BR112019026097A2 - mitoketoscins: terapêuticos à base de mitocôndrias com direcionamento no metabolismo da cetona em células cancerígenas - Google Patents

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Abstract

A presente invenção refere-se a compostos que se ligam a pelo menos um de ACAT1/2 e OXCT1/2 e inibem a produção de ATP mitocondrial, referidos aqui como mitoketoscins. São descritos métodos de rastreamento de compostos para inibição mitocondrial e propriedades anticancerígenas. Também são descritos métodos de utilização de mitoketoscins para prevenir ou tratar câncer, infecções bacterianas, e leveduras patogênicas, bem como métodos de utilização de mitoketoscins para prover benefícios antienvelhecimento. Também são descritos compostos de mitoketoscin específicos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MITOKETOSCIN, SEU MÉTODO DE IDENTIFICAÇÃO E USO E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA".
CAMPO DA INVENÇÃO
[0001] A presente invenção refere-se a mitoketoscins – compostos não carcinogênicos que se ligam a pelo menos uma de ACAT1/2 e OXCT1/2 e inibem a produção de ATP mitocondrial, bem como a métodos para identificar mitoketoscins, métodos de uso de inibidores para atingir células-tronco cancerígenas, visando bactérias e leveduras patogênicas, e para prover benefícios antienvelhecimento, e composições farmacêuticas para tratamento de câncer, infecções bacterianas, infecções por leveduras e envelhecimento, contendo um ou mais mitoketoscins como ingrediente ativo.
ANTECEDENTES
[0002] Os pesquisadores têm se esforçado para desenvolver novos tratamentos anticâncer. As terapias convencionais contra o câncer (por exemplo, irradiação, agentes alquilantes, tais como ciclofosfamida e antimetabólitos, como 5-Fluorouracila) tentam detectar e erradicar seletivamente células cancerígenas de rápido crescimento, interferindo nos mecanismos celulares envolvidos no crescimento celular e na replicação de DNA. Outras terapias contra o câncer utilizam imunoterapias que ligam seletivamente antígenos tumorais mutantes a células cancerígenas de crescimento rápido (por exemplo, anticorpos monoclonais). Infelizmente, os tumores frequentemente retornam após estas terapias no mesmo ou em diferente(s) local(ais), indicando que nem todas as células cancerígenas foram erradicadas. A reincidência pode ser em virtude de dosagem quimioterapêutica insuficiente e/ou ao surgimento de clones de câncer resistentes à terapia. Portanto, novas estratégias de tratamento de câncer são necessárias.
[0003] Cetonas (3-hidroxibutirato, acetoacetato e acetona) são combustíveis mitocondriais de alta energia; elas são geradas naturalmente por hepatócitos durante períodos de restrição calórica, jejum e/ou inanição. Durante a privação de nutrientes, os corpos cetônicos secretados no sangue são então direcionados para o cérebro, onde os neurônios os convertem novamente em Acetil-CoA, de modo que possam ser eficazmente reutilizados como fonte de energia. As duas enzimas neuronais mais críticas para esse processo de reutilização de cetona são OXCT1/2 e ACAT1/2, pois estão diretamente envolvidas na conversão de corpos cetônicos em acetil-CoA. Martinez- Outschoorn et al., Nat Rev Clin Oncol 2017; 14(1):11-31.
[0004] Os inventores demostraram que um similar "transporte bidirecional de cetona" também existe em tumores humanos, em que os fibroblastos associados ao câncer cetogênico (CAFs) produzem localmente corpos cetônicos para reutilização por mitocôndrias em células adjacentes de câncer de mama humano. Martinez-Outschoorn, et al., Cell Cycle 2012; 11(21):3956-63. Em apoio adicional a essa hipótese de "acoplamento metabólico", os inventores constataram que a superexpressão recombinante de ACAT1/2 ou OXCT1/2 em células de câncer de mama MDA-MB-231 era de fato suficiente para promover o crescimento de tumores e metástases pulmonares. Esses dados fornecem evidências genéticas de que a reutilização de corpos cetônicos pode ajudar a acionar a progressão e a metástase tumorais.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0005] Em vista dos fundamentos anteriores, parece que as enzimas ACAT1/2 e OXCT1/2 podem ser genuínos oncogenes metabólicos. Portanto, é um objetivo desta descrição demonstrar que a reutilização de cetonas desempenha um papel crítico na propagação e manutenção de muitos cânceres. Também é um objetivo desta descrição apresentar métodos para identificar mitoketoscins, compostos não carcinogênicos que se ligam a pelo menos uma das ACAT1/2 e OXCT1/2 e inibem a produção de ATP mitocondrial. Também é um objetivo desta descrição identificar mitoketoscins com propriedades anticancerígenas e antibióticas. Também é um objetivo desta descrição identificar mitoketoscins com propriedades antienvelhecimento. Também é um objetivo desta descrição mitoketoscins que funcionam como radiossensibilizadores e fotossensibilizadores. O termo "mitoketoscin" refere-se amplamente a compostos não carcinogênicos que se ligam a pelo menos uma das ACAT1/2 e OXCT1/2 e inibem a produção de ATP mitocondrial. Portanto, esses compostos são designados para atingir as enzimas mitocondriais responsáveis pela reutilização de cetona e que possuem propriedades anticancerígenas e antibióticas. Esses compostos se ligam a um dos dois ou ambos os locais catalíticos ativos de OXCT1/2 e ACAT1/2 para inibir a função mitocondrial. A presente descrição refere-se ainda a métodos de identificação de mitoketoscins, métodos para produzir tais mitoketoscins, e métodos de uso de mitoketoscins para fins terapêuticos.
[0006] Dadas suas propriedades de inibição mitocondrial, os mitoketoscins podem ser usados da mesma forma para atingir bactérias e leveduras patogênicas, prover benefícios antienvelhecimento, funcionar como radiossensibilizadores e/ou fotossensibilizadores, sensibilizar células cancerígenas em massa e células tronco cancerígenas a agentes quimioterapêuticos, farmacêuticos e/ou outras substâncias naturais.
[0007] Os mitoketoscins podem ser identificados através de uma abordagem convergente do rastreamento virtual de alto rendimento in silico, seguida por validação in vitro para inibição mitocondrial. Os mitoketoscins podem ser desenvolvidos rapidamente, combinando-se o design de fármacos in silico com o rastreamento fenotípico de fármacos.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0008] A Figura 1 mostra um diagrama esquemático descrevendo uma estratégia de descoberta de fármaco de acordo com as modalidades da presente abordagem.
[0009] A Figura 2 ilustra as estruturas químicas de oito compostos de mitoketoscin candidatos 1-8 identificados após rastreamento fenotípico de fármacos.
[0010] As Figuras 3A-F mostram os efeitos de seis compostos de mitoketoscin candidatos na formação de mamosfera em células MCF7.
[0011] As Figuras 4A-D mostram os efeitos de quatro compostos de mitoketoscin candidatos na depleção de ATP em células MCF7.
[0012] As Figuras 5A-B e 6A-B mostram os efeitos de dois compostos de mitoketoscin candidatos na respiração basal, vazamento de prótons, respiração ligada a ATP, respiração máxima, e capacidade respiratória sobressalente em células MCF7.
[0013] A Figura 7A mostra os efeitos de cinco compostos de mitoketoscin candidatos na glicólise aeróbica em células MCF7. A Figura 7B mostra os efeitos de cinco compostos de mitoketoscin candidatos na taxa de acidificação extracelular (ECAR) ao longo do tempo em células MCF7.
[0014] As Figuras 8A-D ilustram imagens de acoplamento de quatro compostos de mitoketoscin candidatos.
[0015] A Figura 9 mostra um diagrama esquemático descrevendo como OXCT1 e ACAT1 funcionam para acionar a produção de ATP.
[0016] A Figura 10A mostra quatro compostos de mitoketoscin candidatos e seus respectivos IC-50s para inibir a propagação de CSC. A Figura 10B mostra a estrutura química de arecolina, um inibidor de ACAT1 ocorrendo naturalmente.
[0017] A Figura 11A compara as estruturas de dois compostos de mitoketoscin candidatos. A Figura 11B mostra os farmacóforos para dois compostos de mitoketoscin candidatos.
[0018] A Figura 12A mostra a estrutura da Coenzima A (CoA). A Figura 12B compara a estrutura da CoA com dois compostos de mitoketoscin candidatos.
[0019] A Figura 13 mostra um diagrama esquemático descrevendo uma estratégia de tratamento de acompanhamento com substratos mitocondriais para melhorar os potenciais efeitos colaterais do mitoketoscins, de acordo com as modalidades da presente abordagem.
DESCRIÇÃO
[0020] A descrição a seguir ilustra modalidades da presente abordagem em detalhes suficientes para permitir a prática da presente abordagem. Embora a presente abordagem seja descrita com referência a essas modalidades específicas, deve-se observar que a presente abordagem pode ser incorporada em diferentes formas, e essa descrição não deve ser interpretada como limitante de quaisquer reivindicações anexas às modalidades específicas estabelecidas aqui. Em vez disso, essas modalidades são fornecidas para que esta descrição seja criteriosa e completa, e transmita totalmente o escopo da presente abordagem para os versados na técnica.
[0021] O metabolismo mitocondrial é uma entrada inexplorada para o tratamento de uma série de afecções, que variam de câncer a infecções bacterianas e fúngicas e ao envelhecimento. As mitocôndrias funcionais são necessárias para a propagação de células-tronco cancerígenas. A inibição do metabolismo mitocondrial nas células cancerígenas impede a propagação dessas células. Inibidores mitocondriais visando a reutilização de corpos cetônicos como combustíveis mitocondriais representam, portanto, uma nova classe de terapêuticos anticancerígenos. Esses compostos também podem inibir a tradução de proteínas mitocondriais e, portanto, podem funcionar como antibióticos de amplo espectro que têm como alvo bactérias e leveduras patogênicas. A pesquisa também mostrou que os inibidores mitocondriais têm propriedades antienvelhecimento; portanto, os mitoketoscins também podem conferir benefícios antienvelhecimento.
[0022] Novos inibidores da produção de ATP mitocondrial que se ligam a pelo menos uma das OXCT1/2 e ACAT1/2 - mitoketoscins - podem ser identificados por meio de uma abordagem convergente do rastreamento virtual de alto rendimento, seguida pela validação in vivo da inibição mitocondrial. A Figura 1 é uma visão geral dos métodos para identificar mitoketoscins usando rastreamento de fármacos in silico e rastreamento fenotípico de fármacos, descritos aqui. Toda ou parte da estrutura tridimensional das proteínas OXCT1 suína e ACAT1 humana pode ser usada na etapa S101 para identificar novos compostos que se ligam a essas proteínas por meio de rastreamento virtual de alto rendimento (vHTS) (ou seja, rastreamento de fármacos in silico). O rastreamento pode ser realizado através de uma biblioteca de moléculas. Por exemplo, durante as investigações iniciais, os inventores rastrearam uma coleção de 30.000 compostos de pequenas moléculas para os compostos esperados ligarem-se em qualquer lugar à succinil- CoA: 3-cetoácido CoA transferase do coração de porco covalentemente ligada a CoA (código PDB 3OXO) ou ao sítio de ligação a CoA da acetoacetil-CoA tiolase mitocondrial humana (código PDB 2F2S). O vHTS inicial pode usar vários programas de rastreamento, tais como o programa de rastreamento eHiTS, para identificar um subconjunto de compostos com uma forte afinidade de ligação a qualquer uma das proteínas. Por exemplo, os inventores usaram o eHiTS para identificar os 1.000 principais compostos classificados de uma biblioteca inicial, com base na afinidade de ligação prevista. O eHiTS é um método de rastreamento que abrange sistematicamente a parte do espaço de pesquisa conformacional e posicional que evita confrontos estéricos graves, produzindo posições de acoplamento altamente precisas a uma velocidade bem adequada para um rastreamento virtual de alto rendimento.
[0023] Deve-se observar que aqueles versados na técnica podem selecionar ou desenvolver métodos para identificar um subconjunto de compostos que têm uma desejada afinidade de ligação. Para realizar com eficiência o acoplamento, uma série de arquivos de clipe pode ser preparada correspondendo a toda a estrutura da proteína e cada composto acoplado sequencialmente em cada um dos arquivos de clipe. A pontuação de consenso dos principais compostos pode ser realizada usando o AutoDock 4.2, com base no mesmo sítio de ligação geral para cada composto previsto na tela do eHiTS. Análises adicionais da afinidade de ligação prevista e da inspeção visual podem ser realizadas usando vários métodos, incluindo, por exemplo, um programa de design de novo, como o SPROUT. Vide Law et al., J. Mol Struct. 666: 651-657 (2003), que é incorporado por referência em sua totalidade, para obter informações sobre o SPROUT. Dependendo do tamanho e dos resultados iniciais da biblioteca, vários compostos podem ser selecionados para o rastreamento fenotípico de fármacos. Por exemplo, os inventores selecionaram 227 compostos que tiveram um bom desempenho nessas etapas de análise para o rastreamento fenotípico de fármacos na etapa S103. 84 compostos foram selecionados para a triagem fenotípica baseada em OXCT1 e 143 compostos foram selecionados para a triagem fenotípica baseada em ACAT1.
[0024] O rastreamento fenotípico de fármacos S103 pode ser realizado testando-se a inibição mitocondrial de compostos selecionados de uma linhagem celular selecionada. Por exemplo, podem ser utilizados ensaios de depleção de ATP. Os inventores testaram os 227 compostos selecionados em sua capacidade de induzir funcionalmente a depleção de ATP em células de câncer de mama humanas MCF7. Aproximadamente 85% da ATP celular é normalmente gerada pelo OXPHOS nas mitocôndrias, portanto a depleção de ATP é um marcador substituto da inibição mitocondrial.
Deve ser observado que aqueles versados na técnica podem empregar outros substitutos para inibição mitocondrial.
No entanto, para os inventores do ensaio de depleção de ATP utilizado, as células MCF7 (6.000 células/poço) foram disseminadas em placas pretas de 96 poços de fundo claro e incubadas durante a noite antes do tratamento.
Os 227 compostos identificados por vHTS foram aplicados às células MCF7 disseminadas em placas a uma concentração de 20 µM e foram rastreados quanto à depleção de ATP.
Os compostos mostrando efeitos de depleção de ATP foram subsequentemente rastreados novamente em uma concentração mais baixa (10 µM), para identificar os oito principais compostos que induzem mais potentemente a depleção de ATP.
Os compostos foram testados após 72 horas de incubação e as experiências foram realizadas em duplicata.
Após o tratamento, o meio foi aspirado dos poços e as placas foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato quente (PBS) suplementada com Ca2+ e Mg2+. Em seguida, as células foram incubadas com uma solução colorante, Hoechst 33342 (Sigma) (10 µg/ml) por 30 min, e lavadas com PBS para avaliar a viabilidade celular.
A fluorescência foi lida com um leitor de placas usando comprimentos de onda de excitação/emissão a 355/460-nm.
Em seguida, um ensaio luminescente CellTiter-Glo (Promega) foi realizado para medir a atividade metabólica (conteúdo de ATP) nos mesmos poços que foram tratados com um determinado composto.
Os ensaios foram realizados de acordo com o protocolo do fabricante.
A intensidade da fluorescência (coloração Hoechst) e a intensidade da luminescência (conteúdo de ATP) foram normalizadas para controles tratados apenas com veículo e foram exibidas como controle percentual para comparação.
Todos os oito compostos de teste esgotaram significativamente os níveis de ATP em células viáveis. Deve-se observar que aqueles versados na técnica podem optar por empregar os mesmos ou similares ensaios de depleção de ATP, modificar tais ensaios ou substituir o ensaio de depleção de ATP por outra metodologia para rastrear compostos selecionados para inibição mitocondrial (por exemplo, ensaios de consumo de oxigênio).
[0025] A presente abordagem inclui métodos para confirmar a viabilidade celular. Pessoas versadas na técnica podem selecionar um ou mais métodos para confirmar a viabilidade celular adequada para a modalidade específica. Os inventores usaram inicialmente o ensaio de Sulforodamina (SRB), que se baseia na medição do conteúdo de proteína celular. Após tratamento por 72 horas em placas de 96 poços, as células foram fixadas com ácido tricloroacético a 10% (TCA) por uma hora na câmara fria e foram secas durante a noite à temperatura ambiente. Em seguida, as células foram incubadas com SRB por 15 min, lavadas duas vezes com ácido acético a 1% e secas ao ar por pelo menos uma hora. Finalmente, o corante ligado à proteína foi dissolvido em uma solução Tris 10 mM, pH 8,8, e lido usando o leitor de placas a 540 nm. Utilizando o ensaio SRB, os inventores selecionaram apenas os compostos que esgotam os níveis de ATP sem citotoxicidade proeminente para análise posterior. A citotoxicidade proeminente foi definida como menos do que 30% das células ainda sobre a placa. Obviamente, modalidades que empregam outra metodologia de confirmação de viabilidade celular podem selecionar compostos para análise posterior com base em outras considerações, como possivelmente conhecidas na técnica.
[0026] A presente abordagem envolve ainda métodos de validação funcional na etapa S105, durante os quais a função de um composto como um inibidor mitocondrial pode ser confirmada. Vários métodos podem ser usados para validação funcional, incluindo, por exemplo,
análise de fluxo metabólico, ensaios de mamosfera, ensaios de viabilidade, e atividade antibiótica (antibacteriana e/ou antifúngica). Por exemplo, os inventores determinaram taxas de acidificação extracelular (ECAR) e taxas de consumo de oxigênio em tempo real (OCR) para células MCF7 usando o analisador Seahorse Extracellular Flux (XF96) (Seahorse Bioscience, MA, EUA). As células MCF7 foram mantidas em DMEM suplementado com FBS a 10% (soro fetal bovino), GlutaMAX 2 mM e Pen-Strep a 1%. 5.000 células por poço foram semeadas em placas de cultura de células de poços XF96, e incubadas durante a noite a 37°C em uma atmosfera umidificada com CO2 a 5%. Após 24 horas, as células foram tratadas com compostos selecionados mostrando depleção de ATP sem citotoxicidade proeminente em várias concentrações (ou veículo sozinho). Após 72 horas de tratamento, as células foram lavadas em meio de ensaio XF pré-aquecido (para medição de OCR, o meio de ensaio XF foi suplementado com glicose 10 mM, piruvato 1 mM, L-glutamina 2 mM e ajustado a pH 7,4). As células foram mantidas em 175 μL/poço de meio de ensaio XF a 37°C em uma incubadora sem CO2 por uma hora. Durante a incubação, 25 μL de glicose 80 mM, oligomicina 9 μM, 2-desoxiglicose 1 M (para medição de ECAR) e 25 μL de oligomicina 10 μM, FCCP 9 μM, rotenona 10 μM, antimicina A 10 μM (para medição de OCR) em meio de ensaio XF foram carregados nas portas de injeção do cartucho do sensor XFe-
96. Durante o experimento, o instrumento injetou esses inibidores nos poços em um determinado momento, enquanto ECAR/OCR foi medida continuamente. As medições de ECAR e OCR foram normalizadas pelo teor de proteínas (usando o ensaio de Sulforodamina B). Os conjuntos de dados foram analisados pelo software XFe-96, usando ANOVA unidirecional e cálculos do teste-t de Student. Todas as experiências foram realizadas em triplicata, e os resultados validaram os efeitos da inibição mitocondrial dos compostos de mitoketoscin descritos aqui.
Deve-se observar que numerosos métodos são conhecidos para validação funcional e que pessoas versadas na técnica podem selecionar um ou mais, dependendo das necessidades de validação (por exemplo, outros ensaios que medem ou aproximam a função mitocondrial).
[0027] Em resumo, a presente abordagem pode incluir métodos para identificar mitoketoscins potenciais usando rastreamento de fármacos in silico e rastreamento fenotípico de fármacos. Os novos compostos identificados usando essa metodologia podem ser testados quanto à atividade anticâncer (por exemplo, a capacidade de inibir a formação de mamosfera e a migração celular) e podem ainda ser testados em diferentes cepas bacterianas e/ou de leveduras para investigar a atividade antimicrobiana. A Figura 1 resume os métodos gerais para rastreamento e validação de fármacos de acordo com uma modalidade da presente abordagem, porém, deve-se observar que aqueles versados na técnica podem se desviar dos exemplos específicos descritos aqui sem se afastar da presente abordagem.
[0028] A presente abordagem levou à identificação de mitoketoscins que têm propriedades anticancerígenas, e modalidades da presente abordagem podem assumir a forma de um ou mais desses compostos, bem como composições farmacêuticas incluindo quantidades eficazes de um ou mais desses compostos, e vários métodos de tratamento usando um ou mais desses compostos. Com base no rastreamento e validação iniciais dos inventores, os compostos identificados na Figura 2 têm propriedades anticancerígenas e, portanto, são mitoketoscins. Em vista da pesquisa dos inventores, esses mitoketoscins são, portanto, candidatos a ensaios clínicos. Deve ser observado que os mitoketoscins identificados na Figura 2 não são exaustivos, porém são meramente aqueles compostos que foram identificados até agora usando a nova metodologia apresentada aqui.
Deve ser observado por aqueles versados na técnica que a quantidade terapeuticamente eficaz de cada composto, para uma terapia específica, pode ser determinada através da aplicação de procedimentos diretos, como são conhecidos na técnica.
[0029] Algumas modalidades podem assumir a forma de um ou mais mitoketoscins. A modalidade pode ser incluída em uma composição farmacêutica para tratamento de câncer, infecção bacteriana e/ou infecção por levedura patogênica. Por exemplo, um mitoketoscin pode ser um farmacóforo geral com a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo): , em que Z é definido como etilpiperidina ou etilpirrolidina, ou
[0030] Como outro exemplo, um mitoketoscin pode ser um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo): em que cada R pode ser igual ou diferente e é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila,
alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico.
[0031] Como outro exemplo, um mitoketoscin pode ser um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo):
[0032] Como um outro exemplo, um mitoketoscin pode ser um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo): em que cada R pode ser igual ou diferente e é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico.
[0033] Como um outro exemplo, um mitoketoscin pode ser um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo): em que cada R pode ser igual ou diferente e é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico.
[0034] Outro exemplo de um mitoketoscin é um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo):
[0035] Um outro exemplo de um mitoketoscin é um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo):
[0036] Um exemplo adicional de um mitoketoscin é um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo):
, em que cada R pode ser igual ou diferente e é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico.
[0037] Outro exemplo de um mitoketoscin é um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo): , em que cada R pode ser igual ou diferente e é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico.
[0038] Um outro exemplo de um mitoketoscin é um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo):
[0039] Outro exemplo de um mitoketoscin é um farmacóforo geral tendo a seguinte estrutura (ou um sal do mesmo): , em que cada R pode ser igual ou diferente e é selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico. Deve-se observar que os mitoketoscins podem ser selecionados para uso terapêutico individualmente ou em combinação com mais de um mitoketoscin específico e/ou com outras substâncias para aumentar a eficácia de outros terapêuticos. Os terapêuticos podem ser utilizados na forma de composições farmacêuticas usuais que podem ser preparadas usando um ou mais métodos conhecidos. Por exemplo, uma composição farmacêutica pode ser preparada usando diluentes ou excipientes, tais como, por exemplo, uma ou mais preenchedores,
agentes de volume, aglutinantes, agentes umectantes, agentes desintegrantes, agentes ativos de superfície, lubrificantes e similares, como são conhecidos na técnica.
Vários tipos de formas unitárias de administração podem ser selecionados dependendo do(s) objetivo(s) terapêutico(s). Exemplos de formas para composições farmacêuticas incluem, porém não se limitam a, comprimidos, pílulas, pós, líquidos, suspensões, emulsões, grânulos, cápsulas, supositórios, preparações para injeção (soluções e suspensões), cremes tópicos e outras formas conhecidas na técnica.
Com o objetivo de moldar uma composição farmacêutica em forma de comprimidos, quaisquer excipientes que sejam conhecidos podem ser utilizados, por exemplo, veículos como lactose, açúcar branco, cloreto de sódio, glicose, ureia, amido, carbonato de cálcio, caulim, ciclodextrinas, celulose cristalina, ácido silícico e similares; aglutinantes tais como água, etanol, propanol, xarope simples, soluções de glicose, soluções de amido, soluções de gelatina, carboximetilcelulose, goma-laca, metilcelulose, fosfato de potássio, polivinilpirrolidona, etc.
Além disso, podem ser utilizados agentes desintegrantes, tais como amido seco, alginato de sódio, pó de ágar, pó de laminalia, hidrogenocarbonato de sódio, carbonato de cálcio, ésteres de ácidos graxos de polioxietileno sorbitano, laurilsulfato de sódio, monoglicerídeos de ácido esteárico, amido, lactose, etc.
Inibidores de desintegração, tais como açúcar branco, estearina, manteiga de coco, óleos hidrogenados; aceleradores de absorção, tais como base de amônio quaternário, laurilsulfato de sódio, etc., podem ser utilizados.
Agentes umectantes, tais como glicerina, amido e outros conhecidos na técnica podem ser utilizados.
Agentes adsorventes, tais como, por exemplo, amido, lactose, caulim, bentonita, ácido silícico coloidal, etc., podem ser utilizados.
Lubrificantes, tais como talco purificado, estearatos, pó de ácido bórico, polietileno glicol, etc., podem ser utilizados.
Se comprimidos forem desejados, eles podem ser ainda revestidos com materiais usuais de revestimento para produzir comprimidos como os comprimidos revestidos com açúcar, comprimidos revestidos por película de gelatina, comprimidos revestidos com revestimentos entéricos, comprimidos revestidos com filmes, comprimidos com duas camadas e comprimidos com várias camadas. As composições farmacêuticas adaptadas para administração tópica podem ser formuladas como pomadas, cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, géis, espumas, sprays, aerossóis ou óleos. Tais composições farmacêuticas podem incluir aditivos convencionais que incluem, mas não se limitam a, conservantes, solventes para auxiliar na penetração do fármaco, cossolventes, emolientes, propelentes, agentes modificadores de viscosidade (agentes gelificantes), tensoativos e veículos.
[0040] A presente abordagem pode, em algumas modalidades, envolver métodos de testar compostos e, em particular, mitoketoscins, quanto às propriedades anticancerígenas. Como discutido acima, o vHTS e a química computacional podem ser usados para identificar inibidores mitocondriais candidatos. Esses candidatos podem ser testados quanto às propriedades anticancerígenas específicas. Por exemplo, os inventores compararam sete compostos candidatos em paralelo quanto à sua capacidade de inibir a formação de mamosfera em células MCF7. A Figura 3 demonstra que seis compostos testados inibiram a formação de mamosfera. Os compostos 2 e 8 (FIGs. 3A e 3B, respectivamente) foram os dois candidatos mais potentes na redução do número de mamosferas, uma medida da atividade de células-tronco cancerígenas, a uma concentração de 25 µM. Os compostos 6 e 3 também foram eficazes (FIGs. 3C e 3D, respectivamente), enquanto os compostos 5 e 1 (FIGs. 3E e 3F, respectivamente) foram inibidores menos potentes do crescimento da mamosfera.
Tabela 1. Inibição por mitoketoscin da formação de mamosfera em células MCF7 Composto ID IC-50 (µM) Ligantes de OXCT1 1 ALB-H01004577 160,4 2 ALB-H09465625 11,3 3 ALB-H15358970 46,7 4 ALB-H15354504 166,8 Ligantes de ACAT1 5 ALB-H04367562 66,7 6 LEG19576081 22,9 8 ALB-H01005022 10,1
[0041] A Tabela 1 resume os resultados da inibição da formação da mamosfera para sete compostos candidatos. A Tabela 1 mostra que sete compostos inibiram a formação de mamosfera com concentrações inibitórias semimáximas (IC-50s) entre 10 e 170 µM. Os compostos 1 a 4 foram identificados a partir da triagem de OXCT1, e os compostos 5, 6 e 8 foram identificados a partir da triagem de ACAT1.
[0042] A presente abordagem pode, em algumas modalidades, envolver métodos de validação de função de compostos de mitoketoscin. Por exemplo, os inventores avaliaram a validação funcional de quatro candidatos usando o Seahorse Analyzer, que mede quantitativamente a taxa de consumo de oxigênio (OCR) e a taxa de acidificação extracelular (ECAR). A OCR é um marcador substituto para OXPHOS e ECAR é um marcador substituto para a glicólise e a produção de L-lactato.
[0043] Os resultados dos inventores demonstraram que os Compostos 2, 3, 6 e 8 inibiram todo o consumo de oxigênio mitocondrial dependente de dose nas células MCF7. As Figuras 4A e 4B mostram que os Compostos 2 e 8 reduziram significativamente a respiração mitocondrial, mesmo em doses tão baixas quanto 5 µM. Os compostos 6 e 3 também eram inibidores potentes (Figuras 4C e 4D). Como mostrado nas Figuras 5 e 6, os compostos dependentes de dose reduziram a respiração basal, vazamento de prótons, respiração ligada ao ATP e respiração máxima. A Figura 7 mostra como quatro compostos inibiram significativamente a glicólise em comparação com o controle.
[0044] Algumas modalidades da presente abordagem podem incluir testar compostos quanto às propriedades anticancerígenas, considerando os efeitos dos compostos na formação de mamosfera. Deve ser observado que aqueles versados na técnica podem usar outros métodos conhecidos na técnica para avaliar os efeitos do inibidor mitocondrial candidato em uma linhagem celular específica sem desvio da presente abordagem. Também se deve observar que aqueles versados na técnica podem avaliar os efeitos do inibidor mitocondrial candidato em outros tipos de câncer, uma vez que os inibidores têm como alvo células-tronco cancerígenas (CSCs). As CSCs mostram características conservadas ou similares na maior parte dos tipos de câncer.
[0045] As Figuras 8A-8D ilustram a modelagem molecular dos Compostos 2, 8, 3 e 6. O objetivo da modelagem molecular é prever o modo de ligação predominante de um composto a uma estrutura tridimensional conhecida. As Figuras 8A e 8C mostram o acoplamento molecular dos Compostos 2 e 3, respectivamente, ao sítio de ligação de succinil-CoA dentro da estrutura de cristal 3D de OXCT1. Uma comparação das Figuras 8A e 8C mostra que é previsto que pelo menos um aminoácido, ASN-373, se ligue diretamente aos Compostos 2 e 3.
As Figuras 8B e 8D mostram o acoplamento molecular dos Compostos 8 e 6, respectivamente, ao sítio de ligação de CoA dentro da estrutura de cristal 3D de ACAT1. Uma comparação das Figuras 8B e 8D mostra que é previsto que pelo menos dois aminoácidos, LEU-184 e HIS-192, se liguem diretamente aos Compostos 8 e 6. Esses modos de ligação dominantes previstos podem ser inestimáveis para liderar a otimização.
[0046] Os corpos cetônicos comportam-se funcionalmente como combustíveis mitocondriais, que podem acionar ativamente o crescimento e a metástase do tumor. Neste contexto, OXCT1 e ACAT1 são duas proteínas mitocondriais que participam da reutilização de cetonas, como está resumido na Figura 9. Os inventores visaram molecularmente OXCT1 e ACAT1, para impedir que as células cancerígenas reciclassem corpos cetônicos em acetil-CoA, que normalmente entra no ciclo TCA, acionando a produção de ATP mitocondrial.
[0047] Um ligante principal para a triagem de OXCT1 (Composto 2) e um ligante para a triagem de ACAT1 (Composto 8) têm estruturas químicas semelhantes, com exceção dos menores grupos colaterais funcionais, como mostrado na Figura 10A. O "suporte químico" subjacente ou farmacóforo é o mesmo para ambas as pequenas moléculas, como mostrado na FIG 11B. As estruturas dos Compostos 2 e 8 também foram comparadas com a estrutura molecular da Coenzima A na Figura 12 para demonstrar semelhanças estruturais.
[0048] Dois compostos da triagem de OXCT1 (Compostos 3 e 4) são estruturalmente similares entre si, como é mostrado na Figura 11A. No entanto, com base nos seus valores observados de IC-50, o Composto 3 é quase 4 vezes mais potente do que o Composto 4 em sua capacidade de ter como alvo a propagação de CSC. Os únicos grupos químicos que distinguem estruturalmente essas duas moléculas (destacadas pelas setas na Figura 11A) podem ser responsáveis pelas diferenças observadas nos seus IC-50s, observadas quanto a sua inibição da propagação de CSC.
[0049] Estudos recentes fornecem evidências adicionais de um papel para ACAT1 como um oncogene, visto que esses estudos identificaram a arecolina como um potencial inibidor de ACAT1. Garcia- Bermudez et al., Mol Cell 2016, 64 (5): 856-857. A arecolina é um alcaloide à base de ácido nicotínico encontrado na noz de areca, que é o fruto da palmeira de areca (areca catechu). A arecolina demonstrou atividade antitumoral, validando ainda mais que os medicamentos tendo como alvo ACAT1 podem ser valiosos como agentes anticâncer. No entanto, os inventores não avaliaram sua capacidade de atingir CSCs. Como a arecolina é uma molécula muito pequena (mostrada na Figura 10B para comparação com os Compostos 6 e 3), pode ser necessário que seja modificada significativamente por química medicinal para aumentar a sua potência. A arecolina não é um mitoketoscin, porque o composto é sabido ser carcinógeno.
[0050] Embora o metabolismo normal da cetona ocorra sob condições de inanição e/ou privação severa de nutrientes em um organismo, essa regulação é perdida em tumores humanos e o metabolismo cetônico parece ocorrer constitutivamente em células cancerígenas. Prevê-se que o direcionamento do metabolismo da cetona a tumores humanos, sob condições alimentares normais, tenha efeitos colaterais metabólicos mínimos. No entanto, os potenciais efeitos colaterais dos inibidores de cetona podem ser significativamente melhorados ou "controlados", incluindo uma etapa de "resgate", que consiste em um tratamento de acompanhamento com outros substratos de suporte mitocondrial, tais como glicose, piruvato, lactato, ácidos graxos e/ou acetil-carnitina, como mostrado na FIG 13. Soluções intravenosas estéreis de D-glicose e L-lactato (D5W, D5NS, Lactated Ringer’s) já são usadas rotineiramente em hospitais para outras indicações clínicas e terapêuticas; portanto, um tratamento de acompanhamento é clinicamente viável.
[0051] Os inventores mostraram que os compostos que induzem a depleção aguda de ATP nas células cancerígenas podem sensibilizar essas células à radiação, luz ultravioleta, agentes quimioterapêuticos, substâncias naturais e/ou restrição calórica. Mitoketoscins, como discutido aqui, demonstraram efeitos de depleção de ATP. Com base nesses resultados preliminares, os mitoketoscins também podem ser usados como radiossensibilizadores e/ou fotossensibilizadores. O uso como radiossensibilizadores e/ou fotossensibilizadores pode ser em combinação com outros vetores de tratamento, incluindo, porém não limitados a, outros métodos de tratamento de câncer, como podem ser conhecidos na técnica, e tratamento de câncer através da inibição da biogênese mitocondrial, como descrito aqui. Da mesma forma, os mitoketoscins podem ser usados para sensibilizar funcionalmente células cancerígenas em massa e células tronco cancerígenas a agentes quimioterapêuticos, farmacêuticos e/ou outras substâncias naturais, tais como suplementos alimentares e restrição calórica.
[0052] Além do comportamento anticâncer e antibiótico, os inibidores mitocondriais que podem ser identificados pela presente abordagem têm o potencial de retardar o processo de envelhecimento em mamíferos. Foi demonstrado que a inibição genética da tradução de proteínas mitocondriais tem efeitos colaterais benéficos e, em particular, o efeito colateral de retardar o processo de envelhecimento e aumentar a expectativa de vida dos organismos modelo. Os níveis inferiores no estado estacionário de Mrps5 (uma proteína mitorribossômica) estão fortemente correlacionados funcionalmente com uma expectativa de vida mais longa dos murinos, resultando em um aumento significativo da expectativa de vida de ~ 250 dias. Além disso, o silenciamento gênico (knock-down) seletivo de Mrps5 em C. elegans aumenta drasticamente a expectativa de vida. Os vermes com silenciamento gênico de Mrps5 mostram reduções significativas na respiração mitocondrial e na produção de ATP. Da mesma forma, o silenciamento gênico dos homólogos de vermes do complexo mitocondrial I, III, IV e V, bem como de várias enzimas do ciclo TCA, todos prolongam a expectativa de vida firmemente, implicando ainda mais na reduzida atividade de OXPHOS e níveis mais baixos de ATP como um mecanismo. Finalmente, a inibição farmacológica da biogênese mitocondrial (usando os efeitos fora do alvo da doxiciclina) também aumenta significativamente a expectativa de vida em C. elegans. Assim, os mitoketoscins podem ser usados para visar terapeuticamente o processo de envelhecimento e prolongar a expectativa de vida.
[0053] Mitoketoscins também podem ser usados para minimizar e/ou reverter a resistência aos fármacos em células cancerígenas. Pensa-se que a resistência aos fármacos se baseia, pelo menos em parte, no aumento da função mitocondrial em células cancerígenas. Em particular, espera-se que as células cancerígenas que demonstram resistência a terapias endócrinas, tais como o tamoxifeno, tenham a função mitocondrial aumentada. Os mitoketoscins inibem a função mitocondrial e, portanto, podem ser úteis na redução e, em alguns casos, reversão da resistência aos fármacos em células cancerígenas.
[0054] A terminologia usada na descrição da invenção aqui tem o propósito de descrever apenas modalidades particulares e não se destina a ser limitativa da invenção. Conforme usado na descrição da invenção e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma", "o" e "a" também pretendem incluir as formas plurais, a menos que o contexto indique claramente de outro modo. A invenção inclui numerosas alternativas, modificações e equivalentes, conforme se tornará evidente pela consideração da seguinte descrição detalhada.
[0055] Será entendido que, embora os termos "primeiro", "segundo", "terceiro", "a)", "b)" e "c)" etc. possam ser usados aqui para descrever vários elementos da invenção, tais elementos não devem ser limitados por esses termos. Esses termos são utilizados apenas para distinguir um elemento da invenção de outro. Assim, um primeiro elemento discutido abaixo poderia ser denominado um aspecto do elemento e, similarmente, um terceiro, sem se afastar dos ensinamentos da presente invenção. Portanto, os termos "primeiro", "segundo", "terceiro", "a)", "b)" e "c)" etc. não se destinam necessariamente a transmitir uma sequência ou outra hierarquia aos elementos associados, porém são utilizados apenas para fins de identificação. A sequência de operações (ou etapas) não se limita à ordem apresentada nas reivindicações.
[0056] A menos que definido de outra forma, todos os termos (incluindo os termos técnicos e científicos) aqui utilizados têm o mesmo significado que comumente é entendido por uma pessoa versada na técnica a qual esta invenção pertence. Será entendido ainda que os termos, como aqueles definidos em dicionários comumente usados, devem ser interpretados como tendo um significado consistente com seu significado no contexto do presente pedido e da técnica relevante, e não devem ser interpretados de maneira idealizada ou excessivamente formal, a menos que expressamente definido aqui. A terminologia usada aqui na descrição da invenção é para fins de descrever apenas modalidades particulares e não se destina a ser limitativa da invenção. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes e outras referências mencionadas aqui são incorporados por referência em sua totalidade. No caso de um conflito de terminologia, a presente especificação é controladora.
[0057] Também como utilizado aqui, "e/ou" refere-se a e abrange todas e quaisquer combinações possíveis de um ou mais dos itens listados associados, bem como a falta de combinações quando interpretadas na alternativa ("ou").
[0058] A menos que o contexto indique de outro modo, pretende-se especificamente que as várias características da invenção, descritas aqui, possam ser usadas em qualquer combinação. Além disso, a presente invenção também considera que, em algumas modalidades da invenção, qualquer característica ou combinação de características aqui estabelecida possa ser excluída ou omitida. Para ilustração, se a especificação indicar que um complexo compreende os componentes A, B e C, pretende-se especificamente que qualquer um de A, B ou C, ou uma combinação dos mesmos, possa ser omitido e rejeitado.
[0059] Como utilizado aqui, a frase de transição "consistindo essencialmente de" (e variantes gramaticais) deve ser interpretada como abrangendo as etapas ou os materiais relatados "e aqueles que não afetam materialmente a(s) característica(s) básica(s) e nova(s)" da invenção reivindicada. Assim, o termo "consistindo essencialmente de", como utilizado aqui, não deve ser interpretado como equivalente a "compreendendo".
[0060] O termo "aproximadamente", conforme usado aqui quando se refere a um valor mensurável, tal como, por exemplo, uma quantidade ou concentração e similares, destina-se a abranger variações de ± 20%, ± 10%, ± 5%, ± 1 %, ± 0,5% ou até ± 0,1% da quantidade especificada. Uma variação fornecida aqui para um valor mensurável pode incluir qualquer outra variação e/ou valor individual.
[0061] Tendo assim descrito certas modalidades da presente invenção, deve-se entender que a invenção definida pelas reivindicações anexas não deve ser limitada por detalhes particulares estabelecidos na descrição acima, pois muitas de suas evidentes variações são possíveis sem o desvio de seu espírito ou escopo, conforme reivindicado a seguir.

Claims (42)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de identificação de um mitoketoscin usando rastreamento virtual de alto rendimento e rastreamento fenotípico de fármacos, caracterizado pelo fato de que compreende: identificar um composto, que tem como alvo uma enzima de reutilização de cetona mitocondrial, usando o rastreamento virtual de alto rendimento; sintetizar o mitoketoscin; e testar o mitoketoscin quanto à atividade de inibição mitocondrial.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin se liga a OXCT1.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin se liga a ACAT1.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o rastreamento fenotípico de fármacos é um rastreamento de fármacos in vitro.
5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o rastreamento fenotípico de fármacos compreende um ensaio de depleção de ATP.
6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o rastreamento fenotípico de fármacos compreende um ensaio de taxa de acidificação extracelular.
7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o rastreamento fenotípico de fármacos compreende um ensaio de taxa de consumo de oxigênio.
8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda testar o mitoketoscin quanto à atividade anticancerígena.
9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a atividade anticancerígena testada é a formação de mamosfera.
10. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a atividade anticancerígena testada é a migração celular.
11. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que compreende ainda testar o mitoketoscin quanto à atividade antimicrobiana.
12. Mitoketoscin, caracterizado pelo fato de que compreende a fórmula geral: , em que R pode ser selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico.
13. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que R compreende flúor.
14. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin apresenta atividade antienvelhecimento.
15. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin apresenta pelo menos um de atividade radiossensibilizante e atividade fotossensibilizante.
16. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin apresenta atividade antimicrobiana.
17. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin sensibiliza células-tronco cancerígenas a agentes quimioterapêuticos.
18. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin sensibiliza células tronco cancerígenas a substâncias naturais.
19. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin sensibiliza células tronco cancerígenas à restrição calórica.
20. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin se liga a pelo menos um de OXCT1, OXCT2, ACAT1 e ACAT2.
21. Uso de um mitoketoscin que compreende a fórmula geral: , em que R pode ser selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico caracterizado pelo fato de que é na preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para o tratamento de câncer.
22.Uso, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que R compreende flúor.
23. Uso de um mitoketoscin que compreende a fórmula geral: , em que R pode ser selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico caracterizado pelo fato de que é na preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para tratamento de uma infecção microbiana.
24. Uso, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que R compreende flúor.
25. Uso de um mitoketoscin que compreende a fórmula geral: , em que R pode ser selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico caracterizado pelo fato de que é na preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para tratamento de uma condição relacionada à idade.
26. Uso, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que R compreende flúor.
27. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende, como um ingrediente ativo, um mitoketoscin compreendendo a fórmula geral:
, em que R pode ser selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico; e um veículo farmaceuticamente aceitável.
28. Composição, de acordo com a reivindicação 27, caracterizada pelo fato de que R compreende flúor.
29. Mitoketoscin, caracterizado pelo fato de que compreende a fórmula geral: , em que R pode ser selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona,
aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico.
30. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que R compreende flúor.
31. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin apresenta atividade antienvelhecimento.
32. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin apresenta atividade radiossensibilizante.
33. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin apresenta atividade fotossensibilizante.
34. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin sensibiliza células-tronco cancerígenas a agentes quimioterapêuticos.
35. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin sensibiliza células tronco cancerígenas a substâncias naturais.
36. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin sensibiliza células tronco cancerígenas à restrição calórica.
37. Mitoketoscin, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o mitoketoscin se liga a pelo menos um de OXCT1, OXCT2, ACAT1 e ACAT2.
38. Uso de um mitoketoscin que compreende a fórmula geral: , em que R pode ser selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico caracterizado pelo fato de que é na preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para tratamento de câncer.
39. Uso, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que R compreende flúor.
40. Uso, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar um substrato de suporte mitocondrial compreendendo pelo menos um de glicose, piruvato, lactato, ácidos graxos e acetil-carnitina.
41.Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende, como um ingrediente ativo, um mitoketoscin que compreende a fórmula geral:
, em que R pode ser selecionado do grupo que consiste de hidrogênio, carbono, nitrogênio, enxofre, oxigênio, flúor, cloro, bromo, iodo, carboxila, alcanos, alcanos cíclicos, derivados à base de alcano, alcenos, alcenos cíclicos, derivados à base de alceno, alcinos, derivados à base de alcino, cetonas, derivados à base de cetona, aldeídos, derivados à base de aldeído, ácidos carboxílicos, derivados à base de ácido carboxílico, éteres, derivados à base de éter, ésteres e derivados à base de éster, aminas, derivados à base de amina, amidas, derivados à base de amida, arenos monocíclicos ou policíclicos, heteroarenos, derivados à base de areno, derivados à base de heteroareno, fenóis, derivados à base de fenol, ácido benzoico e derivados à base de ácido benzoico; e um veículo farmaceuticamente aceitável.
42. Composição, de acordo com a reivindicação 41, caracterizada pelo fato de que R compreende flúor.
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