PT1786430E - Pequenas moléculas que substituam ou agonizam a função p53 - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO PEQUENAS MOLÉCULAS QUE SUBSTITUAM OU AGONIZAM A FUNÇÃO P53

CAMPO DA INVENÇÃO

Esta invenção pertence ao campo da oncologia. Em particular, esta invenção fornece compostos que substituem e/ou agonizam a função p53 e métodos de identificação de tais compostos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Dois terços de todos os cancros da mama apresentam mutações no gene supressor tumoral p53 (Lai et al. (2004) Breast Câncer Res. Treat., 83:57-66) e um terço de todos os carcinomas da mama humanos em estado avançado demonstram uma redução marcada na expressão pró-apoptótica de Bcl-2, um membro da família Bax (Krajewski et al. (1995) Câncer Res., 55:4471-4478). Bax e as mutações p53 estão associadas com uma elevada percentagem de todos os tumores humanos. O subgrupo de pacientes exibindo mutações p53 ou reduzida expressão Bax geralmente respondem mal ao tratamento e apresentam crescimento rápido dos tumores e menor sobrevida mediana (Lai et al., supra; Reed (1996) J. Clin. Invest., 97:2403-2404). Embora amplamente pretendido, o mecanismo pelo qual a expressão do Bax é regulada em células normais, malignas ou mortas é desconhecida. O único ativador endógeno conhecido da expressão do Bax é o factor de transcrição de p53, que é responsável por induzir a morte celular em células cancerosas e danificadas (Miyashita e Reed (1995) Cell, 80: 293-299). 1 "Small A WO 95/19367; US 5744310; BYKOV VJN ET AL: molecules that reactivate mutant p53", European Journal of Câncer, Pergamon Press, Oxford, GB, vol. 39, n° 13, 1 de setembro de 2003 páginas 1828-1834; LIONATAS A ET AL: "CURCUMIN AND RESVERATROL INDUCE APOPTOSIS AND NUCLEAR TRANSLOCATION AND ACTIVATION OF P53 IN HUMAN NEUROBLASTOMA", ΑΝΤΙCÂNCER RESEARCH, INTERNATIONAL INSTITUTE OF ΑΝΤΙCÂNCER RESEARCH, GR, vol. 24, n° 28, 1 de março de 2004 páginas 987-998; CHOUDHURI T ET AL: "Curcumin induces apoptosis in human breast câncer cells through p53-dependent Bax induction", FEBS LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 512, n° 1-3, 13 de fevereiro de 2002, páginas 334-340; LIN ET AL: "Resveratrol Induced Serine Phosphorylation of p53 causes Apoptosis in a Mutant p53 Prostate Câncer Cell Line", JOURNAL OF UROLOGY, LIPPINCOTT WILLIAMS & WILKINS, BAL TI MAIS, MD, USA vol. 168, n° 2, 1 de agosto de 2002, páginas 7 48-755; e WATABE MASAHIKO ET AL: "Caffeic acid phenethyl ester induces apoptosis by inhibition of NFkappaB and activation of Fas in human breast câncer MCF-7 cells", THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY 13 de fevereiro de 2004, vol. 279, n° 7, 13 de fevereiro de 2004, páginas 6017 são dirigidas a métodos de promover a morte celular em células virgens p53 compreendendo a utilização de agonistas /miméticos de p53. CHIO LC ET AL: "IDENTIFICATION OF HIGHLY POTENT AND SELECTIVE INHIBITORS OF TOXOPLASMA GONIIDIHYDROFOLATE REDUCTASE", ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTERAPY, AMERICAM SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, Washington, DC, EUA, vol. 37, n° 9, 1 de setembro de 1993 páginas 1914-1923, descreve a utilização de 5-(4-cloro-fenil)-6-(4-nitro-fenoximetil)-pirimidina-2,4-diamina no tratamento da leucemia. 2

BAKER B R ET AL: "Irreversible enzyme inhibitors. CXXXIV

Effect of ring substitution on the selective irreversible inhibition of dihydrofolic redutase from L 1210 mouse leukaemia and liver by 2,4-diamino-5-(3,4-dichloroph-enyl)-6-[p-(m-fluorosulfonyl-phenylureido)phenoxymethyl] pyrimidine", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY janeiro 1969, vol. 12, n° 1, janeiro 1969 páginas 74-78, descreve uma composição que compreende EtOH/THF e 5-(3,4-dicloro-fenil) -6-(4-metil-3-nitro-fenoximetil)-pirimidina-2,4 - diamina. BAKER BR ET AL: "Irreversible enzyme inhibitors. CLXVI. Active-site directed irreversible inhibitors of dihydrofolic reductase derived from 2,4-diamino-5(3,4-dichlorophenyl)pyrimidine with 6 substituents and some factos in their cell Wall transport", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, Janeiro 1970, vol. 13, n° 1, Janeiro 1970 (1970-1901), páginas 82-86, descreve a utilização de 5-(3,4- dicloro-fenil)-6-(fenoximetil)-pirimidina-2,4-diamina e 5-(3,4-dicloro-fenil)-6-(-2-feniletil)-pirimidina-2,4-diamina no tratamento de leucemia

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Esta invenção proporciona novos sistemas de rastreio adequados para a identificação de agentes que atuem como agonistas/miméticos de p53. Também são fornecidos agonistas/miméticos de p53 eficazes.

Assim, em certas formas de realização, esta invenção proporciona compostos que promovem a morte celular de uma célula virgem p53 (por exemplo, uma célula tumoral). Certos compostos preferidos são os da Fórmulaa I, onde R1 e R4 são independentemente selecionados a partir do grupo 3 consistindo num grupo amino, um grupo ciano, um grupo nitro, um grupo carboxilo, halo, hidroxilo, SO2, alquilo Ci_ C6, haloalquilo Ci_6, alcoxi Ci_8, alcoxialquilo Ci_n, alquilamino C1-6, aminoalquilo Ci_6 e semelhantes; R e R“ são independentemente selecionados de entre o grupo que r 6 7 consiste em C, N, e semelhantes; R é C ou 0; R e R são independentemente selecionados de entre o grupo consistindo em H, (apenas R7), halogénio, CN, NO2, alquilo C1-10 ramificado ou não ramificado, saturado ou insaturado, alcoxi Ci-10 ramificado ou não ramificado, acilo C1-10 ramificado ou não ramificado, aciloxi C1-10 ramificado ou não ramificado, alquiltio C1-10 ramificado ou não ramificado, aminossulfonilo, arilo, aroilo, ariloxi, arilsulfonilo, heteroarilo, heteroariloxi e semelhantes; R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em NO2, OH, COOH e semelhantes; R9 é selecionado a partir do grupo que consiste em H, CH3 e semelhantes, ou um éster farmaceuticamente aceitável ou um seu sal. Em certas formas de realização R6 e R7 são ambos halogéneos. Em várias concretizações R1 e R4 são ambos amino. Em várias concretizações R2 e R3 são ambos N. Em várias concretizações R8 é N02. Em certas concretizações, o composto tem a fórmula da fórmula II.

Também é fornecido um método de promover a morte celular de uma célula virgem p53 (por exemplo, uma célula de cancro, incluindo tumores sólidos, células metastáticas e tumores cancerosos não sólidos). 0 método envolve tipicamente o contacto da célula com um composto que induz a transcrição de ras. Em várias concretizações, o composto é um composto de acordo com a Fórmula I tal como aqui descrito. Em várias concretizações, o composto é um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em certas formas de 4 realização, a célula é uma célula de cancro do fígado, uma célula de cancro da mama, uma célula de cancro do cólon, uma célula de cancro do pulmão, uma célula de cancro do útero, uma célula de cancro do ovário, uma célula de cancro da próstata ou uma célula de cancro do cólon.

Também é fornecida uma linha celular para o rastreio de agentes que promovem a morte celular de uma célula virgem p53. A linhagem de células compreende, tipicamente, células de mamífero contendo uma construção de ácido nucleico compreendendo os elementos promotores bax compreendendo uma sequência 5' UTR, uma sequência TATAA, e uma ou mais sequências de consenso que se ligam a p53, em que os elementos promotores bax estão operacionalmente ligados a um repórter tal que a ligação de uma proteína p53 com uma ou mais das ditas sequências de consenso induz ou aumenta a transcrição do referido repórter. Em certas concretizações, o repórter é uma proteína fluorescente, luciferase, cloranfenicol-acetil-transferase (CAT), β-galactosidase (β-gal), fosfatase alcalina, peroxidase de rábano (HRP) ou uma hormona de crescimento (GH). Em certas concretizações, o repórter compreende um gene de luciferina ou cADN. Em várias formas de realização a célula de mamífero é uma célula virgem p53 (por exemplo, uma célula HEK293T).

Esta invenção também proporciona métodos de identificação de agentes que promovem a morte celular em células virgens p53. Os métodos envolvem normalmente o contacto de uma ou mais células a partir da linha de células aqui descrita com um ou mais agentes de teste; a detecção de um sinal do repórter na célula em que um aumento no sinal do repórter indica que o agente é um agente que é susceptível de 5 promover a morte celular de uma célula virgem p53. Em certas formas de realização uma pluralidade de agentes de teste é contactada com a referida célula ao mesmo tempo. Em certas formas de realização um único agente de teste é colocado em contacto com a referida célula. Em várias concretizações, o aumento é medido relativamente a um controlo sem o agente de teste ou compreendendo o agente de teste a uma concentração mais baixa. Em certas concretizações, o método é realizado por um sistema robótico. Em várias formas de realização os agentes de teste são de uma biblioteca selecionada a partir do grupo que consiste em Chem Bridge DiverSet E, Bionet 1, CEREP, Maybridge 1, Maybridge 2, Peakdale 1, Peakdale 2, ChemDiv Combilab e International, Prato comercial misturados 1, misturada comercial Plate 2, Mixed Commercial Plate 1, Mixed Commercial Plate 2, Mixed Commercial Plate 3, Mixed Commercial Plate 4, Chembridge Microformat, Commercial Diversity Setl, NCI Structural Diversity Set version 1, NCI Structural Diversity version 2, NCI Mechanistic Diversity Set, Open Collection 1, NCI Open Collection 2, NINDS Custom Collection, SpecPlus Collection, BIOMOL ICCB know Bioactives, ICCB Discretes Collection, ICCB2, ICCB3, ICCB4, NCI Marine Extracts, Frações aquosas - NCI Plant and Fungai Extracts, Frações orgânicas - NCI Plant and Fungai Extracts, Philippines Plant Extracts 1, Philippines Plant Extracts 2, e Starr Foundation Extracts 1.

DEFINIÇÕES

Uma "célula virgem p53" refere-se a uma célula que expressa uma p53 defeituosa, e/ou uma p53 com atividade reduzida, e/ ou que expressa sob uma p53 normal, etc. Tipicamente as células virgens p53 mostram reduzida atividade supressora de tumor p53 em comparação com uma célula "normal". 6

Os termos "repórter" ou "gene repórter" referem-se ao gene ou cADN que expressa um produto que é detectável por meios espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, imunoquímicos, eléctricos, ópticos, e/ou químicos. Repórteres/etiquetas úteis a este respeito incluem, mas não estão limitadas a proteínas luminescentes, proteínas fluorescentes (por exemplo proteína verde fluorescente (GFP), proteína vermelha fluorescente (RFP), etc.), enzimas (por exemplo, peroxidase de rábano, fosfatase alcalina; β-galactosidase, e outras normalmente usados num ELISA), e semelhantes. 0 termo "gene repórter operativamente ligado a um promotor" refere-se a um promotor e um gene repórter, dispostos de tal modo que o promotor regule a transcrição do gene repórter. 0 termo "agente de teste" refere-se a um agente que está a ser rastreado em um ou mais dos ensaios aqui descritos. 0 agente pode ser virtualmente qualquer composto químico. Pode existir como um único composto isolado ou pode ser um membro de uma biblioteca de produtos químicos (por exemplo combinatória). Numa concretização particularmente preferida, o agente de teste será uma pequena molécula orgânica. 0 termo "pequena molécula orgânica" refere-se a uma molécula com um tamanho comparável às moléculas orgânicas geralmente utilizadas nos medicamentos. 0 termo exclui as macromoléculas biológicas (por exemplo, proteínas, ácidos nucleicos, etc.). Moléculas orgânicas pequenas preferidas variam em tamanho até cerca de 5000 Da, mais 7 preferencialmente até 2000 Da e mais preferivelmente até cerca de 1000 Da.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 ilustra os elementos de ligação do p53 na Bax 5' UTR. A Figura 2A mostra a estrutura de RP53-1 (G6). A Figura 2B mostra que RP53-1 (G6) ativa o repórter p53/Bax em células HEK293T para níveis relativos que sobre expressam transitoriamente a proteína p53. A Figura 3 mostra o p53 mutante (MDA-435), mas não do tipo selvagem (MCF-7), células de cancro da mama são sensíveis ao composto de p53 mimético RP53-1 (G6). A Figura 4 ilustra as mutações do p53 que resultam em desregulação da expressão Bax/Bcl-2. A Figura 5 ilustra que a expressão do Bax é induzida por p53 e leva a apoptose. A Figura 6 ilustra o rastreio de mímicos/agonistas de p53. A Figura 7 mostra que um único tratamento de células de cancro da mama com G6 resulta em completa eficácia do fármaco. A Figura 8 mostra que a G6 induz o p53 repórter em Mt p53 e células nulas. A Figura 9 ilustra os resultados do tratamento de células HT-29 com G6. A Figura 10 mostra que o tratamento de ratinhos nus G6 implantados com tecidos de osteosarcoma humano resulta em de regressão completa do tumor. 8

DESCRIÇÃO DETALHADA

Esta invenção é baseada, em parte, na ideia de que a triagem de compostos moleculares pequenos que atuam como miméticos de p53 na ativação da expressão bax pode resultar em terapêutica para muitas neoplasias mamárias. I. Sistema de rastreio para miméticos/agonistas de p53

Para identificar miméticos de p53, foi desenvolvido um sistema de células de mamifero vivo que relata a promoção da expressão da proteina pró-apoptótica Bax. 0 promotor bax consiste em 372 nucleótideos 5'UTR, uma sequência TATAA, e várias sequências de consenso que se ligam a p53, resultando na sobre regulação da expressão Bax (ver, por exemplo, a Figura 1). Ao expressar estes sitios a montante do gene que codifica a luciferase em células HEK293T (ver, por exemplo, a Figura 5) , criámos um novo conjunto de linhas de células repórter. Estas células fornecem um sistema que permite a identificação de ambos os ativadores diretos da expressão Bax e substituições de uma função apoptótica de p53 (ver, por exemplo, a Figura 6). A) Rastreio de alto rendimento para miméticos/agonistas de p53

As linhas de células descritas aqui são particularmente eficazes para a triagem de miméticos/agonistas de p53. Além disso, estas linhas de células são igualmente bem adaptadas para as modalidades de "elevado rendimento". Convencionalmente, novas entidades quimicas com propriedades úteis (por exemplo, a modulação da atividade ou expressão do transportador, ou a capacidade de ser transportado pelos transportadores da presente invenção) são geradas por meio da identificação de um composto quimico (chamado um "composto guia") com alguma propriedade 9 ou atividade desejável, criando variantes do composto guia, e avaliando a propriedade e atividade desses compostos variantes. No entanto, a tendência atual é a de reduzir a escala de tempo para todos os aspectos da descoberta de medicamentos. Devido à capacidade de testar um grande número com rapidez e eficiência, métodos de rastreio de alto rendimento (HTS) estão a substituir os métodos de identificação de compostos guia convencionais.

Numa concretização preferida, os métodos de rastreio de elevado rendimento envolvem proporcionar uma biblioteca contendo um grande número de compostos (compostos candidatos/agentes de teste) possuindo, potencialmente, a atividade desejada. Tais "bibliotecas químicas" são então pesquisadas num ou mais ensaios, como descrito aqui, para identificar aqueles membros da biblioteca (espécies químicas particulares ou subclasses) que exibem uma atividade característica desejada. Os compostos assim identificados podem servir como "compostos guia" convencionais ou podem ser eles próprios utilizados como terapêutica potencial ou real. 1) Bibliotecas para o rastreio de agentes que atuam como miméticos/agonistas de p53 A probabilidade de um ensaio de identificação de um agente que atua como um mimético/agonista de p53 é aumentada quando o número e tipos de agentes de teste utilizados no sistema de rastreio são aumentados. Recentemente, a atenção tem-se centrado na utilização de bibliotecas químicas combinatórias para auxiliar a geração de novas pistas de compostos químicos. Uma biblioteca de química combinatória é uma coleção de diversos compostos químicos gerados por síntese química ou síntese biológica através da combinação 10 de uma série de "blocos de construção" químicos, tais como reagentes. Por exemplo, uma biblioteca química combinatória linear tal como uma biblioteca de polipeptídeo é formada pela combinação de um conjunto de blocos de construção químicos chamados aminoácidos de qualquer maneira possível para um determinado comprimento do composto (ou seja. o número de aminoácidos num compostos polipeptídico). Milhões de compostos químicos podem ser sintetizados por meio de tal mistura combinatória de blocos de construção químicos. Por exemplo, um comentador observou que a a mistura combinatória sistemática de 100 blocos de construção químicos intercambiáveis resulta na síntese teórica de 100 milhões de compostos tetraméricos ou 1,0 bilião de compostos pentaméricos (Gallop et al. (1994) 37 (9) :1,233 -1250) .

Preparação e rastreio de bibliotecas químicas combinatórias são bem conhecidos dos peritos na técnica. Tais bibliotecas químicas combinatórias incluem, mas não estão limitados a, bibliotecas de péptidos (ver, por exemplo, Patente US 5010175, Furka (1991) Int. J. Pept. Prot. Res., 37: 487-493, Houghton et al. (1991) Nature, 354:84-88). A síntese peptídica não é, de modo nenhum, a única abordagem possível e destinada à para utilização com a presente invenção. Outros produtos químicos para a geração de bibliotecas químicas diversas podem também ser utilizados. Tais produtos químicos incluem, mas não estão limitados a: peptóides (Publicação PCT WO 91/19735, 26 de dezembro de 1991), péptidos codificados (Publicação PCT WO 93/20242, 14 de outubro de 1993), bio-oligómeros aleatórios (Publicação PCT WO 92/00091, 09 de janeiro de 1992), benzodiazepínicos (Patente US 5288514), diversómeros como hidantoínas, benzodiazepínicos e dipéptidos (Hobbs et al., (1993) Proc. 11

Nat. Acad. Sei. USA 90:6909-6913), polipéptidos vinilógos (Hagihara et al. (1992) J. Amer. Chem. Soc. 114:6568), peptidomiméticos não peptídicos com um andaime Beta-D-Glucose (Hirschmann et al., (1992) J. Amer. Chem. Soc. 114:9217-9218), sinteses orgânicas análogas de bibliotecas de compostos pequenos (Chen et al. (1994) J. Amer. Chem. Soc. 116:2661), oligocarbamatos (Cho, et al., (1993) Science 261:1303), e/ou fosfonatos de peptidilo (Campbell et al., (1994) J. Org. Chem. Chem. 59: 658). Ver, em geral, Gordon et al., (1994) J. Med. Chem. Chem. 37:1385, bibliotecas de ácidos nucleicos (ver, por exemplo, Strategene, Corp), bibliotecas de ácidos nucleicos peptídicos (ver, por exemplo, Patente US 5539083), bibliotecas de anticorpos (ver, por exemplo, Vaughn et al. (1996) Nature Biotechnology, 14 (3):309-314) e PCT/US96/10287), bibliotecas de carboidratos (ver, por exemplo, Liang et al. (1996) Science, 274:1520-1522, e Patente US 5593853) e bibliotecas de moléculas pequenas orgânicas (ver, por exemplo, benzodiazepínicos, Baum (1993) C & EN, 18 de janeiro, página 33, isoprenóides Patente US 5569588, tiazolidinonas e metatiazanonas Patente US 5549974, pirrolidinas Patentes US 5525735 e 5519134, compostos de morfolino Patente US 5506337, benzodiazepinas 5288514, e semelhantes).

Além disso, um número de bibliotecas estão disponíveis comercialmente. Essas bibliotecas incluem, mas não estão limitadas a Chem Bridge DiverSet E (16320 compostos), Bionet 1 (4800 compostos) , CEREP (4800 compostos) ,

Maybridge 1 (8800 compostos), Maybridge 2 (704 compostos), Peakdale 1 (2816 compostos), Peakdale 2 (352 compostos),

ChemDiv Combilab and International (28864 compostos), Mixed Commercial Plate 1 (352 compostos), Mixed Commercial Plate 12 2 (320 compostos), Mixed Commercial Plate 3 (251 compostos), Mixed Commercial Plate 4 (331 compostos),

Chembridge Microformat (50000 compostos), Commercial Diversity Setl (5056 compostos) , várias coleções NIC (por exemplo, Structural Diversity Set, versão 1 (1900 compostos) , Structural Diversity Set, versão 2 (1900 compostos), Mechanistic Diversity Set (879 compostos), Open Collection 1 (90000 compostos), Open Collection 2 (10240 compostos), e semelhantes, NINDS Custom Collection (1040 compostos) , ICCB Bioactives 1 (489 compostos) , SpecPlus

Collection (960 compostos), Biomol ICCB know Bioactives (480 compostos), vários ICCB Discretes Collections (por exemplo, ICCB1 (190 compostos), ICCB2 (352 compostos), ICCB3 (352 compostos), ICCB4 (352 compostos), e semelhantes), vários extractos de produtos naturais (por exemplo, NCI Marine Extractes (352 poços), frações aquosas NCI Plant and Fungai Extracts (2112 poços), frações orgânicas - NCI Plant and Fungai Extracts (1408 poços), Philippines Plant Extracts 1 (200 poços), Philippines Plant Extracts 2 (648 poços), Starr Foundation Extracts 1 (1024 poços)) e semelhantes. 2) Dispositivos de rastreio de alto rendimento.

Um certo número de sistemas de rastreio de alto rendimento comercialmente disponíveis (ver, por exemplo, Zymark Corporation, Hopkinton, ΜΔ; Air Technical Industries, Mentor, OH; Beckman Instruments, Inc. Fullerton, CA;

Precision Systems, Inc., Natick, MA, etc.). Estes sistemas tipicamente automatizam procedimentos completos incluindo toda a pipetagem de amostras e reagentes, distribuição de liquidos, incubações temporizadas e leituras finais da microplaca em detector (es), adequado (s) para o ensaio. Estes sistemas configuráveis proporcionam alto rendimento e rápida inicialização, bem como um alto grau de 13 flexibilidade e personalização. Os fabricantes de tais sistemas de alto rendimento proporcionam protocolos pormenorizados. Assim, por exemplo, Zymark Corp proporciona boletins técnicos descrevendo sistemas de rastreio para detecção da modulação da transcrição de genes, ligação de ligandos, e outros semelhantes. II. Miméticos/agonistas de p53

Em certas formas de realização, esta invenção proporciona um certo número de miméticos/agonistas de p53. Estes compostos tipicamente promove a morte celular de uma célula virgem p53 (por exemplo, uma célula cancerosa). Em certas concretizações, os compostos compreende a fórmula:

onde R1 e R4 são independentemente selecionados a partir do grupo consistindo num grupo amino, um grupo ciano, um grupo nitro, um grupo carboxilo, halo, hidroxilo, SO2, alquilo Ci-6, haloalquilo C1-6, alcoxilo Ci-s, alcoxialquilo Ci-n, alquilamino Ci_6 e aminoalquilo Ci_6; R2 e R3 são independentemente selecionados de entre o grupo consistindo em C, N; R5 é C ou 0; R6 e R7 são independentemente selecionados de entre o grupo consistindo eme H, halogéneo, CN, NO2, alquilo C1-10 ramificado ou não ramificado, saturado ou insaturado, alcoxi C1-10 ramificado ou não 14 ramificado, acilo Ci_io ramificado ou não ramificado, aciloxi Ci-io ramificado ou não ramificado, alquiltio Ci-io ramificado ou não ramificado, aminossulfonilo, arilo, aroilo, ariloxi, arilsulfonilo, heteroarilo e heteroariloxi; R8 é selecionado a partir do grupo que consiste em N02, OH, COOH; R9 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, CH3. Também estão incluídos ésteres ou sais farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos. Em certas formas de realização, R6 e R7 são ambos halogéneos. Em certas concretizações, R1 e R4 são ambos amino. Em certas formas de realização, R2 e R3 são ambos N. Em certas concretizações, R8 é N02 · Em certas formas de realização, o composto tem a fórmula:

Tais compostos podem ser facilmente formulados, por exemplo, utilizando o composto de fórmula II, como ponto de partida. III. Formulações farmacêuticas

Em certas concretizações, os miméticos/agonistas de p53 desta invenção são fornecidos e/ou administrados como formulações farmacêuticas. Tipicamente um ou mais miméticos/agonistas de p53 da presente invenção são 15 administrados, por exemplo, a um indivíduo diagnosticado como tendo um ou mais sintomas de cancro. Os miméticos/agonistas de p53 podem ser administrados sob a forma "nativa" ou, se desejado, sob a forma de sais, ésteres, amidas, pró-fármacos, derivados e semelhantes, desde que o sal, éster, amida, pró-fármaco ou derivado seja farmacologicamente adequado, ou seja, eficaz no presente método. Sais, ésteres, amidas, pró-fármacos e outros derivados dos agentes ativos podem ser preparados usando procedimentos padrão conhecidos dos peritos na técnica da química orgânica de síntese e descritos, por exemplo, por March (1992) Advanced Organic Chemistry; Reactions, Mechanisms and Structure, 4th ed. Wiley-Interscience NY.

Por exemplo, os sais de adição de ácidos são preparados a partir da base livre usando uma metodologia convencional, que tipicamente envolve a reação com um ácido adequado. Geralmente, a forma de base do fármaco é dissolvida num solvente orgânico polar, tal como metanol ou etanol e o ácido é adicionado ao mesmo. 0 sal resultante precipita ou pode ser retirado da solução por adição de um solvente menos polar. Os ácidos adequados para preparar sais de adição de ácido incluem ácidos tanto orgânicos, como por exemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido salicílico, e semelhantes, bem como os ácidos inorgânicos, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e semelhantes. Um sal de adição de ácido pode ser reconvertido na base 16 livre por tratamento com uma base adequada. Os sais de adição de ácido particularmente preferidos dos agentes ativos aqui referidos são sais de halogeneto, tais como podem ser preparados utilizando os ácidos clorídrico ou bromídrico. Por outro lado, a preparação de sais de base dos miméticos/agonistas de p53 são preparados de uma maneira semelhante, utilizando uma base farmaceuticamente aceitável tal como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de amónio, hidróxido de cálcio, trimetilamina, ou semelhantes. Sais básicos particularmente preferidos incluem sais de metais alcalinos, por exemplo, o sal de sódio e sais de cobre. A preparação dos ésteres tipicamente envolve a funcionalização dos grupos hidroxilo e/ou carboxilo que podem estar presentes dentro da estrutura molecular do fármaco. Os ésteres são normalmente derivados de acilo substituídos dos grupos álcool livres, isto é, radicais que são derivados de ácidos carboxílicos da fórmula RCOOH em que R é alquilo, e de preferência é alquilo inferior. Os ésteres podem ser reconvertidos nos ácidos livres, se se desejar, por meio de hidrogenólise convencional ou processos de hidrólise.

As amidas e pró-fármacos também podem ser preparadas utilizando técnicas conhecidas dos peritos na técnica ou descritas na literatura pertinente. Por exemplo, as amidas podem ser preparadas a partir de ésteres, utilizando reagentes de amina adequados, ou podem ser preparadas a partir de um anidrido ou de um cloreto de ácido por reação com amónia ou uma amina de alquilo inferior. Os pró-fármacos são geralmente preparados por ligação covalente de uma unidade que resulta num composto que seja 17 terapeuticamente inativo até ser modificado pelo sistema metabólico de um indivíduo.

Os miméticos/agonistas aqui identificados são úteis para administração parentérica, tópica, oral, nasal (inalado ou de outra forma), rectal ou local, tal como por aerossol ou transdermicamente, para tratamento profilático e/ou terapêutico de aterosclerose e/ou seus sintomas. As composições farmacêuticas podem ser administradas numa variedade de formas de dosagem unitárias dependendo do método de administração. As formas de dosagem unitária adequadas, incluem, mas não estão limitadas a pós, comprimidos, pílulas, cápsulas, pastilhas, supositórios, pensos, aerossóis nasais, injetáveis, formulações de libertação sustentada implantáveis, complexos de lípidos, etc.

Os miméticos/agonistas desta invenção são normalmente combinados com um portador farmaceuticamente aceitável (excipiente) para formar uma composição farmacológica. Transportadores farmaceuticamente aceitáveis podem conter um ou mais compostos fisiologicamente aceitáveis que atuam, por exemplo, para estabilizar a composição, ou para aumentar ou diminuir a absorção do agente ativo (s) . Os compostos fisiologicamente aceitáveis podem incluir, por exemplo, hidratos de carbono, tais como, glucose, sacarose ou dextranos, antioxidantes, tais como ácido ascórbico ou glutationa, agentes quelantes, proteínas de baixo peso molecular, potenciadores de proteção e de absorção, tais como, lípidos, composições que reduzem a depuração ou a hidrólise dos agentes ativos ou excipientes ou outros estabilizantes e/ou tampões. 18

Outros compostos fisiologicamente aceites incluem agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes dispersantes ou conservantes que são particularmente úteis para evitar o crescimento ou a ação de microrganismos. Vários conservantes são bem conhecidos e incluem, por exemplo, fenol e ácido ascórbico. Um perito na técnica apreciará que a escolha do veiculo farmaceuticamente aceitável, incluindo um composto fisiologicamente aceitável, depende, por exemplo, da via de administração do agente ativo (s) e das caracteristicas fisico-quimicas particulares do agente ativo (s).

Os excipientes são, de preferência, estéreis e geralmente isentos de matéria indesejável. Estas composições podem ser esterilizadas por técnicas de esterilização convencionais bem conhecidas.

Em aplicações terapêuticas, as composições da presente invenção são administradas a um paciente que sofre de um ou mais sintomas de aterosclerose ou em risco de aterosclerose, numa quantidade suficiente para curar ou pelo menos parcialmente, prevenir ou parar a doença e/ou as suas complicações. Uma quantidade adequada para conseguir isto é definida como uma "dose terapeuticamente eficaz". As quantidades eficazes para esta utilização dependerão da gravidade da doença e do estado geral de saúde do paciente. As administrações únicas ou múltiplas das composições podem ser administradas dependendo da dosagem e da frequência necessárias e toleradas pelo paciente. Em qualquer caso, a composição deve proporcionar uma quantidade suficiente dos agentes ativos das formulações da presente invenção para tratar eficazmente (melhorar um ou mais sintomas) o paciente. 19 A concentração de miméticos/agonistas de p53 pode variar amplamente, e será selecionada primariamente com base nos volumes de fluido, viscosidades, peso corporal e semelhantes, de acordo com o modo de administração particular selecionado e as necessidades do paciente. As concentrações, contudo, serão tipicamente selecionadas para proporcionar dosagens que variam de cerca de 0,1 ou 1 mg/kg/dia a cerca de 50 mg/kg/dia e, por vezes mais elevada. As dosagens tipicas variam de cerca de 3 mg/kg/dia até cerca de 3,5 mg/kg/dia, de preferência desde cerca de 3,5 mg/kg/dia até cerca de 7,2 mg/kg/dia, mais preferivelmente de cerca de 7,2 mg/kg/dia a cerca 11,0 mg/kg/dia, e mais preferencialmente de cerca de 11,0 mg/kg/dia até cerca de 15,0 mg/kg/dia. Em certas concretizações preferidas, as dosagens variam desde cerca de 10 mg/kg/dia a cerca de 50 mg/kg/dia. Deve notar-se que estas dosagens podem variar para optimizar um regime terapêutico, um indivíduo particular ou um grupo de indivíduos.

Em certas formas de realização preferidas, os miméticos/agonistas de p53 da presente invenção são administrados por via oral (por exemplo, através de um comprimido) , ou como um injetável, de acordo com métodos padrão bem conhecidos dos peritos na técnica. Em outras concretizações preferidas, os miméticos/agonistas de p53, também podem ser entregues através da pele, utilizando sistemas convencionais de entrega de fármacos transdérmicos, isto é, "adesivos" transdérmicos, em que o agente ativo (s) está tipicamente contido dentro de uma estrutura laminada, que serve como dispositivo de entrega do fármaco para ser afixado à pele. Nesta estrutura, a composição do fármaco está normalmente contido numa camada, 20 ou "reservatório", subjacente a uma camada de suporte superior. Será apreciado que o termo "reservatório", neste contexto, refere-se a uma quantidade de "ingrediente ativo (s) " que está em última análise disponível para entrega à superfície da pele. Assim, por exemplo, o "reservatório" pode incluir o ingrediente ativo (s) num adesivo numa camada de suporte deste, ou em qualquer um de uma variedade de diferentes formulações de matriz conhecida pelos especialistas na técnica. 0 adesivo pode conter um reservatório único ou pode conter reservatórios múltiplos.

Numa forma de realização, o reservatório compreende uma matriz polimérica de um material adesivo de contacto farmaceuticamente aceitável, que serve para fixar o sistema sobre a pele durante a entrega do fármaco. Exemplos de materiais adesivos de contacto de pele adequados incluem, mas não estão limitados a, polietilenos, polisiloxanos, poliisobutilenos, poliacrilatos, poliuretanos e afins. Em alternativa, o reservatório que contém o fármaco e o adesivo de contacto com a pele estão presentes como camadas distintas e separadas, com o adesivo subjacente ao reservatório, que, neste caso, tanto pode ser uma matriz polimérica, como descrito acima, ou pode ser um líquido ou um reservatório de hidrogel, ou pode tomar qualquer outra forma. A camada de suporte nestes laminados, que serve como superfície superior do dispositivo, de preferência, funciona como um elemento estrutural primário do "adesivo" e proporciona ao dispositivo muita da sua flexibilidade. 0 material selecionado para a camada de suporte é de preferência substancialmente impermeável para o agente ativo (s) e quaisquer outros materiais que estejam presentes. 21

Em certos casos, nomeadamente quando a biodisponibilidade é reduzida com a administração sistémica, os miméticos/agonistas de p53 são administrados diretamente a um local de tumor ou a um local de lesão pós-operatória. Tal entrega pode ser direta através de uma cânula ou por injeção ou colocação de uma formulação de liberação temporizada, por exemplo, durante um procedimento cirúrgico.

Outras formulações preferidas para entrega tópica de fármacos incluem, mas não estão limitados a, pomadas e cremes. As pomadas são preparações semissólidas que são tipicamente baseadas em derivados de petrolato ou outros derivados de petróleo. Cremes contendo o agente ativo selecionado, são tipicamente emulsões liquidas viscosas ou semissólidas, muitas vezes, quer água-em-óleo ou óleo-em-água. Os cremes são tipicamente de base de água-lavável, e contêm uma fase oleosa, um emulsionante e uma fase aquosa. A fase de óleo, por vezes também chamada a fase "interna", é geralmente constituído por petrolato e um álcool gordo tal como o álcool cetílico ou estearílico; a fase aquosa, normalmente, mas não necessariamente, é superior em volume à fase oleosa, e geralmente contém um humectante. 0 emulsionante numa formulação de creme é, geralmente, um agente tensioativo não iónico, aniónico, catiónico ou anfotérico. 0 unguento ou base de creme específico a ser utilizado, tal como será apreciado pelos peritos na técnica, é aquele que vai proporcionar a entrega ideal do fármaco. Tal como acontece com outros transportadores ou veículos, uma base de pomada deve ser inerte, estável, não irritante e não sensitiva. 22 IV. Mitigação/tratamento de cancros

Em certos casos, os miméticos/agonistas de p53 da presente invenção são administrados para mitigar um ou mais sintomas de um cancro (por exemplo, para induzir a morte celular em células cancerosas). Os miméticos/agonistas de p53 podem ser administrados para reduzir o crescimento/proliferação do tumor, para inibir a metástase, para evitar uma recaída (por exemplo, após a cirurgia, a radioterapia, etc.), ou como um componente de uma modalidade de terapia múltipla.

Tipicamente, os miméticos/agonistas de p53 serão administrados numa quantidade suficiente para produzir um efeito biológico (por exemplo, para inibir o crescimento de células cancerosas e/ou a proliferação). Maior eficácia deverá ser encontrada em cancros caracterizados por células virgens p53. V. Kits.

Ainda numa outra forma de realização, esta invenção proporciona estojos para o rastreio de mímicos/agonistas de p53. Tais estojos tipicamente compreendem um recipiente que contém uma linha de células tal como aqui descrito.

Em outras formas de realização, esta invenção proporciona estojos que promovem a morte celular de uma célula virgem p53. Esses kits compreendem, tipicamente, um recipiente contendo um ou mais dos miméticos/agonistas de p53 desta invenção.

Os kits podem incluir, opcionalmente, um ou mais reagentes para utilização nos métodos da presente invenção. Tais "reagentes" podem incluir, mas não estão limitados a, 23 células e/ou linhas celulares, reagentes de transfecção (por exemplo, CaP04, lipofectina), marcadores detectáveis, meios para a detecção de rótulos, tampões, anticorpos anti-transportadores, construções de ácido nucleico que codifica genes de arrumação, biorreatores, seringas e outros dispositivos.

Além disso, os kits podem incluir materiais de instrução contendo as diretivas (ou seja, protocolos) para a prática dos métodos desta invenção. Certos materiais de instrução preferenciais fornecem protocolos que utilizam o conteúdo do kit para o rastreio de miméticos/agonistas de p53 ou para promover a morte celular nas células virgens p53. Embora os materiais didáticos compreendam tipicamente materiais escritos ou impressos, não estão limitados a tal. Qualquer meio capaz de armazenar tais instruções e comunicá-las ao utilizador final é contemplado por esta invenção. Tais meios incluem, mas não estão limitados a meios de armazenagem electrónicos (por exemplo, discos magnéticos, fitas magnéticas, cartuchos, chips), meios ópticos (por exemplo, CD-ROM) e semelhantes. Tais meios podem incluir endereços de sitios na Internet que fornecem esses materiais didáticos. EXEMPLOS EXEMPLO 1 IDENTIFICAÇÃO DE MIMÉTICOS P53

Para identificar miméticos de p53, foi desenvolvido um sistema de células de mamifero vivo que relata a promoção da expressão da proteina Bax pró-apoptótica. 0 promotor bax consiste em 372 nucleótideos 5'UTR, uma sequência TATAA, e várias sequências de consenso que se ligam a p53, resultando na sobre regulação da expressão Bax (ver, por 24 exemplo, a Figura 1). Ao expressar estes sítios a montante do gene que codifica a luciferase em células HEK293T, criámos um novo conjunto de linhas de células repórter. Estas células fornecem um sistema que permite a identificação de ambos os ativadores diretos da expressão e Bax e as substituições de uma função apoptótica de p53.

Descoberta de uma pequena molécula que substitui a função de p53

Nos estudos iniciais, a co-transfecção de um plasmídeo de expressão p53 com sítios de ligação de consenso de um repórter oligomerizado rendeu células fortemente luminescentes, enquanto a co-transfecção com um plasmídeo irrelevante não deu luminescência. 0 sistema apresenta um sinal suficientemente elevado e um fundo suficientemente baixo para permitir que as moléculas pequenas sejam isoladas a partir de bibliotecas de compostos. Ao empregar o manuseio do sistema líquido robótico Multi-Probe II e o luminómetro ultra-sensível Top-Count, foi ativado o rastreio de alta velocidade de milhares de compostos no Instituto Buck.

Foi obtida e rastreada uma biblioteca com cerca de 2000 compostos de moléculas pequenas disponibilizada pelo National Câncer Institute, no nosso sistema de repórter p53 em células HEK293T. Surpreendentemente, identificou-se oito compostos que atuavam sobre o sistema de repórter p53 e produziram aumentos na expressão e atividade da luciferase. Um composto (apelidado RP53-1 ou 06) produziu níveis significativos de atividade de luciferase e, em concentrações elevadas (10 μΜ) induziu níveis maiores da expressão de luciferase do que o p53 do tipo selvagem transfectado (ver, por exemplo, a Figura 2B). 25

Agente quimioterápico RP53-1 tendo especificamente como alvo as neoplasias

Para avaliar a capacidade do composto de molécula pequena RP53-1 para imitar as funções de promotores da transcrição de p53 conduzindo à expressão Bax e indução de morte celular, células cancerosas da mama humana p53 mutado MDA-MB-435 e p53 do tipo selvagem MCF-7 foram tratadas com RP53-1. É interessante notar que apenas o primeiro era sensível a RP53-1 (Figura 3). De igual modo, outras linhas de células de tumor p53 mutante eram também sensíveis à RP53-1 (cólon: ColoHSR, SW480, HT29, próstata: PC-3, DU145, osteossarcoma: SAOS-2), enquanto as células de p53 de tipo selvagem eram resistentes (cólon: Lovo; próstata: LNCaP) A especificidade apresentada por RP53-1 na indução da morte apenas em células p53 mutantes torna-o um candidato ideal para utilização como uma intervenção terapêutica em tumores p53 inativos (ou mau funcionamento de p53) (isto é, a maioria dos tumores clinicamente relevantes) . A falta de toxicidade em células geradoras da atividade normal de p53 (todas as outras células de origem humana) iria reduzir os possíveis efeitos secundários.

Uma vez que o p53 sobre regula a expressão Bax enquanto também diminui a expressão de Bcl-2 anti-apoptótica relacionada (tendo assim, pelo menos, dois efeitos que levam à morte celular), a identificação de pequenas moléculas capazes de substituir a atividade de p53 perdida por sobre regulação Bax, induzindo assim a morte celular de um modo independente de p53 (por exemplo, induzindo a morte celular na ausência de função de p53, substituindo a atividade funcional da p53 com uma molécula pequena) pode permitir a descoberta de novas ferramentas para controlar tanto Bax como Bcl-2 no interior dos tecidos. A importância 26 destas moléculas críticas na neoplasia humana é apoiada pela elevada frequência de mutações de p53, Bax e Bcl-2 em cancros humanos.

Conclusão A descoberta do primeiro mimético de p53, o composto ativo RP53-1, valida e exibe o potencial da metodologia descrita acima. Os sistemas de rastreio aqui descritos aumentam significativamente o nosso potencial para fazer descobertas como o RP53-1, otimizar o RP53-1 para testes clínicos em humanos, e tornar possível uma nova abordagem na erradicação do cancro da mama.

Exemplo 2

Terapêuticas para o cancro usando miméticos de p53 como ativadores da expressão Bax

As mutações de p53 estão associadas com uma elevada percentagem de todos os tumores humanos. Usando um novo rastreio de alto rendimento de molécula pequena, os cientistas no Buck's Institute Discovery Translation Unit (DTU) descobriram o primeiro mimético de p53 funcional chamado G6. G6 e terapêuticas relacionadas podem ser desenvolvidas como agentes terapêuticos para o cancro, incluindo da mama, próstata, pulmão, cólon e pâncreas, bem como osteossarcoma.

Contexto

0 p53 é considerado ser o "guardião do genoma". Um dos papéis do p53 é cometer células geneticamente anormais à morte celular programada suprimindo, assim, o crescimento do tumor. Se o p53 está ausente ou mutado para uma forma não-funcional, o seu papel fundamental como um supressor de tumor é eliminado, como é observado em muitos cancros. A 27 ativação de p53 será necessária para à sensibilização de células de tumor à quimioterapia e à radiação; ausência da função p53 está frequentemente associada com a falta de resposta a estas terapias. Mais de metade de todos os tumores humanos não possui a função de p53 adequada. Não surpreendentemente, os métodos de restaurar a função de p53 têm sido muito procurados como uma estratégia anticancerigena, no entanto, esta provou ser um problema dificil.

Uma função fundamental para o p53 é regular a expressão de proteinas importantes para as decisões de vida e de morte que as células fazem ao responder a situações neoplásicas adversas, tais como mutações deletérias introduzidas no ADN ou aumentos injustificados na taxa de proliferação. A ativação de p53 (por modificações tais como a fosforilação (Figura 4, circulo) resulta em alterações na expressão de proteinas tais como os antagonistas parceiros Bax e Bcl2.

Em condições neoplásicas, o p53 regula positivamente a expressão da proteína pro-morte Bax, ao mesmo tempo que diminui a expressão da proteína anti-morte (oncogénica) Bcl2. Além disso, o único ativador endógeno conhecido da expressão Bax é o p53. Um terço de todos os carcinomas da mama humanos avançados demonstra uma redução marcada na expressão Bax. 0 subgrupo de pacientes exibindo expressão Bax reduzida geralmente respondem mal ao tratamento e apresentam crescimento de tumores e encurtamento da sobrevida mediana. Por essas e outras razões, nós projetamos um rastreio para compostos de pequenas moléculas que imitam o papel de p53 como um retardador da oncogénese. 28

Tecnologia 0 rastreio de compostos de pequenas moléculas que atuam como miméticos de p53 é esperado produzir terapêutica para muitos tipos de cancro. A descoberta do primeiro mimético funcional de p53, o composto ativo G6 (ver, por exemplo, as Figuras 2A e 2B) valida e exibe o potencial da metodologia. Utilizando um novo sistema de rastreio de células vivas de alto rendimento determinou-se que G6 (Figura 2A) corrige as atividades de transcrição de p53 perdidas na neoplasia. Este composto "guia" apresenta a oportunidade para a otimização do ensaio clinico humano em cancros que são deficientes em p53 ou que expressam p53 com defeito. E evidente que as outras famílias de compostos podem ser identificadas através do mesmo processo de rastreio.

Inerente ao projeto inicial de fármacos era uma estratégia para desenvolver uma terapia que visa conter asa células com p53 mutante e que deixaria as células saudáveis expressando p53 normal, Confirmando a validade do linha de células de tumor mostrou susceptibilidade, selvagem a partir de tecido afectadas confirmando assim por exemplo, Tabela 1, e as não afetadas (Figura 3). G6 como um composto guia, cada defeituosa p53 tratada com G6 enquanto as células do tipo normal correspondente não foram a seletividade do fármaco (ver, Figuras 8 e 9). 29

Tabela 1. P 53 wt e células nulas são sensíveis ao G6

Estado de p53

Linha celular WT Mutante ou nulo Sensibilidade G6 Próstata PC3 Nulo + + DU145 Mt + + LNcap WT - Cólon ColoHSR Mt + + + + SW4 8 0 Mt + + Lovo WT - HT2 9 Mt + + Mama MDA-435 Mt + + + MCF-7 WT - Osteosarcoma Saos-2 Nulo + + + + Pulmão A54 9 WT - H23 Mt + + + Rim embrionário 293 WT - 30

Uma vez que G6 ativa uma via celular inerente, um único impulso de G6 na gama nanomolar é suficiente para ativar o programa de morte celular (Figura 7) . T hus G6 parece ser um tratamento potente.

Experiências iniciais de G6 em ratinhos nus xenoenxertados com osteossarcoma humano mostraram-se prometedoras (Figura 10). Ratinhos com tumores p53 anormais têm respondido bem ao G6. A regressão do tumor tem sido completa e nenhum dos ratos mostrou efeitos secundários adversos, em resposta ao tratamento com o G6. Outros estudos em ratos estão em andamento. 31

Claims (3)

1. em que: R‘ e R" são independentemente selecionados a partir do grupo consistindo num grupo amino, um grupo ciano, um grupo nitro, um. grupo carboxilo, halo, hídroxilo, S02, alquilo Ci_6, haloalquilo Cí-í;, aicoxi Cf_s, alcoxialquilo Ct-ii, alqu.ilamino Cge aminoaiquilo Cj.. R‘ e R;’ são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em CH, K; R:; é CH2 ou 0; Rb é selecionado a partir do grupo constituído por halogéneo, CN, N02í alquilo ramificado ou não ramificado saturado ou insaturado Ci_io, aicoxi ramificado ou não ramificado CR.-io, aciio ramificado ou não ramificado C-j_ 10, aciloxi. ramificado ou não ramificado Ci-io, alquiltio ramificado ou não ramificado Ch.-io, aminosulfonilo, ari lo , aroilo, ariloxi, arilsalfonilo, heteroarilo e heteroariloxi; Kl é selecionado a partir do grupo consistindo em í-I, halogéneo, CN, N02, alquilo ramificado ou não ramificado dourado ou insaturado Cf ramificado aicos: acuo ramificado ramirrcaoo ou nao não ramificado Ci~ iloxi ramificado ou não ramificado Cof alquiltio ramificado não ramificadc ,, amínossulf onilo, arilo, aroilo, ari loxi, ari 1. sul f onilo, heteroari m het. eroari loxi lo; R' é seleci onado a ; pa: rtir dc ) g rup o cons. istindo em . no2, OH, COOH; vn 0 é selec ; j_ o i"i cl Cl O cl P ar tir do gri ipo cor iSÍSt indo « am H, CH.3 ' ou um éster _ΐ 3..irrriBC0‘ a ti Icament 0 - ice: i. t 3 V 0 J. ou u :m seu s a 1, em que o referic lo compo 3 L C • ! S 3 L cl I mm excip rente far maceutici amente ae ei' távei. Com posição da reivir 1 d 1 caçã.o -1- / em. que R2 e R ! são ambos f i d J_ ogéneos. Com posição da. rei vir idi cação 1, ps jr> Q'U0 Rj' e R" J são ambos ami η o s. Com .P o 3-lç ã o da reivir idi C cL Ç 3.0 — ' em que R2 e R " são ambos N omposição da reivindicação 1, em que Rf é N02. Composição da reivindicação composto tem a fórmula: em que referido
2. 7. Composição de qualquer das reivindicações 1 a 6, eni que a referida composição é formulada como uma formulaçã.o de dosagem unitária.
3. 8. Composição de qualquer uma das reivindicações 1-7, para atiIizaçã.o num método para o tratamento de cancro. Composi çao da rei vindicação 8 para Ό. i 11 Z cL ç ã O num método para o tratamen to de cancro, em que í o referid o cancro é s e i e c i o nado de ei itre o grupo cons istindo em cancro do fígado , cancro d a mama, cancro d .o pulmão, cancro do útero. cancro do ovário, cancro da próstata e cancro do cólon