BR112019025990A2 - domínios de ligação ao antígeno anti-trbc1 - Google Patents

domínios de ligação ao antígeno anti-trbc1 Download PDF

Info

Publication number
BR112019025990A2
BR112019025990A2 BR112019025990-2A BR112019025990A BR112019025990A2 BR 112019025990 A2 BR112019025990 A2 BR 112019025990A2 BR 112019025990 A BR112019025990 A BR 112019025990A BR 112019025990 A2 BR112019025990 A2 BR 112019025990A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
seq
cell
cells
trbc1
lymphoma
Prior art date
Application number
BR112019025990-2A
Other languages
English (en)
Inventor
Shaun Cordoba
Simon Thomas
Shimo­Bi Onuoha
Wen Chean Lim
Ram Jha
Original Assignee
Autolus Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Autolus Limited filed Critical Autolus Limited
Publication of BR112019025990A2 publication Critical patent/BR112019025990A2/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464403—Receptors for growth factors
    • A61K39/464404—Epidermal growth factor receptors [EGFR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
    • G01N2800/7023—(Hyper)proliferation
    • G01N2800/7028—Cancer

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)

Abstract

A presente invenção fornece um domínio de ligação ao antígeno anti-TRBC1 que compreende: a) um domínio VH com uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID Nº 9, SEQ ID Nº 10, SEQ ID Nº 11, SEQ ID Nº 12, SEQ ID Nº 13, SEQ ID Nº 13, SEQ ID Nº 14, SEQ ID 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17 e SEQ ID No. 18; e b) um domínio VL com uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID Nº 19, SEQ ID Nº 20, SEQ ID Nº 21, SEQ ID Nº 22, SEQ ID Nº 23, SEQ ID Nº 23, SEQ ID Nº 24, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 31, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33, SEQ ID No. 34.

Description

DOMÍNIOS DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO ANTI-TRBC1
CAMPO DE INVENÇÃO
[001] A presente invenção se refere a agentes úteis no tratamento de linfoma de célula T ou leucemia.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] As malignidades linfoides podem ser largamente divididas entre aquelas que são derivadas a partir de quaisquer células T ou células-B. As malignidades de células-T são um grupo clinicamente e biologicamente heterogênea de distúrbios, em conjunto compreendendo 10 - 20% de linfomas não-Hodgkin e 20% de leucemias agudas. Os subtipos histológicos mais comumente identificados são o linfoma de células T periféricas, e não de outro modo especificado (PTCL-NOS); linfoma imunoblástico angio-de células T (AITL) e linfoma anaplásico de células grandes (ALCL). De todos Leucemias linfoblástica aguda (ALL), cerca de 20% são de um fenótipo de células T.
[003] Estas condições normalmente se comportam de forma agressiva, em comparação, por exemplo, com malignidades de células B, com sobrevida estimada de apenas 30% em 5 anos. No caso de linfoma de células T, que estão associados com uma elevada percentagem de pacientes que se apresentam com doença disseminada, indicador de prognóstico desfavorável Internacional (IPI) pontuação e prevalência de doença extra-nodal. A quimioterapia sozinha não é geralmente eficaz e menos do que 30% dos pacientes são curados com os tratamentos atuais.
[004] Além disso, ao contrário de malignidades de células-B, onde imunoterapias, tais como o anticorpo monoclonal anti-CD20 com rituximab ter resultados melhoraram dramaticamente, atualmente não existe qualquer imunoterapêutico equivalente eficaz, minimamente tóxico disponível para o tratamento de malignidades de células-T. Uma dificuldade importante no desenvolvimento de imunoterapia para distúrbios das células T é a sobreposição considerável na expressão do marcador de células T clonais e normais, com nenhum antígeno claramente capaz de identificar células clonais (malignas).
[005] O mesmo problema existe quando destinado a um antígeno de célula B para tratar uma malignidade de células- B. No entanto, neste caso, a diminuição concomitante dos resultados do compartimento de células B em imunossupressão relativamente menor, que é facilmente tolerada pela maioria dos pacientes. Além disso, em terapias que resultam em particular depleção de longa duração do compartimento-B normal, a sua perda pode ser largamente anulada por administração de imunoglobulina agrupada. A situação é completamente diferente quando o direcionamento a malignidades de células-T. Aqui, a depleção concomitante dos condutores do compartimento de células T para a imunossupressão grave e toxicidade grave. Além disso, não há nenhuma maneira satisfatória para mitigar a perda do compartimento da célula-T.
[006] A toxicidade é em parte ilustrada pelos efeitos clínicos da terapêutica anticorpo monoclonal alemtuzumab. Este agente de lise de células que expressam CD52 e tem alguma eficácia em malignidades de células-T. A utilidade deste agente é grandemente limitada por uma profunda imunodeficiência celular, em grande parte devido à depleção de células T, com um risco marcadamente elevados de infecção.
[007] Existe, portanto, uma necessidade de um novo método para o tratamento alvo de malignidades de células-T, que não está associada com as desvantagens acima referidas.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[008] A Figura 1 mostra um diagrama do complexo CD3/ receptor de células T αβ. O receptor de células T é formado a partir de 6 cadeias de proteínas diferentes que devem montar no retículo endoplasmático para ser expresso na superfície da célula. As quatro proteínas do complexo CD3 (CD3ζ, CD3γ, CD3ε e CD3δ) a bainha de células T do receptor (TCR). Este TCR impregna o complexo com a especificidade de um antígeno particular, e é composta de duas cadeias: Tcra e TCRP. Cada uma das cadeias de TCR tem um componente variável distal da membrana e uma extremidade proximal componente constante para a membrana. Quase todos os linfomas de células T e muitas leucemias de células T expressam o complexo TCR / CD3.
[009] A Figura 2 mostra a segregação da região constante-β (TRBC)-1 do receptor de células T e TRBC2 durante o rearranjo do receptor de células-T. Cada cadeia beta de TCR é formada a partir de recombinação gênica de uma variável em particular de regiões beta (V), diversidade (D), ligação (J) e constantes (TRBC). O genoma humano contém dois loci TRBC muito semelhante e funcionalmente equivalente conhecido como TRBC1 e TRBC2. Durante TCR do gene re-arranjo, uma recombinação J-região com qualquer TRBC1 ou TRBC2. Este rearranjo é permanente. As células T expressam muitas cópias de uma única TCR na sua superfície, por conseguinte, cada uma das células T irá expressar um TCR cuja região constante de cadeia β é codificada por qualquer TRBC1 ou TRBC2.
[0010] Figura 3 mostra o alinhamento de TRBC1 e TRBC2 humano no nível de aminoácido. A cadeia constante TCRP codificada por TRBC1 e TRBC2 diferem em apenas 4 aminoácidos diferentes: K / N na posição 3 do TRBC; N / K na posição 4 do TRBC; F / Y na posição 36 da TRBC; V / E na posição 135 da TRBC.
[0011] A Figura 4 mostra diagramas esquemáticos que ilustram diferentes tipos de anticorpos referidos na geração de ligantes anti-TRBC1 humanizado.
[0012] A Figura 5 mostra a construção e seleção de enxerto de cadeia leve e pesada. Domínios VH e VL humanizado foram criados compreendendo as CDRs de JOVI-1 em conjunto com várias regiões de estrutura humana. Os anticorpos quiméricos foram gerados compreendendo humanizados VH com domínios VL de murino, humanizado ou VL com domínios VH de ratos e comparado com um anticorpo quimérico de controle que tem VP e VL (Jovi-1 quimera HC / Jovi-1 quimera LC) de murino. Os anticorpos humanizados também foram criados com combinações de VH e VL humanizados. Todos os anticorpos foram testados quanto à ligação a TRBC1 por ELISA.
[0013] A Figura 6 mostra a ligação TRBC1 / TRBC2 de construções mutadas-back. Uma série de construções VH mutados-back foram criadas com base na estrutura H-AF062256, como mostrado na Tabela 1. Estes domínios VH foram usadas para criar anticorpos humanizados em combinação com um domínio VL possuindo a estrutura humana 3aaΣ. Os anticorpos foram testados quanto à ligação a TRBC1 e TRBC2 por ELISA.
[0014] A Figura 7 mostra a Estabilidade de construções de nticorpo anti-TRBC1 (Tm ° C). Estabilidade de anticorpos que compreendem os constructos mutada-back mostrados na Tabela 1 com uma cadeia leve humanizada 3aaz em comparação com o JOVI 1-anticorpo de murino.
[0015] A Figura 8 mostra a estabilidade de construções de anticorpo anti-TRBC1 (Tm ° C).
[0016] A Figura 9 mostra um diagrama que ilustra um receptor de antígeno quimérico humanizado anti-TRBC1 esquemático (CAR)
[0017] A Figura 10 mostra morte específica mediada por CAR de alvos TRBC1 +. As células T não transfectadas, ou células T que expressam um CAR murino anti-TRBC1 (controle positivo); um CAR anti-TRBC1 humanizado; ou um anti-EGFRvlll CAR (controle negativo) foram co-cultivadas com expressão de TRBC1 ou TRBC2 que expressam as células alvo Raji e morte foram analisados utilizando citometria de fluxo.
[0018] A Figura 11 mostra a proliferação de células T que expressam CAR seguintes co-cultura com células-alvo. As células T não transfectadas, células T que expressam um CAR murino anti-TRBC1; ou células T que expressam um carro anti-TRBC1 humanizado; foram co-cultivadas com TRBC1- expressar ou TRBC2 que expressam as células alvo Raji durante 72 horas e a proliferação de células T foi medida.
[0019] A Figura 12 mostra a liberação de citoquina após a co-cultura de células T que expressam CAR e células- alvo. As células T não transfectadas ou células T que expressam um CAR murino anti-TRBC1 (controle positivo); um CAR anti-TRBC1 humanizado; ou um CAR anti-EGFRvlll (controle negativo) foram co-cultivadas com TRBC1 ou TRBC2 que expressam as células alvo Raji. A liberação de IFNy e IL-2 foi medida após 24 horas.
[0020] A Figura 13 mostra o efeito de CAR anti-TRBC1 humanizado no crescimento do tumor em um modelo de rato NSG, e
[0021] A Figura 14 mostra a expressão de marcadores de exaustão após a co-cultura com células-alvo. PBMC ativadas foram transduzidas com o CAR JOVI1 de murino (mJOVI) ou CAR Jovi-1 humanizado (H1L charneira), depletado de células que expressam CD56e co-cultivadas com TRBC1-TCR que expressam as células alvo Raji. Após 96 horas, as células foram coradas com anti-PD1, anti-LAG-3 e anticorpos anti-Tim3 em seguida analisadas por citometria de fluxo.
SUMÁRIO DOS ASPECTOS DA INVENÇÃO
[0022] Os presentes inventores desenvolveram uma série de domínios de ligação ao antígeno humanizados que se ligam a TRBC1 humano. O domínio de ligação ao antígeno pode ser utilizado em uma variedade de formatos terapêuticos, incluindo um receptor do antígeno quimérico (CAR), um anticorpo terapêutico, o conjugado anticorpo-fármaco (ADC) e engager células T bi-específicas (BiTE) para depletar células-T expressando TRBC1 maligno em um sijeito, sem afetar as células T expressando TRBC2 saudáveis.
[0023] Assim, em um primeiro aspecto, a invenção proporciona domínio de ligação do antígeno anti-TRBC1 que compreende:
a) um domínio VH possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir da SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17 e SEQ ID No. 18; e b) um domínio VL possuindo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir da SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 20, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 22, SEQ ID No. 23, SEQ ID No. 24, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 31, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33, SEQ ID No. 34.
[0024] Em um segundo aspecto, a invenção proporciona um receptor de antígeno quimérico (CAR), que compreende um domínio de ligação a antígeno anti-TRBC1, de acordo com o primeiro aspecto da invenção.
[0025] Em um terceiro aspecto, a invenção proporciona um anticorpo que compreende um domínio de ligação a antígeno anti-TRBC1, de acordo com o primeiro aspecto da invenção.
[0026] Em um quarto aspecto, a invenção proporciona um engager de células T biespecífico (BiTE) que compreende um domínio de ligação a antígeno anti-TRBC1de acordo com o primeiro aspecto da invenção.
[0027] Em um quinto aspecto, a invenção proporciona conjugado anticorpo-fármaco que compreende um domínio de ligação a antígeno anti-TRBC1de acordo com o primeiro aspecto da invenção.
[0028] Em um sexto aspecto, a invenção proporciona uma sequência de ácido nucleico que codifica para um CAR de acordo com o segundo aspecto da invenção.
[0029] Em um sétimo aspecto, a invenção proporciona um vetor compreendendo uma sequência de ácido nucleico de acordo com o sexto aspecto da invenção.
[0030] Em um oitavo aspecto, a invenção proporciona células compreendendo um CAR de acordo com o segundo aspecto da invenção.
[0031] Em um nono aspecto, a invenção proporciona um método para fazer uma célula de acordo com o oitavo aspecto da invenção, que compreende a etapa de introduzir um ácido nucleico de acordo com o sexto aspecto da presente invenção ou um vetor de acordo com o sétimo aspecto da invenção, em uma célula.
[0032] Em um décimo aspecto, a invenção proporciona uma composição farmacêutica que compreende uma pluralidade de células de acordo com o oitavo aspecto da invenção, um anticorpo de acordo com o terceiro aspecto da invenção, uma picada de acordo com o quarto aspecto da invenção ou um anticorpo conjugado -droga de acordo com o quinto aspecto da invenção.
[0033] Em um décimo primeiro aspecto, a invenção proporciona uma composição farmacêutica de acordo com o décimo aspecto da presente invenção para uso no tratamento de uma leucemia ou linfoma de célula T expressando TRBC1 em um sujeito.
[0034] Em um décimo segundo aspecto, a invenção proporciona um método para o tratamento de uma leucemia ou linfoma de célula T expressando TRBC1 em um sujeito, que compreende a etapa de administração de uma composição farmacêutica de acordo com o décimo aspecto da presente invenção a um sujeito.
[0035] Em um décimo terceiro aspecto, a invenção proporciona a utilização de uma composição farmacêutica de acordo com o décimo aspecto da presente invenção na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma leucemia ou linfoma de célula T expressando TRBC1 em um sujeito.
[0036] A leucemia ou o linfoma de células T que expressam TRBC1 pode ser selecionado a partir de: linfoma de células T periféricas, e não de outro modo especificado (PTCL-NOS); linfoma angio-imunobltico de células T (AITL), linfoma de células grandes anaplásicas (ALCL), linfoma de células T associados a enteropatia (EATL), linfoma hepatosplênico de célula T (HSTL), linfoma do tipo nasal de célula T / NK extranodal, linfoma cutâneo de células T, cutâneo primário LAGC, leucemia prolinfocica células T e leucemia linfoblástica aguda de células T.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0037] A invenção proporciona agentes, tais como receptores de antígenos quiméricos (CARs) que se ligam seletivamente TRBC1. Tais agentes são úteis em métodos para o tratamento de um linfoma de células T ou leucemia em um sujeito. As malignidades de células T são clonal, tal que expressam TRBC1 ou TRBC2. Através da administração de um agente seletivo TCRB1 para o sujeito, o agente faz com que a depleção seletiva das células T malignas expressando TRBC1, em conjunto com as células T normais TRBC1-expressando, mas não causa depleção de células T normais expressando TRBC2.
Região constante TCR β (TRBC)
[0038] O receptor de células T (TCR) é expressa na superfície de linfócitos T e é responsável pelo reconhecimento de antígenos ligados a moléculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC). Quando o TCR engata com o peptídeo antigénico e de MHC (peptídeo / MHC), o linfócito T é ativado através de uma série de eventos bioquímicos associados mediados por enzimas, co-receptores, moléculas adaptadoras especializadas, e fatores de transcrição ativados ou liberados.
[0039] O TCR é um heterodímero membrana ancorada ligada por dissulfeto que consiste normalmente de cadeias alfa altamente variável (α) e beta (β) expressas como parte de um complexo com as moléculas de cadeia CD3 invariantes. As células T que expressam este receptor são referidos como células T α:β (ou αβ) (~ 95% de células T totais). Uma minoria de células T expressam um receptor alternativo, formada por cadeias gama variável (γ) e delta (ô), e são referidas como células-T γδ (~ 5% de células T totais).
[0040] Cada cadeia α e β é composta por dois domínios extracelulares: região variável (V) e uma região constante (C), tanto de domínio superfamília de Imunoglobulina (IgSF) formando folhas-β antiparalelas. A região constante é proximal à membrana celular, seguido por uma região transmembranar e uma cauda citoplasmática curta, enquanto se liga a região variável para o peptídeo / MHC (ver Figura 1). A região constante de TCR consiste em sequências de ligação curtas, em que os resíduos de cisteína formam ligações dissulfeto, que forma uma ligação entre as duas cadeias.
[0041] Os domínios variáveis de ambas as cadeias α e cadeias β de TCR tem três hipervariáveis ou regiões determinantes de complementaridade (CDRs). A região variável da cadeia β também tem uma área adicional de hipervariabilidade (HV4), no entanto, este não faz normalmente contato com o antígeno e, portanto, não é considerada uma CDR.
[0042] A TCR também compreende até cinco cadeias invariantes y, δ, ε (coletivamente denominado CD3) e ζ. A CD3 e subunidades ζ da TCR medeiam a sinalização através de domínios citoplasmáticos específicos que interagem com o segundo mensageiro e moléculas adaptadoras seguindo o reconhecimento do antígeno por αβ ou γδ. A expressão na superfície celular do complexo TCR é precedida por pares de montagem de subunidades, em que ambos os domínios transmembranares e extracelulares do TCR α e β e γ e δ da CD3 desempenham um papel.
[0043] Os TCR são, por conseguinte, normalmente composta pelo complexo CD3 e cadeia α e β de TCR, que são por sua vez composta por regiões variáveis e constantes (Figura 1).
[0044] O locus (CHR7: q34) que fornece o β-região constante de TCR (TRBC) duplicou na história evolutiva para produzir dois genes quase idênticos e funcionalmente equivalentes: TRBC1 e TRBC2 (Figura 2), que diferem apenas por quatro aminoácidos no amadurecimento da proteína produzida por cada (Figura 3). Cada TCR irá compreender, em uma forma mutuamente exclusiva, quer TRBC1 ou TRBC2 e, como tal, cada T-célula αβ irá expressar quer TRBC1 ou TRBC2, de um modo mutuamente exclusivo.
[0045] Apesar da semelhança entre a sequência do TRBC1 e TRBC2, é possível discriminar entre eles. As sequências de aminoácidos de TRBC1 e TRBC2 pode ser discriminado, enquanto in situ sobre a superfície de uma célula, por exemplo, uma célula T.
DOMÍNIO DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO
[0046] A presente invenção fornece um domínio de ligação ao antígeno anti-TRBC1 humanizado que tem uma cadeia pesada variável (VH) e uma cadeia leve variável (VL), que compreendem as seguintes regiões determinantes de complementaridade (CDR):
[0047] VH CDR1: GYTFTGY (SEQ ID No. 1);
[0048] VH CDR2: NPYNDD (SEQ ID No. 2);
[0049] VH CDR3: GAGYNFDGAYRFFDF (SEQ ID No. 3);
[0050] VL CDR1: RSSQRLVHSNGNTYLH (SEQ ID No. 4);
[0051] VL CDR2: RVSNRFP (SEQ ID No. 5); e
[0052] VL CDR3: SQSTHVPYT (SEQ ID No. 6).
[0053] O domínio de ligação ao antígeno compreende regiões de estrutura humana, ou regiões de estrutura humana com uma ou mais mutações. Por exemplo a região de estrutura (s) podem compreender uma ou mais substituições em relação à sequência da região de estrutura humana. As substituições podem ser "mutações inversas", onde um ou mais aminoácidos são substituídos com o resíduo equivalente a partir da sequência do anticorpo murino. A sequência do anticorpo de murino da cadeia pesada variável (VH) é mostrado a seguir como SEQ ID No. 7 e a sequência variável de cadeia leve (VL) mostrado como SEQ ID No. 8. Em ambas as sequências, as sequências CDR estão em negrito e sublinhado.
[0054] SEQ ID No. 7 - Jovi-1 VH de murino
EVRLQQSGPDLIKPGASVKMSCKASGYTFTGYVMHWVKQRPGQGLEWIGFINPYNDDIQ SNERFRGKATLTSDKSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT TLTVSS
[0055] SEQ ID No. 8 - Jovi-1 VL de murino
DVVMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGIYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIKR
[0056] A sequência VH humanizada compreendendo a JOVI-1 de murino CDRs mostradas como SEQ ID NO 1, 2 e 3 pode compreender de 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, 2 ou 1 mutações em comparação com a de tipo selvagem sequência da região estrutural humana.
[0057] Uma sequência de VL humanizado compreendendo JOVI-1 CDRs de murino mostradas como SEQ ID No. 4, 5 e 6 pode compreender de 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, 2 ou uma mutação em comparação com a de tipo selvagem sequência da região estrutural humana.
[0058] A sequência VH pode compreender JOVI 1-CDR de VH com a estrutura humana H-AF062256. Esta sequência é apresentada como SEQ ID NO 9. As sequências CDR estão sublinhadas.
[0059] SEQ ID No. 9 - Quadro Humanizado Jovi-1H- AF062256
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT MVTVS
[0060] A sequência VH pode compreender JOVI 1-CDR de VH com a estrutura humana H-EF177999. Esta sequência é apresentada como sequências de SEQ ID No. 10. A CDR estão sublinhadas.
[0061] SEQ ID No. 10 - Quadro Humanizado Jovi-1H- EF177999
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT LVTVSS
[0062] A sequência VH pode compreender JOVI 1-CDR de VH com a estrutura humana H-KF688165. Esta sequência é apresentada como sequências ID SEQ N ° 1 1. A CDR estão sublinhadas.
[0063] Quadro Humanizado Jovi-1H-H-KF688165 - SEQ ID NO 11
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASEYSFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTRDTSISTAYMEVSSLTSDDAAIYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT LVTVSS
[0064] A sequência VH pode compreender a sequência mostrada como SEQ ID NO 9, 10 ou 11 com uma ou mais mutações, tais como mutações inversas. A sequência VH pode compreender de 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, 2 ou uma mutação em comparação com a sequência da região de estrutura humana de tipo selvagem. Por exemplo, a sequência de VH pode compreender a sequência apresentada como SEQ ID NO: 9 com um dos conjuntos de mutações inversas mostradas na Tabela 1 nos Exemplos.
[0065] A sequência VH pode compreender uma das sequências mostradas como SEQ ID No. 12 a 18. A sequências CDR estão sublinhadas e volta-mutações são mostradas em negrito.
[0066] SEQ ID No. 12 - mutação K73
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTRDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT MVTVSS
[0067] SEQ ID No. 13 - mutação S71
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTSDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT MVTVSS
[0068] SEQ ID No. 14 - mutações S71, K73
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTSDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT MVTVSS
[0069] SEQ ID No. 15 - mutação I48
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWIGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT MVTVSS
[0070] SEQ ID No. 16 - mutações I48, K73
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWIGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTRDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT MVTVSS
[0071] SEQ ID No. 17 - mutações M20, S71, K73
QVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTSDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT MVTVSS
[0072] SEQ ID No. 18 - mutações M20, I48
QVQLVQSGAEVKKPGASVKMSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWIGFINPYNDDIQ SNERFRGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGT MVTVSS
[0073] A sequência de VL pode compreender JOVI 1-VL
CDR com a 3aaz estrutura humana. Esta sequência é apresentada como sequências de SEQ ID No. 19. A CDR estão sublinhadas.
[0074] SEQ ID No. 19
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK
[0075] A sequência de VL pode compreender a sequência mostrada como SEQ ID N ° 19 com uma ou mais mutações, tais como mutações inversas. A sequência de VL pode compreender de 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, 2 ou uma mutação em comparação com a sequência da região de estrutura humana de tipo selvagem. Por exemplo, a sequência de VL pode compreender uma das sequências mostradas como SEQ ID No. 20 a 34. As sequências de CDR estão sublinhadas e volta-mutações são mostradas em negrito.
[0076] SEQ ID NO 20
DIVMTQSPLSLPVTLGEQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
[0077] SEQ ID No. 21
DIVMTQSPLSLPVTLGEQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK
[0078] SEQ ID No. 22
DIVMTQSPLSLPVTLGEQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
[0079] SEQ ID No. 23
DIVMTQSPLSLPVTLGEQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK
[0080] SEQ ID No. 24
DIVMTQSPLSLPVTLGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
[0081] SEQ ID No. 25
DIVMTQSPLSLPVTLGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVFYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK
[0082] SEQ ID No. 26
DIVMTQSPLSLPVTLGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
[0083] SEQ ID No. 27
DIVMTQSPLSLPVTLGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK
[0084] SEQ ID No. 28
DIVMTQSPLSLPVTPGEQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
[0085] SEQ ID No. 29
DIVMTQSPLSLPVTPGEQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK
[0086] SEQ ID No. 30
DIVMTQSPLSLPVTPGEQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
[0087] SEQ ID No. 31
DIVMTQSPLSLPVTPGEQASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK
[0088] SEQ ID No. 32
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
[0089] SEQ ID No. 33
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK
[0090] SEQ ID No. 34
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNR FPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGGGTKLEIK
[0091] O domínio de ligação de antígeno anti-TRBC1 pode compreender: a) um domínio VH que compreende JOVI 1-VH CDR com a estrutura humana H-AF062256 ou uma sua variante; e b) um domínio VH que compreende JOVI 1-VL CDR com a 3aaz estrutura humana ou uma sua variante.
[0092] A variante pode ter 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, 2 ou uma mutação em comparação com a sequência da região de estrutura humana de tipo selvagem.
[0093] O domínio VH pode compreender a sequência mostrada como SEQ ID N ° 9, SEQ ID N ° 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID N ° 17 ou domínio de SEQ ID No. 18. o VL pode compreender a sequência mostrada como SEQ ID N ° 19, SEQ ID No. 20, SEQ ID N21, SEQ ID N22, SEQ ID No. 23, SEQ ID No. 24, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 31, SEQ ID N32, SEQ ID No. 33, SEQ ID N ° 34
[0094] O domínio de ligação de antígeno anti-TRBC1 pode compreender: a) um domínio VH que compreende a sequência apresentada como SEQ ID NO: 9; e b) um domínio VH que compreende a sequência apresentada como SEQ ID NO: 19.
ANTICORPO
[0095] O domínio de ligação ao antígeno do primeiro aspecto da invenção pode ser um anticorpo ou um seu fragmento funcional. O anticorpo pode ser um anticorpo terapêutico,
tal como um anticorpo de empobrecimento. O anticorpo pode ser um anticorpo biespecífico que se liga TRBC1 em conjunto com outro antígeno. O anticorpo pode, por exemplo, ser um anticorpo de afinidade duplo alvejamento.
[0096] O termo 'depletar anticorpo' é utilizado no sentido convencional para se relacionar com um anticorpo que se liga a um antígeno (isto é, TRBC1) presente em uma morte de células T e medeia alvo de a de células T alvo. A administração de um anticorpo que empobrecem a um sujeito, portanto, resulta em uma redução / diminuição do número de células no interior do objeto que expressam o antígeno alvo.
[0097] Tal como aqui utilizado, "anticorpo" significa um polipeptídeo possuindo um local de ligação ao antígeno que compreende pelo menos uma regi determinante de complementaridade de CDR. O anticorpo pode compreender 3 CDRs e têm um local de ligação ao antígeno que é equivalente à de um anticorpo de domínio (dAb). O anticorpo pode compreender 6 CDR e têm um local de ligação ao antígeno que é equivalente à de uma molécula de anticorpo clássica. O restante do polipeptídeo pode ser qualquer sequência que proporciona uma estrutura de suporte adequada para o local e o exibe ligação de um modo adequado para que este se ligue ao antígeno. O anticorpo pode ser uma molécula de imunoglobulina inteira ou uma parte do mesmo, tal como um Fab, F (ab) '2, Fv, Fv de cadeia simples fragmento (ScFv), e scFv-Fc ou diacorpo, triacorpo ou nanocorpo que retém a especificidade do antígeno do anticorpo completo. O anticorpo pode ser um anticorpo bifuncional. O anticorpo pode ser não-humano, quimérico, humanizado ou inteiramente humano.
CONJUGADOS
[0098] O anticorpo pode ser um conjugado do anticorpo e outro agente ou anticorpo, por exemplo, o conjugado pode ser uma entidade detectável ou uma entidade quimioterapêutico.
[0099] A entidade detectável pode ser um grupo fluorescente, por exemplo, um peptídeo fluorescente. Um "peptídeo fluorescente" refere-se a um polipeptídeo que, a seguir de excitação, emite luz a um comprimento de onda detectável. Exemplos de proteínas fluorescentes incluem, mas não estão limitados a, isotiocianato de fluoresceína (FITC), ficoeritrina (PE), aloficocianina (APC), proteína fluorescente verde (GFP), reforçada GFP, proteína fluorescente vermelha (RFP), proteína fluorescente azul (BFP) e mCherry.
[00100] Uma entidade quimioterapêutica, tal como aqui utilizado refere-se a uma entidade que é destrutivo para uma célula, que é a entidade reduz a viabilidade da célula. A entidade quimioterapêutica pode ser um fármaco citotóxico. Um agente quimioterapêutico contemplado inclui, sem limitação, agentes alquilantes, nitrosoureias, etileniminas / metilmelamina, sulfonatos de alquila, antimetabólitos, análogos de pirimidina, epipodofilotoxinas, enzimas, tais como L-asparaginase; modificadores da resposta biológica, tais como IFNa, IL-2, G-CSF e GM-CSF; complexos de coordenao de platina tais como cisplatina e carboplatina, antracenodionas, ureia substituída tal como hidroxiureia, derivados de metil-hidrazina, incluindo N-metil-hidrazina
(MIH) e procarbazina, supressores adrenocorticais tais como mitotano (ο, ρ'-DDD) e aminoglutetimida; hormônios e antagonistas incluindo antagonistas adrenocorticosteróides como a prednisona e equivalentes, dexametasona e aminoglutetimida; progestina, tais como caproato de hidroxiprogesterona, acetato de medroxiprogesterona e acetato de megestrol; estrogénio tais como dietilestilbestrol e etinil estradiol equivalentes; anti- estrogénio tal como tamoxifeno; androgénios incluindo propionato de testosterona e fluoximesterona / equivalentes; antiandrogénios tais como flutamida, análogos da hormona libertadora de gonadotropina e leuprolida; e anti- androgênios não esteróides, tais como flutamida.
[00101] Um conjugado anticorpo-fármaco TRBC1- específico permite a entrega direcionada de uma entidade quimioterapêutica em células que expressam TRBC1.
[00102] Engagers de células T BI-ESPECÍFICOS
[00103] Uma ampla variedade de moléculas que têm sido desenvolvidos são baseados no conceito básico de ter dois anticorpos como domínios de ligação.
[00104] Moléculas de engate de células T biespecíficas são uma classe de moléculas do tipo anticorpo biespecíficos que têm sido desenvolvidos, principalmente para a utilização como fármacos anticancerígenos. Dirigem sistema imunológico de um hospedeiro, mais especificamente a atividade citotóxica das células T, contra uma célula alvo, tal como uma célula de câncer. Nestas moléculas, um domínio de ligação se liga a uma célula T através do receptor de CD3, e a outra para um células-alvo, tais como uma célula de tumor (através de uma molécula específica de tumor). Uma vez que se liga a molécula biespecífica tanto a célula alvo e a células T, que traz a célula alvo em proximidade com a célula T, de modo a que a célula T pode exercer o seu efeito, por exemplo, um efeito citotóxico sobre uma célula de câncer. A formação da célula T: biespecífico Ab: de células de câncer induz complexos de sinalização na célula T, conduzindo a, por exemplo, a libertação de mediadores citotóxicos. Idealmente, o agente só induz a sinalização desejado na presença da célula alvo, levando a morte seletiva.
[00105] As moléculas de engate de células T biespecífica foram desenvolvidas em um certo número de formatos diferentes, mas uma das mais comuns é uma fusão que consiste em dois fragmentos variáveis de cadeia simples (scFvs) de anticorpos diferentes. Estes são, por vezes, conhecido como BiTEs (Engagers de T-célula Bi-específica).
[00106] Por conseguinte, a presente invenção proporciona uma molécula bi-específica que reconhece seletivamente TRBC1 e é capaz de ativar a célula T. Por exemplo, o agente pode ser uma BiTE. O agente pode compreender: (i) um primeiro domínio que se liga TRBC1, possuindo um domínio de ligação ao antígeno, tal como definido acima; e (ii) um segundo domínio capaz de ativar uma célula T.
[00107] A molécula bi-específica pode compreender um peptídeo sinal para ajudar a sua produção. O peptídeo sinal pode fazer com que a molécula bi-específica para ser secretada por uma célula hospedeira, de tal modo que a molécula bi-específica possa ser coletada do sobrenadante da célula hospedeira.
[00108] O peptídeo sinal pode ser, no terminal amino da molécula. A molécula bi-específica pode ter a fórmula geral: peptídeo sinal - primeiro domínio - segundo domínio.
[00109] A molécula bi-específica pode compreender uma sequência espaçadora para conectar o primeiro domínio com o segundo domínio e espacialmente separar os dois domínios.
[00110] A sequência espaçadora pode, por exemplo, compreendem uma charneira de IgG1 ou uma haste de CD8. O ligante pode compreender, alternativamente, uma sequência ligante alternativa, que tem um comprimento semelhante e / ou propriedades do domínio de espaçamento como uma charneira de IgG1 ou uma haste de CD8. RECEPTOR DE ANTÍGENO QUIMÉRICO (CAR)
[00111] A presente invenção proporciona um CAR que reconhece seletivamente TRBC1.
[00112] Os receptores de antígenos quiméricos (CAR), também conhecidos como receptores quiméricos de células T, receptores de células T e imunoreceptores quiméricos artificiais são receptores concebidos, que enxertam uma especificidade arbitrária para uma célula efetora imune. Em um CAR clássico, a especificidade de um anticorpo monoclonal é enxertada para uma célula T. CARRO-codificando ácidos nucleicos podem ser transferidas para as células T, utilizando, por exemplo, vetores retrovirais. Deste modo, um grande número de células T específicas do câncer podem ser geradas para a transferência celular adoptiva. Os estudos clínicos de Fase I desta abordagem mostram a eficácia.
[00113] O domínio de ligação ao alvo para o antígeno de um CAR é comumente fundido através de um espaçador e o domínio transmembranar de um endodomínio, que compreende ou associa-se com um domínio de sinalização de células T intracelular. Quando o CAR se liga o antígeno-alvo, isto resulta na transmissão de um sinal de ativação para que a célula T seja expressa.
[00114] O CAR pode também compreender um domínio transmembranar que atravessa a membrana. Pode compreender uma hélice alfa hidrofóbica. O domínio transmembranar pode ser derivada de CD28, o que dá uma boa estabilidade do receptor.
[00115] O endodomínio é a parte do CAR envolvido no sinal de transmissão. Os endodomínios compreendem quer ou associadas com um domínio de sinalização de células T intracelular. Após o reconhecimento do antígeno, receptores agrupam e é transmitido um sinal para a célula. O componente de sinalização de células T mais comumente utilizado é a de células CD3-zeta que contém 3 ITAMs. Este transmite um sinal de ativação para a célula T após antígeno está ligado. CD3 zeta pode não proporcionar um sinal de ativação totalmente competente e pode ser necessária a sinalização co- estimuladora adicional. Por exemplo, CD28 e OX40 quimérico pode ser usado com CD3-Zeta para transmitir um sinal proliferativo / sobrevivência, ou todos os três podem ser utilizados em conjunto.
[00116] O endodomínio do CAR pode compreender o endodomínio CD28 e OX40 e endodomínio CD3-Zeta.
[00117] Em alternativa, o CAR do segundo aspecto da invenção pode faltar um domínio de sinalização intracelular,
mas pode ser capaz de se associar com uma molécula separada que fornece a funcionalidade de sinalização.
[00118] Os sistemas de sinalização CAR tenham sido anteriormente descrito que compreende duas partes: um CAR, que compreende o domínio de ligação ao antígeno e um domínio transmembranar; e um componente de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular. Um ou mais domínios de co-estimuladoras podem ser localizados sobre o carro e / ou o componente de sinalização intracelular.
[00119] Heterodimerização entre o CAR e o componente de sinalização intracelular produz um sistema CAR funcional. Heterodimerização pode ocorrer espontaneamente, tal como descrito no documento WO2016 / 124930; ou pode ocorrer apenas na presença de um indutor químico de dimerização (CID), tal como descrito no documento WO2015 / 150771. Em uma terceira alternativa, a heterodimerização é perturbada pela presença de um agente, tal como uma pequena molécula particular, por isso CARRO mediada apenas a sinalização ocorre na ausência do agente. sistema Tal é descrito no documento WO2016 /
030691.
[00120] O CAR pode compreender um peptídeo sinal de modo que, quando o CAR é expresso dentro de uma célula, tal como uma célula T, a proteína nascente é dirigida para o retículo endoplasmático e, subsequentemente, para a superfície celular, onde é expressa.
[00121] O CAR pode compreender uma sequência espaçadora para ligar o domínio de ligação ao TRBC com o domínio transmembranar e espacialmente separado do domínio de ligação TRBC a partir da membrana. Um espaçador flexível permite que o domínio de ligação ao TRBC para orientar em diferentes direções para permitir ligação TRBC.
[00122] A sequência espaçadora pode, por exemplo, compreendem uma região Fc de IgG1, um de charneira IgG1 ou uma haste de CD8, ou uma combinação dos mesmos.
ÁCIDO NUCLEICO
[00123] A presente invenção proporciona ainda um ácido nucleico que codifica um BiTE ou CAR, tal como definido acima.
[00124] Tal como aqui utilizado, os termos "polinucleotídeo", "nucleotídeos", e "ácido nucleico" destinam-se a ser sinônimo uns com os outros.
[00125] Será entendido por um técnico versado no assunto que numerosos polinucleotídeos diferentes e ácidos nucleicos pode codificar o mesmo polipeptídeo, como resultado da degenerescência do código genético. Além disso, é para ser entendido que os especialistas podem, usando técnicas de rotina, fazer substituições de nucleotídeos que não afetem a sequência do polipeptídeo codificado pelos polinucleotídeos descritos aqui de modo a refletir a utilização de códons de qualquer organismo hospedeiro em particular no qual os polipeptídeos são para ser expressos.
[00126] Os ácidos nucleicos de acordo com a invenção podem compreender DNA ou RNA. Eles podem ser de cadeia simples ou de cadeia dupla. Eles também podem ser polinucleotídeos que incluem no seu interior nucleotídeos sintéticos ou modificados. Um número de diferentes tipos de modificações para oligonucleotídeos são conhecidas no estado da técnica. Estes incluem metilfosfonato e fosforotioato, as espinhas dorsais de adição de cadeias de acridina ou polilisina nas extremidades 3' e / ou 5' da molécula. Para os fins da utilização, tal como aqui descrito, é para ser compreendido que os polinucleotídeos podem ser modificados por qualquer modo disponível no estado da técnica. Tais modificações podem ser realizadas de modo a aumentar a atividade in vivo ou tempo de vida de polinucleotídeo de interesse.
[00127] Os termos "variantes", "homólogos" ou "derivado" relativamente a uma sequência de nucleotídeos incluem qualquer substituição de, variação de, modificação de, troca de, deleção de ou adição de um (ou mais) do ácido nucleico a partir de ou para a sequência.
[00128] A presente invenção também proporciona uma construção de ácido nucleico que compreende um primeiro ácido nucleico que codifica um CAR como definido acima; e um segundo ácido nucleico que codifica um gene suicida.
[00129] Os genes suicidas adequados para uso em uma célula que expressa CAR da invenção incluem RQR8, o qual é descrito no documento WO2013 / 153391; e RapCasp9, o qual é descrito no documento WO2016 / 135470.
[00130] Na construção de ácido nucleico acima descrita, a primeira e segunda sequências de ácidos nucleicos podem estar em qualquer ordem.
VETOR
[00131] A presente invenção também proporciona um vetor, ou kit de vetores, que compreende uma ou mais sequências de ácidos nucleicos (s) ou construção de ácido nucleico (s) da invenção. Um tal vetor pode ser utilizado para introduzir a sequência de ácido nucleico (s) ou construo (s) para uma célula hospedeira, por exemplo, de modo que expressa um CAR tendo um domínio de ligação ao antígeno de acordo com o primeiro aspecto da invenção.
[00132] O vetor pode, por exemplo, ser um plasmídeo ou um vetor viral, tal como um vetor retroviral ou um vetor lentiviral, ou um vetor baseado transposon ou de RNAm sintético.
[00133] O vetor pode ser capaz de transfectar ou transduzir uma célula T ou uma célula NK.
CÉLULA
[00134] A presente invenção também se refere a uma célula, tal como uma célula imune, compreendendo um CAR de acordo com o primeiro aspecto da invenção.
[00135] A célula pode compreender um ácido nucleico, uma construção de ácido nucleico ou um vetor da presente invenção.
[00136] A célula pode ser uma célula T ou uma célula assassina natural (NK).
[00137] As células T podem ser células T ou linfócitos T, que são um tipo de linfócito que desempenham um papel central na imunidade mediada por células. Eles podem ser distinguidos de outros linfócitos, tais como células B e células assassinas naturais (NK), pela presença de um receptor de células T (TCR) na superfície da célula. Existem vários tipos de células T, como resumido abaixo.
[00138] As células auxiliares T help (células Th) auxiliam outras células brancas do sangue, em processos imunológicos, incluindo a maturação de células B em células do plasma e células B de memória, e ativação de células T citotóxicas e macrófagos. células TH expressam CD4 na sua superfície. TH células tornam-se ativados quando eles são apresentados com antígenos peptídicos por moléculas MHC de classe II na superfície das células apresentadoras de antígenos (APCs). Estas células podem diferenciar-se em um dos diversos subtipos, incluindo Th1, Th2, TH3, TH17, Th9, ou TFH, que secretam citocinas diferentes para facilitar a diferentes tipos de respostas imunes.
[00139] As células T citolíticas (células TC, ou CTLs) destruir células tumorais e células infectadas por vírus, e também estão implicados na rejeição de transplantes. CTLs expressam a CD8 na sua superfície. Estas células reconhecem os seus objetivos através da ligação a antígeno associado com MHC de classe I, o qual está presente na superfície de todas as células nucleadas. Através de IL-10, a adenosina e outras moléculas segregadas por células T reguladoras, as células CD8 + podem ser inativados para um estado anérgicas, que a prevenção de doenças autoimunes, tais como a encefalomielite autoimune experimental.
[00140] As células T de memória são um subconjunto de células T específicas do antígeno que persistem a longo prazo depois de uma infecção tenha resolvido. Eles rapidamente expandir-se para um grande número de células T efetoras após reexposição ao seu antígeno cognato, proporcionando assim o sistema imunológico com "memória" contra infecções passadas. As células T de memória compreender três subtipos: células de memória central de T (células TCM) e dois tipos de células
T de memória efetoras (células TEM e células Temra). As células de memória podem ser quer CD4 + ou CD8 +. As células T de memória normalmente expressam a proteína de superfície de células CD45RO.
[00141] As células T reguladoras (Treg), anteriormente conhecido como supressor de células T, são cruciais para a manutenção da tolerância imunológica. O seu papel principal é desligar a imunidade mediada por células T para a extremidade de uma reação imune e para suprimir as células T autoreativas que escaparam do processo de seleção negativa no timo.
[00142] Duas classes principais de células Treg CD4 + foram descritas – células que ocorre naturalmente Treg e células T reguladoras adaptativas.
[00143] As células Treg que ocorre naturalmente (também conhecidas como células-T CD4 + CD25 + FoxP3 + Treg) surgem no timo e têm sido associadas a interações entre o desenvolvimento de células T com ambos mielóide (CD1 1c +) e plasmocitóides (CD123 +) células dendríticas que foram activadas com TSLP . Naturalmente que ocorrem células Treg podem distinguir-se de outras células T pela presença de uma molécula intracelular chamado FoxP3. Mutações do gene FOXP3 pode prevenir o desenvolvimento de células T reguladoras, fazendo com que a doença autoimune fatal IPEX.
[00144] As Treg células adaptativa (também conhecidas como células Tr1 ou células Th3) pode originar durante uma resposta imune normal.
[00145] A célula pode ser uma célula assassina natural (ou de células NK). As células NK formam parte do sistema imune inato. As células NK fornecer respostas rápidas em sinais inatos de células infectadas por vírus de uma forma independente do CPH
[00146] As células NK (pertencente ao grupo de células linfoides inatas) são definidos como linfócitos granulares grandes (LGL) e constituem o terceiro tipo de células diferenciadas a partir do gerador comum linfoide progenitora B e linfócitos T. As células NK são conhecidos para diferenciar e amadurecer na medula óssea, nódulo linfático, baço, amígdalas e timo, onde, em seguida, entram na circulação.
[00147] As células de estacionamento da invenção pode ser qualquer um dos tipos de células acima mencionados.
[00148] As células T ou NK que expressam a um carro de acordo com o primeiro aspecto do invenção podem ser criados ex vivo, quer a partir da própria de sangue periférico de um paciente (1 parte), ou no contexto de um transplante de células estaminais hematopoiéticas a partir de dadores de sangue periférico (2 parte), ou de sangue periférico de um doador sem ligação (3a parte).
[00149] Alternativamente, as células T ou NK que expressam um carro de acordo com o primeiro aspecto da invenção pode ser derivada a partir de diferenciação ex vivo de células progenitoras induteis ou células progenitoras embrionárias para células T ou NK. Alternativamente, pode ser utilizada uma linha de células T imortalizadas que mantém a sua função lítica e poderia atuar como um agente terapêutico.
[00150] Em todas estas concretizações, as células do
CAR são geradas através da introdução de DNA ou RNA que codifica para o CAR por um de diversos meios, incluindo a transdução com um vetor virai, transfecção com DNA ou RNA.
[00151] A célula que expressa o CAR da presente invenção pode ser uma célula T ou NK ex vivo de um indivíduo. A célula T ou NK pode ser a partir de uma amostra de células mononucleares do sangue periférico (CMSP). As células T ou NK pode ser ativado e / ou expandidos antes de serem transduzidas com ácido nucleico que codifica para um carro de acordo com o primeiro aspecto da invenção, por exemplo por tratamento com um anticorpo monoclonal anti-CD3.
[00152] A célula T ou NK da invenção pode ser feita por: (i) isolamento de uma amostra contendo células T ou NK de um indivíduo ou de outras fontes acima listadas; e (ii) a transdução ou transfecção das células T ou NK com uma sequência de ácido nucleico (s) que codifica um CAR da presente invenção.
[00153] As células T ou NK pode, em seguida, purificado por, por exemplo, selecionado com base na expressão do domínio de ligação ao antígeno do polipeptídeo de ligação ao antígeno.
[00154] A presente invenção também proporciona um kit que compreende uma célula T ou NK compreendendo um carro de acordo com o primeiro aspecto da invenção.
COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA
[00155] A presente invenção também se relaciona com uma composição farmacêutica contendo uma entidade terapêutica tal como uma célula que expressa o CAR, um anticorpo terapêutico ou seu conjugado, ou um engager de células T bi-específica da presente invenção. A composição farmacêutica pode compreender adicionalmente um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável. A composição farmacêutica pode compreender, opcionalmente, um ou mais outros polipeptídeos e / ou compostos farmaceuticamente ativos. Tal formulação pode, por exemplo, estar em uma forma adequada para infusão intravenosa. LINFOMA E / OU LEUCEMIA DE CÉLULA T
[00156] A presente invenção se refere a agentes, células e métodos para o tratamento de um linfoma e / ou leucemia de células T.
[00157] Um método para o tratamento de um linfoma e / ou leucemia de células T refere-se à utilização terapêutica de um agente. Aqui, o agente pode ser administrado a um indivíduo tendo uma doença existente de linfoma e / ou leucemia de célula T, a fim de diminuir, reduzir ou melhorar pelo menos um sintoma associado com a doença e / ou para retardar, reduzir ou bloquear a progressão da doença.
[00158] O método da presente invenção pode ser utilizado para o tratamento de qualquer linfoma e / ou leucemia associados com a expansão clonal de uma célula que expressa um receptor de células T (TCR), que compreende TRBC1.
[00159] O método da presente invenção pode ser utilizado para tratar um linfoma de células T, em que a célula T maligna expressa uma TRBC1 compreendendo TCR. 'Linfoma' é aqui utilizado de acordo com o seu sentido normal para referir-se a um câncer que se desenvolve nos gânglios linfáticos, mas pode também afetar o baço, a medula óssea, o sangue e outros órgãos. Linfoma normalmente apresenta-se como um tumor sólido de células linfoides. O principal sintoma associado com o linfoma é linfadenopatia, apesar de (B) sintomas secundários podem incluir febre, suores noturnos, perda de peso, perda de apetite, fadiga, dificuldade respiratória e comichão.
[00160] O método da presente invenção pode ser utilizado para tratar uma leucemia de células T, em que a célula T maligna expressa uma TRBC1 compreendendo TCR. 'Leucemia' é aqui utilizado de acordo com o seu sentido normal para referir um câncer do sangue ou medula óssea.
[00161] O que se segue é uma lista ilustrativa e não exaustiva de doenças que podem ser tratadas pelo método da presente invenção.
LINFOMA PERIFÉRICO DE CÉLULAS T
[00162] Os linfomas de células T periféricas são os linfomas relativamente pouco frequentes e representam menos de 10% de todos os linfomas não-Hodgkin (NHL). Contudo, eles estão associados com um curso clínico agressivo e as causas e origens celulares precisas da maior parte dos linfomas de células T ainda não são bem definidas.
[00163] Linfoma geralmente primeiro apresenta como inchaço no pescoço, nas axilas ou na virilha. inchamento adicional pode ocorrer quando os outros nodos linfáticos estão localizados tal como no baço. Em geral, aumento dos gânglios linfáticos pode invadir o espaço dos vasos sanguíneos, nervos, ou o estômago, levando a braços inchados e pernas, para formigamento e dormência, ou a sentimentos de estar cheio, respectivamente. sintomas de linfoma também incluem sintomas inespecíficos como febre, calafrios, perda de peso inexplicável, suores noturnos, letargia e prurido.
[00164] A OMS classificação utiliza características morfológicas e imunofenóticas em conjunto com aspectos clínicos e em alguns casos genética para delinear um prognostico e categorização terapeuticamente significativo para os linfomas periféricos de células T (Swerdlow et al.; WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues. 4th ed.; Lyon: IARC Press; 2008). A localização anatômica de células T neoplásicas estão paralela em parte aos seus homólogos celulares normais propostos e funções e, como tal, os linfomas de células T está associada com os gânglios linfáticos e no sangue periférico. Esta abordagem permite uma melhor compreensão de algumas das manifestações dos linfomas de células T, incluindo a sua distribuição celular, alguns aspectos da morfologia e achados clínicos ainda associados.
[00165] O mais comum dos linfomas de células-T é o linfoma de células T periféricas, e não de outro modo especificado (PTCL-NOS) compreendendo 25% de rendimento global, seguido de linfoma de células T angioimunoblástica (AITL) (18,5%) LINFOMA PERIFÉRICO DE CÉLULAS T, NÃO-ESPECIFICADO (PTCL-NOS)
[00166] PTCL-NOS compreende mais de 25% de todos os linfomas de células T periféricas e NK linfomas T-célula e é o subtipo mais comum. Ela é determinada por um diagnóstico de exclusão, não correspondendo a qualquer uma das entidades específicas maduro de linfoma de células T listados na corrente OMS 2008. Como tal, é análogo ao linfoma difuso de Célula B grande, não especificados de outra forma (DLBCL- NQS) .
[00167] A maioria dos pacientes são adultos com uma idade mediana de 80 e um macho para fêmea proporção 2: 1, A maioria dos casos são nodal na origem, no entanto, apresentações extranodais ocorrem em aproximadamente 13% dos pacientes e mais vulgarmente envolvem a pele e trato gastrointestinal.
[00168] O espectro citológico é muito amplo, variando de polimorfa para monomorfa. Três variantes morfologicamente definidas têm sido descritas, incluindo Sinfoepitelioide (Lennert) variante, variante de t-zona e variante folicular. A variante de Sinfoepitelioide PTCL contém abundante fundo epitelióides histiócitos e é normalmente positivo de CDS. Tem sido associada com um prognóstico melhor. A variante folicular de PTCL-NOS está a emergir como uma entidade potencialmente clínico-patológico distinto.
[00169] A maioria dos PTCL-NOS tem um fenótipo maduro t-CEII e a maioria dos casos são CD4-positiva. 75% dos casos mostram perda de variável de pelo menos marcadores de célula T (CDS, CD2, CD7 ou CDS), CD7 e com CDS sendo mais frequentemente regulados negativamente. CD30 e CD15 raramente pode ser expressa, com CD15 ser um recurso prognóstico adverso. a expressão do CD56, embora pouco frequente, também tem um impacto de prognóstico de fatores adversos adicionais negativas e patológicos prognósticos incluem uma maior taxa de proliferação de 25% com base em Ki-67, e a presença de mais do que 70% células transformadas.
A análise imunofenotípica destes linfomas ofereceu pouco de conhecimento sobre sua biologia. LINFOMA ANGIOIMUNOBLÁSTICO DE CÉLULAS T (AITL)
[00170] AITL é uma doença sistêmica caracterizada por um infiltrado polimorfo envolvendo nódulos linfáticos, proeminentes vénulas endoteliais elevadas (HEV) e a expansão do malhas dentrítica folicular celular (FDC) peri- vasculares. AITL é considerado como um linfoma de-novo T- ceil derivado de células T αβ de tipo ajudante folicular (TFH), normalmente encontrados nos centros germinais.
[00171] AITL é a entidade segundo mais comum entre os linfomas de linfoma de células T e células NTK periféricas, que compreende cerca de 18,5% dos casos. Ela ocorre em meia idade e idosos, com uma idade média de 85 anos de idade, e uma incidência aproximadamente igual em homens e mulheres. Clinicamente, os pacientes geralmente têm doença em estágio avançado, com Simfadenopatia generalizada. hepatoesplenomegalia e sintomas constitucionais proeminentes. erupção cutânea com prurido associado é comumente presentes. Muitas vezes existe hipergamaglobulinemia policlonal, associada a fenômenos autoimunes.
[00172] Três padrões morfológicos diferentes são descritos em AITL. A lesão inicial de AITL (Padrão I} mostra geralmente preservada arquitetura com folículos hiperplásicas característicos. A proliferação neoplásica é localizada ao periférico dos folículos. No Padrão II a arquitetura nodal é parcialmente apagada com a retenção de alguns folículos regrediram. Os seios subcapsular são preservada e mesmo dilatadas. o paracórtex contém patência HEV e há uma proliferação de FDC além do folículo de células B. as células neoplásicas são de pequeno e médio tamanho, com um mínimo de atípica citológica. Eles têm muitas vezes claro para pálido citoplasma, e pode mostrar células membranares distintas. Um fundo inflamatório polimorfo é geralmente evidente.
[00173] Embora AITL é uma malignidade de células T, há uma expansão característica de células-B e células de plasma, o que provavelmente reflete a função de células das neoplásicas como células TFH. Ambas as EBV-positiva e negativa para EBV-B células estão presentes. Ocasionalmente, as células B- atípica pode assemelhar-se a celular tipo Hodgkin / Reed-Sternberg- morfologicamente e imunofenotipicamente, às vezes levando a uma confusão diagnóstica com essa entidade. A proliferação de células B- em AITL pode ser extensa e alguns pacientes desenvolvem grandes linfomas secundários difusos EBV-positiva de células B (DLBCL) ou mais raramente tumores de células B -EBV- negativos, muitas vezes com diferenciação piasmacística.
[00174] As células-T CD4-positivos neoplásicas de AITL mostram uma forte expressão de CD10 e CD279 (PD-1) e são positivos para CXCL13. conduz a um aumento da CXCL13 recrutamento de células B para os gânglios linfáticos através de adesão ao HEV, ativação B-CEII, diferenciação e expansão de piasmacytic as malhas da FDC, todos contribuindo para o morfológica e características clínicas de AITL. Intensa expressão de PD-1 nas células tumorais perifoliculares é particularmente útil para distinguir AITL Padrão I a partir folicular reativa e hiperplasia paracortical.
[00175] A variante folicular de PTCL-NOS é outra entidade com um fenótipo TFH. Em contraste com AITL, ele não tem HEV proeminente ou de expansão extra-foilicuiar de malhas FDC. As células neoplásicas podem formar agregados intrafoilicular, mimetizando linfoma folicular de células B, mas também pode ter o padrão de crescimento interfoilicular ou envolver zonas expandidos do manto. Clinicamente, a variante folicular de PTCL-NOS é distinta da AITL como os doentes mais frequentemente se apresentam com doença fase inicial com envolvimento parcial nódulo linfático e pode não ter os sintomas constitucionais associados com AITL. GRANDE LINFOMA CELULAR ANAPLÁSICO (ALCL)
[00176] ALCL pode ser subdividido como ALCL- 'anapiastic linfoma cinase'(ALK) + ou ALCL-ALK.
[00177] ALCL-ALK + é um dos melhores-definido entidades dentro dos linfomas de células-T periféricas, com "células" da indicação característicos núcleos em forma de ferradura do rolamento e expressando ALK e CD30. É responsável por cerca de 7% de todos os linfomas periféricos de células T- e células NK- e é mais comum nas três primeiras décadas de vida. Os pacientes muitas vezes apresentam sinfadenopatia. Mas o envolvimento de sítios extranodais (pele, ossos, tecidos moles, pulmão, fígado) e sintomas B é comum.
[00178] ALCL, programas de ALK + um espectro largo morfológica, com 5 padrões diferentes descrito, mas todas as variantes contêm algumas células da indicação. células indicação ter ferradura excêntrico ou núcleos em forma de rim, e uma região perinuclear eosinofílica proeminente de Golgi. As células do tumor crescem em um padrão coeso, com predileção para o envolvimento do seio. células tumorais menores predominam na pequena variante de células, e na variante linfohistiocítica histiócitos abundantes mascarar a presença de células tumorais, muitos dos quais são pequenas.
[00179] Por definição, todos os casos mostram ALK e CD30 positividade, com expressão geralmente mais fraca nos ceils tumorais menores. Muitas vezes há perda de marcadores células pan-T, com 75% dos casos sem expressão de superfície do CDS.
[00180] expressão ALK é um resultado de uma alteração genética recorrente característica consistindo de um rearranjo de gene ALK no cromossoma 2p23 a um dos muitos genes de parceiros, o que resulta em uma expressão de proteína quimérica. O gene mais parceiro comum, ocorrendo em 75% dos casos, é Nucieophosmin {NPM1) no cromossoma 5q35, resultando em t (2; 5) (p23; q35}. A distribuição celular da ALK em diferentes variantes de translocação pode variar dependendo do gene parceiro.
[00181] ALCL- ALK é incluído como uma categoria provisória no 2008 OMS classificação, que é definido como um linfoma de células T- CD30 positivo que é morfologicamente indistinguíveis de LAGC-ALK + com um padrão de crescimento e coesa presença de células indicação, mas falta expressão de proteína ALK.
[00182] Os pacientes são geralmente adultos entre as idades de 40 e 85, em contraste com ALCL-ALK +, que é mais comum em crianças e adultos jovens. ALCL-ALK pode envolver ambos os gânglios linfáticos e tecidos extranodais, embora o último seja visto menos frequentemente do que em ALCL-ALK +, A maioria dos casos de LCGA-ALK demonstrar obliteração da arquitetura do nó de linfa de folhas de células neoplásicas coesivas com características típicas da indicação "". Em contraste com o ALCL-ALK +, a pequena variação morfológica de células não é reconhecida.
[00183] Ao contrário da sua contrapartida ALK +, mostra ALCL-Alk- uma maior preservação de expressão do marcador de superfície de células T, enquanto que a expressão dos marcadores de citotóxicos e antígeno de membrana epitelial (AE) é menos provável. Gene assinaturas de expressão e desequilíbrios cromossômicas recorrentes são diferentes em ALCL-ALK e ALK-LAGC +. confirmando que eles são entidades distintas a um nível molecular e genética.
[00184] ALCL-ALK é clinicamente distinto de ambos ALCL-ALK + e PTCL-NOS, com diferenças significativas no prognóstico entre estas três entidades diferentes. A sobrevivência global cinco anos de LAGC-ALK é classificado como 49%, o que não é tão boa como a de LAGC-ALK + (a 70%), mas, ao mesmo tempo que é significativamente melhor do que a de PTCL-NOS (32%). LINFOMA DE CÉLULAS T ASSOCIADO A ENTEROPATIA (EATL)
[00185] EATL é um neoplasma agressivo que pensado para ser derivadas das células T intra-epiteliais do intestino. Dois tipos distintos morfologicamente, imunohistoquímica e geneticamente de EATL são reconhecidos na classificação da OMS em 2008; Tipo I (que representam a maioria dos EATL) e
Tipo II (compreendendo 10-20% dos casos).
[00186] EATL Tipo I é geralmente associada com enteropatia ostensiva ou clinicamente silenciosa sensível ao glúten, e é visto mais frequentemente em pacientes de extração da Europa do Norte, devido à alta prevalência de doença celíaca na população estudada.
[00187] Mais comumente, as lesões de EATL são encontrados no jejuno ou íleo (90% dos casos), com apresentações raras no duodeno, do cólon, do estômago, ou áreas fora do trato gastrointestinal. As lesões intestinais são geralmente multifocal com ulceração da mucosa. curso clínico da EATL é agressivo com a maioria dos pacientes que morrem de doenças ou complicações da doença dentro de 1 ano.
[00188] O espectro citológico de EATL tipo I é ampla, e nalguns casos pode conter células anaplásicas. Há um fundo inflamatório polimorfo, que podem obscurecer o componente neoplásicas em alguns casos. A mucosa intestinal em regiões adjacentes ao tumor muitas vezes mostra características de doença celíaca com embotamento das vilosidades e um aumento do número de linfócitos intraepiteliais (i el), o que pode representar células precursoras iesional.
[00189] Por imuno-histoquímica, as células neoplásicas são frequentemente CD3 + CD4- D8-CD7 + CD5-CD56- PF1+ e contêm proteínas associadas a de grânulos citotóxicos (TIA-1, granzima B, perforina). CD30 é parcialmente expresso em casos quase ail. CD103, que é um receptor de homing mucosa, pode ser expressa em EATL.
[00190] EATL Tipo II, também referida como linfoma monomórfica CD56n- intestinal de células T, é definida como um tumor intestinal composto de pequenas e células T- monomórfica tamanho médio ~ células Thai Expressam CDs e CD56. Existe muitas vezes um espalhamento lateral do tumor dentro da mucosa, na ausência de um fundo inflamatório. A maioria dos casos de expressar o TCR γδ, no entanto, existem casos associados com o αβ TCR.
[00191] EATL Tipo II tem uma distribuição mais ampla no mundo do que do EATL do tipo I e é muitas vezes visto em asiáticos ou populações hispânicas, nos quais a doença celíaca é rara. Em indivíduos de descendência EATL Europeia, II representa cerca de 20% dos linfomas intestinais de células T-, com uma história de doença celíaca em pelo menos um subconjunto de casos. O curso clínico é agressivo. LINFOMA DE CÉLULAS T HEPATOSPLÊNICO (HSTL)
[00192] HSTL é uma neoplasia sistêmica agressiva geralmente derivada de células T γδ citotóxica do sistema imune inato, no entanto, pode também ser derivado de células- T αβ em casos raros. É um dos raros linfomas de células T, e geralmente afeta adolescentes e adultos jovens (idade média, 35 anos), com uma forte predominância masculina. LINFOMA DE CÉLULAS T TIPO NASAL/ EXTRANODAL NK
[00193] Linfoma de células T tipo nasal/ extranodal NK, é uma doença agressiva, frequentemente com lesões destrutivas de linha média e necrose. A maioria dos casos são de derivação de células NK, mas alguns casos, são derivados a partir de células T citotóxica, -se universalmente associadas com o vírus de Epstein-Barr (EBV).
LINFOMA CUTÂNEO DE CÉLULA T
[00194] O método da presente invenção também pode ser utilizado para tratar o linfoma cutâneo de células T.
[00195] O linfoma cutâneo das células T (LCCT) é caracterizado pela migração de células T malignas para a pele, que causa várias lesões que aparecem. Estas lesões alteram a forma como os progressos da doença, tipicamente começando como o que parece ser uma erupção cutânea e, eventualmente, formando placas e tumores metastáticos antes para outras partes do corpo.
[00196] Os linfomas cutâneos de células T incluem os mencionados na seguinte lista ilustrativa e não exaustiva; A micose fungoide, reticulose pagetóide, síndroma de Sezary, pele folga granulomatosa, linfomatoide papulose, pitiríase liquenóide crónica, CD30 + T cutâneo de células do linfoma, linfoma de células grandes + CD30 cutânea secundária, micose linfoma não-micose CD30 cutânea grande de células T, linfoma pleomorfo de células T, linfoma de Lennert, linfoma de célula T e linfoma subcutânea angiocêntrico.
[00197] Os sinais e sintomas de CTCL variam dependendo da doença específica, dos quais os dois tipos mais comuns são a micose fungóide e síndrome de Sézary. MF clássica é dividido em três etapas:
[00198] Remendo (atrófica ou nonatrophic): dermatite não específica, manchas na inferior do tronco e das nádegas; mínima prurido / ausente;
[00199] Chapa: placas intensamente pruriginosas, linfadenopatia; e
[00200] Tumor: propensa a ulceração
[00201] A SS é definida por eritrodermia e leucemia. Os sinais e sintomas incluem pele edemaciada,
linfadenopatia, palmar e / ou hiperqueratose plantar, alopecia, distrofia ungueal, ectrópio e hepatoesplenomegalia.
[00202] De todos os linfomas cutâneos primários, 65% são do tipo de células-T. A imunofenotipagem mais comum é CD4 positivo. Não há fisiopatologia comum para estas doenças, como o linfoma de célula T cutâneo termo abrange uma vasta variedade de desordens.
[00203] Os mecanismos etiológicos principais para o desenvolvimento de linfoma de células T cutâneo (isto é, micose fungóide) não foram elucidados. A micose fungóide pode ser precedida por uma doença de pele mediada por células T crónica inflamatória, que pode, ocasionalmente, progredir para um linfoma fatal.
[00204] CUTÂNEO ALCL (C-ALCL)
[00205] C-ALCL é muitas vezes indistinguíveis de ALC- ALK por morfologia. Ela é definida como um tumor cutâneo de células grandes anaplásicas com morfologia, pleomorfo ou immunobiastic com mais do que 75% de células que expressam CD30. Juntamente com linfomatoide papulose (PBP), C-ALCL pertence ao espectro de doenças linfoproliferativas de células T primárias cutâneas CD30-positivas, as quais, como um grupo compreendem o segundo mais comum grupo de proliferações cutânea de células T após micose fungóide.
[00206] O perfil de coloração por imunohistoquíma é bastante semelhante ao de LAGC-ALK, com uma maior proporção de casos de coloração positiva para os marcadores citotóxicos. Pelo menos 75% das células de tumor deve ser positivo para CD30, CD15 pode também ser expressa, e quando o envolvimento dos linfonodos ocorre, o diferencial com linfoma de Hodgkin clássico pode ser difícil. casos raros de LAGC-ALK + ma presente com lesões cutâneas localizadas e pode assemelhar-se a C-ALCL.
LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA POR CÉLULAS T
[00207] A leucemia linfoblástica aguda por células T (LLA-T) é responsável por cerca de 15% e 25% de todos os em coortes em crianças e adultos, respectivamente. Os pacientes geralmente apresentam elevadas contagens de glóbulos brancos e podem apresentar-se com organomegalia, alargamento particularmente mediastinal e envolvimento do SNC.
[00208] O método da presente invenção pode ser utilizado para tratar LLA-T que está associada a uma célula T maligna que expressa um TRBC1 compreendendo TCR. LEUCEMIA PRÓ-LINFÓCITA DE CÉLULAS T
[00209] A leucemia prolinfocítica por células T (T- PLL) é uma leucemia de células T maduras com o comportamento agressivo e predileção para o sangue, medula óssea, nódulos linfáticos, fígado, baço, e o envolvimento da pele. T-PLL afeta principalmente adultos com idade superior a 30. Outros nomes incluem leucemia linfocítica crônica de células T, digite "knobby" da leucemia de células T, e leucemia linfocítica e prolinfocítica de células T.
[00210] No sangue periférico, T-PLL consiste em linfócitos de tamanho médio com único nucléolos e citoplasma basofílico com bolhas ou projeções ocasionais. Os núcleos são geralmente redondos para de forma oval, com os pacientes ocasionais ter células com um contorno nuclear mais irregular que é semelhante à forma nuclear cerebriforme visto na síndrome de Sézary. Uma variante de pequenas células compreende 20% de todos casos T-PLL, e o ceil-like (cerebriforme) variante de Sezary é visto em 5% dos casos.
[00211] T-PLL tem o imunofenótipo de um linfócito T amadurecer (pós-timo) e as células neoplásicas são tipicamente positiva para pan-T antígenos CD2, CDS, e CD7 e negativo para TdT e CD1a. O imunofenótipo CD4 + / CD8 está presente em 80% dos casos, as células CD4 + / CD8 + imunofenótipo está presente em 25%, e o CD4 / CD8 + imunofenótipo está presente em 15% dos casos
COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA
[00212] O método da presente invenção pode compreender o passo de administrar o agente na forma de uma composição farmacêutica.
[00213] O agente pode ser administrado com um transportador, diluente, excipiente ou adjuvante farmaceuticamente aceitável. A escolha de transportador farmacêutico, excipiente ou diluente pode ser selecionado tendo em vista a via de administração pretendida e a prática farmacêutica padrão. As composições farmacêuticas podem compreender como (ou em adição ao) o transportador, excipiente ou diluente, qualquer ligante adequado (s), lubrificante (s), agente de suspensão (s), o revestimento de agente (s), solubilização do agente (s), e outros agentes veiculares.
ADMINISTRAÇÃO
[00214] A administração do agente pode ser conseguida utilizando qualquer um de uma variedade de vias que fazem o ingrediente ativo biodisponível. Por exemplo, o agente pode ser administrado pelas vias oral e parentérica, por via intraperitoneal, por via intravenosa, por via subcutânea, por via transcutânea, via intramuscular, via de entrega local, por exemplo por cateter ou stente.
[00215] Tipicamente, um médico determinará a dosagem atual que será mais adequada para um sujeito individual, e ela variará com a idade, peso e resposta do paciente particular. A dosagem é tal que é suficiente para reduzir ou esgotar o número de células-T clonais que expressam TRBC1.
[00216] A invenção irá agora ser adicionalmente descrita por meio de Exemplos, os quais se destinam a servir para auxiliar um técnico versado no assunto na realização da invenção e não se destinam de forma alguma a limitar o escopo da invenção.
EXEMPLOS Exemplo 1 - Seleção de cadeia pesada e cadeia leve enxertadas
[00217] Os domínios VH humanizados foram construídos com os JOVI 1-CDR de VH seguindo estruturas VH humanas: H- AF062256, H-EF177999, H-KF688165. Os domínios VL humanizado foram construídos com a estrutura 3aaz humana.
[00218] Os anticorpos foram criados quer com um domínio de VH humanizado e do JOVI-1 de domínio VL de murino; o domínio VH de murino e um domínio VL humanizado; ou um domínio VH humanizado e um domínio VL humanizado (ver Figura 4).
[00219] A ligação a TRBC1 foi testada por ELISA e os resultados são mostrados na Figura 5.
[00220] Todas as combinações de aglutinantes quiméricos e humanizados foram encontrados para ser capaz de se ligar TRBC1 e de ligação foi semelhante para o anticorpo quimérico tendo domínios VH e VL de murino. Exemplo 2 - Produção e teste de construções mutadas
[00221] Uma série de ligantes mutados de volta para- quadro humano H-AF062256 foram criados, como mostrado na Tabela 1, em que as mutações são mostradas em negrito. Tabela 1 Construção Cadeia Cadeia Pesada Pesada Mutações Jovi Hum 8 H-AF 1 Q3, V20, M48, R71, T73 Jovi Hum 16 H-AF 2 Q3, V20, M48, R71, K73 Jovi Hum 17 H-AF 3 Q3, V20, M48, S71, T73 Jovi Hum 18 H-AF 4 Q3, V20, M48, S71, K73 Jovi Hum 19 H-AF 5 Q3, V20 , I48, R71, T73 Jovi Hum 20 H-AF 6 Q3, V20, I48, R71, K73 Jovi Hum 21 H-AF 7 Q3, V20, I48, S71, T73 Jovi Hum 22 H-AF 8 Q3, V20, I48, S71, K73 Jovi Hum 23 H-AF 9 Q3, M20, M48, R71, T73 Jovi Hum 24 H-AF 10 Q3, M20, M48, R71, K73 Jovi Hum 25 H-AF 11 Q3, M20, M48, S71, T73 Jovi Hum 26 H-AF 12 Q3, M20, M48, S71, K73 Jovi Hum 27 H-AF 13 Q3, M20, I48, R71, T73 Jovi Hum 28 H-AF 14 Q3, M20, I48, R71, K73 Jovi Hum 29 H-AF 15 Q3, M20, I48, S71, T73
Jovi Hum 30 H-AF 16 Q3, M20, I48, S71, K73 Jovi Hum 31 H-AF 17 R3, V20, M48, R71, T73 Jovi Hum 32 H-AF 18 R3, V20, M48, R71, K73 Jovi Hum 33 H-AF 19 R3, V20, M48, S71, T73 Jovi Hum 34 H-AF 20 R3, V20, M48, S71, K73 Jovi Hum 35 H-AF 21 R3, V20, I48, R71, T73 Jovi Hum 36 H-AF 22 R3, V20, I48, R71, K73 Jovi Hum 37 H-AF 23 R3, V20, I48, S71, T73 Jovi Hum 38 H-AF 24 R3, V20, I48, S71, K73 Jovi Hum 39 H-AF 25 R3, M20, M48, R71, T73 Jovi Hum 40 H-AF 26 R3, M20, M48, R71, K73 Jovi Hum 41 H-AF 27 R3, M20, M48, S71, T73 Jovi Hum 42 H-AF 28 R3, M20, M48, S71, K73 Jovi Hum 43 H-AF 29 R3, M20, I48, R71, T73 Jovi Hum 44 H-AF 30 R3, M20, I48, R71, K73 Jovi Hum 45 H-AF 31 R3, M20, I48, S71, T73 Jovi Hum 46 H-AF 32 R3, M20, I48, S71, K73
[00222] Os ligantes tinham um domínio VL humanizado compreendendo a estrutura 3aaz.
[00223] A ligação a TRBC1 e TRBC2 foi testada por ELISA e os resultados são mostrados na Figura 6. Todas as construções ligadas TRBC1, mas não TRBC2 e exibiu uma EC50 similar à do anticorpo quimérico tendo VH murino e domínios VL (Jovi-mu). Isto mostra que, após o enxerto de CDR, a especificidade e afinidade do anticorpo de murino é retido nos anticorpos humanizados. Exemplo 3 - Estudo da estabilidade de mAbs e scFv humanizado
[00224] A estabilidade dos ligantes descritos no Exemplo 2 foi testado por fluorimetria de varrimento diferencial. As proteínas foram armazenadas em PBS a 150 ug / ml antes da adição de corante laranja SYPRO a uma proteína: proporção de corante de 5000: 1. Soluções foram misturados e colocados em uma máquina qPCR e executado no modo de FRET. As soluções foram mantidas a 15 ° C durante 10 minutos, seguido de uma rampa de temperatura de 95 ° C com incrementos de 0,5 ° C e uma espera de 30 segundos em cada passo. Uma leitura da fluorescência foi obtida depois de cada passo. Para obter o valor Tm (constante de equilíbrio; proteína desdobrada = proteína dobrada) a primeira derivada da alteração da fluorescência (ARFU / A ° C) foi trama contra a mudança de temperatura (° C).
[00225] Os resultados são mostrados na Figura 7. Descobriu-se que o uso da estabilidade de estrutura aumenta humano do aglutinante em formatos de mAb.
[00226] Uma experiência semelhante foi conduzida para investigar a estabilidade dos ligantes equivalentes em um formato scFv. Para este estudo, foi utilizado colorimetria de varrimento diferencial. As experiências foram realizadas usando um sistema de PAC DSC. As proteínas em tampão de armazenamento (1 x PBS) foram colocados na célula de amostra de calorímetro e a célula de referência preenchida com o armazenamento tampão sozinho. As células foram estabilizadas dentro do calorímetro durante 1 h a 25 ° C antes de se aquecer até a temperatura final de 100 ° C a uma velocidade de 200 ° C por hora. A temperatura de desnaturação, Tm, correspondente ao máximo do pico de transição, foi determinada a partir de pelo menos dois ensaios em replicado e não variou mais do que 0,25 ° C.
[00227] Os resultados para um ligante de scFv comparação são mostrados na Figura 8. A temperatura de fusão do rato Jovi-1 scFv foi de 61 ° C, enquanto que a temperatura de fusão para humanizado scFv (H-AF1, 3aaz) foi de 65 ° C. Exemplo 4 - Produção de um receptor de antígeno quimérico (CAR) com um domínio de ligação de antígeno anti-TRBC1 humanizado
[00228] Uma segunda geração de CAR foi concebida tendo um 41 BB e CD3 Zeta endodomínio e um domínio de ligação ao antígeno compreendendo uma humanizado JOVI 1-scFv (H-AF1, 3aaz) tal como ilustrado esquematicamente na Figura 9. As células T humanas primárias de dadores normais foram transduzidas com vetores retrovirais que expressam o anti- TRBC1 CAR CARRO ou um EGFRvlll irrelevante como controlo negativo. A capacidade das células para matar qualquer TRBC1- ou as células alvo que expressam TRBC2 foi investigada utilizando citometria de fluxo.
[00229] Os resultados são apresentados na Figura 10. as células T que expressam a humanizado TRBC1 CAR morto TRBC1-expressando mas não TRBC2 que expressam as células alvo.
[00230] A proliferação de células T foi medida depois de 72 horas de co-cultura com TRBC1- ou TRBC2 que expressam as células alvo e os resultados são mostrados na Figura 11.
As células T que expressam quer o murino Jovi-1 CAR ou o CAR humanizado mostrou um aumento na proliferação quando co- cultivadas com TRBC1-expressando, mas não TRBC2 que expressam as células alvo.
[00231] A liberação de citocina foi medida depois de 24 horas de co-cultura com alvos TRBC1- ou TRBC2-expressam. Os resultados são apresentados na Figura 12. as células T expressam quer a CARRO murino Jovi-1 ou o carro humanizado mostrou um aumento na libertação de IFNy e IL-2 quando co- cultivadas com TRBC1-expressar, mas não TRBC2 que expressam as células alvo. Exemplo 5 - CAR αTRBC1 Humanizado limpa o tumor no modelo de camundongo NSG
[00232] Camundongo NSG Feminino, idade 7-8 semanas, foram implantados com células de Jurkat transduzidas para expressar CD19-Fluc (3x10 6 culas por animal em 0,1 ml de PBS). No dia 7, os ratinhos (n = 8 / grupo) receberam infusões intravenosas de 1,0 x 106 células aTRBCI CARRO T ou células transduzidas de forma simulada (NT). O crescimento do tumor foi verificado no dia de estudo de 6, 9, 12 e 15 por imagiologia bioluminescente (BLI). Resumidamente, os ratos foram injectados (sc) com 150 mg / kg de D-luciferina 15 minutos antes da imagiologia. 10 minutos após a administração de ratinhos D-luciferina foram anestesiados e colocados dentro da câmara de imagiologia e fotografada para luminescência (vista ventral e vista dorsal; até 5 ratinhos previstas ao lado do outro, a fim gaiola). Duração e binning (sensibilidade) da aquisição da imagem foi capturada e processada usando imagem viva 4.3.1 software.
[00233] Os resultados são mostrados na Figura 13. Ao dia 12, as células anti-T-TRBC1 CARRO humanizada tinha desaparecido do tumor em todos os animais. Exemplo 6 - Comparação do efeito de células T-CAR anti- TRBC1 murino e humanizado na exaustão
[00234] PBMC ativadas foram transduzidas com vetores que expressam a murina Jovi-1 CAR ou um humanizado Jovi-1 CAR que compreende as RDCs de JOVI-1, com regiões de estrutura H-AF062256 VH e regiões estruturais 3aaz VL. As células foram recolhidas após dois dias e mantidas em meio de cultura com 50 U / mL de IL-2 durante mais dois dias. As células transduzidas T foram esgotadas de células CD56- expressam utilizando o kit de seleção positiva EasySep CD56. Co-culturas de TRBC1-TCR que expressam alvos Raji com células CARRO T foram realizados como se segue: as células alvo foram colocadas em placas a 50.000 células por poço em efector: alvo proporção de 1: 1 em placas de 96 poços com fundo em U. Após 96 horas, co-culturas foram colhidos e as células foram coradas com anticorpos, em seguida, analisadas por citometria de fluxo de anti-PD1, anti-LAG-3 e anti-Tim3.
[00235] Os resultados são apresentados na Figura 14. as células T que expressam a humanizado anti-TRBC1 CAR expressaram níveis mais baixos de todos os três marcadores de exaustão do que as células T que expressam o CARRO murino. Isto era verdade para ambas células T CD4 + e CD8 +. As células T que expressam o CARRO humanizado, por conseguinte, tornam-se menos surpreendentemente exausta durante a exposição a células alvo do que as células T que expressam um carro com um scFv derivado do anticorpo murino Jovi-1.
[00236] A exaustão de células T é um estado de disfunção de células T, que surge durante muitas infecções crónicas e câncer. É definido pela função efetora fraca. Para que uma célula T-CAR seja eficaz para matar células alvo, é vantajosa a fim de evitar ou reduzir a taxa de depleção de células T.
[00237] Todas as publicações mencionadas no relatório descritivo acima são aqui incorporadas por referência. Várias modificações e variações dos métodos descritos e sistema da invenção serão evidentes para os técnicos versados no assunto sem se afastar do escopo e espírito da invenção. Embora a invenção tenha sido descrita em ligação com concretizações preferidas específicas, deverá ser entendido que a invenção como reivindicada não deve ser indevidamente limitada a tais concretizações específicas. De fato, várias modificações dos métodos descritos para realizar a invenção que são óbvias para os especialistas em biologia molecular ou campos relacionados destinam-se a estar dentro do escopo das reivindicações seguintes.

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES
1. Domínio de ligação ao antígeno anti-TRBC1 caracterizado pelo fato de que compreende: a) um domínio VH com uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17 and SEQ ID No. 18; e b) um domínio VL com uma sequência de aminoácidos selecionada de SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 20, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 22, SEQ ID No. 23, SEQ ID No. 24, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 31, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33, SEQ ID No. 34.
2. Receptor de antígeno quimérico (CAR), caracterizado pelo fato de que compreende um domínio de ligação ao antígeno anti-TRBC1, conforme definido pela reivindicação 1.
3. Anticorpo caracterizado pelo fato de que compreende um domínio de ligação ao antígeno anti-TRBC1, conforme definido pela reivindicação 1.
4. Envolvedor de células T biespecífico (BiTE), caracterizado pelo fato de que compreende um domínio de ligação ao antígeno anti-TRBC1, conforme definido pela reivindicação 1.
5. Conjugado anticorpo-fármaco caracterizado pelo fato de que compreende um domínio de ligação ao antígeno anti- TRBC1, conforme definido pela reivindicação 1.
6. Sequência de ácidos nucleicos que codifica um CAR caracterizado pelo fato de que é conforme definida pela reivindicação 2.
7. Vetor caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de ácido nucleico conforme definida pela reivindicação 6.
8. Célula caracterizada pelo fato de que compreenden um CAR conforme definido pela reivindicação 2.
9. Método para fabricar uma célula conforme definido pela reivindicação 8 caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de introdução de um ácido nucleico conforme definido pela reivindicação 6 ou um vetor conforme defindo pela reivindicação 7 em uma célula.
10. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende uma pluralidade de células conforme definido pela reivindicação 8, um anticorpo conforme definido pela reivindicação 3, um BiTE conforme definido pela reivindicação 4 ou um conjugado anticorpo-fármaco conforme definido pela reivindicação 15.
11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de um linfoma ou leucemia de células T que expressa TRBC1 em um sujeito.
12. Método para tratamento de um linfoma ou leucemia de células T que expressa TRBC1 em um sujeito, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de administração de uma composição farmacêutica conforme definido pela reivindicação 10 a um sujeito.
13. Uso de uma composição farmacêutica conforme definido pela reivindicação 10 caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de um linfoma ou leucemia de células T que expressa TRBC1 num indivíduo.
14. Composição farmacêutica para uso, de acordo com a reivindicação 11, método, de acordo com a reivindicação 12 ou uso de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o linfoma ou leucemia de células T que expressa TRBC1 é selecionado dentre: linfoma de células T periférico, não de outra forma especificado (PTCL-NOS); linfoma de células T angioimunoblástica (AITL), linfoma de células grandes anaplásico (ALCL), linfoma de células T associado a enteropatia (EATL), linfoma de células T hepatoesplênico (HSTL), linfoma tipo nasal de células T / extranodal NK, Linfoma cutâneo células T, ALCL cutâneo primário, leucemia prolinocítica de células T e leucemia linfoblástica aguda de células T.
BR112019025990-2A 2017-06-09 2018-06-08 domínios de ligação ao antígeno anti-trbc1 BR112019025990A2 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB1709203.2 2017-06-09
GBGB1709203.2A GB201709203D0 (en) 2017-06-09 2017-06-09 Antigen-binding domain
PCT/GB2018/051570 WO2018224844A1 (en) 2017-06-09 2018-06-08 Anti trbc1 antigen binding domains

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR112019025990A2 true BR112019025990A2 (pt) 2020-07-07

Family

ID=59358238

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112019025990-2A BR112019025990A2 (pt) 2017-06-09 2018-06-08 domínios de ligação ao antígeno anti-trbc1

Country Status (18)

Country Link
US (3) US11440961B2 (pt)
EP (1) EP3635006A1 (pt)
JP (2) JP7177794B2 (pt)
KR (1) KR20200015713A (pt)
CN (1) CN110741018B (pt)
AU (1) AU2018282038A1 (pt)
BR (1) BR112019025990A2 (pt)
CA (1) CA3065006A1 (pt)
CL (1) CL2019003536A1 (pt)
CO (1) CO2019013614A2 (pt)
CU (1) CU24663B1 (pt)
GB (1) GB201709203D0 (pt)
IL (1) IL270731B2 (pt)
MX (1) MX2019013387A (pt)
PE (1) PE20191717A1 (pt)
PH (1) PH12019502785A1 (pt)
WO (1) WO2018224844A1 (pt)
ZA (1) ZA201907524B (pt)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11885807B2 (en) 2014-03-05 2024-01-30 Autolus Limited Method for depleting malignant T-cells
US11385233B2 (en) 2015-03-05 2022-07-12 Autolus Limited Methods of depleting malignant T-cells
GB201709203D0 (en) * 2017-06-09 2017-07-26 Autolus Ltd Antigen-binding domain
GB201800298D0 (en) 2018-01-09 2018-02-21 Autolus Ltd Method
GB201817172D0 (en) 2018-10-22 2018-12-05 Autolus Ltd Antibody
US20220041718A1 (en) * 2018-10-31 2022-02-10 Autolus Limited Binding domain
EP3927744A1 (en) * 2019-02-21 2021-12-29 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
EP4121518A4 (en) * 2020-03-16 2024-06-19 Marengo Therapeutics, Inc. MANIPULATED CELL COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
GB202004263D0 (en) * 2020-03-24 2020-05-06 Autolus Ltd Antibody conjugate
GB202005216D0 (en) 2020-04-08 2020-05-20 Autolus Ltd Cell
JP2021175722A (ja) 2020-04-22 2021-11-04 住友化学株式会社 塩、酸発生剤、レジスト組成物及びレジストパターンの製造方法
JP2023523011A (ja) * 2020-04-24 2023-06-01 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド Ｔ細胞関連のがん細胞に結合する多機能性分子およびその使用
JP2022008152A (ja) 2020-06-25 2022-01-13 住友化学株式会社 塩、酸発生剤、レジスト組成物及びレジストパターンの製造方法
JP2022013736A (ja) 2020-07-01 2022-01-18 住友化学株式会社 塩、酸発生剤、レジスト組成物及びレジストパターンの製造方法
CN111909277A (zh) * 2020-08-13 2020-11-10 上海市第一人民医院 一种靶向trbc1的人源化嵌合抗原受体、t细胞及用途
JP2022123839A (ja) 2021-02-12 2022-08-24 住友化学株式会社 塩、酸発生剤、レジスト組成物及びレジストパターンの製造方法
AU2022222679A1 (en) * 2021-02-17 2023-09-07 The Johns Hopkins University Methods and materials for treating clonal t cell expansions
JP2022164585A (ja) 2021-04-15 2022-10-27 住友化学株式会社 塩、酸発生剤、レジスト組成物及びレジストパターンの製造方法
JP2022164583A (ja) 2021-04-15 2022-10-27 住友化学株式会社 塩、酸発生剤、レジスト組成物及びレジストパターンの製造方法
US20230004084A1 (en) 2021-05-06 2023-01-05 Sumitomo Chemical Company, Limited Salt, acid generator, resist composition and method for producing resist pattern
CN114181971A (zh) * 2021-11-22 2022-03-15 东莞市麦亘生物科技有限公司 一种靶向trbc1 car-t细胞的制备方法与应用
WO2024085182A1 (ja) * 2022-10-18 2024-04-25 Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 Ｔ細胞性腫瘍の治療剤

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003093318A1 (en) 2002-04-29 2003-11-13 Genpat77 Pharmacogenetics Ag Novel antibody binding tcr and tirc7 and its use in therapy and diagnosis
RU2355703C2 (ru) 2002-10-09 2009-05-20 Медиджен Лимитед Одноцепочечные рекомбинантные т-клеточные рецепторы
GB0304068D0 (en) * 2003-02-22 2003-03-26 Avidex Ltd Substances
US8518405B2 (en) * 2009-10-08 2013-08-27 The University Of North Carolina At Charlotte Tumor specific antibodies and uses therefor
WO2013074916A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Car+ t cells genetically modified to eliminate expression of t- cell receptor and/or hla
GB201206559D0 (en) 2012-04-13 2012-05-30 Ucl Business Plc Polypeptide
KR102141259B1 (ko) * 2012-09-04 2020-08-05 셀렉티스 멀티―체인 키메라 항원 수용체 및 그것의 용도들
US11385233B2 (en) 2015-03-05 2022-07-12 Autolus Limited Methods of depleting malignant T-cells
CN106068276B (zh) * 2014-03-05 2020-09-18 Ucl商务有限公司 具有针对T细胞受体beta恒定区的抗原结合域的嵌合抗原受体(CAR)
GB201405845D0 (en) 2014-04-01 2014-05-14 Ucl Business Plc Signalling system
CA2945388A1 (en) * 2014-04-23 2015-10-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptors (car) for use in therapy and methods for making the same
EP3194432B1 (en) * 2014-07-31 2019-04-10 Cellectis Ror1 specific multi-chain chimeric antigen receptor
GB201415347D0 (en) 2014-08-29 2014-10-15 Ucl Business Plc Signalling system
GB201501936D0 (en) 2015-02-05 2015-03-25 Ucl Business Plc Signalling system
GB201503133D0 (en) 2015-02-24 2015-04-08 Ucl Business Plc And Syncona Partners Llp Chimeric protein
GB201709203D0 (en) * 2017-06-09 2017-07-26 Autolus Ltd Antigen-binding domain
GB201800298D0 (en) 2018-01-09 2018-02-21 Autolus Ltd Method

Also Published As

Publication number Publication date
EP3635006A1 (en) 2020-04-15
CN110741018B (zh) 2024-05-10
KR20200015713A (ko) 2020-02-12
CA3065006A1 (en) 2018-12-13
US11434293B2 (en) 2022-09-06
US20200140549A1 (en) 2020-05-07
IL270731B2 (en) 2024-03-01
US11440961B2 (en) 2022-09-13
RU2019136753A3 (pt) 2021-09-27
PE20191717A1 (es) 2019-12-06
RU2019136753A (ru) 2021-07-09
MX2019013387A (es) 2020-08-31
CL2019003536A1 (es) 2020-05-08
AU2018282038A1 (en) 2019-12-12
ZA201907524B (en) 2023-04-26
IL270731A (en) 2020-01-30
CU24663B1 (es) 2023-05-11
US20220098300A1 (en) 2022-03-31
CO2019013614A2 (es) 2020-04-01
JP2022159473A (ja) 2022-10-17
CU20190099A7 (es) 2020-10-20
US20230053849A1 (en) 2023-02-23
IL270731B1 (en) 2023-11-01
WO2018224844A1 (en) 2018-12-13
JP2020527027A (ja) 2020-09-03
JP7177794B2 (ja) 2022-11-24
CN110741018A (zh) 2020-01-31
GB201709203D0 (en) 2017-07-26
PH12019502785A1 (en) 2020-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112019025990A2 (pt) domínios de ligação ao antígeno anti-trbc1
JP7149304B2 (ja) Ｔ細胞受容体ベータ定常領域に対する抗原結合ドメインを有するキメラ抗原抗体（ｃａｒ）
BR112021008169A2 (pt) Domínio de ligação
US11385233B2 (en) Methods of depleting malignant T-cells
US11982673B2 (en) Methods
RU2791327C2 (ru) Антигенсвязывающие домены против trbc1
NZ723307B2 (en) Chimeric antigen receptor (car) with antigen binding domains to the t cell receptor beta constant region
NZ761844B2 (en) Conjugated antibody with antigen binding domains to the t cell receptor beta constant region
NZ761848B2 (en) Bispecific t-cell engager with antigen binding domains to the t cell receptor beta constant domain

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]
B25G Requested change of headquarter approved

Owner name: AUTOLUS LIMITED (GB)