BR112019024116A2 - Use da coenzima q10 formulações no tratamento e prevenção de epidermólise bolhosa - Google Patents

Abstract

a presente invenção é direcionada, em parte, a métodos de tratamento da epidermólise bolhosa (eb) a um indivíduo com necessidade dos mesmos, compreendendo a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma da coenzima q10 (coqio) ao indivíduo.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para USO DE FORMULAÇÕES DE COENZIMA Q10 NO TRATAMENTO E PREVENÇÃO DA EPIDERMÓLISE BOLHOSA.

PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório dos Estados Unidos N^Q 62/507,773, depositado em 17 de maio de 2017, cujo conteúdo inteiro é incorporado por referência na íntegra neste documento.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] De acordo com a Associação de Pesquisa Distrófica da Epidermólise Bolhosa (DebRA), 1 em cada 50.000 bebês nascidos são afetados pela Epidermólise Bolhosa (EB). Isso é observado em todos os grupos raciais e étnicos e em ambos os sexos, igualmente no mundo inteiro. O EB compreende um grupo de distúrbios de fragilidade cutânea determinados geneticamente, caracterizados por formação de bolhas ou laceração da pele e mucosas após trauma mecânico leve. Tradicionalmente, afirmava-se que havia três grupos principais de EB herdada, a saber EB simples, EB juncional e EB distrófica; com base no nível ultraestrutural dentro do qual a pele se quebra e se forma. (Pearson, R.W., 1988). Em 2007, a terceira reunião de consenso internacional sobre diagnóstico e classificação da EB foi realizada em Viena, Áustria. Com base no resultado desta reunião, o EB agora é classificado em 4 tipos principais; tipo misto (síndrome de Kindler) sendo o quarto tipo principal. A disponibilidade de anticorpos monoclonais e policlonais, juntamente com os avanços nas técnicas de diagnóstico molecular, levaram à subclassificação do EB em pelo menos 30 subtipos diferentes (Fine JD 2010).

[003] Uma característica dessas condições é a formação de bolhas ou feridas causadas por pequenos traumas mecânicos, fricção ou calor, com a gravidade da doença dependente do tipo de EB

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2/79 presente. Indivíduos com EB atrasaram significativamente a cicatrização das bolhas e/ou feridas, que são propensas a infecções. Todas as formas de EB simplex (EBS) têm locais que tendem a ser frágeis com tendência a quebrar e formar uma lesão na epiderme (Hanna, Silverman, Boxall, Krafchik, 1983) e geralmente começam com a ruptura de queratinócitos basais. O EBS é geralmente herdado predominantemente e envolve distúrbios dos genes que codificam as queratinas 5, 14 e a plectina. Em formas raras de EBS, também pode haver mutações na plectina e uma probabilidade de distrofia muscular. Em contraste, as formas juncionais e distróficas de EB são o resultado de quebras estruturais dentro ou perto da zona da membrana basal. No EB juncional (JEB), a divagem da pele se desenvolve uniformemente dentro da lâmina lúcida, a metade superior estreita e esparsa de elétrons da junção dermoepidérmica. O JEB é uma doença herdada recessivamente e envolve muitos genes para componentes entre a epiderme e a derme, como laminina 332, plectina e a6b4-integrina. Na EB distrófica (DEB), a divagem sempre ocorre entre os níveis da lâmina densa, que é a metade inferior eletrondensa da junção dermo-epiderma (derme superior). (Fine JD., Schachner LA, 1995). A síndrome de Kindler é responsável por cerca de 1 % dos pacientes com EB e envolve todas as camadas da pele com extrema fragilidade.

[004] Os fenótipos de EB são subclassificados com base na extensão do envolvimento cutâneo (localizado versus generalizado), a natureza específica da distribuição regional das lesões; os tipos de lesões morfológicas presentes na pele; a extensão (se presente) e a diversidade da atividade extracutânea da doença; e o modo de herança (autossômico dominante, autossômico recessivo). Todas as formas de EB são caracterizadas por uma vida inteira de formação recorrente de bolhas e/ou feridas, que perduram e geralmente são infectadas. As bolhas podem se formar em qualquer lugar da superfície da pele,

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3/79 inclusive dentro da cavidade oral, superficies do olho, no trato respiratório, trato gastrointestinal e/ou trato geniturinário. Além das bolhas e feridas crônicas, podem ocorrer cicatrizes desfigurantes e deformidades osteomusculares incapacitantes.

[005] Algumas formas de EB estão associadas à longevidade normal. No entanto, várias formas de EB grave experimentam profunda morbidade e acentuadamente aumento da mortalidade como resultado direto ou indireto do CE. Muitas pessoas com EB tornam-se anêmicas devido à perda crônica de sangue através de feridas, baixa ingestão nutricional, baixa absorção de ferro e supressão da medula óssea por inflamação crônica. Outros pacientes têm deficiências de selênio e carnitina ou vitamina D, o que os torna propensos a osteoporose e/ou cardiomiopatia. A morte geralmente ocorre durante as três primeiras décadas em pacientes gravemente afetados. Infecções repetidas no paciente anêmico já comprometido nutricionalmente são geralmente a causa. Outra complicação séria, tanto na forma distrófica quanto na forma juncional da EB, é o desenvolvimento de carcinomas agressivos de células escamosas durante a idade adulta jovem. A maioria dos pacientes morre como resultado de uma doença metastática generalizada, independentemente de quão cedo e com que agressividade os tumores primários foram diagnosticados e tratados. A obstrução traqueolaríngea também é um risco para uma minoria de pacientes com todas as formas de EB juncional.

[006] O envolvimento cutâneo (feridas) pode variar de bolhas nas extremidades a feridas mais generalizadas em todo o corpo. As feridas podem ocorrer como uma única lesão ou podem ser um aglomerado, dependendo da localização e/ou causa da lesão. As lesões em pacientes com EB tendem a se expandir se não forem tratadas e não a curar. A cicatrização típica de feridas (em pessoas não afetadas pela EB) é um processo serial orquestrado de eventos previsíveis de reparo

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AH2 tecidual envolvendo células imunes, plaquetas, queratinócitos, fibroblastos e macrófagos, desempenhando papéis essenciais. (Demidova-Rice, et al., 2012). Existem dois tipos principais de DEB, um sendo dominante e o outro recessivo, e ambos envolvem defeitos no colágeno tipo VII. As aberrações genéticas na pele de pacientes com EB levam a problemas de pele ao longo da vida que nunca podem ser resolvidos e que afetam significativamente a qualidade de vida.

[007] Em contraste com a cicatrização normal de feridas, feridas crônicas, como as observadas em pacientes com CE, demonstram uma fase inflamatória persistente e exagerada, sem progressão para as fases de cicatrização. (Schober-Flores C., 2003). Como resultado da natureza crônica e prolongada dessas feridas, elas são propensas a infecções persistentes. Pacientes com EB sofrem de dor e desconforto, combatem infecções cutâneas recorrentes, são severamente limitadas em suas escolhas de estilo de vida, frequentemente sofrem de anemia, desnutrição, constipação, osteoporose, cardiomiopatia, câncer e outras aflições. Os tratamentos padrão de tratamento de feridas não podem tratar efetivamente pacientes com EB, pois sua pele não possui a expressão adequada de proteínas estruturais e funcionais que evitam danos causados por fatores ambientais (por exemplo, calor, umidade) e/ou estresse mecânico (por exemplo, fricção, trauma) e não há capacidade de curar a EB, pois é causada por mutações genéticas na pele dos pacientes.

[008] Não existe tratamento específico comprovado para qualquer forma de EB, e a base do manejo clínico é baseada no tratamento de feridas, no manejo da dor e na prevenção de fatores provocadores. Atualmente, o tratamento do EB herdado é essencialmente de suporte. Uma boa terapia tópica é fundamental, consistindo principalmente de curativos estéreis e antibióticos tópicos. Os cuidados padrão incluem o uso de antibióticos em cremes ou pomadas cobertas com gaze

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5/79 impregnada de vaselina ou um curativo sintético não aderente. Áreas vulneráveis com tendência a repetir lesões são protegidas com aplicações espessas de gaze tubular. Tais curativos geralmente são trocados diariamente. Cursos intermitentes de antibióticos sistêmicos são necessários quando ocorre mais do que uma infecção menor.

[009] O cuidado adequado e adequado da ferida continua sendo a pedra angular para o manejo eficaz, independentemente do tipo de diagnóstico de EB e da forma das lesões. Apesar da disponibilidade de um amplo espectro de produtos para tratamento de feridas em feridas na pele com cicatrização normal, no cenário clínico, sua utilidade para uso no CE é extremamente limitada.

[0010] Por conseguinte, permanece uma necessidade significativa na arte de melhores opções de tratamento para EB nas suas várias formas.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0011] A presente invenção é baseada, pelo menos em parte, na descoberta surpreendente de que a Coenzima Q10 aplicada topicamente (CoQ10) pode ser usada para tratar indivíduos com EB. Além disso, a CoQ10 aplicada topicamente pode melhorar estrutural e funcionalmente a integridade da pele e a cicatrização de feridas da pele em pacientes com EB. Sem estar limitado pela teoria, a presente invenção relata a descoberta surpreendente e inesperada de que a aplicação tópica de CoQ10 pode promover a transição do estágio de inflamação da cicatrização (onde bolhas e/ou feridas de EB normalmente estagnam) para os estágios de proliferação e remodelação, permitindo assim bolhas e/ou feridas para resolver. A presente invenção representa uma nova terapia para tratar pacientes com EB.

[0012] Em uma modalidade da invenção, a CoQ10 tópica pode ser usada para alterar a expressão de proteínas estruturais e/ou funcionais

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6/79 que estão ausentes em pacientes com EB, cuja correção pode melhorar a integridade estrutural da pele.

[0013] Outra modalidade da invenção é um método de tratamento de Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo em necessidade da mesma, compreendendo a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo, em que 0 tratamento do indivíduo resulta na redução de tamanho de uma ou mais bolhas e/ou feridas em pelo menos cerca de 70% após a administração de uma quantidade eficaz de CoQ10 por um período de tratamento de cerca de quatro semanas.

[0014] Outra modalidade da invenção é um método de tratamento de uma ferida associada à Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo em necessidade da mesma, compreendendo a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo.

[0015] Uma modalidade adicional da presente invenção é um método para melhorar a integridade estrutural da pele de um indivíduo que sofre de Epidermólise Bolhosa, compreendendo a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 na pele do indivíduo.

[0016] Uma modalidade da invenção é um método para aumentar a taxa de cicatrização de uma bolha da pele e/ou ferida em um indivíduo que sofre de EB, compreendendo a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de Coenzima Q10 (CoQ10) na pele bolha e/ou ferida.

[0017] Em outra modalidade, a invenção é um método de tratamento ou prevenção de carcinoma de células escamosas em um indivíduo que sofre de epidermólise bolhosa, compreendendo a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo

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7/79 uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo.

[0018] Em qualquer uma das modalidades acima, a Epidermólise Bolhosa é Epidermólise Bolhosa Simplex, Epidermólise Bolhosa Juncional, Epidermólise Bolhosa Distrófica ou Síndrome de Kindler.

[0019] Em qualquer uma das modalidades acima, a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é aplicada a um bolha e/ou ferida na pele. Em qualquer uma das modalidades acima, a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é aplicada à pele intacta. Em outra modalidade, a composição farmacêutica tópica é uma preparação selecionada do grupo que consiste em uma pomada, creme, emulsão, loção e gel. Em uma modalidade, a composição farmacêutica tópica está na forma de um creme. Em um aspecto desta modalidade, a composição farmacêutica tópica contém de cerca de 1% a cerca de 5% de CoQ10 (p/p). Em outro aspecto desta modalidade, a composição farmacêutica tópica contém cerca de 3% de CoQ10 (p/p).

[0020] Em qualquer uma das modalidades acima, a administração tópica da composição farmacêutica CoQ10 da invenção fornece um ou mais efeitos benéficos ao indivíduo que sofre de EB após tratamento com uma quantidade eficaz de CoQ10. Em alguns aspectos desta modalidade, 0 um ou mais efeitos benéficos são selecionados do grupo que consiste em: redução da dor associada ao EB; redução da inflamação associada ao EB; redução no tamanho de bolhas e/ou feridas associadas ao EB; redução no número de bolhas e/ou feridas associadas ao EB; aumento na taxa de cicatrização de uma ou mais bolhas e/ou feridas associadas ao EB; aumento na integridade estrutural da pele do indivíduo que sofre de EB; redução no número de infecções de pele associadas ao EB; aumento no fechamento de feridas associadas a EB; aumento na re-epitelização de feridas associadas à EB; aumento na granulação de feridas associadas à EB; redução em uma distância do intervalo epidérmico de uma bolha e/ou ferida

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8/79 associada à EB; redução no tempo para cicatrização de bolhas e/ou feridas associadas à EB; redução na quantidade de medicamentos concomitantes administrados ao indivíduo, a fim de tratar o EB do indivíduo; redução nas cicatrizes associadas ao EB; aumento na produção de queratinócitos na pele do indivíduo; e aumento da produção de fibroblastos na pele do indivíduo.

[0021] Em uma modalidade, a administração da composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 diminui 0 tempo de cicatrização da bolha e/ou ferida em comparação com uma bolha e/ou ferida não tratada. Em outra modalidade, a administração da composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 melhora a qualidade da cicatrização usando 0 índice de Atividade e Cicatrização da Doença da Epidermólise Bolhosa (EBDASI) em comparação com uma bolha e/ou ferida não tratada. Em uma modalidade, a administração da composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 aumenta a resistência ao trauma mecânico da pele em comparação com a pele não tratada. Em uma modalidade, a administração da composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 reduz a formação de bolhas e/ou feridas da pele em comparação com a pele não tratada. Em outra modalidade, a composição compreendendo CoQ10 é aplicada a uma bolha e/ou ferida na pele. Em outra modalidade, a composição compreendendo CoQ10 é aplicada à pele intacta.

[0022] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para promover a cicatrização de uma bolha da pele e/ou ferida em um indivíduo que sofre de epidermólise bolhosa, compreendendo administração tópica à bolha e/ou ferida de uma composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz da coenzima Q10 (CoQ10), promovendo assim a cicatrização da bolha da pele e/ou

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9/79 ferida no indivíduo. Em uma modalidade, a taxa de re-epitelização do bolha e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 é aumentada em comparação com a taxa de re-epitelização de um bolha e/ou ferida não tratada. Em uma modalidade, a distância epidérmica do bolha e/ou ferida é reduzida em comparação com uma distância de folga epidérmica de uma bolha e/ou ferida não tratada. Em uma modalidade, a qualidade da integridade epidérmica do bolha e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 é melhorada em comparação com a qualidade da integridade epidérmica de uma bolha e/ou ferida não tratada. Em outra modalidade, a qualidade da integridade epidérmica é avaliada usando exames histológicos do teto da bolha. Em uma modalidade, 0 nível de expressão de uma ou mais proteínas estruturais no bolha e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 é modulado em comparação com 0 nível de expressão de uma ou mais proteínas estruturais em um bolha e/ou ferida não tratada. Em outra modalidade, a uma ou mais proteínas estruturais é selecionada do grupo que consiste em uma queratina, um colágeno, uma plectina, uma anexina, uma vimentina, uma filamina e uma laminina. Em uma outra modalidade, a queratina é selecionada do grupo que consiste em queratina 13 (KRT13), queratina 14 (KRT14) e queratina 17 (KRT17). Em uma modalidade adicional, a proteína é uma ou mais proteínas selecionadas do grupo que consiste em queratina 5, queratina 14, plectina, laminina 332, a6b4-integrina e colágeno tipo VII. [0023] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de tratamento de um indivíduo com Epidermólise Bolhosa, compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10, tratando desse modo 0 indivíduo. Em uma modalidade, 0 indivíduo é identificado como tendo uma alteração na expressão de uma ou mais proteínas estruturais na pele. Em outra modalidade, a uma ou mais proteínas estruturais é selecionada do grupo que consiste em uma queratina, um colágeno,

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10/79 uma plectina, uma anexina, uma vimentina, uma filamina e uma laminina. Em outra modalidade, a queratina é selecionada do grupo que consiste em queratina 13 (KRT13), queratina 14 (KRT14) e queratina 17 (KRT17). Em um aspecto adicional desta modalidade, a proteína é uma ou mais proteínas selecionadas do grupo que consiste em queratina 5, queratina 14, plectina, laminina 332, a6b4-integrina e colágeno tipo VII. Em uma modalidade adicional, a expressão de uma ou mais proteínas estruturais resulta em aumento de fibroblastos e/ou queratinócitos na pele do indivíduo.

[0024] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de tratamento ou prevenção de carcinoma espinocelular em um indivíduo que sofre de epidermólise bolhosa, compreendendo a administração tópica de uma composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo, tratando ou prevenindo carcinoma espinocelular no indivíduo. Em uma modalidade, a composição compreendendo CoQ10 é administrada a células de carcinoma espinocelular no indivíduo. Em uma modalidade, a composição compreendendo CoQ10 é administrada a uma área da pele compreendendo células de carcinoma de células escamosas no indivíduo. Em uma modalidade, o carcinoma de células escamosas é carcinoma de células escamosas cutâneo (cSCC). Em um aspecto desta modalidade, a composição da invenção é administrada com um agente adicional. Em um aspecto desta modalidade, o agente adicional é um agente quimioterapêutico. Em um aspecto desta modalidade, o agente quimioterapêutico é cisplatina, doxorrubicina, 5-fluorouracil, capecitabina, topotecano ou etoposídeo. Em outro aspecto desta modalidade, o agente quimioterapêutico é o 5-fluorouracil. Em outro aspecto desta modalidade, o agente adicional é diclofenaco, imiquimod ou mebutato de ingenol. Em outro aspecto desta modalidade, o agente adicional é um medicamento usado na terapia fotodinâmica (PDT).

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[0025] Em uma modalidade dos aspectos anteriores, a administração da composição compreendendo CoQ10 modula a expressão de uma ou mais proteínas no indivíduo. Em uma modalidade, a proteína é uma proteína de estresse ou proteína estrutural. Em outra modalidade adicional, a proteína é selecionada do grupo que consiste em transaldolase 1, proteína NM23, proteína 1 de choque térmico 27kDa 1, queratina 1, queratina 14, queratina 13, proteassoma beta 7, subunidade 3 do ativador do proteassoma e inibidor da dissociação do PIB rho alfa. Em outra modalidade, a proteína é selecionada do grupo que consiste em: homólogo 1 do oncogene viral V-akt murino viral (AKTI), atanogene 4 associado a BCL2 (BAG4), proteína X associada a BCL2 (BAX), semelhante a BCL2 1 (BCL2LI), proteína de interação BCL2/adenovírus EIB 19kDa 3 (BNIP3), família do domínio de recrutamento de caspase, membro 6 (CARD6), caspase 6, cisteína peptidase relacionada à apoptose (CASP6), caspase 7, cisteína peptidase relacionada à apoptose (CASP7), parada do crescimento e induzível a danos no DNA, alfa (GADD45A), proteína tumoral p53 (TP53) e proteína tumoral p73 (TP73).

[0026] Em uma modalidade de qualquer um dos aspectos ou modalidades acima, a composição compreendendo CoQ10 compreende entre 1% e 5% da coenzima Q10. Em uma modalidade, a composição compreendendo CoQ10 compreende cerca de 1%, cerca de 2%, cerca de 3%, cerca de 4% ou cerca de 5% da coenzima Q10. Em uma modalidade, a composição compreendendo CoQ10 compreende cerca de 3% da coenzima Q10. Em uma modalidade de qualquer um dos aspectos ou modalidades acima, a composição compreendendo CoQ10 é administrada com uma segunda composição compreendendo um agente adicional. Em uma modalidade de qualquer um dos aspectos ou modalidades acima, a composição compreendendo CoQ10 compreende ainda um agente adicional. Em uma modalidade de

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12/79 qualquer um dos aspectos ou modalidades acima, a composição compreendendo CoQ10 não compreende nenhum agente adicional, isto é, a coenzima Q10 é 0 único agente ativo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0027] A Figura 1 é um gráfico que mostra 0 efeito do aumento da concentração da exposição à coenzima Q10 na proliferação celular de câncer e células normais.

[0028] A Figura 2A e a Figura 2B mostram a expressão de isocitrato desidrogenase (IDH-1) em células de melanoma SK-MEL-28 tratadas com concentração crescente de Coenzima Q10 (50 μΜ ou 100 μΜ). A Figura 2A mostra os resultados de um Western Blot para IDH-1 e um controle de carregamento de beta-actina. A Figura 2B é um gráfico que mostra a mudança na expressão do IDH-1 como uma porcentagem do controle. Como mostrado na Figura 2B, 0 tratamento de células SKMEL-28 com a coenzima Q10 está associado a um aumento dependente da concentração na expressão de IDH-1.

[0029] A Figura 3A e a Figura 3B mostram 0 efeito do tratamento com coenzima Q10 (50 μΜ ou 100 μΜ) na expressão de ATP citrato liase (ACL) em células de melanoma SK-MEL-28. Células do músculo liso da aorta humana (HASMC) foram usadas como controle. A Figura 3A mostra os resultados de um Western Blot para ACL e um controle de carregamento de beta-actina. A Figura 3B é um gráfico que mostra a alteração na expressão do ACL como uma porcentagem do controle. Como mostrado na Figura 3A e na Figura 3B, 0 tratamento de células SK-MEL-28 com a coenzima Q10 está associado a uma diminuição dependente da concentração na expressão do LCA.

[0030] A Figura 4A e a Figura 4B mostram 0 efeito da Coenzima Q10 na expressão de p53, pl4ARF e MDM2 em células de melanoma SK-MEL-28. A Figura 4A mostra os resultados de um Western Blot para p53, P14ARF e MDM2 e um controle de carregamento de beta-actina.

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A Figura 4B é um gráfico que mostra a alteração na expressão de p53, P14ARF e MDM2 como porcentagem do controle.

[0031] A Figura 5 é um Western Blot que mostra a alteração na expressão de Bcl-2, Bax e Caspase 3 nas células SK-MEL-28 em resposta à exposição à coenzima Q10 (50 μΜ ou 100 μΜ) por 12 ou 24 horas. Bcl-2, Bax e Caspase 3 são marcadores pró e anti-apoptóticos que regulam as vias de morte celular. Foi utilizado um controle de carregamento de beta-actina. Foi observada uma diminuição dependente da concentração na proteína bcl-2 anti-apoptótica após a exposição à Coenzima Q10 e um aumento dependente da concentração na expressão do bax pró-apoptótico após a exposição à Coenzima Q10. [0032] A Figura 6 é um esquema que mostra a estrutura da zona da membrana basal cutânea (BMZ).

[0033] A Figura 7 é um esquema que mostra as camadas da pele afetadas em pacientes com EB.

[0034] A Figura 8A mostra uma fotografia de uma lesão alvo (medindo 15,17 cm) na perna anterior esquerda inferior na Semana 1, Dia 1, antes da administração do Creme de CoQ10. A Figura 8B mostra uma fotografia da mesma lesão alvo (medindo 11,2 cm) na Semana 1, Dia 3. Além da redução de tamanho da lesão, houve uma diminuição significativa de líquido dentro da bolha. A Figura 8C mostra a lesão alvo (medindo 9,1 cm) na Semana 2, Dia 1. O paciente nestas fotografias possui subtipo EB Juncional, Não Herlitz.

[0035] A Figura 9A mostra uma fotografia de uma lesão alvo (medindo 5,28 cm) na parte interna da coxa esquerda que o paciente desenvolveu um mês antes, na Semana 1, Dia 1, antes da administração do Creme de CoQ10. A Figura 9B mostra a lesão alvo (medindo 0,28 cm) na Semana 2, Dia 1, que mostra redução significativa de formação de bolhas e três pequenas erosões com granulação presente. A Figura 9C mostra a lesão alvo (medindo 0,25 cm) na

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Semana 8, Dia 1, quase completamente re-epitelizada. O paciente nestas fotografias possui o subtipo EB Simplex, Dowling-Meara.

[0036] A Figura 10A mostra uma fotografia de uma lesão alvo (medindo 36,96 cm) na haste mediai da perna com um bolha principal com alguma granulação, na Semana 1, Dia 1, antes da administração do Creme de CoQ10. A Figura 10B mostra a lesão alvo (medindo 4 cm) na Semana 2, Dia 1, com uma redução nas bolhas e um aumento na granulação, com manchas de secagem. A Figura 10C mostra a lesão alvo (medindo 0 cm) na Semana 8, Dia 1, com apenas cicatrizes presentes. O paciente nestas fotografias possui subtipo EB Juncional, Não Herlitz.

[0037] A Figura 11A mostra uma fotografia de uma lesão alvo (medindo 21,76 cm) no abdômen superior direito, mostrando exsudato e sangue significativos com granulação ao redor da borda, na Semana 1, Dia 1, antes da administração do Creme de CoQ10. A Figura 11B mostra a lesão alvo (medindo 15,19 cm) na Semana 2, Dia 1, com granulação bastante aumentada ao redor da borda. O paciente nestas fotografias tem EB distrófico recessivo.

[0038] A Figura 12A mostra uma fotografia de uma lesão alvo (medindo 20,75 cm) com várias erosões granuladas na parte inferior da perna anterior direita na Semana 1, Dia 1, antes da administração do Creme de CoQ10. A Figura 12B mostra a lesão alvo (medindo 14,4 cm) na Semana 1, Dia 3, com uma redução no número de erosões e reepitelização significativa. A Figura 12C mostra a lesão alvo na Semana 8, Dia 1, com uma redução adicional no número de erosões e um aumento na re-epitelização. O paciente nestas fotografias tem EB juncional.

[0039] As Figuras 13A-D mostram imagens dermatoscópicas tiradas 48 horas após o ferimento com um sistema CELLUTOME de bolha de sucção. Eritema difuso é observado em feridas não tratadas

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15/79 (13A, 13C), enquanto áreas pequenas ou inexistentes de vermelhidão estavam presentes nas feridas tratadas (13B, 13D).

[0040] A Figura 14A mostra imagens de RCM capturadas na semana 1 e a Figura 14B mostra imagens de RCM capturadas na semana 8. Células inflamatórias difusas e feixes desorganizados de colágeno (Figura 14A) estão presentes na semana 1, enquanto poucas células inflamatórias, feixes organizados de colágeno e corneócitos são vistos na semana 8 (Figura 14B).

[0041] A Figura 15A mostra imagens de RCM capturadas na semana 1 e a Figura 15B mostra imagens de RCM capturadas na semana 8. O tecido granular cobre a ferida com corneócitos grandes na semana 8 (Figura 15B), enquanto as células inflamatórias com algumas áreas com tecido granular são vistas na semana 1 (Figura 15A).

[0042] A Figura 16A mostra imagens de RCM capturadas na semana 1 e a Figura 16B mostra imagens de RCM capturadas na semana 8. Feixes de colágeno mais espessos estão presentes na semana 8 (Figura 16B), enquanto pacotes de colágeno finos estão presentes na semana 1 (Figura 16A)

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0043] Atualmente, não existe tratamento específico comprovado para qualquer forma de EB. Todos os tipos de EB são caracterizados por persistentes bolhas e ferimentos na pele que requerem tratamento ativo, incluindo o uso de modalidades terapêuticas com a capacidade de reparar e curar feridas. As feridas com EB são crônicas, difíceis de curar feridas que não progridem através de fases típicas associadas à cicatrização (Pope et al., 2013). As feridas típicas progridem através de quatro estágios de cicatrização: 1) hemostasia, 2) inflamação, 3) proliferação e 4) remodelação. (Guo et al., 2010). No CE, a fase inflamatória costuma ser prolongada sem progressão pelas próximas fases de cicatrização. A fase proliferativa pode ser prejudicada devido à

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16/79 atividade metabólica reduzida causada por infecção, desnutrição e oxigenação tecidual, e também por medicamentos normalmente utilizados no tratamento sintomático da doença, como corticosteroides (Marinkovich et al, 2014). A remodelação na EB também pode ser prejudicada, o que resulta em contração anormal da ferida, causando cicatrizes graves. O objetivo da função mitocondrial nos principais tipos de células, como queratinócitos, fibroblastos e células endoteliais associadas ao fechamento e cicatrização de feridas, tem sido sugerido como um mecanismo importante para efetivar a melhoria da cicatrização de feridas. O metabolismo mitocondrial fornece energia para o reparo de feridas, regula a diferenciação de queratinócitos através da produção de espécies reativas de oxigênio e influencia a expressão de genes centrais ao processo de cicatrização de feridas. (Feichtinger et al., 2014).

[0044] A presente invenção é baseada na descoberta surpreendente de que a coenzima Q10 aplicada topicamente pode ser usada para tratar pacientes que sofrem de EB. Em uma modalidade, a coenzima Q10 aplicada topicamente pode ser usada para tratar bolhas e/ou feridas na pele em pacientes com EB. Pacientes com EB são caracterizados por defeitos e/ou deficiências na expressão e/ou atividade de proteínas estruturais e funcionais da pele. Em particular, em certas modalidades, a presente invenção fornece métodos de tratamento de uma população específica de indivíduos com EB que apresentam uma alteração na expressão de uma ou mais proteínas estruturais na pele, por exemplo, queratinas, colágenos, plectina, anexinas, vimentina, filaminas, integrinas e lamininas. Como a pele de indivíduos com EB está comprometida na expressão e/ou atividade dessas proteínas estruturais, o processo de cicatrização das feridas, por exemplo, bolhas na pele, é único em indivíduos que sofrem de EB. Além das lesões debilitantes dos tecidos epiteliais nos vários órgãos, os

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17/79 pacientes com EB encontram outras complicações, incluindo retardo de crescimento, anemia, distrofia muscular e deformidades das mãos e pés. No entanto, a causa da morbimortalidade em adultos com EB está relacionada à incidência de neoplasias, das quais o carcinoma epidermoide cutâneo (cSCC) é mais significativo. A presente invenção também relata a descoberta surpreendente de que a Coenzima Q10 aplicada topicamente (CoQ10) pode ser usada para tratar e/ou prevenir a cSCC em pacientes com EB.

[0045] A administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo a coenzima Q10 da presente invenção que demonstrou aumentar a expressão de várias proteínas estruturais, como colágenos, plectina, laminina, vimentina, anexina, KRT13, KRT14 e KRT17 em fibroblastos e queratinócitos. Além disso, a aplicação tópica de CoQ10 demonstrou bloquear a regulação positiva de citocinas inflamatórias (IL6) e diminuir a proliferação de células SCC.

1. Definições

[0046] Salvo indicação em contrário, todos os termos aqui utilizados têm os significados dados abaixo e são geralmente consistentes com 0 mesmo significado que os termos têm para os especialistas na técnica da presente invenção. Os profissionais são particularmente direcionados a Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Second Edition), Cold Spring Harbor Press, Plainview, N.Y. e Ausubel F Metal. (1993) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Nova Iorque, NY, para definições e termos da técnica. Deve ser entendido que esta invenção não está limitada à metodologia, protocolos e reagentes específicos descritos, pois eles podem variar.

[0047] Os artigos um e uma são usados aqui para se referir a um ou mais de um (isto é, pelo menos um) do objeto gramatical do artigo.

[0048] O termo incluindo é usado aqui para significar e é usado de forma intercambiável com a frase incluindo, mas não limitado a.

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[0049] O termo ou é usado aqui para significar e é usado de forma intercambiável com o termo e/ou, a menos que o contexto indique claramente o contrário.

[0050] Como aqui utilizado, o termo indivíduo pode significar um animal humano ou não humano, preferencialmente um mamífero. Em modalidades preferidas, os indivíduos são humanos.

[0051] Como usados aqui, o termo agente ou agente adicional significa um composto ou composição que pode ser útil para tratar a Epidermólise Bolhosa e/ou uma condição ou sintoma associado à EB, como dor, inflamação, perda de sangue, cicatrização de feridas, e similar. Agentes e agentes adicionais podem ainda incluir tratamentos de doenças e distúrbios associados ao EB, como carcinoma de células escamosas (CEC), anemia e similares.

[0052] Como aqui utilizado, os termos tratamento, tratamento e semelhantes são aqui utilizados para geralmente significar melhoria em quaisquer sintomas associados ou causados por EB. Tratamento, como usado neste documento, pode se referir a um indivíduo que apresenta um ou mais dos seguintes itens após a administração da composição CoQ10: diminuição da dor associada à EB, diminuição da inflamação associada à EB, diminuição da formação de bolhas e/ou feridas, aumento da taxa de cicatrização de bolhas e/ou feridas, aumento da taxa de fechamento de feridas, aumento da integridade da pele (ou seja, diminuição da probabilidade de laceração ou bolhas devido a estresse mecânico ou ambiental), diminuição do número de bolhas crônicas e/ou feridas, diminuição do número de medicações concomitantes necessárias para controlar os sintomas da EB e diminuição do número de bolhas e/ou feridas que são infectadas, entre outras. As melhorias em qualquer um desses sintomas pode ser prontamente avaliado de acordo com métodos padrão e técnicas conhecidas na técnica. A população de indivíduos tratados pelo método

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19/79 da doença inclui indivíduos que sofrem de qualquer forma de EB. Como EB é uma condição genética, tratando não inclui medidas curativas.

[0053] Como aqui utilizado, o termo prevenção é aqui utilizado para se referir à prevenção total ou parcial ou à diminuição do início ou progressão de uma doença ou distúrbio. Como aqui utilizado, a prevenção visa se referir à realização de um ou mais dos seguintes procedimentos: (a) taxa de progressão decrescente ou lenta da gravidade da doença ou distúrbio; e (b) prevenir ou retardar o desenvolvimento da doença ou distúrbio, em comparação com o tempo médio de aparecimento da subpopulação de pacientes com EB em geral.

[0054] Como aqui utilizado, o termo duração do tratamento é aqui utilizado para se referir à quantidade de tempo que um indivíduo administra a composição de CoQ10 a uma bolha específica, ferida e/ou pele intacta. A duração do tratamento deve ser o tempo necessário para a bolha e/ou ferida cicatrizar e resolver. Normalmente, a duração do tratamento durará de 1 a 12 semanas, mas pode ser mais longa para bolhas e/ou feridas específicas. Como a EB é uma condição genética para a qual não há cura, e um indivíduo que sofre de EB pode apresentar novas bolhas e/ou feridas a qualquer momento, qualquer uma das quais pode ser crônica se tratada com modalidades-padrão de atendimento. Prevê-se que um indivíduo possa ter múltiplas bolhas e/ou feridas que exijam a administração da composição CoQ10 da presente invenção a qualquer momento, e que a data de início do tratamento e a data final do tratamento não possam coincidir para cada área afetada. Além disso, para usos preventivos, a duração do tratamento para administração da composição CoQ10 da presente invenção pode não ter um ponto final discreto, mas será determinado pelo médico que supervisiona o tratamento do indivíduo.

[0055] Como aqui utilizado, o termo quantidade terapeuticamente

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20/79 eficaz em referência à composição CoQ10 da presente invenção se refere à quantidade suficiente para induzir um resultado biológico, farmacêutico ou terapêutico desejado. Esse resultado pode ser 0 alívio dos sinais ou sintomas de uma doença ou distúrbio ou qualquer outra alteração desejada de um sistema biológico. Em uma modalidade da presente invenção, 0 resultado envolverá a promoção e/ou melhoria da bolha e/ou cicatrização de feridas, incluindo 0 aumento da porcentagem de fechamento da ferida, redução do tempo para cicatrização, melhoria da qualidade da cicatrização, redução na distância da lacuna epidérmica e/ou melhoria da integridade da pele.

[0056] Como aqui utilizado, 0 termo formação de bolhas na pele, formação de bolhas na pele ou formação de bolhas se refere a um tipo particular de ferida nas camadas superiores (camada epidérmica e camada dérmica) da pele. No CE, uma ou mais bolhas na pele podem se formar quando pequenos traumas, fricção ou calor são aplicados à pele.

[0057] Como aqui utilizado, 0 termo ferida deve se referir a uma lesão no tecido vivo causada por um corte, golpe ou outro impacto, tipicamente aquele em que a pele é cortada ou quebrada. Os sinônimos incluem lesão, lágrima, talho e/ou divagem da pele.

[0058] Dependendo do tipo de EB, bolhas na pele e/ou feridas podem se formar devido a (1) divagem da pele dentro da camada basal da epiderme, (2) divagem de pele e mucosa que ocorre no nível da lâmina lúcida da zona da membrana basal, uma interface crítica entre a epiderme e a derme e/ou (3) divagem sob a lâmina densa, dentro da derme ao nível das fibrilas de ancoragem. Qualquer bolha e/ou ferida pode ser aguda ou crônica.

[0059] Como aqui utilizado, 0 termo pele intacta se refere à pele na qual não existem bolhas e/ou feridas. Em certas modalidades, a pele intacta se refere à pele na qual não há divagem da pele dentro da

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21/79 camada basal da epiderme ou pele na qual não há divagem no nível da lâmina lúcida da zona da membrana basal ou pele na qual não há divagem abaixo a lâmina densa.

[0060] Como aqui utilizado, o termo proteína estrutural pretende se referir a uma proteína que mantém a integridade epitelial da pele. Em certas modalidades, a proteína estrutural pode ser uma queratina, um colágeno, uma plectina, uma anexina, uma vimentina, uma filamina, uma integrina e uma laminina. Em uma modalidade, a proteína estrutural da invenção é uma proteína à qual um defeito ou deficiência está associado ou causai da Epidermólise Bolhosa.

[0061] Como aqui utilizado, o termo proteína funcional pretende se referir a uma proteína que possui uma atividade que é essencial para manter ou restabelecer (por exemplo, curar) a integridade da pele. Em certas modalidades, a proteína funcional pode ser uma queratina, um colágeno, uma plectina, uma anexina, uma vimentina, uma filamina, uma integrina e uma laminina. Em uma modalidade, uma proteína funcional da invenção é uma proteína à qual um defeito ou deficiência está associado ou causai da Epidermólise Bolhosa.

[0062] O termo expressão, tal como aqui utilizado, pretende referir-se ao processo pelo qual um polipeptídeo é produzido a partir de DNA. O processo envolve a transcrição do gene em mRNA e a tradução desse mRNA em um polipeptídeo. Dependendo do contexto em que usado, expressão pode se referir à produção de RNA, proteína ou ambos.

[0063] Os termos nível de expressão de um gene ou nível de expressão de gene devem se referir ao nível de mRNA, bem como transcritos nascidos pré-mRNA, intermediários de processamento de transcritos, mRNA (s) maduro (s) e produtos de degradação, ou o nível de proteína, codificado pelo gene na célula.

[0064] Como usados aqui, o termo modulação pretende se referir

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22/79 à regulação positiva (isto é, ativação ou estimulação) ou regulação negativa (isto é, inibição ou supressão) de uma resposta, ou as duas em combinação ou à parte. Um modulador é um composto ou molécula que modula e pode ser, por exemplo, um agonista, antagonista, ativador, estimulador, supressor ou inibidor.

[0065] Como aqui utilizado, o termo alteração pretende se referir a um aumento ou diminuição. Em certas modalidades, uma alteração se refere a um aumento ou uma diminuição na expressão da proteína. Em outras modalidades, uma alteração se refere a um aumento ou uma diminuição na expressão gênica.

[0066] Agora será feita referência em detalhes às modalidades preferidas da invenção. Embora a invenção seja descrita em conjunto com as modalidades preferidas, será entendido que não se destina a limitar a invenção às modalidades preferidas. Pelo contrário, pretendese abranger alternativas, modificações e equivalentes que possam ser incluídos no espírito e escopo da invenção, conforme definido pelas reivindicações anexas.

2. Composições Farmacêuticas e Administração Farmacêutica A. Coenzima Q10

[0067] Os termos Coenzima Q, e CoQ10 são usados de forma intercambiável em todo o relatório. CoQ10 tem a seguinte estrutura:

em que x é 10. CoQ10 inclui a versão totalmente oxidada, também conhecida como ubiquinona ou ubidecarenona, a versão parcialmente oxidada, também conhecida como semiquinona ou ubisemiquinona, ou

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23/79 a versão totalmente reduzida, também conhecida como ubiquinol; ou quaisquer misturas ou combinações dos mesmos. Em certas modalidades, o composto CoQ10 para uso nos métodos da invenção é a ubidecarenona.

[0068] CoQ10 é reconhecido na técnica e descrito adicionalmente na Publicação Internacional No. WO 2005/069916 (Appln. No. PCT/US2005/001581), WO 2008/116135 (Appln. No. PCT/USOS/57786), WO2010/132507 (Appln No. PCT/US2010/034453), WO 2011/112900 (Appln. No. PCT/US2011/028042) e WO2012/174559 (Appln. No. PCT/US2012/043001), cujo conteúdo inteiro é expressamente aqui incorporado por referência. CoQ10 é uma de uma série de poliprenil 2,3-dimetóxi-5-metilbenzoquinona (ubiquinona) presente nos sistemas de transporte de elétrons mitocondriais de células eucarióticas. As células humanas produzem CoQ10 exclusivamente e são encontradas nas membranas celulares e mitocondriais de todas as células humanas, com os mais altos níveis em órgãos com alta demanda de energia, como fígado e coração.

B. Composições

[0069] Em uma modalidade preferida, a via de administração é tópica. Em uma modalidade relacionada, a composição é uma preparação selecionada do grupo que consiste em uma pomada, creme, emulsão, loção e gel para administração tópica. Em um aspecto desta modalidade, a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é um creme tópico.

[0070] As composições compreendendo a coenzima Q10 podem ser aplicadas ao bolha e/ou local da ferida, a uma área da pele contendo parte ou a totalidade de um bolha e/ou ferida, à pele intacta ou a toda a superfície da pele, incluindo 0 bolha e/ou ferida local e pele intacta, por exemplo, pele intacta diretamente ao redor da bolha e/ou ferida. Em certas modalidades exemplares, a composição compreendendo CoQ10

Petição 870200004293, de 10/01/2020, pág. 26/134 é aplicada a um bolha e/ou ferida na pele. Em outras modalidades exemplares, a composição compreendendo CoQ10 é aplicada à pele intacta. Em certas modalidades, a composição CoQ10 é aplicada após cada troca regular de curativo do bolha e/ou ferida.

[0071] É preferível apresentar 0 ingrediente ativo, isto é, CoQ10, como uma formulação farmacêutica. O ingrediente ativo pode compreender, para administração tópica, de cerca de 0,001% a cerca de 20% em peso, em peso da formulação no produto final, embora possa compreender até 30% em peso, preferencialmente de cerca de 1% a cerca de 20% p/p da formulação. As formulações tópicas da presente invenção compreendem um ingrediente ativo juntamente com um ou mais veículos aceitáveis para 0 mesmo e, opcionalmente, quaisquer outros ingredientes terapêuticos. O veículo deve ser aceitável no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial para 0 seu receptor.

[0072] No tratamento de um indivíduo exibindo um distúrbio de interesse, por exemplo, um indivíduo com Epidermólise Bolhosa, é administrada uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente ou agentes como esses. Uma dose terapeuticamente eficaz se refere à quantidade do composto que resulta na melhoria dos sintomas ou no prolongamento da sobrevivência de um indivíduo.

[0073] Os cremes de acordo com a presente invenção são formulações semissólidas do ingrediente ativo para aplicação externa. Eles podem ser feitos misturando 0 ingrediente ativo na forma finamente dividida ou em pó, sozinho ou em solução ou suspensão em um fluido aquoso ou não aquoso, com a ajuda de máquinas adequadas, com uma base oleosa ou não oleosa. A base pode compreender hidrocarbonetos, tais como parafina dura, mole ou líquida, glicerol, cera de abelha, um sabão metálico; uma mucilagem; um óleo de origem natural, como amêndoa, amendoim, amendoim, mamona ou azeite; gordura de lã ou

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25/79 seus derivados, ou um ácido graxo, como ácido esteárico ou oleico, juntamente com um álcool, como propilenoglicol ou macrogéis. A formulação pode incorporar qualquer agente ativo de superfície adequado, como um ativo de superfície aniônico, catiônico ou não iônico, como ésteres de sorbitano ou seus derivados de polioxietileno. Também podem ser incluídos agentes de suspensão, como gomas naturais, derivados de celulose ou materiais inorgânicos, como silicas silicáceas e outros ingredientes, como a lanolina.

[0074] Em certas modalidades da invenção, são fornecidos métodos para o tratamento da epidermólise bolhosa em um indivíduo em necessidade da mesma, administrando topicamente uma quantidade eficaz de coenzima Q10 ao indivíduo. Em um aspecto desta modalidade, administra-se ao indivíduo uma dose tópica de Coenzima Q10 no tecido da pele alvo, por exemplo, a bolha da pele, ferida ou pele intacta, na faixa de cerca de 0,01 a cerca de 0,5 miligrama de coenzima Q10 por centímetro quadrado de pele. Em uma modalidade, a coenzima Q10 é aplicada ao tecido alvo, por exemplo, a bolha da pele, ferida ou pele intacta, na faixa de cerca de 0,09 a cerca de 0,15 mg de CoQ10 por centímetro quadrado de pele. Em várias modalidades, a coenzima Q10 é aplicada ao tecido alvo, por exemplo, a bolha de pele, ferida ou pele intacta, na faixa de cerca de 0,001 a cerca de 5,0, cerca de 0,005 a cerca de 1,0, cerca de 0,005 a cerca de 0,5, cerca de 0,01 a cerca de 0,5, cerca de 0,01 a cerca de 0,5, cerca de 0,025 a cerca de 0,5, cerca de 0,05 a cerca de 0,4, cerca de 0,05 a cerca de 0,30, cerca de 0,10 a cerca de 0,25 ou cerca de 0,10 a 0,20 mg de CoQ10 por centímetro quadrado de pele. Em outras modalidades, a coenzima QI0 é aplicada ao tecido alvo, por exemplo, a bolha de pele, ferida ou pele intacta, em uma dose de cerca de 0,01,0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,10, 0,11,0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,18, 0,18, 0,19, 0,20, 0,21,0,22, 0,23, 0,24, 0,25, 0,26, 0,27, 0,28, 0,29, 0,30, 0,31,0,32, 0,33, 0,34, 0,35,

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0,35, 0,36, 0,37, 0,37, 0,38, 0,39, 0,40, 0,41,0,42, 0,43, 0,44, 0,45, 0,46, 0,47, 0,48, 0,49 ou 0,5 mg de CoQ10 por centímetro quadrado de pele. Em uma modalidade, a coenzima Q10 é aplicada ao tecido alvo a uma dose de cerca de 0,12 mg de CoQ10 por centímetro quadrado de pele. Deve ser entendido que faixas com qualquer um desses valores como limites superior ou inferior também devem fazer parte desta invenção, por exemplo, de cerca de 0,03 a cerca de 0,12, de cerca de 0,05 a cerca de 0,15, de cerca de 0,1 a cerca de 0,20 ou de cerca de 0,32 a cerca de 0,49 mg de CoQ10 por centímetro quadrado de pele.

[0075] Em outra modalidade da invenção, a Coenzima Q10 é administrada na forma de um Creme de CoQ10, em que o Creme de CoQ10 compreende entre cerca de 0,1% e 25% da Coenzima Q10. Em outras modalidades, o Creme de CoQ10 compreende cerca de 0,1%, 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 3,5%, 4%, 4,5%, 5%, 5,5%, 6%, 6,5%, 7%, 7,5%, 8%, 8,5%, 9%, 9,5%, 10%, 10,5%, 11%, 11,5%, 12%, 12,5%, 13%, 13,5%, 14%, 14,5%, 15%, 15,5%, 16%, 16,5%, 17%, 17,5%, 18%, 18,5%, 19%, 19,5%, 20%, 20,5%, 21%, 21,5%, 22%, 22,5%, 23%, 23,5%, 24%, 24,5% ou 25% da coenzima Q10. Em outra modalidade da invenção, a Coenzima Q10 é administrada na forma de um Creme de CoQ10, em que o Creme de CoQ10 compreende entre cerca de 1% e 5% da Coenzima Q10. Em uma modalidade, o Creme de CoQ10 compreende cerca de 3% da coenzima Q10. Em outras modalidades, o Creme de CoQ10 compreende cerca de 1 %, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 3,5%, 4%, 4,5% ou 5% da coenzima Q10. Em vários aspectos das modalidades acima, o Creme de CoQ10 é administrado em uma dosagem de cerca de 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 ou 10 miligramas de Creme de CoQ10 por centímetro quadrado de pele. Deve-se entender que faixas com qualquer um desses valores como limites superior ou inferior também devem fazer parte desta invenção, por exemplo, entre cerca de 0,5 e

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27/79 cerca de 5,0, cerca de 1,5 e 2,5 ou cerca de 2,5 e 5,5 mg de Creme de CoQ10 por centímetro quadrado de pele.

[0076] Certos aspectos da invenção fornecem um método para o tratamento da epidermólise bolhosa em um indivíduo necessitado, administrando topicamente a coenzima Q10 ao indivíduo de tal modo que o tratamento ocorre, em que a coenzima Q10 é aplicada topicamente uma ou mais vezes por 24 horas durante um período de tratamento de seis semanas ou mais. Em certos aspectos da invenção, o Creme de CoQ10 é aplicado duas vezes a cada 24 horas durante um período de tratamento de cerca de uma a cerca de doze semanas. Em certos aspectos da invenção, o Creme de CoQ10 é aplicado uma vez a cada 24 horas por um período de tratamento de cerca de uma a cerca de doze semanas. Em certos aspectos da invenção, o Creme de CoQ10 é administrado uma vez a cada 48 horas durante um período de tratamento de cerca de uma a cerca de doze semanas. Em certos aspectos da invenção, o Creme de CoQ10 é administrado duas vezes por semana durante um período de tratamento de cerca de uma a cerca de doze semanas. Uma modalidade da presente invenção é um método de tratamento de Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo em necessidade, compreendendo a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo, em que o tratamento do indivíduo resulta na redução de tamanho de uma ou mais bolhas e/ou feridas em pelo menos cerca de 70% após a administração de uma quantidade eficaz de CoQ10 por um período de tratamento de cerca de quatro semanas. Uma modalidade da presente invenção é um método de tratamento de Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo em necessidade, compreendendo a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo, em que o tratamento

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28/79 do indivíduo resulta na redução de tamanho de uma ou mais bolhas e/ou feridas em pelo menos cerca de 20% a 80% após a administração de uma quantidade eficaz de CoQ10 por uma duração de tratamento de cerca de quatro a cerca de oito semanas. Em um aspecto da modalidade acima, a redução no tamanho de bolha e/ou ferida é de cerca de 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 27%, 28%, 29%, 30 %, 31%, 31%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%,

42%, 43%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%,

53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62% 63%, 64%,

65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%,

77%, 78%, 78%, 79% ou 80 % para qualquer uma das durações do tratamento descritas imediatamente abaixo.

[0077] Em qualquer um dos aspectos anteriores da invenção, a duração do tratamento pode ser tipicamente de duas a doze semanas, ou até a bolha e/ou ferida cicatrizar. Em um aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de uma semana. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de duas semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de três semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de quatro semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de cinco semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de seis semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de sete semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de oito semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de nove semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de dez semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de onze semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é de cerca de doze semanas. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é até

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29/79 a lesão alvo estar suficientemente curada. Em outro aspecto da invenção, a duração do tratamento é crônica (sem ponto final discreto), pois um indivíduo que sofre de EB tem bolhas e/ou feridas habituais que requerem tratamento com uma composição farmacêutica compreendendo CoQ10 da presente invenção.

[0078] Em modalidades preferidas da invenção, a composição compreendendo CoQ10 é aplicada a uma bolha na pele. Em outras modalidades da invenção, a composição compreendendo CoQ10 é aplicada à pele intacta. Em um aspecto da invenção, a composição farmacêutica é 0 Creme de CoQ10 a 3%, descrito na Publicação Internacional No. W02008/116135, cujo conteúdo inteiro é incorporado por referência na íntegra neste documento.

C. Terapias combinadas

[0079] Em certas modalidades, CoQ10 e/ou suas composições farmacêuticas podem ser usadas em terapia de combinação com pelo menos um outro agente terapêutico. CoQ10 e/ou sua composição farmacêutica e 0 outro agente terapêutico podem atuar de forma aditiva ou, mais preferencialmente, sinérgica. Em uma modalidade, CoQ10 e/ou uma composição farmacêutica do mesmo é administrada simultaneamente com a administração de outro agente terapêutico. Em outra modalidade, um composto e/ou composição farmacêutica do mesmo é administrado antes ou após a administração de outro agente terapêutico.

[0080] Em uma modalidade, um agente adicional para uso nos métodos terapêuticos da invenção são agentes que podem controlar a dor e a coceira e tratar complicações como a infecção na Epidermólise Bolhosa. Certos agentes adicionais exemplares incluem vasodilatadores, vasoconstritores, agentes hipertensivos, agentes antibacterianos, antibióticos, antioxidantes, agentes antifúngicos, agentes anti-inflamatórios não esteroides, agentes esteroides e

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30/79 anestésicos.

[0081] Em outra modalidade, um agente adicional para uso nas terapias combinadas da invenção é um agente biológico. Agentes biológicos são os produtos de um sistema biológico, por exemplo, um organismo, célula ou sistema recombinante. Exemplos de tais agentes biológicos incluem moléculas de ácido nucleico (por exemplo, moléculas de ácido nucleico antissenso), interferons, interleucinas, fatores estimuladores de colônias, anticorpos, por exemplo, anticorpos monoclonais, agentes antiangiogênese e citocinas. Agentes biológicos exemplares são discutidos em mais detalhes abaixo e geralmente pertencem a várias classes, incluindo, por exemplo: hormônios, análogos hormonais e complexos hormonais, por exemplo, estrogênios e análogos de estrogênio, progesterona, análogos e progesterona de progesterona e progestógenos, andrógenos, adrenocorticosteroides, antiestrogênios, antiandrogênicos antitestosterona, inibidores de esteroides adrenais e hormônios anti-leuteinizantes; e enzimas, proteínas, peptídeos, anticorpos policlonais e/ou monoclonais, como interleucinas, interferons, fator estimulador de colônias, etc.

[0082] Deve-se notar que mais de um agente adicional, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, pode ser administrado em combinação com CoQ10. Por exemplo, em uma modalidade, dois agentes adicionais podem ser administrados em combinação com CoQ10. Em outra modalidade, um agente quimioterapêutico, um agente biológico e CoQ10 podem ser administrados.

[0083] Várias formas dos agentes biológicos podem ser usadas. Estes incluem, sem limitação, formas como moléculas proformas, moléculas não carregadas, complexos moleculares, sais, éteres, ésteres, amidas e similares, que são ativados biologicamente quando administrados no local-alvo.

3. Métodos de tratamento

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[0084] A presente invenção baseia-se na surpreendente descoberta de que uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais, tais como, sem limitação, queratina, colágeno, plectina, anexina, vimentina, filamina, integrina e laminina, está com defeito na pele de indivíduos com EB. Portanto, em certas modalidades, a presente invenção tem como objetivo tratar uma bolha e/ou ferida em um indivíduo com EB, aumentando a expressão e/ou atividade de uma ou mais proteínas estruturais ou funcionais defeituosas na pele do indivíduo de EB.

A. Epidermólise Bolhosa

[0085] A epidermólise bolhosa (EB) é um distúrbio genético da pele com formação de bolhas, caracterizado por formação de bolhas e/ou feridas quando pequenos traumas mecânicos, fricção ou calor são aplicados à pele. A pele de um indivíduo com EB é caracterizada por extrema fragilidade da pele em comparação com a pele de um indivíduo sem EB. A pele de pessoas com EB é tão frágil que pequenas fricções ou mesmo condições ambientais como calor e umidade podem causar bolhas e/ou feridas. Existe um amplo espectro de gravidade na EB: a forma mais branda é a EB simplex localizada, onde os sintomas incluem bolhas predominantemente nos pés e nas mãos, mas outras formas, notadamente a EB distrófica recessiva (RDEB) e a EB juncional, são caracterizadas por envolvimento mais extenso de pele e mucosa, complicações sistêmicas, desfiguração e, muitas vezes, severamente limitada expectativa de vida. São pessoas com essas formas mais graves de EB que tendem a desenvolver feridas e infecções crônicas ao longo da vida (Pope et al., 2013).

[0086] Pearson, em 1962, propôs um sofisticado sistema de classificação para EB com base nos achados da microscopia eletrônica de transmissão (TEM) (Pearson RW., 1962). Dependendo dos níveis ultraestruturais dentro dos quais a cisão se desenvolve na pele da EB, espontaneamente ou após trauma menor, ele classificou a EB em três

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32/79 tipos principais: epidermolítica (EB simplex; EBS), lucidolítica (EB juncional; JEB) e dermolítica (EB distrófica; DEB).

[0087] Técnicas avançadas de diagnóstico, como mapeamento de antígenos de imunofluorescência (IFM) ou microscopia eletrônica de transmissão (TEM), também podem ser empregadas para diagnosticar e classificar EB. A principal vantagem do TEM é que ele pode visualizar anormalidades ultraestruturais e fornecer uma avaliação semiquantitativa de déficits estruturais da zona da membrana basal da queratinócitos epidérmica (BMZ). (McMillan, 1998). O TEM pode ser particularmente útil em pacientes com DEB ou EBS leve; O IFM pode ser normal nesses casos, mas o TEM mostra anormalidades morfológicas de fibrilas de ancoragem ou filamentos intermediários. Às vezes, uma divisão pode não ser visível em uma amostra de IFM, mas o TEM pode mostrar uma divisão ultraestrutural. Vários planos de divagem, como vistos na síndrome de Kindler, podem ser apreciados apenas pelo TEM. A precisão do diagnóstico do IFM é semelhante à do TEM, com a vantagem de ser mais simples e rápida de executar e interpretar. Além disso, com o uso de anticorpos monoclonais específicos, o IFM pode fornecer informações consideráveis não apenas sobre os principais subtipos de EB, mas também sobre a proteína estrutural mutada mais provável (Fine et al., 2008). Um estudo recente também mostrou a utilidade do IFM no diagnóstico pré-natal de certos tipos de EB grave, estudando a biópsia das vilosidades coriônicas do primeiro trimestre (D 'Alessio et al., 2008).

[0088] Epidermólise bolhosa simples (EBS)·. O tipo mais comum de EB simplex é o EB simplex localizado com divagem da pele na camada basal da epiderme. As bolhas geralmente estão nas palmas das mãos e nas plantas dos pés, agravadas pelo calor e pelo atrito. A herança é autossômica dominante com doença leve. As mutações estão presentes nas queratinas 5 ou 14. Um tipo menos comum, mas também

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33/79 autossômico dominante, Dowling-Meara, apresenta bolhas distais agrupadas com uma série de arranjos em forma de pérola. Embora a ceratodermia dolorosa seja notada com o tempo, os sintomas dos pacientes tendem a ser menos graves com o aumento da idade. Nos casos de EBS, todos os anticorpos são encontrados na base da bolha. Anticorpos específicos de EBS adicionais (por exemplo, para queratina 5 e 14, plectina e integrina α6β4) podem ser empregados; em geral, a expressão de proteínas é normal, exceto no EBS autossômico recessivo, quando os pacientes podem ter ausência de coloração com queratina 14 (Yiasemides E et al., 2008).

[0089] EB juncional (JEB): a divagem da pele e das mucosas ocorre no nível da lâmina lúcida da zona da membrana basal, incluindo áreas periorificial dos sistemas cutâneo, ocular, traqueolaringeal, gastrointestinal, geniturinário e renal. O modo de herança é geralmente autossômico recessivo, com mutações nos genes que codificam o colágeno XVII, a6 4 integrina ou laminina 332. A forma de Herlitz é a mais grave (granulação exuberante na área perioral, ao redor das unhas e área de fraldas desnudada), com morte na maioria dos casos nos primeiros 1 a 2 anos de vida. A forma não-Herlitz é frequentemente severa na infância, mas a expectativa de vida é consideravelmente maior. As principais proteínas alvo no JEB são o colágeno do tipo XVII (BP180 ou BPAG2) e a laminina 332 (anteriormente laminina 5). O colágeno XVII é expresso no teto da pele rachada, enquanto outros anticorpos são vistos no chão da bolha. Na forma Herlitz grave de JEB (JEB-H), causada por mutações em um dos genes que codificam as três cadeias polipeptídicas da laminina 332, a expressão desta proteína está ausente ou é marcadamente reduzida. Nos casos de JEB não Herlitz (JEB-nH), a coloração da laminina 332 é reduzida. Nos casos em que existe uma mutação do colágeno XVII, há redução ou ausência acentuada da expressão de colágeno na BMZ com expressão normal

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34/79 da laminina 332. No JEB com atresia pilórica, a coloração das subunidades a6 e β4 da integrina é reduzida ou ausente (Pohla-Gubo G. et al., 2010). A coloração do colágeno tipo IV em todas as formas de JEB localiza-se no piso da bolha.

[0090] EB distrófico (DEB)·. Este tipo de EB envolve a divagem sob a lâmina densa, dentro da derme ao nível das fibrilas de ancoragem devido a mutações no gene do colágeno tipo VII. Todos os subtipos DEB são causados por mutações no colágeno tipo VII, que é o principal componente das fibrilas de ancoragem. O nível de divagem ocorre na sublamina densa com colágeno XVII e coloração com laminina 332 observada no teto do bolha. Em pacientes com DEB recessivo generalizado grave (RDEB), o IFM mostra colágeno tipo VII ausente ou pouco detectável. Nestes casos, a imunocoloração do colágeno tipo IV ocorre no telhado e indica formação de bolhas dermolíticas para confirmar a DEB. Outros subtipos generalizados ou localizados de DEB podem mostrar uma expressão reduzida ou normal do colágeno tipo VII (Pohla-Gubo G. et al., 2010; Cepeda-Valdés R, et al., 2010). A forma autossômica dominante é o segundo tipo de EB mais comum, e os pacientes apresentam bolhas em áreas propensas a inchaços ou pancadas, como dedos, joelhos, dedos e cotovelos. A forma autossômica recessiva é geralmente mais debilitante, com bolhas desde o nascimento e pseudo-sutilmente, onde dedos e dedos dos pés se fundem. Esta forma está associada a feridas crônicas ao longo da vida e ao desenvolvimento de carcinomas espinocelulares agressivos nos anos 30 a 40. Se atingirem a metade dos 50 anos, 90% dos indivíduos terão carcinoma espinocelular.

[0091] Síndrome de Kindler. Essa forma rara de EB pode resultar em divagem em qualquer um dos três níveis descritos acima. As bolhas na primeira infância são substituídas gradualmente por cicatrizes, queratodermia (palmas e solas espessadas), poiquilodermia

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35/79 (hipopigmentação e hiperpigmentação, telangiectasia e atrofia) e fotossensibilidade. É causada por mutações no gene que codifica kindlin 1, que está envolvido na adesão dos queratinócitos da camada basal nos contatos focais. O IFM que utiliza um painel padrão de anticorpos BMZ não mostra qualquer redução ou alteração importante na intensidade da coloração, embora os anticorpos colágenos tipo IV e VII possam mostrar coloração reticular ampla na junção dérmicoepidérmica. A marcação da pele normal com um novo anticorpo policlonal contra a kindlin-1 mostra uma coloração brilhante na epiderme, particularmente nos queratinócitos basais e ao longo da junção dérmico-epidérmica, sem alterações dérmicas. Por outro lado, na pele da síndrome de Kindler há uma redução acentuada e, em alguns casos, uma completa ausência de manchas na epiderme (Ashton GH. 2004).

[0092] A estrutura da zona da membrana basal cutânea é mostrada na Figura 6.

B. Cicatrização de EB

[0093] A fase inflamatória é a primeira fase da cicatrização normal da ferida e ocorre imediatamente após o trauma. O primeiro passo da cicatrização envolve a formação de um coágulo sanguíneo. Isso é seguido por inflamação, caracterizada por eritema localizado, edema e sensibilidade. Depois que essa inflamação da ferida desaparece, começa a fase proliferativa da cicatrização. É aqui que proliferação celular, proliferação de fibroblastos e epiderme ocorre divisão celular. Durante esta fase, novos vasos sanguíneos são formados e o tecido de granulação preenche gradualmente a ferida. Uma vez que a ferida é preenchida com tecido de granulação, a migração das células epidérmicas ocorre ao longo da borda da ferida na arder para a dosagem. A última fase da cicatrização, a fase de remodelação, começa uma vez que a migração celular da epiderme está completa. Durante

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36/79 esta fase, o tecido cicatricial se formou e amadurece, fortalece e gradualmente afina, suaviza e se mistura com a pele não lesionada (Schober-Flores, 2003).

[0094] É geralmente aceito que o processo de cicatrização de feridas em pacientes com EB esteja gravemente comprometido, permanecendo na fase inflamatória por tempo prolongado sem progressão para as fases de cicatrização (Schober-Flores, 1999). O processo de cicatrização é ainda mais prejudicado devido a vários fatores, incluindo infecção, estado nutricional, estado de oxigenação tecidual e medicamentos tipicamente usados para tratamento sintomático da doença, como corticosteroides (Marinkovich et al., 2014). [0095] Como discutido acima, os pacientes com EB apresentam um defeito na expressão e/ou atividade de uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais, tais como, sem limitação, queratina, colágeno, plectina, anexina, vimentina, uma filamina, uma integrina e uma laminina, que alteram as características essenciais da pele e impedem que ela se cure de maneira normal.

[0096] Por conseguinte, em um aspecto, a presente invenção apresenta um método para melhorar a integridade estrutural da pele de um indivíduo que sofre de EB, compreendendo a administração tópica de uma composição que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 na pele, melhorando assim a integridade estrutural de a pele. Em uma modalidade, a pele compreende uma deficiência em uma proteína estrutural e/ou funcional. Em uma modalidade, a deficiência na proteína estrutural e/ou funcional está dentro da epiderme. Em outra modalidade, a deficiência na proteína estrutural e/ou funcional está dentro da lâmina lúcida. Em outra modalidade, a deficiência na proteína estrutural e/ou funcional está na zona de sublamina densa. Em uma modalidade, o EB é Epidermólise Bolhosa Simplex. Em outra modalidade, o EB é Epidermólise Bolhosa

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Juncional. Em outra modalidade adicional, o EB é a Epidermólise Bolhosa Distrófica. Em outra modalidade, a deficiência em uma proteína estrutural e/ou funcional é uma deficiência na atividade ou expressão de proteínas. Em outra modalidade, a deficiência na atividade ou expressão é determinada por exame histológico, imagem por imunofluorescência ou PCR quantitativo em tempo real. Em outra modalidade, a integridade estrutural é determinada por exame histológico, microscopia eletrônica de transmissão (TEM) ou coloração imunofluorescente de uma biópsia de pele do indivíduo.

[0097] Em certas modalidades, uma melhoria na integridade estrutural é determinada pela quantificação do número de novas bolhas e/ou feridas formadas na pele de um indivíduo que sofre de EB tratado com CoQ10, em comparação com a pele de um indivíduo que sofre de EB que não é tratado com CoQ10. A quantificação pode ser determinada usando análise de imagem de fotografias das bolhas e/ou ferida.

[0098] Em outra modalidade, a integridade estrutural é medida usando um teste de ventosa na pele de um indivíduo que sofre de EB que é tratado com CoQ10, em comparação com a pele de um indivíduo que sofre de EB que não é tratado com CoQ10. Em outra modalidade, 0 tempo para formação de bolhas na pele tratada com CoQ10 é maior que 0 tempo para formação de bolhas na pele não tratada com CoQ10. [0099] Em outro aspecto, a presente invenção apresenta um método de tratamento de uma ferida da pele em um indivíduo, em que a pele compreende uma deficiência em uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais, compreendendo a administração tópica de uma composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 na ferida, tratando assim a ferida no indivíduo. Em outra modalidade, 0 indivíduo sofre de epidermólise bolhosa (EB), por exemplo, epidermólise bolhosa é epidermólise bolhosa simples,

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38/79 epidermólise bolhosa juncional, epidermólise bolhosa juncional, epidermólise bolhosa distrófica ou síndrome de Kindler. Em uma modalidade, a proteína estrutural ou funcional é selecionada do grupo que consiste em: uma queratina, um colágeno, uma plectina, uma anexina, uma vimentina, uma filamina, uma integrina e uma laminina. Por exemplo, a proteína de queratina pode ser selecionada do grupo que consiste em: queratina 5 (KRT5), queratina 13 (KRT13), queratina 14 (KRT14) e queratina 17 (KRT17). Em outra modalidade, a proteína de colágeno é selecionada a partir do colágeno XVII ou colágeno tipo VII. Em outra modalidade, a laminina é laminina 332. Em outra modalidade, a integrina é a64 integrina. Em um aspecto, a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo CoQ10 leva a um aumento de colágenos, plectina, laminina, vimentina, anexina, KRT13, KRT14 e/ou KRT17, bem como um aumento de fibroblastos e/ou queratinócitos.

[00100] Em certas modalidades, o tratamento da ferida é determinado pela porcentagem de fechamento da ferida de um indivíduo tratado com CoQ10 em comparação com a área inicial da ferida e a ferida de um indivíduo não tratado com CoQ10 em comparação com a área inicial da ferida. Por exemplo, a porcentagem de fechamento da ferida pode ser determinada usando a análise de imagens de fotografias da ferida. Em uma modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é maior que 50%. Em outra modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é superior a 75%. Em outra modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é superior a 85%. Em outra modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é superior a 90%. Em outra modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é superior a 95%. Em uma modalidade, a porcentagem de fechamento de ferida está entre 50-99%, por exemplo 51,52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71,72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81,82,

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83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99%.

[00101] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para aumentar a taxa de cicatrização de uma bolha da pele e/ou ferida em um indivíduo que sofre de EB, compreendendo a administração tópica de uma composição que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de Coenzima Q10 (CoQ10) na pele bolha, aumentando assim a taxa de cicatrização da bolha da pele e/ou ferida no indivíduo. Em uma modalidade, a deficiência na proteína estrutural e/ou funcional está dentro da epiderme. Em outra modalidade, a deficiência na proteína estrutural e/ou funcional está dentro da lâmina lúcida. Em outra modalidade, a deficiência na proteína estrutural e/ou funcional está na zona de sublamina densa. Em uma modalidade, o EB é Epidermólise Bolhosa Simplex. Em outra modalidade, o EB é Epidermólise Bolhosa Juncional. Em outra modalidade adicional, o EB é a Epidermólise Bolhosa Distrófica. Em outra modalidade, o EB é a síndrome de Kinder. Em outra modalidade, a deficiência em uma proteína estrutural e/ou funcional é uma deficiência na atividade ou expressão de proteínas. Em outra modalidade, a deficiência na atividade ou expressão é determinada por exame histológico, imagem por imunofluorescência ou PCR quantitativo em tempo real.

[00102] Em uma modalidade, a taxa de cicatrização é determinada pela porcentagem de fechamento da ferida de um indivíduo tratado com CoQ10 em comparação com a área inicial da ferida e a ferida de um indivíduo não tratado com CoQ10 em comparação com a área inicial da ferida. Em uma modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é maior que 50%. Em outra modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é superior a 75%. Em outra modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é superior a 85%. Em outra modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é superior a 90%. Em outra modalidade, a porcentagem de fechamento da ferida é superior a 95%.

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Em uma modalidade, a porcentagem de fechamento de ferida está entre 50-99%, por exemplo 51,52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71,72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81,82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99%. Em outra modalidade, a taxa de cicatrização é determinada pela taxa de reepitelização da bolha da pele e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 é aumentada em comparação com a taxa de re-epitelização de uma bolha e/ou ferida não tratada. Em outra modalidade adicional, a taxa de cura é determinada por uma redução em uma epidermal distância do hiato da bolha da pele e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 em comparação com a epidermal distância de folga de uma bolha e/ou ferida na pele não tratada.

[00103] Em um aspecto, a presente invenção apresenta métodos de tratamento de bolhas na pele e/ou feridas em um indivíduo em necessidade, compreendendo a administração tópica de uma composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de Coenzima QIO (CoQ10) na pele do indivíduo, tratando desse modo bolhas na pele e/ou feridas no indivíduo. Em uma modalidade, o indivíduo sofre de Epidermólise Bolhosa (EB).

[00104] Em uma modalidade da presente invenção, a administração da composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 diminui o tempo de cicatrização da bolha e/ou ferida em comparação com uma bolha e/ou ferida não tratada.

[00105] Em outra modalidade, a administração da composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 melhora a qualidade da cicatrização usando o índice de Atividade e Cicatrização da Doença da Epidermólise Bolhosa (EBDASI) em comparação com uma bolha e/ou ferida não tratada.

[00106] A presente invenção também apresenta, em outros aspectos, métodos para promover a cicatrização de um bolha de pele

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41/79 e/ou ferida em um indivíduo que sofre de epidermólise bolhosa, compreendendo administração tópica ao bolha de uma composição que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de coenzima Q10 (CoQ10), promovendo assim a cicatrização da bolha da pele e/ou ferida no indivíduo.

[00107] Em uma modalidade, a taxa de re-epitelização do bolha tratado com a composição CoQ10 é aumentada em comparação com a taxa de re-epitelização de uma bolha não tratado. Os métodos para avaliar a taxa de re-epitelização são descritos abaixo.

[00108] Em uma modalidade, a qualidade da epidermal a integridade da bolha e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 é melhorada em comparação com a qualidade da epidermal integridade de uma bolha e/ou ferida não tratada. Métodos para avaliar a qualidade da integridade epidérmica descrita abaixo. Em uma modalidade, a qualidade da integridade epidérmica é avaliada usando exames histológicos do teto da bolha.

[00109] Na pele de um indivíduo com EB, faltam âncoras ou proteínas que mantêm a pele normal unida. Como resultado, a pressão trivial na pele causa bolhas. A capacidade de CoQ10 de influenciar a expressão de proteínas estruturais envolvidas na manutenção da estrutura e função da pele, juntamente com sua capacidade de influenciar fases críticas do processo de cicatrização de feridas, fornece uma justificativa convincente para sua utilidade no tratamento potencial de feridas em EB. Assim, a presente invenção é baseada, em parte, na identificação de que a expressão de certas proteínas estruturais é aumentada ou diminuída na pele de indivíduos com EB, e que o tratamento com as composições CoQ10 da invenção pode alterar a expressão de determinadas estruturas de proteínas estruturais.

[00110] Em certas modalidades, o nível de expressão de uma ou mais proteínas estruturais na bolha e/ou ferida tratada com a

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42/79 composição CoQ10 é modulado em comparação com 0 nível de expressão de uma ou mais proteínas estruturais em uma bolha e/ou ferida não tratada. Como resultado, uma população de pacientes específica que possui uma alteração na expressão de uma ou mais proteínas estruturais particulares pode ser escolhida para tratamento com as composições CoQ10 da invenção. Por conseguinte, a invenção também apresenta métodos de tratamento de um indivíduo com Epidermólise Bolhosa, compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10, tratando desse modo 0 indivíduo. Em uma modalidade, 0 indivíduo é identificado como tendo uma alteração na expressão de uma ou mais proteínas estruturais na pele.

[00111] Em certas modalidades, as proteínas estruturais incluem colágenos, plectina, anexinas, vimentina, filaminas e lamininas. Em modalidades particulares, a proteína estrutural é uma queratina e, em particular, queratina 5 (KRT5), queratina 13 (KRT13), queratina 14 (KRT14) e queratina 17 (KRT17).

[00112] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de tratamento ou prevenção de carcinoma espinocelular em um indivíduo que sofre de epidermólise bolhosa, compreendendo a administração tópica de uma composição compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo, tratando ou prevenindo carcinoma espinocelular no indivíduo. Em uma modalidade, a composição compreendendo CoQ10 é administrada a células de carcinoma espinocelular no indivíduo. Em outra modalidade, 0 carcinoma de células escamosas é carcinoma de células escamosas cutâneo. Em uma modalidade, a administração da composição compreendendo CoQ10 modula a expressão de uma ou mais proteínas no indivíduo. Em uma modalidade adicional, a proteína é uma proteína de estresse ou proteína estrutural. Em outra modalidade adicional, a

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43/79 proteína é selecionada do grupo que consiste em transaldolase 1, proteína NM23, proteína 1 de choque térmico 27kDa 1, queratina 1, queratina 14, queratina 13, proteassoma beta 7, subunidade 3 do ativador do proteassoma e inibidor da dissociação do PIB rho alfa. Em outra modalidade, a proteína é selecionada a partir do grupo que consiste em: homólogo 1 do oncogene virai de timo murino V-akt (AKTI), atanogene 4 associado a BCL2 (BAG4), proteína X associada a BCL2 (BAX), semelhante a BCL2 1 (BCL2LI), proteína de interação BCL2/adenovírus EIB 19kDa 3 (BNIP3), família do domínio de recrutamento de caspase, membro 6 (CARD6), caspase 6, cisteína peptidase relacionada à apoptose (CASP6), caspase 7, cisteína peptidase relacionada à apoptose (CASP7), parada do crescimento e induzível a danos no DNA, alfa (GADD45A), proteína tumoral p53 (TP53) e proteína tumoral p73 (TP73).

4. Métodos de avaliação do efeito terapêutico de composições CoQ10

[00113] O efeito terapêutico das composições CoQ10 no tratamento de formação de bolhas na pele e/ou ferida em um indivíduo em necessidade, por exemplo, um indivíduo que sofre de EB, pode ser avaliado de várias maneiras diferentes, incluindo redução da dor, melhoria da qualidade de vida, tempo de cicatrização, qualidade da cicatrização, maior resistência ao trauma e redução de bolhas e/ou formação de feridas.

[00114] Em certas modalidades, a qualidade da cura pode ser avaliada usando a Atividade da Doença da Epidermólise Bolhosa e índice de Cicatrização (EBDASI). EBDASI, quantifica a gravidade geral do envolvimento da pele, couro cabeludo, mucosas, unhas e outras superfícies epitelizadas em termos de atividade e danos. A vantagem do EBDASI é a capacidade de distinguir os escores de atividade que respondem à terapia separadamente dos danos, permitindo que os

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44/79 médicos sigam as atividades da doença potencialmente reversíveis que evitam danos. O EBDASI é um documento de 4 páginas (consulte a Figura 1 e a Figura 1 suplementar de Loh et al, 2014, incorporada por referência em sua totalidade neste documento). No EBDASI, cada área da pele foi examinada em ordem de cima para baixo em 12 locais anatômicos diferentes. A atividade (formação de bolhas/erosões/crostas) é pontuada em 10 em cada área. As características do dano (eritema, dispigmentação, poiquilodermia, atrofia da pele, hiperceratose/descamação, cicatrizes, milia) recebem 0 para ausência e 1 para presente em cada local. O processo é continuado para o couro cabeludo, mucosas, unhas e outras superfícies epitelizadas.

[00115] Outra estrutura que pode ser usada para a avaliação de feridas é o paradigma MEASURE modificado (tamanho da medida, exsudato [quantidade e características], aparência [tecido de base ou granulação], sofrimento [dor], comprometimento [profundidade medida em centímetros], reavaliar e (Keast et al., 2004, incorporado por referência na íntegra aqui). Esta documentação fornece uma boa avaliação da extensão da ferida em seu estado atual, bem como uma boa ferramenta para monitorar o processo de cicatrização. Um modelo modificado adaptado para pacientes com EB é descrito em Pope et al., 2013.

[00116] Em certas modalidades, a formação de tecido de granulação em indivíduos EB é quantificada por fotografia em série.

[00117] O tempo de cicatrização pode ser avaliado como uma bolha e/ou ferimento sendo curado (completamente fechado sem drenagem) ou não curado. Em certas modalidades, o tempo para cicatrização pode ser definido como a primeira data em que a cura é observada menos a data em que a bolha e/ou ferida é identificado pela primeira vez. Por exemplo, se uma bolha e/ou ferida for identificada pela primeira

Petição 870200004293, de 10/01/2020, pág. 47/134 vez no dia 1 e a bolha e/ou ferida for identificada como curada no dia 10, o tempo de cicatrização será de 9 dias. Em uma modalidade, o curso de tempo da cicatrização de feridas é documentado com fotografia, foto dermatoscópica e avaliação por Microscopia Confocal por Reflectância (RCM).

Microscopia Confocal de Reflexão

[00118] A microscopia confocal de refletância (RCM) oferece tecnologia de imagem não invasiva in vivo com resolução no nível celular, que se correlaciona bem com a histopatologia. O RCM fornece avaliação rápida da lesão e in vivo, permite a visualização da epiderme e da derme superior em tempo real. Consequentemente, a cicatrização da bolha da pele e/ou ferida pode ser avaliada usando microscopia confocal de reflexão (RCM).

[00119] Durante os anos 90, o RCM foi desenvolvido para criar imagens da pele em tempo real e para uso adequado para aplicações clínicas. (Rajadhyaksha M, et al., 1999) Um RCM disponível comercialmente (VIVASCOPE 1500, Lucid Inc, Rochester, NY, EUA) usa um laser de diodo de 830 nm no infravermelho próximo e feixe de laser de baixa potência até 22mW para geração de imagens. O feixe de luz examina a pele para obter uma seção óptica horizontal e apresenta imagens em escala de cinza (campo de visão de 500 x 500 pm), bem como imagens em mosaico da pele (Vivablock). Além disso, ele pode produzir uma série de imagens únicas empilhadas verticalmente (Vivastack) no ponto same no tecido. A profundidade máxima de imagem in vivo do RCM é de aproximadamente 250 a 350 pm. (Microscopia confocal de reflexão de tumores cutâneos: um atlas com correlações clínicas, dermatoscópicas e histológicas.: Informa Healthcare; 2008.)

[00120] Camadas normais da pele (estrato córneo, espinhoso e granular, suprabasal, junção epidérmica dérmica e derme superficial)

Petição 870200004293, de 10/01/2020, pág. 48/134 foram caracterizadas usando RCM. Estes resultados foram reproduzíveis. Além disso, outras estruturas e células da pele foram identificadas, incluindo vasos sanguíneos, folículos capilares, glândulas sudoríparas, queratinócitos, células inflamatórias e células melanocíticas. Atualmente, o RCM é usado em pesquisa básica da pele, pesquisa cosmética e dermatologia clínica. Seu uso principal tem sido a detecção precoce da pele de melanoma e não melanoma. (Yamashita et al., 2005; Langley et al., 2001)

[00121] Tradicionalmente, a avaliação rotineira da ferida é baseada na avaliação clínica das características da ferida. Embora a inspeção visual seja o procedimento estabelecido em dermatologia clínica, o método é inerentemente subjetivo, geralmente produzindo descrições imprecisas das condições da ferida e não permite uma análise ultraestrutural do tecido da ferida. (Lange Asschenfeldt, et al., 2012) [00122] Portanto, a histologia de rotina permanece o padrão-ouro para a avaliação morfológica da cicatrização cutânea de feridas. No entanto, enquanto a histologia ainda desempenha um papel importante na pesquisa da pele, existem limitações substanciais. O caráter invasivo das biópsias não permite uma avaliação ao longo do tempo da área same do tecido em que a biópsia foi realizada, e as biópsias podem não ser viáveis para avaliação de feridas grandes ou recorrentes ou pacientes com comprometimento significativo da cicatrização ou alto risco de infecção. Além disso, a remoção de tecidos e o processamento histológico podem resultar em artefatos, limitando ainda mais sua aplicabilidade clínica.

[00123] Considerando essas limitações, várias técnicas de imagem não invasivas foram avaliadas quanto à sua aplicabilidade para avaliar feridas na pele humana em diferentes estágios da cicatrização. Estas técnicas podem ser utilizadas na presente invenção para avaliar a cicatrização de bolhas na pele e/ou feridas em indivíduos com EB. Entre

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47/79 eles, o RCM in vivo representa uma ferramenta inovadora de imagem óptica para avaliação não invasiva da pele em tempo real. Altintas e colegas de trabalho empregaram o RCM pela primeira vez para avaliação de feridas do bumbum, através da qual foram descritos aspectos de microcirculação, inflamação e histomorfologia. A microscopia confocal também tem sido usada para avaliar a cicatrização epidérmica de feridas agudas após terapia com laser fracionário (Sattler, et al, 2013) e em um modelo humano de dano tecidual induzido por criocirurgia. (Terhorst et al., 2011)

[00124] A natureza completamente não invasiva e a capacidade de alta resolução de um microscópio confocal o tornam um instrumento útil na pesquisa de cicatrização de feridas e - dada a sua resolução celular de epiderme e estruturas dérmicas superficiais - particularmente úteis na cicatrização de feridas epidérmicas em modelos de lesões. A caracterização do processo de cicatrização de feridas resultante desta pesquisa pode melhorar nosso conhecimento neste tópico, fornece uma ferramenta valiosa para avaliar a cicatrização de feridas na prática clínica e fornecer uma técnica não invasiva para testar a influência de produtos tópicos no processo de cicatrização de feridas.

[00125] Em certas modalidades, o curso de tempo da cicatrização de feridas é documentado com fotografias, foto dermatoscópica e avaliação de RCM. Os parâmetros de avaliação da RCM incluirão recursos de reparo cutâneo de feridas em nível celular, morfológico e arquitetônico, bem como a documentação de processos dinâmicos como fluxo e inflamação no sangue e os eventos sucessivos de cicatrização.

[00126] Em outras modalidades, a qualidade de vida pode ser medida usando a Escala de Desempenho de Lansky e o índice de Qualidade de Vida em Dermatologia Infantil, como descrito aqui e em Lewis Jones et al., 1995, incorporado por referência em sua totalidade

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48/79 neste documento.

[00127] Em uma modalidade, a taxa de re-epitelização da bolha e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 é aumentada em comparação com a taxa de re-epitelização de uma bolha e/ou ferida não tratada. A taxa de re-epitelização pode ser examinada e comparada usando a avaliação por microscopia confocal de reflexão (RCM).

[00128] Em uma modalidade, a distância epidérmica da bolha e/ou ferida é reduzida em comparação com uma distância epidérmica de folga de uma bolha e/ou ferida não tratada. Mudanças na distância do intervalo epidérmico pode ser determinada pela largura do intervalo, pode ser quantificada como a distância do intervalo entre as duas frentes epiteliais multicamadas em migração através da bolha e expressa em% de bolha aberto/ferida = [bolha/largura do ferimento (mm) * 100/bolha inicial/tamanho da ferida]. Além disso, a coloração com hematoxilina e eosina (HE) pode ser usada para examinar a morfologia do tecido.

[00129] Em uma modalidade, a qualidade da epidermal a integridade da bolha e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 é melhorada em comparação com a qualidade da integridade epidérmica de uma bolha e/ou ferida não tratada. A qualidade da integridade epidérmica pode ser determinada pela avaliação da RCM.

[00130] Será prontamente aparente para os versados na técnica que outras modificações e adaptações adequadas dos métodos da invenção aqui descritos são óbvias e podem ser feitas usando equivalentes adequados sem se afastar do escopo da invenção ou das modalidades aqui divulgadas. Tendo agora descrito a invenção em detalhes, 0 mesmo será entendido mais claramente por referência aos exemplos a seguir, que são incluídos apenas para fins ilustrativos e não pretendem limitar

EXEMPLOS

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Exemplo 1. Efeito do creme tópico de coenzima Q10 em pacientes com epidermólise bolhosa

[00131] Foi realizado um estudo de Fase 1 para avaliar a segurança, farmacocinética e efeito terapêutico do creme tópico de Coenzima Q10 (CoQ10) em pacientes com Epidermólise Bolhosa.

Objetivos da avaliação

[00132] Os objetivos principais do estudo são avaliar a segurança e a tolerabilidade em pacientes com EB quando tratados com creme tópico de CoQ10 3,0% aplicado conforme as instruções a cada dois dias ou duas vezes por semana na pele ferida e todos os dias em uma seção da pele intacta, conforme instruído.

[00133] As observações e medições de segurança avaliadas incluem exposição a medicamentos em estudo, reação local anormal da pele, eventos adversos, dados laboratoriais (hematologia, coagulação e química sérica), sinais vitais e medicações concomitantes.

[00134] Os objetivos secundários do estudo são avaliar a farmacocinética (PK) do Creme de CoQ10 a 3,0% nessa população de pacientes e avaliar o efeito terapêutico do CoQ10 3.0% creme tópico nessa população de pacientes, medido por uma redução na dor, melhora na qualidade da vida, o tempo para a cura, a qualidade da cura, aumento da resistência ao trauma, e redução na formação de bolhas. A atividade da epidermólise bolhosa e o índice de cicatrizes (EBDASI) e a Vancouver Scar Scale são utilizados para quantificar a cicatrização e cicatrização de feridas. EBDASI e a cicatriz Escala Vancouver são conhecidos na arte e são descritos em, por exemplo, Journal of the American Academy of Dermatology 2014; 70: 89-97, incorporado por referência na sua totalidade aqui.

Produto em Investigação

[00135] A coenzima Q10 3,0% é um pó amarelo-laranja profundo e é muito hidrofóbica, com um ponto de fusão de aproximadamente 48

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50/79 graus centígrados. O ingrediente ativo, Creme de CoQ10 a 3,0%, ubidecarenona, USP pode ser afetado negativamente pelo calor e pela luz, de acordo com a literatura. A experimentação com várias concentrações (25-60%) de CoQ10 solubilizada no Polissorbato 80, não mostrou quebra mensurável de CoQ10 nessa mistura quando aquecida por várias horas a 55 ^QC. O aquecimento da mistura a 50-55 ^QC (ou seja, 2-7 ^QC acima do ponto de fusão da CoQ10) acelera bastante a solubilização da CoQ10. Para fabricar 0 Creme de CoQ10 tópico, duas fases de concentrado CoQ10 (CoQ10/Polissorbato 80 e fenoxietanol água-lecitina-glicol) foram aquecidas separadamente a 50-55 ^QC com a fase aquosa adicionada à CoQ10 solubilizada e foram misturadas com alta homogeneização de cisalhamento para formar um microemulsão concentrado de CoQ10. O concentrado CoQ10 foi então adicionado a uma base de emulsão de creme de água em óleo (A/O) para produzir 0 Creme de CoQ10 final. A concentração final de CoQ10 no creme foi de 3,0%. O Creme de CoQ10 a 3% é ainda descrito na Publicação Internacional No. W02008/116135, cujo conteúdo inteiro é incorporado por referência na sua totalidade neste documento.

População experimental

[00136] Dez pacientes foram incluídos neste estudo que diagnosticaram epidermólise bolhosa de qualquer subtipo. Os pacientes devem atender aos seguintes critérios para serem incluídos no ensaio clínico: 1. Homem ou mulher com pelo menos 12 anos de idade no momento da triagem; 2. Ter confirmado diagnóstico de EB; 3. Não possui outra doença dermatológica que possa afetar adversamente a cicatrização de feridas; 4. Estão dispostos a abster-se de usar loções ou cremes não aprovados durante 0 período de tratamento e de lavar a área tratada até a próxima aplicação; 5. Estão dispostos a abster-se de exposição à luz solar direta excessiva ou luz ultravioleta durante a duração do estudo; 6. Tenha valores laboratoriais para os testes listados

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51/79 no cronograma do estudo que estejam dentro dos intervalos de referência definidos pelo laboratório central ou tenham resultados de testes fora do intervalo que sejam clinicamente aceitáveis pelo investigador. Os valores fora da faixa aceitáveis são geralmente aqueles dentro dos níveis normais do paciente devido a medicamentos concorrentes ou processos de doenças, com exceção do INR e PT/APTT; 7. Ter um profissional de saúde capaz de seguir as instruções do estudo e provavelmente completar todos os requisitos do estudo; 8. Ter um consentimento informado por escrito do paciente ou de um responsável legal, incluindo o consentimento para que o tecido seja examinado e armazenado pelo Departamento de Dermatologia e cirurgia cutânea. Se o paciente tiver entre 12 e 17 anos de idade, o paciente deverá concordar; 9. O Guardian forneceu consentimento por escrito para permitir que fotografias da (s) lesão (s) alvo do EB sejam usadas como parte dos dados e documentação do estudo; 10. As mulheres com potencial para engravidar devem ter um teste de gravidez negativo na triagem e estar usando uma forma aceitável de controle da natalidade (contraceptives orais/ implantes/ injetáveis/ transdérmicos, dispositivo intrauterine, preservativo, diafragma, abstinência ou relacionamento monogâmico com um parceiro que fez uma vasectomia); 11. Ter um valor de INR de 0,8 a 1,2, bem como tempo normal de protrombina (PT)/tempo de tromboplastina parcial ativada (APTT); 12. Tenha pelo menos 1 ferida EB ativa entre 2,5 e 50 cm² de tamanho.

Projeto de avaliação

[00137] Pacientes/cuidadores aplicaram Creme de CoQ10 a 3%, conforme as instruções a cada dois dias, duas vezes por semana na pele ferida, incluindo uma ferida selecionada pelos investigadores como a ferida índice e todos os dias em uma seção da pele intacta conforme as instruções. A ferida índice foi seguida para a cicatrização através de

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52/79 avaliação clínica e fotografias. A ferida indexada estava preferencialmente localizada no membro ou no tronco (mas não nas áreas intertriginosas ou na área da fralda, se o paciente estiver usando fraldas). Uma seção de pele intacta foi selecionada para avaliação das bolhas de sucção e aplicação diária de Creme de CoQ10 a 3%. A seção da pele intacta fica na coxa anterior ou na região lombar, se o paciente pesar menos de 15 kg. A área total da aplicação do medicamento em estudo (Creme de CoQ10 3,0%) não deve exceder 20% de BSA. O Grupo de Revisão de Segurança (SRG) monitora a segurança continuamente. Se eventos adversos (EA) e todos os outros parâmetros de segurança forem aceitáveis, o estudo continuará como planejado. Se o SRG determinar que existe uma preocupação significativa com a segurança, nenhum outro tratamento será dado a nenhum paciente até que uma avaliação completa seja realizada. Se o SRG determinar que há risco de continuar o tratamento, o estudo será interrompido.

[00138] As avaliações de segurança e tolerabilidade consistem no monitoramento e registro contínuos de todos os relatórios de EA e eventos adversos graves (SAE), monitoramento regular de sinais e sintomas de irritação cutânea e medições regulares de sinais vitais, exames físicos e testes clínicos de laboratório (química e hematologia), incluindo hemoglobina, hematócrito, contagem de glóbulos brancos (WBC) com diferencial (monócitos, eosinófilos, basófilos, neutrófilos, linfócitos) como porcentagem e valor absoluto, contagem de glóbulos vermelhos (RBC), contagem de plaquetas e PT/APTT/INR Albumina, fosfatase alcalina, bilirrubina total, bicarbonato/CO2, cálcio, colesterol, cloreto, creatinina, creatina quinase, y-GT, glicose, LDH, fósforo inorgânico, lipase, amilase, magnésio, potássio, proteína total, AST, ALT, sódio, triglicerídeos, ureia e ácido úrico. Se a concentração total de bilirrubina for aumentada acima de 1,5 vezes o limite superior da normal, a bilirrubina de reação direta e indireta deve ser diferenciada.

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Administração de tratamentos experimentais

[00139] Tratamentos de teste: A aplicação inicial do tratamento do estudo (Creme de CoQ10 a 3,0%) foi feita na semana 1, dia 1 da clínica, monitorada e orientada pela equipe da clínica, para confirmar a aplicação na ferida índice e em outra pele ferida e nós não afetados pele selecionada. Posteriormente, todos os pacientes do estudo ou seus cuidadores foram solicitados a aplicar o tratamento do estudo em casa, inclusive nos dias de visita ao centro do estudo. A medicação experimental foi aplicada conforme as instruções a cada dois dias, duas vezes por semana na pele ferida e todos os dias a uma seção da pele intacta conforme as instruções.

[00140] Duração do tratamento: Esperava-se que a participação geral de cada paciente fosse no máximo 18 semanas. A duração da triagem foi de até 2 semanas. A duração do período de tratamento foi de 12 semanas. A duração do período de acompanhamento foi de 4 semanas.

[00141] Medicamentos anteriores e concomitantes: Não foram aplicados outros cremes ou loções na área de tratamento durante o curso do estudo. Todos os medicamentos, incluindo medicamentos de venda livre (OTC) e suplementos nutricionais (incluindo suplementos de CoQ10), tomados durante os três meses anteriores, foram registrados no Screening. Posteriormente, foi feito um registro de todos os medicamentos, incluindo medicamentos de venda livre e suplementos nutricionais, tomados durante o curso do estudo. Informações sobre a dose diária total, via de administração, datas de início e descontinuação e indicação foram registradas no formulário de relato de caso do paciente (IRC).

Visão global

Todos os pacientes visitam o centro do estudo nos dias especificados neste protocolo. O cronograma completo de avaliações para este estudo

Petição 870200004293, de 10/01/2020, pág. 56/134 é mostrado abaixo na Tabela 1.

Tabela 1

Procedimento	Semana 1 Dia 1	Semana 1 Dia 3	Semana 2 (+/-4 dias)	Semana 3,4, 5, 6, 7, 9, 10, 11	Semana 8 Dia 1 (+/-2 dias)	Semana 8 Dia 3 (+/-2 dias)	Semana 12 EOT (+/-2 dias) 7
Consentimento/Conse ntimento Informado
Inclusão/Exclusão	X
Dados demográficos/História médica/História da ferida
Vitais	X	X	X		X	X	X
Exame físico	X	X	X		X	X	X
Avaliações de feridas/fotos	X	X	X		X	X	X
Eventos adversos, medicações concomitantes	X	X	X		X	X	X
Contato telefônico para avaliar o EA				X
Avaliação da Dor	X	X	X		X	X	X
Questionário de Qualidade de Vida	X	X	X		X		X
Testes de laboratórioSangue1	X	X	X		X		X
Urinálise	X	X	X		X		X
Amostra PK2	X	X			X
Subdigitação EB 3

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Bolhas e Avaliação4	X	x			x	x
Microscopia Confocal	X	x			x	x
Aplique medicação experimental (Creme de COENZIMA Q 10 a 3,0%) 5	x	x	x		x	x	X
Tratamento de feridas	x	x	x		x	x	X
Distribuir medicação experimental (Creme de COENZIMA Q10 a 3,0%) 6	x	x	x		x	x	X
Instruções aos pacientes	x	x	x		x	x	X

¹ Contagem de hemoglobina, hematócrito, glóbulos brancos (leucócitos) com diferencial (monócitos, eosinófilos, basófilos, neutrófilos, linfócitos) como porcentagem e valor absoluto, contagem de glóbulos vermelhos (RBC), contagem de plaquetas e PT/APTT/INR. Albumina, fosfatase alcalina, bilirrubina total, bicarbonato/CO2, cálcio, colesterol, cloreto, creatinina, creatina quinase, y-GT, glicose, LDH, fósforo inorgânico, lipase, amilase, magnésio, potássio, proteína total, AST, ALT, sódio, triglicerídeos, ureia e ácido úrico. Se a concentração total de bilirrubina for aumentada acima de 1,5 vezes o limite superior da normal, a bilirrubina de reação direta e indireta deve ser diferenciada.

² amostras de PK (2cc) são coletadas antes da dosagem nos dias 1 e 3 das semanas 1 e 8 e 4 horas após dosagem apenas no dia 1 da semana 1.

³ Sub digitação EB - se necessário.

⁴ Avaliação RCM O, 4 e 48 horas após o procedimento de ventosa.

⁵ IP é aplicado diariamente a uma pele intacta selecionada e a áreas de bolha de sucção. Para atingir a ferida por EB, a PI é aplicada a cada dois dias, duas vezes por semana, a critério da equipe de estudo ⁶ Cuidadores fornecem materiais de vestir. A medicação experimental

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56/79 (Creme de CoQ10 a 3,0%) não aplicada ou dispensada na semana 12. NOTA: Os pensos para a ferida índice e a área da bolha de sucção são fornecidos pela Universidade de Miami.

⁷ Todos os pacientes são atendidos aproximadamente 4 semanas após a visita da Semana 12 (por volta da semana 16) para avaliar quaisquer eventos adversos em andamento.

Triagem

[00142] Após 0 consentimento informado assinado, obtido na presença do investigador ou pessoa designada, as avaliações de triagem são coletadas, revisadas e determinadas como aceitáveis pelo pesquisador ou pessoa designada dentro de 14 dias antes do início do tratamento do estudo no dia 1. Elas incluem a data de nascimento, sexo, raça, origem étnica, altura, peso e diagnósticos simultâneos. Além disso, avaliações de feridas e subtipagem de EB, se necessário, são feitas (qualquer subtipo de EB que tenha sido feita no passado também é aceitável - não precisa ser redane). Hematologia concomitante, químicas no sangue e testes de urina são realizados. Para pacientes do sexo feminino com potencial para engravidar, é realizado um teste de gravidez na urina. Os critérios de inclusão/exclusão são confirmados. Os tratamentos e outras histórias médicas e cirúrgicas relevantes, de acordo com a avaliação do investigador, são registrados. Sinais vitais e exames físicos, incluindo exame dermatológico da pele em geral, são realizados. Uma ferida indexada é selecionada, fotografada e medida. Linha de base/inscrição

[00143] Na semana 1, dia 1, os pacientes foram submetidos a avaliações para verificar novamente e confirmar a elegibilidade antes de iniciar 0 tratamento. Foi realizada avaliação pré-tratamento da área de tratamento selecionada, incluindo reações locais da pele (LSRs), fotos, pigmentação e cicatrização. Medicação experimental (Creme de CoQ10 a 3,0%) foi dispensada. A cicatrização foi avaliada usando 0 índice de

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Atividade e Cicatrização da Epidermólise Bolhosa (EBDASI) e a Vancouver Scar Scale, conforme descrito no Jornal da Academia Americana de Dermatologia 2014; 70: 89-97, incorporado por referência na sua totalidade aqui.

Período de tratamento experimental

[00144] A aplicação inicial do tratamento do estudo foi realizada no dia 1 na clínica, monitorada e orientada pela equipe da clínica, para confirmar a aplicação adequada à (s) lesão (s) e à pele intacta selecionada. Posteriormente, todos os pacientes do estudo (ou cuidadores) foram solicitados a aplicar o tratamento do estudo em casa, inclusive nos dias de visita ao centro do estudo. Os pacientes foram atendidos a qualquer momento durante o estudo para avaliação de possíveis eventos adversos. Estes foram capturados como visitas não programadas.

Preparação e administração de medicamentos de teste (Creme de CoQ10 a 3,0%)

[00145] A medicação experimental (Creme de CoQ10 a 3,0%) foi aplicada pelo paciente ou profissional de saúde conforme as instruções a cada dois dias a duas vezes por semana na pele ferida, incluindo a ferida índice, e todos os dias em uma seção de pele intacta conforme as instruções. Em todas as visitas, medicação experimental (Creme de CoQ10 a 3,0%) e curativos foram aplicados na ferida índice e na seleção de pele intacta no centro do estudo. Uma pequena quantidade de creme de ervilha foi colocada na ponta dominante do dedo indicador. O medicamento do estudo (Creme de CoQ10 a 3,0%) foi espalhado uniformemente por 5 a 10 segundos no local de tratamento selecionado e na área circundante à lesão, de modo que a área total da pele coberta com creme era aproximadamente o dobro do tamanho da lesão de tratamento. A ferida tópica de curativo foi aplicada à pele ferida com um curativo de escolha do paciente ou do cuidador da lista selecionada de

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58/79 curativos tópicos aceitáveis.

Padrão de atendimento

[00146] Todos os pacientes em todos os grupos de tratamento receberam os seguintes cuidados: fatores que contribuem para formação de bolhas (como roupas bem ajustadas) foram identificados e modificados; foram tomadas medidas para reduzir o atrito com a pele, especialmente nas áreas ao redor da ferida índice e na seção da pele intacta para avaliação das bolhas de sucção; a pele foi mantida limpa com uma limpeza suave com água e sabão neutro [mas somente após 6 horas de aplicação da medicação experimental (Creme de CoQ10 3,0%)]; curativos não abrasivos e não aderentes foram utilizados; um ambiente de lesão moderadamente úmido foi mantido pelo uso de curativo especificado; para lesões que não sejam a ferida índice, pomadas antibióticas não sensibilizantes foram usadas, se recomendado pelo médico assistente; e infecções foram identificadas e tratadas prontamente.

Medidas dos resultados dos ensaios

[00147] Análise dos resultados de segurança: Foi apresentado um resumo geral do número (porcentagem) de pacientes com qualquer evento adverso emergente do tratamento (TEAEs), SAEs, AEs, LSRs que resultam em descontinuação prematura do tratamento ou do triai, AEs relacionados ao tratamento e AE grave.

[00148] Análise de resultados de eficácia: foram apresentadas avaliações de melhoria/cicatrização usando a Escala EBDASI, bem como uma avaliação de melhoria da qualidade de vida.

[00149] Inscrição e acompanhamento dos participantes: Um total de 10 pacientes foram inscritos e tratados com composições de CoQ10 por um período máximo de 12 semanas. Os pacientes que permaneceram em teste por 12 semanas foram vistos para uma consulta de acompanhamento por volta da semana 16. Os pacientes que tiveram

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59/79 uma boa resposta à aplicação do medicamento em estudo (Creme de CoQ10 a 3,0%) receberam suprimento adicional do medicamento do estudo e são seguidos a cada seis meses para quaisquer eventos adversos.

Resultados da Avaliação

Estudo de caso n° 1: homem de 29 anos com EB juncional, não Herlitz [00150] A lesão alvo na Semana 1, Dia 1, antes do tratamento (Figura 8A), mediu 15,17 cm e mostrou um alto grau de eritema. Após duas aplicações do Creme de CoQ10, na Semana 1, Dia 3 (Figura 8B), a lesão alvo diminuiu para 11,2 cm, e as bolhas continham líquido significativamente reduzido. Na semana 2 (Figura 8C), a lesão alvo havia diminuído para 9,1 cm, com reduções adicionais no líquido e no inchaço.

Estudo de Caso n°2: mulher de 19 anos com EB simplex, tipo Dowling Meara

[00151] A lesão-alvo (medindo 5,28 cm, Figura 9A) na parte interna da coxa do indivíduo estava presente há um mês antes do tratamento no ensaio clínico. Na semana 2, a ferida crônica havia diminuído para 0,28 cm (Figura 9B). Na visita de tratamento Semana 8, houve reepitelização quase completa com apenas 0,25 cm de lesão restante (Figura 9C).

Estudo de caso n^Q 3: mulher de 16 anos com EB juncional, não Herlitz [00152] A lesão-alvo na Semana 1, Dia 1, antes do tratamento (Figura 10A), mediu 36,96 cm com alguma granulação. Na semana 2, a lesão mostrou um aumento na granulação e uma redução significativa no tamanho para 4 cm (Figura 10B). Na semana 8, a lesão havia sido completamente re-epitelizada e apresentava apenas cicatrizes (Figura 10C).

Estudo de Caso n°4: 17 anos, sexo masculino, EB distrófico, recessivo [00153] A lesão-alvo na Semana 1, Dia 1, antes do tratamento, média

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21,76 cm (Figura 11 A) e apresentava exsudato e sangue significativos antes da primeira administração do Creme de CoQ10. Na semana 2, a lesão-alvo havia encolhido para 15,19 cm e mostrava secagem e granulação significativas ao redor da borda.

Estudo de Caso n°5: 59 anos, sexo masculino, EB juncional

[00154] A lesão alvo na Semana 1, Dia 1, antes do tratamento compreendeu várias erosões granuladas e mediu 20,75 cm (Figura 12A). Na semana 1, dia 3 (após dois tratamentos com o Creme de CoQ10), a lesão diminuiu de tamanho para 14,4 cm e mostrou reepitelização significativa (Figura 12B). Na semana 8, a lesão alvo foi curada significativamente com mais redução no número de erosões e mais re-epitelização (Figura 12C).

Conclusões

[00155] A administração tópica do creme de CoQ10 a 3% da presente invenção a pacientes com várias formas de EB proporciona uma cicatrização muito maior de bolhas e feridas, mesmo feridas crônicas que estavam presentes por muitas semanas antes do tratamento. As fotografias mostram que efeitos positivos profundos fechamento de ferida, encolhimento de bolhas, aumento de granulação, aumento de re-epitelização, diminuição de inchaço e/ou diminuição de fluido de bolha - foram notados após apenas alguns tratamentos com a composição da invenção. Isso contrasta fortemente com o padrão de tratamento para feridas com EB, que foram empregadas antes do início do ensaio clínico, e claramente não produziu nenhum alívio significativo. Exemplo 2. Efeito das composições CoQ10 na promoção da cura de bolhas de sucção

[00156] O teste de bolha de sucção para imagens confocais também foi usado para avaliar a eficácia do Creme de CoQ10 3,0% na promoção da cicatrização de feridas quando aplicado na pele não afetada em pacientes com EB. A taxa de re-epitelização da bolha de sucção

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61/79 induzida no início e depois na semana 8 foi comparada usando a avaliação por microscopia confocal de reflexão (RCM). A qualidade da integridade epidérmica foi avaliada por meio de exames histológicos dos telhados das bolhas na linha de base e na semana 8. Os parâmetros de avaliação da RCM incluíram características do reparo cutâneo de feridas em nível celular, morfológico e arquitetônico, além da documentação de processos dinâmicos, como fluxo sanguíneo e inflamação, e eventos sucessivos de cicatrização de feridas. Todas as imagens foram submetidas a análise morfológica descritiva.

[00157] Foram avaliados 4 pacientes com 12 anos ou mais com diagnóstico confirmado de EB. Na semana 1 dia 1 (linha de base), usamos o sistema CELLUTOME para criar feridas uniformes de 1,8 mm de diâmetro, aspirando a camada epidérmica de pele intacta. Imagens clínicas e dermatoscópicas foram obtidas para todas as feridas antes da imagem por microscopia confocal de reflexão (RCM), que foi realizada às O, 4 e 48 horas após o ferimento. Após 48 horas de avaliação do RCM na semana 1, os pacientes foram instruídos a aplicar diariamente o Creme de CoQ10 3,0% na ferida e na área circundante até o dia 3 da semana 8. Na semana 8, dia 1, as bolhas de CELLUTOME foram recriadas da mesma forma na área que foi tratado com o creme tópico CoQ10 3,0%. Realizamos novamente a análise RCM às O, 4 e 48 horas de ferimento. Capturamos 6 imagens em diferentes níveis das feridas durante cada sessão do RCM. Analisamos todas as imagens de RCM para descrever e comparar as alterações celulares e morfológicas durante a cicatrização de pacientes com EB no início do estudo (antes do tratamento com CoQ10 3,0% creme) e após 8 semanas de Creme de CoQ10 3,0% tópico.

[00158] As imagens de dermatoscopia e RCM mostram feridas bem definidas criadas pelo sistema CELLUTOME na pele tratada. Além disso, o eritema estava presente e predominava em feridas não tratadas

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62/79 (Figura 13A, 13C) às 48 horas após o ferimento, enquanto as feridas tratadas tinham significativamente menos eritema na linha de base e às 48 horas (Figuras 13B, 13D).

[00159] Nas feridas não tratadas (linha de base), as imagens de RCM mostram feixes de colágeno e células inflamatórias difusas que persistiram 48 horas após o ferimento (Figura 14A). Além disso, também observamos tecido granular e poucos corneócitos poligonais (Figura 14A). Em contraste, havia significativamente poucas células inflamatórias após o tratamento (Figura 14B). Além disso, são vistos feixes organizados de colágeno e vários corneócitos na semana 8 (Figura 14B), o que é uma forte evidência do avanço da cura. O tratamento leva a produção e organização significativa de colágeno, como mostrado nas imagens de RCM mostrando feixes finos (Figura 16A) na pele não tratada versus os feixes mais espessos e mais organizados de colágeno presentes após o tratamento (Figuras 16B). Além disso, houve grandes diferenças na quantidade de células inflamatórias e granulação observadas entre a pele não tratada (Figura 15A) e a pele tratada (Figura 15B). Na pele tratada, as células inflamatórias estavam presentes 4 horas após o ferimento, mas diminuíram significativamente em 48 horas. Além disso, tecido granular extenso e vários corneócitos poligonais estavam presentes 48 horas após o ferimento (Figura 15B).

[00160] Os pacientes também relataram melhor cicatrização ao aplicar o Creme de CoQ10 a 3,0%. As imagens dos pacientes discutidas acima mostram que o Creme de CoQ10 3,0% melhora a integridade da pele em pacientes com EB. O Creme de CoQ10 a 3,0% também demonstrou diminuir o estágio inflamatório da cicatrização de feridas e aumentar os componentes do estágio proliferative, o que levará a uma cura bem-sucedida em pacientes com EB. Não foi relatada reação adversa ao Creme de CoQ10 a 3,0%.

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Exemplo 3. Efeito de composições CoQ10 em proteínas estruturais [00161] A cicatrização de feridas requer uma combinação da deposição de nova matriz de tecido conjuntivo, isto é, tecido de granulação, e a contração da ferida requer vários tipos de células, incluindo fibroblastos e queratinócitos. Ambos os tipos de células produzem muitas proteínas estruturais essenciais para a re-epitelização e remodelação da área da ferida para concluir 0 processo de cicatrização. Assim, agentes com capacidade de modular a expressão de componentes-chave da matriz extracelular potencialmente melhorarão a regeneração do tecido e facilitarão a cicatrização de feridas. Verificou-se que 0 tratamento de fibroblastos e queratinócitos com composições de CoQ10 está associado a alterações na expressão de várias proteínas estruturais. O tratamento com composições de CoQ10 em fibroblastos influenciou a expressão de várias proteínas estruturais, incluindo colágenos, plectina, anexinas, vimentina, filaminas e lamininas, as quais foram implicadas nas várias patologias associadas à EB. Do mesmo modo, os queratinócitos tratados com composições de CoQ10 demonstraram alterações na expressão de proteínas estruturais, incluindo várias queratinas, incluindo KRT13, KRT14 e KRTI 7, respectivamente. A capacidade das composições CoQ10 de influenciar a expressão de proteínas estruturais envolvidas na manutenção da estrutura e função da pele, juntamente com sua capacidade de influenciar fases críticas do processo de cicatrização de feridas, fornece uma justificativa convincente para sua utilidade no tratamento de feridas em EB.

Exemplo 4. Uso de composições de CoQ10 para o tratamento de carcinoma epidermoide cutâneo em indivíduos com epidermólise bolhosa

[00162] Além das lesões debilitantes dos tecidos epiteliais em vários órgãos, os pacientes com EB encontram outras complicações, incluindo

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64/79 retardo de crescimento, anemia, distrofia muscular e deformidades das mãos e pés. No entanto, a causa da morbimortalidade em adultos com EB está relacionada à incidência de neoplasias, das quais o carcinoma epidermoide cutâneo (cSCC) é muito significativo.

[00163] A incidência de CEC cutâneo é predominante em pacientes com EB distrófica recessiva (RDEB), com risco cumulativo atingindo 67,8%, 80,2% e 90,15 pelas idades de 35, 45 e 55 anos, respectivamente, durante a vida. As taxas de incidência no CE são significativamente maiores em comparação com o risco ao longo da vida de CEC cutâneo em pacientes não CE nos Estados Unidos, de 7 a 11% na população caucasiana. Além disso, quase 80% dos pacientes com EB morrem de CEC metastático, apesar de intervenções cirúrgicas agressivas. A incidência de cSCC também é observada na população de pacientes com EB juncional (EBJ), onde o risco acumulado ao longo da vida é de aproximadamente 18,2% aos 25 anos de idade.

[00164] A maior incidência combinada com a agressividade do CEC cutâneo observada em pacientes com EB em comparação com pacientes sem EB sugere diferenças na etiopatologia molecular do cSCC. Marcadores moleculares incluindo mutações em p53, variações de expressão em metaloproteinases da matriz (MMPs), cinases dependentes de ciclina (CDKs) e polimorfismos do receptor de melanocortina 1 (MCIR) foram estabelecidos como principais determinantes no início e progressão do cSCC. Em contraste, há uma falta de evidências consistentes que impliquem uma via específica na etiologia do cSCC em pacientes com EB. Inúmeros fatores, incluindo estresse tecidual (devido a defeitos associados ao EB na cicatrização de feridas), potencial pré-maligno dos queratinócitos devido a mutações associadas ao EB, fatores de crescimento e outra vigilância imunológica diminuída, foram sugeridos como principais atores no início/progressão do cSCC em pacientes com EB. A análise molecular identificou

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65/79 reguladores de apoptose (por exemplo, p53), fatores de crescimento (por exemplo, EGFR, FGF), proteases (MMPs, colagenase) e epigenética (HDACs) na incidência e progressão do cSCC em pacientes com EB.

[00165] É interessante observar que as queratinas (por exemplo, KRT6, KRT16, KRTI7) e MMPs (1, 3, 9, 10) foram moduladas de maneira mais robusta no cSCC em pacientes transplantados renais. Dado que aberrações em proteínas estruturais como colágeno (por exemplo, Col7A, Coll7), queratinas (por exemplo, KRT5, KRT14) e lamininas (por exemplo, laminina 5) foram associadas ao EB, e que proteases como MMPs (1,2, 3, 5, 9) e colagenase estão associadas à cSCC em pacientes com EB e transplante, acredita-se que a interseção de redes moleculares que sobrecarregam proteínas estruturais citoesqueléticas e atividades de protease em combinação com a regulação do ciclo celular e apoptose provavelmente influencie a iniciação e progressão da cSCC em Pacientes com EB.

[00166] Até o momento, não parece haver nenhum critério padrão para definição ou tratamento desses pacientes. Ressecção cirúrgica, quimioterapia e/ou radiação são as três modalidades de tratamento padrão, com variabilidade significativa nas respostas e resultados a longo prazo. Tanto a quimioterapia quanto o uso de radiação estão associados a incidências significativas de efeitos adversos. Atualmente, existem opções terapêuticas muito limitadas disponíveis para o tratamento de cSCC em pacientes com epidermólise bolhosa distrófica recessiva (RDEB).

[00167] O supressor de tumor p53 é considerado o guardião do genoma e regula os mecanismos de reparo do DNA para evitar a ativação de vias apoptóticas para eliminar os queratinócitos danificados. Na epiderme, insultos internos/externos com potencial para induzir danos ao DNA (por exemplo, exposição aos raios UV) resultam na

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66/79 ativação da p53, orquestrando o reparo do DNA, se possível, ou comprometendo as células a sofrer apoptose se o dano ao DNA estiver além do reparo (Ortonne, 2002). Além disso, a própria p53 pode ser um alvo direto de insulto/lesão/estresse, e a perda da função da p53 pode resultar em proliferação descontrolada e perda da função apoptótica. A mutação no p53 é frequentemente observada nos cânceres de pele, e sua frequência em vários cânceres de pele é altamente variável (Einspahr et al., 1999).

[00168] A etiologia do CEC como consequência da alta exposição solar cumulativa tem sido a principal área de pesquisa devido à incidência e morbimortalidade na população caucasiana. Além dos pacientes com EB, também foi observada maior incidência de CEC em pacientes recebendo terapia imunossupressora, aumentada durante a infecção pelo vírus do papiloma humano (Pons et al., 2006). Queratose actínica e CEC in situ são os estágios pré-invasivos do CEC invasivo. Mutações em p53 foram identificadas em mais de 60% dos CEC e AK e essa mutação é característica da induzida pela radiação UV (Pons et al., 2006). Além da perda de heterozigosidade (LOH) no locus p53 (17 p.13.1), outros cromossomos portadores de LOH foram caracterizados (Boukamp, 2005). Outros fatores, incluindo inflamação (por exemplo, TNF-alfa, IL-6), peroxidação lipídica, espécies reativas de oxigênio e danos no DNA mitocondrial foram implicadas no início e na progressão do CEC (Bachelor et al, 2009). Existe um consenso geral de que múltiplos fatores genéticos, fisiológicos e microambientais contribuem para a disseminação e agressividade do CEC.

[00169] Um insulto específico ao tecido (isto é, dano celular induzido por UV na AK/BCC) pode ser considerado como uma etapa de iniciação no processo de oncogênese, mas é insuficiente para que as lesões neoplásicas adquiram malignidade. A expansão clonal dessas lesões neoplásicas em combinação com alterações genéticas,

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67/79 proteômicas e fenotípicas globais é essencial para a aquisição do fenótipo maligno e do potencial metastático. Começando com os estudos clássicos de Otto Warburg, agora está bem estabelecido que a transformação metabólica na lesão neoplásica é essencial e necessária para a aquisição de capacidades malignas. Isso é evidenciado por tumores altamente proliferativos que exibem o fenótipo de Warburg utilizando glicose como fonte primária de geração de ATP no citoplasma e contornando a fosforilação oxidativa mitocondrial (Weinhouse, 1956, Burk et al., 1956). Dado que a AK e o CBC estão associados à malignidade de baixo grau e à duração prolongada da latência (várias décadas) necessária para o início do fenótipo maligno, isso sugere a presença de insulto oncogênico na ausência de troca metabólica. Por outro lado, a transição de AK para SCC in situ está associada a uma expansão clonal lenta, mas progressiva da lesão neoplásica, juntamente com alterações nas assinaturas de genes, proteínas e metabólicas características do fenótipo maligno (Berhane, 2002). Isso também pode envolver evidências de fatores inflamatórios pela eficácia de Aldara que tem como alvo específico os receptores do tipo Toll, cuja utilização está associada à incidência de efeitos colaterais significativos. Múltiplas estratégias destinadas a contornar redes de bioenergética celular que impulsionam a utilização de glicose para gerar ATP têm sido investigadas como terapias potenciais para câncer (Yeluri et al., 2009). Cânceres altamente proliferativos, como CEC metastático e melanoma, são caracterizados por fenótipo metabólico essencial para a manutenção de suas capacidades malignas (Scatena et al., 2011; Hersey et al, 2009). Uma nova formulação contendo Coenzima Q10 foi desenvolvida como um meio de influenciar seletivamente as vias de bioenergética celular no câncer sem influenciar as funções nas células normais. CoQ10 é um componente integrante da cadeia de transferência de elétrons mitocondrial para a produção de adenosina

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68/79 trifosfato (ATP), a principal fonte de energia da célula. Além de seu papel no metabolismo energético, o CoQ10 funciona como antioxidante, estabilizador de membrana e eliminador de radicais livres. As formulações de CoQ10 foram investigadas como um tratamento para distúrbios oncológicos, cardíacos, neurológicos, metabólicos e genéticos. A coenzima Q10 tem como alvo específico as redes de bioenergética celular, deslocando a produção de energia do citoplasma (observado em cânceres proliferativos altamente metabolicamente ativos) em direção à fosforilação oxidativa mitocondrial (observada em tecidos normais).

[00170] O Pedido Internacional No. PCT/US2005/001581, incorporado por referência na sua totalidade aqui, descreve formulações tópicas de CoQ10 que reduzem a taxa de crescimento de tumores em um animal.

[00171] Estudos in vitro com CoQ10 demonstram sua capacidade de influenciar seletivamente a viabilidade de células cancerígenas na ausência de toxicidade evidente em células normais. A Figura 1 descreve a diminuição dependente da dose nas taxas de proliferação celular das linhagens celulares de carcinoma espinocelular e melanoma, mas nenhum efeito nos queratinócitos e fibroblastos humanos normais.

[00172] A diminuição dependente da concentração nas taxas de proliferação celular observadas nas linhagens celulares de melanoma (SK-MEL-28) e carcinoma espinocelular (SCC-25) é indicativa da Coenzima Q10 em influenciar seletivamente células cancerígenas sem toxicidade em linhagens celulares normais (isto é, em humanos normais queratinócitos e fibroblastos adultos). Quando aplicada topicamente a tumores de melanoma em camundongos nus, uma formulação de CoQ10 a 1,0% inibia 0 crescimento e a angiogênese. O mecanismo envolve a mudança do bioenergético celular da glicólise citoplasmática

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69/79 para a fosforilação oxidativa mitocondrial (AACR 2011). A mudança nas vias metabólicas celulares no câncer, incluindo CEC e melanoma, resulta na recapitulação do potencial apoptótico regulado por p53, restabelecendo o equilíbrio das relações pró-apópticas de Bcl-2/Bax de uma maneira propícia à morte celular.

[00173] As desidrogenases de isocitrato (IDH-1 e IDH-2) são enzimas dependentes de NADP + que catalisam a descarboxilação oxidativa de isocitrato em α-cetoglutarato. O IDH-1 é a mutação da isoforma citosólica que está associada à incidência de câncer no cérebro em humanos (Parsons et al, 2008). Além disso, a expressão do IDH-1 mutado associado à enzima disfuncional está associada ao aumento da expressão de Hif-la (Zhao S et al, 2009). A enzima IDH disfuncional está associada à incidência de vários cânceres, sugerindo que um aumento na expressão da enzima IDH normal deve estar associado à recapitulação da fosforilação oxidativa normal. O tratamento com a coenzima Q10 em células de melanoma está associado a um aumento dependente da concentração na expressão de IDH-1 (Figura 2), sugerindo um aumento na fosforilação oxidativa mitocondrial.

[00174] A ATP citrato liase (ACL) é a enzima primária responsável pela conversão do citrato citosólico derivado da glicose em acetil-CoA para a biossíntese de lipídios e colesterol (Bauer et al, 2005). Além disso, a acetil-CoA gerada por ATP-citrato-liase é essencial para a acetilação da histona em resposta à estimulação do fator de crescimento e durante a diferenciação (Wellen KE et al., 2009). Foi sugerido que uma diminuição na atividade do LCA pode estar associada ao aumento da oxidação do citrato nas mitocôndrias, resultando em aumento das atividades do ciclo TCA e fosforilação oxidativa (Board M e Newsholme E, 1996). Assim, a coenzima QIO induziu uma diminuição na expressão do LCA em uma linhagem celular de melanoma (Figura 3)

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70/79 sugere uma diminuição na biossíntese de lipídios e colesterol essencial para a proliferação e acetilação de histonas na regulação das atividades transcricionais associadas ao crescimento e diferenciação de células cancerígenas. Uma diminuição semelhante na expressão do LCA não é observada em células normais (HASMC) em resposta ao tratamento com coenzima Q10. Assim, o tratamento de células cancerígenas com a coenzima Q10 altera a expressão de proteínas de maneira consistente com o aumento da fosforilação oxidativa mitocondrial, com diminuições associadas nas vias essenciais para a proliferação sustentada.

[00175] Em outro conjunto de experiências, o tratamento de células de melanoma (SK-MEL-28) com as composições CoQ10 resultou em um aumento progressivo dependente da concentração nos níveis de p53 e p14ARF, que são conhecidos por regular as vias apoptóticas. O MDM2 é um regulador negativo da expressão e atividade da p53 e, portanto, a diminuição na expressão mostrada na Figura 4 representa uma validação indireta do aumento na expressão da p53 em resposta ao tratamento com coenzima Q10.

[00176] A Figura 5 descreve a expressão de marcadores pró e antiapoptóticos que regulam as vias de morte celular em uma linhagem celular de melanoma. Observa-se uma diminuição dependente da concentração na proteína bcl-2 antiapoptótica com um aumento concomitante na expressão do bax pró-apoptótico após a exposição à Coenzima Q10. O aumento progressivo dependente da dose na expressão da caspase 3, uma caspase executora, é indicativo da capacidade da Coenzima QIO de permitir o comprometimento das células cancerígenas no processo de apoptose.

[00177] Em seguida, foi realizada uma análise proteômica de um modelo in vitro de carcinoma de células escamosas, linhagem de células SCC (SCC-25), para delinear o efeito regulador mecanicista subjacente das composições CoQ10 da invenção. A Tabela 1, mostrada acima e

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71/79 reproduzida abaixo, lista as proteínas identificadas como tendo uma resposta diferencial ao tratamento com 100 uM de CoQ10 em células SCC às 6 e 24 horas.

Tabela 2

Proteína	Nome	Resposta (alteração de dobra)
Transaldolase 1	TALDO1	Diminuir (1,5) em 6 e 24 horas
Proteína NM23	NME1	Aumentar (-1,2} às 6 horas, diminuir às 24 horas
Proteína 1 de choque térmico 271 kDa	HSPB1	Aumento (-1,9) às 6 e 24 horas
Queratina 1	KRTI	Diminuir (2.3) às 6 e 24 horas
Queratina 14	KRT14	Aumento (-1,6) às 6 e 24 horas
Queratina 13	KRT13	Aumento (-1,5) às 6 e 24 horas
Proteasome Beta 7	PSMB7	Diminuir (1,6) apenas em 24 horas
Subunidade 3 do ativador de proteassoma	PSME3	Diminuir (1.3) somente em 24 horas
Inibidor da dissociação do PIB Rho {GDI) alfa	ARHGDIA	Diminuir (1,5) somente em 6 horas

00178] No modelo SCC, 0 tratamento com CoQ10 foi associado a uma diminuição da Transaldolase-1, uma enzima dentro da via da pentase fosfato que regula a biossíntese de intermediários para ácidos nucléicos. Além disso, a transaldolase-1 também está envolvida na manutenção do equilíbrio equivalente redutor celular (NADPH) e do status redox baseado em glutationa. Além disso, a exposição ao CoQ10 no CEC foi associada a alterações na expressão de proteínas do estresse e queratinas. Um déficit de queratina 14 foi documentado no EB, uma das queratinas cuja expressão é aumentada em resposta à composição de CoQ10 no modelo SCC.

[00179] A Tabela 3, mostrada acima e reproduzida abaixo, lista os genes nas células SCC que são regulados pelo tratamento com 100 uM de Q10 quando analisados pela matriz de apoptose.

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Tabela 3

Símbolo	Descrição	Regulamento.
AKT1	Homólogo de oncogene viral de timoma murino V-akt 1	Regulado para baixo às 6 horas e regulado para cima às 24 horas.
BAG4	Atanogene 4 associado ao BCL2	Regulado até 24 horas.
BAX	Proteína X associada ao BCL2	Regulado até 24 horas.
BCL2L 1	BCL2-tipo 1	Regulado para baixo às 6 horas e depois regulado para às 24 horas
BNIP3	Proteína 3 em interação com BCL2/adenovírus E1B 19kDa	Regulado para baixo às 24 horas.
CARD6	Família de domínios de recrutamento Caspase, membro 6	Regulado para baixo às 6 horas.
CASP6	Caspase 6, cisteína peptidase relacionada à apoptose	Regulado até 24 horas.
CASP7	Caspase 7, cisteína peptidase relacionada à apoptose	Regulado até 24 horas.
GADD45A	Parada de crescimento e indução de dano ao DNA. Alfa	Regulado até 24 horas.
TP53	Proteína tumoral p53	Regulado até 24 horas.
TP73	Proteína tumoral p73	Regulado para baixo às 6 horas e regulado para cima às 24 horas.

[00180] A análise das alterações na expressão transcricional nas células SCC em resposta à exposição ao CoQ10 foi associada a um aumento sustentado nos transcritos de p53 ao longo de 24 horas. Por outro lado, houve uma diminuição inicial seguida por um aumento nos transcritos de TP73. Outras grandes mudanças observadas nas linhagens de células SCC em resposta ao tratamento com CoQ10 foram uma diminuição do AKT1 em conjunto com a regulação positiva de marcadores pró-apoptóticos, incluindo Bax e múltiplas caspases. Coletivamente, os dados da Tabela 1 e Tabela 2 sugerem que a exposição ao CoQ10 nas linhagens de células SCC está associada a

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73/79 alterações no fenótipo metabólico, ativação de p53 e apoptose.

[00181] Numerosos estudos in vitro e in vivo fornecem suporte para a capacidade do CoQ10 de mudar a bioenergética celular para facilitar a síntese de ATP via fosforilação oxidativa mitocondrial. As consequências da mudança do bioenergético celular da glicólise para a fosforilação oxidativa induzida pela Coenzima Q10 são as alterações no apoptose, angiogênese, função mitocondrial e nuclear na seleção seletiva de células cancerígenas para sofrer morte celular na ausência de toxicidade em células normais.

[00182] Os resultados aqui fornecidos demonstram que a coenzima Q10 é uma molécula com a capacidade de interferir seletivamente com a rede metabólica do câncer, deslocando a dependência do câncer na utilização direta da glicose para gerar ATP em direção a vias que suportam a fosforilação oxidativa mitocondrial. As mudanças associadas à exposição à coenzima Q10 na rede de utilização de bioenergético celular em direção à fosforilação oxidativa mitocondrial estão ligadas à recapitulação (correção) das vias apoptóticas mediadas por p53 que deram errado nas células cancerígenas. A atividade e 0 mecanismo de ação da Coenzima Q10 demonstram claramente sua utilidade no tratamento eficaz do CCE metastático, caracterizado por alta atividade metabólica observada em um ambiente oncogênico de boa-fé.

REFERÊNCIAS

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Claims (153)

1. Método de tratamento de Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma de Coenzima Q10 (CoQ10) ao indivíduo.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a Epidermólise Bolhosa é Epidermólise Bolhosa simples, Epidermólise Bolhosa juncional, Epidermólise Bolhosa distrófica ou Síndrome de Kindler.

3. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de cerca de uma semana a cerca de doze semanas.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 14 vezes por semana durante o período de tratamento.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 7 vezes por semana, durante o período de tratamento.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por dia, durante o período de tratamento.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de uma vez por dia, durante o período de tratamento.

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2/25

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo aproximadamente uma vez a cada dois dias, durante o período de tratamento.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por semana, durante o período de tratamento.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de duas semanas.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de três semanas.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de quatro semanas.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de cinco semanas.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de seis semanas.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a administração da composição

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3/25 farmacêutica compreendendo CoQ10 a uma área afetada contendo pelo menos uma bolha e/ou ferida por um período de tratamento de cerca de quatro semanas resulta em pelo menos 70% de redução do tamanho da área afetada contendo pelo menos uma bolha e/ou ferida.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém de cerca de 1% a cerca de 5% de CoQ10 (p/p).

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém cerca de 3% de CoQ10 (p/p).

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que a administração da composição farmacêutica compreendendo CoQ10 ao indivíduo proporciona um ou mais efeitos benéficos ao indivíduo.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que 0 um ou mais efeitos benéficos são selecionados do grupo que consiste em:

a. Redução da dor associada a EB;

b. Redução da inflamação associada a EB;

c. Redução no tamanho de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

d. Redução no número de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

e. Aumento da taxa de cicatrização de uma ou mais bolhas e/ou feridas associadas a EB;

f. Aumento da integridade estrutural da pele do indivíduo que sofre de EB;

g. Redução no número de infecções de pele associadas a EB;

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4/25

h. Aumento no fechamento de feridas associadas a EB;

i. Aumento na re-epitelização de feridas associadas a EB;

j. Aumento na granulação de feridas associadas a EB;

k) Redução na distância do espaçamento epidérmico de uma bolha e/ou ferida associada a EB;

I. Redução do tempo de cicatrização de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

m. Redução na quantidade de medicações concomitantes administradas ao indivíduo, a fim de tratar a EB do indivíduo;

n. Redução de cicatrizes associadas a EB;

o. Aumento na produção de queratinócitos na pele do indivíduo; e

p. Aumento da produção de fibroblastos na pele do indivíduo.

20. Método de tratamento de Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo, em que o tratamento do indivíduo resulta na redução do tamanho de uma ou mais bolhas e/ou feridas em pelo menos cerca de 70% após a administração de uma quantidade eficaz de CoQ10 por um período de tratamento de cerca de quatro semanas.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 contém de cerca de 1% a cerca de 5% de CoQ10 (p/p)·

22. Método, de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém cerca de 3% de CoQ10 (p/p).

23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 22, caracterizado pelo fato de que a administração da CoQ10 ao

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5/25 indivíduo proporciona um efeito benéfico ao indivíduo.

24. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o efeito benéfico é um ou mais do grupo selecionado de:

a. Redução da dor associada a EB;

b. Redução da inflamação associada a EB;

c. Redução no tamanho de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

d. Redução no número de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

e. Aumento da taxa de cicatrização de uma ou mais bolhas e/ou feridas associadas a EB;

f. Aumento da integridade estrutural da pele do indivíduo que sofre de EB;

g. Redução no número de infecções de pele associadas a EB;

h. Aumento no fechamento de feridas associadas a EB;

i. Aumento na re-epitelização de feridas associadas a EB;

j. Aumento na granulação de feridas associadas a EB;

k) Redução na distância do espaçamento epidérmico de uma bolha e/ou ferida associada a EB;

I. Redução do tempo de cicatrização de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

m. Redução na quantidade de medicações concomitantes administradas ao indivíduo, a fim de tratar a EB do indivíduo;

n. Redução de cicatrizes associadas a EB;

o. Aumento na produção de queratinócitos na pele do indivíduo; e

p. Aumento da produção de fibroblastos na pele do indivíduo.

25. Método de tratamento de uma ferida associada à

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6/25

Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo.

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a Epidermólise Bolhosa é Epidermólise Bolhosa simples, Epidermólise Bolhosa juncional, Epidermólise Bolhosa distrófica ou Síndrome de Kindler.

27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 ou 26, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de cerca de uma semana a cerca de doze semanas.

28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 27, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 14 vezes por semana durante 0 período de tratamento.

29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 28, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 7 vezes por semana, durante 0 período de tratamento.

30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 27, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por dia, durante 0 período de tratamento.

31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 28, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de uma vez por dia, durante 0 período de tratamento.

32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 28, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que

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7/25 compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo aproximadamente uma vez a cada dois dias, durante o período de tratamento.

33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 28, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por semana, durante o período de tratamento.

34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 33, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de duas semanas.

35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 34, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de três semanas.

36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 35, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de quatro semanas.

37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 36, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de cinco semanas.

38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 37, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de seis semanas.

39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 36, caracterizado pelo fato de que a administração da composição farmacêutica compreendendo CoQ10 a uma área afetada contendo pelo menos uma bolha e/ou ferida por um período de tratamento de

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8/25 cerca de quatro semanas resulta em pelo menos 70% de redução no o tamanho da área afetada contendo pelo menos uma bolha e/ou ferida.

40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 39, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém de cerca de 1% a cerca de 5% de CoQ10 (p/p).

41. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém cerca de 3% de CoQ10 (p/p).

42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 41, caracterizado pelo fato de que a administração da composição farmacêutica compreendendo CoQ10 ao indivíduo proporciona um ou mais efeitos benéficos ao indivíduo.

43. Método, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o um ou mais efeitos benéficos são selecionados do grupo que consiste em:

a. Redução da dor associada a EB;

b. Redução da inflamação associada a EB;

c. Redução no tamanho de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

d. Redução no número de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

e Aumento da taxa de cicatrização de uma ou mais bolhas e/ou feridas associadas a EB;

f. Aumento da integridade estrutural da pele do indivíduo que sofre de EB;

g. Redução no número de infecções de pele associadas a EB;

h. Aumento no fechamento de feridas associadas a EB;

i. Aumento na re-epitelização de feridas associadas a EB;

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9/25

j. Aumento na granulação de feridas associadas a EB;

k) Redução na distância do espaçamento epidérmico de uma bolha e/ou ferida associada a EB;

I. Redução do tempo de cicatrização de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

m. Redução na quantidade de medicações concomitantes administradas ao indivíduo, a fim de tratar a EB do indivíduo;

n. Redução de cicatrizes associadas a EB;

o. Aumento na produção de queratinócitos na pele do indivíduo; e

p. Aumento da produção de fibroblastos na pele do indivíduo.

44. Método para melhorar a integridade estrutural da pele de um indivíduo que sofre de Epidermólise Bolhosa, caracterizado pelo fato de que compreende a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 na pele do indivíduo.

45. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a baixa integridade estrutural da pele do indivíduo com EB é resultado de um defeito ou deficiência em uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais.

46. Método, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais é selecionada a partir de uma queratina, um colágeno, uma plectina, uma anexina, uma vimentina, uma filamina, uma integrina e uma laminina.

47. Método, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que a proteína queratina é selecionada do grupo que consiste em: queratina 5 (KRT5), queratina 13 (KRT13), queratina 14 (KRT14) e queratina 17 (KRT17).

48. Método, de acordo com a reivindicação 46,

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10/25 caracterizado pelo fato de que a proteína de colágeno é selecionada a partir de colágeno XVII ou colágeno tipo VII.

49. Método, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que a laminina é laminina 332.

50. Método, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que a integrina é α6β4 integrina.

51. Método, de acordo com a reivindicação 45 ou 46, caracterizado pelo fato de que a proteína é selecionada do grupo que consiste em: transaldolase 1, proteína NM23, proteína 27kDa de choque térmico 1, queratina 1, queratina 14, queratina 13, queratina 13, proteassoma beta 7, subunidade ativadora de proteassoma 3, e rho inibidor de dissociação do PIB alfa.

52. Método, de acordo com a reivindicação 45 ou 46, caracterizado pelo fato de que a proteína é selecionada a partir do grupo que consiste em: homólogo 1 do oncogene viral V-akt timoma murino (AKTI), atanogene 4 associado ao BCL2 (BAG4), proteína X associada ao BCL2 (BAX), BCL2-like 1 (BCL2L1), proteína 3 que interage com BCL2/adenovírus E1B 19kDa (BNTP3), família de domínios de recrutamento de caspase, membro 6 (CARD6), caspase 6, cisteína peptidase relacionada a apoptose (CASP6), caspase 7, cisteína peptidase relacionada a apoptose (CASP7), interrupção no crescimento e dano ao DNA, alpha (GADD45A), proteína tumoral p53 (TP53) e proteína tumoral p73 (TP73).

53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 52, caracterizado pelo fato de que o defeito ou deficiência em uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais está dentro da epiderme.

54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 52, caracterizado pelo fato de que o defeito ou deficiência em uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais está dentro da lâmina lúcida.

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55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 52, caracterizado pelo fato de que o defeito ou deficiência em uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais está na zona de sublâmina densa.

56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 52, caracterizado pelo fato de que o defeito ou deficiência em uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais está dentro de mais de uma zona da epiderme, lâmina lúcida e sublâmina densa.

57. Método, de acordo com a reivindicação53, caracterizado pelo fato de que a EB é Epidermólise Bolhosa Simples.

58. Método, de acordo com a reivindicação54, caracterizado pelo fato de que a EB é Epidermólise Bolhosa Juncional.

59. Método, de acordo com a reivindicação55, caracterizado pelo fato de que a EB é Epidermólise Bolhosa Distrófica.

60. Método, de acordo com a reivindicação56, caracterizado pelo fato de que a EB é a Síndrome de Kindler.

61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 60, caracterizado pelo fato de que o defeito ou deficiência em uma ou mais proteínas estruturais e/ou funcionais é um ou mais de uma deficiência na atividade da proteína, uma deficiência na expressão da proteína e uma mutação na proteína.

62. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a integridade estrutural da pele é avaliada por exame histológico, microscopia eletrônica de transmissão (MET) ou coloração imunofluorescente de uma biópsia de pele do indivíduo.

63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 62, caracterizado pelo fato de que uma melhoria na integridade estrutural da pele é determinada pela provisão de um ou mais efeitos benéficos para o indivíduo que sofre de EB após o tratamento com uma

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12/25 quantidade eficaz de CoQ10.

64. Método, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que 0 um ou mais efeitos benéficos são selecionados do grupo que consiste em:

a. Redução da dor associada a EB;

b. Redução da inflamação associada a EB;

c. Redução no tamanho de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

d. Redução no número de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

e. Aumento da taxa de cicatrização de uma ou mais bolhas e/ou feridas associadas a EB;

f. Aumento da integridade estrutural da pele do indivíduo que sofre de EB;

g. Redução no número de infecções de pele associadas a EB;

h. Aumento no fechamento de feridas associadas a EB;

i. Aumento na re-epitelização de feridas associadas a EB;

j. Aumento na granulação de feridas associadas a EB;

k) Redução na distância do espaçamento epidérmico de uma bolha e/ou ferida associada a EB;

I. Redução do tempo de cicatrização de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

m. Redução na quantidade de medicações concomitantes administradas ao indivíduo, a fim de tratar a EB do indivíduo;

n. Redução de cicatrizes associadas a EB;

0. Aumento na produção de queratinócitos na pele do indivíduo; e

p. Aumento da produção de fibroblastos na pele do indivíduo.

65. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

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44 a 64, caracterizado pelo fato de que uma melhoria na integridade estrutural da pele é determinada usando um teste de sucção de bolha na pele do indivíduo que sofre de EB após tratamento com uma quantidade eficaz de CoQ10.

66. Método, de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que um aumento no tempo para formação de bolhas na pele do indivíduo tratado com CoQ10 é indicativo de uma melhoria na integridade estrutural da pele do indivíduo.

67. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 66, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém de cerca de 1% a cerca de 5% de CoQ10 (p/p).

68. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 67, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém cerca de 3% de CoQ10 (p/p).

69. Método para aumentar a taxa de cicatrização de uma bolha e/ou ferida da pele em um indivíduo que sofre de EB, caracterizado pelo fato de que compreende a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de Coenzima Q10 (CoQ10) na bolha da pele e/ou ferida.

70. Método, de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo fato de que a taxa de cicatrização é determinada pela taxa de re-epitelização da bolha da pele e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 em comparação com a taxa de re-epitelização de uma bolha não tratada e/ou ferida.

71. Método, de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo fato de que a taxa de cicatrização é determinada por uma redução na distância do espaçamento epidérmico da bolha da pele e/ou ferida tratada com a composição CoQ10 em comparação com

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14/25 a distância do espaçamento epidérmico de uma bolha da pele não tratada e/ou ferida.

72. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 71, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada sob a forma de um creme CoQ10 a uma dosagem de CoQ10 entre 0,01 mg/cm²e 5 mg/cm².

73. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 72, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada com uma segunda composição compreendendo um agente adicional.

74. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 73, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreende ainda um agente adicional.

75. Método de tratamento ou prevenção de carcinoma de células escamosas em um indivíduo que sofre de Epidermólise Bolhosa, caracterizado pelo fato de que compreende a administração tópica de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 ao indivíduo.

76. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que o carcinoma espinocelular é carcinoma espinocelular cutâneo.

77. Método, de acordo com a reivindicação 75 ou 76, caracterizado pelo fato de que a Epidermólise Bolhosa é Epidermólise Bolhosa juncional, Epidermólise Bolhosa distrófica ou Síndrome de Kindler.

78. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 77, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de cerca de uma semana a cerca de doze semanas.

79. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

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75 a 78, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 14 vezes por semana durante o período de tratamento.

80. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 79, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 7 vezes por semana, durante o período de tratamento.

81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 78, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por dia, durante o período de tratamento.

82. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 79, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de uma vez por dia, durante o período de tratamento.

83. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 79, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo aproximadamente uma vez a cada dois dias, durante o período de tratamento.

84. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 79, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por semana, durante o período de tratamento.

85. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de duas semanas.

86. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 85, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de

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16/25 pelo menos cerca de três semanas.

87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 86, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de quatro semanas.

88. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 87, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de cinco semanas.

89. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 88, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de seis semanas.

90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 89, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém de cerca de 1% a cerca de 5% de CoQ10 (p/p).

91. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 90, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém cerca de 3% de CoQ10 (p/p).

92. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 91, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada na forma de um creme CoQ10 em uma dosagem de CoQ10 entre 0,01 mg/cm²e 5 mg/cm².

93. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 92, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é administrada à pele intacta e à pele com uma ou mais bolhas e/ou feridas.

94. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 93, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é

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17/25 administrada à pele intacta.

95. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 92, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é administrada à pele com uma ou mais bolhas e/ou feridas.

96. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 95, caracterizado pelo fato de que o tratamento do indivíduo resulta no atraso no surgimento de CEC, em comparação com a idade média de surgimento de CEC para a forma de EB da qual o indivíduo sofre.

97. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 96, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada com uma segunda composição compreendendo um agente adicional.

98. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 96, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreende ainda um agente adicional.

99. Método, de acordo com a reivindicação 97 ou 98, caracterizado pelo fato de que o agente adicional é um agente quimioterapêutico.

100. Método, de acordo com a reivindicação 97, caracterizado pelo fato de que o agente quimioterapêutico é cisplatina, doxorrubicina, 5-fluorouracil, capecitabina, topotecano ou etoposídeo.

101. Método, de acordo com a reivindicação 98, caracterizado pelo fato de que o agente adicional é 5-fluorouracil.

102. Método, de acordo com a reivindicação 97 ou 98, caracterizado pelo fato de que o agente adicional é diclofenaco, imiquimod, ou ingenol mebutate.

103. Método, de acordo com a reivindicação 97 ou 98, caracterizado pelo fato de que o agente adicional é um medicamento usado em terapia fotodinâmica (TFD).

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104. Composição farmacêutica tópica caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 para uso no tratamento de Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo com necessidade da mesma.

105. Composição, de acordo com a reivindicação 104, caracterizada pelo fato de ser para 0 uso no tratamento de EB, em que 0 tratamento de EB compreende 0 tratamento de uma ou mais bolhas e/ou feridas associadas a EB.

106. Composição, de acordo com a reivindicação 104 ou 105, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de EB, em que 0 tratamento de EB compreende melhorar a integridade estrutural da pele em um indivíduo que sofre de EB.

107. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 106, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de EB, em que a EB é Epidermólise Bolhosa Simples, Epidermólise Bolhosa Juncional, Epidermólise Bolhosa Distrófica ou Síndrome de Kindler.

108. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 107, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de cerca de uma semana a cerca de doze semanas.

109. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 108, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 14 vezes por semana durante 0 período de tratamento.

110. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 109, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 7 vezes por semana, durante 0 período de tratamento.

111. Composição, de acordo com qualquer uma das

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19/25 reivindicações 104 a 109, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por dia, durante o período de tratamento.

112. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 110, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de uma vez por dia, durante o período de tratamento.

113. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 110, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo aproximadamente uma vez a cada dois dias, durante o período de tratamento.

114. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 110, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por semana, durante o período de tratamento.

115. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 114, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de duas semanas.

116. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 115, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de três semanas.

117. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 116, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de quatro semanas.

118. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 117, caracterizada pelo fato de que a composição

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20/25 farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de cinco semanas.

119. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 118, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de seis semanas.

120. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 117, caracterizada pelo fato de que a administração da composição farmacêutica compreendendo CoQ10 a uma área afetada contendo pelo menos uma bolha e/ou ferida por um período de tratamento de cerca de quatro semanas resulta em uma redução de pelo menos 70% no tamanho da área afetada contendo pelo menos uma bolha e/ou ferida.

121. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 120, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 contém de cerca de 1% a cerca de 5% de CoQ10 (p/p).

122. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 121, caracterizada pelo fato de que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 contém cerca de 3% de CoQ10 (p/p)·

123. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 104 a 122, caracterizada pelo fato de que a administração da composição farmacêutica compreendendo CoQ10 ao indivíduo proporciona um ou mais efeitos benéficos ao indivíduo.

124. Composição, de acordo com a reivindicação 123, caracterizada pelo fato de que 0 um ou mais efeitos benéficos são selecionados a partir do grupo que consiste em:

a. Redução da dor associada a EB;

b. Redução da inflamação associada a EB;

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c. Redução no tamanho de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

d. Redução no número de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

e. Aumento da taxa de cicatrização de uma ou mais bolhas e/ou feridas associadas a EB;

f. Aumento da integridade estrutural da pele do indivíduo que sofre de EB;

g. Redução no número de infecções de pele associadas a EB;

h. Aumento no fechamento de feridas associadas a EB;

i. Aumento na re-epitelização de feridas associadas a EB;

j. Aumento na granulação de feridas associadas a EB;

k. Redução na distância do espaçamento epidérmico de uma bolha e/ou ferida associada a EB;

I. Redução do tempo de cicatrização de bolhas e/ou feridas associadas a EB;

m. Redução na quantidade de medicações concomitantes administradas ao indivíduo, a fim de tratar a EB do indivíduo;

n. Redução de cicatrizes associadas a EB;

o. Aumento na produção de queratinócitos na pele do indivíduo; e

p. Aumento da produção de fibroblastos na pele do indivíduo.

125. Composição farmacêutica tópica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de CoQ10 para uso no tratamento de carcinoma de células escamosas (CEC) associado à Epidermólise Bolhosa (EB) em um indivíduo com necessidade da mesma.

126. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 125, caracterizada pelo fato de que é para uso no

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22/25 tratamento de CEC, em que o CEC é carcinoma de células escamosas cutâneo.

127. Método, de acordo com a reivindicação 125 ou 126, caracterizado pelo fato de que a EB é Epidermólise Bolhosa Juncional, Epidermólise Bolhosa Distrófica ou Síndrome de Kindler.

128. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 127, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de cerca de uma semana a cerca de doze semanas.

129. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 128, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 14 vezes por semana durante o período de tratamento.

130. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 128, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo de 1 a cerca de 7 vezes por semana, durante o período de tratamento.

131. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 129, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por dia, durante o período de tratamento.

132. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 130, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de uma vez por dia, durante o período de tratamento.

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133. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 130, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo aproximadamente uma vez a cada dois dias, durante o período de tratamento.

134. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 130, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada ao indivíduo cerca de duas vezes por semana, durante o período de tratamento.

135. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 134, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de duas semanas.

136. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 135, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de três semanas.

137. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 136, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de quatro semanas.

138. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 137, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de cinco semanas.

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139. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 138, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada por um período de tratamento de pelo menos cerca de seis semanas.

140. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 139, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém de cerca de 1% a cerca de 5% de CoQ10 (p/p).

141. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 140, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 contém cerca de 3% de CoQ10 (p/p).

142. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 141, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica que compreende CoQ10 é administrada na forma de um creme CoQ10 em uma dosagem de CoQ10 entre 0,01 mg/cm²e 5 mg/cm².

143. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 142, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica é administrada à pele intacta e à pele com uma ou mais bolhas e/ou feridas.

144. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 142, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica é administrada à pele intacta.

145. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 142, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica é

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25/25 administrada à pele com uma ou mais bolhas e/ou feridas.

146. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 145, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento ou prevenção de CEC, em que o tratamento ou prevenção no indivíduo resulta no atraso no surgimento do CEC, em comparação com a idade média de surgimento do CEC para a forma de EB da qual o indivíduo sofre.

147. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 146, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreendendo CoQ10 é administrada com uma segunda composição compreendendo um agente adicional.

148. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 125 a 146, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de CEC, em que a composição farmacêutica compreende ainda um agente adicional.

149. Método, de acordo com a reivindicação 147 ou 148, caracterizado pelo fato de que o agente adicional é um agente quimioterapêutico.

150. Método, de acordo com a reivindicação 147, caracterizado pelo fato de que o agente quimioterapêutico é cisplatina, doxorrubicina, 5-fluorouracil, capecitabina, topotecano ou etoposídeo.

151. Método, de acordo com a reivindicação 148, caracterizado pelo fato de que o agente adicional é 5-fluorouracila.

152. Método, de acordo com a reivindicação 147 ou 148, caracterizado pelo fato de que o agente adicional é o diclofenaco, imiquimod, ou ingenol mebutate.

153. Método, de acordo com a reivindicação 147 ou 148, caracterizado pelo fato de que o agente adicional é um medicamento utilizado em terapia fotodinâmica (TFD).