BR112019023480A2 - derivados de pirazolo [1,5-a] pirimidina como inibidores de quinase jack - Google Patents

Abstract

Um composto ou seu sal de adição de ácido da fórmula geral; em que R1 representa fenil substituído por um ou dois substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halogênio e alcoxi C1-C3, ou heteroarila de 6 elementos com 1 ou 2 átomos de nitrogênio, que é não substituído ou substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de ?NH2, halogênio, alquila C1-C4, alcoxila C1-C3 e heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste de N e O. O composto é dotado da atividade de inibidor de quinase JACK1/JACK3 e pode encontrar uso no tratamento de enfermidades inflamatórias e auto imunológicas inflamatórias.

Description

“DERIVADOS DE PIRAZOLO [1,5 -a] PIRIMIDINA COMO INIBIDORES DE QUINASE JACK” Campo da Invenção

[001] A invenção refere-se a novos compostos derivados de pirazolo [1,5-a] pirimidina que exibem a atividade de tirosina quinase JAK, em particular inibidores de JAK1/JAK3, os compostos “podem encontrar uso no tratamento de enfermidades, na patogênese das quais estão envolvidas quinases JAKI e JAK3, Em particular, os compostos podem encontrar uso como moduladores de resposta imunológica, por exemplo, como imunossupressores no campo da transplantologia, e no tratamento de enfermidades auto - imunológicos e inflamatórias.

Técnica Anterior

[002] As Janus quinases JAK são uma família de tirosina quinases não receptoras envolvidas na transdução intracelular de sinal induzido por citocinas e quimiocinas na via de sinalização JAK -STAT. Elas desempenham função importante na ativação das proteínas STAT e iniciação de transcrição de genes, entre outros genes que codificam os mediadores de inflamação. A atividade do fator de transcrição STAT em uma célula depende do seu nível de fosforilação. O aumento do nível de fosforilação em uma célula depende da atividade das quinases JAK; a inibição de quinases causa diminuição da fosforilação e atividade de transcrição das proteínas STAT e, consequentemente, redução da expressão de genes regulados. Por essa razão, os inibidores de quinases JAK bloqueiam a via de sinalização específica responsável pela indução e manutenção do estado inflamatório subjacente a enfermidades auto -imunológicas. Foi confirmado repetidamente que citocinas envolvidas no desenvolvimento e evolução clínica de enfermidades inflamatórias ativam a via JAK -STAT, tornando este último elemento importante no desenvolvimento e evolução clínica de enfermidades tais como artrite reumatóide, psoríase e asma. A estimulação de JAK quinases nos linfócitos T induzidos por citocinas pró - inflamatórias conduz à ativação do fator de transcrição STAT. Isto afeta a diferenciação dos linfócitos T que estimulam os linfócitos B para aumentar a produção de imunoglobulinas E e são responsáveis pelo recrutamento e maturação dos eosinófilos, levando ao desenvolvimento de resposta inflamatória local. Devido ao bloqueio da fosforilação do fator STAT, os inibidores da quinase JAK podem inibir a diferenciação da população T de linfócitos e a resposta inflamatória e, portanto, podem ser úteis como no tratamento de enfermidades inflamatórias.

[003] A família JAK compreende 4 membros conhecidos, JAKl, JAK2, JAK3 e TYK2, As quinases JAK1l, JAK2 e TYK2 são expressas de forma onipresente, enquanto a cinase JAK3 é expressa principalmente em células hematopoiéticas. Assim, acredita-se que os efeitos da inibição de JAK3 serão limitados ao sistema imunológico. O JAK3 é ativado pelas interleucinas IL2, IL4, IL7, IL9, ILI5 e IL21 através do receptor yc transmembranar. Da mesma forma que JAK3, JAK1 está associado ao receptor de IL -2 e, em conjunto com JAK3, medeia a cascata de sinalização de IL -2 para regular a proliferação de células T. O JAKI também desempenha o papel na sinalização de IL -6 e IFN -gama, associado à resposta inflamatória. Os inibidores de JAK3 e/ou JAK1I são um alvo interessante na busca de medicamentos que podem ser utilizados como moduladores da resposta imunológica, em particular na prevenção de rejeições de transplantes em transplantologia e no tratamento de enfermidades auto -imunológicos e inflamatórias.

[004] São pesquisados os compostos que exibem a atividade de inibição das quinases JAKlI e/ou JAK3, especialmente seletivos em relação a JAK2,

[005] O documento WO 2014/039595Al expõe compostos com o núcleo imidazo -[1,2 -b] -piridazina -6 - carboxamida da fórmula Rn o RA. > H

N como inibidores de JAK3 e/ou JAKl seletivos sobre JAK2 e medicamentos potenciais para o tratamento de enfermidades inflamatórias e auto -imunológicos crônicas.

[006] Oo documento WO2012/125893 expõe compostos com o núcleo pirrolo - [1,2 b] piridazina -6 - carboxamida da fórmula R$

NH O R SE No Z H

N como inibidores de JAK3 e/ou JAKl seletivos sobre JAK2 e medicamentos potenciais para o tratamento de enfermidades inflamatórias e auto -imunológicos crônicas.

[007] o documento WO2012/125886 expõe compostos com núcleo pirrolo -[1,2 -b] -piridazina -6 -

carboxamida da fórmula Rn o ; LOS R' q Noz H

N na forma de inibidores de JAK3 e/ou JAK1l seletivos sobre JAK2 e medicamentos potenciais para o tratamento de enfermidades inflamatórias e auto -imunológicos crônicas.

[008] o documento WO2011/014817 expõe compostos inibidores de JAK3 com núcleo heterocíclico bicíclico da fórmula R34, -(CHo))R?

N —— & Nº 4X

RÉ NO OX somente derivados com nucleo de pirrolo -[1,2-b]-piridazina r-6-carboxamida sendo expostos como compostos específicos.

[009] o documento US2010/0105661 expõe compostos com núcleo de pirrolo [2,3 -b] piridina da fórmula

É N. XS Oo

ANA

OCR como inibidores de quinase JAK3 para o uso em enfermidades associadas com transdução de sinal de citocinas indesejadas ou anormais.

Sumário da Invenção

[0010] Existe uma necessidade de novos compostos que exibam a capacidade da inibição da quinase JAK de alta eficácia e/ou seletividade que potencialmente poderia ser útil no tratamento de enfermidades inflamatórias e auto -imunológicos. Este problema é solucionado pela presente invenção.

[0011] O objetivo da invenção é um composto da formula geral (1)

AOS R SIA 1

NH O Fa

ZN

CANA (1) em que R, representa: - fenil substituído por um ou dois substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halogênio e C,7 -C3; alcoxi; ou - heteroarila de 6 elementos com 1 ou 2 átomos de nitrogênio, que é não substituído ou substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de: —- NH, - halogênio, - alquila Ci-Ca, - alcoxila C;,-C3, e —- heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste de N e O, ou seu sal de adição de ácido.

[0012] Os compostos da fórmula (1) têm a capacidade de inibição seletiva das cinases JAK3 e/ou JAK1 sobre JAK2 e podem ser utilizados no tratamento de enfermidades auto-imunológicos e inflamatórias.

[0013] De acordo com outro aspecto, a invenção refere-se também ao composto da fórmula (1) tal como definido anteriormente para o uso na forma de um medicamento.

[0014] De acordo com outro aspecto, a invenção refere-se também a uma composição farmacêutica que compreende o composto da fórmula (1) tal como definido anteriormente no presente caso.

[0015] De acordo com outro aspecto, a invenção refere -se também ao uso do composto da fórmula(I) tal como se encontra definido anteriormente no presente caso para a preparação de um medicamento para o uso no tratamento de enfermidades auto-imunológicos e inflamatórias.

[0016] De acordo com outro aspecto, a invenção refere-se também a um método de tratamento de enfermidades auto-imunológicos e inflamatórias em um paciente mamífero que compreende administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto da fórmula (1) tal como se encontra definido anteriormente neste contexto.

[0017] De acordo com outro aspecto, a invenção refere -se também ao composto da fórmula (TI) tal como se encontra definido anteriormente no presente caso para o uso em um método de tratamento "—* de enfermidades autor imunológicos e inflamatórias em um paciente mamífero.

Descrição detalhada da invenção

[0018] Concretizações preferidas da invenção encontram -se descritas na descrição detalhada seguinte e nas reivindicações em anexo. Vários aspectos da invenção são definidos mo presente caso de forma mais detalhada. Cada um dos aspectos assim definidos pode ser combinado com qualquer outro aspecto ou aspectos, a não ser que de outro modo claramente especificado. Em particular, qualquer característica indicada como preferencial ou vantajosa pode ser combinada com qualquer outra característica ou características indicadas como preferencial ou vantajosa.

[0019] A referência ao longo da descrição a "uma das modalidades" ou "uma modalidade" significa que uma característica, estrutura ou características particulares descritas em conexão com esta modalidade estão compreendidas em pelo menos uma modalidade da presente invenção. Deste modo, quaisquer ocorrências da frase "em uma modalidade" ou "em uma modalidade" em várias partes da presente descrição não necessariamente se relacionam com a mesma, sendo que podem. Além disso, características, estruturas ou características particulares podem ser combinadas de qualquer maneira adequada, tal como será apreciado por uma pessoa versada na técnica desta exposição, em uma ou mais concretizações. Além disso, muito embora algumas concretizações descritas neste documento abranjam algumas, mas não outras, características compreendidas em outras concretizações, combinações de características de várias concretizações podem ser abrangidas pelo escopo da invenção e formar vários exemplos de concretizações, tal como será apreciado por uma pessoa versada na técnica. Por exemplo, nas reivindicações em anexo, qualquer modalidade reivindicada pode ser usada em qualquer combinação.

[0020] De acordo com um primeiro aspecto, a invenção proporciona um composto da seguinte fórmula (1)

AS Rn ELA 1

NH O vo.

AZ NO (1) em que R, representa: - fenil substituído por um ou dois substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halogênio e C1-C3 alcoxi; ou - heteroarila de 6 elementos com 1 ou 2 átomos de nitrogênio, que é não substituído ou substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de: - NH, - halogênio, - alquila Ci-Ca, - alcoxila C;,-C3, e - heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste de N e O; ou seu sal de adição de ácido.

[0021] De acordo com uma concretização da invenção, R, representa fenil substituído por um ou dois substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de átomo de halogênio e C;, -C; alcoxila.

[0022] De acordo com uma concretização da invenção, R, representa fenil substituído por um ou dois átomos de halogênio, de preferência um ou dois átomos de flúor. Vantajosamente, R, representa fenil substituído por um átomo de flúor. Também de forma vantajosa, R;, representa fenil substituído por dois átomos de flúor.

[0023] De acordo com outra concretização da invenção, R, representa fenil substituído por um ou dois grupos C, -C; alcoxila, de preferência grupos metoxi, especialmente por um grupo metoxi, que inclui 2-7 metoxifenil, 4-metoxifenil e 5-metoxifenil, em particular 4-metoxifenil e 5-metoxifenil.

[0024] De acordo com uma concretização da invenção, RR; representa fenil substituído por um átomo de halogênio, de preferência um átomo de flúor, e um grupo C1- C3 alcoxi, especialmente metoxi. Vantajosamente Ri representa fenil substituído por um átomo de flúor e um grupo metoxi. Exemplos de tal substituição inclui 2-fluoro -5-metoxifenil e 2-fluoro-4-metoxifenil, especialmente 2- fluoro-5-metoxifenil.

[0025] De acordo com outra concretização da invenção, R, representa heteroarila de 6 elementos, que compreende 1 ou 2 átomos de nitrogênio, não substituídos ou substituídos por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de NH;; halogênio; C1;-C. alquila; C1;-C;3 alcoxila; e heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste de Neo.

[0026] De acordo com uma concretização, R, representa heteroarila de 6 elementos não substituído, em particular piridinil ou pirimidinil.

[0027] De acordo com outra concretização, R, representa heteroarila de 6 elementos, em particular piridinil ou pirimidinil, substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de NH;; halogênio; C, -C, alquila; C, -c? alcoxila; e heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionado a partir do grupo que consiste de N e O.

[0028] Em particular, o heteroarila de 6 elementos mencionado anteriormente no presente caso, de preferência piridinil ou pirimidinil, é substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de NH; halogênio, especialmente flúor; C1-C4 alquila, especialmente metil ou etil; C, -C; alcoxila, especialmente metoxil ou etoxil; e heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionado a partir do grupo que consiste de N e O, especialmente 4-morfolinil. De uma maneira vantajosa, na concretização mencionada anteriormente no presente caso Ry representa piridin -2 - il, piridin-3-il ou piridin-4-il, ou R;1 representa pirimidin-2-il ou pirimidin-5-il.

[0029] Em particular, o heteroarila de 6 elementos mencionado anteriormente no presente caso é compreendido por piridinil, especialmente piridin-2-il, piridin-3-il ou piridin-4-il, substituído por C1-C3a= alcoxila, especialmente por metoxila ou etoxila.

[0030] Em particular, o heteroarila de 6 elementos mencionado anteriormente no presente caso é compreendido por piridinil, especialmente piridin -2 -il, piridin-3-il ou piridin-4-il, substituído por metoxil.

[0031] Em particular, o heteroarila de 6 elementos mencionado anteriormente no presente caso é compreendido por pirimidinil, especialmente pirimidin-2-il ou pirimidin-5-il, substituído por Cl-C3-alcoxila, especialmente por metoxil ou etoxil.

Definições

[0032] Da forma que é utilizado no presente caso, o termo “alquila” isoladamente ou como uma parte de outro substituinte, refere -se a um grupo de hidrocarboneto dotado de cadeia normal ou ramificada, ligada com ligações de carbono -carbono únicas, e tendo o número de átomos de carbono indicado na definição, por exemplo, C1-C4 ou C1-C3, O número dado depois do átomo de carbono refere -se ao número de átomos de carbono que pode ser compreendido no grupo. Deste modo, por exemplo, Cl -C4 -alquila significa alquila que é dotado de 1 a 4 átomos de carbono, e C1-C3 alquila significa alquila que é dotado de 1 a 3 átomos de carbono. Os grupos C1-C3 alquila são compreendidos por metil, etil, n-propil, e iso-propil, e os grupos C1-C4 alquila são compreendidos por metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil, sec-butil, e terc-butil.

[0033] Da forma que é utilizado no presente caso, o termo “heterociclil”refere -se a um substituinte derivado a partir do grupo heterocíclico, que é o grupo de hidrocarboneto saturado alicíclico que é dotado do número indicado de membros de anel e número indicado e tipo de heteroátomos. “Heterociclil” inclui anéis heterocíclicos saturados de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de oxigênio (O) e nitrogênio (N), tais como morfolinil, piperidinil, piperazinil, tetra hidropiranil e dioxanil, em particular piperidinil, morfolinil e pirrolidinil.

[0034] Da forma que é utilizado no presente caso, o termo “heteroarila” refere -se a um substituinte derivado do grupo heteroarila, que é o grupo cíclico de hidrocarboneto aromático que é dotado do número indicado de elementos de anel e número indicado e tipo de heteroátomos. heteroarila de 6 elementos incluem em particular piridinil, piridazinil, pirimidinil e pirazinil, especialmente piridinil e pirimidinil.

[0035] Halogênio refere-se a átomos de flúor (EF), cloro (Cl), bromo (Br) ou iodo (II), especialmente átomo de flúor.

[0036] Os sais de adição ácida dos compostos da fórmula (1) da invenção englobam em particular os sais com ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são os preferidos. Os ácidos orgânicos e inorgânicos que podem formar os sais farmaceuticamente aceitáveis com os compostos que compreendem o átomo de nitrogênio básico são amplamente conhecidos na técnica. Os sais com ácidos inorgânicos incluem, em particular, os sais de ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico (VI), ácido nítrico (V) e ácido fosfórico (V). Os sais com ácidos orgânicos incluem, em particular, os sais de ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenos sulfônico, ácido benzenos sulfônico, ácido naftaleno dissulfônico, ácido acético, ácido propiônico, ácido lático, ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico e ácido benzóico. . Deverá entender -se que a invenção também inclui em seu escopo outros sais além dos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, que são de utilidade especialmente como intermediários nos processos de preparação, isolamento e purificação dos compostos da presente invenção.

[0037] Os sais de adição de ácido podem ser preparados de uma maneira comumente conhecida como tal. Tipicamente, um composto da fórmula (LI), por exemplo, em uma solução em solvente orgânico, reage com um ácido em uma solução aquosa ou alcoólica aquosa, como solução aquosa metanólica ou etanólica, e o sal precipitado é isolado de uma maneira convencional, por exemplo, por meio de filtração, lavagem e secagem.

[0038] Os compostos particulares da invenção são selecionados a partir do grupo dos seguintes compostos e seus sais de adição de ácido, incluindo os sais de adição de ácido inorgânicos e orgânicos: 1) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il) amino)-2-(4-metoxifenil)-pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida; 2) (R) -7T- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il) amino) -2- (2-fluoro-5-metoxifenil) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida; 3) (R) -7T- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il) amino) -2-(piridin-3-il)-pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida; 4) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-

dimetilpiperidin-4-11) amino) -2- (6-metoxi-piridin-3- il)pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

5) (R) -7T- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-1i1l) amino) -2-(6-etoxi-piridin-3-1il pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

6) (R) -2- (6-Aminopiridin-3-il)-7-((1-(6- cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetilpiperidin-4-il) amino) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

7) (R) -7T- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-1i1) amino) -2- (6-morfolino-piridin-3-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

8) (R) -7T- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il) amino) -2- (2-metoxi-pirimidin-5- il)pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

9) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-i1l)-3,3- dimetilpiperidin-4-il) amino)-2-(2-etoxi-pirimidin-5-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

10) (R) -7T- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-1i1) amino) -2- (6-fluoro-piridin-3-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

11) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il) amino) -2-(6-metoxi-piridin-2-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

12) (R) -7T- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il) amino) -2-(2-metilpiridin-4-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

13) (R) -7T- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(2-morfolinopiridin-4-il)- pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida;

14) Cloridrato de (R)-7-((1-(6-Cianopiridazin-3

—il)-3,3-dimetilpiperidin-4-il) amino)-2-(6-metoxipiridin-2 —-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida.

[0039] De acordo com outro aspecto a invenção refere -se ao composto da fórmula (A) tal como se encontra definido anteriormente no presente caso e de acordo com qualquer uma das concretizações apresentadas para o uso como um medicamento.

[0040] De acordo com outro aspecto a invenção refere -se a uma composição farmacêutica que compreende o composto da fórmula(A) tal como se encontra definido anteriormente no presente caso e de acordo com qualquer uma das concretizações apresentadas como o ingrediente ativo, em combinação com excipientes farmacêuticos.

[0041] Como inibidores da quinase JAK1/JAK3, os compostos da fórmula (A) tais como se encontram definidos anteriormente no presente caso podem ser úteis no tratamento de enfermidades inflamatórias e auto- imunológicos crônicas.

[0042] Por essa razão, a invenção refere -se ao composto da fórmula (I) tal como se encontra definido anteriormente no presente caso para o uso em um método de tratamento de enfermidades inflamatórias e auto- imunológicos crônicas em mamíferos, incluindo seres humanos.

[0043] Por essa razão, a invenção refere -se ao uso do composto da fórmula (1) tal como se encontra definido anteriormente no presente caso para a preparação de um medicamento para o uso em um método de tratamento de enfermidades inflamatórias e auto-imunológicas em mamíferos, incluindo seres humanos.

[0044] A invenção refere-se também a um método de tratamento de enfermidades inflamatórias e auto- imunológicas crônicas em mamíferos, incluindo seres humanos, que compreende administrar aos referidos mamíferos uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto da fórmula (I) tal como se encontra definido anteriormente no presente caso ou uma composição farmacêutica que compreende o composto da fórmula (I) tal como se encontra definido anteriormente.

[0045] As enfermidades inflamatórias e auto - imunológicas crônicas incluem as enfermidades sistêmicas de um tecido de conexão, em particular artrite reumatóide, artrite reativa, artrite psoriática, espondilite anquilosante, lúpus eritematoso sistêmico, esclerodermia; enfermidades inflamatórias intestinais inespecíficas, em particular doença de Crohn e colite ulcerativa; enfermidades das glândulas supra -renais, em particular esclerose múltipla e miastenia; enfermidades da pele, em particular psoríase; e asma.

[0046] Os compostos da invenção também podem encontrar uso para a prevenção da rejeição de transplantes em transplantologia.

[0047] Os compostos da invenção podem ser preparados por meio do processo apresentado no Esquema 1,

[0048] Mais adiante são usadas as seguintes abreviaturas: AcCcOEt-acetato de etil; Boc-grupo terc- butoxicarbonil; CN-grupo nitrila; (COCl)-cloreto de oxalil; Et-etil; EtO-etoxil; LiOH-hidróxido de lítio; Me- metil; MeCN-acetonitrila; MS-ESI-espectroscopia de massa por eletropulverização; m/z - relação massa/carga; NH,.OH- amônia aquosa, amônia água; NMR-ressonância magnética nuclear; Pd/C-paládio em carbono; POCl3;-oxicloreto de fósforo (V); TFA-ácido trifluoroacético.

Esquema 1 ne Ao OK N. N. Boc” . <O — Im so dh PO dh MO " oH O co W v N. N ss Ns NH O mA) NH O nm" NH O mA" A pos A wo vm x N. = N. on N. LA om eo LA om Por LA, um NH O > NH O ==> NH O x NC Nes x" XMb = Ns 1

[0049] Tal como se encontra ilustrado no Esquema 1, os compostos da fórmula (1) são preparados partindo-se de 5-amino-3-bromo-lH-pirazol da fórmula IT.

[0050] O composto da fórmula II é ciclizado com dietil 2- (etoximetileno) -malonato III usado na quantidade de 1 a 2 equivalentes molares, em ácido acético sob temperatura de refluxo, para se obter pirazolo [1,2-b] pirimidina da fórmula IV.

[0051] O grupo hidroxi do composto da fórmula IV é substituído por cloro usando-se reagentes tais como oxicloreto de fósforo (V), pentacloreto de fósforo, cloreto de tionil, preferencialmente oxicloreto de fósforo (V), na quantidade de 2 a 30 equivalentes molares, na presença de um amina tal como trietilamina, diisopropil-etilamina, piridina, quinolina, N, N-dimetil anilina, na quantidade de 1 a 5 equivalentes molares ou sem amina, com a adição ou sem um sal tal como tetra etilamônio, tetra butilamônio ou brometo ou cloreto de benzil trietilamônio, na quantidade de 1 a 3 equivalentes molares, em solvente aprótico, tais como acetonitrila, tetra-hidrofurano, dioxano, tolueno, dimetilformamida, cloreto de metileno, clorofórmio ou sem solvente, sob 60 a 120ºC ou em refluxo.

[0052] O composto da fórmula V é levado a reagir com terc-butil (R)-4-amino-3,3-dimetilpiperidina-l1- carboxilato VI, obtido de acordo com o procedimento descrito no documento WO 2014/039595 Al (Intermediário 4), usado em a quantidade de 1 a 1,5 equivalentes molares, na presença de uma amina como trietilamina, N, N-diisopropil etilamina ou piridina na quantidade de 1 a 3 equivalentes molares, de O a 30ºC, a fim de se obter o composto da fórmula VII.

[0053] Em seguida, o grupo éster no composto da fórmula VII é hidrolisado para obter o ácido VIII usando -se uma base como hidróxido de metal, de preferência hidróxido de lítio, na quantidade de 2 a 10 equivalentes molares, em uma mistura de solventes, tais como água/álcool, de preferência água/metanol, sob de 20 a 80ºC, preferencialmente de 40 a 55ºC.

[0054] O composto da fórmula VIII é convertido em uma amida correspondente da fórmula IX em um processo de duas etapas. Na primeira etapa, o cloreto de ácido é preparado na reação com cloreto de oxalil na quantidade de 2 a 4 equivalentes molares, com quantidade catalítica de dimetilformamida, de O a 30ºC. Posteriormente, o cloreto ácido é levado a reagir com amônia aquosa na quantidade de a 20 equivalentes molares sob de O a 30ºC.

[0055] A amina que protege o grupo terc- butoxicarbonil no composto da fórmula IX é removida usando ácido trifluoroacético na quantidade de 10 a 40 equivalentes molares em solução de diclorometano sob de 0 a 30ºC, para se obter o composto da fórmula X.

[0056] Em seguida, o composto da fórmula X é arilado usando -se 6 -cloropiridazina -3 -carbonitrila na quantidade de 1 a 1,5 equivalentes molares na presença de uma amina tal como trietilamina, N, N -diisopropil etilamina ou piridina na quantidade de 2 a 10 equivalentes molares, em solvente aprótico tais como dimetilformamida ou diclorometano ou solvente prótico tais como metanol ou etanol, para se obter o composto da fórmula XI.

[0057] Na última etapa, o composto da fórmula XI é levado a reagir em uma reação de acoplamento da Suzuki com o ácido borônico XIIa ou éster de pinacol do ácido borônico da fórmula XIIb na quantidade de 1 a 2 equivalentes molares, na presença de um catalisador de paládio, tal como o acetato de paládio (II), bis (dibenzilideno acetona) paládio (0), [1,1 -bis (difenilfosfina) ferroceno] paládio (II) adutor de dicloreto de diclorometano ou outro catalisador de reação convencional da reação de Suzuki na quantidade de 0,05 a 0,2 equivalentes molares, com a adição de uma base inorgânica, tais como sódio, carbonato de potássio ou césio, fosfato de sódio ou potássio, lítio, hidróxido de sódio ou potássio, ou base orgânica, tais como terc - butanolato de sódio ou potássio, na quantidade de 1 a 3 molares equivalentes, usados como um sólido ou como uma solução aquosa, em um solvente tais como tolueno, xileno, tetra -hidrofurano, dioxano, etanol, alcoóis alifáticos C;3 a C;“, dimetil formamida ou dimetoxietano, sob de 80 a 140ºC, de preferência sob temperatura de refluxo.

[0058] O composto da fórmula VI (terc-butil (R) -4-amino-3,3-dimetilpiperidina-l-carboxilato) pode ser obtido de acordo com os procedimentos descritos nos documentos US2005/182095Al e WO2014/039595 Al, de acordo com o Esquema 3,

[0059] O composto da fórmula VI pode ser obtido a partir de terc-butil 4-oxopiperidina-l-carboxilato XVIII disponível comercialmente na reação com agente de metilação, tal como iodometano, usado na quantidade de 2 a 3 equivalentes molares na presença de uma base, tal como hidreto de sódio, metanolato de sódio, terc-butanolato de sódio, n-butil-lítio, carbonato de potássio, preferencialmente hidreto de sódio, usado na quantidade de 2 a 3 equivalentes molares em um solvente aprótico, tais como tetra-hidrofurano, tolueno, diclorometano, acetonitrila, preferencialmente tetra -hidrofurano, para se obter terc-butil 3,3-dimetil-4-oxopiperidina-l-carboxilato XIX.

[0060] Na etapa seguinte, o composto da fórmula XIX é convertido em uma reação de aminação redutora de duas etapas.

[0061] Primeiro, o composto da fórmula XIX é levado a reagir com o (R)-l-feniletano-l-amina XX usado na quantidade de 1 a 2 equivalentes molares, opcionalmente na presença de um ácido tais como ácido para-tolueno sulfônico, benzeno sulfônico ou sulfúrico , de preferência ácido para-tolueno sulfônico, utilizado na quantidade de 0,05 a 1 equivalente molar em um solvente aprótico, tal como tolueno, benzeno ou xileno, preferencialmente tolueno, sob a temperatura de refluxo em um reator com purgador Dean -Stark para destilação azeotrópica, para se obter terc- butil (R)-3,3-dimetil-4-((l1-feniletil) imino) piperidina-1 -carboxilato da fórmula XXI, que é utilizada para outras reações sem separação.

[0062] Em seguida, a mistura de reação com o composto da fórmula XXI é resfriada para a temperatura de - 78 a 0ºC e álcool, tais como metanol, etanol, isopropanol preferencialmente etanol, e redutor, tais como boroidreto de sódio, cianoboroidreto de sódio ou triacetoxiboro- hidreto de sódio , são adicionados na quantidade de 2 a 3 equivalentes molares, para se obter terc-butil (R)-3,3- dimetil-4-(((R)-l-feniletil) amino) piperidina-l1- carboxilato da fórmula XXII.

[0063] Na última etapa, o grupo amina de proteção do grupo l-feniletil no composto da fórmula XXII é removido. O grupo l-feniletil é removido por redução usando -se o catalisador hidrogênio e Pd/C, usado na quantidade de 0,01 a 0,02 equivalentes molares, em um solvente tais como metanol, etanol, isopropanol, preferencialmente etanol, para se obter o composto da fórmula VI, isto é terc-butil de ((R)-4-amino-3,3-dimetilpiperidina-l-carboxilato.

[0064] O composto da fórmula II é compreendido por (5-amino-3-bromo-lH-pirazole) disponível comercialmente.

Também pode ser obtido por meio de um método apresentado no Esquema 2 a partir de 1H -pirazol XIV utilizando-se procedimentos descritos em “J.

Org.

Chem. 1986, 51, 4656 -4660 e J.

Med.

Chem. 2010, 53, 1238 -1249,

+ z e . —z Ss em

IT z EA m | |

É x 7 | õ & =z o

IL zz2 E z E - aà 1 & x = =z E õ e ] ==z " o o

Z z = o A 1 3 z LS = =2 — » x ã x é : z Zz x “x " o ai” QN & mm o: zo” o 7 = É 3 3 a : a HE a HE z Tr > = 2 Ta x = a = ã —=z Z â 3 3

H

S s 2 s & &

[0065] A invenção também proporciona uma composição farmacêutica que compreende o composto da fórmula (1) tal como se encontra definido anteriormente no presente caso como o ingrediente ativo, em uma mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0066] No tratamento de enfermidades e distúrbios anteriormente descritos no presente caso, os compostos da fórmula (1) da invenção podem ser administrados como um composto químico, não obstante, de um modo geral serão utilizados na forma de uma composição farmacêutica que compreende o composto da invenção ou seu sal farmaceuticamente aceitável em combinação com carreadores e substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis.

[0067] No tratamento de enfermidades e distúrbios mencionado anteriormente no presente caso as composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas por qualquer caminho adequado, de preferência por via oral, parenteral ou inalação e estarão na forma de um preparado destinado ao uso na medicina, na dependência da via de administração pretendida.

[0068] As composições para administração oral podem ter a forma de preparações sólidas ou líquidas. As preparações sólidas podem ter, por exemplo, a forma de um comprimido ou cápsula produzida de maneira convencional a partir de excipientes inativos farmaceuticamente aceitáveis, tais como aglutinantes (por exemplo, amido de milho pré-gelatinizado, polivinil pirrolidona ou hidroxipropil metilcelulose); cargas (por exemplo lactose,

sacarose, carboximetil celulose, celulose micro cristalina ou hidrogeno fosfato de cálcio); agentes de desintegração (por exemplo, crospovidona, amido de milho ou amido glicolato de sódio); lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco ou sílica), agentes umectantes (por exemplo, lauril sulfato de sódio). Os comprimidos podem ser revestidos com revestimentos amplamente conhecidos na técnica, tais como revestimentos simples, revestimentos de liberação retardada/controlada ou revestimentos entéricos. As preparações líquidas para administração oral podem estar na forma de, por exemplo, soluções, xaropes ou suspensões, ou podem ter a forma de produto sólido seco para reconstituição em água ou outro veículo adequado antes do uso. Tais preparações líquidas podem ser preparadas usando -se meios convencionais a partir de excipientes inativos farmaceuticamente aceitáveis, tais como agentes de suspensão (por exemplo, xarope de sorbitol, derivados de celulose ou óleos comestíveis hidrogenados), emulsificantes (por exemplo, lecitina ou goma arábica), veículos não aquosos (por exemplo, óleo mandélico, ésteres de óleo, álcool etílico ou óleos vegetais fracionados) e conservantes (por exemplo, p-hidroxibenzoato de metil ou propil ou ácido sórbico). As preparações também podem incluir agentes de tamponamento, aromatizantes, corantes e adoçantes adequados.

[0069] As preparações para administração oral podem ser formuladas de modo a obter liberação controlada do composto ativo usando-se métodos que são do conhecimento da pessoa versada na técnica.

[0070] A via de administração parenteral inclui a administração por injeções intramusculares e intravenosas, bem como infusões intravenosas. As composições para administração parentérica podem ter, por exemplo, a configuração de uma forma de dosagem unitária tais como ampolas ou recipientes de dosagens múltiplas, com a adição de um conservante. As composições podem ter a forma de suspensão, solução ou emulsão em um veículo oleoso ou aquoso, e podem incluir excipientes, tais como agentes de suspensão, estabilizadores e/ou agentes de dispersão. De uma forma alternativa, o ingrediente ativo pode ser formulado como um pó para reconstituição antes de ser usado em um veículo adequado, por exemplo, água estéril, isenta de pirogênio.

[0071] As composições para administração por via de inalação podem ter a forma de inalação e ser administradas por nebulização. Tais preparações incluem um composto ativo e substância (s) auxiliar (es) administrada (s) tal como aerossol, isto é, um sistema de pequenas partículas finamente divididas de substância sólida ou líquida suspensa em um gás. As substâncias auxiliares usadas na nebulização podem ser, por exemplo, cloreto de sódio como agente de isotonicidade, ácidos inorgânicos e hidróxidos tais como reguladores e estabilizadores de pH, cloreto de benzalcônio como conservante, citrato de sódio como agente tampão, polissorbato 80 como agente tensioativo, etanol e propileno glicol como um co-solvente e sulfatos (VI) como anti-oxidantes. As preparações para administração por via inaladora podem ter a forma de inaladores de pressão ou inaladores de pó anidro.

[0072] O método de tratamento com o uso dos compostos da presente invenção compreenderá a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da invenção, preferencialmente na forma de uma composição farmacêutica, ao paciente com necessidade de tal tratamento.

[0073] A dosagem proposta dos compostos da invenção varia desde cerca de 0,1 a cerca de 1000 mg, por dia, em dose única ou em doses divididas. Será evidente para uma pessoa versada na técnica que a seleção de uma dosagem necessária para se obter o efeito biológico desejável “dependerá de muitos fatores, por exemplo composto específico, a indicação, o modo de administração, a idade e a condição de um paciente e que a dosagem exata será determinada por um médico responsável.

Exemplos

[0074] Os exemplos expostos em seguida são para fins ilustrativos e apresentam métodos sintéticos convencionais usados para síntese de intermediários utilizados na preparação dos compostos da invenção.

Intermediários

[0075] Os intermediários para a preparação dos compostos da invenção são preparados da forma descrita em seguida.

Intermediário Pl, Composto VI terc -butil (R)-4-amino-3,3- dimetilpiperidina-l-carboxilato

NH,

S oo + Etapa A: Composto XIX -terc-butil 3,3-dimetil-4- oxopiperidina-l-carboxilato o

ÇS oo +

[0077] À solução de terc-butil 4-oxopiperidina -l-carboxilato XVIII (50,0 g, 246 mmol) em tetrahidrofurano (1000 mL), resfriada to 0ºC, foi adicionado por partes hidreto de sódio (suspensão a 60% em óleo de parafina, 21,6 g, 541 mmol). A mistura de reação foi submetida a agitação durante 2 horas sob 0ºC. A esta mistura foi adicionada gota a gota solução de iodometano (34 mL, 541 mmol) em tetrahidrofurano (60 mL) durante 15 minutos. A mistura de reação foi submetida a agitação durante outras 2 horas sob 0ºC. À mistura foi adicionada solução saturada de cloreto de amônio (500 mL). A mistura foi extraída com acetato de etil (3 x 500 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução salina, submetidas a secagem (NazSO's) e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado com cromatografia de coluna (sílica gel, eluente: hexano : ACOEt = 9:1, v/v). O produto foi purificado por meio de cristalização a partir de hexano quente. O produto foi obtido na forma de cristais de cor branca (39,8 g, 175 mmol), rendimento 71%. *H NMR (300 MHz, DMSO-ds;) 5 3,62 (t,

J=6,4 Hz, 1H), 3,39 (s, 1H), 2,42 (t, J=6,4 Hz, 1H), 1,467 1,39 (m, 6H), 0,99 (s, 3H). Etapa B: Composto XXII - terc-butil (R)-3,3- dimetil-4-(((R)-l-fenil etil)amino)piperidina-l-carboxilato es.

S oo +

[0078] À solução de terc -butil 3,3 -dimetil - 4 -oxopiperidina-l-carboxilato XIX (100 g, 418 mmol) em tolueno (1500 mL) foram adicionados (R)-l-feniletano-l- amina XX (59,7 mL, 460 mmol) e ácido para -tolueno sulfônico (0,80 gq, 4,2 mmol). A mistura de reação foi submetida a agitação sob refluxo sob purgador Dean -Stark azeotrópico durante 24 horas. a mistura assim obtida que continha o composto XXI foi então resfriada para -70'C sem a sua separação, adicionada com etanol (100 mL) e boro hidreto de sódio (19,0 g, 502 mmol) foi adicionado por partes. A mistura de reação foi submetida a agitação durante 3 horas enquanto a temperatura era elevada lentamente para a temperatura ambiente. A mistura foi acrescida com água(300 mL) e concentrada para 1/3 de seu volume. A mistura foi extraída com ACcOEt (2 x 300 mL). As fases orgânicas foram combinadas, submetidas a secagem (Na;SO0s) e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna (sílica gel, eluente hexano : ACOEt = 9:1, v/v). O produto foi obtido na forma de um óleo incolor (67,3 g, 418 mmol) com o rendimento de 48%. *H NMR (300 MHz, DMSO -ds) 5 7,37 -7,25 (m, 4H), 7,22 —-7,15 (my, 1H), 3,85 -3,70 (m, 1H), 3,72 (q, J=6,5 Hz, 1H), 3,58 -3,42 (my, 1H), 2,70 -2,40 (m, 2H), 2,16 (dd, 1H, J=10,7, 6,51 Hz, 1H), 1,44 (s, 1H), 1,36 (s, 9H) 1,22 (dy, J=6,5 Hz, 3H), 1,18 -1,02 (m, 1H), 0,92 (s, 3H) 0,76 (s, 3H).

Etapa C: Composto VI - terc-butil (R)-4-amino-3,3 -dimetilpiperidina-l-carboxilato NH,

CS oo +—

[0079] A uma solução desgaseificada de terc- butil (R) -3, 3-dimetil-4-(((R)-l-fenil-etil)-amino)- piperidina-l-carboxilato XXII (44,9 g, 135 mmol) em etanol (1150 mL) foi adicionado Pd/C a 10% (4,0 g). A mistura de reação foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogênio durante 20 horas. A mistura foi filtrada através de leito de Celite concentrada sob pressão reduzida. o resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna (sílica gel, eluente: ACOEt a ACOEt : metanol = 50:50, v/v). O produto foi obtido na forma de um óleo incolor (26,5 g, 116 mmol) com o rendimento de 86%. *H NMR (300 MHz, CDCl;) 5 4,20 -3,88 (m, 1H), 3,85 -3,53 (m, 1H), 2,95 -2,70 (m, 1H), 2,60 -2,45 (m, 1H), 2,50 (dd, J=10,9, 4,2 Hz, 1H), 1,68 -1,54 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,45 —-1,32 (m, 1H), 1,13 (bs, 2H), 0,93 (s, 3H), 0,82 (s, 3H). Intermediário P2: (R)-2-Bromo-7-((1-(6-ciano piridazin-3- 11) -3,3-dimetilpiperidin-4-il) amino) pirazolo [1,5-a]

pirimidina-6-carboxamida (composto XII) N.

NH O O

AX Etapa 1: Etil 2-bromo-7-hidroxipirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxilato IV N. oH O

[0081] À solução de 5 -amino -3 -bromo -1H - pirazol II (20,0 g, 121 mmol) em ácido acético (200 mL) foi adicionado dietil etoximetileno malonato III (25,9 mL, 127 mmol). A mistura de reação foi aquecida sob refluxo com agitação durante 20 horas. Então a mistura foi resfriada para a temperatura ambiente, o sólido precipitado foi filtrado, lavado com etanol e éter dietílico. O produto foi obtido na forma de um sólido cremoso (27,9 gq, 97,4 mmol), com o rendimento de 81%. MS-ESI: (m/z) calculado para CsH;BrN303 [M-H] = 284,0, encontrado 284,0, HH NMR (300 MHz, DMSO -d;) 5 8,37 (s, 1H), 6,15 (s, 1H), 4,50 (bs, 1H), 4,14 (q, J=7,1 Hz, 2H), 1,24 (t, J=7,1 Hz, 3H). Etapa 2: Etil 2-bromo-7T-cloropirazolo [1,5-a] pirimidina-6 -carboxilato V

N a o

[0082] Trietilamina (22,9 mL, 163 mmol) foi adicionada à solução de etil 2-bromo-7-hidroxipirazolo

[1,5-a] pirimidina-6-carboxilato IV (9,34 g, 32,6 mmol) obtido na Etapa 1 e cloreto de tetrabutil amônio (18,9 g, 65,3 mmol) em acetonitrila (180 mL). Subsequentemente, oxicloreto de fósforo (V) (30,4 mL, 326 mmol) foi adicionado gota a gota durante 15 minutos. A mistura de reação foi aquecida sob refluxo com agitação durante 20 horas. Depois de resfriamento para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi vazada para a mistura de carbonato de sódio saturado e gelo. A mistura foi extraída com acetato de etil (3 x 300 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução salina, submetidas a secagem (Na;SO0s) e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna (sílica gel, eluente: heptano : ACOEt = 9:1 a 8:2, v/v). O produto foi obtido na forma de um sólido amorfo de cor amarelo claro (6,86 9g, 22,5 mmol) com o rendimento de 69%. MS -ESI: (m/z) calculado para CoHsBrClN;O0, [M+H]* = 303,9, encontrado 303,9, *H NMR (300 MHz, CDCl;) 5 8,97 (s, 1H), 6,90 (s, 1H), 4,49 (q, J=7,1 Hz, 2H), 1,46 (t, J=7,1 Hz, 3H). Etapa 3: Etil (R)-2-bromo-7-((1- (terc-butoxicarbonil)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)-amino) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6 -carboxilato VII

N

NH O x

S

[0083] Adicionou-se trietilamina (8,05 mL, 57,7 mmol) à solução de acetonitrila (150 mL) de 2-bromo-7

-cloropirazolo [1,5-a] piridimina-6-carboxilato de etil VI (5,86 g, 19,2 mmol) obtido na etapa 2. Subsequentemente, à mistura foi adicionada gota a gota solução de terc-butil (R) -4-amino-3,3-dimetil piperidina-l-carboxilato VI (Intermediário Pl) (4,61 g, 20,2 mmol) em acetonitrila (30 mL) durante 15 minutos. A mistura de reação foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 20 horas e então concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em ACOEt (100 mL) e foi adicionada água (100 mL). Depois de separação das fases, a fase aquosa foi extraída com ACOEt (2 x 100 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução salina, submetidas a secagem (Na7sSO,s) e evaporadas sob pressão reduzida. [6] resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna (sílica gel, eluente: heptano:ACOEt = 95:5 to 85:15, v/v). O produto foi obtido na forma de um sólido amorfo cremoso (8,08 g, 16,3 mmol) com o rendimento de 85%. MS -ESI: (m/z) calculado para Cr, H3)BrNs5O, [M+H]” = 496,2, encontrado 496,2, *H NMR (300 MHz, CDCl;) 53 9,84 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,70 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,32 (t, J=8,6 Hz, 1H), 4,38 (q, I=7,1 Hz, 2H), 4,20-3,95 (m, 1H), 3,93-3,65 (my, 1H), 3,13-2,93 (m, 1H), 2,90-2,70 (m, 1H), 2,08-1,95 (m, 1H), 1,80-1,65 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,41 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,00 (s, 3H).

Etapa 4: Ácido (R)-2-Bromo-7-((1-(terc-butoxi carbonil)-3,3 -dimetil piperidin-4-il)-amino)-pirazolo [1,5-a] pirimidina -6-carboxílico VIII

N.

NH O x

Y

[0084] À solução de etil (R)-2-bromo-7-((1- (terc-butoxicarbonil)-3,3-dimetil piperidin-4-il)amino) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxilato VII (8,06 g, 16,2 mmol) obtido na Etapa 3 na mistura de etanol (200 mL) e água (50 mL) foi adicionado hidróxido de lítio (3,41 g, 81,2 mmol). A mistura foi aquecida sob 55ºC com agitação durante 90 minutos. Depois de resfriamento para a temperatura ambiente, o etanol foi evaporado a partir da mistura sob pressão reduzida. Ao resíduo foi adicionada água (100 mL) e subsequentemente solução aquosa 1M de ácido clorídrico até a precipitação de sólido de cor branca. O sólido foi filtrado, lavado com água e submetido a secagem. Então o sólido foi dissolvido em diclorometano, submetido a secagem (Na7zSO:) e evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto na forma de um sólido cremoso (7,37 g, 15,7 mmol) com o rendimento de 97% foi usado na etapa seguinte sem purificação. Etapa 5: terc-butil (R)-4-((2-bromo-6-carbamoil pirazolo [1,5-a] pirimidin-7-il) amino) -3,3-dimetil piperidin-l1- carboxilato IX N.

NH O x

Y

[0085] Ácido (R) -2-bromo-7-((1- (terc- butoxicarbonil)-3,3 -dimetilpiperidin-4-il)amino)pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxílico em bruto VIII (7,37 g9g, 15,7 mmol) proveniente da Etapa 4 foi dissolvido em diclorometano anidro (200 mL) sob atmosfera de argônio.

Depois de resfriamento a mistura foi resfriada para 0ºC, foi adicionado cloreto de oxalil (2,72 mL, 31,5 mmol). Então foi adicionada uma gota de dimetilformamida (0,5 mL). A mistura de reação foi submetida a agitação durante 30 minutes sob a temperatura ambiente.

Subsequentemente a mistura de reação foi evaporada sob pressão reduzida.

O resíduo foi dissolvido em diclorometano anidro (200 mL). À mistura foi adicionada amônia aquosa a 25% (24,2 mL, 157 mmol). A mistura de reação foi submetida a agitação durante minutos sob a temperatura ambiente, e diclorometano foi evaporado sob pressão reduzida.

Ao resíduo foi adicionada água (200 mL). A mistura foi extraída com AcCcOEt (3 x 200 mL). As fases orgânicas foram combinadas, submetidas a secagem (Na;SO0s), e evaporadas sob pressão reduzida.

O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna (sílica gel, eluente: diclorometano : metanol = 97:3, v/v). O produto foi obtido na forma de cristais de cor branca (5,21 g, 11,1 mmol) com o rendimento de 71%. MS -ESI: (m/z) calculado para Ci9HagBrNçO;z [M+H]" = 467,1, encontrado 467,1, *H NMR (300 MHz, CDCl3;) 3 10,72 (d, J=9,0 Hz, 1H), 8,35 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,04 (bs, 2H), 5,27 (t, J=8,4 Hz, 1H), 4,20-3,93 (m, 1H), 3,90-3,63 (m, 1H), 3,15-2,90 (mM, 1H), 2,90-2,67 (m, 1H), 2,02 (da, J=7,3, 3,4 Hz, 1H), 1,80-1,65 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,08 (s, 3H), 0,99 (s, 3H).

Etapa 6: (R)-2-Bromo-7-((3,3-dimetil piperidin-4 -il) amino) pirazolo [1,5-a] -pirimidina-6-carboxamida X N.

NH O LX

[0086] À solução de terc -butil (R)-4-((2- bromo-6-carbamoil pirazolo [1,5-a]-pirimidin-7-il)-amino)- 3,3-dimetil piperidina-l-carboxilato IX (5,21 g, 11,1 mmol) proveniente da Etapa 5 em diclorometano (80 mL), foi adicionado ácido trifluoroacético (8,53 mL, 111 mmol). A mistura de reação foi submetida a agitação sob a temperatura ambiente durante 1 hora. Os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida. Ao resíduo foi adicionada água (100 mL), e então hidróxido de sódio 6 M até obtenção de pH = 12. Sólido de cor branca precipitou -se a partir da mistura. A mistura foi extraída com AcCcOEt (3 x 100 mL). As fases orgânicas foram combinadas, submetidas a secagem (Na2SOs), Ee evaporadas. O produto em bruto foi obtido na forma de um sólido de cor branca (4,09 g, 11,1 mmol) com o rendimento de 100% o qual foi usado na etapa seguinte sem outra purificação.

Etapa 7: (R) -2-Bromo-7- ((1- (6-cianopiridazin-3- i1)-3,3-dimetilpiperidin-4-il)-amino) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida XII

N NH O

2. ne DN

[0087] Dissolveu-se (R) -2-bromo-7-((3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino) pirazolo-[1,5-a]-pirimidina-6 -carboxamida em bruto XI (2,05 9g, 5,58 mmol) proveniente da Etapa 6 em dimetilformamida anidro (50 mL) sob atmosfera de argônio. À solução adicionaram-se trietilamina (3,91 mL, 27,9 mmol) e então 6-cloropiridazina-3-carbonitrila (963 mg, 6,69 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 80ºC com agitação durante 1 hora. Depois de resfriamento para a temperatura ambiente, adicionaram-se 100 mL de água e a mistura foi extraída com AcCcOEt (3 x 100 mL). As fases orgânicas foram combinadas, submetidas a secagem e evaporadas sob pressão reduzida. Ao resíduo foi adicionado tolueno (50 mL) e evaporou-se sob pressão reduzida. Isto foi repetido duas vezes. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna (sílica gel, eluente: dicloro- metano : metanol=98:2, v/v). O produto foi obtido na forma de um sólido de cor amarelo claro (2,35 g, 4,99 mmol) com o rendimento de 89%. MS -ESI: (m/z) calculado para CisH2;BrNsO [M+H]* = 470,1, encontrado 470,1, *H NMR (300 MHz, CDCl3) 5 11,06 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,50 (d, J=9,7 Hz, 1H), 6,99 (d, J=9,7 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 6,04 (bs, 2H), 5,49 (dd, J=10,6, 4,2 Hz, 1H), 4,48 (dy, J=13,3 Hz, 1H), 4,29 (df, J=13,6 Hz, 1H), 3,40 (ddd, J=13,6, 9,4, 3,3 Hz, 1H), 3,17 (dy, J=13,7 Hz, 1H), 2,26 (dq, J=11,3, 3,6 Hz, 1H), 1,96 -1,80 (m, 1H), 1,11 (s, 3H), 1,10 (s, 3H).

[0088] Os Compostos da invenção foram preparados a partir do Intermediário P2 e respectivo ácido borônico XIIa ou éster de pinacol do ácido borônico XIIb, de acordo com o procedimento geral, conforme descrito nos exemplos seguintes.

[0089] Procedimento geral: À mistura de (R)-2 -bromo-7- ((1- (6-cianopiridazin-3-1il)-3,3-dimetilpiperidin-4 —il) amino) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida (Intermediário P2) (1 eq.), complexo [1,1' -bis (difenil fosfino) ferroceno]-dicloro-paládio (II) diclorometano (0,1 eq.) e respectivo ácido borônico (2 eq) ou pinacol éster de ácido borônico em dioxano desgaseificado (20 mL/1 mmol P2) em um balcão de vidro de Schlenk desgaseificado foi adicionada solução aquosa 2 M de fosfato de potássio (3 eq.). Através da mistura de reação, o argônio foi purgado durante 15 minutos. O balão de vidro foi bem vedado e a mistura de reação foi aquecida a 120ºC com agitação durante 3 horas. A mistura de reação foi então resfriada, diluída com acetato de etil, filtrada através de leito de Celite e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo oleoso foi purificado por meio de cromatografia em coluna (sílica gel: eluente: hexano: AcCOEt) para se obter um produto.

Exemplo 1) (R) -7- ((1-(6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetilpiperidin-4-1) amino) -2- (4-metoxifenil) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6- carboxamida

AVES CLA e

NH O Nos

[0090] Preparado utilizando-se o Composto P2 (51 mg, 0,11 mmol) e ácido (4 -metoxifenil) borônico (33 mg, 0,22 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (29 mg, 0,058 mmol), com o rendimento de 53%. MS-ESI: (m/z) calculado para CosgHogN9O0O2 [M+H]' = 498,2, encontrado 498,2, 'H NMR (300 MHz, CD;OD) 3 8,51 (s, 1H), 7,92 (d, J=8,7 Hz, 2H), 7,66 (d, J=9,7 Hz, 1H), 7,67-7,47 (m, 2H), 7,35 (d, J=9,9 Hz, 1H), 7,03 (d, J=8,6 Hz, 2H), 6,71 (s, 1H), 5,82 - 5,70 (m, 1H), 4,67-4,55 (my, 1H), 4,42-4,25 (my, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,50 -3,38 (m, 1H), 3,21 (d, J=14,3 Hz, 1H), 2,42- 2,27 (m, 1H), 2,05 -1,85 (m, 18), 1,12 (s, 6H). Exemplo 2) (R) -7- ((1-(6-Cianopiridazin-3-1il)-3,3-dimetilpiperidin-4-1) amino) -2- (2-fluoro-5-metoxifenil) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida

F

ER Õ LA em —o NH O vos

[0091] Preparado a partir do Composto P2 (47 mg, 0,10 mmol) e ácido (2-fluoro-5-metoxi-fenil) borônico (34 mg, 0,20 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (25 mg, 0,049 mmol) com o rendimento de 49%. MS-ESI: (m/z) calculado para CosHo;FN3O> [M+H] =516,2, encontrado 516,2, *H NMR (300 MHz, DMSO -ds;) à 11,22 (bs, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,19 (bs, 1H), 7,87 (d, J=9,7 Hz, 1H), 7,59 (dd, J=5,8, 3,2 Hz, 1H), 7,55 (bs, 1H), 7,49 (d, J=9,8 Hz, 1H), 7,33 (dd, J=10,6, 9,2 Hz, 1H), 7,06 (dt, J=9,0, 3,5 Hz, 1H), 6,88 (d, J=3,3 Hz, 1H), 5,58-5,46 (my, 1H), 4,68 (d,

J=13,7 Hz, 1H), 4,33 (dy, J=13,5 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,34-3,24 (my, 1H), 3,13 (dy, J=13,7 Hz, 1H), 2,36-2,24 (Mm, 1H), 1,92-1,74 (m, 1H), 1,05 (s, 3H), 1,04 (s, 3H).

Exemplo 3) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-1i1)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino) -2- (piridin-3-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina-6- carboxamida

INES

NH O Fenal a O

[0092] Obtido a partir do Composto P2 (50 mg, 0,11 mmol) e 3-(4,4,5,5-tetrametil-1l,3,2-dioxaborolan-2-1i1l) piridina (45 mg, 0,22 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor amarela (40 mg, 0,085 mmol), com o rendimento de 78%. MS-ESI: (m/z) calculado para C2raHosN10O0 [M+H] =469,2, encontrado 469,2, 'H NMR (300 MHz, DMSO-ds.;) 5 11,23 (d, J=6,2 Hz, 1H), 9,26 (dd, J=2,0, 0,5 Hz, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,65 (dd, J=4,7 Hz, 1H), 8,41 (dt, J=8,0, 1,9 Hz, 1H), 8,17 (bs, 1H), 7,87 (d, J=9,7 Hz, 1H), 7,56 (ddd, J=7,9, 4,8, 0,7 Hz, 1H), 7,53 (bs, 1H), 7,49 (d, J=9,8 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,58 -5,47 (m, 1H), 4,63 (dy, J=12,2 Hz, 1H), 4,33 (dy, J=14,0 Hz, 1H), 3,44-3,34 (m, 1H), 3,22 (dy, J=13,5 Hz, 1H), 2,32-2,20 (m, 1H), 1,90-1,74 (m, 1H), 1,04 (s, 3H), 1,03 (s, 3H).

Exemplo 4) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino)-2-(6-metoxi-piridin-3-il) pirazolo [1,5-a]

pirimidina-6-carboxamida &

AÁDIAL / = WeNÇAZ NH,

NH O N

SA ( l

EO

[0093] Preparado a partir do Composto P2 (47 mg, 0,10 mmol) e ácido (6-metoxi piridin-3-il) borônico (31 mg, 0,20 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (33 mg, 0,066 mmol), com o rendimento de 66%. MS-ESI: (m/z) calculado a partir de CosHoNi9O0r [M+H] =499,2, encontrado 499,2, *H NMR (300 MHz, DMSO -ds;) 8 11,20 (d, J=5,9 Hz, 1H), 8,87 (d, J=1,3 Hz, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,32 (dd, J=8,6, 1,7 Hz, 1H), 8,14 (bs, 1H), 7,87 (d, J=9,7 Hz, 1H), 7,50 (bs, 1H), 7,49 (dy, J=9,7 Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,98 (d, J=8,7 Hz, 1H), 5,58 -5,45 (m, 1H), 4,62 (d, J=12,3 Hz, 1H), 4,33 (d, J=13,4 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,44-3,34 (mM, 1H), 3,22 (dy, J=13,6 Hz, 1H), 2,31 -2,,19 (mM, 1H), 1,90-1,72 (1H), 1,04 (s, 3H), 1,02 (s, 3H). Exemplo 5) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetil piperidin-4- il) amino) -2- (6-etoxi-piridin-3 11) pirazolo [1,5-a] piridimina-6-carboxamida Ns

AI 2 NL NNAÃNh

NH O

AO | x nã N

[0094] Preparado a partir do Composto P2 (53 mg, 0,11 mmol) e ácido (6-etoxipiridin-3-il) borônico (37 mg, 0,22 mmol) na forma de um sólido amorfo cremoso (34 mg, 0,066 mmol), com o rendimento de 60%. MS -ESI: (m/z) calculado para CosHogN10O02 [M+H] '=513,2, encontrado 513,2, el NMR (300 MHz, CDCl;) 3 11,26 (d, J=8,2 Hz, 1H), 8,74 (s, 2H), 8,04 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,46 (d, J=9,5 Hz, 1H), 6,91 (dy, J=9,6 Hz, 1H), 6,84 (d, J=8,6 Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,21 (bs, 2H), 5,78 -5,65 (my, 1H), 4,53 (d,J=12,9 Hz, 1H), 4,42 (t, J=7,1 Hz, 2H), 4,32 (dy, J=13,6 Hz, 1H), 3,44 (t, J=11,5 Hz, 1H), 3,19 (dy, J=13,9 Hz, 1H), 2,36 (d, J=l1,2 Hz, 1H), 2,06 -1,86 (m, 1H), 1,44 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,16 (s, 6H).

Exemplo 6) (R) -2- (6-Aminopiridin-3-il)-7-((1-(6-cianopiridazin-3-il)- 3, 3-dimetilpiperidin-4-il) amino) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida ANG,

NH O vos

[0095] Preparado a partir do Composto P2 (48 mg, 0,10 mmol) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2 —il) piridin-2-amina (44 mo, 0,20 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (22 mg, 0,046 mmol) com o rendimento de 46%. MS -ESI: (m/z) calculado para CoaHaÊN110 [M+H]* = 484,2, encontrado 484,2, HH NMR (300 MHz, CDCl3) à

11,03 -10,91 (m, 1H), 8,56 (dd, J=2,3, 0,7 Hz, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,08 (dd, J=2,4, 0,7 Hz, 1H), 7,96 (dd, J=8,7, 2,3 Hz, 1H), 7,63 (dd, J=8,7, 2,5 Hz, 1H), 7,49 (d, J=9,6 Hz, 1H), 6,98 (d, J=9,7 Hz, 1H), 6,66 (ddd, J=8,7, 2,1, 0,7 Hz, 2H), 6,62 (s, 1H), 5,67 (dd, J=10,3, 3,8 Hz, 1H), 4,53 (d, J=13,7 Hz, 1H), 4,30 (d, J=13,1 Hz, 1H), 3,48-3,35 (m, 2H), 2,42-2,30 (m, 1H), 2,03-1,86 (m, 1H), 1,14 (s, 6H).

Exemplo 7) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino) -2-(6-morfolinopiridin-3-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida

N NH O SE

[0096] Preparado a partir do Composto P2 (51 mg, 0,11 mmol) e 4- (5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il) piridin-2-il) morfolina (58 mg, 0,20 mmol) na forma de um sólido amorfo cremoso (20 mg, 0,036 mmol) com o rendimento de 33%. MS -ESI: (m/z) calculado para CogH32N,1107r [M+H] =554,3, encontrado 554,2, 'H NMR (300 MHz, CDCl3) 3 10,87 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,78 (d, J=2,1 Hz, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,97 (dd, J=8,9, 2,4 Hz, 1H), 7,44 (d, J=9,6 Hz, 1H), 6,90 (d, J=9,7 Hz, 1H), 6,73 (d, J=8,8 Hz, 1H), 6,67 (s, 1H), 5,94 (bs, 2H), 5,71 (ddd, J=10,3, 8,9, 4,2 Hz, 1H), 4,52 (d, J=13,3 Hz, 1H), 4,29 (d, J=13,5 Hz, 1H), 3,88-3,82 (m, 4H), 3,64-3,57 (m, 4H), 3,49-3,37 (mm,

1H), 3,17 (dy, J=13,7 Hz, 1H), 2,42 -2,30 (my, 1H), 1,94 (ddd, J=15,2, 11,7, 4,6 Hz, 1H), 1,14 (s, 6H).

Exemplo 8) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino) -2- (2-metoxi-pirimidin-5-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida N RN = Ns

NH O SS

[0097] Preparado a partir do Composto P2 (53 mg, 0,11 mmol) e ácido (2-metoxipirimidin-5-il) borônico (34 mg, 0,22 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (42 mg, 0,084 mmol) com o rendimento de 76%. MS-ESI: (m/z) calculado para CoaHogNi102 [M+H]'=500,2, encontrado 500,2, *H NMR (300 MHz, CDCl;) à 11,18 (d, J=8,1 Hz, 1H), 9,03 (s, 2H), 8,63 (s, 1H), 7,46 (d, J=9,6 Hz, 1H), 6,91 (dy, J=9,6 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,13 (bs, 2H), 5,72-5,57 (m, 1H), 4,52 (dy, J=12,7 Hz, 1H), 4,33 (dy, J=13,7 Hz, 18), 4,10 (s, 3H), 3,42 (t, J=10,9 Hz, 1H), 3,17 (d, J=13,7 Hz, 1H), 2,42 -2,24 (m, 1H), 2,06 -1,90 (m, 1H), 1,16 (s, 3H), 1,15 (s, 3H).

Exemplo 9) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-1il1)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino) -2-(2-etoxi-pirimidin-5-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida

INES ADO [es

NH O SE

[0098] Preparado a partir do Composto P2 (50 mg, 0,11 mmol) e ácido (2-etoxipirimidin-5-il)-borônico (37 mg, 0,22 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (17 mg, 0,033 mmol) com o rendimento de 30%. MS -ESI: (m/z) calculado para CosHogN1102 [M+H]'=514,2, encontrado 514,2, 'H NMR (300 MHz, CDCl;) 5 11,07 (d, J=8,8 Hz, 1H), 9,00 (s, 2H), 8,54 (s, 1H), 7,45 (dy, J=9,5 Hz, 1H), 6,90 (dy, J=9,7 Hz, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,04 (bs, 2H), 5,70 -5,58 (mM, 1H), 4,50 (q, J=7,0 Hz, 3H), 4,32 (df, J=13,6 Hz, 1H), 3,41 (t, J=11,4 Hz, 1H), 3,16 (dy, J=13,6 Hz, 1H), 2,34 (d, J=10,5 Hz, 1H), 2,10-1,94 (m, 1H), 1,47 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,14 (s, 3H). Exemplo 10) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino) -2- (6-fluoro piridin-3-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida

INES

NH O Fen

EO

[0099] Preparado a partir do Composto P2 (47 mg, 0,10 mmol) e ácido (6 -fluoropiridin -3 -il) borônico

(28 mg, 0,20 mmol) na forma de um sólido amorfo cremoso (38 mg, 0,078 mmol) com o rendimento de 78%. MS -ESI: (m/z) calculado para [M+H]' = 487,2, encontrado 487,2, 'H NMR (300 MHz, CDCl;) 5 11,06 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,79 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,29 (ddd, J=8,3, 7,8, 2,5 Hz, 1H), 7,48 (d, J=9,7 Hz, 1H), 7,09 (dd, J=8,5, 2,8 Hz, 1H), 6,95 (dy, J=9,7 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 5,65 (dd, J=10,4, 4,1 Hz, 1H), 4,52 (dy, J=13,3 Hz, 1H), 4,31 (d, J=13,5 Hz, 1H), 3,50 -3,34 (m, 1H), 3,18 (d, J=13,8 Hz, 1H), 2,40 -2,28 (m, 18), 2,06-1,88 (m, 1H), 1,15 (s, 6H).

Exemplo 11) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino) -2- (6-metoxipiridin-2-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina -6-carboxamida IV-CIS —o NH O

SO

[00100] Preparado a partir do Composto P2 (201 mg, 0,43 mmol) e 2-metoxi-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il) piridina (202 mg, 0,86 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (144 mg, 0,29 mmol) com o rendimento de 67%. MS -ESI: (m/z) calculado para CosH2z7N10902 [M+H] '=499,2, encontrado 499,2, *H NMR (300 MHz, DMSO-ds) à 11,32 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,65 (d, J=5,1 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,94 (d, J=9,8 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,87 (dy, J=5,1 Hz, 16), 7,60 (bs, 1H), 7,57 (d, J=9,8 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 5,62 -5,50 (m, 1H), 4,73 (df, J=11,9 Hz,

18), 4,42 (dy, J=13,5 Hz, 18), 3,52-3,40 (m, 18), 3,28 (d, J=13,7 Hz, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,35 (d, J=9,7 Hz, 1H), 1,98- 1,80 (m, 1H), 1,11 (s, 3H), 1,10 (s, 3H). Exemplo 12) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-1i1)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino) -2-(2-metil-piridin-4-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida

N — do A

NH O SAE

[00101] Preparado a partir do Composto P2 (49 mg, 0,10 mmol) e 2-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-l1,3,2- dioxaborolan-2-il) piridina (44, mg, 0,20 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (20 mg, 0,050 mmol) com o rendimento de 41%. MS -ESI: (m/z) calculado para CosHo;N10O [M+H] =483,2, encontrado 483,2, 'H NMR (300 MHz, CDCl3) à 10,89 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,62 (d, J=5,4 Hz, 1H), 8,36 (s, 1H), 7,66-7,57 (my, 2H), 7,46 (d, J=9,6 Hz, 1H), 6,92 (d, J=9,5 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,86-5,61 (my, 3H), 4,58 (d, J=13,0 Hz, 1H), 4,33 (dy, J=13,6 Hz, 1H), 3,44 (t, J=12,3 Hz, 1H), 3,19 (d, J=13,6 Hz, 1H), 2,6 (s, 3H), 2,40 (dd, J=13,4, 3,7 Hz, 1H), 2,07 -1,90 (m, 1H), 1,16 (s, 6H). Exemplo 13) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetilpiperidin-4- il) amino)-2-(2-morfolino piridin-4-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida

N.

O CC o o RN

[00102] Preparado a partir do Composto P2 (52 mg, 0,11 mmol) e ácido (2-morfolinopiridin-4-il)-borônico (46 mg, 0,22 mmol) na forma de um sólido amorfo de cor branca (30 mg, 0,054 mmol) com o rendimento de 49%. MS-ESI: (m/z) calculado para CogH32N110, [M+H] '=554,3, encontrado 554,2, '*H NMR (300 MHz, CDCl;) 5 11,05 (d, J=8,2 Hz, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,29 (d, J=5,2 Hz, 1H), 7,49 (d, J=9,6 Hz, 1H), 7,20 (dd, J=5,2, 1,1 Hz, 1H), 7,12 (s, 1H), 6,97 (d, J=9,7 Hz, 1H), 6,78 (s, 1H), 5,68 (dd, J=10,3, 4,0 Hz, 1H), 4,55 (df, J=13,4 Hz, 1H), 4,28 (dy, J=13,8 Hz, 1H), 3,91- 3,84 (m, 4H), 3,64 - 3,56 (m, 4H), 3,43 -3,31 (m, 1H), 3,18 (dy, J=13,7 Hz, 1H), 2,45 - 2,30 (m, 1H), 2,05-1,89 (m, 18), 1,15 (s, 6H).

Exemplo 14) (R) -7- ((1-(6-Cianopiridazin-3-1il1)-3,3-dimetil piperidin-4- il) amino)-2-(6-metoxi-piridin-2-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina-6-carboxamida =" NEN NH, —o NH O ot Hc!

FO

[00103] Solução aquosa a 37% de ácido clorídrico (170 ul, 2,01 mmol, 1,0 eq) foi adicionada à solução de (R) -7- ((1- (6-cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)-amino)-2-(6-metoxipiridin-2-il) pirazolo [1,5-a] pirimidina 6-carboxamida (100 mg, 0,201 mmol) em acetona (10 mL). O sólido de cor branca precipitado foi filtrado, lavado com acetona, e submetido a secagem para se obter o produto desejado (90 mg, 0,168 mmol) com o rendimento de 84%. 'H NMR (300 MHz, DMSO-ds) 5 12,20 (d, J=6,6 Hz, 1H), 9,00 (s, 1H), 8,57 (bs, 1H), 7,95- 7,78 (m, 4H), 7,50 (dy, J=9,8 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,94 (dy, J=9,8 Hz, 1H), 5,70-5,50 (m, 1H), 4,63 (d, J=13,2 Hz 1H), 4,35 (d, J=13,7 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,39 (t, J=11,3 Hz, 1H), 3,23 (dy, J=13,7 Hz, 1H), 2,35 -2,22 (my, 1H), 1,95 —-1,77 (m, 1H), 1,08 (s, 3H), 1,05 (s, 3H).

Atividade biológica dos compostos da invenção Ensaio de inibição de quinase JAK In vitro

[00104] Os efeitos dos compostos da invenção foram analisados in vitro usando-se o ensaio de inibição da quinase JAK descrito em seguida.

[00105] os compostos testados foram dissolvidos em DMSO 100%, e as soluções de estoque obtidas foram diluídas em série no tampão de reação (Tris 50 mM pH 7,5, MgCcl2 10 mM, MgCl2 10 mM, EGTA 0,25 mM, EGTA 0,15 m, Na3vVO4 O,l mM, Triton 0,013 X -100, 2,5 mM DTT). As quinases recombinantes JAK1 (ProQinase), JAK2 ou JAK3 (Carna Biosciences) foram diluídas no tampão de diluição (Tris -HCl 50 mM pH 7,5, NaCl 150 mM, NaCl 150 mM, glicerol a 10%, Triton X-100 a 0,05%, 1 mM DTT) até a concentração final de 3 ng/uL (JAK1I), 0,1 ng/uLl (JAK2) ou 0,2 ng/uL (JAK3). Foram adicionados 5 ul da solução obtida dos compostos e 5 ul da solução das respectivas quinases ao poço de uma placa de 96 poços.

Para se iniciar a interação entre os compostos e uma enzima testada, a placa foi incubada durante 10 minutos sob 25ºC em um agitador de placas com agitação orbital a 400 rpm.

Os poços de um controle negativo continham todos os reagentes como mencionado anteriormente no presente caso, com exceção dos compostos e quinases testados, e os poços de um controle positivo continham todos os reagentes como mencionados anteriormente no presente caso, com exceção dos compostos testados.

A reação enzimática foi iniciada pela adição de ul da seguinte solução: 5x tampão de reação concentrado (Tris 50 mM pH 7,5, MgCl2 10 mM, M9gCl2 10 mM, EGTA 0,25 mM, EGTA 0,1 mM, Na3VO4 0,1 mM, Triton X a 0,01%-100, DTT 2,5 mM), água, 30 UpuM de ATP e para quinases específicas: peptídeo JAK1I-60 uM IRS-l (Enzo), JAK2 ou JAK3-peptídeo IGF-lRtide de 10 uM (Lipopharm). Em seguida, a placa foi incubada durante 1 hora sob 25ºC em um agitador de placas, com agitação orbital a 400 rpm.

A detecção de ADP formada na reação enzimática foi então realizada usando-se o kit de ensaio ADP-Glo quinase (Promega). Para este propósito, ao poço da placa de 96 poços foram adicionados 25 1pL de reagente ADP-Gllo, e a placa foi incubada durante 40 minutos sob 25ºC em um agitador de placas com agitação orbital a 400 rpm.

Em seguida, ao poço da placa de 96 poços foram adicionados 50 pl de reagente de detecção de quinase e a placa foi incubada durante 30 minutos sob 25ºC em um agitador de placas com agitação orbital a 400 rpm. Após a incubação, a intensidade da luminescência foi medida usando-se o luminômetro Victor x Light (Perkin Elmer, Inc.).

[00106] Com base na medição da luminescência em poços contendo os compostos testados em várias concentrações e em poços de controle, foram então determinados os valores de I1IC50. Estes valores foram determinados por meio do software Graph Pad v. 5,03, ajustando-se os pontos da curva mediante utilização do método de regressão não linear. Cada composto foi testado em pelo menos 6 repetições (6 poços) em duas placas de 96 poços, utilizando-se pelo menos 3 poços de cada controle.

[00107] Os resultados médios da atividade de inibição da quinase JAK para compostos selecionados da presente invenção são apresentados em seguida na Tabela 1. Os dados apresentados mostram que os compostos da invenção são capazes de inibir as quinases JAK1 e JAK3 preferencialmente sobre a quinase JAK2.

Tabela 1.

Exemplo Nº. JAKl ICso JAK2 ICso JAK3 ICso [NM] [NM] [NM] 2 3,74 59,28 3,77 3 4,47 31,15 1,58 27166

E

11 0,05 1,18 0,03 ER ss Ensaio para a viabilidade das células TF -1 in vitro

[00108] Os efeitos da atividade dos compostos da invenção foram testados in vitro usando-se o ensaio de viabilidade celular descrito em seguida.

[00109] Os compostos testados foram dissolvidos em DMSO a 100%, e as soluções de estoque obtidas foram diluídas em série em meio OptiMEM (meio de soro reduzido - Thermo Fisher Scientific). As células TF-l1 (DSMZ nº.: ACC 334) em meio de cultura (80% RPMI 1640+20% FBS) e na presença de 5 ng/ml de IL -3 ou 20 ng/ml de IL4 foram depositadas em - placas de 96 poços no volume de 90 ul por poço, 10 milhares de células por poço. Para um poço da placa de 96 poços, 10 ul das soluções de estoque 10X preparadas dos compostos. As células em placas de 96 poços foram incubadas com os compostos por 72 horas a 37ºC, 5% de CO;. Posteriormente, a viabilidade das células foi medida usando-se o kit ATPlite (Perkin Elmer). Para este propósito, 50 ul de tampão de lise (solução de lise de células de mamíferos) foram adicionados a um poço da placa de 96 poços e a placa foi incubada durante 10 minutos sob 25ºC em um agitador térmico de placas com agitação orbital a 600 rpm . Em seguida, a um poço da placa de 96 poços, foram adicionados 50 ul de substrato (solução de substrato) e incubados durante 15 minutos no escuro, em um agitador térmico de placas com agitação orbital a 600 rpm. Após o tempo de incubação, a intensidade da luminescência em um poço foi medida usando-se o luminômetro Victor x Light (Perkin Elmer, Inc.).

[00110] Com base nas medidas de intensidade de luminescência em poços que continham os compostos testados em várias concentrações e em poços de controle, foram determinados os valores de ECrso. Esses valores foram determinados por meio do software Graph Pad v. 5,03, ajustando-se os pontos da curva usando-se o método de regressão não linear. Cada composto foi testado em pelo menos 6 repetições (6 poços) em duas placas de 96 poços, utilizando pelo menos 3 poços de cada controle.

[00111] Os resultados médios da atividade de inibição da viabilidade das células TF-l1 na presença de IL- 3 (ativação de JAK2) ou IL-4 (ativação de JAK1I/JAK3) para compostos selecionados da presente invenção são apresentados em seguida na Tabela 2. Os dados mostram que os compostos da invenção são capazes de inibir as quinases JAK, e que pode ser vista uma inibição mais potente das quinases JAK1 / JAK3 sobre a inibição da quinase JAK2.

Tabela 2 Exemplo Nº. IL3 IL4 Relacã (ny) (nv) elação 2 836,9 250,4 Li de De e EEE as Li e e de 282,6

1285 111,6 11,5 Ensaio para a inibição da proodução de TNFa e INFy por linfócitos T in vitro

[00112] A atividade dos compostos da invenção foi testada utilizando-se p ensaio in vitro descrito em seguida.

[00113] Os compostos testados foram dissolvidos em DMSO 100%, e as soluções de estoque obtidas foram diluídas em série com meio OptiMEM (meio de soro reduzido- Thermo Fisher Scientific). Os linfócitos foram isolados da camada superior do leucócito causada pelo sangue periférico humano. O isolamento das células mononucleares do sangue periférico foi realizado por meio do método do gradiente Ficoll-Paque + Leucosept, com isolamento de linfócitos pelo Kit de Isolamento de Células T CD4 + e ativação pelo Kit de Ativação/Expansão de Células T (Miltenyi Biotec). As células isoladas em meio de cultura (90% RPMI 1640 + 10% FBS) foram peneiradas em placas de 12 poços a 450 unL/poço, 300 mil/poço, e foram adicionados 50 ul de soluções de estoque 10X preparadas a partir de compostos testados. Após 48 horas, o sobrenadante foi coletado para determinação do nível de citocinas secretadas. Antes da determinação, as células foram centrifugadas a 1000 g, 10 min. A determinação foi realizada com citômetro de fluxo FACS Calibur usando-se o kit de citocinas LEGENDplex Human Th. Os resultados são apresentados na Tabela 3 como uma percentagem de inibição i INFy secretadas pelos linfócitos T com referência às*das citocinas TNF células de controle.

Tabela 3 mb Ensaio de inibição da fosforilação de STAT6 in vitro

[00114] A atividade dos compostos da invenção foi testada utilizando-se o ensaio in vitro descrito em seguida.

[00115] Os compostos testados foram dissolvidos em 100% DMSO, e as soluções de estoque obtidas foram serializadas em meio OptiMEM (meio de soro reduzido-Thermo Fisher Scientific). As células TF-l1 (DSMZ no .: ACC 334) em meio de cultura (80% RPMI 1640 + 20% FBS) na presença de IL-4 a 20 ng/ml foram peneiradas em placas de 12 poços a 900 unl/poço, 700 milhares de células/poço. A um poço da placa de 12 poços foram adicionados 100 ul da solução 10X obtida a partir dos compostos. As células em placas de 12 poços foram incubadas com compostos testados por 1 hora a 37 º C, CO2 a 5%. Posteriormente, as células foram lavadas com PBS, lisadas em tampão RIPA adicionado com EDTA, inibidores de proteases e fosfatases e incubadas durante 5 min. em gelo. A concentração de proteína foi determinada usando-se o Kit de Ensaio de Proteína Pierce BCA (Thermo Fisher Scientific). Os lisados protéicos foram separados por meio de eletroforese (SDS-PAGE) em géis de poliacrilamida a 8%, depois transferidos por via úmida na membrana de nitrocelulose e as proteínas testadas foram detectadas de acordo com as instruções do fabricante do anticorpo.

[00116] Com base na medição da análise densitométrica da intensidade da quimiluminescência, os resultados obtidos para as células tratadas com compostos testados em várias concentrações foram comparados com aqueles obtidos para as células de controle, e os valores de IC50 foram determinados.

[00117] Esses valores foram determinados por meio do software Graph Pad v. 5,03, ajustando-se os pontos da curva usando-se o método de regressão não linear. Cada composto foi testado em pelo menos 3 repetições. Os resultados médios da atividade de inibição da fosforilação da proteína STAT6 em células TF-l na presença de ou IL-4 (ativação de JAKI/JAK3) para compostos selecionados da presente invenção são apresentados em seguida na Tabela 4.

Tabela 4

A LL 4 492,0 |

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto da formula geral (1)

N

AT NS

NH O om

ZN

ZE (1) em que R, representa: - fenil substituído por um ou dois substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halogênio e Cl -C3 alcoxi; ou - heteroarila de 6 elementos com l1 ou 2 átomos de nitrogênio, que é não substituído ou substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de: - NH, - halogênio, - alquila C1 -C4, - alcoxila Cl -C3, e - heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionado a partir do grupo que consiste de N e O; ou seu sal de adição ácida.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R, representa fenil substituído por um ou dois substituintes selecionado a partir do grupo que consiste de halogênio e C;, -C3; alcoxila.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R, representa heteroarila de 6 elementos com 1 ou 2 átomos de nitrogênio, que é não substituído ou substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de: - NH, - halogênio, - alquila Cl -C4, - alcoxila Cl -C3, e - heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste de N e O.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3, em que o dito heteroarila é compreendido por piridinil.

5. Composto de acordo com a reivindicação 3, em que o dito heteroarila é compreendido por pirimidinil.

6. Composto de acordo com a reivindicação 4 ou 5, em que o dito heteroarila é substituído por um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste de alquila C1-CA4, alcoxila C1-C3, e heterociclil de 6 elementos que compreende 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste de N e O.

7. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que piridinil, especialmente piridin-2-il, piridin-3-il ou piridin-4-il, é substituído por C1-C3 alcoxila.

8. Composto de acordo com a reivindicação 5, em que pirimidinil, especialmente pirimidin-5-il, é substituído por C1-C3 alcoxila.

9. Composto de acordo com a reivindicação 1, selecionado a partir do grupo que consiste dos seguintes:

1) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(4-metoxi-fenil)-pirazolo [1,5 -a]pirimidina-6-carboxamida;

2) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-11) amino)-2-(2-fluoro-5-metoxifenil) pirazolo [1,5-a]pirimidina-6-carboxamida;

3) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(piridin-3-il)-pirazolo [1,5-a]pirimidina-6-carboxamida;

4) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(6-metoxi-piridin-3-il) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida;

5) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(6-etoxi-piridin-3-il) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida;

6) (R) -2- (6-Aminopiridin-3-il)-7-((1-(6- cianopiridazin-3-il)-3,3-dimetil-piperidin-4-il)amino) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida;

7) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(6-morfolinopiridin-3-il) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida;

8) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(2-metoxi-pirimidin-5-il) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida;

9) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(2-etoxi-pirimidin-5- il)pirazolo[1,5 -alpirimidina-6-carboxamida;

10) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(6-fluoro-piridin-3-il) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida; 11) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-11) amino)-2- (6-metoxi-piridin-2-il) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida; 12) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(2-metilpiridin-4-il) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida; 13) (R) -7- ((1- (6-Cianopiridazin-3-il)-3,3- dimetilpiperidin-4-il)amino)-2-(2-morfolinopiridin-4-il)- pirazolo[1,5-a]lpirimidina-6-carboxamida; 14) Cloridrato de (R)-7-((1-(6-Cianopiridazin-3 —il)-3,3-dimetil-piperidin-4-1i1) amino)-2-(6-metoxipiridin- 2-il) pirazolo[1,5-a]pirimidina-6-carboxamida.

10. Composto de acordo com a reivindicação 9, que é compreendido por (R)-7-((1-(6-cianopiridazin-3-il)- 3, 3-dimetilpiperidin-4-1il)amino)-2-(6-metoxipiridin-2-il) pirazolo-[1,5-a]-pirimidina-6-carboxamida ou o sal de adição ácida do mesmo.

11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, para o uso na forma de medicamento.

12. Composto de acordo com a reivindicação 11, para o uso em um método de tratamento de enfermidades inflamatória e auto imunológica crônicas.

13. Composição farmacêutica que compreende um composto tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 na forma de um ingrediente ativo.

14. Método de tratamento de enfermidades inflamatória e auto imunológica crônicas em um paciente mamífero que compreende administrar ao referido paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10.