BR112019017793A2

BR112019017793A2 - Composição para injeção dérmica

Info

Publication number: BR112019017793A2
Application number: BR112019017793-0A
Authority: BR
Inventors: Sun Lee Ji; Hyun Jung Su; Su Jang Hak; Eun Choo Jung; Young Jung Hye
Original assignee: Cg Bio Co., Ltd.; Dncompany; Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2017-02-28
Filing date: 2018-02-27
Publication date: 2020-03-31
Also published as: JP2020512061A; WO2018159982A1; KR20180099551A; EP3590548A1; AU2018228299B2; KR102107700B1; BR112019017793B1; EP3590548A4; US11116715B2; AU2018228299A1; CN110573190B; US20190374457A1; TWI685361B; CN110573190A; JP6887514B2; TW201840349A

Abstract

a presente invenção se refere a uma composição para injeção dérmica que inclui dois ou mais tipos de partículas de ácido hialurônico reticulado com diferentes diâmetros de partículas e ácido hialurônico não reticulado. a composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção satisfaz as condições de viscosidade, força de extrusão e viscoelasticidade para injeção dérmica, e um desvio da força de extrusão é baixo para que o usuário não sinta fadiga quando a composição é injetada na região dérmica do mesmo. além disso, a composição é excelente em viscoelasticidade e capacidade de restauração de tecidos, é mantida por um longo período de tempo, permite recuperação rápida porque um grau de inchaço inicial é baixo e também é excelente em segurança e estabilidade no corpo.

Description

COMPOSIÇÃO PARA INJEÇÃO DÉRMICA REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS [001] Este pedido reivindica prioridade e o benefício do Pedido de

Patente Coreana No. 2017-0026491, depositado em 28 de fevereiro de 2017, cuja descrição é incorporada aqui por referência na sua totalidade.

FUNDAMENTOS

1. Campo da invenção [002] A presente invenção se refere a uma composição para injeção dérmica.

2. Discussão da técnica relacionada [003] O ácido hialurônico, como um produto do tipo gel com transparência e viscosidade, é uma substância biodegradável e altamente hidrofílica, e desempenha um papel importante na manutenção da umidade na derme, no volume dérmico e na elasticidade dérmica, pois atrai 214 moléculas de água por uma molécula do mesmo. Assim, um agente de enchimento contendo ácido hialurônico como ingrediente foi utilizado para restaurar a elasticidade dérmica facial, melhorar de forma sutil um contorno, reduzir rugas faciais e para procedimentos gerais de contorno facial cosmético.

[004] No entanto, como o ácido hialurônico natural tem uma meiavida de apenas 1 a 2 dias, o ácido hialurônico usado no material de enchimento é produzido em um estado de reticulação para ser mantido na derme por um longo período de tempo. Aqui, a reticulação resulta na prevenção da degradação do ácido hialurônico causada pelas hialuronidases e no aumento da viscosidade para formar volume (Song, Yi-Seop et al., Korean Journal of Dermatology 2014; 52 (2): 100 a 105).

[005] Os agentes de enchimento de ácido hialurônico atualmente disponíveis no mercado estão na forma monofásica ou bifásica. Um material de enchimento monofásico é composto por um gel homogêneo, de modo que tenha alta viscosidade, é injetado suavemente e é útil para formar uma forma

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2/23 delicada. Um material de enchimento bifásico é feito na forma de uma partícula, filtrando um gel usando uma peneira para que ela tenha alta elasticidade, portanto, é possível manter a forma e aumentar o volume.

[006] Enquanto isso, a pesquisa sobre o desenvolvimento de uma carga com características ideais in vivo e utilidade cirúrgica continua. No entanto, uma carga de ácido hialurônico com excelente estabilidade in vivo tem alta dureza em gel e alta viscosidade, de modo que pode ser difícil injetar a carga através de uma agulha fina. Além disso, um agente de enchimento de ácido hialurônico capaz de ser facilmente injetado através de uma agulha de bitola fina pode ter baixa estabilidade in vivo. Por conseguinte, são necessários enchimentos de ácido hialurônico excelentes tanto em viscosidade quanto em elasticidade.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [007] A presente invenção é direcionada a prover uma composição para injeção dérmica que inclui dois ou mais tipos de partículas de ácido hialurônico reticulado com diferentes diâmetros de partículas e ácido hialurônico não reticulado.

[008] A presente invenção provê uma composição para injeção dérmica que inclui primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, segundas partículas de ácido hialurônico reticulado com um diâmetro de partícula diferente das primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não reticulado, em que as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado estão incluídas em uma razão em peso de 1:1,5 ou mais a 5,5 ou menos, e as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não reticulado estão incluídos em uma razão em peso de 1:0,1 ou mais para 1,2 ou menos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DE MODALIDADES EXEMPLARES [009] A presente invenção se refere a uma composição para injeção

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3/23 dérmica que inclui o primeiro ácido hialurônico reticulado, o segundo ácido hialurônico reticulado com um diâmetro de partícula diferente do primeiro ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não reticulado.

[0010] A seguir, as configurações da presente invenção serão descritas em detalhes.

[0011] Na presente invenção, uma composição para injeção dérmica pode ser identificada como uma composição de enchimento.

[0012] Na presente invenção, os valores numéricos são apresentados usando expressões como “A ou mais”, “A ou menos”, “mais que A” e “menos que A”, mas no caso de valores numéricos providos sem essa expressão, deve ser entendido que o significado de “A ou mais” ou “A ou menos” está implícito.

[0013] Na presente invenção, primeiro ácido hialurônico reticulado e segundo ácido hialurônico reticulado podem ser identificados como primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e segundas partículas de ácido hialurônico reticulado, respectivamente.

[0014] Na composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção, o primeiro ácido hialurônico reticulado e o segundo ácido hialurônico reticulado podem ser incluídos em uma razão de peso de 1:1,5 ou mais a 5,5 ou menos, e as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não reticulado podem ser incluídos em uma razão em peso de 1:0,1 ou mais a 1,2 ou menos.

[0015] Em uma modalidade, o primeiro ácido hialurônico reticulado e o segundo ácido hialurônico reticulado podem ser incluídos em uma razão em peso de 1:1,5 ou mais a menos que 2,5, 1:2,5 ou mais a menos que 3,5, 1:3,5 ou mais a menos que 4,5 ou 1:1,5 ou mais a menos que 4,5.

[0016] Em uma modalidade, as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não reticulado podem ser incluídos em uma razão de peso de 1:0,5 ou mais a 1,0 ou menos, 1:0,5 ou

Petição 870190095566, de 24/09/2019, pág. 10/34 mais a 0,8 ou menos, ou 1:0,5 ou mais a 0,7 ou menos.

[0017] Dentro das faixas acima, podem ser alcançadas propriedades necessárias para a composição para injeção dérmica, como viscosidade, força de extrusão, viscoelasticidade e similares.

[0018] O ácido hialurônico é um polímero linear incluindo β-D-Nacetilglucosamina e ácido β-D-glucurônico ligados alternadamente um ao outro e pode ser interpretado como incluindo todo o próprio ácido hialurônico, um sal do mesmo e uma combinação dos mesmos na presente invenção. O ácido hialurônico pode ter um peso molecular de 100.000 a 5.000.000 Da ou 1.000.000 a 1.500.000 Da, mas a presente invenção não está limitada a isso. Exemplos de sal de ácido hialurônico incluem sais inorgânicos, como hialuronato de sódio, hialuronato de potássio, hialuronato de cálcio, hialuronato de magnésio, hialuronato de zinco, hialuronato de cobalto e similares e sais orgânicos, como hialuronato de tetrabutilamônio e similares. Na presente invenção, como o ácido hialurônico, o próprio ácido hialurônico e um sal do mesmo podem ser utilizados sozinhos ou em combinação de dois ou mais. O ácido hialurônico ou o sal do mesmo pode ser isolado de um micro-organismo, sintetizado ou disponível comercialmente, mas a presente invenção não está limitada a ele. Por exemplo, o ácido hialurônico pode ser isolado de Streptococcus sp. (Streptocossus equi ou Streptococcus zooepidemicus) e purificado.

[0019] Na presente invenção, as partículas de ácido hialurônico reticulado podem ser usadas no mesmo sentido que as partículas de ácido hialurônico reticulado hidratadas. Por exemplo, pode significar que o ácido hialurônico foi submetido a uma reação de reticulação através de uma ligação covalente usando um grupo hidroxila. O teor de umidade ou razão de reticulação do ácido hialurônico pode ser ajustado através de um método comum usado na técnica relacionada e pode ser, por exemplo, 10 a 20% em mol ou 10 a 15% em mol.

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5/23 [0020] As partículas de ácido hialurônico podem ser reticuladas por um agente de reticulação. O agente de reticulação pode ser, mas não está limitado a, éter etilenoglicol diglicidílico (EGDGE), éter 1,4-butanodiol diglicidílico (BDDE), éter 1,6-hexanodiol diglicidílico, éter 1,6-hexanodiol diglicidílico, éter propilenoglicol diglicidílico, éter polipropilenoglicol diglicidílico, éter diglicerol poliglicidílico, l-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodi-imida (EDC), divinilsulfona (DVS), biscarbodi-imida (BCDI) ou uma combinação dos mesmos.

[0021] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção (daqui em diante, também referida como composição de ácido hialurônico) inclui dois ou mais tipos de partículas de ácido hialurônico reticuladas com diferentes diâmetros de partículas.

[0022] Na presente invenção, as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado têm menor elasticidade e maior coesão do que as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado. Por exemplo, a uma frequência de 0,01 Hz a 1 Hz, as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado pode exibir um valor de G’ menor que 300 Pa e um valor de tanô de 0,3 ou mais.

[0023] O valor de tanô é um valor de G”/G’ (fator de amortecimento), que é um valor numérico que indica se o material está próximo de um estado sólido ou líquido. Aqui, G’ representa o módulo de elasticidade e G” representa o módulo de viscosidade. Um valor de tanô próximo ala uma frequência de 0,01 a 1 Hz pode representar um estado de solução (baixa elasticidade) e um valor de tanô próximo a 0 pode representar um corpo elástico com alta elasticidade. Além disso, foi relatado que, como um valor de tanô é baixo e a porcentagem de elasticidade (100 x G7(G’ + G”)) é alta, espera-se que a duração de uma carga seja longa.

[0024] As primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado podem ter um diâmetro médio de partícula de 10 a 250 pm, especificamente, 20 a

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200 μπι, 50 a 150 μπι, 80 a 130 μπι, 20 a 100 μπι, 100 a 200 μπι, 200 a 250 μπι, 50 a 100 μπι ou 150 a 200 μπι.

[0025] Na presente invenção, o diâmetro médio de partícula é D50 (50% de diâmetro de partícula), o que significa um tamanho de partícula (volume) de uma partícula correspondente ao percentual 50 na curva de distribuição de tamanho de partícula. Esse diâmetro médio de partícula é medido usando um analisador de tamanho de partícula (Malvern, MS3000) e a água é usada como solvente dispersante. Ou seja, o diâmetro médio das partículas representa um diâmetro de partículas de partículas de ácido hialurônico reticuladas hidratadas.

[0026] Na presente invenção, as propriedades da segunda partícula de ácido hialurônico reticulado são ajustadas de acordo com o tamanho da mesma. A segunda partícula de ácido hialurônico reticulado tem baixa viscosidade e excelente elasticidade em comparação com as do primeiro ácido hialurônico reticulado. Por exemplo, a uma frequência de 0,01 a 1 Hz, a segunda partícula de ácido hialurônico reticulado pode exibir um valor de G’ de 300 Pa ou mais e um valor de tanô menor que 0,3.

[0027] O segundo ácido hialurônico reticulado pode ter um diâmetro médio de partícula de 300 a 700 pm, especificamente 400 a 600 pm, 450 a 550 pm, 300 a 500 pm, 500 a 700 pm, ou 400 a 700 pm.

[0028] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção inclui ácido hialurônico não reticulado. O ácido hialurônico não reticulado está na forma de uma solução e pode conferir fluidez à composição para injeção dérmica.

[0029] Na presente invenção, as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado e ácido hialurônico não reticulado podem ser incluídas em 1 a 10 partes em peso em relação a 100 partes em peso de toda a composição.

[0030] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente

Petição 870190095566, de 24/09/2019, pág. 13/34 / 23 invenção pode ainda incluir o fator de crescimento epidérmico (EGF) além dos componentes descritos acima. O EGF pode ser injetado na derme para estimular a produção de colágeno, fibroblasto e elastina, por exemplo, para aumentar o efeito da restauração tecidual.

[0031] O EGF pode ser incluído em 0,0001 a 0,002 parte em peso em relação a 100 partes em peso de toda a composição.

[0032] Além disso, a composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode incluir ainda um componente anestésico. O anestésico pode aliviar a dor experimentada durante a injeção da composição. [0033] Esse componente anestésico pode ser, mas não está limitado a, ambucaína, amolanona, amilocaína, benoxinato, benzocaína, betoxicaína, bifenamina, bupivacaína, butacaína, butambeno, butanilicaína, butetamina, butoxicaína, carticaína, cloroprocaína, cocaetileno, cocaína, ciclometicaína, dibucaína, dimetisoquina, dimetocaína, diperodon, diciclonina, ecgonidina, ecgonina, cloreto de etila, etidocaína, beta-eucaína, euprocina, fenalcomina, formocaína, hexilcaína, hidroxitetracaína, isobutil p-aminobenzoato, leucinocaína mesilato, levoxadrol, lidocaína, mepivacaína, meprilcaína, metabutoxicaína, cloreto de metila, mirtecaína, naepaína, octacaína, ortocaína, oxetazina, paretoxicaína, fenacaína, fenol, piperocaína, piridocaína, polidocanol, pramoxina, prilocaína, procaína, propanocaína, proparacaína, propipocaína, propoxicaína, pseudococaína, pirrocaína, ropivacaína, álcool salicílico, tetracaína, tolicaína, trimecaína, zolamina ou uma combinação dos mesmos.

[0034] O componente anestésico pode ser incluído em 0,1 a 1 parte em peso em relação a 100 partes em peso da composição.

[0035] A composição de acordo com a presente invenção pode ser usada com a adição de outros aditivos comuns, como um antioxidante, uma solução tampão e/ou um bacteriostato, um diluente, um dispersante, um tensoativo, um aglutinante, um lubrificante ou similar, como necessário.

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8/23 [0036] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ter as seguintes propriedades físico-químicas:

(a) sem bolhas na aparência, incolor e transparência;

(b) um pH de 7 ± 1;

(c) uma viscosidade de 60.000 a 100.000 cP;

(d) pressão osmótica média de 0,325 osmol/kg ± 10%;

(e) uma força de extrusão de 30 N ou menos;

(f) uma elasticidade de 70 a 95%; e (g) um ângulo de fase de 4 a 20°.

[0037] A viscosidade é a quantidade que representa a magnitude do atrito interno em um fluido, que é a resistência do fluido ao fluxo. Maior viscosidade resulta em facilidade de injeção e é útil para formar uma forma delicada. Por exemplo, uma carga monofásica de ácido hialurônico tem alta viscosidade, de modo que é injetada suavemente e é útil para formar uma forma delicada. Na presente invenção, a viscosidade pode ser medida usando Brookfield DV3T de acordo com as condições dos exemplos experimentais a serem descritos abaixo.

[0038] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ter uma viscosidade de 60.000 a 100.000 cP, 60.000 a 80.000 cP ou 60.000 a 72.000 cP.

[0039] A força de extrusão significa força de extrusão a uma taxa de injeção na qual um paciente se sente confortável. A expressão “um paciente se sente confortável” é usada para definir uma taxa de injeção que não causa lesões ou dor excessiva em um paciente quando a composição é injetada na derme. O termo “conforto” aqui utilizado abrange o conforto ou a capacidade de um médico ou profissional médico de injetar a composição, bem como o conforto de um paciente. Na presente invenção, a força de extrusão pode ser medida usando ΊΌ-101-161 disponível comercialmente na TestOne Co., Ltd. de acordo com as condições dos exemplos experimentais a serem descritos

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9/23 abaixo. Geralmente, quando a força de extrusão é baixa, não há dor por pressão durante a injeção da composição, e a injeção pode ser facilmente controlada.

[0040] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ter uma força de extrusão de 30 N ou menos ou 25 N ou menos.

[0041] A viscoelasticidade é a propriedade de um material que exibe características líquidas e sólidas quando uma força é aplicada ao material. Na presente invenção, a viscoelasticidade pode ser medida usando um reômetro de acordo com as condições dos exemplos experimentais a serem descritos abaixo. Especificamente, uma força que resiste a uma força aplicada e uma perda de energia na composição devido à força aplicada pode ser medida usando um reômetro para determinar o módulo de viscosidade, o módulo de elasticidade e o ângulo de fase.

[0042] Módulo de elasticidade (módulo de armazenamento; G’) significa a razão de tensão e estresse que um corpo elástico possui dentro do limite elástico. Como o módulo de elasticidade é maior, a composição é rígida e tem maior capacidade de resistir à tensão.

[0043] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ter um módulo de elasticidade de 500 a 1.500, 500 a 1.200 ou 550 a 850.

[0044] Módulo de viscosidade (módulo de perda; G”) é uma medida de energia perdida e pertence a um componente viscoso de um material.

[0045] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ter um módulo de viscosidade de 100 a 200 ou 150 a 190.

[0046] Além disso, a elasticidade pode ser calculada usando valores de módulo de elasticidade e de módulo de viscosidade pela fórmula a seguir. Como a elasticidade é maior, a capacidade de restaurar tecidos é excelente e a duração de um material de enchimento é prolongada.

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Elasticidade (%) = (100 x G7(G’ + G”)) [0047] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ter uma elasticidade de 70 a 95% ou 75 a 85%.

[0048] Além disso, o ângulo de fase é uma medida de se a composição está próxima de um estado líquido ou sólido. Quando o ângulo de fase é mais baixo, a composição tem características sólidas e, quando o ângulo de fase é mais alto, a composição tem características líquidas. No caso de um ângulo de fase alto, quando a deformação ocorre devido a uma força aplicada da expressão externa ou facial, a recuperação para o estado original é atrasada e a forma original não é mantida. No caso de um ângulo de fase baixo, o valor de G” se toma menor devido a uma resposta instantânea a fatores de deformação externos, de modo que a composição se parece mais com um corpo elástico do que com um fluido e, portanto, a composição não flui, e a sua forma original pode ser mantida continuamente. Assim, é muito importante manter adequadamente os valores de elasticidade e ângulo de fase na composição para injeção dérmica.

[0049] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ter um ângulo de fase de 4 a 20° ou 10 a 20°.

[0050] A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ser preparada através de um método comumente usado na técnica relacionada.

[0051] Além disso, a presente invenção provê um método de restauração de tecido, que inclui a administração da composição descrita acima para injeção dérmica a um mamífero.

[0052] O mamífero pode ser um humano.

[0053] A restauração do tecido se refere a aliviar temporariamente ou semi-permanentemente as rugas do corpo ou restaurar um estado livre de rugas, melhorar contornos, formar volume no tecido ou regenerar tecidos, como na cicatrização por injeção da composição. A derme e o tecido se

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11/23 referem aos da face, mama, quadril, órgão sexual e outras regiões do corpo. [0054] Em particular, a composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ser selecionada adequadamente de acordo com o grau de rugas de um usuário classificado de acordo com o padrão WSRS. O WSRS é um acrônimo para Wrinkle Severity Rating Scale e classifica o grau de rugas de um ser humano em 5 graus (séries 1 a 5). As séries 1 a 5 são ausência (sem dobras), leve (dobras rasas), moderadas (dobras moderadas), graves (dobras profundas) e extremas (dobras muito profundas), respectivamente. O teor detalhado do WSRS e cada série são descritos em um documento da Am J Clin Dermatol 2004; 5 (1): 49 a 52 1175 a 0561, e a presente invenção pode avaliar rugas de acordo com o WSRS usando um método apresentado no documento.

[0055] Enquanto isso, o Ministério da Segurança de Alimentos e Medicamentos da Coréia também classifica o grau de rugas em leve, moderado, grave e extremo, de acordo com o WSRS por meio de diretrizes para aprovação e revisão de uma carga cosmética dérmica à base de uma matéria-prima de ácido hialurônico emitida em dezembro 2017, que propõe incluir informações sobre o grau de rugas na descrição do objetivo de um preenchimento cosmético dérmico.

[0056] A composição de acordo com a presente invenção pode ser utilizada para dobras leves de Grau 2 ou dobras moderadas de Grau 3 no WSRS.

[0057] Além disso, uma seringa pode ser preenchida com a composição para injeção dérmica para injetar a composição nas camadas dérmicas.

[0058] As camadas dérmicas são classificadas na epiderme, derme e hipoderme. A composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção pode ser injetada na derme superficial ou na derme média.

[0059] A seguir, a presente invenção será descrita em mais detalhes

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12/23 com referência a exemplos de modalidades da presente invenção. No entanto, os exemplos a seguir são meramente apresentados para exemplificar a presente invenção, e o teor da presente invenção não está limitado aos exemplos a seguir. Isto é, os exemplos da presente invenção servem para completar a descrição da presente invenção e são providos para tornar conhecido o escopo completo da invenção àqueles com conhecimento e habilidade comuns na técnica a que esta invenção se refere. Esta invenção deve ser definida com base no escopo das reivindicações anexas.

Exemplos

Exemplo de referência. Medição de propriedades (1) Medição da viscosidade [0060] A viscosidade foi medida de acordo com um método de medição de viscosidade entre os métodos de teste gerais da Farmacopeia Coreana.

[0061] Especificamente, 500 ul de uma amostra de composição foram carregados em um copo de amostra de um viscosímetro (DV3T, Brookfield), o copo de amostra foi instalado em um copo de amostra CP-52 e a velocidade de rotação do eixo foi então ajustada para 2 rpm para medir viscosidade.

(2) medição da força de extrusão [0062] Um teste de compressão foi realizado usando uma máquina de teste universal (T0-101-161, TestOne).

[0063] Especificamente, uma seringa foi preenchida com uma amostra de composição, uma agulha de 27G 1/2 polegada foi instalada na seringa e a seringa foi então colocada em um gabarito. Posteriormente, uma velocidade de 50 mm/min e um deslocamento de 25 mm foram ajustados para realizar um teste de compressão.

(3) Medição da viscoelasticidade [0064] As propriedades reológicas foram medidas usando um reômetro.

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13/23 [0065] Especificamente, uma amostra foi colocada entre placas paralelas, uma força resistente a uma força aplicada e uma perda de energia foram medidas durante a vibração e rotação das placas paralelas para determinar o módulo de elasticidade (G’), módulo de viscosidade (G”), e o ângulo de fase da amostra.

[0066] As condições para a análise do reômetro são as seguintes: Frequência: 1 Hz

Temperatura: 25 °C

Tensão: 5%

Geometria de medição: placa de 20 mm

Distância de medição: 0,5 mm

Modo de medição: modo de oscilação [0067] Além disso, a elasticidade foi calculada pela fórmula a seguir, com referência aos valores G’ e G” medidos.

Elasticidade (%) = (100 x G7(G’ + G”))

Exemplos de preparação 1-1 a 1-20 (1) Preparação das primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado [0068] 10 g de hialuronato de sódio, 81 g de água purificada e 9 g de hidróxido de sódio 1 M (NaOH 1 M) foram agitados a 400 rpm sob vácuo até a mistura se tomar um gel transparente sem grânulos. Em seguida, foram adicionados 0,5 g de éter diglicidílico de butanodiol (BDDE) como agente de reticulação e agitados. Após a agitação estar completa, o recipiente foi selado e foi realizada uma reação de reticulação sob condições de 80 rpm e 50 °C por 1 hora. Em seguida, uma substância resultante foi deixada repousar a 27 °C por 16 horas para preparar um gel.

[0069] Posteriormente, o gel assim obtido foi inserido em 30 L de uma solução salina tamponada com fosfato 0,9X (PBS) e, em seguida, a solução de PBS foi trocada por uma nova a cada 3 horas (3 vezes/dia por 5 dias) para eliminar um reagente residual. Em seguida, uma substância

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14/23 resultante foi passada através de um moedor de argamassa (RS 200 disponível comercialmente na Retsch GmbH) por 40 minutos para preparar as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado.

[0070] As primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado assim preparadas tinham um diâmetro médio de partícula de cerca de 200 pm.

(2) Preparação de segundas partículas de ácido hialurônico reticulado [0071] 20 g de hialuronato de sódio, 117 g de água purificada e 13 g de NaOH 1 M foram agitados a 400 rpm sob vácuo até a mistura se tomar um gel transparente sem grânulos. Em seguida, adicionou-se 1 g de BDDE como agente de reticulação e agitou-se. Após a agitação estar completa, o recipiente foi selado e foi realizada uma reação de reticulação sob condições de 80 rpm e 50 °C por 1 hora. Em seguida, uma substância resultante foi deixada repousar a 27 °C por 16 horas para preparar um gel.

[0072] Posteriormente, o gel assim obtido foi introduzido em 30 L de uma solução de 0,9X de PBS e, em seguida, a solução de PBS foi trocada por uma nova a cada 3 horas (3 vezes/dia por 5 dias) para eliminar um reagente residual. Em seguida, uma substância resultante foi passada através de uma peneira de teste padrão de 200 pm para preparar as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado.

[0073] As segundas partículas de ácido hialurônico reticulado assim preparadas tinham um diâmetro médio de partícula de cerca de 300 a 700 pm.

(3) Preparação de ácido hialurônico não reticulado [0074] 2 g de hialuronato de sódio foram adicionados a 100 g de água purificada e agitados para preparar 2% de ácido hialurônico não reticulado.

(4) Preparação da composição do ácido hialurônico [0075] As primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado preparadas na etapa (1), as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado preparadas na etapa (2) e o ácido hialurônico não reticulado foram misturadas em teores (g) e razões de teor como mostrado na Tabela 1 a seguir para

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15/23 preparar composições de ácido hialurônico.

[Tabela 1]

	Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado	Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado	Ácido hialurônico não reticulado
Teor	Razão de teor	Teor	Razão de teor	Teor	Razão de teor
Exemplo de preparação 1-1	10	1	20	2	2	0,2
Exemplo de preparação 1-2	10	1	20	2	4	0,4
Exemplo de preparação 1-3	10	1	20	2	6	0,6
Exemplo de preparação 1-4	10	1	20	2	8	0,8
Exemplo de preparação 1-5	10	1	20	2	10	1,0
Exemplo de preparação 1-6	10	1	30	3	2	0,2
Exemplo de preparação 1-7	10	1	30	3	4	0,4
Exemplo de preparação 1-8	10	1	30	3	6	0,6
Exemplo de preparação 1-9	10	1	30	3	8	0,8
Exemplo de preparação 1-10	10	1	30	3	10	0,1
Exemplo de preparação 1-11	10	1	40	4	2	0,2
Exemplo de preparação 1-12	10	1	40	4	4	0,4
Exemplo de preparação 1-13	10	1	40	4	6	0,6
Exemplo de preparação 1-14	10	1	40	4	8	0,8
Exemplo de preparação 1-15	10	1	40	4	10	1,0
Exemplo de preparação 1-16	10	1	50	5	2	0,2
Exemplo de preparação 1-17	10	1	50	5	4	0,4
Exemplo de preparação 1-18	10	1	50	5	6	0,6
Exemplo de preparação 1-19	10	1	50	5	8	0,8
Exemplo de preparação 1-20	10	1	50	5	10	1,0

Exemplos de Preparação Comparativos 2-1 a 2-10.

[0076] Como exemplos comparativos das composições, incluindo todas as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, segundas partículas de ácido hialurônico reticulado e ácido hialurônico não reticulado, as composições de ácido hialurônico foram preparadas da mesma maneira que

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16/23 o Exemplo de Preparação 1, exceto que as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não reticulado foram misturadas no teor (g) e na razão de teor, como mostrado na Tabela 2 a seguir.

[Tabela 2]______________________________________________________________

	Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado	Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado	Ácido hialurônico não reticulado
Teor	Razão de teor	Teor	Razão de teor	Teor	Razão de teor
Exemplo de preparação comparativo 2-1	10	1	0	0	0	0
Exemplo de preparação comparativo 2-2	10	1	10	1	0	0
Exemplo de preparação comparativo 2-3	10	1	20	2	0	0
Exemplo de preparação comparativo 2-4	10	1	30	3	0	0
Exemplo de preparação comparativo 2-5	10	1	40	4	0	0
Exemplo de preparação comparativo 2-6	10	1	50	5	0	0
Exemplo de preparação comparativo 2-7	0	0	10	1	0	0
Exemplo de preparação comparativo 2-8	0	0	10	1	2	0,2
Exemplo de preparação comparativo 2-9	0	0	10	1	4	0,4
Exemplo de preparação comparativo 2-10	0	0	10	1	6	0,6

Exemplos de Preparação Comparativos 3-1 a 3-5.

[0077] As composições de ácido hialurônico foram preparadas da mesma maneira que o Exemplo de Preparação 1, exceto que as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não reticulado foram misturadas no teor (g) e na razão de teor, como mostrado na Tabela 3 a seguir.

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17/23 [Tabela 3]

	Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado	Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado	Ácido hialurônico não reticulado
Teor	Razão de teor	Teor	Razão de teor	Teor	Razão de teor
Exemplo de preparação comparativo 3-1	10	1	10	1	2	0,2
Exemplo de preparação comparativo 3-2	10	1	10	1	4	0,4
Exemplo de preparação comparativo 3-3	10	1	10	1	6	0,6
Exemplo de preparação comparativo 3-4	10	1	10	1	8	0,8
Exemplo de preparação comparativo 3-5	10	1	10	1	10	1,0

Exemplo experimental 1. Medição da viscosidade e força de extrusão [0078] Os resultados das medidas de viscosidade e força de extrusão são mostrados nas tabelas 4 a 6 a seguir.

[0079] A medição da viscosidade e força de extrusão foi realizada três vezes usando cada amostra, e os valores médios de três medições foram mostrados.

[Tabela 4]

	Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado	Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado	Ácido hialurônico não reticulado	Viscosidade (cP)	Força de extrusão (N)
Exemplo de preparação 1-1	1	2	0,2	78814	21,33
Exemplo de preparação 1-2	1	2	0,4	72166	19,25
Exemplo de preparação 1-3	1	2	0,6	70397	13,58
Exemplo de preparação 1-4	1	2	0,8	66202	11,78
Exemplo de preparação 1-5	1	2	1,0	61825	10,69
Exemplo de preparação 1-6	1	3	0,2	82970	22,03
Exemplo de preparação 1-7	1	3	0,4	82540	17,84
Exemplo de preparação 1-8	1	3	0,6	77700	15,08
Exemplo de preparação 1-9	1	3	0,8	71857	14,73

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18/23

Exemplo de preparação 1-10	1	3	1,0	71990	14,02
Exemplo de preparação 1-11	1	4	0,2	85880	25,70
Exemplo de preparação 1-12	1	4	0,4	78472	20,60
Exemplo de preparação 1-13	1	4	0,6	77579	15,51
Exemplo de preparação 1-14	1	4	0,8	75407	15,27
Exemplo de preparação 1-15	1	4	1,0	76840	11,61
Exemplo de preparação 1-16	1	5	0,2	94237	29,29
Exemplo de preparação 1-17	1	5	0,4	80335	19,43
Exemplo de preparação 1-18	1	5	0,6	80765	15,65
Exemplo de preparação 1-19	1	5	0,8	91084	13,04
Exemplo de preparação 1-20	1	5	1,0	84701	15,58

[Tabela 5]

	Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado	Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado	Ácido hialurônico não reticulado	Viscosidade (cP)	Força de extrusão (N)
Exemplo de preparação comparativo 2-1	1	0	0	25896	31,12
Exemplo de preparação comparativo 2-2	1	1	0	80170	74,35
Exemplo de preparação comparativo 2-3	1	2	0	105460	112,66
Exemplo de preparação comparativo 2-4	1	3	0	118182	121,24
Exemplo de preparação comparativo 2-5	1	4	0	140016	132,97
Exemplo de preparação comparativo 2-6	1	5	0	147077	125,77
Exemplo de preparação comparativo 2-7	0	1	0	26624	19,49
Exemplo de preparação comparativo 2-8	0	1	0,2	18587	10,32
Exemplo de preparação comparativo 2-9	0	1	0,4	17804	9,25
Exemplo de preparação comparativo 2-10	0	1	0,6	24717	6,68

[Tabela 6]

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19/23

	Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado	Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado	Ácido hialurônico não reticulado	Viscosidade (cP)	Força de extrusão (N)
Exemplo de preparação comparativo 3-1	1	1	0,2	57096	16,94
Exemplo de preparação comparativo 3-2	1	1	0,4	50249	13,78
Exemplo de preparação comparativo 3-3	1	1	0,6	43844	16,84
Exemplo de preparação comparativo 3-4	1	1	0,8	42146	12,35
Exemplo de preparação comparativo 3-5	1	1	1,0	38630	11,58

[0080] Como mostrado na Tabela 5, quando apenas as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado foram usadas (Exemplo de Preparação Comparativo 2-1) ou quando as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado e ácido hialurônico não reticulado foram usadas sem o primeiro ácido hialurônico reticulado, a viscosidade era baixa, portanto, é difícil aplicar essas composições a um material de enchimento.

[0081] Além disso, quando a primeira e a segunda partículas de ácido hialurônico reticulado foram usadas sem ácido hialurônico não reticulado, a força de extrusão aumentou, portanto, existe a possibilidade de ocorrer um problema no uso.

[0082] No entanto, como mostrado na Tabela 4, quando todas as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, segundas partículas de ácido hialurônico reticulado e ácido hialurônico não reticulado foram incluídas, composições de enchimento que satisfazem a viscosidade e a força de extrusão podem ser obtidas.

[0083] Em particular, quando as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e segundas partículas de ácido hialurônico reticulado foram incluídas em uma razão em peso de 1:1,5 ou mais a menos de 2,5, e as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e as partículas de ácido hialurônico não reticulado foram incluídas em uma razão de peso de 1:0,5 ou

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20/23 mais a 1,0 ou menos (Exemplos de Preparação 1-3 a 1-5), uma viscosidade de 60.000 a 80.000 cP, especificamente 60.000 a 72.000 cP, e uma força de extrusão de 25 N ou menos foram exibidas, portanto, essas composições são adequadas para a finalidade de restauração de tecidos.

[0084] Além disso, como mostrado na Tabela 6, quando uma razão de teor de segundas partículas de ácido hialurônico reticulado era de 1,5 ou menos, uma baixa viscosidade de menos de 60.000 cP era exibida, portanto, é difícil aplicar essas composições a um material de enchimento.

Exemplo experimental 2. Medição da viscoelasticidade [0085] Os resultados da medição de elasticidade, módulo de elasticidade (G’), módulo de viscosidade (G”) e ângulo de fase foram mostrados nas tabelas 7 a 9 a seguir.

[0086] A medida da viscoelasticidade foi realizada três vezes usando cada amostra, e um valor médio de três medidas foi mostrado.

[Tabela 7]

	Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado	Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado	Ácido hialurônico não reticulado	Elasticidade	G’	G”	Ângulo de fase
Exemplo de preparação 1-1	1	2	0,2	89,88	1177	132,5	6,43
Exemplo de preparação 1-2	1	2	0,4	86,63	1032	159,3	8,77
Exemplo de preparação 1-3	1	2	0,6	83,19	823	166,3	11,42
Exemplo de preparação 1-4	1	2	0,8	78,06	633,2	178	15,70
Exemplo de preparação 1-5	1	2	1,0	75,27	554,8	182,3	18,20
Exemplo de preparação 1-6	1	3	0,2	88,53	1209	156,7	7,39
Exemplo de preparação 1-7	1	3	0,4	86,87	1098	165,9	8,59
Exemplo de preparação 1-8	1	3	0,6	84,32	904,3	168,1	10,53
Exemplo de preparação 1-9	1	3	0,8	82,13	817,7	177,9	12,27
Exemplo de preparação 1-10	1	3	1,0	81,33	801	183,9	12,93
Exemplo de preparação 1-11	1	4	0,2	89,10	1255	153,5	6,98
Exemplo de preparação 1-12	1	4	0,4	86,65	1170	180,3	8,76

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21/23

Exemplo de preparação 1-13	1	4	0,6	84,96	1065	188,5	10,04
Exemplo de preparação 1-14	1	4	0,8	84,28	953,8	177,9	10,56
Exemplo de preparação 1-15	1	4	1,0	83,26	924,9	186	11,37
Exemplo de preparação 1-16	1	5	0,2	92,60	1383	110,6	4,57
Exemplo de preparação 1-17	1	5	0,4	91,66	1332	121,2	5,20
Exemplo de preparação 1-18	1	5	0,6	90,62	1333	137,9	5,91
Exemplo de preparação 1-19	1	5	0,8	86,62	1095	169,2	8,78
Exemplo de preparação 1-20	1	5	1,0	85,68	1137	190	9,49

[Tabela 8]

	Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado	Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado	Ácido hialurônico não reticulado	Elasticidade	G’	G”	Ângulo de fase
Exemplo de preparação comparativo 2-1	1	0	0	87,80	140,70	19,55	7,91
Exemplo de preparação comparativo 2-2	1	1	0	89,21	854,40	103,30	6,89
Exemplo de preparação comparativo 2-3	1	2	0	91,02	1158,0	114,30	5,64
Exemplo de preparação comparativo 2-4	1	3	0	91,44	1314,00	123,00	5,35
Exemplo de preparação comparativo 2-5	1	4	0	93,60	1359	92,96	3,91
Exemplo de preparação comparativo 2-6	1	5	0	93,90	1413	91,79	3,72
Exemplo de preparação comparativo 2-7	0	1	0	93,09	1839,00	136,50	4,24
Exemplo de preparação comparativo 2-8	0	1	0,2	84,17	846,20	159,10	10,65
Exemplo de preparação comparativo 2-9	0	1	0,4	71,79	319,90	125,70	21,45
Exemplo de preparação comparativo 2-10	0	1	0,6	67,56	72,11	34,62	25,65

[Tabela 9]

Primeira partícula de ácido hialurônico reticulado

Segunda partícula de ácido hialurônico reticulado

Ácido hialurônico não reticulado

Elasticidade

G’

G”

Ângulo de fase

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22/23

Exemplo de preparação comparativo 3-1	1	1	0,2	84,16	660,5	124,3	10,66
Exemplo de preparação comparativo 3-2	1	1	0,4	78,28	568,5	157,7	15,51
Exemplo de preparação comparativo 3-3	1	1	0,6	75,58	484	156,4	17,91
Exemplo de preparação comparativo 3-4	1	1	0,8	68,57	278,8	127,8	24,64
Exemplo de preparação comparativo 3-5	1	1	1,0	66,07	251	128,9	27,18

[0087] Como mostrado na Tabela 7, quando todas as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, segundas partículas de ácido hialurônico reticulado e ácido hialurônico não reticulado foram incluídas, podem ser obtidas composições de ácido hialurônico que satisfazem elasticidade e ângulo de fase.

[0088] Além disso, quando o ácido hialurônico reticulado foi incluído sem o ácido hialurônico não reticulado, o valor do ângulo de fase era baixo, de modo que a composição apresentava características sólidas elevadas, portanto, essas composições não são adequadas para uso como enchimento.

[0089] Enquanto isso, quando as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado foram incluídas em uma razão peso de 1:1 a 2 (Exemplos de Preparação Comparativos 3-1 a 3-5), os valores de elasticidade e ângulo de fase foram semelhantes àqueles dos exemplos de preparação, mas os valores de G’ foram baixos, portanto, o uso dessas composições como composições de enchimento é limitado.

[0090] Uma composição para injeção dérmica de acordo com a presente invenção satisfaz as condições de viscosidade, força de extrusão e viscoelasticidade para injeção dérmica, e um desvio da força de extrusão é baixo para que o usuário não sinta fadiga quando a composição é injetada na derme do mesmo.

[0091] Além disso, a composição é excelente em viscoelasticidade e

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23/23 capacidade de restauração de tecidos, é mantida por um longo período de tempo, permite recuperação rápida porque um grau de inchaço inicial é baixo e também é excelente em segurança e estabilidade no corpo.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição para injeção dérmica, caracterizada pelo fato de que compreende primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, segundas partículas de ácido hialurônico reticulado com diâmetros de partículas diferentes das primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e ácido hialurônico não reticulado, em que as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado são incluídas em uma razão em peso de 1:1,5 ou mais a 5,5 ou menos, e as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não reticulado são incluídos em uma razão em peso de 1:0,1 ou mais a 1,2 ou menos.
2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado têm um diâmetro médio de partícula de 10 a 250 pm.
3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado têm um diâmetro médio de partícula de 300 a 700 pm.
4. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a primeira partícula de ácido hialurônico reticulado, a segunda partícula de ácido hialurônico reticulado ou o ácido hialurônico não reticulado tem um peso molecular de 1.000.000 a 1.500.000 Da.
5. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a primeira partícula de ácido hialurônico reticulado ou a segunda partícula de ácido hialurônico reticulado tem um grau de reticulação de 10 a 20% em mol.
6. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que as primeiras partículas de ácido hialurônico reticulado, as segundas partículas de ácido hialurônico reticulado e o ácido hialurônico não

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2/3 reticulado são incluídas em 1 a 10 partes em peso em relação a 100 partes em peso de toda a composição.
7. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente o fator de crescimento epidérmico (EGF).
8. Composição de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o fator de crescimento epidérmico (EGF) está incluído em 0,0001 a 0,002 parte em peso em relação a 100 partes em peso de toda a composição.
9. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um componente anestésico.
10. Composição de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o componente anestésico é incluído em 0,1 a 1 parte em peso em relação a 100 partes em peso da composição.
11. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição para injeção dérmica tem as seguintes propriedades físico-químicas:

(a) sem bolhas na aparência, incolor e transparência, (b) umpH de 7 ± 1, (c) uma viscosidade de 60.000 a 100.000 cP, (d) pressão osmótica média de 0,325 osmol/kg ± 10%, (e) uma força de extrusão de 30 N ou menos, (f) uma elasticidade de 70 a 95%, e (g) um ângulo de fase de 4 a 20°.
12. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a composição para injeção dérmica tem uma viscosidade de 60.000 a 72.000 cP.
13. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a composição para injeção dérmica tem uma

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3/3 força de extrusão de 25 N ou menos.
14. Composição de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que a composição para injeção dérmica tem uma elasticidade de 75 a 85% e um ângulo de fase de 10 a 20°.