BR112019016056A2

BR112019016056A2 - Aparelho e método para isolar ou purificar substância alvo a partir de amostra biológica

Info

Publication number: BR112019016056A2
Application number: BR112019016056-6A
Authority: BR
Inventors: Woo Kim Sung; Young Byun Jae
Original assignee: Nanobiosys Inc.
Priority date: 2017-02-03
Filing date: 2017-12-12
Publication date: 2020-03-31
Also published as: EP3578267A1; CN110290875A; WO2018143557A1; EP3578267A4; KR20180090543A

Abstract

a presente invenção se refere a um aparelho e método para isolar ou purificar eficientemente uma substância alvo a partir de uma amostra biológica utilizando uma amostra compreendendo partículas magnéticas e um aparelho que compreende um imã. no aparelho de acordo com a presente invenção, uma unidade de transferência, juntamente com um movimento de rotação, sobe e desce em um reagente dentro de uma câmara, e assim as partículas magnéticas e um tampão são suficientemente misturados, de modo que mesmo quando uma pequena quantidade de tampão de eluição é usado, a mistura das partículas magnéticas e do tampão pode ser alcançada. além disso, uma vez que o reagente no interior da câmara é misturado por rotação rápida e forte, o processo não prossegue enquanto as partículas magnéticas permanecem no canto da câmara ou aderem a uma porção de parede da mesma, com os resultados que a eficiência de extração da substância alvo pode ser maximizada e a eficiência da análise de pcr subsequente também pode ser melhorada.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: APARELHO E MÉTODO PARA ISOLAR OU PURIFICAR SUBSTÂNCIA ALVO A PARTIR DE AMOSTRA BIOLÓGICA [Campo técnico] [001] A presente invenção se refere a um aparelho e método para isolar ou purificar uma substância alvo a partir de uma amostra biológica e, mais particularmente, a um aparelho e método que pode isolar ou purificar eficientemente uma substância alvo a partir de uma amostra biológica usando uma unidade fornecendo mistura suficiente de um tampão e partículas magnéticas em uma câmara de reação.

[Arte Antecedente] [002] Aparelhos para isolar ou purificar ácidos nucleicos ou substâncias biológicas de várias amostras biológicas, como sangue e células, são amplamente utilizados em vários campos, como biologia, bioquímica, medicina molecular, medicina forense e medicina diagnostica.

[003] Recentemente, a reação em cadeia da polimerase (PCR) para amplificação de DNA, que é a base de um rápido crescimento da biotecnologia, é frequentemente usada como uma etapa essencial no campo da pesquisa e diagnóstico biológicos.

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 6/41

2/34 [004] Embora métodos típicos de isolamento de ácidos nucleicos utilizados na PCR usem geralmente solventes orgânicos como fenol e clorofórmio, um material com afinidade com ácidos nucleicos é usado em vários métodos recentes. Exemplos de tal material compreendem partículas de silica, fibras de vidro, resinas de troca aniônica e esferas magnéticas.

[005] A publicação da patente US No. 5.234.809 A descreve um método para isolar o ácido nucleico a partir de uma amostra biológica usando partículas de silica, que compreende misturar um material de partida contendo ácido nucleico com um material caotrópico e um sólido contendo silica tendo afinidade com o núcleo ácido, separando o sólido com o ácido nucleico da mistura, lavando o complexo de ácido nucleico sólido obtido e isolando o ácido nucleico do complexo usando um tampão de eluição.

[006] Além disso, o documento WO 1991/12079 divulga um método para extrair ácido nucleico usando esferas magnéticas, que compreende precipitar o ácido nucleico através da adição de um sal e um álcool, agregando as esferas magnéticas ao ácido nucleico, lavando sólidos em suspensão com um agregado de grânulos de ácido nucleico fixado usando um campo magnético externo e isolando o ácido nucleico por eluição.

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 7/41

3/34 [007] Tais métodos que utilizam materiais sólidos com afinidade com ácidos nucléicos não requerem solventes orgânicos prejudiciais, minimizam a degradação física e bioquímica de ácidos nucleicos durante o isolamento e reduzem os efeitos da nuclease nos ácidos nucleicos fixos e, portanto, ainda estão sendo utilizados enquanto estão sendo repetidamente melhorados de várias maneiras.

[008] Em particular, aparelhos automatizados de extração de ácido nucleico, capazes de eliminar a necessidade de mover amostras manualmente usando uma pipeta, foram desenvolvidos nos últimos anos. A maioria desses dispositivos automatizados usa partículas magnéticas para remover uma etapa do uso de um solvente químico e uma etapa de centrifugação de um processo de coleta de ácidos nucleicos ou materiais biológicos de várias amostras biológicas.

[009] No entanto, esse método de isolamento ou purificação de ácidos nucleicos ou vários materiais biológicos usando partículas magnéticas tem um problema, pois as partículas magnéticas não são suscetíveis de serem suficientemente misturadas com um tampão ou de serem suficientemente lavadas, causando deterioração na eficiência de extração de materiais biológicos alvo. Além disso, como é provável que o isolamento e a extração de ácidos nucleicos sejam realizados com partículas magnéticas

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 8/41

4/34 aderidas a uma parede lateral de um recipiente, as partículas magnéticas podem fluir para um dispositivo de PCR junto com os ácidos nucleicos extraídos, causando deterioração na confiabilidade dos resultados da análise por PCR.

[Descrição detalhada da invenção] [Problema técnico] [0010] Modalidades da presente invenção foram concebidas para resolver esse problema na técnica e é um aspecto da presente invenção fornecer um aparelho e método para isolar ou purificar uma substância alvo a partir de uma amostra biológica, que pode agitar suficientemente a amostra biológica em uma câmara de reação, melhorando assim a eficiência no isolamento da substância alvo, como ácido nucleico, e pode manter as esferas magnéticas limpas durante a transferência e o tratamento das esferas magnéticas.

[Solução técnica] [0011] De acordo com um aspecto da presente invenção, um aparelho para isolar ou purificar uma substância alvo de uma amostra biológica usando partículas magnéticas compreende:

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 9/41

5/34 um recipiente compreendendo uma pluralidade de câmaras, cada uma tendo uma abertura em um lado superior da mesma; e uma unidade de transferência móvel para cima e para baixo para ser introduzida nas câmaras, parcialmente ou inteiramente formada por um imã para reter as partículas magnéticas por força magnética e móvel entre as câmaras para transferir as partículas magnéticas entre as câmaras.

[0012] Em uma modalidade, a unidade de transferência pode compreender: uma porção de ímã móvel para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada pelo ímã; e uma porção de anel externa que se move para cima e para baixo e entre as câmaras e permitindo que a porção de ímã se mova ao longo de um centro da mesma.

[0013] Em uma modalidade, a unidade de transferência pode ainda compreender uma cobertura de ímã que evita a contaminação do mesmo.

[0014] Em uma modalidade, a cobertura de ímã pode ser acoplada de forma destacável à porção do anel externo. Aqui, a cobertura de ímã pode ser acoplada à porção do anel externo através do encaixe por pressão.

[0015] Em uma modalidade, a porção do anel externo pode ser ligada rotativamente a um motor rotativo e a cobertura de ímã pode ser rotativa pela rotação da porção

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 10/41

6/34 do anel externo. Aqui, a porção do anel externo e a cobertura de ímã podem ser giradas de 100 rpm a 4.000 rpm.

[0016] Em uma modalidade, a cobertura de ímã pode ser formada de um material selecionado do grupo que consiste em policarbonato (PC), poliestireno (PS), polimetilmetacrilato (PMMA), copolímero de ciclo-olefinas (COC), polietileno (PE), poliamida (PA), polipropileno (PP) , éter polifenileno (PPE), polioximetileno (POM), polieteretercetona (PEEK), politetrafluoretileno (PTFE), cloreto de polivinila (PVC), fluoreto de polivinilideno (PVDF), tereftalato de polibutileno (PBT), etileno propileno fluorado (FEP), perfluoralcoxialcano (PFA), acrilonitrila-butadieno-estireno (ABS) e combinações dos mesmos.

[0017] Em uma modalidade, a cobertura de ímã pode compreender uma porção de protuberância compreendendo pelo menos uma protuberância.

[0018] Em uma modalidade, a porção de ímã pode compreender o ímã e um suporte que suporta o ímã e pode ainda compreender um elemento elástico entre o ímã e o suporte.

[0019] Em uma modalidade, o ímã pode ser um ímã permanente ou um eletroímã.

[0020] Em uma modalidade, a pluralidade de câmaras do recipiente pode ser ligada uma à outra em uma fileira, e

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 11/41

7/34 um ângulo formado entre uma parede de cada câmara e um plano perpendicular a um fundo da câmara pode variar de 3 a 10 graus.

[0021] Em uma modalidade, a amostra biológica pode ser pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em sangue, expectoração, bactérias, sêmen, tecido celular, saliva, cabelo, urina, uma amostra de aspirado, uma amostra de esfregaço e um fluido de cultura de células, e a substância alvo pode ser ácido nucleico.

[0022] Em uma modalidade, as partículas magnéticas podem ser formadas de um material paramagnético ou superparamagnético e podem compreender um revestimento externo de silica.

[0023] De acordo com outro aspecto da presente invenção, um dispositivo de transferência para transferir partículas magnéticas de uma primeira câmara para uma segunda câmara compreende: uma porção de ímã que se move para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada por um ímã; e uma porção de anel externo que se move para cima e para baixo e entre as câmaras e permitindo que a porção de ímã se mova ao longo de um centro da mesma.

[0024] Em uma modalidade, o dispositivo de transferência pode ainda compreender uma cobertura de ímã que evita a contaminação do ímã.

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 12/41

8/34 [0025] Em uma modalidade, a cobertura de ímã pode ser acoplada de forma destacável à porção do anel externo. Aqui, a cobertura de ímã pode ser acoplada à porção do anel externo através do encaixe por pressão.

[0026] Em uma modalidade, a porção do anel externo pode ser rotativa e a cobertura de ímã pode ser rotativa pela rotação da porção do anel externo.

[0027] Em uma modalidade, a cobertura de ímã pode compreender uma porção de protuberância compreendendo pelo menos uma protuberância.

[0028] De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, um método para transferir partículas magnéticas de uma primeira câmara para uma segunda câmara compreende:

fornecer um reagente compreendendo as partículas magnéticas para a primeira câmara;

posicionar uma unidade de transferência na primeira câmara, a unidade de transferência compreendendo uma porção de ímã que se move para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada por um ímã, uma porção de anel externa que se move para cima e para baixo e entre as câmaras e permitindo que a porção de ímã se desloque ao longo de um centro da mesma e uma cobertura de ímã acoplada de modo destacável à porção do anel externo e evitando a contaminação do ímã;

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 13/41

9/34 imergir uma porção da cobertura de imã no reagente deslocando a unidade de transferência para baixo com a porção do ímã deslocada para cima;

agitar o reagente na primeira câmara através de rotação, movimento vertical ou rotação e movimento vertical da cobertura de ímã;

prender as partículas magnéticas a uma superfície da cobertura de ímã deslocando a porção do ímã para baixo; e mover a unidade de transferência com as partículas magnéticas presas a esta para a segunda câmara.

[0029] Em uma modalidade, o método pode ainda compreender, após a movimentação da unidade de transferência para a segunda câmara, liberar as partículas magnéticas seguras movendo a porção do ímã para cima.

[0030] Em uma modalidade, o reagente pode compreender uma amostra biológica que retém uma substância alvo e um tampão de lise, em que a amostra biológica pode ser dissolvida no tampão de lise para descarregar a substância alvo a partir da mesma, de modo que a substância alvo descarregada seja acoplada às partículas magnéticas.

[0031] Em uma modalidade, a cobertura de ímã pode compreender uma porção de protuberância compreendendo pelo menos uma protuberância.

[0032] Em uma modalidade, a amostra biológica pode ser pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 14/41

10/34 sangue, expectoração, bactérias, sêmen, tecido celular, saliva, cabelo, urina, uma amostra de aspirado, uma amostra de esfregaço e um fluido de cultura de células, e a substância alvo pode ser ácido nucleico.

[0033] Em uma modalidade, as partículas magnéticas podem ser formadas de um material paramagnético ou superparamagnético e podem compreender um revestimento externo de silica.

[0034] De acordo com ainda outro aspecto da presente invenção, um método para isolar ou purificar uma substância alvo de uma amostra biológica usando partículas magnéticas compreende:

dissolver a amostra biológica e acoplar a substância alvo às partículas magnéticas, fornecendo um reagente compreendendo a amostra biológica, as partículas magnéticas e um tampão de lise a uma primeira câmara;

posicionar uma unidade de transferência na primeira câmara, a unidade de transferência compreendendo uma porção de ímã que se move para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada por um ímã, uma porção de anel externa que se move para cima e para baixo e entre as câmaras e permitir que a porção do ímã que se desloca ao longo de um centro do mesmo e uma cobertura de ímã acoplada de modo destacável à porção do anel externo e evitando a contaminação do ímã;

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 15/41

11/34 imergir uma porção da cobertura de ímã no reagente deslocando a unidade de transferência para baixo com a porção do ímã deslocada para cima;

prender as partículas magnéticas com a substância alvo acoplada a uma superfície da cobertura de ímã deslocando a porção do ímã para baixo;

lavar as partículas magnéticas movendo a unidade de transferência, à qual as partículas magnéticas que têm a substância alvo acoplada a ela foram presas, para a segunda câmara contendo um tampão de lavagem; e liberar a substância alvo das partículas magnéticas, movendo a unidade de transferência que tem as partículas magnéticas lavadas presas a ela para uma terceira câmara contendo um tampão de eluição.

[0035] Em uma modalidade, o método pode ainda compreender, após lavagem das partículas magnéticas, lavagem adicional das partículas magnéticas, movendo a unidade de transferência com as partículas magnéticas lavadas presas a ela para uma quarta câmara contendo um segundo tampão de lavagem.

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 16/41

12/34 [0036] Em uma modalidade, a cobertura de ímã pode compreender uma porção de protuberância compreendendo pelo menos uma protuberância.

[0037] Em uma modalidade, a amostra biológica pode ser pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em sangue, expectoração, bactérias, sêmen, tecido celular, saliva, cabelo, urina, uma amostra de aspirado, uma amostra de esfregaço e um fluido de cultura celular e a substância alvo pode ser ácido nucleico.

[0038] Em uma modalidade, as partículas magnéticas podem ser formadas de um material paramagnético ou superparamagnético e podem compreender um revestimento externo de silica.

[Efeitos vantajosos] [0039] No aparelho de acordo com a presente invenção, partículas magnéticas podem ser completamente misturadas com um tampão através da rotação e movimento vertical da unidade de transferência imersa em um reagente em uma câmara, em que a mistura das partículas magnéticas com o tampão pode ser alcançada mesmo usando uma pequena quantidade de um tampão de eluição.

[0040] Além disso, como o reagente na câmara é agitado através de rotação rápida e forte da unidade de transferência, é possível evitar a falha do processo devido a partículas magnéticas que ficam nos cantos da câmara ou

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 17/41

13/34 aderem a uma parede da câmara, maximizando assim a eficiência na extração de uma substância alvo, permitindo que um processo de análise de PCR subsequente seja conduzido com mais eficiência.

[Breve descrição dos desenhos] [0041] A FIG. 1 mostra uma vista em perspectiva (a) e uma vista em corte (b) de um recipiente 100 de acordo com uma modalidade da presente invenção.

[0042]	A	FIG. 2	é uma vista	em corte	de uma unidade
de transferência	200	de acordo	com uma	modalidade da
invenção. [0043]	A	FIG. 3	mostra uma	vista em	perspectiva de

uma unidade de acionamento 300 de acordo com uma modalidade da presente invenção.

[0044] A FIG. 4 mostra uma vista em perspectiva (a) , vista em seção (b) e vista parcialmente ampliada (c) de uma cobertura de ímã 230 de acordo com uma modalidade da presente invenção.

[0045] A FIG. 5 é uma vista que ilustra um processo de transferência de partículas magnéticas entre câmaras usando a unidade de transferência 200 de acordo com uma modalidade da presente invenção.

[Melhor modo para realização da invenção]

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 18/41

14/34 [0046] A seguir, modalidades da presente invenção serão descritas com referência aos desenhos anexos. Deve ser entendido que a presente invenção não está limitada às modalidades a seguir e pode ser realizada de maneiras diferentes, e que as modalidades são fornecidas para divulgação completa e compreensão completa da presente invenção por aqueles versados na técnica.

[0047] Um aparelho de acordo com a presente invenção é usado para isolar ou purificar uma substância alvo de uma amostra biológica com alta eficiência usando partículas magnéticas.

[0048] Como usado aqui, o termo amostra biológica se refere a uma amostra que compreende células vivas contendo uma substância alvo a ser analisada ou detectada e pode compreender, por exemplo, sangue, expectoração, bactérias, sêmen, tecido celular, saliva, cabelo, urina, uma amostra de aspirado, uma amostra de esfregaço e um fluido de cultura de células.

[0049] Como aqui utilizado, o termo substância alvo se refere a uma substância a ser finalmente analisada ou detectada e pode compreender qualquer substância que possa ser imobilizada por partículas sólidas. Por conseguinte, a substância alvo pode compreender, por exemplo, ácidos nucleicos como DNA e RNA, proteína, polipeptídeo, componentes de bioafinidade utilizados na

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 19/41

15/34 medição mecânica (anticorpos, antigenos ou complexos dos mesmos), componentes de bioafinidade usados como comprimidos de proteínas (por exemplo, proteína biotinilada), estreptavidina e complexos dos mesmos.

[0050] Como aqui utilizado, o termo partículas magnéticas se refere a partículas finas formadas de um material magnético ou magnetizante, em que o material magnético ou magnetizante se refere a um material paramagnético, um material superparamagnético ou um material ferromagnético. Em uma modalidade da invenção, as partículas magnéticas podem ser partículas paramagnéticas ou superparamagnéticas.

[0051] De acordo com a presente invenção, as partículas magnéticas podem ser revestidas com um material hidrofílico para serem acopladas a biomateriais, como ácidos nucleicos, e são preferencialmente revestidas com silica, ou um grupo carboxila. Na presente invenção, as partículas magnéticas podem ser partículas magnéticas revestidas com silica.

[0052] As partículas magnéticas aplicáveis à presente invenção podem ter um diâmetro de partícula de 100 nm a 1.000 nm, preferencialmente 200 nm a 800 nm, mais preferencialmente 300 nm a 700 nm.

[0053] Um aspecto da presente invenção se refere a um aparelho para isolar ou purificar uma substância alvo de

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 20/41

16/34 uma amostra biológica usando partículas magnéticas. 0 aparelho compreende: um recipiente 100 compreendendo uma pluralidade de câmaras 110 cada uma tendo uma abertura no seu lado superior; e uma unidade de transferência 200 que se move para cima e para baixo a ser introduzida nas câmaras, parcial ou inteiramente formada por um ímã para reter as partículas magnéticas (doravante, também denominadas esferas magnéticas) por força magnética, e móvel entre as câmaras para transferir as partículas magnéticas entre as câmaras.

[0054] Referindo-se à FIG. 1 (a) e FIG. 1 (b) , o recipiente 100 compreende a pluralidade de câmaras 110, as quais são preferencialmente dispostas em fileira. Cada uma das câmaras 110 é fornecida com uma amostra biológica, esferas magnéticas, um tampão ou semelhante adequado para um procedimento de processamento desejado. Especificamente, depois de um tampão adequado para cada processo ser fornecido com uma câmara correspondente 110, as esferas magnéticas são movidas entre as câmaras usando a unidade de transferência 200 de acordo com a presente invenção, isolando finalmente a substância alvo.

[0055] Na presente invenção, a unidade de transferência 200 serve para mover as partículas magnéticas, preferencialmente, as partículas magnéticas que formam um complexo em combinação com a substância alvo, de

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 21/41

17/34 uma câmara para outra. A FIG. 2 é uma vista em corte de uma unidade de transferência 200 de acordo com uma modalidade da invenção. Uma unidade de transferência 200 de acordo com esta modalidade é composta principalmente de uma porção de imã 210 e uma porção de anel externo 220 e pode ainda compreender uma cobertura de imã 230.

[0056] Referindo-se à FIG. 2, a porção de imã 210 está disposta para passar através de um eixo central da porção de anel externo 220 e é móvel para cima e para baixo em uma direção axial da mesma. Aqui, a porção magnética 210 pode ser movida para baixo para um local no qual uma extremidade inferior da porção magnética 210 está suficientemente perto de um fundo 112 da câmara 110 para aplicar força magnética às esferas magnéticas no fundo 112 da câmara 110 a partir de um imã 211 da porção magnética 210. Além disso, a porção magnética 210 pode ser movida para um local no qual o imã 211 da porção magnética 210 aplica pouca ou nenhuma força magnética às esferas magnéticas na câmara 110. Aqui, a expressão o imã 211 aplica pouca ou nenhuma força magnética às esferas magnéticas significa que a mistura das esferas magnéticas com um tampão não é afetada pela força magnética do imã.

[0057] Como descrito acima, a porção de imã 210 compreende o imã 211 para reter as partículas magnéticas por força magnética. De preferência, o ímã 211 está

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 22/41

18/34

localizado	na	extremidade inferior da porção do ímã	210
para aplicar	força magnética às partículas magnéticas	no
fundo 112	da	câmara 110. 0 ímã 211 pode ser um	ímã
permanente	OL	i um eletroímã, preferencialmente um	ímã
permanente. [0058]		Além disso, a porção de ímã 210 pode

compreender um suporte 212 que suporta o ímã 211. 0 suporte 212 é disposto dentro da porção de anel externo 220 para ser móvel para cima e para baixo e transmite o movimento vertical do mesmo ao ímã 211. Além disso, o suporte 212 pode ser ligado a um meio que está presente fora da unidade de transferência 200 para controlar o movimento vertical do suporte. A porção de ímã 210 pode compreender um elemento elástico 213 disposto entre o ímã 211 e o suporte 212 para fornecer absorção de impacto. De preferência, o elemento elástico 213 é uma mola. Especificamente, o elemento elástico 213 serve para evitar danos ou desprendimento da cobertura de ímã devido ao impacto no acoplamento da cobertura de ímã ao ímã.

[0059] Como mostrado na FIG. 2, a porção de anel externo 220 é configurada para permitir que a porção de ímã 210 passe através do centro da mesma e é móvel para cada câmara, de modo que a porção de ímã 210 esteja localizada dentro da câmara. Além disso, a porção de anel externo 220 pode ser móvel para cima e para baixo independentemente do

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 23/41

19/34 movimento vertical axial da porção de imã 210. Desta maneira, a própria unidade de transferência 200 pode ser introduzida na câmara 110 e, portanto, a cobertura de imã descrita abaixo pode ser movida perto do fundo 112 da câmara 110.

[0060] A porção de anel externo 220 pode compreender um corpo 221, uma bucha linear 222 e uma polia 223. A polia 223 transmite torque da porção externa para a porção de anel externo 220, de modo que a porção de anel externo 220 possa ser girada. A bucha linear 222 é disposta entre o corpo 221 e a porção de imã 210 para impedir que a rotação da porção de anel externo 220 seja transmitida para a porção de imã 210 enquanto permite o movimento vertical da porção de imã 210.

[0061] A FIG. 3 é uma vista em perspectiva de uma unidade de acionamento 300 compreendendo a porção de anel externo 220 e um motor rotativo. A porção de anel externo 220 é suportada em uma placa de suporte 310 e recebe torque do motor rotativo 320 através de uma correia dentada 330 e da polia 223. Como mostrado na FIG. 2, um mancai 224 está disposto entre a porção de anel externa 220 e a placa de suporte 310 de modo que a porção de anel externa 220 suportada na placa de suporte 310 possa ser girada suavemente. De preferência, o motor rotativo 320 é um motor DC de 2.000 a 5.000 rpm.

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 24/41

20/34 [0062] A unidade de transferência 200 de acordo com a presente invenção pode ainda compreender a cobertura de imã 230, como mostrado na FIG. 4. A cobertura de imã 230 está configurada para cobrir o imã 211 na extremidade inferior da porção do ímã 210 para evitar que o ímã 211 seja contaminado por um reagente. Uma vez que a cobertura de ímã 230 entra em contato direto com o reagente, a cobertura de ímã 230 é preferencialmente descartável.

[0063] A cobertura de ímã 230 pode ser acoplada de forma destacável ao corpo 221 da porção do anel externo 220. Por exemplo, a cobertura de ímã 230 pode ser acoplada ao corpo 221 da porção do anel externo 220 através de encaixe por pressão. Neste caso, o corpo 221 pode compreender um elemento de vedação, como um anel de vedação, que é disposto em uma junção entre o corpo 221 e a cobertura de ímã 230 para evitar que o reagente flua para o ímã através da junção, permitindo firme acoplamento entre a cobertura de ímã 230 e o corpo 221 e fácil desmontagem da cobertura de ímã 230 do corpo após a remoção da cobertura de ímã após o uso.

[0064] Na presente invenção, uma vez que a cobertura de ímã 230 é acoplada de modo destacável à porção do anel externo 220, o torque da porção do anel externo 220 pode ser transmitido diretamente à cobertura de ímã 230 para girar a cobertura de ímã. Ao girar a porção do anel

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 25/41

21/34 externo 220 operando o motor rotativo após mover a porção do anel externo 220 para baixo para permitir que a cobertura de imã 230 seja colocada no reagente na câmara, a cobertura de imã 230 é capaz de ser girada dentro do reagente na câmara para agitar o reagente. Além disso, a cobertura de imã 230 sofre movimento vertical e movimento rotacional dentro do reagente ao operar a porção de anel externo 220 para girar simultaneamente com o movimento para cima e para baixo, pelo que o reagente pode ser agitado com

mais eficiência. Desta	forma,	com	a cobertura	de	ímã 230
proporcionando agitação	eficiente	do reagente,	as	reações
no reagente podem prosseguir	mais	ativamente e	as	esferas
magnéticas no fundo	podem	ser	suspensas	para	serem

facilmente seguras por uma força magnética em um processo subsequente. Além disso, partículas aderidas ao fundo ou parede da câmara podem ser liberadas no reagente, melhorando assim a confiabilidade da reação.

[0065] A cobertura de ímã 230 pode compreender uma porção de acoplamento 231, uma porção de corpo 232, uma porção de fixação de partículas 233 e uma porção de protuberância 234. A porção de acoplamento 231 é adaptada para ser acoplada ao corpo 221 da porção de anel externo 220 e preferencialmente tem uma forma adequada para o acoplamento ao corpo 221 da porção de anel externo 220. Por exemplo, se a porção de acoplamento 231 for acoplada ao

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 26/41

22/34 corpo 221 através de encaixe por pressão, é desejável que a porção de acoplamento 231 tenha um diâmetro interno adequado para encaixe por pressão no corpo 221.

[0066] A porção de corpo 232 assegura um espaço para o movimento vertical da porção do ímã 210 e estende um comprimento que permite que o ímã 211 na extremidade inferior da porção do ímã 210 entre em contato com uma extremidade inferior interna da cobertura de ímã 230 ao mover a porção de ímã 210 para uma posição mais baixa da mesma.

[0067] Quando a porção de ímã 210 é movida para a posição mais baixa da mesma, o ímã 211 está localizado dentro da porção de fixação de partículas 233. Por conseguinte, as partículas magnéticas podem ser fixadas na porção de fixação de partículas 233 pela força magnética do ímã 211. Preferencialmente, a porção de fixação de partículas 233 tem uma forma adequada para contato próximo com o ímã 211 sem consumo desnecessário de força magnética. Além disso, a porção de fixação de partículas 233 tem preferencialmente uma espessura T de 2 mm ou menos, preferencialmente 1 mm ou menos, mais preferencialmente 0,5 mm ou menos, de modo a transmitir facilmente a força magnética através dela.

[0068] De acordo com a presente invenção, a cobertura de ímã 230 compreende preferencialmente a porção

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 27/41

23/34 de protuberância 234 na extremidade inferior da porção do corpo 232. Referindo-se à FIG. 4 (c) , a porção de protuberância 234 pode compreender pelo menos uma protuberância para permitir que o reagente seja agitado com mais eficiência após a rotação da cobertura de ímã 230 no reagente. Embora a forma da protuberância possa ser simples, como mostrado na FIG. 4 (c) , deve ser entendido que a presente invenção não está limitada a ela, e a protuberância pode ter uma forma de hélice para gerar um vórtice no reagente. Além disso, a porção de protuberância 234 pode compreender uma pluralidade de protuberâncias de formato específico que sobressaem da porção de corpo 232 ou da porção de fixação de partículas 233 da cobertura de ímã 230. Alternativamente, a porção de protuberância 234 pode ser fornecida através da formação de uma pluralidade de recessos de forma específica na porção do corpo 232 ou na porção de fixação de partículas 233, de modo que o restante da porção do corpo ou a porção de fixação de partículas se projete em relação às protuberâncias.

[0069] Na presente invenção, a cobertura de ímã 230 é preferencialmente formada por um material com alta permeabilidade magnética e pode ser formada por uma resina termoplástica ou uma resina termoendurecível. Por exemplo, a cobertura de ímã 230 é preferencialmente formada de um material selecionado do grupo que consiste em policarbonato

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 28/41

24/34 (PC), poliestireno (PS), polimetilmetacrilato (PMMA) , copolímero de ciclo-olefinas (COC), polietileno (PE) , poliamida (PA), polipropileno (PP), éter polifenileno (PPE), polioximetileno (POM), polieteretercetona (PEEK), politetrafluoroetileno (PTFE), cloreto de polivinila (PVC), fluoreto de polivinilideno (PVDF), fluoreto de polivinilideno (PVDF), tereftalato de polibutileno (PBT), etileno propileno fluorado (FEP), perfluoralcoxialcano (PEA), acrilonitrila-butadieno-estireno (ABS) e combinações dos mesmos, e é mais preferencialmente formado de policarbonato (PC) ou copolímero de ciclo-olefinas (COC).

[0070] Um microcomputador típico pode ser usado como um controlador que controla o movimento dos componentes mencionados acima. Será entendido que um microchip ou similar que desempenha a mesma função também pode ser usado. Tal controlador é bem conhecido na técnica e sua descrição detalhada será omitida. O aparelho de acordo com a presente invenção pode ser operado total e automaticamente pelo controlador.

[0071] Outro aspecto da presente invenção se refere a um método para transferir partículas magnéticas de uma primeira câmara para uma segunda câmara usando o aparelho descrito acima.

[0072] O método compreende:

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 29/41

25/34 fornecer um reagente compreendendo partículas magnéticas na primeira câmara;

posicionar uma unidade de transferência na primeira câmara, a unidade de transferência compreendendo uma porção de ímã que se move para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada por um ímã, uma poção de anel externo que se move para cima e para baixo e entre as câmaras e permite que a porção do ímã se mova ao longo de um centro do mesmo, e uma cobertura de ímã acoplada de modo destacável à porção do anel externo e evita a contaminação do ímã;

imergir uma porção da cobertura de ímã no reagente deslocando a unidade de transferência para baixo com a porção do ímã deslocada para cima;

prender as partículas magnéticas a uma superfície da cobertura de ímã deslocando a porção do ímã para baixo; e mover a unidade de transferência com as partículas magnéticas presas nela para a segunda câmara.

[0073] O método pode ainda compreender, após deslocar a unidade de transferência para a segunda câmara, liberar as partículas magnéticas presas deslocando a porção do ímã para cima.

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 30/41

26/34 [0074] Agora, um processo de mover as partículas magnéticas da primeira câmara para a segunda câmara usando o aparelho de acordo com a presente invenção será descrito em detalhes com referência à FIG. 5.

[0075] Primeiro, o reagente que contém uma amostra biológica, um tampão de lise e partículas magnéticas é fornecido à primeira câmara 110, como mostrado na FIG. 5 (a). Então, a amostra biológica é dissolvida no tampão de lise na câmara 110 para descarregar uma substância alvo a partir dela e, em seguida, a substância alvo descarregada é acoplada às partículas magnéticas para formar um complexo. Portanto, a expressão mover as partículas magnéticas para outra câmara usando a unidade de transferência 200, como aqui utilizada, significa não apenas mover as próprias partículas magnéticas, mas também mover o complexo das partículas magnéticas e da substância alvo.

[0076] Com referência à FIG. 5 (a), a unidade de transferência 200 está posicionada acima da câmara 110 com a cobertura de ímã 230 acoplada à porção do anel externo 220. Nesse momento, a porção do ímã 210 é movida para cima. As partículas magnéticas se depositam no fundo da câmara dentro a partir de certo período de tempo após o fornecimento do reagente à câmara 110.

[0077] A seguir, a unidade de transferência 200 é deslocada para baixo, de modo que a extremidade inferior da

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 31/41

27/34 cobertura de imã 230 esteja próxima ao fundo 112 da câmara 110, como mostrado na FIG. 5 (b) . Neste momento, a porção de imã 210 permanece deslocada para cima para não ser completamente inserida na cobertura de imã 230.

[0078] Depois disso, quando a porção do anel externo 220 é operada para girar e se mover para cima e para baixo, como mostrado na FIG. 5 (c), a cobertura de imã 230 gira e se move para cima e para baixo para agitar o reagente. Como resultado, a reação residual prossegue no reagente e as partículas magnéticas são suspensas no reagente sem aderir ao fundo ou à parede da câmara 110. Aqui, a cobertura de ímã 230 pode ser girada de 100 rpm a 4.000 rpm, de um modo preferido 200 rpm a 2.000 rpm e, de um modo mais preferido, 250 rpm a 400 rpm, a fim de otimizar a agitação do reagente.

[0079] Aqui, é importante que o torque da cobertura de ímã 230 seja aplicado uniformemente no interior da câmara para permitir uma agitação mais eficiente do reagente enquanto evita que as partículas magnéticas fiquem nos cantos da câmara. Para este fim, a parede 111 da câmara é inclinada em um ângulo predeterminado em relação a um plano perpendicular ao fundo 112. Aqui, o ângulo predeterminado varia preferencialmente de 3 a 10 graus, mais preferencialmente de 6 a 8 graus.

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 32/41

28/34 [0080] A seguir, a unidade de transferência 200 é deslocada para cima para permitir que a cobertura de ímã 220 seja completamente removida do reagente, como mostrado na FIG. 5 (d) e, em seguida, a porção do ímã 210 é deslocada para baixo para posicionar o ímã 211 dentro da porção de fixação de partículas 233 da cobertura de ímã 230, como mostrado na FIG. 5 (e). As etapas da FIG. 5 (d) e FIG. 5 (e) podem ser omitidas, conforme necessário. Neste caso, após a etapa da FIG. 5 (c) , a porção de ímã 210 é

deslocada	para baixo	para	prosseguir	diretamente para	a
etapa da FIG. 5 (f) . [0081] A FIG.	5 (	f) mostra '	um estado em que	a
cobertura	de ímã 230	está	localizada	próxima ao fundo	da
câmara deslocando a	unidade de transferência 200 para

baixo, com a porção do ímã 210 deslocada para baixo. Podese ver que as partículas magnéticas foram atraídas e presas à porção de fixação de partículas 233 pela força magnética do ímã 211, que está localizado dentro da porção de fixação de partículas, ao contrário da FIG. 5 (b).

[0082] Depois de prender as partículas magnéticas à cobertura de ímã 230, as partículas magnéticas (tendo a substância alvo acoplada a ela) são movidas deslocando a unidade de transferência 200 para cima e depois deslocando a unidade de transferência 200 para outra câmara, como mostrado na FIG. 5 (g) . Depois de deslocar a unidade de

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 33/41

29/34 transferência 200 para a outra câmara, a porção do anel externo 220 é deslocada para baixo para introduzir a cobertura de ímã 220 e as partículas magnéticas presas nela em um reagente na outra câmara e, em seguida, a porção do ímã 211 é deslocada para cima, de modo que sua força magnética não é mais aplicada às partículas magnéticas, permitindo assim que as partículas magnéticas sejam liberadas.

[0083] Na presente invenção, a amostra biológica pode ser pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em sangue, expectoração, bactérias, sêmen, tecido celular, saliva, cabelo, urina, uma amostra de aspirado, uma amostra de esfregaço e um fluido de cultura de célula e a substância alvo pode ser ácido nucleico.

[0084] Na presente invenção, as partículas magnéticas são preferencialmente formadas de um material paramagnético ou superparamagnético e, preferencialmente, compreendem um revestimento externo de silica.

[0085] Outro aspecto da presente invenção se refere a um método para isolar ou purificar uma substância alvo a partir de uma amostra biológica utilizando o aparelho de acordo com a presente invenção.

[0086] O método compreende:

dissolver a amostra biológica e acoplar a substância alvo a partículas magnéticas, fornecendo um reagente,

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 34/41

30/34 compreendendo a amostra biológica, as partículas magnéticas e um tampão de lise a uma primeira câmara;

posicionar uma unidade de transferência na primeira câmara, a unidade de transferência compreendendo uma porção de imã que se move para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada por um imã, uma porção de anel externo que se move para cima e para baixo e entre as câmaras e permitir que a porção do ímã se mova ao longo de um centro do mesmo e uma cobertura de ímã acoplada de modo destacável à porção do anel externo e evitar a contaminação do ímã;

prender as partículas magnéticas tendo a substância alvo acoplada a uma superfície da cobertura de ímã deslocando a porção do ímã para baixo; e lavar as partículas magnéticas deslocando a unidade de transferência, à qual foram presas as partículas magnéticas com a substância alvo acoplada a ela, para uma segunda câmara contendo um tampão de lavagem; e

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 35/41

31/34 liberar a substância alvo das partículas magnéticas, deslocando a unidade de transferência que tem as partículas magnéticas lavadas presas a ela para uma terceira câmara contendo um tampão de eluição.

[0087] O método pode ainda compreender, após lavagem das partículas magnéticas, lavagem adicional das partículas magnéticas, deslocando a unidade de transferência com as partículas magnéticas lavadas presas a ela para uma quarta câmara contendo um segundo tampão de lavagem.

[0088] Em uma modalidade, o método pode ainda compreender lavar as partículas magnéticas uma ou duas vezes da mesma maneira que acima.

[0089] Agora, o método para isolar ou purificar a substância alvo da amostra biológica usando o aparelho de acordo com a presente invenção será descrito em mais detalhes.

[0090] Na presente invenção, a amostra biológica pode ser pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em sangue, expectoração, bactérias, sêmen, tecido celular, saliva, cabelo, urina, uma amostra de aspirado, uma amostra de esfregaço e um fluido de cultura de célula e a substância alvo pode ser ácido nucléico.

[0091] Na presente invenção, as partículas magnéticas são preferencialmente formadas de um material

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 36/41

32/34 paramagnético ou superparamagnético e, de preferência, compreendem um revestimento externo de silica.

[0092] Na presente invenção, o tampão de lise, o tampão de lavagem, o segundo tampão de lavagem e o tampão de eluição podem compreender quaisquer tampões adequados comumente usados na técnica e podem ser preparados apropriadamente usando os reagentes divulgados na Patente No. US 5.130.423, Patente No. US 5.234.809 e Publicação Internacional de Patente No. WO 1991/012079.

[0093] Por exemplo, o tampão de lise de acordo com a presente invenção pode compreender: sais caotrópicos como GuHCl e GuSCN; tampões como Tris-HCl; sais como NaCI; quelantes como ácido etilenodiaminotetracético (EDTA); e tensoativos não iônicos como Tween-20 e Triton X-100.

[0094] Por exemplo, o tampão de lavagem de acordo com a presente invenção pode compreender: sais caotrópicos como GuHCl e GuSCN; tensoactivos não iônicos, tais como Tween-20 e Triton X-100; e álcoois como etanol.

[0095] Por exemplo, o segundo tampão de lavagem de acordo com a presente invenção pode compreender: álcoois como etanol; e sais como NaCI.

[0096] Por exemplo, o tampão de eluição de acordo com a presente invenção pode compreender: tampões como Tris-HCl; e quelantes como EDTA.

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 37/41

33/34 [0097] Na presente invenção, a dissolução da amostra biológica e o acoplamento da substância alvo às partículas magnéticas podem ser realizados a uma temperatura de 40 °C a 60 °C, especificamente de 50 °C a 58 °C, mais especificamente cerca de 56 °C.

[0098] Em outra modalidade, dissolver a amostra biológica e acoplar a substância alvo às partículas magnéticas pode compreender: dissolver a amostra biológica fornecendo a amostra biológica e o tampão de lise para a primeira câmara e aquecer a câmara a uma temperatura de 40 °C a 60 °C, especificamente 50 °C a 58 °C, mais especificamente cerca de 56 °C; introduzir etanol e as partículas magnéticas na primeira câmara contendo a amostra biológica dissolvida; e acoplar a substância alvo às partículas magnéticas.

[0099] Na presente invenção, ao deslocar um complexo da substância alvo e das partículas magnéticas para a terceira câmara, a substância alvo é liberada das partículas magnéticas pelo tampão de eluição na terceira câmara. Embora a liberação da substância alvo das partículas magnéticas possa ser realizada à temperatura ambiente, deve-se entender que a liberação da substância alvo das partículas magnéticas pode ser realizada aquecendo a terceira câmara a uma temperatura predeterminada,

Petição 870190097455, de 30/09/2019, pág. 38/41

34/34 dependendo dos tipos de tampões de eluição e substâncias alvo.

[00100] Depois de liberar a substância alvo das partículas magnéticas, a unidade de transferência é deslocada para baixo para acoplar as partículas magnéticas à cobertura de ímã e depois é deslocada para outra câmara ou para o exterior para remover as partículas magnéticas da terceira câmara, de modo que apenas a substância alvo e o tampão de eluição permanecem na terceira câmara. A substância alvo presente no tampão de eluição, por exemplo, ácido nucleico, pode ser isolada usando qualquer método adequado conhecido na técnica, e a substância alvo isolada, por exemplo, o ácido nucleico, pode ser usada em um processo subsequente, como um processo de PCR.

[00101] Embora a presente invenção tenha sido descrita com referência a algumas modalidades, em conjunto com os desenhos anexos, deve ser entendido que as modalidades anteriores são fornecidas apenas para ilustração e não devem ser de forma alguma interpretadas como limitativas da presente invenção e que várias modificações, alterações, e modalidades equivalentes podem ser feitas pelas pessoas versadas na técnica sem se afastar da essência e do escopo da invenção.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Aparelho para isolar ou purificar uma substância alvo a partir de uma amostra biológica usando partículas magnéticas caracterizado pelo fato de compreender:

um recipiente (100) compreendendo uma pluralidade de câmaras (110), cada uma tendo uma abertura em um lado superior da mesma; e uma unidade de transferência (200) deslocável para cima e para baixo para ser introduzida nas câmaras (110), parcialmente ou inteiramente formada por um ímã para reter as partículas magnéticas por força magnética, e deslocável entre as câmaras (110) para transferir as partículas magnéticas entre as câmaras (110) .
2. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a unidade de transferência (200) compreende:

uma porção de imã (210) deslocável para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada do ímã; e uma porção de anel externo (220) deslocável para cima e para baixo e rotativo, e permitindo que a porção de ímã (210) se mova ao longo de um centro da mesma.
3. Aparelho, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a unidade de transferência (200) compreende adicionalmente uma cobertura de imã (230)

Petição 870200007517, de 16/01/2020, pág. 5/15

2/8

que evita a contaminação do imã, em que a cobertura de ímã (230) é acoplada de forma desmontável à porção do anel externo (220). 4. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a cobertura de ímã ( 230) está acoplada à porção do anel externo (220) através do encaixe por pressão. 5. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a porção do anel externo

(220) está ligada rotativamente a um motor rotativo (320) e a cobertura do ímã (230) é rotativa pela rotação da porção do anel externo (220) .

6. Aparelho, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o anel externo e a cobertura do ímã (230) são rodados de 100 rpm a 4.000 rpm.

7. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a cobertura magnética (230) é formada por um material selecionado do grupo que consiste em policarbonato (PC), poliestireno (PS), polimetilmetacrilato (PMMA), copolímero de ciclo-olefinas (COC), polietileno (PE), poliamida (PA), polipropileno (PP) , éter de polifenileno (PPE), polioximetileno (POM), polieteretercetona (PEEK), politetrafluoretileno (PTFE), cloreto de polivinilo (PVC), polivinilideno fluoreto (PVDF), tereftalato de polibutileno (PBT), etileno

Petição 870200007517, de 16/01/2020, pág. 6/15

3/8 propileno fluorado (FEP), perfluoroalcoxialcano (PEA), acrilonitrila-butadieno-estireno (ABS) e combinações dos mesmos .

8. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a cobertura do imã (230) compreende uma porção de protuberância (234) que compreende pelo menos uma protuberância.

9. Aparelho, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a porção de imã (210) compreende o ímã (211) e um suporte (212) que suporta o ímã (211) .

10. Aparelho, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a porção de ímã (210) compreende adicionalmente um elemento elástico (213) entre o ímã (211) e o suporte (212) .

11. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a pluralidade de câmaras (110) do recipiente (100) está ligada uma à outra em uma f ila.

12. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que uma parede (111) da câmara (110) é inclinada em um ângulo predeterminado em relação a um plano perpendicular ao fundo.

13. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a amostra biológica é pelo

Petição 870200007517, de 16/01/2020, pág. 7/15
4/8 menos uma selecionada do grupo que consiste em sangue, expectoração, bactérias, sêmen, tecido celular, saliva,

cabelo, urina, uma amostra de aspirado, uma amostra de esfregaço e um fluido de cultura de células, em que a substância alvo é ácido nucleico. 14. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as partículas magnéticas são formadas por superparamagnético. um material paramagnético ou 15. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as partículas magnéticas

compreendem um revestimento externo de silica.

16. Dispositivo de transferência para transferir partículas magnéticas de uma primeira câmara para uma segunda câmara caracterizado pelo fato de compreender:

uma porção de ímã (210) deslocável para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada por um ímã; e uma porção de anel externo (220) deslocável para cima e para baixo e entre as câmaras (110) e permitindo que a porção de ímã (210) se mova ao longo de um centro da mesma.

17. Método para transferir partículas magnéticas de uma primeira câmara para uma segunda câmara caracterizado pelo fato de compreender:

fornecer um reagente compreendendo as partículas

Petição 870200007517, de 16/01/2020, pág. 8/15
5/8 magnéticas na primeira câmara;

posicionar uma unidade de transferência (200) na primeira câmara, a unidade de transferência (200) compreendendo uma porção de imã (210) deslocável para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou inteiramente formada por um imã, uma porção de anel externo (220) deslocável para cima e para baixo e entre as câmaras (110) e permitindo que a porção de imã (210) se desloque ao longo de um centro da mesma, e uma cobertura de imã (230) acoplada de modo destacável à porção de anel externo (220) e evitando a contaminação do imã;

imergir uma porção da cobertura do imã (230) no reagente, deslocando a unidade de transferência (200) para baixo, com a porção do imã (210) deslocada para cima;

agitar o reagente na primeira câmara através da rotação da cobertura do imã (230), movimento vertical da cobertura do imã (230), ou rotação e movimento vertical da cobertura do imã (230);

prender as partículas magnéticas a uma superfície da cobertura do ímã (230), deslocando a porção do ímã (210) para baixo; e mover a unidade de transferência (200) com as partículas magnéticas presas a esta para a segunda câmara.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente, após

Petição 870200007517, de 16/01/2020, pág. 9/15
6/8 a movimentação da unidade de transferência (200) para a segunda câmara, liberar as partículas magnéticas seguras movendo a porção do ímã (210) para cima.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que o reagente compreende uma amostra biológica que retém uma substância alvo e um tampão de lise, em que a amostra biológica é dissolvida no tampão de lise para descarregar a substância alvo a partir da mesma, e em que a substância alvo descarregada é acoplada às partículas magnéticas.

20. Método para isolar ou purificar uma substância alvo de uma amostra biológica usando partículas magnéticas caracterizado pelo fato de compreender:

dissolver a amostra biológica e acoplar a substância alvo às partículas magnéticas, fornecendo um reagente compreendendo a amostra biológica, as partículas magnéticas e um tampão de lise para uma primeira câmara;

posicionar uma unidade de transferência (200) na primeira câmara, a unidade de transferência (200) compreendendo uma porção de ímã (210) deslocável para cima e para baixo em uma direção axial da mesma e parcialmente ou totalmente formada por um ímã, uma porção de anel

Petição 870200007517, de 16/01/2020, pág. 10/15
7/8 externo (220) deslocável para cima e para baixo e entre as câmaras (110) e permitindo a porção de ímã (210)se deslocar ao longo de um centro da mesma, e uma coberturade ímã (230) acoplada de modo destacável à porção do anel externo (220) e evitando a contaminação do ímã;

imergir uma porção da cobertura do ímã (230)no reagente, deslocando a unidade de transferência (200) para baixo, com a porção do ímã (210) deslocada para cima;

agitar o reagente na primeira câmara através da rotação e/ou movimento vertical da cobertura do ímã (230);

prender as partículas magnéticas que possuem a substância alvo acoplada a uma superfície da cobertura do ímã (230), deslocando a porção de ímã (210) para baixo; e lavar as partículas magnéticas movendo a unidade de transferência, à qual as partículas magnéticas que têm a substância alvo acoplada à mesma foram presas, para a segunda câmara contendo um tampão de lavagem; e liberar a substância alvo das partículas magnéticas movendo a unidade de transferência (200) tendo as partículas magnéticas lavadas presas para uma terceira câmara contendo um tampão de eluição.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente, após lavagem das partículas magnéticas, a lavagem adicional das partículas magnéticas, movendo a unidade de transferência

Petição 870200007517, de 16/01/2020, pág. 11/15
8/8 (200) tendo as partículas magnéticas lavadas presas para uma quarta câmara contendo um segundo tampão de lavagem.