BR112019013862A2 - dosagem padrão de imunossupressores acoplados a nanocarreadores sintéticos - Google Patents

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Ilyinskii Petr
Kei Kishimoto Takashi
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Abstract

a presente invenção refere-se a métodos e a composições relacionadas fornecidos aqui para administração de vetores virais e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor. em algumas modalidades, os métodos e as composições fornecidos aqui realizam uma melhor expressão do transgene e/ou redução da resposta imune, como respostas imunes de igm e/ou igg reguladas negativamente.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para DOSAGEM PADRÃO DE IMUNOSSUPRESSORES ACOPLADOS A NANOCARREADORES SINTÉTICOS.
PEDIDOS RELACIONADOS [001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade sob 35 U.S.C. § 119 do pedido provisório de patente dos Estados Unidos NQ. 62/443.658 depositado em 7 de janeiro, 2017, pedido provisório de patente dos Estados Unidos NQ. 62/445.637, depositado em 12 de janeiro, 2017 e pedido provisório de patente dos Estados Unidos NQ. 62/545.412, depositado em 14 de agosto, 2017, todo o conteúdo de cada é incorporado aqui a título de referência.
CAMPO DA INVENÇÃO [002] A presente invenção refere-se, pelo menos em parte, a métodos e a composições relacionadas para administração de vetores virais e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor. Em algumas modalidades, os métodos e as composições fornecidos aqui realizam uma maior expressão do transgene e/ou redução das respostas imunes, como respostas imunes de IgM e/ou IgG reguladas negativamente contra os vetores virais.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO [003] Em um aspecto, um método compreendendo a coadministração de uma primeira rodada do vetor viral e de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor a um indivíduo, e administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor em um ou mais pontos de tempo antes e/ou após a coadministração da primeira rodada, onde as administrações anteriores e/ou posteriores dos nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor ocorre dentro de 1 mês, duas semanas, uma semana, 1 dia, 12 horas,
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2/112 horas, uma hora, 30 minutos ou 15 minutos, antes ou após a, respectivamente, coadministração da primeira rodada ser fornecida.
[004] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos aqui, o método compreende ainda a coadministração de uma segunda rodada do vetor viral e nanocarreadores sintéticos, compreendendo um imunosupressor para o indivíduo, e administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor em um ou mais pontos de tempo antes e/ou após a coadministração da segunda rodada, em que as administrações anteriores e/ou posteriores dos nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor ocorre dentro de 1 mês, duas semanas, uma semana, 1 dia, 12 horas, 6 horas, uma hora, 30 minutos ou 15 minutos, antes ou após a, respectivamente, coadministração da segunda rodada.
[005] Em um aspecto, um método compreendendo a coadministração de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e um vetor viral a um indivíduo, e a administração de, pelo menos, uma pré-dose e/ou, pelo menos, uma pós-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor sem o vetor viral a um indivíduo é fornecido.
[006] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, pelo menos uma pré-dose e pelo menos uma pós-dose é administrada ao indivíduo. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, pelo menos duas pré-doses são administradas ao indivíduo. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, pelo menos duas pós-doses são administradas ao indivíduo.
[007] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a coadministração é repetida no indivíduo.
[008] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, pelo menos uma pré-dose e pelo menos uma pós-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor sem
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3/112 o vetor viral é administrada ao indivíduo com cada etapa de coadministração repetida. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, pelo menos uma pré-dose e pelo menos uma pósdose é administrada ao indivíduo com cada etapa de coadministração repetida. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, pelo menos duas pré-doses são administradas ao indivíduo com cada etapa de coadministração repetida. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, pelo menos duas pós-doses são administradas ao indivíduo com cada etapa de coadministração repetida.
[009] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 mês antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de duas semanas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de uma semana antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 3 dias antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 2 dias antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 dia antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 12
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4/112 horas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 6 horas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de uma hora antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 30 minutos antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 15 minutos antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
[0010] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, cada pré-dose e/ou pós-dose é administrada dentro de 3 dias da etapa de coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, cada pré-dose e/ou pós-dose é administrada dentro de 2 dias da etapa de coadministração.
[0011] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, cada pós-dose é administrada quinzenalmente após a etapa de coadministração.
[0012] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a quantidade do imunossupressor de cada pré-dose é igual à quantidade do imunossupressor de cada etapa de coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a quantidade do imunossupressor de cada pós-dose é igual à quantidade do imunossupressor de cada etapa de coadministração.
[0013] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, cada pré-dose, pós-dose e/ou etapa de coadministração é por administração intravenosa.
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5/112 [0014] Em um aspecto, é fornecido um método compreendendo para um primeiro indivíduo (1) a coadministração (a) de uma dose de imunossupressor compreendendo nanocarreadores sintéticos e (b) uma dose de um vetor viral, e (2) administração, sem uma dose do vetor viral, (c) uma pré-dose e/ou uma pós-dose do imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos, em que a quantidade do imunossupressor de (a) e (c) juntos é igual a uma quantidade do imunossupressor de (d) uma dose do imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos que quando coadministrados com o vetor viral, sem uma pré-dose ou uma pós-dose do imunossupressor acoplado aos nanocarreadores sintéticos, reduz uma resposta imune contra o vetor viral ou aumenta a expressão do transgene do vetor viral em um segundo indivíduo.
[0015] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a quantidade do imunossupressor da pré-dose ou pós-dose de (c) não é mais do que metade da quantidade de (d). Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a quantidade do imunossupressor da pré-dose ou pós-dose de (c) é a metade da quantidade de (d).
[0016] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, uma pré-dose e uma pós-dose é administrada ao primeiro indivíduo em (c). Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a quantidade do imunossupressor da pré-dose e pós-dose de (c) é a mesma. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a quantidade do imunossupressor de (a) é a mesma que a quantidade da pré-dose ou pós-dose de (c).
[0017] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, em (c) pelo menos duas pré-doses são administradas ao primeiro indivíduo. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, em (c) pelo menos duas pós-doses são administradas ao primeiro indivíduo.
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6/112 [0018] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, (1) e (2) são repetidos.
[0019] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 mês antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 2 semanas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 semana antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 3 dias antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 2 dias antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 dia antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 12 horas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 6 horas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de uma hora antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s)
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7/112 e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 30 minutos antes ou após a, respectivamente, uma coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 15 minutos antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
[0020] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, cada pré-dose e/ou pós-dose é administrada dentro de 3 dias da etapa de coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, cada pré-dose e/ou pós-dose é administrada dentro de 2 dias da etapa de coadministração. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, cada pós-dose é administrada quinzenalmente após a etapa de coadministração.
[0021] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, cada pré-dose, pós-dose e/ou etapa de coadministração é por administração intravenosa.
[0022] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o vetor viral compreende uma ou mais sequências de controle de expressão. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a uma ou mais sequências de controle de expressão compreende um promotor específico do fígado. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a uma ou mais sequências de controle de expressão compreende um promotor constitutivo.
[0023] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o método compreende ainda avaliação da resposta de IgM e/ou IgG para o vetor viral no indivíduo em um ou mais pontos de tempo. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, pelo menos um dos pontos tempo da avaliação da resposta de IgM e/ou IgG é posterior a uma coadministração.
[0024] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos
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8/112 fornecidos, o vetor viral e os nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor são misturados para cada coadministração.
[0025] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o vetor viral é um vetor retroviral, um vetor adenoviral, um vetor lentiviral ou um vetor viral adeno-associado.
[0026] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o vetor viral é um vetor viral adeno-associado. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o vetor viral adeno-associado é um vetor viral adeno-associado AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV6.2, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10 ou AAV11.
[0027] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o imunossupressor da coadministração e/ou pré-dose e/ou pós-dose é um inibidor da via NF-kB. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o imunossupressor da coadministração e/ou pré-dose e/ou pós-dose é um inibidor de mTOR. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos aqui, o inibidor de mTOR é a rapamicina.
[0028] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o imunossupressor é acoplado aos nanocarreadores sintéticos. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o imunossupressor é encapsulado em nanocarreadores sintéticos.
[0029] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, os nanocarreadores sintéticos da coadministração e/ou prédose e/ou pós-dose compreendem nanopartículas lipídicas, nanopartículas poliméricas, nanopartículas metálicas, emulsões à base de tensoativos, dendrímeros, fulerenos, nanofios, partículas semelhantes a vírus ou partículas de peptídeo ou proteína.
[0030] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos
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9/112 fornecidos, os nanocarreadores sintéticos compreendem nanocarreadores sintéticos. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, as nanopartículas poliméricas compreendem um poliéster, poliéster acoplado a um poliéter, ácido poliamino, policarbonato, poliacetal, policetal, polissacarídeo, polietiloxazolina ou polietileneimina. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, as nanopartículas poliméricas compreendem um poliéster e um poliéster acoplado a um poliéter. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o poliéster compreende um poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), poli(ácido láctico-co-glicólico) ou policaprolactona. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, as nanopartículas poliméricas compreendem um poliéster e um poliéster acoplado a um poliéter. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o poliéter compreende polietileno glicol ou polipropileno glicol.
[0031] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a média de uma distribuição de tamanho de partículas obtido através de dispersão de luz dinâmica de uma população dos nanocarreadores sintéticos é um diâmetro maior que 110nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é maior que 150nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é maior que 200nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é maior que 250nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 5pm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 4pm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 3pm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 2pm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 1 pm. Em uma modalidade
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10/112 de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 750nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 500nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 450nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 400nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 350nm. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, o diâmetro é menor que 300nm. [0032] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a carga do imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos, em média em todo os nanocarreadores sintéticos, é entre 0,1% e 50% (peso/peso). Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a carga é entre 0,1% e 25%. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a carga é entre 1% e 25%. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, a carga é entre 2% e 25%.
[0033] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos, uma razão de aspecto de uma população dos nanocarreadores sintéticos é maior que 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 ou 1:10.
[0034] Em um aspecto, é fornecido um kit compreendendo uma ou mais de qualquer uma das pré-doses fornecidas aqui ou uma ou mais de qualquer uma das pós-doses fornecidas aqui, cada uma, por exemplo, conforme descrito em qualquer uma das reivindicações, e uma dose de qualquer um dos nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor fornecido aqui para a coadministração com um vetor viral.
[0035] Em uma modalidade de qualquer um dos kits fornecidos, o kit compreende adicionalmente uma dose de qualquer um dos vetores virais fornecidos aqui.
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11/112 [0036] Em uma modalidade de qualquer um dos kits fornecidos, o kit compreende uma ou mais de qualquer uma das pré-doses fornecidas aqui e uma ou mais de qualquer uma das pós-doses fornecidas aqui.
[0037] Em uma modalidade de qualquer um dos kits fornecidos, o kit compreende ainda instruções para o uso. Em uma modalidade de qualquer um dos kits fornecidos, as instruções para o uso compreendem instruções para realizar qualquer um dos métodos fornecidos aqui.
[0038] Em uma modalidade de qualquer um dos kits fornecidos, os nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor para a administração com um vetor viral são qualquer um dos nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor fornecido aqui, por exemplo, conforme descrito em qualquer uma das reivindicações.
[0039] Em uma modalidade de qualquer um dos kits fornecidos, o vetor viral é qualquer um dos vetores virais fornecidos aqui, por exemplo, conforme descrito em qualquer uma das reivindicações.
[0040] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos fornecidos aqui, as administrações anteriores e/ou posteriores dos nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor não incluem a administração do vetor viral.
[0041] Em outro aspecto, é fornecido um kit compreendendo qualquer um ou uma combinação de nanocarreadores sintéticos de qualquer um dos métodos fornecidos aqui. Em uma modalidade de qualquer um dos kits fornecidos, o kit compreende adicionalmente um vetor viral de qualquer um dos métodos fornecidos aqui. Em uma modalidade de qualquer um dos kits fornecidos, o kit compreende adicionalmente uma ou mais pré-dose e/ou pós-doses de qualquer um dos métodos fornecidos aqui.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0042] As Figuras 1A e 1B mostram atividade de SEAP e níveis de
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12/112 anticorpos IgG AAV com e sem os nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina.
[0043] As Figuras 2A e 2B mostram atividade de SEAP nos d19 e d75, respectivamente. A Figura 2C mostra os níveis de anticorpos IgG AAV em ambos os d19 e d75.
[0044] A Figura 3A mostra a dinâmica de expressão de SEAP. A Figura 3B mostra os níveis de anticorpos IgG AAV nos d12 e d19.
[0045] As Figuras 4A e 4B mostram a distribuição de tamanho por volume de AAV e nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina.
[0046] A Figura 5A mostra IgM AAV sérica nos d5 e d10 após administração de AAV. A Figura 5B mostra IgG AAV sérica nos d7, d12, d19ed89.
[0047] A Figura 6 mostra IgM AAV no d7 versus expressão de SEAP dirigida por AAV longitudinal.
[0048] A Figura 7 mostra os níveis de anticorpos IgG AAV nos d7, d12, d19ed33.
[0049] A Figura 8 mostra a dinâmica de expressão de SEAP (d7d47).
[0050] A Figura 9 mostra os níveis de anticorpos IgM AAV nos d5 e d13.
[0051] A Figura 10 mostra os níveis de anticorpos IgG AAV nos d9, d13ed20.
[0052] A Figura 11A é um gráfico que mostra a dinâmica de expressão de SEAP em determinados pontos no tempo após a inoculação inicial de AAV com AAV-SEAP ± nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (SVP[Rapa]). A Figura 11B é um gráfico que mostra a formação de IgG AAV em diferentes períodos de tempo após a inoculação inicial de AAV com AAV-SEAP ± nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (SVP[Rapa]).
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13/112 [0053] A Figura 12 é um gráfico que mostra a dinâmica de expressão de SEAP em tempos específicos após a injeção com AAVSEAP ± nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (SVP[Rapa]).
[0054] A Figura 13A é um gráfico que mostra a dinâmica de expressão de SEAP dirigida por AAV em tempos específicos camundongos pré-imunizados com AAV8. A Figura 13B é um gráfico que mostra a formação de IgG AAV em pontos de tempo diferentes com diferentes combinações e regimes de administração SVP[Rapa].
[0055] A Figura 14A é um gráfico que mostra a dinâmica de expressão de SEAP em camundongos com uma baixa IgG AAV e seguindo duas doses de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (SVP[Rapa]). A Figura 14B é um gráfico que mostra a expressão de SEAP no d139, comparando o grupo que recebeu nenhuma ou uma dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (SVP[Rapa]) no reforço AAV (d92) e o grupo que recebeu duas doses de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (SVP[Rapa]) no reforço AAV (d92). A Figura 14C é um gráfico que mostra a dinâmica de IgG AAV após as administrações de AAV-(RFP/SEAP) nos pontos de tempo especificados. A Figura 14D é um gráfico que mostra uma correlação negativa entre IgG AAV e atividade de SEAP no d153.
[0056] A Figura 15A é um gráfico que mostra a dinâmica de SEAP no soro após a primeira injeção de AAV sob diferentes regimes de administração de SVP[Rapa]. A Figura 15B é um gráfico que mostra IgG AAV depois de vetor AAV e nanocarreadores sintéticos compreendendo co-injeção de rapamicina (SVP[Rapa]), seguido de diferentes regimes de administração de SVP[Rapa].
[0057] A Figura 16 mostra as medições de IgG AAV no d116 em grupos co-injetados com AAV e SVP[Rapa] e, em seguida, tratados com diferentes regimes de SVP[Rapa].
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14/112 [0058] A Figura 17A é um gráfico que mostra as dinâmicas de SEAP (AAV-SEAP, 1 x 1O10 VG; dO/125) em diferentes pontos de tempo (dias pós-dose de preparação com AAV). A Figura 17B é um gráfico que representa os resultados de um ELISA. Os gráficos mostram os níveis de IgG AAV após diferentes regimes de tratamento (nos d7, d12, d19, d47 e d75).
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0059] Antes de descrever a presente invenção em detalhes, é para ser entendido que esta invenção não é limitada a materiais particularmente exemplificadores ou parâmetros do processo como tal podem, evidentemente, variar. É para ser entendido também que a terminologia usada aqui é para efeitos de descrição de modalidades específicas da invenção apenas, e não se destina a ser limitante do uso de terminologia alternativa para descrever a presente invenção.
[0060] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente citados aqui, se supra ou infra, são incorporados por referência em sua totalidade, para todos os efeitos. Tal modalidade por referência não se destina a ser uma admissão de que qualquer uma das publicações, patentes e pedidos de patentes incorporados citados aqui constituem técnica anterior.
[0061] Conforme usado neste relatório descritivo e nas reivindicações em anexo, as formas singulares um, uma, o e a incluem referências no plural, a menos que o conteúdo determine claramente o contrário. Por exemplo, a referência a um polímero inclui uma mistura de duas ou mais dessas moléculas ou uma mistura de diferentes pesos moleculares de uma única espécie de polímero, a referência a um nanocarreador sintético inclui uma mistura de dois ou mais desses nanocarreadores sintéticos ou uma pluralidade de tais nanocarreadores sintéticos, a referência a uma molécula de DNA inclui uma mistura de duas ou mais dessas moléculas de DNA ou uma
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15/112 pluralidade de tais moléculas de DNA, a referência a um imunossupressor inclui uma mistura de duas ou mais dessas moléculas imunossupressoras ou uma pluralidade de tais moléculas imunossupressoras, e similares.
[0062] Como usado aqui, o termo compreende ou suas variações como compreender ou compreendendo são para ser lidos para indicar a inclusão de qualquer número inteiro mencionado (por exemplo, um recurso, elemento característico, propriedade, método/etapa do processo ou limitação) ou grupo de números inteiros (por exemplo, recursos, elementos característicos, propriedades, métodos/etapas do processo ou limitações), mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro ou grupo de números inteiros. Assim, como usado aqui, o termo compreendendo é inclusive e não exclui números inteiros adicionais não mencionados ou método/etapas do processo.
[0063] Em modalidades de qualquer uma das composições e métodos fornecidos aqui, compreendendo pode ser substituído por consistindo essencialmente em ou consistindo de. A frase consistindo essencialmente em é usada aqui para exigir o(s) número(s) inteiro(s) especificado(s) ou etapas, bem como aqueles que não afetam materialmente o caractere ou a função da invenção reivindicada. Como usado aqui, o termo consistindo é usado para indicar a presença do número inteiro mencionado (por exemplo, um recurso, elemento característico, propriedade, método/etapa do processo ou limitação) ou grupo de números inteiros (por exemplo, recursos, elementos característicos, propriedades, métodos/etapas do processo ou limitações) sozinhos.
A. INTRODUÇÃO [0064] Vetores virais, como aqueles baseados em vírus adenoassociados (AAVs), têm mostrado grande potencial em aplicações terapêuticas, como a terapia gênica. No entanto, o uso de vetores virais
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16/112 na terapia gênica e outras aplicações têm sido limitado devido a imunogenicidade como resultado de exposição a antígenos virais. Indivíduos expostos a vetores virais exibem, muitas vezes, respostas imunes e, por fim, acabam adquirindo resistência ao vetor viral e/ou enfrentando reações inflamatórias significativas. Ambas as respostas imunes celulares e humorais contra o vetor viral podem diminuir a eficácia e/ou reduzir a capacidade de usar essas terapêuticas, como em um contexto de administração de repetição. Essas respostas imunes incluem respostas de anticorpos, células B e célula T e podem ser específicas para antígenos virais do vetor viral, como proteínas do capsídeo viral ou de revestimento, ou peptídeos das mesmas.
[0065] Os inventores descobriram surpreendentemente que regimes de dosagem que incluem uma pré-dose e/ou pós-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor em combinação com uma coadministração de nanocarreadores sintéticos e vetor viral podem alcançar a redução a resposta imune melhorada e/ou expressão do transgene melhorada. Tais melhorias são significativas em relação à coadministração de nanocarreadores sintéticos e vetor viral sozinhos (sem uma pré-dose ou pós-dose). Por exemplo, como mostrado nos Exemplos, foi demonstrado que as administrações de nanocarreadores sintéticos contendo rapamicina antes e/ou após a injeção de vetor AAV8 trópico do fígado coadministrado com nanocarreadores sintéticos contendo rapamicina, mantiveram o maior e o mais estável níveis de expressão do transgene depois de ambas as injeções inicial e de acompanhamento em animais virgens de tratamento e imunes a AAV. Isto combinado com a menor resposta de anticorpo AAV.
[0066] Além disso, também foi surpreendentemente descoberto que a quantidade de imunossupressores, quando compreendidos nos nanocarreadores sintéticos de uma etapa de coadministração, podería
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17/112 ser reduzida com uma pré-dose ou pós-dose em relação à etapa de coadministração sozinha (sem pré-dose ou pós-dose). Assim, uma quantidade de imunossupressores, quando compreendidos nos nanocarreadores sintéticos, pode ser dividida entre uma pré-dose e/ou pós-dose e dose coadministrada em qualquer um dos regimes de tratamento fornecidos aqui. Por exemplo, os Exemplos demonstram que dividir uma dose de um imunossupressor, quando compreendido nos nanocarreadores sintéticos, em duas partes e a administração da primeira meia dose antes coinjeção de vetor AAV com a segunda meia dose foi benéfico, tanto em termos de expressão do transgene e para efeito supressivo sobre IgG antiviral, em relação a quando a mesma dose total de imunossupressores, quando compreendidos em nanocarreadores sintéticos, foi simplesmente co-injetada com o vetor AAV.
[0067] Além disso, foi surpreendentemente descoberto que a administração do vetor viral pode resultar em respostas imunes de IgM robustas logo após a administração do vetor viral. Também foi descoberto que nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e administrados em tempos em relação à administração de vetor viral induzem a elevada expressão do transgene em uma forma dependente de IgM, em alguns exemplos. Especificamente, os nanocarreadores sintéticos foram descobertos para regular negativamente a indução de uma resposta imune de IgM para vetores virais adeno-associados e que os níveis de IgM foram inversamente correlacionados à expressão do transgene, com altos níveis de anticorpo IgM após administração de vetor viral correlacionando a baixos níveis de expressão do transgene, e viceversa. Além disso, esta correlação foi encontrada para persistir após uma administração adicional de um vetor viral. Antes de esses achados, foi mostrado que nanocarreadores sintéticos compreendendo
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18/112 imunossupressores regulam negativamente respostas do anticorpo IgG para um número de antígenos, incluindo proteínas solúveis e partículas virais. No entanto, para administração de vetor viral, pode ser que outras respostas imunes, como as respostas de anticorpo IgM, sejam tão importantes, em certos contextos, como, por exemplo, expressão do transgene.
[0068] Por conseguinte, os inventores têm surpreendentemente e inesperadamente descoberto que os problemas e as limitações observadas acima podem ser superados, praticando a invenção revelada aqui. Métodos e composições são fornecidos e oferecem soluções aos obstáculos referidos acima para o uso eficaz de vetores virais para tratamento. São fornecidos aqui métodos e composições para o tratamento de um indivíduo com um vetor viral compreendendo qualquer uma das construções de vetor viral fornecidas aqui em combinação com nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor em uma miríade de diferentes regimes de dosagem, em particular com um pré-dose e/ou pós-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor. Os métodos e composições relacionadas fornecidos podem permitir um melhor uso de vetores virais e podem resultar em uma redução de respostas imunes indesejadas, como respostas imunes de IgM e/ou IgG, e/ou resultar em maior eficácia, como, por exemplo, através da expressão do transgene aumentada.
[0069] A presente invenção será descrita agora em detalhe abaixo.
B. DEFINIÇÕES [0070] Administração ou administrando ou administrar significa dar ou dispensar um material a um indivíduo de tal forma que seja farmacologicamente útil. O termo destina-se a incluir fazer com que seja administrado. Fazer com que seja administrado significa fazer com que, estimulando, encorajando, auxiliando, induzindo ou dirigindo,
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19/112 direta ou indiretamente, outra parte para administrar o material. Quando um período de tempo entre as administrações é referido, o período de tempo é o tempo entre o início das administrações, exceto como descrito de outra forma.
[0071] Como usado aqui, coadministração refere-se à administração ao mesmo tempo ou, substancialmente, ao mesmo tempo, sempre que um médico consideraria qualquer tempo entre administrações praticamente nulo ou insignificante quanto ao impacto no resultado terapêutico desejado. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos aqui, a coadministração é uma administração simultânea. Simultânea significa que as administrações começam dentro de 5, 4, 3, 2, 1 ou menos minutos umas das outras. Em algumas modalidades, não mais de 5, 4, 3, 2, 1 ou menos minutos passam entre o final da administração de uma composição e o início da administração de outra composição. Em outras modalidades, não mais de 5, 4, 3, 2,1 ou menos minutos passam entre o início da administração de uma composição e o início da administração de outra composição (por exemplo, como quando as duas composições são dadas em um local diferente e/ou através de um modo diferente). Em algumas modalidades, simultânea significa que as administrações são iniciadas ao mesmo tempo. Em outras modalidades, as composições são misturadas e dadas a um indivíduo. Os nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor podem ser coadministrados com o vetor viral repetidamente, por exemplo 2, 3, 4, 5 ou mais vezes.
[0072] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, a coadministração do vetor viral e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor é precedido por, e/ou seguido de, administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor sem o vetor viral (uma pré-dose ou pós-dose, respectivamente, dos nanocarreadores sintéticos
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20/112 compreendendo o imunossupressor). Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, a pré-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor é administrada 1,2 ou 3 dias antes da coadministração de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e vetor viral. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, a pós-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor é administrada 1, 2 ou 3 dias antes da coadministração de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e vetor viral. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, mais de uma pré-dose e/ou pós-dose é administrada com cada coadministração. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, quando a coadministração é repetida, cada dose repetida é precedida por 1 ou 2 ou mais pré-doses. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, quando a coadministração é repetida, cada dose repetida é seguida por 1 ou 2 ou mais pós-doses. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos fornecidos, quando mais de uma pós-dose é administrada com cada coadministração, as pós-doses são administradas quinzenalmente com cada coadministração.
[0073] Misturar como usado aqui refere-se à mistura de dois ou mais componentes, de modo que os dois ou mais componentes estão presentes juntos em uma composição, e a administração da composição fornece os dois ou mais componentes para um indivíduo. Qualquer uma das coadministrações de qualquer um dos métodos fornecidos aqui pode ser administrada como uma mistura.
[0074] Quantidade eficaz no contexto de uma composição para administração a um indivíduo como fornecido aqui refere-se a uma quantidade da composição que produz um ou mais resultados desejados no indivíduo, por exemplo, a redução ou eliminação de uma
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21/112 resposta imune, como uma resposta imune de IgM e/ou IgG, contra um vetor viral e/ou eficácia ou aumento da expressão do transgene. A quantidade eficaz pode ser para propósitos in vitro ou in vivo. Para propósitos in vivo, a quantidade pode ser uma que um médico acreditaria poder ter um benefício clínico para um indivíduo que possa experimentar respostas imunes indesejáveis como resultado da administração de um vetor viral. Em qualquer um dos métodos fornecidos aqui, a(s) composição(s) administrada(s) pode(m) ser em qualquer uma das quantidades eficazes como fornecido aqui.
[0075] As quantidades eficazes podem envolver a redução do nível de uma resposta imune indesejada, embora em algumas modalidades, ela envolve a prevenção de uma resposta imune indesejada completamente. As quantidades eficazes também podem envolver o atraso da ocorrência de uma resposta imune indesejada. Uma quantidade eficaz também pode ser uma quantidade que resulta em um desfecho terapêutico desejado ou um resultado terapêutico desejado. Em algumas modalidades de qualquer uma das composições e métodos fornecidos, a quantidade eficaz é aquela em que a resposta imune desejada, como a redução ou eliminação de uma resposta imune contra um vetor viral, como um a resposta de IgM e/ou IgG, e/ou a geração de eficácia ou aumento da expressão do transgene, persiste no indivíduo por pelo menos 1 mês. Esta redução ou eliminação ou eficácia ou aumento da expressão pode ser medido localmente ou sistemicamente. A obtenção de qualquer um dos anteriores pode ser monitorada por métodos de rotina.
[0076] As quantidades efetivas dependerão, naturalmente, no indivíduo específico que esteja sendo tratado; a gravidade da condição, doença ou distúrbio; os parâmetros individuais de cada paciente, incluindo idade, condição física, tamanho e peso; a duração do tratamento; a natureza de terapia concomitante (se houver); a via
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22/112 específica de administração e fatores similares no conhecimento e experiência do médico. Estes fatores são bem conhecidos dos versados na técnica e podem ser tratados com não mais do que a experimentação de rotina.
[0077] Quantidades eficazes podem se referir a uma dose de um componente de um único material ou pode se referir a uma dose de um componente de um número de materiais. Por exemplo, quando se refere a uma quantidade eficaz de um imunossupressor, a quantidade pode se referir a uma dose única de um material que inclui o imunossupressor ou um número de doses do mesmo ou de diferentes materiais, que incluem o imunossupressor. Assim, como usado aqui, em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a quantidade eficaz de um imunossupressor pode ser a quantidade de imunossupressor em uma etapa de coadministração conforme fornecido aqui, sem outras administrações do imunossupressor. Em outras modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, no entanto, a quantidade de imunossupressor é a quantidade total de imunossupressor para um conjunto de administrações, como a quantidade total de imunossupressor de uma coadministração como fornecida aqui em combinação com uma quantidade de imunossupressor de uma pré-dose e/ou pós-dose conforme fornecido aqui.
[0078] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a quantidade de imunossupressor é dividida entre o conjunto de administrações, e a quantidade total pode ser baseada em uma quantidade determinada para alcançar uma resposta imune reduzida ou eficaz ou aumento da expressão do transgene de um vetor viral de acordo com outro regime, como quando coadministrado com nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor, mas sem a administração de uma pré-dose ou pós-dose. Esta
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23/112 quantidade total de imunossupressor pode ser administrada de acordo com um regime como fornecido aqui distribuído entre a quantidade de imunossupressor dado como pré-dose e/ou pós-dose, bem como a quantidade de imunossupressor dado como uma etapa de coadministração. Assim, em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a quantidade de imunossupressor da pré-dose e/ou pós-dose em combinação com uma dose coadministrada é igual a esse total.
[0079] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a quantidade do imunossupressor de uma prédose ou pós-dose não é mais do que metade desse total. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a quantidade do imunossupressor de uma pré-dose ou pós-dose é a metade desse total. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a quantidade do imunossupressor das pré-doses e/ou pós-dose pode ser igual à quantidade do imunossupressor da etapa de coadministração.
[0080] Avaliando uma resposta imune refere-se a qualquer medida ou determinação do nível, presença ou ausência, redução, aumento, etc. de uma resposta imune in vitro ou in vivo. Tais medições ou determinações podem ser realizadas em uma ou mais amostras obtidas de um indivíduo. Tal avaliação pode ser realizada com qualquer um dos métodos fornecidos aqui ou conhecidos na técnica, incluindo um ensaio baseado em ELISA. A avaliação pode ser avaliar o número ou percentual de anticorpos, como anticorpos IgM e/ou IgG, como aqueles específicos para um vetor viral, como, por exemplo, em uma amostra de um indivíduo. A avaliação também pode ser avaliar qualquer efeito relacionado à resposta imune, como medir a presença ou ausência de uma citocina, um fenótipo de células, etc. Qualquer um dos métodos fornecidos aqui pode compreender ou compreender adicionalmente
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24/112 uma etapa de avaliação de uma resposta imune a um vetor viral ou antígeno do mesmo. A avaliação pode ser feita direta ou indiretamente. O termo destina-se a incluir ações que causam, estimulam, encorajam, ajudam, induzem ou dirigem outra parte para avaliar uma resposta imune.
[0081] Média, conforme usado aqui, refere-se à média aritmética, salvo indicação em contrário.
[0082] Acoplar ou acoplado (e similares) significa associar quimicamente uma entidade (por exemplo, uma porção) com outra. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o acoplamento é covalente, o que significa que a fixação ocorre no contexto da presença de uma ligação covalente entre as duas entidades. Em modalidades não covalentes, o acoplamento nãocovalente é mediado por interações não covalentes, incluindo, mas não limitada a, interações de carga, interações de afinidade, coordenação de metal, adsorção física, interações hospedeiro-convidado, interações hidrofóbicas, interações de empilhamento TT, interações de ligação de hidrogênio, interações de van der Waals, interações magnéticas, interações eletrostáticas, interações dipolo-dipolo, e/ou suas combinações. Em modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o encapsulamento é uma forma de acoplamento.
[0083] Dose refere-se a uma quantidade específica de um material farmacologicamente ou imunologicamente ativo para administração a um indivíduo por um determinado período de tempo. Em geral, as doses dos nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e/ou vetores virais nos métodos e composições, que incluem kits, da invenção se referem à quantidade de imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos e/ou a quantidade de vetores virais, a menos que seja fornecido ao contrário.
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Alternativamente, a dose pode ser administrada com base no número de nanocarreadores sintéticos que fornecem a quantidade desejada de um imunossupressor, em instâncias quando se refere a uma dose de nanocarreadores sintéticos que compõe um imunossupressor. Quando a dose é usada no contexto de uma dose repetida, a dose refere-se à quantidade de cada uma das doses repetidas, que podem ser as mesmas ou diferentes. Uma pré-dose, conforme usada aqui, refere-se a um material ou conjunto de materiais que é administrado antes de uma administração de outro material ou conjunto de materiais. Uma pósdose, conforme usada aqui, refere-se a um material ou conjunto de materiais que é administrado após uma administração de outro material ou conjunto de materiais. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o(s) material(s) da pré-dose e/ou pós-dose pode ser igual ou diferente que o(s) material(s) de outras administrações. De preferência, como fornecido aqui, o material da prédose ou pós-dose compreende nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor, mas não compreendendo um vetor viral.
[0084] Encapsular significa incluir, pelo menos, uma porção de uma substância dentro de um nanocarreador sintético. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, uma substância é encapsulada completamente em um nanocarreador sintético. Em outras modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a maioria ou a totalidade de uma substância que é encapsulada não está exposta ao ambiente local externo para o nanocarreador sintético. Em outras modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, não mais que 50%, 40%, 30%, 20%, 10% ou 5% (peso/peso) está exposta ao ambiente local. A encapsulação é distinta da absorção, que coloca a maioria ou a totalidade de uma substância em uma superfície de uma nanocarreador
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26/112 sintético, e deixa a substância exposta ao ambiente local externo para o nanocarreador sintético.
[0085] Sequências de controle de expressão são quaisquer sequências que podem afetar a expressão e podem incluir, promotores, potencializadores e operadores. Sequências de controle de expressão, ou elementos de controle, dentro de vetores podem facilitar a boa transcrição de ácido nucleico, tradução, empacotamento viral, etc. Geralmente, os elementos de controle agem em cis, mas eles também podem trabalhar em trans. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a sequências de controle de expressão é um promotor, como um promotor constitutivo ou promotor específico de tecido. Promotores constitutivos, também chamados de promotores onipresentes ou promíscuos, são aqueles que são pensados geralmente como sendo ativos e não exclusivos ou preferencial a determinadas células. Promotores específicos de tecido são aqueles que estão ativos em um determinado tipo de célula ou tecido, tal atividade pode ser exclusiva para o determinado tipo de célula ou tecido. Em qualquer um dos ácidos nucleicos ou vetores virais fornecidos aqui, o promotor poderá ser qualquer um dos promotores fornecidos aqui.
[0086] Resposta imune contra um vetor viral ou similar refere-se a qualquer resposta imune indesejável contra um vetor viral, como um anticorpo (por exemplo, IgM ou IgG) ou resposta celular. Em algumas modalidades, a resposta imune indesejada é uma resposta imune específica de antígeno contra o vetor viral ou um antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, a resposta imune é específica a um antígeno viral do vetor viral. Em outras modalidades, a resposta imune é específica a uma proteína ou um peptídeo codificado por um transgene do vetor viral. Em algumas modalidades, a resposta imune é específica a um antígeno viral do vetor viral e não a uma proteína ou peptídeo que é codificado por um transgene do vetor viral.
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27/112 [0087] Em algumas modalidades, uma resposta do vetor antiviral reduzida em um indivíduo compreende um uma resposta imune do vetor antiviral reduzida medida usando uma amostra biológica obtida a partir do indivíduo após a administração conforme fornecida aqui, em comparação com uma resposta imune do vetor antiviral medida utilizando uma amostra biológica obtida a partir de um outro indivíduo, como um indivíduo teste, após a administração a este outro indivíduo do vetor viral sem administração, conforme fornecido aqui. Em algumas modalidades, a resposta imune do vetor antiviral é um resposta imune do vetor antiviral reduzida em uma amostra biológica obtida a partir do indivíduo após a administração conforme fornecida aqui, mediante um desafio de vetor viral in vitro subsequente realizado na amostra biológica do indivíduo em comparação com a resposta imune do vetor antiviral detectada após o desafio do vetor viral in vitro realizado em uma amostra biológica obtida a partir de um outro indivíduo, como um indivíduo teste, após a administração a o outro indivíduo do vetor viral sem administração, conforme fornecido aqui. Em outras modalidades, uma resposta imune pode ser avaliada em outro indivíduo, como, por exemplo, em uma amostra de um indivíduo teste, onde os resultados para os outros indivíduos, com ou sem escala, seriam esperados para ser um indicativo do que está ocorrendo ou ocorreu no indivíduo em questão. Em algumas modalidades, uma resposta do vetor antiviral reduzida em um indivíduo compreende um uma resposta imune do vetor antiviral reduzida medida usando uma amostra biológica obtida a partir do indivíduo após a administração conforme fornecida aqui, em comparação com uma resposta imune do vetor antiviral medida utilizando uma amostra biológica obtida a partir do indivíduo em um ponte de tempo diferente, como um tempo sem administração conforme fornecido aqui, por exemplo, antes de uma administração conforme fornecido aqui.
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28/112 [0088] Imunossupressor significa um composto que pode causar um efeito tolerogênico, de preferência através de seus efeitos sobre as APCs. Um efeito tolerogênico, de modo geral, refere-se à modulação pela APC ou outras células imunes sistemicamente e/ou localmente, que reduz, inibe ou impede uma resposta imune indesejável a um antígeno em uma forma duradoura. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o imunossupressor é um que faz com que uma APC promova um fenótipo regulador em uma ou mais células efetoras imunes. Por exemplo, o fenótipo regulador pode ser caracterizado pela inibição da produção, indução, estímulo ou recrutamento de células T ou B CD4+ específicas de antígeno, a inibição da produção de anticorpos específicos de antígeno, a produção, indução, estimulação ou o recrutamento das células Tregs (por exemplo, células Tregs CD4+CD25highFoxP3+), etc. Isso pode ser o resultado da conversão de células T ou células B CD4+ a um fenótipo regulador. Isto também pode ser o resultado de indução de FoxP3 em outras células imunes, como as células T CD8+, macrófagos e células iNKT. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o imunossupressor é um que afeta a resposta da APC depois que ele processa um antígeno. Em outra modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o imunossupressor não é um que interfere com o processamento do antígeno. Em uma modalidade adicional de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o imunossupressor não é uma molécula de sinalização apoptótica. Em outra modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o imunossupressor não é um fosfolipídeo.
[0089] Imunossupressores incluem, mas não estão limitados a, estatinas, inibidores de mTOR, como rapamicina ou um análogo da rapamicina (isto é, rapalog); agentes de sinalização do TGF-β;
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29/112 agonistas do receptor TGF-β; inibidores da histona deacetilase, como tricostatina A; corticosteroides; inibidores da função mitocondrial, como rotenona; inibidores de P38; inibidores de NF-kp, como 6Bio, dexametasona, TCPA-1, IKK VII; agonistas do receptor de adenosina; agonistas da prostaglandina E2 (PGE2), como misoprostol; inibidores de fosfodiesterases, como inibidor da fosfodiesterase 4 (PDE4), como rolipram; inibidores de proteasoma; inibidores da quinase; agonistas de receptores acoplados a proteína G; antagonistas dos receptores acoplados a proteína G; glicocorticoides; retinoides; inibidores de citocina; inibidores de receptores da citocina; ativadores do receptor de citocinas; antagonistas dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma; agonistas dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma; inibidores da histona deacetilase; inibidores de calcineurina; onibidores da fosfatase; inibidores de PI3KB, como TGX221; inibidores de autofagia, como 3-metiladenina; inibidores do receptor de hidrocarboneto de arila; inibidor da proteasoma I (PSI); e ATPs oxidados, como bloqueadores de receptores de P2X. Imunossupressores também incluem IDO, vitamina D3, ácido retinóico, ciclosporinas, como a ciclosporina A, inibidores do receptor de hidrocarboneto de arila, resveratrol, azatiopurina (Aza), 6mercaptopurina (6-MP), 6-tioguanina (6-TG), FK506, sanglifehrina, salmeterol, micofenolato mofetil (MMF), aspirina e outros inibidores de COX, ácido niflúmico, estriol e triptolide. Outros imunossupressores exemplificadores incluem, mas não estão limitados a, medicamentos de pequena molécula, produtos naturais, anticorpos (por exemplo, anticorpos contra CD20, CD3, CD4), fármacos baseados em biológicos, fármacos baseados em carboidratos, RNAi, ácidos nucleicos antisenso, aptâmeros, metotrexato, AINES; fingolimode; natalizumabe; alemtuzumabe; anti-CD3; tacrolimo (FK506), abatacepte, belatacepte, etc. Rapalog, conforme usado aqui, refere-se a uma molécula que é
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30/112 estruturalmente relacionada a (um análogo) de rapamicina (sirolimus). Exemplos de rapalogs incluem, sem limitação, temsirolimus (CCI-779), everolimus (RAD001), ridaforolimus (AP-23573) e zotarolimus (ABT578). Exemplos adicionais de rapalogs podem ser encontrados, por exemplo, na publicação WO 1998/002441 e Patente dos EUA NQ 8.455.510, tais rapalogs são aqui incorporados por referência em sua totalidade. Novos imunossupressores são conhecidos por aqueles versados na técnica e a invenção não é limitada nesse aspecto. Em modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o imunossupressor pode compreender qualquer um dos agentes fornecidos aqui, como qualquer um dos anteriores.
[0090] Aumento da expressão do transgene refere-se ao aumento do nível de expressão do transgene de um vetor viral em um indivíduo, um transgene sendo entregue pelo vetor viral. Em algumas modalidades, o nível de expressão do transgene pode ser determinado medindo as concentrações de proteína do transgene em vários tecidos ou sistemas de interesse no indivíduo. Alternativamente, quando o produto de expressão do transgene é um ácido nucleico, o nível de expressão do transgene pode ser medido pelos produtos do ácido nucleico do transgene. A expressão do transgene aumentada pode ser determinada, por exemplo, ao medir a quantidade da expressão do transgene em uma amostra obtida a partir de um indivíduo e comparando-a com uma amostra anterior. A amostra pode ser uma amostra de tecido. Em algumas modalidades, a expressão do transgene pode ser medida através de citometria de fluxo. Em outras modalidades, a expressão do transgene aumentada pode ser avaliada em outro indivíduo, como, por exemplo, em uma amostra de um indivíduo teste, onde os resultados para os outros indivíduos, com ou sem escala, seriam esperados para ser um indicativo do que está ocorrendo ou ocorreu no indivíduo em questão. Qualquer um dos métodos fornecidos
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31/112 aqui pode resultar em expressão do transgene aumentada.
[0091] Carga, quando um imunossupressor é compreendido em nanocarreadores sintéticos, como quando acoplado a eles, é a quantidade dos imunossupressores nos nanocarreadores sintéticos com base no peso seco total da receita de materiais em todo o nanocarreador sintético (peso/peso). Geralmente, essa carga é calculada como uma média entre uma população de nanocarreadores sintéticos. Em uma modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga em média entre os nanocarreadores sintéticos é entre 0,1% e 99%. Em outra modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga é entre 0,1% e 50%. Em outra modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga é entre 0,1% e 20%. Em uma modalidade adicional de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga é entre 0,1% e 10%. Em ainda outra modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga é entre 1% e 10%. Em ainda outra modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga é entre 7% e 20%. Em outra modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga é de, pelo menos, 0,1%, pelo menos 0,2%, pelo menos 0,3%, pelo menos 0,4%, pelo menos 0,5%, pelo menos 0,6%, pelo menos 0,7%, pelo menos 0,8%, pelo menos 0,9%, pelo menos 1%, pelo menos 2%, pelo menos 3%, pelo menos 4%, pelo menos 5%, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8%, pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 11%, pelo menos 12%, pelo menos 13%, pelo menos 14%, pelo menos 15%, pelo menos 16%, pelo menos 17%, pelo menos 18%, pelo menos 19%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou, pelo menos, 99% em média em toda a população de
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32/112 nanocarreadores sintéticos. Em ainda uma outra modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga é de 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19% ou 20%, em média em toda a população de nanocarreadores sintéticos. Em algumas modalidades de qualquer uma das modalidades acima, a carga não é superior a 25%, em média, em toda população de nanocarreadores sintéticos. Em modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a carga é calculada conforme conhecido na técnica.
[0092] A dimensão máxima de um nanocarreador sintético significa a maior dimensão de um nanocarreador medido ao longo de qualquer eixo do nanocarreador sintético. A dimensão mínima de um nanocarreador sintético significa a menor dimensão de um nanocarreador sintético medido ao longo de qualquer eixo do nanocarreador sintético. Por exemplo, para um nanocarreador sintético esferoidal, a dimensão máxima e mínima de um nanocarreador sintético seria substancialmente idêntica, e seria do tamanho de seu diâmetro. De modo semelhante, para uma nanocarreador sintético cuboidal, a dimensão mínima de um nanocarreador sintético seria a menor da sua altura, largura ou comprimento, enquanto a dimensão máxima de um nanocarreador sintético seria a maior de sua altura, largura ou comprimento. Em uma modalidade, uma dimensão mínima de pelo menos 75%, de preferência pelo menos 80%, mais de preferência pelo menos 90%, dos nanocarreadores sintéticos em uma amostra, com base no número total de nanocarreadores sintéticos na amostra, é igual ou superior a 100 nm. Em uma modalidade, uma dimensão máxima de pelo menos 75%, de preferência pelo menos 80%, mais de preferência pelo menos 90%, dos nanocarreadores sintéticos em uma amostra, com base no número total de nanocarreadores sintéticos na amostra, é igual
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33/112 ou menor a 5 nm. De preferência, uma dimensão mínima de pelo menos 75%, de preferência pelo menos 80%, mais de preferência pelo menos 90%, dos nanocarreadores sintéticos em uma amostra, com base no número total de nanocarreadores sintéticos na amostra, é maior que 110 nm, com mais preferência maior que 120 nm, com mais preferência maior que 130 nm e com mais preferência maior que 150 nm. Razões dos aspectos entre as dimensões máxima e mínima de nanocarreadores sintéticos podem variar de acordo com a modalidade. Por exemplo, as razões dos aspectos das dimensões máximas e mínimas de nanocarreadores sintéticos pode variar de 1:1:1 a 1.000.000, de preferência de 1:100.000 a 1:1, com mais preferência de 1:1 a 1:10.000, com mais preferência de 1:1 a 1000:1, com ainda mais preferência de 1:1 a 100:1, e com ainda mais preferência de 1:1 a 10:1. De preferência, uma dimensão máxima de pelo menos 75%, de preferência pelo menos 80%, mais de preferência pelo menos 90%, dos nanocarreadores sintéticos em uma amostra, com base no número total de nanocarreadores sintéticos na amostra é igual ou menor que 3 pm, com mais preferência igual ou menor que 2 pm, com mais preferência igual ou menor que 1 pm, com mais preferência igual ou menor que 800 nm, com mais preferência igual a ou menor que 600 nm e com ainda mais preferência igual ou menor que 500 nm. Em modalidade preferencial, uma dimensão mínima de pelo menos 75%, de preferência pelo menos 80%, mais de preferência pelo menos 90%, dos nanocarreadores sintéticos em uma amostra, com base no número total de nanocarreadores sintéticos na amostra é igual ou maior que 100 nm, com mais preferência igual ou maior que 120 nm, com mais preferência igual ou maior que 130 nm, com mais preferência igual a ou maior que 140 nm e com ainda mais preferência igual ou maior que 150 nm. Medição das dimensões do nanocarreador sintético (por exemplo, diâmetro efetivo) podem ser obtidas, em algumas modalidades,
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34/112 suspendendo o nanocarreador sintético em um meio líquido (geralmente aquoso) e utilizando dispersão de luz dinâmica (DLS) (por exemplo, usando um instrumento Brookhaven ZetaPALS). Por exemplo, uma suspensão de nanocarreadores sintéticos pode ser diluída a parti de um tampão aquoso em água purificada até atingir uma concentração final de suspensão do nanocarreador sintético de cerca de 0,01 a 0,1 mg/ml. A suspensão diluída pode ser preparada diretamente dentro de, ou transferida para, uma cubeta adequada para análise de DLS. A cuveta pode então ser colocada na DLS, permitido equilibrar a temperatura controlada, e, em seguida, escaneadas por tempo suficiente para adquirir uma distribuição estável e reprodutível com base em entradas apropriadas para a viscosidade do meio e indicies de refração da amostra. O diâmetro efetivo, ou média da distribuição, é, então, relatado. A determinação dos tamanhos efetivos da alta razão de aspecto, ou não-esferoidal, nanocarreadores sintéticos podem exigir técnicas aumentativas, como a microscopia eletrônica, para obter medições precisas. Dimensão ou tamanho ou diâmetro dos nanocarreadores sintéticos significa a média de uma distribuição de tamanho de partículas, por exemplo, obtidas através de dispersão de luz dinâmica.
[0093] Excipiente farmaceuticamente aceitável ou veículo farmaceuticamente aceitável significa um material farmacologicamente inativo utilizado junto com um material farmacologicamente ativo para formular as composições. Excipientes farmaceuticamente aceitáveis compreendem uma variedade de materiais conhecidos na técnica, incluindo, mas não limitado a, sacarídeos (como a glicose, lactose, e outros), conservantes como agentes antimicrobianos, corantes, solução salina (como, por exemplo, solução salina tamponada com fosfato) e tampões.
[0094] Dose repetida ou dose de repetição ou similares significa
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35/112 pelo menos uma dose adicional ou dosagem de um material ou de um conjunto de materiais que é administrado a um indivíduo subsequente a uma dose anterior ou dosagem do(s) mesmo(s) material(s). Enquanto o material pode ser o mesmo, a quantidade do material na dose repetida ou dosagem pode ser diferente.
[0095] Indivíduo significa animais, incluindo mamíferos de sangue quente, como seres humanos e primatas; aves; ou animais domésticos como gatos, cachorros, ovinos, caprinos, bovinos, equinos e suínos, animais de laboratório, como camundongos, ratos e cobaias; peixe; répteis; animais de zoológico e selvagens; e similares. Como usado aqui, um indivíduo pode estar em uma necessidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos aqui. Segundo indivíduo ou outro indivíduo fornecido aqui refere-se a um outro indivíduo diferente do indivíduo para o qual as administrações estão sendo fornecidas. Este indivíduo pode ser qualquer outro indivíduo, como um indivíduo de teste, cujo indivíduo pode ser da mesma ou de diferentes espécies. De preferência, este segundo indivíduo é um onde uma resposta imune reduzida a um vetor viral ou eficácia ou aumento da expressão do transgene de um vetor viral foi alcançado com uma coadministração do imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos e o vetor viral sem ter recebido uma pré-dose ou pós-dose do imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos. Assim, em algumas modalidades de qualquer um dos métodos indicados, o segundo indivíduo ou outro indivíduo tem recebido apenas a coadministração para alcançar reposta imune reduzida ou expressão do transgene aumentada. A quantidade do imunossupressor dessa coadministração pode ser usada para determinar as doses conforme fornecido aqui para uso de acordo com qualquer um dos métodos descritos ou em qualquer uma das composições fornecidas aqui. Esta quantidade pode ser distribuída entre as pré-doses e/ou pós-doses e
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36/112 doses coadministradas para conseguir um efeito semelhante ou maior. [0096] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, quando o segundo ou outro indivíduo é de uma espécie diferente a quantidade pode ser dimensionada conforme apropriado para as espécies do indivíduo para receber as administrações, cuja quantidade dimensionada pode ser usada como o total como fornecido aqui. Por exemplo, a escala alométrica ou outros métodos de escala podem ser usados. Respostas imunes em segundo indivíduos ou outros indivíduos, bem como expressão do transgene podem ser avaliadas usando os métodos de rotina conhecidos dos versados na técnica ou como fornecido aqui. Qualquer um dos métodos fornecidos aqui pode compreender ou compreende adicionalmente a determinação de uma ou mais destas quantidades em um segundo ou outro indivíduo, como descrito aqui.
[0097] Nanocarreador(es) sintético(s) significa um objeto discreto que não é encontrado na natureza, e que possui pelo menos uma dimensão menor ou igual a 5 microns de tamanho. Nanopartículas de albumina são geralmente incluídas como nanocarreadores sintéticos, no entanto, em certas modalidades os nanocarreadores sintéticos não incluem as nanopartículas de albumina. Em modalidades, os nanocarreadores sintéticos não compreendem a quitosana. Em outras modalidades, os nanocarreadores sintéticos não são nanopartículas baseadas lipídios. Em outras modalidades, os nanocarreadores sintéticos não incluem um fosfolipídeo.
[0098] Um nanocarreador sintético pode ser, mas não se limita a, uma ou uma pluralidade de nanopartículas à base de lipídios (também referidas aqui como nanopartículas lipídicas, isto é, nanopartículas onde a maioria do material que compõe sua estrutura são lipídios), nanopartículas poliméricas, nanopartículas metálicas, emulsões à base de tensoativos, dendrímeros, fulerenos, nanofios, partículas
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37/112 semelhantes a vírus (isto é, partículas constituídas principalmente por proteínas estruturais virais, mas não infecciosas ou com baixa infectividade), partículas à base de peptídeos ou proteínas (também referidas aqui como partículas de proteína, isto é, partículas onde a maioria do material que compõe sua estrutura são peptídeos ou proteínas) (como nanopartículas de albumina) e/ou nanopartículas que são desenvolvidas usando uma combinação de nanomateriais como as nanopartículas de polímero lipídio. Nanocarreadores sintéticos pode ser uma variedade de diferentes formas, incluindo, mas não limitado a, esferoidais, cuboidais, piramidais, oblongos, cilíndricos, toroidais e similares. Nanocarreadores sintéticos de acordo com a invenção compreendem uma ou mais superfícies. Nanocarreadores sintéticos exemplares que podem ser adaptados para uso na prática da presente invenção compreendem: (1) as nanopartículas biodegradáveis reveladas na patente US 5.543.158 para Gref et al., (2) as nanopartículas poliméricas da patente US 20060002852 para Saltzman et al., (3) a nanopartículas litograficamente construídas da Patente US 20090028910 para DeSimone et al., (4) a revelação de WO 2009/051837 para von Andrian et al., (5) as nanopartículas reveladas no pedido de patente publicado US 2008/0145441 para Penades et al., (6) as nanopartículas de proteínas reveladas no pedido de patente publicado US 20090226525 de los Rios et al., (7) as partículas semelhantes a vírus reveladas no pedido de patente publicado US 20060222652 para Sebbel et al., (8) as partículas semelhantes a vírus anexadas ao ácido nucleico reveladas no pedido de patente publicado US 20060251677 para Bachmann et al., (9) as partículas semelhantes a vírus reveladas em WO2010047839A1 ou W02009106999A2, (10) as nanopartículas nanopreciptadas reveladas em P. Paolicelli et al., Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles Nanomedicine. 5(6):843-853
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38/112 (2010), (11) células apoptóticas, corpos apoptóticos ou as imitações sintéticas ou semi-sintéticas reveladas na publicação US 2002/0086049, ou (12) os de Look et al., Nanogel-based delivery of mycophenolic acid ameliorates systemic lupus erythematosus in mice J. Clinical Investigation 123(4):1741-1749(2013).
[0099] Nanocarreadores sintéticos, de acordo com a invenção, que têm uma dimensão mínima de igual ou menor que 100 nm, de preferência igual ou menor que 100 nm, não compreendem uma superfície com grupos hidroxila que ativam o complemento ou, alternativamente, compreendem uma superfície que consiste essencialmente de porções que não são grupos hidroxila que ativam o complemento. Em uma modalidade preferida, os nanocarreadores sintéticos, de acordo com a invenção, que têm uma dimensão mínima de igual ou menor que cerca de 100 nm, de preferência igual ou menor que 100 nm, não compreendem uma superfície que ativam substancialmente o complemento ou, alternativamente, compreendem uma superfície que consiste essencialmente de porções que não ativam substancialmente o complemento. Em uma modalidade mais preferida, os nanocarreadores sintéticos, de acordo com a invenção, que têm uma dimensão mínima de igual ou menor que cerca de 100 nm, de preferência igual ou menor que 100 nm, não compreendem uma superfície que ativam o complemento ou, alternativamente, compreendem uma superfície que consiste essencialmente de porções que não ativam o complemento. Em modalidades, os nanocarreadores sintéticos excluem partículas semelhantes ao vírus. Em modalidades, os nanocarreadores sintéticos podem possuir uma razão de aspecto maior que 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 ou maior que 1:10.
[00100] Transgene do vetor viral ou transgene ou similares referem-se ao material de ácido nucleico que o vetor viral é usado para transportar para uma célula, e, uma vez na célula, é expressado para
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39/112 produção de uma proteína ou molécula de ácido nucleico, respectivamente, como, por exemplo, para uma aplicação terapêutica, conforme descrito aqui. Expressado ou expressão ou similar referese à síntese de um produto gênico funcional (isto é, fisiologicamente ativo para a finalidade desejada) após o transgene ser transduzido em uma célula e processado pela célula transduzida. Tal produto gênico também é referido aqui como um produto de expressão do transgene. Os produtos expressados são, portanto, a proteína ou o ácido nucléico resultante, como um oligonucleotídeo antisenso ou um RNA terapêutico codificados pelo transgene.
[00101] Vetor viral significa um sistema de entrega baseado em viral que pode ou não entregar uma carga útil, como ácido(s) nucleico(s), para as células. Geralmente, o termo refere-se a uma construção de vetor viral com componentes virais, como o capsídeo e/ou proteínas de revestimento, que pode ou não incluir também uma carga útil (e tem sido assim adaptada). Em algumas modalidades, a carga útil é um transgene. Em algumas modalidades, um transgene é um que codifica uma proteína fornecida aqui, como uma proteína terapêutica, uma proteína de ligação ao DNA ou endonuclease. Em outras modalidades, um transgene codifica RNA guia, um ácido nucleico antisenso, snRNA, uma molécula de RNAi (por exemplo, dsRNAs ou ssRNAs), miRNA, ou oligonucleotídeos formando triplex (TFOs), etc. Em outras modalidades, a carga útil é ácido(s) nucleico(s) que são o(s) terapêutico(s) e a expressão do(s) ácido(s) nucleico(s) entregue(s) não é necessária. Por exemplo, o(s) ácido(s) nucleico(s) pode(m) ser siRNA, como siRNA sintético.
[00102] Em algumas modalidades, a carga útil também pode codificar outros componentes, como repetições terminal invertida (ITRs), marcadores, etc. A carga útil também pode incluir uma sequência de controle de expressão. Sequências de DNA de controle
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40/112 de expressão incluem promotores, potenciadores e operadores, e são geralmente selecionadas com base em sistemas de expressão em que a construção de expressão é para ser usada. Em algumas modalidades, as sequências promotoras e potencializadoras são selecionadas pela capacidade de aumentar a expressão do gene, enquanto as sequências operadoras podem ser selecionadas pela capacidade de regular a expressão gênica. A carga útil pode também incluir sequências que facilitam e, de preferência, promovem a recombinação homóloga em uma célula hospedeira, em algumas modalidades.
[00103] Sequências de controle de expressão exemplificadoras incluem, por exemplo, sequências promotoras, por exemplo, citomegalovírus promotor, vírus do sarcoma de Rous promotor; e vírus símio 40 promotor; bem como quaisquer outros tipos de promotores que são revelados em outro lugar aqui ou que sejam conhecidos na técnica. Em geral, os promotores são ligados de maneira funcional a montante (ou seja, 5') de uma sequência que codifica para um produto de expressão desejado. As cargas úteis também podem incluir uma sequência de poliadenilação adequada (por exemplo, a sequência de poliadenilação de SV40 ou do gene do hormônio do crescimento humano) ligada de maneira funcional a jusante (ou seja, 3') da sequência de codificação.
[00104] Geralmente, os vetores virais são projetados para ser capaz de transduzir um ou mais ácidos nucleicos desejados em uma célula. Além disso, será entendido que para as aplicações terapêuticas fornecidas aqui, é preferível que os vetores virais sejam defeituosos por replicação. Os vetores virais podem ser baseados em, sem limitação, retrovirus (por exemplo, retrovirus murino, retrovirus aviário, vírus da leucemia murina Moloney (MoMuLV), vírus do sarcoma murino de Harvey (HaMuSV), vírus do tumor mamário murino (MuMTV), vírus da leucemia do macaco gibão (GaLV) e vírus do Sarcoma de Rous (RSV)),
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41/112 lentivirus, herpes vírus, adenovirus, vírus adenoassociado, alfavírus, etc. Outros exemplos são fornecidos aqui ou em outros lugares são conhecidos na técnica. Os vetores virais podem ser baseados em variantes naturais, cepas, ou sorotipos de vírus, como qualquer um desses fornecidos aqui. Os vetores virais também podem ser baseados em vírus selecionados através de evolução molecular (ver, por exemplo, J.T. Koerber et al, Mol. Ther. 17(12):2088-2095 e patente US No. 6.09.548). Vetores virais podem ser baseados, sem limitação, nos vírus adeno-associados (AAV), como AAV8 ou AAV2. Os vetores virais também podem ser baseados em Anc80. Assim, um vetor AAV ou vector Anc80 fornecido aqui é um vetor viral baseado em um AAV ou Anc80, respectivamente, e tem componentes virais, como um capsídeo e/ou proteína de revestimento, daí que podem embalar para entrega de material ácido nucleico. Outros exemplos de vetores AAV incluem, mas não estão limitados a, aqueles baseados em AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh 10, Rh74 ou AAV2i8 ou seus variantes. Os vetores virais também podem ser vetores modificados, vetores recombinantes, vetores mutantes ou vetores híbridos. Métodos para gerar tais vetores serão evidentes para o versado na técnica. Em algumas modalidades, o vetor viral é um vetor viral quimérico. Em tais modalidades, isto significa que o vetor viral é composto de componentes virais que são provenientes de mais de um vírus ou vetor viral. Ver, por exemplo, Publicações PCT W001/091802 e WO14/168953, e patente US No. 6.468.771. Tal vetor viral pode ser, por exemplo, um vetor viral AAV8/Anc80 ou AAV2/Anc80.
[00105] Elementos adicionais de vetor viral podem funcionar em cis ou em trans. Em algumas modalidades, o vetor viral inclui um genoma do vetor que também inclui uma ou mais sequência(s) de repetição terminal invertida (ITR) que flanqueia as terminações 5' ou 3' da sequência (doadora) alvo, um elemento de controle de expressão que promove a
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42/112 transcrição (por exemplo, promotor ou potencializador), uma sequência íntron, uma sequência de polinucleotídeos stuffer/enchimento (geralmente, uma sequência inerte), e/ou uma sequência de poli(A) localizada na extremidade 3' da sequência (doadora) alvo.
C. COMPOSIÇÕES PARA USO NOS MÉTODOS INVENTIVOS [00106] Importante, os métodos e as composições fornecidos aqui fornecem efeitos melhorados com a administração de vetores virais. Assim, os métodos e as composições fornecidos aqui são úteis para o tratamento de indivíduos com vetores virais. Tais vetores virais podem ser usados para aplicar os ácidos nucleicos para uma variedade de finalidades, incluindo para terapia gênica, etc. Como mencionado acima, as respostas imunes contra um vetor viral podem impactar negativamente sua eficácia e também podem interferir com sua readministração. Importante, os métodos e as composições fornecidos aqui foram encontrados para superar os obstáculos mencionados acima por alcançar uma melhor expressão de transgenes e/ou reduzir as respostas imunes a vetores virais. Os inventores descobriram surpreendentemente que regimes de dosagem que incluem uma prédose e/ou pós-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor em combinação com uma coadministração de nanocarreadores sintéticos e vetor viral podem alcançar a redução a resposta imune melhorada e/ou expressão do transgene. Além disso, também foi surpreendentemente descoberto que a quantidade de imunossupressores, quando compreendidos nos nanocarreadores sintéticos de uma etapa de coadministração, podería ser reduzida com uma pré-dose ou pós-dose em relação à etapa de coadministração sozinha. Assim, uma quantidade de imunossupressores, quando compreendidos nos nanocarreadores sintéticos, pode ser dividida entre uma pré-dose e/ou pós-dose e dose coadministrada em qualquer um dos regimes de tratamento fornecidos aqui.
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43/112 [00107] Também como mencionado acima, foi descoberto que a administração do vetor viral pode resultar em respostas imunes de IgM logo após a administração do vetor viral. Também foi descoberto que nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e administrados em tempos em relação ao vetor viral induzem a elevada expressão do transgene em uma forma dependente de IgM.
[00108] Transgenes [00109] A carga útil de um vetor viral pode ser um transgene. Por exemplo, o transgene pode codificar um produto de expressão desejado, como um polipeptídeo, proteína, misturas de proteína, DNA, cDNA, molécula de RNA funcional (por exemplo, RNAi, miRNA), mRNA, replicon de RNA, ou outro produto de interesse.
[00110] Por exemplo, produto da expressão do transgene pode ser uma proteína ou porção dela benéfica para um indivíduo, como, por exemplo, com uma doença ou distúrbio. A proteína pode ser uma proteína extracelular, intracelular ou ligada à membrana. Transgenes, por exemplo, podem codificar enzimas, derivados do sangue, hormônios, linfocinas, como as interleucinas e interferons, coagulantes, fatores de crescimento, neurotransmissores, supressores tumorais, apolipoproteínas, antígenos e anticorpos. O indivíduo pode ter ou ser suspeito de ter uma doença ou distúrbio pelo qual a versão endógena do indivíduo da proteína está com defeito ou produzida em quantidades limitadas ou não está. Em outras modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o produto da expressão do transgene pode ser um gene ou parte dele benéfico para um indivíduo. [00111] Exemplos de proteínas terapêuticas incluem, mas não estão limitadas a, proteínas terapêuticas infusíveis ou injetáveis, enzimas, cofatores de enzimas, hormônios, sangue ou fatores de coagulação do sangue, citoquinas e interferons, fatores de crescimento, adipocinas, etc.
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44/112 [00112] Exemplos de proteínas terapêuticas infusíveis ou injetáveis incluem, por exemplo, tocilizumabe (Roche/Actemra®), alfa-1antitripsina (Kamada/AAT), Hematide® (Affymax e Takeda, peptídeo sintético), albinterferon alfa-2b (Novartis/Zalbin™), Rhucin® (Grupo Pharming, terapia de substituição de inibidor de 01), tesamorelina (Theratechnologies/Egrifta, fator de liberação de hormônio do crescimento sintético), ocrelizumabe (Genentech, Roche e Biogen), belimumabe (GlaxoSmithKline/Benlysta®), pegloticase (Savient Pharmaceuticals/Krystexxa™), taliglucerase alfa (Protalix/Uplyso), agalsidase alfa (Shire/Replagal®) e velaglucerase alfa (Shire).
[00113] Exemplos de enzimas incluem lisozima, oxidoreductases, transferases, hidrolases, liases, isomerases, asparaginases, uricases, glicosidases, proteases, nucleases, colagenases, hialuronidases, heparinases, heparanases, quinases, fosfatases, lisinas e ligases. Outros exemplos de enzimas incluem aquelas que é usada para a terapia de reposição enzimática, incluindo, mas não limitada a, imiglucerase (por exemplo, CEREZYMETM), a-galactosidase A (a-gal A) (por exemplo, agalsidase beta, FABRYZYMETM), ácido aglucosidase (GAA) (por exemplo, alglucosidase alfa, LUMIZYMETM, MYOZYMETM), e arilsulfatase B (por exemplo, laronidase, ALDURAZYMETM, idursulfase, ELAPRASETM, arilsulfatase B, NAGLAZYMETM).
[00114] Exemplos de hormônios incluem melatonina (N-acetil-5metoxitriptamina), serotonina, tiroxina (ou tetraiodotironina) (uma hormona da tiroide), triiodotironina (um hormônio da tiroide), epinefrina (ou adrenalina), norepinefrina (ou noradrenalina), dopamina (ou hormônio inibidor de prolactina), hormônio antimuleriano (hormônio ou fator de inibição de muleriano), adiponectina, hormônio adrenocorticotrófico (ou corticotropina), angiotensinogênio e angiotensina, hormônio antidiurético (ou vasopressina, arginina
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45/112 vasopressina), peptídeo natriurético atrial (ou atriopeptina), calcitonina, colecistocinina, hormônio de liberação de corticotropina, eritropoetina, hormônio folículo-estimulante, gastrina, grelina, glucagon, peptídeo do tipo glucagon (GLP-1), GIP, hormônio de liberação de gonadotrofina, hormônio de liberação do crescimento, gonadotrofina coriônica humana, lactogeênio placentário humano, hormônio do crescimento, inibina, insulina, fator de crescimento semelhante à insulina (ou somatomedina), leptina, hormônio luteinizante, hormônio melanócito estimulante, orexina, ocitocina, hormônio da paratireoide, prolactina, relaxina, secretina, somatostatina, trombopoietina, hormônio estimulante da tireoide (ou tirotropina), hormônio de liberação de trirotropina, cortisol, aldosterona, testosterona, dehidroepiandrosterona, androstenediona, dihidrotestosterona, estradiol, estrona, estriol, progesterone, calcitriol (1,25-diidroxivitamina D3), calcidiol (25-hidroxivitamina D3), prostaglandinas, leucotrienos, prostaciclina, tromboxano, hormônio de liberação de prolactina, lipotropina, peptídeo natriurético cerebral, neuropeptídeo Y, histamina, endotelina, polipeptídio pancreático, renina e encefalina.
[00115] Exemplos de sangue ou de fatores de coagulação de sangue incluem fator I (fibrinogênio), fator II (protrombina), fator tecidual, fator V (proacelerina, fator lábil), fator VII (fator estável, proconvertina), fator VIII (globulina anti-hemofílica), fator IX (fator Christmas ou componente da tromboplastina plasmática), fator X (fator de Stuart-Prower), fator Xa, fator XI, fator XII (fator de Hageman), fator XIII (fator estabilizador de fibrina), fator de von Willebrand, fator de von Heldebrant, precalicreína (fator de Fletcher), cininogênio de alto peso molecular (HMWK) (fator de Fitzgerald), fibronectina, fibrina, trombina, antitrombina, como a antitrombina III, cofator II da heparina, proteína C, proteína S, proteína Z, protease da protease relacionada a proteína Z (ZPI), plasminogênio, alfa 2-antiplasmina, ativador do plasminogênio tecidual (tPA),
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46/112 uroquinase, inibidor do ativador do plasminogênio 1 (PAI1), inibidor do ativador de plasminogênio 2 (PAI-2), pró-coagulante do câncer e epoetina alfa (Epogen, Procrit).
[00116] Exemplos de citocinas incluem as linfocinas, interleucinas e quimiocinas, citocinas tipo 1, como IFN-γ, TGF-β, e citocinas do tipo 2, como IL-4, IL-10 e IL-13.
[00117] Exemplos de fatores de crescimento incluem adrenomedulina (AM), angiopoietina (Ang), fator de motilidade autócrino, proteínas morfogenéticas do osso (BMPs), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fator de crescimento epidérmico (EGF), eritropoetina (EPO), fator de crescimento de fibroblastos (FGF), fator neurotrófico derivado da linhagem de células gliais (GDNF), fator estimulador de colônia de granulócito (G-CSF), fator estimulador de colônia de granulócito macrófago (GM-CSF), fator de diferenciação do crescimento 9 (GDF9), fator de cicatrização, fator de crescimento dos hepatócitos (HGF), fator de crescimento derivado de hepatoma (HDGF), fator de crescimento semelhante à insulina (IGF), fator estimulante de migração, miostatina (GDF-8), fator de crescimento nervoso (NGF) e outras neurotrofinas, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), trombopoietina (TPO), fator de crescimento de transformação alfa (TGF-α), fator de crescimento transformador beta (TGF-β), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), via de sinalização Wnt, fator de crescimento placentário (PIGF), [(somatotrofina bovina fetal)] (FBS), IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6 e IL-
7.
[00118] Exemplos de adipocinas, incluem leptina e adiponectina.
[00119] Outros exemplos de proteínas terapêuticas incluem, mas não estão limitados a, receptores, proteínas sinalizadoras, proteínas do citoesqueleto, proteínas de arcabouço, fatores de transcrição, proteínas estruturais, proteínas de membrana, proteínas citosólicas, proteínas de
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47/112 ligação, proteínas nucleares, proteínas secretadas, proteínas de Golgi, proteínas do retículo endoplasmático, proteínas mitocondriais e proteínas vesiculares, etc.
[00120] Em uma modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o produto de expressão pode ser usado para interromper, corrigir/reparar ou substituir um gene alvo, ou parte de um gene alvo. Por exemplo, as repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas/Cas (CRISPR/Cas) podem ser usadas para edição precisa do genoma. No sistema, nucleases únicas associadas a CRISPR (nucleases Cas) podem ser programadas por um RNA guia (RNA curto) para reconhecer um alvo específico de DNA, que compreende local de DNA contendo repetições curtas de uma sequência de base. Cada local CRISPR é flanqueado por segmento curto de DNA espaçador, que são derivados de material genômico viral. No sistema tipo II de CRISPR, o sistema mais comum, o DNA espaçador se hibridiza com RNA de ativação trans (tracRNA), onde é processado em CRISPR-RNA (crRNA) e, em seguida, associado com as nucleases Cas, formando complexos que iniciam o processamento de RNAse III e resultando na degradação do DNA estranho. A sequência-alvo preferencialmente contém uma sequência do motivo adjacente do protoespaçador (PAM) em sua terminação 3' a fim de ser reconhecido. O sistema pode ser modificado em um número de maneiras, por exemplo, RNAs guias sintéticos podem ser fundidos a um vetor de CRISPR, e uma variedade de diferentes estruturas e elementos de RNA guia são possíveis (incluindo sequências em forma de grampo (hairpin) e de arcabouço).
[00121] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a sequência transgene pode codificar qualquer um ou mais componentes de um sistema CRISPR/Cas, como uma sequência repórter, que produz um sinal detectável quando expressado.
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Exemplos de tais sequências repórteres incluem, mas não estão limitados a, β-lactamase, β-galactosidase (LacZ), fosfatase alcalina, timidina quinase, proteína verde fluorescente (GFP), cloranfenicol acetiltransferase (CAT), luciferase, proteínas de ligação de membrana, incluindo, por exemplo, CD2, CD4, CD8, e a proteína hemaglutinina influenza. Outros repórteres serão conhecidos pelos versados na técnica.
[00122] Em outro exemplo de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o transgene pode codificar um produto de RNA, como tRNA, dsRNA, RNA ribossômico, RNA catalítico, siRNA, RNAi, miRNA, RNA pequeno em forma de grampo (shRNA), RNA transsplicing e RNAs antisenso. Por exemplo, as sequências de RNA específicas podem ser geradas para inibir ou extinguir a expressão de uma sequência de ácido nucleico alvo no indivíduo. Sequências-alvo adequadas incluem, por exemplo, alvos oncológicos e doenças virais. [00123] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a sequência de transgene pode codificar uma sequência repórter, que produz um sinal detectável quando expressado, ou a sequência do transgene pode codificar uma proteína ou RNA funcional que pode ser usado para criar um modelo animal de doença. Em outro exemplo de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o transgene codifica uma proteína ou RNA funcional que se destinam a ser utilizados para fins de investigação, por exemplo, para criar um modelo animal transgênico somático abrigando o transgene, por exemplo, para estudar a função do produto do transgene. Em outras modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a intenção de tais produtos de expressão é para tratamento. Outros usos de transgenes serão evidentes para o versado na técnica.
[00124] A sequência de um transgene também pode incluir uma sequência de controle de expressão. Sequências de controle de
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49/112 expressão incluem promotores, potenciadores e operadores, e são geralmente selecionadas com base em sistemas de expressão em que a construção de expressão é para ser usada. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, as sequências promotoras e potencializadoras são selecionadas pela capacidade de aumentar a expressão do gene, enquanto as sequências operadoras podem ser selecionadas pela capacidade de regular a expressão gênica. Normalmente, as sequências promotoras estão localizadas a montante (ou seja, 5') da sequência de ácido nucleico codificando o produto de expressão desejado, e são ligados de maneira funcional a uma sequência adjacente, aumentando, assim, a quantidade do produto desejado expressado em relação a uma quantidade expressada sem o promotor. Sequências potencializadoras, geralmente localizadas a montante das sequências promotoras, podem aumentar ainda mais a expressão do produto desejado. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, a(s) sequência(s) potencializadora(s) pode(m) ser localizada(s) a jusante do promotor e/ou dentro do transgene. O transgene pode também incluir sequências que facilitam e, de preferência, promovem a recombinação homóloga em uma célula hospedeira e/ou empacotamento. O transgene pode também incluir sequências que são necessárias para a replicação em uma célula hospedeira.
[00125] As sequências de controle de expressão exemplares incluem sequências promotoras específicas do fígado e sequências promotoras constitutivas, como qualquer uma que pode ser fornecida aqui. Outros promotores específicos do tecido incluem olho, retina, sistema nervoso central, medula espinhal, entre outros. Exemplos de promotores e potencializadores onipresentes ou promíscuos incluem, mas não são limitados a, promotor de início imediato do citomegalovírus (CMV)/ sequências potencializadoras, promotor do vírus do sarcoma de Rous
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50/112 (RSV)/sequências potencializadoras e os outros promotores/potenciadores virais ativos em vários tipos de células de mamíferos, ou elementos sintéticos, que não estão presentes na natureza (ver, por exemplo, Boshart et al, Cell, 41 :521-530 (1985)), promotor de SV40, promotor da diidrofolato redutase (DHFR), promotor da β-actina citoplasmática e o promotor da fosfoglicerol quinase (PGK). [00126] Os operadores, ou elementos reguláveis, são sensíveis a um sinal ou estímulo, que podem aumentar ou diminuir a expressão do ácido nucleico ligado de maneira funcional. Elementos induzíveis são aqueles que aumentam a expressão de ácido nucleico ligado de maneira funcional em resposta a um sinal ou estímulo, por exemplo, promotores induzíveis de hormônio. Elementos repressíveis são aqueles que diminuem a expressão de ácido nucleico ligado de maneira funcional em resposta a um sinal ou estímulo. Normalmente, elementos repressíveis e induzíveis são proporcionalmente responsivos à quantidade de sinal ou estímulo presente. O transgene pode incluir essas sequências em qualquer um dos métodos ou composições fornecidos.
[00127] O transgene pode ainda conter uma sequência de poliadenilação ligada de maneira funcional a jusante (ou seja, 3') da sequência de codificação.
[00128] Métodos de liberação de transgenes, por exemplo, para terapia gênica, são conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Smith. Int. J. Med. Sei. 1(2): 76-91 (2004); Phillips. Methods in Enzymology: Gene Therapy Methods. Vol. 346. Academic Press (2002)). Qualquer urn dos transgenes descritos aqui podem ser incorporados em qualquer um dos vetores virais descritos aqui usando patente US No. 7.629.153.
Vetores Virais [00129] Os vírus evoluíram mecanismos especializados para transportar seus genomas no interior das células que eles infectam;
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51/112 vetores virais com base em tais vírus podem ser adaptados para transduzir células para aplicações específicas. Exemplos de vetores virais que podem ser usados como fornecidos aqui são conhecidos na técnica ou descritos aqui. Vetores virais adequados incluem, por exemplo, vetores retrovirais, vetores lentivirais, vetores baseados nos vírus da herpes simples (HSV), vetores baseados em adenovirus, vetores baseados no vírus adenoassociado (AAV) e vetores quiméricos AAV-adenovirais.
[00130] Os vetores virais fornecidos aqui podem ser baseados em um retrovirus. O retrovirus é um vírus de RNA de sentido positivo de fita simples. Um vetor retroviral pode ser manipulado para tornar a replicação viral incompetente. Como tal, vetores retrovirais são pensados para ser particularmente úteis para a transferência estável de genes in vivo. Exemplos de vetores retrovirais podem ser encontrados, por exemplo, nas publicações US n° 20120009161, 20090118212 e 20090017543, os vetores virais e os métodos de sua produção são incorporados aqui por referência em sua totalidade.
[00131] Os vetores lentivirais são exemplos de vetores retrovirais que podem ser usados para a produção de um vetor viral conforme fornecido aqui. Exemplos de lentivírus incluem HIV (seres humanos), vírus da imunodeficiência símia (SIV), vírus da imunodeficiência felina (FIV), vírus da anemia infecciosa equina (EIAV) e visna vírus (lentivírus ovino). Exemplos de vetores lentivirais podem ser encontrados, por exemplo, nas publicações US N° 20150224209, 20150203870, 20140335607, 20140248306, 20090148936, e 20080254008, os vetores virais e os métodos de sua produção são incorporados aqui por referência em sua totalidade.
[00132] Os vetores virais baseados no vírus da herpes simples (HSV) também são adequados para uso como fornecido aqui. Muitos vetores de HSV deficientes de replicação contêm uma deleção para remover um
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52/112 ou mais genes intermediários precoces para evitar a replicação. Para uma descrição dos vetores baseados em HSV, ver, por exemplo, as patentes US NQS. 5.837.532, 5.846.782, 5.849.572 e 5.804.413 e pedidos de patente internacional WO 91/02788, WO 96/04394, WO 98/15637 e WO 99/06583, cuja descrição de tais vetores virais e métodos de sua produção é incorporada por referência em sua totalidade.
[00133] Os vetores virais podem ser baseados em adenovirus. O adenovirus em que um vetor viral pode ser baseado pode ser de qualquer origem, qualquer subgrupo, qualquer subtipo, mistura de subtipos ou qualquer sorotipo. Por exemplo, um adenovirus pode ser do subgrupo A (por exemplo, sorotipos 12, 18, e 31), subgrupo B (por exemplo, sorotipos 3, 7, 11, 14, 16, 21, 34, 35 e 50), subgrupo C (por exemplo, sorotipos 1,2, 5 e 6), subgrupo D (por exemplo, sorotipos 8, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 20, 32, 33, 22-30, 36-39 e 42-48), subgrupo E (por exemplo, sorotipo 4), subgrupo F (por exemplo, sorotipos 40 e 41), um sorogrupo não classificado (por exemplo, sorotipos 49 e 51), ou qualquer outro sorotipo adenoviral. Os sorotipos adenovirais 1 até 51 estão disponíveis a partir da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, Virginia). Adenovirus não pertencentes ao grupo C e, até mesmo, adenovirus não-humanos, podem ser usados para preparar vetores adenovirais deficientes de replicação. Vetores adenovirais não pertencentes ao grupo C, métodos de produção de vetores adenovirais não pertencentes ao grupo C e métodos para usar vetores adenovirais não pertencentes ao grupo C são divulgados, por exemplo, nas patentes US Nos 5.801.030, 5.837.511 e 5.849.561, e pedidos de patente internacional WO 97/12986 e WO 98/53087. Quaisquer adenovirus, até mesmo um adenovirus quimérico, pode ser usado como a fonte do genoma viral para um vetor adenoviral. Por exemplo, um adenovirus humano pode ser usado como a fonte do genoma viral para um vetor
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53/112 adenoviral deficiente de replicação. Exemplos adicionais de vetores adenovirais podem ser encontrados nas publicações US n° 20150093831, 20140248305, 20120283318, 20100008889,
20090175897, e 20090088398, cuja descrição dos vetores virais e os métodos de sua produção são incorporados aqui por referência em sua totalidade.
[00134] Os vetores virais fornecidos aqui também podem ser baseados em vírus adenoassociado (AAVs). Vetores AAV têm sido de especial interesse para uso em aplicações terapêuticas, como as descritas aqui. Para uma descrição dos vetores baseados em AAV, ver, por exemplo, as patentes US NQS. 8.679.837, 8.637.255, 8.409.842, 7.803.622 e 7.790.449, e publicação US NQS 20150065562, 20140155469, 20140037585, 20130096182, 20120100606 e
20070036757. Os vetores AAV podem ser vetores AAV recombinantes. Os vetores AAV também pode ser vetores AAV auto complementares (sc), que são descritos, por exemplo, nas publicações de patentes 2007/01110724 e 2004/0029106, e nas patentes US N°s 7.465.583 e 7.186.699, cujos vetores virais e métodos ou suas produções são incorporados aqui por referência em sua totalidade.
[00135] O vírus adenoassociado no qual um vetor viral pode ser baseado pode ser de qualquer sorotipo ou uma mistura de sorotipos. Os sorotipos de AAV incluem AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10 e AAV11. Por exemplo, quando o vetor viral é baseado em uma mistura de sorotipos, o vetor viral pode conter o as sequências sinal do capsídeo retiradas de um sorotipo AAV (por exemplo, selecionadas a partir de qualquer um dos sorotipos de AAV 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 e 11) e sequências empacotadoras de um sorotipo diferente (por exemplo, selecionadas a partir de qualquer um dos sorotipos de AAV 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 e 11). Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos
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54/112 aqui, portanto, o vetor AAV é um vetor baseado em AAV 2/8. Em outras modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos aqui, o vetor AAV é um vetor baseado em AAV 2/8.
[00136] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o vírus em que um vetor viral se baseia pode ser sintético, como o Anc80.
[00137] Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, o vetor viral é um vetor AAV/Anc80, como um vetor AAV8/Anc80 ou um vetor AAV2/Anc80.
[00138] Outros vírus em que o vetor pode ser baseado incluem AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV9, AAV10, AAV11, rhIO, rh74 ou AAV-2Í8 e suas variantes.
[00139] Os vetores virais fornecidos aqui podem também ser baseados em um alfavírus. Alfavírus incluem Sindbis vírus (e VEEV), Aura vírus, Babanki vírus, Barmah Forest vírus, Bebaru vírus, Cabassou vírus, Chikungunya vírus, vírus da encefalite equina do Leste, Everglades vírus, Fort Morgan vírus, Getah vírus, Highlands J vírus, Kyzylagach vírus, Mayaro vírus, Me Tri vírus, Middelburg vírus, Mosso das Pedras vírus, Mucambo vírus, Ndumu vírus, 0'nyong-nyong vírus, Pixuna vírus, Rio Negro vírus, Ross River vírus, vírus da doença do pâncreas de salmão, Semliki Florest vírus, vírus do elefante marinho do sul, Tonate vírus, Trocara vírus, Una vírus, vírus da encefalite equina venezuelana, vírus da encefalite equina do Oeste e Whataroa vírus. Exemplos de vetores alfavirais podem ser encontrados nas publicações US n° 20150050243, 20090305344 e 20060177819, os vetores e os métodos de sua produção são incorporados aqui por referência em sua totalidade.
[00140] Qualquer um dos vetores virais fornecidos aqui pode ser usado em qualquer um dos métodos fornecidos aqui.
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Imunossupressores [00141] Imunossupressores incluem, mas não estão limitados a, estatinas, inibidores de mTOR, como rapamicina ou um análogo da rapamicina; agentes de sinalização do TGF-β; agonistas do receptor TGF-β; inibidores da histona deacetilase (HDAC); corticosteroides; inibidores da função mitocondrial, como rotenona; inibidores de P38; inibidores de NF-kp; agonistas do receptor de adenosina; agonistas da prostaglandina E2; inibidores de fosfodiesterases, como inibidor da fosfodiesterase 4; inibidores de proteasoma; inibidores da quinase; agonistas de receptores acoplados a proteína G; antagonistas dos receptores acoplados a proteína G; glicocorticoides; retinoides; inibidores de citocina; inibidores de receptores da citocina; ativadores do receptor de citocinas; antagonistas dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma; agonistas dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma; inibidores da histona deacetilase; inibidores de calcineurina; inibidores da fosfatase; e ATPs oxidados. Imunossupressores também incluem IDO, vitamina D3, ciclosporina A, inibidores do receptor hidrocarboneto de arila, resveratrol, azatiopurina, 6-mercaptopurina, aspirina, ácido niflúmico, estriol, tripolide, interleucinas (por exemplo, IL-1, IL-10), ciclosporina A, siRNAs alvejando citocinas ou receptores de citocinas e similares.
[00142] Exemplos de estatinas incluem atorvastatina (LIPITOR®, TORVAST®), cerivastatina, fluvastatina (LESCOL® LESCOL®XL), lovastatina (MEVACOR®, ALTOCOR®, ALTOPREV®), mevastatina (COMPACTIN®), pitavastatina (LI VALO®, PIAVA®), rosuvastatina (PRAVACHOL®, SELEKTINE®, LIPOSTAT®), rosuvastatina (CRESTOR®) e sinvastatina (ZOCOR®, LIPEX®).
[00143] Exemplos de inibidores de mTOR incluem rapamicina e seus análogos (por exemplo, CCL-779, RAD001, AP23573, C20metalilrapamicina (C20-Marap), C16(S)-butilsulfonamidorapamicina
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56/112 (C16-BSrap), C16-(S)-3-metilindolerapamicina (C16-iRap) (Bayle et al. Chemistry & Biology 2006, 13:99-107)), AZD8055, BEZ235 (NVPBEZ235), ácido chrisofânico (chrisofanol), deforolimus (MK-8669), everolimus (RAD0001), KU-0063794, PI-103, PP242, temsirolimus, e WYE-354 (disponível junto à Selleck, Houston, TX, USA).
[00144] Exemplos de agentes de sinalização de TGF-β incluem ligantes TGF-β (por exemplo, ativina A, GDF1, GDF11, proteínas morfogênicas ósseas, nodal, ΤΟΕ-βε) e seus receptores (por exemplo, ACVR1B, ACVR1C, ACVR2A, ACVR2B, BMPR2, BMPR1A, BMPR1B, TGF β RI, TGF β RH), R-SMADS/co-SMADS (por exemplo, SMAD1, SMAD2, SMAD3, SMAD4, SMAD5, SMAD8), e inibidores de ligante (por exemplo, folistatina, nogina, cordina, DAN, lefty, LTBP1, THBS1, decorina).
[00145] Exemplos de inibidores da função mitocondrial incluem atractilosídeo (sal dipotássico), ácido bongcréquico (sal de triamônio), cianeto de carbonila m-clorofenilhidrazona, carboxiatractilosídeo, (por exemplo, de Atractylis gummifera), CGP-37157, (-)-Deguelina (por exemplo, de Mundulea sericea), F16, peptídeo de domínio de ligação hexoquinase II VDAC, oligomicina, rotenona, Ru360, SFK1 e valinomicina (por exemplo, de Streptomyces fulvissimus) (EMD4Biosciences, EUA).
[00146] Exemplos de inibidores de P38 incluem SB-203580 (4-(4Fluorofenil)-2-(4-metilsulfinilfenil)-5-(4-piridill) 1 H-imidazole), SB-239063 (trans-1 -(4-hidroxiciclo-hexil)-4-(fluorofenil)-5-(2-metóóxi-pirimidin-4-il) imidazole), SB-220025 (5-(2amino-4-pirimidinil)-4-(4-fIuorofeniI)-1 -(4piperidinil)imidazole)) e ARRY-797.
[00147] Exemplos de inibidores de NF (por exemplo, ΝΚ-Κβ) incluem IFRD1, 2-(1,8-naftiridin-2-il)-fenol, ácido 5-aminossalicílico, BAY 117082, BAY 11-7085, CAPE (fenetiléster do ácido caféico), dietilmaleato, inibidor IKK-2 IV, IMD 0354, lactacistina, MG-132 [Z-Leu-Leu-Leu-CHO],
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57/112 inibidor de ativação de NFkB III, inibidor de ativação de NF-kp II, JSH23, partenolide, óxido de fenilarsina (PAO), PPM-18, sal de amônio do ácido pirrolidinaditiocarbâmico, QNZ, RO 106-9920, rocaglamida, rocaglamida AL, rocaglamida C, rocaglamida I, rocaglamida J, rocaglaol, (R)-MG-132, salicilato de sódio, triptolide (PG490) e wedelolactona.
[00148] Exemplos de agonistas de receptores de adenosina incluem CGS-21680 e ATL-146e.
[00149] Exemplos de agonistas de prostaglandina E2 incluem EProstanoide 2 e E-Prostanoide 4.
[00150] Exemplos de inibidores da fosfodiesterase (não-seletivo e inibidores seletivos) incluem cafeína, aminofilina, IBMX (3-isobutilo-1metilxantina), paraxantina, pentoxifilina, teobromina, teofilina, xantinas metiladas, vinpocetina, EHNA (eritro-9-(2-hidróxi-3-nonil)adenina), anagrelida, enoximona (PERFANTM), milrinona, levosimendona, mesembrina, ibudilast, piclamilast, luteolina, drotaverina, roflumilast (DAXASTM, DALIRESPTM), sildenafil (REVATION, VIAGrA®), tadalafil (ADCIRCA®, CIALIS®), vardenafil (LEVITRA®, STAXYN®), udenafil, avanafil, icariina, 4-metilpiperazina e pirazolo pirimidina-7-1.
[00151] Exemplos de inibidores de proteassoma incluem bortezomibe, dissulfiram, epigalocatequina-3-galato e salinosporamida A. [00152] Exemplos de inibidores da quinase incluem bevacizumabe, BIBW 2992, cetuximabe (ERBITUX®), imatinibe (GLIVEC®), trastuzumabe (HERCEPTIN®), gefitinibe (IRESSA®), ranibizumabe (LUCENTIS®), pegaptanibe, sorafenibe, dasatinibe, sunitinibe, erlotinibe, nilotinibe, lapatinibe, panitumumabe, vandetanibe, E7080, pazopanibe e mubritinibe.
[00153] Exemplos de glicocorticóides incluem hidrocortisona (cortisol), acetato de cortisona, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona, triancinolona,
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58/112 beclometasona, acetato de fluorcortisona, acetato de deoxicorticosterona (DOCA) e aldosterona.
[00154] Exemplos de retinoides incluem retinol, retinal, tretinoina (ácido retinoico, RETIN-A®), isotretinoina (ACCUTANE®, AMNESTEEM®, CLARAVIS®, SOTRET®), alitertinoína (PANRETIN®), etretinato (TEGISONTM) e seu metabolite acitretina (SORIATANE®), tazaroteno (TAZORAC®, AVAGE®, ZORAC®), bexarotene (TARGRETIN®) e adapaleno (DIFFERIN®).
[00155] Exemplos de inibidores de citocinas incluem IL1ra, antagonista do receptor IL1, IGFBP, TNF-BF, uromodulina, alfa-2macroglobulina, ciclosporina A, pentamidina e pentoxifilina (PENTOPAK®, PENTOXIL®, TRENTAL®).
[00156] Exemplos de antagonista do receptor ativado por proliferadores de peroxissoma incluem GW9662, antagonista PPARy III, G335 e T0070907 (EMD4Biosciences, EUA).
[00157] Exemplos de agonistas do receptor ativado por proliferadores de peroxissoma incluem pioglitazona, ciglitazona, clofibrato, GW1929, GW7647, L-165,041, LY 171883, ativador PPARy, Fmoc-Leu, troglitazona e WY-14643 (EMD4Biosciences, EUA).
[00158] Exemplos de inibidores da histona deacetilase incluem ácidos hidroxâmicos (como hidroxamatos), como tricostatina A, tetrapeptídeos cíclicos (como trapoxina B) e depsipeptídeos, benzamidas, cetonas eletrofílicas, compostos de ácidos alifáticos como fenilbutirato e ácido valpróico, ácidos hidroxâmicos, como vorinostate (SAHA) belinostate (PXD101), LAQ824, e panobinostate (LBH589), benzamidas como um entinostate (MS-275), IC994, e mocetinostate (MGCD0103), nicotinamida, derivados de NAD, dihidrocoumarina, naftopiranona e 2-hidroxinafaldeídos.
[00159] Exemplos de inibidores da calcineurina incluem ciclosporina, pimecrolimus, voclosporina e tacrolimo.
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59/112 [00160] Exemplos de inibidores da fosfatase incluem cloridrato BN82002, CP-91149, caliculina A, ácido cantarídico, cantaridina, cipermetrina, etil-3,4-defostatina, sal de sódio fostriecina, MAZ51, metil-
3,4-defostatina, NSC 95397, norcantaridina, sal de amônio do ácido okadaico de prorocentrum concavum, ácido okadaico, sal de potássio do ácido okadaico, sal de sódio do ácido okadaico, óxido de fenilarsina, vários coquetéis inibidores de fosfatase, fosfatase da proteína 1C, proteína inibidora da fosfatase da proteína 2A, fosfatase da proteína 2A1, fosfatase da proteína 2A2 e ortovanadato de sódio. Nanocarreadores Sintéticos [00161] Os métodos fornecidos aqui incluem as administrações de nanocarreadores sintético compreendendo um imunossupressor. Geralmente, o imunossupressor é um elemento que está em adição do material que compõe a estrutura dos nanocarreadores sintéticos. Por exemplo, em uma modalidade de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, onde o nanocarreador sintético é composto de um ou mais polímeros, o imunossupressor é um composto que está em adição e, em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, ligado a um ou mais polímeros. Em modalidades onde o material do nanocarreador sintético também resulta em um efeito tolerogênico, o imunossupressor é um elemento presente em adição ao material do nanocarreador sintético que resulta em um efeito tolerogênico.
[00162] Uma grande variedade de nanocarreadores sintéticos podem ser usados de acordo com a invenção. Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos são esferas ou esferoides. Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos são planos ou em formato de placa. Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos são cubos ou cúbicos. Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos são ovais ou elipses. Em algumas
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60/112 modalidades, os nanocarreadores sintéticos são cilindros, cones ou pirâmides.
[00163] Em algumas modalidades, é desejável utilizar uma população de nanocarreadores sintéticos que é relativamente uniforme em termos de tamanho ou forma de modo que cada nanocarreador sintético tenha propriedades semelhantes. Por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95% dos nanocarreadores sintéticos de qualquer uma das composições ou métodos fornecidos, com base no número total de nanocarreadores sintéticos, podem ter uma dimensão mínima ou dimensão máxima que cai dentro de 5%, 10%, ou 20% do diâmetro médio ou dimensão média dos nanocarreadores sintéticos.
[00164] Nanocarreadores sintéticos podem ser sólidos ou ocos e podem incluir uma ou mais camadas. Em algumas modalidades, cada camada tem uma única composição e propriedades únicas em relação à(s) outra(s) camada(s). Para dar um exemplo, nanocarredores sintéticos podem ter uma estrutura de núcleo/casca, onde o núcleo é uma camada (por exemplo, um núcleo polimérico) e a casca é uma segunda camada (por exemplo, uma monocamada ou bicamada lipídica). Os nanocarreadores sintéticos podem incluir uma pluralidade de camadas diferentes.
[00165] Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos pode incluir opcionalmente um ou mais lipídios. Em algumas modalidades, um nanocarreador sintético pode compreender um lipossoma. Em algumas modalidades, um nanocarreador sintético pode compreender uma bicamada lipídica. Em algumas modalidades, um nanocarreador sintético pode compreender uma monocamada lipídica. Em algumas modalidades, um nanocarreador sintético pode compreender uma micela. Em algumas modalidades, um nanocarreador sintético pode compreender um núcleo compreendendo uma matriz
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61/112 polimérica rodeada por uma camada lipídica (por exemplo, bicamada lipídica, monocamada lipídica, etc). Em algumas modalidades, o nanocarreador sintético pode incluir um núcleo não polimérico (por exemplo, partículas de metal, quantum dot, partículas de cerâmica, partículas de ossos, partículas virais, proteínas, ácidos nucléicos, carboidratos, etc.) rodeado por uma camada lipídica (por exemplo, bicamada lipídica, monocamada lipídica, etc).
[00166] Em outras modalidades, os nanocarreadores sintéticos podem compreender partículas metálicas, pontos quânticos, partículas de cerâmica, etc. Em algumas modalidades, um nanocarreador sintético não-polimérico é um agregado de componentes não poliméricos, como um agregado de átomos de metal (por exemplo, átomos de ouro).
[00167] Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos pode incluir opcionalmente uma ou mais entidades anfifílicas. Em algumas modalidades, uma entidade anfifílica pode promover a produção do nanocarreadores sintéticos com maior estabilidade, maior uniformidade ou maior viscosidade. Em algumas modalidades, as entidades anfifílicas podem ser associadas com a superfície interna de uma membrana lipídica (por exemplo, bicamada lipídica, monocamada lipídica, etc.). Muitas entidades anfifílicas conhecidas na técnica são adequadas para o uso em produzir nanocarreadores sintéticos de acordo com a presente invenção. Tais entidades anfifílicas incluem, mas não estão limitadas a, fosfoglicerídeos; fosfatidilcolinas; fosfatidilcolinas dipalmitoil (DPPC); dioleilfosfatidil etanolamina (DOPE); dioleiloxipropiltrietilamônio (DOTMA); dioleoilfosfatidilcolina; colesterol; colesterol éster; diacilglicerol; diacilglicerolsuccinato; difosfatidilglicerol (DPPG); hexanodecanol; álcoois graxos como polietilenoglicol (PEG); éter polioxietileno-9-laurílico; ácido graxo de superfície ativa, como ácido palmitico ou ácido oleico; ácidos graxos; monoglicerídeos de ácidos graxos; diglicerídeos de ácidos graxos; amidas de ácido graxo;
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62/112 glicolato de sorbitano trioleate (Span®85); monolaurato de sorbitano (Span®20); polissorbato 20 (Tween®20); polissorbato 60 (Tween®60); polissorbato 65 (Tween®65); polissorbato 80 (Tween®80); polissorbato 85 (Tween® 85); monoestearato de polioxietileno; surfactina; um poloxómero; um éster de ácido graxo de sorbitano, como trioleato de sorbitano; lecitina; lisolecitina; fosfatidilserina; fosfatidilinositol; esfingomielina; fosfatidiletanolamina (cefalina); cardiolipina; ácido fosfatidico; cerebrosideos; dicetilfosfato; dipalmitoilfosfatidilglicerol; estearilamina; dodecilamina; hexadecil-amina; palmitato de acetila; ricinoleato de glicerol; hexadecil esterato; miristato de isopropila; tiloxapol; poli (etilenoglicol)5000-fosfatidiletanolamina; poli(etilenoglicol) 400-monoestearato; fosfolipídeos; detergentes sintéticos e/ou naturais com elevadas propriedades de tensoativo; desoxicolatos; ciclodextrinas; sais caotrópicos; agentes de emparelhamento de ions; e combinações dos mesmos. Um componente de entidade anfifílica pode ser uma mistura de diferentes entidades anfifílicas. Aqueles versados na técnica reconhecerão que essa é uma lista exemplificadora, não exaustiva, de substâncias com atividade tensoativa. Qualquer entidade anfifílica pode ser usada na produção de nanocarreadores sintéticos para ser usado de acordo com a presente invenção.
[00168] Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos pode incluir opcionalmente um ou mais carboidratos. Os carboidratos podem ser naturais ou sintéticos. Um carboidrato pode ser derivado de um carboidrato natural. Em algumas modalidades, um carboidrato compreende monossacarídeo ou dissacarídeo, incluindo, mas não limitado a, glicose, frutose, galactose, ribose, lactose, sacarose, maltose, trealose, celbiose, manose, xilose, arabinose, ácido glucorônico, ácido galactorônico, ácido manurônico, glucosamina, galatosamina e ácido neurâmico. Em algumas modalidades, um carboidrato é um polissacarídeo, incluindo, mas não limitado a,
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63/112 pululano, celulose, celulose microcristalina, hidróxipropil metilcelulose (HPMC), hidroxicelulose (HC), metilcelulose (MC), dextrano, ciclodextrano, glicogênio, hidroxietilamido, carragenano, glicogênio, amilose, quitosana, Ν,Ο-carboxilmetilquitosano, algin e ácido algínico, amido, quitina, inulina, konjac, glucomanano, pustulan, heparina, ácido hialurônico, curdlan e goma xantana. Em modalidades, os nanocarreadores sintéticos não incluem (ou excluem especificamente) carboidratos, como um polissacarídeo. Em certas modalidades, os carboidratos podem incluir um derivado de carboidrato como um álcool de açúcar, incluindo, mas não limitado a, manitol, sorbitol, xilitol, eritritol, maltitol e lactitol.
[00169] Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos podem incluir um ou mais polímeros. Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos compreendem um ou mais polímeros que é um polímero plurônico não-metóxi-terminado. Em algumas modalidades, pelo menos, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, ou 99% (peso/peso) dos polímeros que compõem os nanocarreadores sintéticos são polímeros plurônicos não-metóxiterminados. Em algumas modalidades, todos os polímeros que compõem os nanocarreadores sintéticos são polímeros plurônicos nãometóxi-terminados. Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos compreendem um ou mais polímeros que é um polímero não metóxi-terminado. Em algumas modalidades, pelo menos, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, ou 99% (peso/peso) dos polímeros que compõem os nanocarreadores sintéticos são polímeros não metóxi-terminados. Em algumas modalidades, todos os polímeros que compõem os nanocarreadores sintéticos são polímeros não metóxiterminados. Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos
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64/112 compreendem um ou mais polímeros que não compreendem um polímero plurônico. Em algumas modalidades, pelo menos, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, ou 99% (peso/peso) dos polímeros que compõem os nanocarreadores sintéticos não compreendem polímero plurônico. Em algumas modalidades, todos os polímeros que compõem os nanocarreadores sintéticos não compreendem polímero plurônico. Em algumas modalidades, tal polímero pode ser circundado por uma camada de revestimento (por exemplo, lipossoma monocamadade lipídios, micela, etc.). Em algumas modalidades, elementos dos nanocarreadores sintéticos podem ser anexados ao polímero.
[00170] Imunossupressores podem ser acoplados aos nanocarreadores sintéticos por qualquer um de uma série de métodos. Geralmente, o acoplamento pode ser resultado de ligação entre os imunossupressores e os nanocarreadores sintéticos. Essa ligação pode resultar nos imunossupressores sendo fixados à superfície dos nanocarreadores sintéticos e/ou contidos (encapsulados) dentro dos nanocarreadores sintéticos. Em algumas modalidades, no entanto, os imunossupressores são encapsulados pelos nanocarreadores sintéticos como resultado da estrutura dos nanocarreadores sintéticos em vez de ligação aos nanocarreadores sintéticos. Em modalidades preferíveis, o nanocarreador sintético compreende um polímero, como fornecido aqui, e os imunossupressores são fixados ao polímero.
[00171] Quando a fixação ocorre como resultado da ligação entre os imunossupressores e nanocarreadores sintéticos, a fixação pode ocorrer através de um agrupamento de acoplamento. Um agrupamento de acoplamento pode ser qualquer agrupamento, através do qual um imunossupressor é ligado a um nanocarreador sintético. Tais agrupamentos incluem ligações covalentes, como uma ligação de
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65/112 amida ou ligação de éster, bem como moléculas separadas que ligam (covalentemente ou não-covalentemente) o imunossupressor aos nanocarreadores sintéticos. Tais moléculas incluem ligantes ou polímeros ou uma unidade destes. Por exemplo, o agrupamento de acoplamento pode compreender um polímero carregado ao qual um imunossupressor se liga eletrostaticamente. Como outro exemplo, o agrupamento de acoplamento pode compreender um polímero ou unidade deste ao qual está covalentemente ligado.
[00172] Em modalidades preferidas, os nanocarreadores sintéticos compreendem um polímero conforme fornecido aqui. Estes nanocarreadores sintéticos podem ser completamente poliméricos ou eles podem ser uma mistura de polímeros e outros materiais.
[00173] Em algumas modalidades, os polímeros de um nanocarreador sintético se associam para formar uma matriz polimérica. Em algumas dessas modalidades, um componente, como um imunossupressor, pode ser covalentemente associado a um ou mais polímeros da matriz polimérica. Em algumas modalidades, a associação covalente é mediada por um ligante. Em algumas modalidades, um componente pode ser não covalentemente associado a um ou mais polímeros da matriz polimérica. Por exemplo, em algumas modalidades, um componente pode ser encapsulado dentro, rodeado por e/ou disperso por uma matriz polimérica. Alternativa ou adicionalmente, um componente pode ser associado a um ou mais polímeros de uma matriz polimérica por interações hidrofóbicas, interações de carga, forças de Van der Waals, etc. Uma ampla variedade de polímeros e métodos para a formação de matrizes poliméricas resultante são conhecidos convencionalmente.
[00174] Polímeros podem ser polímeros natural ou artificial (sintéticos). Polímeros podem ser homopolímeros ou copolímeros compreendendo dois ou mais monômeros. Em termos de sequência, os
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66/112 copolímeros podem ser aleatórios, em bloco, ou compreender uma combinação de sequências aleatórias e em bloco. Normalmente, os polímeros, de acordo com a presente invenção são polímeros orgânicos.
[00175] Em algumas modalidades, o polímero compreende um poliéster, policarbonato, poliamida ou poliéster, ou unidade destes. Em outras modalidades, o polímero compreende poli(etileno glicol) (PEG), polipropileno glicol, poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), poli(ácido láctico-co-glicólico), ou uma policaprolactona ou unidade destes. Em algumas modalidades, é preferível que o polímero seja biodegradável. Por conseguinte, nessas modalidades, é preferível que se o polímero compreender um poliéter, como poli(etileno glicol) ou polipropileno glicol ou unidade destes, o polímero compreenda um bloco-co-polímero de poliéster e um polímero biodegradável de forma que o polímero seja biodegradável. Em outras modalidades, o polímero não compreende apenas um poliéter ou uma unidade do mesmo, como poli(etileno glicol) ou polipropileno glicol ou unidade dos mesmos.
[00176] Outros exemplos de polímeros adequados para uso na presente invenção incluem, mas não se limitam a, polietilenos, policarbonatos (p.ex. poli(1,3-dioxan-2ona)), polianidridos (p.ex. Poli(anidrido sebácico)), polipropilfumeratos, poliamidas (p.ex. policaprolactama), poliacetais, poliéteres, poliésteres (p.ex. polilactídeo, poliglicolídeo, polilactídeo-co-glicolídeo, policaprolactona, polihidroxiácido (p.ex. poli(p-hidroxialcanoato))), poli(ortoésteres), policianoacrilatos, poli(álcool vinílico), poliuretanos, polifosfazenos, poliacrilatos, polimetacrilatos, poliureas, poliestirenos, e copolímeros de poliaminas, polilisina, polilisina-PEG, e copolímeros de poli(etileneimina), poli(etileno imina)-PEG.
[00177] Em algumas modalidades, os polímeros, de acordo com a presente invenção incluem polímeros, que foram aprovados para uso
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67/112 em seres humanos pela FDA (U.S. Food and Drug Administration) em 21 C.F.R. § 177.2600, incluindo, mas não limitado a, poliésteres (por exemplo, ácido polilático, poli(ácido láctico-co-glicólico), policaprolactona, polivalerolactona, poli(1,3-dioxan-2-ona)); polianidridos (por exemplo, poli(anidrido sebácico); poliéteres (por exemplo, polietileno glicol); poliuretanos; polimetacrilatos; poliacrilatos e policianoacrilatos.
[00178] Em algumas modalidades, os polímeros podem ser hidrofílicos. Por exemplo, os polímeros podem incluir grupos aniônicos (por exemplo, grupo fosfato, grupo sulfato, grupo carboxilato); grupos catiônicos (por exemplo, grupo amina quaternária); ou grupos polares (por exemplo, grupo hidroxila, grupo tiol, grupo amina). Em algumas modalidades, o nanocarreador sintético compreendendo uma matriz polimérica hidrofílica gera um ambiente hidrofílico dentro do nanocarreador sintético. Em algumas modalidades, os polímeros podem ser hidrofóbicos. Em algumas modalidades, o nanocarreador sintético contendo uma matriz polimérica hidrofóbica gera um ambiente hidrofóbico dentro do nanocarreador sintético. Seleção de hidrofilidade ou hidrofobicidade do polímero pode ter um impacto sobre a natureza dos materiais que são incorporados em nanocarreadores sintéticos.
[00179] Em algumas modalidades, os polímeros podem ser modificados com uma ou mais porções e/ou grupos funcionais. Uma variedade de porções ou grupos funcionais podem ser utilizados de acordo com a presente invenção. Em algumas modalidades, os polímeros podem ser modificados com polietileno glicol (PEG), com um carboidrato, e/ou com poliacetais acíclicos derivados de polissacarídeos (Papisov, 2001, o ACS Symposium Series, 786:301). Algumas modalidades podem ser feitas usando os ensinamentos gerais da Patente US N° 5543158 para Gref et al., ou publicação W02009/051837 por Von Andrian et al.
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68/112 [00180] Em algumas modalidades, os polímeros podem ser modificados com um grupo de ácidos graxos ou lipídeos. Em algumas modalidades, um grupo de ácidos graxos pode ser um ou mais dos ácidos butírico, capróico, caprílico, cáprico, láurico, mirístico, palmítico, esteárico, araquídico, beénico ou lignocérico. Em algumas modalidades, um grupo de ácidos graxos pode ser um ou mais dos ácidos palmitoleico, vaccenico, oleico, linoleico, alfa-linoleico, gamalinoleico, araquidônico, gadoleico, araquidônico, eicosapentaenóico, docosahexaenóico ou erúcico.
[00181] Em algumas modalidades, os polímeros podem ser poliésteres incluindo copolímeros contendo unidades de ácido láctico e ácido glicólico, como poli(ácido láctico-co-ácido glicólico) e poli(lactídeoco-glicolídeo), referidos coletivamente aqui como PLGA; e os homopolímeros compreendendo unidades de ácido glicólico, referido aqui como PGA, e unidades de ácido láctico, como ácido poli-L-láctico, ácido poli-D-láctico, ácido poli-D,L-láctico, ácido poli-L-láctico, poli-Dláctico, e poli-D,L-láctico, referidos coletivamente aqui como PLA. Em algumas modalidades, poliésteres exemplares incluem, por exemplo, poli-hidroxiácidos; copolímeros de PEG e copolímeros de lactídeo e glicolídeo (por exemplo, copolímeros PLA-PEG, copolímeros PGAPEG, copolímeros PLGA-PEG, e seus derivados. Em algumas modalidades, os poliésteres incluem, por exemplo, os copolímeros de poli(caprolactona) e poli(caprolactona)-PEG, poli(L-lactídeo-co-L-lisina), poli(serina éster), poli(4-hidróxi-L-prolina éster), poli[a-(4-aminobutil)-Lácido glicólico], e seus derivados.
[00182] Em algumas modalidades, um polímero pode ser PLGA. PLGA é um copolímero biocompatível e biodegradável de ácido láctico e ácido glicólico, e várias formas de PLGA são caracterizadas pela razão de ácido láctico:ácido glicólico. Ácido láctico pode ser ácido Lláctico, ácido D-láctico ou ácido D,L-láctico. A taxa de degradação de
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PLGA pode ser ajustada alterando a razão de ácido láctico: ácido glicólico. Em algumas modalidades, o PLGA para ser usado de acordo com a presente invenção é caracterizado por uma razão de ácido lático:ácido glicólico de aproximadamente 85:15, aproximadamente 75:25, aproximadamente 60:40, aproximadamente 50:50, aproximadamente 40:60, aproximadamente 25:75, ou aproximadamente 15:85.
[00183] Em algumas modalidades, os polímeros podem ser uma ou mais polímeros acrílicos. Em certas modalidades, os polímeros acrílicos incluem, por exemplo, copolímeros de ácido acrílico e ácido metacrílico, copolímeros de metilmetacrilato, metacrilatos de etoxietil, metacrilato de cianoetila, copolímero de metacrilato de aminoalquila, poli (ácido acrílico), poli (ácido metacrílico) copolímero de alquilamida do ácido metacrílico, poli (metacrilato de metila), poli (anidrido de ácido metacrílico), metacrilato de metila, polimetacrilato, poli (metacrilato de metila), poliacrilamida, copolímero de metacrilato de aminoalquila, copolímeros de metacrilato de glicidila, policianoacrilatos e combinações compreendendo um ou mais dos polímeros anteriores. O polímero acrílico pode incluir copolímeros totalmente polimerizados de ésteres do ácido acrílico e metacrílico com um baixo teor de grupos de amônio quaternário.
[00184] Em algumas modalidades, os polímeros podem ser polímeros catiônicos. Em geral, polímeros catiônicos são capazes de condensar e/ou proteger fitas negativamente carregadas de ácidos nucleicos. Polímeros contendo amina, como poli(lisina) (Zauner et al., 1998, Adv. Drug Del. Rev., 30:97; e Kabanov et al., 1995, Bioconjugate Chem., 6:7), poli(etileno imina) (PEI; Boussif et al., 1995, Proc. Natl. Acad. Sei., USA, 1995, 92:7297), e dendrímeros de poli(amidoamina) (Kukowska-Latallo et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sei., USA, 93:4897; Tang etal., 1996, Bioconjugate Chem., 7:703; and Haensleret al., 1993,
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Bioconjugate Chem., 4:372) são positivamente carregados em pH fisiológico, formam pares de ions com ácidos nucleicos. Em modalidades, os nanocarreadores sintéticos podem não incluir (ou podem excluir) polímeros catiônicos.
[00185] Em algumas modalidades, os polímeros podem ser poliésteres degradáveis tendo as cadeias laterais catiônicas (Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc., 115:11010; Kwon et al., 1989, Macromolecules, 22:3250; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633;eZhouetal., 1990, Macromolecules, 23:3399). Exemplos destes poliésteres incluem poli(L-lactídeo-co-Llisina) (Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc., 115:11010), poli(serina éster) (Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399), poli(4-hidróxi-Lprolina éster) (Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; and Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633), e poli(4-hidróxi-L-prolina éster) (Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; e Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633).
[00186] As propriedades destes e de outros polímeros e métodos para prepará-los são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, patentes U.S. 6.123.727; 5.804.178; 5.770.417; 5.736.372; 5.716.404; 6.095.148; 5.837.752; 5.902.599; 5.696.175; 5.514.378; 5.512.600; 5.399.665; 5.019.379; 5.010.167; 4.806,621; 4.638.045; e 4.946.929; Wang et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:9480; Lim et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:2460; Langer, 2000, Acc. Chem. Res., 33:94; Langer, 1999, J. Control. Release, 62:7; e Uhrich et al., 1999, Chem. Rev., 99:3181). De modo mais geral, uma variedade de métodos para a síntese de determinados polímeros adequados são descritos em Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Amines and Ammonium Salts, Ed. byGoethals, Pergamon Press, 1980; Principles of Polymerization by Odian, John Wiley & Sons, Fourth Edition, 2004; Contemporary Polymer Chemistry by Allcock et al., Prentice-Hall, 1981;
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Deming et al., 1997, Nature, 390:386; e nas patentes US 6.506.577, 6.632.922, 6.686.446 e 6.818.732.
[00187] Em algumas modalidades, os polímeros podem ser polímeros lineares ou ramificados. Em algumas modalidades, os polímeros podem ser dendrímeros. Em algumas modalidades, os polímeros podem ser substancialmente reticulados uns aos outros. Em algumas modalidades, os polímeros podem ser substancialmente livres de reticulações. Em algumas modalidades, os polímeros podem ser utilizados de acordo com a presente invenção sem sofrer uma etapa de reticulação. Deve ainda ser entendido que os nanocarreadores sintéticos podem incluir copolímeros em bloco, e os copolímeros de enxerto, blendas, misturas, e/ou adutos de qualquer destes materiais e outros polímeros. Os versados na técnica reconhecem que os polímeros listados aqui representam uma lista exemplar, não exaustiva, de polímeros que podem ser utilizados de acordo com a presente invenção.
[00188] Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos não incluem um componente polimérico. Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos podem compreender partículas metálicas, pontos quânticos, partículas de cerâmica, etc. Em algumas modalidades, um nanocarreador sintético não-polimérico é um agregado de componentes não poliméricos, como um agregado de átomos de metal (por exemplo, átomos de ouro).
[00189] Composições de acordo com a invenção podem compreender excipientes farmaceuticamente aceitáveis, como conservantes, tampões, solução salina ou solução salina tamponada com fosfato. As composições podem ser feitas utilizando a fabricação de produtos farmacêuticos convencionais e técnicas de composição para chegar a formas de dosagem útil. Em uma modalidade, as composições são suspensas em solução salina estéril para injeção junto com um conservante.
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D. MÉTODOS PARA USAR E PRODUZIR AS COMPOSIÇÕES [00190] Vetores virais podem ser feitos com métodos conhecidos dos versados na técnica ou aqui descritos. Por exemplo, os vetores virais podem ser construídos e/ou purificado usando os métodos estabelecidos, por exemplo, in patente US N° 4.797.368 e Laughlin et al., Gene, 23, 65-73 (1983).
[00191] Como um exemplo, vetores adenovirais deficientes de replicação podem ser produzidos em linhagens celulares complementares que fornecem funções de genes não presentes nos vetores adenovirais deficientes de replicação, mas necessário para a propagação viral, em níveis adequados, a fim de gerar altos títulos de estoque de vetor viral. A linhagem celular complementar pode complementar uma deficiência em pelo menos uma função do gene essencial de replicação codificado por regiões iniciais, regiões tardias, regiões de empacotamento viral, regiões de RNA associado ao vírus, ou suas combinações, incluindo todas as funções adenovirais (por exemplo, para permitir a propagação de amplicons adenovirais). Construção de linhagens celulares complementares envolvem biologia molecular padrão e técnicas de cultura de células, como os descritos por Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 2a edição, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) e Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates e John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1994).
[00192] As linhagens celulares complementares para produzir vetores adenovirais incluem, mas não estão limitados a, células HEK 293 (descrito em, por exemplo, Graham et al., J. Gen Virol., 36, 59-72 (1977)), células PER.C6 (descrito em, por exemplo, pedido de patente internacional WO 97/00326, e patente US N°s 5.994.128 e 6.033.908) e células 293-ORF6 (descrito em, por exemplo, pedido de patente internacional WO 95/34671 e Brough et al., J. Virol., 71, 9206-9213
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73/112 (1997)). Em alguns casos, célula de complementação não irá complementar todas as funções do gene adenoviral necessárias. Os vírus ajudantes podem ser empregados para fornecer as funções do gene em trans que não são codificadas pelos genomas celulares ou adenovirais para permitir replicação do vetor adenoviral. Os vetores adenovirais podem ser construídos, propagados e/ou purificados usando os materiais e os métodos estabelecidos, por exemplo, na patente US N° 5.965.358, 5.994.128, 6.033.908, 6.168.941,6.329.200, 6.383.795, 6.440.728, 6.447.995 e 6.475.757, publicação de pedido de patente US NQ 2002/0034735 A1, e pedidos de patente internacional WO 98/53087, WO 98/56937, WO 99/15686, WO 99/54441, WO 00/12765, WO 01/77304 e WO 02/29388, bem como as outras referências identificadas aqui. Vetores adenovirais não pertencentes ao grupo C, incluindo 35 vetores do sorotipo adenoviral, podem ser produzidos usando os métodos estabelecidos aqui, por exemplo, nas patentes US N°s 5.837.511 e 5.849.561, e pedidos de patente internacional WO 97/12986 e WO 98/53087.
[00193] Vetores virais, como vetores AAV, podem ser produzidos usando métodos recombinantes. Por exemplo, os métodos podem envolver a cultura de uma célula hospedeira que contém uma sequência de ácido nucleico que codifica uma proteína do capsídeo de AAV ou seu fragmento; um gene rep funcional; um vetor recombinante de AAV composto de repetições terminal invertida (ITR) do AAV e um transgene; e funções ajudantes suficientes para permitir a embalagem do vector recombinantes de AAV nas proteínas do capsídeo de AAV. Em algumas modalidades, o vetor viral pode conter repetições terminais invertidas (ITR) de sorotipos AAV selecionados do grupo consistindo em: AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV6.2, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 e suas variantes.
[00194] Os componentes a serem cultivados na célula do hospedeiro
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74/112 para empacotar um vetor viral em um capsídeo podem ser fornecidos à célula hospedeira na trans. Alternativamente, qualquer um ou mais dos componentes necessários (por exemplo, vetor recombinante de AAV, sequências rep, sequências pac e/ou funções ajudantes) pode ser fornecido por uma célula hospedeira estável que tenha sido projetada para conter um ou mais dos componentes necessários usando métodos conhecidos pelos versados na técnica. Mais adequadamente, tal célula hospedeira estável irá conter o(s) componente(s) necessário(s) sob o controle de um promotor induzível. No entanto, o(s) componente(s) necessário(s) podem estar sob o controle de um promotor constitutivo. O vetor viral recombinante, as sequências rep, sequências pac e funções auxiliares necessárias para produzirem o vetor viral podem ser entregues para a embalagem da célula hospedeira usando qualquer elemento genético apropriado. O elemento genético selecionado pode ser entregue por qualquer método adequado, incluindo aqueles descritos aqui. Outros métodos são conhecidos para aqueles com especialidade em manipulação de ácido nucleico e incluem a engenharia genética engenharia recombinante e técnicas sintéticas. Ver, por exemplo, Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. Da mesma forma, os métodos para gerar os virions de rAAV são bem conhecidos e a seleção de um método adequado não é uma limitação da presente invenção. Ver, por exemplo, K. Fisher et al., J. Virol., 70:520-532 (1993) e patente U.S. No. 5.478.745.
[00195] Em algumas modalidades, os vetores de transferência de AAV recombinante podem ser produzidos utilizando o método de transfecção tripla (por exemplo, como descrito em detalhe na patente US No. 6,001,650, Pat. US No. 6,593,123, bem como X. Xiao et al, J. Virol. 72:2224-2232 (1998), e T. Matsushita et al, Gene Ther. 5(7): 938945 (1998), cujos conteúdos relativos ao método de tripla transfecção
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75/112 são incorporados aqui por referência). Por exemplo, os AAVs recombinantes podem ser produzidos pela transfecção de uma célula hospedeira com um vetor de transferência recombinante de AAV (compreendendo um transgene) para ser embalados em partículas de AAV, um vetor função auxiliar de AAV e um vetor de função acessório. Geralmente, um vetor função auxiliar de AAV codifica a função auxiliar de AAV (rep e cap), que funcionam em trans para replicação de AAV produtiva e encapsidação. De preferência, o vetor da função auxiliar do AAV suporta a produção eficiente do vector de AAV sem gerar quaisquer virions de AAV do tipo selvagem detectáveis (pisto é, virions de AAV contendo os genes rep e cap funcionais). O vetor da função acessória pode codificar as sequências de nucleótidos para as funções virais não derivadas de AAV e/ou celulares sobre o qual o AAV é dependente para replicação. As funções acessórias incluem as funções necessárias para a replicação de AAV, incluindo, sem limitação, as porções envolvidas na ativação da transcrição do gene de AAV, splicing do mRNA de AAV específico do estágio, replicação do DNA de AAV, síntese dos produtos de expressão cap e conjunto do capsídeo de AAV. As funções acessórias baseadas em virais podem ser derivadas a partir de qualquer um dos vírus auxiliares conhecidos como o adenovirus, herpesvirus (exceto vírus herpes simplex tipo 1), e vírus vaccinia.
[00196] Outros métodos para a produção de vetores virais são conhecidos na técnica. Além disso, os vetores virais estão disponíveis comercialmente.
[00197] Em relação aos nanocarreadores sintéticos acoplados aos imunossupressores, os métodos para a fixação de componentes aos nanocarreadores sintéticos podem ser úteis.
[00198] Em modalidades, os métodos para a fixação de componentes a, por exemplo, nanocarreadores sintéticos podem ser úteis. Em certas modalidades, a fixação pode ser um ligante covalente.
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Em modalidades, os imunossupressores, de acordo com a invenção, podem ser ligados covalentemente à superfície externa através de um ligante 1,2,3-triazol formada pela reação de cicloadição 1,3-dipolar de grupos com azido imunossupressor contendo um grupo alcino ou pela reação de cicloadição 1,3-dipolar de alcinos com imunossupressores contendo um grupo azido. Tais reações de cicloadição são realizadas preferencialmente na presença de um catalisador de Cu(l) junto com um ligante Cu(l) e um agente redutor para reduzir compostos de Cu(ll) para composto de Cu(l) ativo catalítico. Esta cicloadição de alcino-azida catalisado por Cu(l) (CuAAC) também pode ser referida como a reação de clique.
[00199] Além disso, o acoplamento covalente pode compreender um ligante covalente que compreende um ligante amida, um ligante bissulfeto, um ligante tioéter, um ligante hidrazona, um ligante hidrazida, um ligante imina ou oxima, um ligante uréia ou tioureia, um ligante amidina, um ligante amina e um lugante sulfonamida.
[00200] Um ligante amida é formado através de uma ligação amida entre uma amina em um componente como um imunossupressor com o grupo ácido carboxílico de um segundo componente como o nanocarreador. A ligação amida no lingante pode ser feita usando qualquer uma das reações de formação de ligação amida convencionais com aminoácidos devidamente protegidos e ácido carboxílico ativado como éster ativado por N-hidroxissuccinimida.
[00201] Um ligante bissulfeto é feito através da formação de uma ligação dissulfeto (S-S) entre dois átomos de enxofre sob a forma, por exemplo, de R1-S-S-R2. Uma ligação dissulfeto pode ser formada pela troca de tiol de um componente contendo grupo tiol/mercaptano (-SH) com outro grupo tiol ativado ou um componente contendo grupos tiol/mercaptano com um componente contendo grupo tiol ativado.
[00202] Um ligante triazólico, especificamente um 1,2,3-triazol da
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Figure BR112019013862A2_D0001
forma R2 , onde R1 e R2 podem ser quaisquer entidades químicas, é feito pela reação de cicloadição 1,3-dipolar de uma azida acoplada a um primeiro componente com um alcino terminal fixado a um segundo componente, como o imunossupressor. A reação de cicloadição 1,3dipolar é realizada com ou sem um catalisador, de preferência com catalisador Cu(l), que liga os dois componentes através de uma função de 1,2,3-triazol. Essa química é descrita em detalhes por Sharpless et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41(14), 2596, (2002) e Meldal, et al, Chem. Rev., 2008, 108(8), 2952-3015 e é frequentemente referido como uma reação clique ou CuAAC.
[00203] Um ligante tioéter é feito pela formação de uma ligação enxofre-carbono (tioéter), sob a forma, por exemplo, de R1-S-R2. O tioéter pode ser feito tanto pela alquilação de um grupo tiol/mercaptano (-SH) em um componente com um grupo alquilante como haleto ou epóxido em um segundo componente. Ligantes tioéter também podem ser formados por adição de Michael de um grupo tiol/mercaptano em um componente para um grupo alceno deficiente de elétron em um segundo componente que contém um grupo maleimida ou grupo vinil sulfona como aceptor de Michael. De outro modo, os ligantes tioéter podem ser preparados pela reação do radical tiol-eno de um grupo tiol/mercaptano em um componente com um grupo alceno em um segundo componente.
[00204] O ligante hidrazona é feito pela reação de um grupo hidrazida em um componente com um grupo aldeído/cetona no segundo componente.
[00205] O ligante hidrazida é formado pela reação de um grupo hidrazina em um componente com um grupo ácido carboxílico no segundo componente. Essa reação é geralmente realizada com a
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78/112 química semelhante à formação de ligação amida onde o ácido carboxílico é ativado com um reagente de ativação.
[00206] Um ligante imina ou oxima é formado pela reação de uma amina ou N-alcoxiamina (ou grupo aminooxi) em um componente com um grupo aldeído ou cetona no segundo componente.
[00207] Um ligante ureia ou tioureia é preparado pela reação de um grupo amina em um componente com um grupo isocianato ou tioisocianato no segundo componente.
[00208] Um ligante amidina é preparado pela reação de um grupo amina em um componente com um grupo imidoéster no segundo componente.
[00209] O ligante amina é feito pela reação de alquilação de um grupo hidrazida em um componente com um grupo de alquilação como haleto, epóxido ou sulfonato de éster no segundo componente. Alternativamente, um ligante amina também pode ser feito por aminação redutora de um grupo amina em um componente com um grupo aldeído ou cetona no segundo componente com um reagente de redução adequado como o cianoboroidreto de sódio ou triacetoxiboroidreto de sódio.
[00210] Um ligante sulfonamida é preparado pela reação de um grupo amina em um componente com um grupo haleto de sulfonila (como o cloreto de sulfonila) no segundo componente.
[00211] Um ligante sulfona é feito por adição de Michael de um nucleófilo para um vinil sulfona. Tanto o vinil sulfona ou o nucleófilo pode estar na superfície do nanocarreador ou anexado a um componente.
[00212] O componente também pode ser conjugado através de métodos de conjugação não covalente. Por exemplo, um imunossupressor carregado negativamente pode ser conjugado a um componente carregado positivamente através de adsorção eletrostática. Um componente contendo um ligante de metal também podem ser
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79/112 conjugados com um complexo de metal através de um complexo metalligante.
[00213] Em modalidades, o componente pode ser fixado a um polímero, por exemplo, ácido polilático-bloco-polietileno glicol, antes da montagem de um nanocarreador sintético ou o nanocarreador sintético pode ser formado com grupos reativos ou ativáveis em sua superfície. Neste último caso, o componente pode ser preparado com um grupo que é compatível com a química de fixação que é apresentada pela superfície de nanocarreadores sintéticos. Em outras modalidades, um componente peptídeo pode ser fixado a VLPs ou lipossomas usando um ligante. Um ligante é um composto ou reagente capaz de acoplamento entre duas moléculas juntas. Em uma modalidade, o ligante pode ser um reagente homobifuncional ou heterobifuncional, como descrito em Hermanson 2008. Por exemplo, um VLP ou nanocarreador sintético de lipossoma contendo um grupo carboxílico na superfície pode ser tratado com um ligante homobifuncional, dihidrazida adípica (ADH), na presença de EDC para formar o nanocarrier sintético correspondente com o ligante ADH. O nanocarreador sintético ligado a ADH resultante é então conjugado com uma componente de peptídeo contendo um grupo ácido através da outra extremidade do ligador ADH no nanocarreador para produzir a VLP correspondente ou conjugado peptídeo lipossoma.
[00214] Em modalidades, um polímero contendo um grupo azida ou alcino, terminal à cadeia polimérica é preparado. Este polímero é então usado para preparar um nanocarreador sintético, de tal forma que uma pluralidade de grupos alcino ou azida são posicionados na superfície do nanocarreador. Alternativamente, o nanocarreador sintético pode ser preparado por uma outra rota, e posteriormente funcionalizado com grupos alcino ou azida. O componente é preparado com a presença de um polímero alcino (se o polímero contém uma azida) ou uma azida (se
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80/112 o polímero contém um alcino). O componente é então deixado reagir com o nanocarreador através da reação de cicloadição 1,3-dipolar com ou sem um catalisador que anexa covalentemente o componente à partícula através do ligante 1,4-dissubstituído 1,2,3-triazol.
[00215] Se o componente for uma pequena molécula pode ser vantajoso fixar o componente a um polímero antes da montagem dos nanocarreadores sintéticos. Em modalidades, também pode ser uma vantagem preparar os nanocarreadores sintéticos com grupos de superfície que são usados para fixar o componente ao nanocarreador sintético através do uso destes grupos de superfície, em vez de fixar o componente a um polímero e então usar este polímero conjugado na construção de nanocarreadores sintéticos.
[00216] Para descrições detalhadas de métodos de conjugação disponíveis, consulte Hermanson G T Bioconjugate Techniques, 2a edição publicada por Academic Press, Inc., 2008. Além de fixação covalente o componente pode ser fixado por adsorção a um nanocarreador sintético pré-formado ou pode ser fixado por encapsulamento durante a formação do nanocarreador sintético.
[00217] Os nanocarreadores sintéticos podem ser preparados utilizando uma ampla variedade de métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, nanocarreadores sintéticos podem ser formados por métodos como nanoprecipitação, fluxo com foco utilizando canais fluídicos, secagem por atomização, evaporação de solvente de emulsão simples e dupla, extração de solvente, separação de fase, moagem, procedimentos de microemulsão, microfabricação, nanofabricação, camadas de sacrifício, coacervação simples e complexa, e outros métodos bem conhecidos dos versados na técnica. Alternativa ou adicionalmente, sínteses de solventes aquosos e orgânicos para monodispersão de nanomateriais semicondutores, condutores, magnéticos, orgânicos e outros têm sido descritas (Pellegrino et al., 2005, Small, 1:48; Murray et
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81/112 al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545; e Trindade et al., 2001, Chem. Mat., 13:3843). Outros métodos têm sido descritos na literatura (ver, por exemplo, Doubrow, Ed.,Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy, CRC Press, Boca Raton, 1992; Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Release, 5:13; Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, 6:275; e Mathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci., 35:755; Patentes US 5578325 e 6007845; P. Paolicelli et al., Surface-modified PLGAbased Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)).
[00218] Materiais podem ser encapsulados em nanocarreadores sintéticos como desejável, usando uma variedade de métodos, incluindo mas não limitado a, C. Astete et al., Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles J. Biomater. Sci. Polymer Edn, Vol. 17, No. 3, pp. 247-289 (2006); K. Avgoustakis Pegylated Poly(Lactide) and Poly(Lactide-Co-Glycolide) Nanoparticles: Preparation, Properties and Possible Applications in Drug Delivery Current Drug Delivery 1:321-333 (2004); C. Reis et al., Nanoencapsulation I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles Nanomedicine 2:8- 21 (2006); P. Paolicelli et al., Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010). Outros métodos adequados para encapsular materiais em nanocarreadores sintéticos podem ser usados, incluindo, sem limitação, métodos divulgados nos nas patentes US 6.632.671 para Unger emitida em 14 de outubro, 2003.
[00219] Em algumas modalidades, os nanocarreadores sintéticos são preparados por um processo de nanoprecipitação ou spray de secagem. As condições utilizadas na preparação de nanocarreadores sintéticos podem ser alterados para produzir partículas de um tamanho ou propriedade desejado (por exemplo, hidrofobicidade, hidrofilidade, morfologia externa, viscosidade, forma, etc.). O método de preparação
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82/112 dos nanocarreadores sintéticos e as condições (por exemplo, solvente, temperatura, concentração, taxa de fluxo de ar, etc.) usados podem depender dos materiais a ser fixados nos nanocarreadores sintéticos e/ou a composição da matriz do polímero.
[00220] Se nanocarreadores sintéticos preparados por qualquer um dos métodos acima tiver uma faixa de tamanho fora da faixa desejada, os nanocarreadores sintéticos podem ser dimensionados, por exemplo, usando uma peneira.
[00221] Elementos dos nanocarreadores sintéticos podem ser fixados ao nanocarreador sintético em geral, como, por exemplo, por uma ou mais ligações covalentes, ou podem ser fixados por meio de um ou mais ligantes. Métodos adicionais de nanocarreadores sintéticos funcionalizantes podem ser adaptados da publicação do pedido de patente publicado US 2006/0002852 para Saltzman et al., publicação do pedido de patente publicado US 2009/0028910 para Desimone et al., ou publicação do pedido de patente internacional publicado WO 2008/127532/A1 para Murthy et al.
[00222] Como alternativa ou adicionalmente, nanocarreadores sintéticos podem ser fixados aos componentes direta ou indiretamente através de interações não covalentes. Em modalidades não covalentes, a fixação não covalente é mediada por interações não-covalentes, incluindo, mas não limitada a, interações de carga, interações de afinidade, coordenação de metal, adsorção física, interações hospedeiro-convidado, interações hidrofóbicas, interações de empilhamento TT, interações de ligação de hidrogênio, interações de van der Waals, interações magnéticas, interações eletrostáticas, interações dipolo-dipolo, e/ou suas combinações. Essas fixações podem ser arranjadas para estar em uma superfície externa ou uma superfície interna de um nanocarreador sintético. Em modalidades, o encapsulamento e/ou a absorção é uma forma de fixação.
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83/112 [00223] As composições fornecidas aqui podem compreender tampões inorgânicos ou orgânicos (por exemplo, sais de sódio ou potássio de fosfato, carbonato, acetato ou citrato) e agentes de ajuste de pH (por exemplo, ácido clorídrico, hidróxido de sódio ou potássio, sais de citrato ou acetato, aminoácidos e seus sais), antioxidantes (por exemplo, ácido ascórbico, alfa-tocoferol), tensoativos (por exemplo, polissorbato 20, polissorbato 80, polioxietileno 9-10 nonil fenol, desoxicolato de sódio), solução e/ou estabilizadores crio/ lio (por exemplo, sacarose, lactose, manitol, trealose), agentes de ajuste osmótico (por exemplo, sais ou açúcares), agentes antibacterianos (por exemplo, ácido benzóico, fenol, gentamicina), agentes antiespumantes (por exemplo, polidimetilsilozona), conservantes (por exemplo, timerosal, 2-fenoxietanol, EDTA), estabilizadores poliméricos e agentes de ajuste de viscosidade (por exemplo, polivinilpirrolidona, poloxâmero 488, carboximetilcelulose) e co-solventes (por exemplo, glicerol, polietilenoglicol, etanol).
[00224] As composições de acordo com a invenção podem incluir excipientes farmaceuticamente aceitáveis. As composições podem ser feitas utilizando a fabricação de produtos farmacêuticos convencionais e técnicas de composição para chegar a formas de dosagem útil. Técnicas adequadas para uso na prática da presente invenção podem ser encontrada no Handbook of Industrial Mixing: Science and Practice, Edited by Edward L. Paul, Victor A. Atiemo-Obeng, e Suzanne M. Kresta, 2004 John Wiley & Sons, Inc.; e Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design, 2nd Ed. Edited by Μ. E. Auten, 2001, Churchill Livingstone. Em uma modalidade, as composições são suspensas em solução salina estéril para injeção com um conservante.
[00225] É para ser entendido que as composições da invenção podem ser feitas de qualquer maneira adequada, e a invenção não é de modo algum limitada a composições que podem ser produzidas
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84/112 utilizando os métodos descritos aqui. A seleção de um método adequado de fabricação pode exigir atenção das propriedades dos agrupamentos especiais sendo associados.
[00226] Em algumas modalidades, as composições são fabricadas sob condições estéreis ou são terminalmente esterilizadas. Isso pode garantir que as composições resultantes são estéreis e não-infecciosas, melhorando assim a segurança quando comparada as composições não-estéreis. Isto oferece uma importante medida de segurança, especialmente quando os indivíduos recebendo as composições têm defeitos imunes, estão sofrendo de infecção e/ou são suscetíveis à infecção.
[00227] A administração de acordo com a presente invenção pode ser por uma variedade de vias, incluindo, mas não limitada a uma via subcutânea, intravenosa, intramuscular e intraperitoneal. As composições referidas aqui podem ser fabricadas e preparadas para administração, em algumas modalidades coadministração, usando métodos convencionais.
[00228] As composições da invenção podem ser administradas em quantidades eficazes, como as quantidades eficazes descritas aqui. Formas de dosagem podem ser administradas a uma variedade de frequências. Em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos, foi realizada a administração repetida de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor com ou sem um vetor viral.
[00229] Aspectos da invenção referem-se à determinação de um protocolo para os métodos de administração como fornecido aqui. Um protocolo pode ser determinado pela variação de, pelo menos, a frequência, a quantidade de dosagem de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e/ou vetor viral, como de acordo com os regimes de administração fornecidos, e avaliando a resposta
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85/112 imune desejada ou indesejada ou expressão do transgene. Um protocolo preferido para a prática da invenção reduz uma resposta imune contra o vetor viral ou antígeno viral e/ou promove a expressão do transgene. O protocolo compreende, pelo menos, a frequência de administração e as doses dos nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e/ou vetores virais, como de acordo com qualquer um dos regimes de administração fornecidos aqui. Qualquer um dos métodos indicados aqui pode incluir uma etapa de determinação de um protocolo ou as etapas de administração são realizadas de acordo com um protocolo que foi determinado para alcançar qualquer um ou mais dos resultados desejados conforme fornecido aqui.
[00230] Outro aspecto da revelação refere-se aos kits. Em algumas modalidades de qualquer um dos kits fornecidos, o kit é composto por uma ou mais das composições fornecidas aqui. De preferência, a(s) composição(ões) está(estão) em uma quantidade para fornecer uma ou mais doses conforme fornecido aqui. A(s) composição(ões) pode(m) estar em um recipiente ou em mais do que um recipiente no kit. Em algumas modalidades de qualquer um dos kits fornecidos, o recipiente é um frasco ou uma ampola. Em algumas modalidades de qualquer um dos kits fornecidos, a(s) composição(s) está/estão em forma liofilizada, cada uma em um recipiente separado ou no mesmo recipiente, de modo que elas possam ser reconstituídas em um momento posterior. Em algumas modalidades de qualquer um dos kits fornecidos, o kit compreende ainda instruções para reconstituição, mistura, administração, etc. Em algumas modalidades de qualquer um dos kits fornecidos, as instruções incluem uma descrição de qualquer um dos métodos descritos aqui. Instruções podem ser de qualquer forma adequada, como, por exemplo, uma inserção impressa ou um rótulo. Em algumas modalidades de qualquer um dos kits fornecidos aqui, o kit
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86/112 inclui ainda uma ou mais seringas ou outro(s) dispositivo(s) que pode(m) fornecer a(s) composição(s) in vivo a um indivíduo.
EXEMPLOS
Exemplo 1: Nanocarreadores sintéticos contendo rapamicina Materiais [00231] A rapamicina foi comprada da TSZ CHEM (185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; Catálogo de Produto # R1017). PLGA com teor de lactídeo a 76% e glicolídeo a 24% e uma viscosidade intrínseca de 0,69 dL/g foi comprado de SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211. Código do produto 7525 DLG 7A.) Copolímero em bloco PLA-PEG com um bloco de PEG de cerca de 5.000 Da e bloco de PLA de cerca de 40.000 Da foi comprado de SurModics Pharmaceuticals (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211; Código do Produto 100 DL mPEG 5000 5CE). Poli(álcool vinílico) (85-89% hidrolisado) foi comprada da EMD Chemicals (Número do Produto 1.41350.1001).
Método [00232] As soluções foram preparadas da seguinte maneira:
[00233] Solução 1: PLGA a 75 mg/mL e PLA-PEG a 25 mg/mL em cloreto de metileno. A solução foi preparada pela dissolução de PLGA e PLA-PEG em cloreto de metileno puro.
[00234] Solução 2: Rapamicina a 100 mg/mL em cloreto de metileno. A solução foi preparada dissolvendo a rapamicina em cloreto de metileno puro.
[00235] Solução 3: Álcool polivinílico a 50 mg/ml em 100 mM de tampão fosfato pH 8.
[00236] Uma emulsão óleo-em-água foi usada para preparar os nanocarreadores. A emulsão O/A foi preparada pela combinação de solução 1 (1 mL), solução 2 (0,1 mL) e solução 3 (3 mL) em um pequeno tubo de pressão e sonicação a amplitude de 30% por 60 segundos
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87/112 usando um sonificador Branson Digital 250. A emulsão O/A foi adicionada a um béquer contendo 70 mM solução tampão fosfato, pH 8 (30 ml_) e agitada em temperatura ambiente por 2 horas para permitir que o cloreto de metileno evaporasse e para que os nanocarreadores se formassem. Uma parte dos nanocarreadores foi lavada ao transferir a suspensão do nanocarreador para um tubo de centrífuga e centrifugação a 75.000 χ g e 4 °C, por 35 minutos, removendo o sobrenadante e ressuspendendo o pélete em solução salina tamponada com fosfato. O procedimento de lavagem foi repetido, e o pélete foi ressuspenso em solução salina tamponada com fosfato para uma dispersão final de nanocarreador de cerca de 10 mg/mL.
[00237] O tamanho do nanocarreador foi determinado pela dispersão de luz dinâmica. A quantidade de rapamicina no nanocarreador foi determinada por análise HPLC. A massa de matéria nanocarreador seco total por ml_ de suspensão foi determinada por um método gravimétrico.
Diâmetro eficaz (nm) Teor de rapamicina (% p/p)
227 6,4
Exemplo 2: Nanocarreadores sintéticos contendo GSK1059615 Materiais [00238] O GSK1059615 foi comprado de MedChem Express (11 Deer Park Drive, Suite 102D Monmouth Junction, NJ 08852), código do produto HY-12036. PLGA com uma razão de lactídeo:glicolídeo de 1:1 e uma viscosidade inerente de 0,24 dL/g foi comprado de Lakeshore Biomaterials (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211), código do produto 5050 DLG 2.5A. Copolímero em bloco PLA-PEG-OMe com um bloco de PEG terminado com éter metílico de cerca de 5.000 Da e uma viscosidade inerente geral de 0,26 DL/g foi comprado de Lakeshore
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Biomaterials (756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211; Código do produto 100 DL mPEG 5000 5K-E). Solução salina tamponada com fosfato Cellgro 1x pH 7,4 (PBS 1X) foi comprada da Corning (9345 Discovery Blvd. Manassas, VA 20109), código do produto 21-040-CV.
Método [00239] As soluções foram preparadas da seguinte maneira:
[00240] Solução 1: PLGA (125 mg) e PLA-PEG-OMe (125 mg) foram dissolvidos em 10 mL de acetona. Solução 2: GSK1059615 foi preparado a 10 mg em 1 mL de N-metil-2-pirrolidona (NMP).
[00241] Os nanocarreadores foram preparados pela combinação da Solução 1 (4 mL) e Solução 2 (0,25 mL) em um tubo de pressão de vridro pequeno e adicionando a mistura gota a gota para um frasco de fundo redondo de 250 mL contendo 20 mL de água ultrapura, sob agitação. O frasco foi montado em um dispositivo rotativo de evaporação, e a acetona foi removida sob pressão reduzida. Uma parte dos nanocarreadores foi lavada ao transferir a suspensão do nanocarreador para tubos de centrífuga e centrifugação a 75.600 rcf e 4 °C, por 50 minutos, removendo o sobrenadante e ressuspendendo o pélete em PBS 1X. O procedimento de lavagem foi repetido e o pélete foi ressuspenso em PBS 1 para obter uma suspensão de nanocarreador tendo uma concentração nominal 10 mg/ml em uma base de polímero. A solução de nanocarreador lavada foi então filtrada usando filtros de seringa de membrana PES de 1.2pm da Pali, número da peça 4656. Uma solução de nanocarreador idêntica foi preparada como descrito acima e agrupada com a primeira após a etapa de filtração. A suspensão homogênea foi armazenada congelada a -20°C.
[00242] O tamanho do nanocarreador foi determinado pela dispersão de luz dinâmica. A quantidade de GSK1059615 no nanocarreador foi determinada por absorção UV a 351 nm. A massa de matéria nanocarreador seco total por mL de suspensão foi determinada por um
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89/112 método gravimétrico.
Diâmetro eficaz (nm) Teor de GSK1059615 (% p/p)
143 1,02
Exemplo 3: Expressão precoce do transgene codificado por AAV in vivo não é afetada se o AAV for pré-misturado com nanocarreadores sintéticos acoplados a rapamicina [00243] Em um modelo de transdução de AAV de camundongo macho padrão, se o AAV for pré-misturado com um nanocarreador sintético acoplado a rapamicina (SVP[Rapa]), neste caso, a rapamicina encapsulada, a expressão precoce do transgene codificada por AAV in vivo não é afetada; se o SVP[Rapa] for administrado imediatamente após o AAV, a expressão do transgene é inferior; este efeito foi encontrado como sendo independente da formação de anticorpos IgG. [00244] Especificamente, grupos de 6-12 de camundongos machos C57BL/6 foram injetados (i.v., veia caudal) com AAV-SEAP, com ou sem rapamicina encapsulada por SVP (SVP[Rapa] neste exemplo), que foi ou misturada a AAV e então administrada ou foram injetados imediatamente após AAV-SEAP (dentro de 15 min de intervalo; rotulado como 'não misturado). No momento indicado (dia 19), foi coletado sangue dos camundongos, o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20 ± 5 °C até o momento das análises. Então os níveis de SEAP no soro foram medidos usando um kit de ThermoFisher Scientific (Waltham, MA, USA). Brevemente, as amostras dos soros e os controles positivos foram diluídos em tampão de diluição, incubados a 65°C por 30 min e, em seguida, resfriados à temperatura ambiente, plaqueados no formato de 96 poços, tampão de ensaio (5 min) e, em seguida, o substrato (20 min) adicionado e as placas lidas no luminômetro (477 nm).
[00245] Separadamente, anticorpo IgG para AAV foi medido em um ensaio ELISA: placas de 96 poços revestidas durante a noite com o
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AAV, lavadas e bloqueadas no dia seguinte e, em seguida, amostras de soro diluídas (1:40) adicionadas à placa e incubadas; as placas então lavadas, IgG de cabra anti-camundongo conjugado com HRP adicionado e depois de outra incubação e lavagem, a presença de anticorpos IgG ao AAV detectado pela adição de substrato TMB e medição a uma absorvância a 450 nm com um comprimento de onda de referência de 570 nm (a intensidade do sinal apresentado como densidade óptica superior, OD, é diretamente proporcional à quantidade de anticorpo IgG na amostra).
[00246] Enquanto misturados SVP[Rapa] não afetou a expressão de SEAP neste momento, a expressão de SEAP foi regulada negativamente em camundongos sequencialmente injetados com AAVSEAP seguido de SVP[Rapa] (Figura 1A). Este efeito foi independente da indução de anticorpo IgG para AAV, pois nesse momento todos os camundongos tratados com o SVP[Rapa] demonstraram regulação negativa de anticorpo IgG para AAV (Figura 1B).
Exemplo 4: Nanocarreadores sintéticos não-misturados acoplados a rapamicina resulta na regulação negativa precoce da expressão do transgene dirigida por AAV, independente da ordem de administração [00247] Neste experimento verificou-se os resultados de SVP[Rapa] não misturado na regulação negativa precoce da expressão do transgene dirigida por AAV, independente da ordem de administração. Descobriu-se que os níveis de expressão do transgene aumentam com o tempo em camundongos que receberam AAV combinado com SVP[Rapa]; este efeito não está relacionado a regulação negativa de anticorpo IgG pelo SVP[Rapa].
[00248] Especificamente, grupos de 5-6 camundongos C57BL/6 foram injetados i.v. com AAV-SEAP, com ou sem SVP[Rapa], os quais foram misturados a AAV ou injetados separadamente antes ou depois
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91/112 de AAV-SEAP com um intervalo de 15 minutos ou 1 hora. Em momentos indicados (d19 e d75) a atividade SEAP e os anticorpos IgG para AAV nos soros do camundongo foram medidos.
[00249] Administração separada de AAV-SEAP e SVP[Rapa] levou à diminuição da expressão de SEAP no dia 19 (Figura 2A). Camundongos tratados com um intervalo de uma hora mostrou expressão um pouco menor do que aqueles injetados com um intervalo de 15 minutos. Camundongos administrados com mistura de AAV-SEAP e SVP[Rapa] tiveram os mesmos níveis de expressão SEAP como aqueles injetados com AAV-SEAP sozinho (Figura 2A). Notavelmente, os níveis de expressão SEAP cresceram com o tempo em todos os camundongos que receberam SVP [Rapa] e no dia 75 os camundongos que receberam mistura de AAV-SEAP e SVP[Rapa] expressaram SEAP para níveis mais elevados do que aqueles que receberam somente AAV-SEAP, enquanto havia grupos de camundongos que receberam AAV-SEAP e SVP[Rapa] não-misturados que produziram níveis de SEAP semelhantes aos que receberam apenas AAV-SEAP (Figura 2B). Este fenômeno foi independente da regulação negativa de anticorpo IgG, que foi visto em todos os grupos, que receberam SVP[Rapa] (Figura 2C).
Exemplo 5: Nanocarreadores sintéticos misturados acoplados a rapamicina e AAV-SEAP levaram à imediata elevação da expressão do transgene independente da resposta de anticorpo IgG [00250] Neste experimento, descobriu-se que a administração de SVP[Rapa] com AAV-SEAP para camundongos fêmea leva à imediata elevação da expressão do transgene independente da resposta de anticorpo IgG.
[00251] A partir dos Exemplos 3 e 4, parece que a não-mistura de [SVP Rapa] e AAV pode ter efeitos inferiores a curto prazo. No entanto, o fenômeno pode ser mascarado por um ponto do tempo precoce (como, por exemplo, dia 19) pela eficiente transdução por AAV que é
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92/112 comumente visto em camundongos machos C57BL/6. Separadamente, os grupos de camundongos fêmeas C57BL/6 foram inoculadas i.v. com duas diferentes doses de AAV-SEAP, com ou sem o SVP[Rapa] com a atividade SEAP e anticorpos IgG AAV medidos no soro nos dias 12 e
19. Descobriu-se que os níveis elevados da expressão SEAP ocorreu imediatamente após a inoculação de AAV em todos os camundongos que receberam mistura de AAV-SEAP e SVP[Rapa] com uma melhoria média de duas vezes (Figura 3A). Notavelmente, isso foi observado em um ponto de tempo muito cedo como dia 12, no qual a indução mínima de anticorpo IgG foi vista (Figura 3B). Além disso, os níveis relativos da expressão SEAP entre os grupos permaneceram o mesmo num dado intervalo de tempo (entre 12 e 19 dias após a injeção), enquanto os níveis de anticorpo IgG em grupos não tratados com SVP[Rapa] cresceram durante o mesmo tempo (Figura 3B).
[00252] Estes resultados confirmam que a administração do transgene transportando AAV com SVP[Rapa] levou a maiores níveis de expressão do transgene in vivo, que é especialmente perceptível em sistemas menos ameno a transdução de AAV e que este fenômeno é independente de anticorpo IgG AAV regulado negativamente pelo SVP[Rapa].
Exemplo 6: Mistura de AAV e nanocarreadores sintéticos acoplados a rapamicina in vitro leva à sua adsorção completa dentro de 15 minutos [00253] Especificamente, 2,5 χ 1011 VG do AAV em 1 ml_ de PBS ou partículas de SVP[Rapa] foram adicionados a uma cubeta de quartzo e medida por DLS separadamente (Figura 4A) ou depois misturando (a uma razão de partícula de AAV para SVP[Rapa] de 100:1) imediatamente ou após 15 minutos de incubação (Figura 4B).
[00254] Imediatamente depois da mistura de AAV para SVP[Rapa] (Figura 4B), foram observados dois picos distintos que correspondem a
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93/112 tamanhos de AAV e SVP[Rapa] medidos separadamente (Figura 4A; 25 e 150 nm, correspondentemente). Em 15 minutos depois da mistura de SVP[Rapa] para AAV apenas um único pico foi observado (Figura 4B), que correspondeu ao tamanho do nanocarreador indicando uma adsorção total de AAV para SVP[Rapa].
Exemplo 7: Indução precoce de IgM AAV é regulada negativamente pela administração de nanocarreadores sintéticos acoplados a rapamicina e ao vetor viral [00255] Grupos de 5 camundongos fêmeas C57BL/6 foram injetados (i.v., veia caudal) com 1 x1O10 genomas virais (VG) AAV-SEAP, com ou sem rapamicina encapsulada por SVP (SVP[Rapa] neste exemplo) ou polímero controle apenas (SVP[vazio] neste exemplo), que foram ou misturados a AAV e então administrados ou foram injetados imediatamente antes a AAV-SEAP (dentro de 15 min de intervalo; rotulado como 'não misturado). Nos momentos indicados (dias 5 e 10 em A e dias 6,12,19 e 89 em B), foi coletado sangue dos camundongos, o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20 ± 5 °C até o momento das análises. Separadamente, anticorpo IgM para AAV foi medido com um ensaio ELISA: placas de 96 poços revestidas durante a noite com o AAV, lavadas e bloqueadas no dia seguinte e, em seguida, amostras de soro diluídas (1:40) adicionadas à placa e incubadas; as placas então lavadas, IgM de cabra anticamundongo conjugado com HRP adicionado e depois de outra incubação e lavagem, a presença de anticorpos IgM ao AAV detectado pela adição de substrato TMB e medição a uma absorvância a 450 nm com um comprimento de onda de referência de 570 nm (a intensidade do sinal apresentado como densidade óptica superior, OD, é diretamente proporcional à quantidade de anticorpo IgM na amostra).
[00256] Ambos AAV misturados e não-misturados administrados com SVP[Rapa] fortemente regularam negativamente a indução
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94/112 precoce de IgM nos dias 5 (Figura 5A) e 7 (Figura 5B) após a injeção do AAV para níveis perto da linha basal normal do soro (linhas pontilhadas). Este efeito foi ainda observado no dia 10 (Figura 5A), mas menos pronunciado pelo dia 12 e posterior (Figura 5B), nos pontos em que os níveis de IgM em camundongos não tratados diminuíram. Não houve atividade de IgM regulada negativamente observada no grupo tratado com nanocarreador controle SVP[vazio].
Exemplo 8: Níveis de IgM precoce contra o capsídeo de AAV inversamente correlacionados com níveis de expressão do transgene após administração de AAV [00257] Oito grupos de 4-5 camundongos fêmeas C57BL/6 foram injetados i.v. com AAV-SEAP (1 x1O10 VG) com ou sem SVP[Rapa] ou SVP[vazio], os quais foram misturados a AAV ou injetados separadamente imediatamente antes de AAV-SEAP. Nos tempos indicados (d7 a d89), atividade SEAP e os níveis de IgM AAV foram medidos (Figura 6). No dia 92 todos os animais foram reforçados com as mesmas quantidades de AAV-SEAP e submetidos aos mesmos tratamentos como no início. Os níveis de SEAP no soro foram medidos usando um kit de ThermoFisher Scientific (Waltham, MA, USA). Brevemente, as amostras do soro e os controles positivos foram diluídos em tampão de diluição, incubados a 65°C por 30 min e, em seguida, resfriados à temperatura ambiente, plaqueados no formato de 96 poços, tampão de ensaio (5 min) e, em seguida, o substrato (20 min) adicionado e as placas lidas no luminômetro (477 nm).
[00258] Os níveis de IgM no d7 mostrou uma correlação muito forte e estatisticamente significativa inversa com os níveis séricos SEAP (valores p indicados no gráfico) no dia 7 após administração de AAV, quando os níveis globais de SEAP no soro são geralmente baixos. Esta correlação foi mantida por quase três meses após a AAV inicial e Administração de SVP[Rapa]. Além disso, depois o reforço de AAV
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SEAP no dia 92 os animais que inicialmente tinham baixos níveis de AAV IgM responderam ao reforço de uma forma mais benéfica, ou seja, elevando a expressão do transgene para níveis mais elevados, enquanto os animais com altos níveis de IgM, inicialmente, responderam de uma forma mais fraca, ou seja, por uma menor elevação da expressão do transgene. Como resultado, a correlação inversa entre os níveis de AAV IgM inicial (dia 7) e níveis de SEAP séricos pós-reforço se tornou ainda mais forte após o reforço (d99 e d104 ou dias 7 e 12 pós-reforço).
Exemplo 9: Administração de nanocarreadores sintéticos acoplados a rapamicina antes dos nanocarreadores sintéticos e um vetor viral (Profético) [00259] Um grupo de indivíduos são injetados i.v. com SVP[Rapa], e dentro de 30 dias os indivíduos são injetados i.v. com AAV-SEAP (1 x1O10 VG) com SVP[Rapa], que é ou misturado ou não misturado, mas administrado simultaneamente. Nos tempos indicados, a atividade SEAP e os níveis de IgM AAV são medidos.
Exemplo 10: Administração adicional de nanocarreadores sintéticos acoplados a rapamicina e um vetor viral (Profético) [00260] Dentro de 30 dias da segunda administração dos indivíduos do Exemplo 9, os indivíduos são novamente injetados i.v. com SVP[Rapa]. Dentro de outros 30 dias os indivíduos são injetados i.v. com AAV-SEAP (1 x1010 VG) com SVP[Rapa], que é ou misturado ou não misturado, mas administrado simultaneamente. Nos tempos indicados, a atividade SEAP e os níveis de IgM AAV são medidos novamente.
Exemplo 11: Supressão de IgG [00261 ] Grupos de 5 camundongos fêmeas C57BL/6 foram injetados (i.v., veia caudal) com 1 x1010 genomas virais (VG) AAV-SEAP sozinho ou com rapamicina encapsulada por SVP, neste exemplo (SVP[Rapa]) ou polímero controle apenas, neste exemplo (SVP[vazio]), com o último
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96/112 sendo misturado a AAV e então administrado ou injetado antes a AAVSEAP (dentro de 15 min; rotulado como não misturado). Nos momentos indicados, foi coletado sangue dos camundongos, o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20 ± 5 °C até o momento das análises.
[00262] O anticorpo IgG para AAV foi medido em um ensaio ELISA: placas de 96 poços revestidas durante a noite com o AAV, lavadas e bloqueadas no dia seguinte e, em seguida, amostras de soro diluídas (1:40) adicionadas à placa e incubadas; as placas então lavadas, IgG de cabra anti-camundongo conjugado com HRP adicionado e depois de outra incubação e lavagem, a presença de anticorpos IgG ao AAV detectado pela adição de substrato TMB e medição a uma absorvância a 450 nm com um comprimento de onda de referência de 570 nm (a intensidade do sinal apresentado como densidade óptica superior, OD, é proporcional à quantidade de anticorpo IgG na amostra). Os níveis de SEAP foram medidos usando um kit de ThermoFisher Scientific (Waltham, MA, USA). As amostras dos soros e os controles positivos foram diluídos em tampão de diluição, incubados a 65°C por 30 min, resfriados à temperatura ambiente, plaqueados no formato de 96 poços, tampão de ensaio (5 min) e, em seguida, o substrato (20 min) adicionado e as placas lidas no luminômetro (477 nm).
[00263] Ambos SVP[Rapa] misturados e não-misturados suprimiram a indução precoce de IgG para AAV (Figura 7). Este efeito foi forte independentemente se SVP[Rapa] foi misturado a AAV ou administrado separadamente antes da injeção de AAV.
[00264] Ambos os SVP[Rapa] misturados e não-misturados a AAV promoveram a elevação precoce e consistente da expressão SEAP no soro (Figura 8). A expressão SEAP em ambos os grupos tratados com SVP[Rapa] foi maior do que no grupo não tratado por um fator de 2,5 a 3,0 e, também, do que no grupo tratado com um controle SVP[vazio].
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Esta diferença foi observada no dia 7 e persistiu por pelo menos 7 semanas.
Exemplo 12: Supressão de IgM e IgG [00265] Grupos de 5 camundongos fêmea C57BL/6 foram injetados (i.v., veia caudal) com 1 x1O10 genomas virais (VG) AAV sozinho ou com rapamicina encapsulada com SVP (SVP[Rapa] neste exemplo) ou misturados a AAV e então administrados (dia 0), injetados separadamente em um dia antes do AAV (dia -1), ou ambos injetados separadamente em um dia antes do AAV e misturado (dias -1,0). Nos momentos indicados, foi coletado sangue dos camundongos, o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20 ± 5 °C até o momento das análises. Os níveis de IgM e IgG contra AAV foram determinados como descrito acima.
[00266] Enquanto o SVP[Rapa] misturado com AAV levou à supressão de ambos os AAV IgM (Figura 9) e IgG (Figura 10), um efeito similar foi observado se o SVP[Rapa] foi administrado separadamente do AAV um dia mais cedo. Notavelmente, tanto AAV IgM (até o dia 13, Figura 9) e IgG (até o dia 20, Figura 10) nesses dois grupos começaram a se tornar elevado em momento posteriores, embora os seus níveis tivessem ficou menores do que em camundongos não tratados. Ao mesmo tempo, os camundongos tratados com o SVP[Rapa] em um dia antes da injeção de AAV e também misturados (d -1, 0) apresentaram os menores níveis de IgM AAV no dia 5 (com elevação marginal até o dia 13, Figura 9) e nenhum desenvolvimento de AAV IgG até dia 20 (Figura 10). Assim, a produção de anticorpos AAV IgM e IgG foi suprimida mais fortemente em camundongos recebendo tratamentos com SVP[Rapa] no dia -1 e dia 0.
Exemplo 13: Nanocarreadores sintéticos contendo um imunosupressor [00267] Nanocarreadores sintéticos compreendendo um
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98/112 imunossupressor, como a rapamicina, podem ser produzidos usando qualquer método conhecido pelos versados na técnica. De preferência, em algumas modalidades de qualquer um dos métodos ou composições fornecidos aqui, os nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor são produzidos por qualquer um dos métodos da Publicação US 2016/0128986 A1 e Publicação US 2016/0128987 A1, os métodos descritos de tal produção e os nanocarreadores sintéticos resultantes sendo incorporados aqui por referência em sua totalidade. Em qualquer um dos métodos ou composições fornecidos aqui, os nanocarreadores sintéticos compreendendo imunossupressores são tais nanocarreadores sintéticos incorporados. Os nanocarreadores sintéticos compreendendo a rapamicina foram produzidos com métodos no mínimo semelhante a estes métodos incorporados e usados nos Exemplos a seguir.
Exemplo 14: Doses divididas de nanocarreadores sintéticos contendo um imunosupressor [00268] As doses divididas de rapamicina, quando compreendidas nos nanocarreadores sintéticos, em duas partes e a administração da primeira meia dose antes da co-injeção de vetor AAV com a segunda meia dose da rapamicina, quando compreendida nos nanocarreadores sintéticos, foi benéfica, tanto em termos de expressão do transgene (Fif 11A) e para efeito supressivo sobre IgG antiviral (Fig 11B), em relação a mesma dose cumulativa de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, co-injetados com o vetor AAV.
[00269] Grupos de 5 camundongos fêmea C57BL/6 foram injetados nos dias 0 e 92 (intravenosa, i.v., veia caudal) com 1x1010 genomas virais (VG) de AAV-SEAP sozinhos (AAV-SEAP) ou com nanocarreadores sintéticos compreendendo a rapamicina (AAV-SEAP + nanocarreadores sintéticos compreendendo a rapamicina, 100 pg, dO, 92) ou com nanocarreadores sintéticos compreendendo a rapamicina
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99/112 (50 pg rapamicina) aplicados dois dias antes da injeção de AAV e com injeção de AAV (AAV-SEAP + nanocarreadores sintéticos compreendendo a rapamicina, d-2, 0, 90, 92). Nos tempos indicados na Figura 11A (dias 7, 19, 75, 99, 104 e 111), foi coletado o sangue dos camundongos, e o soro foi separado do sangue total e armazenado a 20 ± 5 °C até o momento das análises.
[00270] Os níveis de SEAP no soro foram medidos usando um kit de ThermoFisher Scientific (Waltham, MA, USA). Brevemente, as amostras do soro e os controles positivos foram diluídos em tampão de diluição, incubados a 65°C por 30 min e, em seguida, resfriados à temperatura ambiente, plaqueados no formato de 96 poços, incubados com tampão de ensaio (5 min) e, em seguida, o substrato adicionado (20 min) e as placas lidas usando um luminômetro (477 nm).
[00271] Separadamente, anticorpo IgG para AAV foi medido usando um ensaio ELISA. Placas de 96 poços foram revestidas durante a noite com o AAV e, em seguida, lavadas e bloqueadas no dia seguinte. Amostras de soro diluído (1:40) foram adicionadas à placa e incubadas. As placas foram, então, lavadas, e IgG de cabra anticamundongo conjugado com HRP foi adicionado. Após outra incubação e lavagem, a presença de anticorpos IgG para AAV foi detectada pela adição de substrato TMB e medição a uma absorvância de 450 nm com um comprimento de onda de referência de 570 nm (a intensidade do sinal apresentado como densidade óptica superior, OD, é diretamente proporcional à quantidade de anticorpo IgG na amostra na Figura 11B).
[00272] Administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (50 pg) 2 dias antes da coadministração de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (50 pg) misturados a AAV-SEAP levou a elevação imediata da expressão SEAP (Figura 11 A), que em determinados pontos no tempo foi quase duas
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100/112 vezes maior do que sem SVP. Expressão relativa é mostrada para cada ponto no tempo de cada grupo acima do gráfico em comparação ao dos camundongos não tratados no dia 19 (d19) (100%). Ao mesmo tempo, a mesma dose total de 100 pg (nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina misturados e coadministrados com AAV) não teve um efeito benéfico sobre a expressão do transgene. Um efeito similar foi observado após o reforço do dia 92 (indicado por uma seta). Notavelmente, ambos os regimes de administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina, igualmente suprimiu a formação de uma resposta de IgG para AAV após iniciador e reforçador (Figura 11B).
Exemplo 15: Dosagem de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor em pelo menos duas partes [00273] A aplicação da rapamicina, quando incluída em nanocarreadores sintéticos, dose em duas partes, com a primeira parte sendo administrada dois dias antes da coinjeção de AAV com a segunda metade da dose, foi encontrado a levar à expressão estável e elevada do transgene (Figura 12).
[00274] Grupos de 9-10 camundongos fêmea C57BL/6 foram injetados no dia 0 (i.v., veia caudal) com 1x1010 VG de AAV-SEAP sozinho (AAV-SEAP) ou com rapamicina, quando compreendido em nanocarreadores sintéticos a 50 pg aplicados dois dias antes da injeção de AAV e com injeção de AAV (AAV-SEAP + nanocarreadores sintéticos compreendendo a rapamicina, d-2, 0). Nos tempos indicados (dias 7, 12, 19, 33, 48 e 77), foi coletado o sangue dos camundongos, e o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20 ± 5°C até o momento das análises. Os níveis SEAP no soro foram medidos como descrito no Exemplo 14.
[00275] A administração de 50 pg de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, 2 dias antes da
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101/112 coadministração de outro 50 pg da rapamicina, quando compreendida em nanocarriers sintéticos, misturados a AAV-SEAP levou a uma imediata elevação da expressão SEAP, que, de um modo geral, foi 2 vezes maior do que sem os nanocarreadores sintéticos (e foi três vezes maior no início, 7 dias após a administração de AAV). Esta diferença foi estável e mantida em todos os pontos no tempo consecutivos (expressão relativa é mostrada para cada ponto no tempo em cada grupo acima do gráfico em comparação aos de camundongos não tratados no d19 tomada como 100%).
Exemplo 16: Doses adicionais de nanocarreadores sintéticos contendo um imunosupressor [00276] A aplicação de uma dose adicional de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, antes da coinjeção de vetores AAV com rapamicina, quando compreendidos em nanocarreadores sintéticos, em camundongos AAV-imunes foi encontrado a levar à expressão elevada do transgene.
[00277] Uma vez que a pré-administração de 50 pg de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, foi mostrada como sendo benéfico para a expressão do transgene depois de AAV iniciador, se é também benéfico em animais previamente expostos a AAV foi examinada. Grupos de 5 camundongos fêmea C57BL/6 foram injetados no dia 0 (i.v., veia caudal) com 1x1010 VG de AAV-RFP sozinho ou misturado com rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, em 50 pg e, em seguida, reforçado com a mesma dose de AAV-SEAP sozinho ou misturado com rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticas, ou com a rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, ambos misturados a AAV-SEAP e pré-injetado em três dias antes de AAV-SEAP. Nos momentos indicados, foi coletado sangue dos camundongos, o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20
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102/112 ± 5 °C até o momento das análises. Os níveis SEAP no soro e IgG para AVV foram medidos como descrito no Exemplo 14.
[00278] Os animais não tratados com os nanocarreadores sintéticos compreendendo a rapamicina (AAV-RFP/AAV-SEAP) não mostraram expressão SEAP significativa do transgene (Figura 13A). A administração de 50 pg de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, em AAV-RFP iniciador apenas (AAV-RFP+ nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina/AAV-SEAP) apresentou baixos níveis de expressão do transgene (geralmente, ΙΟΙ 3% do que dos camundongos virgens de tratamento não pré- injetados com AAV-RFP). Elevação adicional da expressão do transgene foi alcançada pela administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina, tanto na no iniciador como reforçador (AAV-RFP/AAV-SEAP; nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina, dO, 86), que algumas vezes ultrapassou 20% e ficou dentro de um intervalo de 15-24%. Em contraste, nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina adicionais em 3 dias antes do reforço de AAV levou à elevação de muito maior da expressão SEAP, que por vezes ultrapassou 50% dos camundongos virgens de tratamento e permaneceu dentro de uma faixa de 34-52% (expressão relativa é mostrada para cada ponto no tempo de cada grupo acima do gráfico em comparação aqueles em camundongos não-iniciador em cada ponto de tempo tomado como 100%).
[00279] Esta expressão do transgene classificada de perto e inversamente correspondeu à presença de AAV IgG com camundongos não tratados com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina, mostrando de imediato a produção de IgG, que foi então elevada posteriormente por reforço (indicado pelas setas na Figura 13B). Camundongos tratados com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina em iniciadores apenas desenvolveram AAV
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IgG logo após o reforço, enquanto aqueles tratados em ambos iniciador e reforçador mostraram desenvolvimento de anticorpos pós-reforço adiado por várias semanas. Notavelmente, os camundongos tratados adicionalmente com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina antes de reforço com AAV permaneceram principalmente negativo para anticorpos para a duração do estudo, com apenas um único camundongo mostrando anticorpos IgG detectáveis em 7 semanas após o reforço (Figura 13B).
Exemplo 17: Doses adicionais de nanocarreadores sintéticos contendo um imunosupressor [00280] A aplicação de doses adicionais de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina antes do vetor AAV e co-injeção de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina em camundongos com baixos níveis pré-existentes de AAV IgG (e não tratados com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina na dose inicial) foi essencial para pós-reforçar a expressão do transgene.
[00281] Uma vez que a pré-administração de 50 pg de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, foi mostrada como sendo benéfica para a expressão do transgene depois de reforço de AAV em animais previamente expostos a AAV, mas também tratados com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina na iniciador inicial, foi examinado se benefício semelhante foi encontrado em animais pré-expostos a AAV que foram imunizados pela coadministração de AAV sem nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina. Grupos de 5-7 camundongos fêmea C57BL/6 foram injetados no dia 0 (i.v., veia caudal) com 2x109 VG de AAV-RFP do que os camundongos com níveis baixos de AAV IgG (OD superior no dia 75 pós-iniciador < 0,3) foram selecionados e reforçados no dia 92 com 1x1010 VG AAV-SEAP sozinho ou misturado com
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104/112 nanocarreadores sintético compreendendo rapamicina, ou com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina, ambos misturados a AAV-SEAP e pré-injetados em dois dias antes de AAVSEAP. Nos momentos indicados, foi coletado sangue dos camundongos, o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20 ± 5 °C até o momento das análises. Os níveis SEAP no soro e IgG para AVV foram medidos como descrito no Exemplo 14.
[00282] Os animais não tratados com os nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina ou que recebem uma única administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo a rapamicina no reforço (AAV-RFP/SEAP; nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina < 1) mostraram muito pouca expressão SEAP do transgene (Figura 14A). A expressão do transgene foi geralmente dentro do intervalo de 5-9% (como comparado a expressão em camundongos virgens de tratamento a 100%) e foi devido a um único camundongo de cinco demonstrando um significativo nível de expressão (ver a coluna à esquerda na Figura 14B). Em comparação, os camundongos do grupo que foi administrado 50 pg de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintético, 2 dias antes do reforçado de AAV e também no reforçador (AAV-RFP/SEAP; nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina = 2) mostraram expressão SEAP muito mais pronunciada que, em geral, ficou na faixa de 34-40% em comparação com aquela de camundongos virgens de tratamento (expressão relativa é mostrada na Figura 14A para cada ponto no tempo em cada grupo). Notavelmente, cinco de sete camundongos neste grupo apresentaram expressão SEAP detectável (ver coluna da direita na Figura 14B), o que levou a diferentes níveis estatisticamente significantes da expressão SEAP entre os grupos experimentais (Figura 14B).
[00283] Esta atividade da expressão do transgene pós-reforço em
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105/112 camundongos AAV-imunes perto e inversamente correspondeu ao desenvolvimento da resposta anamnéstica para AAV, como demonstrado pela elevação de AAV IgG em camundongos recebendo menos de dois tratamentos com os nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina e uma repressão desta resposta em camundongos que receberam dois tratamentos com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina antes e no reforço com AAV (Figura 14C, reforço é mostrado pelas setas). Os camundongos que foram tratados com menos de duas doses de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina mostraram uma forte resposta do reforço de AAV IgG tão cedo quanto 7 dias depois do reforço (Figura 14C), como todos, mas um camundongo de cinco tornou-se fortemente AAV IgG positivo. Ao mesmo tempo, os camundongos tratados com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina duas vezes mostraram uma resposta de anticorpo anamnéstica de AAV muito inferior com eles, tornando-se estatisticamente diferente tão cedo como 7 dias após o reforço do dia 92 (d99 na Figura 14C), uma vez que apenas dois dos sete camundongos tornaram-se AAV IgG fortemente positivo. Notavelmente, os níveis de anticorpos neste grupo foram consistentemente menores do que em camundongos virgens de tratamento que foram expostos a AAV pela primeira vez no dia 92 (grupo controle de referência nas Figuras 14A e 14C). Não surpreendentemente, exatamente esses camundongos (um no grupo recebendo menos de dois tratamentos com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina e cinco no grupo recebendo dois tratamentos com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina) foram os mesmos que consistentemente mostraram uma significativa expressão SEAP resultando em uma correlação estatisticamente significativa inversa entre AAV IgG e os níveis SEAP séricos nos dois grupos experimentais (Figura 14D).
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Exemplo 18: Dosagem de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor em vetor viral [00284] As doses de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina administradas após o vetor AAV e a coinjeção de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina forneceram benefícios adicionais para a expressão do transgene e supressão de anticorpos AAV.
[00285] Embora a coadministração de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina com AAV mostrou fornecer benefícios imediatos para a expressão do transgene dirigida por AAV e para suprimir eficazmente anticorpos para AAV, foi examinado se as injeções de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina fornecería um benefício adicional. Grupos de 5 camundongos fêmea C57BL/6 foram injetados nos dias 0 e 88 (i.v., veia caudal) com 1x1010 VG do AAV-SEAP sozinho ou misturado com rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, a 50 pg e um grupo foi então tratado com mais dois nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina quinzenalmente após iniciador e reforçador (d14, 28, 102 e 116). Nos momentos indicados, foi coletado sangue dos camundongos, o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20 ± 5 °C até o momento das análises. Os níveis SEAP no soro e IgG para AVV foram medidos como descrito no Exemplo 14.
[00286] Como mostrado anteriormente, a administração de 50 pg de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, misturados a AAV-SEAP levou a uma imediata elevação da expressão SEAP (Figura 15A), que em determinados pontos no tempo foi 4 vezes maior do que o grupo sem os nanocarreadores sintéticos. No entanto, os tratamentos de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina forneceram benefícios ainda mais acentuados, com níveis de expressão resultantes sendo 6-7 vezes maior do que em
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107/112 camundongos não tratados. Mesmo uma maior elevação foi observada após o reforço no dia 88 (indicado por uma seta; expressão relativa é mostrada para cada ponto no tempo pós-reforço em relação a níveis SEAP no d75 pré-reforço em cada grupo). Enquanto a administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina no reforço forneceu um modesto benefício adicional com expressão do transgene resultante estabilizando em um excesso 5 vezes superior em comparação com camundongos não tratados, o benefício de tratamentos adicionais de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina continuaram a elevar até um diferencial de 8 vezes no dia
108. Isto correspondeu à supressão de AAV IgG mais pronunciada em camundongos dosados com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina adicionais, enquanto a supressão da resposta de IgG em camundongos tratados com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina apenas misturados com AAV foi pronunciada, mas incompleta, especialmente depois de reforço (Figura 15B).
Exemplo 19: Doses adicionais de nanocarreadores sintéticos contendo um imunosupressor [00287] Os nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina adicionais forneceram o maior potencial para a supressão de anticorpo AAV a longo prazo.
[00288] Embora a co-administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina com AAV e sua posterior aplicação foram mostrados para suprimir eficazmente anticorpos para AAV, esta supressão nem sempre alcança o nível de 100%. Por conseguinte, foi examinado se a combinação das injeções de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina no iniciador e administração de acompanhamento de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina proporcionará um benefício sinergético combinado. Grupos
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108/112 de 6-9 camundongos fêmea C57BL/6 foram injetados nos dias 0 e 83 (i.v., veia caudal) com 1x1010 VG do AAV-SEAP sozinho ou misturado com rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, a 50 pg com um grupo adicionalmente tratado com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina em 2 dias antes do iniciador e reforçador (d-2 e d81), outro foi tratado com mais dois nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina quinzenalmente após iniciador e reforçador (d14, 28, 116 e 116) e o último com uma combinação destes (d-2, 12, 28, 81,97 e 116). IgG para AVV foram medidos como descrito no Exemplo 14.
[00289] Como mostrado anteriormente, a administração de 50 pg de rapamicina, quando compreendida em nanocarreadores sintéticos, misturados a AAV-SEAP combinado com tratamento de pré-imunização com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina (gr. 2; d-2, 0, 81, 83), levou a uma profunda supressão de AAV IgG sem conversões pré-reforço, uma vez que apenas 2 de 9 camundongos mostraram níveis de IgG detectáveis (conforme determinado pela OD superior) no dia 90 (imediatamente após reforço). Apenas 3 de 9 (e somente um de três, fortemente) eram IgG positivo pelo dia 116 (33 dias pós-reforço). Neste estudo, os tratamentos de acompanhamento (d14 e d28) com nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina foram administração eficiente pré-reforço (sem conversão). No entanto, vários camundongos começaram a converter pós-reforço (cinco de nove; quatro de cinco, fortemente), tornando-se positivos pelo dia 116. Portanto, a combinação de ambos regimes de administração de nanocarreadores sintéticos compreendendo rapamicina foi a mais eficaz, uma vez que não foram observadas conversões até o dia 116 (33 dias pós-reforço) (Figura 16).
Exemplo 20: Expressão do transgene dirigido por AAV [00290] Tem sido demonstrado que, em um modelo de transdução
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109/112 de AAV de camundongo fêmea padrão, há uma vantagem da coadministração de SVP[Rapa] com AAV, o que resulta em maior expressão do transgene in vivo. Este efeito é ainda aumentado por administrações adicionais de SVP[Rapa]. Neste exemplo, é demonstrado que uma única co-administração de SVP[Rapa] com AAV no iniciador e no reforçador aumenta a expressão do transgene de maneira dependente da dose e que este efeito é, pelo menos em parte, inversamente correlacionado com o desenvolvimento de anticorpos AAV. Além disso, se uma alta dose de SVP[Rapa] capaz de elevar fortemente a expressão do transgene dirigida por AAV é igualmente dividida em três partes, das quais apenas uma é coadministrada com AAV e as outras duas são administradas separadamente antes e após injeção de AAV, então o efeito benéfico de SVP[Rapa] na expressão do transgene e a supressão mediada por SVP[Rapa] de desenvolvimento do anticorpo AAV não são comprometidos.
[00291 ] Especificamente, quatro grupos de 10 camundongos fêmeas C57BL/6 foram injetados (intravenosamente (i.v.), veia caudal) com 1 x1O10 VG do AAV8-SEAP sem ou com SVP[Rapa]. As seguintes doses de SVP[Rapa] foram usadas: uma única dose de 50 pg (misturada e coadministrada com AAV), uma única dose de 150 pg (misturada e coadministrada com AAV) e uma dose de 150 pg, que foi dividida em três injeções de 50 pg (uma misturada e coadministrada com AAV e duas administradas separadamente, em 2 dias antes da injeção de AAV e em 2 dias após a injeção de AAV).
[00292] Nos tempos indicados (dias 7, 12, 19, 47 e 75), foi coletado o sangue dos camundongos, e o soro foi separado do sangue total e armazenado a -20 ± 5°C até o momento das análises. Então, o anticorpo IgG para AAV foi medido usando um ensaio ELISA. Placas de 96 poços foram revestidas com o AAV durante a noite, lavadas e bloqueadas no dia seguinte e, em seguida, amostras de soro diluídas (1:40) foram
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110/112 adicionadas à placa e incubadas. Após incubação, as placas foram lavadas e IgG de cabra anticamundongo conjugado com HRP foi adicionado. As placas foram incubadas e lavadas novamente e, em seguida, a presença de anticorpos IgG ao AAV foi detectada pela adição de substrato TMB e medindo o sinal com uma absorvância 450 nm com um comprimento de onda de referência de 570 nm. A intensidade do sinal apresentada como densidade óptica superior, OD, é diretamente proporcional à quantidade de anticorpo IgG na amostra.
[00293] Separadamente, os níveis de fosfatase alcalina secretada (SEAP) no soro foram medidos usando um kit de ensaio da ThermoFisher Scientific (Waltham, MA, USA). Brevemente, as amostras dos soros e os controles positivos foram diluídos em tampão de diluição, incubados a 65°C por 30 min e, em seguida, resfriados à temperatura ambiente, plaqueados em placas de 96 poços, em seguida, incubadas com tampão de ensaio (5 min) e, então, o substrato (20 min). As placas foram então lidas em um luminômetro a 477 nm.
[00294] Depois da detecção e análise inicial (pós-iniciador) de AAV IgG e SEAP, camundongos descansaram, e então, foi novamente coletado o sangue no dia 117 e reforçado no dia 125 com AAV-SEAP usando as mesmas doses de AAV e SVP[Rapa] como no iniciador, ou seja, o primeiro grupo não recebeu o SVP[Rapa], e os seguintes grupos receberam 50 pg de SVP[Rapa] no reforço, 150 pg de SVP[Rapa] no reforço e 50 pg de SVP[Rapa] três vezes: 2 dias antes do reforço, no reforço (misturados e coadministrados com AAV), e 2 dias depois do reforço. Foi coletado sangue dos camundongos nos dias 132 e 138 (7 e 13 dias pós-reforço) e os níveis séricos de SEAP foram determinados conforme especificado acima.
[00295] Todos os grupos tratados com SVP[Rapa] mostraram aumento de níveis SEAP imediatamente após o iniciador em comparação aos camundongos não tratados (Figura 17A, gr. 1 x gr. 2
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4), essas diferenças foram estatisticamente significantes (**** p<0,0001) e persistiram por vários meses. A maioria dos primeiros pontos no tempo, os níveis de SEAP nos grupos tratados com 150 pg de SVP[Rapa] (como uma única dose ou uma dose dividida; gr. 3 e 4) foram maiores do que no grupo tratado com a menor, 50 pg/dose (gr.
2), embora a longo prazo (d75-117) todos estes níveis se tornaram iguais. Até certo ponto, isto foi correlacionado com o início da dinâmica do desenvolvimento de AAV IgG nos camundongos nos grupos tratados com 150 pg de SVP[Rapa] não mostrando conversões de IgG até o dia 75 (Figura 17B, gr. 3 e 4), enquanto alguns camundongos no grupo tratado com a menor dose de 50 pg (Figura 17B, gr. 2) demonstraram anticorpos detectáveis no dia 19, com conversão quatro de dez (40%) até o dia 75 (Figura 17B). Notavelmente, todos os camundongos injetados com AAV sem SVP[Rapa] tornaram-se rapidamente AAV IgG positivos (Figura 17B, gr. 1).
[00296] Após o reforço do dia 125 (mostrado pela seta na Figura 17A), a diferença entre os grupos tratados com SVP[Rapa] e não tratados se tornou ainda mais profunda (Figura 17A, dias 132 e 138). Notavelmente, imediatamente após o reforço (d132) não houve elevação de SEAP nos camundongos que não foram tratados com SVP[Rapa] (razões de expressão de SEAP pós-reforço para expressão pré-reforço no d117 são mostrados como uma linha superior na Figura 17A), enquanto todos os grupos tratados com SVP[Rapa] apresentaram elevação imediata (Figura 17A, gr. 2-4, d132). Curiosamente, os níveis de SEAP no grupo não tratado e no grupo tratado com a dose de 50 pg baixa de SVP[Rapa] evoluíram de forma semelhante ao dia 138, com a sua expressão relativa (mostrada como a linha inferior na Figura 17A, níveis no gr. 1 não tratado atribuído um número de '100') continuando a mesma (50 pg-grupo tratado consistentemente tendo SEAP —3,5 vezes maior). Ao mesmo tempo, os níveis de SEAP em ambos os grupos de
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112/112 camundongos tratados com as maiores doses (150 pg) de SVP[Rapa] tinham expressão do transgene mais elevada do dia 132 ao dia 138, ou seja, de ser ~4 vezes maior para se tornar aproximadamente 4,5 vezes maior do que em camundongos não tratados, e em um exemplo, mesmo tornando-se estatisticamente diferente do que camundongos tratados com a menor dose (50 pg) de SVP[Rapa] (Figura 17A, gr. 2 vs. gr. 4; dia 138; p<0,05).
[00297] Portanto, a expressão do transgene dirigida por AAV foi encontrada como sendo elevada pela coadministração de SVP[Rapa] misturado de maneira dose-dependente em ambos iniciador e reforçador. Este efeito inverso, embora não completamente, correlacionado com a supressão de anticorpos para AAV mas não foi dependente da dose SVP[Rapa] sendo aplicada como uma única dose misturada de AAV ou como uma dose dividida, com algumas delas sendo misturadas ao AAV e algumas administradas separadamente.

Claims (98)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Método caracterizado pelo fato de que compreende: coadministração de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor e um vetor viral a um indivíduo, e administração de, pelo menos, uma pré-dose e/ou, pelo menos, uma pós-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor sem o vetor viral a um indivíduo.
  2. 2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma pré-dose e pelo menos uma pós-dose são administradas ao indivíduo.
  3. 3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que pelo menos duas pré-doses são administradas ao indivíduo.
  4. 4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que pelo menos duas pós-doses são administradas ao indivíduo.
  5. 5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a coadministração é repetida no indivíduo.
  6. 6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma pré-dose e pelo menos uma pós-dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor sem o vetor viral são administradas ao indivíduo com cada etapa de coadministração repetida.
  7. 7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma pré-dose e pelo menos uma pós-dose são administradas ao indivíduo com cada etapa de coadministração repetida.
  8. 8. Método, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que pelo menos duas pré-doses são
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    2/12 administradas ao indivíduo com cada etapa de coadministração repetida.
  9. 9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, caracterizado pelo fato de que pelo menos duas pós-doses são administradas ao indivíduo com cada etapa de coadministração repetida.
  10. 10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) prédose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 mês antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  11. 11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 2 semanas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  12. 12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 semana antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  13. 13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 3 dias antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  14. 14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 2 dias antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  15. 15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 dia antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
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    3/12
  16. 16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 12 horas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  17. 17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 6 horas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  18. 18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de uma hora antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  19. 19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 30 minutos antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  20. 20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 15 minutos antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  21. 21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    1 a 9, caracterizado pelo fato de que cada pré-dose e/ou pós-dose é administrada dentro de 3 dias da etapa de coadministração.
  22. 22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que cada pré-dose e/ou pós-dose é administrada dentro de
    2 dias da etapa de coadministração.
  23. 23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que cada pós-dose é administrada quinzenalmente após a etapa de coadministração.
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    4/12
  24. 24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a quantidade do imunossupressor de cada pré-dose é igual à quantidade do imunossupressor de cada etapa de coadministração.
  25. 25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a quantidade do imunossupressor de cada pós-dose é igual à quantidade do imunossupressor de cada etapa de coadministração.
  26. 26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que cada pré-dose, pós-dose e/ou etapa de coadministração é por administração intravenosa.
  27. 27. Método caracterizado pelo fato de que compreende:
    (1) a um primeiro indivíduo, a coadministração (a) de uma dose de imunossupressor compreendendo nanocarreadores sintéticos e (b) uma dose de um vetor viral, e (2) administração, sem uma dose do vetor viral, (c) uma pré-dose e/ou uma pós-dose do imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos, em que a quantidade do imunossupressor de (a) e (c) juntos é igual a uma quantidade do imunossupressor de (d) uma dose do imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos que quando coadministrados com o vetor viral, sem uma pré-dose ou uma pós-dose do imunossupressor acoplado aos nanocarreadores sintéticos, reduz uma resposta imune contra o vetor viral ou aumenta a expressão do transgene do vetor viral em um segundo indivíduo.
  28. 28. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a quantidade do imunossupressor da pré-dose ou pósdose de (c) não é mais do que metade da quantidade de (d).
  29. 29. Método, de acordo com a reivindicação 27 ou 28, caracterizado pelo fato de que a quantidade do imunossupressor da prédose ou pós-dose de (c) é a metade da quantidade de (d).
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    5/12
  30. 30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 29, caracterizado pelo fato de que uma pré-dose e uma pós-dose são administradas ao primeiro indivíduo em (c).
  31. 31. Método, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a quantidade do imunossupressor da pré-dose e pósdose de (c) é a mesma.
  32. 32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a quantidade do imunossupressor de (a) é a mesma que a quantidade da pré-dose ou pós-dose de (c).
  33. 33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 32, caracterizado pelo fato de que pelo menos duas pré-doses são administradas ao primeiro indivíduo.
  34. 34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 33, caracterizado pelo fato de que em (c) pelo menos duas pósdoses são administradas ao primeiro indivíduo.
  35. 35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 34, caracterizado pelo fato de que (1) e (2) são repetidos.
  36. 36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 35, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) prédose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 mês antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  37. 37. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de duas semanas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  38. 38. Método, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de uma semana antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
    Petição 870190080343, de 19/08/2019, pág. 121/150
    6/12
  39. 39. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 3 dias antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  40. 40. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 2 dias antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  41. 41. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 1 dia antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  42. 42. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 12 horas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  43. 43. Método, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 6 horas antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  44. 44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de uma hora antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  45. 45. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s) ocorre dentro de 30 minutos antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  46. 46. Método, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que a administração da(s) pré-dose(s) e/ou pós-dose(s)
    Petição 870190080343, de 19/08/2019, pág. 122/150
    7/12 ocorre dentro de 15 minutos antes ou após a, respectivamente, uma coadministração.
  47. 47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 35, caracterizado pelo fato de que cada pré-dose e/ou pós-dose é administrada dentro de 3 dias da etapa de coadministração.
  48. 48. Método, de acordo com a reivindicação 47, caracterizado pelo fato de que cada pré-dose e/ou pós-dose é administrada dentro de 2 dias da etapa de coadministração.
  49. 49. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 48, caracterizado pelo fato de que cada pós-dose é administrada quinzenalmente após a etapa de coadministração.
  50. 50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 49, caracterizado pelo fato de que cada pré-dose, pós-dose e/ou etapa de coadministração é por administração intravenosa.
  51. 51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o vetor viral compreende uma ou mais sequências de controle de expressão.
  52. 52. Método, de acordo com a reivindicação 51, caracterizado pelo fato de que uma ou mais sequências de controle de expressão compreendem um promotor específico do fígado.
  53. 53. Método, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que uma ou mais sequências de controle de expressão compreendem um promotor constitutivo.
  54. 54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda avaliação da resposta de IgM para o vetor viral no indivíduo em um ou mais pontos de tempo.
  55. 55. Método, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que pelo menos um dos pontos tempo da avaliação da resposta de IgM é posterior a uma coadministração.
    Petição 870190080343, de 19/08/2019, pág. 123/150
    8/12
  56. 56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o vetor viral e os nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor são misturados para cada coadministração.
  57. 57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o vetor viral é um vetor retroviral, um vetor adenoviral, um vetor lentiviral ou um vetor viral adenoassociado.
  58. 58. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o vetor viral é um vetor viral adenoassociado.
  59. 59. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o vetor viral adenoassociado é um vetor viral adenoassociado AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV6.2, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10 ou AAV11.
  60. 60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o imunossupressor da coadministração e/ou pré-dose e/ou pós-dose é um inibidor da via NFkB.
  61. 61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o imunossupressor da coadministração e/ou pré-dose e/ou pós-dose é um inibidor de mTOR.
  62. 62. Método, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que o inibidor de mTOR é uma rapamicina.
  63. 63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o imunossupressor é acoplado aos nanocarreadores sintéticos.
  64. 64. Método, de acordo com a reivindicação 62, caracterizado pelo fato de que o imunossupressor é encapsulado nos nanocarreadores sintéticos.
  65. 65. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    Petição 870190080343, de 19/08/2019, pág. 124/150
    9/12 anteriores, caracterizado pelo fato de que os nanocarreadores sintéticos da coadministração e/ou pré-dose e/ou pós-dose compreendem nanopartículas lipídicas, nanopartículas poliméricas, nanopartículas metálicas, emulsões à base de tensoativos, dendrímeros, fulerenos, nanofios, partículas semelhantes a vírus ou partículas de peptídeo ou proteína.
  66. 66. Método, de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que os nanocarreadores sintéticos compreendem nanopartículas poliméricas.
  67. 67. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que as nanopartículas poliméricas compreendem um poliéster, poliéster acoplado a um poliéter, ácido poliamino, policarbonato, poliacetal, policetal, polissacarídeo, polietiloxazolina ou polietileneimina.
  68. 68. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que as nanopartículas poliméricas compreendem um poliéster ou um poliéster acoplado a um poliéter.
  69. 69. Método, de acordo com a reivindicação 67 ou 68, caracterizado pelo fato de que o poliéster compreende um poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico), poli(ácido láctico-co-glicólico) ou policaprolactona.
  70. 70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 69, caracterizado pelo fato de que as nanopartículas poliméricas compreendem um poliéster e um poliéster acoplado a um poliéter.
  71. 71. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 70, caracterizado pelo fato de que o poliéter compreende polietileno glicol ou polipropileno glicol.
  72. 72. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a média de uma distribuição de tamanho de partículas obtido através de dispersão de luz dinâmica
    Petição 870190080343, de 19/08/2019, pág. 125/150
    10/12 de uma população dos nanocarreadores sintéticos é um diâmetro maior que 110nm.
  73. 73. Método, de acordo com a reivindicação 72, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é maior que 150nm.
  74. 74. Método, de acordo com a reivindicação 73, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é maior que 200nm.
  75. 75. Método, de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é maior que 250nm.
  76. 76. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    72 a 75, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 5pm.
  77. 77. Método, de acordo com a reivindicação 76, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 4pm.
  78. 78. Método, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 3pm.
  79. 79. Método, de acordo com a reivindicação 78, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 2pm.
  80. 80. Método, de acordo com a reivindicação 79, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 1 pm.
  81. 81. Método, de acordo com a reivindicação 80, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 750nm.
  82. 82. Método, de acordo com a reivindicação 81, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 500nm.
  83. 83. Método, de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 450nm.
  84. 84. Método, de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 400nm.
  85. 85. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 350nm.
  86. 86. Método, de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que o diâmetro é menor que 300nm.
    Petição 870190080343, de 19/08/2019, pág. 126/150
    11/12
  87. 87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a carga do imunossupressor compreendido nos nanocarreadores sintéticos, em média em todo os nanocarreadores sintéticos, é entre 0,1% e 50% (peso/peso).
  88. 88. Método, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que a carga é entre 0,1% e 25%.
  89. 89. Método, de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que a carga é entre 1 % e 25%.
  90. 90. Método, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que a carga é entre 2% e 25%.
  91. 91. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que uma razão de aspecto de uma população dos nanocarreadores sintéticos é maior que 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 ou 1:10.
  92. 92. Kit caracterizado pelo fato de que compreende:
    uma ou mais pré-doses ou uma ou mais pós-doses, cada uma descrita em qualquer uma das reivindicações anteriores, e uma dose de nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor para a coadministração com um vetor viral.
  93. 93. Kit de acordo com a reivindicação 92, caracterizado pelo fato de que compreende uma dose do vetor viral.
  94. 94. Kit, de acordo com a reivindicação 92 ou 93, caracterizado pelo fato de que o kit compreende uma ou mais pré-doses e uma ou mais pós-doses.
  95. 95. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 92 a 94, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente instruções para o uso.
  96. 96. Kit, de acordo com a reivindicação 95, caracterizado pelo fato de que as instruções para o uso compreendem instruções para realizar o método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 91.
    Petição 870190080343, de 19/08/2019, pág. 127/150
    12/12
  97. 97. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 92 a 96, caracterizado pelo fato de que os nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor para administração com um vetor viral são descritos em qualquer uma das reivindicações 1 a 91.
  98. 98. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações 92 a 97, caracterizado pelo fato de que o vetor viral é como descrito em qualquer uma das reivindicações 1 a 91.
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2013012593A (es) 2011-04-29 2014-08-21 Selecta Biosciences Inc Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas de anticuerpos.
KR20220025907A (ko) 2013-05-03 2022-03-03 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 비-알레르겐성 항원에 반응하는 아나필락시스를 감소시키거나 방지하기 위한 관용유발 합성 나노담체
MX2017002931A (es) 2014-09-07 2017-05-30 Selecta Biosciences Inc Metodos y composiciones para atenuar respuestas inmunes anti-vector de transferencia viral.
KR20190124295A (ko) 2017-03-11 2019-11-04 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 항염증제, 및 면역억제제를 포함하는 합성 나노담체를 사용한 조합 치료와 관련된 방법 및 조성물
WO2019075360A1 (en) * 2017-10-13 2019-04-18 Selecta Biosciences, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MITIGATING ANTI-VECTOR VIRAL TRANSFER IGM RESPONSES
CA3106640A1 (en) * 2018-07-16 2020-01-23 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions of mma constructs and vectors
BR112021021566A2 (pt) * 2019-04-28 2022-04-19 Selecta Biosciences Inc Métodos para tratamento de indivíduos com imunidade preexistente a vetores de transferência viral
CA3141863A1 (en) * 2019-05-28 2020-12-03 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuated anti-viral transfer vector immune response
JP2022537555A (ja) * 2019-06-20 2022-08-26 武田薬品工業株式会社 ウイルスベースの遺伝子療法による治療方法
EP4097475A4 (en) * 2020-01-29 2024-05-22 Helix Nanotechnologies, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR NUCLEIC ACID EXPRESSION INVOLVING INHIBITION OF NF-KB PATHWAYS AND/OR IRF PATHWAYS
CA3216491A1 (en) 2021-04-16 2022-10-20 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Rational polyploid aav virions that cross the blood brain barrier and elicit reduced humoral response
WO2023086615A1 (en) * 2021-11-14 2023-05-19 Selecta Biosciences, Inc. Multiple dosing with viral vectors

Family Cites Families (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US609548A (en) 1898-08-23 Horse-hitching device
US4946929A (en) 1983-03-22 1990-08-07 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible articles useful as implants and prostheses having predictable degradation rates
US4638045A (en) 1985-02-19 1987-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Non-peptide polyamino acid bioerodible polymers
US4797368A (en) 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
US4806621A (en) 1986-01-21 1989-02-21 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible, bioerodible, hydrophobic, implantable polyimino carbonate article
US5736372A (en) 1986-11-20 1998-04-07 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure
US5804178A (en) 1986-11-20 1998-09-08 Massachusetts Institute Of Technology Implantation of cell-matrix structure adjacent mesentery, omentum or peritoneum tissue
CA1340581C (en) 1986-11-20 1999-06-08 Joseph P. Vacanti Chimeric neomorphogenesis of organs by controlled cellular implantation using artificial matrices
US5019379A (en) 1987-07-31 1991-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Unsaturated polyanhydrides
US5010167A (en) 1989-03-31 1991-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Poly(amide-and imide-co-anhydride) for biological application
GB8918616D0 (en) 1989-08-15 1989-09-27 Univ Glasgow Herpes simplex virus type 1 mutant
US5849572A (en) 1990-10-10 1998-12-15 Regents Of The University Of Michigan HSV-1 vector containing a lat promoter
US5804413A (en) 1992-07-31 1998-09-08 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Herpes simplex virus strains for gene transfer
US5399665A (en) 1992-11-05 1995-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymers for cell transplantation
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5512600A (en) 1993-01-15 1996-04-30 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of bonded fiber structures for cell implantation
US5514378A (en) 1993-02-01 1996-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible polymer membranes and methods of preparation of three dimensional membrane structures
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
PT797676E (pt) 1993-10-25 2006-05-31 Canji Inc Vector adenoviral recombinante e metodos de utilizacao
JP3816518B2 (ja) 1994-06-10 2006-08-30 ジェンベク、インコーポレイティッド 相補的なアデノウイルスベクター系と細胞系
US6007845A (en) 1994-07-22 1999-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
GB9415319D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Medical Res Council HSV viral vector
US5846782A (en) 1995-11-28 1998-12-08 Genvec, Inc. Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs
JPH10507758A (ja) * 1994-10-19 1998-07-28 ジェネティック セラピー，インコーポレイテッド アデノウイルスおよび免疫抑制剤同時反復投与を伴う遺伝子治療
US5716404A (en) 1994-12-16 1998-02-10 Massachusetts Institute Of Technology Breast tissue engineering
US6123727A (en) 1995-05-01 2000-09-26 Massachusetts Institute Of Technology Tissue engineered tendons and ligaments
DK0833934T4 (da) 1995-06-15 2012-11-19 Crucell Holland Bv Pakningssystemer til human rekombinant adenovirus til anvendelse ved genterapi
US6001650A (en) 1995-08-03 1999-12-14 Avigen, Inc. High-efficiency wild-type-free AAV helper functions
US5801030A (en) 1995-09-01 1998-09-01 Genvec, Inc. Methods and vectors for site-specific recombination
US5837511A (en) 1995-10-02 1998-11-17 Cornell Research Foundation, Inc. Non-group C adenoviral vectors
US6095148A (en) 1995-11-03 2000-08-01 Children's Medical Center Corporation Neuronal stimulation using electrically conducting polymers
US5902599A (en) 1996-02-20 1999-05-11 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymer networks for use in orthopedic and dental applications
EP0937082A2 (en) 1996-07-12 1999-08-25 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Materials and method for treating or preventing pathogenic fungal infection
US5849561A (en) 1997-05-22 1998-12-15 Cornell Research Foundation, Inc. Method for the production of non-group C adenoviral vectors
EP0996735B1 (en) 1997-06-09 2003-12-10 Genvec, Inc. Chimeric vectors comprising a phage packaging site and a portion derived from the genome of a eukaryotic virus
US5837752A (en) 1997-07-17 1998-11-17 Massachusetts Institute Of Technology Semi-interpenetrating polymer networks
AU8605598A (en) 1997-07-31 1999-02-22 University Of Pittsburgh Targeted hsv vectors
ATE303448T1 (de) 1997-09-23 2005-09-15 Genvec Inc Duale selektionkassette und sie enthaltende plasmide
NZ505325A (en) 1997-12-23 2003-07-25 Crucell Holland B Adeno-associated virus and adenovirus chimeric recombinant viruses useful for the integration of foreign genetic information into the chromosomal dna of target cells
US6686446B2 (en) 1998-03-19 2004-02-03 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
US6506577B1 (en) 1998-03-19 2003-01-14 The Regents Of The University Of California Synthesis and crosslinking of catechol containing copolypeptides
US6632922B1 (en) 1998-03-19 2003-10-14 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
EE200000605A (et) 1998-04-22 2002-04-15 Genvec, Inc. Adenoviiruse efektiivne puhastamine
US6436392B1 (en) 1998-05-20 2002-08-20 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated virus vectors
US5965358A (en) 1998-08-26 1999-10-12 Genvec, Inc. Method for assessing the relative purity of viral gene transfer vector stocks
US6759237B1 (en) 1998-11-05 2004-07-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same
CA2400172C (en) 2000-02-28 2010-04-20 Genesegues, Inc. Nanocapsule encapsulation system and method
US6168941B1 (en) 2000-04-07 2001-01-02 Genvec, Inc. Method of producing adenoviral vector stocks
AU2001252458A1 (en) 2000-05-05 2001-11-20 Martin Bachmann Molecular antigen arrays and vaccines
US20060057553A1 (en) 2000-05-30 2006-03-16 Estuardo Aguilar-Cordova Chimeric viral vectors for gene therapy
WO2001092551A2 (en) 2000-06-01 2001-12-06 University Of North Carolina At Chapel Hill Duplexed parvovirus vectors
US6593123B1 (en) 2000-08-07 2003-07-15 Avigen, Inc. Large-scale recombinant adeno-associated virus (rAAV) production and purification
CA2319928A1 (en) 2000-09-18 2002-03-18 Vasogen Ireland Limited Apoptosis-mimicking synthetic entities and use thereof in medical treatments
US6447995B1 (en) 2000-10-04 2002-09-10 Genvec, Inc. Utilizing intrinsic fluorescence to detect adenovirus
GB0025414D0 (en) 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
US7122181B2 (en) 2000-12-19 2006-10-17 Research Development Foundation Lentiviral vector-mediated gene transfer and uses thereof
ES2345876T3 (es) 2001-05-31 2010-10-05 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Particulas de replicones de alfavirus quimericos.
IL160132A0 (en) 2001-08-02 2004-06-20 Inst Clayton De La Rech Methods and compositions relating to improved lentiviral vector production systems
US6818732B2 (en) 2001-08-30 2004-11-16 The Regents Of The University Of California Transition metal initiators for controlled poly (beta-peptide) synthesis from beta-lactam monomers
JP4790984B2 (ja) 2001-09-06 2011-10-12 アルファヴァックス，インコーポレイテッド アルファウイルスレプリコンベクター系
EP1438075A4 (en) 2001-10-02 2006-04-19 Inst Clayton De La Rech METHOD AND COMPOSITIONS ASSOCIATED WITH LENTIVIRAL VECTORS WITH LIMITED EXPRESSION AND ITS APPLICATIONS
ES2975413T3 (es) 2001-12-17 2024-07-05 Univ Pennsylvania Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (AAV), vectores que las contienen y usos de las mismas
ES2348868T3 (es) 2002-12-13 2010-12-16 Genetix Pharmaceuticals Inc. Vectores retrovirales terapeuticos para terapia genica.
US7510872B2 (en) 2003-02-26 2009-03-31 Nationwide Children's Hospital Recombinant adeno-associated virus production
EP1605972A2 (en) 2003-03-26 2005-12-21 Cytos Biotechnology AG Hiv-peptide-carrier-conjugates
US7186699B2 (en) 2003-06-03 2007-03-06 Cell Genesys, Inc. Method for treating cancer by vector-mediated delivery of one or more anti-angiogenic or pro-apoptotic genes
EP1486567A1 (en) 2003-06-11 2004-12-15 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Improved adeno-associated virus (AAV) vector for gene therapy
US20050100890A1 (en) 2003-10-15 2005-05-12 Davidson Beverly L. Methods for producing and using in vivo pseudotyped retroviruses
EP3242318A1 (en) 2003-12-19 2017-11-08 The University of North Carolina at Chapel Hill Monodisperse micro-structure or nano-structure product
WO2006080951A2 (en) 2004-07-01 2006-08-03 Yale University Targeted and high density drug loaded polymeric materials
EP1858332A4 (en) 2005-02-16 2011-06-22 Lentigen Corp LENTIVIRUS VECTORS AND ITS USE
CN101248186A (zh) 2005-05-23 2008-08-20 瓦克辛公司 不含腺病毒的重组腺病毒载体的快速生产
WO2007070392A2 (en) 2005-12-12 2007-06-21 Canji, Inc. Adenoviral expression vectors having an expression cassette in the e1 region and an inactivated e2b polymerase
GB0526211D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Oxford Biomedica Ltd Viral vectors
AU2008236566A1 (en) 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
EP2146747A1 (en) 2007-04-12 2010-01-27 Emory University Novel strategies for delivery of active agents using micelles and particles
AU2008285224B2 (en) 2007-08-03 2015-01-22 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Lentiviral gene transfer vectors and their medicinal applications
MX350501B (es) 2007-10-12 2017-09-07 Massachusetts Inst Technology Nanotecnologia de vacuna.
EP2262489A2 (en) 2008-02-28 2010-12-22 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts Hollow nanoparticles and uses thereof
US8871515B2 (en) 2008-09-17 2014-10-28 Isogenis, Inc. Construction of fully-deleted adenovirus-based gene delivery vectors and uses thereof
CN101676291B (zh) 2008-09-18 2012-05-09 上海海和药物研究开发有限公司 一类雷帕霉素碳酸酯类似物、其药物组合物及其制备方法和用途
US20120015899A1 (en) 2008-10-25 2012-01-19 Plant Bioscience, Limited Modified plant virus particles and uses therefor
US8679837B2 (en) 2009-04-02 2014-03-25 University Of Florida Research Foundation, Inc. Inducible system for highly efficient production of recombinant Adeno-associated virus (rAAV) vectors
US20120283318A1 (en) 2009-10-05 2012-11-08 Mei Ya-Fang Replicating viral vectors for gene therapy
US8927514B2 (en) 2010-04-30 2015-01-06 City Of Hope Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment
US10392632B2 (en) 2011-02-14 2019-08-27 The Children's Hospital Of Philadelphia AAV8 vector with enhanced functional activity and methods of use thereof
WO2012145509A2 (en) 2011-04-19 2012-10-26 The Research Foundation Of State University Of New York Adeno-associated-virus rep sequences, vectors, and viruses
MX2013012593A (es) * 2011-04-29 2014-08-21 Selecta Biosciences Inc Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas de anticuerpos.
AU2013240248B2 (en) 2012-03-26 2018-12-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Delivery of packaged RNA to mammalian cells
MY172457A (en) 2012-04-18 2019-11-26 Childrens Hospital Philadelphia Composition and methods for highly efficient gene transfer using aav capsid variants
JP2015529466A (ja) 2012-09-14 2015-10-08 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 鎌状赤血球症の幹細胞遺伝子治療のためのレンチウイルスベクター
CN102871966B (zh) * 2012-10-19 2013-11-20 东南大学 用于改善雷帕霉素生物利用度的纳米载药颗粒及其制备方法
US9624510B2 (en) 2013-03-01 2017-04-18 The Wistar Institute Adenoviral vectors comprising partial deletions of E3
US9828587B2 (en) 2013-04-08 2017-11-28 University Of Iowa Research Foundation Chimeric adeno-associated virus/ bocavirus parvovirus vector
KR20220025907A (ko) * 2013-05-03 2022-03-03 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 비-알레르겐성 항원에 반응하는 아나필락시스를 감소시키거나 방지하기 위한 관용유발 합성 나노담체
US20140356361A1 (en) * 2013-06-04 2014-12-04 Selecta Biosciences, Inc. Repeated administration of non-immunosuppressive antigen specific immunotherapeutics
GB201407322D0 (en) * 2014-04-25 2014-06-11 Ospedale San Raffaele Gene therapy
MX2017002931A (es) * 2014-09-07 2017-05-30 Selecta Biosciences Inc Metodos y composiciones para atenuar respuestas inmunes anti-vector de transferencia viral.
DK3215192T3 (da) 2014-11-05 2021-05-03 Selecta Biosciences Inc Fremgangsmåder og sammensætninger i forbindelse med syntetiske nanobærere med rapamycin i en stabil, supermættet tilstand

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