BR112018015629B1 - Compostos derivados de ácido betulínico e composição - Google Patents

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Abstract

compostos tendo propriedades de fármacos e bioativas, suas composições farmacêuticas e métodos de uso são expostos. em particular, derivados de ácido betulínico que possuem atividade antiviral única são providos como inibidores de maturação do hiv, como representado por compostos de fórmula (i). esses compostos são úteis para o tratamento de hiv e aids.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se aos novos compostos úteis contra HIV e, mais particularmente, aos compostos derivados de ácido betulínico e outros compostos que são úteis como inibidores da maturação de HIV e às composições farmacêuticas contendo os mesmos e também aos métodos para a preparação deles.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[002] A infecção por HIV-1 (vírus da imunodeficiência humana -1) continua a ser um importante problema médico, com uma estimativa de 45 a 50 milhões de pessoas infectadas em todo o mundo no final de 2010. A quantidade de casos de HIV e AIDS (síndrome da imunodeficiência adquirida) aumentou rapidamente. Em 2005, aproximadamente 5,0 milhões de novas infecções foram relatadas e 3,1 milhões de pessoas morreram de AIDS. Os fármacos atualmente disponíveis para o tratamento do HIV incluem inibidores nucleosídeos da transcriptase reversa (RT) ou combinações de pílula única aprovadas: zidovudina (ou AZT ou RETROVIR®), didanosina (ou VIDEX®), estavudina (ou ZERIT®), lamivudina (ou 3TC ou EPIVIR®), zalcitabina (ou DDC ou HIVID®), succinato de abacavir (ou ZIAGEN®), sal de tenofovir disoproxil fumarato (ou VIREAD®), emtricitabina (ou FTC- EMTRIVA®), COMBIVIR®(contém -3TC mais AZT), TRIZIVIR®(contém abacavir, lamivudina e zidovudina), EPZICOM®(contém abacavir e lamivudina), TRUVADA®(contém VIREAD®e EMTRIVA®); inibidores não nucleosídeos da transcriptase reversa: nevirapina (ou VIRAMUNE®), delavirdina (ou RESCRIPTOR®) e efavirenz (ou SUSTIVA®), ATRIPLA® (TRUVADA®+ SUSTIVA®) e etravirina e inibidores da protease peptidomimética ou formulações aprovadas: saquinavir, indinavir, ritonavir, nelfinavir, amprenavir, lopinavir, KALETRA®(lopinavir e Ritonavir), darunavir, atazanavir (REYATAZ®) e tipranavir (APTIVUS®) e cobicistat e inibidores da integrase tais como raltegravir (ISENTRESS®) e inibidores de entrada tais como enfuvirtida (T-20) (FUZEON®) e maraviroc (SELZENTRY®).
[003] Cada um destes fármacos pode impedir apenas transientemente a replicação viral se usado sozinho. No entanto, quando usados em combinação, esses fármacos têm um efeito profundo na viremia e progressão da doença. Na realidade, reduções significativas em taxas de morte dentre os pacientes com AIDS têm sido recentemente documentadas como uma consequência da aplicação disseminada de terapia de combinação. Entretanto, apesar desses resultados impressionantes, 30% a 50% dos pacientes podem apresentar falhas de tratamento com as terapias de combinação de fármacos. Potência de fármaco insuficiente, não conformidade do paciente, penetração restringida em tecido e limitações específicas ao fármaco dentro de determinados tipos de células (por exemplo os análogos de nucleosídeo não podem, em sua maioria, ser fosforilados em células quiescentes) podem ser a causa da supressão incompleta de vírus sensíveis. Além disso, a alta taxa de replicação e a rápida taxa de renovação de HIV-1 combinadas com a incorporação frequente de mutações resulta no surgimento de variantes resistentes aos fármacos e falhas de tratamento quando estão presentes concentrações de fármaco subideais. Portanto, novos agentes anti-HIV que apresentam padrões de resistência diferentes e farmacocinética favorável e também perfis de segurança favoráveis são necessários para prover mais opções de tratamento. Os inibidores de fusão do HIV melhorados e os antagonistas do correceptor de entrada do HIV são dois exemplos de novas classes de agentes anti-HIV adicionalmente sendo estudados por vários investigadores.
[004] Os inibidores da fixação do HIV são uma subclasse adicional de compostos antivirais que se ligam à glicoproteína de superfície do HIV gp120 e interferem na interação entre a proteína de superfície gp120 e o receptor de célula hospedeira CD4. Dessa forma, evitam que o HIV se fixe em célula T CD4 humana e bloqueiam a replicação de HIV no primeiro estágio do ciclo de vida do HIV. As propriedades dos inibidores da fixação de HIV têm sido aprimoradas em um esforço para obter compostos com utilidade e eficácia maximizadas como agentes antivirais. Em particular, as patentes U.S. nos 7.354.924 e 7.745.625 são patentes que ilustram os inibidores da fixação de HIV.
[005] Outra classe emergente de compostos para o tratamento de infecção por HIV é a classe dos chamados inibidores da maturação de HIV. A maturação é a última etapa de tantas quantas 10 ou mais etapas em replicação de HIV ou no ciclo de vida do HIV, na qual o HIV torna-se infeccioso como uma consequência de vários eventos de clivagem mediada por protease de HIV na proteína gag que finalmente resulta em liberação da proteína de capsídeo (CA). Os inibidores da maturação impedem que o capsídeo de HIV se monte e se mature apropriadamente, que forme uma capa externa protetora ou que saia das células humanas. Ao contrário, vírus não infecciosos são produzidos, impedindo os ciclos subsequentes de infecção por HIV.
[006] Determinados derivados de ácido betulínico têm demonstrado potente atividade anti-HIV como inibidores da maturação de HIV. Por exemplo, a patente US 7.365.221 descreve derivados monoacilados de di- hidrobetulina e de betulina e o uso deles como agentes anti-HIV. Conforme discutido na referência ‘221, a esterificação do ácido betulínico (1) com certos grupos acila substituídos, tais como os grupos 3’,3’-dimetilglutarila e 3’,3’- dimetilsuccinila produziram derivados com atividade intensificada (Kashiwada, Y., et al., J. Med. Chem. 39:1016-1017 (1996)). O ácido betulínico acilado e derivados de ácido di-hidrobetulínico que são potentes agentes anti-HIV também são descritos na Pat. US n° 5.679.828. A esterificação da hidroxila no carbono 3 de betulina com ácido succínico também produziu um composto capaz de inibir a atividade de HIV-1 (Pokrovskii, A. G., et al., “Synthesis of derivatives of plant triterpenes and study of their antiviral and immunostimulating activity”, Khimiya y Interesakh Ustoichivogo Razvitiya, Vol. 9, n° 3, pp. 485-491 (2001) (Resumo em inglês).
[007] Outras referências ao uso de tratamento de infecção por HIV com compostos derivados de ácido betulínico incluem as patentes US 2005/0239748 e US 2008/0207573 e também WO2006/053255, WO2009/100532 e WO2011/007230.
[008] Um composto inibidor da maturação de HIV que tem estado em desenvolvimento foi identificado como Bevirimat ou PA-457, com a fórmula química de C36H56O6 e o nome IUPAC de ácido3e-(3-carboxi-3- metil-butanoiloxi) lup-20(29)-en-28-oico.
[009] É também feita aqui referência aos pedidos de Bristol-Myers Squibb intitulados “MODIFIED C-3 BETULINIC ACID DERIVATIVES AS HIV MATURATION INHIBITORS” - USSN 13/151.706 depositado em 2 de junho de 2011 (agora patente U.S. 8.754.068) e “C-28 AMIDES OF MODIFIED C-3 BETULINIC ACID DERIVATIVES AS HIV MATURATION INHIBITORS” - USSN 13/151.722, depositado em 2 de junho de 2011 (agora patente U.S. 8.802.661). Também é feita referência ao pedido intitulado “C-28 AMINES OF C-3 MODIFIED BETULINIC ACID DERIVATIVES AS HIV MATURATION INHIBITORS” - USSN 13/359.680 depositado em 27 de janeiro de 2012 (agora patente U.S. n° 8.748.415). Além disso, é feita referência ao pedido intitulado “C-17 AND C3 MODIFIED TRITERPENOIDS WITH HIV MATURATION INHIBITORY ACTIVITY” - USSN 13/359.727 depositado em 27 de janeiro de 2012 (agora patente U.S. 8.846.647). Referência adicional é feita ao pedido “C-3 CYCLOALKENYL TRITERPENOIDS WITH HIV MATURATION INHIBITORY ACTIVITY” USSN 13/760.726 depositado em 6 de fevereiro de 2013 (agora U.S. 8.906.889), bem como ao pedido intitulado “TRITERPENOIDS WITH HIV MATURATION INHIBITORY ACTIVITY” USSN 14/682.179 depositado em 9 de abril de 2015.
[0010] Agora são necessários na técnica novos compostos que são úteis como inibidores da maturação de HIV e também novas composições farmacêuticas contendo estes compostos. Em particular, são necessários novos compostos que serão eficazes contra mutantes genotípicos emergentes de HIV.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0011] A presente invenção fornece compostos de Fórmula I abaixo, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, suas formulações farmacêuticas e seu uso em pacientes sofrendo de ou suscetíveis a um vírus como HIV. Os compostos de Fórmula I são agentes antivirais efetivos, particularmente como inibidores de HIV. São úteis para o tratamento de HIV e AIDS.
[0012] Uma modalidade da presente invenção é direcionada a um composto da Fórmula I, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo: em que R1 é isopropenila ou isopropila; A é -C1-6alquil-OR0; em que R0 é heteroarila-Q0; Q0 é selecionado a partir do grupo de -H, -CN, -C1-6 alquila, - COOH, -Ph, -OC1-6 alquila, -halo, -CF3, Y é selecionado a partir do grupo de -COOR2, -C(O)NR2SO2R3, -C(O)NHSO2NR2R2, -SO2NR2C(O)R2, -tetrazol e -CONHOH; R2 é -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila alquilsubstituída ou -C1-6 alquila arilsubstituída; W é ausente ou é -CH2- ou -CO-; R3 é -H, -C1-6alquila ou -C1-6alquila alquilsubstituída; R4 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquil-C3-6 cicloalquila, -C1-6 alquila com -C1-6 substituído, -C1-6 alquil-Q1, -C1-6 alquil-C3-6 cicloalquil-Q1, arila, heteroarila, heteroarila substituída, -COR6, - SO2R7, -SO2NR2R2 e em que G é selecionado do grupo de -O-, -SO2- e -NR12-; em que Q1 é selecionado do grupo de -C1-6 alquila, - C1-6 fluoroalquila, heteroarila, heteroarila substituída, halogênio, CF3, -OR2, - COOR2, -NR8R9, -CONR8R9e -SO2R7; R5 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C3-6 cicloalquila, alquila alquilsubstituída com -C1-6, -C1-6 alquil-NR8R9, -COR3, - SO2R7 e -SO2NR2R2; com a condição de que R4 ou R5 não é -COR6 quando W é - CO-; com a condição adicional de que apenas um de R4 ou R5 é selecionado a partir do grupo de -COR6, -COCOR6,-SO2R7 e -SO2NR2R2; R6 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila-alquila substituída, -C3-6 cicloalquila, -C3-6 cicloalquila substituída-Q2, -C1-6 alquil-Q2, -C1-6 alquila-alquila substituída-Q2, -C3-6 cicloalquil-Q2, aril- Q2, -NR13R14 e -OR15; em que Q2 é selecionado a partir do grupo de arila, heteroarila, heteroarila substituída, -OR2, -COOR2, -NR8R9, SO2R7, -CONHSO2R3 e - CONHSO2NR2R2; R7 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6alquila, -C1-6 alquila substituída, -C3-6 cicloalquila, -CF3, arila e heteroarila; R8 e R9 são independentemente selecionados a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila substituída, arila, heteroarila, arila substituída, heteroarila substituída, -C1-6 alquil-Q2 e -COOR3, ou R8 e R9 são tomados em conjunto com o N adjacente para formar um ciclo selecionado a partir do grupo de: M é selecionado a partir do grupo de -R15, -SO2R2, - SO2NR2R2, -OH e -NR2R12; V é selecionado a partir do grupo de -CR10R11-, -SO2-, -O- e - NR12-; com a condição de que apenas um de R8 ou R9 pode ser - COOR3; R10e R11 são independentemente selecionados a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila substituída e -C3-6 cicloalquila; R12 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila alquilsubstituída, -CONR2R2, -SO2R3 e -SO2NR2R2; R13 e R14 são independentemente selecionados a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C3-6 cicloalquila, -C1-6 alquila substituída, -C1-6 alquil-Q3, -C1-6 alquil-C3-6 cicloalquil-Q3 e C1-6 alquila substituída-Q3; Q3 é selecionado a partir do grupo de heteroarila, heteroarila substituída, -NR2R12, -CONR2R2, -COOR2, -OR2 e -SO2R3; R15 é selecionado a partir do grupo de -C1-6 alquila, -C3-6 cicloalquila, -C1-6 alquila substituída, -C1-6 alquila-Q3, -C1-6 alquila-C3-6 cicloalquila-Q3 e -C1-6 alquila substituída-Q3; R16 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -NR2R2 e -COOR2; com a condição de que quando V é -NR12-; R16 não é -NR2R2; e R17 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, - COOR3 e arila.
[0013] Em uma outra modalidade, é provido um método para tratar mamíferos infectados com um vírus, especialmente em que o dito vírus é HIV, compreendendo administrar ao dito mamífero uma quantidade eficaz antiviral de um composto que é selecionado do grupo de compostos da Fórmula I e um ou mais carreadores, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Opcionalmente, o composto da Fórmula I pode ser administrado em combinação com uma quantidade eficaz antiviral de outro agente para tratamento de AIDS selecionado do grupo consistindo em: (a) um agente antiviral de AIDS; (b) um agente anti-infeccioso; (c) um imunomodulador; e (d) outros inibidores da entrada do HIV.
[0014] Uma outra modalidade da presente invenção é uma composição farmacêutica compreendendo um ou mais compostos da Fórmula I e um ou mais carreadores, excipientes, e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis; e opcionalmente em combinação com outro agente para tratamento de AIDS selecionado do grupo consistindo em: (a) um agente antiviral de AIDS; (b) um agente anti-infeccioso; (c) um imunomodulador; e (d) outros inibidores da entrada do HIV.
[0015] Em uma outra modalidade da invenção é provido aqui um ou mais métodos para preparar os compostos da Fórmula I.
[0016] Também são providos aqui compostos intermediários úteis na preparação dos compostos da Fórmula I.
[0017] A presente invenção refere-se a estas e também a outras finalidades importantes, descritas doravante.
DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES
[0018] Como usado aqui, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referências no plural, a menos que o contexto indique claramente de outro modo.
[0019] Visto que os compostos da presente invenção podem possuir centros assimétricos e, portanto, ocorrer como misturas de diastereômeros, a presente descrição inclui as formas diastereoisoméricas dos compostos da Fórmula I, adicionalmente às misturas dos mesmos. Definições
[0020] A menos que sejam especificamente apresentados de outra maneira alhures no pedido, um ou mais dos seguintes termos podem ser aqui usados e devem ter os seguintes significados: “H” refere-se a hidrogênio, incluindo seus isótopos, como deutério.
[0021] O termo “C1-6 alquila” como aqui usado e nas reivindicações (a não ser que seja especificado de outra maneira) significa grupos alquila de cadeia linear ou ramificada como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, t-butila, amila, hexila e similares.
[0022] “C1 -C4 fluoroalquila” refere-se à C1 -C4 alquila substituída com F em que pelo menos um átomo de H é substituído com átomo de F e cada átomo de H pode ser independentemente substituído com átomo de F.
[0023] “Halogênio” ou “halo” refere-se a cloro, bromo, iodo ou flúor.
[0024] Um grupo “arila” ou “Ar” refere-se a um grupo completamente de carbonos monocíclico ou policíclico de anéis fundidos (isto é, anéis que compartilham pares adjacentes de átomos de carbono) tendo um sistema de elétrons-pi completamente conjugado. Exemplos, sem limitação, de grupos arila são fenila, naftalenila e antracenila. O grupo arila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituinte(s) são preferivelmente um ou mais selecionados dentre alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tio-hidróxi, tioarilóxi, tio-heteroarilóxi, tio- heteroaliciclóxi, ciano, halogênio, nitro, carbonila, O-carbamila, N-carbamila, C-amido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometila, ureído, amino e -NRxRy, em que Rx e Ry são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, cicloalquila, arila, carbonila, C-carbóxi, sulfonila, tri-halometila, e, combinados, um anel heteroalicíclico de cinco ou seis membros.
[0025] Um grupo “heteroarila” refere-se a um grupo monocíclico ou de anéis fundidos (isto é, anéis que compartilham um par adjacente de átomos) tendo no anel (nos anéis) um ou mais átomos selecionados do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre e, adicionalmente, tendo um sistema de elétrons-pi completamente conjugado. A não ser que seja indicado de outra maneira, o grupo heteroarila pode estar ligado a um átomo de carbono ou um átomo de nitrogênio dentro do grupo heteroarila. Deve ser observado que o termo heteroarila pretende englobar um N-óxido da heteroarila parental se um tal N-óxido for quimicamente viável conforme conhecido na técnica. Exemplos, sem limitação, de grupos heteroarila são furila, tienila, benzotienila, tiazolila, imidazolila, oxazolila, oxadiazolila, tiadiazolila, benzotiazolila, triazolila, tetrazolila, isoxazolila, isotiazolila, pirrolila, piranila, tetra-hidropiranila, pirazolila, piridila, pirimidinila, quinolinila, isoquinolinila, purinila, carbazolila, benzoxazolila, benzimidazolila, indolila, isoindolila, pirazinila, diazinila, pirazina, triazinila, tetrazinila e tetrazolila. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituído(s) é (são) preferencialmente um ou mais selecionados de alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tioalcóxi, tio-hidróxi, tioarilóxi, tio-heteroarilóxi, tio- heteroaliciclóxi, ciano, halogênio, nitro, carbonila, O-carbamila, N-carbamila, C-amido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometila, ureído, amino e -NRxRy, em que Rx e Rysão como definidos acima.
[0026] Um grupo “heteroalicíclico” refere-se a um grupo monocíclico ou de anéis fundidos tendo no anel (nos anéis) um ou mais átomos selecionados do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre. Os anéis são selecionados daqueles que proveem arranjos estáveis de ligações e não pretendem englobar sistemas que não existiriam. Os anéis também podem ter uma ou mais ligações duplas. No entanto, os anéis não têm um sistema de elétrons-pi completamente conjugado. Exemplos, sem limitação, de grupos heteroalicíclicos são azetidinila, piperidila, piperazinila, imidazolinila, tiazolidinila, 3-pirrolidin-1-ila, morfolinila, tiomorfolinila e seus S-óxidos e tetra-hidropiranila. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituído(s) é (são) preferencialmente um ou mais selecionados de alquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tio-hidróxi, tioalcóxi, tioarilóxi, tio-heteroarilóxi, tio- heteroaliciclóxi, ciano, halogênio, nitro, carbonila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, C-amido, C-tioamido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometanossulfonamido, tri- halometanossulfonila, silila, guanila, guanidino, ureído, fosfonila, amino e - NRxRy, em que Rx eRysão como definidos acima.
[0027] Um grupo “alquila” refere-se a um hidrocarboneto alifático saturado incluindo grupos de cadeia linear e de cadeia ramificada. Preferencialmente, o grupo alquila tem 1 a 20 átomos de carbono (sempre que uma faixa numérica; por exemplo “1 a 20”, for aqui mencionada, significa que o grupo, neste caso o grupo alquila, pode conter 1 átomo de carbono, 2 átomos de carbono, 3 átomos de carbono, etc. até e incluindo 20 átomos de carbono). Mais preferencialmente, é uma alquila de tamanho médio tendo 1 a 10 átomos de carbono. Com a máxima preferência, é uma alquila inferior tendo 1 a 4 átomos de carbono. O grupo alquila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituinte(s) é (são) preferencialmente um ou mais individualmente selecionados de tri- haloalquila, cicloalquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tio-hidróxi, tioalcóxi, tioarilóxi, tio- heteroarilóxi, tio-heteroaliciclóxi, ciano, halo, nitro, carbonila, tiocarbonila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, C-amido, C- tioamido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometanossulfonamido, tri-halometanossulfonila e combinados, um anel heteroalicíclico de cinco ou seis membros.
[0028] Um grupo “cicloalquila” refere-se a um grupo completamente de carbonos monocíclico ou de anéis fundidos (isto é, anéis que compartilham um par adjacente de átomos de carbono) em que um ou mais anéis não têm um sistema de elétrons-pi completamente conjugado. Exemplos, sem limitação, de grupos cicloalquila são ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclopenteno, ciclo-hexano, ciclo-hexeno, ciclo-heptano, ciclo-hepteno e adamantano. Um grupo cicloalquila pode ser substituído ou não substituído. Quando substituído, o(s) grupo(s) substituinte(s) é (são) preferencialmente um ou mais individualmente selecionados de alquila, arila, heteroarila, heteroalicíclico, hidróxi, alcóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heteroaliciclóxi, tio- hidróxi, tioalcóxi, tioarilóxi, tio-heteroarilóxi, tio-heteroaliciclóxi, ciano, halo, nitro, carbonila, O-carbamila, N-carbamila, O-tiocarbamila, N-tiocarbamila, C-amido, C-tioamido, N-amido, C-carbóxi, O-carbóxi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, tri-halometanossulfonamido, tri-halometanossulfonila, silila, amidino, guanidino, ureído, fosfonila, amino e -NRxRy com Rx e Rysão como definidos acima.
[0029] Um grupo “alquenila” refere-se a um grupo alquila, como aqui definido, tendo pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla de carbono-carbono.
[0030] Um grupo “alquinila” refere-se a um grupo alquila, como aqui definido, tendo pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação tripla de carbono-carbono.
[0031] Um grupo “hidróxi” refere-se a um grupo -OH.
[0032] Um grupo “alcoxila” refere-se a ambos um grupo -O-alquila e um grupo -O-cicloalquila como aqui definidos.
[0033] Um grupo “arilóxi” refere-se a ambos um grupo -O-arila e um grupo -O-heteroarila, como aqui definidos.
[0034] Um grupo “heteroarilóxi” refere-se a um grupo heteroarila-O- com heteroarila como aqui definido.
[0035] Um grupo “heteroaliciclóxi” refere-se a um grupo heteroalicíclico-O- com heteroalicíclico como aqui definido.
[0036] Um grupo “tio-hidróxi” refere-se a um grupo -SH.
[0037] Um grupo “tioalcóxi” refere-se a ambos um grupo S-alquila e um grupo -S-cicloalquila, como aqui definidos.
[0038] Um grupo “tioarilóxi” refere-se a ambos um grupo -S-arila e um grupo -S-heteroarila, como aqui definidos.
[0039] Um grupo “tio-heteroarilóxi” refere-se a um grupo heteroarila- S- com heteroarila como aqui definido.
[0040] Um grupo “tio-heteroaliciclóxi” refere-se a um grupo heteroalicíclico-S- com heteroalicíclico como aqui definido.
[0041] Um grupo “carbonila” refere-se a um grupo -C(=O)-R”, no qual R” é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, heteroarila (ligada através de um carbono do anel) e heteroalicíclico (ligado através de um carbono do anel), como cada um é aqui definido.
[0042] Um grupo “aldeído” refere-se a um grupo carbonila no qual R” e hidrogênio.
[0043] Um grupo “tiocarbonila” refere-se a um grupo -C(=S)-R”, com R” como aqui definido.
[0044] Um grupo “ceto” refere-se a um grupo -CC(=O)C- no qual o carbono em qualquer um dos ou em ambos os lados do C=O pode ser um carbono de um grupo alquila, cicloalquila, arila ou um carbono de um grupo heteroarila ou heteroalicíclico.
[0045] Um grupo “tri-halometanocarbonila” refere-se a um grupo Z3CC(=O)- com dito Z sendo um halogênio.
[0046] Um grupo “C-carbóxi” refere-se um grupo -C(=O)O-R”, com R” como aqui definido.
[0047] Um grupo “O-carbóxi” refere-se a um grupo R”C(-O)O-, com R” como aqui definido.
[0048] Um grupo “ácido carboxílico” refere-se a um grupo C-carbóxi no qual R” é hidrogênio.
[0049] Um grupo “tri-halometila” refere-se a um grupo -CZ3, em que Z é um grupo halogênio como definido aqui.
[0050] Um grupo “tri-halometanossulfonila” refere-se a um grupo Z3CS(=O)2- com Z como definido acima.
[0051] Um grupo “tri-halometanossulfonamido” refere-se a um grupo Z3CS(=O)2NRx- com Z como definido acima e Rx sendo H ou (C1-6)alquila.
[0052] Um grupo “sulfinila” refere-se a um grupo -S(=O)-R”, com R” sendo (C1-6)alquila.
[0053] Um grupo “sulfonila” refere-se a um grupo -S(=O)2R” com R” sendo (C1-6)alquila.
[0054] Um grupo “S-sulfonamido” refere-se a -S(=O)2NRXRY, com RX e RY sendo independentemente H ou (C1-6)alquila.
[0055] Um grupo “N-sulfonamido” refere-se a um grupo R”S(=O)2NRX-, com Rx sendo H ou (C1-6)alquila.
[0056] Um grupo “O-carbamila” refere-se a um grupo - OC(=O)NRxRy, com RX e RY independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
[0057] Um grupo “N-carbamila” refere-se a um grupo RxOC(=O)NRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
[0058] Um grupo “O-tiocarbamila” refere-se a um grupo - OC(=S)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
[0059] Um grupo “N-tiocarbamila” refere-se a um grupo RxOC(=S)NRy-, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
[0060] Um grupo “amino” refere-se a um grupo -NH2.
[0061] Um grupo “C-amido” refere-se a um grupo -C(=O)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
[0062] Um grupo “C-tioamido” refere-se a um grupo -C(=S)NRxRy, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
[0063] Um grupo “N-amido” refere-se a um grupo RxC(=O)NRy-, com Rx e Ry independentemente sendo H ou (C1-6)alquila.
[0064] Um grupo “ureído” refere-se a um grupo -NRxC(=O)NRyRy2 , com Rx, Ry e Ry2 sendo independentemente H ou (C1-6)alquila.
[0065] Um grupo “guanidino” refere-se a um grupo - RxNC(=N)NRyRy2, com Rx, Ry e Ry2 sendo independentemente H ou (C1- 6)alquila.
[0066] Um grupo “amidino” refere-se a um grupo RxRyNC(=N)-, com Rx e Ry sendo independentemente H ou (C1-6)alquila.
[0067] Um grupo “ciano” refere-se a um grupo -CN.
[0068] Um grupo “silila” refere-se a um grupo -Si(R”)3, com R” sendo (C1-6)alquila ou fenila.
[0069] Um grupo “fosfonila” refere-se a um grupo P(=O)(ORx)2 com Rx sendo (C1-6)alquila.
[0070] Um grupo “hidrazino” refere-se a um grupo -NRxNRyRy2, com Rx, Ry e Ry2 sendo independentemente H ou (C1-6)alquila.
[0071] Um grupo “N-lactama cíclico de anel de 4, 5 ou 6 membros” O O O Ntf, o X) refere-se a
[0072] Um grupo “espiro” é um grupo orgânico bicíclico com anéis conectados através de apenas um átomo. Os anéis podem ser de naturezas diferentes ou idênticos. O átomo conector é também chamado de espiroátomo, mais frequentemente um carbono quaternário (“espirocarbono”).
[0073] Um grupo “oxoespiro” ou “oxaespiro” é um grupo espiro tendo um oxigênio contido dentro da estrutura de anel bicíclico. Um grupo “dioxoespiro” ou “dioxaespiro” tem dois oxigênios dentro da estrutura de anel bicíclico.
[0074] Quaisquer dois grupos adjacentes R podem combinar-se para formarem um anel arila, cicloalquila, heteroarila ou heterocíclico adicional fundido no anel inicialmente possuindo aqueles grupos R.
[0075] É conhecido na técnica que átomos de nitrogênio em sistemas heteroarila podem estar “participando de uma ligação dupla de anel heteroarila” e isto refere-se à forma de ligações duplas nas duas estruturas tautoméricas que compreendem os grupos heteroarila de anel de cinco membros. Isto determina se os nitrogênios podem ser substituídos como é bem-conhecido pelos químicos na técnica. A descrição e as reivindicações da presente descrição são baseadas nos princípios gerais conhecidos da ligação química. É entendido que as reivindicações não abrangem as estruturas que conhecidamente são instáveis ou incapazes de existir com base na literatura.
[0076] Os sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-fármacos dos compostos aqui descritos estão dentro do escopo da invenção. O termo “sal farmaceuticamente aceitável” como aqui usado e nas reivindicações pretende incluir sais de adição de base não tóxicos. Os sais adequados incluem aqueles derivados de ácidos orgânicos e inorgânicos como, sem limitação, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfônico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido sulfínico, ácido cítrico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido sórbico, ácido aconítico, ácido salicílico, ácido ftálico e similares. O termo “sal farmaceuticamente aceitável”, tal como aqui usado, também pretende incluir sais de grupos ácidos, tais como um carboxilato, com contra-íons como amônio, sais de metais alcalinos, particularmente sais de sódio ou potássio, sais de metais alcalinoterrosos, particularmente cálcio ou magnésio e sais com bases orgânicas adequadas tais como alquilaminas inferiores (metilamina, etilamina, ciclo-hexilamina e similares) ou com alquilaminas inferiores substituídas (por exemplo, alquilaminas substituídas com hidroxila, tais como dietanolamina, trietanolamina ou tris(hidroximetil)- aminometano) ou com bases tais como piperidina ou morfolina.
[0077] Como mencionado acima, os compostos da invenção também incluem “pró-fármacos”. O termo “pró-fármaco” como aqui usado engloba tanto o termo “ésteres de pró-fármacos” quanto o termo “éteres de pró- fármacos”.
[0078] Como apresentado acima, a invenção é direcionada a um composto, incluindo os sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, que é selecionado a partir de um composto da Fórmula I: em que R1 é isopropenila ou isopropila; A é -C1-6alquil-OR0; em que R0 é heteroarila-Q0; Q0 é selecionado a partir do grupo de -H, -CN, -C1-6 alquila, - COOH, -Ph, -OC1-6 alquila, -halo, -CF3, Y é selecionado a partir do grupo de --COOR2, - C(O)NR2SO2R3, -C(O)NHSO2NR2R2, -SO2NR2C(O)R2, -tetrazol e - CONHOH; R2 é -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila alquilsubstituída ou -C1-6 alquila arilsubstituída; W é ausente ou é -CH2- ou -CO-; R3 é -H, -C1-6alquila ou -C1-6alquila alquilsubstituída; R4 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquil-C3-6 cicloalquila, -C1-6 alquila com -C1-6 substituído, -C1-6 alquil-Q1, -C1-6 alquil-C3-6 cicloalquil-Q1, arila, heteroarila, heteroarila substituída, -COR6, - SO2R7, -SO2NR2R2 e em que G é selecionado do grupo de -O-, -SO2- e -NR12-; em que Q1 é selecionado do grupo de -C1-6 alquila, - C1-6 fluoroalquila, heteroarila, heteroarila substituída, halogênio, CF3, -OR2, - COOR2, -NR8R9, -CONR8R9e -SO2R7; R5 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C3-6 cicloalquila, alquila alquilsubstituída com -C1-6, -C1-6 alquil-NR8R9, -COR3, - SO2R7 e -SO2NR2R2; com a condição de que R4 ou R5 não é -COR6 quando W é - CO-; com a condição adicional de que apenas um de R4 ou R5 é selecionado a partir do grupo de -COR6, -COCOR6,-SO2R7 e -SO2NR2R2; R6 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila-alquila substituída, -C3-6 cicloalquila, -C3-6 cicloalquila substituída-Q2, -C1-6 alquila-Q2, -C1-6 alquila-alquila substituída-Q2,-C3-6 cicloalquila-Q2, arila-Q2, -NR13R14 e -OR15; em que Q2 é selecionado a partir do grupo de arila, heteroarila, heteroarila substituída, --OR2, -COOR2, -NR8R9, SO2R7, -CONHSO2R3 e - CONHSO2NR2R2; R7 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6alquila, -C1-6 alquila substituída, -C3-6 cicloalquila, -CF3, arila e heteroarila; R8 e R9 são independentemente selecionados a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila substituída, arila, heteroarila, arila substituída, heteroarila substituída, -C1-6 alquil-Q2 e -COOR3, ou R8 e R9 são tomados em conjunto com o N adjacente para formar um ciclo selecionado a partir do grupo de: M é selecionado a partir do grupo de –R15, -SO2R2, - SO2NR2R2, -OH e -NR2R12; V é selecionado a partir do grupo de -CR10R11-, -SO2-, -O- e - NR12-; com a condição de que apenas um de R8 ou R9 pode ser - COOR3; R10e R11 são independentemente selecionados a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila substituída e -C3-6 cicloalquila; R12 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C1-6 alquila alquilsubstituída, -CONR2R2, -SO2R3 e -SO2NR2R2; R13 e R14 são independentemente selecionados a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -C3-6 cicloalquila, -C1-6 alquila substituída, -C1-6 alquil-Q3, -C1-6 alquil-C3-6 cicloalquil-Q3 e C1-6 alquila substituída-Q3; Q3 é selecionado a partir do grupo de heteroarila, heteroarila substituída, -NR2R12, -CONR2R2, -COOR2, -OR2 e -SO2R3; R15 é selecionado a partir do grupo de -C1-6 alquila, -C3-6 cicloalquila, -C1-6 alquila substituída, -C1-6 alquila-Q3, -C1-6 alquila-C3-6 cicloalquila-Q3 e -C1-6 alquila substituída-Q3; R16 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, -NR2R2 e -COOR2; com a condição de que quando V é -NR12-; R16 não é -NR2R2; R17 é selecionado a partir do grupo de -H, -C1-6 alquila, - COOR3 e arila.
[0079] Em uma modalidade preferida da invenção, R1 é isopropenila.
[0080] Também é preferido que Y seja -COOR2. Mais preferivelmente, R2 nessa modalidade é -H.
[0081] Em uma outra modalidade preferida da invenção, no grupo R0 a porção “heteroarila” é preferivelmente selecionada a partir do grupo de:
[0082] É também preferido que não exista um grupo alquila intermediário ou outro grupo substituinte entre a porção -O e o grupo R0 no substituinte A.
[0083] É adicionalmente preferido que R4 seja -C1-6 alquila-Q1.
[0084] Também é preferida a modalidade em que Q1 é -NR8R9.
[0085] Adicionalmente, quando R8 e R9 são tomados em conjunto com o -N adjacente para formar um ciclo, o ciclo preferido será selecionado a partir do grupo de:
[0086] Em algumas modalidades, é também preferido que Q0 seja - CN.
[0087] Em uma outra modalidade preferida da invenção, R1 é isopropenila, no grupo R0 a porção “heteroarila” é selecionada a partir do grupo de:
[0088] Y é -COOH, R4 é -C1-6 alquila-Q1, Q1 é -NR8R9 e R8 e R9 são tomados juntos com o -N adjacente para formar um ciclo que é selecionado a partir do grupo de:
[0089] Nessa modalidade, também é preferido que R7 e R16 sejam, cada um, -H ou -C1-6 alquila.
[0090] Os compostos preferidos, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, como parte da invenção, incluem os seguintes:
[0091] Em uma outra modalidade, os compostos preferidos, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, serão os seguintes:
[0092] Os compostos acima representam a mistura de diastereoisômeros e os dois diastereômeros individuais. Em certas modalidades, um dos diastereômeros específicos pode ser particularmente preferido.
[0093] Os compostos da presente invenção, de acordo com todas as várias modalidades descritas acima, podem ser administrados oralmente, parenteralmente (incluindo injeções subcutâneas, injeção intravenosa, intramuscular, intraesternal ou técnicas de infusão), por pulverização por inalação ou por via retal e por outros meios, em formulações unitárias de dosagem contendo carreadores, excipientes e diluentes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos disponíveis para o versado na técnica. Um ou mais adjuvantes podem também ser incluídos.
[0094] Dessa forma, de acordo com a presente invenção, é adicionalmente provido um método de tratamento e uma composição farmacêutica, para tratar infecções virais como infecção por HIV e AIDS. O tratamento envolve administrar a um paciente que necessita da mesma uma composição farmacêutica que contém uma quantidade eficaz antiviral de um ou mais dos compostos da Fórmula I, junto com um ou mais carreadores, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Como aqui usado, o termo “quantidade eficaz antiviral” significa a quantidade total de cada componente ativo da composição e do método que é suficiente para mostrar um benefício significativo para o paciente, isto é, inibição, melhoria ou cura de condições agudas caracterizadas pela inibição de infecção por HIV. Quando aplicado a um ingrediente ativo individual, administrado sozinho, o termo refere-se apenas àquele ingrediente. Quando aplicado a uma combinação, o termo refere-se às quantidades combinadas dos ingredientes ativos que resultam no efeito terapêutico, administrado em combinação, seja em série ou simultaneamente. Os termos “tratar, tratando, tratamento” como aqui usados e nas reivindicações significam prevenir, inibir, melhorar e/ou curar doenças e condições associadas à infecção por HIV.
[0095] As composições farmacêuticas da invenção podem estar sob a forma de comprimidos ou suspensões oralmente administráveis; e também pulverizadores nasais, preparações estéreis injetáveis, por exemplo, como suspensões oleaginosas ou aquosas estéreis injetáveis ou supositórios. Carreadores, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados nas composições farmacêuticas e são aqueles usados na técnica de preparações farmacêuticas.
[0096] Quando administradas oralmente como uma suspensão, estas composições são preparadas de acordo com técnicas tipicamente conhecidas na técnica de formulação farmacêutica e podem conter celulose microcristalina para conceder volume, ácido algínico ou alginato de sódio como um agente suspensor, metilcelulose como um agente intensificador de viscosidade e agentes adoçantes/flavorizantes conhecidos na técnica. Como comprimidos de liberação imediata, estas composições podem conter celulose microcristalina, fosfato de dicálcio, amido, estearato de magnésio e lactose e/ou outros excipientes, aglutinantes, extensores, desintegrantes, diluentes e lubrificantes conhecidos na técnica.
[0097] As soluções ou suspensões injetáveis podem ser formuladas de acordo com a técnica, usando diluentes ou solventes adequados parenteralmente aceitáveis, não tóxicos, como manitol, 1,3-butanodiol, água, solução de Ringer ou solução isotônica de cloreto de sódio ou agentes dispersantes ou umectantes ou suspensores adequados, como óleos estéreis, insípidos, fixos, incluindo monoglicerídeos ou diglicerídeos sintéticos e ácidos graxos, incluindo ácido oleico.
[0098] Os compostos aqui apresentados podem ser administrados oralmente a humanos em uma faixa de dosagem de cerca de 1 a 100 mg/kg de peso corporal em doses divididas, geralmente durante um período prolongado, como dias, semanas, meses ou mesmo anos. Uma faixa de dosagem preferida é cerca de 1 a 10 mg/kg de peso corporal oralmente em doses divididas. Outra faixa de dosagem preferida é cerca de 1 a 20 mg/kg de peso corporal em doses divididas. Será entendido, no entanto, que o nível de dose específico e a frequência de dosagem para qualquer paciente específico podem ser variados e dependerão de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico utilizado, a estabilidade metabólica e a duração da ação daquele composto, a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo, a dieta, o modo e o tempo de administração, a taxa de excreção, a combinação de fármacos, a severidade da condição específica e o hospedeiro submetido à terapia.
[0099] Também são aqui consideradas combinações dos compostos da Fórmula I aqui apresentados, juntas com um ou mais outros agentes úteis no tratamento de AIDS. Por exemplo, os compostos desta descrição podem ser eficazmente administrados, seja em períodos de pré-exposição e/ou de pós-exposição, em combinação com quantidades eficazes dos agentes antivirais contra AIDS, imunomoduladores, agentes anti-infecciosos ou vacinas, como aqueles na seguinte tabela não limitadora: ANTIVIRAIS
[00100] Adicionalmente, os compostos da descrição aqui apresentados podem ser usados em combinação com inibidores da entrada do HIV. Exemplos de tais inibidores da entrada do HIV são discutidos em DRUGS OF THE FUTURE 1999, 24(12), pp. 1355-1362; CELL, Vol. 9, pp. 243-246, Oct. 29, 1999; e DRUG DISCOVERY TODAY, Vol. 5, No. 5, May 2000, pp. 183-194 e Inhibitors of the entry of HIV into host cells. Meanwell, Nicholas A.; Kadow, John F., Current Opinion in Drug Discovery & Development (2003), 6(4), 451-461. Especificamente os compostos podem ser utilizados em combinação com inibidores da fixação, inibidores da fusão e antagonistas de receptor de quimiocina intencionados para o correceptor de CCR5 ou CXCR4. Os inibidores da fixação de HIV são também apresentados na patente US 7.354.924 e na patente US 7.745.625.
[00101] Será entendido que o escopo de combinações dos compostos deste pedido com agentes antivirais de AIDS, imunomoduladores, agentes anti-infecciosos, inibidores da entrada do HIV ou vacinas, não é limitado à lista na Tabela acima, mas inclui, em princípio, qualquer combinação com qualquer composição farmacêutica útil para o tratamento de AIDS.
[00102] As combinações preferidas são tratamentos simultâneos ou alternados com um composto da presente descrição e um inibidor da protease de HIV e/ou um inibidor não nucleosídeo da transcriptase reversa de HIV. Um quarto componente opcional na combinação é um inibidor nucleosídeo da transcriptase reversa de HIV, como AZT, 3TC, ddC ou ddI. Um inibidor da protease de HIV preferido é REYATAZ® (ingrediente ativo Atazanavir). Tipicamente uma dose de 300 a 600 mg é administrada uma vez por dia. Este pode ser coadministrado com uma dose baixa de Ritonavir (50 a 500 mg). Outro inibidor da protease de HIV preferido é KALETRA®. Outro inibidor da protease de HIV útil é indinavir, que é o sal de sulfato de etanolato de N- (2(R)-hidroxi-1-(S)-indanil)-2(R)-fenilmetil-4-(S)-hidroxi-5-(1-(4-(3-piridil- metil)-2(S)-N’-(t-butilcarboxamido)-piperazinil))-pentanoamida e é sintetizado de acordo com a patente US 5.413.999. Indinavir é, de modo geral, administrado em uma dosagem de 800 mg três vezes por dia. Outros inibidores de protease preferidos são nelfinavir e ritonavir. Outro inibidor da protease de HIV preferido é saquinavir que é administrado em uma dosagem de 600 ou 1.200 mg tid. Os inibidores não nucleosídeos da transcriptase reversa de HIV preferidos incluem efavirenz. Estas combinações podem ter efeitos surpreendentes sobre a limitação da disseminação e do grau de infecção de HIV. As combinações preferidas incluem aquelas com o seguinte (1) indinavir com efavirenz e, opcionalmente, AZT e/ou 3TC e/ou ddI e/ou ddC; (2) indinavir e qualquer um de AZT e/ou ddI e/ou ddC e/ou 3TC, em particular, indinavir e AZT e 3TC; (3) estavudina e 3TC e/ou zidovudina; (4) sal de fumarato de tenofovir disoproxila e emtricitabina.
[00103] Em tais combinações o(s) composto(s) da presente invenção e outros agentes ativos podem ser administrados separadamente ou em conjunto. Além disso, a administração de um elemento pode ser antes da, simultânea com a ou subsequente à, administração do(s) outro(s) agente(s). QUÍMICA GERAL (MÉTODOS DE SÍNTESE)
[00104] A presente invenção compreende compostos da Fórmula I, suas formulações farmacêuticas e seu uso em pacientes sofrendo de ou suscetíveis à infecção por HIV. Os compostos da Fórmula I também incluem sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Procedimentos para construir os compostos da Fórmulas I e os intermediários úteis para a síntese deles são descritos após as Abreviações. Abreviações
[00105] Uma ou mais das seguintes abreviações, as quais, em sua maioria, são abreviações convencionais bem conhecidas pelos versados na técnica, podem ser usadas em toda a descrição da invenção e nos exemplos: RT = temperatura ambiente BHT = 2,6-di-terc-butil-4-hidroxitolueno CSA = ácido canforossulfônico LDA = di-isopropilamida de lítio KHMDS = bis(trimetilsilil)amida de potássio SFC = cromatografia em fluido supercrítico Quant = quantitativo TBDMS = terc-butildimetilsilano PTFE = politetrafluoroetileno NMO = N-óxido de 4-metilmorfolina THF = tetra-hidrofurano TLC = cromatografia em camada fina DCM = diclorometano DCE = dicloroetano TFA = ácido trifluoroacético LCMS = cromatografia líquida/espectrometria de massa Prep = preparativa HPLC = cromatografia líquida de alta eficiência DAST = trifluoreto de (dietilamino)enxofre TEA = trietilamina DIPEA = N,N-di-isopropiletilamina HATU = [hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)- 1,1,3,3-tetrametilurônio] DCC = N,N’-diciclo-hexilcarbodiimida DMAP = dimetilaminopiridina TMS = trimetilsilila RMN = ressonância magnética nuclear DPPA = difenilfosforil azida AIBN = azobisisobutironitrila TBAF = fluoreto de tetrabutilamônio DMF = dimetilformamida TBTU = tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’- tetrametilurônio Min(s) = minuto(s) h = hora(s) sat. = saturada TEA = trietilamina EtOAc = acetato de etila TFA = ácido trifluoroacético PCC = clorocromato de piridínio TLC = cromatografia em camada fina Tf2NPh = (trifluorometilsulfonil)metanossulfonamida dioxano = 1,4-dioxano PG = grupo protetor atm = atmosfera(s) mol = mol(es) mmol= milimol(es) mg = miligrama(s) μg = micrograma(s) μl = microlitro(s) μm= micrômetro(s) mm= milímetro(s) Rpm = revoluções por minuto SM = material de partida TLC = cromatografia em camada fina AP = porcentagem de área Equiv. = equivalente(s) DMP = periodinano de Dess-Martin TMSCl = cloreto de trimetilsilila TBSCl = cloreto de terc-Butildimetilsilila TBSOTf = trifluorometanossulfonato de trimetilsilila PhMe = tolueno PhNTf2 = N-Fenil-bis(trifluorometanossulfonimida) S-Phos = 2-Diciclo-hexilfosfino-2’,6’-dimetoxibifenila TFDO = metil(trifluorometil)dioxirano TEMPO = 2,2,6,6-tetrametilpiperidinilóxi DI = água deionizada
[00106] Os termos “C-3” e “C-28” referem-se a certas posições de um núcleo de triterpeno conforme numerado de acordo com as regras da IUPAC (posições representadas abaixo em relação a um triterpeno ilustrativo: betulina):
[00107] A mesma numeração é mantida ao se referir à série de compostos em esquemas e descrições gerais de métodos.
EXEMPLOS
[00108] Os seguintes exemplos ilustram as sínteses típicas dos compostos da Fórmula I conforme descritas de modo geral exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem limitar maneira a descrição. Os reagentes e materiais de partida estão facilmente disponíveis para uma pessoa de habilidade comum na técnica. Química Procedimentos típicos e caracterização dos exemplos selecionados: Salvo indicação em contrário, os solventes e reagentes foram usados diretamente como obtidos das fontes comerciais e as reações foram realizadas sob uma atmosfera de nitrogênio. A cromatografia flash foi realizada em gel de Sílica 60 (tamanho de partícula 0,040 a 0,063, fornecimento de EM Science). Os espectros de 1H RMN foram registrados em Bruker DRX-500f a 500 MHz (ou Bruker AV 400 MHz, Bruker DPX-300B ou Varian Gemini 300 a 300 MHz conforme mencionado). Os deslocamentos químicos foram relatados em ppm na δ escala em relação a δTMS = 0. As seguintes referências internas foram usadas para os prótons residuais nos seguintes solventes: CDCl3 (δH 7,26), CD3OD (δH 3,30), acético-d4 (Ácido Acético d4) (δH 11,6, 2,07), mistura de DMSO ou DMSO-D6-CDCl3 (δH 2,50 e 8,25) (razão 75%:25%) e DMSO-D6 (δH 2,50). Acrônimos padrão foram utilizados para descrever os padrões de multiplicidade: s (singlete), br. s (singlete largo), d (dublete), t (triplete), q (quarteto), m (multiplete), b (largo), app (aparente). A constante de acoplamento (J) é em Hertz. Todos os dados da Cromatografia Líquida (LC) foram registrados em um cromatógrafo líquido Shimadzu LC-10AS usando um detector UV-Vis SPD-10AV com dados de Espectrometria de Massa (MS) determinados usando uma Plataforma Micromass para LC em modo de eletropulverização. Métodos LCMS
[00109] Método de LCMS 1: % B inicial = 0 % B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Vazão = 1 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Phenomenex LUNA C18 2,0 x 30mm 3μm Método de LCMS 2: % B inicial = 20 % B final = 100 Tempo de gradiente = 3 min Vazão = 0,6 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Xbridge Phenyl 2,1 X 50 mm 2,5 μm Método de LCMS 3: % B inicial = 20 % B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Vazão = 0,6 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Xbridge Phenyl 2,1 X 50 mm 2,5 μm Método de LCMS 4: % B inicial = 0 % B final = 100 Tempo de gradiente = 4 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Phenomenex LUNA C18 2,0 x 50mm 3μm Método de LCMS 5: % B inicial = 20 % B final = 100 Tempo de gradiente = 3 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Phenomenex LUNA C18 2,0 x 50mm 3μm Método de LCMS 6: % B inicial = 20 % B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Phenomenex LUNA C18 2,0 X 50 mm 3μm Método de LCMS 7: % B inicial = 20 % B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Vazão = 0,5 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Xbridge Phenyl 2,1 X 50 mm 2,5 μm Método de LCMS 8: % B inicial = 20 % B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Xbridge Phenyl 2,1 X 50 mm 2,5 μm Método de LCMS 9: % B inicial = 0 % B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Vazão = 1,0 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 5% de MeCN - 95% de H2O - 10 mM de acetato de amônio Solvente B = 95% de MeCN - 5% de H2O - 10 mM de acetato de amônio Coluna = PHENOMENEX-LUNA C18 2,0 X 30mm 3μm Método de LCMS 10: % B inicial = 0 % B final = 100 Tempo de gradiente = 4 min Vazão = 0,6 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Xbridge Phenyl 2,1 X 50 mm 2,5 μm Método de LCMS 11: % B inicial = 0 % B final = 100 Tempo de gradiente = 4 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Phenomenex LUNA C18 2,0 X 50 mm 3μm Método de LCMS 12: % B inicial = 40 % B final = 60 Tempo de gradiente = 4 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 254 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Xbridge Phenyl 2,1 X 50 mm 2,5 μm Método de LCMS 13: % B inicial = 35 % B final = 100 Tempo de gradiente = 4 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 10% de MeOH - 90% de H2O - 0,1% de TFA Solvente B = 90% de MeOH - 10% de H2O - 0,1% de TFA Coluna = Phenomenex LUNA C18 2,0 X 50 mm 3μm Método de LCMS 14 Condições: 0% B ^ 100% B durante gradiente de 4 minutos; manter a 100% B durante 1 min Solvente A: 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B: 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna: Phenomenex Luna C18, 3 mm, 2,0 x 50 mm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de LCMS 15 Condições: 0% B ^ 100% B durante gradiente de 2 minutos; manter a 100% B durante 1 min Solvente A: 90% de água, 10% de metanol, 0,1% de TFA Solvente B: 10% de água, 90% de metanol, 0,1% de TFA Coluna: Phenomenex Luna C18, 2,0 x 50 mm, 3 μm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de LCMS 16 % de B Inicial = 2,% de B Final = 98 durante gradiente de 1,5 minuto, manter a 100% de B durante 0,5 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda do detector = 220 nm Solvente A = 100% de água, 0,05% de TFA Solvente B = 100% de acetonitrila, 0,05% de TFA Coluna = Waters Aquity UPLC BEH C18 2,1 X 50 mm 1,7 um Temp do forno = 40 °C Método de LCMS 17 % de B Inicial = 2,% de B Final = 98 durante gradiente de 3 minutos, manter a 98% de B durante 1 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda do detector = 220 nm Solvente A = 100% de água, 0,05% de TFA Solvente B = 100% de acetonitrila, 0,05% de TFA Coluna = Waters Aquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 μm Temp do forno = 40 °C Método de LCMS 18 % de B Inicial = 0,% de B Final = 100 durante gradiente de 4 minutos, manter a 100% de B durante 1 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda do detector = 220 nm Solvente A = 95% de água, 5% de acetonitrila, 10 mM de acetato de amônio Solvente B = 5% de água, 95% de acetonitrila, 10 mM de acetato de amônio Coluna = Phenomenex Luna C18, 50 x 2 mm, 3 μm Temp do forno = 40 °C Método de LCMS 19 % de B Inicial = 2,% de B Final = 98 durante gradiente de 4 minutos, manter a 98% de B durante 1 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda do detector = 220 nm Solvente A = 100% de água, 0,05% de TFA Solvente B = 100% de acetonitrila, 0,05% de TFA Coluna = Waters Aquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 μm Temp do forno = 40 °C Método de LCMS 20 % de B Inicial = 2,% de B Final = 98 durante gradiente de 2 minutos, manter a 98% de B durante 1 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda do detector = 220 nm Solvente A = 100% de água, 0,05% de TFA Solvente B = 100% de acetonitrila, 0,05% de TFA Coluna = Waters Aquity UPLC BEH C18, 2,1 x 50 mm, 1,7 μm Temp do forno = 40 °C Método de LCMS 21 % de B Inicial = 0,% de B Final = 100 durante gradiente de 2 minutos, manter a 100% de B durante 3 min Vazão = 0,8 mL/min Comprimento de onda do detector = 220 nm Solvente A = 95% de água, 5% de acetonitrila, 10 mM de acetato de amônio Solvente B = 5% de água, 95% de acetonitrila, 10 mM de acetato de amônio Coluna = Phenomenex Luna C18, 50 x 2 mm, 3 μm Temp do forno = 40 °C Métodos de HPLC Preparativa Método de HPLC Preparativa 1 Condições: 30% B ^ 100% B durante gradiente de 20 minutos; manter a 100% B durante 4 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Xbridge 30 x 100 mm, 5 μm Vazão: 40 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Preparativa 2 Condições: 10% B ^ 100% B durante gradiente de 25 minutos Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire 30 x 150 mm, 5 um Vazão: 40 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Preparativa 3 Condições: 10% B ^ 100% B durante gradiente de 20 minutos; manter a 100% B durante 5 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire 30 x 150 mm, 5 um Vazão: 40 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Preparativa 4 Condições: 30% B ^ 100% B durante gradiente de 20 minutos; manter a 100% B durante 5 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire 30 x 150 mm, 5 um Vazão: 40 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Preparativa 5: % de B Inicial = 20,% de B Final = 100 durante gradiente de 10 min, manter a 100% de B durante 4 min Vazão = 50 ml/min Comprimento de onda = 220 Par de Solventes = Água - acetonitrila-TFA Solvente A = 90% de água -10% de acetonitrila-0,1% de TFA Solvente B = 10% de água -90% de acetonitrila-0,1% de TFA Coluna = Waters Sunfire C18, 5 μm, 30 x 150 mm Método de HPLC Preparativa 6 Condições: 0% B ^ 100% B durante gradiente de 20 minutos Solvente A: 10% de acetonitrila, 90% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 90% de acetonitrila, 10% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire C18, 30 x 150 mm, 5 μm Vazão: 50 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Preparativa 7 Condições: 30% B ^ 100% B durante gradiente de 20 minutos Solvente A: 10% de acetonitrila, 90% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 90% de acetonitrila, 10% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire C18, 30 x 150 mm, 5 μm Vazão: 50 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Preparativa 8 Condições: 20% B ^ 100% B durante gradiente de 15 minutos Solvente A: 10% de acetonitrila, 90% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 90% de acetonitrila, 10% de água 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire C18, 30 x 150 mm, 5 μm Vazão: 50 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Métodos de MPLC Preparativa Método de MPLC Preparativa 1 Condições: 30% B para 1 volume de coluna, gradiente de 30% B para 80% B durante 7 volumes de coluna, gradiente de 80% B para 100% B durante 0,5 volume de coluna, 100% B para 2 volumes de coluna Solvente A = 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B = 95% de acetonitrila, 5% de água, 0,1% de TFA Coluna = Redi Sep Gold (150 g) Vazão = 60 mL/min Comprimento de onda do detector = 220 nm Método de MPLC Preparativa 2 Condições: 30% B para 1 volume de coluna, gradiente de 30% B para 80% B durante 10 volumes de coluna, 100% B para 2 volumes de coluna Solvente A = 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B = 95% de acetonitrila, 5% de água, 0,1% de TFA Coluna = Redi Sep Gold (150 g) Vazão = 60 mL/min Comprimento de onda do detector = 220 nm Métodos de HPLC Analítica Método de HPLC Analítica 1 Condições: 10% B ^ 100% B durante gradiente de 15 min; manter a 100% B durante 10 min Solvente A: 10% de metanol, 90% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 90% de metanol, 10% de água, 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire C18, 4,6 x 150 mm, 3,5 mm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Analítica 2 Condições: 10% B ^ 100% B durante gradiente de 15 min; manter a 100% B durante 10 min Solvente A: 10% de metanol, 90% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 90% de metanol, 10% de água, 0,1% de TFA Coluna: Waters Xbridge phenyl, 4,6 x 150 mm, 3,5 mm Vazão: 1 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Analítica 3 Condições: 10% B ^ 100% B durante gradiente de 15 min; manter a 100% B durante 10 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água, 0,1% de TFA Coluna: Waters Sunfire C18, 3,0 x 150 mm, 3,5 um Vazão: 0,5 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Método de HPLC Analítica 4 Condições: 10% B ^ 100% B durante gradiente de 15 min; manter a 100% B durante 10 min Solvente A: 5% de acetonitrila, 95% de água, 0,1% de TFA Solvente B: 95% de acetonitrila, 5% de água, 0,1% de TFA Coluna: Waters Xbridge phenyl, 3,0 x 150 mm, 3,5 um Vazão: 0,5 mL/min Comprimento de onda do detector: 220 nm Preparação de intermediários Intermediário 1. Preparação de 1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00110] Uma mistura de 4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila (12,7 g, 75 mmol), etileno glicol (21 ml, 373 mmol), ácido (1S)-(+)-10- canforsulfônico (0,175 g, 0,75 mmol) e tolueno anidro (300 mL) foi submetida a refluxo com um captador de água Dean-Stark durante 8 horas. A mistura foi resfriada bruscamente com 100 mL de solução saturada de bicarbonato de sódio e foi vigorosamente agitada. A fase orgânica separada foi lavada com água (100 mL), seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 15% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado como um óleo (15,9 g, 99%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,13 (q, J=7,2 Hz, 2H), 3,95 (s, 4H), 2,34 (tt, J=10,4, 4,0 Hz, 1H), 1,98 - 1,90 (m, 2H), 1,87 - 1,75 (m, 4H), 1,61 - 1,51 (m, 2H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H). Intermediário 2. Preparação de 8-formil-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila.
[00111] A uma solução de 1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (21 g, 98 mmol) em THF (150 mL) a -78 °C, adicionou-se LDA 2M (64 mL, 127 mmol) gota a gota. A solução resultante foi agitada a -78 °C durante 1 h, depois em um banho durante 1,5 h. A mistura de reação foi resfriada novamente a -78 °C e peneiras moleculares foram adicionadas. Formiato de etila seco (12 mL, 147 mmol) foi adicionado gota a gota lentamente ao longo de 1 h. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 1 h. O banho frio foi removido e a reação foi resfriada bruscamente com uma solução saturada de NH4Cl em HCl 0,5 N (250 mL) gota a gota. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 200 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com solução saturada de NH4Cl em HCl 0,5 N (200 mL), salmoura (200 mL), seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 20% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado como um óleo (9,3 g, 39%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,54 (s, 1H), 4,21 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,98 - 3,90 (m, 4H), 2,25 - 2,16 (m, 2H), 2,10 - 2,01 (m, 2H), 1,74 - 1,60 (m, 4H), 1,27 (t, J=7,2 Hz, 3H). Intermediário 3. Preparação de 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano- 8-carboxilato de etila.
[00112] A uma solução do 8-formil-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila (1,0 g, 4,13 mmol) em EtOH (10 mL) a 0 °C, adicionou- se NaBH4 (0,187 g, 4,95 mmol). A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 h. A reação foi resfriada bruscamente com NH4Cl saturado (10 mL) e foi então diluída com H2O até dissolvido. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 50 mL), lavada com salmoura (50 mL), seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 25% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado como um óleo (0,86 g, 85%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,21 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,99 - 3,91 (m, 4H), 3,65 (d, J=6,5 Hz, 2H), 2,19 - 2,11 (m, 2H), 1,68 (dd, J=6,8, 5,5 Hz, 4H), 1,63 - 1,57 (m, 2H), 1,29 (t, J=7,0 Hz, 3H). Intermediário 4. Preparação de 8-((benzoiloxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00113] A uma solução de 8-(hidroximetil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (3,0 g, 12,3 mmol) em piridina (60 mL), adicionou-se DMAP (0,3 g, 2,5 mmol). A mistura foi aquecida a 50 °C e foi adicionado anidrido benzoico (3,1 g, 13,5 mmol). A mistura de reação foi agitada a 50 °C por 3 h. A mistura de reação foi concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (3 x 50 mL), lavado com salmoura (50 mL), seco com Na2SO4 e concentrado a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica com 0 a 20% de hexano/EtOAc para dar o produto desejado como um óleo (4,3 g, 100%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,01 (dd, J=8,4, 1,4 Hz, 2H), 7,60 - 7,54 (m, 1H), 7,47 - 7,40 (m, 2H), 4,35 (s, 2H), 4,20 (q, J=7,2 Hz, 2H), 3,99 - 3,92 (m, 4H), 2,36 - 2,23 (m, 2H), 1,76 - 1,63 (m, 6H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 3H). Intermediário 5. Preparação de benzoato de (1-(etoxicarbonil)-4-oxociclo- hexil)metila.
[00114] dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (4,3 g, 12,4 mmol) em acetona (120 mL) e HCl 0,5 N (24,8 mL, 12,4 mmol) foi agitada a 50 °C durante a noite. A mistura de reação foi neutralizada com Na2CO3 aquoso saturado e e parcialmente concentrada a vácuo para remover acetona. O resíduo foi diluído com H2O (50 mL) e extraído com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4 e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 30% de hexano/EtOAc para dar o produto desejado como um óleo (3,8 g, 100%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,01 (d, J=7,6 Hz, 2H), 7,62 - 7,55 (m, 1H), 7,49 - 7,42 (m, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,28 (q, J=7,1 Hz, 2H), 2,61 - 2,48 (m, 4H), 2,47 - 2,37 (m, 2H), 1,91 - 1,79 (m, 2H), 1,28 (t, J=7,1 Hz, 3H). Intermediário 6. Preparação de benzoato de (1-(etoxicarbonil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00115] Uma solução de benzoato de (1-(etoxicarbonil)-4-oxociclo- hexil)metila (3,8 g, 12,4 mmol) e 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N- ((trifluorometil)sulfonil)metanossulfonamida (4,95 g, 13,8 mmol) em THF (120 mL) foi resfriada a -78 °C. A essa solução adicionou-se KHMDS (1 M em THF) (16,4 mL, 16,4 mmol). A solução resultante foi agitada a -78 °C durante 2 h. A reação foi resfriada bruscamente com NH4Cl saturado aquoso (50 mL), extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4 e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 20% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado (3,8 g, 69%) como um óleo. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 8,00 (dd, J=8,4, 1,1 Hz, 2H), 7,62 - 7,56 (m, 1H), 7,49 - 7,44 (m, 2H), 5,80 (td, J=3,2, 1,6 Hz, 1H), 4,46 - 4,40 (m, 2H), 4,21 (qd, J=7,1, 2,1 Hz, 2H), 2,93 - 2,83 (m, 1H), 2,59 - 2,27 (m, 4H), 1,99 - 1,90 (m, 1H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H). Intermediário 7. Benzoato de (1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00116] Uma mistura de benzoato de (1-(etoxicarbonil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (3,8 g, 8,7 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,4 g, 9,5 mmol), acetato de potássio (2,6 g, 26,0 mmol) e aduto de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (0,2 g, 0,260 mmol) em 1,4-dioxano (80 mL) foi resfriado a -78 °C. Foram realizados três ciclos de evacuação do balão e purga com nitrogênio. A mistura foi agitada a 70 °C por 3 h. A mistura foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4 e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 20% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado (5,8 g, 67%) como um óleo. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,00 (dd, J=8,4, 1,4 Hz, 2H), 7,59 - 7,54 (m, 1H), 7,46 - 7,41 (m, 2H), 6,54 (dt, J=3,6, 1,9 Hz, 1H), 4,44 (d, J=10,8 Hz, 1H), 4,39 (d, J=10,8 Hz, 2H), 4,17 (q, J=7,2 Hz, 2H), 2,77 - 2,68 (m, 1H), 2,29 - 2,20 (m, 3H), 2,05 - 1,97 (m, 1H), 1,92 - 1,83 (m, 1H), 1,27 (s, 12H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H). Intermediários 8 e 9. Separação quiral de benzoato de (S)-(1-(etoxicarbonil)- 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila e benzoato de (R)-(1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00117] A mistura racêmica foi separada por cromatografia de fluido supercrítico (SFC) para dar benzoato de (S)-(1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila e benzoato de (R)-(1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex- 3-en-1-il)metila. Detalhes experimentais de CFS: Coluna: ChiralCel OJ-H, 30 x 250mm, 5μm Fase móvel: 5% de MeOH / 95% de CO2 Pressão: 100 bar (10 Mpa) Temperatura: 40°C Vazão: 70 mL/min UV: 225 nm Injeção: 0,50 mL (~100 mg/mL em IPA:ACN:MeOH, 2:2:1) Coleta de fração: Inclinação e Nível (com 6 mL/min de composição de MeOH): Janela de pico 1: 3,00’ - 4,50’ Janela de pico 2: 3,80’ - 7,00’ Intermediário 10. Preparação de 8-(((metilsulfonil)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00118] A 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila seco a vácuo (280 mg, 1,146 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionada N, N-di-isopropiletilamina (0,299 mL, 1,719 mmol) sob nitrogênio. A solução clara foi resfriada em um banho de gelo até se tornar fria. A esta adicionou-se gota a gota cloreto de metanossulfonila puro (0,106 mL, 1,375 mmol) e a solução resultante foi agitada no banho de gelo e deixada chegar à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação bruta foi purificada por coluna de gel de sílica eluído com 50% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado (304 mg, 82%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,26 - 4,17 (m, 4H), 3,97 - 3,93 (m, 4H), 3,00 (s, 3H), 2,24 - 2,15 (m, 2H), 1,73 - 1,61 (m, 6H), 1,29 (t, J=7,2 Hz, 3H). Procedimento geral A: Preparação de derivados de ácido ciclo hexenocarboxílico C-3 α-substituídos. Etapa 1: Preparação de éter.
[00119] Etapa 1-A: A uma solução de 8-(hidroximetil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (intermediário 3) (1 eq), reagente Ar-OH (1 eq) e trifenilfosfina (1,2 eq) em THF foi adicionou-se diazeno-1,2-dicarboxilato de di-isopropila (1,2 eq) gota a gota sob nitrogênio. A solução resultante foi agitada à RT durante 1 h, depois a 50 °C por 3 dias. A mistura de reação foi diluída com NH4Cl saturado, extraída com EtOAc, lavada com salmoura, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado.
[00120] Etapa 1-B: Uma mistura de 8-(((metilsulfonil)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (1 eq), carbonato de césio (2,15 eq) e Ar-OH (3,5 eq) em acetonitrila foi agitada a 85 °C durante 48 horas. Os sais inorgânicos foram removidos por filtração e o filtrado foi lavado com água, extraído com acetato de etila. A fase orgânica combinada foi concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com Acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado. Etapa 2: Preparação de cetona.
[00121] Uma solução do produto da etapa 1 (1 eq) e HC1 0,5 N (1 eq) em acetona foi agitada a 50 °C durante 1 a 2 dias. A mistura de reação foi neutralizada com Na2CO3 saturado aquoso e parcialmente concentrada a vácuo para remover a acetona. O resíduo foi diluído com H2O, extraído com EtOAc, lavado com salmoura, seco com Na2SO4 e concentrado a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com acetato de etila / hexanos para dar a cetona desejada. Etapa 3: Preparação de triflato.
[00122] A uma solução de cetona da etapa 2 (1 eq) e 1,1,1-trifluoro-N- fenil-N-((trifluorometil)sulfonil)-metanossulfonamida (1,1 eq) em THF a -78 °C foi adicionado KHMDS (1 M em THF) (1,3 eq). A solução amarela para laranja resultante foi agitada a -78 °C durante 2 h. A reação foi resfriada bruscamente com NH4Cl saturado aquoso. A mistura foi extraída com EtOAc, lavada com salmoura, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com acetato de etila / hexanos para dar o triflato desejado. Etapa 4: Preparação de boronato.
[00123] Em um vaso de pressão, uma mistura de triflato da etapa 3 (1 eq), bis(pinacolato)diboro (1,1 eq), KOAc (2,5 eq) e aduto de PdCl2(dppf)- CH2Cl2 (0,03 eq) em 1,4-dioxano foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com Na2SO4 e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com acetato de etila / hexanos para dar o boronato desejado. Etapa 5: Preparação de éster ciclo-hexenocarboxílico C-3 α-substituído.
[00124] Uma mistura de C3-triflato (1 eq), boronato da etapa 4 (1eq), Na2CO3 H2O (3 eq) e Pd(Ph3P)4 (0,06 eq) em dioxano e H2O (4 : 1) foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e o resíduo foi particionado entre EtOAc e H2O. A camada aquosa separada foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com Na2SO4 e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com acetato de etila / hexanos para dar o éster ciclo- hexenocarboxílico C-3 a-substituído desejado. Etapa 6: Preparação de ácido carboxílico.
[00125] Uma solução de éster da etapa 5 em 1,4-dioxano, MeOH e NaOH 1N (2 : 1 : 1) foi agitada a 60 a 70 °C durante 1 a 2 h. A mistura de reação foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa para dar o produto final. Exemplo 1 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-((piridin-2-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano- 8-carboxilato de etila.
[00126] O composto título foi preparado com um rendimento de 83% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando piridin-2-ol como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,14 (ddd, J=5,0, 2,0, 0,8 Hz, 1H), 7,59 - 7,53 (m, 1H), 6,87 (ddd, J=7,1, 5,1, 0,9 Hz, 1H), 6,73 (dt, J=8,4, 0,8 Hz, 1H), 4,38 (s, 2H), 4,17 (q, J=7,2 Hz, 2H), 4,01 - 3,93 (m, 4H), 2,35 - 2,24 (m, 2H), 1,79 - 1,67 (m, 6H), 1,23 (t, J=7,1 Hz, 3H). LC/MS m/z 322,10 (M+H)+, 1,93 min (Método de LCMS 1). Etapa 2. Preparação de 4-oxo-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hexano-1- carboxilato de etila.
[00127] O composto título foi preparado com um rendimento de 99% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-((piridin-2-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,14 (ddd, J=5,1, 1,9, 0,8 Hz, 1H), 7,61 - 7,55 (m, 1H), 6,90 (ddd, J=7,1, 5,1, 0,9 Hz, 1H), 6,74 (dt, J=8,3, 0,8 Hz, 1H), 4,45 (s, 2H), 4,24 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,59 - 2,48 (m, 4H), 2,46 - 2,37 (m, 2H), 1,94 - 1,83 (m, 2H), 1,26 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 278,05 (M+H)+, 1,74 min (Método de LCMS 1). Etapa 3. Preparação de 1-((piridin-2-iloxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00128] O composto título foi preparado com um rendimento de 110% (contendo PhNHTf) como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 4-oxo-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo- hexano-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,14 (ddd, J=5,0, 2,0, 0,8 Hz, 1H), 7,62 - 7,55 (m, 1H), 6,90 (ddd, J=7,1, 5,1, 0,9 Hz, 1H), 6,73 (dt, J=8,3, 0,8 Hz, 1H), 5,80 - 5,76 (m 1H), 4,45 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,39 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,18 (qd, J=7,1, 1,3 Hz, 2H), 2,88 - 2,80 (m, 1H), 2,56 - 2,25 (m, 4H), 2,02 - 1,93 (m, 1H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ - 73,87 (s, 3F). /LC/MS m/z 410,00 (M+H)+, 2,24 min (Método de LCMS 1). Etapa 4. Preparação de 1-((piridin-2-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00129] O composto título foi preparado com um rendimento de 75% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1-((piridin-2-iloxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,13 (ddd, J=5,0, 2,0, 0,8 Hz, 1H), 7,58 - 7,51 (m, 1H), 6,86 (ddd, J=7,0, 5,1, 0,9 Hz, 1H), 6,71 (dt, J=8,4, 0,8 Hz, 1H), 6,57 - 6,53 (m, 1H), 4,42 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,33 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,14 (qd, J=6,7, 1,4 Hz, 2H), 2,73 (dq, J=18,8, 2,8 Hz, 1H), 2,31 - 2,18 (m, 3H), 2,03 - 1,95 (m, 1H), 1,91 - 1,83 (m, 1H), 1,27 (s, 6H), 1,26 (s, 6H), 1,19 (t, J=7,0 Hz, 3H). LC/MS m/z 388,20 (M+H)+, 2,22 min (Método de LCMS 1). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila.
[00130] O composto título foi preparado com um rendimento de 71% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-((piridin-2-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,13 (dd, J=5,1, 1,4 Hz, 1H), 7,55 (ddd, J=8,6, 7,0, 2,0 Hz, 1H), 6,85 (ddd, J=7,0, 5,3, 0,8 Hz, 1H), 6,72 (d, J=8,3 Hz, 1H), 5,35 (br, s, 1H), 5,18 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,47 - 4,37 (m, 2H), 4,14 ((qd, J=6,7, 1,4 Hz, 2H), 3,12 - 2,99 (m, 8H), 2,73 - 2,39 (m, 6H), 2,23 - 0,84 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,20 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 -0,90 (m, 9H), 0,89 (s, 3H). LC/MS m/z 830,00 (M+H)+, 3,74 min (Método de LCMS 2).
[00131] Etapa 6. Ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 32% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,14 (d, J=3,8 Hz, 1H), 7,59 - 7,52 (m, 1H), 6,89 - 6,84 (m, 1H), 6,73 (d, J=8,3 Hz, 1H), 5,35 (br. s, 1H), 5,21 - 5,16 (m, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,50 - 4,38 (m, 2H), 3,14 - 2,99 (m, 8H), 2,86 - 2,57 (m, 6H), 2,29 - 0,89 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,97 - 0,91 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). LC/MS m/z 802,50 (M+H)+, 3,56 min (Método de LCMS 2). Exemplo 2 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00132] O composto título foi preparado com um rendimento de 99% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-ol como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,78 - 7,70 (m, 2H), 7,39 (t, J=7,6 Hz, 2H), 7,32 - 7,28 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 4,21 (q, J=7,1 Hz, 2H), 4,12 (s, 2H), 4,01 - 3,94 (m, 4H), 3,67 (s, 3H), 2,37 - 2,26 (m, 2H), 1,80 - 1,65 (m, 6H), 1,31 - 1,26 (m, 3H). LC/MS m/z 401,10 (M+H)+, 2,17 min (Método de LCMS 1). Etapa 2. Preparação de 1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)-4- oxociclo-hexano-1-carboxilato de etila.
[00133] O composto título foi preparado com um rendimento de 81% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,75 - 7,71 (m, 2H), 7,42 - 7,35 (m, 2H), 7,32 - 7,27 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 4,28 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,19 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,63 - 2,51 (m, 4H), 2,48 - 2,39 (m, 2H), 1,92 - 1,81 (m, 2H), 1,30 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 357,15 (M+H)+, 1,99 min (Método de LCMS 1). Etapa 3. Preparação de 1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00134] O composto título foi preparado com um rendimento de 68% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)-4-oxociclo- hexano-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,75 - 7,71 (m, 2H), 7,41 - 7,35 (m, 2H), 7,32 - 7,29 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 5,83 - 5,79 (m, 1H), 4,25 - 4,10 (m, 4H), 3,67 (s, 3H), 2,92 - 2,82 (m, 1H), 2,59 - 2,25 (m, 4H), 2,00 (ddd, J=13,7, 7,8, 6,4 Hz, 1H), 1,27 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -73,83 (s, 3F). LC/MS m/z 489,20 (M+H)+, 2,30 min (Método de LCMS 1). Etapa 4. Preparação de 1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)-4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00135] O composto título foi preparado com um rendimento de 68% como uma cera, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,75 - 7,71 (m, 2H), 7,41 - 7,34 (m, 2H), 7,31 - 7,28 (m, J=7,5 Hz, 1H), 6,57 - 6,53 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 4,23 - 4,11 (m, 4H), 3,65 (s, 3H), 2,76 - 2,67 (m, 1H), 2,32 - 2,12 (m, 3H), 2,03 - 1,86 (m, 2H), 1,27 (s, 12H), 1,23 (t, J=7,0 Hz 3H). LC/MS m/z 467,30 (M+H)+, 3,58 min (Método de LCMS 2). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00136] O composto título foi preparado com um rendimento de 59% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,74 - 7,70 (m, 2H), 7,40 - 7,33 (m, 2H), 7,31 - 7,25 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 5,36 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,71 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,24 - 4,15 (m, 4H), 3,65 (s, 3H), 3,10 - 2,98 (m, 8H), 2,74 - 2,43 (m, 6H), 2,32 - 1,02 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,26 (t, J=7,0 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,97 - 0,91 (m, 9H), 0,86 (s, 3H). LC/MS m/z 909,60 (M+H)+, 3,89 min (Método de LCMS 2). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 81% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-3-fenil-1H-pirazol-5-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 7,73 - 7,68 (m, 2H), 7,40 - 7,34 (m, 2H), 7,31 - 7,26 (m, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,22 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,31 - 4,23 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,20 - 3,04 (m, 8H), 2,92 - 2,61 (m, 6H), 2,24 - 1,10 (m, 27H), 1,73 (s, 3H), 1,16 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,92 (s, 3H). LC/MS m/z 881,55 (M+H)+, 3,77 min (Método de LCMS 2). Exemplo 3 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)oxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00137] O composto título foi preparado com um rendimento de 86% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3-ol como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,99 (s, 1H), 4,20 (q, J=7,2 Hz, 2H), 4,19 (s, 2H), 3,96 (t, J=3,0 Hz, 4H), 3,82 (s, 3H), 2,31 - 2,19 (m, 2H), 1,78 - 1,64 (m, 6H), 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H). LC/MS m/z 393,05 (M+H)+, 2,18 min (Método de LCMS 1). Etapa 2. Preparação de 1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)oxi)metil)-4-oxociclo-hexano-carboxilato de etila.
[00138] O composto título foi preparado com um rendimento de 98% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,99 (s, 1H), 4,26 (s, 2H), 4,26 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,82 (d, J=0,8 Hz, 3H), 2,59 - 2,34 (m, 6H), 1,92 - 1,79 (m, 2H), 1,28 (t, J=6,8 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -60,88 (s, 3F). LC/MS m/z 349,15 (M+H)+, 2,08 min (Método de LCMS 1). Etapa 3. Preparação de 1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)oxi)metil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00139] O composto título foi preparado com um rendimento de 70% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3-il)oxi)metil)-4- oxociclo-hexano-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,99 (s, 1H), 5,79 - 5,76 (m, 1H), 4,29 - 4,16 (m, 4H), 3,81 (d, J=0,8 Hz, 3H), 2,85 - 2,75 (m, 1H), 2,55 - 2,19 (m, 4H), 2,02 - 1,93 (m, 1H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ - 60,89 (s, 3F), -73,88 (s, 3F). LC/MS m/z 481,10 (M+H)+, 2,32 min (Método de LCMS 1). Etapa 4. Preparação de 1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila.
[00140] O composto título foi preparado com um rendimento de 79% como uma cera, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,55 - 6,51 (m, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,25 (d, J=9,3 Hz 1H), 4,19 - 4,13 (m, 3H), 3,81 (d, J=0,8 Hz, 3H), 2,69 (dq, J=19,1, 2,8 Hz, 1H), 2,27 - 2,16 (m, 3H), 2,00 - 1,81 (m, 2H), 1,26 (s, 12H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ -60,84 (s, 3F). LC/MS m/z 481,13 (M+Na)+, 2,41min (Método de LCMS 1). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00141] O composto título foi preparado com um rendimento de 88% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3-il)oxi)metil)-4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,98 (s, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,29 - 4,09 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 3,12 - 3,00 (m, 8H), 2,79 - 2,46 (m, 6H), 2,24 - 0,88 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,22 (t, J=7,0 Hz, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,96 - 0,89 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -60,83 (s, 3F). LC/MS m/z 901,50 (M+H)+, 3,89 min (Método de LCMS 2). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 56% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-5-(trifluorometil)-1H-pirazol-3- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,00 (s, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,34 - 4,21 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,14 - 2,99 (m, 8H), 2,76 - 2,54 (m, 6H), 2,23 - 1,04 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,08 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,97 - 0,92 (m, 6H), 0,86 (s, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -60,81 (s, 3F). LC/MS m/z 873,45 (M+H)+, 3,73 min (Método de LCMS 2). Exemplo 4 Preparação de ácido 2-((1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metoxi)tiazol-4-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 2-((8-(etoxicarbonil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8- il)metoxi)tiazol-4-carboxilato de etila.
[00142] O composto título foi preparado como um óleo sem purificação adicional, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 2-hidroxitiazol-4-carboxilato de etila como reagente. LC/MS m/z 400,30 (M+H)+, 2,18 min (Método de LCMS 1). Etapa 2. Preparação de 2-((1-(etoxicarbonil)-4-oxociclo-hexi)metoxi)tiazol-4- carboxilato de etila.
[00143] O composto título foi preparado com um rendimento de 26% (rendimento calculado durante 2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 2-((8- (etoxicarbonil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)metoxi)tiazol-4-carboxilato de etila bruto como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,61 (s, 1H), 4,66 (s, 2H), 4,38 (q, J=7,3 Hz, 2H), 4,26 (q, J=7,2 Hz, 2H), 2,58 - 2,48 (m, 4H), 2,45 - 2,36 (m, 2H), 1,92 - 1,81 (m, 2H), 1,39 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,28 (t, J=7,2 Hz, 3H). Etapa 3. Preparação de 2-((1-(etoxicarbonil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-en-1-il)metoxi)tiazol-4-carboxilato de etila.
[00144] O composto título foi preparado com um rendimento de 40% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 2-((1-(etoxicarbonil)-4-oxociclo-hexil)metoxi)tiazol-4- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,60 (s, 1H), 5,80 - 5,76 (m, 1H), 4,66 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,60 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,38 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,19 (qd, J=7,1, 0,8 Hz, 2H), 2,87 - 2,79 (m, 1H), 2,56 - 2,23 (m, 4H), 1,99 - 1,90 (m, 1H), 1,38 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,24 (t, J=7,0 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -73,84 (s, 3F). LC/MS m/z 488,15 (M+H)+, 2,41 min (Método de LCMS 1). Etapa 4. Preparação de 2-((1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metoxi)tiazol-4-carboxilato de etila.
[00145] O composto título foi preparado com um rendimento de 57% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 2-((1-(etoxicarbonil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo- hex-3-en-1-il)metoxi)tiazol-4-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,58 (s, 1H), 6,54 - 6,49 (m, 1H), 4,64 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,56 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,37 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,16 (q, J=7,2 Hz, 2H), 2,68 (dq, J=19,1, 3,0 Hz, 1H), 2,27 - 2,16 (m, 3H), 2,00 - 1,81 (m, 2H), 1,38 (t, J=7,0 Hz, 3H), 1,26 (s, 12H), 1,21 (t, J=7,0 Hz, 3H). LC/MS m/z 466,30 (M+H)+, 2,42 min (Método de LCMS 1). Etapa 5. Preparação de 2-((4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1- il)metoxi)tiazol-4-carboxilato de etila.
[00146] O composto título foi preparado com um rendimento de 79% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 2-((1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metoxi)tiazol-4-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,58 (s, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,71 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,67 - 4,60 (m, 2H), 4,59 (s, 1H), 4,37 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,20 - 4,09 (m, 2H), 3,12 - 2,96 (m, 8H), 2,74 - 2,41 (m, 6H), 2,21 - 0,86 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,38 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,96 - 0,90 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). LC/MS m/z 908,60 (M+H)+, 3,05 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 2-((1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metoxi)tiazol-4-carboxílico foi preparado em rendimento de 85% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 2-((4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metoxi)tiazol-4- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (500MHz, METANOL-d4) δ 7,49 (s, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,68 (s, 1H), 4,61 - 4,53 (m, 2H), 3,27 - 3,06 (m, 11H), 2,99 - 2,96 (m, 1H), 2,89 - 2,80 (m, 1H), 2,67 - 2,58 (m, 1H), 2,35 - 1,04 (m, 27H), 1,73 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,00 - 0,96 (m, 6H), 0,92 (s, 3H). LC/MS m/z 852,50 (M+H)+, 2,86 min (Método de LCMS 3). Exemplo 5 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00147] O composto título foi preparado com um rendimento de 64% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-ol como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,43 (s, 2H), 4,18 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,99 - 3,92 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,31 - 2,24 (m, 2H), 1,75 - 1,66 (m, 6H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 343,20 (M+H)+, 2,17 min (Método de LCMS 1). Etapa 2. Preparação de 1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-oxociclo- hexano-1-carboxilato de etila.
[00148] O composto título foi preparado com um rendimento de 81% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,51 (s, 2H), 4,26 (q, J=7,1 Hz, 2H), 2,61 - 2,38 (m, 6H), 2,37 (s, 3H), 1,91 - 1,82 (m, 2H), 1,28 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 299,20 (M+H)+, 1,94 min (Método de LCMS 1). Etapa 3. Preparação de 1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00149] O composto título foi preparado com um rendimento de 60% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-oxociclo- hexano-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,82 - 5,78 (m, 1H), 4,52 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,47 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,26 - 4,12 (m, 2H), 2,90 - 2,82 (m, 1H), 2,59 - 2,27 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,00 - 1,93 (m, 1H), 1,24 (t, J=7,0 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -73,83 (s, 3F). LC/MS m/z 431,15 (M+H)+, 2,41 min (Método de LCMS 1). Etapa 4. Preparação de 1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00150] O composto título foi preparado com um rendimento de 74% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,56 - 6,52 (m, 1H), 4,51 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,44 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,16 (qd, J=7,1, 1,1 Hz, 2H), 2,71 (dq, J=19,1, 3,3 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,31 - 2,17 (m, 3H), 2,04 - 1,85 (m, 2H), 1,26 (s 12H), 1,21 (t, J=7,0 Hz, 3H). LC/MS m/z 409,25 (M+H)+, 2,45 min (Método de LCMS 1). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00151] O composto título foi preparado com um rendimento de 73% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,36 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=5,3 Hz, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,56 - 4,44 (m, 2H), 4,21 - 4,09 (m, 2H), 3,17 - 3,00 (m, 8H), 2,98 - 2,59 (m, 6H), 2,23 - 0,82 (m, 27H), 2,35 (s, 3H), 1,70 (s, 3H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,97 - 0,91 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). LC/MS m/z 851,55 (M+H)+, 3,07 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 53% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((4-metil-1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxilato de etila como reagente.
[00152] 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,36 (br. s., 1H), 5,18 (br. s., 1H), 4,74 (br. s., 1H), 4,65 (br. s., 1H), 4,59 - 4,45 (m, 2H), 3,24 - 2,98 (m, 9H), 2,89 - 2,51 (m, 5H), 2,34 (s, 3H), 1,68 (s, 3H), 2,22 - 0,97 (m, 27H), 1,15 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,97 - 0,89 (m, 6H), 0,86 (s, 3H). LC/MS m/z 823,55 (M+H)+, 2,85 min (Método de LCMS 3). Exemplo 6 Preparação de ácido 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00153] O composto título foi preparado com um rendimento de 92% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 1,2,5-tiadiazol-3-ol como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,97 (s, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,18 (q, J=7,1 Hz, 2H), 4,00 - 3,92 (m, 4H), 2,32 - 2,21 (m, 2H), 1,76 - 1,66 (m, 6H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 329,20 (M+H)+, 2,07 min (Método de LCMS 1). Etapa 2. Preparação de 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-oxociclo-hexano- 1-carboxilato de etila.
[00154] O composto título foi preparado com um rendimento de 80% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,99 (s, 1H), 4,54 (s, 2H), 4,26 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,60 - 2,50 (m, 4H), 2,47 - 2,38 (m, 2H), 1,93 - 1,82 (m, 2H), 1,28 (t, J=7,0 Hz, 3H). LC/MS m/z 285,15 (M+H)+, 1,85 min (Método de LCMS 1). Etapa 3. Preparação de 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00155] O composto título foi preparado com um rendimento de 34% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-oxociclo-hexano-1- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,99 (s, 1H), 5,81 - 5,78 (m, 1H), 4,55 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,50 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,20 (qd, J=7,1, 0,8 Hz, 2H), 2,90 - 2,81 (m, 1H), 2,57 - 2,25 (m, 4H), 2,04 - 1,95 (m, 1H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -73,83 (s, 3F). LC/MS m/z 417,10 (M+H)+, 2,37 min (Método de LCMS 1). Etapa 4. Preparação de 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00156] O composto título foi preparado com um rendimento de 69% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,96 (s, 1H), 6,56 - 6,52 (m, 1H), 4,54 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,45 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,16 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,71 (dq, J=18,9, 3,4 Hz, 1H), 2,30 - 2,17 (m, 3H), 2,03 - 1,94 (m, 1H), 1,92 - 1,83 (m, 1H), 1,26 (s, 12H), 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 395,30 (M+H)+, 2,40 min (Método de LCMS 1). Etapa 5. Preparação de 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00157] O composto título foi preparado com um rendimento de 76% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,97 (s, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,0 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,58 - 4,49 (m, 2H), 4,16(q, J=7,5 Hz, 2H), 3,13 - 2,98 (m, 8H), 2,76 - 2,43 (m, 6H), 2,22 - 0,82 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,22 (t, J=7,2 Hz 3H), 1,06 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,96 - 0,91 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). LC/MS m/z 837,55 (M+H)+, 3,08 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 56% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 1-(((1,2,5-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,98 (s, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,19 (br. s., 1H), 4,76 (s, 1H), 4,66 (s, 1H), 4,62 - 4,49 (m, 2H), 3,23 - 3,00 (m, 8H), 2,90 - 2,53 (m, 6H), 2,28 - 0,89 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,16 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,97 - 0,91 (m, 6H), 0,86 (s, 3H). LC/MS m/z 809,50 (M+H)+, 2,90 min (Método de LCMS 3). Exemplo 7 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxílico.Etapa 1. Preparação de 8-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00158] O composto título foi preparado com um rendimento de 56% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-B, usando 1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-ol como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,07 (s, 1H), 4,19 (q, J=7,1 Hz, 3H), 4,17 (q, J=7,3 Hz, 2H), 4,10 (s, 2H), 4,01 - 3,92 (m, 4H), 2,33 - 2,24 (m, 2H), 1,76 - 1,61 (m, 6H), 1,44 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 340,25 (M+Na)+, 1,91 min (Método de LCMS 1). Etapa 2. Preparação de 1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4-oxociclo- hexano-1-carboxilato de etila.
[00159] O composto título foi preparado com um rendimento de 86% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,09 (s, 1H), 4,26 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,18 (q, J=7,5 Hz, 2H), 4,17 (s, 2H), 2,61 - 2,50 (m, 4H), 2,47 - 2,38 (m, 2H), 1,89 - 1,78 (m, 2H), 1,45 (t, J=7,4 Hz, 3H), 1,28 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 296,25 (M+H)+, 1,62 min (Método de LCMS 1). Etapa 3. Preparação de 1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00160] O composto título foi preparado com um rendimento de 35% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4-oxociclo-hexano- 1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 7,09 (s, 1H), 5,82 - 5,78 (m, 1H), 4,24 - 4,13 (m, 6H), 2,90 - 2,81 (m, 1H), 2,60 - 2,24 (m, 4H), 2,00 - 1,92 (m, 1H), 1,44 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -73,82 (s, 3F). LC/MS m/z 428,20 (M+H)+, 2,15 min (Método de LCMS 1). Etapa 4. Preparação de 1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00161] O composto título foi preparado com um rendimento de 57% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,07 (s, 1H), 6,55 - 6,50 (m, 1H), 4,21 - 4,11 (m, 6H), 2,69 (dq, J=19,0, 2,9 Hz, 1H), 2,31 - 2,09 (m, 3H), 2,02 - 1,85 (m, 2H), 1,43 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,27 (s, 12H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 406,20 (M+H)+, 2,22 min (Método de LCMS 1). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00162] O composto título foi preparado com um rendimento de 90% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,07 (s, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,70 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,23 - 4,11 (m, 6H), 3,11 - 2,97 (m, 8H), 2,71 - 2,42 (m, 6H), 2,24 - 0,86 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,42 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,23 (t, J=7,0 Hz, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 - 0,90 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). LC/MS m/z 848,60 (M+H)+, 2,74 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 61% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-etil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxilato de etila como reagente.
[00163] 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,10 (s, 1H), 5,36 (br. s., 1H), 5,18 (br. s., 1H), 4,69 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,28 - 4,20 (m, 2H), 4,16 (q, J=7,3 Hz, 2H), 3,13 - 2,99 (m, 8H), 2,82 - 2,55 (m, 6H), 2,24 - 1,00 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,43 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,09 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,96 - 0,91 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). LC/MS m/z 820,55 (M+H)+, 2,86 min (Método de LCMS 3). Exemplo 8 Preparação de ácido 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00164] O composto título foi preparado com um rendimento de 26% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-B, usando benzo[d]isotiazol-3(2H)-ona como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,88 (dd, J=8,1, 0,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,53 (ddd, J=8,2, 7,1, 1,1 Hz, 1H), 7,39 (td, J=7,5, 0,8 Hz, 1H), 4,63 - 4,59 (m, 2H), 4,20 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,97 (t, J=2,6 Hz, 4H), 2,41 - 2,31 (m, 2H), 1,82 - 1,73 (m, 6H), 1,23 (t, J=7,1 Hz, 3H). LC/MS m/z 378,25 (M+H)+, 4,17 min (Método de LCMS 4). Etapa 2. Preparação de 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4-oxociclo- hexano-1-carboxilato de etila.
[00165] O composto título foi preparado com um rendimento de 88% como uma cera, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,87 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1H), 7,79 (dt, J=8,2, 0,8 Hz, 1H), 7,54 (ddd, J=8,2, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 7,40 (ddd, J=8,0, 7,0, 1,0 Hz, 1H), 4,68 (s, 2H), 4,26 (q, J=7,3 Hz, 2H), 2,66 - 2,51 (m, 4H), 2,49 - 2,40 (m, 2H), 1,99 - 1,88 (m, 2H), 1,26 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 334,20 (M+H)+, 2,31 min (Método de LCMS 1). Etapa 3. Preparação de 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00166] O composto título foi preparado com um rendimento de 64% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4-oxociclo-hexano-1- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,86 (dt, J=8,0, 1,0 Hz, 1H), 7,79 (dt, J=8,1, 0,8 Hz, 1H), 7,54 (ddd, J=8,2, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 7,43 - 7,39 (m, 1H), 5,83 - 5,79 (m, 1H), 4,68 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,63 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,20 (qd, J=7,2, 2,1 Hz, 2H), 2,97 - 2,88 (m, 1H), 2,59 - 2,32 (m, 4H), 2,07 - 1,98 (m, 1H), 1,23 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -73,83 (s, 3F). LC/MS m/z 466,15 (M+H)+, 2,51 min (Método de LCMS 1). Etapa 4. Preparação de 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00167] O composto título foi preparado com um rendimento de 61% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,85 (dt, J=7,9, 0,9 Hz, 1H), 7,76 (dt, J=8,2, 0,8 Hz, 1H), 7,52 (ddd, J=8,2, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 7,42 - 7,37 (m, 1H), 6,58 - 6,54 (m, 1H), 4,66 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,58 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,16 (qd, J=7,1, 1,0 Hz, 2H), 2,76 (dq, J=18,9, 2,7 Hz, 1H), 2,37 - 2,28 (m, 1H), 2,27 - 2,20 (m, 2H), 2,07 - 1,89 (m, 2H), 1,28 - 1,25 (m, 12H), 1,19 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 444,25 (M+H)+, 2,58 min (Método de LCMS 1). Etapa 5. Preparação de 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00168] O composto título foi preparado com um rendimento de 47% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,87 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,77 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,52 (td, J=7,6, 1,1 Hz, 1H), 7,37 (td, J=7,5, 1,0 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,20 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,64 (s, 1H), 4,19 - 4,16 (m, 2H), 4,13 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,17 - 3,03 (m, 8H), 2,79 - 2,36 (m, 6H), 2,28 - 0,83 (27H), 1,70 (s, 3H), 1,27 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,08 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,99 - 0,95 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). LC/MS m/z 886,55 (M+H)+, 3,07 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 21% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 1-((benzo[d]isotiazol-3-iloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,88 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,77 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,55 - 7,49 (m, 1H), 7,40 - 7,33 (m, 1H), 5,39 (br. s., 1H), 5,20 (br. s., 1H), 4,78 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,74 - 4,64 (m, 2H), 3,34 - 2,52 (m, 14H), 2,33 - 1,00 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,98 - 0,91 (m, 6H), 0,87 (s, 3H). LC/MS m/z 858,50 (M+H)+, 2,88 min (Método de LCMS 3). Exemplo 9 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-4-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico.Etapa 1. Preparação de 8-((piridin-4-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano- 8-carboxilato de etila.
[00169] O composto título foi preparado com um rendimento de 77%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 4-hidroxipiridina como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,46 - 8,41 (m, 2H), 6,81 - 6,77 (m, 2H), 4,20 (q, J=7,2 Hz, 2H), 4,04 (s, 2H), 4,01 - 3,93 (m, 4H), 2,37 - 2,25 (m, 2H), 1,80 - 1,66 (m, 6H), 1,24 (t, J=7,1 Hz, 3H). LC/MS: m/e 322,05 (M+H)+, 2,26 min (Método de LCMS 11). Etapa 2. Preparação de 4-oxo-1-((piridin-4-iloxi)metil)ciclo-hexano-1- carboxilato de etila.
[00170] O composto título foi preparado com um rendimento de 64%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8- ((piridin-4-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,27 - 8,23 (m, 2H), 6,67 - 6,62 (m, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,92 (q, J=7,3 Hz, 2H), 2,43 - 2,31 (m, 4H), 2,27 - 2,17 (m, 2H), 1,77 - 1,66 (m, 2H), 1,07 (t, J=7,3 Hz, 3H). LC/MS: m/e 278,05 (M+H)+, 0,81 min (Método de LCMS 8). Etapa 3. Preparação de 1-((piridin-4-iloxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00171] O composto título foi preparado com um rendimento de 66%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 4- oxo-1-((piridin-4-iloxi)metil)ciclo-hexanocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,47 - 8,44 (m, 2H), 6,83 - 6,79 (m, 2H), 5,82 (t, J=4,1 Hz, 1H), 4,21 (q, J=7,2 Hz, 2H), 4,17 - 4,07 (m, 2H), 2,91 - 2,82 (m, 1H), 2,59 - 2,47 (m, 1H), 2,45 - 2,25 (m, 4H), 2,09 - 2,00 (m, 2H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 410,00 (M+H)+, 1,92 min (Método de LCMS 8). Etapa 4. Preparação de 1-((piridin-4-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00172] O composto título foi preparado com um rendimento de 59%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1- ((piridin-4-iloxi)metil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,33 - 8,30 (m, 2H), 6,73 - 6,69 (m, 2H), 6,46 (br. s., 1H), 4,10 - 4,04 (m, 2H), 4,02 - 3,95 (m, 2H), 2,63 (dd, J=19,2, 2,9 Hz, 1H), 2,23 - 2,12 (m, 2H), 2,12 - 2,01 (m, 1H), 1,94 - 1,77 (m, 2H), 1,17 (s, 12H), 1,11 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 388,10 (M+H)+, 1,90 min (Método de LCMS 8). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-4-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila.
[00173] O composto título foi preparado com um rendimento de 34%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1- ((piridin-4-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. LC/MS: m/e 831,45 (M+H)+, 2,54 min (Método de LCMS 3). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) 8,42 (d, J=6,0 Hz, 2H), 6,80 (d, J=6,3 Hz, 2H), 5,36 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,71 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,20 - 4,06 (m, 4H), 3,12 - 2,97 (m, 8H), 2,74 - 2,51 (m, 4H), 2,51 - 2,40 (m, 1H), 2,31 - 2,12 (m, 4H), 2,11 - 1,98 (m, 3H), 1,98 - 1,80 (m, 5H), 1,80 - 1,62 (m, 2H), 1,69 (s, 3H), 1,62 - 1,37 (m, 10H), 1,37 - 1,17 (m, 4H), 1,26 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,16 - 0,99 (m, 3H), 0,99 - 0,93 (m, 6H), 0,93 - 0,87 (m, 3H), 0,87 - 0,81 (m, 3H). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-4-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 47%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-4-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 8,33 (d, J=6,3 Hz, 2H), 6,98 (d, J=5,5 Hz, 2H), 5,38 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=5,0 Hz, 1H), 4,80 - 4,71 (m, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,28 - 4,12 (m, 2H), 3,24 - 3,00 (m, 8H), 2,94 - 2,72 (m, 5H), 2,66 (d, J=18,1 Hz, 1H), 2,37 - 1,97 (m, 8H), 1,97 - 1,78 (m, 1H), 1,72 (s, 3H), 1,78 - 1,69 (m, 3H), 1,66 - 1,21 (m, 14H), 1,16 (s, 3H), 1,20 - 1,08 (m, 2H), 1,05 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H). LC/MS: m/e 802,45 (M+H)+, 2,50 min (Método de LCMS 3). Exemplo 10 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-((piridin-3-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano- 8-carboxilato de etila.
[00174] O composto título foi preparado com um rendimento de 84%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 3-hidroxipirina como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,30 (d, J=2,7 Hz, 1H), 8,24 (dd, J=4,4, 1,4 Hz, 1H), 7,25 - 7,15 (m, 2H), 4,21 (q, J=7,2 Hz, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,00 - 3,93 (m, 4H), 2,38 - 2,25 (m, 2H), 1,83 - 1,66 (m, 6H), 1,32 - 1,22 (m, 3H). LC/MS: m/e 322,10 (M+H)+, 2,534 min (Método de LCMS 11). Etapa 2. Preparação de 4-oxo-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hexano-1- carboxilato de etila.
[00175] O composto título foi preparado com um rendimento de 47,8%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-((piridin-3-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. LCMS: m/e 279,00 (M+H)+, 2,079 min (Método de LCMS 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,22 (dd, J=2,6, 0,9 Hz, 1H), 8,16 (dd, J=4,3, 1,8 Hz, 1H), 7,19 - 7,09 (m, 2H), 4,18 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,07 - 4,04 (m, 2H), 2,55 - 2,41 (m, 4H), 2,38 - 2,28 (m, 2H), 1,88 - 1,75 (m, 2H), 1,19 (t, J=7,2 Hz, 3H). Etapa 3. Preparação de 1-((piridin-3-iloxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00176] O composto título foi preparado com um rendimento de 51,9%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 4-oxo-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hexanocarboxilato de etila como reagente. LCMS: m/e 410,00 (M+H)+, 1,983 min (Método de LCMS 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,26 - 8,21 (m, 1H), 8,19 - 8,13 (m, 1H), 7,20 - 7,09 (m, 2H), 5,78 - 5,70 (m, 1H), 4,16 - 4,10 (m, 2H), 4,09 - 4,02 (m, 2H), 2,84 - 2,74 (m, 1H), 2,52 - 2,40 (m, 1H), 2,38 - 2,26 (m, 2H), 2,26 - 2,17 (m, 1H), 2,01 - 1,92 (m, 1H), 1,21 - 1,15 (m, 3H). Etapa 4. Preparação de 1-((piridin-3-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00177] O composto título foi preparado com um rendimento de 88%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1- ((piridin-3-iloxi)metil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. LCMS: m/e 388,10 (M+H)+, 1,986 min (Método de LCMS 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,20 (dd, J=2,4, 0,9 Hz, 1H), 8,13 (dd, J=4,0, 2,0 Hz, 1H), 7,18 - 7,10 (m, 2H), 6,52 - 6,45 (m, 1H), 4,16 - 3,95 (m, 4H), 2,71 - 2,60 (m, 1H), 2,26 - 2,03 (m, 3H), 1,96 - 1,79 (m, 2H), 1,20 - 1,18 (m, 12H), 1,14 (t, J=7,2 Hz, 3H). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila e 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00178] Os compostos título foram preparados com um rendimento de 26,4% e 28,4%, respectivamente, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-((piridin-3-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente.
[00179] Para 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila: LCMS: m/e 830,50 (M+H)+, 2,363 min (Método de LCMS 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,28 (d, J=2,0 Hz, 1H), 8,21 (dd, J=4,0, 2,0 Hz, 1H), 7,23 - 7,16 (m, 2H), 5,35 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,72 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,15 - 4,09 (m, 4H), 3,14 - 2,96 (m, 8H), 2,91 - 2,48 (m, 6H), 1,68 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 2,29 - 1,00 (m, 30H), 0,97 - 0,89 (m, 9H), 0,86 - 0,81 (m, 3H).
[00180] Para 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila: LCMS: m/e 858,55 (M+H)+, 2,454 min (Método de LCMS 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,28 (d, J=1,8 Hz, 1H), 8,21 (dd, J=4,0, 1,8 Hz, 1H), 7,20 - 7,16 (m, 2H), 5,35 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,72 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,20 - 4,05 (m, 4H), 3,11 (t, J=8,5 Hz, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,88-2,76 (m, 1H), 2,2,74 - 2,38 (m, 7H), 1,68 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 2,27 - 0,78 (m, 47H). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxílico foi preparado em rendimento de 68,1%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,32 (s, 1H), 8,21 (br. s., 1H), 7,23 (br. s., 2H), 5,37 (br. s., 1H), 5,18 (br. s., 1H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,23 - 4,08 (m, 2H), 3,16 - 2,99 (m, 8H), 2,89 - 2,57 (m, 6H), 2,33 - 1,79 (m, 9H), 1,68 ( s, 3H), 1,11 ( s, 3H), 0,99 ( s, 3H), 0,96 ( s, 3H), 0,93-0,92 ( m, 3H), 0,86 ( s, 3H), 1,75 - 0,81 (m, 18H). LC/MS: m/e 802,45 (M+H)+, 2,346 min (Método de LCMS 8). Exemplo 11 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxílico.
[00181] O composto título foi preparado com um rendimento de 4,02%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. LCMS: m/e 830,50 (M+H)+, 2,367 min (Método de LCMS 8). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,31 (s, 1H), 8,20 (t, J=2,9 Hz, 1H), 7,22 (d, J=2,3 Hz, 2H), 5,37 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,76 - 4,67 (m, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,16 (br. s., 2H), 3,13 (t, J=10,2 Hz, 2H), 2,92 - 2,59 (m, 9H), 2,48 (d, J=11,5 Hz, 1H), 2,31 - 1,78 (m, 15H), 1,68 ( s, 3H), 1,12 ( s, 3H), 0,98 ( s, 3H), 0,96 ( s, 3H), 0,93-0,92 ( m, 3H), 0,85 ( s, 3H), 1,71 - 0,77 (m, 18H). Exemplo 12 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno- 1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-((isotiazol-3-iloxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00182] O composto título foi preparado com um rendimento de 69%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 5-metilisotiazol-3-ol como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 6,32 (d, J=1,0 Hz, 1H), 4,37 (br. s. 2H), 4,17 (q, J=7,0 Hz, 2H), 3,95 (s, 4H), 2,47 (d, J=1,0 Hz, 3H), 2,28 - 2,21 (m, 2H), 1,76 - 1,63 (m, 6H), 1,23 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 342,10 (M+H)+, 3,67 min (Método de LCMS 11). Etapa 2. Preparação de 1-(((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)-4-oxociclo- hexano-1-carboxilato de etila.
[00183] O composto título foi preparado com um rendimento de 87%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8- (((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,34 (s, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,26 (q, J=7,1 Hz, 2H), 2,59 - 2,45 (m, 4H), 2,45 - 2,36 (m, 2H), 1,94 - 1,82 (m, 2H), 1,29 (t, J=7,1 Hz, 3H). LC/MS: m/e 298,05 (M+H)+, 2,20 min (Método de LCMS 8). Etapa 3. Preparação de 1-(((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00184] O composto título foi preparado com um rendimento de 87%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1- (((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,31 (s, 1H), 5,74 (br. s., 1H), 4,43 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,37 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,17 (q, J=7,2 Hz, 2H), 2,79 (dd, J=17,8, 2,8 Hz, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,43 - 2,17 (m, 4H), 1,97 - 1,86 (m, 1H), 1,22 (t, J=7,3 Hz, 3H). LC/MS: m/e 430,2 (M+H)+, 2,20 min. Etapa 4. Preparação de 1-(((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00185] O composto título foi preparado com um rendimento de 32%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1- (((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,51 - 6,45 (m, 1H), 6,26 (d, J=1,0 Hz, 1H), 4,42 - 4,37 (m, 1H), 4,33 - 4,26 (m, 1H), 4,11 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,69 - 2,58 (m, 1H), 2,42 (d, J=1,0 Hz, 3H), 2,22 - 2,12 (m, 3H), 2,02 (s, 1H), 1,95 - 1,87 (m, 1H), 1,82 - 1,74 (m, 1H), 1,22 (d, J=2,0 Hz, 12H), 1,16 (t, J=7,2 Hz, 3H). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- eno-1-carboxilato de etila.
[00186] O composto título foi preparado com um rendimento de 43%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1- (((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,30 (d, J=1,0 Hz, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,70 (s, 2H), 4,58 (d, J=1,5 Hz, 2H), 4,49 - 4,43 (m, 1H), 4,42 - 4,36 (m, 1H), 4,17 - 4,12 (m, 2H), 3,13 - 2,96 (m, 8H), 2,73 - 2,62 (m, 2H), 2,62 - 2,52 (m, 2H), 2,50 - 2,41 (m, 1H), 2,46 (d, J=1,0 Hz, 3H), 2,22 - 2,10 (m, 8H), 2,10 - 1,97 (m, 3H), 1,96 - 1,65 (m, 4H), 1,68 (s, 3H), 1,64 - 1,37 (m, 7H), 1,37 - 1,23 (m, 6H), 1,20 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,16 - 0,98 (m, 5H), 0,98 - 0,81 (m, 9H). LC/MS: m/e 850,55 (M+H)+, 2,99 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno- 1-carboxílico foi preparado em rendimento de 36%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-metilisotiazol-3-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,36 (d, J=0,8 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,30 - 5,10 (m, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,51 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,45 (dd, J=10,0, 3,5 Hz, 1H), 3,39 (d, J=12,3 Hz, 1H), 3,28 - 2,87 (m, 11H), 2,86 - 2,57 (m, 2H), 2,49 (d, J=0,8 Hz, 3H), 2,31 - 1,83 (m, 12H), 1,83 - 1,67 (m, 2H), 1,71 (s, 3H), 1,67 - 1,23 (m, 13H), 1,16 (s, 3H), 1,13 - 1,02 (m, 2H), 1,06 (s, 3H), 0,97 (m, 3H), 0,93 (m, 3H), 0,88 (s, 3H). LC/MS: m/e 822,60 (M+H)+, 2,83 min (Método de LCMS 3). Exemplo 13 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-(((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00187] O composto título foi preparado com um rendimento de 82%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 1-metil-1H-tetrazol-5-ol como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,57 (s, 2H), 4,18 (q, J=7,0 Hz, 2H), 3,97 - 3,92 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 2,29 - 2,21 (m, 1H), 2,18 - 2,10 (m, 1H), 1,76 - 1,63 (m, 6H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 327,20 (M+H)+, 2,15 min (Método de LCMS 3). Etapa 2. Preparação de 1-(((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)-4-oxociclo- hexano-1-carboxilato de etila.
[00188] O composto título foi preparado com um rendimento de 91%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8- (((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,67 (s, 2H), 4,27 (q, J=7,2 Hz, 2H), 3,79 (s, 3H), 2,61 - 2,36 (m, 6H), 1,92 - 1,75 (m, 2H), 1,28 (t, J=7,3 Hz, 3H). LC/MS: m/e 283,15 (M+H)+, 3,01 min (Método de LCMS 10). Etapa 3. Preparação de 1-(((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00189] O composto título foi preparado com um rendimento de 29%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1- (((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,80 - 5,72 (m, 1H), 4,70 - 4,57 (m, 2H), 4,22 - 4,15 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,89 - 2,81 (m, 1H), 2,50 - 2,23 (m, 4H), 1,97 - 1,88 (m, 1H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 415,25 (M+H)+, 2,51 min (Método de LCMS 3). Etapa 4. Preparação de 1-(((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00190] O composto título foi preparado com um rendimento de 90%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1- (((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,54 - 6,40 (m, 1H), 4,64 (d, J=9,8 Hz, 1H), 4,56 (d, J=9,8 Hz, 1H), 4,17 - 4,10 (m, 2H), 3,74 (s, 3H), 2,72 - 2,63 (m, 1H), 2,34 - 2,11 (m, 3H), 2,00 - 1,92 (m, 1H), 1,88 - 1,80 (m, 1H), 1,23 (s, 12H), 1,21 (t, J=7,2 Hz 3H). LC/MS: m/e 393,35 (M+H)+, 4,06 min (Método de LCMS 10). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxilato de etila.
[00191] O composto título foi preparado com um rendimento de 56%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1- (((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,70 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,58 (d, J=1,3 Hz, 1H), 4,20 - 4,10 (m, 4H), 3,75(s, 3H), 3,12 - 2,97 (m, 8H), 2,76 - 2,40 (m, 6H), 2,26 - 0,87 (m, 27H), 1,68 (s, 3H), 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,94 - 0,87 (m, 6H), 0,84 (s, 3H). LC/MS: m/e 835,60 (M+H)+, 2,82 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 74%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-metil-1H-tetrazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,37 (br. s., 1H), 5,20 (t, J=6,4 Hz, 1H), 4,79 - 4,61 (m, 4H), 3,79 (s, 2H), 3,26 - 2,98 (m, 10H), 2,82 (d, J=9,3 Hz, 4H), 2,76 - 2,55 (m, 1H), 2,33 - 2,11 (m, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,11 - 1,82 (m, 8H), 1,70 (s, 3H), 1,65 - 1,37 (m, 10H), 1,36 - 1,22 (m, 4H), 1,16 (s, 3H), 1,11 - 1,01 (m, 2H), 1,03 (s, 3H), 0,98 (s, 1,5H), 0,97 (s, 1,5H), 0,94 (s, 1,5H), 0,93 (s, 1,5H), 0,87 (s, 3H). LC/MS: m/e 807,60 (M+H)+, 2,90 min (Método de LCMS 3). Exemplo 14 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-oxo-4,5-di-hidro-1,2,4-tiadiazol-3- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-(((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00192] O composto título foi preparado com um rendimento de 90%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-ol como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,45 (s, 2H), 4,17 (q, J=7,0 Hz, 2H), 3,98 - 3,91 (m, 4H), 2,68 (s, 3H), 2,31 - 2,21 (m, 2H), 1,77 - 1,66 (m, 6H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 375,10 (M+H)+, 2,50 min (Método de LCMS 3). Etapa 2. Preparação de 1-(((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- oxociclo-hexanocarboxilato de etila.
[00193] O composto título foi preparado com um rendimento de 100%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8- (((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,53 (s, 2H), 4,25 (q, J=7,1 Hz, 2H), 2,69 (s, 3H), 2,58 - 2,48 (m, 4H), 2,44 - 2,35 (m, 2H), 1,96 - 1,86 (m, 2H), 1,28 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 331,05 (M+H)+, 2,32 min (Método de LCMS 3). Etapa 3. Preparação de 1-(((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00194] O composto título foi preparado com um rendimento de 55%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1- (((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,74 (td, J=3,1, 1,8 Hz, 1H), 4,50 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,45 (d, J=10,3 Hz, 1H),4,15 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,84 - 2,75 (m, 1H), 2,65 (s, 3H), 2,51 - 2,19 (m, 4H), 2,02 - 1,94 (m, 1H), 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H). Etapa 4. Preparação de 1-(((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00195] O composto título foi preparado com um rendimento de 39%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4 durante 7 horas, usando 1-(((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,50 (dt, J=3,5, 1,8 Hz, 1H), 4,49 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,40 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,11 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,72 - 2,64 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,28 - 2,16 (m, 3H), 1,98 - 1,81 (m, 2H), 1,23 (s, 12H), 1,17 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 441,25 (M+H)+, 2,92 min (Método de LCMS 3). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00196] O composto título foi preparado, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5 a 90 °C durante 4 horas, usando 1- (((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. LC/MS: m/e 883,55 (M+H)+, 3,11 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-oxo-4,5-di-hidro-1,2,4-tiadiazol-3- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 10%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-(metiltio)-1,2,4-tiadiazol-3-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,80 (s, 1H), 4,76 - 4,69 (m, 1H), 4,60 -4,50 (m, 2H), 3,35 - 3,01 (m, 10H), 3,01 - 2,78 (m, 4H), 2,67 - 2,51 (m, 4H), 2,51 - 2,36 (m, 5H), 2,36 - 2,14 (m, 2H), 1,81 - 1,75 (m, 2H), 1,72 (s, 3H), 1,75 - 1,68 (m, 2H), 1,68 - 1,34 (m, 11H), 1,27 (s, 3H), 1,26 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,08 (s, 3H), 1,13 - 1,03 (m, 4H), 0,94 (s, 3H). LC/MS: m/e 825,50 (M+H)+, 2,78 min (Método de LCMS 3). Exemplo 15 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((tiazol-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico.Etapa 1: Preparação de 8-((tiazol-2-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila.
[00197] O composto título foi preparado com um rendimento de 35%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando tiazol-2-ol como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,39 (d, J=5,5 Hz, 1H), 6,03 (d, J=5,3 Hz, 1H), 4,09 (q, J=7,3 Hz, 2H), 3,86 (s, 4H), 3,76 (s, 2H), 2,11 - 2,03 (m, 2H), 1,68 - 1,46 (m, 6H), 1,20 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS m/z 328,10 (M+H)+, 2,09 min (Método de LCMS 3). Etapa 2. Preparação de 4-oxo-1-((tiazol-2-iloxi)metil)ciclo-hexano-1- carboxilato de etila.
[00198] O composto título foi preparado com um rendimento de 80%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8- ((tiazol-2-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,47 (d, J=5,5 Hz, 1H), 6,13 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,28 (q, J=7,0 Hz, 2H), 3,97 (s, 2H), 2,55 - 2,35 (m, 6H), 1,89 - 1,77 (m, 2H), 1,34 (t, J=7,2 Hz, 3H). MS m/z 284,20 (M+H)+, 1,72 min (Método de LCMS 3). Etapa 3. Preparação de 1-((tiazol-2-iloxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00199] O composto título foi preparado com um rendimento de 22% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 4-oxo-1-((tiazol-2-iloxi)metil)ciclo-hexano-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,43 (d, J=5,5 Hz, 1H), 6,11 (d, J=5,3 Hz, 1H), 5,73 (td, J=3,4, 1,5 Hz, 1H), 4,16 (qd, J=7,2, 2,6 Hz, 2H), 3,90 (s, 2H), 2,74 - 2,64 (m, 1H), 2,45 - 2,39 (m, 2H), 2,33 - 2,20 (m, 2H), 1,85 - 1,76 (m, 1H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H). MS m/z 416,20 (M+H)+, 2,75 min (Método de LCMS 3). Etapa 4. Preparação de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1- ((tiazol-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00200] O composto título foi preparado com um rendimento de 71%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1- ((tiazol-2-iloxi)metil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,49 - 6,46 (m, 1H), 6,45 (d, J=5,3 Hz, 1H), 6,06 (d, J=5,3 Hz, 1H), 4,12 (qd, J=7,2, 2,6 Hz, 2H), 3,86 (s, 2H), 2,63 - 2,54 (m, 1H), 2,31 - 1,99 (m, 4H), 1,60 (ddd, J=13,0, 9,0, 5,6 Hz, 1H), 1,23 (s, 12H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H). MS m/z 394,30 (M+H)+, 2,65 min (Método de LCMS 3). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((tiazol-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila.
[00201] O composto título foi preparado com um rendimento de 30% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato e 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-((tiazol-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagentes. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,46 (d, J=5,5 Hz, 1H), 6,06 (d, J=5,3 Hz, 1H), 5,30 (br. s., 1H), 5,18 - 5,13 (m, 1H), 4,70 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,11 (q, J=7,3 Hz, 2H), 3,96 - 3,84 (m, 2H), 3,11 - 2,97 (m, 8H), 2,74 - 2,42 (m, 6H), 2,22 - 0,85 (m, 27H), 1,67 (s, 3H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,93 - 0,86 (m, 6H), 0,83 (s, 3H). MS m/z 836,65 (M+H)+, 2,98 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((tiazol-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 68% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((tiazol-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,70 (d, J=5,5 Hz, 1H), 6,08 (d, J=5,5 Hz, 1H), 5,42 - 5,28 (m, 1H), 5,20 (dd, J=16,2, 4,9 Hz, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,19 - 4,01 (m, 1H), 4,02 - 3,85 (m, 1H), 3,29 (d, J=15,8 Hz, 1H), 3,24 - 2,95 (m, 7H), 2,85 (d, J=10,8 Hz, 2H), 2,61 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,43 (d, J=15,1 Hz, 1H), 2,31 - 2,12 (m, 8H), 2,12 - 1,85 (m, 6H), 1,85 - 1,75 (m, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,75 - 1,60 (m, 2H), 1,59 - 1,21 (m, 12H), 1,17 (s, 3H), 1,13 - 1,01 (m, 2H), 1,04 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). LC/MS: m/e 808,55 (M+H)+, 1,832 min (Método de LCMS 3). Exemplo 16 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxílico.Etapa 1. Preparação de 8-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00202] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando 1-fenil-1H-1,2,3-triazol- 5-ol como reagente. Esse material foi levado adiante à etapa seguinte sem purificação. LC/MS: m/e 388,20 (M+H)+, 2,32 min (Método de LCMS 3). Etapa 2. Preparação de 4-oxo-1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5- il)oxi)metil)ciclo-hexanocarboxilato de etila.
[00203] O composto título foi preparado com um rendimento de 9%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8- (((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,66 - 7,59 (m, 2H), 7,53 - 7,45 (m, 1H), 7,45 - 7,36 (m, 2H), 7,20 (s, 1H), 4,22 (s, 2H), 4,15 (q, J=7,1 Hz, 2H), 2,53 - 2,42 (m, 4H), 2,40 - 2,30 (m, 2H), 1,83 - 1,71 (m, 2H), 1,15 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 388,20 (M+H)+, 2,32 min (Método de LCMS 3). Etapa 3. Preparação de 1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila
[00204] O composto título foi preparado com um rendimento de 144%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 4- oxo-1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hexanocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,69 - 7,63 (m, 2H), 7,54 - 7,48 (m, 2H), 7,46 - 7,40 (m, 1H), 7,22 (s, 1H), 5,80 - 5,75 (m, 1H), 4,29 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,22 (d, J=8,8 Hz, 1H), 4,17 - 4,11 (m, 2H), 2,87 - 2,79 (m, 1H), 2,56 - 2,44 (m, 1H), 2,42 - 2,22 (m, 3H), 1,97 - 1,89 (m, 1H), 1,17 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 476,25 (M+H)+, 2,65 min (Método de LCMS 3). Etapa 4. Preparação de 1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00205] O composto título foi preparado com um rendimento de 91% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,68 - 7,63 (m, 2H), 7,50 - 7,43 (m, 2H), 7,41 - 7,35 (m, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,49 (dt, J=3,5, 1,8 Hz, 1H), 4,25 (d, J=8,8 Hz, 1H), 4,19 (d, J=8,8 Hz, 1H), 4,08 (qd, J=7,1, 1,0 Hz, 2H), 2,69 - 2,60 (m, 1H), 2,28 - 2,05 (m, 3H), 1,98 - 1,90 (m, 1H), 1,88 - 1,81 (m, 1H), 1,23 (s, 12H), 1,12 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 454,35 (M+H)+, 2,63 min (Método de LCMS 3). Etapa 4. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila.
[00206] Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 58% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,71 - 7,65 (m, 2H), 7,51 - 7,44 (m, 2H), 7,41 - 7,35 (m, 1H), 7,19 (s, 1H), 5,32 (br, s,, 1H), 5,15 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,68 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,57 (s, 1H), 4,30 - 4,20 (m, 2H), 4,09 (q, J=7,3 Hz, 2H), 3,09 - 2,96 (m, 8H), 2,71 - 2,38 (m, 6H), 2,25 - 0,86 (m, 27H), 1,66 (s, 3H), 1,14 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,93 - 0,87 (m, 6H), 0,83 (s, 3H). Etapa 6. O composto título foi preparado com um rendimento de 20% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-fenil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,79 - 7,70 (m, 2H), 7,53 - 7,46 (m, 2H), 7,43 - 7,37 (m, 1H), 7,26 - 7,22 (m, 1H), 5,36 (br. s., 1H), 5,18 (t, J=5,5 Hz, 1H), 4,70 (s, 1H), 4,61 (s, 1H), 4,38 - 4,23 (m, 2H), 3,09 - 2,92 (m, 8H), 2,90 - 2,80 (m, 2H), 2,78 - 2,54 (m, 4H), 2,31 - 2,10 (m, 4H), 2,04 - 1,80 (m, 6H), 1,73 (d, J=11,3 Hz, 1H), 1,67 (s, 3H), 1,54 (d, J=17,8 Hz, 3H), 1,49 - 1,35 (m, 6H), 1,35 - 1,15 (m, 5H), 1,11 (s, 3H), 1,14 - 1,02 (m, 2H), 1,00 (s, 3H), 0,97 - 0,94 (m, 1H), 0,96 (s, 3H), 0,93 - 0,92 (m, 3H), 0,85 (s, 3H). LC/MS: m/e 868,65 (M+H)+, 2,83 min (Método de LCMS 3). Exemplo 17 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1--(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00207] O composto título foi preparado com um rendimento de 43% como um semissólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-B a 105 °C, usando 1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-ol como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,06 (s, 1H), 4,59 (spt, J=6,8 Hz, 1H), 4,18 (q, J=7,2 Hz, 2H), 4,08 (s, 2H), 4,00 - 3,91 (m, 4H), 2,33 - 2,24 (m, 2H), 1,76 - 1,65 (m, 6H), 1,51 (d, J=6,8 Hz, 6H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 354,30 (M+H)+, 3,33 min (Método de LCMS 11). Etapa 2. Preparação de 1-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4- oxociclo-hexano-1-carboxilato de etila.
[00208] O composto título foi preparado com um rendimento de 91% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,02 (s, 1H), 4,50 (spt, J=6,8 Hz, 1H), 4,17 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,11 (s, 2H), 2,52 - 2,40 (m, 4H), 2,38 - 2,28 (m, 2H), 1,82 - 1,71 (m, 2H), 1,43 (d, J=7,0 Hz, 6H), 1,19 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 354,30 (M+H)+, 1,96 min (Método de LCMS 3). Etapa 3. Preparação de 1-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila
[00209] O composto título foi preparado com um rendimento de 97% como um óleo, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4-oxociclo- hexanocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,04 (s, 1H), 5,79 - 5,73 (m, 1H), 4,53 (spt, J=6,8 Hz, 1H), 4,19 - 4,04 (m, 4H), 2,88 - 2,76 (m, 1H), 2,55 - 2,21 (m, 4H), 1,92 (ddd, J=13,7, 7,9, 6,3 Hz, 1H), 1,47 (d, J=6,8 Hz, 6H), 1,20 (t, J=7,2 Hz, 3H). 19F RMN (376MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ -73,94 (s, 3F). LC/MS: m/e 442,20 (M+H)+, 2,64 min (Método de LCMS 3). Etapa 4. Preparação de 1-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00210] O composto título foi preparado com um rendimento de 100%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1- (((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,02 (s, 1H), 6,48 (dt, J=3,3, 1,7 Hz, 1H), 4,53 (spt, J=6,8 Hz, 1H), 4,16 - 4,06 (m, 4H), 2,69 - 2,60 (m, 1H), 2,28 - 2,05 (m, 3H), 1,98 - 1,81 (m, 2H), 1,46 (dd, J=6,8, 2,3 Hz, 6H), 1,22 (s, 12H), 1,17 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 420,30 (M+H)+, 2,65 min (Método de LCMS 3). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00211] O composto título foi preparado com um rendimento de 100%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1- (((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,05 (s, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,16 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,68 (s, 1H), 4,56 (s, 1H), 4,56 (spt, J=6,7 Hz, 1H), 4,20 - 4,09 (m, 4H), 3,11 - 2,93 (m, 8H), 2,71 - 2,36 (m, 6H), 2,30 - 0,86 (m, 27H), 1,66 (s, 3H), 1,49 (d, J=6,3 Hz, 6H), 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,93 - 0,87 (m, 6H), 0,83 (s, 3H). LC/MS: m/e 862,73 (M+H)+, 2,35 min (Método de LCMS 1). Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 45%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((1-isopropil-1H-1,2,3-triazol-5-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,12 (d, J=2,3 Hz, 1H), 5,36 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,3 Hz, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,67 - 4,52 (h, J=6,8 Hz, 1H), 4,32 - 4,10 (m, 2H), 3,20 - 2,89 (m, 8H), 2,87 - 2,68 (m, 3H), 2,68 - 2,53 (m, 1H), 2,34 - 2,21 (m, 1H), 2,21 - 1,85 (m, 11H), 1,85 - 1,73 (m, 1H), 1,71 - 1,65 (m, 1H), 1,68 (s, 3H), 1,51 (d, J=6,5 Hz, 6H), 1,64 - 1,36 (m, 9H), 1,36 - 1,19 (m, 4H), 1,14 (s, 3H), 1,07 (br. s., 2H), 1,01 (s, 3H), 0,97 - 0,96 (m, 4H), 0,94 - 0,89 (m, 3H), 0,87 (s, 3H). LC/MS: m/e 834,69 (M+H)+, 2,32 min (Método de LCMS 1). Exemplo 18 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-(prop-1-en-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-((isotiazol-3-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00212] O composto título foi preparado com um rendimento de 36%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 1-A, usando isotiazol-3(2H)-ona como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,42 (d, J=4,8 Hz, 1H), 6,57 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,42 (s, 2H), 4,17 (q, J=7,0 Hz, 2H), 3,99 - 3,93 (m, 4H), 2,31 - 2,20 (m, 2H), 1,75 - 1,65 (m, 6H), 1,23 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 328,20 (M+H)+, 3,59 min (Método de LCMS 12). Etapa 2. Preparação de 8-(((5-(2-hidroxipropan-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)- 1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00213] A uma solução de 8-((isotiazol-3-iloxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila (100 mg, 0305 mmol) em THF (2 mL) sob nitrogênio a -78 °C, adicionou-se uma solução 2M de LDA (0,305 mL, 0,611 mmol). Foi agitada a -78 °C durante 20 minutos antes de ser adicionada propan-2-ona pura (0,045 mL, 0,611 mmol). A agitação continuou por mais 30 minutos a -78 °C. A reação foi resfriada bruscamente com um cloreto de amônio semissaturado em HCl 0,5 M, extraída com acetato de etila e concentrada a vácuo. A mistura bruta foi purificada por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 45% de EtOAc / hexanos para dar o produto desejado como um óleo (83 mg, 70%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,35 (s, 1H), 4,32 (s, 2H), 4,13 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,91 (s, 4H), 2,84 (s, 1H), 2,26 - 2,12 (m, 2H), 1,72 - 1,61 (m, 6H), 1,58 (s, 6H), 1,19 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 386,20 (M+H)+, 2,75 min (Método de LCMS 13). Etapa 3. Preparação de 1-(((5-(2-hidroxipropan-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)- 4-oxociclo-hexanocarboxilato de etila.
[00214] O composto título foi preparado com um rendimento de 100%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8- (((5-(2-hidroxipropan-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,36 (s, 1H), 4,41 (s, 2H), 4,20 (q, J=7,2 Hz, 2H), 2,99 (s, 1H), 2,52 - 2,41 (m, 4H), 2,39 - 2,29 (m, 2H), 1,88 - 1,75 (m, 2H), 1,59 (s, 6H), 1,23 (t, J=7,0 Hz, 3H). LC/MS: m/e 342,15 (M+H)+, 2,03 min (Método de LCMS 3). Etapa 4. Preparação de 1-(((5-(prop-1-en-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00215] O composto título foi preparado com um rendimento de 22%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 1- (((5-(2-hidroxipropan-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)-4-oxociclo- hexanocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,50 (s, 1H), 5,76 (td, J=3,3, 1,8 Hz, 1H), 5,45 (s, 1H), 5,18 (s, 1H), 4,47 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,41 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,19 (qd, J=7,1, 0,8 Hz, 2H), 2,85 - 2,77 (m, 1H), 2,53 - 2,22 (m, 4H), 2,09 (s, 3H), 1,98 - 1,90 (m, 1H), 1,24 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 456,10 (M+H)+, 2,76 min (Método de LCMS 3). Etapa 5. Preparação de 1-(((5-(prop-1-en-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)-4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00216] O composto título foi preparado com um rendimento de 78%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1- (((5-(prop-1-en-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,55 - 6,50 (m, 1H), 6,49 (s, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,14 (s, 1H), 4,46 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,37 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,15 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,74 - 2,64 (m, 1H), 2,28 - 2,16 (m, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,01 - 1,80 (m, 2H), 1,26 (s, 12H), 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 434,20 (M+H)+, 2,79 min (Método de LCMS 3). Etapa 6. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-(prop-1-en-2-il)isotiazol-3- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00217] O composto título foi preparado com um rendimento de 42%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1- (((5-(prop-1-en-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,51 (s, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,19 (br. s., 1H), 5,17 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,51 - 4,38 (m, 2H), 4,21 - 4,12 (m, 2H), 3,41 - 2,92 (m, 11H), 2,78 - 2,54 (m, 3H), 2,22 - 0,89 (m, 27H), 2,09 (s, 3H), 1,69 (s, 3H), 1,23 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,96 - 0,91 (m, 6H), 0,87 (s, 3H). LC/MS: m/e 876,60 (M+H)+, 3,01 min (Método de LCMS 3). Etapa 7. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-(prop-1-en-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 56%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((5-(prop-1-en-2-il)isotiazol-3-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,55 (s, 1H), 5,47 (s, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=5,3 Hz, 1H), 5,19 (s, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,56 - 4,50 (m, 1H), 4,50 - 4,43 (m, 1H), 3,40 (d, J=11,8 Hz, 1H), 3,29 - 2,91 (m, 10H), 2,80 - 2,72 (m, 1H), 2,72 - 2,62 (m, 1H), 2,34 - 2,09 (m, 6H), 2,11 (s, 3H), 2,09 - 1,97 (m, 4H), 1,97 - 1,83 (m, 2H), 1,83 - 1,68 (m, 2H), 1,71 (s, 3H), 1,67 - 1,37 (m, 12H), 1,37 - 1,23 (m, 1H), 1,15 (s, 3H), 1,13 - 1,03 (m, 2H), 1,06 (s, 3H), 0,98 - 0,97 (m, 3H), 0,95 - 0,93 (m, 3H), 0,89 (s, 3H). LC/MS: m/e 848,50 (M+H)+, 3,05 min (Método de LCMS 3). Exemplo 19 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridazin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico. Etapa 1. Preparação de 8-((piridazin-3-iloxi)metil)-1,4- dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila.
[00218] À solução de 8-(hidroximetil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8- carboxilato de etila (300 mg, 1,23 mmol) em DMF (6 mL) a 0 °C, adicionou- se terc-butóxido de potássio (1,84 mL, 1,84 mmol) seguido de 3- cloropiridazina (211 mg, 1,84 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0 °C, depois aquecida até RT durante a noite. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (10 mL), lavada com água, seca com sulfato de sódio e concentrada a vácuo para dar produto bruto. LC/MS: m/e 323,20 (M+H)+, 2,09 min (Método de LCMS 7). Etapa 2. Preparação de 4-oxo-1-((piridazin-3-iloxi)metil)ciclo- hexanocarboxilato de etila.
[00219] O composto título foi preparado com um rendimento de 70%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 2, usando 8- ((piridazin-3-iloxi)metil)-1,4-dioxaespiro[4.5]decano-8-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,82 (dd, J=4,5, 1,3 Hz, 1H), 7,37 (dd, J=9,0, 4,5 Hz, 1H), 6,96 (dd, J=8,9, 1,4 Hz, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,21 (q, J=7,1 Hz, 2H), 2,57 - 2,28 (m, 6H), 1,92 - 1,82 (m, 2H), 1,28 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 279,15 (M+H)+, 1,71 min (Método de LCMS 7). Etapa 3. Preparação de 1-((piridazin-3-iloxi)metil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00220] O composto título foi preparado com um rendimento de 39%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 3, usando 4- oxo-1-((piridazin-3-iloxi)metil)ciclo-hexanocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,82 (dd, J=4,5, 1,3 Hz, 1H), 7,36 (dd, J=9,0, 4,5 Hz, 1H), 6,94 (dd, J=9,0, 1,3 Hz, 1H), 5,75 (td, J=3,1, 1,8 Hz, 1H), 4,62 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,59 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,18 - 4,11 (m, 2H), 2,88 - 2,79 (m, 1H), 2,53 - 2,23 (m, 4H), 1,97 - 1,90 (m, 1H), 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H). LC/MS: m/e 411,15 (M+H)+, 2,66 min (Método de LCMS 7). Etapa 4. Preparação de 1-((piridazin-3-iloxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00221] O composto título foi preparado com um rendimento de 43%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 4, usando 1- ((piridazin-3-iloxi)metil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,78 (dd, J=4,5, 1,3 Hz, 1H), 7,32 (dd, J=8,9, 4,4 Hz, 1H), 6,91 (dd, J=8,9, 1,4 Hz, 1H), 6,49 (dt, J=3,7, 1,8 Hz, 1H), 4,62 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,53 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,07 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,72 - 2,64 (m, 1H), 2,27 - 2,08 (m, 3H), 1,98 - 1,80 (m, 2H), 1,21 (s, 12H), 1,21 (t, J=7,3 Hz, 3H). LC/MS: m/e 389,25 (M+H)+, 2,74 min (Método de LCMS 7). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridazin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila.
[00222] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 5, usando 1-((piridazin-3-iloxi)metil)- 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. O material bruto foi tomado diretamente na etapa seguinte sem purificação. Etapa 6. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridazin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 22% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral A etapa 6, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridazin-3-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 9,09 (d, J=4,5 Hz, 1H), 7,74 (dd, J=9,0, 4,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J=8,8 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,21 (t, J=5,6 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,76 - 4,64 (m, 2H), 3,39 (d, J=12,5 Hz, 1H), 3,25 - 3,02 (m, 9H), 3,02 - 2,86 (m, 2H), 2,86 - 2,62 (m, 2H), 2,32 - 2,06 (m, 5H), 2,06 - 1,84 (m, 6H), 1,82 - 1,67 (m, 2H), 1,71 (s, 3H), 1,66 - 1,35 (m, 10H), 1,35 - 1,20 (m, 4H), 1,17 (s, 3H), 1,14 - 1,04 (m, 2H), 1,05 (s, 3H), 0,97 - 0,95 (m, 3H), 0,92 - 0,91 (m, 3H), 0,87 (s, 3H). LC/MS: m/e 803,48 (M+H)+, 2,27 min (Método de LCMS 1). Procedimento geral B: Preparação de derivados de ácido ciclo-hexenocarboxílico (R) α-substituídos. Etapa 1. Preparação de benzoato de ((R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00223] Uma mistura de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato (1 eq), benzoato de (R)-(1- (etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1- il)metila (1,2 eq), Na2CO3 (3 eq) e Pd(Ph3P)4 (0,06 eq) em 1,4-dioxano e H2O (4 : 1) foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 35% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado (rendimento de 68%) como um sólido. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,01 (dd, J=8,4, 1,4 Hz, 2H), 7,60 - 7,53 (m, 1H), 7,47 - 7,40 (m, 2H), 5,36 (br. s., 1H), 5,20 (dd, J=6,0, 1,8 Hz, 1H), 4,71 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,49 - 4,39 (m, 2H), 4,18 (qd, J=7,2, 1,4 Hz, 2H), 3,13 - 2,98 (m, 8H), 2,73 - 2,43 (m, 6H), 2,27 - 0,89 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,25 - 1,20 (m, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,97 (br. s., 3H), 0,96 (br. s., 3H), 0,94 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). LC/MS m/z 857,65 (M+H)+, 2,43 min (Método de LCMS 1). Etapa 2. Preparação de (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila.
[00224] Uma suspensão de benzoato de ((R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1 eq) e NaOH 1N (1 eq) em MeOH e THF foi agitada à RT durante 2 dias. A mistura foi neutralizada com HCl 1N e o solvente foi removido a vácuo. O resíduo foi tomado em CH2Cl2, lavado com H2O seguido de salmoura, seco com Na2SO4 e concentrado a vácuo. O produto bruto foi purificado em gel de sílica eluído com acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado (rendimento de 85%) como um sólido. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,32 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,71 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,19 (q, J=7,2 Hz, 2H), 3,69 (br. s., 2H), 3,12 - 2,98 (m, 8H), 2,72 - 2,43 (m, 6H), 2,28 - 0,89 (m, 27H), 1,70 (s, 3H), 1,28 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). LC/MS m/z 753,65 (M+H)+, 3,79 min (Método de LCMS 2). Etapa 3. Preparação de (R) α-metil éter.
[00225] A uma solução de (R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila (1 eq) e Ar-X (2 eq) em DMF, adicionou-se KOtBu (2 eq) a 0 °C. A mistura resultada foi aquecida à RT e agitada durante a noite. A mistura de reação foi diluída com EtAOc, lavada com água, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo para dar produto bruto que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Etapa 4: Preparação de ácido ciclo-hexenocarboxílico (R) a-substituídos.
[00226] Uma solução de (R) α-metil éster da Etapa 3 em 1,4-dioxano, MeOH e NaOH 1N (2 : 1 : 1) foi agitada a 50 °C. A mistura de reação foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa para dar o produto final. Exemplo 20 Preparação de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico. Etapa 1 - 2: Procedimento geral B. Etapa 3. Preparação de (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00227] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 3, usando 2- cloropiridina como reagente. LC/MS m/z 830,55 (M+H)+, 3,56 min (Método de LCMS 5). Etapa 4. Ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 41% (2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 4 durante 6 h, usando (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,21 (dd, J=5,3, 1,4 Hz, 1H), 7,70 (ddd, J=8,6, 7,0, 2,0 Hz, 1H), 6,98 (ddd, J=7,1, 5,3, 0,8 Hz, 1H), 6,84 (d, J=8,4 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,20 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,49 (d, J=9,9 Hz, 1H), 4,45 (d, J=9,9 Hz, 1H), 3,38 - 3,31 (m, 1H), 3,25 - 3,00 (m, 9H), 2,98 - 2,85 (m, 2H), 2,79 (dt, J=10,9, 5,6 Hz, 1H), 2,70 - 2,62 (m, 1H), 2,28 - 1,86 (m, 11H), 1,76 - 1,07 (m, 16H), 1,70 (s, 3H), 1,16 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). LC/MS m/z 802,45 (M+H)+, 3,34 min (Método de LCMS 5). Exemplo 21 Preparação de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirimidin-4-iloxi)metil)ciclo-hex-3- eno-1-carboxílico. Etapa 1 - 2: Procedimento geral B. Etapa 3. Preparação de (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirimidin-4-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00228] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 3, usando 4- cloropirimidina como reagente. LC/MS m/z 831,55 (M+H)+, 3,45 min (Método de LCMS 5).
[00229] Etapa 4. Ácido (R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirimidin-4-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 31% (2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 4 durante 4 h, usando (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirimidin-4-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,95 (s, 1H), 8,57 (d, J=6,4 Hz, 1H), 6,96 (dd, J=6,3, 0,9 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,70 (s, 1H), 4,66 (s, 2H), 3,37 - 3,31 (m, 1H), 3,23 - 3,01 (m, 9H), 2,97 - 2,86 (m, 2H), 2,80 (dt, J=10,6, 5,6 Hz, 1H), 2,69 - 2,62 (m, 1H), 2,30 - 1,87 (m, 11H), 1,76 - 1,01 (m, 16H), 1,70 (s, 3H), 1,16 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). LC/MS m/z 725,50 (M+H)+, 3,23 min (Método de LCMS 5). Exemplo 22 Preparação de ácido (R)-1-(((3-cloropiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1 - 2: Procedimento geral B. Etapa 3. Preparação de (R)-1-(((3-cloropiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00230] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 3, usando 2,3- dicloropiridina como reagente. LC/MS m/z 864,45 (M+H)+, 3,83 min (Método de LCMS 5). Etapa 4. Ácido (R)-1-(((3-cloropiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 69% (2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 4 durante 6 h, usando (R)-1-(((3- cloropiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,04 (dd, J=4,9, 1,7 Hz, 1H), 7,64 (dd, J=7,6, 1,5 Hz, 1H), 6,87 (dd, J=7,6, 5,0 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,54 (d, J=10,4 Hz, 1H), 4,51 (d, J=10,2 Hz, 1H), 3,43 - 3,36 (m, 1H), 3,25 - 3,01 (m, 9H), 2,99 - 2,87 (m, 2H), 2,75 (td, J=10,9, 5,7 Hz, 1H), 2,69 - 2,62 (m, 1H), 2,30 - 1,85 (m, 11H), 1,76 - 1,07 (m, 16H), 1,69 (s, 3H), 1,16 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). LC/MS m/z 836,45 (M+H)+, 3,48 min (Método de LCMS 5). Exemplo 23 Preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.Etapa 1 - 2: Procedimento geral B. Etapa 3. Preparação de (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00231] O composto título foi preparado com um rendimento de 97% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 3, usando 2-fluoronicotinonitrila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,33 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 7,87 (dd, J=7,4, 1,9 Hz, 1H), 7,00 - 6,95 (m, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,71 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,57 - 4,53 (m, 2H), 4,18 (qd, J=7,2, 2,6 Hz, 2H), 3,12 - 2,99 (m, 8H), 2,76 - 2,41 (m, 6H), 2,28 - 0,90 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,27 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). LC/MS m/z 855,60 (M+H)+, 4,03 min (Método de LCMS 2). Etapa 4. Ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 67% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 3 à RT durante 2 dias, usando (R)-1-(((3- cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 8,37 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 8,06 (dd, J=7,5, 1,8 Hz, 1H), 7,10 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,22 (dd, J=6,0, 1,5 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,76 (t, J=1,5 Hz, 1H), 4,63 - 4,55 (m, 2H), 3,27 - 3,07 (m, 11 H), 2,91 (ddd, J=14,4, 10,0, 4,6 Hz, 1H), 2,79 - 2,61 (m, 2H), 2,32 - 1,09 (m, 27H), 1,77 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,12 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). LC/MS m/z 827,60 (M+H)+, 3,70 min (Método de LCMS 2). Exemplo 24 Preparação de ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00232] O composto título foi um subproduto formado durante a Etapa 4 da preparação de (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila. O material foi isolado em rendimento de 14% como um sólido. 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 8,40 (dd, J=7,8, 2,0 Hz, 1H), 8,29 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 7,13 (dd, J=7,7, 4,9 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,64 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,53 (d, J=10,5 Hz, 1H), 3,28 - 3,03 (m, 11H), 3,01 - 2,90 (m, 1H), 2,84 - 2,68 (m, 2H), 2,37 - 1,06 (m, 27H), 1,75 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H). LC/MS m/z 845,60 (M+H)+, 3,66 min (Método de LCMS 2). Procedimento geral C: Preparação de derivados hexenocarboxílico (S) a-substituídos. Etapa 1 ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00233] O composto título foi preparado em 86% de rendimento como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 1, usando benzoato de (S)-(1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila em vez de benzoato de (R)-(1- (etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1- il)metila como o reagente. LC/MS m/z 857,50 (M+H)+, 3,055 min (Método de LCMS 3). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,07 - 7,90 (m, 2H), 7,64 - 7,52 (m, 1H), 7,49 - 7,37 (m, 2H), 5,37 (br. s., 1H), 5,21 (dd, J=6,0, 1,8 Hz, 1H), 4,72 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,61 (d, J=1,3 Hz, 1H), 4,52 - 4,37 (m, 2H), 4,25 - 4,16 (m, 2H), 3,15 - 3,00 (m, 8H), 2,78 - 2,53 (m, 5H), 2,51 - 2,42 (m, 1H), 2,34-2,23 (m, 1H), 1,70 ( s, 3H), 1,07 ( s, 3H), 0,99 ( s, 3H), 0,97 ( s, 3H), 0,93 ( s, 3H), 0,87 ( s, 3H), 2,22 - 0,80 (m, 29H). Etapa 2. Preparação de (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila.
[00234] O composto título foi preparado em 94% de rendimento como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B etapa 2, usando benzoato de ((S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila em vez de benzoato de ((R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila como o reagente. LC/MS m/z 753,55 (M+H)+, 2,754 min (Método de LCMS 3). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,30 (s, 1H), 5,16 (d, J=5,0 Hz, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,61 (s, 1H), 4,23 - 4,12 (m, 2H), 3,67 (s, 2H), 3,28 - 2,65 (m, 13H), 2,54 (d, J=16,1 Hz, 1H), 1,68 ( s, 3H), 1,09 ( s, 3H), 0,98 ( s, 3H), 0,96 ( s, 3H), 0,89 ( s, 3H), 0,85 ( s, 3H), 2,23 - 0,78 (m, 30H). Etapa 3. Preparação de (S)-1-((ariloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00235] A uma solução de (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila (1 eq) em DMF a -78 °C, adicionou-se KOtBu (2 eq). A mistura resultada foi agitada durante 20 minutos antes da adição de Ar-X (2 eq). Em seguida, a reação foi aquecida à RT e agitada durante a noite. A mistura de reação foi diluída com EtAOc, lavada com água, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo para dar produto bruto que foi usado na etapa seguinte sem purificação ou purificado por cromatografia em gel de sílica usando acetato de etila/hexanos como eluentes. Etapa 4. Preparação de ácido (S)-1-((ariloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00236] Uma solução de (S)-1-((ariloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila da Etapa 3 em 1,4-dioxano, MeOH e NaOH 1N (2 : 1 : 1) foi agitada a 50 °C durante 2 a 18 horas. A mistura de reação foi então purificada por HPLC preparativa de fase reversa para dar o produto final. Exemplo 25 Preparação de ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1 - 2: Procedimento geral C etapa 1-2. Etapa 3. Preparação de (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00237] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 3, usando 2- cloronicotinonitrila como reagente. LC/MS m/z 855,50 (M+H)+, 3,004 min (Método de LCMS 3). Etapa 4. Ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 29% (durante 2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 4 durante 7 h, usando (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como o reagente. LC/MS: m/e 827,50 (M+H)+, 3,393 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 8,40 (dd, J=5,1, 1,9 Hz, 1H), 8,08 (dd, J=7,5, 2,0 Hz, 1H), 7,12 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,39 (br. s., 1H), 5,25 - 5,21 (m, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,62 (d, J=10,3 Hz, 1H), 4,58 (d, J=10,3 Hz, 1H), 3,31 - 3,18 (m, 8H), 3,16 - 3,12 (m, 2H), 3,12 - 3,07 (m, 1H), 3,02 - 2,87 (m, 1H), 2,80 (td, J=11,0, 5,5 Hz, 1H), 2,73 - 2,63 (m, 2H), 2,37 - 2,27 (m, 1H), 2,26 - 2,01 (m, 8H), 1,97 - 1,91 (m, 1H), 1,88 - 1,75 (m, 2H), 1,78 (s, 3H), 1,72 - 1,44 (m, 10H), 1,42 - 1,31 (m, 1H), 1,20 (s, 3H), 1,27 - 1,09 (m, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H).
[00238] Alternativamente, o Exemplo 28 pode ser preparado usando o seguinte procedimento:
[00239] Etapa 1: Preparação de ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, HCl. A um balão contendo uma suspensão de ácido (R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(fluorometil)ciclo-hex-3-enocarboxílico (4,08 g, 5,61 mmol) preparada conforme descrito na WO 2015157483 em 1,4-dioxano (50,0 mL), adicionou-se hidróxido de tetrabutilamônio (55% em água) (26,5 g, 56,1 mmol). O balão foi afixado ao condensador de refluxo e foi aquecido em um banho de óleo a 100 °C. Após 8,5 dias de aquecimento, a LC/MS mostrou que a reação estava completa. A mistura foi resfriada até RT e foi transferida para um funil de adição graduado. Ao ficar no funil de adição, duas camadas distintas se formaram. A camada inferior contendo o produto foi dividida ao meio com base na graduação do funil. Metade do material foi acidificado pela adição de HCl 1N. Os sólidos que se formaram foram coletados por filtração e foram lavados com água. Os sólidos foram então triturados com éter e coletados por filtração. Os sólidos foram lavados com éter e depois deixados secar no papel filtro. O produto título foi isolado como um sólido branco (1,95 g, 2,56 mmol, 45,6% de rendimento, 91% se calculado como metade da mistura). LCMS: m/e 725,4 (M+H)+, 1,15 min (Método 16).
[00240] Etapa 2. A uma suspensão de ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, HCl (1,95 g, 2,56 mmol) em THF (30 mL), adicionou-se KHMDS (0,91M em THF) (9,0 mL, 8,19 mmol). A mistura foi agitada durante 5 minutos, depois 2-fluoronicotinonitrila (1,0 g, 8,19 mmol) foi adicionado. Após 2,5 h, uma alíquota foi removida. A LC/MS mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi diluída com HCl 1N (30 mL) e depois extraída com acetato de etila (3 x 75 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com NaCl aq. sat. e secas com sulfato de magnésio. O agente de secagem foi removido por filtração. O agente de secagem não filtrou bem, então é provável que o sólido precipite enquanto permanece em rt, então a torta de filtro sólida foi agitada com acetato de etila, depois com diclorometano, depois filtrada de novo. Os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado com éter e os sólidos que se formaram foram coletados por filtração e lavados com éter. O resíduo foi dissolvido em metanol e foi purificado por cromatografia de fase reversa usando uma coluna Isco Redisep gold C18 de 275 g e um gradiente de 20%B-80%A a 100%B em que A era 90% de água, 10% de acetonitrila com 0,1% de tampão de TFA e B era 10% de água, 90% de acetonitrila com 0,1% de tampão de TFA. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para dar ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (1,50g, 1,59 mmol, 62%) como um sólido branco. LCMS: m/e 827,4 (M+H)+, 1,32 min (Método 16). Exemplo 26 Preparação de ácido (S)-1-(((3-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00241] O composto título foi preparado como um subproduto em rendimento de 7% (durante 2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C Etapa 4 durante 7 h, usando (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como o reagente. LC/MS: m/e 845,55 (M+H-H2O)+, 3,349 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 8,42 (dd, J=7,5, 2,0 Hz, 1H), 8,31 (dd, J=4,8, 2,0 Hz, 1H), 7,16 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,40 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,86 (br. s., 1H), 4,76 (s, 1H), 4,66 - 4,62 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,57 - 4,53 (d, J=10,5 Hz, 1H), 3,30 - 3,17 (m, 7H), 3,12 (d, J=17,3 Hz, 3H), 2,96 - 2,92 (m, 1H), 2,81 - 2,71 (m, 2H), 2,45 - 2,30 (m, 1H), 2,25 - 2,12 (m, 5H), 2,12 - 2,00 (m, 3H), 1,92 - 1,67 (m, 6H), 1,78 (s, 3H), 1,67 - 1,41 (m, 10H), 1,26 - 1,06 (m, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). Exemplo 27 Preparação de ácido (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-(metoxicarbonil)piridin-2- il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00242] O composto título foi preparado como um subproduto em rendimento de 0,6% (durante 2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral B Etapa 4 durante 15 h, usando (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como o reagente. LC/MS: m/e 860,65 (M+H)+, 2,93 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 8,30 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 8,17 (dd, J=7,5, 2,0 Hz, 1H), 7,06 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,39 (br. s., 1H), 5,25 - 5,21 (m, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,57 - 4,47 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,30 - 3,17 (m, 8H), 3,16 - 3,07 (m, 3H), 3,02 - 2,90 (m, 1H), 2,81 (td, J=11,0, 5,4 Hz, 1H), 2,73 - 2,63 (m, 1H), 2,36 - 2,00 (m, 9H), 2,00 - 1,90 (m, 1H), 1,90 - 1,75 (m, 3H), 1,77 (s, 3H), 1,75 - 1,34 (m, 12H), 1,26 - 1,09 (m, 2H), 1,20 (s, 3H), 1,12 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). Exemplo 28 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1--(((6-metoxipiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- eno-1-carboxílico. Etapa 1 - 2: Procedimento geral C etapa 1-2. Etapa 3. Preparação de (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((6-fluoropiridin-2-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00243] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 3, usando 2,6- difluoropiridina como reagente. LC/MS m/z 848,50 (M+H)+, 3,031 min (Método de LCMS 3).
[00244] Etapa 4. Ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((6-metoxipiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno- 1-carboxílico foi preparado em rendimento de 3,7% (durante 2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 4 durante 15 h, usando (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((6-fluoropiridin-2-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxilato de etila como o reagente. LC/MS: m/e 832,50 (M+H)+, 3,267 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (500MHz, METANOL- d4) δ 7,54 (t, J=7,9 Hz, 1H), 6,32 (d, J=2,9 Hz, 1H), 6,30 (d, J=2,9 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,29 - 5,15 (m, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,485 - 4,345 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,30 - 3,17 (m, 8H), 3,17 - 3,07 (m, 3H), 2,94 (ddd, J=14,5, 10,2, 4,7 Hz, 1H), 2,78 (td, J=11,0, 5,4 Hz, 1H), 2,67 - 2,60 (m, 1H), 2,30 (d, J=18,2 Hz, 1H), 2,22 - 2,09 (m, 3H), 2,09 - 2,00 (m, 2H), 1,96 - 1,66 (m, 8H), 1,78 (s, 3H), 1,66 - 1,43 (m, 10H), 1,43 - 1,29 (m, 2H), 1,29 - 1,09 (m, 1H), 1,19 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). Exemplo 29 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1--(((6-fluoropiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00245] O composto título foi preparado com um rendimento de 69,8% (2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 4 durante 7 h, usando (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((6-fluoropiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila como o reagente. LC/MS: m/e 820,45 (M+H)+, 3,136 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (500MHz, ACETONA-d6) δ 7,85 (q, J=8,1 Hz, 1H), 6,71 (dd, J=8,0, 1,3 Hz, 1H), 6,61 (dd, J=7,8, 2,3 Hz, 1H), 5,42 - 5,35 (m, 1H), 5,23 (dd, J=6,2, 1,8 Hz, 1H), 4,79 (d, J=1,2 Hz, 1H), 4,68 (d, J=1,4 Hz, 1H), 4,46 (d, J=10,2 Hz, 1H), 4,41 (d, J=10,2 Hz, 1H), 3,43 - 3,24 (m, 8H), 3,23 - 3,12 (m, 5H), 3,12 - 3,05 (m, 3H), 3,02 (td, J=10,8, 5,7 Hz, 1H), 2,70 - 2,61 (m, 1H), 2,38 - 2,16 (m, 4H), 2,17 - 2,01 (m, 3H), 1,95 - 1,84 (m, 2H), 1,84 - 1,68 (m, 2H), 1,74 (s, 3H), 1,64 (d, J=16,8 Hz, 1H), 1,61 - 1,42 (m, 8H), 1,40 - 1,22 (m, 1H), 1,26 (s, 3H), 1,23 - 1,11 (m, 2H), 1,13 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H). Exemplo 30 Preparação de ácido (S)-1-(((4-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.Etapa 1 - 2: Procedimento geral C etapa 1-2. Etapa 3. Preparação de (S)-1-(((4-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00246] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 3, usando 2- fluoroisonicotinonitrila como reagente. LC/MS m/z 855,50 (M+H)+, 3,048 min (Método de LCMS 3).
[00247] Etapa 4. Ácido (S)-1-(((4-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 30,5% (durante 2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 4 durante 7 h, usando (S)-1-(((4-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila como o reagente. LC/MS: m/e 845,55 (M+H)+, 3,048 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,02 (d, J=5,3 Hz, 1H), 7,12 (d, J=5,3 Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 5,16 (br. s., 1H), 5,00 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,58 (br. s., 1H), 4,48 (br. s., 1H), 4,35 - 4,18 (m, 2H), 3,25 - 2,65 (m, 18H), 2,47 (d, J=17,1 Hz, 1H), 2,14 - 1,64 (m, 10H), 1,52 - 1,48 (m, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,45 - 1,03 (m, 10H), 0,98 (s, 3H), 0,88 - 0,84 (m, 2H), 0,86 (s, 3H), 0,78 (s, 3H), 0,73 (s, 3H), 0,68 (s, 3H). Exemplo 31 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico. Etapa 1 - 2: Procedimento geral C etapa 1-2. Etapa 3. Preparação de (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila
[00248] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 3, usando 2- bromopiridina como reagente. LC/MS m/z M+1=830,55. 2,822 min (Método de LCMS 3).
[00249] Etapa 4. Ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 22,9% (durante 2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 4 durante 7 h, usando (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila como o reagente. LC/MS: m/e 802,45 (M+H)+, 2,824 min (Método de LCMS 3). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,21 (dd, J=5,1, 1,4 Hz, 1H), 7,69 (ddd, J=8,6, 7,0, 1,8 Hz, 1H), 6,97 (td, J=6,2, 0,9 Hz, 1H), 6,83 (d, J=8,5 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,51 (d, J=10,0 Hz 1H), 4,46 (d, J=10,0 Hz 1H), 3,37 - 3,34 (m, 1H), 3,25 - 3,10 (m, 7H), 3,10 - 3,01 (m, 2H), 3,00 - 2,87 (m, 2H), 2,82 (dt, J=10,9, 5,6 Hz, 1H), 2,73 (d, J=15,3 Hz, 1H), 2,35 - 2,13 (m, 4H), 2,13 - 1,88 (m, 7H), 1,81 - 1,67 (m, 2H), 1,71 (s, 3H), 1,66 - 1,26 (m, 13H), 1,18 (s, 3H), 1,13 - 1,03 (m, 1H), 1,06 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,89 (s, 3H). Exemplo 32 Preparação de ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirazin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico. Etapa 1 - 2: Procedimento geral C etapa 1-2. Etapa 3. Preparação de (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirazin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno- 1-carboxilato de etila.
[00250] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 3, usando 2- fluoropirazina como o reagente. LC/MS m/z M+1=831,55. 2,922 min (Método de LCMS 3).
[00251] Etapa 4. Ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirazin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 77,0% (durante 2 etapas) como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral C etapa 4 durante 9 h, usando (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirazin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila como o reagente. LC/MS: m/e 803,42 (M+H)+, 2,38 min (Método de LCMS 1). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,27 (br. s., 2H), 8,17 (br. s., 1H), 5,39 (br. s., 1H), 5,22 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,62 - 4,48 (dd, J=10,5, 17,3 Hz, 2H), 3,44 - 3,32 (m, 1H), 3,30 - 2,89 (m, 11H), 2,84 - 2,64 (m, 2H), 2,38 - 1,83 (m, 11H), 1,83 - 1,67 (m, 2H), 1,71 (s, 3H), 1,68 - 1,37 (m, 10H), 1,38 - 1,22 (m, 2H), 1,16 (s, 3H), 1,13 - 1,03 (m, 2H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,89 (s, 3H). Procedimento geral D: Preparação de derivados de ácido □-piridin-2-iloxi ciclo-hexenocarboxílico. Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00252] Uma mistura de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato (1 eq), 1-((piridin-2- iloxi)metil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato (1,2 eq), Na2CO3 (3 eq) e Pd(Ph3P)4 (0,06 eq) em 1,4-dioxano e H2O (4 : 1), foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 55% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado (rendimento de 57%) como um sólido. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,13 (dd, J=5,0, 1,5 Hz, 1H), 7,58 - 7,52 (m, 1H), 6,86 (ddd, J=7,2, 5,1, 0,8 Hz, 1H), 6,72 (d, J=8,5 Hz, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,73 (d, J=2,3 Hz, 1H), 4,60 (dd, J=2,3, 1,3 Hz, 1H), 4,48 - 4,37 (m, 2H), 4,18 - 4,11 (m, 2H), 2,70 - 2,62 (m, 1H), 2,54 (td, J=10,9, 5,3 Hz, 1H), 2,29 - 0,84 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,20 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,07 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,97 - 0,91 (m, 6H), 0,86 (s, 3H). LC/MS m/z 669,60 (M+H)+, 2,82 min (Método de LCMS 3). Etapa 2: Preparação de derivado de amina C-17.
[00253] A uma solução de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila (1 eq) e aldeído (2 eq) em DCE, adicionou-se isopropóxido de titânio (IV) (2 eq). A mistura foi agitada à RT durante 1 h. Triacetoxiboroidreto de sódio (2 eq) foi adicionado e a mistura foi agitada à RT durante a noite. A reação foi resfriada bruscamente com Na2CO3 aquoso saturado. A pasta fluida resultante foi extraída com diclorometano, lavada com salmoura, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado. Etapa 3: Preparação de ácido carboxílico.
[00254] Uma solução do éster da etapa 2 em 1,4-dioxano, MeOH e NaOH 1N (2 : 1 : 1) foi agitada a 60-70 °C. A mistura de reação foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa para dar o produto final. Exemplo 33 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico. Etapa 1: Procedimento geral D etapa 1. Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila.
[00255] O composto título foi preparado com um rendimento de 78% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral D etapa 2, usando 2-(4-hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4- il)acetaldeído como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,12 (dd, J=5,0, 1,5 Hz, 1H), 7,57 - 7,52 (m, 1H), 6,85 (ddd, J=7,0, 5,1, 0,9 Hz, 1H), 6,72 (d, J=8,5 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,73 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,61 (s, 1H), 4,48 - 4,36 (m, 2H), 4,18 - 4,08 (m, 4H), 3,57 - 3,43 (m, 2H), 2,91 - 2,61 (m, 5H), 2,50 (td, J=10,7, 5,5 Hz, 1H), 2,24 - 0,88 (31H), 1,68 (s, 3H), 1,19 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 - 0,90 (m, 6H), 0,85 (s, 3H). LC/MS m/z 845,60 (M+H)+, 3,59 min (Método de LCMS 4). Etapa 3. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4- hidroxi-1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 76% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral D etapa 3 a 60 °C durante 12 h, usando 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroxi- 1,1-dioxidotetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- octadeca-hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,29 (br. s., 1H), 7,96 (t, J=7,0 Hz, 1H), 7,17 (br. s., 1H), 7,04 (d, J=8,3 Hz, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,3 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,53 - 4,39 (m, 2H), 3,58 - 3,35 (m, 2H), 3,21 (br. s., 2H), 2,97 - 2,84 (m, 2H), 2,76 - 2,62 (m, 2H), 2,58 - 2,44 (m, 1H), 2,34 - 1,04 (m, 32H), 1,68 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,95 - 0,91 (m, 6H), 0,87 (s, 3H). LC/MS m/z 817,55 (M+H)+, 5,51 min (Método de LCMS 4). Procedimento geral E. Preparação de derivados de ácido ciclo- hexenocarboxílico a-substituído por meio de alquilação de álcool a-metílico.Etapa 1. Preparação de benzoato de (4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00256] (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato (1 eq), benzoato de (1- (etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1- il)metila (1,05 eq), Na2CO3 H2O (3 eq) e Pd(Ph3P)4 (0,06 eq) em 1,4-dioxano e H2O (4 : 1) foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e o resíduo foi particionado entre EtOAc e H2O. A camada aquosa separada foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com Na2SO4 e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 60% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado como um sólido (rendimento de 67%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,01 (dd, J=8,2, 1,1 Hz, 2H), 7,59 - 7,53 (m, 1H), 7,46 - 7,40 (m, 2H), 5,36 (br. s., 1H), 5,20 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,71 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,48 - 4,39 (m, 2H), 4,21 - 4,14 (m, 2H), 3,12 - 2,98 (m, 8H), 2,73 - 2,53 (m, 5H), 2,50 - 2,42 (m, 1H), 2,31 - 0,81 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,98 - 0,92 (m, 6H), 0,86 (s, 3H). LC/MS: m/e 857,50 (M+H)+, 2,91 min (Método de LCMS 3). Etapa 2: Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila.
[00257] Uma suspensão de benzoato de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1 eq) e NaOH 1N (1 eq) em MeOH e THF foi agitada à RT durante 1 dia. A mistura foi neutralizada com ácido cítrico aquoso saturado e o solvente foi removido a vácuo. O resíduo foi tomado em EtOAc, lavado com salmoura, seco com Na2SO4 e concentrado a vácuo para dar o produto desejado (99% de rendimento) como um sólido sem purificação adicional. LC/MS m/z 753,70 (M+H)+, 2,85 min (Método de LCMS 3). Etapa 3. Preparação de éster ciclo-hexenocarboxílico a-substituído.
[00258] A uma solução de -4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de etila (1 eq) e Ar-X (2 eq) em DMF, adicionou-se KOtBu (2 eq). A mistura resultante foi aquecida à RT e agitada durante a noite. A mistura de reação foi diluída com EtAOc, lavada com água, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo para dar produto bruto que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Etapa 4. Preparação de ácido ciclo-hexenocarboxílico a-substituído.
[00259] Uma solução de α-metil éster da etapa 4 em 1,4-dioxano, MeOH e NaOH 1N (2 : 1 : 1) foi agitada a 50 °C. A mistura de reação foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa para dar o produto final. Exemplo 34 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirimidin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico. Etapa 1-2: Procedimento geral E. Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirimidin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de etila.
[00260] O composto título foi preparado como um produto bruto, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral E etapa 3, usando 2- bromopiridina como reagente. LC/MS m/z 831,60 (M+H)+, 2,76 min (Método de LCMS 3). Etapa 4. Ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirimidin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico foi preparado em rendimento de 11% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral E etapa 4, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((pirimidin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,62 (d, J=4,8 Hz, 2H), 7,10 (t, J=4,9 Hz, 1H), 5,39 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,64 - 4,54 (m, 2H), 3,39 (br, d, J=13,1 Hz, 1H), 3,27 - 3,03 (m, 9H), 3,03 - 2,89 (m, 2H), 2,80 - 2,70 (m, 1H), 2,33 - 2,06 (m, 4H), 2,06 - 2,02 (m, 6H), 2,02 - 1,85 (m, 4H), 1,81 - 1,67 (m, 2H), 1,71 (s, 3H), 1,67 - 1,37 (m, 10H), 1,37 - 1,25 (m, 2H), 1,16 (s, 3H), 1,12 - 1,03 (m, 1H), 1,06 (s, 3H), 0,98 - 0,97 (m, 3H), 0,95 - 0,94 (m, 3H), 0,89 (s, 3H). LC/MS: m/e 803,50 (M+H)+, 2,80 min (Método de LCMS 3). Exemplo 35 Preparação de ácido 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- (1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1--(((7-metoxi-isoquinolin-1-il)oxi)metil)ciclo-hex- 3-eno-1-carboxílico. Etapa 1-2: Procedimento geral E. Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((7-metoxi-isoquinolin-1-il)oxi)metil)ciclo- hex-3-enocarboxilato de etila.
[00261] O composto título foi preparado como um produto bruto, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral E etapa 3, usando 1- cloro-7-metoxi-isoquinolina como reagente. LC/MS: m/e 910,65 (M+H)+, 2,98 min (Método de LCMS 3).
[00262] Etapa 4: Ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((7-metoxi-isoquinolin-1-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 39% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral E etapa 4, usando 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((7-metoxi-isoquinolin-1-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de etila como reagente. LC/MS: m/e 882,60 (M+H)+, 2,83 min (Método de LCMS 3). Exemplo 36 Preparação de ácido 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1-2: Procedimento geral E. Etapa 3. Preparação de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00263] O composto título foi preparado com um rendimento de 41%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral E etapa 3, usando 2- cloronicotinonitrila como reagente. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,31 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,86 (dd, J=7,5, 2,0 Hz, 1H), 6,97 (dd, J=7,4, 5,1 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=5,0 Hz, 1H), 4,69 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,57 (br. s., 1H), 4,53 (s, 2H), 4,21 - 4,12 (m, 2H), 3,10 - 2,97 (m, 8H), 2,74 - 2,40 (m, 6H), 2,28 - 0,82 (m, 27H), 1,67 (s, 3H), 1,25 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,93 - 0,88 (m, 6H), 0,84 (s, 3H). LC/MS: m/e 855,60 (M+H)+, 3,08 min (Método de LCMS 7). Etapa 4. Ácido 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 33%, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral E etapa 3 à RT, usando 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila como reagente. 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 8,41 - 8,38 (m, 1H), 8,08 (dd, J=7,5, 1,8 Hz, 1H), 7,12 (dd, J=7,7, 5,1 Hz, 1H), 5,39 (br. s., 1H), 5,23 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,63 (dd, J=3,8, 10,5 Hz, 1H), 4,58 (d, J=10,3 Hz, 1H), 3,30 - 3,17 (m, 8H), 3,17 - 3,07 (m, 3H), 2,99 - 2,89 (m, 1H), 2,80 (td, J=11,0, 5,4 Hz, 1H), 2,72 - 2,64 (m, 1H), 2,40 - 2,23 (m, 1H), 2,23 - 2,15 (m, 2H), 2,15 - 2,01 (m, 7H), 1,99 - 1,90 (m, 1H), 1,90 - 1,76 (m, 3H), 1,78 (s, 3H), 1,76 - 1,64 (m, 2H), 1,63 - 1,41 (m, 9H), 1,41 - 1,29 (m, 1H), 1,24 - 1,18 (m, 1H), 1,20 (s, 3H), 1,18 - 1,10 (m, 1H), 1,13 (s, 3H), 1,025 - 1,015 (m, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). LC/MS: m/e 827,65 (M+H)+, 3,12 min (Método de LCMS 7). Procedimento geral F. Preparação de derivados de ácido ciclo- hexenocarboxílico a-substituído por meio de carboxilato de silila. MAJOR / MINOR Etapa 1. Preparação de benzoato de (1-((benziloxi)carbonil)-4-oxociclo- hexil)metila.
[00264] A uma solução de 1-(hidroximetil)-4-oxociclo- hexanocarboxilato de benzila (4,3 g, 16,4 mmol) em piridina (20 mL), adicionou-se anidrido benzoico (4,45 g, 19,7 mmol) seguido de DMAP (2,00 g, 16,4 mmol). A solução resultante foi agitada a 55 °C por 2 horas. A mistura de reação foi diluída com 50 mL de acetato de etila e foi lavada com HCl 0,5 N a pH = 4. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 50% de acetato de etila / hexanos para dar o produto desejado como um óleo (3,3 g, 49%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,92 (d, J=7,8 Hz, 2H), 7,65 - 7,54 (m, 1H), 7,44 - 7,37 (m, 2H), 7,35 - 7,27 (m, 5H), 5,25 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 2,63 - 2,35 (m, 6H), 1,86 (td, J=12,4, 5,0 Hz, 2H). Etapa 2. Preparação de benzoato de (1-((benziloxi)carbonil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00265] A uma solução de benzoato de (1-((benziloxi)carbonil)-4- oxociclo-hexil)metila (4,2 g, 11,5 mmol) e 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N- ((trifluorometil)sulfonil)-metanossulfonamida (4,5 g, 12,6 mmol) em THF (50 mL) a -78 °C, adicionou-se KHMDS (1 M em THF) (14,9 mL, 14,9 mmol). A solução amarela resultante foi agitada a -78 °C durante 2 h. A reação foi resfriada bruscamente com NH4Cl saturado aquoso. A mistura foi extraída com EtOAc, lavada com salmoura, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 15% de acetato de etila / hexanos para dar o triflato desejado como um óleo (3,6 g, 63%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,92 (d, J=7,8 Hz, 2H), 7,62 - 7,55 (m, 1H), 7,42 (t, J=7,5 Hz, 2H), 7,35 - 7,27 (m, 5H), 5,80 (br. s., 1H), 5,26 - 5,14 (m, 2H), 4,50 - 4,41 (m, 2H), 2,90 (dd, J=17,9, 2,4 Hz, 1H), 2,57 - 2,28 (m, 4H), 2,02 - 1,91 (m, 1H). Etapa 3. Preparação de benzoato de (1-((benziloxi)carbonil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00266] Uma mistura de benzoato de (1-((benziloxi)carbonil)-4- (((trifluorometil)sulfonil)oxi)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (3,32 g, 6,66 mmol), bis(pinacolato)diboro (1,71 g, 6,73 mmol), KOAc (1,64 g, 16,7 mmol) e aduto de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (0,16 g, 0,2mmol) em 1,4-dioxano (30 mL) foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida a 70 °C durante 20 h. A mistura foi diluída com água (150 mL) e extraída com EtOAc (3 x 125 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com Na2SO4 e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0 a 20% de acetato de etila / hexanos para dar o boronato desejado como um óleo (2,2 g, 69%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 7,90 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,58 - 7,51 (m, 1H), 7,42 - 7,36 (m, 2H), 7,32 - 7,22 (m, 5H), 6,54 (br. s., 1H), 5,16 (s, 2H), 4,48 - 4,36 (m, 2H), 2,75 (d, J=17,6 Hz, 1H), 2,32 - 2,19 (m, 3H), 2,07 - 2,00 (m, 1H), 1,92 - 1,86 (m, 1H), 1,27 (s, 12H). LC/MS: m/e 499,20 (M+Na)+, 3,10 min (Método de LCMS 7). Etapa 4. Preparação de benzoato de (4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-1-(buta-2,3-dien-2- il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((benziloxi)carbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00267] Uma mistura de (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato (2,4 g, 4,3 mmol), benzoato de (1-((benziloxi)carbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo- hex-3-en-1-il)metila (2,05 g, 4,3 mmol), Na2CO3 H2O (1,60 g, 12,9 mmol) e Pd(Ph3P)4 (0,3 g, 0,26 mmol) em 1,4-dioxano (100 mL) e H2O (25 mL) foi jateada com nitrogênio, vedada e aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica eluído com 0-55% de acetato de etila / hexanos para dar o éster ciclo- hexenocarboxílico C-3 a-substituído desejado (1,8 g, 55%). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,91 (d, J=7,0 Hz, 2H), 7,58 - 7,51 (m, 1H), 7,42 - 7,35 (m, 2H), 7,33 - 7,28 (m, 2H), 7,26 - 7,22 (m, 3H), 5,34 (br. s., 1H), 5,21 - 5,11 (m, 3H), 4,73 (s, 1H), 4,60 (br. s., 1H), 4,51 - 4,39 (m, 2H), 2,71 (d, J=17,3 Hz, 1H), 2,54 (td, J=10,9, 5,1 Hz, 1H), 2,25 - 0,92 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,13 - 0,85 (m, 15H). LC/MS: m/e 758,70 (M+H)+, 3,24 min (Método de LCMS 7). Etapa 5. Preparação de benzoato de (1-((benziloxi)carbonil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00268] Uma suspensão de benzoato de (4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((benziloxi)carbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1,6 g, 2,11 mmol), cloridrato de 1,1-dióxido de 4-(2-cloroetil)tiomorfolina (1,5 g, 6,33 mmol), iodeto de sódio (0,35 g, 2,32 mmol) e K3PO4 (2,24 g, 10,55 mmol) em acetonitrila (20 mL) foi jateada com N2, vedada e aquecida a 100 °C durante 15 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (100 mL), lavada com água (100 mL), seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica eluído com 25 a 60% de EtOAc/hexano para dar o produto desejado (1,3 g, 67% de rendimento). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 7,92 (d, J=7,8 Hz, 2H), 7,58 - 7,51 (m, 1H), 7,43 - 7,36 (m, 2H), 7,31 (d, J=4,6 Hz, 2H), 7,25 (d, J=4,4 Hz, 3H), 5,35 (br. s., 1H), 5,22 - 5,12 (m, 3H), 4,71 (s, 1H), 4,60 (br. s., 1H), 4,45 (q, J=10,7 Hz, 2H), 3,15 - 2,99 (m, 8H), 2,78 - 2,42 (m, 6H), 2,23 - 0,81 (m, 27H), 1,69 (s, 3H), 1,07 - 0,79 (m, 15H). LC/MS: m/e 919,60 (M+H)+, 3,27 min (Método de LCMS 7). Etapa 6. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila.
[00269] A uma solução de benzoato de (1-((benziloxi)carbonil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1,0 g, 1,09 mmol) em MeOH (15 mL), adicionou-se NaOH 1N (1,09 mL, 1,09 mmol). A mistura foi agitada à RT durante 12 h, neutralizada com ácido cítrico aquoso saturado e o solvente foi removido a vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc, lavado com salmoura, seco com Na2SO4 e concentrado a vácuo para dar o produto desejado (56% de rendimento com subproduto de metil éster em quantidade mínima) como um sólido sem purificação adicional. LC/MS: m/e 815 (M+H)+, 4,803 min (Método de LCMS 7). Para metil éster: LC/MS: m/e 739,55 (M+H)+, 4,615 min (Método de LCMS 7). Etapa 7. Preparação de 1-((ariloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila.
[00270] A uma solução de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila (1 eq) em DMF a -78 °C, adicionou-se KOtBu (2 eq). A mistura resultada foi agitada durante 20 minutos antes da adição de Ar-X (2 eq). Em seguida, a reação foi aquecida à RT e agitada durante a noite. A mistura de reação foi diluída com EtOAc, lavada com água, seca com Na2SO4 e concentrada a vácuo para dar produto bruto que foi usado na etapa seguinte sem purificação ou purificado por cromatografia em gel de sílica com acetato de etila/hexanos como eluentes. Etapa 8. Preparação de 1-((ariloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de terc- butildimetilsilila.
[00271] A uma solução do produto bruto (1 eq) do procedimento geral F, etapa 7 em DCE (3 mL), adicionou-se TEA (1,6 eq), t-Butildimetilsilano (2,0 eq) e acetato de paládio (0,25 eq). A mistura foi jateada com N2 durante 5 minutos e depois aquecida a 60 °C durante 2 a 6 horas. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e foi filtrada através de uma camada de Celite e gel de sílica e lavada com 50% de EtOAc em hexanos, depois com diclorometano. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o produto bruto obtido foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Etapa 9. Preparação de ácido 1-((ariloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00272] A uma solução do produto bruto (1 eq) do procedimento geral F, etapa 8 em THF (3 mL), adicionou-se uma solução de TBAF (1,6 eq) em THF. A mistura resultante foi agitada por 2 horas. A solução foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa. Frações contendo o produto desejado foram coletadas e secas para produzir o ácido 1-((ariloxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico desejado. Exemplo 37 Preparação de ácido 1-(((4-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1-6: Procedimento geral F etapas 1-6 Etapa 7. Preparação de 1-(((4-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila.
[00273] O composto título foi preparado com um rendimento de 22% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F etapa 7, usando 2-fluoroisonicotinonitrila como o reagente. LC/MS m/z M+1=917,65, 4,765 min (Método de LCMS 7). Etapa 8. Preparação de 1-(((4-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de terc- butildimetilsilila.
[00274] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F, etapa 8 h, usando 1-(((4- cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila como o reagente. LC/MS m/z M+1=941,75, 3,467 min (Método de LCMS 7).
[00275] Etapa 9. Ácido 1-(((4-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 10,7% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F, etapa 9, usando 1-(((4-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de terc- butildimetilsilila como o reagente. LC/MS: m/e 827,60 (M+H)+, 3,00 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,31 (d, J=5,0 Hz, 1H), 7,21 (dd, J=5,1, 1,1 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,36 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,52 (dd, J=4,3, 10,3 Hz, 1H), 4,45 (dd, J=1,8, 10,3 Hz, 1H), 3,28 - 3,15 (m, 8H),3,14 - 3,06 (m, 4H), 2,98 - 2,87 (m, 1H), 2,76 (td, J=11,1, 5,4 Hz, 1H), 2,45 - 2,58 (m, 1H), 2,35 - 2,21 (d, J=8,5 Hz, 1H), 2,21 - 1,98 (m, 8H), 1,92 - 1,73 (m, 2H), 1,77 (s, 3H), 1,73 - 1,41 (m, 11H), 1,40 - 1,28 (m, 2H), 1,27 - 1,08 (m, 2H), 1,18 (s, 3H), 1,11 (s, 3H), 1,00 - 0,99 (m, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). Exemplo 38 Preparação de ácido 1-(((5-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1-6: Procedimento geral F etapas 1-6 Etapa 7. Preparação de 1-(((5-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila.
[00276] O composto título foi preparado com um rendimento de 35,5% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F etapa 7, usando 6-fluoronicotinonitrila como o reagente. LC/MS m/z M+1=917,65, 3,136 min (Método de LCMS 7). Etapa 8: Preparação de 1-(((5-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de terc- butildimetilsilila.
[00277] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F, etapa 8 h, usando 1-(((5- cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila como o reagente. LC/MS m/z M+1=941,70, 3,311 min (Método de LCMS 7). Etapa 9. Ácido 1-(((5-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 10,5% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F, etapa 9, usando 1-(((5-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de terc- butildimetilsilila como o reagente. LC/MS: m/e 827,55 (M+H)+, 3,049 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 8,52 (d, J=2,3 Hz, 1H), 7,96 (dd, J=8,8, 2,3 Hz, 1H), 6,92 (d, J=8,8 Hz, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,21 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,56 (dd, J=2,8, 10,5 Hz, 1H), 4,49 (d, J=10,5 Hz, 1H), 3,28 - 3,15 (m, 8H), 3,14 - 3,06 (m, 3H), 2,93 (dt, J=14,2, 5,2 Hz, 1H), 2,81 - 2,71 (m, 1H), 2,67 - 2,57 (m, 1H), 2,35 - 2,21 (m, 1H), 2,21 - 1,97 (m, 10H), 1,92 - 1,72 (m, 5H), 1,77 (s, 3H), 1,72 - 1,39 (m, 11H), 1,39 - 1,20 (m, 1H), 1,20 - 1,07 (m, 1H), 1,18 (s, 3H), 1,11 (s, 3H), 1,02 - 0,98 (m, 1H), 0,96 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). Exemplo 39 Preparação de ácido 1-(((6-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1-6: Procedimento geral F etapas 1-6 Etapa 7. Preparação de 1-(((6-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila.
[00278] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F, etapa 7, usando 6- cloropicolinonitrila como reagente. LC/MS m/z M+1=917,65, 3,083 min (Método de LCMS 7). Etapa 8. Preparação de 1-(((6-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de terc- butildimetilsilila.
[00279] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F, etapa 8 h, usando 1-(((6- cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila como o reagente. LC/MS m/z M+1=941,70, 3,516 min (Método de LCMS 7).
[00280] Etapa 9. Ácido 1-(((6-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 17,6% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F, etapa 9, usando 1-(((6-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de terc- butildimetilsilila como o reagente. LC/MS: m/e 827,55 (M+H)+, 3,003 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 7,84 (dd, J=8,5, 7,3 Hz, 1H), 7,47 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,09 (d, J=8,5 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,24 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,59 - 4,53 (m, 1H), 4,48 - 4,43 (m, 1H), 3,30 - 3,17 (m, 8H), 3,09 - 3,17 (m, 3H), 2,98 - 2,89 (m, 1H), 2,78 (td, J=10,9, 5,5 Hz, 1H), 2,65 (br, d, J=15,8 Hz, 1H), 2,37 - 2,00 (m, 9H), 1,94 - 1,74 (m, 5H), 1,79 (s, 3H), 1,74 - 1,44 (m, 11H), 1,44 - 1,29 (m, 2H), 1,26 - 1,10 (m, 2H), 1,20 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,03 - 1,02 (m, 3H), 1,00 - 0,99 (m, 3H), 0,95 (s, 3H). Exemplo 40 Preparação de ácido 1-(((6-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 1-(((6-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de metila.
[00281] O composto título foi preparado como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral F, etapa 7, usando 6- cloropicolinonitrila e ((S)4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de metila em vez de ((R)4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de benzila como os reagentes. LC/MS m/z M+1=841,60, 3,164 min (Método de LCMS 7). Etapa 2. Ácido 1-(((6-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico foi preparado em rendimento de 19,9% como um sólido, seguindo o procedimento descrito no procedimento geral E, etapa 4, usando 1-(((6-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de metila como o reagente. LC/MS: m/e 845,60 (M+H)+, 2,931 min (Método de LCMS 7). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ 7,84 (dd, J=8,3, 7,3 Hz, 1H), 7,72 (dd, J=7,3, 0,8 Hz, 1H), 6,99 (d, J=7,8 Hz, 1H), 5,39 (br. s., 1H), 5,23 (d, J=4,3 Hz, 1H), 4,87 (s, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,61 - 4,56 (m, 1H), 4,55 - 4,50 (m, 1H), 3,25 (d, J=8,8 Hz, 5H), 3,20 (br. s., 2H), 3,17 - 3,09 (m, 3H), 2,97 - 2,87 (m, 1H), 2,77 (d, J=5,3 Hz, 1H), 2,68 (d, J=13,6 Hz, 1H), 2,41 - 1,99 (m, 9H), 1,94 - 1,68 (m, 6H), 1,79 (s, 3H), 1,68 - 1,44 (m, 9H), 1,43 - 1,30 (m, 3H), 1,29 - 1,11 (m, 2H), 1,19 (s, 3H), 1,13 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). Preparação de 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanona.
[00282] A uma solução de (metilsulfonil)eteno (10,0 g, 94 mmol) em benzeno (50 mL) adicionou-se (buta-1,3-dien-2-iloxi)trimetilsilano (14,07 g, 99 mmol) e hidroquinona (20 mg, 0,182 mmol). A mistura foi desgaseificada várias vezes a -78 °C antes do aquecimento. Os conteúdos foram vedados e aquecidos a 105 °C durante 48 horas. A reação foi analisada por RMN em CDCl3que mostrou cerca de 10% do resíduo de vinilsulfona. Mais (buta-1,3- dien-2-iloxi)trimetilsilano (4 mL) foi adicionado e o aquecimento foi continuado durante mais 48 horas. A análise por RMN novamente no momento de 72 horas mostrou uma redução adicional da quantidade de vinil sulfona (~ 3%). A amostra do tubo de RMN foi combinada com a mistura de reação e evaporada até uma goma espessa sob vácuo à temperatura ambiente (~19 °C). A mistura foi rediluída com acetona (250 mL) resultando na formação de uma solução transparente. A mistura foi esfriada em um banho de gelo até esfriar. 4 mL de HCl 0,25 N (pré-resfriado no mesmo banho de gelo) foram adicionados resultando na formação de uma mistura turva, que se tornou clara após 15 minutos de agitação a 0 °C e então retornou para um estado turvo em 10 minutos adicionais, ela permaneceu turva durante o restante do período de agitação. Uma alíquota de 50 μL foi removida, seca rapidamente em um filme e analisada por RMN em CDCl3. A RMN mostrou ~ 7% de vinil sulfona em relação ao produto desejado. A solução de acetona foi filtrada através de um leito curto de gel de sílica de tipo H após um tempo de reação total de cerca de uma hora e o leito foi então lavado com mais acetona. O filtrado foi concentrado no rotovapor a temperatura de banho a 19 °C. O produto bruto foi subdividido em duas partes, 7,75 gm cada, para purificação. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% de acetato de etila ^ 100% de acetato de etila em hexanos; duas colunas de 330 g) para produzir 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanona (16,7 g, 100% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 3,29 (tt, J=11,0, 3,9 Hz, 1H), 2,94 (s, 3H), 2,73-2,62 (m, 2H), 2,58-2,37 (m, 4H), 2,15 (qd, J=11,9, 4,5 Hz, 2H). Preparação de 2-(cis-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído e 2- (trans-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído. Etapa 1. Preparação de (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol e (trans)-1- alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol.
[00283] A uma solução de 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanona (1,03 g, 5,84 mmol) em THF (40 mL) a 0 °C foi adicionado via cânula brometo de alilmagnésio (7,60 mL, 7,60 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante a noite. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de solução saturada de NH4Cl (25 mL). A mistura foi transferida para um funil de separação e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (5 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (70% de acetato de etila com 1% de metanol/30% de hexanos ^ 100% de acetato de etila com 1% de metanol; coluna de 40 g) para produzir (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol (374 mg, 1,713 mmol, 29% de rendimento) como um sólido branco e (trans)-1-alil- 4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol (551 mg, 2,52 mmol, 43% de rendimento) como um óleo incolor. (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol: 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 5,96-5,79 (m, 1H), 5,26-5,21 (m, 1H), 5,18 (ddt, J=17,1, 2,1, 1,2 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,80 (tt, J=12,5, 3,6 Hz, 1H), 2,25 (d, J=7,5 Hz, 2H), 2,15-2,07 (m, 2H), 1,97 (qd, J=13,0, 3,8 Hz, 2H), 1,881,81 (m, 2H), 1,52-1,42 (m, 2H); 13C RMN (100MHz, CDCl3) δ 132,50, 120,02, 69,06, 62,26, 47,86, 36,85, 35,67, 21,13.
[00284] A estrutura de (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol foi confirmada por cristalografia de raios-X. (trans)-1-alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol: 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 5,88 (ddt, J=17,2, 10,1, 7,4 Hz, 1H), 5,28-5,16 (m, 2H), 2,98-2,91 (m, 1H), 2,90 (s, 3H), 2,35 (d, J=7,5 Hz, 2H), 2,23-2,14 (m, 2H), 2,02-1,93 (m, 2H), 1,90-1,78 (m, 2H), 1,57-1,46 (m, 2H); 13C RMN (100MHz, CDCl3) δ 132,62, 120,19, 69,20, 62,41, 48,00, 36,98, 35,83, 21,29. Etapa 2a. Preparação de 2-((cis)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído.
[00285] (trans)-1-Alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol (3,4 g, 15,57 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (160 mL) e MeOH (32,0 mL) em um frasco de fundo redondo de 500 mL. N-óxido de N-metilmorfolina (NMO) (2,189 g, 18,69 mmol) foi adicionado e a mistura foi resfriada para -78 °C [Schwartz, C., Raible, J., Mott, K., Dussault, P. H. Org. Lett. 2006, 8, 3199 - 3201]. Ozônio foi borbulhado através da mistura de reação até que a solução se tornasse saturada com ozônio (alterada para uma cor azul) e durante vários minutos depois (tempo total 25 min). Nitrogênio foi então borbulhado através da mistura de reação até o desaparecimento da cor azul. Sulfeto de dimetila (11,52 mL, 156 mmol) foi então adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 16 h. A mistura foi concentrada sob vácuo. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (50% de acetato de etila com 1% de metanol/50% de hexanos ^ 95% de acetato de etila com 1% de metanol/5% de hexanos; coluna de 330 g) para produzir 2-((1s,4s)-1- hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (3,31 g, 15,03 mmol, 96% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 9,87 (t, J=1,1 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,82-2,76 (m, 1H), 2,67 (d, J=1,3 Hz, 2H), 2,13-1,98 (m, 6H), 1,50-1,38 (m, 2H); 13C RMN (101MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 202,5, 68,9, 61,9, 54,9, 36,8, 35,9, 20,8. Etapa 2b. Preparação de 2-((trans)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído.
[00286] (1r,4r)-1-Alil-4-(metilsulfonil)ciclo-hexanol (2 g, 9,16 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (80 mL) e MeOH (16,00 mL) em um frasco de fundo redondo de 500 mL. N-óxido de N-metilmorfolina (NMO) (1,288 g, 10,99 mmol) foi adicionado e a mistura foi resfriada para -78 °C [Schwartz, C., Raible, J., Mott, K., Dussault, P. H. Org. Lett. 2006, 8, 3199 - 3201]. Ozônio (excesso) foi borbulhado através da mistura de reação até que a solução se tornasse saturada com ozônio (alterada para uma cor azul) e durante vários minutos depois (tempo total 25 min). Nitrogênio foi então borbulhado através da mistura de reação até o desaparecimento da cor azul. Sulfeto de dimetila (6,78 mL, 92 mmol) foi então adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 16 h. A mistura foi concentrada sob vácuo. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (70% de acetato de etila com 5% de metanol/30% de hexanos ^ 100% de acetato de etila com 5% de metanol; coluna de 220 g) para produzir 2-((1r,4r)-1- hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (1,58 g, 7,17 mmol, 78% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 9,82 (t, J=1,8 Hz, 1H), 2,99 - 2,88 (m, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,67 (d, J=1,8 Hz, 2H), 2,20 - 2,10 (m, 2H), 2,06 - 1,98 (m, 2H), 1,74 (dtd, J=14,0, 10,6, 3,5 Hz, 2H), 1,61 - 1,50 (m, 2H); 13C RMN (101MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 202,4, 70,0, 59,3, 50,3, 38,2, 34,9, 21,1.
[00287] Exemplo A1. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00288] Uma mistura de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila (65 mg, 0,097 mmol), 2-((1s,4s)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído (47,1 mg, 0,214 mmol) e complexo de borano-2-picolina (22,86 mg, 0,214 mmol) em MeOH (1 mL) e ácido acético (0,2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e solução aquosa saturada de carbonato de sódio (2 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% 9:1 acetona:metanol/90% hexanos ^ 65% 9:1 acetona:metanol/35% hexanos; coluna de 24 g, □ = 220 nm) para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1- hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enecarboxilato de etila (69 mg, 81% de rendimento) como um sólido incolor : 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,15 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,56 (ddd, J=8,5, 6,9, 2,0 Hz, 1H), 6,87 (td, J=6,1, 0,7 Hz, 1H), 6,73 (d, J=8,4 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,20 (d, J=6,1 Hz, 1H), 4,75 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,50 - 4,44 (m, 1H), 4,43 - 4,37 (m, 1H), 4,21 - 4,10 (m, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,84 - 2,67 (m, 4H), 2,55 (td, J=10,8, 5,5 Hz, 1H), 2,22 - 0,88 (m, 43H), 1,70 (s, 3H), 1,21 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,87 (s, 3H); LC/MS m/e 873,7 [(M+H)+, calc para C53H81N2O6S 873,6], tR = 4,67 min (Método de LCMS 14).
[00289] Etapa 2. Uma solução de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila (65 mg, 0,074 mmol) em dioxano (1 mL) e MeOH (0,5 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (0,372 mL, 0,744 mmol, 2M aq). A mistura de reação foi aquecida a 50 °C durante 3 h e depois a 60 °C durante 6 h. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 2 N (200 uL). A mistura foi filtrada através de um filtro de seringa e foi purificada por HPLC de fase reversa (Método de HPLC preparativa 1). O produto (61,7 mg) continha uma impureza (ca. 6%). O produto foi repurificado por HPLC de fase reversa (Método de HPLC preparativa 2). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfoil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxílico, TFA (48,4 mg, 67% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 8,29 (dd, J=5,3, 1,7 Hz, 1H), 7,90 - 7,82 (m, 1H), 7,13 - 7,08 (m, 1H), 6,99 (d, J=8,4 Hz, 1H), 5,41 (br. s., 1H), 5,26 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,56 - 4,50 (m, 1H), 4,49 - 4,44 (m, 1H), 3,48 - 3,34 (m, 2H), 3,09 - 2,99 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 2,89 - 2,79 (m, 1H), 2,72 (d, J=16,0 Hz, 1H), 2,32 - 1,32 (m, 35H), 1,75 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,13 (d, J=7,5 Hz, 2H), 1,09 (s, 3H), 1,02 (d, J=3,7 Hz, 3H), 0,99 (d, J=3,7 Hz, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS m/e 845,6 [(M+H)+, calc para C51H77N2O6S 845,6], tR = 4,36 min (Método de LCMS 14); HPLC (Método de HPLC analítica 1): tR = 18,86 min; HPLC (Método de HPLC analítica 2): tR = 20,24 min. Exemplo A2. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-((1s,4S)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila.
[00290] Uma mistura de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila (65 mg, 0,097 mmol), 2-((1r,4r)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo- hexil)acetaldeído (47,1 mg, 0,214 mmol) e complexo de borano-2-picolina (22,86 mg, 0,214 mmol) em MeOH (1 mL) e ácido acético (0,2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A reação não foi completa. 2- ((1r,4r)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído adicional (21 mg, 0,097 mmol, 1 eq) foi então adicionado e 1 h depois, complexo de borano-2- picolina (10 mg, 0,097 mmol, 1 eq) foi adicionado à mistura de reação e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e solução aquosa saturada de carbonato de sódio (2 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (4 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (10% 9:1 acetona:metanol/90% hexanos ^ 65% 9:1 acetona:metanol/35% hexanos; coluna de 24 g, □ = 220 nm) para produzir 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- ((1r,4S)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enecarboxilato de etila (42,4 mg, 50% de rendimento) como uma espuma incolor : 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,14 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,61 - 7,54 (m, 1H), 6,87 (ddd, J=7,0, 5,1, 0,8 Hz, 1H), 6,73 (d, J=8,4 Hz, 1H), 5,36 (br. s., 1H), 5,20 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,72 (d, J=1,4 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,51 - 4,44 (m, 1H), 4,43 - 4,36 (m, 1H), 4,21 - 4,10 (m, 2H), 2,99 - 2,91 (m, 1H), 2,89 (s, 3H), 2,83 - 2,76 (m, J=12,1 Hz, 1H), 2,72 - 2,62 (m, 2H), 2,59 - 2,51 (m, 1H), 2,21 - 0,88 (m, 43H), 1,69 (s, 3H), 1,21 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,87 (s, 3H); LC/MS m/e 873,7 [(M+H)+, calc para C53H81N2O6S 873,6], tR = 4,62 min (Método de LCMS 14). Etapa 2. Uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila (42 mg, 0,048 mmol) em dioxano (1 mL) e MeOH (0,5 mL) foi tratada com hidróxido de sódio (0,361 mL, 0,721 mmol, 2 M aq). A mistura de reação foi aquecida a 60 °C durante 24 h. Hidróxido de sódio adicional (0,120 mL, 0,240 mmol, 5 eq, 2 M aq) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a 70 °C por 8 h. A reação foi completa. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 2 N (400 uL). A mistura foi filtrada através de um filtro de seringa e foi purificada por HPLC de fase reversa (Método de HPLC preparativa 3). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfoil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-((piridin-2-iloxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxílico, TFA (31,3 mg, 67% de rendimento) como um sólido amorfo branco. 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 8,30 - 8,25 (m, 1H), 7,85 - 7,78 (m, 1H), 7,10 - 7,04 (m, 1H), 6,95 (dd, J=8,5, 0,6 Hz, 1H), 5,41 (br. s., 1H), 5,26 (d, J=6,0 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,55 - 4,49 (m, 1H), 4,48 - 4,43 (m, 1H), 3,46 - 3,37 (m, 1H), 3,36 - 3,28 (m, 1H), 3,18 - 3,10 (m, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,91 - 2,81 (m, 1H), 2,71 (d, J=16,3 Hz, 1H), 2,32 - 1,32 (m, 35H), 1,75 (s, 3H), 1,16 - 1,12 (m, 2H), 1,14 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,02 (d, J=3,7 Hz, 3H), 0,99 (d, J=3,2 Hz, 3H), 0,94 (s, 3H); LC/MS m/e 845,6 [(M+H)+, calc para C51H77N2O6S 845,6], tR = 4,33 min (Método de LCMS 14); HPLC (Método de HPLC analítica 1): tR = 18,86 min; HPLC (Método de HPLC analítica 2): tR = 20,48 min. Exemplo A3. Preparação de ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de benzoato de ((S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00291] A um balão contendo (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato (1,00 g, 1,79 mmol), adicionou-se benzoato de (R)-(1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1,337 g, 3,23 mmol), fosfato de potássio tribásico (1,52 g, 7,17 mmol), 2-diciclo-hexilfosfino-2’,6’- dimetoxibifenila (S-Phos) (0,055 g, 0,134 mmol) e acetato de paládio(II) (0,020 g, 0,090 mmol). A mistura foi diluída com 1,4-dioxano (25 mL) e água (6,25 mL), depois jateada com N2 e aquecida a 75 °C durante 16 h. A mistura foi resfriada até a rt. A mistura foi diluída com água (100 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 75 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (150 mL), secas com sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (50% de acetato de etila com 4% de MeOH e 0,8% de hidróxido de amônio/50% de hexanos ^ 70% de acetato de etila com 4% de MeOH e 0,8% de hidróxido de amônio/30% de hexanos, coluna de 120 g) para produzir benzoato de ((S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1,15 g, 92% de rendimento) como um sólido esbranquiçado: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,06 - 8,00 (m, 2H), 7,62 - 7,55 (m, 1H), 7,49 - 7,41 (m, 2H), 5,38 (br. s., 1H), 5,22 (dd, J=6,3, 1,8 Hz, 1H), 4,75 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,62 (dd, J=2,3, 1,3 Hz, 1H), 4,52 - 4,40 (m, 2H), 4,20 (qd, J=7,2, 2,1 Hz, 2H), 2,70 (d, J=18,3 Hz, 1H), 2,56 (td, J=10,9, 5,3 Hz, 1H), 2,35 - 1,95 (m, 6H), 1,91 - 1,81 (m, 1H), 1,78 - 1,13 (m, 20H), 1,71 (s, 3H), 1,24 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,88 (s, 3H); LC/MS m/e 696,7 [(M+H)+, calc para C46H65NO4 696,5], tR = 2,60 min (Método de LCMS 15). Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- etila.
[00292] A uma solução de benzoato de ((S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1,07 g, 1,537 mmol) em THF (10 mL) e MeOH (1 mL), adicionou-se hidróxido de sódio (1,691 mL, 1,691 mmol). A mistura de reação foi agitada à rt durante 14 h. O sólido foi removido por filtração. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL)/água (10 mL). A camada aquosa foi extraída com 5% de metanol em acetato de etila (5 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL). A lavagem de salmoura foi reextraída com 5% de metanol em acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas com MgSO4, filtradas e concentrada para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- etila (0,535 g, 59% de rendimento) como um sólido branco. O produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,34 (t, J=3,8 Hz, 1H), 5,20 (dd, J=6,1, 1,9 Hz, 1H), 4,75 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,63 (d, J=1,3 Hz, 1H), 4,21 (q, J=7,0 Hz, 2H), 3,70 (s, 2H), 2,62 - 2,51 (m, 2H), 2,23 - 2,15 (m, 2H), 2,09 - 1,92 (m, 4H), 1,83 - 1,12 (m, 21H), 1,72 (s, 3H), 1,30 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,09 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,88 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 614,6 [(M+H)+, calc para C39H61NO3Na 614,5], tR = 4,28 min (Método de LCMS 14). Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-etila.
[00293] A uma solução de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)- etila (495 mg, 0,836 mmol) e 2-fluoronicotinonitrila (204 mg, 1,673 mmol) em THF (7 mL) e DMF (1 mL) a 0 °C, adicionou-se terc-butóxido de potássio (1,004 mL, 1,004 mmol). O banho de resfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada a 20 °C durante 1,5 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de NaHCO3 (15 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (15 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (50% de uma solução a 5% de metanol em acetato de etila/50% de hexanos ^ 100% de uma solução a 5% de metanol em acetato de etila; coluna de 40 g) para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-etila (344 mg, 59% de rendimento) como um sólido esbranquiçado: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,34 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=7,5, 2,0 Hz, 1H), 6,99 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,21 (dd, J=6,1, 1,6 Hz, 1H), 4,75 (d, J=2,3 Hz, 1H), 4,62 (dd, J=2,1, 1,4 Hz, 1H), 4,57 (s, 2H), 4,25 - 4,15 (m, 2H), 2,78 - 2,68 (m, 1H), 2,56 (td, J=10,9, 5,1 Hz, 1H), 2,35 - 1,89 (m, 6H), 1,79 - 1,11 (m, 21H), 1,71 (s, 3H), 1,27 (t, J=6,8 Hz, 3H), 1,09 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,88 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 694,7 [(M+H)+, calc para C45H64N3O3 694,5], tR = 4,52 min (Método de LCMS 14). Etapa 4. Preparação de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-etila.
[00294] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-etila (150 mg, 0,216 mmol) e 2-((1s,4s)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (76 mg, 0,346 mmol) foram dissolvidos em MeOH (1,6 mL) e ácido acético (0,32 mL). Complexo de borano-2- picolina (37,0 mg, 0,346 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (3 mL) e solução de carbonato de sódio (2 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (5 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% de acetato de etila com 5% de :metanol/70% de hexanos ^ 100% de acetato de etila com 5% de :metanol; coluna de 24 g, gradiente de 25 min) para produzir 1- (((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-etila (134,6 mg, 69% de rendimento) como uma espuma branca: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,34 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=7,6, 1,9 Hz, 1H), 6,99 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,20 (dd, J=6,2, 1,6 Hz, 1H), 4,74 (d, J=1,5 Hz, 1H), 4,61 (s, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,24 - 4,15 (m, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,83 - 2,67 (m, 4H), 2,55 (td, J=10,9, 5,6 Hz, 1H), 2,31 - 0,88 (m, 37H), 1,70 (s, 3H), 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,87 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 898,7 [(M+H)+, calc para C54H80N3O6S 898,6], tR = 4,44 min (Método de LCMS 14). Etapa 5. A uma solução de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-etila (123 mg, 0,137 mmol) em dioxano (4 mL) e MeOH (2 mL), adicionou-se hidróxido de lítio (2 mL, 2,00 mmol, 1 M aq). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 12,5 h. Apenas uma pequena quantidade de material de partida foi detectada por LC/MS (Método de LCMS 16). A reação foi interrompida nesse momento devido à hidrólise concomitante do grupo nitrila para a amida correspondente. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 6 N (250 μL). A mistura foi então filtrada através de um filtro de seringa e foi purificada por HPLC de fase reversa (5 injeções) (Método de HPLC preparativa 4). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (51,6 mg, 38% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 8,42 (dd, J=5,1, 1,9 Hz, 1H), 8,05 (dd, J=7,6, 1,9 Hz, 1H), 7,11 (dd, J=7,6, 5,1 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,27 (d, J=4,7 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,68 - 4,61 (m, 2H), 3,47 - 3,33 (m, 2H), 3,08 - 2,99 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 2,90 - 2,81 (m, 1H), 2,74 (d, J=15,6 Hz, 1H), 2,38 - 1,13 (m, 37H), 1,75 (s, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 870,6 [(M+H)+, calc para C52H76N3O6S 870,5], tR = 1,31 min (Método de LCMS 16); HPLC (Método de HPLC analítica 3): tR = 12,19 min; HPLC (Método de HPLC analítica 4): tR = 11,64 min. Via alternativa para a preparação do Exemplo A3 Preparação de ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de benzoato de ((S)-1-(etoxicarbonil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00295] Benzoato de ((S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1Hciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (7,63 g, 10,96 mmol) e 2-((1s,4s)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (3,86 g, 17,54 mmol) foram dissolvidos em MeOH (30 mL) e ácido acético (6 mL). Complexo de borano-2-picolina (1,876 g, 17,54 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) e solução de carbonato de sódio (50 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (7 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% de acetato de etila com 5% de :metanol/70% de hexanos ^ 100% de acetato de etila com 5% de :metanol; coluna de 330 g, gradiente de 30 min) para produzir benzoato de ((S)-1-(etoxicarbonil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (8,81 g, 89% de rendimento) como um sólido branco: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO- d) δ 8,06 - 8,00 (m, 2H), 7,61 - 7,54 (m, 1H), 7,50 - 7,42 (m, 2H), 5,37 (br. s., 1H), 5,21 (dd, J=6,2, 1,6 Hz, 1H), 4,75 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,47 - 4,41 (m, 2H), 4,24 - 4,16 (m, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,83 - 2,65 (m, 4H), 2,55 (td, J=10,9, 5,6 Hz, 1H), 2,33 - 2,23 (m, 1H), 2,20 - 1,03 (m, 36H), 1,70 (s, 3H), 1,24 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,99 - 0,87 (m, 12H); LC/MS m/e 900,4 [(M+H)+, calc para C55H82NO7S 900,6], tR = 4,55 min (Método de LCMS 14). Etapa 2. Preparação de ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxílico.
[00296] A uma solução de benzoato de ((S)-1-(etoxicarbonil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (8,00 g, 8,89 mmol) em 1,4-dioxano (160 mL) e metanol (80 mL) em um vaso de pressão, adicionou- se hidróxido de lítio (89 mL, 89 mmol). O vaso foi vedado e a mistura foi aquecida a 65 °C (temperatura interna) durante 16 h. A mistura de reação foi resfriada até a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 4 N (15,5 mL, 7 eq). A mistura foi então concentrada. O produto bruto foi tomado em dioxano (40 mL)/metanol (20 mL)/água (5 mL) e foi tornado ácido pela adição de TFA (gota a gota até acidificar). A suspensão se tornou uma solução. A solução continha um pouco de matéria sólida suspensa. Foi passada através de um tampão curto de areia seguido de filtração através de um filtro de seringa. O produto foi então purificado por MPLC de fase reversa em uma coluna C18 Redi Sep Gold (150 g) no biotage (Método de MPLC preparativa 1, 6 injeções). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1- hidroxi-4-(metilsulfoil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3- enocarboxílico, TFA (6,57 g, 84% de rendimento) como um sólido amorfo branco. O produto foi então seco adicionalmente sob vácuo em um dessecador a vácuo com dryrite. 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,54 (br. s., 1H), 8,02 (br. s., 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,23 - 5,16 (m, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,70 (s, 1H), 3,76 (s, 2H), 3,22 (d, J=3,1 Hz, 2H), 2,86 (s, 3H), 2,83 - 2,68 (m, 2H), 2,59 (d, J=15,3 Hz, 1H), 2,47 - 2,34 (m, 1H), 2,26 - 1,06 (m, 36H), 1,71 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,88 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 768,4 [(M+H)+, calc para C46H74NO6S 768,5], tR = 3,85 min (Método de LCMS 14). Etapa 3. A uma solução de ácido (S)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (5,92 g, 6,71 mmol) em THF (80 mL) a 0 °C, adicionou-se hidreto de sódio (2,147 g, 53,7 mmol). O banho de resfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min. A mistura foi resfriada a 0 °C e 2-fluoronicotinonitrila (3,28 g, 26,8 mmol) em THF (10 mL) foi adicionada por meio de cânula. A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 1,5 h. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de ácido acético (3,84 mL, 67,1 mmol, 10 eq). A solução foi diretamente injetada em uma coluna e foi purificada por cromatografia em coluna de gel de sílica (5% de metanol em CH2Cl2 para eluir o material de alto Rf e depois 12% de metanol em CH2Cl2 para eluir o produto. Foi obtido 6,70 g de produto. O produto foi então adicionalmente purificado por MPLC de fase reversa em uma coluna C18 Redi Sep Gold (150 g) no biotage (Método de MPLC preparativa 2, 5 injeções). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (5,06 g, 5,14 mmol) como um sólido amorfo branco.
[00297] O produto (sal de TFA) foi então dissolvido em MeCN/H2O (60/40) e foi lentamente passado através de uma forma de cloreto de resina de troca iônica AG 1-x2 (Bio-Rad 100-200 mesh cat. n° 140-1241, pré-lavada com 90% de acetonitrila/10% de água). Foram usadas 140 gramas de resina. As frações contendo produto foram combinadas e o solvente orgânico foi removido no rotovapor e a água foi congelada e colocada no liofilizador para produzir ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, HCl (4,26 g, 66% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 8,42 (dd, J=5,1, 1,9 Hz, 1H), 8,05 (dd, J=7,6, 1,9 Hz, 1H), 7,11 (dd, J=7,6, 5,1 Hz, 1H), 5,43 (br. s., 1H), 5,27 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,69 - 4,60 (m, 2H), 3,45 - 3,33 (m, 2H), 3,13 (td, J=10,8, 5,1 Hz, 1H), 3,08 - 3,00 (m, 1H), 2,97 (s, 3H), 2,74 (d, J=15,1 Hz, 1H), 2,61 - 2,53 (m, 1H), 2,38 - 1,13 (m, 36H), 1,76 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 870,3 [(M+H)+, calc para C52H76N3O6S 870,5], tR = 4,56 min (Método de LCMS 14); HPLC (Método de HPLC 3): tR = 13,13 min; HPLC (Método de HPLC 4): tR = 12,46 min. Exemplo A4. Preparação de ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-etila.
[00298] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (S)-etila (150 mg, 0,216 mmol) e 2-((1r,4r)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (76 mg, 0,346 mmol) foram dissolvidos em MeOH (1,6 mL) e ácido acético (0,32 mL). Complexo de borano-2- picolina (37,0 mg, 0,346 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (20 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (5 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% de acetato de etila com 5% de :metanol/70% de hexanos ^ 100% de acetato de etila com 5% de :metanol; coluna de 24 g) para produzir 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (S)-etila (131 mg, 68% de rendimento) como uma espuma branca: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,33 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 7,87 (dd, J=7,5, 2,0 Hz, 1H), 6,98 (dd, J=7,4, 5,1 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,20 (d, J=4,5 Hz, 1H), 4,72 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,24 - 4,15 (m, 2H), 2,99 - 2,89 (m, 1H), 2,88 (s, 3H), 2,83 - 2,61 (m, 3H), 2,55 (td, J=10,8, 5,5 Hz, 1H), 2,31 - 1,02 (m, 37H), 1,69 (s, 3H), 1,27 (q, J=7,2 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 6H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 898,7 [(M+H)+, calc para C54H79N3O6S 898,6], tR = 4,44 min (Método de LCMS 14). Etapa 2. A uma solução de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de etila (131 mg, 0,146 mmol) em dioxano (4 mL) e MeOH (2 mL), adicionou-se hidróxido de lítio (2 mL, 2,00 mmol, 1 M aq). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 10,5 h. Apenas uma pequena quantidade de material de partida foi detectada por LC/MS (Método de LCMS 16). A reação foi interrompida nesse ponto. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 6 N (250 μL). A mistura foi então filtrada através de um filtro de seringa e foi purificada por HPLC de fase reversa (5 injeções) (Método de HPLC preparativa 4). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (S)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (69 mg, 48% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (400MHz, Ácido Acético-d4) δ 8,43 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 8,06 (dd, J=7,5, 2,0 Hz, 1H), 7,12 (dd, J=7,5, 5,3 Hz, 1H), 5,44 (br. s., 1H), 5,27 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,69 - 4,61 (m, 2H), 3,43 - 3,29 (m, 2H), 3,20 - 3,10 (m, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,91 - 2,81 (m, J=9,0 Hz, 1H), 2,74 (d, J=17,6 Hz, 1H), 2,40 - 1,33 (m, 37H), 1,76 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 870,7 [(M+H)+, calc para C52H75N3O6S 870,5], tR = 2,37 min (Método de LCMS 15); HPLC (Método de HPLC analítica 3): tR = 16,00 min; HPLC (Método de HPLC analítica 4): tR = 13,90 min. Exemplo A5. Preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de benzoato de ((R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00299] A um balão contendo (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato (2,2 g, 3,94 mmol), adicionou-se benzoato de (S)-(1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (2,94 g, 7,10 mmol), fosfato de potássio tribásico (3,35 g, 15,78 mmol), 2-diciclo-hexilfosfino-2’,6’- dimetoxibifenila (S-Phos) (0,121 g, 0,296 mmol) e acetato de paládio(II) (0,044 g, 0,197 mmol). A mistura foi diluída com 1,4-dioxano (60 mL) e água (15 mL) e foi jateada com N2 e aquecida a 75 °C durante 16 h. A mistura foi resfriada até a rt. A mistura foi diluída com água (150 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (200 mL), secas com sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (50% de acetato de etila com 4% de MeOH e 0,8% de hidróxido de amônio/50% de hexanos ^ 70% de acetato de etila com 4% de MeOH e 0,8% de hidróxido de amônio/30% de hexanos, coluna de 220 g) para produzir benzoato de ((R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (2,47 g, 90% de rendimento) como um sólido esbranquiçado: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,05 - 8,00 (m, 2H), 7,61 - 7,55 (m, 1H), 7,45 (t, J=7,7 Hz, 2H), 5,38 (br. s., 1H), 5,25 - 5,19 (m, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,46 (q, J=10,8 Hz, 2H), 4,19 (q, J=7,0 Hz, 2H), 2,74 - 2,66 (m, 1H), 2,56 (td, J=10,9, 5,1 Hz, 1H), 2,29 - 1,96 (m, 6H), 1,87 (dt, J=12,9, 6,2 Hz, 1H), 1,78 - 1,11 (m, 20H), 1,71 (s, 3H), 1,24 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,09 (s, 3H), 0,98 (br. s., 3H), 0,97 (br. s., 3H), 0,95 (s, 3H), 0,89 (s, 3H); LC/MS m/e 696,7 [(M+H)+, calc para C46H65NO4 696,5], tR = 2,55 min (Método LCMS 15). Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- etila.
[00300] A uma solução de benzoato de ((R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1,20 g, 1,724 mmol) em THF (10 mL) e MeOH (1 mL), adicionou-se hidróxido de sódio (1,897 mL, 1,897 mmol). A mistura de reação foi agitada à rt durante 14 h. O sólido foi removido por filtração. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de NaHCO3 (10 mL)/água (10 mL). A camada aquosa foi extraída com 5% de metanol em acetato de etila (5 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL). A lavagem de salmoura foi reextraída com 5% de metanol em acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram secas com MgSO4, filtradas e concentrada para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- etila (450 mg, 44% de rendimento) como um sólido branco. O produto bruto foi usado diretamente na etapa seguinte. 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,34 (br. s., 1H), 5,20 (dd, J=6,0, 1,8 Hz, 1H), 4,75 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,20 (q, J=7,2 Hz, 2H), 3,70 (s, 2H), 2,62 - 2,51 (m, 2H), 2,21 - 2,14 (m, 2H), 2,10 - 1,94 (m, 4H), 1,82 - 1,12 (m, 21H), 1,71 (s, 3H), 1,29 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,09 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,89 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 614,6 [(M+H)+, calc para C39H61NO3Na 614,5], tR = 4,27 min (Método de LCMS 14). Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila.
[00301] A uma solução de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- etila (412 mg, 0,696 mmol) e 2-fluoronicotinonitrila (170 mg, 1,392 mmol) em THF (7 mL) e DMF (1 mL) a 0 °C, adicionou-se terc-butóxido de potássio (0,835 mL, 0,835 mmol). O banho de resfriamento foi removido e a mistura de reação foi agitada a 20 °C durante 1,5 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de NaHCO3 (15 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (4 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (15 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (50% de uma solução a 5% de metanol em acetato de etila/50% de hexanos ^ 100% de uma solução a 5% de metanol em acetato de etila; coluna de 40 g) para produzir 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila (365 mg, 0,526 mmol, 76% de rendimento) como um sólido esbranquiçado: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,34 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=7,4, 1,9 Hz, 1H), 6,99 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,21 (dd, J=6,3, 1,8 Hz, 1H), 4,74 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,62 (dd, J=2,1, 1,4 Hz, 1H), 4,60 - 4,52 (m, 2H), 4,19 (qd, J=7,1, 2,5 Hz, 2H), 2,73 (d, J=17,1 Hz, 1H), 2,56 (td, J=10,9, 5,4 Hz, 1H), 1,78 - 1,13 (m, 21H), 2,27 - 1,87 (m, 6H), 1,71 (s, 3H), 1,26 (t, J=6,8 Hz, 3H), 1,09 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,88 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 694,7 [(M+H)+, calc para C45H64N3O3 694,5], tR = 4,51 min (Método de LCMS 14). Etapa 4. Preparação de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-etila.
[00302] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila (150 mg, 0,216 mmol) e 2-((1s,4s)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (76 mg, 0,346 mmol) foram dissolvidos em MeOH (1,4 mL) e ácido acético (0,28 mL). Complexo de borano-2- picolina (37,0 mg, 0,346 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (3 mL) e solução de carbonato de sódio (2 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (5 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% de acetato de etila com 5% de :metanol/70% de hexanos ^ 100% de acetato de etila com 5% de :metanol; coluna de 24 g, gradiente de 25 min) para produzir 1- (((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-etila (130 mg, 67% de rendimento) como uma espuma branca: 1H RMN (500MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,34 (dd, J=5,0, 2,0 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=7,5, 2,0 Hz, 1H), 6,99 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,38 (br. s., 1H), 5,23 - 5,19 (m, 1H), 4,75 (d, J=1,7 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,59 - 4,52 (m, 2H), 4,19 (dtt, J=10,8, 7,2, 3,8 Hz, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,83 - 2,70 (m, 4H), 2,55 (td, J=10,9, 5,6 Hz, 1H), 2,28 - 0,89 (m, 37H), 1,70 (s, 3H), 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,87 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 898,7 [(M+H)+, calc para C54H80N3O6S 898,6], tR = 4,43 min (Método de LCMS 14). Etapa 5. A uma solução de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1s,4R)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-etila (124 mg, 0,138 mmol) em dioxano (4 mL) e MeOH (2 mL), adicionou-se hidróxido de lítio (2 mL, 2,00 mmol, 1 M aq). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 10 h. Um pouco de material de partida foi detectado por LC/MS (Método de LCMS 16) junto com a formação de um subproduto de amida devido à hidrólise da nitrila. A reação foi interrompida nesse ponto. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 6 N (250 μL). A mistura foi então filtrada através de um filtro de seringa e foi purificada por HPLC de fase reversa (5 injeções) (Método de HPLC preparativa 4). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2- ((1s,4R)-1-hidroxi-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (48,1 mg, 34% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (500MHz, Ácido Acético-d4) δ 8,42 (dd, J=5,1, 1,9 Hz, 1H), 8,05 (dd, J=7,6, 1,9 Hz, 1H), 7,11 (dd, J=7,5, 5,2 Hz, 1H), 5,43 (br. s., 1H), 5,27 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,68 - 4,59 (m, 2H), 3,46 - 3,33 (m, 2H), 3,09 - 2,99 (m, 1H), 2,96 (s, 3H), 2,89 - 2,81 (m, 1H), 2,74 (d, J=16,5 Hz, 1H), 2,34 - 1,13 (m, 37H), 1,75 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 870,7 [(M+H)+, calc para C52H76N3O6S 870,5], tR = 1,24 min (Método de LCMS 16); HPLC (Método de HPLC analítica 3): tR = 12,24 min; HPLC (Método de HPLC analítica 4): tR = 11,77 min. Exemplo A6. Preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico. Etapa 1. Preparação de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-etila.
[00303] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila (150 mg, 0,216 mmol) e 2-((1r,4r)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)acetaldeído (76 mg, 0,346 mmol) foram dissolvidos em MeOH (1,6 mL) e ácido acético (0,32 mL). Complexo de borano-2- picolina (37,0 mg, 0,346 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura foi transferida para um funil de separação contendo solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (20 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (5 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com MgSO4, filtradas e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (30% de acetato de etila com 5% de :metanol/70% de hexanos ^ 100% de acetato de etila com 5% de :metanol; coluna de 24 g) para produzir 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-etila (131 mg, 68% de rendimento) como uma espuma branca: 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,33 (dd, J=5,1, 1,9 Hz, 1H), 7,87 (dd, J=7,4, 1,9 Hz, 1H), 6,98 (dd, J=7,4, 5,1 Hz, 1H), 5,37 (br. s., 1H), 5,22 - 5,17 (m, 1H), 4,71 (d, J=1,8 Hz, 1H), 4,61 - 4,51 (m, 3H), 4,23 - 4,14 (m, 2H), 2,99 - 2,90 (m, 1H), 2,87 (s, 3H), 2,82 - 2,61 (m, 3H), 2,54 (td, J=10,8, 5,5 Hz, 1H), 2,23 - 1,02 (m, 37H), 1,68 (s, 3H), 1,26 (q, J=7,3 Hz, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,86 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 898,7 [(M+H)+, calc para C54H79N3O6S 898,6], tR = 4,43 min (Método de LCMS 14). Etapa 2. A uma solução de 1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)-etila (107 mg, 0,119 mmol) em dioxano (4 mL) e MeOH (2 mL), adicionou-se hidróxido de lítio (2 mL, 2,00 mmol, 1 M aq). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 10,5 h. Apenas uma pequena quantidade de material de partida foi detectada por LC/MS (Método de LCMS 16). A reação foi interrompida nesse ponto. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente e foi parcialmente neutralizada pela adição de HCl 6 N (250 μL). A mistura foi então filtrada através de um filtro de seringa e foi purificada por HPLC de fase reversa (5 injeções) (Método de HPLC preparativa 4). O solvente orgânico foi evaporado no rotovapor e a mistura aquosa foi liofilizada para produzir ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroxi-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (58 mg, 49% de rendimento) como um sólido amorfo branco: 1H RMN (400MHz, Ácido Acético-d4) δ 8,43 (dd, J=5,1, 1,9 Hz, 1H), 8,06 (dd, J=7,5, 1,8 Hz, 1H), 7,12 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,44 (br. s., 1H), 5,27 (d, J=4,8 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,69 - 4,60 (m, 2H), 3,43 - 3,29 (m, 2H), 3,20 - 3,09 (m, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,91 - 2,81 (m, 1H), 2,75 (d, J=15,3 Hz, 1H), 2,32 - 1,33 (m, 37H), 1,76 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,03 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 870,6 [(M+H)+, calc para C52H75N3O6S 870,5], tR = 2,30 min (Método de LCMS 15); HPLC (Método de HPLC analítica 3): tR = 14,96 min; HPLC (Método de HPLC analítica 4): tR = 14,64 min. Exemplo A7 e Exemplo A8. Preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3- di-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (Exemplo A7) e ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (Exemplo A8). Etapa 1. Preparação de benzoato de ((R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila.
[00304] Em um balão de média pressão de 150 mL, combinou-se (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato (1,5 g, 2,69 mmol), benzoato de (R)-(1-(etoxicarbonil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1,259 g, 3,04 mmol) e pré-catalisador de Buchwald (0,127 g, 0,161 mmol) em THF (25 mL). À mistura de reação adicionou-se uma solução de K3PO4 0,5 M (13,45 mL, 6,72 mmol). A solução marrom resultante foi aspergida com N2(g), agitada a 72°C durante a noite. Após 16 h, a reação foi deixada resfriar até a rt, diluída com EtOAc (50 mL) e lavada com K3PO4 1,5M (50 mL). A camada aquosa foi extraída com 2 x 50 mL de EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca com MgSO4, filtrada e concentrada para espuma cinza. O material bruto foi dissolvido em DCM e carregado em uma coluna de gel de sílica (SiO2, cartucho Isco de 80 g, eluído com 0% de B a 50% de B acima de 4 volumes de coluna e mantido a 50% de B até todo o produto eluir, solvente A = DCM, solvente B = 90:10 DCM:MeOH) e seco a vácuo para dar benzoato de ((R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (1,8 g, 2,59 mmol, 96% de rendimento) como um sólido marrom. LCMS: m/z 696,6 (M+H+), tempo de retenção 1,589 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 8,06 - 7,96 (m, 2H), 7,63 - 7,53 (m, 1H), 7,48 - 7,39 (m, 2H), 5,36 (br. s., 1H), 5,20 (dd, J=6,1, 1,7 Hz, 1H), 4,73 (d, J=2,0 Hz, 1H), 4,61 (s, 1H), 4,44 (q, J=10,8 Hz, 2H), 4,18 (qd, J=7,1, 1,0 Hz, 2H), 2,77 - 2,64 (m, 1H), 2,55 (td, J=10,9, 5,3 Hz, 1H), 2,26 - 2,13 (m, 3H), 2,08 (td, J=12,7, 5,7 Hz, 2H), 2,00 (dd, J=17,0, 6,5 Hz, 1H), 1,85 (dt, J=13,1, 6,4 Hz, 1H), 1,78 - 1,71 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 1,67 - 1,56 (m, 6H), 1,55 - 1,49 (m, 4H), 1,48 - 1,38 (m, 6H), 1,37 - 1,26 (m, 3H), 1,24 - 1,19 (m, 3H), 1,08 (s, 3H), 0,97 (s, 3H), 0,96 (br. s., 3H), 0,94 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- etila.
[00305] A uma solução de benzoato de ((R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(etoxicarbonil)ciclo-hex-3-en-1-il)metila (0,692 g, 0,994 mmol) em THF (10 mL) e MeOH (1 mL), adicionou-se hidróxido de sódio (0,994 mL, 0,994 mmol) e a mistura resultante foi agitada à rt. Após 3 h, a reação foi concentrada até secar e o material foi dissolvido em DCM:MeOH e purificado por cromatografia em coluna flash (SiO2, cartucho Isco de 40 g, eluído com 95:5 DCM:MeOH) e seco a vácuo para dar 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- etila (427 mg, 0,721 mmol, 72,6% de rendimento) como um sólido amarelo claro. LCMS: m/z 592,5 (M+H+), tempo de retenção 1,705 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 5,30 (br. s., 1H), 5,14 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,72 (br. s., 1H), 4,60 (br. s., 1H), 4,22 - 4,00 (m, 2H), 3,74 - 3,53 (m, 2H), 2,60 - 2,42 (m, 2H), 2,13 (br. s., 2H), 2,06 - 1,87 (m, 4H), 1,78 - 1,70 (m, 1H), 1,67 (br. s., 5H), 1,63 - 1,51 (m, 6H), 1,43 (br. s., 7H), 1,32 (br. s., 1H), 1,24 (t, J=7,0 Hz, 4H), 1,06 (br. s., 4H), 0,97 (br. s., 3H), 0,92 (br. s., 3H), 0,90 (br. s., 3H), 0,85 (br. s., 3H). Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila.
[00306] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(hidroximetil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de (R)- etila (420 mg, 0,710 mmol) e 3-ciano-2-fluoropiridina (130 mg, 1,064 mmol) foram combinados em DMF (3 mL) e THF (3 mL) resfriados a 0 °C. A pasta fluida amarela foi tratada com uma solução de terc-butóxido de potássio (0,781 mL, 0,781 mmol) em THF. A reação se tornou quase totalmente homogênea; o banho frio foi removido e a reação foi agitada à rt. Após 3,5 h, ainda havia uma pequena quantidade de material de partida; portanto, adicionou-se à reação mais 3-ciano-2-fluoropiridina (43,3 mg, 0,355 mmol) e terc-butóxido de potássio (0,142 mL, 0,142 mmol) e agitou-se à RT por mais 1 h. A reação foi diluída com EtOAc e lavada com 25 mL de HCl 0,5N. A camada aquosa foi extraída com 2 x 50 mL de EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com NaHCO3 saturado, salmoura, seca com MgSO4, filtrada e concentrada até uma pasta marrom. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (SiO2, cartucho Isco de 40 g, eluído com 95:5 DCM:MeOH) e seco sob vácuo para dar 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila (426 mg, 0,614 mmol, 87% de rendimento) como um sólido marrom claro. LCMS: m/z 694,9 (M+H+), tempo de retenção 1,517 min (Método de LCMS 16). Etapa 4. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- (((R)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila, TFA.
[00307] A uma solução de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila (48,5 mg, 0,070 mmol) em acetonitrila (0,5 mL) e 1,4-dioxano (0,5 mL), adicionou-se terc-butildimetilsilil (R)-(-)-glicidil éter (0,094 mL, 0,489 mmol) e a mistura foi agitada a 100 °C durante a noite. Após 19 h, a reação foi deixada resfriar até à RT e foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa usando o método de HPLC preparativa 8 e seca sob vácuo para dar 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila, TFA (22,8 mg, 0,023 mmol, 32,7% de rendimento, 53,5% de rendimento com base no material de partida recuperado) e material de partida recuperado (21,9 mg), ambos como sólido de vidro claro. LCMS: m/z 882,4 (M+H+), tempo de retenção 1,849 min (Método de LCMS 16). Etapa 5. A uma solução de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-(((R)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila, TFA (22,8 mg, 0,023 mmol) em 2-Me-THF (1 mL) e H2O (0,3 mL), adicionou-se uma solução de hidróxido de tetrabutilamônio (0,105 mL, 0,160 mmol) e a mistura foi agitada à RT durante 4 h, mas a LC/MS não apresentou reação. A reação foi então agitada a 50 °C. Após 14 h, a LC/MS apresentou que aproximadamente 60% do material de partida restava; dessa forma, a mistura foi agitada a 50 °C durante outra noite. Após 40 h, a mistura de reação foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa usando o método de HPLC preparativa 8 e as frações do produto foram secas a vácuo para dar dois produtos, ambos como sólidos de vidro.
[00308] O Exemplo A8 foi o primeiro dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3- di-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (4,0 mg, 4,36 μmol, 19,04% de rendimento). LCMS: m/z 758,7 (M+H+), tempo de retenção 1,219 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,47 - 8,36 (m, 1H), 8,25 (d, J=3,2 Hz, 1H), 7,08 (dd, J=7,6, 4,9 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (br. s., 1H), 4,06 - 3,90 (m, 1H), 3,66 (d, J=4,2 Hz, 2H), 3,23 - 3,11 (m, 1H), 3,03 - 2,92 (m, 1H), 2,80 - 2,61 (m, 2H), 2,48 - 1,90 (m, 10H), 1,84 (d, J=6,6 Hz, 1H), 1,71 (s, 4H), 1,69 - 1,21 (m, 15H), 1,15 (d, J=12,7 Hz, 1H), 1,08 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,86 (s, 3H).
[00309] O Exemplo A7 foi o segundo dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3- di-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (6,5 mg, 7,46 μmol, 32,6% de rendimento). LCMS: m/z 740,6 (M+H+), tempo de retenção 1,289 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,33 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,94 (dd, J=7,6, 1,7 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=7,6, 5,1 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 3,99 (dd, J=8,6, 3,9 Hz, 1H), 3,66 (d, J=4,2 Hz, 2H), 3,18 (dd, J=12,1, 3,5 Hz, 1H), 2,98 (dd, J=11,9, 8,9 Hz, 1H), 2,78 - 2,56 (m, 2H), 2,35 - 2,08 (m, 4H), 2,08 - 1,87 (m, 6H), 1,75 (br. s., 1H), 1,72 (s, 3H), 1,70 - 1,53 (m, 6H), 1,51 - 1,22 (m, 8H), 1,21 - 1,12 (m, 1H), 1,08 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H).
[00310] Exemplo A9 e Exemplo A10. Preparação de ácido (R)-1-(((3- cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-(((R)-2-hidroxi-3-metoxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (Exemplo A9) e ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2-hidroxi-3- metoxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (Exemplo A10).
[00311] Os compostos título foram preparados em 7,1% e 16,1% de rendimento, respectivamente, a partir de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila seguindo o mesmo procedimento como descrito para a preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA e ácido (R)-1-(((3- carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que (R)-(-)-metil glicidil éter foi usado em vez de terc-butildimetilsilil (R)-(-)-glicidil éter na Etapa 4.
[00312] O Exemplo A10 foi o primeiro dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2- hidroxi-3-metoxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico (5,6 mg, 7,25 μmol, 16,13% de rendimento). LCMS: m/e 772,6 (M+H+), 1,284 min (Método de LCMS 16).
[00313] O Exemplo A9 foi o segundo dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2- hidroxi-3-metoxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (2,9 mg, 3,17 μmol, 7,06% de rendimento). LCMS: m/z 754,6 (M+H+), tempo de retenção 1,345 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,33 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,94 (dd, J=7,5, 1,8 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,07 (dd, J=9,9, 4,0 Hz, 1H), 3,54 - 3,44 (m, 2H), 3,39 (s, 3H), 3,15 (dd, J=11,9, 3,3 Hz, 1H), 2,93 (t, J=11,1 Hz, 1H), 2,75 - 2,59 (m, 2H), 2,31 - 2,08 (m, 4H), 2,07 - 1,89 (m, 6H), 1,79 - 1,73 (m, 1H), 1,71 (s, 3H), 1,67 (br. s., 1H), 1,65 - 1,57 (m, 3H), 1,56 - 1,39 (m, 6H), 1,37 - 1,22 (m, 4H), 1,21 - 1,13 (m, 1H), 1,08 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H).
[00314] Exemplo A11 e Exemplo A12. Preparação de ácido (R)-1-(((3- cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-(((S)-2-hidroxi-3-metoxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (Exemplo A11) e ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((S)-2-hidroxi-3- metoxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (Exemplo A12).
[00315] Os compostos título foram preparados em 26,9% e 6,1% de rendimento, respectivamente, a partir de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila seguindo o mesmo procedimento como descrito para a preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA e ácido (R)-1-(((3- carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que (S)-(+)-metil glicidil éter foi usado em vez de terc-butildimetilsilil (R)-(-)-glicidil éter na Etapa 4.
[00316] O Exemplo A12 foi o primeiro dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((S)-2- hidroxi-3-metoxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (2,2 mg, 2,359 μmol, 6,11% de rendimento). LCMS: m/z 772,6 (M+H+), tempo de retenção 1,279 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,41 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 8,25 (dd, J=4,8, 2,1 Hz, 1H), 7,08 (dd, J=7,6, 4,9 Hz, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,11 (t, J=4,0 Hz, 1H), 3,69 - 3,63 (m, 1H), 3,61 - 3,55 (m, 1H), 3,44 (s, 3H), 3,27 - 3,20 (m, 1H), 3,19 - 3,12 (m, 1H), 2,72 (d, J=15,9 Hz, 1H), 2,63 - 2,52 (m, 1H), 2,26 (br. s., 1H), 2,22 - 2,08 (m, 4H), 2,07 - 1,95 (m, 4H), 1,88 - 1,74 (m, 3H), 1,72 (s, 3H), 1,70 - 1,62 (m, 2H), 1,62 - 1,41 (m, 8H), 1,41 - 1,22 (m, 4H), 1,16 (br. s., 1H), 1,09 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H).
[00317] O Exemplo A11 foi o segundo dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((S)-2- hidroxi-3-metoxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (9,5 mg, 10,40 μmol, 26,9% de rendimento). LCMS: m/z 754,6 (M+H+), tempo de retenção 1,347 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,33 (dd, J=5,1, 2,0 Hz, 1H), 7,94 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=7,6, 4,9 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,11 (t, J=4,0 Hz, 1H), 3,70 - 3,54 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 3,27 - 3,20 (m, 1H), 3,19 - 3,12 (m, 1H), 2,64 (d, J=15,9 Hz, 1H), 2,60 - 2,51 (m, 1H), 2,20 (d, J=16,6 Hz, 3H), 2,11 - 1,89 (m, 7H), 1,82 - 1,74 (m, 2H), 1,72 (s, 3H), 1,70 - 1,63 (m, 2H), 1,63 - 1,22 (m, 12H), 1,20 - 1,11 (m, 1H), 1,09 (s, 3H), 1,05 (s, 2H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). 13C RMN (101MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 178,3, 164,5, 152,27 - 152,01, 148,9, 147,7, 144,1, 139,7, 122,7, 121,9, 117,7, 112,5, 97,5, 78,5, 76,6, 72,6, 71,5, 65,1, 60,2, 53,8, 50,0, 46,8, 46,6, 45,3, 42,8, 41,4, 38,6, 38,3, 36,9, 34,2, 32,6, 31,1, 30,2, 30,1, 28,1, 27,4, 26,8, 25,9, 22,0, 21,7, 20,3, 19,2, 17,0, 16,0, 15,0.
[00318] Exemplo A13 e Exemplo A14 Preparação de ácido (R)-1-(((3- cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-(((R)-2,3-di-hidroxi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1- (prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca- hidro-1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (Exemplo A13) e ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di-hidroxi-2- metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (Exemplo A14).
[00319] Os compostos título foram preparados em 26,0% e 13,6% de ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila seguindo o mesmo procedimento como descrito para a preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA e ácido (R)-1-(((3- carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que (2R)-(-)-2- metilglicidil 4-nitrobenzoato foi usado em vez de terc-butildimetilsilil (R)-(-)- glicidil éter na Etapa 4.
[00320] O Exemplo A14 foi o primeiro dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-1-(((3-carbamoilpiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3- di-hidroxi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (4,8 mg, 5,91 μmol, 13,57% de rendimento). LCMS: m/z 772,6 (M+H+), tempo de retenção 1,242 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,41 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 8,25 (dd, J=4,9, 2,0 Hz, 1H), 7,08 (dd, J=7,6, 4,9 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,81 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 3,69 (s, 2H), 2,97 (d, J=12,2 Hz, 1H), 2,79 - 2,68 (m, 1H), 2,68 - 2,59 (m, 1H), 2,34 - 2,23 (m, 1H), 2,22 - 2,08 (m, 3H), 2,08 - 1,95 (m, 4H), 1,90 - 1,80 (m, 1H), 1,79 - 1,74 (m, 1H), 1,73 (s, 3H), 1,71 - 1,66 (m, 1H), 1,66 - 1,53 (m, 4H), 1,52 - 1,33 (m, 6H), 1,30 (br. s., 2H), 1,23 (s, 3H), 1,20 - 1,09 (m, 2H), 1,06 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,86 (s, 3H).
[00321] O Exemplo A13 foi o segundo dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2- il)oxi)metil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3- di-hidroxi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA (8,7 mg, 0,011 mmol, 26,0% de rendimento). LCMS: m/z 754,6 (M+H+), tempo de retenção 1,309 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,33 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,94 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=7,6, 5,1 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,81 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 3,69 (s, 2H), 2,97 (d, J=12,0 Hz, 1H), 2,72 - 2,59 (m, 2H), 2,30 - 2,15 (m, 3H), 2,12 - 1,99 (m, 5H), 1,98 - 1,88 (m, 2H), 1,81 - 1,74 (m, 1H), 1,73 (s, 3H), 1,71 - 1,66 (m, 1H), 1,66 - 1,53 (m, 5H), 1,52 - 1,33 (m, 7H), 1,31 - 1,25 (m, 1H), 1,23 (s, 3H), 1,19 - 1,09 (m, 2H), 1,06 (s, 3H), 1,04 (s, 2H), 0,96 (s, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). 13C RMN (101MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ178,3, 164,5, 152,2, 148,9, 147,8, 144,1, 139,7, 122,7, 121,9, 117,7, 112,4, 97,5, 78,6, 72,2, 71,6, 71,5, 69,6, 53,8, 50,0, 46,3, 45,3, 42,9, 42,6, 41,4, 38,6, 38,3, 36,9, 34,2, 32,1, 31,1, 30,2, 30,08 - 30,04, 28,5, 28,1, 27,7, 26,9, 26,0, 23,5, 22,0, 21,7, 20,3, 19,4, 17,0, 16,0, 15,0.
[00322] Exemplo A15 e Exemplo A16. Preparação de ácido (R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2-carboxi-2- hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxílico, TFA (Exemplo A15) e ácido 2-(((R)-1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2-carboxi-2- hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metoxi)nicotínico, TFA (Exemplo A16).
[00323] Os compostos título foram preparados em 19,5% e 17,9% de rendimento, respectivamente, a partir de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila seguindo o mesmo procedimento como descrito para a preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA e ácido (R)-1-(((3- carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que (R)- metilglicidato foi usado em vez de terc-butildimetilsilil (R)-(-)-glicidil éter na Etapa 4.
[00324] O Exemplo A16 foi o primeiro dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido 2-(((R)-1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2-carboxi-2- hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)metoxi)nicotínico (6,0 mg, 7,37 μmol, 17,94% de rendimento). LCMS: m/z 773,5 (M+H+), tempo de retenção 1,224 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,41 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 8,25 (dd, J=4,9, 2,0 Hz, 1H), 7,08 (dd, J=7,6, 4,9 Hz, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,44 (dd, J=10,0, 4,2 Hz, 1H), 3,40 - 3,34 (m, 1H), 3,06 (t, J=11,0 Hz, 1H), 2,77 - 2,62 (m, 2H), 2,26 (br. s., 1H), 2,22 - 2,05 (m, 5H), 2,04 - 1,94 (m, 3H), 1,89 - 1,74 (m, 3H), 1,72 (s, 3H), 1,69 - 1,57 (m, 4H), 1,57 - 1,40 (m, 5H), 1,39 - 1,22 (m, 4H), 1,22 - 1,12 (m, 1H), 1,10 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H).
[00325] O Exemplo A15 foi o segundo dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2-carboxi-2- hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxílico (6,3 mg, 8,02 μmol, 19,52% de rendimento). LCMS: m/z 754,6 (M+H+), tempo de retenção 1,289 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,33 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,94 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,41 (d, J=5,4 Hz, 1H), 3,06 (t, J=10,8 Hz, 1H), 2,65 (d, J=19,1 Hz, 2H), 2,20 (d, J=15,9 Hz, 3H), 2,14 - 2,05 (m, 2H), 2,05 - 1,87 (m, 5H), 1,82 - 1,69 (m, 5H), 1,68 - 1,57 (m, 4H), 1,56 - 1,41 (m, 5H), 1,39 - 1,22 (m, 4H), 1,21 - 1,12 (m, 1H), 1,10 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H).
[00326] Exemplo A17 e Exemplo A18. Preparação de ácido (R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((S)-2-carboxi-2- hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxílico, TFA (Exemplo A17) e ácido (R)-3- (((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((S)-4-(((3- carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4-(etoxicarbonil)ciclo-hex-1-en-1-il)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)-2-hidroxipropanoico, TFA (Exemplo A18).
[00327] Os compostos título foram preparados em 19,5% e 16,0% de rendimento, respectivamente, a partir de 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila seguindo o mesmo procedimento como descrito para a preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA e ácido (R)-1-(((3- carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que (S)- metilglicidato foi usado em vez de terc-butildimetilsilil (R)-(-)-glicidil éter na Etapa 4.
[00328] O Exemplo A18 foi o primeiro dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-3- (((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((S)-4-(((3- carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4-(etoxicarbonil)ciclo-hex-1-en-1-il)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-3a-il)amino)-2-hidroxipropanoico, TFA (5,7 mg, 6,11 μmol, 15,98% de rendimento). LCMS: m/z 772,7 (M+H+), tempo de retenção 1,222 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,41 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 8,25 (dd, J=4,9, 2,0 Hz, 1H), 7,08 (dd, J=7,6, 4,9 Hz, 1H), 5,35 (br. s., 1H), 5,19 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,41 (t, J=6,6 Hz, 1H), 3,20 (d, J=6,4 Hz, 2H), 2,71 (d, J=13,4 Hz, 2H), 2,36 - 2,23 (m, 1H), 2,16 (d, J=14,9 Hz, 2H), 2,13 - 2,06 (m, 2H), 2,05 - 1,95 (m, 4H), 1,89 - 1,80 (m, 1H), 1,79 - 1,74 (m, 1H), 1,72 (s, 3H), 1,68 (br. s., 2H), 1,65 - 1,57 (m, 2H), 1,57 - 1,50 (m, 2H), 1,49 - 1,39 (m, 4H), 1,39 - 1,22 (m, 4H), 1,12 (s, 3H), 1,08 (d, J=9,5 Hz, 1H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H).
[00329] O Exemplo A17 foi o segundo dos dois produtos isolados a eluir da coluna de HPLC preparativa: ácido (R)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((S)-2-carboxi-2- hidroxietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxílico, TFA (6,8 mg, 7,44 μmol, 19,46% de rendimento). LCMS: m/z 754,6 (M+H+), tempo de retenção 1,284 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,33 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,94 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=7,6, 5,1 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (br. s., 1H), 4,71 (br. s., 1H), 4,41 (br. s., 1H), 3,20 (d, J=5,1 Hz, 2H), 2,70 (br. s., 1H), 2,64 (d, J=18,8 Hz, 1H), 2,20 (d, J=16,1 Hz, 3H), 2,12 - 1,89 (m, 7H), 1,75 (br. s., 2H), 1,72 (s, 3H), 1,70 - 1,51 (m, 6H), 1,51 - 1,39 (m, 4H), 1,38 - 1,22 (m, 4H), 1,12 (s, 3H), 1,08 (d, J=9,0 Hz, 1H), 1,04 (s, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). Exemplo A19 Preparação de ácido (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-carboxi-2-hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxílico.
[00330] O composto título foi preparado em 19,4% de rendimento a partir de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de (R)-etila seguindo o mesmo procedimento como descrito para a preparação de ácido (R)-1-(((3-cianopiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, TFA e ácido (R)-1-(((3- carbamoilpiridin-2-il)oxi)metil)-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((R)-2,3-di- hidroxipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-enocarboxílico, exceto que 2- metilglicidato de metila foi usado em vez de terc-butildimetilsilil (R)-(-)- glicidil éter na Etapa 4. LCMS: m/z 768,5 (M+H+), tempo de retenção 1,295 min (Método de LCMS 16). 1H RMN (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 8,33 (dd, J=5,0, 1,8 Hz, 1H), 7,94 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=7,5, 5,0 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (br. s., 1H), 4,71 (br. s., 1H), 3,08 - 2,89 (m, 1H), 2,80 - 2,57 (m, 2H), 2,33 - 2,09 (m, 4H), 2,08 -1,87 (m, 6H), 1,82 - 1,74 (m, 1H), 1,72 (s, 3H), 1,70 - 1,57 (m, 4H), 1,56 - 1,41 (m, 8H), 1,40 - 1,22 (m, 4H), 1,12 (s, 1H), 1,09 (br. s., 1,5H), 1,07 (br. s., 1,5H), 1,05 (s, 3H), 1,01 (s, 1H), 0,96 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,86 (br. s., 3H). Preparação de 8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2- oxaespiro[4.5]dec-7-en-1-ona. Etapa 1: Preparação de 8-((trimetilsilil)oxi)-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-1-ona.
[00331] A um vaso de pressão Chemglass de 350 mL com tampa rosqueada, adicionou-se 3-metilenodi-hidrofurano-2(3H)-ona (4,31 g, 43,9 mmol) e (buta-1,3-dien-2-iloxi)trimetilsilano (7,50 g, 52,7 mmol) e benzeno (100 mL). Foi adicionada hidroquinona (0,726 g, 6,59 mmol), depois a solução foi purgada com nitrogênio, vedada e aquecida a 123°C durante 20 h. Adicionou-se então mais 2,4 equivalentes de (buta-1,3-dien-2- iloxi)trimetilsilano (15,0 g, 105,4 mmol) ao vaso e a mistura foi aquecida a 123°C durante mais 60 h. A mistura foi concentrada a vácuo para dar aproximadamente 19 g de óleo amarelo. A mistura bruta foi carregada com DCM e hexanos mínimos em um cartucho de sílica Isco de 330 g, pré- equilibrado com hexanos. Gradiente de eluição de 100% de hexanos a 11:1 hexanos:EtOAc acima de dois volumes de coluna, depois manter 11:1 hex:EtOAc para 3 volumes de coluna e depois gradiente para 5:1 hex:EtAc acima de 2 volumes de coluna, depois manter 5:1 hex:EtOAc para 6 volumes de coluna. A concentração de frações combinadas contendo o material desejado forneceu o produto como um sólido branco: 7,50 g (71,0% de rendimento). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,85 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,40 - 4,23 (m, 2H), 2,47 (dd, J=16,6, 2,2 Hz, 1H), 2,19 - 2,10 (m, 4H), 2,06 (d, J=3,4 Hz, 1H), 2,04 - 1,99 (m, 1H), 1,75 - 1,65 (m, 1H), 0,22 (s, 9H). Etapa 2. Preparação de 2-oxaespiro[4.5]decano-1,8-diona.
[00332] 8-((trimetilsilil)oxi)-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-1-ona (7,50 g, 31,2 mmol) foi combinada com THF (100 mL) e ácido clorídrico, 0,05 M aquoso (3,12 mL, 0,156 mmol). A mistura foi agitada durante 18 h à RT. A mistura de reação foi então concentrada a vácuo até um resíduo. O resíduo foi tomado em EtOAc (200 mL) e lavado com NaHCO3 saturado (50 mL) e com salmoura (50 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada a vácuo. A mistura bruta foi carregada em DCM mínimo sobre um cartucho de sílica Isco de 330 g pré-equilibrado com hexanos. Gradiente de eluição de 100% de hexanos a 1:1 hexanos:EtOAc acima de 10 volumes de coluna, manter 1:1 hexanos:EtOAc para 6 volumes de coluna. A separação parcial dos dois materiais foi obtida. Frações similares foram combinadas e deixadas de lado e frações mistas foram recromatografadas de uma maneira semelhante. O material desejado foi o principal produto da reação e foi o segundo dos dois materiais a eluir da coluna de sílica. O material desejado foi recuperado como um sólido branco: 4,14 g (79,0% de rendimento). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 4,40 (t, J=7,1 Hz, 2H), 2,87 - 2,70 (m, 2H), 2,44 - 2,29 (m, 4H), 2,24 (ddd, J=13,6, 8,3, 5,5 Hz, 2H), 1,96 (dt, J=13,6, 6,5 Hz, 2H). Etapa 3. Preparação de 1-oxo-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-8-il trifluorometanossulfonato.
[00333] Em um frasco de fundo redondo de 250 mL equipado com agitador magnético e septo de borracha foram combinados 2- oxaespiro[4.5]decano-1,8-diona (4,13 g, 24,6 mmol) e N,N- bis(trifluorometilsulfonil)anilina (10,1 g, 28,2 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (100 mL). A solução foi resfriada para -78oC em um banho de gelo seco/acetona. À solução fria adicionou-se gota a gota hexametildisilazida de potássio, 0,5M em tolueno (56,5 mL, 28,2 mmol) durante 15 min. A mistura foi agitada a -78 °C por um total de 4 h quando foi tratada lentamente com 100 mL de cloreto de amônio aquoso saturado. A mistura foi agitada à RT durante 15 minutos e foi concentrada a vácuo para remover a maior parte do THF, depois adicionou-se acetato de etila (300 mL) ao resíduo. A mistura resultante foi agitada e as fases foram separadas. O orgânico foi lavado com água (2 x 100 mL) e com salmoura (50mL). O orgânico foi seco com sulfato de magnésio anidro, filtrado e concentrado a vácuo para dar um óleo amarelo bruto. O resíduo bruto foi carregado como um óleo em um cartucho de sílica Isco de 220 g pré-equilibrado com hexanos e o balão foi enxaguado com DCM mínimo e foi também adicionado à coluna. Gradiente de eluição de 100% de hexanos a 3:1 hexanos:EtOAc acima de 3 volumes de coluna, depois manter 3:1 hex:EtOAc para 3 volumes de coluna e depois 2:1 hex:EtOAc para 3 volumes de coluna. As frações do produto similares foram combinadas e concentradas a vácuo para dar o material desejado como um óleo levemente amarelo: 6,44 g (87,0% de rendimento). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,86 - 5,76 (m, 1H), 4,44 - 4,29 (m, 2H), 2,63 (dd, J=17,7, 2,8 Hz, 1H), 2,59 - 2,38 (m, 2H), 2,30 - 2,16 (m, 3H), 2,16 - 2,04 (m, 1H), 1,86 (dt, J=13,7, 2,9 Hz, 1H). Etapa 4. Em um balão de fundo redondo de 250 mL com um condensador de refluxo, foram combinados 1-oxo-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-8-il trifluorometanossulfonato (6,43 g, 21,4 mmol), acetato de potássio (5,25 g, 53,5 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-octametil-2,2’-bi(1,3,2-dioxaborolano) (5,71 g, 22,5 mmol) e PdCl2(dppf).CH2Cl2 (0,529 g, 0,642 mmol) em 1,4-dioxano seco (100 mL). A mistura foi jateada com nitrogênio e aquecida a 70 °C durante 5 h. A mistura de reação foi concentrada a vácuo até aprox. 25 mL de volume total e foi diluída com acetato de etila (300 mL) e água (150 mL). A mistura foi agitada e as fases foram separadas. O orgânico foi novamente lavado com água (100 mL) e depois com salmoura (100 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada a vácuo até um resíduo vermelho-profundo. A mistura bruta foi dissolvida em DCM mínimo e carregada em um cartucho de sílica Isco de 220 g, pré-equilibrado com hexanos. Gradiente de eluição de 100% de hexanos a 20% de acetato de etila em hexanos acima de 10 volumes de coluna, depois manter 20% de acetato de etila em hexanos para 6 volumes de coluna, depois gradiente para 15% de acetato de etila em hexanos acima de 10 volumes de coluna, depois manter 25% de acetato de etila em hexanos para 6 volumes de coluna. As frações do produto foram combinadas e concentradas a vácuo para dar o material desejado como um sólido de espuma branca = 4,94 g (83,0% de rendimento). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 6,60 - 6,49 (m, 1H), 4,39 - 4,22 (m, 2H), 2,50 (d, J=17,6 Hz, 1H), 2,40 (dd, J=18,1, 3,9 Hz, 1H), 2,21 - 2,01 (m, 4H), 1,85 (td, J=12,3, 5,5 Hz, 1H), 1,73 - 1,62 (m, 1H), 1,29 (s, 12H).
[00334] Exemplo A20. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-(piridin-2-iloxi)etil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico.Etapa 1. Preparação de 8-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-1-ona.
[00335] Em um vaso de pressão Chemglass de 150 mL com barra de agitação magnética, foram combinados (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il trifluorometanossulfonato (2,00 g, 2,78 mmol) com 8- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-1-ona (0,851 g, 3,06 mmol) e pré-catalisador de Buchwald 13 (0,131 g, 0,167 mmol). O vaso foi vedado com um septo de borracha. Uma agulha foi inserida no septo e o vaso foi iterativamente evacuado e então purgado com nitrogênio em um forno a vácuo à RT quatro vezes durante um período de 15 min. Ao balão de reação purgado com nitrogênio, adicionou-se THF anidro (40 mL) e adicionou-se K3PO4 0,5 M aquoso aspergido com nitrogênio recém-preparado (13,9 mL, 6,95 mmol). O vaso foi vedado e a solução amarela resultante foi agitada a 80 °C durante 20,5 h. A mistura escureceu para uma cor verde muito escura após 30 min de aquecimento e após 20,5 h de aquecimento estava presente uma mistura bifásica quase incolor. A mistura foi diluída com EtOAc (150 mL) e lavada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL x 2) e depois com salmoura (50 mL). A camada aquosa combinada foi extraída com 2 x 100 mL de clorofórmio e as fases orgânicas foram combinadas, secadas com sulfato de magnésio anidro, filtradas e concentradas para um sólido de espuma ligeiramente amarelo. O material amarelo bruto foi carregado em DCM mínimo sobre um cartucho de sílica Isco de 80 g pré-equilibrado com hexanos. Gradiente de eluição de 100% de hexanos a 1:1 hexanos:EtOAc acima de dois volumes de coluna, manter 1:1 hexano:EtOAc para 3 volumes de coluna, depois gradiente de 1:1 hexanos:EtOAc para 1:4 hex:EtOAc acima de 8 volumes de coluna, depois manter 1:4 hexanos:EtOAc para 10 volumes de coluna. As frações do produto foram combinadas e concentradas a vácuo para dar um sólido vítreo esbranquiçado: 1,63 g (81,0% de rendimento). LCMS m/z = 721,6 (M+H+), tempo de retenção 2,404 min (Método de LCMS 17). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 5,41 - 5,30 (m, 1H), 5,22 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,70 (br. s., 1H), 4,42 - 4,27 (m, 2H), 3,19 - 2,97 (m, 8H), 2,78 - 2,53 (m, 4H), 2,52 - 2,32 (m, 2H), 2,29 - 2,10 (m, 4H), 2,04 - 1,75 (m, 6H), 1,69 (s, 4H), 1,66 - 1,54 (m, 4H), 1,53 (br. s., 1H), 1,45 (br. s., 4H), 1,40 - 1,32 (m, 2H), 1,32 - 1,13 (m, 5H), 1,10 (s, 6H), 1,04 (br. s., 1H), 0,99 (br. s., 5H), 0,95 (d, J=7,3 Hz, 3H), 0,88 (s, 3H). Etapa 2. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-hidroxietil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de potássio.
[00336] Em um balão de fundo redondo de 250 mL equipado com um condensador de refluxo, foram combinados 8- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-1-ona (1,61 g, 2,23 mmol) com carbonato de potássio (1,54 g, 11,2 mmol) em uma mistura de MeOH (20 mL) e THF (20 mL). O resultado foi aquecido a 70 °C em um banho de óleo durante 2,5 h. O solvente foi removido a vácuo para deixar um resíduo marrom sólido que foi levado à etapa seguinte sem manipulação adicional. LCMS m/z = 739,5 (M+H+), tempo de retenção 1,852 min (Método de LCMS 18). Etapa 3. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-hidroxietil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de isopropila.
[00337] Em um balão de fundo redondo de 250 mL equipado com um condensador de refluxo, foram combinados a mistura de reação bruta da Etapa 2 contendo 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-hidroxietil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de potássio (1,73 g, 2,23 mmol) com carbonato de potássio (1,543 g, 11,17 mmol) em uma mistura de acetonitrila (20 mL) e DMF (20 mL). A essa mistura adicionou-se 2-iodopropano (4,46 mL, 44,7 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 80 °C por 2,5 h. A mistura foi concentrada a vácuo até um resíduo. Acetato de etila (120 mL) e água (100 mL) foram adicionados e a mistura foi agitada e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada duas vezes mais com água (2 x 50 mL) e depois com salmoura (20 mL). O orgânico ligeiramente amarelo foi seco com sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada a vácuo até um resíduo. O material foi carregado em DCM em um cartucho de gel de sílica de 120 g Isco que foi pré-equilibrado com DCM. Gradiente de eluição de 100% de DCM a 19:1 DCM:MeOH acima de 6 volumes de coluna, manter 19:1 DCM:MeOH para 8 volumes de coluna. As frações do produto combinadas foram concentradas a vácuo até uma espuma bege: 1,55 g (89% de rendimento durante 2 etapas). LCMS m/z = 781,5 (M+H+), tempo de retenção 2,873 min (Método de LCMS 19). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,6 Hz, 1H), 5,04 (dt, J=12,4, 6,1 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,61 (s, 1H), 3,73 (d, J=4,9 Hz, 1H), 3,16 - 2,97 (m, 7H), 2,75 - 2,54 (m, 4H), 2,54 - 2,42 (m, 1H), 2,28 - 2,16 (m, 1H), 2,13 (dd, J=12,1, 6,5 Hz, 1H), 2,07 - 1,91 (m, 4H), 1,89 - 1,75 (m, 4H), 1,71 (s, 3H), 1,70 - 1,62 (m, 2H), 1,62 - 1,49 (m, 5H), 1,49 - 1,39 (m, 4H), 1,39 - 1,29 (m, 3H), 1,29 - 1,22 (m, 7H), 1,22 - 1,11 (m, 2H), 1,08 (s, 6H), 1,01 - 0,95 (m, 6H), 0,94 - 0,90 (m, 3H), 0,88 (s, 3H). Etapa 4. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-((metilsulfonil)oxi)etil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de isopropila.
[00338] 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-hidroxietil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de isopropila (0,800 g, 1,02 mmol) foi dissolvido em uma mistura de trietilamina (5 mL) e DCM (5 mL). A mistura clara foi resfriada em um banho de gelo e a ela adicionou-se uma solução de anidrido metanossulfônico (0,446 g, 2,56 mmol) em DCM (3 mL). A solução incolor assumiu uma cor ligeiramente amarela, virando um laranja profundo e finalmente marrom ao longo do curso da reação. A mistura marrom foi agitada a 0 °C por 4 h e depois foi concentrada a vácuo até um resíduo sem aquecimento. O resíduo bruto foi diluído com EtOAc (100 mL) e lavado com NaHCO3 aquoso a 5% (2 x 20 mL), água (20 mL) e salmoura (20 mL). O orgânico foi seco com sulfato de magnésio anidro, filtrado e concentrado a vácuo para dar uma espuma avermelhada/marrom. O material bruto foi carregado em DCM mínimo em um cartucho de sílica Isco de 80 g que foi pré-equilibrado com hexanos. Gradiente de eluição de 100% de hexanos a 3:2 hexanos:acetona acima de 3 volumes de coluna, manter 3:2 hexanos:acetona para 10 volumes de coluna. As frações do produto desejadas foram combinadas e concentradas a vácuo para dar uma espuma amarela: 667 mg (76,0% de rendimento). LCMS m/z = 859,6 (M+H+), tempo de retenção 3,160 min (Método de LCMS 19). 1H RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ 5,33 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,4 Hz, 1H), 5,04 (dt, J=12,2, 6,3 Hz, 1H), 4,75 (br. s., 1H), 4,63 (br. s., 1H), 4,29 (t, J=7,0 Hz, 1H), 3,72 (t, J=6,5 Hz, 1H), 3,25 (s, 1H), 3,16 (s, 1H), 3,08 (br. s., 6H), 3,01 (s, 2H), 2,83 (s, 1H), 2,77 - 2,54 (m, 4H), 2,49 (br. s., 1H), 2,30 - 2,09 (m, 3H), 2,09 - 1,95 (m, 4H), 1,95 - 1,76 (m, 4H), 1,72 (br. s., 3H), 1,66 (dd, J=14,3, 7,2 Hz, 3H), 1,61 - 1,50 (m, 5H), 1,50 - 1,38 (m, 5H), 1,33 (t, J=13,1 Hz, 3H), 1,29 - 1,21 (m, 7H), 1,18 - 1,03 (m, 6H), 1,00 (br. s., 3H), 0,97 (d, J=7,3 Hz, 3H), 0,93 (d, J=5,4 Hz, 3H), 0,88 (s, 3H). Etapa 5. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-(piridin-2-iloxi)etil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxilato de isopropila.
[00339] Em um frasco de 1 dram com tampa rosqueada PTFE foram combinados piridin-2-ol (0,0190 g, 0,204 mmol) e 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-((metilsulfonil)oxi)etil)ciclo-hex-3- enocarboxilato de isopropila (0,0250 g, 0,0290 mmol) em DMF anidra (0,5 mL). À mistura adicionou-se NaHMDS, 1,0M em THF (0,175 mL, 0,175 mmol) com agitação. A mistura ligeiramente amarela resultante foi aquecida a 50 °C e agitada durante 3 d. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa (Método de HPLC preparativa 6). Dessa forma foi isolado o material desejado (0,00940 g, 29,7% de rendimento) como um sal de TFA sólido branco. LCMS m/z = 858,6 (M+H+), tempo de retenção 1,627 min (Método de LCMS 16). Etapa 6. Em um frasco de 1 dram com tampa rosqueada de PTFE, foram combinados 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-(piridin-2-iloxi)etil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de isopropila, sal de TFA (0,00940 g, 8,65 μmol) com hidróxido de lítio, 1,0 M aquoso (0,087 mL, 0,087 mmol) e uma mistura de THF e MeOH (0,3 mL). A mistura resultante foi agitada a 75 °C durante 48 h. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa (Método de HPLC preparativa 6). A fração contendo o produto desejado foi concentrada a vácuo para dar o composto título como um sólido vítreo branco (0,0035 g, 33% de rendimento). LCMS m/z = 816,5 (M+H+), tempo de retenção 2,182 min (Método de LCMS 17). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,07 (d, J=5,1 Hz, 1H), 7,65 - 7,59 (m, 1H), 6,90 (t, J=6,1 Hz, 1H), 6,74 (d, J=8,3 Hz, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,6 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,34 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,24 (br. s., 3H), 3,21 - 3,13 (m, 3H), 3,12 - 2,96 (m, 4H), 2,84 - 2,72 (m, 1H), 2,60 (d, J=15,4 Hz, 1H), 2,26 - 1,96 (m, 10H), 1,87 - 1,70 (m, 6H), 1,69 - 1,59 (m, 3H), 1,57 (br. s., 2H), 1,53 - 1,43 (m, 5H), 1,40 (br. s., 1H), 1,39 - 1,22 (m, 2H), 1,15 (s, 3H), 1,11 (br. s., 1H), 1,08 (s, 3H), 1,04 - 0,99 (m, 1H), 0,97 (br. s., 3H), 0,93 (s, 3H), 0,90 (s, 3H).
[00340] Exemplo A21. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-((5-metilisotiazol-3-il)oxi)etil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00341] O composto título foi obtido pelos mesmos procedimentos usados na preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-(piridin-2-iloxi)etil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico, exceto que 5-metilisotiazol-3-ol (0,023 g, 0,204 mmol) foi usado em vez de piridin-2-ol na Etapa 5. Dessa forma, foi obtido o composto título como um sólido vítreo branco (0,0027 g, 8,3% de rendimento combinado para as Etapas 5 e 6). LCMS m/z = 836,5 (M+H+), tempo de retenção 2,394 min (Método de LCMS 17). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 5,32 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,4 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,36 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,75 (t, J=6,0 Hz, 2H), 3,27 - 3,12 (m, 8H), 3,12 - 2,94 (m, 5H), 2,78 (td, J=10,8, 4,4 Hz, 1H), 2,58 (d, J=16,1 Hz, 1H), 2,25 - 1,95 (m, 11H), 1,92 - 1,70 (m, 8H), 1,70 - 1,59 (m, 3H), 1,59 - 1,39 (m, 9H), 1,39 - 1,24 (m, 3H), 1,22 (s, 1H), 1,18 - 1,04 (m, 7H), 0,97 (d, J=2,7 Hz, 3H), 0,92 (br. s., 3H), 0,90 (s, 3H).
[00342] Exemplo A22. Preparação de ácido 1-(2-((3-cianopiridin-2- il)oxi)etil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico. Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-hidroxietil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de potássio.
[00343] Em um balão de fundo redondo de 50 mL equipado com um condensador de refluxo, foram combinados 8- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-1-ona (0,700 g, 0,971 mmol) com carbonato de potássio (1,34 g, 9,71 mmol) em uma mistura de MeOH (10 mL) e THF (15 mL). O resultado foi aquecido até refluxo em um banho de óleo a 85 °C durante 24 h. A mistura foi deixada resfriar até a RT, depois DCM foi adicionado e o resultado foi filtrado para remover sólidos brancos. O solvente foi removido a vácuo e o resíduo foi seco em um forno a vácuo a 50 °C durante a noite para proporcionar o material desejado como um pó branco (0,940 g, 125% de rendimento). A recuperação de massa indicou que o material era aproximadamente 80% puro com o restante como excesso de sais de potássio. Este material foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS m/z = 739,5 (M+H+), tempo de retenção 1,852 min (Método de LCMS 17). Etapa 2. Ao produto em pó bruto da Etapa 1 contendo aprox. 80% em peso de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-hidroxietil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de potássio (0,025 g, 0,026 mmol), adicionou-se 2-fluoronicotinonitrila (0,016 g, 0,129 mmol), DMF anidra (0,4 mL) e THF anidro (0,3 mL) para dar uma mistura amarela ligeiramente turva. À mistura adicionou-se terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF (0,103 mL, 0,103 mmol). A mistura foi agitada à RT durante 2 h e depois 6-fluoropicolinonitrila adicional (0,032 g, 0,258 mmol) e terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF (0,206 mL, 0,206 mmol) e mais DMF (0,2 mL) foram adicionados e a mistura foi agitada por mais 1 h. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa (Método de HPLC preparativa 7). O composto título foi assim obtido como um pó ligeiramente amarelo (0,0086 g, 25% de rendimento) como um sal de TFA. LCMS m/z = 841,6 (M+H+), tempo de retenção 2,289 min (Método de LCMS 17). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,34 (dd, J=4,2, 1,0 Hz, 1H), 7,94 (dd, J=8,1, 1,7 Hz, 1H), 7,03 (dd, J=7,1, 5,1 Hz, 1H), 5,40 - 5,28 (m, 1H), 5,17 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,80 (br. s., 1H), 4,71 (br. s., 1H), 4,39 - 4,31 (m, 1H), 3,28 - 3,12 (m, 7H), 3,09 (br. s., 2H), 3,01 (br. s., 2H), 2,82 (br. s., 1H), 2,61 (d, J=17,4 Hz, 1H), 2,25 - 1,96 (m, 10H), 1,86 (d, J=10,5 Hz, 1H), 1,78 - 1,68 (m, 5H), 1,67 - 1,53 (m, 5H), 1,53 - 1,38 (m, 6H), 1,38 - 1,24 (m, 3H), 1,19 - 1,03 (m, 8H), 1,03 - 0,82 (m, 9H).
[00344] Exemplo A23. Preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico. Etapa 1. Preparação de 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- ((2-(1,1-dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1- en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro- 1H-ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-hidroxietil)ciclo-hex-3-eno-1-carboxilato de potássio.
[00345] Em um balão de fundo redondo de 50 mL equipado com um condensador de refluxo, foram combinados 8- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-2-oxaespiro[4.5]dec-7-en-1-ona (0,700 g, 0,971 mmol) com carbonato de potássio (1,34 g, 9,71 mmol) em uma mistura de MeOH (10 mL) e THF (15 mL). O resultado foi aquecido até refluxo em um banho de óleo a 85 °C durante 24 h. A mistura foi deixada resfriar até a RT, depois DCM foi adicionado e o resultado foi filtrado para remover sólidos brancos. O solvente foi removido a vácuo e o resíduo foi seco em um forno a vácuo a 50 °C durante a noite para proporcionar o material desejado como um pó branco (0,940 g, 125% de rendimento). 0,9155 g desse material foi dissolvido com agitação em 10 mL de 9:1 DCM:MeOH e essa suspensão (os sais não dissolveram) foi carregada em um tampão curto de gel de sílica de 40 mL em um funil de sucção de frita de vidro de 60 mL. O material foi eluído com 400 mL de 9:1 DCM:MeOH. Grande parte da cor laranja associada ao produto impuro foi deixada na sílica. A concentração a vácuo produziu um sólido rosado/branco que foi colocado em um forno a vácuo a 45 °C durante várias horas. O material desejado foi assim obtido como um pó branco (0,5082 g, 69,4% de rendimento). LCMS m/z = 739,6 (M+H+), tempo de retenção 1,978 min (Método de LCMS 21). Etapa 2. Ao produto purificado da Etapa 1, 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-hidroxietil)ciclo-hex-3-enocarboxilato de potássio (0,025 g, 0,032 mmol), adicionou-se ácido 2-cloroisonicotínico (0,025 g, 0,161 mmol) seguido de DMF anidra (0,35 mL). À mistura adicionou-se terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF (0,322 mL, 0,322 mmol). A mistura ficou ligeiramente amarela e turva com sólido suspenso após a adição da base. A mistura foi agitada à RT por 70 h. A mistura de reação foi resfriada bruscamente pela adição de 3 gotas de ácido acético. 0,5 mL de MeOH foi então adicionado e a mistura foi filtrada. A mistura bruta foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa em uma injeção única (Método de HPLC preparativa 8). Dessa forma, foi obtido o composto título como um sal de TFA sólido branco (0,0069 g, 18% de rendimento). LCMS m/z = 860,6 (M+H+), tempo de retenção 1,559 min (Método de LCMS 20).
[00346] Exemplo A24. Preparação de ácido 1-(2-((4-cianopiridin-2- il)oxi)etil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00347] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-fluoroisonicotinonitrila (0,020 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título foi isolado como um sal de TFA sólido ligeiramente amarelo (0,0133 g, 36,0% de rendimento). LCMS m/z = 841,6 (M+H+), tempo de retenção 1,689 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,28 (d, J=5,4 Hz, 1H), 7,11 (dd, J=5,1, 1,2 Hz, 1H), 7,00 (s, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=4,4 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,47 - 4,39 (m, 2H), 3,28 - 3,04 (m, 9H), 3,04 - 2,96 (m, 2H), 2,86 - 2,74 (m, 1H), 2,59 (d, J=16,4 Hz, 1H), 2,24 - 1,95 (m, 11H), 1,89 - 1,74 (m, 3H), 1,73 (s, 4H), 1,68 - 1,42 (m, 10H), 1,42 - 1,29 (m, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,11 (br. s., 2H), 1,08 (s, 4H), 0,96 (d, J=2,4 Hz, 3H), 0,92 (d, J=2,9 Hz, 3H), 0,90 (s, 3H).
[00348] Exemplo A25. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-(pirimidin-2-iloxi)etil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico.
[00349] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-bromopiridina (0,026 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título foi isolado como um sal de TFA sólido branco (0,0056 g, 14,2% de rendimento). LCMS m/z = 817,6 (M+H+), tempo de retenção 1,547 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,50 (d, J=4,9 Hz, 1H), 7,02 (t, J=4,8 Hz, 1H), 5,35 (dd, J=14,7, 2,9 Hz, 1H), 5,25 - 5,14 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,50 - 4,44 (m, 1H), 4,38 - 4,31 (m, 1H), 3,27 - 2,98 (m, 10H), 2,84 - 2,75 (m, 1H), 2,64 - 2,58 (m, 1H), 2,25 - 1,96 (m, 10H), 1,89 - 1,75 (m, 3H), 1,73 (s, 3H), 1,69 - 1,53 (m, 5H), 1,53 - 1,25 (m, 8H), 1,15 (d, J=2,9 Hz, 3H), 1,11 (br. s., 2H), 1,08 (s, 3H), 1,03 - 0,84 (m, 9H).
[00350] Exemplo A26. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-((4-metilpirimidin-2-il)oxi)etil)ciclo-hex-3-eno- 1-carboxílico.
[00351] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-cloro-4-metilpirimidina (0,021 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título foi isolado como um sal de TFA sólido branco (0,0056 g, 14,2% de rendimento). LCMS m/z = 831,7 (M+H+), tempo de retenção 1,550 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,21 (d, J=6,1 Hz, 1H), 6,52 (d, J=5,9 Hz, 1H), 5,40 - 5,34 (m, 1H), 5,23 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,41 - 4,27 (m, 2H), 3,30 - 3,05 (m, 10H), 3,01 (d, J=3,4 Hz, 2H), 2,81 (td, J=11,2, 4,9 Hz, 1H), 2,49 - 2,33 (m, 2H), 2,27 - 1,98 (m, 10H), 1,93 - 1,81 (m, 2H), 1,81 - 1,74 (m, 2H), 1,72 (s, 4H), 1,69 - 1,40 (m, 12H), 1,38 - 1,34 (m, 1H), 1,21 - 1,03 (m, 9H), 1,02 - 0,86 (m, 8H).
[00352] Exemplo A27. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-((4-metoxipirimidin-2-il)oxi)etil)ciclo-hex-3- eno-1-carboxílico.
[00353] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-cloro-4-metoxipirimidina (0,023 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título foi isolado como um sal de TFA sólido branco (0,0116 g, 28,8% de rendimento). LCMS m/z = 847,7 (M+H+), tempo de retenção 1,525 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 7,28 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,62 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,40 - 5,33 (m, 1H), 5,23 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,41 - 4,29 (m, 2H), 3,27 - 2,97 (m, 12H), 2,81 (td, J=11,2, 4,9 Hz, 1H), 2,43 - 2,33 (m, 1H), 2,28 - 1,98 (m, 10H), 1,92 - 1,81 (m, 2H), 1,80 - 1,73 (m, 2H), 1,73 (s, 3H), 1,70 - 1,40 (m, 12H), 1,38 - 1,34 (m, 1H), 1,16 (s, 3H), 1,15 - 1,09 (m, 2H), 1,08 (s, 3H), 1,00 (d, J=3,2 Hz, 3H), 0,96 (d, J=7,6 Hz, 3H), 0,91 (s, 3H).
[00354] Exemplo A28. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-((3-metilpiridin-2-il)oxi)etil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico.
[00355] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-fluoro-3-metilpiridina (0,018 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título foi isolado como um sal de TFA sólido branco (0,0262 g, 74,7% de rendimento). LCMS m/z = 830,7 (M+H+), tempo de retenção 1,707 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 7,89 (dd, J=5,1, 1,2 Hz, 0,35H), 7,44 (dd, J=7,1, 1,0 Hz, 0,35H), 7,42 - 7,37 (m, 0,65H), 7,22 (dd, J=6,5, 1,3 Hz, 0,65H), 6,81 (dd, J=7,0, 5,3 Hz, 0,35H), 6,29 (t, J=6,7 Hz, 0,65H), 5,39 - 5,30 (m, 1H), 5,23 (d, J=4,9 Hz, 0,65H), 5,18 (d, J=4,6 Hz, 0,35H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,41 - 4,29 (m, 2H), 3,27 - 2,98 (m, 12H), 2,81 (td, J=11,1, 4,6 Hz, 1H), 2,43 - 2,33 (m, 1H), 2,30 - 2,07 (m, 10H), 2,07 - 1,94 (m, 4H), 1,92 - 1,73 (m, 4H), 1,72 (s, 3H), 1,69 - 1,40 (m, 12H), 1,38 - 1,34 (m, 1H), 1,20 - 1,05 (m, 9H), 1,02 - 0,86 (m, 9H).
[00356] Exemplo A29. Preparação de ácido 1-(2-((3-cloropiridin-2- il)oxi)etil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00357] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 3-cloro-3-fluoropiridina (0,021 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título foi isolado como um sal de TFA sólido branco (0,0156 g, 42,7% de rendimento). LCMS m/z = 850,6 (M+H+), tempo de retenção 1,770 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 7,99 (dd, J=4,9, 1,7 Hz, 1H), 7,65 (dd, J=7,7, 1,6 Hz, 1H), 6,86 (dd, J=7,6, 4,9 Hz, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,45 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,27 - 2,98 (m, 12H), 2,80 (td, J=11,1, 4,8 Hz, 1H), 2,60 (d, J=15,7 Hz, 1H), 2,25 - 1,95 (m, 10H), 1,90 - 1,74 (m, 3H), 1,73 (s, 3H), 1,68 - 1,42 (m, 10H), 1,40 (br. s., 1H), 1,38 - 1,29 (m, 2H), 1,29 - 1,23 (m, 1H), 1,15 (s, 3H), 1,12 (d, J=5,4 Hz, 1H), 1,08 (s, 3H), 0,99 - 0,84 (m, 9H).
[00358] Exemplo A30. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-((3-(trifluorometil)piridin-2-il)oxi)etil)ciclo- hex-3-eno-1-carboxílico.
[00359] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-cloro-3-(trifluorometil)piridina (0,029 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título foi isolado como um sal de TFA sólido branco (0,0020 g, 4,9% de rendimento). LCMS m/z = 884,6 (M+H+), tempo de retenção 1,810 min (Método de LCMS 20).
[00360] Exemplo A31. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-(pirazin-2-iloxi)etil)ciclo-hex-3-eno-1- carboxílico.
[00361] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-cloropirazina (0,018 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título foi isolado como um sal de TFA sólido branco (0,0102 g, 28,2% de rendimento). LCMS m/z = 817,6 (M+H+), tempo de retenção 1,592 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,16 - 8,08 (m, 2H), 8,05 (d, J=2,4 Hz, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=5,4 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (br. s., 1H), 4,44 (t, J=6,2 Hz, 2H), 3,27 - 3,13 (m, 7H), 3,13 - 3,05 (m, 3H), 3,05 - 2,95 (m, 2H), 2,86 - 2,74 (m, 1H), 2,60 (d, J=17,4 Hz, 1H), 2,25 - 1,96 (m, 10H), 1,89 - 1,81 (m, 1H), 1,81 - 1,74 (m, 2H), 1,73 (s, 4H), 1,65 - 1,42 (m, 10H), 1,40 (br. s., 1H), 1,38 - 1,24 (m, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,11 (br. s., 2H), 1,08 (s, 3H), 1,01 - 0,86 (m, 9H).
[00362] Exemplo A32. Preparação de ácido 4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)-1-(2-((4-metoxipiridin-2-il)oxi)etil)ciclo-hex-3-eno- 1-carboxílico.
[00363] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-bromo-4-metoxipiridina (0,030 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título era um de dois compostos isolados dessa reação. O material foi obtido como um sal de TFA sólido branco (0,0068 g, 18,3% de rendimento). LCMS m/z = 846,7 (M+H+), tempo de retenção 1,335 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 7,97 (d, J=6,6 Hz, 1H), 6,76 (dd, J=6,6, 2,2 Hz, 1H), 6,59 (d, J=2,0 Hz, 1H), 5,34 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,42 (t, J=6,7 Hz, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,27 - 3,04 (m, 10H), 3,01 (d, J=3,4 Hz, 2H), 2,86 - 2,76 (m, 1H), 2,67 - 2,57 (m, 1H), 2,27 - 2,15 (m, 3H), 2,15 - 1,96 (m, 8H), 1,85 (td, J=12,2, 3,3 Hz, 1H), 1,81 - 1,73 (m, 2H), 1,72 (s, 4H), 1,66 - 1,38 (m, 10H), 1,38 - 1,28 (m, 2H), 1,15 (s, 3H), 1,12 (br. s., 2H), 1,07 (s, 3H), 1,01 - 0,85 (m, 9H).
[00364] Exemplo A33. Preparação de ácido 1-(2-((4-bromopiridin-2- il)oxi)etil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00365] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2-bromo-4-metoxipiridina (0,030 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título era um de dois compostos isolados dessa reação. O material foi obtido como um sal de TFA sólido branco (0,0045 g, 12,2% de rendimento). LCMS m/z = 894,5 (M+H+), tempo de retenção 1,672 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,09 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,06 (d, J=2,2 Hz, 1H), 6,86 (dd, J=5,9, 2,2 Hz, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,21 - 5,15 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,72 (s, 1H), 4,16 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,27 - 2,98 (m, 12H), 2,84 - 2,74 (m, 1H), 2,60 (dd, J=18,7, 2,8 Hz, 1H), 2,24 - 1,96 (m, 11H), 1,87 - 1,74 (m, 3H), 1,73 (s, 4H), 1,68 - 1,55 (m, 4H), 1,55 - 1,38 (m, 7H), 1,38 - 1,25 (m, 2H), 1,15 (s, 3H), 1,14 - 1,10 (m, 1H), 1,08 (s, 3H), 1,01 - 0,96 (m, 3H), 0,96 - 0,91 (m, 3H), 0,90 (s, 3H).
[00366] Exemplo A34. Preparação de ácido 1-(2-((4-cloropiridin-2- il)oxi)etil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00367] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2,4-dicloropiridina (0,024 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título era um de dois compostos isolados dessa reação. O material foi obtido como um sal de TFA sólido ligeiramente amarelo (0,0143 g, 38,7% de rendimento). LCMS m/z = 850,6 (M+H+), tempo de retenção 1,637 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,11 (d, J=5,9 Hz, 1H), 6,91 (d, J=2,2 Hz, 1H), 6,83 (dd, J=5,9, 2,2 Hz, 1H), 5,33 (br. s., 1H), 5,18 (d, J=4,6 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,17 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,27 - 2,98 (m, 12H), 2,80 (td, J=11,2, 4,8 Hz, 1H), 2,60 (d, J=16,6 Hz, 1H), 2,26 - 1,97 (m, 11H), 1,89 - 1,74 (m, 3H), 1,72 (s, 4H), 1,67 - 1,38 (m, 11H), 1,38 - 1,27 (m, 2H), 1,15 (s, 3H), 1,10 (d, J=11,0 Hz, 1H), 1,07 (s, 3H), 0,99 - 0,86 (m, 9H).
[00368] Exemplo A35. Preparação de ácido 1-(2-((2-cloropiridin-4- il)oxi)etil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-eno-1-carboxílico.
[00369] O composto título foi preparado seguindo o procedimento descrito para a preparação de ácido 2-(2-(1-carboxi-4- ((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1- dioxidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadeca-hidro-1H- ciclopenta[a]crisen-9-il)ciclo-hex-3-en-1-il)etoxi)isonicotínico, exceto que no presente caso usou-se 2,4-dicloropiridina (0,024 g, 0,161 mmol) em vez de ácido 2-cloroisonicotínico e havia menos terc-butóxido de potássio, 1,0M em THF usado no presente caso (0,129 mL, 0,129 mmol). O composto título era um de dois compostos isolados dessa reação. O material foi obtido como um sal de TFA sólido ligeiramente amarelo (0,0168 g, 41,2% de rendimento). LCMS m/z = 850,6 (M+H+), tempo de retenção 1,809 min (Método de LCMS 20). 1H RMN (400MHz, mistura 1:1 de CDCl3 e CD3OD, CD3OD lock) δ 8,00 (d, J=5,6 Hz, 1H), 6,90 (dd, J=5,6, 1,7 Hz, 1H), 6,76 (d, J=1,7 Hz, 1H), 5,32 (br. s., 1H), 5,17 (d, J=4,9 Hz, 1H), 4,79 (s, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,41 - 4,33 (m, 2H), 3,28 - 2,98 (m, 12H), 2,80 (td, J=11,0, 4,6 Hz, 1H), 2,58 (d, J=15,4 Hz, 1H), 2,26 - 1,96 (m, 11H), 1,89 - 1,73 (m, 2H), 1,72 (s, 4H), 1,67 - 1,38 (m, 11H), 1,38 - 1,26 (m, 2H), 1,18 - 1,04 (m, 8H), 1,01 - 0,86 (m, 9H).
ENSAIO DE CULTURA DE CÉLULAS DE HIV
[00370] Células. As células MT-2 e 293T foram obtidas junto ao NIH AIDS Research and Reference Reagent Program. As linhagens celulares foram subcultivadas duas vezes por semana em meio RPMI 1640 (MT-2) ou DMEM (293T, HeLa) suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado pelo calor (FBS), 100 unidades/mL de penicilina G e 100 μg/mL de estreptomicina. O meio DMEM foi adicionalmente suplementado com tampão HEPES 10 mM, pH 7,55, L-glutamina 2 mM e 0,25 μg/mL de anfotericina B.
[00371] Vírus. O vírus NLRepRluc contém o marcador Renilla luciferase no lugar do gene nef viral. O plasmídeo pró-viral pNLRepRluc foi construído na Bristol-Myers Squibb, a partir de um clone pró-viral NL4-3 (subtipo B) que foi obtido junto ao NIH AIDS Research and Reference Reagent Program. O vírus parental recombinante do tipo selvagem (WT) (NLRepRlucP373S) foi derivado de NLRepRluc e contém a substituição adicional de P373 por serina em Gag (dentro do espaçador SP1), a variação 373 mais comum no subtipo B. Outros vírus recombinantes (A364V, V370A/ΔT371 e o “T332S triplo” (T332S/V362I + R41G de protease de HIV-1)) foram gerados por mutagênese sítio-dirigida do plasmídeo pNLRepRlucP373S para introduzir as substituições de aminoácidos em Gag e protease. O DNA viral recombinante foi então usado para gerar estoques virais por transfecção de células 293T (Kit Lipofectamine PLUS, Invitrogen). Os títulos dos estoques virais foram determinados usando um ponto final do ensaio de luciferase (Sistema de Ensaio de Dual-Luciferase® Reporter, Promega, Milwaukee, WI, EUA).
[00372] Ensaio de susceptibilidade a fármacos de ciclo múltiplo. Glóbulos de células MT-2 foram infectadas com vírus sítio-dirigidos NLRepRlucP373S Gag, onde os inóculos iniciais das cepas repórter foram normalizados usando sinais equivalentes de atividade do ponto final da luciferase. Essas misturas de células-vírus foram ressuspensas em meio, incubadas durante 1 hora a 37 °C/CO2 e adicionadas ao composto contendo placas de 96 poços a uma densidade celular final de 10.000 células por poço. Os compostos de teste foram diluídos em série 3 vezes em DMSO a 100% e testados a uma concentração final de DMSO de 1%. Após 4 a 5 dias de incubação a 37 °C/CO2, os rendimentos do vírus foram determinados por atividade de Renilla luciferase (Sistema de Ensaio de Dual-Luciferase® Reporter, Promega). A luminescência do ponto final foi detectada em um Wallac Trilux (PerkinElmer).
[00373] As concentrações inibitórias a 50% (EC50s) foram calculadas usando a forma exponencial da equação de efeito mediano onde a Inibição Percentual = 1/[1+ (EC50/conc. de fármaco)m], onde m é um parâmetro que reflete a inclinação da curva concentração-resposta. O antecedente foi tomado como o sinal residual observado após inibição à concentração mais alta de um inibidor de protease de controle, NFV (3 μM).
[00374] As concentrações inibitórias a 90% (EC90s) foram calculadas usando a forma exponencial da equação de efeito mediano onde ECF = [(F/(100-F)]1/H^EC50, onde H é um parâmetro que reflete a inclinação da curva concentração-resposta. O antecedente foi tomado como o sinal residual observado após inibição à concentração mais alta de um inibidor de protease de controle, NFV (3 μM). Ensaio de cultura de células de HIV
[00375] HIV-1 NL4-3 que expressa o gene Renilla luciferase foi convertido no vírus gag V370A/ΔT371 por mutagênese sítio-dirigida. A364V é um mutante sítio-dirigido.
[00376] O vírus T332s/V362I/Pr R41G (Nl4.3, B Clade) foi obtido da seguinte forma: A seleção para resistência do vírus da cepa NL4-4 do HIV-1 com o composto inibidor de maturação (MI) do HIV foi iniciada na EC50 para esse vírus (2 nM), com um aumento de duas vezes na concentração do composto inibidor de maturação aplicada em cada passagem. Na passagem 8, o vírus foi colhido e sequenciado. A população de vírus selecionada continha as substituições de aminoácidos de Gag T332S e V362I e a substituição de R41G na protease. Essas substituições foram subsequentemente introduzidas no NLRepRlucP373, um derivado do clone NL4-3 do HIV-1 modificado para conter P373S, a substituição polimórfica mais comum no subtipo B na posição 373 e o gene Renilla luciferase inserido no lócus nef.
[00377] O surgimento de substituições selecionadas no fundo genotípico do tipo wt é discutido aqui: partindo do vírus wt, a substituição R41G da protease do HIV foi detectada em uma das três seleções in vitro quanto à resistência ao composto MI acima, juntamente com Gag V362I e Gag T332S. R41G não é uma substituição de resistência PI primáriaie não está presente no banco de dados LANL (2010). Existe um único relatório de R41G associado à seleção in vitro para resistência a um PI investigacionalii. No entanto, nesse caso, o R41G não conferiu por si só resistência a PI. Uma alteração relacionada, R41K, é um polimorfo comum do subtipo B (27% do banco de dados LANL) e o R41K pode estar envolvido no surgimento da resistência da protease a um inibidor de protease investigacional.iii R41 está localizado em uma alça proximal ao sítio de ligação do substrato de protease do HIV-1 e esta alteração pode atuar alostericamente para facilitar o fechamento da cavidade do sítio ativo da protease sobre o substrato, permitindo assim a catálise. Pode ser que o R41G altere a dinâmica do movimento da alça e o posicionamento final da alça, o que poderia fazer com que o sítio ativo reconheça melhor as alterações selecionadas pelo composto MI primário (acima) (V362I/T332S). Uma análise das substituições V362I/T332S/Pr R41G e os seus efeitos na susceptibilidade dos compostos MI e crescimento viral, são descritos na Tabela 1 abaixo: Tabela 1: Sensibilidade antiviral de mutantes sítio-dirigidos
[00378] Foram construídos vírus que contêm combinações de T332S e R41G de protease do HIV, com e sem V362I. Os vírus com apenas uma única alteração são apenas ~2 vezes menos sensíveis ao composto MI, enquanto as combinações duplas dessas 3 substituições são de 5,7 a 9,3 vezes menos sensíveis. O vírus com a tripla alteração é muito menos sensível ao composto MI, sugerindo que a alteração R41G na protease pode ‘cruzar’ com alterações Gag para reduzir ainda mais a sensibilidade ao composto MI, uma descoberta inesperada. Assim, o vírus mutante sítio-dirigido T332S/V362I (SDM) apresenta uma alteração de apenas 5,7 vezes, mas a adição da alteração da protease R41G aumenta substancialmente a FC para 217.
[00379] i Johnson VA, Brun-Vezinet F, Clotet B, Gunthard HF, Kuritzkes DR, Pillay D, Schapiro JM, Richman DD. Update of the drug resistance mutations in HIV-1: December 2009. Top HIV Med. 2009 Dec; 17(5):138-45.
[00380] ii Dierynck, I, Van Markck, H, Van Ginderen, M, Jonckers, TH, Nalam, MN, Schiffer, CA, Raoof, A, Kraus, G, Picchio, G. TMC310911, a novel human immunodeficiency virus type 1 protease inhibitor, shows in vitro an improved resistance profile and higher genetic barrier to resistance compared
[00381] iii Stray KM, Callebaut C, Glass B, Tsai L, Xu L, Müller B, Krausslich HG, Cihlar T. Mutations in multiple domains of Gag drive the emergence of in vitro resistance to the phosphonate-containing HIV-1 protease inhibitor GS-8374. J Virol. 2013 87:454-63
[00382] Todos os três vírus recombinantes foram usados como descrito acima no ensaio de culturas de células de HIV para o vírus NL4-3. Os dados de EC50 WT, EC50 V370A/ΔT371, EC50 A364V e EC50 T332s/V362I/Pr R41G para os compostos são mostrados na Tabela 2.
[00383] Na Tabela 3 abaixo, dois compostos correspondendo a duas modalidades da invenção (Exemplos 25 e A3) foram testados e comparados com outros dois compostos (comparativos) fora do seu escopo. Cada composto foi avaliado quanto a valores de EC50 (WT) ou EC90 (ver as cepas identificadas abaixo, incluindo o mutante triplo T332S/V362I/pr R41G ):
[00384] Como pode ser deduzido a partir da Tabela 3, os dois compostos identificados de acordo com a invenção apresentaram melhores valores de EC90 versus os compostos comparativos, quando testados contra as cepas mutantes especificadas identificadas acima.
[00385] A descrição anterior é meramente ilustrativa e não deve ser entendida como limitativa do escopo ou dos princípios subjacentes da invenção de qualquer maneira. De fato, várias modificações da invenção, em adição às mostradas e descritas aqui, se tornarão evidentes para os versados na técnica a partir dos seguintes exemplos e da descrição anterior. Tais modificações também pretendem fazer parte do escopo das reivindicações anexas.

Claims (3)

1. Composto, caracterizadopelo fato do composto, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, ser selecionado a partir de:
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato do composto, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, é:
3. Composição, caracterizadapelo fato de que compreende uma quantidade de melhoria de HIV de um ou mais compostos como definidos na reivindicação 1 ou 2, juntamente com um ou mais carreadores, excipientes e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis
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