BR112017026097B1 - Processo para a preparação de um extrato de gentiana acaulis e/ou de gentiana septemfida - Google Patents

Abstract

extrato de genciana isento de gentiopicrosida. a presente invenção se refere a extratos de gentiana acaulis e/ou gentiana septemfida isentos de gentiopicrosida. além disso, refere-se a composições cosméticas compreendendo tais extratos de gentiana acaulis ou gentiana septemfida isentos de gentiopicrosida, bem como a misturas destes.

Description

[0001] A presente invenção se refere a extratos de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida isentos de gentiopicrosida. Além disso, refere-se a composições cosméticas compreendendo tais extratos de Gentiana acaulis ou Gentiana septemfida isentos de gentiopicrosida, bem como a misturas destes.

[0002] É cada vez mais importante para os seres humanos parecerem saudáveis e uma pele bonita com poucas rugas é sempre percebida como um sinal de boa saúde. Existem muitos ingredientes cosméticos que reivindicam efeitos cosméticos, mas alguns deles são difíceis de formular, pouco solúveis em preparações cosméticas, instáveis durante o armazenamento do produto cosmético final, ou apresentam sinais de toxicidade ou mesmo geram reações alérgicas quando usados em uma base regular.

[0003] No processo de envelhecimento, vários sinais aparecem na pele resultantes de uma modificação da estrutura da pele e da função cutânea.

[0004] Uma sinal característico do envelhecimento da pele, independentemente da etiologia, é a perda da elasticidade resultante da redução da produção de colágeno e da degradação do colágeno existente. Colágenos são proteínas estruturais fibrosas e um componente principal da matriz extracelular do tecido conjuntivo. O colágeno contribui para a força e a elasticidade da pele humana e a sua degradação causa alterações na aparência e/ou função da pele, como rugas, incluindo rugas superficiais finas e rugas profundas grosseiras, linhas, fissuras, caroços (protuberâncias), poros dilatados, marcas, descamação da pele, perda da elasticidade da pele, flacidez (incluindo o inchaço na área dos olhos e papada), perda de firmeza da pele, propriedades de barreira comprometidas, descoloração (incluindo olheiras), manchas, amarelecimento, pigmentação mosqueada, manchas senis, sardas, queratoses, diferenciação anormal, hiper-queratinização, elastose, telangiectasias e outras alterações histológicas no estrato córneo, derme, epiderme e sistema vascular da pele. Além disso, há uma contínua tendência, no estado da técnica, em proporcionar ingredientes para cuidados da pele derivados de produtos naturais para a aplicação na pele.

[0005] Assim, há uma necessidade constante por ingredientes naturais e extratos vegetais naturais que possuam benefícios cosméticos, particularmente em relação ao envelhecimento da pele, que sejam de fácil formulação e seguros para o usuário final.

[0006] Extratos de genciana, como, por exemplo, extratos de Gentiana acaulis foram divulgados no estado da técnica como tendo efeitos benéficos para a pele (documento FR2990350). Estes extratos de genciana, no entanto, contêm quantidades significativas de gentiopicrosida (N° de CAS 20831-76-9), um glucosídeo secoiridoide que foi relatado com tendo efeitos danosos para o DNA, efeitos mutagênicos e clastogênicos (K. Mustafayeva et al. /J. Nat. Prod. 2010, 73, 99-103). Devido a preocupações de segurança, os extratos de genciana, portanto, ainda não são encontrados em produtos cosméticos comerciais e existe uma necessidade constante por um extrato de genciana que seja isento de gentiopicrosida e ainda proporcione efeitos cosméticos benéficos.

[0007] Os presentes inventores encontraram agora uma maneira de proporcionar extratos de genciana isentos de gentiopicrosida que ainda apresentam excelentes benefícios cosméticos.

[0008] Assim, em uma primeira modalidade, a presente invenção se refere a um extrato de Gentiana acaulis e/ou de Gentiana septemfida, que está substancialmente isento de gentiopicrosida.

[0009] Em outra modalidade, a presente invenção se refere a um processo para a preparação de um extrato de Gentiana acaulis e/ou de Gentiana septemfida, que está substancialmente isento de gentiopicrosida, em que o dito processo compreende as etapas de: (i) Extração das partes aéreas (folha, flor, caule) de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida com uma mistura de água/solvente orgânico para obter, após a filtração das partes aéreas, um extrato compreendendo gentiopicrosida, seguida de (ii) Remoção do solvente orgânico para obter um extrato aquoso, seguida de (iii) Hidrólise da gentiopicrosida no extrato aquoso para gentiopicral.

[00010] A Gentiana acaulis (genciana sem tronco) é uma espécie de planta florida da família das Gentianaceae, nativa do centro e do sul da Europa, da Espanha ao leste dos Balcãs, crescendo especialmente nas regiões montanhosas, como os Alpes, os Cevennes e os Pireneus, em alturas de 800 - 3.000 metros.

[00011] É uma planta perene, que cresce a 2 cm de altura e 10 cm de largura ou mais. As folhas são perenes, com 2 - 3,5 cm de comprimento, em uma roseta basal, formando touceiras. As flores terminais em forma de trombeta são azuis com gargantas com manchas longitudinais verde-oliva. Elas crescem em um pedúnculo muito curto, com 3 - 6 cm de comprimento. A haste floral é, muitas vezes, sem folhas, ou tem 1 ou 2 pares de folhas. Ela gosta de sol pleno, é bastante resistente e floresce no final da primavera e no verão. Esta planta, como as outras do seu gênero, tem seu cultivo valorizado devido ao extraordinário azul intenso de suas flores.

[00012] A Gentiana septemfida (genciana com crista ou genciana de verão) é uma espécie de planta florida da família das Gentianaceae, nativa da região do Cáucaso e da Turquia. É uma planta herbácea perene de baixo crescimento, que cresce até 15 - 20 cm de altura por 30 cm de largura, tendo até oito flores em forma de trombeta de cor azul brilhante no verão, com interiores listrados. Ela necessita de um solo rico, úmido e de sol pleno.

[00013] O termo "substancialmente isento de", conforme usado no presente documento, refere-se a concentrações inferiores a 0,5 %. De preferência, a concentração de gentiopicrosida é inferior a 0,1 %, mais de preferência, inferior a 0,01 %, com a máxima preferência inferior a 0,001 %. Em particular, o extrato não contém mais gentiopicrosida detectável (todos os valores de % dados para a concentração de gentiopicrosida no extrato são % de área medidos por UPLC (coluna: coluna de fase reversa C-18, eluente: água/acetonitrila) e detecção por UV a 254 nm).

[00014] Em todas as modalidades da presente invenção, os extratos são, de preferência, também substancialmente isentos de gentiopicral, que é removido do extrato aquoso obtido em (iii) em uma etapa de extração subsequente (iv).

[00015] Em todas as modalidades de acordo com a presente invenção, a concentração de gentiopicral no estrato de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida, de acordo com a presente invenção é, de preferência, inferior a 1 %. Mais de preferência, a concentração de gentiopicral é inferior a 0,5 %, com a máxima preferência inferior a 0,1 %, tal como, em particular, inferior a 0,01 %. A extração é realizada até que o extrato não contenha mais gentiopicral detectável. (Todos os % dados para a concentração de gentiopicral no extrato são % por área, medidos por UPLC (coluna: coluna de fase reversa C-18, eluente: água/acetonitrila) e detecção por UV a 254 nm).

[00016] De preferência, o solvente orgânico usado para a extração das partes aéreas é selecionado do grupo que consiste em C1-C6 álcoois, mais de preferência, a partir de metanol, etanol e isopropanol, bem como de misturas destes. Mais de preferência, o solvente orgânico é o etanol.

[00017] Em todas as modalidades da presente invenção, a quantidade de água na mistura água/solvente orgânico é, de preferência, selecionada na faixa de 10 a 50 % em peso, mais de preferência, na faixa de 30 a 50 % em peso, tal como, com a máxima preferência na faixa de 35 a 45 % em peso com base no peso total da mistura de solvente.

[00018] A quantidade da mistura água/solvente orgânico usada para a extração das partes aéreas é, de preferência, selecionada na faixa de 1 a 50 % em peso, de preferência, na faixa de 5 a 30 % em peso, com a máxima preferência na faixa de 5 a 15 % em peso, tal como na faixa de 10 a 12 % em peso, com base no peso das partes aéreas.

[00019] Em uma modalidade preferida, a mistura de água/solvente orgânico contém uma quantidade eficaz de carvão ativo, de preferência, em uma quantidade na faixa de 5-20 % (p/p) com base nas partes secas da planta usadas, mais de preferência, em uma quantidade na faixa de 10-25 % (p/p).

[00020] Em uma modalidade preferida, as partes aéreas são picadas antes da extração.

[00021] No caso de uso de Gentiana acaulis e Gentiana septemfida (para obter um extrato de Gentiana acaulis e de Gentiana septemfida), as partes secas da planta são misturadas antes da extração. Alternativamente, os respectivos extratos podem ser preparados individualmente e misturados após a preparação, para obtenção do extrato composto de Gentiana acaulis e Gentiana septemfida.

[00022] De preferência, a extração das partes aéreas é realizada a uma temperatura selecionada na faixa de 30-60 °C, de preferência, na faixa de 45-55 °C, mais de preferência, a cerca de 50 °C por um período de 1 a 5 h, de preferência, de 1,5 a 3 h. Com a máxima preferência, a extração é realizada durante por 2 h a 50 °C.

[00023] A hidrólise de gentiopicrosida para gentiopicral no extrato aquoso é realizada, de preferência, com uma -glicosidase (EC 3.2.1.21), mais de preferência, com uma -glicosidase ligada a uma fase sólida tal como a uma resina epóxi-ativada, em particular uma resina epóxi- ativada de metacrílico/estireno. Tais resinas, por exemplo, estão disponíveis comercialmente com o nome comercial de Purolite. De preferência, a hidrólise é realizada até que a concentração de gentiopicrosida esteja nos limites delineados acima, de preferência, no entanto, até que não haja mais gentiopicrosida detectável por UPLC.

[00024] A extração de gentiopicral, de preferência, é realizada usando um solvente orgânico. Solventes orgânicos adequados para a extração de gentiopicral podem ser facilmente selecionados por um técnico no assunto e englobam éteres como o éter dietílico ou éter terc- butílico, cetonas como acetona, solventes de éster como acetato de etila, solventes halogenados como clorofórmio e diclorometano, bem como solventes de hidrocarbonetos aromáticos, tais como benzeno e tolueno. Um solvente particularmente adequado para a remoção de gentiopicral é, no entanto, acetato de etila, visto que este tem a vantagem de remover seletivamente o gentiopicral, sem a remoção dos outros ingredientes ativos (em particular flavonoides) necessários para alcançar o efeito cosmético desejado.

[00025] A remoção (evaporação) dos solventes pode ser realizada por métodos padrão do estado da técnica, por exemplo, por evaporação em um dispositivo Rotavap (evaporador rotativo) a 50 °C e 50 mbar de atmosfera.

[00026] Em uma modalidade preferida, os processos de acordo com a presente invenção contêm ainda uma etapa adicional (ii-1) posterior à etapa (ii), que consiste no tratamento do extrato aquoso concentrado obtido em (ii) com etanol puro (ou seja, ETOH abs.) para precipitar quaisquer açúcares e/ou proteínas, seguida de filtração e evaporação do etanol. De preferência, a precipitação ocorre por 1 h a 36 h, mais de preferência, por 12 h a 30 h, com a máxima preferência por 18 a 28 h. A quantidade de etanol nesta etapa é, de preferência, cerca de 2 a 8 vezes a quantidade do extrato aquoso, de preferência, cerca de 4 a 6 vezes. A quantidade de etanol usado para a precipitação, de preferência, é pelo menos 2 vezes a quantidade do extrato aquoso, mais de preferência, a quantidade é selecionada entre 4 a 6 vezes a quantidade do extrato aquoso.

[00027] Em uma modalidade preferida, o(s) extrato(s) de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida isento(s) de gentiopicrosida de acordo com a presente invenção é(são) padronizado(s) com relação ao teor de flavonoides calculado como isoorientina. Os principais compostos químicos no extrato consistem em: iridoides e secoiridoides: swertiamarina, swerosida, gelidosida, triflorosida e flavonoides: isoorientina, isovitexina, isoorientin-4'-O- glucosídeo e isossaponarina.

[00028] Em uma modalidade particularmente vantajosa, o teor de flavonoide no extrato de acordo com a presente invenção está na faixa de 1 a 6 % em peso, de preferência, na faixa de 2 a 5 % em peso, com base no extrato seco.

[00029] O(s) extrato(s) de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida isento(s) de gentiopicrosida de acordo com a presente invenção pode(m) ser usado(s) como extrato aquoso ou na forma seca (em pó).

[00030] Em uma modalidade particularmente preferida, o extrato de Gentiana isento de gentiopicrosida de acordo com a presente invenção é um extrato de uma mistura das partes aéreas de Gentiana acaulis e Gentiana septemfida. Mais de preferência, a mistura consiste em uma proporção de Gentiana acaulis para Gentiana septemfida compreendida entre 5/95 massa/massa e 50/50 massa/massa, ainda mais de preferência, a proporção de Gentiana acaulis para Gentiana septemfida está compreendida entre 10/90 massa/massa e 30/70 massa/massa, com a máxima preferência a proporção das partes aéreas de Gentiana acaulis para Gentiana septemfida está compreendida entre 15/85 massa/massa e 25/75 massa/massa.

[00031] Surpreendentemente, foi encontrado que o uso do extrato de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida isento de gentiopicrosida, de acordo com a presente invenção, apresenta ainda os efeitos cosméticos benéficos, mais particularmente com relação aos efeitos antienvelhecimento.

[00032] Assim, a invenção também se refere a composições cosméticas compreendendo tal(is) extrato(s) de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida isento(s) de gentiopicrosida. Além disso, a invenção se refere ao uso cosmético de uma composição compreendendo tal(is) extrato(s) de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida isento(s) de gentiopicrosida. Ela também se refere a um método de tratamento cosmético, o dito método compreendendo a aplicação tópica na pele de um indivíduo que busca tal tratamento, de uma composição cosmética compreendendo tal(is) extrato(s) de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida isento(s) de gentiopicrosida.

[00033] O termo "composição cosmética" conforme usado no presente documento se refere a qualquer substância ou preparação destinada a ser colocada em contato com qualquer parte das superfícies externas do corpo humano (isto é, a epiderme, sistema capilar, unhas, lábios e órgãos genitais externos) ou com os dentes e as membranas mucosas da cavidade oral, com o objetivo exclusivo ou principal de limpar das mesmas, perfumá-las, alterar sua aparência, protegê-las, mantê-las em bom estado ou corrigir os odores corporais, exceto se essa limpeza, perfume, proteção, alteração, manutenção, ou correção for integralmente para fins de tratamento ou prevenção de doença.

[00034] De preferência, em todas as modalidades da presente invenção, a composição cosmética de acordo com a presente invenção compreende entre 0,001 e 20 % em peso de um extrato de Gentiana acaulis isento de gentiopicrosida, um extrato de Gentiana septemfida isento de gentiopicrosida, ou mistura destes (com base na matéria seca). Mais de preferência, a composição cosmética compreende entre 0,01 e 10 % em peso, ainda mais de preferência, compreende entre 0,01 e 5 % em peso de extrato de Gentiana acaulis, extrato de Gentiana septemfida, ou uma mistura destes.

[00035] De acordo com a presente invenção, o extrato de Gentiana acaulis, extrato de Gentiana septemfida, ou misturas destes podem ser usados como tal ou em uma forma encapsulada, por exemplo, em uma forma lipossomal. De preferência, os lipossomas são formados com lecitinas, com ou sem adição de esteróis ou fitoesteróis. O encapsulamento dos ingredientes ativos pode ser feito sozinho ou em conjunto com outros ingredientes ativos. Outras modalidades incluem cápsulas sólidas ou semi-sólidas ou com o objetivo de proteger o extrato de Gentiana acaulis, extrato de Gentiana septemfida, ou a mistura destes de degradação ou para administração controlada. Tecnologias de encapsulamento adequadas são descritas, por exemplo, nos documentos WO 0180823, WO 9903450, WO 9317784 ou no Fragrance Journal (2001), 29(2), 83-90.

[00036] Uma composição cosmética preferida de acordo com a presente invenção é uma composição tópica, mais de preferência, compreendendo adicionalmente um veículo cosmético convencional, ainda mais de preferência, é uma preparação para cuidado da pele (rosto e corpo), uma preparação decorativa, uma preparação para proteção suave, ou uma preparação funcional.

[00037] Exemplos de preparações para cuidado da pele são, em particular, cremes faciais, óleos corporais, loções corporais, géis corporais, cremes de tratamento, pomadas para proteção da pele, preparações para barbear tal como espumas ou géis de barbear, géis hidratantes, sprays hidratantes, sprays corporais revitalizantes, géis contra celulite, hidratantes faciais e/ou corporais, loções de limpeza faciais e/ou corporais e máscaras faciais. Os produtos mais preferidos são produtos de cuidados para o rosto.

[00038] Composições cosméticas tópicas preferidas de acordo com a invenção são preparações de cuidados da pele ou preparações funcionais.

[00039] Exemplos de preparações decorativas são, em particular, batons, sombras, rímel e máscaras para cílios, formulações para maquiagem secas e úmidas, rouges, pós e/ou loções bronzeadoras.

[00040] Exemplos de preparações funcionais são composições cosméticas contendo ingredientes ativos adicionais, tais como hormônios, vitaminas, extratos de frutas e/ou vegetais, ingredientes antienvelhecimento e/ou ingredientes antimicrobianos (antifúngicos e antibacterianos), sem limitação.

[00041] Uma composição cosmética para uso de acordo com a invenção pode ser na forma de um líquido, loção, uma loção espessa, um gel, um creme, um leite, uma pomada, uma pasta, um pó, uma maquiagem, ou um bastão sólido, e pode ser opcionalmente empacotada como um aerossol, e pode ser proporcionada na forma de uma mousse aerossol, uma espuma ou um spray de espuma, sprays, bastões, um gel, um emplastro, um pó, um limpador, um sabão ou aerossóis ou panos de limpeza. Composições tópicas preferidas compreendem um creme, uma emulsão, um gel, uma pomada, uma loção, uma tintura, um spray, uma mousse, uma composição de limpeza ou espuma.

[00042] Em outra modalidade, a composição cosmética para uso de acordo com a presente invenção é caracterizada pelo fato de compreender adicionalmente pelo menos um agente de controle UV, e/ou um hidratante, e/ou um agente antienvelhecimento, e/ou um agente de tonalização da pele, e um veículo cosmético convencional.

[00043] Veículos cosméticos convencionais compreendem excipientes ou diluentes usados convencionalmente em composições tópicas. As quantidades necessárias dos adjuvantes e aditivos cosméticos e dermatológicos podem, com base no produto desejado, ser facilmente determinadas por um técnico no assunto.

[00044] Com relação ao tipo de composição cosmética tópica e à preparação das preparações cosméticas tópicas, bem como com relação a aditivos adicionais adequados, pode- se referir à literatura pertinente, por exemplo, à Novak G.A., Die kosmetischen Prâparate - Band 2, Die kosmetischen Prâparate - Rezeptur, Rohstoffe, wissenschaftliche Grundlagen (Verlag für Chem. Industrie H. Ziolkowski KG, Augsburg).

[00045] De preferência, as composições cosméticas tópicas usadas na presente invenção estão na forma de uma suspensão ou dispersão em solventes ou substâncias graxas ou, alternativamente, na forma de uma emulsão ou microemulsão (em particular do tipo O/A ou A/O, do tipo O/A/O ou A/O/A), emulsões PET, emulsões múltiplas, emulsões de Pickering, hidrogéis, géis alcoólicos, lipogéis, soluções de fase única ou multifásicas, ou uma dispersão vesicular e outras composições habituais, que também podem ser aplicadas por canetas, como máscaras ou como sprays. As emulsões também podem conter tensoativos aniônicos, não iônicos, catiônicos ou anfotéricos.

[00046] As composições cosméticas tópicas usadas na presente invenção também podem conter adjuvantes e aditivos cosméticos habituais, tais como conservantes/antioxidantes, substâncias graxas/óleos, água, solventes orgânicos, silicones, espessantes, emolientes, emulsionantes, protetores solares, agentes antiespumantes, hidratantes, fragrâncias, agentes tensoativos, cargas, agentes sequestrantes, polímeros catiônicos, aniônicos, não iônicos ou anfotéricos ou misturas destes, propelentes, agentes acidificantes ou basificantes, tinturas, corantes, pigmentos ou nanopigmentos, por exemplo, aqueles adequados para proporcionar um efeito fotoprotetor pelo bloqueio físico da radiação ultravioleta, ou quaisquer outros ingredientes habitualmente formulados em composições cosméticas tópicas. As quantidades necessárias de adjuvantes e aditivos cosméticos e dermatológicos podem, com base no produto desejado, ser facilmente escolhidas por um técnico no assunto e serão ilustradas nos exemplos, sem se limitar a esses. Os adjuvantes e aditivos cosméticos habituais, tais como emulsionantes, espessantes, ingredientes tensoativos e formadores de película podem apresentar efeito sinérgico, que pode ser determinado por um técnico no assunto com testes normais, ou com as considerações habituais com relação à formulação de composição cosmética tópica.

[00047] Tipicamente, composições cosméticas tópicas também contêm ingredientes tensoativos como emulsionantes, solubilizantes e semelhantes. Um emulsionante permite que dois ou mais componentes imiscíveis sejam combinados de forma homogênea. Além disso, o emulsionante atua para estabilizar a composição. Solubilizantes que podem ser usados na presente invenção incluem, sem limitação, PEG/PPG-18/18 Dimeticona, óleo de mamona hidrogenado de PEG-40, estearato de PEG-20, estearato de glicerila de PEG- 30 e cocoato de glicerila de PEG-7. Emulsionantes que podem ser usados na presente invenção de modo a formar emulsões/microemulsões O/A, A/O, O/A/O ou A/O/A incluem oleato de sorbitano, sesquioleato de sorbitano, isoestearato de sorbitano, trioleato de sorbitano, poligliceril-3-di-isoestearato, ésteres de poliglicerol de ácido oleico/isoesteárico, poligliceril-6-hexarricinolato, poligliceril-4-oleato, poligliceril-4-oleato/cocoato de propilenoglicol de PEG-8, DEA oleamida, miristato de TEA, estearato de TEA, estearato de magnésio, estearato de sódio, laurato de potássio, ricinoleato de potássio, cocoato de sódio, talowato de sódio, castorato de potássio, oleato de sódio e misturas destes. Além disso, um ou mais polímeros sintéticos podem ser usados como um emulsionante. Por exemplo, copolímero de PVP eicoseno, políemro de acrilatos/C10-30 acrilato de alquila reticulado, copolímero de acrilatos/estearato-20 metacrilato, copolímero de PEG- 22/dodecilglicol, copolímero de PEG-45/docecilglicol e misturas destes. Os emulsionantes preferidos são copolímero de PVP Eicoseno, polímero de acrilatos/C10-30 acrilato de alquila reticulado, isoestearato de sorbitano de PEG-20, isostearato de sorbitano e misturas destes. O um ou mais emulsionantes estão presentes em uma quantidade total de cerca de 0,01 % em peso a cerca de 20 % em peso, com base no peso total da composição cosmética tópica para uso na presente invenção. de preferência, são usados cerca de 0,1 % em peso a cerca de 10 % em peso de emulsionantes.

[00048] A fase lipídica das composições cosméticas tópicas pode ser vantajosamente escolhida dentre: óleos minerais e ceras minerais; óleos, tais como triglicerídeos de ácido caprínico ou ácido caprílico e óleo de mamona; óleos ou ceras e outros óleos naturais ou sintéticos, em uma modalidade preferida ésteres de ácidos graxos com álcoois, por exemplo, isopropanol, propilenoglicol, glicerina ou ésteres de álcoois graxos com ácidos carboxílicos ou ácidos graxos; alquilbenzoatos; e/ou óleos de silicone, tal como dimetilpolissiloxano, dietilpolissiloxano, difenilpolissiloxano, ciclometiconas e misturas destes.

[00049] Substâncias graxas exemplares que podem ser incorporadas na fase oleosa da emulsão, microemulsão, óleo gel, hidrodispersão ou lipodispersão da composição cosmética tópica da presente invenção são vantajosamente escolhidas dentre ésteres de ácidos alquil-carboxílicos saturados e/ou insaturados, lineares ou ramificados com 3 a 30 átomos de carbono, e/ou álcoois saturados e/ou insaturados, lineares e/ou ramificados com 3 a 30 átomos de carbono, bem como ésteres de ácidos carboxílicos aromáticos e de álcoois saturados e/ou insaturados, lineares ou ramificados com 3 a 30 de átomos de carbono. Tais ésteres podem ser vantajosamente selecionados a partir octilpalmitato, octilcocoato, octilisoestearato, octildodecilmiristato, cetearilisononanoato, isopropilmiristato, isopropilpalmitato, isopropilestearato, isopropiloleato, n-butilestearato, n-hexilaureato, n- deciloleato, isooctilestearato, isononilestearato, isononilisononanoato, 2-etil-hexilpalmitato, 2-etil- hexilaurato, 2-hexildecilestearato, 2- octildodecilpalmitato, estearil-heptanoato, oleiloleato, oleilerucato, eruciloleato, erucilerucato, tridecilestearato, trideciltrimelitato, bem como misturas sintéticas, semi-sintéticas ou naturais de tais ésteres, por exemplo, óleo de jojoba.

[00050] Outros componentes graxos adequados para uso nas composições cosméticas tópicas para uso de acordo com a presente invenção incluem óleos polares, tais como lecitinas e triglicerídeos de ácidos graxos, a saber, ésteres de triglicerol de ácidos carboxílicos saturados e/ou insaturados, lineares ou ramificados com 8 a 24 átomos de carbono, de preferência, com 12 a 18 átomos de carbono, ao passo que os triglicerídeos de ácidos graxos são preferencialmente escolhidos dentre óleos sintéticos, semi- sintéticos ou naturais (por exemplo, cocoglicerídeo, azeite, óleo de girassol, óleo de soja, óleo de amendoim, óleo de colza, óleo de amêndoa doce, óleo de palma, óleo de coco, óleo de mamona, óleo de mamona hidrogenado, óleo de trigo, óleo de semente de uva, óleo de macadâmia e outros); óleos apolares, tais como hidrocarbonetos lineares e/ou ramificados e ceras, por exemplo, óleos minerais, vaselina; parafinas, esqualano e esqualeno, poliolefinas, poli- isobutenos hidrogenados e iso-hexadecanos, poliolefinas preferidas sendo os polidecenos; éteres dialquílicos como o dicrapilil-éter; óleos de silicone lineares ou cíclicos, de preferência, como as ciclometiconas (octametil- ciclotetrassiloxano; cetildimeticona, hexametilciclotrissiloxano, polidimetilssiloxano, poli(metilfenilssiloxano) e misturas destes.

[00051] Outros componentes graxos que podem ser vantajosamente incorporados em composições cosméticas tópicas para uso de acordo com a presente invenção são isoeicosano; neopentilglicoldi-heptanoato; propilenoglicol dicaprilato/dicaprato; diglicerilsuccinato caprílico/cáprico; caprilato/caprato de butilenoglicol; C12- 13-alquil-lactato; di-C12-13-alquiltartarato; tri- isoestearina; hexacaprilato/hexacaprato de dipentaeritritila; monoisoestearato de propilenoglicol; tricaprilina; dimetilisossorbida. Especialmente útil é o uso de misturas de C12-15-alquilbenzoato e 2- etilhexilisoestearato, misturas de C12-15-alquilbenzoato e isotridecilisononanoato, bem como misturas de C12-15- alquilbenzoato, 2-etilhexilisostearato e isotridecilisononanoato.

[00052] A fase oleosa das composições cosméticas tópicas para uso de acordo com a presente invenção também pode conter ceras naturais animais ou vegetais, como cera de abelha, cera da china, cera de zangão e outras ceras de insetos, bem como manteiga de karité e manteiga de cacau.

[00053] Um agente hidratante pode ser incorporado em uma composição cosmética tópica usada de acordo com a presente invenção para manter a hidratação ou re-hidratar a pele. Os hidratantes que impedem a evaporação da água da pele, proporcionando um revestimento protetor, são chamados de emolientes. Além disso, um emoliente proporciona um efeito de amaciamento ou efeito calmante sobre a superfície da pele e geralmente é considerado seguro para uso tópico. Emolientes preferidos incluem óleos minerais, lanolina, vaselina, trigliceraldeídos cáprico/caprílico, colesterol, silicones tais como dimeticona, ciclometicona, óleo de amêndoa, óleo de jojoba, óleo de abacate, óleo de mamona, óleo de gergelim, óleo de girassol, óleo de coco e óleo de semente de uva, manteiga de cacau, azeite, extratos de aloe, ácidos graxos tais como ácido esteárico e ácido oleico, álcoois graxos tais como álcool cetílico e hexadecílico (ENJAY), adipato de di-isopropila, ésteres de hidroxibenzoato, ésteres de ácido benzoico de C9-15-álcoois, iso-nonanoato de isononila, éteres tais como butil-éteres de polioxipropileno e cetil-éteres de polioxipropileno, e benzoatos de C12-15-alquila e misturas destes. Os emolientes mais preferidos são ésteres de hidroxibenzoato, aloe vera, benzoatos de C12-15-alquila e misturas destes. Um emoliente está presente em uma quantidade de cerca de 1 % em peso a cerca de 20 % em peso do peso total da composição cosmética tópica. A quantidade preferida de emoliente é de cerca de 2 % em peso a cerca de 15 % em peso e com a máxima preferência de cerca de 4 % em peso a cerca de 10 % em peso.

[00054] Os hidratantes que ligam a água, desta forma retendo-a na superfície da pele, são chamados umectantes. Umectantes adequados podem ser incorporados em uma composição cosmética tópica da presente invenção, tais como glicerina, polipropileno glicol, polietileno glicol, ácido lático, pirrolidona, ácido carboxílico, ureia, fosfolipídeos, colágeno, elastina, ceramidas, lecitina, sorbitol, PEG-4 e misturas destes. Hidratantes adicionais adequados são hidratantes poliméricos da família dos polissacarídeos solúveis em água e/ou incháveis em água e/ou que formam géis com água, tais como o ácido hialurônico, quitosana e/ou polissacarídeo rico em fucose que está disponível comercialmente, por exemplo, como Fucogel®1000 (N° de CAS 178463-23-5) fornecido pela SOLABIA S. Um ou mais umectantes estão opcionalmente presentes em uma quantidade de cerca de 0,5 % em peso a cerca de 8 % em peso em uma composição cosmética tópica da presente invenção, de preferência, de cerca de 1 % em peso a cerca de 5 % em peso.

[00055] A fase aquosa das composições cosméticas tópicas preferidas para uso na presente invenção pode conter aditivos cosméticos habituais, tais como álcoois, especialmente álcoois menores, de preferência, etanol e/ou isopropanol, diois ou poliois menores e seus éteres, de preferência, propilenoglicol, glicerina, etilenoglicol, etilenoglicol monoetil ou monobutil éter, propilenoglicol monometil ou monoetil ou monobutil éter, dietilenoglicol monometil ou monoetil éter e produtos análogos, polímeros, estabilizadores de espuma; eletrólitos e especialmente um ou mais espessantes. No entanto, de preferência, as composições cosméticas tópicas para uso na presente invenção são isentas de etanol, mais de preferência, elas são isentas de álcoois e com a máxima preferência elas são isentas de solventes orgânicos, uma vez que esses compostos podem causar irritação na pele.

[00056] Espessantes que podem ser usados em composições cosméticas tópicas para uso na presente invenção para ajudar a criar a consistência de um produto adequado incluem carbômero, dióxido de silício, silicatos de magnésio e/ou de alumínio, cera de abelha, ácido esteárico, polissacarídeos de álcool estearílico e seus derivados, tais como goma xantana, hidroxipropil celulose, poliacrilamidas, polímeros de acrilato reticulados, de preferência, um carbômero, como carbopol do tipo 980, 981, 1382, 2984, 5984 sozinho ou misturas destes.

[00057] Agentes neutralizantes adequados que podem ser incluídos na composição cosmética tópica da presente invenção para neutralizar componentes, tais como, por exemplo, um emulsionante ou um espumante/estabilizador de espuma incluem, sem limitação, hidróxidos alcalinos tais como hidróxido de sódio e potássio; bases orgânicas tais como dietanolamina (DEA), trietanolamina (TEA), aminometil propanol e misturas destes; aminoácidos como a arginina e lisina e qualquer combinação de qualquer um dos compostos anteriores. O agente neutralizante pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0,01 % em peso a cerca de 8 % em peso na composição cosmética tópica da presente invenção, de preferência, de cerca de 1 % em peso a cerca de 5 % em peso.

[00058] A adição de eletrólitos na composição cosmética tópica para uso de acordo com a presente invenção pode ser necessária para alterar o comportamento de um emulsionante hidrofóbico. Assim, as emulsões/microemulsões para uso de acordo com a presente invenção podem conter eletrólitos, de preferência, de um ou de vários sais, incluindo ânions tais como cloretos, sulfatos, carbonatos, aluminato e borato, sem limitação. Outros eletrólitos adequados podem ser na base de ânions orgânicos, tais como, sem limitação, lactato, acetato, benzoato, propionato, tartarato e citrato. De preferência, como cátions são selecionados amônio, alquilamônio, metais alcalinos ou alcalino-terrosos, íons magnésio, ferro ou zinco. Sais especialmente preferidos são cloreto de potássio e cloreto de sódio, sulfato de magnésio, sulfato de zinco e misturas destes. Os eletrólitos podem estar presentes em uma quantidade de cerca de 0,01 % em peso a cerca de 8 % em peso na composição cosmética tópica da presente invenção.

[00059] Também é um objeto da presente invenção proporcionar uma composição cosmética compreendendo um extrato de Gentiana acaulis, extrato de Gentiana septemfida, ou mistura destes e um veículo cosmético convencional. O veículo cosmético preferido para a presente invenção é glicerina.

[00060] A presente invenção também se refere ao uso de uma composição cosmética conforme descrita acima, para aplicação cosmética na pele de um ser humano. A aplicação cosmética, de preferência, é tópica e usada por aplicação pelo menos uma vez ao dia, por exemplo, duas ou três vezes ao dia sobre a pele, de preferência, no rosto.

[00061] A aplicação cosmética de acordo com a presente invenção é selecionada dentre o combate ao envelhecimento da pele e, em particular, o aparecimento de rugas, incluindo a inibição da inflamação das células da pele, retardo do envelhecimento, estimulação da síntese de proteínas pelas células da derme e epiderme, proteção das células da pele contra o estresse oxidativo, estimulação da síntese de glicosaminoglicanos por células da derme, inibição da colagenase e/ou elastase nas células da pele. Mais particularmente, ela é selecionada dentre a indução da síntese de colágeno IV, o aumento na produção de ácido hialurônico, diminuição na caspase-3, indução de citocinas pró-inflamatórias.

[00062] Além disso, a presente invenção se refere a um método de tratamento cosmético, o dito método compreendendo a aplicação tópica na pele de um indivíduo que busca tal tratamento cosmético, de uma composição compreendendo um extrato de Gentiana acaulis isento de gentiopicrosida, um extrato de Gentiana septemfida isento de gentiopicrosida, ou uma mistura destes, tal como definido em todas as modalidades anteriores da invenção.

[00063] O termo "uma quantidade eficaz" se refere a uma quantidade necessária para obter um efeito fisiológico. O efeito fisiológico pode ser alcançado através da aplicação de uma dose ou por repetidas aplicações. A dosagem administrada pode, evidentemente, variar dependendo de fatores conhecidos, tais como a frequência de tratamento; e o efeito desejado e pode ser ajustada por um técnico no assunto.

[00064] A presente invenção também se refere a um método conforme descrito acima, em que, desde cerca de 0,2 μg a cerca de 200 μg de um extrato de Gentiana acaulis isento de gentiopicrosida, um extrato de Gentiana septemfida isento de gentiopicrosida, ou uma mistura destes, tal como definido em todas as modalidades anteriores da invenção, é aplicado por centímetro quadrado de pele por dia.

[00065] A utilidade dos agentes na luta contra o envelhecimento da pele pode ser determinada por métodos conhecidos no estado da técnica.

[00066] A invenção será agora adicionalmente ilustrada pelos Exemplos seguintes, sem ser limitada pelos mesmos. EXEMPLOS Exemplo 1: Composição de cuidado da pele

Exemplo 2: Preparação de um extrato de genciana isento de gentiopicrosida/gentiopicral: a-Preparação da enzima ligada à fase sólida (etapa conhecida da literatura)

[00067] A enzima -glicosidase (EC 3.2.1.21) (100 mg) foi incubada com 15,4 mg de glicose dissolvidos em 82 ml de solução tampão (pH = 7,75) à temperatura ambiente por 1 hora.

[00068] A resina Purolite ECR 8214F é misturada separadamente com 30 ml de solução tampão (pH = 7,75) por 5 minutos e, em seguida, filtrada (etapa de lavagem).

[00069] A resina filtrada foi então adicionada à solução tampão contendo a enzima a 25 °C e misturada suavemente por 24 horas. Após 24 horas, a solução foi filtrada e a resina resultante foi lavada com 60 ml de solução tampão (pH = 7,75) e duas vezes com 60 ml de água deionizada. A resina foi então misturada em 80 ml de solução tampão (pH = 7,75) e foi adicionado 1 ml de BSA (Bis(trimetilsilil)acetamida). A suspensão foi misturada suavemente por 24 horas. Após 24 horas, a resina foi filtrada e lavada duas vezes com 100 ml de água deionizada.

[00070] A solução tampão é uma mistura de 14,4 ml de solução de KH2PO4 (68 g/500 ml) e 86,6 ml de solução de K2HPO4 (87,1 g/500 ml). b- Preparação de um extrato de genciana isento de gentiopicrosida: transformação da gentiopicrosida em gentiopicral no extrato de genciana. b-1) Um extrato de 50 g das partes aéreas (folha, flor, caule) de plantas alpinas raras das espécies de Gentian (Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida) foi preparado conforme a seguir: as plantas secas picadas foram extraídas duas vezes com 10 vezes (p/p) de etanol 60 % (com carvão ativo) por 2 horas a 50 °C. O extrato foi então filtrado e concentrado em um dispositivo Rotavapor (evaporador rotativo) a 50 °C e 50 mbar de atmosfera para obter uma solução aquosa concentrada. Etanol puro (5 vezes a quantidade em peso da solução aquosa) foi adicionado a este concentrado, de modo a precipitar açúcares e proteínas e, então, após filtração, o etanol foi removido novamente em um dispositivo Rotavapor, resultando em cerca de 54 g de um extrato aquoso compreendendo cerca de 36 % (% por área) de gentiopicrosida (determinado por UPLC: coluna de fase reversa C18, eluente: água/acetonitrila, detecção: 254 nm), que foi usado na etapa b-2) subsequente: b-2) A solução aquosa obtida conforme descrito em b-1) foi colocada em um balão a 28 °C (banho) e a enzima (5 g) preparada na etapa a) (pó branco) foi adicionada à solução de extrato. A reação foi realizada durante alguns dias e foi seguida por UPLC. O percentual de transformação da gentiopicrosida foi acompanhado cuidadosamente. Se necessário, uma quantidade suplementar de enzima ligada era adicionada. Quando a gentiopicrosida foi completamente transformada em gentiopicral, a reação foi encerrada por filtração e lavagem subsequente da resina filtrada com 50 ml de água deionizada. A solução de lavagem foi coletada junto com a solução principal. A fase sólida com a enzima ligada foi lavada e seca (liofilizada) de modo a ser reutilizada. c- Remoção do gentiopicral.

[00071] A solução obtida na etapa b-2) (100 ml) foi extraída duas vezes com uma quantidade igual de acetato de etila (100 ml). As fases aquosa e orgânica foram então separadas. A solução aquosa foi analisada por UPLC: coluna de fase reversa C-18, eluente: água/acetonitrila, detecção: 254 nm) para determinar se o gentiopicral havia sido completamente removido. Se necessário, foi realizada uma terceira extração com 100 ml de acetato de etila. A fase aquosa obtida foi destilada a vácuo para remover os vestígios remanescentes de acetato de etila. A solução aquosa finalmente obtida pode ser usada diretamente para formulação ou para a fabricação de extrato seco.

[00072] Os estudos foram realizados com os extratos de genciana individuais ou misturas de ambas as plantas em uma proporção de Gentiana acaulis/Gentiana septemfida de 15/85 massa/massa ou 25/75 massa/massa. Exemplo 3: Efeito de um extrato de genciana na produção de ácido hialurônico:

[00073] Foi usado extrato de genciana (Gentiana acaulis/Gentiana septemfida, 25/75 m/m).

[00074] Fibroblastos humanos normais (NHF) P2+1 foram semeados a 5000 células/poço em placas de cultura de células com 96 poços (Nunclon) em MEM 10 % de FCS (Pan Biotech). Após três dias de crescimento, uma solução de extrato de genciana foi adicionada ao meio sem FCS e as células foram incubadas por mais três dias. O ácido hialurônico secretado no meio de crescimento foi medido usando um Kit para Ensaio de Ácido Hialurônico (K-1200, Echelon, Salt Lake City, Utah).

[00075] Em comparação com células não tratadas, as células tratadas apresentaram um aumento de 26 ± 4,9 % na produção de ácido hialurônico com 0,001 % de extrato de Genciana e TGFbeta1 (10 ng/ml), serviu como controle positivo, estimulado por 45,6 ± 1,1 %. Exemplo 4: Efeito de um extrato de genciana na reparação do CPD (dímero de ciclobutano pirimidina): Uma média de 400000 células foram semeadas em placas de 6 poços. Após incubação durante a noite em meio de crescimento, as células foram lavadas duas vezes com PBS, cobertas com 1 ml de PBS e irradiadas com 20 mJ/cm2 de UVB. Em seguida, as células foram incubadas com meio de crescimento e extrato de genciana. Em intervalos definidos, as células foram tripsinizadas e o DNA foi isolado usando um Kit de Isolamento de DNA da Qiagen. 200 ng de DNA foram marcados em placas ELISA e os CPDs foram detectados usando um anticorpo anti-CPD biotinilado fornecido por Kamiya em uma diluição de 1:2000. O extrato consiste em Gentiana acaulis e Gentiana septemfida, 25/75 m/m.

[00076] Esses resultados na tabela abaixo mostram um aumento de 40 % na reparação do CPD após 4 horas com 0,1 % de extrato de genciana.

Exemplo 5: Efeito de um extrato de genciana sobre as citocinas pró-inflamatórias e MMPs: Material e Método Medição de citocinas e MMPs

[00077] Queratinócitos humanos normais (NHK) P4+1 foram cultivados à sub-confluência em meio de crescimento CnT-07 (CELLnTEC, Berna, Suíça). Após a irradiação com 100 mJ/cm2 de UVB com um simulador de luz solar (SOL500RF, Dra. Hoenle, Alemanha), as células foram novamente incubadas por 24 h em CnT-07 contendo 0,1 % de extrato de genciana (Gentiana acaulis e Gentiana septemfida, 25/75 m/m) ou veículo. O sobrenadante da cultura de células foi coletado ao longo do tempo e congelado a -20 °C até as citocinas e as MMPs serem medidas em um dispositivo Luminex100. As medições no Luminex100 foram realizadas usando um kit multiplex personalizado (Panomics, Itália), de acordo com as instruções do fabricante.

[00078] Uma inibição da liberação das citocinas pró- inflamatórias IL-1β, IL-8, TNFα, MMP-1 foi encontrada, conforme destacado na tabela abaixo

[00079] Tabela com resultados para o Exemplo 8: % de Inibição de liberação de citocinas de células tratadas com 0,1 % de extrato de genciana irradiadas com UVB em comparação com células não tratadas irradiadas com UV.

Exemplo 6: Redução da produção intracelular de espécies reativas do oxigênio por um extrato de genciana: Detecção das espécies reativas do oxigênio (ERO)

[00080] A geração intracelular de ERO foi determinada usando uma sonda específica para ERO H2DCF-DA (Molecular Probes). A oxidação do H2DCF-DA ao produto DCF fluorescente serve como um indicador do nível geral de estresse oxidativo intracelular.

[00081] Fibroblastos humanos primários foram semeados a 5000 células/poço em placas de cultura de células com 96 poços em meio DMEM, 10 % de FCS, 1 % de Pen/Strep. Após 24 h, foi adicionado um extrato de genciana (Gentiana acaulis e Gentiana septemfida, 25/75 m/m) à solução e as células incubadas por 72 h adicionais. Após tratamento com o composto, as células foram incubadas com H2DCF-DA (25 μM) e Hoechst 33258 (1 μg/ml) em HBSS/2,5 % de HEPES por 45 min a 37 °C no escuro. As células foram lavadas duas vezes com HBSS/HEPES para remover qualquer H2DCF-DA que não tivesse sido internalizado e submetidas a 30 % de H2O2. A produção de ERO foi medida em um leitor de placas fluorescente (SpectraMax GeminiXS) após 30 min (520 nM) e normalizada para o teor de DNA.

[00082] Neste estudo foi mostrado que, em comparação com células não tratadas, as células tratadas com 0,05 % de extrato de genciana apresentaram uma redução de 30 % da produção de ERO intracelular.

[00083]Todos esses dados demonstram um efeito positivo sobre o fotoenvelhecimento e antienvelhecimento in vitro.

Claims (7)

1. Processo para a preparação de um extrato de Gentiana acaulis e/ou de Gentiana septemfida que é substancialmente livre de gentiopicrosida, o dito processo caracterizado por compreender as etapas de: (i) extrair as partes aéreas (folha, flor, caule) de Gentiana acaulis e/ou Gentiana septemfida com uma mistura de água/solvente orgânico para obter, após a filtração, um extrato compreendendo gentiopicrosida, em que o solvente orgânico é selecionado do grupo consistindo de álcoois C1C6, seguida por (ii) remoção do solvente orgânico para obter um extrato aquoso, seguida por (iii) hidrólise da gentiopicrosida no extrato aquoso para gentiopicral com uma β-glucosidase até que a concentração de gentiopicrosídeo seja inferior a 0,1%, de preferência inferior a 0,01%, mais preferencialmente inferior a 0,001%, e (iv) remoção do gentiopicral do extrato aquoso obtido em (iii) por extração.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a extração na etapa (i) é realizada com uma mistura de etanol/água.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a hidrólise de gentiopicrosida para gentiopicral na etapa (iii) é realizada com uma β-glicosidase imobilizada em uma resina de epóxi-ativada de metacrílico/estireno.

4. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o gentiopicral é removido por extração com um solvente orgânico, de preferência, com acetato de etila.

5. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que uma mistura das partes aéreas de Gentiana acaulis e Gentiana septemfida é usada em uma proporção de Gentiana acaulis para Gentiana septemfida entre 5/95 massa/massa e 50/50 massa/massa.

6. Processo, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a proporção de Gentiana acaulis para Gentiana septemfida está compreendida entre 10/90 massa/massa e 30/70 massa/massa.

7. Processo, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a proporção de Gentiana acaulis para Gentiana septemfida está compreendida entre 15/85 massa/massa e 25/75 massa/massa.