BR112016003511B1

BR112016003511B1 - Composição farmacêutica para induzir anabolismo de osso e/ou cartilagem que contém derivado de hidantoína e uso

Info

Publication number: BR112016003511B1
Application number: BR112016003511-9A
Authority: BR
Inventors: Hiroshi Noda; Hidetomo Kitamura; Tatsuya Tamura
Original assignee: Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha
Priority date: 2014-06-09
Filing date: 2014-06-09
Publication date: 2022-11-08
Also published as: CN106572994A; BR112016003511A2; EP3153166B1; RU2016113896A; EP3153166A4; RU2701168C2; RU2016113896A3; AU2014397042A1; AU2014397042B2; KR102382331B1; KR20170010354A; US20170112812A1; CA2949023C; MX371090B; BR112016003511A8; CA2949023A1; KR20170010439A; CN106535892B; BR112016003511B8; MX2016013684A

Abstract

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA QUE CONTÉM DERIVADO DE HIDANTOÍNA. A presente invenção fornece uma composição farmacêutica para induzir uma ação de absorção de osso e/ou cartilagem, que inclui como um componente eficaz da mesma um composto indicado pela fórmula geral (1) ou um sal farmacologicamente aceitável do mesmo: (na fórmula, R1, R2, R3 e R4 são conforme definidos nas reivindicações).

Description

CAMPO DA TÉCNICA

[0001] A presente invenção refere-se a preparações farmacêuticas que contêm, como um ingrediente ativo, um derivado de hidantoína que tem alta estabilidade metabólica e exibe efeitos potentes semelhantes a PTH e fornece farmacêuticos que induzem anabolismo de osso e/ou cartilagem para prevenir, tratar e facilitar a recuperação e cicatrização para osteoporose, diminuição de massa óssea em doença periodontal, defeito ósseo alveolar após extração de dente, osteoartri- te, deficiência de cartilagem articular, doença óssea adinâmica, acon- droplasia, hipocondroplasia, osteomalacia, fratura óssea e similares.

TÉCNICA ANTECEDENTE

[0002] O hormônio de paratireoide (PTH) é conhecido como um hormônio que age sobre células-alvo no rim e osso para regular ho- meostase de cálcio (Ca) e fósforo (Pi) (Documentos de Não Patente 1). Nível de concentração de Ca no soro é mantido por PTH principalmente através de ações direta ou indireta no trato gastrointestinal, osso e rim. PTH promove reabsorção de Ca a partir dos túbulos renais e, desse modo, suprime excreção de Ca no corpo para o lado de fora. O mesmo também aumenta a síntese de uma enzima que converte vitamina D para ativar vitamina D no rim e, desse modo, contribui para a facilitação de absorção de Ca medida por vitamina D ativa do trato gastrointestinal. Adicionalmente, PTH melhora a diferenciação de os- teoclastos indiretamente por meio de osteoblastos e promove liberação de Ca do osso. Essas ações de PTH são elaboradas para ocorrer principalmente por meio da elevação de adenosina 3’,5’-monofosfato (cAMP) cíclica e/ou ativação de fosfolipase C (PLC) que ocorre quando PTH se liga ao PTH1R.

[0003] Em seres humanos, as preparações de PTH [PTH (1-34) e PTH (1-84)] têm um efeito anabólico ósseo poderoso e induzem aumentos significativos na densidade mineral óssea (BMD) e resistência óssea. Atualmente, a maioria dos fármacos de osteoporose disponíveis para seres humanos são inibidores de reabsorção de osso e o único tipo de fármaco com o efeito anabólico ósseo que, por exemplo, aumenta ativamente BMD é de preparações de PTH. Desse modo, a preparação de PTH é considerada como um dos tratamentos mais efi-cazes para osteoporose (Documentos de Não Patente 2); no entanto, uma vez que o mesmo é um peptídeo, necessita ser administrado por um método invasivo. Portanto, há uma expectativa quanto à produção de um agente farmacêutico que tem efeitos semelhantes a PTH e que possa ser administrado de modo não invasivo.

[0004] A osteoartrite é uma doença degenerativa caracterizada por degeneração e destruição de cartilagem nas articulações de todo o corpo como joelhos, articulações de quadril, coluna vertebral, dedos; sinovite; endurecimento do osso subcondral ou disfunção de articulação devido à formação de osteófito e dor crônica. Quarenta por cento ou mais da população com 65 anos ou mais pode ser afetada por os- teoartrite e se tornou um enorme sobrecarga sobre economias médicas (Documentos de Não Patente 3 e 4). As causas de osteoartrite incluem carga de peso fisicamente excessiva em cartilagem de articulação, inflamação da membrana sinovial e medula óssea, pré-disposição genética dos compostos de matriz de cartilagem e aprimoramento de metabolismo ósseo do osso subcondral; no entanto, não há agentes terapêuticos que contenham a degeneração e destruição de cartilagem de articulação e as necessidades médicas permanecem altas.

[0005] Agrecanases (ADAMTS-4, ADAMTS-5, etc.), metaloprotei- nases de matriz (MMP-3, MMP-9, MMP-13, etc.; Documentos de Não Patente 5) e citocinas inflamatórias (IL-1, IL-6, etc.; Documentos de Não Patente 6), que estão envolvidas na destruição da matriz de cartilagem, vêm recebendo atenção como alvos para agentes terapêuticos, mas tais agentes não foram postos em uso prático. Por outro lado, testes clínicos foram realizados para agentes farmacêuticos que têm como objetivo o aprimoramento de alteração metabólica do osso sub- condral (risedronato, calcitonina; Documentos de Não Patente 7 e 8); no entanto, a degeneração e a destruição de cartilagem de articulação não poderiam ser ocultadas. Adicionalmente, os efeitos de suprimir a destruição de cartilagem de articulação além do seu mecanismo foram demonstrados em testes clínicos de ranelato de estrôncio que tem os efeitos combinados de promover a formação de osso bem como promover formação de cartilagem (Documentos de Não Patente 9); no entanto, o mesmo não atingiu o estágio de uso prático.

[0006] Por outro lado, a transformação de cartilagem de articulação de cartilagem permanente para cartilagem calcificada em patogê- nese de osteoartrite foi relatada em estudos recentes e sua supressão chamou atenção como um alvo para agentes terapêuticos (Documentos de Não Patente 10). Os agentes farmacêuticos com múltiplos modos para suprimir diferenciação terminal de condrócitos de articulação com base nesse mecanismo de ação foram relatados como supressores de degeneração e destruição de cartilagem de articulação em animais de modelo de osteoartrite, o que sugere uma possibilidade de colocar agentes terapêuticos com base nesse mecanismo e uso prático (Documentos de Não Patente 11 e 12).

[0007] Sob tais circunstâncias, os presentes inventores apresentaram um pedido de patente antecipadamente com base em sua descoberta que Os compostos representados pela fórmula (A):

[0008] [Documentos de Patente 1 pode ser mencionado para W, X, Y, m, n, R1, R2, R33, e R34 na fórmula] e sais farmacologicamente aceitáveis do mesmo são úteis como compostos tendo efeitos semelhantes a PTH, ou mais de preferência, como um agonista de PTH1R, e são úteis para a prevenção e/ou tratamento de osteoporose, fratura, osteomalacia, artrite, trombocitopenia, hipoparatiroidismo, hiperfosfa- tomia ou calcinose tumoral ou mobilização de célula tronco (Documento de Patente 1).

[0009] Para produzir agentes farmacêuticos que têm alto valor clínico e podem ser administrados invasivamente, é necessário considerar a cinética in vivo tal como absorção, distribuição, metabolismo, e excreção do fármaco além de suas ações diretas no alvo. Para esse propósito, é desejável ter um agente farmacêutico tendo efeitos seme-lhantes a PTH que tenha alta estabilidade metabólica contra micros- somas de fígado de ser humano e forte de capacidade mediada por PTH1R de ser humano de produção de cAMP.

DOCUMENTOS DE TÉCNICA ANTERIOR DOCUMENTOS DE PATENTE

[0010] Documento de Patente 1 WO 2010/126030 DOCUMENTOS DE NÃO PATENTE

[0011] Documentos de Não Patente 1 Kronenberg, H.M., et al., In Handbook de Experimental Pharmacology, Mundy, G.R., e Martin, T.J., (eds), páginas 185 a 201, Springer-Verlag, Heidelberg (1993)

[0012] Documentos de Não Patente 2 Tashjian e Gagel, J. Bone Miner. Res. 21:354 a 365 (2006)

[0013] Documentos de Não Patente 3 Sem Arth Rheumatism 2013; 43: 303 a 13

[0014] Documentos de Não Patente 4 CPMP/EWP/784/97 Rev. 1. 2010, European Medicines Agency

[0015] Documentos de Não Patente 5 Osteoarth Cart 2010; 18: 1109 a 1116

[0016] Documentos de Não Patente 6 Osteoarth Cart 2013; 21: 16 a 21

[0017] Documentos de Não Patente 7 Arthritis Rheum. 2006;54 (11):3494 a 507

[0018] Documentos de Não Patente 8 J Clin Pharmacol. 2011;51 (4):460 a 71

[0019] Documentos de Não Patente 9 Ann Rheum Dis. 2013 Feb;72 (2):179 a 86

[0020] Documentos de Não Patente 10 Arth Rheum 2006; 54(8): 2462 a 2470

[0021] Documentos de Não Patente 11 Nat Med 2009; 15(12): 1421 a 1426

[0022] Documentos de Não Patente 12 Sci Trans Med 2011;3: 101 a 93

SUMÁRIO DA INVENÇÃO PROBLEMAS A SEREM SOLUCIONADOS PELA INVENÇÃO

[0023] Um objetivo da presente invenção é fornecer métodos para prevenir, tratar e facilitar a recuperação e cicatrização de osteoporose, diminuição de massa óssea em doença periodontal, defeito ósseo al-veolar após a extração de dente, osteoartrite, deficiência de cartilagem articular, doença óssea adinâmica, acondroplasia, hipocondroplasia, osteomalacia, fratura óssea e similares, ao induzir anabolismo de os- so/cartilagem por exposição sistêmica não invasiva ou exposição local a derivados de hidantoínas que têm alta estabilidade metabólica e que exibe efeitos potentes semelhantes a PTH.

MEIOS PARA SOLUCIONAR OS PROBLEMAS

[0024] Sob tais circunstâncias, os presentes inventores revelaram com pesquisa adicional que os derivados de hidantoína recém- revelados da presente invenção mostram uma capacidade de produ ção de cAMP alta em células compelidas a expressar PTH1R humano e são altamente estáveis em relação ao metabolismo em microssomas de fígado humano. Adicionalmente, ao administrar compostos da presente invenção, os presentes inventores revelaram que os mesmos induziram o anabolismo de osso e/ou cartilagem e são úteis como composições farmacêuticas para prevenir, tratar e facilitar recuperação e cicatrização para osteoporose, diminuição de massa óssea em doença periodontal, defeito ósseo alveolar após extração de dente, oste- oartrite, deficiência de cartilagem articular, doença óssea adinâmica, acondroplasia, hipocondroplasia, osteomalacia, fratura óssea e similares.

[0025] A presente invenção refere-se ao seguinte: [1] Uma composição farmacêutica para induzir anabolismo de osso e/ou cartilagem, que compreende como um ingrediente ativo um composto representado pela fórmula geral (1) abaixo ou um sal farmacologicamente aceitável do mesmo:

em que, quando R1 e R2 não são ambos átomos de hidrogênio, R1 e R2 são independentemente: 1) átomo de hidrogênio; 2) átomo de halogênio; 3) um grupo alquila que compreende um ou dois carbonos que pode ser substituído com um a cinco átomos de flúor; ou 4) um grupo alcóxi que compreende um ou dois carbonos que pode ser substituído com um a cinco átomos de flúor; ou R1 e R2 ligam-se entre si para formar um grupo representado pela fórmula abaixo:

(em que cada * indica a posição de ligação com a porção de fenila); e R3 e R4 são independentemente um grupo metila que pode ser substituído com um a três átomos de flúor; ou R3 e R4, juntamente com um átomo de carbono ligado, formam um anel carboxílico de três a seis membros (em que um dos átomos de carbono que forma o anel pode ser substituído com um átomo de oxigênio, um átomo de enxofre ou um átomo de nitrogênio metil-substituído ou não substituído).

[0026] Para o composto contido como um ingrediente ativo de uma composição farmacêutica da presente invenção, um composto no qual a combinação de R1 e R2 é um grupo trifluormetila e um átomo de hi-drogênio e, em que R3 e R4, juntamente com um átomo de carbono ligado, formam um anel de ciclopentila, pode ser excluído dos compostos mencionados acima representados pela fórmula (1).

[0027] [2] A composição farmacêutica de [1], em que R1 e R2 do composto representado pela fórmula geral (1) ou um sal farmacologi- camente aceitável do mesmo são selecionados a partir das combinações abaixo: 1) R1 é um átomo de hidrogênio ou um átomo de halogê- nio, e R2 é um átomo de hidrogênio, um grupo trifluormetila, ou um grupo trifluormetóxi (desde que R1 e R2 não sejam ambos átomos de hidrogênio); 2) R1 é um grupo trifluormetila ou um grupo trifluormetóxi, e R2 é um átomo de hidrogênio ou um átomo de halogênio; 3) R1 e R2 ligam-se entre si para formar um grupo repre- sentado pela fórmula abaixo:

(em que, cada * indica a posição de ligação com a porção de fenila); e R3 e R4 são grupos metila; ou R3 e R4, juntamente com um átomo de carbono ligado, formam um anel selecionado abaixo:

(em que * indica a posição de ligação com a porção de imidazolidina- 2,4-diona).

[0028] [3] A composição farmacêutica de [1], em que R1 e R2 do composto representado pela fórmula geral (1) ou um sal farmacologi- camente aceitável do mesmo são selecionados a partir das combinações abaixo:

[0029] 1) R1 é um grupo trifluorometóxi e R2 é um átomo de flúor; 2) R1 é um átomo de bromo e R2 é um átomo de hidrogênio; 3) R1 é um grupo trifluorometóxi e R2 é um átomo de flúor; 4) R1 é um átomo de flúor e R2 é um grupo trifluormetóxi; 5) R1 é um grupo trifluormetila e R2 é um átomo de hidro-gênio; 6) R1 é um átomo de hidrogênio e R2 é um grupo trifluor- metóxi; 7) R1 e R2 ligam-se entre si para formar um grupo repre-sentado pela fórmula abaixo:

(em que cada * indica a posição de ligação com a porção de fenila); e R3 e R4 são grupos metila; ou R3 e R4, juntamente com um átomo de carbono ligado, formam um anel selecionado abaixo:

[0030] [4] A composição farmacêutica de [1], em que R3 e R4 do composto representado pela fórmula geral (1) ou um sal farmacologi- camente aceitável do mesmo são grupos metila.

[0031] [5] A composição farmacêutica de [1], em que R3 e R4 do composto representado pela fórmula geral (1) ou um sal farmacologi- camente aceitável do mesmo, juntamente com um átomo de carbono ligado, forma um anel selecionado abaixo:

[0032] [6] A composição farmacêutica de [1], que compreende co mo um ingrediente ativo um composto ou sal farmacologicamente aceitável do mesmo, em que o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em: 1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil)-4-oxo-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazoli- dina-2,4-diona; 1-(4-(2-((2-(3-bromofenil)-4-oxo-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8- il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona; 1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-4-oxo-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazo- lidina-2,4-diona; 1-(4-(2-((2-(3-fluoro-4-(trifluorometóxi)fenil)-4-oxo-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazoli- dina-2,4-diona; 1-(4-(2-((2-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-4-oxo-1,3,8-triazaes- piro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimida- zolidina-2,4-diona; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona); 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonano-2,4- diona; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-8-metil-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca- no-2,4-diona; 5-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-2-oxa-5,7-diazaspiro[3.4]octano- 6,8-diona; e 4-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-4,6-diazaspiro[2.4]heptano-5,7- diona.

[0033] [7] A composição farmacêutica de [1], em que o composto é 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona ou sal farmacologicamente aceitável do mesmo.

[0034] [8] A composição farmacêutica de [1], em que o composto é 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona ou sal farmacologicamente aceitável do mesmo.

[0035] [9] A composição farmacêutica de [1], em que o composto é 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonano-2,4-dio- na ou sal farmacologicamente aceitável do mesmo.

[0036] [10] A composição farmacêutica de [1] para uso na preven ção ou tratamento de osteoporose, aprimorar a diminuição de massa óssea em doença periodontal, facilitar recuperação de defeito ósseo alveolar após extração de dente, prevenir ou tratar osteoartrite, facilitar recuperação de deficiência de cartilagem articular, prevenir ou tratar doença óssea adinâmica, prevenir ou tratar acondroplasia, prevenir ou tratar hipocondroplasia, prevenir ou tratar osteomalacia ou facilitar a recuperação de fratura óssea;

[0037] [11] um método para induzir anabolismo de osso e/ou carti lagem, que compreende administrar um composto de qualquer um dentre [1] a [9] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em uma quantidade farmaceuticamente eficaz para um paciente que precisa de prevenção ou tratamento de osteoporose, aprimoramento de diminuição de massa óssea em doença periodontal, facilitação de recuperação de defeito ósseo alveolar após a extração de dente, prevenção ou tratamento de osteoartrite, facilitação de recuperação de deficiência de cartilagem articular, prevenção ou tratamento de doença óssea adinâmica, prevenção ou tratamento de acondroplasia, prevenção ou tratamento de hipocondroplasia, prevenção ou tratamento de osteomalacia ou facilitação de recuperação de fratura óssea;

[0038] [12] o método de [11], em que o método para induzir anabo- lismo de osso e/ou cartilagem é um método para prevenir ou tratar os- teoporose, um método para aprimorar diminuição de massa óssea em doença periodontal, um método para facilitar recuperação de defeito ósseo alveolar após a extração de dente, um método para prevenir ou tratar osteoartrite, um método para promover recuperação de deficiência de cartilagem articular, um método para prevenir ou tratar doença óssea adinâmica, um método para prevenir ou tratar acondroplasia, um método para prevenir ou tratar hipocondroplasia, um método para prevenir ou tratar osteomalacia ou um método para facilitar recuperação de fratura óssea;

[0039] [13] uso de um composto de qualquer um dentre [1] a [9] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para fabricar uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar osteoporose, aprimorar diminuição de massa óssea em doença periodontal, promover re-cuperação de defeito ósseo alveolar após a extração de dente, prevenir ou tratar osteoartrite, facilitar a recuperação de deficiência de cartilagem articular, prevenir ou tratar doença óssea adinâmica, prevenir ou tratar acondroplasia, prevenir ou tratar hipocondroplasia, prevenir ou tratar osteomalacia ou facilitar a recuperação de fratura óssea;

[0040] [14] uso de um composto de qualquer um dentre [1] a [9] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para fabricar uma composição farmacêutica para induzir anabolismo de osso e/ou carti-lagem; e

[0041] [15] o composto de qualquer um dentre [1] a [9] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para ser usado para prevenir ou tratar a osteoporose, aprimorar a diminuição de massa óssea em doença periodontal, facilitar a recuperação de defeito ósseo alveolar após a extração de dente, prevenir ou tratar osteoartrite, promover a recuperação de deficiência de cartilagem articular, prevenir ou tratar doença óssea adinâmica, prevenir ou tratar acondroplasia, prevenir ou tratar hipocondroplasia, prevenir ou tratar osteomalacia ou facilitar a recuperação de fratura óssea.

[0042] Adicionalmente, a presente invenção fornece métodos para tratar condições patológicas que podem ser prevenidas, tratadas e/ou curadas através de anabolismo de osso e/ou cartilagem ao administrar um composto de fórmula (1) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

EFEITOS DA INVENÇÃO

[0043] A presente invenção possibilita a prevenção, tratamento e facilitação de recuperação e/ou cura de osteoporose, diminuição de massa óssea em doença periodontal, defeito ósseo alveolar após a extração de dente, osteoartrite, deficiência de cartilagem articular, do-ença óssea adinâmica, acondroplasia, hipocondroplasia, osteomalacia e fratura óssea através de indução de anabolismo de osso e/ou cartilagem usando-se derivados de hidantoína que têm efeitos potentes semelhantes a PTH e alta estabilidade metabólica.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0044] A Figura 1 mostra a densidade mineral óssea da coluna vertebral lombar e fêmur em ratos ovarioctomizados com seis semanas de administração repetida. Mais especificamente, a mesma mostra os resultados de medições de densidade mineral óssea tiradas na coluna vertebral lombar e fêmur com o uso de um dispositivo de varredura de mineral de osso de raios X duplos, quando um veículo, o Composto 7 ou hPTH (1-34) foi administrado repetidamente uma vez ao dia durante seis semanas em ratos ovarioctomizados.

[0045] A Figura 2 mostra as densidades minerais ósseas da coluna vertebral lombar e de osso de perna inferior em ratos normais com quatro semanas de administração repetida. Mais especificamente, a mesma mostra os resultados de medições de densidade mineral óssea retirados da coluna vertebral lombar e osso de perna inferior com o uso de um dispositivo de varredura de mineral de osso de raios X du- plos, quando um veículo, Composto 7 ou hPTH(1-34) foi administrado repetidamente uma vez ao dia durante quatro semanas em ratos normais.

[0046] A Figura 3 mostra as densidades minerais ósseas da mandíbula (osso de maxilar inferior) em ratos normais com quatro semanas de administração repetida. Mais especificamente, a mesma mostra os resultados de medições de densidade mineral óssea retirados da mandíbula com o uso de um dispositivo de varredura de mineral de osso de raios X duplos, quando um veículo, Composto 7 ou hPTH(1- 34) foi administrado repetidamente uma vez ao dia durante quatro semanas em ratos normais.

[0047] A Figura 4 mostra a ação supressora do Composto 7 em relação à diferenciação terminal de condrócitos de articulação do osso de perna inferior de coelho. Mais especificamente, as fotografias mostram os resultados de avaliação da ação supressora de Composto 7 e hPTH(1-34) em relação à diferenciação terminal de condrócitos de articulação do osso de perna inferior de coelho com o uso de coloração de fosfatase alcalina (A) e coloração vermelha S de alizarina (B).

[0048] A Figura 5 mostra a quantidade de proteoglicano sinteriza- do em condrócitos humanos. Mais especificamente, a mesma mostra os resultados de avaliação do efeito de Composto 7 e hPTH(1-34) ao promover síntese de proteoglicano em condrócitos humanos.

[0049] A Figura 6 mostra a proporção de área de lesão na cartilagem de articulação do osso de perna inferior de coelhos-modelo com menisco parcialmente removido. Mais especificamente, a mesma mostra os resultados de medição da proporção de área de lesão na cartilagem de articulação do osso de perna inferior quando um veículo ou o Composto 7 foi continuamente administrado para as articulações de joelho de coelhos-modelo com menisco parcialmente removido.

[0050] A Figura 7 mostra as alterações visualmente observadas da cartilagem de articulação do osso de perna inferior duas semanas após a cirurgia em coelhos-modelo com menisco parcialmente removido. Mais especificamente, a mesma mostra os resultados de observação visual das alterações da cartilagem de articulação do osso de perna inferior duas semanas após cirurgia quando um veículo ou o Composto 7 foi continuamente administrado para as articulações de joelho de coelhos-modelo com menisco parcialmente removido.

[0051] A Figura 8 mostra fotomicrografias de exemplos representativos da cartilagem de articulação na extremidade distal do fêmur em ratos normais após quatro semanas de administração oral repetida. Mais especificamente, a mesma mostra o resultado de observação his- topatológica de exemplos representativos da cartilagem de articulação na extremidade distal do fêmur sob um microscópio de luz em ratos normais após quatro semanas de administração oral repetida diariamente de um veículo ou Composto 7.

[0052] A Figura 9 mostra o nível de alteração média em concentração de Ca de soro até 24 horas após administração oral de cada composto a uma dose de 30 mg/kg para modelos de rato TPTX.

MODO PARA REALIZAR A INVENÇÃO

[0053] A presente invenção se refere a derivados de hidantoína que têm alta estabilidade metabólica e exibem efeitos potentes semelhantes a PTH, e a usos dos mesmos. Os presentes inventores sinteri- zaram compostos representados pela fórmula mencionada anteriormente (1) ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo e revelaram que esses compostos ou sais do mesmo induzem anabolismo de osso e/ou cartilagem.

[0054] A "alquila" no presente documento refere-se a um grupo monovalente derivado pela remoção de qualquer um átomo de hidrogênio a partir de um hidrocarboneto alifático, e cobre um subconjunto de estruturas do grupo hidrocarbila ou hidrocarboneto não contendo um heteroátomo ou uma ligação de carbono insaturada-carbono e con-tendo átomos de carbono e de hidrogênio na cadeia principal. Exemplos do grupo alquila incluem aqueles de estruturas lineares ou ramificadas. O grupo alquila é de preferência um grupo alquila compreendendo um ou dois átomos de carbono. O grupo alquila é especificamente, por exemplo, um grupo metila ou um grupo etila e é, de preferência, um grupo metila.

[0055] O termo "alcóxi", conforme usado no presente documento, refere-se a um grupo óxi ao qual a alquila definida acima está ligada, e de preferência refere-se a um grupo alcóxi compreendendo um ou dois átomos de carbono. Exemplos específicos incluem grupos metóxi e etóxi e um exemplo preferido é um grupo metóxi.

[0056] O "B opcionalmente substituído com A" no presente documento significa que qualquer (quaisquer) átomo(s) de hidrogênio em B pode(m) ser substituído(s) com qualquer número de As.

[0057] Na presente invenção, o número de substituintes não é limitado a não ser que de outra maneira indicado. Por exemplo, o número de substituintes pode ser de 1 a 5, de 1 a 4, de 1 a 3, de 1 a 2, ou 1.

[0058] O "átomo de halogênio" no presente documento refere-se a um átomo de flúor, um átomo de cloro, um átomo de bromo ou um átomo de iodo.

[0059] No presente documento, o símbolo "*" na fórmula química refere-se à posição de ligação.

[0060] Os compostos da presente invenção representados pela fórmula (1) têm fortes efeitos semelhantes a PTH e alta estabilidade metabólica.

[0061] O "efeito semelhante a PTH" no presente documento se refere à atividade de geração de cAMP intracelular (cAMP: monofosfa- to de adenosina cíclico) pela ação sobre o receptor de PTH ou ação sobre a trajetória de transdução de sinal através do receptor de PTH.

[0062] Na presente invenção, se há um "forte efeito semelhante a PTH" ou se "um efeito semelhante a PTH é forte" ou se "tem um efeito semelhante a PTH forte" pode ser confirmado por medição da atividade de sinalização de cAMP por análise de sinalização de cAMP, por exemplo, de acordo com o método descrito em J. Bone. Miner. Res. 14: páginas 11 a 20, 1999. Especificamente, por exemplo, de acordo com o método descrito no exemplo de teste de referência 1, a quantidade de cAMP produzida em células forçadas a expressar PTH1R humano é determinada usando-se um kit cAMP EIA comercialmente disponível (por exemplo, sistema Biotrack cAMP EIA, GE health care) para medir a concentração de cada composto a 20% de atividade de sinalização de cAMP (EC20) ou sua concentração a 50% de atividade de sinalização de cAMP (EC50), com a atividade de sinalização de cAMP obtida na administração de 100 nM de PTH humano (1-34) sendo definida como 100%. Na presente invenção, para um "forte efeito semelhante a PTH" ou "um efeito semelhante a PTH é forte", por exemplo, o valor de EC20 (μM) medido pelo método mencionado acima é de preferência 5,0 ou menos, mais de preferência 3,0 ou menos, e ainda mais de preferência 2,0 ou menos. For EC50, o valor (μM) medido pelo método mencionado acima é, por exemplo, de preferência 25,0 ou menos, mais de preferência 15,0 ou menos, e anda mais de preferência 10,0 ou menos.

[0063] Se há "alta estabilidade metabólica" ou se a "estabilidade metabólica é alta" pode ser confirmado usando-se um método de medição geral. Por exemplo, células de fígado, células de intestino delgado, microssomas de fígado, microssomas de intestino delgado, S9 de fígado, e os mesmos podem ser usados para a confirmação. Especificamente, por exemplo, a estabilidade de um composto nos microsso- mas de fígado pode ser confirmada por medições de acordo com a descrição em T. Kronbach e outros (Oxidation of midazolam and triazolam by human liver cytochrome P450IIIA4. Mol. Pharmacol, 1989, 36(1), páginas 89 a 96). Mais especificamente, a estabilidade pode ser confirmada pelo seguinte método descrito no exemplo de teste de refe-rência 3. Na presente invenção, "alta estabilidade metabólica" ou "es-tabilidade metabólica é alta" é quando o valor de depuração (μL/min/mg) no teste de estabilidade metabólica usando-se microsso- mas de fígado de ser humano descritos no exemplo de teste de referência mencionado acima é de preferência 60 ou menos, mais de preferência 40 ou menos, e anda mais de preferência 35 ou menos. Especificamente, alta estabilidade metabólica pode ser obtida na fórmula acima mencionada (1), exceto onde a combinação de R1 e R2 é um grupo trifluorometila e um átomo de hidrogênio, e R3 e R4, juntamente com um átomo de carbono ligado, formam um anel de ciclopentila.

[0064] Se "anabolismo de osso e/ou cartilagem é induzido" pode ser confirmado com o uso de métodos conhecidos.

[0065] A indução de anabolismo ósseo pode ser confirmada, por exemplo, ao administrar continuamente um composto-teste durante um certo período e, então, medir a densidade mineral óssea ou massa óssea com o uso de um método de medição geral e, então, comparar o mesmo com um controle. Especificamente, por exemplo, as medições de densidade mineral óssea podem ser tiradas com o uso de um dispositivo de varredura de mineral de osso de raios X duplos [por exemplo, DCS-600EX (Aloka)] ao seguir o método descrito no documento por Takeda et al. (Bone 2013; 53(1): páginas 167 a 173). Se a densidade mineral óssea for alta em comparação ao controle de veículo, um indivíduo pode considerar que o anabolismo ósseo está sendo induzido. Os compostos da presente invenção são preferencialmente, por exemplo, aqueles que mostram aumentos equivalentes a ou maiores que o nível de aumento em densidade mineral óssea quando hPTH(1-34) é administrado como um agente terapêutico para osteopo- rose para testar indivíduos em um nível de dose clinicamente equiva-lentes. Mais especificamente, por exemplo, um aumento de 8% a 12% em densidade mineral óssea relativo ao controle de veículo é preferencial e um aumento de 12% ou mais é mais preferencial.

[0066] A indução de anabolismo de cartilagem pode ser confirmada, por exemplo, ao cultivar condrócitos na presença de um composto da presente invenção e, então, medir o nível de matrizes de condróci- tos (como proteoglicano) produzidas. A mesma também pode ser confirmada ao determinar se a diferenciação terminal e a calcificação de condrócitos são suprimidos. Especificamente, por exemplo, a quantidade de produção de matriz de cartilagem pode ser medida os seguir os métodos descritos nos documentos por Loester et al. (Atrh Rheum 2003; 48(8): páginas 2188 a 2196) e Ab-Rahim et al. (Mol Cell Bio- chem 2013; 376: 11 a 20). A supressão de diferenciação terminal pode ser avaliada de acordo com o método descrito no documento por Okazaki et al. (Osteoarth Cart 2003;11(2): páginas 122 a 32). Se a quantidade de produção de matriz de cartilagem for melhorada e a diferenciação terminal e a calcificação forem suprimidas em comparação ao controle, a indução de anabolismo de cartilagem pode estar ocorrendo. Os compostos da presente invenção são preferencialmente, por exemplo, aqueles que têm efeitos equivalentes a ou maiores que aqueles de PTH em relação à produção de matriz de cartilagem e à supressão de diferenciação terminal de condrócitos. Em comparação ao PTH, os compostos da presente invenção têm alta estabilidade metabólica e, portanto, os mesmos têm efeitos suficientes nas condições de doença mencionadas anteriormente e múltiplas vias de administração podem ser selecionadas. Adicionalmente, quando um efeito maior que PTH puder ser obtido para a quantidade de produção de matriz de cartilagem, torna-se possível obter efeitos superiores ao PTH em relação às condições patológicas mencionadas anteriormente

[0067] Por exemplo, a indução de anabolismo de cartilagem pode ser confirmada ao coletar o osso de cartilagem de um indivíduo conti-nuamente administrada com uma substância de teste durante um certo período de tempo, observar o mesmo de modo histopatológico e observar o espessamento da cartilagem de articulação e placa epifisária. Especificamente, a espessura de cartilagem de articulação e cartilagem da placa epifisária pode ser medida de modo histológico. Quando a espessura da cartilagem é aumentada em comparação àquela do controle, o composto-teste pode induzir o anabolismo de cartilagem. Em particular, quando o espessamento de cartilagem não é viável em comparação àquele de PTH, é preferencial que haja efeitos suficientes contra as condições patológicas mencionadas anteriormente e é mais preferencial quando os efeitos são obtidos através de administração oral.

[0068] Isso também pode ser confirmado, por exemplo, ao seguir o método de Kikuchi et al. (Osteoarth Cart 1996;4(2): páginas 99 a 110) e o método de Sampson et al. (Sci Transl Med 2011; 3: páginas 101 a 93) para administrar de modo contínuo um composto-teste durante um certo período de tempo a animais (roedores e não roedores) com menisco parcialmente removido para desestabilizar a articulação de joelho e induzir a osteoartrite e, então, visualmente ou de modo histopato- lógico, avaliar o estado degenerado da cartilagem de articulação da articulação de joelho. Se a degeneração de cartilagem de articulação na articulação de joelho for suprimida de uma maneira similar ao caso com PTH, pode ser determinado que o composto-teste é eficaz através de ações de anabolismo de cartilagem e supressão de diferenciação terminal. É mais preferencial se esses efeitos forem obtidos através de administração oral do composto-teste.

[0069] A avaliação também pode ser realizada, por exemplo, ao seguir o método de Wakitani et al. (Bone Joint Surg Br. 1989;71(1): páginas 74 a 80) para administrar um composto-teste durante um certo período de tempo para indivíduos cuja cartilagem de articulação e osso subcartilaginoso foram danificados e analisar o estado de regeneração de cartilagem no estado danificado. A observação de uma regeneração de cartilagem efeito superior para aquela do controle sugere a indução de um efeito de anabolismo de cartilagem do composto-teste. Em particular, um efeito de regeneração de cartilagem proeminente em comparação àquele de PTH é favorável uma vez que efeitos suficientes podem ser obtidos em relação às condições patológicas mencionadas anteriormente e, é mais preferencial se o composto-teste exibir esses efeitos através de administração oral.

[0070] Esses efeitos também podem ser confirmados ao medir ações similares a PTH. PTHrP que ativa PTH1R, um receptor de PTH, por ação parácrena é um fator importante envolvido na regulação de crescimento e diferenciação de condrócitos e é conhecido por suprimir a diferenciação terminal de condrócitos e a função para manter tecidos cartilaginosos (Science 1996; 273: páginas 663 a 666). O anabolismo de cartilagem por ativação de PTH1R também pode ser avaliado, por exemplo, ao seguir o método de Xie et al. (Human Mol Genet 2012; 21(18): páginas 3941 a 3955) para administrar um composto-teste durante um certo período de tempo em indivíduos normais ou em indivíduos com um distúrbio de crescimento genético e analisar a velocidade de crescimento do osso cartilaginoso e analisar de modo histológico o espessamento da placa epifisária. Se aumentos na velocidade de crescimento e na placa epifisária espessamento puderem ser confirmados por comparação ao controle, um indivíduo pode assumir que o composto-teste tem um efeito de anabolismo de cartilagem. Em particular, os efeitos do composto-teste são preferencialmente superiores àqueles de PTH e é mais preferencial se o composto-teste exibir efeitos através de administração oral.

[0071] Os compostos de acordo com a presente invenção, se formarem sais farmacologicamente aceitáveis ou livres, estão incluídos na presente invenção. Exemplos de tais "sais" incluem sais de ácido inorgânicos, sais de ácido orgânico, sais de base inorgânicos, sais de base orgânicos e sais de amino ácido básico ou ácido.

[0072] Exemplos preferenciais dos sais de ácido inorgânicos incluem cloridratos, bromidratos, sulfatos, nitratos e fosfatos. Exemplos pre-feridos dos sais de ácido orgânicos incluem acetatos, succinatos, fu- maratos, maleatos, tartratos, citratos, lactatos, estearatos, benzoatos, metanossulfonatos, benzenossulfonatos e p-toluenossulfonatos.

[0073] Exemplos preferidos dos sais de base inorgânicos incluem sais de metal alcalino tais como sais de sódio e sais de potássio, sais de metal alcalino-terroso tais como sais de cálcio e sais de magnésio, sais de alumínio e sais de amônio. Exemplos preferidos dos sais de base orgânicos incluem sais de dietilamina, sais de dietanolamina, sais de meglumina e sais de N,N-dibenziletilenodiamina.

[0074] Exemplos preferidos dos sais de aminoácido ácidos incluem aspartatos e glutamatos. Exemplos preferidos dos sais de aminoá- cido básicos incluem sais de arginina, sais de lisina e sais de ornitina.

[0075] Os compostos da presente invenção podem absorver umidade, têm água adsorvida ou formam hidratos quando deixados no ar. Tais hidratos também estão incluídos nos sais da presente invenção.

[0076] Adicionalmente, os compostos da presente invenção podem absorver certos outros solventes para formar solvatos. Tais sais são também incluídos na presente invenção como sais dos compostos da fórmula (1).

[0077] No presente documento, uma fórmula estrutural de um composto pode representar um certo isômero por razões de conveniência. No entanto, os compostos da presente invenção incluem todos os isômeros tais como isômeros geométricos, isômeros óticos com ba se em carbonos assimétricos, estereoisômeros e tautômeros bem como misturas desses isômeros que ocorrem devido à estrutura dos compostos, sem querer estar limitado às fórmulas descritas por razões de conveniência, e podem ser ou um de isômeros ou uma sua mistura. Assim, os compostos da presente invenção podem ter um átomo de carbono assimétrico na molécula e podem estar presentes como ra-cematos e formas oticamente ativas, mas a presente invenção não é limitada a cada um deles e inclui ambos.

[0078] A presente invenção inclui todos os isótopos dos compostos representados pela fórmula (1). Nos isótopos dos compostos da presente invenção, pelo menos um átomo é substituído por um átomo tendo o mesmo número atômico (número de prótons) mas tendo um número de massa diferente (soma do número de prótons e do número de nêutrons). Exemplos dos isótopos contidos nos compostos da presente invenção incluem um átomo de hidrogênio, um átomo de carbono, um átomo de nitrogênio, um átomo de oxigênio, um átomo de fósforo, um átomo de enxofre, um átomo de flúor e um átomo de cloro, 2 3 13 14 15 17 18 31 32 35 18 36 ncu n o H, H, C, C, N, O, O, P, P, S, F e Cl, respectivamente. Em particular, radioisótopos que decaem por emissão de radioatividade tais como 3H e 14C são úteis no teste de distribuição de tecido de copo quanto a compostos ou produtos farmacêuticos. Isótopos estáveis não decaem, são quase iguais em abundância e não emitem radioatividade, e assim eles podem ser usados com segurança. Os isótopos dos compostos da presente invenção podem ser convertidos de acordo com métodos convencionais por emprego de um reagente contendo um isótopo correspondente como substituto de um reagente usado para síntese.

[0079] Os compostos de acordo com a presente invenção podem exibir polimorfismo cristalino, mas não estão particularmente limitados a qualquer um dos mesmos, mas podem estar em qualquer uma des sas formas de cristal ou existem como uma mistura de duas ou mais formas de cristal.

[0080] Os compostos de acordo com a presente invenção incluem seus pró-fármacos. Os pró-fármacos são derivados dos compostos da presente invenção que têm grupos quimicamente ou metabolicamente descombináveis e são convertidos de volta nos compostos originais depois da administração in vivo para exibir sua eficácia original, inclu-indo complexos não formados com ligações covalentes, e sais.

[0081] Os compostos representados pela fórmula acima (1) de acordo com a presente invenção são preferencialmente como a seguir.

[0082] Na fórmula, R1 e R2 são selecionados a partir das combinações abaixo: 1) R1 é um átomo de hidrogênio ou um átomo de halogê- nio, e R2 é um átomo de hidrogênio, um grupo trifluormetila ou um grupo trifluormetóxi (desde que R1 e R2 não sejam ambos átomos de hidrogênio); 2) R1 é um grupo trifluormetila ou um grupo trifluormetóxi, e R2 é um átomo de hidrogênio ou um átomo de halogênio; 3) R1 e R2 ligam-se entre si para formar um grupo repre-sentado pela fórmula abaixo:

(em que, * cada um indica a posição de ligação com a porção de feni- la); e R3 e R4 são grupos metila; ou R3 e R4, juntamente com um átomo de carbono ligado, formam um anel selecionado abaixo:

[0083] Os compostos representados pela fórmula acima (1) de acordo com a presente invenção são mais preferencialmente os a seguir.

[0084] Na fórmula, R1 e R2 são selecionados a partir das combinações abaixo: 1) R1 é um grupo trifluorometóxi e R2 é um átomo de flúor; 2) R1 é um átomo de bromo e R2 é um átomo de hidrogênio; 3) R1 é um grupo trifluorometóxi e R2 é um átomo de flúor; 4) R1 é um átomo de flúor e R2 é um grupo trifluormetóxi; 5) R1 é um grupo trifluormetila e R2 é um átomo de hidro-gênio; 6) R1 é um átomo de hidrogênio e R2 é um grupo trifluor- metóxi; 7) R1 e R2 ligam-se entre si para formar um grupo repre-sentado pela fórmula abaixo:

(em que *, cada um, indica a posição de ligação com a porção de feni- la); e R3 e R4 são grupos metila; ou R3 e R4, juntamente com um átomo de carbono ligado, formam um anel selecionado abaixo:

[0085] Os compostos representados pela fórmula acima (1) de acordo com a presente invenção são adicionalmente, de preferência, um composto selecionado a partir do grupo que consiste em um sal farmacologicamente aceitável do mesmo ou o seguinte. COMPOSTO 1:

[0086] 1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil)-4-oxo-1,3,8-tria- zaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimi- dazolidina-2,4-diona; COMPOSTO 2:

[0087] 1-(4-(2-((2-(3-bromofenil)-4-oxo-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca- 1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4- diona; COMPOSTO 3:

[0088] 1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-4-oxo-1,3,8-triaza- espiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimida- zolidina-2,4-diona; COMPOSTO 4:

[0089] 1-(4-(2-((2-(3-fluoro-4-(trifluorometóxi)fenil)-4-oxo-1,3,8-tria- zaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimi- dazolidina-2,4-diona; COMPOSTO 5:

[0090] 1-(4-(2-((2-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-4-oxo-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetili- midazolidina-2,4-diona; COMPOSTO 6:

[0091] 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-tri- azaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina- 2,4-diona; COMPOSTO 7:

[0092] 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazoli- dina-2,4-diona); COMPOSTO 8:

[0093] 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]no- nano-2,4-diona; COMPOSTO 9:

[0094] 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-8-metil-1,3,8-triazaes- piro[4.5]decano-2,4-diona; COMPOSTO 10:

[0095] 5-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-2-oxa-5,7-diazaspiro [3.4]octano-6,8-diona; e COMPOSTO 11:

[0096] 4-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-4,6-diazaspiro[2.4] heptano-5,7-diona.

[0097] Dentre os compostos 1 a 11 acima, os compostos 6, 7 e 8 são mais preferenciais.

[0098] Tais compostos da presente invenção representados pela fórmula mencionada acima (1) ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo induzem anabolismo de osso e/ou cartilagem e devido ao fato de que tais efeitos, os mesmos são úteis para prevenir ou tratar osteoporose, aprimorar diminuição de massa óssea em doença perio- dontal, facilitar a recuperação de defeito ósseo alveolar após a extração de dente, prevenir ou tratar osteoartrite, facilitar a recuperação de deficiência de cartilagem articular, prevenir ou tratar doença óssea adinâmica, prevenir ou tratar acondroplasia, prevenir ou tratar hipo- condroplasia, ou prevenir ou tratar osteomalacia.

[0099] Os compostos ou seus sais de acordo com a presente invenção podem ser formulados por métodos convencionais para formar comprimidos, pós, grânulos finos, grânulos, comprimidos revestidos, cápsulas, xaropes, pastilhas, inalações, supositórios, injeções, pomadas, pomadas oftálmicas, preparações oftálmicas, preparações nasais, preparações de ouvido, cataplasmas, loções e similares. Carreadores comumente usados, como excipientes, aglutinantes, lubrificantes, colo- rantes, corretivos, e quando necessário, estabilizadores, emulsificado- res, promotores de absorção, tensoativos, ajustadores de pH, conser-vantes, antioxidantes e similares podem ser usados para formulação, e eles são combinados com ingredientes comumente usados como ma-térias-primas de preparações farmacêuticas e são formulados pelos métodos convencionais.

[00100] Por exemplo, preparações orais são fabricadas por adição, ao composto ou a um seu sal farmacologicamente aceitável de acordo com a presente invenção, de um excipiente, e quando necessário, um aglutinante, um desintegrante, um lubrificante, um colorante, um corretivo e similares e então formulação deles para formar pó, grânulos finos, grânulos, comprimidos, comprimidos revestidos, cápsulas e similares por um método convencional.

[00101] Exemplos desses ingredientes incluem óleos de animal e vegetal tais como óleo de soja, sebo bovino e glicerídeo sintético; hi- drocarbonetos tais como parafina líquida, esqualano e parafina sólida; óleos de éster tais como miristato de octildodecila e miristato de iso- propila; álcoois superiores tais como álcool cetoestearila e álcool bee- nila; resina de silicone; óleo de silicone; tensoativos tais como éster de ácido graxo de polioxietileno, éster de ácido graxo de sorbitano, éster de ácido graxo de glicerol, éster de ácido graxo de polioxietileno sorbi- tano, óleo de rícino de polioxietileno hidrogenado e um copolímero por blocos de polioxietileno-polioxipropileno; polímeros solúveis em água tais como hidroxietilcelulose, ácido poliacrílico, um polímero de carbo- xivinila, polietileno glicol, polivinilpirrolidona e metilcelulose; álcoois inferiores tais como etanol e isopropanol; álcoois poliídricos tais como glicerol, propileno glicol, dipropileno glicol e sorbitol; açúcares tais como glicose e sacarose; pós inorgânicos tais como anidrido silícico, sili- cato de magnésio alumínio e silicato de alumínio e água purificada.

[00102] Exemplos dos excipientes incluem lactose, amido de milho, açúcar branco suave, glicose, manitol, sorbitol, celulose microcristalina e dióxido de silício.

[00103] Exemplos dos aglutinantes incluem álcool polivinílico, éter de polivinila, metilcelulose, etilcelulose, acácia, tragacanto, gelatina, goma-laca, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose, polivinilpir- rolidona, um polímero por blocos de polipropileno glicol-polioxietileno e meglumina.

[00104] Exemplos dos desintegrantes incluem amido, ágar, pó de gelatina, celulose microcristalina, carbonato de cálcio, bicarbonato de sódio, citrato de cálcio, dextrina, pectina e carboximetilcelulose calcíca.

[00105] Exemplos dos lubrificantes incluem estearato de magnésio, talco, polietileno glicol, sílica e óleo vegetal hidrogenado.

[00106] Colorantes usados são aqueles aprovados como aditivos a produtos farmacêuticos. Corretivos usados são pó de cacau, hortelã- pimenta, cânfora, espasmos, óleo de menta, borneol, casca de árvore de canela em pó e similares.

[00107] Obviamente, esses comprimidos e grânulos podem ser re-vestidos com açúcar ou de outra maneira revestidos aproximadamente quando necessários. Preparações líquidas tais como xaropes e prepa-rações injetáveis são fabricadas por adição de um ajustador de pH, um solubilizador, um agente de ajuste de tonicidade e similares, e quando necessário, um agente de solubilização, um estabilizador e similares ao composto ou a um seu sal farmacologicamente aceitável de acordo com a presente invenção e sua formulação por um método convencional.

[00108] O método de fabricação de preparações externas não é limitado e elas podem ser fabricadas por métodos convencionais. Especificamente, várias matérias-primas comumente usadas para produtos farmacêuticos, quase (alegadamente) fármacos, cosméticos e similares podem ser usadas como materiais de base para formulação. Exemplos específicos dos materiais de base usados incluem matérias- primas tais como óleos de animal e de vegetal, óleos minerais, óleos de éster, ceras, álcoois superiores, ácidos graxos, óleo de silicone, tensoativos, fosfolipídios, álcoois, álcoois poliídricos, polímeros solúveis em água, minerais de argila e água purificada. Além disso, ajustadores de pH, antioxidantes, queladores, conservantes e fungicidas, colorantes, sabores e similares podem ser adicionados quando necessário. Os materiais de base para preparação externa de acordo com a presente invenção não são limitados a esses materiais.

[00109] Ingredientes tais como ingredientes tendo um efeito de indução de diferenciação, promotores de fluxo de sangue, bactericidas, agentes anti-inflamatórios, ativadores de células, vitaminas, aminoáci- dos, umectantes e agentes ceratolíticos podem também ser combinados quando necessários. Os materiais de base acima mencionados são adicionados em uma quantidade que corresponde à concentração usualmente escolhida para a fabricação de preparações externas.

[00110] O modo de administração dos compostos ou seus sais, ou hidratos dos compostos ou sais de acordo com a presente invenção não é particularmente limitado, e eles podem ser oralmente ou paren- teralmente administrados por métodos comumente usados. Por exemplo, eles podem ser formulados para formar preparações tais como comprimidos, pós, grânulos, cápsulas, xaropes, pastilhas, inalações, supositórios, injeções, pomadas, pomadas oftálmicas, preparações oftálmicas, preparações nasais, preparações de ouvido, cataplasmas e loções e são administrados.

[00111] A dosagem e o método de administração do remédio de acordo com a presente invenção podem ser apropriadamente selecionados dependendo da severidade do sintoma, da idade, do sexo, do peso de corpo, do modo de administração, do tipo do sal, do típico específico da doença e similares.

[00112] Embora a dosagem significativamente varie de acordo com o tipo da doença e a severidade do sintoma do paciente, a idade do paciente, a diferença de sexo e a diferença em sensibilidade a fárma- cos entre os pacientes, e similares, a dosagem é usualmente cerca de 0,03 a 1000 mg, de preferência de 0,1 a 500 mg e de preferência de 0,1 a 100 mg por dia para adultos e é administrada dividida em uma a várias doses por dia.

[00113] A via de administração é selecionada apropriadamente ao considerar o tipo de doença e grau de sintomas do paciente, idade e gênero de paciente, diferença em sensibilidade de fármaco e similares. O método de administração não é particularmente limitado desde que o mesmo seja um método no qual um composto da presente invenção é exposto de modo não invasivo de modo sistêmico ou local e um efeito de indução de anabolismo de osso e/ou cartilagem é obtido. Exemplos de tais métodos de administração incluem administração oral, administração intravenosa, administração transnasal, administração transdérmica, administração transpulmonar e administração intraarticular.

[00114] Na fabricação dos compostos da presente invenção repre-sentados pela fórmula acima (1), compostos de matéria prima e vários reagentes podem formar sais, hidratos ou solvatos, a totalidade varia de acordo com o material de partida, o solvente usado, e similares, e não são particularmente limitados à medida que eles não inibem a reação.

[00115] O solvente usado também varia de acordo com o material de partida, o reagente e similares, e não é particularmente limitado à medida que não inibe a reação e dissolve o material de partida em uma certa extensão, obviamente.

[00116] Vários isômeros (por exemplo, isômeros geométricos, isô- meros óticos com base em carbonos assimétricos, rotâmeros, estere- oisômeros e tautômeros) podem ser purificados e isolados usando-se meios de separação comuns, por exemplo, recristalização, métodos de sal diastereoméricos, métodos de decomposição enzimáticos e vários métodos de cromatografia (por exemplo, cromatografia de camada fina, cromatografia de coluna, cromatografia líquida de alto desempenho e cromatografia gasosa).

[00117] Os compostos de acordo com a presente invenção obtidos como formas livres podem ser convertidos em sais que podem ser formados pelos compostos ou em hidratos dos compostos de acordo com métodos convencionais. Os compostos de acordo com a presente invenção obtidos como sais ou hidratos dos compostos podem também ser convertidos em formas livres dos compostos de acordo com métodos convencionais.

[00118] Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser isolados e purificados por aplicação de operações químicas comuns tais como extração, concentração, evaporação, cristalização, filtração, recristalização e vários métodos de cromatografia.

[00119] A totalidade dos documentos da técnica anterior relatados é incorporada ao presente documento a título de referência.

MÉTODOS DE SÍNTESE GERAL

[00120] Os compostos da presente invenção podem ser sintetizados por vários métodos, alguns dos quais serão descritos com referência aos seguintes esquemas. Os esquemas são ilustrativos e a presente invenção não é apenas limitada pelas reações e condições explicitamente indicadas. Embora alguns substituintes estejam excluídos nos seguintes esquemas por causa de claridade, pretende-se que tal exclusão não limite a revelação dos esquemas. Compostos representativos da presente invenção podem ser sintetizados usando-se intermediários apropriados, compostos conhecidos, e reagentes. R1, R2, R3 e R4 nas fórmulas nos seguintes métodos de síntese gerais são como definidos para R1, R2, R3 e R4. Os compostos representados pela fórmula geral acima (1) (compostos representados pela fórmula 1 nos seguintes métodos de síntese gerais).

[00121] Os compostos da presente invenção (Fórmula 1) podem ser sintetizados pelos métodos de fabricação (Métodos A e B) mostrados abaixo. ESQUEMA 1 (MÉTODO A)

[00122] O esquema 1 mostra um método para obtenção de um derivado de hidantoína (Fórmula 1) por amidação do derivado de ácido carboxílico (1) e o derivado de amino-amida (2) para se obter o derivado de amida-amida (3) e, então, a construção do anel de espiroimi- dazolona por ciclização intramolecular.

[00123] A etapa 1 é um método da amidação de um derivado de ácido carboxílico (1) e um derivado de amino-amida (2). Exemplos do reagente de acoplamento incluem N,N'-dicicloexilcarbodiimida (DCC), cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC), hexafluo- rofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio (HATU) e n-hidrato de cloreto de 4-(4,6-dimethoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmor- folínio (DMT-MM). Exemplos da base incluem trietilamina ou N,N-di- isopropiletilamina. Se necessário, 4-(dimetilamino)piridina (DMAP) pode ser usada como um catalisador. Exemplos do solvente apropriado incluem diclorometano ou N,N-dimetilformamida. Exemplos do solvente de reação apropriado quando DMT-MM é usado incluem metanol, etanol e acetonitrila. A temperatura de reação é de 0°C para a temperatura ambiente, por exemplo, e o tempo de reação é de 0,5 a 24 horas. O derivado de amino-amida resultante (3) é isolado por uma técnica comum e, se necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00124] A etapa 2 é um método para a cristalização do derivado de amida-amida (3) na presença de uma base adequada tal como solução de hidróxido de sódio aquosa ou t-butóxido de potássio em um solvente adequado tal como etanol, terc-butanol ou dimetilsulfóxido. A temperatura de reação é realizada, por exemplo, sob a temperatura ambiente em condições de refluxo por uma a 24 horas. O derivado de hidantoína obtido (Fórmula 1) é isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00125] O derivado de amino-amida (2) indicado no Esquema 1 pode ser sintetizado do derivado de piperidina (4). O método sintético para o derivado de amino-amida (2) é mostrado no Esquema 2. ESQUEMA 2

[00126] A etapa 3 é uma síntese de Strecker de conversão de um derivado de piperidinona (4) em um derivado de amino-nitrila (5). Es-pecificamente, esse é um método de reação de uma piperidinona (4) com cianeto de sódio e cianeto de potássio e cloreto de amônio ou acetato de amônio em um solvente apropriado tal como etanol, etanol ou tetraidrofurano na presença/ausência de água. A temperatura de reação é a temperatura ambiente até 80°C, por exemplo, e o tempo de reação é de 2 a 72 horas. O derivado de amino-nitrila resultante (5) é isolado por uma técnica comum e, se necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00127] A etapa 4 é um método de conversão do grupo nitrila em um grupo amido sob condições de hidrólise básicas na presença de peróxido de hidrogênio. Essa reação pode ser realizada com referência a Chemistry-A European Journal (2002), 8(2), 439 a 450, por exemplo.

[00128] A etapa 5 é um método da hidrogenação de um Composto de olefina (6) em um solvente inerte tal como metanol, etanol, trifluoro- etanol, dimetilformamida ou dimetilacetamida na presença de um cata-lisador tal como paládio-carbono ou hidróxido de paládio-carbono, res-pectivamente, sob uma atmosfera de H2. A temperatura de reação é a temperatura ambiente até 80°C, e a reação pode ser realizada sob pressão. O derivado de amino-amida resultante (2) é isolado por uma técnica comum e, se necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00129] O derivado de piperidinona (4) mostrado no Esquema 2 pode ser sintetizado de derivado de cetal vinilsulfonila conhecido (7) e um derivado de hidantoína-brometo de arila (8). O método sintético para o derivado de piperidina (4) é mostrado no Esquema 3. ESQUEMA 3

[00130] A etapa 6 é um método para a síntese de um derivado de cetal-arilvinilsulfonila (9) pelo acoplamento do derivado de cetal vi- nilsulfonila (7) e o derivado de hidantoína-brometo de arila (8) sob atmosfera de N2 na presença de um catalisador de paládio tal como tris(dibenzilidinaacetona)paládio(0) ou bis(dibenzilidinaacetona)paládio e por adição de um ligante de fosfina tais como ácido tri-terc-butilfos- fina tetrafluorobórico e uma base adequada tal como metildicicloexila- mina, em um solvente adequado tal como N-metil-2-piperidona (NMP). A temperatura de reação está entre 90°C e temperatu ra de refluxo. O derivado de cetal-arilvinilsulfonila obtido (9) é isolado por técnicas co-muns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00131] A etapa 7 é um método para a conversão de cetal do derivado de cetal-arilvinilsulfonila (9) em cetona em um solvente adequado tal como tetraidrofurano aquoso na presença de um ácido tal como ácido clorídrico. A temperatura de reação é, por exemplo, o ponto de ebulição do solvente, e o tempo de reação é cerca de 1 a 24 horas. O derivado de piperidina obtido (4) é isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00132] O derivado de hidantoína-brometo de arila (8) mostrado no Esquema 3 pode ser sintetizado de 4-bromo-3,5-dimetilanilina (10) e o derivado de ácido bromoacético (11), ou de 2-bromo-5-iodo-1,3- dimetilbenzeno (13) e o derivado de aminoácido (14). Um método sintético para o derivado de hidantoína-brometo de arila (8) é mostrado no Esquema 4. ESQUEMA 4

[00133] A etapa 8 é um método para a alquilação de 4-bromo-3,5- dimetilanilina (10) com o derivado de ácido bromoacético (11) na pre-sença de uma base adequada tal como di-isopropiletilamina e em um solvente adequado tal como N-metil-2-piperidona (NMP). A temperatura de reação é, por exemplo, a temperatura ambiente até 100°C, e o tempo de reação é de 1 a 24 horas. O derivado de brometo de arila- aminoácido obtido (12) é isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00134] A etapa 9 é um método para a síntese do derivado de brometo de arila-aminoácido (12), pelo acoplamento de 2-bromo-5-iodo- 1,3-dimetilbenzeno (13) e o derivado de aminoácido (14) na presença de um catalisador de metal tal como iodeto de cobre (I). A reação pode ser realizada na presença de uma base adequada tal como diazabici- cloundeceno (DBU) e em um solvente adequado tal como N,N- dimetilacetamida (DMA), em uma temperatura de reação de cerca de 80°C a 120°C. O derivado de brometo de arila-aminoá cido obtido (12) é isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00135] A etapa 10 é um método para a síntese do derivado de hidan- toína-brometo de arila (8) por reação do derivado de brometo de arila- aminoácido (12) com cianato de sódio sob condição ácida. O solvente é, por exemplo, um solvente misto tal como ácido acético - diclorometano; a temperatura de reação é a temperatura ambiente até 60°C; e o tempo de reação é de 1 a 24 horas. O derivado de hidantoína-brometo de arila obtido (8) pode ser isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00136] O derivado de hidantoína-brometo de arila (8) mostrado no Esquema 3 pode também ser sintetizado de 4-bromo-3,5-dimetilanilina (10) e um derivado de cetona (15). Um método sintético para o derivado de hidantoína-brometo de arila (8) é mostrado no Esquema 5. ESQUEMA 5

[00137] A etapa 11 é síntese de Strecker que dirige o derivado de cetona (15) para se tornar um derivado de arilamino-nitrila (16). Mais especificamente, é um método que reage o derivado de cetona (15) com 4-bromo-3,5-dimetilanilina (10) e cianeto de trimetilsilila em um solvente adequado tal como ácido acético. A temperatura de reação pode estar a temperatura ambiente, e o tempo de reação é de um a três horas ou semelhante. O derivado de arilamino-nitrila obtido (16) é isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00138] A etapa 12 é um método para reação do derivado de arila amino-nitrila (16) com 2,2,2-tricloroacetilisocianato em um solvente adequado tal como diclorometano, e então sintetização de um derivado de iminoidantoína (17) por adição de reagentes tais como metanol, água, e trietilamina e sua permissão de reagir sob condições de aquecimento. O derivado de iminoidantoína obtido (17) é isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00139] A etapa 13 é um método para a conversão do derivado de iminoidantoína (17) no derivado de hidantoína-brometo de arila (8) sob condição ácida. Por exemplo, a síntese pode ser realizada em um sol-vente de ácido acético-água com aquecimento a cerca de 65°C por uma a seis horas ou semelhante. O derivado de hidantoína-brometo de arila obtido (8) é isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00140] O esquema 6 é um método para uma reação de Heck de um derivado de vinilsulfonamida (18) e o derivado de hidantoína- brometo de arila (8) na presença de um catalisador de metal, e então a hidrogenação de composto de olefina (19) para dar o derivado de hi- dantoína (Fórmula 1). ESQUEMA 6 (MÉTODO B)

[00141] O derivado de hidantoína (Fórmula 1) pode ser sintetizado por realização da reação do Etapa 14 de acordo com o método da Etapa 6 e a ração da Etapa 15 de acordo com o método da Etapa 5. O derivado de hidantoína obtido (Fórmula 1) é isolado por técnicas comuns, e quando necessário, pode ser purificado por cristalização ou cromatografia.

[00142] O derivado de vinilsulfonamida (18) usado na Etapa 14 pode ser sintetizado com referência aos Esquemas 2, 3, e 12 ao documento WO 2010/126030(A1).

[00143] Todos os documentos da técnica anterior relatados nesse relatório são incorporados ao presente documento por referência.

[00144] No presente documento abaixo, a presente invenção será adicionalmente exemplificada com referência aos Exemplos, mas a mesma não deve ser interpretada como sendo limitada aos mesmos.

EXEMPLOS EXEMPLO 1 EFEITOS EM DENSIDADE MINERAL ÓSSEA MEDIANTE SEIS SEMANAS DE ADMINISTRAÇÃO REPETIDA EM RATOS OVARIOCTOMIZADOS

[00145] Os ratos fêmeas Crl:CD(SD) obtidos a partir de Charles River Japão, Inc. foram aclimatados durante uma semana ou mais mediante condições laboratoriais padrão de 20°C a 26°C e umidade de 35% a 75% e, então, usados em experimentos. Os ratos tiveram livre acesso à água de torneira e a uma dieta de roedor padrão (CE-2) (Clea Japão Inc.) que contém 1,1% de cálcio, 1,0% de ácido fosfórico e 250 IU/100 g de vitamina D3.

[00146] Os ratos com doze semanas de vida foram submetidos à remoção de ambos os ovários por cirurgia (OVX) ou à cirurgia de si-mulação (Simulação). Após o peso do corpo ser determinado na quarta semana após a cirurgia, os ratos foram divididos em grupos para que o peso médio do corpo de cada grupo de seis ratos seria igual. A partir do dia subsequente após a divisão de grupo, cada rato foi sub- metido à administração repetida uma vez ao dia durante seis semanas. O solvente para administração oral (veículo) e o solvente para administração subcutânea (tampão PC) foram respectivamente admi-nistrados de modo oral e subcutâneo em ratos do grupo de Controle de Simulação. O veículo e o tampão PC foram administrados de modo oral e subcutâneo aos ratos do grupo de controle de OVX, respectivamente. Para ratos de Composto 7 OVX, o Composto 7 mencionado acima dissolvido no veículo foi administrado de modo oral em uma dose de 30 mg/kg e o tampão PC foi administrado de modo subcutâneo. Para ratos do grupo OVX-hPTH(1-34), o veículo foi administrado de modo oral e hPTH(1-34) dissolvido em tampão PC foi administrado de modo subcutâneo em uma dose de 0,9 nmol/kg.

[00147] O nível de AUC (área sob a curva para concentração sanguinea versus tempo) foi o mesmo que quando 20 μg de Forteo®, um agente terapêutico clinicamente usado para osteoporose, é administrado em humanos quando a dose de administração para ratos foi definida como 0,9 nmol/kg. As doses de administração foram 5 ml/kg para administração oral e 1 ml/kg para administração subcutânea em todos os grupos. O veículo usado foi uma composição preparada a partir de 10% de dimetilsulfóxido (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 10% de Kolliphor EL (Sigma-Aldrich Japan) e 10% de hidroxipropil-β- ciclodextrina (Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd), cujo pH foi ajustado para 10 com o uso de glicina (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) e hidróxido de sódio (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). O tampão PC usado foi uma composição preparada a partir de 25 mmol/l de tampão de fosfato-citrato, 100 mmol/l de NaCl e 0,05% de Tween80, ajustado para pH 5,0. Os ratos foram eutanasiados com anestesia um dia após a administração final ao coletar sangue da aorta abdominal e, então, a autopsia foi realizada para coletar a coluna vertebral lombar e fêmur. A coluna vertebral lombar e o fêmur foram armazenados em 70% de etanol. As densidades minerais ósseas da coluna vertebral lombar e fêmur foram determinadas com o uso de um dispositivo de varredura de mineral de osso de raios X duplos (DCS-600EX, Aloka). A densidade mineral óssea de coluna vertebral lombar foi determinada ao medir da segunda até a quarta vértebra lombar e a densidade mineral óssea de fêmur foi determinada ao dividir de modo vertical o fêmur em dez partes e ao medir as três partes na extremidade distal dos joelhos. Os resultados são mostrados na Figura 1.

[00148] Os dados são mostrados como valor principal + erro padrão (SE). O pacote pré-clínico SAS ver. 5,00 (SAS Institute Japan) foi usado para realizar as análises estatísticas a seguir. O nível de significância foi definido em 5% em ambos os lados. Em relação à coluna vertebral lombar e à densidade mineral óssea de fêmur, um teste t de dois grupos foi usado para comparação do grupo de Controle de Simulação e do grupo de controle de OVX (#P < 0,05), a comparação do grupo de con-trole de OVX e o grupo de Composto 7 OVX (*P < 0,05) e a comparação do grupo de controle de OVX e do grupo OVX-hPTH(1-34) (JP < 0,05).

[00149] Conforme mostrado na Figura 1, em relação à densidade mineral óssea de fêmur, o grupo de controle de OVX mostrou uma diminuição significativa na densidade mineral óssea em relação ao grupo de Controle de Simulação e ao grupo OVX-hPTH(1-34) que é o controle positivo mostrou um aumento significativo em relação ao grupo de controle de OVX. A porcentagem de aumento no grupo OVX- hPTH(1-34) em relação ao grupo de controle de OVX foi de 8%. O grupo de Composto 7 OVX mostrou um aumento significativo em relação ao grupo de controle de OVX e a porcentagem de aumento foi de 12%. Em relação à densidade mineral óssea de coluna vertebral lombar, o grupo de controle de OVX mostrou uma diminuição significativa em densidade mineral óssea em relação ao grupo de Controle de Simulação e o grupo de Composto 7 OVX mostrou uma tendência cres- cente em relação ao grupo de controle de OVX, embora o aumento não tenha sido significante. O grupo OVX-hPTH(1-34) mostrou um aumento significativo em relação ao grupo de controle de OVX e a porcentagem de aumento foi de 12%.

[00150] Conforme descrito acima, a administração oral repetida de Composto 7 ocasionou um aumento de densidade mineral óssea em ratos de OVX, um modelo patológico para osteoporose. Portanto, o Composto 7 pode ser eficaz para prevenir, tratar, aprimorar e facilitar a recuperação de condições patológicas que exigem indução de anabo- lismo ósseo, aumento de massa óssea ou regeneração óssea, como osteoporose, diminuição de massa óssea em doença periodontal e defeito ósseo alveolar após a extração de dente. Adicionalmente, os compostos representados pela fórmula (1) foram confirmados como tendo efeitos potentes semelhantes a PTH e alta estabilidade metabólica nos Exemplos de Referência 1 a 5 e os mesmos podem render um efeito de aumento de densidade mineral óssea através de anabolismo ósseo por funções semelhantes a PTH. Portanto, os compostos representados pela fórmula (1) podem ser eficazes para prevenir, tratar, aprimorar e facilitar a recuperação de condições patológicas que exigem indução de anabolismo ósseo, aumento de massa óssea ou regeneração óssea, como osteoporose, diminuição de massa óssea em doença periodontal e defeito ósseo alveolar após a extração de dente.

EXEMPLO 2 EFEITOS EM DENSIDADE MINERAL ÓSSEA DURANTE QUATRO SEMANAS DE ADMINISTRAÇÃO REPETIDA EM RATOS NORMAIS

[00151] Os ratos fêmea RccHan: WIST obtidos a partir de Japan Laboratory Animals Inc. foram aclimatados durante uma semana ou mais sob condições laboratoriais padrão de 20°C a 2 6°C e umidade de 30% a 70% e, então, usados em experimentos. Os ratos tiveram livre acesso à água de torneira e a uma dieta de roedor padrão (CR-LPF) (Oriental Yeast Co., Ltd.).

[00152] O cateter intravenoso foi colocado em ratos com oito semanas de vida. O cateter foi inserido a partir da veia femoral na região inguinal e a ponta foi estendida na veia cava caudal para substituição naquele local. O peso do corpo foi determinado na primeira semana após a cirurgia e os ratos foram divididos em grupos de dez animais por grupo para que o peso médio do corpo de cada grupo fosse igual. Dois dias após a divisão de grupo, todos ratos foram administrados de modo intravenoso uma vez ao dia repetidamente durante quatro semanas. A administração foi realizada ao conectar uma bomba de infusão (MEDFUSION SYRINGE INFUSION PUMP Modelo 2001) ao cate- ter permanente.

[00153] O solvente (veículo) foi administrado de modo intravenoso ao grupo de Controle de veículo. Para o Composto 7grupos de -20 mg/kg, -30 mg/kg e -50 mg/kg, o Composto 7 dissolvido no veículo foi administrado de modo intravenoso em uma dose de 20 mg/kg, 30 mg/kg e 50 mg/kg, respectivamente. Para todos os grupos, o volume de administração foi 5 ml/kg e a velocidade de administração foi de 5 ml/kg/minuto. A composição do veículo usado foi de 5% de dimetilsul- fóxido (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 25% de propilenoglicol (Kanto Chemical Co., Inc.)/20% de etanol (Junsei Chemical Co., Ltd.)/15% de hidroxipropil-β-ciclodextrina (Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd)/300 mM de glicina (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)/192 mM de hidróxido de sódio (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)/solução salina fisiológica (Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.). Os ratos foram eutanasiados mediante anestesia no dia após a administração final ao coletar sangue da aorta abdominal e, então, a autopsia foi realizada para coletar a coluna vertebral lombar, o osso de perna inferior e a mandíbula. A coluna vertebral lombar, o osso de perna inferior e a mandíbula foram armazenados em 70% de etanol. As densidades ós- seas minerais da coluna vertebral lombar (segunda até a quarta vértebra lombar), o osso de perna inferior e a mandíbula foram determinadas com o uso de um dispositivo de varredura de mineral de osso de raios X duplos (DCS-600EX, Aloka). Os resultados são mostrados nas Figuras 2 e 3.

[00154] Os dados são mostrados como valor principal + erro padrão (SE). O pacote pré-clínico SAS ver. 5.00 (SAS Institute Japan) foi usado para realizar as análises estatísticas a seguir. O nível de significân- cia foi definido como 5% em ambos os lados. Em relação à coluna vertebral lombar, ao osso de perna inferior e à densidade mineral óssea de mandíbula, comparação de múltiplos testes paramétricos Dunnett (*P < 0,05) foi realizada para os três grupos de dosagem do Composto 7 com o grupo de Controle de veículo como controle.

[00155] Conforme mostrado na Figura 2, em relação à densidade mineral óssea da coluna vertebral lombar e do osso de perna inferior, os grupos administrados com Composto 7 mostraram um efeito signifi- cante no aumento da densidade mineral óssea em uma maneira dependente de dose em comparação com o grupo de Controle de veículo. Adicionalmente, a porcentagem de aumento na densidade mineral óssea de coluna vertebral lombar para os três grupos administrados com o Composto 7: 20 mg/kg grupo, 30 mg/kg grupo, e 50 mg/kg grupo, em relação ao grupo de Controle de veículo foi de 16%, 21%, e 25%, respectivamente; e a porcentagem de aumento de densidade mineral óssea no osso de perna inferior foi de 7%, 16%, e 19%, respectivamente. Conforme mostrado na Figura 3, em relação à densidade mineral óssea de mandíbula, o grupo de 30 mg/kg do Composto 7 mostrou um efeito significante de aumento na densidade mineral óssea em relação ao grupo de Controle de veículo. A porcentagem de aumento em relação ao grupo de Controle de veículo foi de 7%.

[00156] Conforme descrito acima, uma vez que administração oral repetida de Composto 7 em ratos de OVX, um modelo patológico para osteoporose ocasionou uma aumento na densidade mineral óssea de fêmur e administração intravenosa repetida do Composto 7 ocasionou aumento na densidade mineral óssea da coluna vertebral lombar, osso de perna inferior e mandíbula em ratos normais, a exposição sistêmica do Composto 7 pode ser eficaz para prevenir, tratar, aprimorar e facilitar a recuperação de condições patológicas que exigem indução de anabolismo ósseo, aumento de massa óssea ou regeneração óssea, como osteoporose, diminuição de massa óssea em doença periodontal e defeito ósseo alveolar após a extração de dente. Adicionalmente, compostos representados pela fórmula (1) foram confirmados como tendo efeitos potentes semelhantes a PTH e alta estabilidade metabólica nos Exemplos de Referência 1 a 5 e os mesmos podem render um efeito de aumento de densidade mineral óssea através de anabolismo ósseo por ações similares a PTH. Portanto, os compostos representados pela fórmula (1) podem ser eficazes para prevenir, tratar, aprimorar e promover a recuperação de condições patológicas que exigem indução de anabolismo ósseo, aumento de massa óssea ou regeneração óssea, como osteoporose, diminuição de massa óssea em doença periodontal e defeito ósseo alveolar após a extração de dente.

EXEMPLO 3 EFEITOS SUPRESSORES DE COMPOSTO 7 EM DI-FERENCIAÇÃO TERMINAL DE CONDRÓCITOS DE ARTICULAÇÃO DE COELHO

[00157] Os ratos NZW (4 semanas de vida, Oriental Yeast Co., Ltd.) foram eutanasiados e, então, a cartilagem de articulação do osso de perna inferior foi coletado e transferido para um tubo de teste de 50 ml (Nippon Becton Dickinson Company). PBS (Nacalai Tesque, Inc.) que contém 1% de tripsina (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) foi adici-onado ao mesmo e o tecido mole foi digerido a 37°C durante uma hora. Isso foi seguido por centrifugação a 1.200 rpm durante cinco minu- tos, então, o sobrenadante foi removido e PBS (-) foi adicionado à suspensão do tecido de cartilagem. Esse foi centrifugado a 1.200 rpm durante cinco minutos, seguido por remoção do sobrenadante e lavado três vezes ao suspender em PBS (-). Esse foi centrifugado a 1.200 rpm durante cinco minutos e, então, a paletização de célula foi digerida por tratamento com DMEM (Life Technologies Japan, Ltd.) que contém 0,2% de colagenase de Tipo II (CLS-2, Worthington Biochemical Corp.) a 37°C durante três horas. O soro bovino fetal (Life Technologies Japão, Ltd.) foi adicionado a 10% v/v para interromper a reação e o mesmo foi vigorosamente pipetado com o uso de uma pipeta de 10 ml (Nippon Becton Dickinson Company) para isolar os condrócitos. Os mesmos foram centrifugados a 1.200 rpm durante cinco minutos, seguido por remoção do sobrenadante e lavados três vezes por suspensão em 10% de FCS que contém DMEM e os condrócitos foram inoculados em 1 x 104 células/cavidade em uma placa de cultura de cavidade 96 revestida por colágeno do tipo I (AGC TECHNO GLASS CO., LTD.). A troca de meio foi realizada três vezes por semana; e após as células terem alcançado confluência, as mesmas foram cultivadas em DMEM que contém 100 μg/ml de n hidrato de sal de fosfato de magnésio de ácido ascórbico L (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 10 mmol/l de pentahidrato β-glicerofosfato (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) e 10% de FCS. As condições a seguir foram usadas para cultivar as células e a coloração de fosfatase alcalina (cultivada durante 14 dias) e coloração vermelha alizarina (cultivada durante 21 dias) foram realizadas para avaliar a diferenciação terminal de condrócitos. 1) Controle 2) BMP-2100 de ng/ml 3) Composto 7de 10-7 mol/l 4) Composto 7de 10-6 mol/l 5) Composto 7 de 3x 10-6 mol/l 6) Composto 7de 10-5 mol/l 7) PTH (1-34) de 10-10 mol/l 8) PTH (1-34) de 10-9 mol/l 9) PTH (1-34) de 10-8 mol/l 10) PTH (1-34) de 10-7 mol/l

[00158] A coloração de fosfatase alcalina foi realizada ao descartar o meio e, então, lavar os condrócitos uma vez com 200 mmol/l de tampão Tris-HCl de pH 8,2, coloração das células de acordo com o protocolo fornecido com o kit de coloração de fosfatase alcalina (Kit I de Substrato de Fosfatase Alcalina Vermelha de Vetor, Vector Laboratories, Inc.) e tirar fotografias com um microscópio invertido (Nikon Corporation) (4x objetivo).

[00159] Como resultado, BMP-2 foi mostrado para aumento de atividade de fosfatase alcalina e tanto no Composto 7 e quanto em PTH(1-34) a atividade de fosfatase alcalina suprimida em uma maneira dependente de concentração (Figura 4A).

[00160] A coloração vermelha alizarina foi realizada ao descartar o meio e, então, lavar os condrócitos duas vezes com PBS, fixando as células com o uso de 100% de etanol (Wako Pure Chemical Industries Ltd.) durante 15 minutos, descartar o etanol e, então, coloração com 1% de S vermelha alizarina (Wako Pure Chemical Industries Ltd.) durante 15 minutos, seguido por lavagem com água destilada e fotografias foram tiradas com um microscópio invertido. Como resultado, BMP- 2 aumentou notavelmente a propriedade de coloração vermelha aliza- rina e promoveu a calcificação. Tanto o Composto 7 e quanto PTH(1- 34) suprimiram a propriedade de coloração de alizarina de uma maneira dependente de concentração e suprimiu a calcificação (Figura 4B).

EXEMPLO 4 EFEITOS DE COMPOSTO 7 EM SÍNTESE DE PROTE- OGLICANO POR CONDRÓCITOS DE ARTICULAÇÃO HUMANOS

[00161] Após a aquisição de condrócitos de articulação de humano criopreservados (Lote 2867, Cell Applications Inc.), as células foram descongeladas em um banho de água de 37°C, 15 ml de Meio Basal complementado com 10% de Suplemento de Crescimento (Meio de Crescimento, Cell Applications Inc.) foi colocado em um frasco de cultura T75 (CORNING, Corning Japan K. K.) para cultivar as células e trocado no próximo dia com 15 ml de Meio de Crescimento e as células foram cultivadas durante três dias. O Meio de Crescimento foi, então, removido e HBSS (Cell Applications Inc.) foi usado para lavar a camada de condrócito. Com adição de 1 ml de tripsina/solução de EDTA (Cell Applications Inc.), o mesmo foi deixado em espera em temperatura ambiente durante aproximadamente cinco minutos e con- drócitos foram separados do frasco. Com 10 ml de solução de Neutralização (Cell Applications Inc.) adicionada, hemocitômetro Bulker-Turk foi usado para determinar a contagem de célula e as células foram, então, transferidas para um tubo de teste de 15 ml para centrifugação (1.200 rpm durante cinco minutos, Tomy Seiko Co., Ltd.) para produzir uma paletização de condrócito. O sobrenadante foi descartado e as células foram colocadas em uma solução de 1,2% de alginato de sódio (25 mmol/l HEPES/150 mmol/l de solução de cloreto de sódio, pH 7,0) a 2 x 106 de células/ml. Isso foi extraído em uma seringa de 1 ml (Terumo Corporation) equipada com uma agulha de injeção 22G, cinco gotas foram adicionadas a cada cavidade de uma placa de 24 cavidades (Corning Japan K.K.) que contém 2 ml de 102 mmol/I solução de CaCl2 aquosa e a mesma foi deixada em espera durante cinco minutos para formar grânulos. De modo subsequente, a mesma foi lavada três vezes com uma solução de cloreto de sódio de 150 mmol/l e incubada durante um dia em Meio de Crescimento e o meio foi trocado com Meio Basal complementado com 1% de suplemento de Crescimento (Cell Applications Inc.). Nesse procedimento, os fatores a seguir foram adicionados ao meio e as células foram cultivadas durante 13 dias com três vezes de troca de meio realizada durante uma semana. 1) Controle 2) TGF-β1 de 10 ng/ml 3) PTH(1-34) de 10-8 mol/l 4) Composto 7 de 10-6 mol/l 5) Composto 7 de 10-5 mol/l

[00162] No 12° dia de cultura, o ácido sulfúrico rotulado como 35S- (PerkinElmer Japan Co., Ltd.) foi adicionado a um 370 kBq/cavidade e o meio foi coletado 24 horas após em um tubo de teste e armazenado a 4°C. Para o gel de alginato, uma solução de citrato de sódio de 55 mmol/l (Nacalai Tesque, Inc.; 1 ml/cavidade) foi adicionada e a mesma foi incubada a 37°C durante dez minutos para solução. A mesma foi coletada em um microtubo (Eppendorf AG) e, então, centrifugada (1.200 rpm, cinco minutos) para produzir uma paletização de condróci- to. A mesma foi suspensa ao adicionar 0,5 ml de 1 mg/ml de actinase E (Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.)-que contém 0,2 mol/l de Tris-HCl (Sigma-Aldrich Co. LLC.)/5 mmol/l de CaCl2 (Nacalai Tesque, Inc.) o pH de 7,8 para o microtubo. A suspensão foi transferida para uma placa de 12 cavidades (Corning Japan K.K.), vedada e, então, incubada ao longo da noite em um incubador de ovos (ESPEC CORP.) ajustado em 50°C. 0,4 ml dessa solução digerida foi transfer ida para um tubo de teste, 250 μl de uma solução de sulfato de condroitina aquosa de 0,1 mg/ml (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) e 2,5 ml cada de 2 mmol/l MgSO4 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 0,2 mol/l Tris-HCl (Sigma Aldrich)/5 mmol/l CaCl2 (Nacalai Tesque, Inc.) a pH 7,8, 1% de cloreto de cetilpiridínio (CPC, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)/20 mmol/l NaCl (Nacalai Tesque, Inc.) foram adicionados e foram incubados a 37°C durante três horas. Essa solução foi fil trada através de um filtro de vidro (GC-50, ADVANTEC) por sucção com o uso de uma bomba a vácuo e 1% de CPC/20 mmol/l de NaCl foi usado para lavar para remover ácido sulfúrico livre rotulado de 35S. O filtro de vidro foi transferido para a recipiente de contagem de cintilação de líquido, 5 ml de cintilador (Hionic-Fluor, PerkinElmer Japan Co., Ltd.) foram adicionados e a radioatividade foi medida em um contador de cintilação de líquido (TRI-CARB, PerkinElmer Japan Co., Ltd.).

[00163] O 0,1 ml restante da solução digerida foi usado para quanti-ficação de DNA. Para 1 ml de tampão incluído em um kit de quantificação de DNA (Cosmo Bio Co., Ltd.), 100 μl da solução de coloração e 450 μl da solução digerida foram adicionados juntamente e intensidades de fluorescências foram medidas a 458 nm com excitação a 356 nm (Infinite M200, Tecan Group Ltd.).

[00164] Uma curva padrão para a concentração de DNA foi produzida ao preparar soluções diluídas em série duas vezes da solução padrão (100 μg/ml) fixada ao kit. Uma equação de regressão linear foi produzida (Excel, Microsoft) a partir dos resultados de medição dessa curva padrão e a concentração de DNAs das amostras foi calculada.

[00165] A radioatividade de cada cavidade foi padronizada pelo conteúdo de DNA (DNA de cpm/μg).

[00166] Como resultado, o controle positivo, TGF-β1, mostrou uma radioatividade de 10 vezes do controle de veículo e aumentou a quan-tidade de síntese de proteoglicano. PTH(1-34) mostrou uma radioativi-dade de 6 vezes do controle de veículo. O Composto 7 mostrou uma radioatividade de 3 vezes do controle de veículo a 10-6 mol/l e uma ra-dioatividade de 10 vezes do controle de veículo a 10-5 mol/l (Figura 5). Esses resultados mostraram que o Composto 7 tem um efeito de pro-mover síntese de matriz de cartilagem em condrócitos de articulação humanos.

EXEMPLO 5 EFEITOS DE COMPOSTO 7 EM MODELO DE COELHOS COM MENISCO PARCIALMENTE REMOVIDO

[00167] Ratos macho de doze semanas de vida NZW (Oriental Yeast Co., Ltd.) foram aclimatados durante cinco dias e, então, sob anestesia de isoflurano, a pele lateral da articulação de joelho esquerda foi incisada e o ligamento colateral lateral e o ligamento sesamóide foram cirurgicamente removidos para expor o menisco lateral. O centro do menisco lateral foi excisado em uma largura de 3 a 4 mm para produzir um modelo de osteoartrite (Kikuchi T et al., Osteoarth Cart 1999; 4(2): 99-110). As pontas dos três tubos de polietileno (PE60, Nippon Becton Dickinson Company) conectadas às três bombas osmóticas (2ML1, Durect, Road Cupertino, CA, US) que foram incorporadas de modo subcutâneo no fêmur esquerdo foram colocadas na articulação e a solução de fármaco foi continuamente administrada à articulação de joelho. Cada bomba osmótica foi preenchida com qualquer um dentre 1) controle de veículo (50% de dimetilsulfóxido/50% de v/v salina fisio-lógica); 2) Composto 7 a 3,0 μg/ml; ou 3) Composto 7 a 30 μg/ml. No dia 7 após a cirurgia, os coelhos foram submetidos novamente à anestesia de isoflurano e a bomba inicial foi substituída por uma bomba osmótica preenchida com o mesmo agente farmacêutico que a bomba inicialmente transplantada. Os coelhos foram eutanasiados 14 dias após remover cirurgicamente uma porção do menisco. O fêmur e o osso de perna inferior foram coletados e os mesmos foram fixados por imersão em 20% de formalina tamponada neutra. Então, a construção crua na superfície da cartilagem de articulação foi colorida com o uso de tinta indiana (Figura 7). As imagens da estrutura de superfície do osso de perna inferior foram tiradas de um microscópio digital (VHX- 2000, Keyence Corporation), a área do local de lesão de tinta indiana positiva e a área do côndilo lateral completo foram determinadas e a proporção do local de lesão que ocupa o côndilo lateral completo foi calculada (Figura 6). Como resultado, o Composto 7 foi revelado para induzir a área do local de lesão de uma maneira dependente de dose. As fotografias da superfície de cartilagem de articulação do osso de perna inferior durante esse experimento são mostradas na Figura 4.

EXEMPLO 6 EFEITOS NA CARTILAGEM DE PLACA EPIFISÁRIA DURANTE QUATRO SEMANAS DE ADMINISTRAÇÃO ORAL REPE-TIDA EM RATOS NORMAIS

[00168] Os ratos fêmea RccHan: WIST obtidos a partir de Japan Laboratory Animals Inc. foram aclimatados durante pelo menos uma semana sob condições laboratoriais padrão de 20°C a 26°C e umidade de 30% a 70% e, então, usados em experimentos. Os ratos tiveram livre acesso à água de torneira e a uma dieta de roedor padrão (CE-2, Clea Japan Inc.) que contém 1,1% de cálcio, 1,0% de ácido fosfórico e 250 IU/100 g de vitamina D3.

[00169] Após a medição de peso do corpo para os ratos de seis meses de vida, os mesmos foram divididos em grupos para que o peso médio do corpo de cada grupo de dez ratos fosse igual. A partir do dia após a divisão de grupo, todos os ratos foram administrados uma vez ao dia repetidamente durante quatro semanas. O solvente (veículo) foi administrado de modo oral ao grupo de Controle de veículo. Para o grupo de 6mg/kg do Composto 7, o grupo 60 mg/kg do Composto 7 e o grupo de 600 mg/kg do Composto 7, o Composto 7 suspenso no veículo foi administrado oralmente em uma dose de 6 mg/kg, 60 mg/kg e 600 mg/kg, respectivamente. Para todos os grupos, o volume de administração foi de 2 ml/kg. O propilenoglicol (grade especial, Kanto Chemical Co., Inc.) foi usado para o veículo. Os ratos foram eutanasi- ados sob anestesia um dia após a administração final ao coletar sangue da aorta abdominal e, então, a autopsia foi realizada para coletar o fêmur. O fêmur foi fixado com o uso de uma solução neutra de formalina tamponada de 10% e após a desmineralização, as amostras de sessões de tecido incorporadas em parafina (hematoxilina-eosina com coloração) foram preparadas. As extremidades distais do fêmur das amostras produzidas foram observadas de modo histopatológico sob um microscópio de luz. Os resultados são mostrados na Tabela 1 e as imagens histológicas representativas são mostradas na Figura 8. TABELA 1 ALTERAÇÕES HISTOLÓGICAS NA CARTILAGEM DE PLACA EPIFI- SÁRIA FEMORAL APÓS QUATRO SEMANAS DE ADMINISTRAÇÃO ORAL REPETIDA EM RATOS NORMAIS.

[00170] Conforme mostrado na Tabela 1, os grupos de Composto 7 ocasionaram espessamento dependente de dose da cartilagem de placa epifisária femoral em comparação com o grupo de Controle de veículo. Quando a largura de uma cartilagem de placa epifisária representativa (indicada por uma seta) foi determinada a partir da imagem de tecido da Figura 8 com base na escala, a mesma foi d aproximadamente 390 μm para um indivíduo no grupo de Controle de veículo e de aproximadamente 2940 μm par um indivíduo no grupo de 600 mg/kg de Composto 7.

[00171] Conforme descrito acima, a administração oral repetida de Composto 7 ocasionou o espessamento da cartilagem de placa epifi- sária femoral de rato. Tais efeitos são devido à indução de anabolismo de cartilagem, supressão da diferenciação terminal de cartilagem ou promoção de crescimento de cartilagem por Composto 7 e, desse modo, administração oral de Composto 7 pode ser eficaz para tratar a os- teoartrite. Adicionalmente, os compostos representados pela fórmula (1) foram confirmados como tendo os efeitos potentes semelhantes a PTH e alta estabilidade metabólica nos Exemplos de Referência 1 a 5 e espera-se que os mesmos sejam eficazes para o tratamento de osteoar- trite através de anabolismo de cartilagem por ações similares a PTH.

EXEMPLOS DE REFERÊNCIA

[00172] O conteúdo da presente invenção será descrito em maiores detalhes pelos seguintes exemplos e o exemplo de teste; no entanto, a presente invenção não é limitada ao conteúdo dos exemplos e exemplo de teste. Todos os materiais de partida e reagentes foram obtidos a partir de fornecedores comerciais ou foram sintetizados usando-se métodos conhecidos. Espectros de 1H-RMN foram medidos usando-se Mercury 300 (fabricado por Varian), ECP-400 (fabricado por JEOL) ou 400-MR (fabricado por Varian) com ou sem Me4Si como o padrão interno (s = unipleto, d = dupleto, t = tripleto, brs = unipleto amplo, m = multipleto). Medição de espectrometria de massa foi realizada usando- se um espectrômetro de massa, ZQ2000 (fabricado por Waters), SQD (fabricado por Waters) ou 2020 (fabricado por Shimazu).

EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1

[00173] 1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3-(trifluorometóxi)fenil)-4-oxo-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5- dimetilimidazolidina-2,4-diona (Composto 1) REAÇÃO (1-1)

[00174] A uma solução de 4-bromo-3,5-dimetilanilina (3,47 g, 17,4 mmoles) e di-isopropiletilamina (5,3 ml, 30,4 mmoles) em DMI (13 ml), ácido 2-bromoisobutírico (3,86 g, 23,1 mmoles) foi adicionado a tem-peratura ambiente. A mistura foi agitada a 100°C po r uma hora. E en- tão 2-bromoisobutirato (496 mg, 2,97 mmoles) e di-isopropiletilamina (0,8 ml, 4,59 mmoles) foi adicionada e a mistura foi agitada a 100°C por uma hora.

[00175] Metanol (52 ml) e uma solução de hidróxido de sódio aquosa a 5 N (52 ml, 260 mmoles) foram adicionados à mistura de reação a temperatura ambiente, e então essa mistura foi agitada a 75°C por 1,5 horas. A mistura de reação foi resfriada, seguida por adição de água é ajuste do pH para 5 usando-se uma solução de sulfato de hidrogênio de potássio aquosa a 1 N, e então foi extraída usando-se acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água, então foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, e foi concentrada para fornecer ácido 2- ((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)-2-metil propanoico como um produto bruto (5,79 g).

[00176] MS(ESI) m/z = 286, 288 (M+H)+ REAÇÃO 1-2

[00177] A uma mistura de ácido 2-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)- 2-metil propanoico (5,79 g do composto obtido a partir da Reação 1-1) em diclorometano (62 ml) e ácido acético (62 ml), cianato de sódio (5,03 g, 59,8 mmoles) foi adicionado a temperatura ambiente. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por três horas. Uma solução saturada de carbonato de hidrogênio de sódio (400 ml) foi adicionada para ajustar o pH para 7-8 usando-se um hidróxido de sódio aquoso a 5 N, e essa mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O sólido obtido foi lavado sequencialmente com acetato de etila-hexano e então com diclorometano-hexano para se obter 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona (3,80 g, 66%).

[00178] MS(ESI) m/z = 311, 313 (M+H)+ (REAÇÃO 1-3)

[00179] Uma mistura de 8-(vinilsulfonil)-1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5] decano (431 mg, 1,85 mmoles), 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-5,5-dime- tilimidazolidina-2,4-diona (575 mg, 1,85 mmoles), tris(dibenzilidina- acetona)paládio(0) (508 mg, 0,55 mmol), ácido tri-terc-butilfosfina te- trafluorobórico (165 mg, 0,55 mmol), e metildicicloexilamina (2,1 ml, 9,25 mmoles) em N-metil-2-pirrolidona (18,5 ml) foi agitada sob atmosfera de nitrogênio a 110°C por duas horas. A mistura de reação foi resfriada, foi bruscamente resfriada com água, e então foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de amino-sílica-gel (diclorometano - metanol) para fornecer (E)-1-(4-(2- (1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decan-8-ilsulfonil)vinil)-3,5-dimetilfenil)-5,5- dimetilimidazolidina-2,4-diona (584 mg, 68%).

[00180] MS(ESI) m/z = 464 (M+H)+ REAÇÃO 1-4

[00181] A uma solução de (E)-1-(4-(2-(1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5] de- can-8-ilsulfonil)vinil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona (1,2 g, 2,58 mmoles) em tetraidrofurano (26 ml), uma solução de ácido clrorídrico aquosa a 2 N (26 ml, 52 mmol) foi adicionada gota a gota no período de dez minutos. A mistura foi agitada a 60°C por duas horas. A mistura de reação foi resfriada, seguido por ajuste de seu pH a 7 usando-se uma solução de hidróxido de sódio aquosa a 2 N, e essa mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura, foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna de sílica-gel (diclorometano - acetato de etila) para fornecer (E)-1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxopipedridin-1-il)sulfonil)vinil)fenil)- 5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona (998 mg, 92%).

[00182] MS(ESI) m/z = 420 (M+H)+ REAÇÃO 1-5

[00183] A uma solução de (E)-1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxopipedridin- 1-il)sulfonil)vinil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona (994 mg, 2,37 mmoles) em metanol (24 ml), cianeto de potássio (188 mg, 2,84 mmoles) e acetato de amônio (237 mg, 3,08 mmoles) foram adicionados a temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 60-70°C por três horas. A mistura de reação foi resfriada, foi concentrada sob pressão reduzida, e então foi diluída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (diclorometano - acetato de etila) para fornecer (E)-4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioxoimidazolidin -1-il)-2,6-dimetilstyril)sulfonil)piperidina-4-carbonitrila (681 mg, 68%).

[00184] 1H-RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 1,3 (6H, s), 1,7 (2H, m), 2,0 (2H, m), 2,3 (6H, s), 2,7 (2H, s), 2,9 (2H, m), 3,4 (2H, m), 6,9 (1H, d, J = 15,9 Hz), 7,1 (2H, s), 7,4 (1H, d, J = 15,9 Hz), 11,2 (1H, brs) REAÇÃO 1-6

[00185] A uma solução de (E)-4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioxoi- midazolidin-1-il)-2,6-dimetilstyril)sulfonil)piperidina-4-carbonitrila (675 mg, 1,50 mmoles) em metanol (7,5 ml) e dimetilsulfóxido (0,195 ml) a temperatura ambiente, uma solução de hidróxido de sódio aquosa a 2 N (1,6 ml, 1,6 mmoles) foi adicionada e então uma solução de 30% peróxido de hidrogênio aquosa (0,2 ml, 1,95 mmoles) foi lentamente adicionada gota a gota. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por uma hora. Acetato de etila, hexano, e uma solução de cloreto de amônio aquosa saturada foram adicionados à mistura de reação. O sólido foi coletado por filtração, foi lavado e foi seco para fornecer (E)- 4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioxoimidazolidina-1-il)-2,6- dimetilstiril)sulfonil)piperidina-4-carboxamida (498 mg, 72%).

[00186] MS(ESI) m/z = 464 (M+H)+ REAÇÃO 1-7

[00187] Uma mistura de (E)-4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioxoimi- dazolidina-1-il)-2,6-dimetilstiril)sulfonil)piperidina-4-carboxamida (1,3 g, 2,8 mmoles) e hidróxido de paládio sobre carbono (20% de Pd) (molhado com cerca de 50% água) (1,3 g) em metanol(21 ml) e dimetil- formamida (7 ml) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio a temperatura ambiente por quatro horas. A mistura de reação foi filtrada e foi lavada, e então o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer 4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioxoimidazolidin-1-il)-2,6- dimetilfenetil)sulfonil)piperidin-4-carboxamida (998 mg, 77%).

[00188] MS(ESI) m/z = 466 (M+H)+ REAÇÃO 1-8

[00189] A uma solução de 4-amino-1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioxoi- midazolidin-1-il)-2,6-dimetilfenetil)sulfonil)piperidin-4-carboxamida (120 mg, 0,258 mmol), ácido 4-fluoro-3-(trifluorometóxi)benzoico (69 mg, 0,309 mmol), e di-isopropiletilamina (0,09 ml, 0,516 mmol) em dimetil- formamida (2,5 ml), O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio- hexafluorofosfato (HATU) (118 mg, 0,309 mmol) foi adicionada. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1,5 horas. A mistura de reação foi bruscamente resfriada com água, e então foi extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, foi lavada com sulfato de sódio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer 1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioxoimidazolidin-1-il)-2,6- dimetilfenetil)sulfonil)-4-(4-fluoro-3-(trifluorometóxi)benzamida)piperidi- na-4-carboxamida (150 mg, 67%).

[00190] MS(ESI) m/z = 672 (M+H)+ REAÇÃO 1-9

[00191] A uma solução mista de 1-((4-(5,5-dimetil-2,4-dioxoimida- zolidin-1-il)-2,6-dimetilfenetil)sulfonil)-4-(4-fluoro-3-(trifluorometóxi)ben- zamida)piperidina-4-carboxamida (150 mg, 0.223 mmol) em terc-buta- nol (2,5 ml) e etanol (2,5 ml), terc-butóxido de potássio (75 mg, 0,670 mmoles) foi adicionada a 0°C. A mistura foi agitada sob atmosfera de nitrogênio a 50°C por 1,5 horas. A mistura de reação foi resfriada, foi diluída com água, foi bruscamente resfriada com uma solução de cloreto de amônio aquosa saturada, e então foi extraída com diclorome- tano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (diclorometano-metanol) para fornecer 1-(4-(2-((2-(4-fluoro-3- (trifluorometóxi)fenil)-4-oxo-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfo- nil)etil)-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona 118 mg, 81%).

[00192] MS(ESI) m/z = 654 (M+H)+. 1H-RMN (400MHz, CD3OD) δ 1,40 (6H, s), 1,71-1,80 (2H, m), 2,00-2,08 (2H, m), 2,43 (6H, s), 3,22 (4H, s), 3,47-3,57 (2H, m), 3,80-3,88 (2H, m), 7,01 (2H, s), 7,50-7,57 (1H, m), 7,97-8,04 (1H, m), 8,05-8,12 (1H, m).

[00193] Os seguintes compostos dos Exemplos de Referência foram sintetizados por operações similares àquelas das Reações 1-8 e 1-9 no Exemplo de Referência1, usando-se materiais de partida de ácido carboxílico, reagentes, e solventes apropriados. COMPOSTO 2-5

EXEMPLO DE REFERÊNCIA 2 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona (Composto 6) REAÇÃO 2-1

[00194] Uma mistura de 2-(3-(trifluorometil)fenil)-8-(vinilsulfonil)- 1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-4-ona (150 mg, 0,387mmol) sintetizada de acordo com o método descrito nos Esquemas 2, 3, e 12 de WO 2010/126030(A1), 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-5,5-dimetilimidazolidina- 2,4-diona (169 mg, 0,542 mmol), bis(dibenzilidinaacetona) paládio (45 mg, 0,077 mmol), ácido tri-terc-butilfosfina tetrafluorobórico (22 mg, 0,077 mmol), e metildicicloexilamina (0,123 ml, 0,581 mmol) em N- metil-2-pirrolidona (0,97 ml) foi agitada a 100°C por uma hora sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada, foi bruscamente resfriada com água, e então foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (acetato de etila - hexano) para fornecer (E)-1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo- 2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil) vinil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona (197 mg, 82%).

[00195] MS(ESI) m/z = 618 (M+H)+ REAÇÃO 2-2

[00196] Uma mistura de (E)-1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(triflu- orometil)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)vinil)fenil)- 5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona (195 mg, 0,316 mmol) e hidróxido de paládio/carbono (20% de Pd) (molhado com cerca de 50% água) (195 mg, 0,139 mmol) em 2,2,2-trifluoroetanol (6 ml) foi agitada a temperatura ambiente for 14 horas sob uma atmosfera de hidrogênio. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (acetato de etila - hexano) para fornecer 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluoro- metil)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5] deca-1-en-8-il)sulfonil)etil) fenil)-5,5- dimetilimidazolidina-2,4-diona (121 mg, 62%).

[00197] MS(ESI) m/z = 620 (M+H)+. 1H-RMN (400MHz, CD3OD) δ 1,40 (6H, s), 1,72-1,81 (2H, m), 2,00-2,10 (2H, m), 2,44 (6H, s), 3,22 (4H, s), 3,50-3,58 (2H, m), 3,80-3,88 (2H, m), 7,01 (2H, s), 7,72-7,79 (1H, m), 7,88-7,94 (1H, m), 8,16-8,23 (1H, m), 8,31 (1H, s). EXEMPLO DE REFERÊNCIA 3

[00198] 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5- dimetilimidazolidina-2,4-diona (Composto 7) REAÇÃO 3

[00199] Com o uso de materiais de partida e solventes apropriados, 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona (Composto 7) foi sintetizado por operações similares àquelas descritas no Exemplo de Referência 2.

[00200] MS(ESI) m/z = 636 (M+H)+. 1H-RMN (400MHz, CDCl3) δ 1,47 (6H, s), 1,70-1,78 (2H, m), 2,10-2,19 (2H, m), 2,40 (6H, s), 3,003,07 (2H, m), 3,19-3,25 (2H, m), 3,45-3,53 (2H, m), 3,81-3,88 (2H, m), 6,94 (2H, s), 7,35 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,73 (1H, brs), 7,93 (2H, d, J = 8,0 Hz), 9,37 (1H, brs). EXEMPLO DE REFERÊNCIA 4

[00201] 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4] no- nano-2,4-diona (Composto 8) REAÇÃO 4-1

[00202] A uma mistura de ciclopentanona (42 mg, 0,500 mmol) e 4- bromo-3,5-dimetilanilina (100 mg, 0,500 mmol) em ácido acético (0,5 ml), cianeto de trimetilsilila (0,063 ml, 0,500 mmol) foi adicionado a temperatura ambiente. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1,5 horas sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi bruscamente resfriada com 28% de amônia aquosa (1 ml), foi diluída com água e foi extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer 1-((4-bromo- 3,5-dimetilfenil)amino)ciclopentanecarbonitrila como um produto bruto (152 mg).

[00203] 1H-RMN (400MHz, CDCl3) δ 1,83-1,92 (4H, m), 2,07-2,15 (2H, m), 2,33-2,42 (2H, m), 2,37 (6H, m), 3,71 (1H, brs), 6,56 (2H, s) REAÇÃO 4-2

[00204] A uma solução de 1-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino) ciclo- pentanecarbonitrila (145 mg, 0,495 mmol) in diclorometano (5 ml), 2,2,2-tricloroactilisocianato (0,070 ml, 0,593 mmol) foi adicionada a temperatura ambiente. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por uma hora sob uma atmosfera de nitrogênio.

[00205] Trietilamina (0,103 ml, 0,742 mmol), água (0,045 ml), e metanol (0,10 ml) foram adicionados e a mistura foi submetida a refluxo por 1,5 horas sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada, foi seguida por diluição com água e ajuste de seu pH para 5 usando-se uma solução de ácido clorídrico aquosa a 1 N, e então foi extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)- 4-imino-1,3-diazaespiro[4.4]nonan-2-ona como um produto bruto.

[00206] MS(ESI) m/z = 336, 338 (M+H)+ REAÇÃO 4-3

[00207] Uma mistura de 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-4-imino-1,3- diazaespiro[4.4]nonan-2-ona (o produto bruto obtido na reação anterior) em ácido acético (1,0 ml) e água (0,25 ml) foi agitada por 1,5 horas a 65°C sob uma atmosfera de nitrogênio. Depois de o utra adição de ácido acético (1,0 ml) e água (0,25 ml), a mistura foi agitada por 17 horas a 65°C sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada, foi seguida por diluição com água e ajuste de seu pH para 8 usando-se uma solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada, e foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (acetato de etila - hexano) para fornecer 1-(4-bromo-3,5-dimetilfenil)-1,3-diazaespiro[4.4]nonano- 2,4-diona (121 mg).

[00208] MS(ESI) m/z = 337, 339 (M+H)+ REAÇÃO 4-4

[00209] Com o uso de materiais de partida e solventes apropriados, 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5] zdeca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaespiro[4.4]nonano-2,4- diona (Composto 8) foi obtido por operações similares àquelas descritas no Exemplo de Referência 2.

[00210] MS(ESI) m/z = 662 (M+H)+. 1H-RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 1,36-1,44 (2H, m), 1,60-1,70 (4H, m), 1,82-1,91 (2H, m), 1,91-2,06 (4H, m), 2,38 (6H, s), 3,01-3,09 (2H, m), 3,22-3,30 (2H, m), 3,30-3,42 (2H, m), 3,70-3,77 (2H, m), 7,03 (2H, s), 7,57 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,14 (2H, d, J = 8,4 Hz). EXEMPLO DE REFERÊNCIA 5

[00211] 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-8-metil-1,3,8-triazaes- piro[4.5]decano-2,4-diona (Composto 9) REAÇÃO 5-1

[00212] Com o uso de éster de terc-butila de ácido 4-oxopiperidina- 1-carboxílico como um material de partida, e o uso de um solvente apropriado, éster de terc-butila de ácido 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2- (4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8- il)sulfonil)etil)fenil)-2,4-dioxo-1,3,8-triazaespiro[4.5]decan-8-carboxílico foi obtido por operações similares àquelas descritas no Exemplo de Referência 4. MS(ESI) m/z = 777 (M+H)+. REAÇÃO 5-2

[00213] A uma solução mista de éster de terc-butila de ácido 1-(3,5- dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5] deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-2,4-dioxo-1,3,8-triazaespiro[4.5]decan- 8-carboxílico (11,7 mg, 0,015 mmol) em diclorometano (0,13 ml), ácido trifluoroacético (0,05 ml, 0,673 mmol) foi adicionado a temperatura ambiente. A mistura foi colocada sob uma corrente de nitrogênio, e foi agitada a temperatura ambiente por uma hora. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para se obter sal de ácido 1-(3,5- dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5] deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]decan-2,4-diona 2 trifluoroacético (13,6 mg).

[00214] MS(ESI) m/z = 677 (M+H)+. REAÇÃO 5-3

[00215] A uma mistura de sal de ácido 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2- (4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil) etil)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]decan-2,4-diona 2 trifluoroacético (21,1 mg, 0,022 mmol) e ácido fórmico (0,033 ml), uma solução de 37% de formaldeído aquosa (0,055 ml) foi adicionada. A mistura foi colocada sob uma corrente de nitrogênio, e foi agitada por três horas enquanto se aquecendo a 80°C. A mistura de reação foi concen trada, e o resíduo resultante foi diluído com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com uma solução de hidróxido de sódio aquosa diluída, foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi submetido a cromatografia de coluna (diclorometano - metanol) para a purificação para se obter 1- (3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil-8-metil-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca- no-2,4-diona (4,5 mg, 30%).

[00216] MS(ESI) m/z = 691 (M+H)+. 1H-RMN (400MHz, CD3OD) δ 1,76-1,84 (2H, m), 1,92-2,02 (2H, m), 2,02-2,12 (4H, m), 2,38 (3H, s), 2,46 (6H, s), 2,81-2,88 (2H, m), 2,92-3,02 (2H, m), 3,23 (4H, s), 3,513,60 (2H, m), 3,72-3,80 (2H, m), 7,01 (2H, s), 7,48 (2H, d, J = 8,0 Hz), 8,10 (2H, d, J = 8,0 Hz). EXEMPLO DE REFERÊNCIA 6

[00217] 5-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-2-oxa-5,7-diazaspiro [3.4]octano-6,8-diona (Composto 10) REAÇÃO 6

[00218] Com o uso de oxetano-3-ona como um material de partida, e o uso de solventes apropriados, 5-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4- (trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil) fenil)-2-oxa-5,7-diazaespiro[3.4]octano-6,8-diona foi obtida por operações similares àquelas do Exemplo de Referência 4.

[00219] MS(ESI) m/z = 650 (M+H)+. 1H-RMN (400MHz, CDCl3) δ 1,69-1,77 (2H, m), 2,12-2,22 (2H, m), 2,45 (6H, s), 3,03-3,11 (2H, m), 3,22-3,29 (2H, m), 3,46-3,53 (2H, m), 3,84-3,91 (2H, m), 4,86 (2H, d, J = 7,2 Hz), 5,03 (2H, d, J = 7,2 Hz), 7,07 (2H, s), 7,35 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,98 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,56 (1H, s), 10,34 (1H, s). EXEMPLO DE REFERÊNCIA 7

[00220] 4-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-4,6-diazaspiro[2.4] heptano-5,7-diona (Composto 11) REAÇÃO 7-1

[00221] Uma mistura de 2-bromo-5-iodo-1,3-dimetilbenzeno (300 mg, 0,965 mmol), ácido 1-aminociclopropano carboxílico (195 mg, 1,93 mmoles), iodeto de cobre (I) (37 mg, 0,194 mmol), e diazabiciclounde- ceno (0,50 ml, 3,35 mmol) em dimetilacetamida (2,6 ml) foi agitada a 120°C por três horas sob uma atmosfera de nitrogêni o. A mistura de reação foi purificada por cromatografia de coluna de sílica-gel (Wakosil C18, acetonitrila - água (0,1% de ácido fórmico)) para fornecer ácido 1- ((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino)ciclopropano carboxílico (219 mg, 80%).

[00222] MS(ESI) m/z = 284, 286 (M+H)+. REAÇÃO 7-2

[00223] A uma mistura de ácido 1-((4-bromo-3,5-dimetilfenil)amino) ciclopropano carboxílico (198 mg, 0,697 mmol) em ácido acético (3 ml) e diclorometano (1,5 ml), cianato de potássio (424 mg, 5,23 mmol) foi adicionado a temperatura ambiente. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por uma hora, e então foi agitada a 60°C por duas horas. Uma solução de carbonato de hidrogênio de sódio aquosa saturada foi adicionada para ajustar pH para 8, e essa mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de sódio anidro, e então foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (acetato de etila - hexano) para fornecer 4-(4-bromo-3,5- dimetilfenil)-4,6-diazaespiro[2.4]heptano-5,7-diona (49 mg, 23%).

[00224] MS(ESI) m/z = 309, 311 (M+H)+. REAÇÃO 7-3

[00225] Com o uso de materiais de partida e solventes apropriados, 4-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-4,6-diazaespiro[2.4]heptano-5,7- diona (Composto 11) foi obtida por operações similares àquelas de Exemplo de Referência 2.

[00226] MS(ESI) m/z = 634 (M+H)+. 1H-RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 0,99-1,03 (2H, m), 1,19-1,27 (4H, m), 1,58-1,64 (2H, m), 1,81-1,90 (2H, m), 2,35 (6H, s), 2,99-3,04 (2H, m), 3,22-3,29 (2H, m), 3,67-3,73 (2H, m), 6,95 (2H, s), 7,56 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,12 (2H, d, J = 8,4 Hz). EXEMPLO DE REFERÊNCIA 8

[00227] 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3- diazaspiro[4.4]nonano-2,4-diona (Composto 12) REAÇÃO 8

[00228] Com o uso de materiais de partida e solventes apropriados, 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaespiro [4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaespiro[4.4]nonano-2,4- diona foi obtida por operações similares àquelas de Exemplo de Referência 2.

[00229] MS(ESI) m/z = 646 (M+H)+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,40-1,48 (2H, m), 1,62-1,71 (4H, m), 1,88-1,97 (2H, m), 1,97-2,08 (4H, m), 2,41 (6H, s), 3,03-3,10 (2H, m), 2,29-3,34 (2H, m), 3,38-3,47 (2H, m), 3,72-3,79 (2H, m), 7,06 (2H, s), 7,84 (1H, dd, J = 7,6, 7,6 Hz), 8,02 (1H, d, J = 7,6 Hz), 8,33 (1H, d, J = 7,6 Hz), 8,38 (1H, s).

EXEMPLOS DE TESTE DE REFERÊNCIA

[00230] Para os compostos da presente invenção, resultados de teste sobre a atividade de produção de cAMP via o PTH1R de ser humano, atividade de produção de cAMP via o PTH1R no rato, estabilidade metabólica usando-se microssomas de fígado de ser humano, estabilidade metabólica usando-se hepatócito de rato, e ação calcêmi- ca em modelos de ratos TPTX são mostrados nos Exemplos de Teste de Referência 1 a 5, respectivamente. Compostos descritos na WO 2010/126030A1, que são mostrados na Tabela 3, foram usados como compostos comparativos.

EXEMPLO DE TESTE DE REFERÊNICA 1: MEDIÇÃO DE ATIVIDADE DE SINAL DE CAMP IN VITRO DE COMPOSTOS POR MEIO DO PTH1R HUMANO PEPTÍDEOS

[00231] PTH de ser humano (1-34) e calcitonina foram adquiridos a partir de Peptide Institute, Inc. (Osaka, Japão), dissolvidos em ácido acético de 10 mM a 1 mM e armazenados em um congelador a -80°C CULTURA DE CÉLULA

[00232] As células foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementadas com 10% de soro bovino fetal (Hyclone), 100 unidades/ml de penicilina G e 100 μ g/ml de sulfato de estreptomicina (Invitrogen Corp) a 37°C em uma atmosfera umidificada contendo 5% de CO2.

[00233] Análise de transdução de sinal de cAMP utilizava células de LLC-PK1 que não expressa o PTH1R, e células de HKRK-B7, que é, células de LLC-PK1 que ultra expressam o PTH1R ser humano a 9,5 x 105 receptores/célula (Takasu e outros, J. Osso. Miner. Res. 14:11-20, 1999).

ESTIMULAÇÃO DE CAMP

[00234] As células de HKRK-B7 ou LLC-PK1 foram semeadas em uma placa de 96 cavidades 1 x 105 células/cavidade e foram incubadas de um dia para a noite. No dia seguinte, 50 μ l de tampão de ensaio de cAMP (DMEM, IBMX a 2 mM, 0,2 mg/ml de albumina de soro bovino, 35 mM Hepes-NaOH, pH 7,4) contendo PTH de ser humano (1-34) ou cada composto foi adicionado e a placa foi colocada em uma incubadora a 37°C. As células foram incubadas por 20 minutos. Depois da remoção o meio, as células foram lavadas uma vez com 100 μ l de tampão de ensaio de cAMP. A placa foi colocada sobre pó de gelo seco para congelar as células e então foi removida do gelo seco. As células foram lisadas com 40 μ l de HCl a 50 mM e foram congeladas novamente sobre gelo seco. A quantidade de cAMP intracelular produzida foi medida usando-se um kit cAMP EIA comercialmente disponível (sistema Biotrack cAMP EIA, GE health care).

CÁLCULO DE 20% DE CONCENTRAÇÃO EFICAZ (EC20) E 50% DE CONCENTRAÇÃO EFICAZ (EC50) NA MEDIAÇÃO DE CAPACIDADE DE INDUÇÃO DE CAMP IN VITRO

[00235] Análises foram realizadas usando-se uma equação de curva de dose-resposta de forma S de gradiente variável. A atividade de sinalização de cAMP de PTH humano (1-34) a 100 nM foi definida como 100%, e a concentração em que cada composto mostra 20% ou 50% de atividade de sinalização de cAMP foi calculada como EC20 ou EC50.

[00236] Os resultados obtidos com células de HKRK-B7 são mostrados na Tabela 4.

[00237] O grau de resposta de cAMP em células de LLC-PK1 era mais baixo do que o grau em células de HKRK-B.

EXEMPLO DE TESTE DE REFERÊNCIA 2: MEDIÇÃO DA ATIVIDADE DE SINALIZAÇÃO DE CAMP IN VITRO DOS COMPOSTOS IN VITRO VIA O PTH1R DO RATO

[00238] Ao invés de células de HKRK-B7, células de LLC-PK46_ RATO_PTH1R que ultra expressam PTH1R no rato, que foram estabe-lecidas em Chugai Pharmaceutical, foram usadas para tomar medições de um modo similar ao Exemplo de Teste de Referência 1.

[00239] Os resultados obtidos por uso de células de LLC-PK46_ RATO_PTH1R são mostrados na Tabela 5.

[00240] Os valores de EC20 de atividade de sinalização de cAMP in vitro do receptor de PTH1 no rato tinham uma boa correlação com aqueles de PTH1R de ser humano. Uma boa correlação entre rato e ser humano foi também vista para os valores de EC50.

EXEMPLO DE TESTE DE REFERÊNCIA 3: EXAME DE ESTABILIDADE METABÓLICA COM O USO DE MICROSSOMAS DE FÍGADO DE SER HUMANO

[00241] No tampão de fosfato a 0,1 M (pH7,4), microssomas de fígado de ser humano foram incubados com um composto ou um exemplo comparativo na coexistência de NADPH a 37°C por uma quantidade especificada de tempo. A concentração do composto de origem em cada tempo de reação foi medida usando-se LC/MS/MS e depuração inerente (μL/min/mg de proteína) foi calculada a partir da inclinação do tempo de reação versus taxa residual. CONDIÇÕES DE ENSAIO Concentração de composto: 1 μM Microssoma: 0,5 mg/ml NADPH: 1 mM Tempo de reação: 0, 5, 15 e 30 minutos

[00242] Os resultados são mostrados na Tabela 6. Os compostos 1 a 11 mostraram alta estabilidade metabólica em relação aos micros- somas de fígado humano em comparação com os Exemplo Comparativos 1 a 6. TABELA 6

EXEMPLO DE TESTE DE REFERÊNCIA 4: EXAME DE ESTABILIDADE METABÓLICA COM O USO DE HEPATÓCITO DE RATO

[00243] As células de fígado foram preparadas a partir do fígado de ratos (SD, fêmeas) por um método de perfusão de colagenase. Um composto dos Exemplos de Referência ou um Exemplo comparativo foi adicionado, e esse foi incubado a 37°C por uma quantidade especificada de tempo, seguida por adição de uma solução de parada de reação. A concentração do composto de origem em cada tempo de reação foi medida usando-se LC/MS/MS, e depuração inerente (μL/106 células/min) foi calculada a partir da inclinação do tempo de reação versus taxa residual. CONDIÇÕES DE ENSAIO Concentração celular: 1 x 106 células/ml Concentração de composto: 1 μM Meio: Meio E de Williams Tempo de reação: 0, 15, 30, 60, 120 e 240 minutos Solução de interrupção de reação: acetonitrila/2-propanol (4/6, v/v)

[00244] Os resultados são mostrados na Tabela 7. A estabilidade metabólica de hepatócito de rato dos Compostos 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 e 11 aumentou em comparação aos Exemplos Comparativos 1, 2, 3, 5 e 6.

EXEMPLO DE TESTE DE REFERÊNCIA 5: AÇÃO CALCÊMICA NO MODELO DE RATO TPTX

[00245] Ratos com quatro semanas de idade fêmeas Crl:CD(SD) foram obtidos a partir de Charles River Japão (Atsugi Breeding Center), e foram aclimados a condições de laboratório padrão de 20-26°C e de 35-75% de umidade por uma semana. Aos ratos foram dados água da torneira e foram alimentados ad libitum com comida de roedor padrão (CE-2) (CLEA Japão, Inc.) contendo 1,1% de cálcio, 1,0% de ácido fosfórico, e 250 IU/100 g de vitamina D3.

[00246] TPTX foi realizado em ratos com cinco semanas de idade. Alguns dos indivíduos foram submetidos a operação de simulação (Simulação). Indivíduos cuja concentração de Ca no soro era menos do que 8 mg/dL no quarto dia depois da operação foram selecionados quanto ao uso como ratos TPTX. No quinto dia depois da operação, os ratos foram distribuídos em 8 grupos TPTX e um grupo Simulação (n=5, cada grupo) com base em seu peso de corpo e concentração de Ca no soro medidas no quarto dia depois da operação. O solvente sozinho foi oralmente administrado ao grupo Simulação e ao grupo TPTX-Veículo em um volume de 10 ml/kg. Cada artigo de teste foi oralmente administrado individualmente a cada grupo de artigo de teste de TPTX por sua dissolução em um solvente em uma dose de 30 mg/10 ml/kg. A composição de solvente era de 10% de dimetilsulfóxi- do (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 10% de Cremophor EL (Sigma-Aldrich Japão LLC), 20% hidroxipropil-beta-ciclodextrina (Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd.), glicina (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) e o pH foi ajustado para 10. Imediatamente depois da administração de cada amostra, pré-coleta de sangue foi realizada e coleta de sangue também foi realizada a 2, 6, 10, e 24 horas depois da administração para medir a concentração de Ca no soro. Cada coleta de sangue foi realizada a partir da veia jugular sob anestesia por inalação de isoflurano.

[00247] Medição de Ca no soro: Soro obtido por centrifugação a partir do sangue coletado foi medido por uso de um analisador automático TBA-120FR (Toshiba Medical Systems Corporation).

[00248] Para análise dos estudos de animais, dados são mostrados como média ± erro padrão (SE). Análises estatísticas foram realizadas por um teste desemparelhado da SAS Preclinical Package (Ver.5.00.010720, SAS Institute Japan, Tóquio, Japão). Um valor de p de <0,05 foi con-siderado como estatisticamente significativo. Estatisticamente signifi-cativo de cada grupo de artigo de teste em comparação com o grupo TPTX-Veículo, o grupo de Exemplo comparativo 1, e o grupo de Exemplo comparativo 2 foi mostrado como #, * e f respectivamente.

[00249] O pré-valor para a concentração de Ca no soro era de 9,9 mg/dl para o grupo Simulação, e de 5,3-6,2 mg/dl para cada um dos grupos TPTX. As concentrações de Ca no soro para cada composto até 24 horas depois da administração são mostradas no Fig. 9 como a quantidade média da mudança do pré-valor. Além do mais, para todos os compostos, a concentração de Ca no soro atingiu um pico a seis horas depois de administração ou dez horas depois de administração de cada composto.

[00250] Os compostos 6, 7 e 8 que têm alta estabilidade metabólica de hepatócito de rato mostraram grandes mudanças positivas do pré- valor, e sua administração oral mostrou fortes efeitos sobre a ação calcêmica. Por outro lado, o Composto 1 e os Exemplos comparativos 1 e 2 que têm baixa estabilidade metabólica de hepatócito de rato mostrou mudanças positivas menores do pré-valor em comparação com os Compostos 6, 7, e 8. Em particular, os Compostos 7 e 8 eram estatisticamente significativos em comparação com os Exemplos com-parativos 1 e 2.

[00251] Adicionalmente, os Compostos 6, 7 e 8 que têm alta estabilidade metabólica hepatócito de rato mostravam valores máximos individuais de 7,8 a 8,5 mg/dl a seis ou dez horas depois de administração, e alcançavam a faixa alvo terapêutica de concentração de Ca no soro de 7,6 a 8,8 mg/dl em paciente com hipoparatiroidismo. Por outro lado, essa faixa alvo terapêutica poderia não ser alcançada a qualquer um dos tempos de medição para o Composto 1, e os Exemplos comparativos 1 e 2 que têm baixa estabilidade metabólica de hepatócito de rato.

[00252] A partir dos resultados de teste mencionados acima, Compostos 6, 7, e 8, que têm atividade de sinalização de cAMP em células forçadas a expressar PTH1R no rato e alta estabilidade contra rompimento metabólico nos hepatócitos de rato demonstraram mostrar fortes efeitos sobre ação calcêmica em ratos quando administrado oralmente. Esses compostos também têm atividade de sinalização de cAMP em células forçadas a expressar PTH1R de ser humano e alta estabilidade metabólica contra microssomas de fígado de ser humano em comparação com os Compostos Comparativos; e eles são esperados como tendo altos efeitos terapêuticos quando administrados oralmente a pacientes com hipoparatiroidismo. Além do mais, compostos representados pela fórmula (1), que têm atividade de sinalização de cAMP em células forçadas a expressar PTH1R de ser humano e mostram estabilidade metabólica contra microssomas de fígado de ser humano para o mesmo grau como os Compostos 6, 7, e 8, são também esperados como tendo altos efeitos terapêuticos em pacientes com hipoparatiroidismo.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

[00253] A presente invenção fornece farmacêuticos para prevenir, tratar e facilitar a recuperação e a cura de osteoporose, a diminuição de massa óssea em doença periodontal, o defeito ósseo alveolar após a extração de dente, a osteoartrite, a deficiência de cartilagem articular, a doença óssea adinâmica, a acondroplasia, a hipocondroplasia, a osteomalacia, a fratura óssea e similares, o que induz anabolismo de osso/cartilagem por exposição sistêmica não invasiva ou exposição local a derivados de hidantoína que têm alta estabilidade metabólica e exibem efeitos potentes semelhantes a PTH.

Claims

1. Composição farmacêutica para aprimorar diminuição da massa óssea na doença periodontal, facilitar recuperação de defeito ósseo alveolar após a extração de dente ou facilitar recuperação de deficiência de cartilagem articular, caracterizada pelo fato de que com-preende como um ingrediente ativo um composto ou sal farmacologi- camente aceitável do mesmo, em que o composto é selecionado a partir do grupo consistindo em: 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5- dimetilimidazolidina-2,4-diona; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5- dimetilimidazolidina-2,4-diona); e 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8- triazaespiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3- diazaspiro[4.4]nonano-2,4-diona.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o composto é 1-(3,5-dimetil-4-(2- ((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8- il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona ou um sal farma- cologicamente aceitável do mesmo.

3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o composto é 1-(3,5-dimetil-4-(2- ((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8- il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina-2,4-diona ou um sal farma- cologicamente aceitável do mesmo.

4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o composto é 1-(3,5-dimetil-4-(2- ((4-oxo-2-(4-(trifluorometóxi)fenil)-1,3,8-triazaespiro[4.5]deca-1-en-8- il)sulfonil)etil)fenil)-1,3-diazaspiro[4.4]nonano-2,4-diona ou um sal far- macologicamente aceitável do mesmo.

5. Uso de um composto, selecionado do grupo consistindo em: 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(3-(trifluorometil)fenil)-1,3,8- triazaspiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina- 2,4-diona; 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometoxi)fenil)-1,3,8- triazaspiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-5,5-dimetilimidazolidina- 2,4-diona); e 1-(3,5-dimetil-4-(2-((4-oxo-2-(4-(trifluorometoxi)fenil)-1,3,8- triazaspiro[4.5]deca-1-en-8-il)sulfonil)etil)fenil)-1,3- diazaspiro[4.4]nonano-2,4-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracte-rizado pelo fato de que é na fabricação de uma composição farmacêutica para aprimorar diminuição de massa óssea em doença periodontal, facilitar recuperação de defeito ósseo alveolar após extração de dente, ou facilitar recuperação de deficiência de cartilagem articular.