BR112015029815B1

BR112015029815B1 - Composição cosmética para clarear uma pele e/ou cabelo de um indiví$#205;duo e conjunto para clarear uma pele e/ou cabelo de um indivíduo

Info

Publication number: BR112015029815B1
Application number: BR112015029815-0A
Authority: BR
Inventors: Paula Belinky; Haim Lasser; Yoram Karmon; Bella KRINFELD
Original assignee: Rakuto Bio Technologies Ltd
Priority date: 2013-05-27
Filing date: 2014-05-27
Publication date: 2020-06-30
Also published as: HRP20192284T1; EP3626310A1; KR20160044437A; WO2014191995A3; EP3003493B1; WO2014191995A2; JP6843946B2; CA2912997C; US20210205201A1; MX2015016262A; CN108524320A; CA2912997A1; BR112015029815A2; US10980730B2; JP2016520121A; HK1222364A1; CN105407867A; EP3003493A2; ES2771048T3; MX368498B

Abstract

COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO E CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO Composições cosméticas ou farmacêuticas são divulgadas nesse documento para aplicação na pele, cabelo e/ou unha de um indivíduo, bem como métodos de uso das mesmas para administrar o peróxido de hidrogênio na pele, cabelo e/ou unha e conjuntos para aplicação das mesmas; as composições compreendem uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio; além disso, são divulgadas nesse documento composições cosméticas e conjuntos para clarear a pele e/ou cabelo, que compreende, ainda, uma lignina peroxidase, bem como métodos cosméticos utilizando as mesmas.

Description

COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍ$#205;DUO E CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO

CAMPO DE APLICAÇÃO E HISTÓRICO

[0001] O presente pedido de patente de invenção, em algumas aplicações respectivas, refere-se a novas composições cosméticas, conjuntos e métodos e, mais particularmente, mas não exclusivamente, a composições cosméticas, conjuntos e métodos que utilizam um sistema enzimático para produzir peróxido de hidrogênio in situ e para usos respectivos, por exemplo, no clareamento da pele e/ou cabelo.

[0002] A cor da pele humana é governada pela quantidade, qualidade e distribuição da melanina, um pigmento que também está presente em plantas e microrganismos.

[0003] A síntese de melanina inicia-se a partir do precursor L-tirosina, que é transformado em um segundo precursor dopaquinona através da ação da tirosinase. A síntese de melanina ocorre nos melanossomas, que estão presentes nas células de melanócito presentes na camada basal da epiderme; a síntese da melanina nessas células é induzida por luz ultravioleta (UV|ultraviolet light). Após a síntese, a melanina migra para as células da epiderme e é dispersa ali, onde a melanina é descolorida após o metabolismo da derme e, então, descamada na forma de sujeira no momento da renovação da pele. A melanina tem uma importância clinica, uma vez que ela protege a pele dos efeitos adversos causados pela luz UV. Entretanto, altos níveis de melanina podem resultar em escurecimento indesejado da pele, enquanto a distribuição heterogênea respectiva pode levar a cloasma e sardas que podem ser esteticamente desagradáveis.

[0004] Os produtos de clareamento da pele se tornaram cada vez mais populares nos últimos anos. O objetivo principal dos produtos de clareamento da pele é clarear ou branquear a pele ou tratar distúrbios de pigmentação, tais como cloasmas, sardas, marcas da gravidez e manchas da idade. Vários tipos de produtos de clareamento da pele estão presentemente disponíveis.

[0005] Os produtos com base na degeneração e morte das células de pigmento tipicamente incluem produtos químicos, tais como hidroquinona, 4-isopropilcatecol e hidroquinona monobenzil éter, que promovem o branqueamento da pele, clareamento ou desaparecimento da pigmentação da pele. Outros agentes que estão comumente disponíveis para branqueamento da pele incluem ácido kójico e derivados respectivos, que inibem a produção de melanina, e uma variedade de extratos, tais como alcaçuz (Glycyrrhiza glabra), o qual inclui glabridina que diminui a atividade de oxidação das células de criação da melanina na pele de forma similar ao ácido kójico.

[0006] Os produtos com base na degeneração e morte das células de pigmento tipicamente incluem produtos químicos, tais como hidroquinona, 4-isopropilcatecol, e hidroquinona monobenzil éter, que promovem o branqueamento da pele, clareamento ou desaparecimento da pigmentação da pele. Outros agentes que são comumente disponíveis para branqueamento da pele incluem ácido kójico e derivados respectivos, que inibem a produção de melanina e uma variedade de extratos, tais como alcaçuz (Glycyrrhiza glabra) que inclui glabridina que diminui a atividade de oxidação das células de criação da melanina na pele de maneira similar como faz o ácido kójico.

[0007] Outros produtos de clareamento se baseiam na inibição de tirosinase, a enzima que transforma o precursor L-tirosina em um segundo precursor dopaquinona. Esse grupo de produtos inclui arbutina, um composto de glicose hidroquinona, que é capaz de inibir a tirosinase pela quelação dos ions de cobre, suprimindo, desse modo, a tautomerização de dopacroma a 5,6-di-hidróxi-indol (DHI | dihydroxyindole) e ácido 5,6-di-hidróxi-indol-2-carboxilico (DHICA | dihydroxyindole-2-carboxylic acid). Melanostat é outro produto de clareamento que age através da tirosinase. Melanostat é um peptídeo sintético que funciona na desativação de melanogênese em melanócitos.

[0008] Vários compostos antioxidantes que podem inibir a produção de melanina também são utilizados nos produtos de clareamento. Visto que a síntese de melanina envolve uma reação de oxidação, bloqueia a oxidação em vários pontos da tirosina/DOPA para melanina, em última análise, inibe a síntese de melanina. Por exemplo, ácido L-ascórbico (vitamina C) age como um agente de redução nos intermediários de melanina e bloqueia reações oxidativas; outros antioxidantes utilizados pelos produtos de clareamento incluem bioflavonoides, os quais são tipicamente extraídos da amoreira ou alcaçuz.

[0009] Entretanto, os produtos de branqueamento da pele atualmente disponíveis são tipicamente ineficazes e podem ser prejudiciais à pele, uma vez que uma aplicação externa continua desses produtos pode levar ao leucoderma permanente e efeitos colaterais tais como discromatose e erupção cutânea.

[00010] Os consumidores frequentemente usam produtos cosméticos para cuidar da pele. Pele áspera e/ou rachada e hiperpigmentações (tais como manchas da idade, sardas e manchas marrons associadas com exposição à luz solar, envelhecimento da pele ou dano ambiental à pele humana) são áreas que os consumidores tipicamente buscam tratar. O branqueamento da pele é de interesse particular em algumas populações asiáticas.

[00011] A Publicação do Pedido de Patente Norte- Americana n° 20050013784 revela uma máscara de tratamento que compreende um substrato insolúvel em água e uma composição liquida que compreende um agente de alteração do tom da pele e um agente espessante solúvel em água.

[00012] As máscaras de tratamento, que incluem peróxido de hidrogênio, estão atualmente disponíveis pelo Reviva Labs (por exemplo, Oxygen Mask [máscara de oxigênio], Green Papaya [mamão verde] & Hydrogen Peroxide Oxygen Mask [máscara de oxigênio de peróxido de hidrogênio], REV-11305).

[00013] A Publicação do Pedido de Patente Internacional WO 2004/052275 revela métodos de produção de lignina peroxidase e métodos e composições cosméticas adequadas para clareamento da pele e cabelo, bem como conjuntos e um artigo de fabricação que inclui princípios ativos para clareamento da pele e cabelo.

[00014] A Publicação do Pedido de Patente Internacional WO 2012/153336 divulga conjuntos e métodos para clarear a pele de um indivíduo, utilizando uma máscara que compreende um ativador oxidante tal como peróxido de hidrogênio, e uma composição cosmética compreendendo uma lignina peroxidase; ou uma máscara que compreende uma lignina peroxidase e uma composição cosmética que compreende o ativador oxidante.

[00015] A Patente Norte-Americana n° 8.426.158 descreve métodos para aumentar a hidrólise de um material celulósico pela hidrolização do material celulósico com uma composição de enzima na presença de um polipeptideo com atividade peroxidase, a atividade peroxidase sendo para reduzir a inibição da hidrólise por peróxidos gerados durante a fermentação.

[00016] O peróxido de hidrogênio é formado na saliva por oxidação de glicose por glicose oxidase. O peróxido de hidrogênio serve como um substrato para lactoperoxidase na saliva, que forma intermediários bactericidas oxidados tais como hipotiocianato, hipobromito e hipoiodito de tiocianato, brometo e iodeto, respectivamente.

[00017] A Publicação do Pedido de Patente Internacional WO 88/002600 descreve uma composição bactericida compreendendo uma enzima de formação de peróxido de hidrogênio tal como glicose oxidase, uma peroxidase tal como lactoperoxidase, um tiocianato e lisozima. O peróxido de hidrogênio gerado durante o uso é destinado, em combinação com a peroxidase, a converter o tiocianato em hipotiocianato, atenuando, desse modo, bactérias de modo que elas são lisadas pela lisozima.

[00018] Midda & Cooksey [J Clin Periodontol 1986, 13:950-956] descrevem enxaguantes bucais e dentifrícios que contêm amiloglicosidase e glicose oxidase para produção de peróxido de hidrogênio de carboidratos fermentáveis alimentares, o qual, por sua vez, converte tiocianato em hipotiocianato na presença de lactoperoxidase salivar, inibindo, desse modo, as bactérias.

[00019] O creme dental Enzycal™ (Curaprox) contém lactoperoxidase, glicose oxidase e amiloglucosidase, para fortalecimento do efeito antibacteriano da saliva [Br Dent J 2008, 205:681] .

[00020] O creme dental e enxaguante bucal Biotene™ (GlaxoSmithKline) contêm glicose oxidase, lactoferrina, lactoperoxidase, lisozima.

[00021] A Patente Norte-Americana n° 5.607.681 descreve composições antimicrobianas que contêm iodeto, tiocianato, glicose oxidase, D-glicose e opcionalmente também uma peroxidase tal como lactoperoxidase. As composições são para uso como conservantes ou como agentes ativos nos produtos de higiene oral, desodorante e anticaspa. As composições podem ser fornecidas como pós secos não reagentes e soluções não aquosas que podem ser diluídas, a fim de obter atividade antimicrobiana.

[00022] A Patente Norte-Americana n° 6.214.339 descreve o tratamento de otite externa em cães e gatos pela administração ao ouvido externo de uma composição não aquosa contendo um substrato oxidável tal como glicose e uma enzima oxidorredutase tal como glicose oxidase, para produção de peróxido de hidrogênio ao encontrar o ambiente do ouvido externo. A composição contém, ainda, um sal de iodeto e uma peroxidase tal como lactoperoxidase para produção de hipioiodito do peróxido de hidrogênio.

[00023] A Patente Norte-Americana n° 7.833.290 descreve um método de tingimento de fibras queratinosas pelo tratamento com um composto tal como hematoxilina, hemateína, brazilina e brazileína; um sal de metal; um bicarbonato; e peróxido de hidrogênio ou um sistema que gera peróxido de hidrogênio, tal como peróxido de ureia, peróxidos de metal, perboratos, percarboratos e oxidases na presença de um substrato adequado.

[00024] A técnica anterior adicional inclui Hugoson et al. [Odontol Rev 1974, 25:69-80]; Patente Norte- Americana n° 7.981.166; e Publicação do Pedido de Patente Norte-Americana n° 20040161435 e 20090130040.

SUMÁRIO

[00025] Os presentes inventores já conceberam e praticaram com sucesso uma metodologia que contorna a necessidade de incluir peróxido de hidrogênio em composições cosméticas e conjuntos e em composições contendo lignina peroxidase e conjuntos em particular.

[00026] De acordo com um aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecida uma composição cosmética para clarear a pele e/ou cabelo de um indivíduo, a composição compreendendo uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio, e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio.

[00027] De acordo com um aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecido um conjunto para clarear a pele e/ou cabelo de um indivíduo, o conjunto compreendendo uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio, um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio e uma lignina peroxidase, em que pelo menos uma da enzima de produção de peróxido de hidrogênio, o substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase forma uma parte de uma composição que é embalada individualmente dentro do conjunto.

[00028] De acordo com um aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecido um método cosmético de clarear a pele e/ou cabelo de um indivíduo, o método compreendendo pôr em contato a região da pele e/ou cabelo do indivíduo com uma composição que compreende uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio, clareando, desse modo, a pele e/ou cabelo do indivíduo.

[00029] De acordo com um aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecida uma composição cosmética ou farmacêutica para aplicação na pele, cabelo e/ou unha de um indivíduo, a composição compreendendo uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio, e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio.

[00030] De acordo com um aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecido um conjunto para aplicar uma composição cosmética ou farmacêutica na pele, cabelo e/ou unha de um indivíduo, a composição cosmética ou farmacêutica compreendendo peróxido de hidrogênio, o conjunto compreendendo uma primeira composição que compreende uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e uma segunda composição que compreende um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio.

[00031] De acordo com um aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecido um método de administração de peróxido de hidrogênio na pele, cabelo e/ou unha de um indivíduo, o método compreendendo pôr em contato uma região da pele, cabelo e/ou unha do indivíduo com uma composição que compreende uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio, gerando, desse modo, peróxido de hidrogênio na pele, cabelo e/ou unha.

[00032] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama.

[00033] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama.

[00034] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 0,0175 µmols/grama a 175 µmols/grama.

[00035] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição compreende, ainda, um mediador oxidante.

[00036] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno.

[00037] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama.

[00038] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é selecionada do grupo consistindo em uma glicose oxidase, uma hexose oxidase, uma colesterol oxidase, uma aril álcool oxidase, uma L-gulonolactona oxidase, uma galactose oxidase, uma piranose-2-oxidase, uma piridoxina-4-oxidase, uma álcool oxidase, uma 2-hidróxi-ácido oxidase, uma colina oxidase, uma álcool de cadeia longa oxidase, uma glicerol-3-fosfato oxidase, a D-arabinono-1, 4- lactona oxidase, uma vanilil álcool oxidase, uma alditol oxidase, uma prosolanapirona II oxidase, uma paromamina 6'- oxidase, uma glioxal oxidase, uma veratril álcool oxidase, uma álcool desidrogenase, uma celobiose desidrogenase, uma aldeído oxidase, uma oxalato oxidase, uma aril aldeído oxidase, uma dihidro-orotato oxidase, uma pirroloquinolina- quinona sintase, uma L-aminoácido oxidase, uma L-glutamato oxidase, uma poliamina oxidase, uma NAD(P)H oxidase, uma urato oxidase, uma hidroxilamina oxidase, uma tiol oxidase, uma glutationa oxidase, uma citocromo c oxidase, uma xantina oxidase e uma superóxido dismutase.

[00039] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio compreende glicose oxidase e o substrato compreende D-glicose.

[00040] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a lignina peroxidase é isoenzima Hl ou uma forma modificada de isoenzima H2.

[00041] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a lignina peroxidase é uma lignina peroxidase de um fungo da podridão branca.

[00042] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a lignina peroxidase é um extrato de um fungo Phanerochaete chrysosporium.

[00043] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a lignina peroxidase é recombinantemente expressa.

[00044] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a lignina peroxidase compreende uma sequência de polipeptídeo estabelecida no ID SEQ. N° 1.

[00045] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição cosmética está em uma forma selecionado do grupo consistindo em uma máscara, um soro, uma loção, um shampoo, um gel e um tônico.

[00046] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição compreende, ainda, um transportador cosmeticamente aceitável e/ou transportador farmaceuticamente aceitável.

[00047] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição compreende, ainda, um transportador cosmeticamente aceitável.

[00048] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição é embalada em um recipiente hermético.

[00049] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o recipiente hermético é configurado para distribuir a composição sem entrar ar no container.

[00050] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio forma uma parte de uma primeira composição do conjunto e o substrato forma uma parte de uma segunda composição do conjunto, as primeira e segunda composições sendo embaladas individualmente dentro do conjunto.

[00051] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a primeira composição compreende, ainda, lignina peroxidase.

[00052] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a segunda composição compreende, ainda, lignina peroxidase.

[00053] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a lignina peroxidase forma uma parte de uma terceira composição dentro do conjunto, a terceira composição sendo embalada individualmente dentro do conjunto.

[00054] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e o substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio são embalados juntos em um pacote hermético dentro do conjunto.

[00055] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o pacote hermético é um recipiente configurado para distribuir a composição sem entrar ar no recipiente.

[00056] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, uma concentração de lignina peroxidase em uma composição que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama.

[00057] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o conjunto compreende um mediador oxidante, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio, o substrato da referida enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase.

[00058] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o mediador oxidante forma uma parte de uma composição que compreende a lignina peroxidase.

[00059] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, uma concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama.

[00060] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição que compreende a enzima está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama.

[00061] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, uma concentração do substrato em uma composição que compreende o substrato está em uma faixa de 0,035 µmols/grama a 350 µmols/grama.

[00062] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o conjunto compreende:

- uma primeira composição, compreendendo lignina peroxidase em uma concentração em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e glicose oxidase em uma concentração em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama; e
- uma segunda composição, compreendendo D-glicose em uma concentração em uma faixa de 0,35 µmols/grama a 35 µmols/grama.

[00063] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição que é embalada individualmente dentro do conjunto está em uma forma selecionada do grupo consistindo em uma máscara, um soro, uma loção, um creme, um shampoo, um gel e um tônico.

[00064] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição que é embalada individualmente dentro do conjunto compreende, ainda, um transportador cosmeticamente aceitável.

[00065] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição é formada por uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio como embalado dentro de um conjunto descrito anteriormente.

[00066] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o contato é efetuado pelo menos cinco vezes.

[00067] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o contato é efetuado um ou duas vezes ao dia.

[00068] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição é formada pelo contato da região da pele e/ou cabelo com a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e/ou o substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio subsequente ao contato da região da pele e/ou cabelo com a lignina peroxidase.

[00069] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a pele compreende pele facial.

[00070] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a pele compreende uma região da pele exposta ao sol.

[00071] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o clareamento da pele compreende clarear toda a tez a pele.

[00072] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a pele compreende um tom de pele desigual, mancha(s) escura(s), sarda(s), melasma, hiperpigmentação, descoloração da pele, mancha(s) da idade, marca(s) de acne e/ou uma cicatriz.

[00073] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição compreende, ainda, pelo menos um agente que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica em uma presença de peróxido de hidrogênio.

[00074] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o pelo menos um agente é selecionado do grupo consistindo em uma peroxidase e um precursor de corante oxidativo.

[00075] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição é selecionada do grupo consistindo em uma composição alvejante, uma composição de tingimento de cabelo, uma composição antimicrobiana e uma composição de remoção do odor.

[00076] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, o conjunto compreende, ainda, pelo menos, um agente que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica em uma presença de peróxido de hidrogênio.

[00077] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a primeira composição compreende glicose oxidase em uma concentração em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e a segunda composição compreende D-glicose em uma concentração em uma faixa de 0,35 µmols/grama a 35 µmols/grama.

[00078] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a primeira composição e a segunda composição são cada independentemente em uma forma selecionada do grupo consistindo em uma máscara, um soro, uma loção, um creme, um shampoo, um gel e um tônico.

[00079] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a primeira composição e a segunda composição compreendem, ainda, um transportador cosmeticamente aceitável e/ou transportador farmaceuticamente aceitável.

[00080] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição é formada por uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio como embalado dentro de um conjunto descrito anteriormente.

[00081] De acordo com algumas de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, e qualquer combinação respectiva, a composição de um método, conforme descrito anteriormente, é quaisquer das composições descritas nesse documento, incluindo qualquer uma das aplicações respectivas, em qualquer combinação.

[00082] Salvo indicação em contrário, todos os termos técnicos e/ou científicos utilizados nesse documento têm o mesmo significado como comumente entendido por um especialista na técnica, ao qual pertence o presente pedido de patente de invenção. Embora os métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos nesse documento possam ser utilizados na prática ou teste das aplicações do presente pedido de patente de invenção, métodos e/ou materiais exemplares são descritos abaixo. No caso de conflito, o relatório descritivo da patente, incluindo definições, controlará. Além disso, os materiais, métodos, e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser necessariamente limitantes.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[00083] Algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção são descritas nesse documento, apenas a título de exemplo, com referência aos desenhos anexos. Agora, com referência específica aos desenhos em detalhe, é salientado que as características mostradas são a título de exemplo e para fins de discussão ilustrativa das aplicações do presente pedido de patente de invenção. A esse respeito, a descrição feita com os desenhos torna evidente para os especialistas na técnica como as aplicações do presente pedido de patente de invenção podem ser praticadas.

Nos desenhos:

[00084] A figura 1 apresenta imagens que mostram um creme de enzima exemplar, compreendendo 25 unidades/grama de fração de isoenzima Hl de lignina peroxidase (LIP | lignin peroxidase), 25 unidades/grama de glicose oxidase (GOX| glucose oxidase) e 6 mmols/kg de álcool veratrílico (VA| veratryl alcohol) com 140 µg/ml de melanina (LIP/VA/GOX) e um creme ativador exemplar compreendendo 3,5 mmols/kg de glicose (GLU I glucose), um creme de enzima de controle compreendendo 25 unidades/grama de fração de isoenzima H1 de LIP e 6 mmols/kg de VA com 140 µg/ml de melanina (LIP/VA) e creme ativador de controle compreendendo 3,53 mmols/kg H₂O₂, bem como uma mistura da enzima exemplar e creme ativador (LIP/VA/GOX/GLU) e uma mistura da enzima de controle e creme ativador (LIP/VA/H₂O₂) .

[00085] As figuras 2A e 2B apresentam gráficos em barra que mostram valores para um índice de melanina (figura 2A) e índice de eritema (figura 2B) em várias regiões faciais de um indivíduo nos dias 0, 7 e 21 de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (* p<0,05 versus dia 0).

[00086] As figuras 3A e 3B apresentam gráficos em barra que mostram valores para um índice de melanina (figura 3A) e índice de eritema (figura 3B) em várias regiões faciais de um indivíduo nos dias 0 e 21 de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima H1 de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (* p<0,05 versus dia 0).

[00087] As figuras 4A e 4B apresentam gráficos em barra que mostram valores para um índice de melanina (figura 4A) e índice de eritema (figura 4B) em várias regiões faciais de um indivíduo nos dias 0, 7 e 21 de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (* p<0,05 versus dia 0).

[00088] As figuras 5A e 5B apresentam gráficos em barra que mostram valores para um índice de melanina (figura 5A) e índice de eritema (figura 5B) em várias regiões faciais de um indivíduo nos dias 0, 7 e 21 de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (* p<0,05 versus dia 0, # p<0,05 versus dia 7).

[00089] As figuras 6A e 6B apresentam gráficos em barra que mostram valores para um índice de melanina (figura 6A) e índice de eritema (figura 6B) em várias regiões faciais de um indivíduo nos dias 0, 7 e 21 de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (* p<0,05 versus dia 0, # p<0,05 versus dia 7).

[00090] As figuras 7A e 7B apresentam gráficos em barra que mostram valores para um índice de melanina (figura 7A) e índice de eritema (figura 7B) em várias regiões faciais de um indivíduo nos dias 0, 7 e 21 de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (* p<0,05 versus dia 0, # p<0,05 versus dia 7).

[00091] As figuras 8A e 8B apresentam gráficos em barra que mostram valores para um índice de melanina (figura 8A) e índice de eritema (figura 8B) em várias regiões faciais de um indivíduo nos dias 0 e 7 de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (* p<0,05 versus dia 0).

[00092] As figuras 9A e 9B apresentam gráficos em barra que mostram valores para um índice de melanina (figura 9A) e índice de eritema (figura 9B) em várias regiões faciais de um indivíduo nos dias 0, 7 e 21 de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (* p<0,05 versus dia 0, # p<0,05 versus dia 7; aumento para o índice de eritema no rosto no dia 21 devido à irritação não relacionada ao tratamento).

[00093] As figuras 10A e 10B apresentam gráficos que mostram o índice de melanina da pele pigmentada (figura 10A) e não pigmentada (figura 10B) após 0, 4, 6 e 8 semanas de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (** p<0,01 (p=0,001 na figura 10A e p=0,007 na figura 10B), *** p<0,001).

[00094] A figura 11 apresenta uma escala análoga visual que mostra a uniformidade de pigmentação da pele, conforme avaliado por um dermatologista, após 0, 4, 6 e 8 semanas de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (0 = uniforme, igual, 10 = desigual, manchado, malhado, * p<0,05).

[00095] A figura 12 apresenta uma escala análoga visual que mostra clareza da pele, conforme avaliado por um dermatologista, após 0, 4, 6 e 8 semanas de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (0 = clara, igual, 10 = embotada, opaca, * p<0,05, ** p<0,01) .

[00096] A figura 13 apresenta uma escala análoga visual que mostra o clareamento/branqueamento da pele, conforme avaliado por um dermatologista, após 0, 4, 6 e 8 semanas de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (0 = aparência clara/brilhante, 10 = embotada, fosca, ** p<0,01, *** p<0,001).

[00097] A figura 14 apresenta uma escala análoga visual que mostra o tom da pele, conforme avaliado por um dermatologista, após 0, 4, 6 e 8 semanas de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (0 = igual, cor da pele saudável, 10 = desigual, aparência descolorida, * p<0,05, *** p<0,001).

[00098] A figura 15 apresenta uma escala análoga visual que mostra a luminosidade da pele, conforme avaliado por um dermatologista, após 0, 4, 6 e 8 semanas de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (0 = radiante, aparência luminosa, 10 = embotada, fosca, aparência amarelada, *** p<0,001).

[00099] A figura 16 apresenta uma escala análoga visual que mostra a aparência total da pele, conforme avaliado por um dermatologista, após 0, 4, 6 e 8 semanas de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção (0 = aparência saudável, 10 = aparência não saudável, *** p<0,001).

[000100] A figura 17 apresenta fotografias de indivíduos antes (linha de base) e após 8 semanas de um tratamento compreendendo a administração duas vezes ao dia de isoenzima Hl de LIP, glicose oxidase e glicose, de acordo com uma aplicação exemplar do presente pedido de patente de invenção.

DESCRIÇÃO DE APLICAÇÕES ESPECÍFICAS DA INVENÇÃO

[000101] O presente pedido de patente de invenção, em algumas aplicações respectivas, refere-se a novas composições cosméticas, conjuntos e métodos e, mais particularmente, mas não exclusivamente, a composições cosméticas de produção de peróxido de hidrogênio, conjuntos e métodos e para usos respectivos, por exemplo, no clareamento pele e/ou cabelo.

[000102] Antes de explicar, pelo menos, uma aplicação do presente pedido de patente de invenção em detalhe, deve ser entendido que o presente pedido de patente de invenção não é necessariamente limitado em sua aplicação aos detalhes estabelecidos na descrição a seguir ou exemplificados pelos Exemplos. O presente pedido de patente de invenção é capaz de outras aplicações ou de ser praticado ou realizado em várias maneiras.

[000103] Métodos para clarear a pele de um indivíduo, utilizando peróxido de hidrogênio e uma lignina peroxidase, foram anteriormente divulgados (vide, por exemplo, Publicação do Pedido de Patente Internacional WO 2012/153336, discutida acima). Tais métodos exigem a utilização de composições que contêm peróxido de hidrogênio.

[000104] Muitas outras composições cosméticas e métodos incluem ou utilizam peróxido de hidrogênio.

[000105] Entretanto, utilizar peróxido de hidrogênio em aplicações cosméticas foi recentemente reconhecido como indesejado.

[000106] Em uma pesquisa para metodologias nas quais a necessidade para utilizar composições contendo peróxido de hidrogênio é contornada, os presentes inventores previram e idealizaram com sucesso e praticaram uma nova metodologia que utiliza um sistema enzimático para gerar eróxido de hidrogênio mediante aplicação. Mais especificamente, os presentes inventores utilizaram uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato respectivo, para gerar peróxido de hidrogênio in situ, imediatamente antes da aplicação de uma composição ou sistema contendo a mesma e/ou durante aplicação de uma composição ou sistema contendo a mesma. O sistema enzimático é prontamente controlável ao manter a enzima e substrato separados, até a geração do peróxido de hidrogênio ser desejada e/ou ao manter enzima e substrato inativos um para o outro, através do armazenamento na ausência de oxigênio. A metodologia divulgada nesse documento é vantajosa ao ser capaz de gerar o peróxido de hidrogênio gradualmente in situ, onde é consumido, de modo que uma concentração de peróxido de hidrogênio permanece baixa e estável ao longo do tempo.

[000107] Ao reduzir o presente pedido de patente de invenção à prática, os inventores demonstraram a eficácia de um sistema enzimático para gerar peróxido de hidrogênio para ativar a lignina peroxidase a fim de clarear a pele.

[000108] Desse modo, conforme mostrado na seção de Exemplos a seguir, os presentes inventores projetaram uma composição cosmética que compreende lignina peroxidase, e uma composição ativadora que compreende glicose, que quando aplicadas juntas (por exemplo, em uma região da pele de um indivíduo) resulta em um efeito de branqueamento significativo como um resultado da redução no teor de melanina (Figuras 1 a 9B) , devido à interação de lignina peroxidase com peróxido de hidrogênio gerado pela glicose oxidase e glicose.

[000109] Esses resultados demonstram a eficácia de utilização de um sistema de enzima/substrato para gerar peróxido de hidrogênio in situ (isto é, dentro ou em uma região do corpo onde é pretendido reagir, por exemplo, com melanina em uma reação de catalisada de peroxidase).

[000110] De acordo com um aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecida uma composição cosmética ou farmacêutica para aplicação tópica (por exemplo, para aplicação na pele, cabelo e/ou unha de um indivíduo). De acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, a composição compreende um sistema enzimático de produção de peróxido de hidrogênio, a saber, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio.

[000111] Conforme utilizado ao longo desse documento, o termo "cosmético" com relação a quaisquer das composições, conjuntos e métodos (e qualquer outro aspecto) divulgado nesse documento, refere-se a composições, conjuntos e método que realçam a aparência ou odor do corpo humano.

[000112] Em algumas aplicações, o termo "cosmético" segue a definição de autoridades reguladoras em todo o mundo. Por exemplo, em algumas aplicações, o termo "cosmético" segue a definição da Administração de Alimentos e Medicamentos dos Estados Unidos (FDA|Food e Drug Administration), como sendo "destinado a ser aplicado ao corpo humano para limpeza, embelezamento, promoção da atratividade ou alteração da aparência sem afetar a estrutura ou funções do corpo".

O SISTEMA ENZIMÁTICO DE PRODUÇÃO DE PERÓXIDO DE HIDROGÊNIO:

[000113] Conforme utilizado ao longo desse documento, a expressão "enzima de produção de peróxido de hidrogênio" refere-se a uma enzima que catalisa uma reação na qual o peróxido de hidrogênio é um produto.

[000114] Conforme utilizado ao longo desse documento, o "substrato" de uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio refere-se a qualquer composto diferente de O₂ ou água que serve como um substrato para a reação mencionada acima catalisada pela enzima de produção de peróxido de hidrogênio na qual o peróxido de hidrogênio é um produto. O "substrato" pode ser um composto único ou uma pluralidade de compostos. A pluralidade de compostos pode interagir com a enzima como parte de reações diferentes, ou a enzima catalisa uma única reação que utiliza uma pluralidade de compostos como substratos.

[000115] Em algumas aplicações, a enzima catalisa uma reação na qual o substrato é oxidado e O₂ é reduzido ao peróxido de hidrogênio.

[000116] Em algumas aplicações, a enzima catalisa uma reação na qual o substrato é reduzido e água é oxidada ao peróxido de hidrogênio.

[000117] Exemplos de enzimas de produção de peróxido de hidrogênio que podem ser utilizadas em aplicações do presente pedido de patente de invenção incluem, sem limitação:

- uma EC 1.1.3 oxidorredutase, tal como, por exemplo, uma glicose oxidase (EC 1.1.3.4), uma hexose oxidase (EC 1.1.3.5), uma colesterol oxidase (EC 1.1.3.6), uma aril álcool oxidase (EC 1.1.3.7), uma L-gulonolactona oxidase (EC 1.1.3.8), uma galactose oxidase (EC 1.1.3.9), uma piranose-2-oxidase (EC 1.1.3.10), uma piridoxina-4-oxidase (EC 1.1.3.12), uma álcool oxidase (EC 1.1.3.13), uma 2-hidróxi-ácido oxidase (EC 1.1.3.15), uma colina oxidase (EC 1.1.3.17), uma álcool de cadeia longa oxidase (EC 1.1.3.20), uma glicerol-3-fosfato oxidase (EC 1.1.3.21), uma D-arabinono-1,4-lactona oxidase (EC 1.1.3.37), uma vanilil álcool oxidase (EC 1.1.3.38), uma alditol oxidase (EC 1.1.3.41), uma prosolanapirona II oxidase (EC 1.1.3.42), uma paromamina 6'-oxidase (EC 1.1.3.43), uma glioxal oxidase e uma veratril álcool oxidase;
- uma álcool desidrogenase (EC 1.1.99.8);
- uma celobiose desidrogenase (EC 1.1.99.18);
- uma EC 1.2.3 oxidorredutase tal como, por exemplo, uma aldeído oxidase (EC 1.2.3.1), uma oxalato oxidase (EC 1.2.3.4) , e uma aril aldeído oxidase (EC 1.2.3.9);
- uma EC 1.3.3 oxidorredutase tal como, por exemplo, uma dihidro-orotato oxidase (EC 1.3.3.1), e uma pirroloquinolina-quinona sintase (EC 1.3.3.11);
- uma EC 1.4.3 oxidorredutase tal como, por exemplo, uma L-aminoácido oxidase (EC 1.4.3.2), e uma L-glutamato oxidase (1.4.3.11) ;
- uma EC 1.5.3 oxidorredutase tal como, por exemplo, uma poliamina oxidase (1.5.3.11);
- uma EC 1.6.3 oxidorredutase tal como, por exemplo, uma NAD(P)H oxidase (1.6.3.1);
- uma EC 1.7.3 oxidorredutase tal como, por exemplo, uma urato oxidase (EC 1.7.3.3), e uma hidroxilamina oxidase (EC 1.7.3.4) ;
- uma EC 1.8.3 oxidorredutase tal como, por exemplo, uma tiol oxidase (EC 1.8.3.2), e uma glutationa oxidase (EC 1.8.3.3);
- uma EC 1.9.3 oxidorredutase, tal como, por exemplo, uma citocromo c oxidase (EC 1.9.3.1);
- uma EC 1.17.3 oxidorredutase tal como, por exemplo, uma xantina oxidase (EC 1.17.3.2); e
- uma superóxido dismutase (EC 1.15.1.1).

[000118] A nomenclatura EC nesse document é de acordo com a União Internacional de Bioquímica e Biologia Molecular.

[000119] Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é uma ou mais de uma EC
1.1.3 oxidorredutase, uma EC 1.2.3 oxidorredutase, uma EC
1.3.3 oxidorredutase, uma EC 1.4.3 oxidorredutase, uma EC
1.5.3 oxidorredutase, uma EC 1.6.3 oxidorredutase, uma EC
1.7.3 oxidorredutase, uma EC 1.8.3 oxidorredutase, uma EC
1.9.3 oxidorredutase e uma EC 1.17.3 oxidorredutase (por exemplo, tal como uma oxidorredutase descrita nesse documento).

[000120] Em algumas aplicações, uma superóxido dismutase é incluída para produzir peróxido de hidrogênio de superóxido, em combinação com uma fonte de superóxido. Em algumas aplicações, a fonte de superóxido é uma enzima que produz superóxido, por exemplo, uma NAD(P)H oxidase e/ou uma xantina oxidase.

[000121] Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio produz superóxido. Como o superóxido normalmente reage a um grau considerável para formar peróxido de hidrogênio (por exemplo, por dismutação), a produção de superóxido é considerada nesse documento para englobar a produção de peróxido de hidrogênio.

[000122] Os substratos adequados da enzima de produção de peróxido de hidrogênio estarão evidentes ao especialista na técnica.

[000123] Em aplicações exemplares, a enzima é uma glicose oxidase (EC 1.1.3.4) e o substrato compreende D- glicose.

[000124] Em algumas aplicações, a enzima é uma hexose oxidase (EC 1.1.3.5) e o substrato compreende D- glicose, D-galactose, D-manose, maltose, lactose e/ou celobiose.

[000125] Em algumas aplicações, a enzima é uma colesterol oxidase (EC 1.1.3.6) e o substrato compreende colesterol.

[000126] Em algumas aplicações, a enzima é uma aril álcool oxidase (EC 1.1.3.7) e o substrato compreende um álcool primário aromático.

[000127] Em algumas aplicações, a enzima é uma L- gulonolactona oxidase (EC 1.1.3.8) e o substrato compreende L-gulono-1,4-lactona.

[000128] Em algumas aplicações, a enzima é uma galactose oxidase (EC 1.1.3.9) e o substrato compreende um álcool primário (por exemplo, metanol, etanol, n-propanol, n- butanol, isobutanol), um monossacarídeo, um oligossacarídeo e/ou um polissacarídeo.

[000129] Em algumas aplicações, a enzima é uma piranose-2-oxidase (EC 1.1.3.10) e o substrato compreende uma aldopiranose (por exemplo, D-glicose, D-xilose, D-galactose), L-sorbose e/ou 1,5-anidroglucitol e/ou dissacarídeos respectivos. Deve ser apreciado que piranose-2-oxidase é uma fonte natural para peróxido de hidrogênio para ativação de lignina celulose.

[000130] Em algumas aplicações, a enzima é uma piridoxina-4-oxidase (EC 1.1.3.12) e o substrato compreende piridoxina.

[000131] Em algumas aplicações, a enzima é uma álcool oxidase (EC 1.1.3.13) e o substrato compreende um álcool primário (por exemplo, metanol, etanol, n-propanol, n- butanol, isobutanol).

[000132] Em algumas aplicações, a enzima é uma 2- hidróxi-ácido oxidase (EC 1.1.3.15) e o substrato compreende um ácido (S)-2-hidróxi (por exemplo, glicolato, 2- hidroxiglutarato) e/ou um (S)-2-aminoácido.

[000133] Em algumas aplicações, a enzima é uma colina oxidase (EC 1.1.3.17) e o substrato compreende colina e/ou glicina betaína aldeído.

[000134] Em algumas aplicações, a enzima é uma álcool de cadeia longa oxidase (EC 1.1.3.20) e o substrato é um álcool de cadeia longa (por exemplo, um álcool graxo).

[000135] Em algumas aplicações, a enzima é uma glicerol-3-fosfato oxidase (EC 1.1.3.21) e o substrato compreende glicerol-3-fosfato.

[000136] Em algumas aplicações, a enzima é uma D- arabinono-1,4-lactona oxidase (EC 1.1.3.37) e o substrato compreende L-gulono-1,4-lactona, D-arabinono-1,4-lactona e/ou L-galactono-1,4-lactona.

[000137] Em algumas aplicações, a enzima é uma vanilil álcool oxidase (EC 1.1.3.38) e o substrato compreende um 4-alilfenol, um álcool 4-hidroxibenzilico (por exemplo, álcool vanilílico), uma 4-hidroxibenzamina e/ou a 4- (metoximetil)fenol.

[000138] Em algumas aplicações, a enzima é uma alditol oxidase (EC 1.1.3.41) e o substrato compreende um alditol (por exemplo, xilitol, D-sorbitol).

[000139] Em algumas aplicações, a enzima é uma prosolanapirona II oxidase (EC 1.1.3.42) e o substrato compreende prosolanapirona II.

[000140] Em algumas aplicações, a enzima é uma paromamina 6'-oxidase (EC 1.1.3.43) e o substrato compreende paromamina e/ou 6'''-deamino-6'''hidroxineomicina C.

[000141] Em algumas aplicações, a enzima é uma veratril álcool oxidase e o substrato é um álcool (4-metóxi)- aromático primário (por exemplo, álcool veratrίlico).

[000142] Em algumas aplicações, a enzima é uma glioxal oxidase e o substrato é glioxal, uma alquil glioxal (por exemplo, metil glioxal) e/ou celobiose.

[000143] Em algumas aplicações, a enzima é uma álcool desidrogenase (EC 1.1.99.8) e o substrato compreende um álcool primário (por exemplo, metanol, etanol, n-propanol, n-butanol, isobutanol).

[000144] Em algumas aplicações, a enzima é uma celobiose desidrogenase (EC 1.1.99.18) e o substrato compreende celobiose, um celo-oligossacarίdeo, lactose e/ou D-glicosil-1, 4-β-D-manose.

[000145] Em algumas aplicações, a enzima é uma aldeído oxidase (EC 1.2.3.1) e o substrato compreende um aldeído.

[000146] Em algumas aplicações, a enzima é uma oxalato oxidase (EC 1.2.3.4) e o substrato compreende oxalato.

[000147] Em algumas aplicações, a enzima é uma aril aldeído oxidase (EC 1.2.3.9) e o substrato compreende um aldeído aromático (por exemplo, benzaldeido, vanilina).

[000148] Em algumas aplicações, a enzima é uma dihidro-orotato oxidase (EC 1.3.3.1) e o substrato compreende dihidro-orotato.

[000149] Em algumas aplicações, a enzima é uma pirroloquinolina-quinona sintase (EC 1.3.3.11) e o substrato compreende 6-(2-amino-2-carboxietil)-7,8-dioxo-l, 2,3, 4,7,8- hexa-hidroquinolina-2,4-dicarboxilato.

[000150] Em algumas aplicações, a enzima é uma L- aminoácido oxidase (EC 1.4.3.2) e o substrato compreende um L-aminoácido.

[000151] Em algumas aplicações, a enzima é uma L- glutamato oxidase (1.4.3.11) e o substrato compreende L- glutamato.

[000152] Em algumas aplicações, a enzima é uma poliamina oxidase (1.5.3.11) e o substrato compreende N₁- acetilespermina.

[000153] Em algumas aplicações, a enzima é uma NAD(P)H oxidase (1.6.3.1) e o substrato compreende NADH e/ou NADPH.

[000154] Em algumas aplicações, a enzima é uma urato oxidase (EC 1.7.3.3) e o substrato compreende urato.

[000155] Em algumas aplicações, a enzima é uma hidroxilamina oxidase (EC 1.7.3.4) e o substrato compreende uma hidroxilamina.

[000156] Em algumas aplicações, a enzima é uma hiol oxidase (EC 1.8.3.2) e o substrato compreende um grupo tiol.

[000157] Em algumas aplicações, a enzima é uma glutationa oxidase (EC 1.8.3.3) e o substrato compreende glutationa e/ou cisteína.

[000158] Em algumas aplicações, a enzima é uma citocromo c oxidase (EC 1.9.3.1) e o substrato compreende ferrocitocromo c.

[000159] Em algumas aplicações, a enzima é uma xantina oxidase (EC 1.17.3.2) e o substrato compreende xantina e/ou hipoxantina.

[000160] A enzima de produção de peróxido de hidrogênio descrita nesse documento (por exemplo, glicose oxidase) pode ser obtido, por exemplo, a partir de um fornecedor comercial, pela extração de uma fonte natural e/ou pela expressão recombinante. Os procedimentos gerais para expressar uma proteína são descritos em detalhes a seguir, e podem ser utilizados para expressar uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio descrita nesse documento.

AS COMPOSIÇÕES DE PRODUÇÃO DE PERÓXIDO DE HIDROGÊNIO:

[000161] Uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, conforme descrita nesse documento, produz peróxido de hidrogênio sempre que a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e seu substrato entram em contato um com o outro na presença de oxigênio (ou ar) e/ou água.

[000162] Deve ser entendido que uma composição de produção de peróxido de hidrogênio de acordo com qualquer uma das aplicações relacionadas a tais composições (por exemplo, conforme descrito nessa seção) pode utilizar um sistema de produção de peróxido de hidrogênio de acordo com qualquer uma das aplicações descritas nesse documento em relação a tais sistemas.

[000163] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, qualquer composição descrita nesse documento é preparada in situ, isto é, no local da aplicação (por exemplo, pele, cabelo e/ou unha) do indivíduo, pelo contato de diferentes componentes da composição um com o outro. Em algumas aplicações, a geração de peróxido de hidrogênio começa apenas mediante o contato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio com o substrato respectivo in situ.

[000164] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é preparada no local da aplicação (por exemplo, pele, cabelo e/ou unha) do individuo, através do contato do local de aplicação com uma parte da composição que compreende a enzima e, depois disso, contato do local de aplicação com uma parte da composição que compreende o substrato da enzima, ou vice versa, contato do local de aplicação com uma parte da composição que compreende o substrato da enzima e, depois disso, o contato do local de aplicação com uma parte da composição que compreende a enzima.

[000165] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é preparada brevemente antes de entrar em contato com o local de aplicação (por exemplo, pele, cabelo e/ou unha) do indivíduo, através do contato de uma parte da composição que compreende o substrato da enzima com uma parte da composição que compreende o substrato da enzima, e, depois disso, o contato da composição resultante com o local de aplicação (por exemplo, pele, cabelo e/ou unha) de um indivíduo.

[000166] A composição pode ser preparada a partir dos componentes embalados em um conjunto, conforme descrito em detalhes adicionais aqui a seguir.

[000167] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é embalada em um recipiente, e pode ser utilizada logo após empacotamento.

[000168] Em algumas de quaisquer dessas aplicações, uma composição compreende a enzima de produção de peróxido de hidrogênio em contato com seu substrato, mas a enzima na composição é inibida a partir da produção de peróxido de hidrogênio devido à falta de oxigênio no recipiente.

[000169] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o recipiente é hermético, a fim de limitar a quantidade de oxigênio que pode ser utilizada pela enzima para produzir o peróxido de hidrogênio.

[000170] Nesse documento, o termo "hermético" refere-se a uma embalagem e/ou recipiente vedado de tal maneira que não haja aberturas que deixem que gases como o oxigênio entrem ou escapem, e em que a embalagem e/ou recipiente é formado de um material que é substancialmente impermeável a tais gases.

[000171] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o ar é descarregado da embalagem e/ou recipiente antes da vedação, por exemplo, pela submissão da embalagem e/ou recipiente a uma pressão reduzida e/ou pela purga da embalagem e/ou recipiente com um gás que não contém oxigênio (por exemplo, nitrogênio).

[000172] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o recipiente hermético é configurado para distribuir a composição (por exemplo, distribuir mais de uma vez) sem entrada de ar no recipiente, de modo a evitar a produção de peróxido de hidrogênio no recipiente após distribuir um pouco da composição.

[000173] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o recipiente tem um volume que diminui ao distribuir, de modo que o recipiente tem pouco ou nenhum espaço para a entrada do ar, mesmo quando o volume da composição no recipiente diminui mediante a distribuição. Exemplos de tais recipientes incluem, por exemplo, um tubo flexível (por exemplo, similar a um tubo de creme dental tube) que distribui uma composição quando submetida à pressão, e um recipiente que compreender um pistão que se move ao distribuir uma composição.

[000174] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma abertura do recipiente (por exemplo, um bocal) compreende uma válvula configurada de modo a ser aberta apenas quando uma composição está saindo do recipiente através da abertura, no momento em que composição sendo distribuída obstrui o ar de entrar através da abertura.

[000175] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma composição compreende a enzima de produção de peróxido de hidrogênio em contato com seu substrato, mas a enzima na composição é inibida de produzir o peróxido de hidrogênio devido a uma falta de água ou umidade no recipiente. Meios para embalar em ambiente não úmido são bem-conhecidos na técnica.

[000176] Em aplicações onde a composição é embalada em um recipiente, o recipiente pode ser identificado para uso em qualquer aplicação cosmética que exige peróxido de hidrogênio, conforme descrito em mais detalhes a seguir.

[000177] As concentrações da enzima de produção de peróxido de hidrogênio e o substrato respectivo podem ser selecionados de modo a resultar em uma taxa adequada de produção de peróxido de hidrogênio. O especialista na técnica pode determinar uma taxa adequada de peróxido de hidrogênio com base em uma concentração desejada (por exemplo, concentração de estado estável) de peróxido de hidrogênio (que dependerá do uso pretendido da composição) e em uma taxa na qual o peróxido de hidrogênio é consumido, que dependerá, por exemplo, de uma concentração e reatividade dos compostos que reagem com peróxido de hidrogênio (por exemplo, agentes tais como descritos nesse documento).

[000178] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas no contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração é cerca de 12,5 unidades/grama.

[000179] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas no contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 1,25 a 1250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 4 a 1250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 12,5 a 1250 unidades/grama.

[000180] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas no contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,125 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,125 a 12,5 unidades/grama.

[000181] Conforme utilizado nesse documento e na técnica, uma "unidade" de uma enzima refere-se a uma quantidade da enzima que catalisa uma conversão de 1 micromol de um substrato (por exemplo, um substrato conforme descrito nesse documento) por minuto, em uma temperatura de 25°C e em concentrações de substrato que produzem uma taxa de conversão máxima.

[000182] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas no contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,0175 µmols/grama a 175 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,175 a 17,5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,5 a 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1 a 3,5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração é cerca de 1,75 µmols/grama.

[000183] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas no contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,175 pmols/grama a 175 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,5 a 175 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1,75 a 175 µmols/grama.

[000184] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas no contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,0175 µmols/grama a 17,5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,0175 a 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,0175 a 1,75 µmols/grama.

[000185] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,0175 µmols/grama a 175 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000186] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,175 µmols/grama a 175 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000187] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,0175 µmols/grama a 17,5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000188] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,175 a 17,5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000189] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,5 a 175 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000190] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,0175 a 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000191] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,5 a 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000192] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 1,75 a 175 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000193] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 0,0175 a 1,75 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000194] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas de contexto de uma composição de produção de peróxido de hidrogênio, a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama, e a concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) na composição está em uma faixa de 1 a 3,5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose.

[000195] Deve ser observado que para qualquer uma das aplicações que pertencem a uma composição, conforme descrito nesse documento, qualquer uma das enzimas de produção de peróxido de hidrogênio, incluindo quaisquer das aplicações descritas nesse documento a esse respeito, em qualquer combinação, pode ser utilizada (a menos que outra seja indicada).

[000196] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações e quaisquer dos aspectos descritos nesse documento, a composição é para obter peróxido de hidrogênio per se como um agente ativo. O peróxido de hidrogênio pode ser pretendido, por exemplo, para clarear um local corporal tópico de um indivíduo (por exemplo, uma região da pele, cabelo e/ou unha de um indivíduo) por reação direta (por exemplo, branqueamento) com o local corporal tópico, para exibir uma atividade antimicrobiana, ou para exibir uma atividade de remoção de odor (por exemplo, remoção de odor de gambá).

[000197] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações e quaisquer dos aspectos descritos nesse documento, a composição compreende, ainda, pelo menos um agente que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica na presença de peróxido de hidrogênio. Em algumas aplicações, a composição é para obter a atividade de tal agente, pela geração de peróxido de hidrogênio na presença do agente.

[000198] Nesse documento, "um agente que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica na presença de peróxido de hidrogênio" engloba agentes que são ativados na presença de peróxido de hidrogênio. Por "ativado" entende-se que o agente é quimicamente modificado (por exemplo, oxidado) na presença de peróxido de hidrogênio e sua forma oxidada exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica desejada; ou o agente é uma enzima que requer peróxido de hidrogênio para exibir sua atividade (por exemplo, requer peróxido de hidrogênio como um substrato ou como um coativador).

[000199] Os exemplos não limitantes dos agentes que exibem uma atividade cosmética ou farmacêutica na presença de peróxido de hidrogênio incluem, por exemplo, peroxidases e precursores de corante oxidativo.

[000200] Os precursores de corante oxidativo são compostos que reagem para formar um colorante (por exemplo, um corante permanente) mediante a oxidação, por exemplo, para uso no tingimento do cabelo. O peróxido de hidrogênio é comumente utilizado para oxidar tais precursores de corante, e muitos precursores de corante oxidativo adequados e seus usos precisos serão conhecidos dos especialistas na técnica. Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição compreende pelo menos um precursor de corante oxidativo para tingimento do cabelo.

[000201] As peroxidases são enzimas que catalisam uma formação de um composto reativo, tal como uma espécie de oxigênio reativo (ROS|reactive oxygen species), na presença de peróxido de hidrogênio. Uma peroxidase, desse modo, aumenta a reatividade do peróxido de hidrogênio, pela conversão da mesma em um composto mais reativo. Tal composição pode ser útil, por exemplo, para clarear um local corporal tópico através da reação do composto reativo com o local corporal, para exibir uma atividade antimicrobiana, ou para exibir uma atividade aumentada de remoção de odor (por exemplo, remoção do odor de gambá).

[000202] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma peroxidase oxida tiocianato em hipotiocianato e/ou pelo menos um haleto (por exemplo, cloreto, brometo e/ou iodeto) em um hipohaleto (por exemplo, hipoclorito, hipobromito e/ou hipoiodito). Exemplos de tais peroxidases incluem, sem limitação, mieloperoxidase e eosinofil peroxidase (que pode cada oxidar, por exemplo, tiocianato, cloreto, brometo e iodeto), lactoperoxidase (que pode oxidar, por exemplo, tiocianato, brometo e iodeto), ovoperoxidase e vanádio bromoperoxidase (que pode cada oxidar, por exemplo, brometo e iodeto), Murex bromoperoxidase (que pode oxidar, por exemplo, brometo), peroxidase de rábano silvestre (que pode oxidar, por exemplo, tiocianato e iodeto) e tireoide peroxidase (que pode oxidar, por exemplo, iodeto).

[000203] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição compreende, ainda, um substrato (por exemplo, tiocianato, cloreto, brometo, iodeto e/ou um mediador oxidante conforme descrito nesse documento) que é oxidado na presença de peróxido de hidrogênio e a peroxidase.

[000204] Nesse documento, a expressão "mediador oxidante" refere-se a uma molécula que facilita uma reação redox catalisada pela peroxidase, por exemplo, pelo aumento do potencial oxidativo e/ou a estabilidade de uma peroxidase e/ou pela ação como um cofator para a peroxidase e/ou pela ação como um substrato da peroxidase que forma um produto intermediário reativo (por exemplo, um radical livre). Os mediadores oxidantes incluem compostos (por exemplo, compostos aromáticos) capazes de estabilizar os elétrons (por exemplo, pela deslocalização) transferidos durante uma reação catalisada pela peroxidase.

[000205] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a peroxidase oxida um substrato (por exemplo, tiocianato, cloreto, brometo, iodeto) presente dentro ou no local corporal tópico na presença de peróxido de hidrogênio.

[000206] Outras atividades cosméticas ou farmacêuticas de peroxidases também podem ser utilizadas no contexto de quaisquer das aplicações desse aspecto do presente pedido de patente de invenção.

[000207] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a peroxidase é capaz, na presença de peróxido de hidrogênio, de degradar melanina em um indivíduo (por exemplo, na pele e/ou cabelo) . Em algumas aplicações, a presença de um mediador oxidante é necessária para a peroxidase para degradar melanina na presença de peróxido de hidrogênio. A degradação de melanina é útil para clarear a pele e/ou cabelo. A lignina peroxidase é uma peroxidase exemplar capaz de degradar a melanina.

[000208] Sem ser vinculado a nenhuma teoria particular, acredita-se que algumas peroxidases (por exemplo, lignina peroxidase) degradem a melanina pela oxidação de um mediador oxidante (que serve como um substrato) de modo a formar um radical livre, e o radical livre, então, reage de modo a degradar a melanina.

[000209] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações e quaisquer dos aspectos descritos nesse documento, a composição é uma composição de tintura de cabelo. Nesse documento, a expressão "composição de tintura de cabelo" refere-se a qualquer composição utilizada na coloração (por exemplo, tingimento permanente) do cabelo, incluindo composições que compreendem uma tintura de cabelo e/ou precursor respectivo e composições que não compreendem uma tintura de cabelo ou precursor respectivo, mas que são pretendidos para estar em contato com uma tintura de cabelo e/ou precursor respectivo (por exemplo, no cabelo).

[000210] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações e quaisquer dos aspectos descritos nesse documento, a composição é uma composição de remoção de odor, por exemplo, para remoção de odor de gambá (por exemplo, da pele, cabelo e/ou unha). Em algumas aplicações, a composição de remoção de odor compreende, ainda, um detergente (por exemplo, lauril sulfato de sódio) e/ou um agente alcalino (por exemplo, bicarbonato de sódio).

[000211] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações e quaisquer dos aspectos descritos nesse documento, a composição é uma composição antimicrobiana. Nesse documento, a expressão "composição antimicrobiana" refere-se a qualquer composição para exterminar ou, de outra maneira, inibir os animais, plantas, fungos, bactérias, arquebactérias e/ou virus microscópicos.

[000212] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações e quaisquer dos aspectos descritos nesse documento, a composição é uma composição de branqueamento. Nesse documento, a expressão "composição de branqueamento" refere-se a qualquer composição para remover pelo menos uma porção de uma cor, e inclui, por exemplo, composições para clarear a pele e/ou porções da pele, composições de branqueamento do cabelo, e composições para remover manchas das unhas.

[000213] Conforme exemplificado nesse documento, lignina peroxidase é capaz de degradar a melanina, desse modo, clareando a pele e/ou cabelo.

[000214] A lignina peroxidase é um agente exemplar que exibe uma atividade cosmética na presença de peróxido de hidrogênio.

[000215] Em algumas aplicações, a lignina peroxidase é utilizada em combinação com qualquer uma das aplicações descritas nesse documento para uma composição e/ou enzima de produção de peróxido de hidrogênio, e qualquer combinação respectiva.

[000216] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a pele para ser clareada compreende pele facial (por exemplo, testa e/ou bochechas).

[000217] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a pele para ser clareada compreende uma região da pele exposta ao sol (por exemplo, uma região bronzeada).

[000218] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, clarear a pele compreende clarear uma tez da pele inteira.

[000219] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a pele para ser clareada compreende uma porção da pele relativamente escura, por exemplo, a pele compreendendo um tom desigual, uma ou manchas escuras, uma ou mais sardas, melasma, hiperpigmentação da pele, descoloração da pele, uma ou mais manchas da idade, uma ou mais marcas de acne e/ou uma cicatriz.

[000220] Conforme descrito nesse documento, uma concentração desejada de peróxido de hidrogênio pode ser determinada pela seleção de concentrações adequadas de enzima de produção de peróxido de hidrogênio e o substrato respectivo e compostos que reagem com peróxido de hidrogênio (se algum descrito nesse documento).

[000221] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição para obter peróxido de hidrogênio per se (por exemplo, uma composição de branqueamento) tem concentrações de ingredientes selecionados de modo a resultar em uma concentração de peróxido de hidrogênio relativamente alta, por exemplo, de 0,5 a 12 por cento em peso. Em algumas aplicações, o peróxido de hidrogênio concentração é não mais que 6 por cento em peso. Em algumas aplicações, a concentração de peróxido de hidrogênio é não mais que 3 por cento em peso. Uma concentração de peróxido de hidrogênio relativamente alta pode ser obtida, por exemplo, pela minimização de uma presença de compostos que reagem com peróxido de hidrogênio e/ou pela seleção de concentração mais alta do componente do sistema enzimático, conforme descrito nesse documento.

[000222] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição que compreende um agente que exibe uma atividade na presença de peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento) tem concentrações de ingredientes selecionadas de modo a resultar em uma concentração de peróxido de hidrogênio adequada para obter a atividade do agente. Em algumas aplicações, a concentração de peróxido de hidrogênio é relativamente baixa, por exemplo, não mais que 0,5 por cento em peso. Em algumas aplicações, a concentração de peróxido de hidrogênio é não mais que 0,1 por cento em peso. Em algumas aplicações, a concentração de peróxido de hidrogênio é não mais que 0,02 por cento em peso. Deve ser apreciado que o agente pode ajudar a manter uma concentração de peróxido de hidrogênio relativamente baixa pela reação com o peróxido de hidrogênio. O agente pode reagir continuamente com o peróxido de hidrogênio gerado de modo que uma baixa concentração de peróxido de hidrogênio seja mantida continuamente.

[000223] Baixa concentração de peróxido de hidrogênio pode ser especialmente vantajosa, por exemplo, em uma composição que compreende um agente (por exemplo, uma proteína tal como uma peroxidase) que pode ser sensível a (por exemplo, adversamente afetada por) concentrações altas de peróxido e/ou que podem ser altamente eficazes na reação com peróxido de hidrogênio. Tais agentes que podem ser adversamente afetados pelas concentrações altas de peróxido de hidrogênio incluem, por exemplo, certas peroxidases (por exemplo, lignina peroxidase), que são conhecidas, por exemplo, por sofrerem "autossuicídio" na presença de altas concentrações de peróxido de hidrogênio.

CONJUNTOS PARA OBTER A COMPOSIÇÃO DE PRODUÇÃO DE PERÓXIDO DE HIDROGÊNIO:

[000224] Deve ser entendido que uma composição de produção de peróxido de hidrogênio de acordo com qualquer uma das aplicações relacionadas a tais composições pode ser obtida utilizando um conjunto de acordo com qualquer uma das aplicações descritas nesse documento em relação a tais conjuntos (por exemplo, conforme descrito nessa seção). O especialista na técnica será capaz de selecionar um conjunto adequado, conforme descrito nesse documento, de modo a obter qualquer composição desejada descrita nesse documento, com base na orientação provida nesse documento.

[000225] Para qualquer uma das aplicações que descrevem um conjunto, qualquer uma das enzimas de produção de peróxido de hidrogênio e/ou composições, incluindo qualquer uma das respectivas aplicações respectivas, e qualquer combinação respectiva, podem ser utilizadas.

[000226] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, quaisquer das composições, conforme descrito nesse documento, podem ser consideradas como uma composição de duas (ou mais) partes, em que uma parte da composição compreende uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio, conforme descrito nesse documento, e uma parte da composição compreende um substrato da enzima.

[000227] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição de duas partes é embalada em um conjunto e é identificada para uso em qualquer aplicação cosmética ou farmacêutica que utiliza peróxido de hidrogênio, seja per se, ou em combinação com outro agente, conforme descrito nesse documento.

[000228] De acordo com um aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecido um conjunto para formar e/ou aplicar (topicamente) a um local corporal tópico de um individuo, uma composição cosmética ou farmacêutica, conforme descrito nesse documento, em que a composição cosmética ou farmacêutica compreende peróxido de hidrogênio (por exemplo, de acordo com um método descrito nesse documento).

[000229] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é embalada no conjunto, de modo que todos os seus componentes são embalados juntos em um recipiente, em condições que inibem a formação de peróxido de hidrogênio, conforme descrito nesse documento. Em algumas dessas aplicações, uma vez que a composição é dispensada do recipiente e aplicada no local corporal, sua exposição ao ar e/ou umidade promove uma reação entre a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e seu substrato e o peróxido de hidrogênio é produzido.

[000230] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma parte da composição que compreende uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e uma parte da composição que compreende o substrato são embaladas individualmente dentro do conjunto, de modo que a composição é formada uma vez que essas duas partes da composição são misturadas.

[000231] Por "embalado individualmente" entende- se que não há contato direto entre as partes da composição (ou as primeira e segunda composições, conforme descrito nesse documento) quando no conjunto.

[000232] Por exemplo, cada parte da composição (por exemplo, uma primeira composição e uma segunda composição, conforme descrito nesse documento) é individualmente embalada dentro de um recipiente vedado no conjunto. O recipiente pode ser feito de, por exemplo, plástico, madeira, náilon, vidro, tecido, metal, couro e/ou folha de metal.

[000233] Um ou mais dos recipientes podem incluir meios para distribuir seu conteúdo, seja diretamente ao local corporal tópico ou em um receptáculo para misturar com outras partes da composição que são embaladas individualmente dentro do conjunto. Alternativamente, o conjunto compreende, ainda, meios para distribuir os conteúdos de um ou mais dos recipientes e/ou meios para misturar os conteúdos do recipiente e meios para distribuir a mistura obtida no local corporal tópico.

[000234] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o conjunto compreende uma primeira composição, compreendendo uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento) e uma segunda composição, compreendendo um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento). Em algumas aplicações, as primeira e segunda composições do conjunto são embaladas individualmente no conjunto. A primeira composição e a segunda composição do conjunto podem ser combinadas de modo a preparar a composição cosmética ou farmacêutica (por exemplo, uma composição descrita nesse documento) em que a enzima contata o substrato, produzindo, desse modo, o peróxido de hidrogênio na composição.

[000235] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o conjunto compreende, ainda, pelo menos um agente que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica na presença de peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento). O(s) agente(s) pode(m) ser incluído(s) dentro da primeira composição, da segunda composição e/ou em uma terceira composição dentro do conjunto, que é individualmente embalado no conjunto. A primeira composição e a segunda composição e terceira composição opcional do conjunto podem ser combinadas de modo a preparar a composição cosmética ou farmacêutica compreendendo o(s) agente(s) (por exemplo, conforme descrito nesse documento).

[000236] A combinação das primeira e segunda composições do conjunto pode ser efetuada imediatamente antes da aplicação ao local corporal tópico (por exemplo, entre 1 minuto e 10 minutos antes da aplicação), ou durante a aplicação ao local corporal tópico.

[000237] Minimizar um intervalo de tempo entre a combinação das composições pode ser vantajosos para evitar uma situação em que o peróxido de hidrogênio está sendo produzido na presença de um agente, tal como uma peroxidase ou um precursor de corante oxidativo, que reage com o peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento) quando a composição não está em contato com o local corporal tópico, como tal situação poderia resultar em consumo não produtivo (por exemplo, um resíduo) do peróxido de hidrogênio.

[000238] A combinação das primeira e segunda composições do conjunto durante aplicação pode ser efetuada, por exemplo, pela coadministração das primeira e segunda composições do conjunto para o local corporal tópico.

[000239] Por "coadministração" entende-se que as primeira e segunda composições são topicamente administradas ao local corporal ao mesmo tempo (concomitantemente) ou, que as primeira e segunda composições do conjunto são administradas sequencialmente, em qualquer ordem, pelo que o tempo de intervalo entre a administração da primeira composição e administração da segunda composição pode variar de 0,1 minuto a 5 minutos. Em algumas aplicações, o intervalo de tempo é não mais que 2 minutos.

[000240] Se uma terceira composição está incluída no conjunto, pode ser combinada com a primeira e segunda composição antes da aplicação ao local corporal, ou ser coadministrada ao local corporal com as primeira e segunda composições.

[000241] A terceira composição pode ser coadministrada concomitantemente com a primeira e/ou segunda composição, antes da administração da primeira e/ou segunda composição, ou depois disso, com o intervalo de tempo entre as administrações ser como descrito anteriormente.

[000242] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o conjunto compreende, ainda, instruções escritas de como utilizar a(s) composição(ões) ali, por exemplo, uma quantidade de uma composição a ser aplicada, uma sequência na qual diferentes composições devem ser aplicadas, uma temporização e/ou frequência de aplicações e/ou uma duração do tratamento (por exemplo, conforme descrito nesse documento).

[000243] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o conjunto compreende, ainda, uma composição de lavagem, tal como uma lavagem facial, para limpar um local corporal tópico antes do contato com uma composição descrita nesse documento.

[000244] De acordo com as aplicações exemplares, a lavagem facial compreende ingredientes como apresentados na Tabela 1:
Tabela 1: Lavagem Facial de acordo com aplicações exemplares

[000245] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o conjunto inclui instruções apropriadas para uso e rótulos, indicando aprovação por uma agência reguladora para uso indicado, conforme descrito nesse documento.

APLICAÇÕES COSMÉTICAS DE UMA COMPOSIÇÃO DE PRODUÇÃO DE PERÓXIDO DE HIDROGÊNIO:

[000246] Conforme exemplificado nesse documento, ao fornecer uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio em contato com seu substrato, as composições descritas nesse documento são eficazes na administração de peróxido de hidrogênio em uma superfície.

[000247] De acordo com um aspecto das aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecido um método de administrar topicamente peróxido de hidrogênio a um local corporal tópico de um indivíduo (por exemplo, na pele, cabelo e/ou unha de um indivíduo) . O método, de acordo com algumas dessas aplicações, é efetuado pelo contato de um local corporal tópico, ou uma região respectiva, do indivíduo com uma composição (por exemplo, uma composição descrita nesse documento) compreendendo uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio. Em algumas aplicações, a composição é formada por uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato respectivo conforme embalado dentro de um conjunto conforme descrito nesse documento.

[000248] Deve ser entendido que um método para administrar topicamente um peróxido de hidrogênio de acordo com qualquer uma das aplicações em relação a tal método (por exemplo, conforme descrito nessa seção) pode utilizar um sistema de produção de peróxido de hidrogênio e/ou um conjunto de acordo com qualquer uma das aplicações descritas nesse documento em relação a tais sistemas e/ou conjuntos.

[000249] Conforme utilizado nesse documento, os termos "tópico" e "topicamente" referem-se a um local corporal tópico, conforme definido nesse documento, incluindo, por exemplo, administração de uma composição pela aplicação em um local corporal tópico, e composições para administração de tal maneira.

[000250] Nesse documento, a expressão "local do corpo tópico" ou "local corporal tópico" refere-se a uma superfície da pele (incluindo qualquer região particular da superfície da pele) e/ou cabelo (incluindo todo o cabelo e/ou qualquer região particular do cabelo) de qualquer parte do corpo e/ou superfície da unha (incluindo todas as unhas da mão e/ou unhas do pé e/ou qualquer unha individual e/ou uma região respectiva) . A pele pode ser de qualquer parte do corpo, por exemplo, pele facial, pele do pescoço, pele do braço, pele da mão, pele do tronco e/ou pele da perna. O cabelo pode ser, por exemplo, cabelo da cabeça, pelo facial e/ou pelo pubiano. Essa expressão também engloba uma determinada região ou parte de uma superfície da pele (por exemplo, uma parte de uma pele facial, uma parte de uma pele do braço ou da perna) , ou de um cabelo (por exemplo, uma parte do pelo facial, da cabeça ou pubiano), conforme descrito em mais detalhes em outro lugar nesse documento.

[000251] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a pele de um local corporal tópico não inclui membranas mucosas, tais como aquelas da boca, lábios, pálpebras, orelhas, área genital e ânus.

[000252] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é formada pelo contato do local corporal tópico ou uma região respectiva com a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e/ou o substrato respectivo subsequente ao contato do local corporal tópico ou uma região respectiva com o agente que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica na presença de peróxido de hidrogênio. Em tal sequência, o peróxido de hidrogênio apenas será gerado na presença do agente que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica na presença do peróxido de hidrogênio, que pode permitir uma utilização mais eficaz do peróxido de hidrogênio.

[000253] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é formada pelo contato do local corporal tópico com a enzima de produção de peróxido de hidrogênio antes do contato do local corporal tópico com o substrato.

[000254] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é formada pelo contato do local corporal tópico com a enzima de produção de peróxido de hidrogênio após contato do local corporal tópico com o substrato.

[000255] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é formada pelo contato do local corporal tópico com a enzima de produção de peróxido de hidrogênio concomitantemente com o contato do local corporal tópico com o substrato.

[000256] O agente que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica na presença do peróxido de hidrogênio pode estar em contato com o local corporal tópico (ou região respectiva) antes, após ou concomitantemente com o contato da região tópica com quaisquer dos outros componentes, por exemplo, pela coadministração (conforme definido nesse documento) do agente com a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e/ou o substrato respectivo.

[000257] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é para tingir o cabelo, e o método compreendendo, ainda, o contato do cabelo com pelo menos um precursor de corante oxidativo para tingir o cabelo, conforme descrito nesse documento.

[000258] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método compreende, ainda, o contato do local corporal tópico com uma peroxidase (por exemplo, conforme descrito nesse documento). Tal método pode ser útil, por exemplo, para clarear um local corporal tópico, para exibir uma atividade antimicrobiana, ou para exibi uma atividade aumentada de remoção do odor (por exemplo, conforme descrito nesse documento).

[000259] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método compreende, ainda, o contato do local corporal tópico com um substrato e/ou mediador oxidante da peroxidase (por exemplo, conforme descrito nesse documento).

[000260] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é para remoção de odor de gambá (por exemplo, de um local corporal tópico). Em algumas aplicações, o método compreende, ainda, o contato do local corporal tópico com um detergente (por exemplo, lauril sulfato de sódio) e/ou um agente alcalino (por exemplo, bicarbonato de sódio).

[000261] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é para obter uma atividade antimicrobiana, por exemplo, pela formação de uma composição antimicrobiana (por exemplo, conforme descrito nesse documento).

[000262] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é para branquear um local corporal tópico ou uma região respectiva, por exemplo, pela formação de uma composição de branqueamento (por exemplo, conforme descrito nesse documento). O método pode compreender, por exemplo, clarear a pele e/ou porções da pele, branquear o cabelo e/ou remover manchas das unhas.

[000263] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é para clarear a pele facial (por exemplo, testa e/ou bochechas).

[000264] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é para clarear uma região da pele exposta ao sol (por exemplo, uma região bronzeada).

[000265] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é para clarear uma tez da pele inteira.

[000266] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é para clarear uma porção relativamente escura da pele, por exemplo, a pele compreendendo um tom desigual, uma ou mais manchas escuras, uma ou mais sardas, melasma, hiperpigmentação da pele, descoloração da pele, uma ou mais manchas da idade, uma ou mais marcas de acne e/ou uma cicatriz.

[000267] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é efetuado repetidamente, opcionalmente mesmo indefinidamente, a fim de responder uma formação de cor repetida, tal como melanina recém-formada na pele, novo crescimento de cabelo escuro, formação de mancha crônica nas unhas e assim por diante.

[000268] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 5 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 10 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 20 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 50 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 100 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 200 vezes.

[000269] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é efetuado pelo contato da região tópica uma ou duas vezes ao dia. Nas aplicações exemplares, o contato é efetuado duas vezes ao dia.

[000270] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é efetuado por, pelo menos, uma semana. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, duas semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, três semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, quatro semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, seis semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, oito semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, três meses. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, quatro meses. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, seis meses. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, um ano.

[000271] A dosagem e curso do tratamento dependerão do tipo de tratamento e a gravidade de uma aflição a ser tratada, com o curso do tratamento durante de um dia a várias semanas ou mais, ou até a cura ser efetuada ou diminuição da condição a ser tratada ser alcançada.

[000272] A quantidade de uma composição a ser administrada, com certeza, dependerá do indivíduo a ser tratado, o grau de uma condição a ser tratada, o modo de administração, o julgamento de um médico assistente, ou um cosmetologista ou o consumidor, o efeito desejado da composição, etc.

[000273] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o local corporal tópico é limpo (por exemplo, com uma lavagem, conforme descrito nesse documento) antes do contato com uma composição descrita nesse documento.

[000274] Nas aplicações onde o método é, por exemplo, para branquear ou tingir o cabelo, o método pode ser efetuado uma vez, para alcançar um efeito desejado e pode ser repetido, uma vez que o efeito desejado é reduzido ou diminuído.

[000275] Nas aplicações onde o método é, por exemplo, para tratar uma infecção, o tratamento é efetuado uma vez, até a infecção ser eliminada, e o número de administrações e duração do tratamento ser efetuado até a cura ser efetuada.

COMPOSIÇÕES, MÉTODOS E CONJUNTOS DE PRODUÇÃO DE PERÓXIDO DE HIDROGÊNIO PARA CLAREAR A PELE E/OU CABELO:

[000276] Uma aplicação exemplar das composições, métodos e conjuntos descritos nesse documento é uma composição para clarear um local corporal tópico tal como pele e/ou cabelo em que uma composição de produção de peróxido de hidrogênio conforme descrita nesse documento é utilizada em combinação com lignina peroxidase.

[000277] Deve ser entendido que uma composição, método e/ou conjunto de acordo com qualquer uma das aplicações relacionadas a tais composições, métodos e/ou conjuntos pode ser utilizada para clarear a pele e/ou cabelo, conforme descrito nesse documento (por exemplo, nessa seção).

[000278] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, é fornecida uma composição cosmética para clarear um local corporal tópico tal como pele e/ou cabelo de um indivíduo (por exemplo, conforme descrito nesse documento), a composição compreendendo uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento) e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento).

[000279] De acordo com outro aspecto das aplicações descritas nesse documento, é fornecido um método cosmético de clareamento de um local corporal tópico tal como pele e/ou cabelo de um indivíduo (por exemplo, conforme descrito nesse documento) , o método compreendendo o contato de uma região tópica de um indivíduo com uma composição compreendendo uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, uma composição contendo lignina peroxidase descrita nesse documento). Em algumas aplicações, a composição é formada por uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato respectivo conforme embalado dentro de um conjunto descrito nesse documento.

[000280] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição é formada pelo contato da região tópica com a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e/ou o substrato respectivo subsequente ao contato da região tópica com a lignina peroxidase. Em tal sequência, o peróxido de hidrogênio apenas será gerado na presença da lignina peroxidase, que pode permitir uma utilização mais eficaz do peróxido de hidrogênio.

[000281] As composições que compreendem lignina peroxidase, conforme descrito nesse documento, podem ser fornecidas em concentrações mais altas e ser prescritas por um médico, como uma composição farmacêutica ou cosmética para tratar distúrbios de pigmentação da pele tais como melasma, cloasma, ocronose e lentigem e/ou para clarear a tez da pele inteira.

[000282] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 5 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 10 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 20 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 50 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 100 vezes. Em algumas aplicações, o método é efetuado pelo contato da região tópica com a composição pelo menos 100 vezes.

[000283] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é efetuado pelo contato da região tópica uma ou duas vezes ao dia. Nas aplicações exemplares, o contato é efetuado duas vezes ao dia.

[000284] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o método é efetuado por, pelo menos, uma semana. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, duas semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, três semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, quatro semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, seis semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, oito semanas. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, três meses. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, quatro meses. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, seis meses. Em algumas aplicações, o método é efetuado por, pelo menos, um ano.

[000285] A dosagem e curso do tratamento dependerão do grau de cor (por exemplo, pigmentação) na região a ser tratada, por exemplo, um grau de pigmentação da pele em um distúrbio de pigmentação da pele (por exemplo, cloasma, melasma, ocronose e lentigem), o tom da cor da pele, tez da pele e/ou a capacidade de resposta da pele, com o curso de tratamento durante de vários dias a várias semanas ou mais, ou até a cura ser efetuada ou a diminuição do distúrbio da pele ser alcançada.

[000286] A quantidade de uma composição a ser administrada dependerá, com certeza, no indivíduo a ser tratado, o grau de uma condição a ser tratada, o modo de administração, o julgamento de um médico assistente ou um cosmetologista, ou o consumidor, etc.

LIGNINA PEROXIDASE:

[000287] Deve ser entendido que a lignina peroxidase, de acordo com qualquer uma das aplicações descritas nesse documento referente à lignina peroxidase (por exemplo, conforme descrito nessa seção), pode ser utilizada em combinação com um sistema enzimático de produção de peróxido de hidrogênio de acordo com qualquer uma das aplicações descritas nesse documento referente a tal sistema.

[000288] Conforme utilizado nesse documento, a expressão "lignina peroxidase" refere-se a uma enzima que desempenha um papel importante na degradação da lignina. A lignina peroxidase é capaz de catalisar a oxidação dos substratos com potencial redox alto. Essa habilidade única é consistente com um local ativo heme de baixa densidade de elétron, que é indicada pelo potencial redox alto [Cai e Tien, J Biotechnol 1993, 30: 79-90] .

[000289] Exemplos de lignina peroxidases são classificados como EC 1.11.1.14.

[000290] A manganês peroxidase (EC 1.11.1.13) está envolvida na degradação de lignina em Basidomycetes (por exemplo, Phanerochaete chrysosporium) e também é definida nesse documento como uma peroxidase de degradação de lignina.

[000291] A lignina peroxidase é produzida em vários organismos e as sequências de codificação das enzimas de lignina peroxidase estão disponíveis de GenBank através do http://www (ponto) ncbi (ponto) nlm (ponto) nih (ponto) gov/. Por exemplo, a lignina peroxidase de Phanerochaete chrysosporium (ID SEQ. N° 1); Mycobacterium tuberculosis H37Rv [número de acesso ao GenBank NP_216416.1 (ID SEQ. N° 2 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 3 (polinucleotídeo) ] ; Mycobacterium bovis AF2122/97 [número de acesso ao GenBank NP_855586.1 (ID SEQ. N° 4 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 5 (polinucleotídeo)]; Mycobacterium bovis BCG str. Pasteur 1173P2 [número de acesso ao GenBank YP_978029.1 (ID SEQ. N° 6 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 7 (polinucleotídeo)]; Mycobacterium bovis BCG str. Tokyo 172 [número de acesso ao GenBank YP_002644977.1 (ID SEQ. N° 8 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 9 (polinucleotídeo)]; Mycobacterium tuberculosis H37Ra [número de acesso ao GenBank YP_001283231.1 (ID SEQ. N° 10 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 11 (polinucleotídeo)]; Mycobacterium ulcerans Agy99 [número de acesso ao GenBank YP_908214.1 (ID SEQ. N° 12 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 13 (polinucleotídeo)]; Mycobacterium marinum M [número de acesso ao GenBank YP_001848608.1 (ID SEQ. N° 14 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 15 (polinucleotídeo)]; Mycobacterium tuberculosis KZN 1435 [número de acesso ao GenBank YP_003032055.1 (ID SEQ. N° 16 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 17 (polinucleotídeo)]; Mycobacterium tuberculosis Fll [número de acesso ao GenBank YP_001287866.1 (ID SEQ. N° 18 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 19 (polinucleotídeo)]; P. chrysosporium ligninase (CKG4) [número de acesso ao GenBank M18743.1 (ID SEQ. N° 20 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 21 (polinucleotídeo)]; Phanerochaete chrysosporium (anamorph: Sporotrichum pruinosum) [número de acesso ao GenBank M80213.1 (ID SEQ. N° 22 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 23 (polinucleotídeo)]; Phanerochaete sordida ylpB [número de acesso ao GenBank AB455007.1 (ID SEQ. N° 24 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 25 (polinucleotídeo)]; Phanerochaete chrysosporium (anamorph: Sporotrichum pruinosum) [número de acesso ao GenBank M77508.1 (ID SEQ. N° 26 (polipeptídeo) e ID SEQ. N° 27 (polinucleotídeo)].

[000292] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a lignina peroxidase é uma lignina peroxidase de um fungo da podridão branca, por exemplo, uma lignina peroxidase extraída de um fungo da podridão branca ou uma proteína recombinante derivada de uma lignina peroxidase do fungo da podridão branca.

[000293] Nesse documento e na técnica, a expressão "fungo da podridão branca" refere-se aos fungos capazes de quebrar a lignina na madeira. Como tal processo frequentemente deixa a celulose da madeira de cor clara, tais fungos tipicamente causam o ataque para assumir uma cor mais clara.

[000294] Exemplos de fungos da podridão branca que produzem uma lignina peroxidase adequada incluem, entre outros, Phanerochaete (por exemplo, Phanerochaete chrysosporium, Phanerochaete sordida), Trametes (por exemplo, Trametes versicolor) e Ganoderma.

[000295] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, a enzima de lignina peroxidase utilizada de acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção é a isoforma Hl de lignina peroxidase, que exibe atividades de oxidação de melanina ambos in vitro e in vivo [WO 2004/052275] .

[000296] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 6 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 12,5 a 125 unidades/grama.

[000297] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1,25 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1,25 a 12,5 unidades/grama.

[000298] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 0,125 a 1250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 12.5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000299] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 1,25 a 1250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 12.5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000300] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 0,125 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 12.5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000301] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 12.5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000302] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 4 a 1250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 12.5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000303] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 0,125 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 12.5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000304] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama, e a concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio na composição está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000305] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a lignina peroxidase é utilizada em combinação com um mediador oxidante. Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a composição que compreende lignina peroxidase compreende, ainda, um mediador oxidante (conforme definido nesse documento).

[000306] Os mediadores oxidantes para lignina peroxidase incluem moléculas aromáticas, tais como compostos aromáticos etoxilados.

[000307] Exemplos de mediadores oxidantes adequados incluem, entre outros, compostos fenólicos tais como álcool veratrílico (3,4-dimetoxibenzil álcool), veratrol (1,2-dimetoxibenzeno) e 1,4-dimetoxibenzeno. Álcool veratrílico é um mediador oxidante exemplar.

[000308] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração é cerca de 3 µmols/grama.

[000309] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 µmols/grama a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 3 a 300 µmols/grama.

[000310] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,03 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,03 a 3 µmols/grama.

[000311] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000312] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 4 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000313] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000314] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 4 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000315] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 6 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000316] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000317] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 6 a 20 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000318] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 12,5 a 125 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000319] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição está em uma faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase na composição está em uma faixa de 1,25 a 12,5 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,03 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 300 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,3 a 30 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 1 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 3 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico.

[000320] Várias abordagens podem ser utilizadas para produzir a enzima de lignina peroxidase utilizada de acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção.

[000321] Por exemplo, a isoenzima Hl de lignina peroxidase pode ser preparada a partir do fungo Phanerochaete chrysosporium. Altos níveis de atividade enzimática de lignina peroxidase podem ser produzidos a partir do fungo acima quando cultivados em um fermentador do reator de tanque agitado (STR|stirred tank reactor) enquanto é imobilizado na espuma de poliuretano em suspensão [Dosoretz et al., Appl Environ Microbiol 1993, 59: 1919-26].

[000322] De acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, o fermentador é conectado a um sistema de resfriamento para manter uma temperatura de cultura de 37 °C e é agitado à velocidade de 50 a 300 rpm (rotações por minuto) , mais preferencialmente, 100 a 200 rpm, mais preferencialmente a 160 rpm. A fim de aumentar o rendimento da atividade de lignina peroxidase, o fermentador é oxigenado a uma taxa de oxigenação de 0,1 a 1 litro de ar por litro de meio de cultura por minuto. De acordo com as configurações presentemente preferidas, o fermentador é oxigenado em uma taxa de oxigenação de 0,2 litro de ar por litro de meio de cultura por minuto.

[000323] O Phanerochaete chrysosporium é cultivado em condições de cultura desprovidas de ions de manganês e contendo glicerol como uma fonte de carbono. De acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, o glicerol é fornecido em uma faixa de concentração de 3 a 20 gramas por litro. De acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, o glicerol é fornecido em uma concentração de 6 gramas por litro.

[000324] Durante o processo de purificação de isoenzima Hl de lignina peroxidase do fungo acima, a atividade enzimática da proteína purificada está sendo adicionalmente testada para uma mudança na absorvência a 310 nm, que ocorre devido à oxidação do álcool veratrílico para veratril aldeído.

[000325] Como a isoenzima Hl de lignina peroxidase pode resultar de uma desfosforilação pós-translacional da isoenzima H2 [Kuan e Tien, J Biol Chem 1989, 264:20350-20355], a lignina peroxidase utilizada de acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção pode ser preparada pela desfosforilação da isoenzima H2 de lignina peroxidase.

[000326] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, a lignina peroxidase pode ser recombinantemente expressa utilizando uma estrutura de ácido nucleico projetada para expressar a sequência de codificação da lignina peroxidase em uma célula hospedeira. Os exemplos não limitantes de tais sequências de ácido nucleico são fornecidos nas ID SEQ. N° : 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25 e 27 .

[000327] Os procedimentos gerais para expressar uma proteína, tal como lignina peroxidase, são descritos em detalhes nesse documento.

[000328] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, a lignina peroxidase é expressa em células bacterianas modificadas para expressar a lignina peroxidase conforme divulgada na Patente Norte-Americana n° 5.200.338. Por exemplo, uma célula bacteriana, tal como E. coli, pode ser transformada com um vetor de expressão incluindo a sequência de codificação da lignina peroxidase sob o controle regulatório de um forte promotor constitutivo o (por exemplo, SP6) (por exemplo, codificando um polipeptídeo com a ID SEQ. N° 1) . Após a expressão, as células bacterianas podem ser lisadas e a lignina peroxidase pode ser coletada utilizando técnicas cromatográficas (consulte, Billman-Jacobe [Curr Opin Biotechnol 1996, 7: 500-4]; Harris e Emtage [Microbiol. Sci. 1986, 3: 28-31], para mais detalhes).

[000329] A lignina peroxidase, de acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, pode ser extraída de linhagens de célula de mamífero tais como células HeLa. Nesse caso, a sequência de codificação da lignina peroxidase está posicionada em um forte promotor de mamífero (por exemplo, CMV) em um vetor de expressão adequado (por exemplo, pCDNA3.1, Invitrogen Life Technologies, Frederick, MD, EUA). Após transfecção das células HeLa com o vetor de expressão, o produto de expressão de lignina peroxidase pode ser extraído das células ou meio (por exemplo, pela modificação da sequência de lignina peroxidase para incluir um sinal de secreção) através de técnicas convencionais de purificação e cromatografia (consulte Cunha e Aires-Barros [Mol. Biotechnol. 2002, 20: 29-40] para mais detalhes).

EXPRESSÃO DE PROTEÍNA:

[000330] Uma estrutura de ácido nucleico (também referida nesse documento como um "vetor de expressão") utilizada em algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção (por exemplo, para expressar uma lignina peroxidase ou enzima de produção de peróxido de hidrogênio descritas nesse documento) inclui sequências adicionais que tornam esse vetor adequado para replicação e integração em procariotas, eucariotas ou preferencialmente ambos (por exemplo, vetores de transporte). Além disso, os vetores de clonagem típicos também podem conter uma sequência de iniciação de transcrição e tradução, terminador de transcrição e tradução e um sinal de poliadenilação. A titulo de exemplo, tais estruturas incluirão tipicamente 5' LTR, um local de ligação de tRNA, um sinal de empacotamento, uma origem de síntese de DNA de segunda cadeia e um 3' LTR ou uma porção respectiva.

[000331] A estrutura de ácido nucleico de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção tipicamente inclui uma sequência de sinal para secreção do peptídeo de uma célula hospedeira na qual é colocada. Preferencialmente, a sequência de sinal para essa finalidade é uma sequência de sinal de mamífero ou a sequência de sinal das variantes de polipeptídeo de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção.

[000332] Os promotores eucarióticos tipicamente contêm dois tipos de sequência de reconhecimento, a caixa TATA e elementos do promotor a montante. Pensa-se que a caixa TATA, localizada de 25 a 30 pares de base a montante do local de iniciação da transcrição, está envolvida no direcionamento do RNA polimerase para começar a síntese de RNA. Os outros elementos promotores a montante determinam a taxa na qual a transcrição é iniciada.

[000333] Os elementos potenciadores podem estimular a transcrição até 1.000 vezes a partir dos promotores homólogos ou heterólogos. Os potenciadores são ativos quando colocados a jusante ou a montante do local de iniciação da transcrição. Muitos elementos potenciadores derivados de vírus têm uma ampla faixa de hospedeiros e são ativos em uma variedade de tecidos. Por exemplo, o potenciador de gene inicial SV40 é adequado para muitos tipos de células. Outras combinações de potenciador/promotor que são adequadas para algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção incluem aquelas derivadas de poliomavírus, citomegalovírus (CMV|cytomegalovirus) humano ou murino, a repetição a longo prazo de vários retrovirus, tais como vírus da leucemia murina, vírus de sarcoma murino ou Rous e HIV. Consulte Enhancers and Eukaryotic Expression, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 1983, que é incorporado nesse documento por referência.

[000334] Na construção do vetor de expressão, o promotor é preferencialmente posicionado aproximadamente na mesma distância do local de partida de transcrição heteróloga já que é do local de partida de transcrição em sua configuração natural. Como é conhecido na técnica, entretanto, alguma variação nessa distância pode ser acomodada sem a perda da função do promotor.

[000335] As sequências de poliadenilação também podem ser adicionadas ao vetor de expressão a fim de aumentar a eficácia de tradução de mRNA (por exemplo, tradução de mRNA de lignina peroxidase). Dois elementos de sequência distintos são exigidos para poliadenilação precisa e eficaz: sequências ricas de GU ou U localizadas a jusante do local de poliadenilação e uma sequência altamente conservada de seis nucleotídeos, AAUAAA, localizados de 11 a 30 nucleotídeos a montante. Os sinais de poliadenilação e terminação que são adequados para algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção incluem aqueles derivados de SV40.

[000336] Além dos elementos já descritos, o vetor de expressão de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção pode tipicamente conter outros elementos especializados pretendidos para aumentar o nível de expressão dos ácidos nucleicos clonados ou para facilitar a identificação das células que carregam o DNA recombinante. Por exemplo, vários virus animais contêm sequências de DNA que promovem a replicação cromossômica extra do genoma viral em tipos de célula permissiva. Os plasmídeos que carregam estes replicons virais são replicados epissomicamente, contanto que os fatores apropriados sejam fornecidos pelos genes, carregados no plasmídeo ou com o genoma da célula hospedeira.

[000337] O vetor pode ou não inclui um replicon eucariótico. Se um replicon eucariótico está presente, então o vetor é amplificável em células eucarióticas utilizando o marcador selecionável apropriado. Se o vetor não compreende um replicon eucariótico, nenhuma ampliação epissômica é possível. Em vez disso, o DNA recombinante integra no genoma da célula projetada, onde o promotor direciona a expressão do ácido nucleico desejado.

[000338] O vetor de expressão de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção pode, ainda, incluir sequências adicionais de polinucleotídeo que permitem, por exemplo, a tradução de várias proteínas de um único mRNA tal como um local de entrada de ribossomo interno (IRES|internal ribosome entry site) e sequência para integração genômica do polipeptídeo quimérico do promotor.

[000339] Conforme mencionado aqui acima, uma variedade de células procarióticas ou eucarióticas pode ser utilizada como sistemas de expressão de hospedeiro para expressar os polipeptídeos de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção. Esses incluem, entre outros, micro-organismos, tais como bactérias transformadas com um vetor de expressão de DNA bacteriófago recombinante, DNA plasmídeo ou DNA cosmídeo contendo a sequência de codificação; levedura transformada com vetores de expressão de levedura recombinante contendo a sequência de codificação; sistemas de célula de planta infectados com vetores de expressão de virus recombinante (por exemplo, virus do mosaico da couve-flor, CaMV; virus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformada com vetores de expressão de plasmídeo recombinante, tais como plasmídeo Ti, contendo a sequência de codificação. Os sistemas de expressão de mamífero também podem ser utilizados para expressar os polipeptídeos de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção.

[000340] Exemplos para vetores de expressão de mamífero incluem, entre outros, pcDNA3, pcDNA3.1(+/-), pGL3, pZeoSV2(+/-), pSecTag2, pDisplay, pEF/myc/cyto, pCMV/myc/cyto, pCR3.1, pSinRepõ, DH26S, DHBB, pNMT1, pNMT41, pNMT81, os quais são disponíveis de Invitrogen, pCI que está disponível de Promega, pMbac, pPbac, pBK-RSV e pBK-CMV os quais estão disponíveis de Strategene, pTRES que está disponível de Clontech, e seus derivados.

[000341] Os vetores de expressão contendo elementos regulatórios de virus eucarióticos, tais como retrovirus, também podem ser utilizados. Os vetores SV40 incluem pSVT7 e pMT2. Os vetores derivados de papilomavírus bovino incluem pBV-1MTHA, e vetores derivados de virus Epstein Bar incluem pHEBO, e p205. Outros vetores exemplares incluem pMSG, pAV009/A+, pMTO10/A+, pMAMneo-5, baculovírus pDSVE, e qualquer outro vetor que permite a expressão de proteínas sob a direção do promotor inicial SV-40, promotor posterior SV- 40, promotor metalotioneína, promotor de virus de tumor mamário murino, promotor de virus de sarcoma de Rous, promotor de poliedrina, ou outros promotores mostrados eficazes para expressão em células eucarióticas.

[000342] Vários métodos podem ser utilizados para introduzir o vetor de expressão de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção nas células-tronco. Tais métodos são geralmente descritos em Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992), in Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley e Sons, Baltimore, Md. (1989), Chang et al., Somatic Gene Therapy, CRC Press, Ann Arbor, Mich. (1995), Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor Mich. (1995), Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors e Their Uses, Butterworths, Boston Mass. (1988) e Gilboa et at. [Biotechniques 4 (6): 504-512, 1986] e incluem, por exemplo, transfecção estável ou transiente, eletroporação e infecção com vetores virais recombinantes. Além disso, consulte as Patentes Norte-Americanas n° 5.464.764 e 5.487.992 para métodos de seleção positivo- negativo .

[000343] A introdução de ácidos nucleicos por infecção viral oferece várias vantagens sobre outros métodos tais como eletroporação, uma vez que eficácia de transfecção mais alta pode ser obtida devido à natureza infecciosa dos virus.

[000344] Diferente de conter os elementos necessários para a transcrição e tradução da sequência de codificação inserida, a estrutura de expressão de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção também pode incluir sequências projetadas para aumentar a estabilidade, produção, purificação, rendimento ou toxicidade do peptídeo expresso. Por exemplo, a expressão de uma proteína de fusão ou uma proteína de fusão clivável que compreende a proteína Hl ou H2 de lignina peroxidase de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção e uma proteína heteróloga pode ser projetada. Tal proteína de fusão pode ser projetada de modo que a proteína de fusão pode ser prontamente isolada por cromatografia de afinidade; por exemplo, pela imobilização em uma coluna especifica para a proteína heteróloga. Onde um local de clivagem é projetado entre a proteína Hl ou H2 de lignina peroxidase e a proteína heteróloga, a proteína de lignina peroxidase pode ser liberada de coluna de cromatografia pelo tratamento com uma enzima apropriada ou agente que perturba o local de clivagem [por exemplo, consulte Booth et al. (1988) Immunol. Lett. 19:6570; e Gardella et al., (1990) J. Biol. Chem. 265:15854-15859] .

[000345] Conforme mencionado aqui a seguir, uma variedade de células procarióticas ou eucarióticas pode ser utilizada como sistemas de expressão de hospedeiro para expressar os polipeptídeos de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção. Esses incluem, entre outros, micro-organismos, tais como bactérias transformadas com um vetor de expressão de DNA bacteriófago recombinante, DNA plasmídeo ou DNA cosmídeo contendo a sequência de codificação; levedura transformada com vetores de expressão de levedura recombinante contendo a sequência de codificação; sistemas de célula de planta infectados com vetores de expressão de virus recombinante (por exemplo, virus do mosaico da couve-flor, CaMV; virus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformada com vetores de expressão de plasmídeo recombinante, tal como plasmídeo Ti, contendo a sequência de codificação. Os sistemas de expressão de mamífero também podem ser utilizados para expressar os polipeptídeos de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção.

[000346] Exemplos de estruturas bacterianas incluem a série pET dos vetores de expressão de E. coli [Studier et al. (1990) Methods in Enzymol. 185:60-89).

[000347] Na levedura, vários vetores contendo promotores constitutivos ou induzíveis podem ser utilizados, conforme divulgado no Pedido de Patente Norte-Americana n° 5.932.447. Alternativamente, os vetores podem ser utilizados, os quais promover integração de sequências de DNA estrangeiro no cromossomo de levedura.

[000348] Nos casos onde os vetores de expressão de planta são utilizados, a expressão da sequência de codificação pode ser acionada por vários promotores. Por exemplo, os promotores virais tais como os promotores de 35S RNA e 19S RNA do CaMV [Brisson et al. (1984) Nature 310:511-514], ou o promotor de proteína de revestimento para TMV [Takamatsu et al. (1987) EMBO J. 6:307-311] podem ser utilizados. Alternativamente, os promotores de planta, tais como a pequena subunidade de RUBISCO [Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3:16711680 e Brogli et al., (1984) Science 224:838-843] ou promotores de choque térmico, por exemplo, soja hspl7,5-E ou hspl7.3-B [Gurley et al. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:559-565] podem ser utilizados. Essas estruturas podem ser introduzidas nas células de planta utilizando plasmídeo Ti, plasmídeo Ri, vetores virais de planta, transformação de DNA direto, microinjeção, eletroporação e outras técnicas bem-conhecidas do especialista na técnica. Consulte, por exemplo, Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, Section VIII, pp 421-463.

[000349] Outros sistemas de expressão, tais como sistemas de célula hospedeira de insetos e mamíferos, os quais são bem-conhecidos na técnica e são adicionalmente descritos aqui abaixo, também podem ser utilizados por algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção.

[000350] A recuperação do polipeptideo recombinante é efetuada após um tempo apropriado em cultura. A expressão "recuperar o polipeptídeo recombinante" refere- se à coleta de todo o meio de fermentação que contém o polipeptídeo e não precisa implicar etapas adicionais de separação ou purificação. Apesar do acima exposto, os polipeptídeos de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção podem ser purificados utilizando uma variedade de técnicas de purificação de proteína padrão, tais como, entre outros, cromatografia de afinidade, cromatografia de troca de íon, filtração, eletroforese, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia de filtração de gel, cromatografia de fase reversa, cromatografia de concanavalina A, cromatofocagem e solubilização diferencial.

UM CONJUNTO CONTENDO LIGNINA PEROXIDASE:

[000351] De acordo com outro aspecto de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, é fornecido um conjunto para clarear um local corporal tópico tal como pele e/ou cabelo de um indivíduo (por exemplo, de acordo com um método descrito nesse documento). O conjunto compreende uma lignina peroxidase (por exemplo, conforme descrito nesse documento), uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento) e um substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, conforme descrito nesse documento). Pelo menos uma da lignina peroxidase, enzima de produção de peróxido de hidrogênio e substrato respectivo forma uma parte de uma composição que é embalada individualmente dentro do conjunto.

[000352] Deve ser entendido que um conjunto contendo lignina peroxidase descrito nesse documento (por exemplo, nessa seção) pode conter lignina peroxidase de acordo com qualquer uma das aplicações descritas nesse documento em relação à lignina peroxidase, e pode conter um sistema de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, enzima e/ou substrato) de acordo com qualquer uma das aplicações descritas nesse documento em relação a tal sistema e/ou a um conjunto contendo tal sistema.

[000353] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio forma uma parte de uma primeira composição e o substrato forma uma parte de uma segunda composição, em que a primeira composição e segunda composição são embaladas individualmente dentro do conjunto. Isto é, a enzima e substrato respectivo estão em composições separadas dentro do conjunto, e não há contato entre a enzima e o substrato enquanto eles estão dentro do conjunto.

[000354] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a segunda composição compreende, ainda, a lignina peroxidase (por exemplo, a lignina peroxidase é embalada dentro da mesma composição como o substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio) . Em tais aplicações, a primeira composição também é referida como um "ativador", já que resulta na ativação da lignina peroxidase quando em contato com a segunda composição contendo lignina peroxidase.

[000355] Nas aplicações exemplares, a primeira composição compreende, ainda, a lignina peroxidase (por exemplo, a lignina peroxidase é embalada dentro da mesma composição como a enzima de produção de peróxido de hidrogênio). Em tais aplicações, a primeira composição também é referida como a formulação da "enzima" (por exemplo, "creme de enzima"), já que compreende as duas enzimas ativas. A segunda composição também é referida como um "ativador", já que resulta na ativação da lignina peroxidase quando em contato com a primeira composição contendo lignina peroxidase.

[000356] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a lignina peroxidase forma uma parte de uma terceira composição dentro do conjunto, em que a terceira composição é embalada individualmente dentro do conjunto.

[000357] Em quaisquer das aplicações descritas nesse documento, cada uma da primeira composição descrita nesse documento, da segunda composição descrita nesse documento, e qualquer outra parte da composição de produção de peróxido de hidrogênio descrita nesse documento pode ser referida nesse documento também como uma formulação, que é embalada dentro do conjunto, pelo que a mistura dessas formulações resulta na formação de qualquer composição de produção de peróxido de hidrogênio, conforme descrito nesse documento.

[000358] A primeira composição e a segunda composição e a terceira composição opcional do conjunto podem ser combinadas de modo a preparar uma composição cosmética compreendendo uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato respectivo (por exemplo, conforme descrito nesse documento).

[000359] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e o substrato respectivo são embalados juntos (por exemplo, como parte de uma única composição) em uma embalagem hermética dentro do conjunto (por exemplo, um recipiente hermético descrito nesse documento). A lignina peroxidase pode ser embalada junto com a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e substrato respectivo, ou embalada separadamente.

[000360] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração é cerca de 25 unidades/grama.

[000361] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 12 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 25 a 250 unidades/grama.

[000362] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 2,5 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 2,5 a 25 unidades/grama.

[000363] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o conjunto compreende, ainda, um mediador oxidante (por exemplo, conforme descrito nesse documento).

[000364] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o mediador oxidante é parte de uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase. Em algumas aplicações, a lignina peroxidase e o mediador oxidante são ambos parte da primeira composição. Em algumas aplicações, a lignina peroxidase e o mediador oxidante são ambos parte da segunda composição. Em algumas aplicações, a lignina peroxidase e o mediador oxidante são ambos parte da terceira composição.

[000365] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o mediador oxidante é embalado separadamente da composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase. Em algumas aplicações, a lignina peroxidase é uma parte da primeira composição ou terceira composição descrita nesse documento, e o mediador oxidante é uma parte da segunda composição. Em algumas aplicações, a lignina peroxidase é uma parte da segunda composição ou terceira composição descrita nesse documento e o mediador oxidante é uma parte da primeira composição.

[000366] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 2 a 2 0 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 4 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração é cerca de 6 µmols/grama.

[000367] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 µmols/grama a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 2 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 6 a 600 µmols/grama.

[000368] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,06 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,06 a 6 µmols/grama.

[000369] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 1Oµmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000370] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000371] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e a concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1, 4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000372] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1, 4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000373] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1, 4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000374] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000375] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 1Oµmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000376] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1, 4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000377] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do mediador oxidante na composição no conjunto que compreende o mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama, e uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,06 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 600 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 0,6 a 60 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 2 a 20 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante está em uma faixa de 4 a 10 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração do mediador oxidante é cerca de 6 µmols/grama. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1, 4- dimetoxibenzeno. Em algumas aplicações, o mediador oxidante é álcool veratrílico. Em algumas aplicações, o mediador oxidante e a lignina peroxidase são compreendidos pela mesma composição.

[000378] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração é cerca de 25 unidades/grama.

[000379] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 8 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 25 a 2500 unidades/grama.

[000380] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,25 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,25 a 25 unidades/grama.

[000381] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase são compreendidas pela mesma composição. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000382] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase são compreendidas pela mesma composição. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000383] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase são compreendidas pela mesma composição. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000384] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase são compreendidas pela mesma composição. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000385] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 8 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase são compreendidas pela mesma composição. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000386] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase são compreendidas pela mesma composição. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000387] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração de lignina peroxidase em uma composição no conjunto que compreende a lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama, e uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 2,5 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de lignina peroxidase é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio e a lignina peroxidase são compreendidas pela mesma composição. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio é glicose oxidase.

[000388] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,035 µmols/grama a 350 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,35 a 35 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1 a 12 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 2 a 7 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração é cerca de 3,5 µmols/grama.

[000389] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,35 µmols/grama a 350 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 1 a 350 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 3,5 a 350 µmols/grama.

[000390] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose) em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,035 µmols/grama a 35 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0, 035 a 12 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração está em uma faixa de 0,035 a 3,5 µmols/grama.

[000391] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,035 µmols/grama a 350 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000392] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,35 µmols/grama a 350 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000393] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,035 µmols/grama a 35 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000394] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,35 µmols/grama a 35 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000395] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 1 µmols/grama a 350 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000396] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,035 µmols/grama a 12 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000397] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 1 µmols/grama a 12 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000398] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 3,5 µmols/grama a 350 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000399] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,035 µmols/grama a 3,5 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000400] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma concentração da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição em quaisquer dos conjuntos descritos nesse documento (por exemplo, a primeira composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 0,25 a 2500 unidades/grama, e uma concentração do substrato da enzima de produção de peróxido de hidrogênio em uma composição no conjunto (por exemplo, a segunda composição descrita nesse documento) está em uma faixa de 2 µmols/grama a 7 µmols/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 0,25 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 2500 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 8 a 80 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima está em uma faixa de 12 a 40 unidades/grama. Em algumas aplicações, a concentração de enzima é cerca de 25 unidades/grama. Em algumas aplicações, a enzima é glicose oxidase e o substrato é glicose. Em algumas aplicações, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio (por exemplo, glicose oxidase) e o substrato (por exemplo, glicose) são compreendidos por composições separadas no conjunto.

[000401] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a primeira composição do conjunto compreende glicose oxidase na concentração em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama (por exemplo, uma concentração de glicose oxidase descrita nesse documento), e a segunda composição do conjunto compreende D-glicose em uma concentração em uma faixa de 0,35 µmols/grama a 35 µmols/grama (por exemplo, uma concentração de glicose descrita nesse documento).

[000402] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a primeira composição do conjunto compreende glicose oxidase em uma concentração em uma faixa de 2,5 a 250 unidades/grama (por exemplo, uma concentração de glicose oxidase descrita nesse documento), e lignina peroxidase em uma concentração de 2,5 a 250 unidades/grama (por exemplo, uma concentração de lignina peroxidase descrita nesse documento); e a segunda composição do conjunto compreende D-glicose em uma concentração em uma faixa de 0,35 µmols/grama a 35 µmols/grama (por exemplo, uma concentração de glicose descrita nesse documento).

[000403] Os conjuntos descritos nesse documento podem incluir composições adicionais (por exemplo, composições cosméticas), além das composições que compreendem um ou mais princípios ativos conforme descrito nesse documento (por exemplo, um agente que exibe uma atividade na presença do peróxido de hidrogênio, a lignina peroxidase, a enzima de produção de peróxido de hidrogênio, a substrato de enzima de produção de peróxido de hidrogênio e/ou um mediador oxidante).

[000404] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o conjunto compreende, ainda, uma composição de lavagem (por exemplo, conforme descrito nesse documento), tal como uma lavagem facial, para limpar um local corporal tópico ante do contato com uma composição descrita nesse documento.

[000405] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o conjunto inclui instruções apropriadas para uso e rótulos indicando aprovação por uma agência reguladora para o uso indicado, conforme descrito nesse documento.

FORMULAÇÃO DAS COMPOSIÇÕES:

[000406] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações e quaisquer dos aspectos das aplicações do presente pedido de patente de invenção descritas nesse documento, o(s) principio(s) ativo(s) descrito(s) nesse documento (por exemplo, um agente que exibe uma atividade na presença do peróxido de hidrogênio, uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio, um substrato de enzima de produção de peróxido de hidrogênio e/ou um mediador oxidante) pode(m) ser utilizado(s) em uma composição compreendendo o(s) principio (s) ativo(s) per se ou em combinação com componentes químicos adicionais tais como transportadores e excipientes fisiologicamente adequados. As composições incluem uma composição cosmética ou farmacêutica descrita nesse documento (que exibe uma atividade cosmética ou farmacêutica, conforme descrito nesse documento) e composições dentro de um conjunto (por exemplo, a primeira composição, a segunda composição e/ou a terceira composição, conforme descrito nesse documento) que pode ser utilizada para preparar uma composição cosmética ou farmacêutica descrita nesse documento (embora elas possam ser inativas por elas mesmas).

[000407] A finalidade de uma composição cosmética ou farmacêutica que compreende transportadores e excipientes é para facilitar a administração do principio ativo em um organismo. Nas aplicações em que uma atividade exibida pela composição é cosmética, conforme definido nesse documento, a composição também é referida nesse documento como uma "composição cosmética". Nas aplicações em que uma atividade exibida pela composição é farmacêutica, a composição também é referida nesse documento como uma "composição farmacêutica".

[000408] Ao longo desse documento, o termo "farmacêutico" significa que a composição ou conjunto é para exibir um efeito terapêutico quando aplicado em um local corporal do sujeito, conforme descrito nesse documento.

[000409] A seguir, a expressão "transportador adequado" refere-se a um transportador ou um diluente que não causa irritação significativa a um organismo e não anula a atividade biológica e propriedades do(s) princípio(s) ativo(s). Nas aplicações em que uma atividade exibida pelo(s) princípio(s) ativo(s) é cosmética, tal transportador também é referido nesse documento como um "transportador cosmética ou cosmeceuticamente aceitável". Nas aplicações em que uma atividade exibida pelo(s) princípio(s) ativo(s) é farmacêutica, tal transportador também é referido nesse documento como um "transportador farmaceuticamente aceitável".

[000410] Nesse documento, o termo "excipiente" refere-se a uma substância inerte adicionada a uma composição para também facilitar a administração do(s) princípio (s) ativo(s). Exemplos, sem limitação, de excipientes incluem carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares e tipos de amido, derivados de celulose, gelatina, óleos vegetais e polietileno glicóis.

[000411] As composições do presente pedido de patente de invenção podem ser fabricadas pelos processos bem- conhecidos na técnica, por exemplo, através de processos convencionais de mistura, dissolução, granulação, fabricação de drágea, levigação, emulsificação, encapsulamento, aprisionamento ou liofilização.

[000412] As composições para uso de acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção podem ser, desse modo, formuladas em maneira convencional utilizando um ou mais transportadores adequados compreendendo excipiente e auxiliares, que facilitam o processamento do(s) princípio (s) ativo(s) nas preparações. A própria formulação depende da abordagem de administração escolhida.

[000413] Alternativamente, o(s) princípio(s) ativo (s) pode estar na forma de um pó para constituição com um veículo adequado, por exemplo, solução estéril, à base de água sem pirogênio, antes do uso.

[000414] As composições de acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações e quaisquer dos aspectos descritos nesse documento podem ser formulados em qualquer de uma variedade de formas utilizadas pela indústria cosmética (por exemplo, para uso tópico) , tal como, por exemplo, uma máscara, um soro, uma loção, um creme, um shampoo, um gel e/ou um tônico. Conforme estará evidente ao especialista na técnica, a adequabilidade das formulações dependerá do tipo de superfície a estar em contato com o(s) princípio(s) ativo(s) - desse modo, por exemplo, uma formulação de shampoo é adequada para o contato do cabelo, uma facial máscara é adequada para o contato da pele facial e assim por diante.

[000415] Os métodos para preparar as composições com propriedades, tal como descrito nesse documento, são bem- conhecidos dos especialistas na técnica e são descritos em detalhes em Remington's Pharmaceutical Sciences, 1990 (supra); e Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 6^a ed., Williams & Wilkins (1995).

[000416] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, a composição cosmética é formulada suficientemente viscosa para permanecer na área tratada, não evapora facilmente e/ou não é facilmente removida através do enxague com água.

[000417] Conforme utilizado nesse documento, o termo "soro" refere-se a uma solução aquosa que é formulada para aplicação tópica.

[000418] De acordo com as aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, o soro é uma solução cosmética aquosa engrossada. De acordo com algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção, o soro é uma solução aquosa de clara a ligeiramente obscura.

[000419] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, o soro é formulado para permanecer em um local corporal tópico e não precisa ser removido por água, sabão e/ou limpadores.

[000420] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, mediante aplicação tópica do soro (por exemplo, uma pele), o soro é rapidamente absorvido, deixando uma sensação suave e sedosa cosmeticamente elegante.

[000421] De acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção, o soro é incorporado dentro de uma máscara (uma máscara cosmética).

[000422] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o soro compreende ingredientes, conforme apresentados na Tabela 2:
Tabela 2: Composição de soro de acordo com algumas aplicações

[000423] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, uma composição, conforme descrito nesse documento (por exemplo, soro, loção, creme), compreende um emoliente dermatologicamente aceitável. Tais composições preferencialmente contêm de cerca de 2% a cerca de 50% do emoliente. Conforme utilizado nesse documento, "emoliente" refere-se a um material útil para a prevenção ou alivio de secura, bem como para a proteção da pele. Uma ampla variedade de emolientes adequados é conhecida e pode ser utilizada nesse documento. Consulte, por exemplo, Sagarin, Cosmetics, Science and Technology, 2 ^a Edição, Vol. 1, pp. 3243 (1972), que contém numerosos exemplos de materiais adequados como um emoliente. Um emoliente preferido é glicerina. A glicerina é preferencialmente utilizada em uma quantidade de ou cerca de 0,001 a ou cerca de 20%, mais preferencialmente de ou cerca de 0,01 a ou cerca de 10%, mais preferencialmente de ou cerca de 0,1 a ou cerca de 5%, por exemplo, 3%.

[000424] As loções e cremes de acordo com o presente pedido de patente de invenção geralmente compreendem um sistema transportador de solução e um ou mais emolientes. As loções tipicamente compreendem de cerca de 1% a cerca de 20%, preferencialmente de cerca de 5% a cerca de 10% de emoliente; de cerca de 50% a cerca de 90%, preferencialmente de cerca de 60% a cerca de 80% água; e uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um descrito nesse documento. Um creme tipicamente compreende de cerca de 5% a cerca de 50%, preferencialmente de cerca de 10% a cerca de 20% de emoliente; de cerca de 45% a cerca de 85%, preferencialmente de cerca de 50% a cerca de 75% água; e uma quantidade eficaz do(s) principio(s) ativo(s) descrito(s) nesse documento.

[000425] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o creme ou loção compreende ingredientes, conforme apresentados na Tabela 3:
Tabela 3: Composição de creme ou loção de acordo com algumas aplicações

[000426] Nas aplicações exemplares, o creme ou loção compreende ingredientes, conforme apresentados na Tabela 4:
Tabela 4: COMPOSIÇÃO DE CREME OU LOÇÃO DE ACORDO COM APLICAÇÕES EXEMPLARES

[000427] Conforme utilizado nesse documento, o termo "máscara" refere-se a uma máscara cosmética que compreende o(s) principio(s) ativo(s) conforme descrito nesse documento e que é topicamente aplicada a fim de manter o contato do(s) principio(s) ativo(s) com uma região tópica, por exemplo, a fim de clarear a região tópica.

[000428] Vários tipos de máscaras cosméticas são mostrados na indústria cosmética. Esses incluem, entre outros, uma máscara com um suporte sólido, uma máscara de enxague, uma máscara descascada, ou uma máscara que endurece ou polimeriza após um período de tempo definido.

[000429] Conforme utilizada nesse documento, a expressão "máscara de enxague" refere-se a uma composição cosmética formulada a fim de ser topicamente aplicada em uma camada relativamente espessa e deixada por um determinado período de tempo, geralmente de poucos minutos a várias dezenas de minutos, e a fim de ser, no final desse período de tempo, enxaguada com água ou também simplesmente limpa.

[000430] As máscaras e técnicas adequadas para preparar máscaras com princípio(s) ativo(s), tal como descrito nesse documento, são descritas na Publicação do Pedido de Patente Internacional WO 2012/153336.

[000431] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a forma da composição é determinada, pelo menos em parte, pela seleção de um transportador adequado.

[000432] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, o transportador compreende uma emulsão. Tais transportadores incluem, sem limitação, emulsões de óleo-em-água, água-em-óleo, água-em- óleo-em-água, e óleo-em-água-em-silicone, um creme, uma pomada, uma solução aquosa, uma loção ou um aerossol. Como será entendido pelo especialista na técnica, um determinado componente distribuirá primariamente dentro da fase de água ou óleo/silicone, dependendo da solubilidade/dispersibilidade da água do componente na composição.

[000433] As emulsões de acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção geralmente contêm uma quantidade eficaz de principio(s) ativo(s) divulgada nesse documento e óleo. O(s) principio(s) ativo(s) (por exemplo, um agente que exibe uma atividade na presença do peróxido de hidrogênio, uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio, um substrato de enzima de produção de peróxido de hidrogênio e/ou um mediador oxidante) e óleos podem ser derivados de animais, plantas ou petróleo e podem ser naturais ou sintéticos (isto é, feitos pelo homem). As emulsões preferidas também contêm um umectante, tal como glicerina. As emulsões conterão preferencialmente, ainda, de cerca de 1% a cerca de 10%, mais preferencialmente de cerca de 2% a cerca de 5%, de um emulsificante, com base no peso do transportador. Os emulsificantes podem ser não iônicos, aniônicos ou catiônicos. Os emulsificantes adequados são descritos, por exemplo, na Patente Norte-Americana n° 3.755.560, concedida a Dickert, et al. Aug. 28, 1973; Patente Norte-Americana n° 4.421.769, concedida a Dixon, et al., Dec. 20, 1983; e McCutcheon's Detergents and Emulsifiers, North American Edition, páginas 317-324 (1986).

[000434] A emulsão também pode conter um agente antiespumante para minimizar a formação de espuma mediante aplicação ao tecido queratinoso. Os agentes antiespumantes incluem silicones de alto peso molecular e outros materiais bem-conhecidos na técnica para tal uso.

[000435] As emulsões adequadas podem ter uma ampla faixa de viscosidades, dependendo do produto da forma desejada do produto. As emulsões de baixa viscosidade exemplares, que são preferidas, tem uma viscosidade de cerca de 50 centistokes ou menos, mais preferencialmente cerca de 10 centistokes ou menos, mais preferencialmente cerca de 5 centistokes ou menos. A emulsão também pode conter um agente antiespumante para minimizar a formação de espuma mediante aplicação tópica. Os agentes antiespumantes incluem silicones de alto peso molecular e outros materiais bem-conhecidos na técnica para tal uso.

[000436] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a emulsão é uma emulsão óleo-em-água, com uma fase aquosa continua e uma fase hidrofóbica, insolúvel em água ("fase oleosa") nele disperso. Exemplos de transportadores adequados que compreendem emulsões óleo-em-água são descritos nas Patentes Norte- Americanas n° 5.073.371 e 5.073.372.

[000437] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a emulsão óleo-em-água compreende um agente de estruturação para auxiliar na formação de uma estrutura de rede de gel cristalino líquido. Sem ser limitado pela teoria, acredita-se que o agente de estruturação auxilia no fornecimento de características reológicas para a composição que contribui para a estabilidade da composição. O agente de estruturação também pode funcionar como um emulsificante ou tensoativo. As composições preferidas do presente pedido de patente de invenção compreendem de cerca de 0,5% a cerca de 20%, mais preferencialmente de cerca de 1% a cerca de 10%, mais preferencialmente de cerca de 1% a cerca de 5%, em peso da composição, de um agente de estruturação. Os agentes de estruturação preferidos do presente pedido de patente de invenção são selecionados do grupo consistindo em ácido esteárico, ácido palmítico, álcool estearílico, álcool cetílico, álcool behenílico, o éter de polietilenoglicol de álcool estearílico com uma média de cerca de 1 a cerca de 21 unidades de óxido de etileno, o éter de polietilenoglicol de álcool cetílico com uma média de cerca de 1 a cerca de 5 unidades de óxido de etileno e misturas respectivas.

[000438] Uma ampla variedade de tensoativos aniônicos também é útil nesse documento, conforme descrito, por exemplo, na Patente Norte-Americana n° 3.929.678. Além disso, os tensoativos anfotéricos e zwiteriônicos também são úteis nesse documento.

[000439] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a emulsão óleo-em-água compreende de cerca de 25% a cerca de 98%, preferencialmente de cerca de 65% a cerca de 95%, mais preferencialmente de cerca de 70% a cerca de 90% de água em peso do transportador tópico.

[000440] Em algumas aplicações de quaisquer das aplicações descritas nesse documento, a emulsão é uma emulsão água-em-silicone. As emulsões água-em-silicone contêm uma fase continua de silicone e uma fase aquosa dispersa. As emulsões água-em-silicone preferidas do presente pedido de patente de invenção compreendem de cerca de 1% a cerca de 60%, preferencialmente de cerca de 5% a cerca de 40%, mais preferencialmente de cerca de 10% a cerca de 20%, em peso de uma fase continua de silicone. A fase continua de silicone existe como uma fase externa que contém ou envolve a fase aquosa descontinua descrita a seguir. A fase continua de silicone pode conter um óleo de poliorganossiloxano.

[000441] A fase continua de silicone pode conter um ou mais óleos de não silicone. As concentrações de óleos de não silicone na fase continua de silicone são preferencialmente minimizadas ou evitadas completamente de modo a aumentar, ainda, a estabilidade do(s) principio(s) ativo(s) nas composições. Os óleos de não silicone adequados têm um ponto de fusão de cerca de 25 °C ou menos em cerca de uma atmosfera de pressão. Exemplos de óleos de não silicone para uso na fase continua de silicone são aqueles bem- conhecidos nas técnicas químicas em produtos de cuidado pessoal tópico na forma de emulsões água-em-óleo, por exemplo, óleo mineral, óleos vegetais, óleos sintéticos, óleos semissintéticos, etc.

[000442] As composições tópicas úteis de acordo com algumas aplicações de quaisquer das aplicações do presente pedido de patente de invenção compreendem de cerca de 30% a cerca de 90%, mais preferencialmente de cerca de 50% a cerca de 85%, e mais preferencialmente de cerca de 70% a cerca de 80% de uma fase aquosa dispersa. O termo "fase dispersa" é bem-conhecido de um especialista na técnica e isso implica que a fase existe como partículas pequenas ou gotas que são suspensas em e rodeadas por uma fase continua. A fase dispersa também é conhecida como a fase interna ou descontinua. A fase aquosa dispersa é uma dispersão de pequenas partículas aquosas ou gotas suspensas em e rodeadas pela fase continua oleosa e/ou de silicone (por exemplo, conforme descrito nesse documento). A fase aquosa pode ser água, ou uma combinação de água e um ou mais ingredientes solúveis em água ou dispersáveis. Exemplos não limitantes de tais ingredientes opcionais incluem espessantes, ácidas, bases, sais, quelantes, gomas, álcoois e polióis solúveis em água ou dispersíveis, tampões, conservantes, agentes de proteção solar, colorações e similares.

[000443] As composições tópicas de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção tipicamente compreendem de cerca de 25% a cerca de 90%, preferencialmente de cerca de 40% a cerca de 80%, mais preferencialmente de cerca de 60% a cerca de 80% de água na fase aquosa dispersa em peso da composição.

[000444] As emulsões de algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção compreendem um emulsificante. Em uma aplicação preferida, a composição contém de cerca de 0,1% a cerca de 10% de emulsificante, mais preferencialmente de cerca de 0,5% a cerca de 7,5%, mais preferencialmente de cerca de 1% a cerca de 5% de emulsificante em peso da composição. O emulsificante ajuda a dispersar e suspender a fase aquosa dentro da fase oleosa e/ou silicone. Os agentes emulsificantes conhecidos ou convencionais podem ser utilizados na composição, contanto que o agente emulsificante selecionado é química e fisicamente compatível com componentes essenciais da composição, e fornece as características de dispersão desejadas. Os emulsificantes adequados incluem emulsificantes conhecidos pelos especialistas na técnica para uso nos produtos de cuidado pessoal tópico.

[000445] Os emulsificantes adequados incluem qualquer de uma ampla variedade de tensoativos catiônicos, aniônicos, zwitteriônicos e anfotéricos conhecidos. Consulte McCutcheon's Detergents and Emulsifiers, North American Edition (1986), publicado por Allured Publishing Corporation; Patente Norte-Americana n° 5.011.681 para Ciotti et al., emitida em 30 de abril de 1991; Patente Norte-Americana n° 4.421.769 para Dixon et al. Emitida em 20 de dezembro de 1983; e Patente Norte-Americana n° 3.755.560. O tensoativo exato escolhido depende do pH da composição e dos outros componentes presentes. São preferidos os tensoativos catiônicos, especialmente compostos de amônio quaternário de dialquila, exemplos dos quais são descritos na Patente Norte-Americana n° 5.151.209 para McCall et al. emitida em 29 de setembro de 1992; Patente Norte-Americana n° 5.151.210 para Steuri et al., emitida em 29 de setembro de 1992; Patente Norte- Americana n° 5.120.532; Patente Norte-Americana n° 4.387.090; Patente Norte-Americana n° 3.155.591; Patente Norte-Americana n° 3.929.678; Patente Norte-Americana n° 3.959.461; McCutcheon's, Detergents & Emulsifiers (North American edition 1979) M.C. Publishing Co.; e Schwartz, et al., Superfície Active Agents, Their chemistry e Technology, New York: Interscience Publishers, 1949.

[000446] Alternativamente, outros emulsificantes catiônicos úteis incluem amino-amidas. Exemplos não limitantes desses emulsificantes catiônicos incluem cloreto fosfato de estearamidopropil PG-dimônio, cloreto de behenamidopropil PG dimônio, etossulfato de estearamidopropil etildimônio, cloreto de estearamidopropil dimetil (miristil acetato) amônio, tosilato de estearamidopropil dimetil cetearil amônio, cloreto de estearamidopropil dirnetil amônio, lactato de estearamidopropil dimetil amônio e misturas respectivas.

[000447] A determinação de uma quantidade eficaz do(s) principio(s) ativo(s) está bem dentro da capacidade daqueles especialistas na técnica, especialmente à luz da divulgação detalhada fornecida nesse documento.

[000448] Para qualquer preparação utilizada nos métodos do presente pedido de patente de invenção, a quantidade terapeuticamente eficaz ou dose pode ser estimada inicialmente de ensaios in vitro. Além disso, uma dose pode ser formulada em sistemas ex vivo (por exemplo, pele, cabelo e/ou unha ex vivo) ou em modelos animais para alcançar uma concentração ou titulação desejada. Tal informação pode ser utilizada para determinar mais precisamente doses úteis em humanos.

[000449] A fim de aumentar a absorção percutânea dos princípios ativos (por exemplo, lignina peroxidase e/ou mediador oxidante), um ou mais de vários agentes podem ser adicionados à composição incluindo, entre outros, dimetilsulfóxido, dimetilacetamida, dimetilformamida, tensoativos, azona, álcool, acetona, propilenoglicol, polietilenoglicol e butilenoglicol.

[000450] As composições descritas nesse documento também podem incluir componentes adicionais que são adicionados, a fim de enriquecer as composições com fragrância e fatores de nutrição (por exemplo, fatores de nutrição de pele ou cabelo).

[000451] Tais componentes são selecionados adequados para uso tópico em um humano sem induzir a toxicidade, incompatibilidade, resposta alérgica e similar dentro do escopo do julgamento médico. Além disso, tais componentes opcionais são úteis, contanto que eles não alterem inaceitavelmente os benefícios dos compostos ativos do presente pedido de patente de invenção.

[000452] O Manual de Ingrediente Cosmético da CTFA (Cosmetic Toiletry and Fragrance Association | Associação de Cosméticos, Produtos de Higiene Pessoal e Fragrância), Segunda Edição (1992) descreve uma ampla variedade de ingredientes cosméticos não limitantes comumente utilizados na indústria de cuidado da pele, os quais são adequados para uso nas composições do presente pedido de patente de invenção. Exemplos dessas classes de ingrediente incluem: abrasivos, absorventes, componentes estéticos tais como fragrâncias, pigmentos, colorações/colorantes, óleos essenciais, sensibilizantes da pele, adstringentes, etc. (por exemplo, óleo de cravo, mentol, cânfora, óleo de eucalipto, eugenol, lactato de mentila, destilado de hamamélis) , agentes antiacne, agentes antiaglomerantes, agentes antiespumantes, agentes antimicrobianos (por exemplo, butilcarbamato de iodopropila), antioxidantes, ligantes, aditivos biológicos, agentes de tamponamento, agentes espessantes, agentes quelantes, aditivos químicos, colorantes, adstringentes cosméticos, biocidas cosméticos, desnaturantes, adstringentes de droga, analgésicos externos, formadores de película ou materiais, por exemplo, polímeros, para auxiliar as propriedades de formação de película e substantividade da composição (por exemplo, copolímero de eicoseno e vinil pirrolidona), agentes opacificantes, ajustadores de pH, propulsores, agentes redutores, sequestrantes, agentes de condicionamento da pele (por exemplo, umectantes, incluindo diversos e oclusivos), calmante da pele e/ou agentes de cicatrização (por exemplo, pantenol e derivados (por exemplo, etil pantenol), aloe vera, ácido pantotênico e seus derivados, alantoína, bisabolol, e glicirrizinato de dipotássio), agentes de tratamento da pele, espessantes e vitaminas e derivados respectivos.

[000453] As composições de acordo com algumas aplicações descritas nesse documento são para utilização in vivo, a composição é preferencialmente de alta pureza e substancialmente livre de contaminantes potencialmente prejudiciais, por exemplo, pelo menos, grau Nacional de Alimentação (NF|National Food), geralmente, pelo menos, grau analítico, e preferencialmente, pelo menos, grau farmacêutico. Na medida em que um determinado composto deve ser sintetizado antes do uso, tal síntese ou subsequente purificação preferencialmente resulta em um produto que seja substancialmente livre de quaisquer agentes tóxicos potencialmente contaminantes que foram utilizados durante as sínteses ou procedimentos de purificação.

[000454] Conforme utilizado nesse documento, o termo "cerca de" refere-se a ± 10%.

[000455] Os termos "compreende", "compreendendo", "inclui", "incluindo", "tendo" e seus conjugados significam "incluindo, entre outros".

[000456] O termo "consistindo em" significa "incluindo e limitado a".

[000457] O termo "consistindo essencialmente em" significa que a composição, método ou estrutura pode incluir ingredientes, etapas e/ou partes adicionais, mas apenas se os ingredientes, etapas e/ou partes adicionais não alteram materialmente as características básicas e novas da composição, método ou estrutura reivindicada.

[000458] Conforme utilizado nesse documento, as formas singulares "um", "uma" e "o/a" incluem referências plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Por exemplo, o termo "um composto" ou "pelo menos um composto" pode incluir uma pluralidade de compostos, incluindo misturas respectivas.

[000459] Em todo esse pedido de patente, várias aplicações desse pedido de patente de invenção podem ser apresentadas em um formato de faixa. Deve ser entendido que a descrição no formato de faixa é meramente para conveniência e brevidade e não deve ser interpretada como uma limitação inflexível no escopo do presente pedido de patente de invenção. Consequentemente, a descrição de uma faixa deve ser considerada para ter especificamente divulgadas todas as possíveis subfaixas, bem como valores numéricos individuais dentro daquela faixa. Por exemplo, a descrição de uma faixa tal como de 1 a 6 deve ser considerada para ter subfaixas especificamente divulgadas tais como de 1 a 3, de 1 a 4, de 1 a 5, de 2 a 4, de 2 a 6, de 3 a 6 etc., bem como números individuais dentro daquela faixa, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, e 6. Isto se aplica independentemente da abrangência da faixa.

[000460] Sempre que uma faixa numérica é indicada nesse documento, ela é destinada a incluir qualquer numeral citado (fracionai ou integral) dentro da faixa indicada. As expressões "variando/varia entre", a primeira indica número e a segunda indica número e "variando/varia de", a primeira indica número "a", a segunda indica número, são utilizadas nesse documento indistintamente e são destinadas a incluir os primeiro e segundo números indicados e todos os numerais fracionais e integrais entre eles.

[000461] Conforme utilizado nesse documento, o termo "método" refere-se a modos, meios, técnicas e procedimentos para a realização de uma determinada incluindo, entre outros, aqueles modos, meios, técnicas e procedimentos, sejam conhecidos ou rapidamente desenvolvidos de modos, meios, técnicas e procedimentos conhecidos pelos profissionais das artes químicas, farmacológicas, biológicas, bioquímicas e médicas.

[000462] Conforme utilizado nesse documento, o termo "tratar" inclui anular, substancialmente inibir, reduzir ou reverter a progressão de uma condição, substancialmente melhorar os sintomas clínicos e estéticos de uma condição substancialmente prevenir o aparecimento de sintomas clínicos ou estéticos de uma condição.

[000463] É apreciado que determinadas características do presente pedido de patente de invenção que são, para clareza, descritas no contexto de aplicações separadas, também podem ser fornecidas em combinação em uma única aplicação. Inversamente, várias características do presente pedido de patente de invenção que são, para brevidade, descritas de contexto de uma aplicação única, também podem ser fornecidas separadamente ou em qualquer subcombinação adequada ou como adequadas em qualquer outra aplicação descrita do presente pedido de patente de invenção. Certas características descritas no contexto de várias aplicações não devem ser consideradas características essenciais daquelas aplicações, a menos que a aplicação seja inoperante sem aqueles elementos.

[000464] Várias aplicações e aspectos do presente pedido de patente de invenção são delineados aqui acima e, conforme reivindicado na seção de reivindicações abaixo, encontram apoio experimental nos exemplos a seguir.

EXEMPLOS

[000465] Referência é agora feita aos exemplos a seguir, os quais junto com as descrições acima ilustram algumas aplicações do presente pedido de patente de invenção em uma maneira não limitante.

[000466] Geralmente, a nomenclatura utilizada nesse documento e os procedimentos de laboratório utilizados no presente pedido de patente de invenção incluem técnicas de DNA molecular, bioquímico, microbiológico e recombinante. Tais técnicas são explicadas completamente na literatura. Consulte, por exemplo, "Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al., (1989); "Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III Ausubel, R. M., ed. (1994); Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley e Sons, Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide a Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988); Watson et al., "Recombinant DNA", Scientific American Books, New York; Birren et al. (eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998); as metodologias são conforme estabelecidas nas Patentes Norte-Americanas n° 4.666.828; 4.683.202; 4.801.531; 5.192.659 e 5.272.057; "Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volumes I-III Cellis, J. E., ed. (1994); "Current Protocols in Immunology" Volumes I-III Coligan J. E., ed. (1994); Stites et al. (eds), "Basic e Clinical Immunology" (8th Edition), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994); Mishell e Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular Immunology", W. H. Freeman e Co., New York (1980); imunoensaios disponíveis são extensivamente descritos na patente e literatura cientifica, consulte, por exemplo, Patentes Norte-Americanas n° 3.791.932; 3.839.153; 3.850.752; 3.850.578; 3.853.987; 3.867.517; 3.879.262; 3.901.654; 3.935.074; 3.984.533; 3.996.345; 4.034.074; 4.098.876; 4.879.219; 5.011.771 e 5.281.521; "Oligonucleotide Synthesis" Gait, M. J., ed. (1984); "Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., e Higgins S. J., eds. (1985); "Transcription e Translation" Hames, B. D., e Higgins S. J., Eds. (1984); "Animal Cell Culture" Freshney, R. I., ed. (1986); "Immobilized Cells e Enzymes" IRL Press, (1986); "A Practical Guide a Molecular Cloning" Perbal, B., (1984) e "Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press; "PCR Protocols: A Guide a Methods e Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990); Marshak et al., "Strategies for Protein Purification e Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996); todos os quais são incorporados por referência como se totalmente estabelecidos nesse documento. Outras referências gerais são fornecidas ao longo de todo esse documento. Acredita-se que os procedimentos nesse lugar são bem-conhecidos na técnica e são fornecidos para a conveniência do leitor. Todas as informações contidas nesse lugar são incorporadas nesse documento por referência.
MATERIAIS E MÉTODOS
MATERIAIS:
Glicose oxidase (livre de estabilizador) foi obtida da Sigma- Aldrich;
Isoenzima Hl de lignina peroxidase (de P. chrysosporium) foi preparada conforme descrito na Publicação do Pedido de Patente Internacional W02004/052275, com as modificações menores a seguir: uma solução de esporos com 7,5*104 esporos/ml foi diretamente cravada no meio de crescimento, o meio de crescimento compreendido, ainda, de extrato de levedura e caldo de nutriente; e aeração do fermentador foi de 4 litros/minute com agitação de 150 rotações por minuto (lignina peroxidases de outros fungos da podridão branca também são contempladas para uso nas aplicações do presente pedido de patente de invenção);
Álcool veratrílico foi obtido da Fluka.

FORMULAÇÃO EM CREME:

[000467] As formulações exemplares foram preparadas na forma de dois cremes complementares: um creme de enzima que compreende 25 unidades/grama de isoenzima Hl de fração LIP, 25 unidades/grama de GOX e 0,10 por cento em peso de álcool veratrílico (6 mmols/kg de creme), e o creme ativador complementar compreendeu a glicose (3,5 mmols/kg de creme).

[000468] Para comparação, um creme de enzima complementar e creme ativador foram formulados para ativação de LIP por H202 não enzimaticamente produzido. Esse creme de enzima compreendeu a isoenzima H1 de fração LIP (25 unidades/grama) e álcool veratrílico (6 mmols/kg de creme) sem GOX, e o creme ativador complementar compreendeu H202 (3,53 mmols/kg de creme).

[000469] Outros ingredientes (por exemplo, o transportador) nos cremes foram conforme descrito na Tabela 5 abaixo.
Tabela 5: Ingredientes não ativos de cremes exemplares

[000470] Uma escala análoga visual (VAS) é um método que é utilizado para medir uma característica ou atitude que se acredita que varie através de um continuo de valores que não podem ser facilmente diretamente medidos. A VAS foi apresentada como uma linha horizontal, ancorada por descritos de palavra em cada extremidade, conforme descrito abaixo. As extremidades da escala foram rotuladas pelos valores 0 (para resultados mais desejáveis) e 10 (para resultado menos desejável). A significância estatística foi determinada pelo cálculo de valores p de acordo com as medições repetidas ANOVA. Uma VAS foi utilizada para avaliar cada uma das variáveis a seguir:

- Uniformidade de pigmentação (ancorada pelos descritores "uniforme, igual" e "desigual, manchado, malhado";
- Claridade (ancorada pelos descritores "claro, igual" e "embotado, opaco");
- Luminosidade/Brilho (ancorada pelos descritores "aparência clara/brilhante" e "embotado, fosco");
- Tom da pele (ancorado pelos descritores "igual, cor da pele saudável" e "desigual, aparência descolorida");
- Radiância (ancorado pelos descritores "radiante, aparência luminosa" e "embotado, fosco, aparência amarelada"); e
- Aparência total (ancorado pelos descritores "aparência saudável" e "aparência não saudável").

FOTOGRAFIA DIGITAL:

[000471] A fotografia digital das faces de indivíduos tratados foi realizada utilizando um sistema de formação de imagem facial VISIAO-CR, colocado em um ambiente com iluminação ambiente estável e consistente. O sistema permaneceu na mesma localização/orientação para diferentes visitas por cada indivíduo.
EXEMPLO 1
OXIDAÇÃO DE MELANINA POR LIGNINA PEROXIDASE, GLICOSE OXIDASE E GLICOSE NA FORMULAÇÃO EM CREME

[000472] A fim de avaliar a habilidade da lignina peroxidase (LIP) para clarear a pele mediante ativação de uma fonte enzimática de peróxido de hidrogênio, um creme de enzima compreendendo LIP, álcool veratrílico e GOX (glicose oxidase) e um creme ativador compreendendo glicose foram preparados conforme descrito anteriormente, e testados na melanina solubilizada. Os resultados foram comparados com aqueles obtidos com um creme de enzima compreendendo LIP e álcool veratrílico e um creme ativador compreendendo peróxido de hidrogênio, preparado conforme descrito anteriormente.

[000473] 0,3 grama de cada creme de enzima foi primeiro misturado com melanina (140 µg/ml), resultando em uma cor preta acinzentada. 0,3 grama do creme ativador complementar foi então adicionado.

[000474] Conforme mostrado na figura 1, a cor de cada formulação do creme de enzima mudou de preto acinzentado a bege imediatamente após adição do creme ativador.

[000475] Esses resultados indicam que LIP é eficazmente ativado pelo H202 produzido enzimaticamente pelo sistema de GOX-glicose, a um grau comparável conforme é obtido com o sistema de ativação convencional de H202 não enzimático.
EXEMPLO 2
CLAREAMENTO DA PELE POR LIGNINA PEROXIDASE, GLICOSE OXIDASE E GLICOSE NA FORMULAÇÃO EM CREME MEDIANTE TRATAMENTO POR 21 DIAS

[000476] A enzima exemplar e os cremes ativadores descritos nesse documento foram testados com relação à sua habilidade para clarear a pele in vivo.

[000477] Lignina peroxidase, glicose oxidase e glicose foram administradas a 10 indivíduos do sexo feminino (com idade de 23 a 65), das quais 8 completaram o estudo. As composições foram aplicadas à pele facial de acordo com o regime a seguir:
Manhã
Etapa 1 - lavagem facial ELURE™
Etapa 2 - creme compreendendo lignina peroxidase e glicose oxidase (conforme descrito na seção de Materiais e Métodos)
Etapa 3 - creme ativador compreendendo glicose (conforme descrito na seção de Materiais e Métodos)
Etapa 4 - protetor solar SPF 30 (para reduzir a formação de nova melanina)
Tarde
Etapa 1 - lavagem facial
Etapa 2 - creme compreendendo lignina peroxidase e glicose oxidase
Etapa 3 - creme ativador compreendendo glicose

[000478] Após o creme que compreende lignina peroxidase e glicose oxidase ser aplicado e absorvido pela pele, o creme ativador foi aplicado.

[000479] A cor da pele foi medida utilizando um colorímetro de pele Mexameter®, o qual foi utilizado para avaliar as contribuições de melanina e eritema (hemoglobina) para a cor da pele. A cor da pele foi medida em várias regiões (testa, bochecha direita, bochecha esquerda e pontos de interesse) . Em cada região, a cor da pele foi medida em diferentes pontos e os resultados foram calculados. A cor da pele foi avaliada no dia 0 (isto é, antes do tratamento) e nos dias 7 e 21 do tratamento.

[000480] Conforme mostrado nas figuras 2A a 9B, o tratamento resultou em pelo menos alguma redução no teor de melanina, em todos os 8 indivíduos testados, e as reduções no teor de melanina foram usualmente dependentes da duração do tratamento (Figuras 2A, 6A, 7A, 9A).

[000481] Conforme mostrado, ainda, nesse lugar, o tratamento não teve qualquer efeito consistente nos níveis de eritema.

[000482] Conforme mostrado nas figuras 3A, 5A e 6A, o tratamento resultou na redução do teor de melanina de mais pontos na pele.

[000483] Em um indivíduo (Figura 9B), um aumento de eritema das bochechas no dia 21 foi observado, mas julgou- se ser causado pela irritação não relacionada ao tratamento (irritação por tônico utilizado para remover sombra borrada).

[000484] Esses resultados indicam que o tratamento com lignina peroxidase, glicose oxidase e glicose é eficaz no clareamento da pele pela diminuição do teor de melanina, sem causar irritação significativa da pele.
EXEMPLO 3
CLAREAMENTO DA PELE POR LIGNINA PEROXIDASE, GLICOSE OXIDASE E GLICOSE NA FORMULAÇÃO EM CREME MEDIANTE TRATAMENTO POR 8 SEMANAS

[000485] A formulação e regime diário descritos no Exemplo 2 foram testados em 28 indivíduos voluntários do sexo (com idade de 33 a 50) com hiperpigmentação aparente, mas leve, difusa incluindo melasma, por um período de 8 semanas. Os indivíduos cumprindo quaisquer dos critérios a seguir foram excluídos: pele sensível, hipersensível ou atópica; histórico de alergia a produtos cosméticos ou limpadores de pele; histórico de doença/condição ou enfermidade simultânea que poderia interferir no resultado do estudo; grávida, planejando ficar grávida, ou amamentando; problemas de pele na área de teste, incluindo doenças de pele, verrugas, acne, manchas vermelhas, telangiectasia, etc.; tratamentos dermatológicos ou procedimentos com interferência potencial dentro dos últimos 3 meses; atualmente envolvido ou participando em qualquer estudo clinico de cuidado da pele dentro dos últimos 3 meses; avaliado por um médico como inadequado para inscrição nesse ensaio clinico.

[000486] O efeito da formulação foi analisado, avaliando a pigmentação da pele em 0, 4, 6 e 8 semanas a partir do inicio do tratamento, utilizando as técnicas a seguir:

1) medição instrumental utilizando um colorímetro de pele Mexameter®;
2) avaliação de escalada análoga visual (VAS) por um dermatologista;
3) fotografia digital com sistema de formação de imagem facial VISIA®-CR; e
4) autoavaliação pelos indivíduos.

[000487] Conforme mostrado nas figuras 10A e 10B, a formulação reduziu progressivamente o índice de melanina na pele pigmentada (Figure 10A) e pele não pigmentada (Figura 10B) durante as 8 semanas de tratamento (conforme determinado utilizando um colorímetro de pele Mexameter®).

[000488] Além disso, após 4 semanas, o índice de melanina na pele pigmentada foi reduzido em 22 dos 2 8 indivíduos (78,6%), e o índice de melanina em pele não pigmentada foi reduzido em 20 dos 28 indivíduos (71,4%) . Após 6 e 8 semanas, o índice de melanina em cada pele pigmentada e não pigmentada foi reduzido em 27 dos 28 indivíduos (96,4%) .

[000489] Uma escala análoga visual (VAS) foi utilizada, conforme descrito na seção de Materiais e Métodos, para avaliar a uniformidade da pigmentação, claridade, luminosidade/brilho, tom, radiância e aparência total da pele tratada, em vários pontos no tempo durante o decorrer do tratamento.

[000490] Conforme mostrado nas figuras 11 a 16, bem como nas Tabelas 6 e 7, a formulação progressivamente aumentou a uniformidade da pigmentação (Figura 11), claridade (Figura 12), luminosidade/brilho (Figura 13), tom (Figura 14), radiância (Figura 15) e aparência total (Figura 16) da pele tratada, durante o curso de 8 semanas de tratamento.

[000491] O grau médio de melhorias em cada ponto do tempo mostrado nas figuras 11 a 16 é apresentado na Tabela 6:
Tabela 6: Melhoria média e significância estatística da aparência da pele em relação ao início do tratamento (n=28)

[000492] A figura 17 mostra as mudanças na tez facial em indivíduos individuais tratados por 8 semanas com a formulação.

[000493] As porcentagens dos 28 indivíduos que mostraram melhoria significativa na claridade, luminosidade/brilho, tom da pele, radiância e/ou aparência total da tez da face inteira após 4, 6 e 8 semanas de tratamento são apresentadas na Tabela 7:
Tabela 7: Porcentagem de indivíduos mostrando melhoria da aparência da pele em relação ao início do tratamento (n=28)

[000494] Conforme mostrado na Tabela 8, a satisfação dos indivíduos com a formulação aumentou progressivamente durante o curso de 8 semanas de tratamento (conforme determinado de acordo com a autoavaliação pelo questionário).
Tabela 8: Respostas dos indivíduos à pergunta "no geral, você está satisfeito com o produto que utilizou?"

[000495] Além disso, conforme mostrado na Tabela 9, a satisfação dos indivíduos com a formulação foi expressa durante o curso de 8 semanas de tratamento com relação a cada tópico perguntado no questionário.
Tabela 9: Respostas de indivíduos aos itens específicos do questionário (n=28)

[000496] Como posteriormente determinado por autoavaliação, nenhum dos 28 indivíduos relatou qualquer desconforto ou reação alérgica ao utilizar a formulação.

[000497] Esses resultados confirmam que o tratamento com lignina peroxidase, glicose oxidase e glicose é eficaz para clarear a pele pela diminuição do teor de melanina, sem causar irritação da pele e indicam, ainda, que a tez da pele tratada continua a melhorar durante o decorrer do tratamento.

[000498] Embora o presente pedido de patente de invenção tenha sido descrito em conjunto com aplicações especificas respectivas, é evidente que muitas alternativas, modificações e variações serão evidentes àqueles especialistas na técnica. Consequentemente, pretende-se abranger todas essas alternativas, modificações e variações que recaiam no espirito e amplo escopo das reivindicações anexas.

[000499] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados nesse relatório descritivo são incorporados nesse documento em sua totalidade por referência no relatório, na mesma medida como se cada publicação, patente ou pedido de patente individual fosse especifica e individualmente indicado como sendo incorporado nesse documento por referência. Além disso, a citação ou identificação de qualquer referência nesse pedido não deverá ser interpretada como uma admissão de que tal referência esteja disponível como técnica anterior ao presente pedido de patente de invenção. Na medida em que os títulos das seções são utilizados, eles não deverão ser interpretados como necessariamente limitantes.

Claims

"COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", caracterizada por ter uma lignina peroxidase, uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio e um substrato da referida enzima de produção de peróxido de hidrogênio, caracterizado pela referida enzima de produção de peróxido de hidrogênio ter glucose oxidase e o referido substrato ter D-glucose e em que a concentração da referida glucose oxidase está na faixa de 1,25 unidades/grama a 125 unidades/grama e a concentração da referida D-glucose está na faixa de 0,175 µmols/grama a 17,5 µmols/grama.
"COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com a reivindicação número 1, caracterizado por a concentração da referida lignina peroxidase estar em uma faixa de 1,25 unidades/grama a 125 unidades/grama.
"COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de número 1 ou 2, caracterizada por ter, ainda, um mediador de oxidação, o referido mediador de oxidação sendo uma molécula que facilita a reação redox catalisada pela referida lignina peroxidase.
"COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com a reivindicação número 3, caracterizado por a concentração do referido mediador de oxidação estar na faixa de 0,03 µmols/grama a 300 µmols/grama
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", o conjunto caracterizado por ter uma enzima de produção de peróxido de hidrogênio, um substrato da referida enzima de produção de peróxido de hidrogênio e uma lignina peroxidase, caracterizado por a referida enzima de produção de peróxido de hidrogênio ter glucose oxidase e o referido substrato ter D-glucose, em que a referida enzima de produção de peróxido de hidrogênio forma uma parte de uma primeira composição e o referido estrato forma uma parte de uma segunda composição, as referidas primeira e segunda composições sendo embaladas individualmente dentro do conjunto e em que a concentração da referida glucose oxidase na referida primeira composição está na faixa de 2,5 a 250 unidades/grama e a concentração da referida D-glucose na referida segunda composição está na faixa de 0,35 µmols/grama a 35 µmols/grama.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com a reivindicação número 5, caracterizado por a referida primeira composição ter, ainda, a referida lignina peroxidase.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com a reivindicação número 5, caracterizado por a referida segunda composição ter, ainda, a referida lignina peroxidase.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de número 5 a 7, caracterizado por a concentração da referida lignina peroxidase em uma composição tendo a referida lignina peroxidase estar na faixa de 2,5 as 250 unidades/grama.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de número 5 a 8, caracterizado por ter, ainda, um mediador de oxidação, o referido mediador de oxidação sendo uma molécula que facilita a reação redox catalisada pela referida lignina peroxidase.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com a reivindicação número 9, caracterizado por o referido mediador de oxidação formar uma parte de uma composição que tem a referida lignina peroxidase.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com a reivindicação número 9 ou 10, caracterizado por a concentração do referido mediador de oxidação em uma composição tendo o referido mediador de oxidação estar na faixa de 0,06 µmols/grama a 600 µmols/grama.
"COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com a reivindicação número 3 ou 4, caracterizado por o referido mediador de oxidação ser selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetóxibenzeno.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de números 9 a 11, caracterizado por o referido mediador de oxidação ser selecionado do grupo consistindo em álcool veratrílico, veratrol e 1,4-dimetóxibenzeno.
"COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de números 1 a 4 ou 12, caracterizado por a referida lignina peroxidase ser isoenzima Hl ou uma forma desfosforilada da isoenzima H2.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", tal como definido na reivindicação número 12 e de acordo com qualquer uma das reivindicações de números 5 a 11, caracterizado por a referida lignina peroxidase ser isoenzima Hl ou uma forma desfosforilada da isoenzima H2.
"COMPOSIÇÃO COSMÉTICA PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de números 1 a 4 ou 12 ou 14, caracterizado por ser para uso no clareamento de uma pele ou cabelo de um indivíduo.
"CONJUNTO PARA CLAREAR UMA PELE E/OU CABELO DE UM INDIVÍDUO", tal como definido na reivindicação número 14 e de acordo com qualquer uma das reivindicações de números 5 a 13, caracterizado por ser para uso no clareamento de uma pele ou cabelo de um indivíduo.