CN105407867A - 含酶系统的美容组合物 - Google Patents

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Abstract

本文公开了用于向受试者的皮肤、毛发和/或指甲敷用的美容或药物组合物，以及利用所述美容或药物组合物向皮肤、毛发和/或指甲施用过氧化氢的方法和用于敷用所述美容或药物组合物的试剂盒。所述组合物包含过氧化氢生成酶和所述过氧化氢生成酶的底物。本文还公开了还包含木质素过氧化物酶，用于提亮皮肤和/或毛发的美容组合物和试剂盒，以及利用所述美容组合物和试剂盒的方法。

Description

含酶系统的美容组合物
技术领域及背景技术
本发明，在其一些实施方案中，涉及新型美容组合物、试剂盒和方法并且，更特别地但不完全，涉及利用酶系统原位生成过氧化氢的美容组合物、试剂盒和方法，并且涉及例如其用于提亮皮肤和/或毛发的用途。
人皮肤的颜色受黑色素(植物和微生物中也存在的一种色素)的量、质量和分布所控制。
黑色素的合成从前体L-酪氨酸开始，经由酪氨酸酶的作用将其转化为第二前体多巴醌。黑色素的合成发生在黑素体中，黑素体存在于表皮基底层中存在的黑素细胞中；这些细胞中黑色素的合成受紫外(UV)光诱导。合成后，黑色素迁移到表皮细胞并分散于其中，在这里黑色素在皮肤新陈代谢后脱色，然后在皮肤更新时呈污垢形式脱落。黑色素因为保护皮肤免受UV光产生的不利影响，所以具有临床价值。然而，高水平的黑色素可引起不必要的皮肤变黑，而其不均匀分布可导致在审美上可能令人不愉快的黄褐斑和雀斑。
亮肤产品在过去的几年里变得越来越受欢迎。亮肤产品的主要用途是提亮或增白皮肤或治疗色素沉着病症如黄褐斑、雀斑、妊娠纹和老年斑。目前有几种类型的亮肤产品可用。
基于色素细胞退化和死亡的产品通常包括促进皮肤增白、提亮或淡化皮肤色素沉着的刺激性化学物质，如氢醌、4-异丙基儿茶酚和氢醌单苄醚。常用于皮肤增白的其它试剂包括抑制黑色素生成的曲酸及其衍生物，和多种提取物如甘草(光果甘草(Glycyrrhizaglabra))，其包括以与曲酸相似的途径降低皮肤中产黑色素细胞的氧化活性的光甘草定(glabridin)。
其它提亮产品基于对酪氨酸酶，将前体L-酪氨酸转化为第二前体多巴醌的酶的抑制。这类产品包括熊果苷，一种葡萄糖氢醌化合物，其能够通过螯合铜离子抑制酪氨酸酶，从而阻遏由多巴色素互变异构化为5,6-二羟吲哚(DHI)和5,6-二羟吲哚-2-羧酸(DHICA)。促黑素抑制素(Melanostat)是通过酪氨酸酶起作用的另一种提亮产品。促黑素抑制素是在钝化黑素细胞中的黑素生成中起作用的合成肽。
在提亮产品中还利用了可以抑制黑色素生成的几种抗氧化化合物。因为黑色素的合成牵涉氧化反应，所以在不同时间点阻断酪氨酸/DOPA向黑色素的氧化最终抑制了黑色素的合成。例如，L-抗坏血酸(维生素C)对黑色素中间产物起还原剂的作用并阻断氧化反应；提亮产品所利用的其它抗氧化剂包括通常提取自桑葚或甘草的生物类黄酮。
然而，目前可用的皮肤增白产品通常无效并且可能对皮肤有害，因为连续外敷这些产品可导致永久性白斑病和如色素异常症和皮疹的副作用。
消费者经常使用化妆品来保护他们的皮肤。粗糙和/或破损皮肤及色素沉着过多(如老年斑、雀斑和与日光暴露、皮肤老化或对人皮肤的环境损伤相关的褐色斑块)是消费者通常设法治疗的区域。皮肤增白在某些亚洲人群中令人特别感兴趣。
美国专利申请公布第20050013784号公开了一种包含非水溶性底物的治疗面膜和一种包含肤色改变剂和水溶性增稠剂的液体组合物。
包括过氧化氢的治疗面膜目前可从RevivaLabs获得(例如，氧气面膜、青木瓜和过氧化氢氧气面膜、REV-11305)。
国际专利申请公布WO2004/052275公开了生成木质素过氧化物酶的方法及适于皮肤和毛发提亮的方法和美容组合物以及包括用于皮肤和毛发提亮的活性成分的试剂盒和制品。
国际专利申请公布WO2012/153336公开了使用包含氧化活化剂如过氧化氢的面膜和包含木质素过氧化物酶的美容组合物；或包含木质素过氧化物酶的面膜和包含氧化活化剂的美容组合物提亮受试者的皮肤的试剂盒和方法。
美国专利第8,426,158号描述了在具有过氧化物酶活性的多肽的存在下通过用酶组合物水解纤维素材料提高纤维素材料水解的方法，所述过氧化物酶活性是用于减少发酵期间生成的过氧化物对水解的抑制。
过氧化氢是在唾液中通过葡萄糖氧化酶对葡萄糖的氧化而形成。过氧化氢在唾液中用作乳过氧化物酶的底物，其分别由硫氰酸盐、溴化物和碘化物形成杀菌氧化中间产物如次硫氰酸盐、次溴酸盐和次碘酸盐。
国际专利申请公布WO88/002600描述了一种包含过氧化氢形成酶如葡萄糖氧化酶、过氧化物酶如乳过氧化物酶、硫氰酸盐和溶菌酶的杀菌组合物。意在使使用期间产生的过氧化氢与过氧化物酶组合，以将硫氰酸盐转化为次硫氰酸盐，从而使细菌减毒使其被溶菌酶溶解。
Midda和Cooksey[JClinPeriodontol1986,13:950-956]描述了口腔冲洗液和洁齿剂，其含有用于由饮食可发酵碳水化合物生成过氧化氢的淀粉葡萄糖苷酶和葡萄糖氧化酶，过氧化氢转而在唾液乳过氧化物酶的存在下将硫氰酸盐转化为次硫氰酸盐，从而抑制细菌。
EnzycalTM牙膏(Curaprox)含有用于增强唾液抗菌作用的乳过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和淀粉葡萄糖苷酶[BrDentJ2008,205:681]。
BioteneTM牙膏和漱口水(GlaxoSmithKline)含有葡萄糖氧化酶、乳铁蛋白、乳过氧化物酶、溶菌酶。
美国专利第5,607,681号描述了含有碘化物、硫氰酸盐、葡萄糖氧化酶、D-葡萄糖并且还任选地含有过氧化物酶如乳过氧化物酶的抗菌组合物。所述组合物是在口腔卫生、除臭和去屑产品中用作防腐剂或活性剂。所述组合物可作为非反应干粉或可经稀释以便获得抗菌活性的非水溶液而提供。
美国专利第6,214,339描述了在狗和猫中通过向外耳施用含可氧化底物如葡萄糖和氧化还原酶如葡萄糖氧化酶的非水组合物，以在遇到外耳环境后生成过氧化氢对外耳炎的治疗。所述组合物还含有用于由过氧化氢生成次碘酸盐的碘盐和过氧化物酶如乳过氧化物酶。
美国专利第7,833,290描述了通过用化合物如苏木精、氧化苏木精、巴西木素和氧化巴西木素；金属盐；重碳酸盐；和过氧化氢或在适合底物的存在下生成过氧化氢的体系，如过氧化脲、金属过氧化物、过硼酸盐、过碳酸盐和氧化酶处理而使角质纤维染色的方法。
另外的背景技术包括Hugoson等[OdontolRev1974,25:69-80]；美国专利第7,981,166号；和美国专利申请公布第20040161435和20090130040号。
发明内容
本发明人现已发明并成功地实践了避免需要在美容组合物和试剂盒中并且尤其是在含木质素过氧化物酶的组合物和试剂盒中包括过氧化氢的方法。
根据本发明的一些实施方案的一方面，提供了一种用于提亮受试者的皮肤和/或毛发的美容组合物，所述组合物包含木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物。
根据本发明的一些实施方案的一方面，提供了一种用于提亮受试者的皮肤和/或毛发的试剂盒，所述试剂盒包含过氧化氢生成酶、过氧化氢生成酶的底物和木质素过氧化物酶，其中过氧化氢生成酶、过氧化氢生成酶的底物和木质素过氧化物酶中的至少一种形成单独包装在所述试剂盒中的组合物的一部分。
根据本发明的一些实施方案的一方面，提供了一种提亮受试者的皮肤和/或毛发的美容方法，所述方法包括使所述受试者的皮肤和/或毛发区接触包含木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物的组合物，从而提亮所述受试者的皮肤和/或毛发。
根据本发明的一些实施方案的一方面，提供了一种用于向受试者的皮肤、毛发和/或指甲敷用的美容或药物组合物，所述组合物包含过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物。
根据本发明的一些实施方案的一方面，提供了一种用于向受试者的皮肤、毛发和/或指甲敷用美容或药物组合物的试剂盒，所述美容或药物组合物包含过氧化氢，所述试剂盒包含含过氧化氢生成酶的第一组合物和含所述过氧化氢生成酶的底物的第二组合物。
根据本发明的一些实施方案的一方面，提供了一种向受试者的皮肤、毛发和/或指甲施用过氧化氢的方法，所述方法包括使所述受试者的皮肤、毛发和/或指甲区接触包含过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物的组合物，从而在所述皮肤、毛发和/或指甲上生成过氧化氢。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物中过氧化氢生成酶的浓度在0.125至1250单位/克的范围内。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物中过氧化氢生成酶的底物的浓度在0.0175微摩尔/克至175微摩尔/克的范围内。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物还包含氧化介质。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述过氧化氢生成酶选自葡萄糖氧化酶、己糖氧化酶、胆固醇氧化酶、芳基醇氧化酶、L-古洛糖酸内酯氧化酶、半乳糖氧化酶、吡喃糖-2-氧化酶、吡哆醇-4-氧化酶、醇氧化酶、2-羟酸氧化酶、胆碱氧化酶、长链醇氧化酶、甘油-3-磷酸氧化酶、D-阿拉伯糖-1,4-内酯氧化酶、香草醇氧化酶、醛醇氧化酶、茄格孢吡喃酮原II氧化酶、巴龙霉胺6’-氧化酶、乙二醛氧化酶、藜芦醇氧化酶、醇脱氢酶、纤维二糖脱氢酶、醛氧化酶、草酸氧化酶、芳基醛氧化酶、二氢乳清酸氧化酶、吡咯喹啉-醌合成酶、L-氨基酸氧化酶、L-谷氨酸氧化酶、多胺氧化酶、NAD(P)H氧化酶、尿酸氧化酶、羟胺氧化酶、硫醇氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、细胞色素c氧化酶、黄嘌呤氧化酶和超氧化物歧化酶。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述过氧化氢生成酶包含葡萄糖氧化酶并且所述底物包含D-葡萄糖。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述木质素过氧化物酶为同工酶H1或修饰形式的同工酶H2。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述木质素过氧化物酶为白腐菌的木质素过氧化物酶。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述木质素过氧化物酶为真菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)的提取物。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，重组表达所述木质素过氧化物酶。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述木质素过氧化物酶包含SEQIDNO:1中列出的多肽序列。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述美容组合物呈选自面膜、精华液、洗液、面霜、洗发剂、凝胶和调色剂的形式。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物还包含美容上可接受的载体和/或药学上可接受的载体。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物还包含美容上可接受的载体。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物包装在气密性容器中。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述气密性容器配置用于分配所述组合物，无空气进入所述容器。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述过氧化氢生成酶形成所述试剂盒的第一组合物的一部分并且所述底物形成所述试剂盒的第二组合物的一部分，所述第一和第二组合物单独包装在试剂盒中。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述第一组合物还包含木质素过氧化物酶。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述第二组合物还包含木质素过氧化物酶。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述木质素过氧化物酶形成所述试剂盒中第三组合物的一部分，所述第三组合物单独包装在所述试剂盒中。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述过氧化氢生成酶和所述过氧化氢生成酶的底物一起包装在所述试剂盒中的气密性包装中。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述气密性包装是配置用于分配所述组合物的容器，无空气进入所述容器。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，在包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述试剂盒包含氧化介质、过氧化氢生成酶、过氧化氢生成酶的底物和木质素过氧化物酶。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述氧化介质形成包含木质素过氧化物酶的组合物的一部分。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，在所述组合物中所述氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述过氧化氢生成酶在包含所述酶的组合物中的浓度在0.25至2500单位/克的范围内。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，在包含所述底物的组合物中所述底物的浓度在0.035微摩尔/克至350微摩尔/克的范围内。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述试剂盒包含：
包含浓度在2.5至250单位/克的范围内的木质素过氧化物酶和浓度在2.5至250单位/克的范围内的葡萄糖氧化酶的第一组合物；和
包含浓度在0.35微摩尔/克至35微摩尔/克的范围内的D-葡萄糖的第二组合物。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，单独包装在所述试剂盒中的所述组合物呈选自面膜、精华液、洗液、面霜、洗发剂、凝胶和调色剂的形式。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，单独包装在所述试剂盒中的所述组合物还包含美容上可接受的载体。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物由包装在上文所述的试剂盒中的木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物形成。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，实行所述接触至少5次。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，每天实行所述接触一次或两次。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物通过在使皮肤和/或毛发区接触木质素过氧化物酶后，使皮肤和/或毛发区接触过氧化氢生成酶和/或过氧化氢生成酶的底物而形成。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述皮肤包含面部皮肤。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述皮肤包含暴露于阳光的皮肤区域。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，提亮皮肤包括提亮整个皮肤肤色。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述皮肤含不均匀肤色、暗斑、雀斑、黑斑病、色素沉着过多、皮肤色素减退、老年斑、痘印和/或疤痕。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物还包含在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的至少一种试剂。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述至少一种试剂选自过氧化物酶和氧化性染剂前体。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物选自漂白组合物、染发剂组合物、抗菌组合物和除臭组合物。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述试剂盒还包含在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的至少一种试剂。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，第一组合物包含浓度在2.5至250单位/克的范围内的葡萄糖氧化酶，并且第二组合物包含浓度在0.35微摩尔/克至35微摩尔/克的范围内的D-葡萄糖。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，第一组合物和第二组合物各自独立地呈选自面膜、精华液、洗液、面霜、洗发剂、凝胶和调色剂的形式。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，第一组合物和第二组合物还包含美容上可接受的载体和/或药学上可接受的载体。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，所述组合物由包装在上文所述的试剂盒中的过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物形成。
根据本发明的任何一些实施方案及其任何组合，上文所述方法的组合物为本文，包括其任一实施方案，以任何组合描述的任何组合物。
除非另有定义，本文使用的所有技术和/或科学术语均具有本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的相同含义。虽然在本发明实施方案的实践或试验中可使用与本文所述类似或等效的方法和材料，但是下面描述的是示例性方法和/或材料。如有冲突，以专利说明书，包括定义为准。另外，所述材料、方法和实例仅为说明性而非旨在为必要性限制。
附图说明
本文仅以举例的方式，参考附图描述了本发明的一些实施方案。现详细地具体参考附图，强调所示细节仅举例而言并且是为了说明性讨论本发明实施方案的目的。就这一点而言，随附图所做的描述使得对于本领域技术人员而言可如何实践本发明的实施方案显而易见。
图中：
图1呈现了示出包含5单位/克木质素过氧化物酶(LIP)同工酶H1组分、25单位/克葡萄糖氧化酶(GOX)和6mmol/kg藜芦醇(VA)及140μg/ml黑色素(LIP/VA/GOX)的示例性酶面霜和包含3.5mmol/kg葡萄糖(GLU)的示例性活化剂面霜，包含25单位/克LIP同工酶H1组分和6mmol/kgVA及140μg/ml黑色素(LIP/VA)的对照酶面霜和包含3.53mmol/kgH2O2的对照活化剂面霜，以及示例性酶和活化剂面霜(LIP/VA/GOX/GLU)的混合物和对照酶和活化剂面霜(LIP/VA/H2O2)的混合物的图像；
图2A和2B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗的第0、7和21天，受试者各面部区域中黑色素指数(图2A)和红斑指数(图2B)的值的柱状图(与第0天相比*p<0.05)；
图3A和3B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗的第0和21天，受试者各面部区域中黑色素指数(图3A)和红斑指数(图3B)的值的柱状图(与第0天相比*p<0.05)；
图4A和4B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗的第0、7和21天，受试者各面部区域中黑色素指数(图4A)和红斑指数(图4B)的值的柱状图(与第0天相比*p<0.05)；
图5A和5B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗的第0、7和21天，受试者各面部区域中黑色素指数(图5A)和红斑指数(图5B)的值的柱状图(与第0天相比*p<0.05，与第7天相比#p<0.05)；
图6A和6B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗的第0、7和21天，受试者各面部区域中黑色素指数(图6A)和红斑指数(图6B)的值的柱状图(与第0天相比*p<0.05，与第7天相比#p<0.05)；
图7A和7B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗的第0、7和21天，受试者各面部区域中黑色素指数(图7A)和红斑指数(图7B)的值的柱状图(与第0天相比*p<0.05，与第7天相比#p<0.05)；
图8A和8B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗的第0和7天，受试者各面部区域中黑色素指数(图8A)和红斑指数(图8B)的值的柱状图(与第0天相比*p<0.05)；
图9A和9B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗的第0、7和21天，受试者各面部区域中黑色素指数(图9A)和红斑指数(图9B)的值的柱状图(与第0天相比*p<0.05，与第7天相比#p<0.05；在第21天由于和治疗无关的刺激，脸颊中的红斑指数增大)；
图10A和10B呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗0、4、6和8周后色素沉着(图10A)和无色素沉着(图10B)的皮肤的黑色素指数的柱状图(**p<0.01(在图10A中p＝0.001并且在图10B中p＝0.007)，***p<0.001)；
图11呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗0、4、6和8周后，由皮肤科医师判定的皮肤色素沉着的一致性的视觉模拟评分(0＝一致、均匀，10＝不均匀、有斑点、有杂色，*p<0.05)；
图12呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗0、4、6和8周后，由皮肤科医师判定的皮肤透明度的视觉模拟评分(0＝透明、均匀，10＝暗沉、不透明，*p<0.05，**p<0.01)；
图13呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗0、4、6和8周后，由皮肤科医师判定的皮肤提亮/增亮的视觉模拟评分(0＝外表光亮/明亮，10＝暗沉、无光泽，**p<0.01，***p<0.001)；
图14呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗0、4、6和8周后，由皮肤科医师判定的肤色的视觉模拟评分(0＝皮肤颜色均匀、健康；10＝外表不均匀、变色，*p<0.05，***p<0.001)；
图15呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗0、4、6和8周后，由皮肤科医师判定的皮肤发光度的视觉模拟评分(0＝外表发光、有光泽，10＝外表暗沉、无光泽、灰黄，***p<0.001)；
图16呈现了示出在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗0、4、6和8周后，由皮肤科医师判定的皮肤整体外观的视觉模拟评分(0＝看起来很健康，10＝看起来不健康，***p<0.001)；及
图17呈现了在根据本发明的示例性实施方案，包括每天施用两次LIP同工酶H1、葡萄糖氧化酶和葡萄糖的治疗8周之前(基线)和之后受试者的照片。
具体实施方式
本发明，在其一些实施方案中，涉及新型美容组合物、试剂盒和方法并且，更特别地但不完全，涉及生成过氧化氢的美容组合物、试剂盒和方法，并且涉及例如其用于提亮皮肤和/或毛发的用途。
在详细解释本发明的至少一个实施方案之前，应理解本发明在其应用上不一定限于以下描述中提出或通过实施例举例说明的细节。本发明能够有其它实施方案或以各种方式实践或实施。
先前已经公开了使用过氧化氢和木质素过氧化物酶提亮受试者皮肤的方法(参见，例如，上文所讨论的国际专利申请公布WO2012/153336)。此类方法需要利用含过氧化氢的组合物。
许多其它美容组合物和方法也包括或利用过氧化氢。
然而，在妆品应用中利用过氧化氢最近已经被认为是有害的。
在寻找避免需要利用含过氧化氢的组合物的方法中，本发明人已经想象到并且成功地发明和实践了一种利用酶系统在敷用后生成过氧化氢的新方法。更具体地，本发明人已经利用过氧化氢生成酶及其底物，就在敷用组合物或含所述组合物的体系之前和/或敷用组合物或含所述组合物的体系期间，原位生成过氧化氢。通过保持所述酶和底物分离，直至需要生成过氧化氢和/或通过储存在无氧条件下，保持所述酶和底物相互无活性可容易地控制酶系统。本文公开的方法优点在于能够在其被消耗的原位逐渐生成过氧化氢，使得过氧化氢的浓度随时间推移保持低且稳定。
虽然为实践而简化了本发明，但是本发明人已经证实了酶系统生成用于活化木质素过氧化物酶的过氧化氢以便提亮皮肤的功效。
因此，如以下实施例部分所示，本发明人已经设计了包含木质素过氧化物酶的美容组合物和包含葡萄糖的活化剂组合物，其在一起敷用(例如，在受试者的皮肤区域上)时作为由于木质素过氧化物酶与葡萄糖氧化酶和葡萄糖生成的过氧化氢的相互作用引起的黑色素含量降低的结果，产生显著的增白效果。
这些结果证实了使用酶/底物体系原位(即，在预期反应(例如在过氧化物酶催化的反应中与黑色素反应)的身体区域)生成过氧化氢的功效。
根据本发明的一些实施方案的一方面，提供了一种供局部敷用(例如，向受试者的皮肤、毛发和/或指甲敷用)的美容或药物组合物。根据本发明的一些实施方案，所述组合物包含过氧化氢生成酶系统，即过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物。
如本文通篇所用，关于本文公开的组合物、试剂盒和方法中的任一种(及任何其它方面)的术语“美容”涉及增强人体外观或气味的组合物、试剂盒和方法。
在一些实施方案中，术语“美容”遵循全球监管机构的定义。例如，在一些实施方案中，术语“美容”遵循美国食品和药物管理局(FDA)的定义，正如“旨在向人体敷用用于清洁、美化、提升吸引力或改变外观，而不影响身体的结构或功能”。
过氧化氢生成酶系统：
如本文通篇所用，短语“过氧化氢生成酶”是指催化其中过氧化氢为产物的反应的酶。
如本文通篇所用，过氧化氢生成酶的“底物”是指除O2或水外，用作过氧化氢生成酶所催化的其中过氧化氢为产物的上述反应的底物的任何化合物。“底物”可为一种化合物或多种化合物。所述多种化合物可作为不同反应的一部分与酶相互作用，或所述酶催化利用多种化合物作为底物的一个反应。
在一些实施方案中，所述酶催化其中底物被氧化并且O2被还原为过氧化氢的反应。
在一些实施方案中，所述酶催化其中底物被还原并且水被氧化为过氧化氢的反应。
可用于本发明的实施方案中的过氧化氢生成酶的实例包括但不限于：
EC1.1.3氧化还原酶，如葡萄糖氧化酶(EC1.1.3.4)、己糖氧化酶(EC1.1.3.5)、胆固醇氧化酶(EC1.1.3.6)、芳基醇氧化酶(EC1.1.3.7)、L-古洛糖酸内酯氧化酶(EC1.1.3.8)、半乳糖氧化酶(EC1.1.3.9)、吡喃糖-2-氧化酶(EC1.1.3.10)、吡哆醇-4-氧化酶(EC1.1.3.12),醇氧化酶(EC1.1.3.13)、2-羟酸氧化酶(EC1.1.3.15)、胆碱氧化酶(EC1.1.3.17)、长链醇氧化酶(EC1.1.3.20)、甘油-3-磷酸氧化酶(EC1.1.3.21)、D-阿拉伯糖-1,4-内酯氧化酶(EC1.1.3.37)、香草醇氧化酶(EC1.1.3.38)、醛醇氧化酶(EC1.1.3.41)、茄格孢吡喃酮原II氧化酶(EC1.1.3.42)、巴龙霉胺6’-氧化酶(EC1.1.3.43)、乙二醛氧化酶和藜芦醇氧化酶；
醇脱氢酶(EC1.1.99.8)；
纤维二糖脱氢酶(EC1.1.99.18)；
EC1.2.3氧化还原酶如醛氧化酶(EC1.2.3.1)、草酸氧化酶(EC1.2.3.4)和芳基醛氧化酶(EC1.2.3.9)；
EC1.3.3氧化还原酶如二氢乳清酸氧化酶(EC1.3.3.1)和吡咯喹啉-醌合成酶(EC1.3.3.11)；
EC1.4.3氧化还原酶如L-氨基酸氧化酶(EC1.4.3.2)和L-谷氨酸氧化酶(1.4.3.11)；
EC1.5.3氧化还原酶如多胺氧化酶(1.5.3.11)；
EC1.6.3氧化还原酶如NAD(P)H氧化酶(1.6.3.1)；
EC1.7.3氧化还原酶如尿酸氧化酶(EC1.7.3.3)和羟胺氧化酶(EC1.7.3.4)；
EC1.8.3氧化还原酶如硫醇氧化酶(EC1.8.3.2)和谷胱甘肽氧化酶(EC1.8.3.3)；
EC1.9.3氧化还原酶如细胞色素c氧化酶(EC1.9.3.1)；
EC1.17.3氧化还原酶如黄嘌呤氧化酶(EC1.17.3.2)；和
超氧化物歧化酶(EC1.15.1.1)。
本文的EC命名是根据国际生物化学与分子生物学联盟。
在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为EC1.1.3氧化还原酶、EC1.2.3氧化还原酶、EC1.3.3氧化还原酶、EC1.4.3氧化还原酶、EC1.5.3氧化还原酶、EC1.6.3氧化还原酶、EC1.7.3氧化还原酶、EC1.8.3氧化还原酶、EC1.9.3氧化还原酶和EC1.17.3氧化还原酶(例如，本文所述的氧化还原酶)中的一种或多种。
在一些实施方案中，包括超氧化物歧化酶以与一些超氧化物的来源组合，由超氧化物生成过氧化氢。在一些实施方案中，超氧化物的来源是生成超氧化物的酶，例如NAD(P)H氧化酶和/或黄嘌呤氧化酶。
在一些实施方案中，过氧化氢生成酶生成超氧化物。因为超氧化物通常反应到相当程度形成过氧化氢(例如，通过歧化)，本文认为超氧化物的生成涵盖过氧化氢的生成。
过氧化氢生成酶的适合底物将对技术人员显而易见。
在示例性实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶(EC1.1.3.4)并且所述底物包含D-葡萄糖。
在一些实施方案中，所述酶为己糖氧化酶(EC1.1.3.5)并且所述底物包含D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖、麦芽糖、乳糖和/或纤维二糖。
在一些实施方案中，所述酶为胆固醇氧化酶(EC1.1.3.6)并且所述底物包含胆固醇。
在一些实施方案中，所述酶为芳基醇氧化酶(EC1.1.3.7)并且所述底物包含芳香族伯醇。
在一些实施方案中，所述酶为L-古洛糖酸内酯氧化酶(EC1.1.3.8)并且所述底物包含L-古洛糖酸-1,4-内酯。
在一些实施方案中，所述酶为半乳糖氧化酶(EC1.1.3.9)并且所述底物包含伯醇(例如，甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇)、单糖、寡糖和/或多糖。
在一些实施方案中，所述酶为吡喃糖-2-氧化酶(EC1.1.3.10)并且所述底物包含吡喃醛糖(例如，D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖)、L-山梨糖和/或1,5-脱水葡萄糖醇和/或其二糖。应认识到吡喃糖-2-氧化酶是用于活化木质素纤维素的过氧化氢的天然来源。
在一些实施方案中，所述酶为吡哆醇-4-氧化酶(EC1.1.3.12)并且所述底物包含吡哆醇。
在一些实施方案中，所述酶为醇氧化酶(EC1.1.3.13)并且所述底物包含伯醇(例如，甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇)。
在一些实施方案中，所述酶为2-羟酸氧化酶(EC1.1.3.15)并且所述底物包含(S)-2-羟酸(例如，羟乙酸盐、2-羟戊二酸)和/或(S)-2-氨基酸。
在一些实施方案中，所述酶为胆碱氧化酶(EC1.1.3.17)并且所述底物包含胆碱和/或甘氨酸甜菜醛。
在一些实施方案中，所述酶为长链醇氧化酶(EC1.1.3.20)并且所述底物为长链醇(例如，脂肪醇)。
在一些实施方案中，所述酶为甘油-3-磷酸氧化酶(EC1.1.3.21)并且所述底物包含甘油-3-磷酸。
在一些实施方案中，所述酶为D-阿拉伯糖-1,4-内酯氧化酶(EC1.1.3.37)并且所述底物包含L-古洛糖酸-1,4-内酯、D-阿拉伯糖-1,4-内酯和/或D-半乳糖酸-1,4-内酯。
在一些实施方案中，所述酶为香草醇氧化酶(EC1.1.3.38)并且所述底物包含4-烯丙基酚、4-羟基苄醇(例如，香草醇)、4-羟基苯扎明和/或4-(甲氧基甲基)苯酚。
在一些实施方案中，所述酶为醛醇氧化酶(EC1.1.3.41)并且所述底物包含醛醇(例如，木糖醇、D-山梨糖醇)。
在一些实施方案中，所述酶为茄格孢吡喃酮原II氧化酶(EC1.1.3.42)并且所述底物包含茄格孢吡喃酮原II。
在一些实施方案中，所述酶为巴龙霉胺6’-氧化酶(EC1.1.3.43)并且所述底物包含巴龙霉胺和/或6”’-脱氨基-6”’羟基新霉素C。
在一些实施方案中，所述酶为藜芦醇氧化酶并且所述底物为(4-甲氧基)-芳香伯醇(例如，藜芦醇)。
在一些实施方案中，所述酶为乙二醛氧化酶并且所述底物为乙二醛、烷基乙二醛(例如，甲基乙二醛)和/或纤维二糖。
在一些实施方案中，所述酶为醇脱氢酶(EC1.1.99.8)并且所述底物包含伯醇(例如，甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇)。
在一些实施方案中，所述酶为纤维二糖脱氢酶(EC1.1.99.18)并且所述底物包含纤维二糖、纤维寡糖、乳糖和/或D-葡糖基-1,4-β-D-甘露糖。
在一些实施方案中，所述酶为醛氧化酶(EC1.2.3.1)并且所述底物包含醛。
在一些实施方案中，所述酶为草酸氧化酶(EC1.2.3.4)并且所述底物包含草酸盐。
在一些实施方案中，所述酶为芳基醛氧化酶(EC1.2.3.9)并且所述底物包含芳族醛(例如，苯甲醛、香草醛)。
在一些实施方案中，所述酶为二氢乳清酸氧化酶(EC1.3.3.1)并且所述底物包含二氢乳清酸。
在一些实施方案中，所述酶为吡咯喹啉-醌合成酶(EC1.3.3.11)并且所述底物包含6-(2-氨基-2-羧乙基)-7,8-二氧代-1,2,3,4,7,8-六氢喹啉-2,4-二羧酸盐。
在一些实施方案中，所述酶为L-氨基酸氧化酶(EC1.4.3.2)并且所述底物包含L-氨基酸。
在一些实施方案中，所述酶为L-谷氨酸氧化酶(1.4.3.11)并且所述底物包含L-谷氨酸。
在一些实施方案中，所述酶为多胺氧化酶(1.5.3.11)并且所述底物包含N1-乙酰精胺。
在一些实施方案中，所述酶为NAD(P)H氧化酶(1.6.3.1)并且所述底物包含NADH和/或NADPH。
在一些实施方案中，所述酶为尿酸氧化酶(EC1.7.3.3)并且所述底物包含尿酸盐。
在一些实施方案中，所述酶为羟胺氧化酶(EC1.7.3.4)并且所述底物包含羟胺。
在一些实施方案中，所述酶为硫醇氧化酶(EC1.8.3.2)并且所述底物包含硫醇基。
在一些实施方案中，所述酶为谷胱甘肽氧化酶(EC1.8.3.3)并且所述底物包含谷胱甘肽和/或半胱氨酸。
在一些实施方案中，所述酶为细胞色素c氧化酶(EC1.9.3.1)并且所述底物包含亚铁细胞色素c。
在一些实施方案中，所述酶为黄嘌呤氧化酶(EC1.17.3.2)并且所述底物包含黄嘌呤和/或次黄嘌呤。
本文所述的过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)例如，可从商业供应商获得，通过从天然来源提取，和/或通过重组表达获得。表达蛋白质的一般程序在下文有详细描述，并且可用于表达本文所述的过氧化氢生成酶。
过氧化氢生成组合物：
如本文所述的过氧化氢生成组合物在每当过氧化氢生成酶及其底物在氧气(或空气)和/或水的存在下相互接触时生成过氧化氢。
应理解根据涉及过氧化氢生成组合物(例如，如这个部分中所述)的任一实施方案的此类组合物可利用根据本文所述涉及过氧化氢生成系统的任一实施方案的此类系统。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，在原位，即，在受试者的敷用部位(例如，皮肤、毛发和/或指甲)，通过使所述组合物的不同组分相互接触而制备本文所述的任何组合物。在一些实施方案中，过氧化氢生成只有在使过氧化氢生成酶与其底物在原位接触时才开始。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，在受试者的敷用部位(例如，皮肤、毛发和/或指甲)，通过使敷用部位接触包含所述酶的组合物的一部分，之后使敷用部位接触包含所述酶底物的组合物的一部分，或反之亦然，使敷用部位接触包含所述酶底物的组合物的一部分，之后使敷用部位接触包含所述酶的所述组合物的一部分而制备所述组合物。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，在接触受试者的敷用部位(例如，皮肤、毛发和/或指甲)前不久，通过使包含所述酶底物的组合物的一部分接触包含所述酶底物的组合物的一部分，之后使所得组合物接触受试者的敷用部位(例如，皮肤、毛发和/或指甲)制备所述组合物。
如下文进一步详细描述，所述组合物可由包装在试剂盒中的组分制备。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物包装在容器中，并且在包装后可很好地使用。
在任何这些实施方案的一些中，组合物包含与其底物接触的过氧化氢生成酶，但是由于容器中缺乏氧气而抑制所述组合物中的酶生成过氧化氢。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述容器为气密性，以便限制可以被酶用于生成过氧化氢的氧气的量。
在本文中，术语“气密性”是指包装和/或容器以使得没有允许气体如氧气进入或逸出的开口的方式密封，并且其中包装和/或容器由基本上不透此类气体的材料形成。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，在密封之前，例如通过使包装和/或容器减压和/或通过用不含氧气的气体(例如，氮气)吹洗包装和/或容器从包装和/或容器中抽出空气。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述气密性容器配置用于分配所述组合物(例如，分配一次以上)，无空气进入所述容器，以便避免在分配一些组合物后在容器中生成过氧化氢。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述容器的体积在分配后减小，使得即使在所述容器中组合物的体积在分配后减小时，所述容器也具有很小空间或没有空间供空气进入。此类容器的实例包括，例如在受到压力时分配组合物的软管(例如，类似于牙膏皮)和包含在分配组合物时移动的活塞的容器。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述容器的开口(例如，喷嘴)包含阀，其配置为仅在组合物通过开口脱离容器时打开，此时分配的组合物阻止空气通过开口进入。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，组合物包含与其底物接触的过氧化氢生成酶，但是由于容器中缺乏水或湿度而抑制所述组合物中的酶生成过氧化氢。在非湿润环境中包装的方式在本领域公知。
在将所述组合物包装在容器中的实施方案中，如下文进一步详细描述，可鉴定所述组合物以用于需要过氧化氢的任何美容应用中。
可选择过氧化氢生成酶及其底物的浓度以便产生适合的过氧化氢生成率。技术人员可根据所需过氧化氢的浓度(例如，稳态浓度)(这将取决于所述组合物的预期用途)和消耗过氧化氢的速率(这将取决于，例如与过氧化氢反应的化合物(例如，如本文所述的试剂)的浓度和反应性)而确定适合的过氧化氢率。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度在0.125至1250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度为约12.5单位/克。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度在1.25至1250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在4至1250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在12.5至1250单位/克的范围内。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度在0.125至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.125至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.125至12.5单位/克的范围内。
如本文和本领域中所用，酶的“单位”是指在25℃温度下且在产生最高转化率的底物浓度下，每分钟催化1微摩尔底物(例如，本文所述的底物)转化的酶的量。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.0175微摩尔/克至175微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.175至17.5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.5至6微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1至3.5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度为约1.75微摩尔/克。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.175微摩尔/克至175微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.5至175微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1.75至175微摩尔/克的范围内。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.0175微摩尔/克至17.5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.0175至6微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.0175至1.75微摩尔/克的范围内。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.0175微摩尔/克至175微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.175微摩尔/克至175微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.0175微摩尔/克至17.5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.175至17.5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.5至175微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.0175至6微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.5至6微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在1.75至175微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.0175至1.75微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
在过氧化氢生成组合物的上下文中描述的任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度0.125至1250单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在1至3.5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。
值得注意的是，对于与本文所述组合物有关的任一实施方案而言，可以利用任一种过氧化氢生成酶，包括呈任何组合的本文所述与之相关的任何实施方案(除非另有说明)。
在本文所述任何实施方案和任何方面的一些实施方案中，所述组合物是用于自身获得作为活性剂的过氧化氢。过氧化氢可例如，用于通过与局部身体部位的直接反应(例如，漂白)提亮受试者的局部身体部位(例如，受试者的皮肤、毛发和/或指甲区域)，用于表现出抗菌活性，或用于表现出除臭活性(例如，去除臭鼬味)。
在本文所述任何实施方案和任何方面的一些实施方案中，所述组合物还包含在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的至少一种试剂。在一些实施方案中，所述组合物是用于通过在所述试剂的存在下生成过氧化氢而获得此类试剂的活性。
在本文中，“在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的试剂”涵盖在过氧化氢的存在下活化的试剂。用“活化”意指所述试剂在过氧化氢的存在下经化学改性(例如，氧化)并且其氧化形式表现出所需的美容或药物活性；或所述试剂是需要过氧化氢才能表现出其活性(例如，需要过氧化氢作为底物或辅活化剂)的酶。
在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的试剂的实例包括，例如过氧化物酶和氧化性染剂前体。
氧化性染剂前体是反应形成在氧化后，例如用于染发的着色剂(例如，持久型染剂)的化合物。过氧化氢常用于氧化此类染剂前体，并且许多适合的氧化性染剂前体及其准确用途将为技术人员所知。在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物包含至少一种用于染发的氧化性染剂前体。
过氧化物酶是催化在过氧化氢的存在下形成反应性化合物，例如活性氧(ROS)的酶。从而过氧化物酶通过将过氧化氢转化为更具反应性的化合物而增强其反应性。这种组合物可例如，用于通过反应性化合物与身体部位的反应而提亮局部身体部位，用于表现出抗菌活性，或用于表现出更强的除臭活性(例如，去除臭鼬味)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，过氧化物酶将硫氰酸盐氧化为次硫氰酸盐和/或将至少一种卤化物(例如，氯化物、溴化物和/或碘化物)氧化为次卤酸盐(例如，次氯酸盐、次溴酸盐和/或次碘酸盐)。此类过氧化物酶的实例包括但不限于髓过氧化物酶和嗜酸性粒细胞过氧化物酶(其各自可氧化，例如硫氰酸盐、氯化物、溴化物和碘化物)、乳过氧化物酶(其可氧化，例如硫氰酸盐、溴化物和碘化物)、卵过氧化物酶和钒溴过氧化物酶(其各自可氧化，例如溴化物和碘化物)、骨螺溴过氧化物酶(其可氧化，例如溴化物)、辣根过氧化物酶(其可氧化，例如硫氰酸盐和碘化物)和甲状腺过氧化物酶(其可氧化，例如碘化物)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物还包含在过氧化氢和过氧化物酶的存在下氧化的底物(例如，硫氰酸盐、氯化物、溴化物、碘化物和/或如本文所述的氧化介质)。
在本文中，短语“氧化介质”是指例如通过提高过氧化物酶的氧化点位和/或稳定性，和/或通过对过氧化物酶起辅因子的作用，和/或通过起形成反应性中间产物(例如，自由基)的过氧化物酶底物的作用促进受过氧化物酶催化的氧化还原反应的分子。氧化介质包括能够稳定在受过氧化物酶催化的反应期间转移的电子(例如，通过离域作用)的化合物(例如，芳香族化合物)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，过氧化物酶在过氧化氢的存在下氧化在局部身体部位中或上存在的底物(例如，硫氰酸盐、氯化物、溴化物、碘化物)。
在本发明这个方面的任何实施方案的上下文中也可利用过氧化物酶的其它美容或药物活性。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，过氧化物酶能够在过氧化氢的存在下降解受试者体内(例如，皮肤和/或毛发中)的黑色素。在一些实施方案中，氧化介质的存在对于过氧化物酶在过氧化氢的存在下降解黑色素而言是必需的。黑色素的降解对提亮皮肤和/或毛发有用。木质素过氧化物酶是能够降解黑色素的示例性过氧化物酶。
不受任何特定理论约束，据信一些过氧化物酶(例如，木质素过氧化物酶)降解黑色素是通过使氧化介质(其用作底物)氧化以便形成自由基，然后自由基反应以便降解黑色素。
在本文所述任何实施方案和任何方面的一些实施方案中，所述组合物为染发剂组合物。在本文中，短语“染发剂组合物”是指用于染发(例如，持久型染色)的任何组合物，包括包含染发剂和/或其前体的组合物和不包含染发剂或其前体，但旨在与染发剂和/或其前体(例如，在毛发上)接触的组合物。
在本文所述任何实施方案和任何方面的一些实施方案中，所述组合物为除臭组合物，例如，用于去除臭鼬味(例如，从皮肤、毛发和/或指甲上)。在一些实施方案中，除臭组合物还包含洗涤剂(例如，十二烷基硫酸钠)和/或碱剂(例如，碳酸氢钠)。
在本文所述任何实施方案和任何方面的一些实施方案中，所述组合物为抗菌组合物。在本文中，短语“抗菌组合物”是指用于杀灭或以其它方式抑制微观动物、植物、真菌、细菌、古细菌和/或病毒的任何组合物。
在本文所述任何实施方案和任何方面的一些实施方案中，所述组合物为漂白组合物。在本文中，短语“漂白组合物”是指用于去除至少一部分颜色的任何组合物，并且包括，例如，用于提亮皮肤和/或部分皮肤的组合物、毛发漂白组合物和用于从指甲上去除污斑的组合物。
如本文所例证，木质素过氧化物酶能够降解黑色素，从而提亮皮肤和/或毛发。
木质素过氧化物酶是在过氧化氢的存在下表现出美容活性的示例性试剂。
在一些实施方案中，木质素过氧化物酶与本文对组合物和/或过氧化氢生成酶及其任何组合描述的任一实施方案组合使用。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，待提亮的皮肤包含面部皮肤(例如，前额和/或脸颊)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，待提亮的皮肤包含暴露于阳光的皮肤区域(例如，晒黑区域)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，提亮皮肤包括提亮整个皮肤肤色。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，待提亮的皮肤包含皮肤相对暗的部分，例如含不均匀肤色、一个或多个暗斑、一个或多个雀斑、黑斑病、皮肤色素沉着过多、皮肤色素减退、一个或多个老年斑、一个或多个痘印和/或疤痕的皮肤。
如本文所述，可通过选择过氧化氢生成酶及其底物和与过氧化氢反应的化合物(若本文有任何描述)的适合浓度确定所需的过氧化氢浓度。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，用于自身获得过氧化氢的组合物(例如，漂白组合物)选择成分的浓度以便产生相对高的过氧化氢浓度，例如，从0.5至12重量％。在一些实施方案中，过氧化氢浓度不超过6重量％。在一些实施方案中，过氧化氢浓度不超过3重量％。例如，通过将与过氧化氢反应的化合物的存在减到最少和/或通过选择较高浓度的如本文所述酶系统的组分可获得相对高的过氧化氢浓度。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，包含在过氧化氢的存在下表现出活性的试剂(例如，如本文所述)的组合物选择成分的浓度以便产生适于获得所述试剂的活性的过氧化氢浓度。在一些实施方案中，过氧化氢浓度相对低，例如不超过0.5重量％。在一些实施方案中，过氧化氢浓度不超过0.1重量％。在一些实施方案中，过氧化氢浓度不超过0.02重量％。应意识到所述试剂可通过与过氧化氢反应帮助维持相对低的过氧化氢浓度。所述试剂可持续地与生成的过氧化物反应，以便持续维持低过氧化氢浓度。
低过氧化氢浓度可特别有利，例如，在包含可能对高过氧化物浓度敏感(例如，受不利影响)和/或与过氧化氢反应高度有效的试剂(例如，蛋白质如过氧化物酶)的组合物中。可受高过氧化氢浓度不利影响的此类试剂包括例如，因例如在高浓度的过氧化氢存在下经历“自我毁灭”而出名的某些过氧化物酶(例如，木质素过氧化物酶)。
用于获得过氧化氢生成组合物的试剂盒：
应理解根据涉及过氧化氢生成组合物的任一实施方案的此类组合物可使用根据本文所述涉及试剂盒的任一实施方案的此类试剂盒获得(例如，如这个部分中所述)。技术人员将能够根据本文提供的指导选择如本文所述的适合试剂盒以便获得本文所述的任何所需组合物。
对于描述试剂盒的任一实施方案而言，可以利用过氧化氢生成酶和/或组合物中的任一种，包括其各自实施方案的任一个及其组合。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，可将如本文所述的任何组合物视为两(多)部分组合物，其中所述组合物的一个部分包含如本文所述的过氧化氢生成酶而所述组合物的另一个部分包含所述酶的底物。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，两部分组合物包装在试剂盒中并且经鉴定用于利用过氧化氢本身，或与本文所述的另一试剂组合的任何美容或药物应用中。
根据本发明的一些实施方案的一方面，提供了一种用于形成和/或向受试者的局部身体部位敷用(局部)如本文所述的美容或药物组合物的试剂盒，其中所述美容或药物组合物包含过氧化氢(例如，根据本文所述的方法)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物包装在试剂盒中，使其所有组分一起包装在容器中，如本文所述，处于抑制过氧化氢形成的条件下。在这些实施方案中的一些中，一旦所述组合物从容器中分配并且敷用在身体部位上，其对空气和/或湿度的暴露就促进过氧化氢生成酶及其底物之间的反应并且生成过氧化氢。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，包含过氧化氢生成酶的一部分组合物和包含底物的一部分组合物单独包装在试剂盒中，使得一旦这两部分的组合物混合就形成所述组合物。
用“单独包装”意指在试剂盒中时所述部分的组合物(或如本文所述的第一和第二组合物)之间没有直接接触。
例如，每个部分的组合物(例如，如本文所述的第一和第二组合物)单独包装在试剂盒中的密封容器内。所述容器可由(例如)塑料、木材、尼龙、玻璃、织物、金属、皮革和/或金属箔制成。
所述容器中的一个或多个可包括用于直接向局部身体部位或向接受器分配其内容物以与单独包装在试剂盒中的其它部分的组合物混合的装置。可选地，所述试剂盒还包含用于分配所述容器中的一个或多个的内容物的装置，和/或用于混合容器的内容物的装置和用于将获得的混合物分配在局部身体部位上的装置。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒包含含过氧化氢生成酶(例如，如本文所述)的第一组合物和包含过氧化氢生成酶的底物(例如，如本文所述)的第二组合物。在一些实施方案中，所述试剂盒的第一和第二组合物单独包装在试剂盒中，可组合所述试剂盒的第一组合物和第二组合物以便制备其中所述酶接触所述底物，从而在所述组合物中生成过氧化氢的美容或药物组合物(例如，本文所述的组合物)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒还包含在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的至少一种试剂(例如，如本文所述)。在试剂盒内单独包装在试剂盒中的第一组合物、第二组合物和/或第三组合物中可包括所述试剂。可组合所述试剂盒的第一组合物和第二组合物及任选第三组合物以便制备包含所述试剂(例如，如本文所述)的美容或药物组合物。
可在向局部身体部位敷用之前即刻(例如，在敷用之前1分钟至10分钟)，或在向局部身体部位敷用期间实行组合所述试剂盒的第一和第二组合物。
将组合物组合的时间间隔减到最小可利于避免在组合物未与局部身体部位接触时，在与过氧化氢反应的试剂，如过氧化物酶或氧化性染剂前体(例如，如本文所述)的存在下生成过氧化氢的情况，因为这种情况可导致过氧化氢的非生产性消耗(例如，浪费)。
例如，通过向局部身体部位联合施用所述试剂盒的第一和第二组合物可实行在敷用期间组合所述试剂盒的第一和第二组合物。
用“联合施用”意指第一和第二组合物同时(相伴地)向身体部位局部施用或，所述试剂盒的第一和第二组合物按任何顺序依次施用，借此第一组合物施用和第二组合物施用之间的时间间隔范围可为0.1分钟至5分钟。在一些实施方案中，时间间隔不超过2分钟。
如果所述试剂盒中包括第三组合物，则可在向身体部分敷用之前将其与第一和第二组合物组合，或与第一和第二组合物联合施用至身体部位。
第三组合物可与第一和/或第二组合物相伴地，在第一和/或第二组合物施用之前或之后联合施用，施用的时间间隔如上文所述。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒还包含如何使用其中的组合物，例如敷用组合物的量，敷用不同组合物的顺序，敷用时间和/或频率，和/或治疗持续时间(例如，如本文所述)的书面说明。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒还包含用于在与本文所述的组合物接触之前清洁局部身体部位的洗涤组合物，例如洁面乳。
根据示例性实施方案，洁面乳包含如表1中所呈现的成分：
表1：根据示例性实施方案的洁面乳
成分 重量百分比范围
水 25–50％
丙二醇 10–25％
甘油 10–25％
硬脂酸 10–25％
肉豆蔻酸 5–10％
氢氧化钾 5–10％
月桂酸 1–5％
癸基葡萄糖苷 1–5％
乙二醇二硬脂酸酯 1–5％
甘油硬脂酸酯 1–5％
PEG-100硬脂酸酯 1–5％
合成蜂蜡 1–5％
椰油酰甘氨酸钾 0-0.1％
丁羟甲苯(BHT) 0-0.1％
木质素过氧化物酶 0-0.1％
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒包括适当的使用说明和如本文所述，表明经监管机构批准用于指定用途的标签。
过氧化氢生成组合物的美容应用：
如本文所例证，通过提供与其底物接触的过氧化氢生成酶，本文所述的组合物在向表面施用过氧化氢上有效。
根据本发明实施方案的一方面，提供了一种向受试者的局部身体部位(例如，向受试者的皮肤、毛发和/或指甲)局部施用过氧化氢的方法。根据这些实施方案中的一些的方法通过使受试者的局部身体部分或其区域接触包含过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物的组合物(例如，本文所述的组合物)而实行。在一些实施方案中，所述组合物由如本文所述包装在试剂盒中的过氧化氢生成酶及其底物形成。
应理解，根据涉及这种方法(例如，如这个部分中所述)的任一实施方案局部地施用过氧化氢的方法可利用根据本文所述涉及此类系统和/或试剂盒的任一实施方案的过氧化氢生成系统和/或试剂盒。
如本文中所用术语“局部”和“局部地”是指如本文所述的局部身体部位，包括例如，指通过向局部身体部位敷用而施用组合物及以这种方式施用的组合物。
在本文中，短语“局部身体部位”是指身体任何部分的皮肤表面(包括皮肤表面的任何特定区域)和/或毛发(包括整根毛发和/或毛发的任何特定区域)，和/或指甲表面(包括所有手指甲和/或脚指甲，和/或任何单独的指甲和/或其区域)。所述皮肤可为身体的任何部分，例如面部皮肤、颈部皮肤、手臂皮肤、手上皮肤、躯干皮肤和/或腿部皮肤。所述毛发可为，例如，头发、面部毛发和/或阴毛。如本文其它地方所进一步详细描述，这个短语还涵盖皮肤表面的一部分(例如，面部皮肤的一部分、手臂或腿部皮肤的一部分)或毛发的一部分(例如，面部毛发、头发或阴毛的一部分)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，局部身体部位的皮肤不包括粘膜如口腔、嘴唇、眼睑、耳朵、生殖器部位和肛门的粘膜。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过在使局部身体部位或其区域接触在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的试剂之后，使局部身体部位或其区域接触过氧化氢生成酶和/或其底物而形成所述组合物。按这种顺序，将仅在在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的试剂的存在下生成过氧化氢，这样可允许更有效地利用过氧化氢。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过在使局部身体部位接触底物之前，使局部身体部位接触过氧化氢生成酶而形成所述组合物。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过在使局部身体部位接触底物之后，使局部身体部位接触过氧化氢生成酶而形成所述组合物。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过在使局部身体部位接触底物时相伴地使局部身体部位接触过氧化氢生成酶而形成所述组合物。
可在使局部区域接触任何其它组分之前、之后或相伴地使在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的试剂与局部身体部位(或其区域)接触，例如通过联合施用(如本文所定义)所述试剂与过氧化氢生成酶和/或其底物。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法用于染发，并且所述方法还包括使毛发接触如本文所述，用于染发的至少一种氧化性染剂前体。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法还包括使局部身体部位接触过氧化物酶(例如，如本文所述)。这种方法可用于，例如提亮局部身体部位，表现出抗菌活性，或表现出更强的除臭活性(例如，如本文所述)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法还包括使局部身体部位接触过氧化物酶的底物和/或氧化介质(例如，如本文所述)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法用于去除臭鼬味(例如，从局部身体部位)。在一些实施方案中，所述方法还包括使局部身体部位接触洗涤剂(例如，十二烷基硫酸钠)和/或碱剂(例如，碳酸氢钠)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法用于(例如)通过形成抗菌组合物(例如，如本文所述)获得抗菌活性。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法用于(例如)通过形成漂白组合物(例如，如本文所述)漂白局部身体部位或其区域。所述方法可包括，例如提亮皮肤和/或部分皮肤、漂白毛发和/或从指甲上去除污斑。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法用于提亮面部皮肤(例如，前额和/或面颊)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法用于提亮暴露于阳光的皮肤区域(例如，晒黑区域)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法用于提亮整个皮肤肤色。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述方法用于提亮皮肤相对暗的部分，例如含不均匀肤色、一个或多个暗斑、一个或多个雀斑、黑斑病、皮肤色素沉着过多、皮肤色素减退、一个或多个老年斑、一个或多个痘印和/或疤痕的皮肤。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，重复地、任选地甚至无限期地实行所述方法，以便应对重复的颜色形成，如皮肤中新形成的黑色素、新生长的黑色毛发、指甲中的慢性污点形成，等等。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少5次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少10次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少20次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少50次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少100次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少200次而实行所述方法。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过每天接触局部区域一次或两次而实行所述方法。在示例性实施方案中，每天实行接触两次。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，实行所述方法至少一周。在一些实施方案中，实行所述方法至少两周。在一些实施方案中，实行所述方法至少三周。在一些实施方案中，实行所述方法至少四周。在一些实施方案中，实行所述方法至少六周。在一些实施方案中，实行所述方法至少八周。在一些实施方案中，实行所述方法至少三个月。在一些实施方案中，实行所述方法至少四个月。在一些实施方案中，实行所述方法至少六个月。在一些实施方案中，实行所述方法至少一年。
剂量和疗程将取决于治疗的类型和所治疾患的严重程度，疗程持续一天至几周或更长，或直至达到治愈或实现所治病状的减轻。
当然，要施用的组合物的量将取决于所治受试者、所治病状的程度、施用方式、主治医师或美容师或消费者的判断、组合物的预期效果等。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，在接触本文所述的组合物之前清洁(例如，用如本文所述的洗剂)局部身体部位。
在所述方法用于(例如)漂白毛发或染发的实施方案，可实行所述方法一次，以实现预期效果并且一旦预期效果降低或减弱就可重复。
在所述方法用于(例如)治疗感染的实施方案中，实行所述治疗一次，直至感染消除，并且实行所述施用次数和治疗持续时间直至达到治愈。
过氧化氢生成组合物、用于提亮皮肤和/或毛发的方法和试剂盒：
本文所述组合物、方法和试剂盒的示例性实施方案是用于提亮局部身体部位如皮肤和/或毛发的组合物，其中如本文所述的过氧化氢生成组合物与木质素过氧化物酶组合使用。
应理解，如本文所述(例如，在这个部分中)，根据涉及此类组合物、方法和/或试剂盒的任一实施方案的组合物、方法和/或试剂盒均可用于提亮皮肤和/或毛发。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，提供了一种用于提亮受试者(例如，如本文所述)的局部身体部位如皮肤和/或毛发的美容组合物，所述组合物包含木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶(例如，如本文所述)和过氧化氢生成酶的底物(例如，如本文所述)。
根据本文所述实施方案的另一方面，提供了一种提亮受试者(例如，如本文所述)的局部身体部位如皮肤和/或毛发的美容方法，所述方法包括使受试者的局部区域接触包含木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物的组合物(例如，如本文所述的含木质素过氧化物酶的组合物)。在一些实施方案中，所述组合物由包装在如本文所述的试剂盒中的木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶及其底物形成。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过在使局部区域接触木质素过氧化物酶之后，使局部区域接触过氧化氢生成酶和/或其底物而形成所述组合物。按这种顺序，将仅在木质素过氧化物酶的存在下生成过氧化氢，这样可允许更有效地利用过氧化氢。
可提供更高浓度的如本文所述，包含木质素过氧化物酶的组合物并且由医师开处方作为药物或美容组合物以治疗皮肤色素沉着病症如黑斑病、黄褐斑、褐黄病和斑痣，和/或提亮整个皮肤肤色。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少5次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少10次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少20次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少50次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少100次而实行所述方法。在一些实施方案中，通过使局部区域与所述组合物接触至少100次而实行所述方法。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，通过每天接触局部区域一次或两次而实行所述方法。在示例性实施方案中，每天实行接触两次。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，实行所述方法至少一周。在一些实施方案中，实行所述方法至少两周。在一些实施方案中，实行所述方法至少三周。在一些实施方案中，实行所述方法至少四周。在一些实施方案中，实行所述方法至少六周。在一些实施方案中，实行所述方法至少八周。在一些实施方案中，实行所述方法至少三个月。在一些实施方案中，实行所述方法至少四个月。在一些实施方案中，实行所述方法至少六个月。在一些实施方案中，实行所述方法至少一年。
剂量和疗程将取决于待治区域中颜色(例如，色素沉着)的程度，例如皮肤色素沉着病症(例如，黄褐斑、黑斑病、褐黄病和斑痣)中皮肤色素沉着的程度、皮肤颜色的色调、皮肤肤色和/或皮肤的反应性，疗程持续几天至几周或更长，或直至达到治愈或实现皮肤病的减轻。
当然，要施用的组合物的量将取决于所治受试者、所治病状的程度、施用方式、主治医师或美容师或消费者的判断等。
木质素过氧化物酶：
应理解，根据本文所述(例如，如这个部分所述)涉及木质素过氧化物酶的任一实施方案的木质素过氧化物酶可与根据本文所述涉及过氧化氢生成酶系统的任一实施方案的这种系统组合使用。
如本文中所用，短语“木质素过氧化物酶”是指在木质素降解中其主要作用的酶。木质素过氧化物酶能够催化具有高氧化还原电位的底物的氧化。这种独特的能力与由高氧化还原电位指示的低电子密度的血红素活性部位一致[Cai和Tien，JBiotechnol1993,30:79-90]。
木质素过氧化物酶的实例被归类为EC1.11.1.14。
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)涉及担子菌类(例如，黄孢原毛平革菌)中木质素的降解，并且本文也定义为降解木质素的过氧化物酶。
木质素过氧化物酶在各种生物体内生成并且木质素过氧化物酶的编码序列可经由超文本传输协议：//WorldWideWeb(dot)ncbi(dot)nlm(dot)nih(dot)gov/从基因库得到。例如，来自于黄孢原毛平革菌(SEQIDNO:1)；结核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)H37Rv[基因库登录号NP_216416.1(SEQIDNO:2(多肽)和SEQIDNO:3(多核苷酸)]；牛分支杆菌(Mycobacteriumbovis)AF2122/97[基因库登录号NP_855586.1(SEQIDNO:4(多肽)和SEQIDNO:5(多核苷酸)]；牛分支杆菌BCG巴斯德株(str.Pasteur)1173P2[基因库登录号YP_978029.1(SEQIDNO:6(多肽)和SEQIDNO:7(多核苷酸)]；牛分支杆菌BCG东京株(str.Tokyo)172[基因库登录号YP_002644977.1(SEQIDNO:8(多肽)和SEQIDNO:9(多核苷酸)]；结核分支杆菌H37Ra[基因库登录号YP_001283231.1(SEQIDNO:10(多肽)和SEQIDNO:11(多核苷酸)]；溃疡分支杆菌(Mycobacteriumulcerans)Agy99[基因库登录号YP_908214.1(SEQIDNO:12(多肽)和SEQIDNO:13(多核苷酸)]；海分支杆菌M(MycobacteriummarinumM)[基因库登录号YP_001848608.1(SEQIDNO:14(多肽)和SEQIDNO:15(多核苷酸)]；结核分支杆菌KZN1435[基因库登录号YP_003032055.1(SEQIDNO:16(多肽)和SEQIDNO:17(多核苷酸)]；结核分支杆菌F11[基因库登录号YP_001287866.1(SEQIDNO:18(多肽)和SEQIDNO:19(多核苷酸)]；黄孢原毛平革菌木质酶(CKG4)[基因库登录号M18743.1(SEQIDNO:20(多肽)和SEQIDNO:21(多核苷酸)]；黄孢原毛平革菌(无性型：银星侧孢霉(Sporotrichumpruinosum))[基因库登录号M80213.1(SEQIDNO:22(多肽)和SEQIDNO:23(多核苷酸)]；污原毛平革菌(Phanerochaetesordida)ylpB[基因库登录号AB455007.1(SEQIDNO:24(多肽)和SEQIDNO:25(多核苷酸)]；黄孢原毛平革菌(无性型：银星侧孢霉)[基因库登录号M77508.1(SEQIDNO:26(多肽)和SEQIDNO:27(多核苷酸)]的木质素过氧化物酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，木质素过氧化物酶为白腐菌的木质素过氧化物酶，例如提取自白腐菌的木质素过氧化物酶或源自白腐菌木质素过氧化物酶的重组蛋白。
在本文和本领域中，短语“白腐菌”是指能够分解木材中的木质素的真菌。因为这个过程常常留下木材的浅色纤维素，所以此类真菌通常使得受攻击的木材呈现较浅的颜色。
生成适合木质素过氧化物酶的白腐菌的实例包括但不限于原毛平革菌(Phanerochaete)(例如，黄孢原毛平革菌、污原毛平革菌)、栓菌(Trametes)(例如，变色栓菌(Trametesversicolor)))和灵芝(Ganoderma)。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案，根据本发明的一些实施方案使用的木质素过氧化物酶为木质素过氧化物酶H1同种型，其在体外和体内均表现出黑色素氧化活性[WO2004/052275]。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度为约12.5单位/克。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在6至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1.25至125单位/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1.25至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1.25至12.5单位/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的浓度在0.125至1250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的浓度在1.25至1250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的浓度在0.125至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的浓度在4至1250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的浓度在0.125至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内，并且所述组合物中过氧化氢生成酶的浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约12.5单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
根据本文所述任何实施方案中的一些实施方案，木质素过氧化物酶与氧化介质组合使用。在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，包含木质素过氧化物酶的组合物还包含氧化介质(如本文所定义)。
木质素过氧化物酶的氧化介质包含芳香族分子，如甲氧基化芳香族化合物。
适合氧化介质的实例包括但不限于酚类化合物如藜芦醇(3,4-二甲氧基苄醇)、藜芦醚(1,2-二甲氧基苯)和1,4-二甲氧基苯。藜芦醇为示例性氧化介质。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度为约3微摩尔/克。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.3微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在3至300微摩尔/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.03至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.03至3微摩尔/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在4至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在4至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在6至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在6至20单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在12.5至125单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述组合物中氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内，并且所述组合物中木质素过氧化物酶的浓度在1.25至12.5单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.03至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至300微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.3至30微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在1至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约3微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。
几种方法可用于生成根据本发明的一些实施方案利用的木质素过氧化物酶。
例如，可由真菌黄孢原毛平革菌制备木质素过氧化物酶同工酶H1。可由以上真菌在搅拌釜反应器(STR)发酵罐中生长时，同时固定在聚氨酯泡沫或悬浮液中而产生高水平的木质素过氧化物酶的酶活性[Dosoretz等，ApplEnvironMicrobiol1993,59:1919-26]。
根据本发明的一些实施方案，发酵罐与冷却系统连接以维持37℃的培养温度并且以50-300rpm(转/分钟)，更优选地，100-200rpm，最优选地以160rpm的速度搅拌。为了增加木质素过氧化物酶活性的产率，以每分钟每升培养基0.1-1升空气的通气速率为发酵罐通气。根据目前优选的构造，以每分钟每升培养基0.2升空气的通气速率为发酵罐通气。
在无锰离子而含有作为碳源的甘油的培养条件下培养黄孢原毛平革菌。根据本发明的一些实施方案，提供浓度范围为3-20克/升的甘油。根据本发明的一些实施方案，提供浓度为6克/升的甘油。
从以上真菌纯化木质素过氧化物酶同工酶H1的过程中，通过在310nm下的吸光度由于藜芦醇氧化为藜芦醛而发生的变化进一步试验了纯化蛋白的酶活性。
因为木质素过氧化物酶同工酶H1可由同工酶H2翻译后去磷酸化而产生[Kuan和Tien，JBiolChem1989,264:20350-20355]，所以根据本发明的一些实施方案使用的木质素过氧化物酶可通过使木质素过氧化物酶同工酶H2去磷酸化而制备。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案，可使用设计为在宿主细胞中表达木质素过氧化物酶的编码序列的核酸构建体重组表达木质素过氧化物酶。在SEQIDNO:3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25和27中提供了此类核酸序列的非限制性实例。
本文详细描述了表达蛋白质如木质素过氧化物酶的一般程序。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案，如美国专利第5,200,338号中所公开，在修饰为表达木质素过氧化物酶的细菌细胞中表达木质素过氧化物酶。例如，可用包括处于强组成型启动子(例如，SP6)的调控下的木质素过氧化物酶编码序列(例如，编码具有SEQIDNO:1的多肽)的表达载体转化细菌细胞，如大肠杆菌(E.coli)。表达后，可溶解细菌细胞并且使用色谱技术收集木质素过氧化物酶(更多详情，参见Billman-Jacobe[CurrOpinBiotechnol1996,7:500-4]；Harris和Emtage[Microbiol.Sci.1986,3:28-31])。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案的木质素过氧化物酶可提取自哺乳动物细胞系如海拉细胞(HeLacell)。在这种情况下木质素过氧化物酶编码序列处于适合表达载体(例如，pCDNA3.1，InvitrogenLifeTechnologies,Frederick,MD,USA)中的强哺乳动物启动子(例如，CMV)下。用表达载体转染海拉细胞后，可通过常规纯化和色谱技术从细胞或培养基提取(例如，通过将木质素过氧化物酶序列修饰为包括分泌信号)木质素过氧化物酶表达产物(更多详情，参见Cunha和Aires-Barros[Mol.Biotechnol.2002,20:29-40])。
蛋白质表达：
在本发明的一些实施方案中使用(例如，用于表达本文所述的木质素过氧化物酶或过氧化氢生成酶)的核酸构建体(本文也称为“表达载体”)包括使这种载体适于在原核生物、真核生物或优选地在两者中(例如，穿梭载体)复制和整合的附加序列。另外，典型克隆载体也可含有转录和翻译起始序列、转录和翻译终止子和多腺苷酸化信号。举例而言，此类构建体通常将包括5'LTR、tRNA结合位点、包装信号、第二链DNA合成的起点和3'LTR或其一部分。
本发明一些实施方案的核酸构建体通常包括用于从肽所在的宿主细胞中分泌肽的信号序列。优选地，用于此目的的信号序列为哺乳动物信号序列或本发明一些实施方案的多肽变体的信号序列。
真核启动子通常含有两种类型的识别序列，TATA盒和上游启动子元件。认为位于转录起始位点上游25-30个碱基对处的TATA盒涉及指示RNA聚合酶开始RNA合成。其它上游启动子元件决定开始转录的速率。
增强自元件可刺激从连接的同源或异源启动子高达1,000倍的转录。增强子在处于转录起始位点下游或上游时有活性。源自病毒的许多增强子元件具有广泛的宿主范围并且在多种组织中有活性。例如，SV40早期基因增强子适合许多细胞类型。适合本发明的一些实施方案的其它增强子/启动子组合包括源自多瘤病毒、人或鼠巨细胞病毒(CMV)、来自于各种逆转录病毒如鼠白血病毒、鼠或劳氏肉瘤病毒(Roussarcomavirus)和HIV的长末端重复序列的增强子/启动子组合。参见，EnhancersandEukaryoticExpression,ColdSpringHarborPress,ColdSpringHarbor,N.Y.1983，其通过引用并入本文。
在表达载体的构建中，启动子优选地位于距异源转录起始位点与其在自然环境中距转录起始位点大致相同的距离处。然而，正如本领域中所知，可适应在这个距离上的一些变化，而不丧失启动子功能。
也可向表达载体添加聚腺苷酸化序列以便增加mRNA翻译(例如，木质素过氧化物酶mRNA翻译)的效率。对于精确有效的聚腺苷酸化而言需要两种不同的序列元件：位于聚腺苷酸化位点下游的富GU或U序列和位于上游11-30个核苷酸处的6个核苷酸的高度保守序列AAUAAA。适合本发明的一些实施方案的终止和聚腺苷酸化信号包括源自SV40的终止和聚腺苷酸化信号。
除已经描述的元件外，本发明一些实施方案的表达载体通常可含有旨在增加克隆核酸的表达水平或促进对携带重组DNA的细胞的识别的其它特化元件。例如，许多动物病毒含有促进病毒基因组在感受细胞类型中的额外染色体复制的DNA序列。只要质粒上携带的基因或宿主细胞的基因组提供了适当因子，带有这些病毒复制子的质粒就附加复制。
载体可能包括或可能不包括真核复制子。如果存在真核复制子，则可使用适当的可选标记在真核细胞中扩增载体。如果载体不包含真核复制子，则附加型扩增是不可能的。相反，重组DNA整合到工程化细胞的基因组中，其中启动子指示所需核酸的表达。
本发明的一些实施方案的表达载体还可包括允许，例如由单个mRNA如内部核糖体进入位点翻译几种蛋白质的附加多核苷酸序列和用于启动子-嵌合多肽的基因组整合的序列。
如上文所提及，多种原核或真核细胞可用作宿主表达系统以表达本发明的一些实施方案的多肽。这些包括但不限于微生物，如经含有编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌；经含有编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母；经重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒、CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染或经含有编码序列的重组质粒表达载体，如Ti质粒转化的植物细胞系统。哺乳动物表达系统也可用于表达本发明的一些实施方案的多肽。
哺乳动物表达载体的实例包括但不限于可从Invitrogen得到的pcDNA3、pcDNA3.1(+/-)、pGL3、pZeoSV2(+/-)、pSecTag2、pDisplay、pEF/myc/cyto、pCMV/myc/cyto、pCR3.1、pSinRep5、DH26S、DHBB、pNMT1、pNMT41、pNMT81，可从Promega得到的pCI，可从Strategene得到的pMbac、pPbac、pBK-RSV和pBK-CMV，可从Clontech得到的pTRES及其衍生物。
也可使用含有来自于真核病毒如逆转录病毒的调控元件的表达载体。SV40载体包括pSVT7和pMT2。源自牛乳头瘤病毒的载体包括pBV-1MTHA，并且源自爱泼斯坦-巴尔病毒(EpsteinBarvirus)的载体包括pHEBO和p2O5。其它示例性载体包括pMSG、pAV009/A+、pMTO10/A+、pMAMneo-5、杆状病毒pDSVE和允许在SV-40早期启动子、SV-40晚期启动子、金属硫蛋白启动子、鼠乳腺瘤病毒启动子、劳氏肉瘤病毒启动子、多角体蛋白启动子或经证实在真核细胞中表达有效的其它启动子的指示下表达蛋白质的任何其它载体。
各种方法可用于将本发明一些实施方案的表达载体引入干细胞中。在Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringsHarborLaboratory,NewYork(1989,1992)；在Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWileyandSons,Baltimore,Md.(1989)；Chang等，SomaticGeneTherapy,CRCPress,AnnArbor,Mich.(1995)；Vega等，GeneTargeting,CRCPress,AnnArborMich.(1995),Vectors:ASurveyofMolecularCloningVectorsandTheirUses,Butterworths,BostonMass.(1988)和Gilboa等，[Biotechniques4(6):504-512,1986]中大体描述了此类方法并且包括，例如稳定或瞬时转染、电穿孔和重组病毒载体感染。另外，正-负选择方法，参见美国专利第5,464,764和5,487,992号。
通过病毒感染引入核酸提供了优于其它方法如电穿孔的几个优点，因为由于病毒的感染特性可获得更高的转染效率。
除含有转录和翻译插入的编码序列的必需元件外，本发明的一些实施方案的表达构建体还包括经工程化以增强表达的肽的稳定性、生成、纯化、产率或毒性的序列。例如，可工程化包含本发明的一些实施方案的木质素过氧化物酶H1或H2蛋白和异源蛋白的融合蛋白或可裂解融合蛋白的表达。这种融合蛋白可设计为使得融合蛋白易于通过亲和色谱法；例如，通过固定在对异源蛋白有特异性的柱上而分离。在木质素过氧化物酶H1或H2蛋白和异源蛋白之间工程化裂解位点时，可通过用破坏裂解位点的适当的酶或试剂处理从色谱柱上释放木质素过氧化物酶蛋白[例如，参见Booth等(1988)Immunol.Lett.19:65-70；和Gardella等，(1990)J.Biol.Chem.265:15854-15859]。
如上文所提及，多种原核或真核细胞可用作宿主表达系统以表达本发明的一些实施方案的多肽。这些包括但不限于微生物，如经含有编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌；经含有编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母；经重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒、CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染或经含有编码序列的重组质粒表达载体，如Ti质粒转化的植物细胞系统。哺乳动物表达系统也可用于表达本发明的一些实施方案的多肽。
细菌构建体的实例包括pET系列的大肠杆菌表达载体[Studier等(1990)MethodsinEnzymol.185:60-89)。
在酵母中，如美国专利申请第5,932,447号中所公开，可使用许多含有组成型或诱导型启动子的载体。可选地，可使用促进外源DNA序列整合到酵母染色体中的载体。
在使用植物表达载体的情况下，编码序列的表达可受许多启动子驱动。例如，可使用病毒启动子如CaMV的35SRNA和19SRNA启动子[Brisson等(1984)Nature310:511-514]，或TMV的外壳蛋白启动子[Takamatsu等(1987)EMBOJ.6:307-311]。可选地，可使用植物启动子如RUBISCO的小亚基[Coruzzi等(1984)EMBOJ.3:1671-1680和Brogli等(1984)Science224:838-843]或热激启动子，例如大豆hsp17.5-E或hsp17.3-B[Gurley等(1986)Mol.Cell.Biol.6:559-565]。可使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电穿孔和技术人员公知的其它技术将这些构建体引入植物细胞中。参见，例如，Weissbach和Weissbach，1988,MethodsforPlantMolecularBiology,AcademicPress,NY，第八部分，第421-463页。
本发明的一些实施方案也可使用本领域公知且下文进一步描述的其它表达系统如昆虫和哺乳动物宿主细胞系统。
重组多肽的回收在培养适当时间后实行。短语“回收重组多肽”是指收集含所述多肽的所有发酵培养基并且不需要包含分离或纯化的附加步骤。尽管如上所述，但是可使用多种标准蛋白质纯化技术，例如但不限于亲和色谱法、离子交换色谱法、过滤、电泳、疏水相互作用色谱法、凝胶过滤色谱法、反相色谱法、伴刀豆球蛋白A色谱法、色谱聚焦和差示溶解法纯化本发明的一些实施方案的多肽。
含木质素过氧化物酶的试剂盒：
根据本发明的一些实施方案的另一方面，提供了一种用于提亮受试者的局部身体部位如皮肤和/或毛发(例如，根据本文所述的方法)的试剂盒。所述试剂盒包含木质素过氧化物酶(例如，如本文所述)、过氧化氢生成酶(例如，如本文所述)和过氧化氢生成酶的底物(例如，如本文所述)。木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶及其底物中的至少一种形成单独包装在所述试剂盒中的组合物的一部分。
应理解，本文所述(例如，在这个部分中)的含木质素过氧化物酶的试剂盒可含有根据本文所述涉及木质素过氧化物酶的任一实施方案的木质素过氧化物酶，并且可含有根据本文所述涉及过氧化氢生成系统和/或含有这种系统的试剂盒的任一实施方案的过氧化氢生成系统(例如，酶和/或底物)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，过氧化氢生成酶形成第一组合物的一部分而底物形成第二组合物的一部分，其中所述第一组合物和第二组合物单独包装在所述试剂盒中。即，所述酶及其底物处于所述试剂盒中的单独组合物中，并且所述酶及其底物在处于试剂盒中时它们之间没有接触。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，第二组合物还包含木质素过氧化物酶(例如，木质素过氧化物酶包装在与过氧化氢生成酶的底物相同的组合物中)。在此类实施方案中，第一组合物也称为“活化剂”，因其在与含木质素过氧化物酶的第二组合物接触时引起木质素过氧化物酶活化。
在示例性实施方案中，第一组合物还包含木质素过氧化物酶(例如，木质素过氧化物酶包装在与过氧化氢生成酶相同的组合物中)。在此类实施方案中，第一组合物也称为“酶”制剂(例如，“酶面霜”)，因其包含两种活性酶。第二组合物也称为“活化剂”，因其在与含木质素过氧化物酶的第一组合物接触时引起木质素过氧化物酶活化。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，木质素过氧化物酶形成所述试剂盒中第三组合物的一部分，其中所述第三组合物单独包装在所述试剂盒中。
在本文所述任何实施方案中，本文所述第一组合物、本文所述第二组合物及本文所述过氧化氢生成组合物的任何其它部分的每一种在本文中也可称为制剂，其包装在所述试剂盒中，由此混合这些制剂导致形成如本文所述的任何过氧化氢生成组合物。
可组合所述试剂盒的第一组合物和第二组合物及任选第三组合物以便制备包含木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶及其底物(例如，如本文所述)的美容组合物。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，过氧化氢生成酶及其底物一起(例如，作为单一组合物的一部分)包装在试剂盒内的气密性包装(例如，本文所述的气密性容器)中。木质素过氧化物酶可与过氧化氢生成酶及其底物包装在一起或单独包装。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度为约25单位/克。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在12至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在25至250单位/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在2.5至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在2.5至25单位/克的范围内。
根据本文所述任何实施方案中的一些实施方案，所述试剂盒还包含氧化介质(例如，如本文所述)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，氧化介质是试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物的一部分。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶和氧化介质均为第一组合物的一部分。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶和氧化介质均为第二组合物的一部分。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶和氧化介质均为第三组合物的一部分。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，氧化介质与试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物分开包装。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶是本文所述第一组合物或第三组合物的一部分，而氧化介质是第二组合物的一部分。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶是本文所述第二组合物或第三组合物的一部分而氧化介质是第一组合物的一部分。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度为约6微摩尔/克。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.6微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在2至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在6至600微摩尔/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.06至6微摩尔/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在12至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含氧化介质的组合物中氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内，并且试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至25单位/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.06至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至600微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在0.6至60微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在2至20微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度在4至10微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，氧化介质浓度为约6微摩尔/克。在一些实施方案中，氧化介质选自藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯。在一些实施方案中，氧化介质为藜芦醇。在一些实施方案中，氧化介质和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度在0.25至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度为约25单位/克。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在8至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在25至2500单位/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)的浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.25至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.25至25单位/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内，并且试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内，并且试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内，并且试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内，并且试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内，并且试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在8至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内，并且试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中包含木质素过氧化物酶的组合物中木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内，并且试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在2.5至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，木质素过氧化物酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶和木质素过氧化物酶为相同组合物所包含。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶为葡萄糖氧化酶。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.035微摩尔/克至350微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.35至35微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1至12微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在2至7微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度为约3.5微摩尔/克。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.35微摩尔/克至350微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在1至350微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在3.5至350微摩尔/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物(例如，葡萄糖)的浓度在0.035微摩尔/克至35微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.035至12微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述浓度在0.035至3.5微摩尔/克的范围内。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在0.035微摩尔/克至350微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在0.35微摩尔/克至350微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在0.035微摩尔/克至35微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在0.35微摩尔/克至35微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在1微摩尔/克至350微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在0.035微摩尔/克至12微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在1微摩尔/克至12微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在3.5微摩尔/克至350微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在0.035微摩尔/克至3.5微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，本文所述任何试剂盒中的组合物(例如，本文所述第一组合物)中过氧化氢生成酶的浓度在0.25至2500单位/克的范围内，并且所述试剂盒中的组合物(例如，本文所述第二组合物)中过氧化氢生成酶的底物的浓度在2微摩尔/克至7微摩尔/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在0.25至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至2500单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在2.5至250单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在8至80单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度在12至40单位/克的范围内。在一些实施方案中，所述酶浓度为约25单位/克。在一些实施方案中，所述酶为葡萄糖氧化酶并且所述底物为葡萄糖。在一些实施方案中，过氧化氢生成酶(例如，葡萄糖氧化酶)和底物(例如，葡萄糖)为试剂盒中单独的组合物所包含。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒的第一组合物包含浓度在2.5至250单位/克的范围内的葡萄糖氧化酶(例如，本文所述的葡萄糖氧化酶浓度)，并且所述试剂盒的第二组合物包含浓度在0.35微摩尔/克至35微摩尔/克的范围内的D-葡萄糖(例如，本文所述的葡萄糖浓度)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒的第一组合物包含浓度在2.5至250单位/克的范围内的葡萄糖氧化酶(例如，本文所述的葡萄糖氧化酶浓度)和浓度为2.5至250单位/克的木质素过氧化物酶(例如，本文所述的木质素过氧化物酶浓度)，并且所述试剂盒的第二组合物包含浓度在0.35微摩尔/克至35微摩尔/克的范围内的D-葡萄糖(例如，本文所述的葡萄糖浓度)。
除包含如本文所述的一种或多种活性剂(例如，在过氧化氢的存在下表现出活性的试剂、木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶、过氧化氢生成酶的底物和/或氧化介质)的组合物外，本文所述的试剂盒可包括附加组合物(例如，美容组合物)。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒还包含用于在与本文所述的组合物接触之前清洁局部身体部位的洗涤组合物(例如，如本文所述)，如洁面乳。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述试剂盒包括适当的使用说明和如本文所述，表明经监管机构批准用于指定用途的标签。
组合物的配方：
根据本文所述的本发明的任何实施方案和任何方面的一些实施方案，本文所述的活性成分(例如，在过氧化氢的存在下表现出活性的试剂、木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶、过氧化氢生成酶的底物和/或氧化介质)可用于包含活性成分本身或与另外的化学组分如生理上适合的载体和赋形剂组合的组合物中。组合物包括本文所述的美容或药物组合物(其表现出如本文所述的美容或药物活性)和试剂盒中可用于制备如本文所述的美容或药物组合物的组合物(例如，如本文所述的第一组合物、第二组合物和/或第三组合物)(虽然其自身可能无活性)。
包含载体和赋形剂的美容或药物组合物的用途是利于向生物体施用活性成分。在其中所述组合物所表现出的活性是如本文所定义的美容活性的实施方案中，本文也将所述组合物称为“美容组合物”。在其中所述组合物所表现出的活性是药物活性的实施方案中，本文也将所述组合物称为“药物组合物”。
在本文通篇，术语“药物”意指所述组合物或试剂盒是为了在如本文所述敷用在受试者的身体部位上时表现出治疗效果。
在下文中，短语“适合的载体”是指不会对生物体产生显著刺激并且不会消除活性成分的生物活性和性质的载体或稀释剂。在其中活性成分所表现出的活性为美容活性的实施方案中，本文也将这种载体称为“美容或药妆上可接受的载体”。在其中活性成分所表现出的活性为药物活性的实施方案中，本文也将这种载体称为“药学上可接受的载体”。
在本文中术语“赋形剂”是指添加到组合物中以进一步利于活性成分的施用的惰性物质。赋形剂的实例包括但不限于碳酸盐、磷酸钙、各种糖和各类淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
可通过本领域公知的工艺，例如借助于常规混合、溶解、粒化、制糖丸、淘洗、乳化、封装、包埋或冻干工艺生产本发明的组合物。
因此供根据本发明的一些实施方案使用的组合物可按常规方式使用一种或多种适合的载体，包括利于将活性成分加工成制剂的赋形剂和助剂配制。适当的配方取决于所选施用途径。
可选地，活性成分可呈粉末形式以在使用之前，用适合媒介物，例如无菌、无热源水基溶液复水。
根据本文所述任何实施方案和任何方面的一些实施方案的组合物可配制成美容行业所利用(例如，供局部使用)的多种形式中的任一种，如面膜、精华液、洗液、面霜、洗发剂、凝胶和/或调色剂。正如技术人员将显而易见的那样，制剂的适合性将取决于要与活性成分接触的表面的类型—因此，例如，洗发剂制剂适于接触毛发，面膜适于接触面部皮肤，等等。
制备具有如本文所述的性质的组合物的方法为本领域技术人员公知，并且在Remington'sPharmaceuticalSciences,1990(上文)；和PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems,，第6版，Williams&Wilkins(1995)中有详细描述。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案，将美容组合物配制成足够粘以留在治疗区上，不易蒸发，和/或不易通过用水冲洗而去除。
如本文中所用，术语“精华液”是指配制用于局部敷用的水溶液。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案，精华液为增稠美容水溶液。根据本发明的一些实施方案，精华液为透明至略微混浊的水溶液。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案，精华液配制为留在局部身体部位上并且不需要用水、肥皂和/或清洁剂去除。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案，在局部敷用精华液(例如，向皮肤)，精华液被迅速吸收，留下美容上优雅、如丝般光滑的感觉。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案，将精华液并入面膜(美容面膜)中。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，精华液包含如表2中呈现的成分：
表2：根据以下实施方案的精华液组成
成分 重量百分比范围
水 75–100％
活性成分 如本文所述
甘油 5–10％
聚丙烯酸酯-13 0.1–1％
二甲聚硅氧烷 0.1–1％
碳酸二辛酯 0.1–1％
鲸蜡醇 0.1–1％
硬脂醇 0.1–1％
苯氧乙醇 0.1–1％
马齿苋 0–1％
聚异丁烯 0.1–1％
丁二醇 0–1％
普鲁兰(Pullulan) 0–0.1％
聚山梨醇酯20 0–0.1％
PEG-4月桂酸酯 0–0.1％
PEG-4二月桂酸酯 0–0.1％
PEG-4 0–0.1％
丁基氨基甲酸碘代丙炔酯 0–0.1％
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，如本文所述的组合物(例如，精华液、洗液、面霜)包含皮肤病学可接受的润肤剂。此类组合物优选含有约2％至约50％的润肤剂。如本文中所用，“润肤剂”是指用于防止或缓解干燥，以及保护皮肤的材料。已知多种多样的适合润肤剂并且可用于本文中。参见，例如，Sagarin，Cosmetics,ScienceandTechnology，第2版，第1卷，第3243页(1972)，其含有许多适合作为润肤剂的材料的实例。优选的润肤剂为甘油。优选按从(或约)0.001至(或约)20％，更优选从(或约)0.01至(或约)10％，最优选从(或约)0.1至(或约)5％，例如3％的量使用甘油。
根据本发明的洗液和面霜通常包含溶液载体系统和一种或多种润肤剂。洗液通常包含约1％至约20％，优选约5％至约10％的润肤剂；约50％至约90％，优选约60％至约80％的水；和药学有效量的本文所述的试剂。面霜通常包含约5％至约50％，优选约10％至约20％的润肤剂；约45％至约85％，优选约50％至约75％的水；和有效量的本文所述的试剂。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，面霜或洗液包含如表3中呈现的成分：
表3：根据以下实施方案的面霜或洗液组成
表3(续)
在示例性实施方案中，面霜或洗液包含如表4中呈现的成分：
表4：根据示例性实施方案的面霜或洗液组成
表4(续)
如本文中所用术语“面膜”是指包含如本文所述的活性成分并且局部敷用以便保持活性成分与局部区域的接触，例如以便提亮局部区域的美容面膜。
在美容行业中已知各种类型的美容面膜。这些包括但不限于具有固体支撑体的面膜、冲洗面膜、撕拉面膜或在规定时间段后硬化或聚合的面膜。
如本文中所用短语“冲洗面膜”是指为了局部敷用较厚一层并保留一定时间段，通常从几分钟到几十分钟，并且为了在这个时间段结束时，用水冲洗掉或也可简单地擦掉而配制的美容组合物。
在国际专利申请公布WO2012/153336中描述了适合的面膜和用如本文所述的活性成分制备面膜的技术。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，至少部分地通过选择适合的载体确定所述组合物的形式。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述载体包含乳液。此类载体包括但不限于水包油、油包水、水包油包水和硅酮包水包油乳液、面霜、软膏、水溶液、洗液或气溶胶。正如技术人员将理解的那样，给定组分将根据所述组分在组合物中的水溶性/分散性主要分布到水或油/硅酮相中。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案的乳液通常含有有效量的本文公开的活性成分和油。活性成分(例如，在过氧化氢的存在下表现出活性的试剂、木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶、过氧化氢生成酶的底物和/或氧化介质)和油可源自动物、植物或石油并且可为天然或合成的(即，人造的)。优选的乳液还含有湿润剂，如甘油。按所述载体的重量计，乳液还将优选地含有约1％至约10％，更优选约2％至约5％的乳化剂。乳化剂可为非离子型、阴离子型或阳离子型。例如，1973年8月28日颁发给Dickert等的美国专利第3,755,560号；1983年12月20日颁发给Dixon等的美国专利第4,421,769号；和McCutcheon的DetergentsandEmulsifiers,NorthAmericanEdition，第317-324页(1986)中描述了适合的乳化剂。
所述乳液也可含有消泡剂以在敷用到角质组织后将泡沫形成减到最少。消泡剂包括高分子量硅酮和本领域中公知做此类用途的其它材料。
适合的乳液可根据所需产品形式具有多种粘度。优选的示例性低粘度乳液的粘度为约50厘沲或更低，更优选约10厘沲或更低，最优选约5厘沲或更低。所述乳液也可含有消泡剂以在局部敷用后将泡沫形成减到最少。消泡剂包括高分子量硅酮和本领域中公知做此类用途的其它材料。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述乳液是具有连续水相和分散于其中的疏水性、水不溶相(“油相”)的水包油乳液。在美国专利第5,073,371和5,073,372号中描述了包含水包油乳液的适合载体的实例。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，水包油乳液包含结构剂以帮助形成液晶凝胶网络结构。不受理论限制，据信结构剂帮助为所述组合物提供有助于所述组合物的稳定性的流变特征。结构剂也可起乳化剂或表面活性剂的作用。按组合物的重量计，本发明的优选组合物包含约0.5％至约20％，更优选约1％至约10％，最优选约1％至约5％的结构剂。本发明的优选结构剂选自硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、二十二醇、平均具有约1个至约21个环氧乙烷单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、平均具有约1个至约5个环氧乙烷单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。
多种阴离子表面活性剂在本文中也有用，例如，美国专利第3,929,678号中所述。另外，两性和两性离子表面活性剂在本文中也有用。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，按局部载体的重量计，水包油乳液包含约25％至约98％，优选约65％至约95％，更优选约70％至约90％的水。
在本文所述任何实施方案中的一些实施方案中，所述乳液为硅酮包水乳液。硅酮包水乳液含有连续硅酮相和分散的水相。本发明的优选硅酮包水乳液按重量计包含约1％至约60％，优选约5％至约40％，更优选约10％至约20％的连续硅酮相。连续硅酮相作为含有或包围下文所述不连续水相的外相而存在。
连续硅酮相可含有聚有机硅氧烷油。
连续硅酮相可含有一种或多种非硅油。连续硅酮相中非硅油的浓度优选被减到最低或完全避免以便进一步增强所述组合物中活性成分的氧化稳定性。适合的非硅油在约1个大气压力下的熔点为约25℃或更低。适合用于连续硅酮相中的非硅油的实例是化学领域公知的在个人局部护理产品中呈油包水乳液形式，例如矿物油、植物油、合成油、半合成油等非硅油。
根据本发明的任何实施方案中的一些实施方案的有用局部用组合物包含约30％至约90％，更优选约50％至约85％，且最优选约70％至约80％的分散水相。术语“分散相”为本领域技术人员公知，其暗示所述相作为悬浮在连续相中并且为连续相所包围的小颗粒或液滴而存在。分散相也称为内相或不连续相。分散水相是悬浮在连续油和/或硅酮相(例如，如本文所述)中并为其所包围的水性小颗粒或液滴的分散体。水相可为水，或水和一种或多种水溶性或可分散性成分的组合。此类任选成分的非限制性实例包括增稠剂、酸、碱、盐、螯合剂、胶、水溶性或可分散性醇和多元醇、缓冲液、防腐剂、防晒剂、染色剂等。
本发明的一些实施方案的局部用组合物在分散水相中按组合物的重量计包含约25％至约90％，优选约40％至约80％，更优选约60％至约80％的水。
本发明的一些实施方案的乳液包含乳化剂。在一个优选的实施方案中，按组合物的重量计，所述组合物含有约0.1％至约10％的乳化剂，更优选约0.5％至约7.5％，最优选约1％至约5％的乳化剂。乳化剂帮助使水相分散并悬浮在油和/或硅酮相中。已知或常规的乳化剂均可用于组合物中，只要所选乳化剂在化学和物理上与组合物必需组分相容，并提供所需分散特征。适合的乳化剂包括本领域技术人员已知用于个人局部护理产品中的乳化剂。
适合的乳化剂包括多种已知阳离子、阴离子、两性离子和两性表面活化剂中的任一种。参见，AlluredPublishingCorporation公开的McCutcheon的DetergentsandEmulsifiers,NorthAmericanEdition(1986)；1991年4月30日颁发给Ciotti等的美国专利第5,011,681号；1983年12月20日颁发给Dixon等的美国专利第4,421,769号；和美国专利第3,755,560号。所选的确切表面活性剂取决于组合物的pH和存在的其它组分。优选阳离子表面活性剂，尤其是双烷基季铵化合物，其实例在1992年9月29日颁发给McCall等的美国专利第5,151,209号；1992年9月29日颁发给Steuri等的美国专利第5,151,210号；美国专利第5,120,532号；美国专利第4,387,090号；美国专利第3,155,591号；美国专利第3,929,678号；美国专利第3,959,461号；McCutcheon的Detergents&Emulsifiers(NorthAmericanedition1979)M.C.PublishingCo.；和Schwartz等，SurfaceActiveAgents,TheirchemistryandTechnology,NewYork:IntersciencePublishers,1949中有描述。
可选地，其它有用的阳离子乳化剂包括氨基-酰胺。这些阳离子乳化剂的非限制性实例包括硬脂酰胺丙基PG-二甲基氯化铵磷酸酯、山嵛酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基乙基二甲铵乙基硫酸盐、硬脂酰胺丙基二甲基(肉豆蔻醇乙酸酯)氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基十六烷基甲苯磺酸铵、硬脂酰胺丙基二甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基乳酸铵及其混合物。
活性成分有效量的测定在本领域技术人员的能够范围内，尤其是根据本文提供的详细公开。
对于用于本发明的方法中的任何制剂而言，治疗有效量或剂量最初可由体外测定估计。另外，可在离体系统(例如，离体皮肤、毛发和/或指甲)中或在动物模型中配制一个剂量以达到所需浓度或滴度。此类信息可用于更精确地测定在人中的有用剂量。
为了增强活性成分(例如，木质素过氧化物酶和/或氧化介质)的经皮吸收，可向组合物中添加许多试剂中的一种或多种，包括但不限于二甲亚砜、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、表面活性剂、氮酮、醇、丙酮、丙二醇、聚乙二醇和丁二醇。
本文所述的组合物还可包括，例如为了使组合物富含香料和营养因子(例如，皮肤或毛发营养因子)而添加的附加组分。
选择适于在人身上局部使用，而在正确医疗判断范围内不会引起毒性、不相容性、不稳定性、变态反应等的此类组分。另外，此类任选组分只要其不会不能接受性地改变本发明的活性化合物的益处就有用。
CTFA化妆品成分手册(CosmeticIngredientHandbook)第二版(1992)描述了多种常用于皮肤护理行业，适合用于本发明的组合物中的非限制性化妆品成分。这些成分类别的实例包括：研磨剂、吸收剂、美容组分如香料、色素、染色剂/着色剂、精油、皮肤感知剂、收敛剂等(例如，丁香油、薄荷醇、樟脑、桉油、丁香酚、乳酸薄荷酯、金缕梅馏出物)、抗痘剂、防结块剂、消泡剂、抗菌剂(例如，丁基氨基甲酸碘代丙炔酯)、抗氧化剂、粘合剂、生物添加剂、缓冲剂、膨胀剂、螯合剂、化学添加剂、着色剂、化妆品收敛剂、化妆品杀生物剂、变性剂、药物收敛剂、外用镇痛剂、成膜剂或用于帮助组合物的成膜性质和直接性的材料，例如聚合物(例如，二十烯和乙烯基吡咯烷酮的共聚物)、乳浊剂、pH调节剂、推进剂、还原剂、多价螯合剂、皮肤调节剂(例如，湿润剂，包括混杂和堵塞性湿润剂)、皮肤舒缓和/或愈合剂(例如，泛醇和衍生物(例如，乙基泛醇)、芦荟、泛酸及其衍生物、尿囊素、红没药醇和甘草酸二钾)、皮肤治疗剂、增稠剂和维生素及其衍生物。
因为根据本文所述的一些实施方案的组合物是为了体内利用，所以组合物优选具有高纯度且基本上无潜在有害污染物，例如至少为国家食品(NF)级，通常至少为分析级，并且优选至少为药物级。就必须在使用之前合成指定化合物来说，此类合成或后续纯化应优选产生基本上无合成或纯化工序期间已经使用的任何潜在污染性有毒试剂的产品。
如本文中所用术语“约”是指±10％。
术语“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“具有”及其同根词意为“包括但不限于”。
术语“由……组成”意为“包括但不限于”。
术语“基本上由……组成”意指所述组合物、方法或结构可包括附加成分、步骤和/或部分，但只有在附加成分、步骤和/或部分不实质性改变要求保护的组合物、方法或结构的基本和新型特征时。
如本文中所用，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一”、“一种(个)”和“所述”包括复数指示物。例如，术语“一种化合物”或“至少一种化合物”可包括多种化合物，包括其混合物。
在本申请通篇，本发明的各个实施方案均呈范围形式呈现。应理解呈范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁而不得解释为对本发明范围的僵化限制。因此，范围的描述应视为已经具体公开了所有可能的子范围以及在该范围内的独立数值。例如，范围的描述如1至6应视为已经具体公开了子范围如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等，以及该范围内的独立数值，例如1、2、3、4、5和6。不管范围的宽度如何，这都适用。
当在本文中指定数值范围时，这意味着包括指定范围内的任何引用数值(小数或整数)。短语“范围介于”第一指定数值和第二指定数值之间及“范围为”第一指定数值“至”第二指定数值在本文中可交换使用并且意为包括第一和第二指定数值以及之间的所有小数和整数数值。
如本文中所用，术语“方法”是指用于实现指定任务的方式、手段、技术和工序，包括但不限于化学、药学、生物学、生物化学和医学领域的从业人员已知或易于由已知方式、手段、技术和工序开发的那些方式、手段、技术和工序。
如本文中所用，术语“治疗”包括消除、基本上抑制、减缓或逆转病状的进展，基本上改善病状的临床或美学症状或基本上防止病状的临床或美学症状的出现。
应当理解，为了清楚起见在单独实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可在单个实施方案中呈组合提供。相反，为简洁起见在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征也可单独地或呈任何适合的子组合或如其所应在本发明的任何其它所述实施方案中提供。不得将各个实施方案的上下文中描述的某些特征视为那些实施方案的必需特征，除非没有那些要素该实施方案无效。
如上文所述以及如下面的权利要求部分所要求保护的本发明的各个实施方案和方面从以下实施例中得到实验性支持。
实施例
现参考以下实施例，与以上描述一起以非限制性方式说明本发明的一些实施方案。
通常，本文所用的命名和本发明中利用的实验室工序包括分子、生物化学、微生物学和重组DNA技术。在文献中透彻地解释了此类技术。参见，例如，"MolecularCloning:AlaboratoryManual"Sambrook等，(1989)；"CurrentProtocolsinMolecularBiology"第I-III卷Ausubel,R.M.编辑(1994)；Ausubel等，"CurrentProtocolsinMolecularBiology",JohnWileyandSons,Baltimore,Maryland(1989)；Perbal,"APracticalGuidetoMolecularCloning",JohnWiley&Sons,NewYork(1988)；Watson等，"RecombinantDNA",ScientificAmericanBooks,NewYork；Birren等(编辑)"GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries"，第1-4卷，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork(1998)；美国专利第4,666,828、4,683,202、4,801,531、5,192,659和5,272,057号中阐述的方法；"CellBiology:ALaboratoryHandbook"，第I-III卷，Cellis,J.E.编辑(1994)；"CurrentProtocolsinImmunology"第I-III版ColiganJ.E.编辑(1994)；Stites等(编辑),"BasicandClinicalImmunology"(第8版),Appleton&Lange,Norwalk,CT(1994)；Mishell和Shiigi(编辑),"SelectedMethodsinCellularImmunology",W.H.FreemanandCo.,NewYork(1980)；在专利和科学文献中广泛地描述了可用免疫测定法，参见，例如，美国专利第3,791,932、3,839,153、3,850,752、3,850,578、3,853,987、3,867,517、3,879,262、3,901,654、3,935,074、3,984,533、3,996,345、4,034,074、4,098,876、4,879,219、5,011,771和5,281,521号；"OligonucleotideSynthesis"Gait,M.J.编辑(1984)；“NucleicAcidHybridization"Hames,B.D.和HigginsS.J.编辑(1985)；"TranscriptionandTranslation"Hames,B.D.和HigginsS.J.编辑(1984)；"AnimalCellCulture"Freshney,R.I.编辑(1986)；"ImmobilizedCellsandEnzymes"IRLPress,(1986)；"APracticalGuidetoMolecularCloning"Perbal,B.,(1984)和"MethodsinEnzymology"第1-317卷，AcademicPress；"PCRProtocols:AGuideToMethodsAndApplications",AcademicPress,SanDiego,CA(1990)；Marshak等，"StrategiesforProteinPurificationandCharacterization-ALaboratoryCourseManual"CSHLPress(1996)；其全部通过引用并入，如同在本文中全面阐述一样。在本文件全篇提供了其它一般参考文献。据信其中的工序在本领域中公知并且是为了方便读者而提供。其中所含全部信息通过引用并入本文。
材料和方法
材料：
从Sigma-Aldrich获得葡萄糖氧化酶(无稳定剂)；
如国际专利申请公布WO2004/052275中所述，做以下较小修改制备木质素过氧化物酶同工酶H1(来自于黄孢原毛平革菌)：将具有7.5*104个孢子/ml的孢子溶液直接搀入生长培养基；生长培养基还包含酵母提取物和营养肉汤；并且发酵罐的通气为4升/分钟，通气为150转/分钟(还考虑到将来自于其它白腐菌的木质素过氧化物酶用于本发明的实施方案中)；
从Fluka获得藜芦醇。
面霜制剂：
示例性制剂制备成两种互补面霜的形式：包含25单位/克LIP同工酶H1组分、25单位/克GOX和0.10重量％藜芦醇的酶面霜(6mmol/kg的面霜)，和包含葡萄糖的互补活化剂面霜(3.5mmol/kg的面霜)。
为了比较，配制互补酶面霜核活化剂面霜以用非酶促生成的H2O2活化LIP。这种酶面霜包含LIP同工酶H1组分(25单位/克)和藜芦醇(6mmol/kg的面霜)，无GOX，而互补活化剂面霜包含H2O2(3.53mmol/kg的面霜)。
面霜中的其它成分(例如，载体)如下面表5中所述。
表5：示例性面霜的非活性成分
视觉模拟评分(VAS)：
视觉模拟评分(VAS)是用于测量被认为范围跨越不能直接测量的连续值的特征或看法。VAS呈现为水平线，如下所述，在每个末端固定有词语描述符。标度尺末端用值0(对于最理想的结果而言)和10(对于最不理想的结果而言)标记。通过根据重复测量ANOVA计算p值而测定统计显著性。VAS用于评价以下每种变量：
色素沉着的一致性(固定有描述符“一致、均匀”和“不均匀、有斑点、有杂色”)；
透明度(固定有描述符“透明、均匀”和“暗沉、不透明”)；
提亮/增亮(固定有描述符“外表光亮/明亮”和“暗沉、无光泽”)；
肤色(固定有描述符“皮肤颜色均匀、健康”和“外表不均匀、变色”)；
发光度(固定有描述符“外表发光、有光泽”和“外表暗沉、无光泽、灰黄”)；和
整体外观(固定有描述符“看起来很健康”和“看起来不健康”)。
数码摄影：
使用置于具有稳定和一致环境照明的环境中的面部成像系统进行受治受试者面部的数码摄影。所述系统对于每位受试者不同访问次数而言留在相同位置/方向上。
实施例1
黑色素受面霜制剂中的木质素过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖氧化
为了评价木质素过氧化物酶(LIP)在被过氧化氢的酶源活化后提亮皮肤的能力，如上文所述制备包含LIP、藜芦醇和GOX(葡萄糖氧化酶)的酶面霜和包含葡萄糖的活化剂面霜，并对溶解的黑色素进行试验。将结果与用如上文所述制备的包含LIP和藜芦醇的酶面霜和包含过氧化氢的活化剂面霜获得的结果比较。
首先将各0.3克的酶面霜与黑色素(140μg/ml)混合，产生灰黑色。然后添加0.3克的互补活化剂面霜。
如图1所示，每种酶面霜制剂的颜色在添加活化剂面霜之后立即从灰黑色变为米黄色。
这些结果表明LIP被由GOX-葡萄糖系统酶促生成的H2O2有效活化，达到与用传统非酶促H2O2活化系统获得的同等程度。
实施例2
治疗21天后面霜制剂中的木质素过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖提亮皮肤
试验本文所述的示例性酶和活化剂面霜在体内提亮皮肤的能力。
向10名女性受试者(23-65岁)施用木质素过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖，其中8名完成研究。根据以下方案将组合物敷用到面部皮肤：
早晨
第1步-ELURETM洁面乳
第2步-包含木质素过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的面霜(如材料和方法部分中所述)
第3步-包含葡萄糖的活化剂面霜(如材料和方法部分中所述)
第4步-SPF30防晒霜(用于减少新的黑色素形成)
夜晚
第1步-洁面乳
第2步-包含木质素过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的面霜
第3步-包含葡萄糖的活化剂面霜
在敷用包含木质素过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的面霜并且为皮肤吸收之后，敷用活化剂面霜。
使用用于评价对皮肤颜色的黑色素和红斑(血红蛋白)作用的皮肤色度计测量皮肤颜色。测量不同区域(前额、右脸颊、左脸颊和目标斑点)中的皮肤颜色。在每个区域中，在不同点测量皮肤颜色并且将结果平均。在第0天(即，治疗之前)和在治疗第7和21天评估皮肤颜色。
如图2A-9B所示，在8名受试受试者中，治疗引起在黑色素含量上至少有一定减少，并且黑色素含量的减少同时依赖于治疗持续时间(图2A、6A、7A、9A)。
如其中进一步所示，治疗对红斑水平没有任何一致性影响。
如图3A、5A和6A所示，治疗引起皮肤上大多数斑点的黑色素含量减少。
在一名受试者(图9B)中，观察到第21天脸颊的红斑增多，但是判断是由与治疗无关的刺激(用于去除烟熏眼影的调色剂的刺激)而引起。
这些结果表明用木质素过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖治疗通过降低黑色素含量对提亮皮肤有效，不会造成皮肤的明显刺激。
实施例3
治疗21天后面霜制剂中的木质素过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖提亮皮肤
对具有明显但是轻微、弥漫性色素沉着过度(包括黑斑病)的28名女性自愿受试者(33-50岁)试验实施例2中所述的制剂和日方案8周。排除满足以下任何标准的受试者：敏感、过敏或有特应性皮肤；对美容产品或皮肤清洁剂有过敏史；有可能干扰研究结果的疾病/病状或同时并发症史；妊娠、正计划妊娠或哺乳；在试验区域有皮肤问题，包括皮肤病、黑痣、痤疮、红点、毛细管扩张等；在过去3个月内进行具有潜在干扰的皮肤病学治疗或手术；在过去3个月内同时涉及或参与任何临床皮肤护理；医师判断不适合参加这项临床试验。
从治疗开始0、4、6和8周时，使用以下技术，通过评价皮肤色素沉着评估制剂的效果：
1)使用皮肤色度计的仪器测量；
2)皮肤病学家的视觉模拟评分(VAS)评估；
3)用面部成像系统数码摄影；和
4)受试者自我评估。
如图10A和10B所示，通过8周治疗(使用皮肤色度计所测定)，所述制剂逐渐降低了色素沉着皮肤(图10A)和无色素沉着皮肤(图10B)中的黑色素指数。
此外，在4周后，28名受试者中22名(78.6％)的色素沉着皮肤中的黑色素指数降低，并且28名受试者中20名(71.4％)的无色素沉着皮肤中的黑色素指数降低。在6和8周后，28名受试者中27名(96.4％)的色素沉着和无色素沉着皮肤中的黑色素指数均降低。
如材料和方法部分中所述，使用视觉模拟评分(VAS)评价在治疗过程中的不同时间点受治皮肤的色素沉着的一致性、光度/亮度、色调、发光度和整体外观。
如图11-16以及表6和7所示，在8周治疗过程中，所述制剂逐渐增强了受治皮肤的色素沉着的一致性(图11)、透明度(图12)、光度/亮度(图13)、色调(图14)、发光度(图15)和整体外观(图16)。
表6中呈现了图11-16所示每个时间点的平均改善程度：
表6：相对于治疗开始时皮肤外观的平均改善和统计显著性(n＝28)
图17示出了用所述制剂治疗8周的个别受试者中面部肤色的改变。
表7中呈现了28名受试者治疗4、6和8周后在整个面部肤色的透明度、提亮/增亮、肤色、发光度和/或整体外观上显示出显著改善的百分比。
表7：相对于治疗开始时显示出皮肤外观改善的受试者的百分比
如表8所示，受试者对所述制剂的满意度在8周治疗过程中逐渐提高(如根据问卷的自我评估所确定)。
表8：受试者对问题“总体来说，您对您所使用的产品满意吗？”的回答
此外，如表9所示，就问卷中询问的有关话题而论，受试者对所述制剂的满意度在8周治疗过程中逐渐提高。
表9：受试者对问卷具体项目的回答(n＝28)
正如通过自我评估所进一步测定，28名受试者使用所述制剂没有报告任何不适或变态反应。
这些结果确认用木质素过氧化物酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖治疗通过降低黑色素含量而对提亮皮肤有效，不会造成皮肤的显著刺激，并且进一步表明受治皮肤的肤色在治疗过程中继续改善。
尽管本发明已经结合其具体实施方案进行了描述，但是显然许多替代、修改和变型对本领域技术人员而言将显而易见。因此，其意图在于包括属于所附权利要求的精神和宽范围内的所有此类替代、修改和变型。
在本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请在本文中通过引用整体并入本说明书中，其程度如同特别地且单独地指出将每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用并入本文一样。另外，本申请中任何参考文献的引用或标识不应解释为承认此类参考文献可用作本发明的现有技术。至于所使用的章节标题，不应将其解释为必要性限制。

Claims (50)

1.一种用于提亮受试者的皮肤和/或毛发的美容组合物，所述组合物包含木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶和过氧化氢生成酶的底物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述木质素过氧化物酶的浓度在1.25单位/克至125单位/克的范围内。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的组合物，其中所述过氧化氢生成酶的浓度在0.125至1250单位/克的范围内。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述过氧化氢生成酶的所述底物的浓度在0.0175微摩尔/克至175微摩尔/克的范围内。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其还包含氧化介质。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述氧化介质选自由藜芦醇、藜芦醚和1,4-二甲氧基苯所组成的组。
7.根据权利要求5-6中任一项所述的组合物，其中所述氧化介质的浓度在0.03微摩尔/克至300微摩尔/克的范围内。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述过氧化氢生成酶选自由葡萄糖氧化酶、己糖氧化酶、胆固醇氧化酶、芳基醇氧化酶、L-古洛糖酸内酯氧化酶、半乳糖氧化酶、吡喃糖-2-氧化酶、吡哆醇-4-氧化酶、醇氧化酶、2-羟酸氧化酶、胆碱氧化酶、长链醇氧化酶、甘油-3-磷酸氧化酶、D-阿拉伯糖-1,4-内酯氧化酶、香草醇氧化酶、醛醇氧化酶、茄格孢吡喃酮原II氧化酶、巴龙霉胺6’-氧化酶、乙二醛氧化酶、藜芦醇氧化酶、醇脱氢酶、纤维二糖脱氢酶、醛氧化酶、草酸氧化酶、芳基醛氧化酶、二氢乳清酸氧化酶、吡咯喹啉-醌合成酶、L-氨基酸氧化酶、L-谷氨酸氧化酶、多胺氧化酶、NAD(P)H氧化酶、金酸氧化酶、羟胺氧化酶、硫醇氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、细胞色素c氧化酶、黄嘌呤氧化酶和超氧化物歧化酶所组成的组。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述过氧化氢生成酶包含葡萄糖氧化酶，并且所述底物包含D-葡萄糖。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述木质素过氧化物酶为同工酶H1或修饰形式的同工酶H2。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述木质素过氧化物酶为白腐菌的木质素过氧化物酶。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中所述木质素过氧化物酶为真菌黄孢原毛平革菌的提取物。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的组合物，其中所述美容组合物呈选自由面膜、精华液、洗液、面霜、洗发剂、凝胶和调色剂所组成的组的形式。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的组合物，其还包含美容上可接受的载体。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的组合物，其包装在气密性容器中。
16.一种用于提亮受试者的皮肤和/或毛发的试剂盒，所述试剂盒包含过氧化氢生成酶、所述过氧化氢生成酶的底物和木质素过氧化物酶，其中所述过氧化氢生成酶、所述过氧化氢生成酶的所述底物和所述木质素过氧化物酶中的至少一种形成单独包装在所述试剂盒中的组合物的一部分。
17.根据权利要求16所述的试剂盒，其中所述过氧化氢生成酶形成第一组合物的一部分并且所述底物形成第二组合物的一部分，所述第一和所述第二组合物单独包装在所述试剂盒中。
18.根据权利要求17所述的试剂盒，其中所述第一组合物还包含所述木质素过氧化物酶。
19.根据权利要求17所述的试剂盒，其中所述第二组合物还包含所述木质素过氧化物酶。
20.根据权利要求17所述的试剂盒，其中所述木质素过氧化物酶形成所述试剂盒中第三组合物的一部分，所述第三组合物单独包装在所述试剂盒中。
21.根据权利要求16所述的试剂盒，其中所述过氧化氢生成酶和所述过氧化氢生成酶的所述底物一起包装在所述试剂盒中的气密性包装中。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的试剂盒，其中在包含所述木质素过氧化物酶的组合物中所述木质素过氧化物酶的浓度在2.5至250单位/克的范围内。
23.根据权利要求16-22中任一项所述的试剂盒，其包含氧化介质、所述过氧化氢生成酶、所述过氧化氢生成酶的所述底物和所述木质素过氧化物酶。
24.根据权利要求23所述的试剂盒，其中所述氧化介质形成包含所述木质素过氧化物酶的组合物的一部分。
25.根据权利要求23-24中任一项所述的试剂盒，其中在包含所述氧化介质的组合物中所述氧化介质的浓度在0.06微摩尔/克至600微摩尔/克的范围内。
26.根据权利要求16-25中任一项所述的试剂盒，其中所述过氧化氢生成酶在包含所述酶的组合物中的浓度在0.25至2500单位/克的范围内。
27.根据权利要求16-26中任一项所述的试剂盒，其中在包含所述底物的组合物中所述底物的浓度在0.035微摩尔/克至350微摩尔/克的范围内。
28.根据权利要求16-27中任一项所述的试剂盒，其中所述过氧化氢生成酶选自由葡萄糖氧化酶、己糖氧化酶、胆固醇氧化酶、芳基醇氧化酶、L-古洛糖酸内酯氧化酶、半乳糖氧化酶、吡喃糖-2-氧化酶、吡哆醇-4-氧化酶、醇氧化酶、2-羟酸氧化酶、胆碱氧化酶、长链醇氧化酶、甘油-3-磷酸氧化酶、D-阿拉伯糖-1,4-内酯氧化酶、香草醇氧化酶、醛醇氧化酶、茄格孢吡喃酮原II氧化酶、巴龙霉胺6’-氧化酶、乙二醛氧化酶、藜芦醇氧化酶、醇脱氢酶、纤维二糖脱氢酶、醛氧化酶、草酸氧化酶、芳基醛氧化酶、二氢乳清酸氧化酶、吡咯喹啉-醌合成酶、L-氨基酸氧化酶、L-谷氨酸氧化酶、多胺氧化酶、NAD(P)H氧化酶、金酸氧化酶、羟胺氧化酶、硫醇氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、细胞色素c氧化酶、黄嘌呤氧化酶和超氧化物歧化酶所组成的组。
29.根据权利要求28所述的试剂盒，其中所述过氧化氢生成酶包含葡萄糖氧化酶，所述底物包含D-葡萄糖。
30.根据权利要求29所述的试剂盒，其包含：
包含浓度在2.5至250单位/克的范围内的所述木质素过氧化物酶和浓度在2.5至250单位/克的范围内的所述葡萄糖氧化酶的第一组合物；和
包含浓度在0.35微摩尔/克至35微摩尔/克的范围内的所述D-葡萄糖的第二组合物。
31.根据权利要求16-30中任一项所述的试剂盒，其中所述木质素过氧化物酶为同工酶H1或修饰形式的同工酶H2。
32.根据权利要求16-31中任一项所述的试剂盒，其中所述木质素过氧化物酶为白腐菌的木质素过氧化物酶。
33.根据权利要求16-31中任一项所述的试剂盒，其中所述木质素过氧化物酶为真菌黄孢原毛平革菌的提取物。
34.根据权利要求16-33中任一项所述的试剂盒，其中单独包装在所述试剂盒中的所述组合物呈选自由面膜、精华液、洗液、面霜、洗发剂、凝胶和调色剂所组成的组的形式。
35.根据权利要求16-33中任一项所述的试剂盒，其中单独包装在所述试剂盒中的所述组合物还包含美容上可接受的载体。
36.一种提亮受试者的皮肤和/或毛发的美容方法，所述方法包括使所述受试者的皮肤和/或毛发区接触包含木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶和所述过氧化氢生成酶的底物的组合物，从而提亮所述受试者的皮肤和/或毛发。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述组合物还包含美容上可接受的载体。
38.根据权利要求36-37中任一项所述的方法，其中所述组合物由包装在根据权利要求16-35中任一项所述的试剂盒中的木质素过氧化物酶、过氧化氢生成酶和所述过氧化氢生成酶的底物而形成。
39.根据权利要求36所述的方法，其中所述组合物为根据权利要求1-15中任一项所述的组合物。
40.根据权利要求36-39中任一项所述的方法，其中实行所述接触至少5次。
41.根据权利要求36-40中任一项所述的方法，其中每天实行所述接触一次或两次。
42.根据权利要求1-15中任一项所述的组合物，根据权利要求16-35中任一项所述的试剂盒或根据权利要求36-41中任一项所述的方法，其中所述提亮所述皮肤包括提亮整个皮肤肤色。
43.根据权利要求1-15中任一项所述的组合物，根据权利要求16-35中任一项所述的试剂盒或根据权利要求36-41中任一项所述的方法，其中所述皮肤含不均匀肤色、暗斑、雀斑、黑斑病、色素沉着过多、皮肤色素减退、老年斑、痘印和/或疤痕。
44.一种用于向受试者的皮肤、毛发和/或指甲敷用的美容或药物组合物，所述组合物包含过氧化氢生成酶和所述过氧化氢生成酶的底物。
45.根据权利要求44所述的组合物，其还包含在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的至少一种试剂。
46.一种用于向受试者的皮肤、毛发和/或指甲敷用美容或药物组合物的试剂盒，所述美容或药物组合物包含过氧化氢，所述试剂盒包含第一组合物和第二组合物，所述第一组合物包含过氧化氢生成酶，所述第二组合物包含所述过氧化氢生成酶的底物。
47.根据权利要求46所述的试剂盒，其还包含在过氧化氢的存在下表现出美容或药物活性的至少一种试剂。
48.一种向受试者的皮肤、毛发和/或指甲施用过氧化氢的方法，所述方法包括使所述受试者的皮肤、毛发和/或指甲区接触包含过氧化氢生成酶和所述过氧化氢生成酶的底物的组合物，从而在所述皮肤、毛发和/或指甲上生成过氧化氢。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述组合物由过氧化氢生成酶形成并且所述过氧化氢生成酶的底物包装在根据权利要求46-47中任一项所述的试剂盒中。
50.根据权利要求48所述的方法，其中所述组合物为根据权利要求44-45中任一项所述的组合物。
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