BR112015028573B1 - Kit de diagnóstico para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste tomada a partir de uma superfície de pele de um mamífero, e, método para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste - Google Patents

Kit de diagnóstico para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste tomada a partir de uma superfície de pele de um mamífero, e, método para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste Download PDF

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Abstract

kit, inserto para um dispositivo de ensaio de fluxo lateral, e, método para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste. a presente invenção refere-se a um kit de diagnóstico para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste tomada a partir de uma superfície corporal de um mamífero, o kit de diagnóstico compreendendo: um inserto separado para um dispositivo de fluxo lateral (200, 411) compreendendo uma membrana (201) fixada a um suporte rígido (202) e o inserto separa do sendo configurado para obter a amostra de teste; um dispositivo de ensaio de fluxo lateral configurado (300, 400) para aceitar o inserto separado (200, 411); um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (2 11) o inserto separado a uma superfície corporal de um mamífero (213); em que o membro de preensão (210) compreende uma camada expansível (212) configurada para aplicar pressão ao inserto separado (200, 411), assim pressionando o inserto separado (200, 411) contra a superfície corporal do mamífero (213).

Description

Campo da invenção
[0001] A presente invenção refere-se a kits de diagnóstico e métodos baseados em dispositivos de ensaio de fluxo lateral para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste tomada a partir de uma superfície corporal de um mamífero; bem como insertos para dispositivos de ensaio de fluxo lateral.
Fundamentos da invenção
[0002] A revelação rápida de genômicos, transcriptômicos, proteômicos e regulômicos tornou possível analisar mecanismos moleculares e celulares em grande escala. Um dos resultados importantes desses estudos foi a revelação de genômicos funcionais e a compreensão de que células de diferentes indivíduos têm diferenças significantes em estrutura de genoma, perfis de expressão de genes e proteínas e mecanismos regulatórios que controlam funções celulares específicas. Isso resultou em um interesse em detectar e/ou quantificar biomarcadores para avaliar o estado atual de um mamífero a título de presença, ausência e/ou concentração de um ou mais biomarcadores.
[0003] Também aqui há uma necessidade para avaliar quão efetivos os tratamentos são em um nível pessoal, como nos campos de medicina personalizada e cuidados de pele personalizados.
[0004] Em relação à medicina personalizada, há uma necessidade por dispositivos de ponto de cuidados que sejam úteis na diagnose ou prognose de um distúrbio, tal como um distúrbio de pele, ou para prever a suscetibilidade, início ou provável severidade de um distúrbio, tal como um distúrbio de pele em um indivíduo; ou para prever a responsividade de um indivíduo a terapia; ou em prever e/ou monitorar a reincidência após tratamento de um distúrbio particular, como um distúrbio de pele.
[0005] Em relação a um cuidado com a pele personalizado, os efeitos reivindicados de efeitos antirrugas e antienvelhecimento de produtos cosméticos são tipicamente baseados na suposição que esses produtos têm efeito similar em todos indivíduos. Entretanto, esse não é o caso. Pessoas diferentes e tipos de pele diferentes reagem diferentemente a produtos cosméticos, por isso a necessidade para dispositivos de ponto de cuidados (POC) que possam determinar os efeitos ou responsividade de um indivíduo a um tipo particular de produto de cuidado com a pele.
[0006] Um método de ensaio rápido que foi usado para teste de diagnóstico de ponto de cuidados, tal como um teste de gravidez doméstico, é o método de ensaio de fluxo lateral.
[0007] Um dos desafios visados com métodos de ensaio de fluxo lateral é a provisão de uma amostra a testar, em particular a provisão de uma forma de amostra na pele, e em particular para fornecer amostras da pele em um modo reproduzível e/ou uniforme.
[0008] No exemplo de testes caseiros de gravidez, a amostra é, na maioria dos casos, urina.
[0009] Pedido de patente US 2005/0175992 para Aberl et al. descreve um método para o diagnóstico rápido de alvos em fluidos de corpo humano. Em particular um método de ensaio de fluxo lateral é empregado, onde uma amostra é coletada não invasivamente de fluido de olho usando um membro de suabe.
[00010] O membro de suabe de US 2005/0175992 não é particularmente bem apropriado para obter analitos da pele, em particular quando há um desejo para obter uma amostra em um modo reproduzível e/ou uniforme, ou se há um desejo para comparar o nível de um ou mais analitos de teste dentro da amostra com uma amostra de controle tomada a partir da pele em um local diferente.
[00011] Consequentemente, há uma necessidade na técnica para kits e métodos para obter e analisar analitos da pele, em dispositivos de ponto de cuidados particulares que permitam uma rápida detecção. Há também uma necessidade na técnica para amostrar métodos para dispositivos de ponto de cuidados que possam fornecer uma amostra em um modo reproduzível e/ou uniforme comparado com a técnica anterior.
Sumário da invenção
[00012] A presente invenção foi feita em vista da técnica anterior descrita acima, e o objeto da presente invenção é fornecer dispositivos de ponto de cuidados que sejam particularmente bem apropriados para obter analitos de, por exemplo, a superfície de pele humana, em um modo reproduzível e/ou uniforme comparado com a técnica anterior, ou pelo menos para fornecer dispositivos de ponto de cuidados com formas alternativas de obter um analito a partir da pele.
[00013] Para resolver o problema, a presente invenção fornece um kit de diagnóstico para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste tomada a partir de uma superfície corporal de um mamífero, tal como a superfície de pele de um mamífero, o kit de diagnóstico compreendendo: um inserto separado para um dispositivo de fluxo lateral (200, 411) compreendendo uma membrana (201), opcionalmente fixada a um suporte rígido (202), o inserto separado sendo configurado para obter a amostra de teste; um dispositivo de ensaio de fluxo lateral configurado (300, 400) para aceitar o inserto separado (200, 411); e um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) o inserto separado a uma superfície corporal de um mamífero (213). Em algumas modalidades a membrana tem uma espessura, uma largura e um comprimento.
[00014] Em algumas modalidades da presente invenção, o dispositivo de fluxo lateral é construído de modo a formar um leito capilar, quando esse é acoplado com o inserto separado, em que o dispositivo de fluxo lateral (100, 500) acoplado com o inserto separado compreende uma zona de eluição (101, 501) e uma área de detecção (DA), bem como um ou mais dos seguintes: um bloco conjugado (102, 502) e um bloco com efeito de mecha (104, 504).
[00015] Em algumas modalidades da presente invenção, a membrana tem uma espessura igual a 4 mm ou menor, e uma largura e um comprimento, ambos maiores que a espessura, em que o dispositivo de fluxo lateral é configurado para ter uma direção de fluxo lateral (L) substancialmente na direção de um plano criado pela largura e o comprimento da membrana.
[00016] Em algumas modalidades da presente invenção, o membro de preensão (210) compreende uma camada expansível (212) configurada para aplicar pressão ao inserto separado (200, 411) assim pressionando o inserto separado (200, 411) contra a superfície corporal do mamífero (213).
[00017] Isso é, os inventores da presente invenção, em um primeiro aspecto da invenção, verificaram que dividir o dispositivo de ensaio de fluxo lateral tradicional em um inserto separado configurado para obter uma amostra de teste de, por exemplo, a superfície de pele humana e um dispositivo de ensaio de fluxo lateral configurado para aceitar o inserto separado, é útil para obter amostras da superfície corporal de um mamífero, tal como a superfície de pele de um ser humano, em particular quando combinada com um membro de preensão que prende, de modo destacável, o inserto separado à superfície de, por exemplo, a pele.
[00018] Em modalidades preferidas o membro de preensão pode aplicar pressão adicional ao inserto separado pelas ações de uma camada expansível que pressiona o inserto separado mais firmemente à pele. Onde a técnica anterior descrita acima (US 2005/0175992) sugere que um movimento de torção de um membro de suabe é suficiente para obter uma amostra, os presentes inventores perceberam que uma forma alternativa de obter uma amostra e, em muitos casos, método de amostragem superior para obter amostras da pele, é por preensão, de modo destacável, a um inserto separado à pele, e aplicação de pressão adicional a partir de uma camada expansível.
[00019] Em algumas modalidades da presente invenção, o dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreende uma zona de eluição (101) e uma área de detecção (DA), e em que o inserto separado é a zona de eluição (101). Isto é, o inserto separado é adaptado para ajustar-se na zona de eluição ou área de amostra. Consequentemente, o inserto separado não é a área de detecção (DA).
[00020] Em algumas modalidades da presente invenção, o dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreende uma zona de eluição (501) e uma área de detecção (DA), e em que o inserto separado é a área de detecção (DA). Isto é, que o inserto separado é adaptado para ajustar-se na área de detecção, que pode compreender uma zona de detecção (505) tendo imobilizado uma ou mais moléculas de afinidade. Consequentemente, o inserto separado não é a zona de eluição ou área de amostra. Isso é uma forma modificada de prover um ensaio de fluxo lateral, em que o um ou mais analitos de teste já serão ligados às moléculas imobilizadas de afinidade uma vez que o inserto separado é colocado no dispositivo de ensaio de fluxo lateral.
[00021] Em algumas modalidades da presente invenção, o inserto separado compreende uma membrana (201) fixada a uma armação de suporte rígido (202).
[00022] Em algumas modalidades da presente invenção, a armação de suporte rígido (202) cobre o perímetro da membrana (201).
[00023] Em algumas modalidades da presente invenção, a camada expansível do membro de preensão contém celulose comprimida, e em que a camada expansível não está em comunicação fluídica com o inserto separado (200, 411).
[00024] Em algumas modalidades da presente invenção, a área de detecção (DA) compreende uma zona de detecção (105, 505) contendo uma ou mais molécula(s) de afinidade para seletivamente reter um ou mais analito(s) de teste e opcionalmente uma zona de indicador (106, 506) contendo uma ou mais molécula(s) de afinidade para seletivamente reter uma ou mais molécula(s) de afinidade de indicador.
[00025] Em algumas modalidades da presente invenção, em que o um ou mais analito(s) de teste é(são) selecionado(s) da lista consistindo em: quimiocinas, interleucinas, fatores de crescimento, hormônios, enzimas, e outras moléculas presentes na pele de um mamífero, tal como selecionados da lista consistindo em: IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Trappin2/Elafin, hBD-1, hBD-2, VEGF, e TSLP.
[00026] Em outro aspecto da presente invenção, provê-se um inserto para um dispositivo de ensaio de fluxo lateral (200, 411) compreendendo uma membrana (201) fixada a uma armação de suporte rígido (202), o inserto separado sendo configurado para obter a amostra de teste a partir de uma superfície corporal de um mamífero (213).
[00027] Em algumas modalidades da presente invenção, a membrana tem uma espessura igual a ou menos que 4 mm, e uma largura e um comprimento ambos maiores que a espessura.
[00028] Em algumas modalidades da presente invenção, a armação de suporte rígido cobre o perímetro da membrana.
[00029] Em algumas modalidades da presente invenção, o inserto adicionalmente compreende um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) o inserto a uma superfície corporal de um mamífero (213).
[00030] Em algumas modalidades da presente invenção, o inserto é a área de detecção (DA) do dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreendendo uma zona de detecção (105, 505) contendo uma ou mais molécula(s) de afinidade para seletivamente reter um ou mais analito(s) de teste.
[00031] Em algumas modalidades da presente invenção, a membrana é permeável à água a partir do lado opondo-se longe (isto é, o lado oposto) da superfície de pele à qual a membrana é configurada para afixar.
[00032] Em algumas modalidades da presente invenção, em que o um ou mais analito(s) de teste é(são) selecionado(s) da lista consistindo em: quimiocinas, interleucinas, fatores de crescimento, hormônios, enzimas, e outras moléculas presentes na pele de um mamífero, tal como selecionados da lista consistindo em: IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Trappin2/Elafin, hBD-1, hBD-2, VEGF, e TSLP.
[00033] Em outro aspecto da presente invenção, provê-se um método para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste, o método compreendendo as seguintes etapas:afixar de modo destacável a uma superfície corporal de um mamífero o inserto separado para um dispositivo de fluxo lateral (200, 411) compreendendo uma membrana (201) fixada a um suporte rígido (202) e o inserto separado sendo configurado para obter a amostra de teste;deixar o inserto separado (200) na superfície corporal do mamífero (213) durante, pelo menos, 5 minutos;prender o inserto separado contendo a amostra de teste em um dispositivo de ensaio de fluxo lateral adaptada para receber o inserto separado (300, 400);revelar o dispositivo de ensaio de fluxo lateral.
[00034] Em algumas modalidades da presente invenção, o inserto separado (200, 411) é afixado de modo destacável à superfície corporal por um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) o inserto separado a uma superfície corporal de um mamífero (213), e onde o membro de preensão compreende uma camada expansível (212) que é ativada entre etapas a) e b) assim gerando uma força pressionando o inserto separado contra a superfície corporal.
[00035] Em algumas modalidades da presente invenção, o dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreende uma zona de eluição (101) e uma área de detecção (DA), e em que o inserto separado é a zona de eluição (101).
[00036] Em algumas modalidades da presente invenção, o dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreende uma zona de eluição (101) e uma área de detecção (DA), e em que o inserto separado é a área de detecção (DA).
[00037] Em algumas modalidades da presente invenção, a superfície corporal do mamífero é a pele de um ser humano.
[00038] Em algumas modalidades da presente invenção, o dispositivo de ensaio de fluxo lateral é construído de modo a formar um leito capilar, quando esse é acoplado com o inserto separado, em que o dispositivo de fluxo lateral (100, 500) acoplado com o inserto separado compreende uma zona de eluição (101, 501) e uma área de detecção (DA), bem como um ou mais dos seguintes: um bloco conjugado (102, 502) e um bloco com efeito de mecha (104, 504).
[00039] Em algumas modalidades da presente invenção, a membrana tem uma espessura igual a 4 mm ou menos, e uma largura e um comprimento, ambos maiores que a espessura, em que o dispositivo de fluxo lateral é configurado para ter uma direção de fluxo lateral (L) substancialmente na direção de um plano criado pela largura e a comprimento da membrana.
Breve descrição dos desenhos
[00040] Certas modalidades ilustrativas são descritas em maiores detalhes abaixo com referência às figuras em anexo, em que:Figura 1 mostra vistas perspectivas de diferentes modalidades, da presente invenção, de uma tira de ensaio de fluxo lateral (100). Em Figura 1a uma tira de fluxo lateral (100) é mostrada com um bloco de amostra (101), um bloco conjugado (102), uma zona de detecção (105) e uma zona de indicador (106), ambas zonas imobilizadas em suporte poroso (107), um bloco com efeito de mecha (104) e um material de forro (108). “L” mostra a direção do fluxo lateral e a área “DA” define a área de detecção. Figura 1b ilustra a tira de fluxo lateral, onde o bloco de amostra (101) é destacado da tira de fluxo lateral restante. Figura 1c mostra uma modalidade alternativa de Figura 1a, onde o bloco de amostra (101); bloco conjugado (102); zona de detecção (105) e zona de indicador (106) em suporte poroso (107); e bloco com efeito de mecha (104) é contíguo ou sobreposto, e colocado em um material de forro (108). Figura 1d ilustra a tira de fluxo lateral de Figura 1c, onde o bloco de amostra (101) é destacado da tira de fluxo lateral restante.
[00041] Figura 2 mostra, em uma modalidade da presente invenção, diferentes vistas de um inserto separado (200), um membro de preensão (210), e o membro de preensão retendo o inserto separado na pele de um mamífero. Em Figura 2a é mostrado um inserto separado (200) para um dispositivo de ensaio de fluxo lateral com uma membrana (201) fixada a um suporte rígido (202). Figura 2b mostra uma modalidade do mesmo inserto separado (200), onde o fundo da membrana (201) que faz contato com a superfície corporal do mamífero é mostrado. Figura 2c mostra um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) à superfície corporal de um mamífero com uma camada expansível (212). Figura 2d mostra uma modalidade onde um inserto separado é afixado de modo destacável à superfície corporal de um mamífero (213) por membro de preensão (210), e onde o lado superior da camada expansível (212) é mostrado.
[00042] Figura 3 mostra uma modalidade de acordo com a presente invenção. Em Figura 3a um dispositivo de ensaio de fluxo lateral (300) com alojamento (310) é mostrado com um inserto separado (200), e cobertura de bloco de amostra (312) em uma posição aberta mostrando a abertura de amostra (313) permitindo adição de líquido para a revelação do dispositivo de fluxo lateral, e uma janela de reação (311) permitindo a detecção visual de reações na zona de detecção e zona de indicador. Figura 3b mostra uma vista transversal de uma modalidade da presente invenção, onde o alojamento de ensaio de fluxo lateral (310) contém um inserto separado (200) em local na posição de um bloco de amostra (101) com uma cobertura de bloco de amostra (312) em posição fechada mostrando a abertura de amostra (313). O inserto separado está em comunicação fluídica com um suporte poroso (309), que novamente está em comunicação fluídica com um bloco conjugado (302), novamente em comunicação fluídica com uma membrana porosa (307) que tem uma zona de detecção e zona de indicador imobilizada (105, 106, não mostrada), e um bloco com efeito de mecha (304). Finalmente uma janela de reação (311) permite a inspeção visual da área de detecção (“DA”).
[00043] Figura 4 mostra uma modalidade de acordo com a presente invenção. Em Figura 4a um dispositivo de ensaio de fluxo lateral (400) com alojamento (410) é mostrado com um inserto separado (411) e uma a abertura de amostra (413) permitindo para adição de líquido para a revelação do dispositivo de fluxo lateral. Figura 4b mostra uma vista transversal de um dispositivo de ensaio de fluxo lateral (400) de acordo com uma modalidade da presente invenção, onde um alojamento de ensaio de fluxo lateral (410) contém um inserto separado (411) sendo inserida na posição de uma área de detecção (“DA”). Um bloco de amostra (401), a abertura de amostra (413) e bloco com efeito de mecha (404) é mostrado, e uma vez que o inserto separado (411) é completamente inserido, esse levará o bloco de amostra em conexão de fluido com o bloco com efeito de mecha (404) através do inserto separado (411). Figura 4c mostra um dispositivo de ensaio de fluxo lateral (400) onde um inserto separado é completamente inserido. Uma zona de detecção (405) e zona de indicador (406) são mostradas. Figura 4d mostra uma vista transversal de um dispositivo de ensaio de fluxo lateral (400) de acordo com uma modalidade da presente invenção, onde um inserto separado (411) é completamente inserido e onde o bloco de amostra (401), inserto separado (411) com uma zona de detecção (405) e uma zona de indicador (406) estão em comunicação fluídica com um bloco com efeito de mecha (404).
[00044] Figura 5 mostra vistas perspectivas de diferentes modalidades, da presente invenção, de uma tira de ensaio de fluxo lateral (500). Em Figura 5a uma tira de fluxo lateral (500) é mostrada com um bloco de amostra (501), um bloco conjugado (502), uma zona de detecção (505) e uma zona de indicador (506), ambas zonas imobilizadas em suporte poroso (507), um bloco com efeito de mecha (504) e opcionalmente um material de suporte (508). “L” mostra a direção do fluxo lateral e a área “DA” define a área de detecção. Figura 5b ilustra a tira de fluxo lateral, onde a zona de detecção (505) e zona de indicador (506) imobilizada em suporte poroso (507) é destacada da tira de fluxo lateral restante.
[00045] Figura 6 mostra a sensibilidade de um dispositivo de ensaio de fluxo lateral de acordo com exemplo 1, onde em Figura 6a diferentes concentrações de analitos adicionados diretamente a blocos de amostra foram analisadas. Controles (esquerda) e analitos (direita) mostram que um nível de detecção visual de detecção IL-8 deve ser em torno e 1 ng/ml e que o nível de detecção visual de hBD-1 como estando em torno de 0,25 ng/ml. Figura 6b mostra que usando um bloco de amostra colocado na pele, IL-8 e hBD-1 podem ser detectados a partir da superfície de pele.
[00046] Figura 7 mostra a sensibilidade de um dispositivo de ensaio de fluxo lateral de acordo com exemplo 2, onde em Figura 7a diferentes concentrações de analitos adicionado diretamente à área de detecção (DA) foram analisadas. Controles (direita) e analitos (esquerda) mostram que um nível de detecção visual de Detecção IL-8 deve estar em torno de 1 ng/ml e que o nível de detecção visual de hBD-1 deve estar em torno de 0,25 ng/ml. Figura 7b mostra que usando a área de detecção (DA) como a “área de amostragem”, os analitos hBD-1 e IL-8 podem ser detectados a partir da superfície de pele.
[00047] Será reconhecido pelo versado na técnica, dado o benefício dessa descoberta, que certos aspectos característicos mostrados em Figuras 15 não são necessariamente desenhados em escala. As dimensões e características de alguns aspectos nas Figuras podem ter sido ampliadas, distorcidas ou alteradas relativas a outros aspectos nas Figuras de modo a facilitar um melhor entendimento dos exemplos ilustrativos descritos aqui.
[00048] Será ainda reconhecido pelo versado na técnica que os aspectos individuais das Figuras podem ser trocados para obter outras modalidades.
Descrição Detalhada da Invenção
[00049] Ao descrever as modalidades da invenção, uma terminologia específica será usada por propósito de clareza. Entretanto, a invenção não é destinada a ser limitada aos termos específicos assim selecionados, sendo entendido que cada termo específico inclui todos os equivalentes técnicos que operam em um modo similar para conseguir um propósito similar.
[00050] Ensaios de fluxo laterais podem ser empregados em dispositivos de ponto de cuidados para detectar a presença ou ausência de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste. A saída de leitura pode ser feita visualmente, isto é, presença ou ausência de uma ou mais linhas de teste coloridas também referidas como tiras de teste em uma zona de detecção (105), e a confirmação/validação do teste pode ser feita pela presença e/ou ausência de uma ou mais linhas/tiras de indicador colorido em uma zona de indicador (106). O teste pode ser qualitativo (presença ou ausência) bem como quantitativo, e a detecção/quantificação pode ser auxiliada por equipamento de leitura, ou pode ser puramente detectada visualmente pelo olho do usuário do ensaio de fluxo lateral.
[00051] Se desejado, um equipamento de leitura, tal como um leitor óptico, pode ser usado em algumas modalidades para medir a intensidade das sondas. A configuração real e estrutura do leitor óptico pode geralmente variar dependendo das sondas, que devem ser medidas. Por exemplo, técnicas de detecção ópticas que podem ser utilizadas incluem, mas não são limitadas a, luminescência (por exemplo, fluorescência, fosforescência, etc.), absorbância (por exemplo, fluorescente ou não fluorescente), difração, e assim em diante. Determinação qualitativa, quantitativa, ou semiquantitativa da presença ou concentração de um analito pode ser conseguida de acordo com a presente invenção. Por exemplo, a quantidade do analito pode ser quantitativamente ou semiquantitativamente determinada usando as intensidades dos sinais produzidos por sondas de detecção ligadas na zona de detecção (105) e a zona de indicador (106).
[00052] Ensaios de fluxo laterais podem ser baseados em um leito capilar (tal como papel poroso ou polímero sinterizado) ou, na maioria dos casos, podem ser baseados em uma série de leitos capilares em comunicação fluídica entre si. Os leitos capilares têm a capacidade de transportar fluido por ação de forças capilares. Em algumas modalidades da presente invenção, o ensaio de fluxo lateral é construído de modo a formar um leito capilar.
[00053] O primeiro elemento, o bloco de amostra (101) atua como uma esponja e retém a amostra de teste. Uma vez que esta está embebida, a amostra de teste, contendo um ou mais analitos de teste, migrará para um bloco conjugado (102), que contém uma ou mais molécula(s) de afinidade de indicador, como moléculas de afinidade etiquetadas com sonda de detecção projetada para ligar a um ou mais analitos de teste dentro da amostra de teste. A amostra de teste e uma ou mais moléculas de afinidade são misturadas e a uma ou mais moléculas de afinidade tendo afinidade para um ou mais analitos de teste dentro da amostra de teste irá se ligar uma à outra enquanto migrando ainda para uma área de detecção (DA) que pode conter uma zona de detecção (105), e pode conter uma zona de indicador (106), ambas com uma ou mais tiras, onde outro conjunto de uma ou mais moléculas de afinidade foi imobilizado. No momento em que a amostra de teste misturada com a(s) molécula(s) de afinidade do bloco conjugado alcança a área de detecção (DA), o um ou mais analitos na amostra de teste terão sido ligados à(s) molécula(s) de afinidade do bloco conjugado. Esse complexo será, então, por sua vez, ligado pela(s) molécula(s) de afinidade sobre a(s) tira(s) na zona de detecção (105). Depois de um tempo, quando mais e mais fluido passou a zona de detecção, sondas de detecção se acumulam, e a tira muda de cor. As sondas de detecção podem, por exemplo, ser partículas de ouro ou látex conjugadas à(s) molécula(s) de afinidade para preparar moléculas de afinidade etiquetadas com sondas de detecção. A área de detecção (DA) pode também compreender uma zona de indicador (106) que pode funcionar como um controle para verificar que o ensaio de fluxo lateral foi conduzido de modo apropriado. Tal zona de indicador (106) pode também compreender uma ou mais tiras com moléculas de afinidade imobilizadas que apenas se liga à(s) molécula(s) de afinidade etiquetada(s) com sondas de detecção do bloco conjugado, considerando que a(s) molécula(s) de afinidade em a zona de detecção (105) ligada ao complexo entre o(s) analito(s) e a(s) molécula(s) de afinidade de indicador, tal como a(s) molécula(s) de afinidade etiquetada(s) com sondas de detecção do bloco conjugado. Após passar a área de detecção (DA) o fluido entra no bloco com efeito de mecha (104), que geralmente recebe fluido que foi migrado através do inteiro leito capilar (101, 102, DA, 104 - também representado por 107). O bloco com efeito de mecha pode ajudar para promover a ação capilar e o fluxo de fluido a partir do bloco de amostra (101), bloco conjugado (102) através da área de detecção (DA).
[00054] A tira de ensaio de fluxo lateral pode opcionalmente compreender uma camada de suporte (108) e/ou alojamento (310, 410), que é impermeável a líquido de modo que fluido fluindo através de tira de ensaio de fluxo lateral não vaza através da camada de suporte (108). Exemplos de materiais apropriados para o suporte incluem, mas não são limitados a, vidro; materiais poliméricos, tais como poliestireno, polipropileno, poliéster, polibutadieno, cloreto de polivinila, poliamida, policarbonato, epóxidos, metacrilatos, e polimelamina.
[00055] A zona de detecção (105) pode estar localizada a montante ou a jusante da zona de indicador (106). As linhas ou tiras na zona de detector ou zona de indicador podem estar dispostas em uma direção que é substancialmente perpendicular ao fluxo da amostra de teste. Em algumas modalidades, as linhas podem estar em uma direção que é substancialmente paralela ao fluxo da amostra de teste. As linhas ou tiras na zona de detecção (105) ou zona de indicador (106) não precisam ser linhas ou tiras, e podem também adquirir outros formatos, como, por exemplo, pontos ou padrões.
[00056] Em um aspecto da presente invenção, provê-se um kit de diagnóstico para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste tomada a partir de uma superfície corporal de um mamífero, o kit de diagnóstico compreendendo: um inserto separado para um dispositivo de fluxo lateral (200, 411) compreendendo uma membrana (201), que pode ser fixada a um suporte rígido (202), o inserto separado sendo configurado para obter a amostra de teste; um dispositivo de ensaio de fluxo lateral configurado (300, 400) para aceitar o inserto separado (200, 411); e um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) o inserto separado em uma superfície corporal de um mamífero (213).
[00057] Em geral, a presente invenção é dirigida a um kit de diagnóstico que fornece um sistema integrado para detectar a presença ou ausência de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste, sobre uma faixa ampla de possíveis concentrações do um ou mais analitos de teste. Em algumas modalidades, a quantidade do um ou mais analitos de teste são também detectados em um teste quantitativo. O kit de diagnóstico emprega um dispositivo de ensaio de fluxo lateral (300, 400) e um inserto separado (200, 411) e um ou mais reagentes de teste para detectar o um ou mais analitos de teste dentro da amostra de teste. Os reagentes de teste incluem molécula(s) de afinidade etiquetada(s) com sondas de detecção que são capazes de produzir um sinal de detecção representando a presença ou quantidade do um ou mais analito(s) de teste na amostra de teste. Uma forma de quantificar um ou mais do(s) analito(s) de teste é preparando curvas padrão apropriadas usando conhecidas concentrações do um ou mais analito(s) de teste.
[00058] Em algumas modalidades da presente invenção, o um ou mais analito(s) de teste é(são) selecionado(s) da lista consistindo em: quimiocinas, interleucinas, fatores de crescimento, hormônios, enzimas, e outras moléculas presentes em uma superfície corporal de um mamífero, como a pele de um mamífero. Analitos específicos de teste podem incluir um ou mais selecionado da lista consistindo em: IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Trappin2/Elafin, hBD-1, hBD-2, VEGF, e TSLP.
[00059] A presente invenção é apropriada para a detecção de qualquer molécula que esteja presente na pele de um mamífero, que pode incluir quimiocinas, interleucinas, fatores de crescimento, hormônios ou enzimas. Da mesma forma, a presente invenção é também apropriada para a detecção de fármacos bem como metabólitos dos mesmos, à medida que eles são excretados na pele de um mamífero. Essa detecção de fármacos cobre tanto os fármacos administrados para fins medicinais e/ou cosméticos, bem como drogas administradas para fins recreativos.
[00060] A amostra de teste é tomada a partir de uma superfície corporal de um mamífero usando um inserto separado para um dispositivo de fluxo lateral. O inserto separado compreende uma membrana (201), que pode ser fixada a um suporte rígido (202).
[00061] O suporte rígido (202) pode ser usado para estabilizar a membrana (201) de modo que essa não flexione ou dobre, e pode ser usada para facilitar a manipulação do inserto separado permitindo ao mesmo se ajustar, ou travar em posição no dispositivo de ensaio de fluxo lateral (300), como, por exemplo, aparafusamento no local. Em algumas modalidades, o suporte rígido cobre o perímetro da membrana, como, por exemplo, descrito em Figura 2.
[00062] A membrana é configurada para obter a amostra de teste, que significa que a membrana deve ser capaz de absorver a amostra de teste, e qualquer material capaz de assim fazê-lo pode ser apropriado. Os materiais usados para a membrana podem incluir, mas não são limitados a, materiais naturais, sintéticos ou de ocorrência natural, que são sinteticamente modificados, como polissacarídeos (por exemplo, materiais de celulose tal como papel e derivados de celulose, tais como acetato de celulose e nitrocelulose), poliéter sulfona, polietileno, fluoreto de polivinilideno de náilon (PVDF), poliéster, polipropileno, algodão, ou tecido. Em algumas modalidades a membrana é não adesiva, o que minimizará a quantidade de células de pele transferidas para a membrana. Os materiais usados para o suporte rígido podem incluir, mas não são limitados a, materiais plásticos, compósitos, metais ou ligas metálicas.
[00063] A membrana pode ser do tipo folha. A membrana pode ter uma espessura igual a ou menor que 4 mm (tal como menor que 4, 3, 2, 1 mm), e uma largura e um comprimento ambos maiores que a espessura. Em algumas modalidades a largura e comprimento da membrana são ambos maiores (por exemplo, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 50 vezes maiores ou até 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 50 vezes maiores) que a espessura. Em algumas modalidades a membrana é um quadrado, tal como um retângulo, e em algumas modalidades a membrana é circular. Se a membrana é um formato irregular, isto é diferente de um quadrado ou retângulo, então a largura, comprimento e espessura referem-se aos valores máximos para tal formato irregular. Por exemplo, a largura de um círculo será o diâmetro. Exemplos de larguras e comprimentos podem ser 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40 mm, tal como por exemplo, faixa de larguras e comprimentos de 5-30 mm.
[00064] A amostra de teste é tomada a partir de uma superfície corporal de um mamífero, e compreende o um ou mais analito(s) de teste. A amostra de teste é obtida por difusão da amostra da superfície corporal de um mamífero para a membrana. A amostragem pode ser auxiliada molhando a membrana com um volume determinado de fluido, quer enquanto é afixada no sítio de amostragem na superfície corporal ou antes de ser afixada ao sítio de amostragem sobre a superfície corporal.
[00065] Em algumas modalidades, a membrana é permeável à água do lado oposto afastado da superfície de pele a qual a membrana é configurada para afixar. Isso pode permitir umedecer a membrana com um volume determinado de fluido enquanto ela é afixada, bem como pode permitir a adição de um líquido para a revelação do dispositivo de fluxo lateral, quando, por exemplo, a membrana funciona como parte da zona de eluição, como mostrado em Figura 3, isto é, permite umedecer a membrana do lado oposto afastado da superfície de pele à qual a membrana é configurada para se afixar.
[00066] Em modalidades preferidas, a superfície corporal é a pele, como a pele de um corpo humano e, em modalidades preferidas, o mamífero é um corpo humano.
[00067] Após a amostra de teste ter sido transferida para a membrana, o inserto separado é então inserido em um dispositivo de ensaio de fluxo lateral configurado (300, 400) para aceitar o inserto separado (200, 411).
[00068] Em algumas modalidades da presente invenção, o dispositivo de fluxo lateral é construído de modo a formar um leito capilar, quando esse é acoplado com o inserto separado, em que o dispositivo de fluxo lateral (100, 500) acoplado com o inserto separado compreende uma zona de eluição (101, 501) e uma área de detecção (DA), bem como um ou mais dos seguintes: um bloco conjugado (102, 502) e um bloco com efeito de mecha (104, 504).
[00069] Em algumas modalidades da presente invenção, o dispositivo de fluxo lateral é configurado para ter uma direção de fluxo lateral (L) substancialmente na direção de um plano criado pela largura e o comprimento da membrana. Substancialmente na direção do plano engloba ambos, contíguo bem como sobreposto, tal como parcialmente sobrepondo a membrana com os outros elementos do dispositivo de fluxo lateral, ver por exemplo, Figura 1, onde os elementos (101. 102, 107, 104) do dispositivo de fluxo lateral são descritos como sendo contíguos. Ver por exemplo, Figura 3b, onde o inserto separado (200) é parcialmente sobreposto com um suporte poroso (309), um bloco conjugado (302), membrana porosa (307) e um bloco com efeito de mecha (304). Estando o suporte poroso (309) inteiramente sobreposto com o inserto separado (200), a direção de fluxo lateral (L) do bloco de amostra para a área de detecção (DA) ainda teria sido substancialmente na direção do plano criado pela largura e o comprimento da membrana, como oposto à perpendicular a este plano.
[00070] Muitas possibilidades para acoplar um inserto separado com um dispositivo de fluxo lateral existem e, em modalidades preferidas, a parte de membrana do inserto é preparada de modo que ela se ajustará no mesmo local do dispositivo de ensaio de fluxo lateral assim aumentando a reprodutibilidade. Uma forma de colocar a parte de membrana do inserto na mesma posição em uma maneira reproduzível é fixar a membrana a um suporte rígido.
[00071] Quando desejando obter a amostra de teste em um modo reproduzível e uniforme, a partir de um ponto particular sobre a superfície corporal, o inserto é afixado de modo destacável (211) à superfície corporal preferivelmente usando um membro de preensão (210). Afixando o inserto à superfície corporal em um modo destacável, torna-se possível amostrar uma área particular, definida pelo tamanho da membrana do inserto, durante uma duração particular de tempo. Isso é vantajoso quando desejando comparar os níveis de analitos particulares de teste em uma amostra de teste tomada de, por exemplo, uma área lesional da pele com analitos particulares de teste em uma amostra de teste tomada de, por exemplo, uma área saudável ou não lesional da pele em um modo reproduzível, onde o mesmo tamanho de área de pele é amostrado durante a mesma duração. Afixar de modo destacável o inserto proporciona vantagens com relação a limpar uma área com um membro de suabe, porque a limpeza com suabe é feita sobre uma área menos precisamente definida, e em um modo não reproduzível, quando proveniente de variação amostra a amostra, significando que se torna difícil preparar a amostra de teste a partir de, por exemplo, uma pele não lesional usando limpar o mesmo tamanho de amostra como uma amostra de teste obtida limpando uma área lesional da pele. Consequentemente, afixar de modo destacável exclui limpar com suabe.
[00072] Um exemplo de pele lesional pode ser pele inflamada, e um exemplo de pele não lesional pode ser pele não inflamada, por exemplo, pele psoriática lesional e pele psoriática não lesional.
[00073] Em algumas modalidades, o membro de preensão é uma tira de material adesivo.
[00074] Quando desejando melhorar a reprodutibilidade e uniformidade na obtenção da amostra de teste, o membro de preensão (210) pode compreender uma camada expansível (212) configurada para aplicar pressão ao inserto separado (200, 411) assim pressionando o inserto separado (200, 411) contra a superfície corporal do mamífero (213). Uma forma de configurar a camada expansível para aplicar pressão ao inserto separado consiste em colocar a mesma entre o inserto separado e o membro de preensão. A camada expansível (212) é uma camada que pode ser expandida de modo a aplicar pressão à membrana (201) do inserto separado (200, 411). Exemplos de uma camada expansível incluem material inflável, tal como uma bolsa inflável, um dispositivo operado por mola ou um material intumescível. Em algumas modalidades o material é celulose comprimida, que dilatará em contato com um líquido, como uma solução aquosa, assim aplicando pressão à membrana (201), que será pressionada firmemente contra a pele do mamífero. Pode ser notado a partir da tabela no exemplo 3 que o desvio padrão para obter uma amostra a partir da pele usando um inserto separado com uma camada expansível é melhorado comparado a não usar uma camada expansível. Em algumas modalidades da presente invenção, a camada expansível não está em comunicação fluídica com o inserto separado (200, 411), conforme poderia haver algum risco de transferir parte da amostra de teste à camada expansível, se a camada expansível for feita de, por exemplo, celulose comprimida em comunicação fluídica com a membrana. Em alguma modalidade, há uma camada de forro inerte entre a camada expansível e a membrana, que não permitirá à amostra de teste difundir na camada expansível.
[00075] Consequentemente em algumas modalidades da presente invenção, provê-se um inserto para um dispositivo de ensaio de fluxo lateral (200, 411) compreendendo uma membrana (201) fixada a uma armação de suporte rígido (202), o inserto separado sendo configurado para obter a amostra de teste a partir de uma superfície corporal de um mamífero (213), e em algumas modalidades da presente invenção, o inserto adicionalmente compreendendo um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) o inserto a uma superfície corporal de um mamífero (213).
[00076] As modalidades descritas até agora foram descritas com referência a uma modalidade da presente invenção do dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreendendo uma zona de eluição (101) e uma área de detecção (DA), e onde o inserto separado é a zona de eluição (101). Isto é, que o inserto separado é adaptado para ajustar-se na zona de eluição ou área de amostra.
[00077] No entanto, a presente invenção também cobre modalidades do dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreendendo uma zona de eluição (501) e uma área de detecção (DA) e em que o inserto separado é a área de detecção (DA). Isto é, que o inserto separado é adaptado para se encaixar na área de detecção, que pode compreender uma zona de detecção (505) tendo imobilizada uma ou mais moléculas de afinidade. Esta é uma forma modificada de fornecer um ensaio de fluxo lateral, em que o um ou mais analitos de teste já estarão ligados às moléculas imobilizadas de afinidade uma vez que o inserto separado é colocado no dispositivo de ensaio de fluxo lateral.
[00078] Nessa forma modalidade, onde o inserto separado é a área de detecção (DA), o dispositivo de ensaio de fluxo lateral funcionará de modo levemente diferente, em que o um ou mais analitos de teste prontamente estará ligado às moléculas de afinidade imobilizadas na zona de detecção (405) quando a amostra de teste é obtida de uma superfície corporal de um mamífero. A revelação do ensaio de fluxo lateral por adição de fluido ao bloco de amostra (401) então irá transportar a(s) molécula(s) de afinidade etiquetada(s) com sondas de detecção a partir do bloco conjugado sobre a área de detecção (DA) e elas irão se ligar ao um ou mais analitos de teste já ligados às moléculas de afinidade imobilizadas na zona de detecção assim detectando a presença ou quantidade do um ou mais analitos de teste na amostra de teste.
[00079] Em algumas modalidades da presente invenção, a área de detecção (DA) compreende uma zona de detecção (105, 505) contendo uma ou mais molécula(s) de afinidade para seletivamente reter um ou mais analito(s) de teste e opcionalmente uma zona de indicador (106, 506) contendo uma ou mais molécula(s) de afinidade para seletivamente reter uma ou mais molécula(s) de afinidade de indicador, tal como molécula(s) de afinidade etiquetada(s) com sondas de detecção do bloco conjugado.
[00080] Moléculas de afinidade são moléculas que predominantemente ligam-se a um ou mais analito(s) assim seletivamente retendo tais analito(s) de interesse. Moléculas de afinidade em geral são moléculas que têm uma grande afinidade para um analito particular ou classe de analitos que outros analitos. Exemplos mais notáveis de tais moléculas são anticorpos (policlonal e/ou monoclonal, e fragmentos destes), aptâmeros, e receptores, bem como outros andaimes de proteína engenheirada conhecidos como AdNectin, Affibody, Anticalin, Knottin, DARPin e Kunitz, bem como andaimes orgânicos e/ou poliméricos.
[00081] Em outro aspecto da presente invenção, provê-se um método para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste, o método compreendendo as seguintes etapas:afixar de modo destacável a uma superfície corporal de um mamífero o inserto separado para um dispositivo de fluxo lateral (200, 411) compreendendo uma membrana (201) fixada a um suporte rígido (202) e o inserto separado sendo configurado para obter a amostra de teste;deixar a membrana do inserto separado (200) na superfície corporal do mamífero (213) durante, pelo menos, 5 minutos ou por uma duração terminando quando uma suficiente quantidade de amostra de teste foi obtida;prender o inserto separado contendo a amostra de teste em um dispositivo de ensaio de fluxo lateral adaptado para receber o inserto separado (300, 400);revelar o dispositivo de ensaio de fluxo lateral.
[00082] Em algumas modalidades da presente invenção, o inserto separado (200, 411) é afixado de modo destacável à superfície corporal por um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) o inserto separado a uma superfície corporal de um mamífero (213), e onde o membro de preensão compreende uma camada expansível (212) que é ativada entre etapas a) e b) assim gerando uma força pressionando o inserto separado contra a superfície corporal.
[00083] A camada de membrana do inserto separado será afixada à pele pela duração do período de amostragem, que termina quando foi obtida uma amostra de teste em quantidade suficiente. Em alguns exemplos será suficiente ter a camada de membrana afixada à pele por pelo menos 1 minuto, tal como pelo menos 5 minutos, pelo menos 10 minutos, pelo menos 15 minutos, pelo menos 20 minutos, pelo menos 30 minutos, pelo menos 40 minutos, pelo menos 50 minutos, pelo menos 60 minutos, como até 5 minutos, até 10 minutos, até 15 minutos, até 20 minutos, até 30 minutos, até 40 minutos, até 50 minutos, até 60 minutos, tal como até 24 horas. É desejável manter o tempo de amostragem tão curto quanto possível, conforme esse permitirá uma detecção mais rápida. É considerado que o presente método de amostragem deve ser sensível o suficiente para permitir um tempo de amostragem, onde a membrana está afixada à pele, ou em comunicação fluídica com a pele para estar entre 1 e 30 minutos, em particular entre 15 e 30 minutos.
[00084] Quando descrevendo todas as modalidades da presente invenção, as combinações e trocas de todas as modalidades possíveis não foram explicitamente descritas. Não obstante, o mero fato de que algumas medições são descritas em reivindicações dependentes mutuamente diferentes ou descritas em diferentes modalidades não indica que uma combinação dessas medidas não pode ser usada para vantagem. A presente invenção considera todas as possíveis combinações e trocas das modalidades descritas.
[00085] Os termos “compreendendo”, “compreendem” e “compreende” aqui são destinados pelos inventores a serem opcionalmente substituíveis pelos termos “consistindo em”, “consistem em” e “consiste em”, respectivamente, em cada exemplo.
ExemplosExemplo 1 - Detectar IL-8 e hBD-1 com o dispositivo de acordo a Figura 3
[00086] Esse é um exemplo mostrando que um inserto separado de um bloco de amostra (200) separado do dispositivo de ensaio de fluxo lateral (300) pode ser usado em um ensaio de fluxo lateral (Figura 3) para detectar IL-8 e hBD-1 da pele humana.Materiais
Figure img0001
Calibração de sensibilidade de teste
[00087] Analitos IL-8 e hBD1 foram diluídos em tampão de corrida a concentrações 0,25, 1 e 25 ng/ml e usados para determinar sensibilidade para essa configuração particular (Figura 6a). Para teste, analitos foram adicionados ao bloco de amostra (50 μl) seguindo montagem do cassete de análise e adição de 100 μl de tampão de corrida.
[00088] As tiras de fluxo lateral de Figura 6a mostram o nível de detecção visual de IL-8 como estando em torno de 1 ng/ml e que o nível de detecção visual de hBD-1 como estando em torno de 0,25 ng/ml.
[00089] Para analisar IL-8 e hBD-1 da pele, um bloco de amostra (200) foi umedecido com 25 μl de água milliQ e colocado em contato com uma área lesional de pele de dermatite de contato durante 15 minutos, inserido no cassete de ensaio de fluxo lateral (310) e revelado por adição de 100 μl de tampão de corrida.
[00090] A tira de fluxo lateral é mostrada em Figura 6b onde pode ser visto que IL-8 e hBD-1 (direita) podem ser detectados a partir de uma amostra obtida da superfície de pele. Controles são mostrados (esquerda).
Exemplo 2 - Detecção de IL-8 e hBD-1 com o dispositivo de acordo a Figura 4
[00091] Isso é um exemplo mostrando que um inserto separado de uma área de detecção (411, 507) separada do dispositivo de ensaio de fluxo lateral (400) pode ser usado no ensaio de fluxo lateral para detectar IL-8 e hBD-1 apartir da pele humana.Materiais
Figure img0002
Calibração de sensibilidade de teste
[00092] Analitos IL-8 e hBD1 foram diluídos em tampão de corrida a concentrações 0,25, 1 e 25 ng/ml e usados para determinar sensibilidade para essa configuração particular (Figura 7a). Para testar, analitos foram adicionados à área de membrana de detecção (50 μl) seguindo montagem do cassete de análise e adicionando 100 μl de tampão de corrida.
[00093] As tiras de fluxo lateral de Figura 7a mostram o nível de detecção visual de IL-8 como estando em torno de 1 ng/ml e o nível de detecção visual de hBD-1 como estando em torno de 0,25 ng/ml.
[00094] Para analisar IL-8 e hBD-1 a partir da pele, uma área de detecção (411, 507) foi umedecida com 25 μl de água milliQ e colocada em contato com uma área de pele lesional de dermatite de contato por 15 minutos, inserida no cassete de ensaio de fluxo lateral (410) e revelada adicionando 100 μl de tampão de corrida.
[00095] A tira de fluxo lateral é mostrada em Figura 7b onde pode ser notado que IL-8 e hBD-1 (esquerda) podem ser detectados a partir de uma amostra obtida da superfície de pele. Controles são mostrados (direita).
Exemplo 3 - Exemplo mostrando o efeito da camada em expansão (212).
[00096] O efeito de uma camada expansível na etapa de amostragem é testado. Pode ser visto que resultados estáveis e confiáveis de análise de pele são obtidos usando uma configuração de bloco de amostra do dispositivo de fluxo lateral (Figura 1, 2 e 3) para detectar IL-8 e hBD-1 a partir da pelehumana.Materiais
Figure img0003
Figure img0004
[00097] Comparação de resultados de análise obtidos usando o bloco de amostra com e sem camada expansível mostra que camada expansível melhora a reprodutibilidade e qualidade de resultados de análise, como evidente a partir da tabela 1 abaixo.
[00098] A tabela mostra o efeito da camada expansível sobre o nível de detecção e variação dos resultados de análise de pele. Blocos de amostra com e sem material expansível (nos blocos de amostra sem material expansível, o material expansível foi trocado por um material não expansível) tendo dois diferentes anticorpos de captura, IL-8, hBD-1 foram cada úmidos com água mQ (150 μl) após serem fixados de modo destacável a 4 indivíduos, cada indivíduo foi analisado com 3 adesivos. Os blocos de amostra foram expostos por 15 minutos na área de pele de dermatite de contato seguindo processamento idêntico. Nível de analitos foi quantificado usando curvas padrão e leitor de tira de fluxo lateral. Concentração média, desvio padrão e% de desvio padrão foram calculadas.
Figure img0005
[00099] Pode ser visto a partir das leituras que dispositivos com uma camada expansível em bloco de amostra resultaram em valor significantemente maior de analitos, e resultaram em desvio padrão e desvio padrão % significantemente menores comparados aos blocos de amostra sem material expansível.
[000100] Essa maior sensibilidade e menor variação de análise a partir dos dispositivos com a camada expansível está relacionada com um contato firme e homogêneo do material de bloco de amostra com a pele devido à pressão constante criada pela camada expansível.

Claims (18)

1. Kit de diagnóstico para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste no interior de uma amostra de teste tomada a partir de uma superfície de pele de um mamífero, o kit de diagnóstico caracterizado pelo fato de compreender:a) um inserto separado para um dispositivo de fluxo lateral (200, 411) compreendendo uma membrana (201), a membrana tendo uma espessura, uma largura e um comprimento, opcionalmente fixada a um suporte rígido (202) e o inserto separado sendo configurado para obter a amostra de teste,b) um dispositivo de ensaio de fluxo lateral configurado (300, 400) para aceitar o inserto separado (200, 411), ec) um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) o inserto separado a uma superfície de pele de um mamífero (213).
2. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dispositivo de fluxo lateral é construído de modo a formar um leito capilar, quando esse é acoplado com o inserto separado, em que o dispositivo de fluxo lateral (100, 500) acoplado com o inserto separado compreende uma zona de eluição (101, 501) e uma área de detecção (DA), bem como um ou mais dos seguintes: um bloco conjugado (102, 502) e um bloco com efeito de mecha (104, 504).
3. Kit de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo fato de que a membrana tem uma espessura igual a 4 mm ou menos, e uma largura e um comprimento, ambos maiores que a espessura, em que o dispositivo de fluxo lateral é configurado para ter uma direção de fluxo lateral (L) substancialmente na direção de um plano criado pela largura e o comprimento da membrana.
4. Kit de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o membro de preensão (210) compreende uma camada expansível (212) configurada para aplicar pressão ao inserto separado (200, 411) assim pressionando o inserto separado (200, 411) contra a superfície de pele do mamífero (213).
5. Kit de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreende uma zona de eluição (101) e uma área de detecção (DA), e em que o inserto separado é a zona de eluição (101), e não a área de detecção (DA).
6. Kit de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de o dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreende uma zona de eluição (501) e uma área de detecção (DA), e em que o inserto separado é a área de detecção (DA) e não a zona de eluição.
7. Kit de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o inserto separado compreende uma membrana (201) fixada a uma armação de suporte rígido (202).
8. Kit de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a armação de suporte rígido (202) cobre o perímetro da membrana (201).
9. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a camada expansível do membro de preensão contém celulose comprimida, e em que a camada expansível não está em comunicação fluídica com o inserto separado (200, 411).
10. Kit de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a área de detecção (DA) compreende uma zona de detecção (105, 505) contendo uma ou mais molécula(s) de afinidade para seletivamente reter um ou mais analito(s) de teste e opcionalmente uma zona de indicador (106, 506) contendo uma ou mais molécula(s) de afinidade para seletivamente reter uma ou mais molécula(s) de afinidade de indicador.
11. Kit de diagnóstico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o um ou mais analito(s) de teste é(são) selecionado(s) da lista consistindo em: quimiocinas, interleucinas, fatores de crescimento, hormônios, enzimas, e outras moléculas presentes na pele de um mamífero, tal como selecionados da lista consistindo em: IL-1a, IL-1b, IL-1RA, IL-8, CCL-2, CCL-5, CCL-27, CXCL-1, CXCL-2, CXCL-9, Trappin2/Elafin, hBD-1, hBD-2, VEGF, e TSLP.
12. Método para detectar a presença ou quantidade de um ou mais analitos de teste, o método caracterizado pelo fato de compreender as seguintes etapas:a) afixar de modo destacável a uma superfície de pele de um mamífero o inserto separado para um dispositivo de fluxo lateral (200, 411) como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 compreendendo uma membrana (201) fixada a um suporte rígido (202) e o inserto separado sendo configurado para obter a amostra de teste;b) deixar o inserto separado (200) na superfície de pele do mamífero (213) durante, pelo menos, 5 minutos;c) fixar o inserto separado contendo a amostra de teste em um dispositivo de ensaio de fluxo lateral adaptado para receber o inserto separado (300, 400);d) revelar o dispositivo de ensaio de fluxo lateral.
13. Método de acordo com reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o inserto separado (200, 411) é afixado de modo destacável à superfície de pele por um membro de preensão (210) configurado para afixar de modo destacável (211) o inserto separado a uma superfície de pele de um mamífero (213) e onde o membro de preensão compreende uma camada expansível (212) que é ativada entre etapas a) e b), assim gerando uma força pressionando o inserto separado contra a superfície de pele.
14. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 13, caracterizado pelo fato de que o dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreende uma zona de eluição (101) e uma área de detecção (DA) e em que o inserto separado é a zona de eluição (101).
15. Método de acordo com qualquer uma de reivindicações 12 a 13, caracterizado pelo fato de que o dispositivo de ensaio de fluxo lateral compreende uma zona de eluição (101) e uma área de detecção (DA) e em que o inserto separado é a área de detecção (DA).
16. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15, caracterizado pelo fato de que a superfície de pele do mamífero é a pele de um ser humano.
17. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 16, caracterizado pelo fato de que o dispositivo de ensaio de fluxo lateral é construído de modo a formar um leito capilar, quando esse é acoplado com o inserto separado, em que o dispositivo de fluxo lateral (100, 500) acoplado com o inserto separado compreende uma zona de eluição (101, 501) e uma área de detecção (DA), bem como um ou mais dos seguintes: um bloco conjugado (102, 502) e um bloco com efeito de mecha (104, 504).
18. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 17, caracterizado pelo fato de que a membrana tem uma espessura igual a 4 mm ou menos, e uma largura e um comprimento, ambos maiores que a espessura, em que o dispositivo de fluxo lateral é configurado para ter uma direção de fluxo lateral (L) substancialmente na direção de um plano criado pela largura e o comprimento da membrana.
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