BR112015015474B1 - Sais sulfato de n-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1h-benzo[d]imidazol-2- amina, seu preparo e uso dos mesmos - Google Patents

Abstract

sais sulfato de n-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1h-benzo[d]imidazol-2-amina, seu preparo e uso dos mesmos. a presente invenção se refere a sais sulfato de n-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1h-benzo[d]imidazol-2-amina e solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, seu preparo, composições farmacêuticas contendo os mesmos e ao uso dos mesmos no tratamento e/ou prevenção de doenças neurodegenerativas.

Description

[0001] A presente invenção se refere a novos sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina e solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, seu preparo, composições farmacêuticas contendo os mesmos e o uso dos mesmos no tratamento e/ou prevenção de doenças neurodegenerativas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin- 1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, que possui a estrutura de Fórmula I:

pertence a uma família de derivados de 1,4-bis(3- aminopropil)piperazina anteriormente descritos no documento WO2006/051489 e que são úteis para o tratamento e/ou prevenção de doenças neurodegenerativas.

[0003] A forma de base livre deste composto apresenta problemas de estabilidade a longo prazo, provavelmente em virtude de oxidações que ocorrem no anel piperazina. Além disso, a forma de base livre não cristaliza. Em termos de desenvolvimento farmacêutico, formas cristalinas de ingredientes ativos são, na verdade, preferidas. Em geral, elas superam os problemas de estabilidade e estão abertas a processos de cristalização e/ou recristalização que são adequados para purificação em escala industrial, alta reprodutibilidade de lote para lote, em particular em relação à cristalinidade.

[0004] Embora se saiba que a salificação de uma molécula farmaceuticamente ativa (PAM) possa melhorar suas propriedades físico-químicas, a seleção de um sal adequado continua a ser um processo complexo. Na verdade, melhora das propriedades físico-químicas vai muito além de obtenção de materiais sólidos estáveis. Estes sólidos devem compreender uma fase cristalizada que tem uma boa cristalinidade e uma morfologia definida. Em outros aspectos, as formas salinas podem conferir outros benefícios, tal como melhorar a solubilidade em água, mas também pode ser igualmente prejudicial em virtude da higroscopicidade, problemas de estabilidade ou toxicidade intrínseca. Consequentemente, a seleção do sal não pode ser feita de forma arbitrária e garantias em estudos aprofundados em primeiro lugar.

[0005] O sal oxalato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, que, a propósito, foi reportado no documento WO2006/051489, supera parcialmente as desvantagens mencionadas acima encontradas com a base livre. No entanto, 4 equivalentes de ácido oxálico são necessários para se obter o sal oxalato como um pó estável. Consequentemente, a porcentagem em peso da molécula farmaceuticamente ativa com sais de oxalato cai para tão baixo quanto 54%. A quantidade de fármaco a ser administrada para uma determinada dose de PAM é, assim, significativamente aumentada.

[0006] Além disso, oxalatos não são considerados como um dos sais mais farmaceuticamente aceitáveis. Sais oxalato são, em determinados casos, nefrotóxicos, por exemplo, oxalato de naftidofurila é conhecido por causar cristalúria por oxalato de cálcio e, assim, cálculos renais em pacientes idosos. Além disso, em virtude da baixa solubilidade do oxalato de cálcio, concentração aumentada de oxalato de cálcio em fluidos corporais, incluindo urina (hiperoxalúria) pode levar ao depósito de oxalato de cálcio (oxalose) no tecido renal (nefrocalcinose) ou trato urinário (urolitíase). A oxalose pode envolver diversos órgãos quando os rins não conseguem depurar o oxalato de cálcio. Os depósitos em vasos sanguíneos podem causar úlceras dolorosas na pele que não cicatrizam, depósitos na medula óssea causam anemia e depósitos no coração causam anormalidades do ritmo cardíaco ou mau funcionamento do coração. Os pacientes que sofrem de doenças neurodegenerativas são geralmente idosos e sofrem de outras patologias para as quais eles recebem outros medicamentos. Seus rins, portanto, já são altamente solicitados para a excreção dos medicamentos tomados por esses pacientes os quais, por sinal, estão menos conscientes quanto às sensações de sede e, portanto, propensos à desidratação. O excesso de oxalato de cálcio é eventualmente excretado em pacientes que têm rins saudáveis e que bebem muita água. O excesso de oxalato de cálcio é, de fato, um problema real em terapia, especialmente para idosos. Além disso, os tratamentos de doenças neurodegenerativas são muitas vezes crônicos, durante longos períodos de tempo, se não ao longo da vida. A Requerente considerou que, em virtude de seu potencial de toxicidade para os rins e vias urinárias, sais oxalato acrescentariam um encargo indevido para pacientes já debilitados por sua condição. Assim, a Requerente considerou sais oxalato como farmaceuticamente inaceitáveis, especialmente uma vez que a N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina requer 4 equivalentes do contra-íon de sal para permanecer estável. Portanto, embora os sais oxalato permitam a obtenção de materiais sólidos estáveis, eles implicam no risco de efeitos colaterais tóxicos.

[0007] Ainda há, portanto, uma necessidade na técnica por sais estáveis, cristalinos e não higroscópicos de N-(3- (4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina que não apresentam os inconvenientes mencionados acima em termos de formação de sal e toxicidade.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0008] A presente invenção se baseia nas descobertas inesperadas de que os sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina fornecem pós cristalinos estáveis de fluxo livre, os quais não são higroscópicos e satisfazem os critérios exigentes apresentados acima.

[0009] A invenção se refere, assim, a um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il) propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

[0010] Sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina e solvatos dos mesmos são obtidos na forma de pós que têm uma fase cristalina com boa cristalinidade e morfologia definida. Os sais sulfato da invenção são, além disso, especialmente adequados para o preparo de composições farmacêuticas contendo os mesmos. Eles são farmaceuticamente aceitáveis e, até onde a Requerente saiba, não estão associados a qualquer toxicidade intrínseca de qualquer tipo. A este respeito, a Requerente realizou vários estudos crônicos in vivo com sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il) propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina e não observou qualquer evento de toxicidade inesperado até o momento.

[0011] Além disso, quando comparado com outros sais, tais como sais oxalato, o menor peso molecular dos íons sulfato permite um aumento da proporção em peso de N-(3-(4- (3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo [d]imidazol-2-amina em relação ao peso total do sal do mesmo. Por exemplo, a porcentagem em peso de PAM com sais dissulfureto é de 69%. Portanto, quando comparado com o sal oxalato, a quantidade de sal sulfato necessária para uma determinada dose de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina é reduzida. Isto, por sua vez, diminui a quantidade de produto administrado a um paciente e, consequentemente, reduz os custos de produção das composições farmacêuticas que contêm N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-amina. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0012] Os compostos da invenção são sais sulfato de N- (3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-amina e solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Mais particularmente, os sais sulfato da invenção e solvatos dos mesmos são aqueles de Fórmula II:

em que x é 0,5 a 4, de preferência x é 0,5 a 3,5, mais preferivelmente x é 0,9 a 3.

[0013] Em outras palavras, o sal sulfato de N-(3-(4- (3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina contém 0,5 a 4 equivalentes, de preferência 0,5 a 3,5 equivalentes, mais preferivelmente de 0,9 a 3 equivalentes de sulfato para uma molécula de N-(3- (4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina.

[0014] Em uma concretização, x é 2,5 a 3,5, de preferência 2,6 a 3,2, mais preferivelmente x é 2,8 a 3, ainda mais preferivelmente x é cerca de 2,9 ou x é 2,9.

[0015] Em outra concretização, x é 1,5 a 2,5, de preferência x é 1,5 a 2,1, mais preferivelmente x é 1,7 a 1,9, ainda mais preferivelmente x é cerca de 1,8 ou x é 1,8.

[0016] Em ainda outra concretização, x é 0,5 a 1,5, de preferência x é 0,7 a 1,3, mais preferivelmente x é 0,9 a 1,1, ainda mais preferivelmente x é cerca de 1 ou x é 1.

[0017] Em outra concretização, x é 1,7 a 2,3, de preferência x é 1,9 a 2,1, mais preferivelmente x é cerca de 2 ou x é 2.

[0018] Em uma concretização particular, o sal sulfato de Fórmula II está na forma de um solvato farmaceuticamente aceitável, de preferência um hidrato. A estequiometria do solvato está entre 0,5 a 5, de preferência entre 1 e 4, mais preferivelmente entre 1,5 e 2,5, ainda mais preferivelmente y é 1,8 a 2,2, ainda mais preferivelmente 2 ou cerca de 2 moléculas de solvato para uma molécula de sal sulfato de Fórmula II.

[0019] Solvatos farmaceuticamente aceitáveis preferidos de sais sulfato de Fórmula II são aqueles de Fórmula III:

em que: x é conforme definido acima na Fórmula II, e y é 0,5 a 5, de preferência y é 1 a 4, mais preferivelmente y é 1,5 a 2,5, ainda mais preferivelmente y é 1,8 a 2,2, ainda mais preferivelmente y é cerca de 2 ou y é 2.

[0020] Os compostos preferidos de Fórmula III são aqueles nos quais x é 0,5 a 1,5, de preferência 0,8 a 1,2, mais preferivelmente x é 0,9 a 1,1, ainda mais preferivelmente x é cerca de 1 ou x é 1.

[0021] Os compostos particularmente preferidos da invenção são compostos de Fórmula III em que x é cerca de 1 e y é cerca de 2 ou x é 1 e y é 2.

[0022] A Requerente demonstrou que um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-amina e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo são úteis para retificar o metabolismo da Proteína Precursora de Amiloide (APP) em quatro pontos essenciais: 1) aumentar os fragmentos carbóxi terminais de APP (APP-CTFs) os quais todos possuem em comum os últimos 50 aminoácidos da APP e especialmente aqueles que possuem atividades fisiológicas potenciais, tais como as α-stubs (APP-CTF alfa) e as Y—stubs (APP-CTF gama ou AICD para o domínio intracelular de APP), 2) aumentar a secreção de sAPP α que apresenta propriedades neuroprotetoras/neurotróficas, 3) diminuir a produção de subprodutos neurotóxicos da APP, ou seja, peptídeos β-amiloides (Aβ), especialmente em sua forma x-42, 4) sem modificar a expressão de APP e na ausência de neurotoxicidade.

[0023] Os sais sulfato da invenção e solvatos dos mesmos são, na verdade, úteis para orientar o metabolismo de APP em direção a vias não amiloidogênicas no córtex frontal e hipocampo.

[0024] A Requerente também demonstrou que um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina e solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo são úteis para alterar a fosforilação da proteína Tau patológica, ao mesmo tempo em que alivia processos de estresse oxidativo. As proteínas Tau interagem com a tubulina para estabilizar os microtúbulos e promover a montagem da tubulina em microtúbulos, a estabilidade de microtúbulos sendo controlada por isoformas e fosforilação. Patologias pela Tau compreendem mecanismos que levam a alterações anormais de proteínas Tau associadas a microtúbulos, agregação e acúmulo progressivo em material fibrilar no interior de neurônios em degeneração para formar os assim denominados emaranhados neurofibrilares (NFT).

[0025] Além disso, e ao contrário de outros sais, suas propriedades físico-químicas são especialmente úteis em relação à formulação ou segurança, solubilidade, estabilidade, cristalinidade, morfologia e toxicidade do fármaco.

[0026] Os sais sulfato da invenção são, assim, úteis como um medicamento, em particular para o tratamento ou prevenção de doenças neurodegenerativas e todas as doenças nas quais uma disfunção do metabolismo de APP é observado, incluindo, mas não limitado a, doença de Alzheimer, angiopatias amiloides, demência com corpos de Lewy (DLB) e síndrome de Down.

[0027] Os sais sulfato da invenção são, assim, úteis como um medicamento, em particular para o tratamento ou prevenção de doenças neurodegenerativas e todas as doenças nas quais uma disfunção da fosforilação de proteínas Tau é observada, incluindo, porém sem limitações, taupatias, tal como demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17.

[0028] Consequentemente, a invenção também se refere a um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido aqui, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença selecionada de doenças neurodegenerativas, incluindo doença de Alzheimer, demência com corpos de Lewy (DLB), esclerose lateral amiotrófica (ALS) com demência frontotemporal, miopatia por corpos de inclusão com doença de Paget dos ossos e/ou demência frontotemporal (IBMPFD), degeneração frontotemporal lobar, sinucleopatias, doença de Huntington e doença de Parkinson, amiloidopatias, incluindo angiopatias amiloides, taupatias, incluindo demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17, doenças neuromusculares com inclusões de proteína, bem como doenças do desenvolvimento, incluindo síndrome de Down. De preferência, a doença é selecionada de doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS) com demência frontotemporal, miopatia por corpos de inclusão com doença de Paget dos ossos e/ou demência frontotemporal (IBMPFD), degeneração frontotemporal lobar, sinucleopatias, doença de Huntington, amiloidopatias, incluindo angiopatias amiloides, taupatias, incluindo demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17. Mais preferivelmente, a doença é selecionada de doença de Alzheimer, sinucleopatias, amiloidopatias, incluindo angiopatias amiloides, e taupatias, incluindo demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17. Ainda mais preferivelmente, a doença é selecionada de doença de Alzheimer e taupatias, incluindo demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17.

[0029] Em outros termos, a invenção também fornece um método de tratamento e/ou prevenção de uma doença selecionada de doenças neurodegenerativas, amiloidopatias, taupatias e doenças do desenvolvimento, em particular aquelas citadas acima, bem como concretizações das mesmas, compreendendo administração, a um paciente que precisa do mesmo, de uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um sal sulfato de N- (3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme descrito aqui. Em uma concretização particular, a doença é selecionada de doença de Alzheimer e taupatias.

[0030] Em uma concretização particular, a invenção se refere também a um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo conforme definido aqui para uso no retardo, em um paciente, do aparecimento de uma doença selecionada de doenças neurodegenerativas, incluindo doença de Alzheimer, demência com corpos de Lewy (DLB), esclerose lateral amiotrófica (ALS) com demência frontotemporal, miopatia por corpos de inclusão com doença de Paget dos ossos e/ou demência frontotemporal (IBMPFD), degeneração frontotemporal lobar, sinucleopatias, doença de Huntington e doença de Parkinson, amiloidopatias, incluindo angiopatias amiloides, taupatias, incluindo demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17, doenças neuromusculares com inclusões de proteína, bem como doenças do desenvolvimento, incluindo síndrome de Down. De preferência, a doença é selecionada de doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS) com demência frontotemporal, miopatia por corpos de inclusão com doença de Paget dos ossos e/ou demência frontotemporal (IBMPFD), degeneração frontotemporal lobar, sinucleopatias, doença de Huntington, amiloidopatias, incluindo angiopatias amiloides, taupatias, incluindo demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17. Mais preferivelmente, a doença é selecionada de doença de Alzheimer, sinucleopatias, amiloidopatias, incluindo angiopatias amiloides, e taupatias, incluindo demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17. Ainda mais preferivelmente, a doença é selecionada de doença de Alzheimer e taupatias, incluindo demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17.

[0031] Em outros termos, a invenção fornece um método para retardar, em um paciente, o aparecimento de uma doença selecionada de doenças neurodegenerativas, amiloidopatias, taupatias e doenças do desenvolvimento, em particular aquelas citadas acima, bem como concretizações do mesmo, compreendendo administração, a um paciente que precisa do mesmo, de uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um sal sulfato da invenção ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma concretização particular, a doença é selecionada de doença de Alzheimer e taupatias.

[0032] De acordo com outra característica da presente invenção, é fornecido um método para modulação do metabolismo de APP em um paciente, de preferência, um animal de sangue quente e, ainda mais preferivelmente, um ser humano que precisa de tal tratamento, compreendendo administração, ao dito paciente, de uma quantidade eficaz de um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina da presente invenção ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0033] De acordo com ainda outra característica da presente invenção, é fornecido um método para alterar a fosforilação de proteína tau patológica, ao mesmo tempo em que alivia processos de estresse oxidativo em um paciente, de preferência um animal de sangue quente e, ainda mais preferivelmente, um ser humano que precisa de tal tratamento o qual compreende administração, ao dito paciente, de uma quantidade eficaz do sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina da presente invenção ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0034] A invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um sal sulfato de N-(3-(4-(3- (di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo conforme descrito aqui e pelo menos um veículo, diluente, excipiente e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável. Em uma concretização, a invenção abrange também composições farmacêuticas que contêm, além de um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo, agentes terapêuticos e/ou ingredientes ativos adicionais.

[0035] De acordo com uma concretização, os sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina da invenção, bem como seus solvatos farmaceuticamente aceitáveis, podem ser administrados como parte de uma terapia combinada. Assim, estão incluídas, dentro do âmbito da presente invenção, concretizações que compreendem a coadministração de composições e medicamentos que contêm, além de um sal sulfato da presente invenção ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo como ingrediente ativo, agentes terapêuticos e/ou ingredientes ativos adicionais. Tais regimes de múltiplos fármacos, muitas vezes referidos como "terapia combinada", podem ser usados no tratamento e/ou prevenção de qualquer uma das doenças ou condições mediadas por ou associadas à modulação do metabolismo de APP. O uso de tais combinações de agentes terapêuticos é especialmente pertinente em relação ao tratamento das doenças neurodegenerativas mencionadas acima em um paciente que precisa de tratamento ou em risco de se tornar tal paciente.

[0036] Além do requisito de eficácia terapêutica, a qual pode requerer o uso de agentes ativos além dos sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, pode haver justificativas adicionais as quais obrigam ou recomendam fortemente o uso de combinações de fármacos que envolvem ingredientes ativos os quais representam terapia adjuvante, ou seja, que complementam e suplementam a função desempenhada pelos sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina da presente invenção ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Agentes terapêuticos suplementares adequados usados para a finalidade de tratamento auxiliar incluem medicamentos que, em vez de tratar e/ou prevenir diretamente uma doença ou condição mediada por ou associada ao metabolismo de APP, tratam doenças ou condições que resultam diretamente ou acompanham indiretamente a doença ou condição modulada pelo metabolismo básico ou subjacente de APP.

[0037] De acordo com outra característica da presente invenção, um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser usado em terapia combinada com outros fármacos usados para o tratamento de doença de Alzheimer. Mais particularmente, o composto de Fórmula II, bem como o solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, podem ser usados como terapia adjuvante em combinação com inibidores de acetilcolinesterase, incluindo, porém sem limitações, donepezil (CAS N° 120014-06-4) e sais e solvatos do mesmo, galantamina (CAS N° 357-70-0) e sais e solvatos da mesma, rivastigmina (CAS N° 123441-03-2) e sais e solvatos da mesma, tacrina (CAS N° 321-64-2) e sais e solvatos da mesma, ou em combinação com antagonistas do receptor de glutamato NMDA, incluindo, porém sem limitações, memantina (CAS N° 19982-082) e sais e solvatos da mesma, ou em combinação com um inibidor duplo de acetilcolinesterase e antagonista do receptor de glutamato NMDA, incluindo, porém sem limitações, huperzina A (CAS N° 102518-79-6) e sais e solvatos da mesma, ou em combinação com agonistas de peptídeo 1 semelhante ao glucagon (GLP-1), incluindo, porém sem limitações, liraglutida (CAS N° 204656-20- 2) e sais e solvatos da mesma, exenatida (CAS N° 141732-76-5) e sais e solvatos da mesma, ou em combinação com retinoides, incluindo, porém sem limitações, acitretina (CAS N° 55079-83-9) e sais e solvatos da mesma, ou em combinação com bloqueadores de canal de cálcio (CCB), incluindo, porém sem limitações, nilvadipina (CAS N° 75530-68-6) e sais e solvatos da mesma, nitrendipina (CAS N° 39562-70-4) e sais e solvatos da mesma, nimodipina (CAS N° 66085-59-4) e sais e solvatos da mesma, ou em combinação com bloqueadores do receptor de angiotensina, incluindo, porém sem limitações, valsartana (CAS N° 13786253-4) e sais e solvatos da mesma, ou em combinação com os antibióticos de tetraciclina, incluindo, porém sem limitações, minociclina (CAS N° 10118-90-8) e sais e solvatos da mesma.

[0038] Assim, os métodos de tratamento e composições farmacêuticas da presente invenção podem empregar um sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo em monoterapia. No entanto, os ditos métodos e composições também podem ser usados em terapia múltipla na qual um ou mais sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il) propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são coadministrados em combinação com um ou mais de outros agentes terapêuticos.

[0039] Na concretização descrita acima, combinações de sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou um solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos e outros agentes ativos terapêuticos podem ser administrados, em termos de formas de dosagem, quer separadamente ou em conjunto uns com os outros e, em termos de seu momento de administração, tanto em série ou simultaneamente. Assim, a administração de um agente componente pode ser antes, simultaneamente ou subsequentemente à administração do(s) outro(s) agente(s) componente(s).

[0040] Em geral, para uso farmacêutico, os sais sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos podem ser formulados como uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um sal sulfato da invenção ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo e pelo menos um veículo, diluente, excipiente e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável e, opcionalmente, um ou mais outros agentes terapêuticos e/ou ingredientes ativos.

[0041] Por meio de exemplos não limitativos, a composição farmacêutica pode estar em uma forma de dosagem adequada para administração oral, para administração parenteral (tal como através de injeção intravenosa, intramuscular ou subcutânea ou infusão intravenosa), para administração tópica (incluindo ocular), para administração por inalação, através de um emplastro para a pele, através de um implante, através de um supositório, etc. Tais formas de administração adequadas - as quais podem ser sólidas, semissólidas ou líquidas, dependendo do modo de administração - bem como métodos e veículos, diluentes e excipientes para uso no preparo das mesmas, serão evidentes para aqueles versados na técnica; referência é feita à última edição de Remington's Pharmaceutical Sciences. As composições farmacêuticas podem ser formuladas na forma sólida e novamente dissolvidas ou suspensas antes de uso.

[0042] Alguns exemplos preferidos, mas não limitativos, de formas de dosagem incluem comprimidos, pílulas, pós, pastilhas, sachês, hóstias, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis, unguentos, cremes, loções, cápsulas gelatinosas moles e duras, supositórios, gotas, soluções injetáveis estéreis e pós embalados estéreis (que são, geralmente, reconstituídos antes de uso) para administração na forma de bolo e/ou administração contínua, as quais podem ser formuladas com veículos, excipientes e diluentes que são adequados per se para tais formulações, tais como lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, polietileno glicol, celulose, água (estéril), metil celulose, metil e propil-hidroxibenzoatos, talco, estearato de magnésio, óleos comestíveis, óleos vegetais e óleos minerais ou misturas adequadas dos mesmos. As composições farmacêuticas podem conter, opcionalmente, outras substâncias que são comumente usadas em formulações farmacêuticas, tais como agentes lubrificantes, agentes umectantes, agentes emulsificantes e agentes de suspensão, agentes de dispersão, agentes de desintegração, agentes de estabilização, agentes isotônicos, agentes de volume, materiais de enchimento, agentes conservantes, edulcorantes, agentes flavorizantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes, agentes antibacterianos e/ou agentes antifúngicos, tais como parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, agentes de distribuição, reguladores de fluxo, agentes de liberação, etc. As composições também podem ser formuladas de modo a permitir liberação rápida, sustentada ou retardada do(s) composto(s) ativo(s) contido(s) nas mesmas.

[0043] As composições farmacêuticas da invenção estão, de preferência, em uma forma de dosagem unitária e podem ser adequadamente embaladas, por exemplo, em uma caixa, blister, frasco, garrafa, sachê, ampola ou em qualquer outro contentor ou recipiente adequado de dose única ou múltiplas doses (o qual pode ser apropriadamente rotulado); opcionalmente com um ou mais folhetos contendo informação e/ou instruções para uso do produto. Geralmente, tais unidades de dosagem conterão entre 0,05 e 1000 mg e, normalmente, entre 1 e 500 mg de pelo menos um composto da invenção, por exemplo, cerca de 10, 25, 50, 100, 200, 300 ou 400 mg por unidade de dosagem.

[0044] Em geral, dependendo da condição a ser prevenida ou tratada e da via de administração, o composto ativo da invenção normalmente será administrado entre 0,01 a 100 mg por quilograma, mais frequentemente entre 0,1 e 50 mg, tal como entre 1 e 25 mg, por exemplo cerca de 0,5, 1, 5, 10, 15, 20 ou 25 mg por quilograma de peso corporal do paciente por dia, que pode ser administrado como uma única dose diária, dividida em uma ou mais doses diárias ou de forma essencialmente contínua, por exemplo, usando uma infusão por gotejamento.

[0045] Todas as referências a compostos de Fórmula II incluem referências aos solvatos, em particular compostos de Fórmula III, complexos multicomponentes e cristais líquidos dos mesmos.

[0046] Os compostos descritos ao longo de todo o presente Pedido de Patente foram denominados usando o ChemDraw® Ultra versão 12.0 (CambridgeSoft, Cambridge, MA, EUA).

[0047] N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin- 1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina pode ser obtida conforme descrito no documento WO2006/051489. Os sais sulfato e solvatos dos mesmos podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos na técnica, tais como aqueles que envolvem precipitação, cristalização, recristalização, liofilização, transferência de fase ou resinas de troca iônica.

DEFINIÇÕES

[0048] O termo "solvato" é usado aqui para descrever um composto da presente invenção que contém quantidades estequiométricas ou subestequiométricas de uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, tal como etanol. O termo "hidrato" se refere a quando o dito solvente é água. As moléculas de solventes farmaceuticamente aceitáveis podem ser co-cristalizadas com o composto da invenção e/ou estar presentes nas fases cristalinas e/ou amorfas de sólidos das mesmas e/ou estar adsorvidas nas mesmas.

[0049] O termo "doença de Alzheimer", conforme usado aqui, designa todos os tipos de doença de Alzheimer, incluindo, porém sem limitações, os tipos esporádico e familiar.

[0050] O termo "miopatia por corpo de inclusão com doença de Paget dos ossos e/ou demência frontotemporal (IBMPFD)", conforme usado aqui, é um tipo de miopatia, mais especificamente uma doença multissistêmica hereditária com início na fase adulta, que afeta os músculos, ossos e o sistema nervoso central. Os pacientes com esta condição podem se apresentar com uma variedade de manifestações, compreendendo miopatia por corpos de inclusão, doença de Paget dos ossos, demência frontotemporal e/ou esclerose lateral amiotrófica (doença de Lou Gehrig).

[0051] O termo "demência com corpos de Lewy (DLB)", conforme usado aqui, também conhecida como demência de corpos de Lewy, doença de corpo de Lewy difusa, doença de corpo de Lewy cortical e demência senil de tipo Lewy, é um tipo de demência estreitamente associada tanto à doença de Alzheimer quanto à doença de Parkinson. Ela se caracteriza pela presença de corpos de Lewy, aglomerados de proteína alfa- sinucleína e ubiquitina nos neurônios, detectáveis em histologia do cérebro post mortem.

[0052] O termo "sinucleopatias", conforme usado aqui, significa uma doença do sistema nervoso central caracterizada por depósitos positivos para alfa-sinucleína nos neurônios.

[0053] O termo "angiopatias amiloides", conforme usado aqui, significa doenças relacionadas a depósitos de amiloide que se formam nas paredes dos vasos sanguíneos do sistema nervoso central.

[0054] O termo "taupatias", conforme usado aqui, significa doenças neurodegenerativas associadas à agregação patológica da proteína tau no cérebro humano.

[0055] O termo "doenças do desenvolvimento", conforme usado aqui, significa qualquer condição que apareça em algum estágio de desenvolvimento de uma criança e atrasam ou impedem o desenvolvimento de uma ou mais funções fisiológicas, tais como habilidades de linguagem. Doenças do desenvolvimento incluem doenças psicológicas e físicas. Exemplos não limitativos de doenças do desenvolvimento são transtorno de espectro autista (ASD), síndrome de Down, transtorno de déficit de atenção (ADD) e transtorno de déficit de atenção com hiperatividade (ADHD).

[0056] O termo "paciente" se refere a um animal de sangue quente, mais preferivelmente um ser humano, o qual está esperando o recebimento de ou está recebendo tratamento médico ou é/será objeto de um procedimento médico.

[0057] O termo "ser humano" se refere a um indivíduo de ambos os sexos e em qualquer fase de desenvolvimento (isto é, recém-nascido, criança, jovem, adolescente, adulto).

[0058] Os termos "tratar", "tratando" e "tratamento", conforme usados aqui, se destinam a incluir aliviar, atenuar ou revogar uma condição ou doença e/ou seus sintomas concomitantes.

[0059] Os termos "prevenir", "prevenindo" e "prevenção", conforme usados aqui, se referem a um método para retardar ou impedir o aparecimento de uma condição ou doença e/ou seus sintomas concomitantes, impedir que um paciente adquira uma condição ou doença ou reduzir o risco de um paciente de adquirir uma condição ou doença.

[0060] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" (ou, mais simplesmente, uma "quantidade eficaz"), conforme usado aqui, significa a quantidade de agente ativo ou ingrediente ativo (por exemplo, N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina) que é suficiente para obter o efeito terapêutico ou profilático desejado no paciente ao qual ele é administrado.

[0061] O termo "administração", ou uma variante do mesmo (por exemplo, "administrar"), significa fornecer o agente ativo ou ingrediente ativo (por exemplo, N-(3-(4-(3- (di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina) individualmente ou como parte de uma composição farmaceuticamente aceitável ao paciente no qual a condição, sintoma ou doença deve ser tratada ou prevenida.

[0062] Por "farmaceuticamente aceitável", entenda-se que os ingredientes de uma composição farmacêutica são compatíveis uns com os outros e não prejudiciais para o paciente da mesma.

[0063] O termo "veículo farmacêutico", conforme usado aqui, significa um carreador ou meio inerte usado como solvente ou diluente no qual o agente farmaceuticamente ativo é formulado e/ou administrado. Exemplos não limitativos de veículos farmacêuticos incluem cremes, géis, loções, soluções e lipossomas.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0064] A Figura 1 mostra o espectro de DSC do sal tartarato (1 eq) de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0065] A Figura 2 mostra o espectro de DSC do sal fumarato (1 eq) de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0066] A Figura 3 mostra o espectro de DSC do sal oxalato (2 eq) de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0067] A Figura 4 mostra o espectro de DSC do sal oxalato (3 eq) de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0068] A Figura 5 mostra o espectro de DSC do sal oxalato (4 eq) de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0069] A Figura 6 mostra o espectro de DSC do sal sulfato (1 eq) de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0070] A Figura 7 mostra o espectro de DSC do sal sulfato (2 eq) de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0071] A Figura 8 mostra o difratograma de XRPD de 4 eq de sal oxalato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina.

[0072] A Figura 9 mostra o difratograma de XRPD de 2,9 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina do Exemplo 1.

[0073] A Figura 10 mostra o difratograma de XRPD de 1,8 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina do Exemplo 2 (gráfico de maior intensidade) sobreposto com aquele de 2,9 eq de sal sulfato de N-(3-(4- (3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il) propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina do Exemplo 1 (gráfico de menor intensidade).

[0074] A Figura 11 mostra o difratograma de XRPD de 1 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina do

Exemplo 3.

[0075] A Figura 12 mostra o difratograma de XRPD de 1 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina do Exemplo 3 (gráfico inferior) sobreposto com aquele de N- (3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)- 1H-benzo[d]imidazol-2-amina (base livre) (gráfico superior).

[0076] A Figura 13-a mostra fotografias de cristais de 1 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, conforme observável com um microscópio ótico na ampliação de X325 sob luz transmitida.

[0077] A Figura 13-b mostra fotografias de cristais de 1 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina, conforme observável com um microscópio ótico na ampliação de X325 sob luz polarizada cruzada.

[0078] A Figura 14 mostra o difratograma de XRPD de 2 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina do

Exemplo 4.

[0079] A Figura 15 mostra o difratograma de XRPD de 2 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina do Exemplo 4 (gráfico inferior) sobreposto com aquele de N-(3- (4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina (base livre) (gráfico superior).

[0080] A Figura 16 mostra a curva de secagem de DVS a 25°C de 1 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina do Exemplo 3.

[0081] A Figura 17 mostra gráficos de isoterma de sorção/dessorção por DVS a 25°C de 1 eq de sal sulfato de N- (3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil) - 1H-benzo[d]imidazol-2-amina do Exemplo 3.

[0082] A Figura 18 mostra gráficos de isoterma de sorção/dessorção por DVS a 25°C da forma di-hidratada de 1 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina do

Exemplo 3.

[0083] As Figuras 19-a a 19-d mostram os resultados obtidos para 1,8 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina no ensaio de metabolismo de APP in vitro. Em todas as figuras, os resultados são fornecidos para o controle (barra branca) e o sal sulfato da invenção em quatro concentrações (barras pretas). A Figura 19-a mostra os níveis de AICD, a Figura 19-b os níveis de CTFα, a Figura 19-c os níveis de Aβ1-42 e a Figura 19-d os níveis de sAPPα.

[0084] A Figura 20 mostra os níveis de CTFα medidos no córtex frontal de camundongos tratados com várias doses de 1,8 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina (ensaio de metabolismo de APP in vivo; tratamento agudo de 24 h). Os resultados são fornecidos para o veículo (barra branca) e o sal sulfato da invenção em cinco doses (barras cinza escuro).

[0085] A Figura 21 mostra os níveis de CTFα medidos no córtex frontal de camundongos tratados com várias doses de 2 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina ou do sal oxalato do documento WO2006/051489 (ensaio de metabolismo de APP in vivo; tratamento agudo de 24 h dos camundongos). Os resultados são fornecidos para o veículo (barra branca), o sal oxalato (barras cinza claro) e o sal sulfato da invenção (barras cinza escuro) a 6 mg/kg.

[0086] As Figuras 22-a e 22-b mostram os resultados obtidos para 1,8 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina no ensaio de metabolismo de APP in vivo (estudo crônico de 1 mês com ratos). Em todas as figuras, os resultados são fornecidos para o veículo (barra branca) e o sal sulfato da invenção em duas concentrações (barras cinza escuro). A Figura 22-a mostra os níveis de CTF no córtex frontal e a Figura 22-b os níveis de CTFβ no hipocampo.

[0087] As Figuras 23-a, 23-b e 23-c mostram os resultados obtidos para 1,8 eq de sal sulfato de N-(3-(4-(3- (di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo [d]imidazol-2-amina no ensaio de metabolismo de APP in vivo (estudo crônico de 3 meses com camundongos). Em todas as figuras, os resultados são fornecidos para o veículo (barra branca) e o sal sulfato da invenção em três concentrações (barras cinza escuro). A Figura 23-a mostra os níveis de AT100, a Figura 23-b os níveis de AT8 e A Figura 23-c os níveis de LPO.

EXEMPLOS DE QUÍMICA

[0088] As abreviaturas a seguir são usadas ao longo do presente Pedido de Patente: °C: graus Celsius, DIPE: di- isopropil éter, DSC: calorimetria de varredura diferencial, DVS: sorção/dessorção de vapor de água dinâmica, δ: desvios químicos de RMN expressos em ppm, eq: equivalente(s), Et: etila, g: grama(s), h: hora(s), HPLC: cromatografia líquida de alta eficiência, IPA: isopropanol, IR: infravermelho, L: litro(s), LCMS: HPLC acoplada a um espectrômetro de massa, M: mol/l, mM: mmol/L, μM: μmol/L, Me: metila, mg: miligrama(s), min: minuto(s), mL: mililitro(s), mol: mole(s), mmol: milimole(s), μmol: micromole(s), MS: Espectrometria de Massa, NMR: ressonância magnética nuclear, ppm: partes por milhão, RH: umidade relativa, rm: mistura de reação, rpm: rotação(ões) por minuto, rt: tempo de retenção, RT: temperatura ambiente (aproximadamente 15-25°C), RV: frasco de reação, THF: tetra-hidrofurano, XRPD: difração de pó por raios X, W: Watt(s).

[0089] Todas as temperaturas reportadas são expressas em graus Celsius (°C); todas as reações foram realizadas em temperatura ambiente (RT), a menos que indicado de outra forma.

[0090] Os procedimentos de configuração experimental ou de purificação que foram usados na presente invenção, quando não descritos em detalhes específicos, são assumidos como sendo conforme conhecido por aqueles versados na técnica e estão descritos em manuais de referência padrões, tais como: i) Gordon, A. J.; Ford, R. A. "The Chemist’s Companion - A Handbook of Practical Data, Techniques and References", Wiley: New York, 1972; ii) Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry, Pearson Prentice Hall: Londres, 1989.

Análise por HPLC Método A:

[0091] Os espectros de HPLC foram, tipicamente, obtidos em um sistema de HPLC Waters Alliance 2695. O instrumento inclui um amostrador automático, uma bomba quaternária e um detector de múltiplos comprimentos de onda no ultravioleta. A coluna cromatográfica usada foi uma Waters X-Terra RP18 de 5 μm, 4,6 x 250 mm.

[0092] O eluente usado foi, tipicamente, uma mistura de uma solução A (TFA a 0,1% em H2O) e solução B (TFA a 0,1% em MeOH).

[0093] Gradiente foi aplicado em uma taxa de fluxo de 1 ml por minuto como segue: gradiente realizado nas condições iniciais de 5% de solução B durante 0 minutos, aumentado linearmente para 40% de solução B em 50 min, mantido a 40% durante 5 min, retornado para as condições iniciais em 1 min e mantido durante 5 min.

Método B:

[0094] Em uma variante, as análises de HPLC foram realizadas de acordo com os parâmetros descritos na Tabela 1 abaixo. Tabela 1: Parâmetros de HPLC para método B

Análise por RMN

[0095] Espectros de 1H (300 MHz) foram registrados em um instrumento Bruker Advance DRX 300 MHz. Os desvios químicos são expressos em partes por milhão, (ppm, unidades δ). As constantes de acoplamento são expressas em Hertz (Hz). As abreviaturas para as multiplicidades observadas em espectros de RMN são como segue: s (singleto), d (dupleto), t (tripleto), q (quadrupleto), m (multipleto), br (largo).

Espectros de DSC. TA Instrument, DSC Q10.

[0096] Os espectros de DSC foram registrados em um instrumento TA DSC Q10 dentro de uma faixa de temperatura de -10°C a 300°C ou 400°C e com incrementos de 10°C.

Microscopia Ótica

[0097] Observação por microscopia ótica foi realizada em um microscópio LEICA DMIRB equipado com uma câmara digital e uma plataforma motorizada. Alguns grãos de pó são dispersos em uma placa de vidro com óleo mineral. Fotos foram tiradas com uma plataforma de análise de imagem da Microvision Instruments, tanto sob luz transmitida quanto luz polarizada.

Difração de Pó por Raios x

[0098] Análise de difração de pó por raios X (XRPD) é realizada em um difratômetro Brüker - AXS D8 Advance usando um anticatodo de cobre, um suporte de amostra de silício monocristalino e um detector sensível à posição. As condições de funcionamento do instrumento para aquisição do padrão de raios X estão descritas na Tabela 2. Tabela 2: Condições de funcionamento do instrumento para aquisição de padrões de raios X

[0099] A amostra de pó é dispersa sobre o suporte de amostra de silício de forma a evitar orientação preferida (cristais não aleatoriamente orientados) e assegurar o caráter plano da superfície do espécime.

Sorção Dinâmica de Vapor

[0100] Análises de sorção dinâmica de vapor (DVS) com água foram realizadas em uma incubadora DVS-Intrisic da SMS Ltda., equipada com o software DVS-Intrisic Control 1.0.

[0101] Uma amostra de cerca de 5 a 10 mg, colocada em um suporte de panela de alumínio, foi submetida a uma análise de ciclo completo (sorção seguido por dessorção) sob as condições descritas na Tabela 3. Tabela 3: Condições de funcionamento para análise DVS

[0102] A amostra foi pré-seca sob uma corrente de ar filtrado seco até que uma massa estável fosse obtida. A umidade relativa do ar foi, então, aumentada em incrementos de 5%. Em cada etapa, permitiu-se que a amostra aumentasse até que o equilíbrio fosse atingido (critério dm/dt), então, a umidade relativa foi aumentada ainda mais. A umidade relativa foi aumentada para 95%. Após equilíbrio neste estágio, a dessorção é iniciada de uma maneira gradual similar, deixando-se o peso da amostra estabilizar após cada etapa de diminuição incremental da umidade.

[0103] Os solventes e reagentes foram adquiridos e usados conforme recebido a partir de fornecedores comerciais, a menos que especificado de outra forma. Exemplo 1: Síntese de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, 2,9 eq de sal sulfato

[0104] Uma solução de ácido sulfúrico diluído em DIPE foi preparada mediante adição de 4 ml (0,0751mol) de ácido sulfúrico concentrado a 28 ml de (0,197 mol) de DIPE.

[0105] A uma suspensão de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina (16,1 g, 0,03756 mol) em DIPE (280 ml) foram adicionados gota a gota 32 ml da solução de ácido sulfúrico diluído descrita acima. Foi observado um ligeiro aumento de temperatura em torno de 10°C. A mistura de reação foi agitada em RT e se tornou límpida ao longo de uma hora. A solução branca resultante foi filtrada e recuperada. O pó branco obtido foi, então, seco sob vácuo a 50°C durante 48 horas. Dados analíticos HPLC (método A): Rt: 20,24 min. Análise elementar: calculado: % C = 48,06; % H = 7,74; N = 13,45; % S = 10,26; % O = 20,48 experimental: % C = 41,43; % H = 6,95; % N = 11,60; % S = 12,34; % O = 26,53. Exemplo 2: Síntese de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, 1,8 eq de sal sulfato

[0106] O composto do título foi preparado de acordo com um processo similar àquele descrito no Exemplo 1. Dados analíticos HPLC (método A): Rt: 29,207 min. RMN (D2O): δ (ppm): 7,2 (m, 4H, 2CH); 3,7 (b, 8H, 4CH2); 3,4-3,1 (m, 8H, 4CH2); 2,9 (m 4H, 2CH2); 2,3-1,9 (m, 6H, 2CH+2CH2); 0,85(d, 12H, 4CH3). Análise elementar: calculado: % C = 48,06; % H = 7,74; % N = 13,45; % S = 10,26; % O = 20,48% experimental: % C = 49,55; % H = 7,89; % N = 13,87; % S = 8,95; % O = 19,29. Exemplo 3: Síntese de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, 1 eq de sal sulfato

[0107] 3 ml de etanol foram adicionados a 99,6 mg de síntese de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, sendo obtida dissolução quase completa sob aquecimento a 70°C. Uma quantidade equimolar de uma solução aquosa de ácido sulfúrico a 0,5 M foi adicionada (465 μl) e dissolução completa foi observada. A solução é seca a vácuo a 70°C para proporcionar um resíduo sólido. O sólido é ressuspenso em IPA/EtOH em uma temperatura de 70°C para proporcionar uma suspensão de partículas finas; o volume do solvente foi, então, parcialmente reduzido sob vácuo. A suspensão foi deixada esfriar à temperatura ambiente. O sobrenadante foi removido e o pó foi seco sob vácuo durante 2 h a 70°C para produzir o composto do título em um rendimento de 89%.

[0108] Análise de HPLC (método B): Descobriu-se que a porcentagem de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina (base livre) no composto do título, determinada por meio de normalização externa, era de 83,4%. Este resultado foi consistente com a porcentagem teórica calculada: 81,4%. Exemplo 4: Síntese de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, 2 eq de sal sulfato

[0109] 3 ml de etanol foram adicionados a 101,7 mg de síntese de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1- il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, sendo obtida dissolução quase completa sob aquecimento a 70°C. Uma quantidade de dois molares de uma solução aquosa de ácido sulfúrico a 0,5 M foi adicionada (950 μl) e dissolução completa foi observada. A solução é seca a vácuo a 70°C para se obter um filme translúcido, no qual a cristalização do sal esperado ocorreu progressivamente. O sólido foi, então, ressuspenso em 3 ml de metanol para obter uma suspensão límpida, a qual é agitada a 60°C durante 15 minutos. 10 ml de IPA foram adicionados para finalizar a cristalização do sal e a suspensão resultante foi agitada a 80°C durante 30 minutos. A suspensão foi, então, deixada esfriar para a temperatura ambiente e armazenada de um dia para outro em temperatura subambiente. O sobrenadante foi removido do frasco e o pó seco em vácuo durante 2,5 horas a 70°C para proporcionar o composto do título em um rendimento de 71%.

[0110] Análise de HPLC (método B): Descobriu-se que a porcentagem de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil) piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina (base livre) no composto do título, determinada por meio de normalização externa, era de 65,8%. Este resultado foi consistente com a porcentagem teórica calculada: 68,6%.

[0111] Nenhuma instabilidade a longo prazo em virtude de oxidação, em particular oxidação no anel piperazina, foi observada com sais sulfato no estado sólido. Exemplo 5: Análise físico-química de diferentes sais

[0112] Os sais cloridrato, bromidrato, acetato, tartrato, fumarato, malato, oxalato e sulfato de N-(3-(4-(3- (di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo [d]imidazol-2-amina foram preparados de acordo com procedimentos similares àqueles descritos nos exemplos anteriores ou métodos convencionais de formação de sal bem conhecidos na técnica. Os resultados destas formações de sal são reportados na Tabela 4. Tabela 4: Resultados de formação de sal

1 Uma amostra pesada de sal cloreto foi deixada em repouso aberta ao ar. A dita amostra ganhou peso rapidamente e eventualmente se tornou deliquescente dentro de poucos segundos ou minutos, dependendo da RH ambiente. 2 Espectro de DSC não revelou qualquer endoterma, sendo, assim, característico de sólidos que carecem de uma fase cristalina. 3 Sal formado em EtOH/água.

[0113] Descobriu-se imediatamente que o sal cloreto era muito higroscópico, enquanto que os sais acetato não foram obtidos na forma sólida. Embora os sais tartarato e fumarato tenham sido obtidos como sólidos, análise DSC mostrou que eles não são cristalinos (vide Figuras 1 e 2). Tal deficiência pode resultar em variações de lote para lote em relação às formas sólidas. A reprodutibilidade de lote para lote é um critério essencial na síntese de substâncias medicamentosas, especialmente quando diferentes formas sólidas podem ter diferentes propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas. Consequentemente, sais tartarato e fumarato não são satisfatórios.

[0114] O sal malato foi obtido na forma de um pó; entretanto, ele possui um carbono assimétrico. Centros quirais complicam consideravelmente o desenvolvimento clínico, uma vez que cada estereoisômero precisa ser igualmente caracterizado como o estereoisômero ativo.

[0115] Com relação aos sais oxalato, 4 eq de contra- íons de oxalato são requeridos para obter pós cristalinos adequados. Os gráficos de DSC de sais oxalato (2 eq, 3 eq e 4 eq) são mostrados, respectivamente, nas Figuras 3, 4 e 5. Conforme mostrado pelos espectros de DSC, o sal tetraoxalato tem a endoterma melhor formada e definida. O requisito de ter de 4 equivalentes de um sal de oxalato é uma ressalva, uma vez que a porcentagem em peso da molécula ativa cai para tão baixo quanto 54%. A quantidade de fármaco a ser administrado para uma determinada dose de PAM é, assim, significativamente aumentada, bem como o risco de nefrotoxicidade associada aos oxalatos.

[0116] Ambos os sais sulfato precipitaram como sólidos. Descobriu-se que eles eram estáveis quando deixados abertos ao ar. Em contraste com o sal cloreto, nenhum problema de higroscopicidade foi observado. A análise por DSC (vide Figuras 6 e 7) revelou picos endotérmicos bem definidos, os quais são consistentes com sólidos que compreendem uma fase cristalina. Exemplo 6: Análise de XRPD dos sais oxalato e sulfato

[0117] O difratograma de XRPD de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina, 4 eq de sal oxalato, é mostrado na Figura 8. Na janela angular analisada, foram detectados alguns grandes raios de difração de baixa intensidade. O perfil de XPRD revela a presença de uma base de difusão elevada. Tal perfil de XPRD é característico de um pó que possui uma fase cristalina com pouca ou pobre cristalinidade (raios grandes) com a presença de uma fase amorfa (base de difusão elevada).

[0118] O perfil de difração de raios X para o sal sulfato do Exemplo 1 (vide Figura 9) mostra vários picos de difração bem definidos e acentuados entre 5 e 25° na escala 2-teta, o que indica que a forma sólida do dito sal sulfato compreende uma fase cristalina muito boa. O difratograma também apresenta uma base halo (entre 10 e 30°) que é interpretada como proveniente de uma fração amorfa presente no sólido. Comparação de perfis com o sal sulfato do Exemplo 2 revela muita sobreposição entre os vários picos de difração detectados (vide Figura 10).

[0119] O difratograma de XPRD do sal sulfato do Exemplo 3 (vide Figura 11) confirmou a boa cristalinidade deste sal com picos de difração numerosos, finos e bem definidos entre 4 e 30° 2θ e reportou um perfil de difração diferente da síntese de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin- 1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina (base livre). O perfil de XPRD deste sal foi comparado com aquele da base livre, ambos os perfis sobrepostos em um mesmo cromatograma (Figura 12) são consistentes com diferentes formas cristalinas entre o sal sulfato e a base livre. Estes resultados são consistentes com as observações por microscopia ótica. Na verdade, a alta birrefringência e a morfologia bem definida de tipo bastão das partículas, quando observadas sob luz transmitida (Figura 13a) e luz polarizada cruzada (Figura 13b), indicaram um sal sulfato de boa cristalinidade.

[0120] O difratograma de XPRD do sal sulfato do Exemplo 4 (vide Figura 14) confirmou a boa cristalinidade deste sal, com numerosos picos de difração entre 4 e 30° 2θ e reportou um perfil de difração diferente da síntese de N-(3-(4-(3- (di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina (base livre). O perfil de XPRD deste sal foi comparado com aquele da base livre, ambos os perfis sobrepostos em um mesmo cromatograma (Figura 15) são consistentes com diferentes formas cristalinas entre o sal sulfato e a base livre.

[0121] Como um resultado, os Exemplos 5 e 6 mostram claramente que os sais sulfato são superiores a qualquer outro sal de ácido, e aos sais oxalato, em particular. Sais sulfato não possuem higroscopicidade severa como os sais cloreto. Ao contrário dos sais brometo, eles cristalizam para fornecer materiais em pó. Sua cristalinidade é, na verdade, muito superior aos sais tartarato e fumarato. Assim como sais sulfato, o sal oxalato com uma estequiometria específica de 4 eq fornece sólidos que compreendem uma fase cristalina e uma fase amorfa. No entanto, os perfis de XRPD e microscopia ótica sob luz polarizada e transmitida revelaram que a fase cristalina de sais sulfato é melhor definida em termos de morfologia e cristalinidade do que aquela do sal oxalato. Além disso, os sais sulfato corrigem as deficiências de N-(3-(4-(3-(di- isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d] imidazol-2-amina (base livre), isto é, eles podem ser isolados em uma forma sólida tendo uma fase cristalizada com uma boa cristalinidade e não têm problemas óbvios de estabilidade. Além disso, eles ampliam as possibilidades de formulação deste PAM em virtude de sua solubilidade muito elevada em água. O sal de oxalato, 4 eq, não resolve completamente as deficiências da base livre em termos de cristalinidade e morfologia e é, de qualquer maneira, inferiore aos sais sulfato nestes aspectos. Aqueles versados na técnica ainda considerariam que um sal oxalato, 4 eq, pioraria as propriedades gerais do PAM de base livre, uma vez que ele contém altas quantidades de contra-íons de oxalato, os quais podem induzir à nefrotoxicidade grave. Exemplo 7: Perfil DVS de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino) propil)piperazin-1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, sal sulfato, 1 eq

[0122] A análise DVS foi realizada de acordo com o método descrito acima.

[0123] Os resultados são mostrados nas Figuras 16 e 17, que mostram a curva de secagem por DVS, bem como os gráficos de isoterma de DVS (traços de sorção/dessorção de vapor de água) após secagem preliminar do sal sulfato do Exemplo 3. Na Figura 17, a curva superior corresponde à fase de dessorção e a curva inferior à fase de sorção.

[0124] Mediante secagem a 25°C/RH de 0%, a amostra perdeu 0,18% de sua massa.

[0125] Mediante sorção, três intervalos de umidade relativa, correspondendo a diferentes taxas e comportamentos de sorção de água, foram observados a partir da variação de massa da amostra: - em RH de 0 a 80%: taxa de sorção contínua e lenta de água; absorção de água a 25°C/RH de 60% e 25°C/RH de 80% foi, respectivamente, de 0,7% e 1,5% comparado com a massa da amostra obtida após secagem inicial em RH de 0%; - em RH de 80 a 90%: taxa de sorção de água rápida e quase constante; captação de água a 25°C/RH de 90% foi de 9,7% comparado com a massa da amostra obtida após secagem inicial em RH de 0%; - a sorção de água, então, aumentou ainda mais e captação de vapor de água a 25°C/RH de 95% foi de 19,4% comparado com a massa da amostra obtida após secagem inicial em RH de 0%.

[0126] Mediante dessorção, foram observados três intervalos de umidade relativa, correspondendo a diferentes taxas e comportamentos de sorção de água: - em RH de 95 a 90%: uma rápida diminuição da taxa de água residual com 10% permanecendo a 25°C/RH de 75% comparado com a massa da amostra obtida após secagem inicial em RH de 0%; - em RH de 75 a 10%: a amostra reteve a água "adsorvida", com uma histerese forte e quase constante (até 6,7% a 25°C/RH de 75%); - em RH de 10 a 0%: a amostra perdeu parte de sua água; a quantidade restante de água foi de 4,6% a 25°C/RH de 0%, comparado com a massa da amostra obtida após secagem inicial em RH de 0%; neste estágio, a massa da amostra foi estabilizada e, assim, ficou em equilíbrio com o ambiente circundante.

[0127] Com base nos critérios comumente usados (isto é, um composto é dito higroscópico se ele apresenta mais de 2% em peso de absorção de água a 25°C/RH de 60%), o sal sulfato do Exemplo 3 não era higroscópico a 25°C/RH de 60%, com apenas uma absorção global de massa neste estágio.

[0128] Dada a rápida absorção de água em umidade relativa de 80%, bem como a forte histerese (6 a 6,7% de água restante em RH de 80 a 10% mediante dessorção), o sal sulfato do Exemplo 3, originalmente obtido como sua forma não solvatada, converteu-se para uma forma di-hidratada em elevada RH. A absorção teórica de água para a forma di- hidratada de N-(3-(4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin- 1-il)propil)-1H-benzo[d]imidazol-2-amina, 1 eq, sal sulfato do Exemplo 3 é de 6,8% e, em linha com os 6,7% experimentalmente determinados.

[0129] Ao final do primeiro ciclo de DVS descrito acima, a mesma amostra foi submetida a um segundo ciclo de DVS com uma segunda fase de sorção e uma segunda fase de dessorção. Os resultados são mostrados na Figura 18. Tanto a segunda fase de sorção quanto a segunda fase de dessorção eram idênticas à primeira curva da fase de dessorção obtida durante o primeiro ciclo de DVS. Na verdade, conforme pode ser visto na Figura 18, a fase de sorção e a fase de dessorção se sobrepõem uma à outra. A forma di-hidratada de N-(3-(4- (3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina, 1 eq, sal sulfato do Exemplo 3, a qual foi obtida além de uma RH de 80% a 25°C durante o primeiro ciclo era, assim, estável e não higroscópica. EXEMPLOS BIOLÓGICOS

Ensaio de metabolismo de APP in vitro

[0130] Este ensaio foi realizado usando células SH- 5Y5Y (linhagem de células de neuroblastoma humano que superexpressam APP humana de tipo selvagem), que foram tratadas durante 24 h com o sal sulfato do Exemplo 2. Este ensaio foi realizado em quatro concentrações diferentes de compostos de 0,3, 1, 3 e 10 μM. A quantificação de diferentes metabólitos foi obtida por meio de análise Western blot. CTFα, CTFβ e AICD foram analisados usando anticorpo anti- actina ((I-19) (SC-1616 da Santa Cruz Biotechnology, 1:1000 a partir de 200 μg/ml de estoque) como um controle interno e anticorpo anti-C de APP term (1:250000 em tampão de lavagem). As concentrações de proteína foram determinadas pelo BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific). As amostras (20 μg de proteína total) foram separadas por SDS-PAGE a 16% de acordo com o peso molecular de cada proteína e transferidas para membranas de nitrocelulose.

[0131] Os resultados são mostrados nas Figuras 19-a, 19-b, 19-c e 19-d. Eles mostram níveis aumentados dependentes da dose de AICD, CTFα e sAPPα e nível reduzido de Aβ1-42.

[0132] O sal sulfato do Exemplo 2 induz, assim, um aumento significativo de metabolismo de APP através da via não amiloidogênica, concomitante com uma redução na formação de metabolitos deletérios envolvidos na formação de placas amiloides. Estes resultados são um tanto mais notáveis, uma vez que Aβ1-42 é um dos subprodutos mais prejudiciais do metabolismo de APP em relação à formação de placas amiloides. Além disso, o peptídeo sAPPα não induz à formação de placa amiloide e é bastante reconhecido como tendo efeitos neuroprotetores benéficos.

[0133] Além disso, observou-se que nenhuma citotoxicidade foi encontrada para este sal sulfato, descobriu-se que sua CC50 sobre a linhagem de células SH-5Y5Y era maior do que 30 μM. A CC50 é definida aqui como a concentração na qual 50% das células plaqueadas permanecem vivas.

Ensaio de metabolismo de APP in vivo

[0134] Experimentos in vivo foram realizados em camundongos fêmeas C57BL6 de quatro meses de idade ou ratos Sprague Dawley de 2 meses de idade.

Tratamento agudo: 24 h p.o.

[0135] Camundongos fêmeas C57BL6 foram tratados per os (sonda esofágica) com veículo ou composto (Exemplo 2) a 0,25, 0,5, 1, 3 e 6 mg/kg (n = 6 por grupo) durante 24 h. O produto foi administrado com um tudo de alimentação Rodent descartável ECIMED Ref # V0104030 (4 mm x 30 mm). Os animais foram sacrificados após 24 horas, o cérebro foi imediatamente removido para dissecção. Os níveis de CTFα no córtex frontal (FC) e/ou no hipocampo (HIP) foram medidos por meio de análise Western Blot, conforme descrito anteriormente. Resumidamente, os tecidos foram homogeneizados com 200 μl de tampão de lise (10 ml de Tampão Pré-lise de Laemmli e 1 comprimido de coquetem inibidor de Protease Complete Mini (Roche)) em um recipiente. Após sonicação (5 min), os homogeneizados foram centrifugados a 1600 rpm 5 min 4°C. Os sobrenadantes foram divididos em alíquotas e armazenados a -80°C antes da análise Western blot.

[0136] Os resultados dependentes da dose são mostrados na Figura 20. O composto do Exemplo 2 aumenta o metabolismo de APP através da via não amiloidogênica no córtex frontal, conforme demonstrado pelo aumento na concentração de CTFα. O córtex frontal é geralmente a primeira região do cérebro a ser afetada pela formação de placas amiloides em doenças relacionadas ao metabolismo anormal de APP.

[0137] O composto do Exemplo 2 foi também comparado com o sal oxalato do documento WO2006/051489 no mesmo ensaio (dose de 6 mg/kg). Os resultados mostrados na Figura 21 indicam maior eficiência do sal sulfato em comparação com o sal oxalato.

Tratamento crônico: 1 mês

[0138] Aos ratos foram fornecidos, durante um mês, 1 ou 10 mg/kg/dia do composto do Exemplo 2 dissolvido em sua água potável. A alta solubilidade notável deste sal sulfato permitiu formulação e administração fácil do mesmo aos animais. Os animais foram sacrificados ao final de um mês e os níveis de CTFα e CTFβ no córtex frontal (FC) e/ou hipocampo (HIP) foram medidos por meio de análise Western Blot, conforme descrito anteriormente. Os resultados dependente da dose são mostrados nas Figuras 22-a e 22-b. O sal sulfato do Exemplo 2 aumenta o metabolismo de APP através da via não amiloidogênica no córtex frontal, conforme mostrado pelas concentrações crescentes de CTFα (Figura 22- a). O sal sulfato do Exemplo 2 atenua o metabolismo de APP através da via amiloidogênica no hipocampo, conforme mostrado pelas concentrações decrescentes de CTFβ (Figura 22-b). O córtex frontal é geralmente a primeira região do cérebro a ser afetada pela formação de placas amiloides em doenças relacionadas ao metabolismo anormal de APP, enquanto o hipocampo, que está altamente envolvido em processos de memória e recordação, é afetado depois, mas de forma grave. O sal sulfato do Exemplo 2tem, assim, um efeito muito positivo sobre o metabolismo de APP, tanto no córtex frontal quanto no hipocampo e seria, portanto, de interesse no tratamento de doenças neurodegenerativas, em particular para ambas as fases inicial e avançada de doenças relacionadas ao metabolismo anormal de APP.

Tratamento crônico: 3 meses

[0139] Distúrbios neuropatológicos são também caracterizados por fosforilação anormal da proteína Tau (AT100). Hiperfosforilação da proteína tau (em sítios específicos) pode resultar em acúmulo intracelular de emaranhados neurofibrilares (NFTs), envolvidos na patogênese da doença de Alzheimer e outras taupatias. Um eixo do estudo era, assim, estudar o efeito do sal sulfato do Exemplo 2 sobre esta fosforilação anormal. Em paralelo, tal efeito também foi monitorado em relação à fosforilação não patológica de proteína Tau (AT8), a qual não deverá ser afetada. Outro eixo deste estudo era, assim, o impacto do sal sulfato do Exemplo 2 sobre o estresse oxidativo (OS). Portanto, os níveis de peroxidação lipídica, um marcador conhecido para avaliação do estresse oxidativo, foram determinados. Na verdade, acredita-se que o estresse oxidativo (OS), através da geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) tóxicas e danos oxidativos (oxidação de componentes celulares vitais, tais como lipídios, proteínas e DNA) está envolvido na patogênese de distúrbios neurodegenerativos. A resposta ao OS da célula neuronal é particularmente estudada por sua contribuição para os processos de neurodegeneração. OS resulta de um desequilíbrio entre a geração de ROS e as defesas antioxidantes, levando a um acúmulo de danos oxidativos e, finalmente, morte celular. O dano oxidativo também foi associado à perda neuronal patológica na doença de Parkinson (PD) e doença de Huntington (HD).

[0140] Foram fornecidos a camundongos fêmeas C57BL6 de 4 meses de idade 0,5, 1 ou 3 mg/kg de composto do Exemplo 2 dissolvido em sua água potável. Primeiramente, todos os camundongos foram pesados e distribuídos em cada gaiola de modo a ter aproximadamente a mesma média de peso ± SD por gaiola. Cada concentração do produto foi preparada em frascos estéreis e mantida em RT protegido contra a luz. Os bebedouros foram cheios a cada semana e pesados. O volume consumido foi calculado pesando cada frasco após cada semana e o volume restante foi descartado.

[0141] Medições dos níveis de fosforilação de AT100 foram realizadas em tecidos cerebrais por meio de análise Western blot (anteriormente descrita), usando anticorpo anti-AT100 específico (anticorpo monoclonal PHF-tau anti- humano, MN1020, ThermoScientific/Pierce).

[0142] Medições dos níveis de fosforilação de AT8 foram realizadas em tecidos cerebrais por meio de análise Western blot (anteriormente descrita), usando anticorpo anti-AT8 específico (anticorpo monoclonal PHF-tau anti-humano, MN1060, ThermoScientific/Pierce).

[0143] Medições dos níveis de LPO: o nível de peroxidação lipídica no hipocampo é determinado como equivalentes de hidroperóxido de cumeno (CHP) e expresso como equivalentes de CHP em peso úmido de tecido e como porcentagem dos dados do grupo de controle após o ensaio FOX modificado.

[0144] Os resultados são apresentados nas Figuras 23- a, 23-b e 23-c. O sal sulfato da presente invenção diminui a fosforilação da proteína Tau patológica (Figura 23-a), ao mesmo tempo em que não afeta a fosforilação da proteína Tau normal (Figura 23-b). Além disso, este sal sulfato induz a uma diminuição significativa dos níveis de LPO e é, portanto, capaz de aliviar parcialmente processos de estresse oxidativo (Figura 23-c).

[0145] Em vista dos resultados experimentais acima, os sais sulfato da invenção são úteis para orientar o metabolismo de APP ao longo da vias não amiloidogênicas no córtex frontal e hipocampo. Além disso, eles alteram a fosforilação da proteína Tau patológica, ao mesmo tempo em que aliviam processos de estresse oxidativo.

Claims (10)

1. Sal sulfato caracterizado pelo fato de ser de N-(3- (4-(3-(di-isobutilamino)propil)piperazin-1-il)propil)-1H- benzo[d]imidazol-2-amina.

2. Sal sulfato, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ter a Fórmula II:

em que x é 0,5 a 4.

3. Sal sulfato, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que x é 1,5 a 2,5.

4. Sal sulfato, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que x é 0,5 a 1,5.

5. Sal sulfato, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que x é 2,5 a 3,5.

6. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender um sal sulfato como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e pelo menos um veículo, diluente, excipiente e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável.

7. Uso de um sal sulfato, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de ser para a produção de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de uma doença selecionada de doenças neurodegenerativas, amiloidopatias, taupatias e doenças do desenvolvimento.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a doença é selecionada de doença de Alzheimer, demência com corpos de Lewy (DLB), esclerose lateral amiotrófica (ALS) com demência frontotemporal, miopatia por corpos de inclusão com doença de Paget dos ossos e/ou demência frontotemporal (IBMPFD), degeneração frontotemporal lobar, sinucleopatias, doença de Huntington, doença de Parkinson, angiopatias amiloides, demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17 e síndrome de Down.

9. Uso de sal sulfato, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 caracterizado pelo fato de ser para a produção de um medicamento para retardar, em um paciente, o aparecimento de uma doença selecionada de doenças neurodegenerativas, amiloidopatias, taupatias e doenças do desenvolvimento.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a doença é selecionada de doença de Alzheimer, demência com corpos de Lewy (DLB), esclerose lateral amiotrófica (ALS) com demência frontotemporal, miopatia por corpos de inclusão com doença de Paget dos ossos e/ou demência frontotemporal (IBMPFD), degeneração frontotemporal lobar, sinucleopatias, doença de Huntington, doença de Parkinson, angiopatias amiloides, demência frontotemporal com Parkinsonismo relacionada ao cromossomo 17 e síndrome de Down.

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