BR112013027173B1 - Sistema de classificador de célula, método para calibrar um sistema de classificador de célula, e sistema de controle de retardo de carga para um citômetro de fluxo - Google Patents

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Abstract

resumo patente de invenção: "método e sistema de classificador de célula". a presente invenção refere-se a métodos e sistemas aprimorados de classificador de célula. tais sistemas e métodos fornecem um jato classificador de autoestabilização para automatizar a calibração, e lida com o problema de desvio em sistemas de classificação de célula. os sistemas e métodos apresentados possibilitam determinar e definir o intervalo de retardo de carga automaticamente com um conjunto de circuitos no classificador de célula. esses circuitos podem definir, monitorar e ajustar o retardo de tempo continuamente, permitindo um jato classificador de autoestabilização completamente automático, autônomo do tipo de pronto funcionamento.

Description

[001] De acordo com o documento 35 U.S.C. § 119 (e), este pedido reivindica prioridade para a data de depósito do Pedido de Patente Provisório n° de série US 61/480.872 depositado em 29 de abril de 2011; a revelação do cujo pedido está incorporada no presente documento a título de referência.
INTRODUÇÃO [002] A presente invenção refere-se a citômetros de fluxo e instrumentos para classificação e identificação de velocidade alta de partículas, tais como células.
[003] A citometria de fluxo é um método válido para a análise e isolamento de partículas biológicas tais como células e moléculas constituintes. Como tal, a mesma tem uma ampla faixa de aplicações terapêuticas e de diagnóstico. O método utiliza uma corrente de fluido para segregar de modo linear as partículas de modo que as mesmas possam passar, em fila única, através de um aparelho de detecção. As células individuais podem ser distinguidas de acordo com a localização das mesmas na corrente de fluido e com a presença de marcadores detectáveis. Consequentemente, um citômetro de fluxo pode ser usado para produzir um perfil de diagnóstico de uma população de partículas biológicas.
[004] O isolamento de partículas biológicas tem sido alcançado adicionando-se uma capacidade de coleta ou classificação aos citômetros de fluxo. As partículas em uma corrente segregada, detectada como tendo uma ou mais das características desejadas, são isoladas
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2/17 individualmente da corrente de amostra através de remoção elétrica ou mecânica. Esse método de classificação de fluxo tem sido usado para classificar células de tipos diferentes, para separar esperma contendo cromossomos X e Y para reprodução animal, para classificar cromossomos para análise genética, e para isolar organismos particulares de populações biológicas complexas.
[005] Um conjunto de procedimentos de classificação de fluxo comum utiliza classificação de gota em que uma corrente de fluido contendo partículas segregadas de modo linear é quebrada em gotas e as gotas contendo partículas de interesse são carregadas eletricamente e desviadas em um tubo de coleta através da passagem através de um campo elétrico. Os sistemas de classificação de gota atuais têm capacidade para formar gotas em uma taxa de 100.000 gotas/segundo em uma corrente de fluido que é passada através de um bocal que tem um diâmetro inferior a 100 micrômetros. A classificação de gota exige que as gotas se rompam da corrente em uma distância fixa da ponta do bocal. A distância é normalmente na ordem de poucos milímetros da ponta do bocal e pode ser mantida para uma corrente de fluido não perturbada oscilando-se a ponta do bocal em uma frequência predefinida.
[006] Tipicamente, as partículas segregadas de modo linear na corrente são caracterizadas à medida que as mesmas passam através de um ponto de observação situado logo abaixo da ponta do bocal. Uma vez que uma partícula é identificada como atendendo um ou mais critérios desejados, o tempo em que a mesma atingirá o ponto de rompimento de gota e se quebrará da corrente em uma gota pode ser previsto. Idealmente, uma carga breve é aplicada à corrente de fluido logo antes que a gota contendo a partícula selecionada se quebra da corrente e ligada, em seguida, imediatamente após a gota se romper. A gota a ser classificada mantém uma carga elétrica à medida que a
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3/17 mesma se rompe da corrente de fluido, e todas as outras gotas são deixadas não carregadas. A gota carregada é desviada lateralmente da trajetória descendente das outras gotas através de um campo elétrico e coletada em um tubo de amostra. As gotas não carregadas caem diretamente em uma drenagem.
[007] As perturbações em uma corrente de fluido, incluindo a turbulência causada pela variabilidade no tamanho de partículas presentes em amostras biológicas típicas ou o desvio em componentes de citômetro, podem impactar significativamente a capacidade de predizer qual gota irá conter uma partícula de interesse. A previsão imprópria de qual gota contém uma partícula pode levar a perda de partículas válidas que estão presentes frequentemente em quantidades pequenas em amostras biológicas. Mesmo um breve lapso na capacidade de predizer com precisão os conteúdos de uma gota pode contaminar uma fração de partículas desejadas com partículas indesejadas, comprometendo, desse modo, a qualidade da fração ou tornando a mesma inapta para administração terapêutica.
[008] Embora os citômetros de luxo de diagnóstico tenham sido disponibilizados para uso comum em uma variedade de configurações, a classificação de fluxo é mais complicada e foi confinada principalmente para instalações fundamentais que têm operadores dedicados. Atualmente, os classificadores de fluxo exigem procedimentos de alinhamento e organização relativamente complicados que necessitam frequentemente de operadores altamente treinados. Embora analisadores de fluxo tenham observado muitos aprimoramentos para facilitar o uso devido à automação e simplificação, a maior parte dos aprimoramentos nos classificadores de fluxo foi direcionada para o aumento da velocidade de classificação e o número de parâmetros usados. Os aumentos na velocidade e no número de parâmetros tiveram o efeito de aumento da complexidade e precisão exigida nos classificadores de
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4/17 fluxo.
[009] Por exemplo, em um sistema de classificador de célula típico, um operador precisa definir com precisão o tempo de retardo entre um evento (por exemplo, a detecção de uma célula) na interseção de um laser e uma corrente de jato (isto é, interseção de jato e laser (LJI)), e a aplicação de um pulso de carga ao jato. O pulso de carga deve se sobrepor ao ponto no tempo quando a gota que contém a célula medida se separa do jato principal no ponto de rompimento (BOP). Atualmente, esse ajuste do retardo de tempo é feito manualmente antes da classificação, tornando a precisão e a pureza de classificação dependente de critérios subjetivos. Além disso, devido ao fato de que o retardo de tempo é ajustado antes da classificação, o mesmo está propenso a desviar devido às alterações de pressão e temperatura que ocorrem durante a duração da classificação.
SUMÁRIO [0010] Os métodos e sistemas aprimorados de classificador de célula são fornecidos no presente documento. Tais sistemas e métodos fornecem um jato classificador de autoestabilização para automatizar a calibração e lidar com o problema de desvio em sistemas de classificação de célula. Os sistemas e métodos apresentados tornam possível determinar e definir o intervalo de retardo de carga (CDI) automaticamente com conjunto de circuitos no classificador de célula. Esses circuitos podem definir, monitorar e ajustar o retardo de tempo continuamente, permitindo um jato classificador de autoestabilização completamente automático, autônomo do tipo de pronto funcionamento.
[0011] Também são apresentados no presente documento os sistemas e métodos para determinar automaticamente a fase do ponto de rompimento do jato (PBP), tornando possível saber quando a gota com a célula se separa do jato. Combinando-se os sistemas e métodos
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5/17 apresentados com os métodos para determinar automaticamente a fase do sinal de acionamento de gota quando um evento (por exemplo, a célula) passa pelo ponto de interseção do laser e do jato de um classificador de célula (conforme descrito na Patente de no U.S. 7.679.039, que está incorporada no presente documento a título de referência de modo integral), a distância entre o ponto de medição (por exemplo, na LJI) e o ponto de rompimento de jato (BOP) podem ser definidos e mantidos em um número inteiro (n) de gotas.
[0012] Por exemplo, são apresentados os métodos para determinação de n uma vez que LJI e BOP tenham sido fixados. Todos os cálculos podem ser feitos com o conjunto de circuitos que realiza captação de distância e de fase no interior de uma malha de retroalimentação fechado. A combinação de invenções descrita aqui permite, pela primeira vez, a construção de um aparelho que pode definir de modo automático e autônomo o ponto de rompimento do mesmo, o retardo de gota e o sinal de carga de pulso de tempo. Devido ao fato de que os cálculos são feitos no interior de uma malha de retroalimentação, tal sistema é estável e corrige de modo autônomo alterações em temperatura e pressão.
[0013] Em uma modalidade exemplificativa, para medir o tempo do BOP, primeiro, a drenagem que coleta a corrente de gota é isolada. Em seguida, a drenagem é conectada com um conversor de corrente para tensão (CVC) à terra. Com as placas de deflexão desligadas, uma carga é colocada na corrente de gota. A carga será conduzida através das gotas para a drenagem. A carga irá fluir à terra através do circuito de CVC, gerando uma leitura de tensão no circuito. As gotas só irão conduzir a carga se houver uma tensão aplicada ao jato no momento em que a gota se separa do jato. Se uma carga for colocada na corrente como um pulso muito curto, a duração do qual somente ocupa uma fração do período de ciclo de gota, a corrente de gotas
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6/17 somente irá conduzir uma carga se os pulsos de carga coincidirem com o tempo de rompimento das gotas. A amplitude do sinal de acionamento de gota pode ser ajustada agora de modo que o ponto de rompimento de gota e o ponto de interseção de laser de jato sejam separados por um número inteiro de ciclos de gota (o sinal de LJI e o pulso de carga estão em sincronização com a diferença de fase zero) realizando-se periodicamente esse procedimento: (1) desengatar as placas de deflexão; (2) aplicar a carga rápida em sincronização com o sinal no ponto de interseção de jato de laser; e (3) ajustar a amplitude de acionamento para corrente de drenagem máxima.
[0014] O instrumento pode ajustar de modo automático e rápido a amplitude de acionamento de gota do mesmo de modo que o tempo entre a medição de evento e formação de gota permanece constante. Uma vez que o rompimento da gota está em sincronização com a frequência de acionamento de gota no ponto de LJI, o período do intervalo de tempo entre uma medição de evento e o ponto de rompimento deve ser determinado. Em uma modalidade, o acionamento de gota é definido em uma frequência preferencial fi. O retardo de tempo entre a medição de evento e a carga rápida é mantido constante (dt). A frequência de acionamento de gota é aumentada ao mesmo tempo em que se mantém a amplitude de gota constante até que o pulso de carga coincida novamente com o BOP (pode ser detectado observandose a corrente de drenagem). A frequência em que isso acontece, A? é indicada. Os relacionamentos a seguir devem manter:
dt = n / f 1 dt = (n+1) / Í2 [0015] O número de ciclos de gota, n, entre LJI e BOP, portanto, deve ser:
n = fi / (f2-fi) [0016] Todos os sinais relevantes podem ser ajustados por comPetição 870180139389, de 09/10/2018, pág. 16/370
7/17 putador ou podem ser mantidos constantes em malhas de retroalimentação fechadas. Portanto, todas as propriedades do jato podem ser mantidas constantes através do conjunto de circuitos no instrumento. Para tornar o método mais preciso, o cálculo de retardo automático pode ser feito em múltiplas frequências, por exemplo, aquelas para n2, n-1, n+1 e n+2. Um valor preciso de n pode ser determinado através de uma análise de regressão.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0017] Os desenhos anexos que estão incorporados no presente documento formam parte do relatório descritivo. Juntamente com esta descrição escrita, os desenhos servem adicionalmente para explicar os princípios, e para possibilitar que um indivíduo versado na(s) técnica(s) relevante(s) crie e use os sistemas e métodos de acordo com a presente invenção.
[0018] A Figura 1 é um desenho esquemático de um sistema de classificador de célula.
[0019] A Figura 2 é um fluxograma que esboça um método, de acordo com uma modalidade apresentada no presente documento.
[0020] A Figura 3 é um fluxograma que esboça um método, de acordo com uma modalidade apresentada no presente documento. DESCRIÇÃO DETALHADA [0021] A descrição detalhada a seguir das Figuras refere-se aos desenhos anexos que ilustram uma modalidade exemplificativa de um sistema de classificador de célula. Outras modalidades são possíveis. Modificações podem ser feitas à modalidade descrita no presente documento sem sair do espírito e escopo da presente invenção. Portanto, a descrição detalhada a seguir não é destinada como sendo limitante.
[0022] A Figura 1 é um desenho esquemático de um sistema de classificador de célula 100, de acordo com uma modalidade apresenPetição 870180139389, de 09/10/2018, pág. 17/370
8/17 tada no presente documento. Conforme mostrado na Figura 1, um transdutor de formação de gota (por exemplo, piezo oscilador) 102 é acoplado a um conduto de fluido, tal como o bocal 101. Dentro do bocal 101, fluido de revestimento 104 foca de modo hidrodinâmico um fluido de amostra 106 em uma corrente 108. Dentro da corrente 108, as partículas (por exemplo, as células) são alinhadas em fila única para cruzar uma interseção de corrente e laser 110 (por exemplo, a LJI), irradiada através de uma fonte de irradiação (por exemplo, o laser) 112. A vibração do piezo oscilador 102 faz com que a corrente 108 se quebre em uma pluralidade de gotas 109.
[0023] Em operação, um detector de evento 114 identifica quando uma partícula de interesse (ou célula de interesse) cruza a interseção de corrente e laser 110. O detector de evento 114 se alimenta do circuito de tempo 128 que por sua vez, se alimenta do circuito de carga rápida 130. No ponto de rompimento de gota, informado por um retardo de gota de duração específica (At), uma carga rápida é aplicada à corrente de modo que a gota de interesse conduza uma carga. A gota carregada pode ser classificada, em seguida, ativando-se as placas de deflexão (não mostradas) para desviar a gota para um tubo de coleta. Conforme mostrado na Figura 1, entretanto, as gotas são coletadas em um receptáculo de drenagem 138.
[0024] O detector de limite de gota 116 serve para determinar automaticamente a fase do sinal de acionamento de gota quando uma partícula de interesse passa pela interseção de corrente e laser 110. Um detector de limite de gota exemplificativo está descrito na Patente de n° U.S. 7.679.039 que está incorporada no presente documento a título de referência de modo integral. O detector de limite de gota 116 permite que o instrumento calcule com precisão o lugar de cada partícula detectada em uma gota. O detector de limite de gota 116 se alimenta em um sinal de amplitude 120 e sinal de fase 118 que, por sua
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9/17 vez, se alimentam (através do amplificador 122) em um circuito de controle de amplitude 126 e/ou um circuito de controle de frequência 124. O circuito de controle de amplitude 126 e/ou o circuito de controle de frequência 124, por sua vez, controlam o piezo oscilador 102.
[0025] O sistema de classificador de célula 100 inclui adicionalmente um conversor de corrente para tensão (CVC) 134 acoplado ao receptáculo 138. O CVC 134 é configurado para detectar a presença de uma partícula carregada que entra no receptáculo 138. O resistor 136 define os volts por ampere de CVC 134 e fornece uma tensão que é proporcional à corrente observada no receptáculo (por exemplo, a drenagem) 138. A corrente de drenagem é medida na unidade de circuito 132 e é fornecida a um processador 140. O processador 140 se alimenta, em seguida, do circuito de controle de frequência 124.
[0026] O sistema de classificador de célula 100 pode ser empregado para fornecer um jato classificador de autoestabilização para automatizar a calibração, e lidar com o problema de desvio em sistemas de classificação de célula. O sistema torna possível determinar e definir o intervalo de retardo de carga automaticamente com o conjunto de circuitos apresentado. Esses circuitos podem definir, monitorar e ajustar o retardo de tempo continuamente, permitindo um jato classificador de autoestabilização completamente automático, autônomo do tipo de pronto funcionamento. O sistema de classificador de célula 100 pode ser usado de vários modos, tal como na prática dos métodos esboçados adicionalmente abaixo.
[0027] Em outra modalidade, é fornecido um sistema de classificador de célula, sendo que o sistema compreende: um conduto de fluido; uma fonte de irradiação posicionada para irradiar uma corrente de fluido presente no conduto de fluido; um circuito de carga que fornece uma carga elétrica à corrente de fluido; um receptáculo posicionado para receber uma ou mais gotas formadas a partir da corrente de flui
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10/17 do; e um circuito de detecção de corrente acoplado ao receptáculo. O sistema pode inclui adicionalmente uma unidade de controle de retardo de carga que controla o circuito de carga, em que a unidade de controle de retardo de carga recebe um sinal a partir do circuito de detecção de corrente e determina um retardo de carga com base no sinal recebido do circuito de detecção de corrente. O sistema pode compreender adicionalmente um conversor de corrente para tensão para detectar a presença de uma gota carregada que entra no receptáculo. O sistema pode compreender adicionalmente um integrador para detectar um número de gotas por unidade de tempo que entra no receptáculo. Em uma modalidade, o receptáculo é uma drenagem. A drenagem pode ser isolada eletricamente. Em outra modalidade, o receptáculo é um tubo de coleta de gota. O tubo de coleta de gota pode ser isolado eletricamente.
[0028] Em ainda outra modalidade, é fornecido um sistema de controle de retardo de carga para um citômetro de fluxo, sendo que o sistema compreende: um circuito de carga que fornece uma carga elétrica para uma corrente de fluido no citômetro de fluxo; um circuito de detecção de corrente acoplado a um receptáculo, em que o receptáculo é posicionado para receber uma ou mais gotas formadas a partir da corrente de fluido; e uma unidade de controle de retardo de carga acoplada de modo operativo ao circuito de detecção de corrente, em que a unidade de controle de retardo de carga é configurada para determinar um retardo de carga com base em uma corrente medida pelo circuito de detecção de corrente. O sistema pode incluir adicionalmente: um conversor de corrente para tensão para detectar a presença de uma gota carregada que entra no receptáculo; e/ou um integrador para detectar um número de gotas por unidade de tempo que entra no receptáculo. A unidade de controle de retardo de carga pode ser configurada adicionalmente para: (a) aplicar uma carga rápida à corrente de
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11/17 fluido em uma primeira frequência de acionamento de um transdutor de formação de gota do citômetro de fluxo; (b) identificar uma amplitude de acionamento ótima variando-se uma amplitude de acionamento do transdutor de formação de gota até que uma corrente máxima seja detectada no receptáculo; (c) identificar uma segunda frequência de acionamento aumentando-se a frequência de acionamento do transdutor de formação de gota, ao mesmo tempo em que continua a aplicar a carga rápida na primeira frequência de acionamento, até que a corrente medida no receptáculo retorne à corrente máxima; e/ou (d) calcular um retardo de gota com base na primeira e na segunda frequências de acionamento.
[0029] A Figura 2 é um fluxograma que esboça um método exemplificativo 200 para calibrar um classificador de célula e, mais especificamente, para determinar uma amplitude de acionamento ótima para um oscilador acoplado a um bocal de fluido. Na etapa 202, quaisquer placas de deflexão estão desativadas. A etapa 202 é uma etapa opcional para a simplificação do método apresentado. Os métodos alternativos podem ser empregados com as placas de deflexão ativadas. Na etapa 204, a frequência de acionamento da unidade de oscilador é definida a uma frequência constante (6). Uma carga rápida é aplicada à corrente na frequência (A), na etapa 206. A corrente é medida, em seguida, em um receptáculo, na etapa 208. Se a corrente medida ao longo do tempo for uma corrente máxima (ou pico), a amplitude é identificada e como uma amplitude de acionamento ótima, como na etapa 214. Entretanto, se a corrente medida no receptáculo não for uma corrente máxima (ou pico), a amplitude de acionamento é ajustada, na etapa 212, e a etapa 208 é repetida até que uma amplitude de acionamento ótima seja identificada.
[0030] A Figura 3 é um fluxograma que esboça um método exemplificativo 300 para calibrar um classificador de célula e, mais especifi
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12/17 camente, para determinar os ciclos de gota e/ou frequência de acionamento ótima para uma unidade de oscilador. Na etapa 302, a amplitude de acionamento ótima (tal como a identificada na etapa 214) é mantida constante. Na etapa 304, uma carga rápida é aplicada na frequência (fy). A frequência de acionamento é aumentada, em seguida, para a frequência fi), na etapa 306. A corrente é medida novamente no receptáculo, na etapa 308. Na etapa 310, uma determinação é feita de se a corrente medida no receptáculo retornou à corrente máxima, isto é, retornou à corrente observada quando a frequência de acionamento foi fi. Até que a corrente retorne a um máximo, a frequência de acionamento é continuamente ajustada para uma frequência superior, Í2. Quando uma corrente máxima é novamente detectada no receptáculo, os ciclos de gota são calculados como uma função de (fi)l(f2-fi). [0031] Em outra modalidade, é fornecido um método para calibrar um sistema de classificador de célula, sendo que o método compreende: (a) definir uma frequência de acionamento de um transdutor de formação de gota; (b) aplicar uma carga rápida à corrente de fluido na frequência de acionamento; (c) medir uma corrente em um receptáculo que recebe gotas formadas a partir da corrente de fluido; e (d) identificar uma amplitude de acionamento ótima variando-se a amplitude de acionamento do transdutor de formação de gota até que uma corrente máxima seja detectada no receptáculo. O método pode incluir adicionalmente (e) identificar uma segunda frequência de acionamento aumentando-se a frequência de acionamento do transdutor de formação de gota, ao mesmo tempo em que continua a aplicar a carga rápida na frequência de acionamento da etapa (a), até que a corrente medida no receptáculo retorne à corrente máxima. O método pode incluir adicionalmente: (1) calcular um retardo de gota com base na frequência de acionamento identificada na etapa (e) e a frequência de acionamento da etapa (a); (2) manter a amplitude de acionamento do transdutor de
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13/17 formação de gota constante na amplitude de acionamento ótima; (3) desativar uma placa de deflexão antes da etapa (a); e/ou (4) isolar eletricamente o receptáculo.
[0032] Em uma modalidade, é fornecido um método de sincronização de uma frequência de acionamento do classificador de célula com a frequência de formação de gota (ou rompimento). A frequência de acionamento é a frequência em que o transdutor (por exemplo, elemento piezo) é acionado. A frequência de formação de gota ou frequência de rompimento é a frequência em que as gotas se rompem, realmente, da corrente. A frequência de acionamento e a frequência de formação de gota podem fica fora de sincronização devido a fatores externos (por exemplo, alterações em temperatura, pressão, etc.). Entretanto, quando a frequência de acionamento e a frequência de formação de gota estão em sincronização, há um número inteiro de gotas entre a interseção de jato e laser (LJI) e o ponto de rompimento (BOP). A frequência de acionamento do sistema é uma variável conhecida (isto é, definida), mas a frequência de formação de gota é variável desconhecida (isto é, sujeita a flutuações externas).
[0033] Um método exemplificativo para sincronizar a frequência de acionamento com a frequência de formação de gota compreende: (a) (se necessário) as placas de deflexão são desligadas; (b) uma carga rápida é aplicada à corrente na frequência de acionamento (6); (c) com a frequência de acionamento e a frequência de carga mantida constante em fi, a amplitude de acionamento é variada. Alterando-se a amplitude de acionamento ao mesmo tempo em que se mantém a frequência de acionamento constante, a frequência de formação de gota é variada. Quando uma corrente de drenagem máxima é medida com a drenagem modificada (ou tubo de coleta), sabe-se então que uma amplitude de acionamento ótima foi alcançada.
[0034] Em seguida, o retardo de gota é determinado. Para deter
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14/17 minar o retardo de gota: (1) a amplitude de acionamento é mantida constante na amplitude de acionamento ótima determinada na etapa (c) acima; (2) com a frequência de carga mantida constante em fi, a frequência de acionamento do sistema é aumentada até que uma corrente máxima reapareça na drenagem, a qual está em uma frequência de acionamento f?, (3) o número de gotas entre a LJI e o BOP é n = fi/(f2-fi)', (4) em seguida, o retardo de gota é calculado com base no número de gotas entre a LJI e o BOP.
CONCLUSÃO [0035] A descrição anterior da invenção foi apresentada para fins de ilustração e descrição. A mesma não é destinada ser exaustiva ou a limitar a invenção à forma precisa revelada. Outras modificações e variações podem ser possíveis à luz dos ensinamentos acima. As modalidades foram escolhidas e descritas a fim de explicar melhor os princípios da invenção e sua aplicação prática, e para permitir, desse modo, que outros indivíduos versados na técnica utilizem melhor a invenção em várias modalidades e várias modificações conforme são adequadas ao uso particular contemplado. Pretende-se que as reivindicações anexas sejam interpretadas como incluindo outras modalidades alternativas da invenção; incluindo meios, métodos, componentes e estruturas equivalentes.
[0036] Deve-se observar que a seção de Descrição Detalhada, e não as seções de Sumário e Resumo, é destinada a ser usada para interpretar as reivindicações. As seções de Sumário e Resumo podem apresentar uma ou mais, mas não todas, as modalidades exemplificativas da presente invenção as conforme contempladas pelo(s) inventor(es) e, assim, não são destinadas a limitar a presente invenção e as reivindicações anexas de maneira alguma.
[0037] Deve-se entender que esta invenção não é limitada às modalidades particulares descritas, visto que tais modalidades particula
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15/17 res podem, evidentemente, variar. Deve-se entender, ainda, que a terminologia usada no presente documento é para o fim de descrição de modalidades particulares apenas, e não é destinada a ser limitante, visto que o escopo da presente invenção será limitado apenas pelas reivindicações anexas.
[0038] Quando uma faixa de valores é fornecida, entende-se que cada valor de interveniente, até a décima parte da unidade do limite inferior a menos que o contexto dite claramente de outra maneira, entre o limite superior e o limite inferior daquela faixa e qualquer outro indicado ou valor de interveniente naquela faixa mencionada, é englobado pela invenção. Os limites superior e inferior dessas faixas menores podem ser independentemente incluídos nas faixas menores ranges e também estão englobados pela invenção, sujeitos a qualquer limite especificamente excluído na faixa mencionada. Quando a faixa mencionada inclui um ou ambos os limites, faixas que excluem qualquer um ou ambos aqueles limites incluídos também são incluídas na invenção.
[0039] Determinadas faixas são apresentadas no presente documento com valores numéricos que são precedidos do termo cerca de. O termo cerca de é usado no presente documento para fornecer suporte literal ao número exato que o mesmo precede, bem como um número que é próximo ao número que o termo precede, ou aproximadamente esse número. Na determinação de se um número está próximo a um número especificamente recitado, ou aproximadamente esse número, o número próximo ou de aproximação não recitado pode ser um número que, no contexto no qual é apresentado, fornece o equivalente substancial do número especificamente recitado.
[0040] Salvo quando definido de outra maneira, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por um indivíduo de habili
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16/17 dade comum na técnica à qual esta invenção pertence. Embora quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles descritos no presente documento também possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais ilustrativos representativos são agora descritos.
[0041] Todas as publicações e patentes citadas neste relatório descritivo estão incorporadas no presente documento a título de referência com se cada patente ou publicação individual estivesse indicada de modo específico e individual a ser incorporada a título de referência e são incorporadas no presente documento a título de referência para revelar e descrever os métodos e/ou materiais em conexão com as publicações são citadas. A citação de qualquer publicação é para a revelação da mesma antes da data de depósito e não deve ser interpretada como uma admissão de que a presente invenção não está revestida do direito de ser revelada antes de tal publicação em virtude da descrição prévia. Ademais, as datas de publicação fornecidas podem ser diferentes das datas de publicação reais que podem precisar ser confirmadas de modo independente.
[0042] Observa-se que, conforme no presente documento e nas reivindicações anexas, as formas singulares um, uma, o e a incluem referentes plurais a mesmo que o contexto dite claramente de outra maneira. Observa-se, além disso, que as reivindicações podem ser redigidas para excluir qualquer elemento opcional. Como tal, essa afirmação é destinada a servir como base antecedente para o uso de tal terminologia exclusiva como somente, apenas e similares em conexão com a recitação de elementos de reivindicação, ou o uso de uma limitação negativa.
[0043] Observa-se que determinados recursos da invenção, os quais são, para fins de esclarecimento, descritos no contexto de modalidades separadas, podem ser fornecidos, ainda, em combinação em
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17/17 uma modalidade única. Em contrapartida, vários recursos da invenção, os quais são, para fins de brevidade, descritos no contexto de uma modalidade única, também podem ser fornecidos separadamente ou em qualquer subcombinação adequada. Todas as combinações das modalidades são especificamente englobadas pela presente invenção e são reveladas no presente documento simplesmente como se cada e toda combinação estivesse revelada de modo individual e explícito, à medida que tais combinações englobam dispositivos/sistemas/kits e/ou processos operáveis. Além disso, todas as subcombinações listadas nas modalidades que descrevem tais variáveis também são englobadas especificamente pela presente invenção e são reveladas no presente documento simplesmente como se cada e toda tal subcombinação de grupos químicos fosse revelada de modo individual e explícito no presente documento.
[0044] Conforme será evidente àqueles versados na técnica mediante a leitura desta revelação, cada uma das modalidades individuais descritas e ilustradas no presente documento tem componentes e recursos discretos que podem ser prontamente separados dos recursos de qualquer uma das outras diversas modalidades, ou combinados com os mesmos, sem que se distancie do escopo ou espírito da presente invenção. Qualquer método recitado pode ser realizado na ordem de eventos recitada ou em qualquer outra ordem que é logicamente possível.

Claims (21)

1. Sistema de classificador de célula (100), caracterizado pelo fato de que compreende:
um conduto de fluido (101);
uma fonte de irradiação (1120 posicionada para irradiar uma corrente de fluido (108) presente no conduto de fluido (101);
um circuito de carga (130) que fornece uma carga elétrica à corrente de fluido (108);
um receptáculo (138) posicionado para receber uma ou mais células contendo gotas (109) formadas a partir da corrente de fluido (108); e um circuito de detecção de corrente (134) acoplado ao receptáculo (138).
2. Sistema de classificador de célula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente:
uma unidade de controle de retardo de carga (128) que controla o circuito de carga (130), em que a unidade de controle de retardo de carga (128) recebe um sinal a partir do circuito de detecção de corrente (134) e determina um retardo de carga com base no sinal recebido do circuito de detecção de corrente (134).
3. Sistema de classificador de célula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o circuito de detecção de corrente (134) compreende adicionalmente:
um conversor de corrente para tensão para detectar a presença de uma gota carregada (109) que entra no receptáculo(138).
4. Sistema de classificador de célula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o circuito de detecção de corrente (134) compreende adicionalmente:
um integrador para detectar um número de gotas (109) por
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2/5 unidade de tempo que entra no receptáculo (138).
5. Sistema de classificador de célula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o receptáculo (138) é uma drenagem.
6. Sistema de classificador de célula, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a drenagem é isolada eletricamente.
7. Sistema de classificador de célula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o receptáculo é um tubo de coleta de gota.
8. Sistema de classificador de célula, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o tubo de coleta de gota é eletricamente isolado.
9. Sistema de controle de retardo de carga, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o circuito de detecção de corrente é configurado para medir uma corrente no receptáculo (138).
10. Método para calibrar um sistema de classificador de célula (100), caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de:
(a) definir uma frequência de acionamento de um transdutor de formação de gota (102);
(b) aplicar uma carga rápida à corrente de fluido (108) na frequência de acionamento;
(c) medir uma corrente em um receptáculo (138) que recebe gotas (109) formadas a partir da corrente de fluido (108); e (d) identificar uma amplitude de acionamento ótima variando-se a amplitude de acionamento do transdutor de formação de gota (101) até que uma corrente máxima seja detectada no receptáculo (138).
11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizaPetição 870180139389, de 09/10/2018, pág. 29/370
3/5 do pelo fato de que compreende adicionalmente:
(e) identificar uma segunda frequência de acionamento aumentando-se a frequência de acionamento do transdutor de formação de gota (102), ao mesmo tempo em que continua a aplicar a carga rápida na frequência de acionamento da etapa (a), até que a corrente medida no receptáculo (138) retorne à corrente máxima.
12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente:
calcular um retardo de gota com base na frequência de acionamento identificada na etapa (e) e na frequência de acionamento da etapa (a).
13. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente:
manter a amplitude de acionamento do transdutor de formação de gota (102) constante na amplitude de acionamento ótima.
14. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente: desativar uma placa de deflexão antes da etapa (a).
15. Método, de acordo com a reivindicação 10, que compreende adicionalmente: isolar eletricamente o receptáculo.
16. Sistema de controle de retardo de carga para um citômetro de fluxo, caracterizado pelo fato de que compreende:
um circuito de carga (1300 que fornece uma carga elétrica a uma corrente de fluido (108) no citômetro de fluxo;
um circuito de detecção de corrente (134) acoplado a um receptáculo (138), em que o receptáculo (138) é posicionado para receber uma ou mais gotas (109) formadas a partir da corrente de fluido (108); e uma unidade de controle de retardo de carga (128) acoplada de modo operativo ao circuito de detecção de corrente (134), em
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4/5 que a unidade de controle de retardo de carga (128) é configurada para determinar um retardo de carga com base em uma corrente medida pelo circuito de detecção de corrente (134).
17. Sistema de controle de retardo de carga, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o circuito de detecção de corrente (134) compreende adicionalmente:
um conversor de corrente para tensão para detectar a presença de uma gota carregada (109) que entra no receptáculo (138).
18. Sistema de controle de retardo de carga, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o circuito de detecção de corrente (134) compreende adicionalmente:
um integrador para detectar um número de gotas por unidade de tempo que entra no receptáculo (138).
19. Sistema de controle de retardo de carga, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a unidade de controle de retardo de carga (128) é adicionalmente configurada para:
(a) aplicar uma carga rápida à corrente de fluido em uma primeira frequência de acionamento de um transdutor de formação de gota (102) do citômetro de fluxo (100); e (b) identificar uma amplitude de acionamento ótima variando-se a amplitude de acionamento do transdutor de formação de gota (102) até que uma corrente máxima seja detectada no receptáculo (138).
20. Sistema de controle de retardo de carga, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que a unidade de controle de retardo de carga (128) é configurada adicionalmente para identificar uma segunda frequência de acionamento aumentando-se a frequência de acionamento do transdutor de formação de gota (102), ao mesmo tempo em que continua a aplicar a carga rápida na primeira frequência de acionamento, até que a corrente medida no receptáculo
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5/5 (138) retorne à corrente máxima.
21. Sistema de controle de retardo de carga, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a unidade de controle de retardo de carga (128) é configurada adicionalmente para calcular um retardo de gota com base na primeira e na segunda frequências de acionamento.
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