BR112013017573B1

BR112013017573B1 - uso de um suporte de coluna de cromatografia, suporte de coluna de cromatografia e dispositivo para suportar coluna de cromatografia

Info

Publication number: BR112013017573B1
Application number: BR112013017573-7A
Authority: BR
Inventors: Andreas Blaschyk
Original assignee: F. Hoffmann-La Roche Ag
Priority date: 2011-02-02
Filing date: 2012-01-31
Publication date: 2021-05-18
Also published as: MX347297B; CA2824218C; KR101951965B1; CN103339502A; JP2017083471A; US11241638B2; JP6389285B2; RU2013138115A; JP2014508924A; RU2584176C2; WO2012104278A1; EP2671074A1; HK1189269A1; BR112013017573A2; KR20140008340A; US20190255462A1; MX2013008354A; CN103339502B; JP6073811B2; CA2824218A1

Abstract

SUPORTE DE COLUNA DE CROMATOGRAFIA É descrito aqui o uso de um suporte de coluna de cromatografia que compreende pelo menos um plano de simetria, um eixo de simetria, pelo menos três pernas, pelo menos três conectores retos, em que os conectores definem um plano que é perpendicular ao eixo de simetria do suporte, em que os conectores são conectados uns aos outros no eixo de simetria, em que cada perna está conectada a um conector, em que cada uma das pernas é perpendicular ao plano definido pelos conectores, em que todas as pernas estão no mesmo lado do plano definido pelos conectores para estabilizar o empacotamento de uma coluna de cromatografia.

Description

[001] Descreve-se um suporte de coluna de cromatografia que permite que um calcinador móvel seja colocado dentro de uma coluna de cromatografia, em uma posição desejada. O suporte compreende uma multiplicidade de pernas e uma multiplicidade de conectores conectados à extremidade superior das pernas proporcionando um suporte ao longo de todo o diâmetro da coluna para um calcinador móvel.

Descrição do estado da técnica

[002] O projeto de processos cromatográficos preparativos em grande escala pode ser muito complexo e pode envolver diversos fatores que não são primariamente "cromatografia". Esses fatores incluem o método de empacotamento da coluna, queda de pressão hidrodinâmica e distribuição do fluxo. Esses fatores influem em economias do processo.

[003] Stickel, J.J. e Fotopoulos, A. (Biotechnol. Prog. 17 (2001) 755-751) relatam relações de fluxo e pressão para leitos empacotados de meio de cromatografia compressível em laboratório e escala de produção.

[004] Para colunas de filtração em gel em escala técnica o problema de compactação do enchimento de gel resultando em uma capacidade reduzida pode ser evitado pela disposição das paredes de separação no interior da coluna de cromatografia com uma direção paralela à da parede da coluna, como relatado em EP 0005708.

[005] No documento EP 0176891, uma coluna para cromatografia de alta pressão é relatado por compreender elementos de suporte adicionais para a estabilização do empacotamento da coluna.

[006] No documento US 3398512 é relatada uma coluna cromatográfica. O aparelho de cromatografia como aí relatado compreende uma coluna do tipo que tem uma entrada de gás, uma saída de gás, pelo menos uma parede da coluna se interligando com a entrada de gás e a saída de gás e confinando o material de empacotamento particulado sólido, e meios para evitar e reduzir a distorção do perfil do componente endireitando ou reformulando os perfis de componente depois de terem sofrido distorção.

[007] No documento US 5770061 é descrito que, fornecendo colunas de cromatografia com placas que são permeáveis ao fluxo de líquido, mas transportando o material de enchimento, o material de enchimento pode ser dividido em várias camadas sobrepostas, diminuindo, assim, a diferença de pressão ao longo da altura total do material de enchimento (ver, por exemplo, GB 1203439, US 3539505). Tentativas também foram feitas para eliminar as desvantagens de grandes colunas, por meio de várias paredes dispostas na coluna e tendo a direção do eixo vertical da coluna. Estas paredes dividem a coluna em várias seções paralelas de uma seção transversal menor, as seções se estendendo continuamente ao longo do leito de enchimento ou ao longo de quase todo o leito (ver, por exemplo, EP 0005708, US 5124133, US 3298527).

[008] No documento WO 91/014490 um compressor de suspensão é relatado, que facilita a obtenção de um empacotamento de leito absorvente homogêneo em colunas de cromatografia líquida, melhorando assim a eficiência das colunas e aumentando a precisão dos resultados assim obtidos.

[009] No documento US 6440301 é relatado um aparelho que facilita o uso de um objeto de vidro de laboratório padrão dimensionado e configurado como coluna de cromatografia. Também é relatado que um suporte de matriz de aço inoxidável, o suporte definindo uma abertura central e definindo adicionalmente um diâmetro circular reduzido com ranhuras engatadas por uma junta de vedação em O.

[010] No documento US 3374606 é relatado um método e um aparelho para separações cromatográficas compreendendo placas de peneira que podem ser dispostas em qualquer sequência ou posição dentro do leito de empacotamento ou material de separação em uma coluna de cromatografia, separando assim a coluna em uma série de zonas de separação.

[011] Foi relatado no documento US 5770061 que o resultado de separação e capacidade de grandes colunas de separação pode ser acentuadamente melhorado pela disposição na coluna de uma estrutura interna que é leve, autoportante e fácil de instalar na coluna. Em mais detalhe, é relatada uma coluna de separação, que é caracterizada pelo fato de que seu espaço de material de enchimento compreende na direção vertical pelo menos duas zonas entre as quais nenhum meio que impediria o fluxo vertical existe e que são divididos por meio de paredes substancialmente verticais em seções separadas, as zonas sendo de tal forma dimensionadas que a borda superior das paredes na zona mais alta está abaixo da superfície superior do material de enchimento da coluna nas condições de funcionamento da coluna.

[012] No documento US 4351621 é relatado um conector para combinação de equipamentos. Um distribuidor de fluxo de coluna de cromatografia de alta velocidade é relatado em EP 1606615. No documento JP 2008241624 é relatada uma unidade de introdução de líquido para uso em coluna de cromatografia. Um dispositivo de cromatografia é relatado em JP 62-042051.

Sumário da Invenção

[013] Um aspecto tal como aqui relatado é um suporte de coluna de cromatografia compreendendo - pelo menos um plano de simetria, - um único eixo geométrico de simetria, - pelo menos três pernas, - pelo menos três conectores retos, em que os conectores formam um plano que é perpendicular ao eixo geométrico de simetria do suporte, em que os conectores são conectados uns aos outros no eixo geométrico de simetria ou em um círculo em torno do eixo geométrico de simetria, em que cada perna está conectada a um conector, em que cada uma das pernas é perpendicular ao plano formado pelos conectores, em que todas as pernas estão no mesmo lado do plano formado pelos conectores.

[014] Em uma modalidade, as pernas são placas que compreendem uma multiplicidade de furos. Em uma outra modalidade, o suporte compreende três pernas e um conector, em que o conector é em forma de Y. Em também uma modalidade, o suporte compreende pelo menos quatro pernas e no máximo dezesseis pernas e compreende quatro conectores.

[015] Em uma modalidade, pelo menos um dos conectores e uma das pernas são combinados em uma unidade. Em uma modalidade cada um dos conectores é combinado com uma perna em uma unidade.

[016] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia compreende mais pernas do que conectores.

[017] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia compreende - pelo menos três pernas que cada uma forma uma unidade com um conector, - pelo menos três pernas que não formam uma unidade com um conector, - pelo menos uma perna que é circular em torno do eixo geométrico de simetria.

[018] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia é um conjunto único.

[019] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia compreende vários conjuntos.

[020] Em uma modalidade, os conectores possuem uma largura menor do que 8,0 mm.

[021] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia tem um diâmetro menor do que 12,5 cm.

[022] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia é feito de aço inoxidável, ou silicone, ou politetrafluoroetileno, ou vidro.

[023] Outro aspecto tal como aqui relatado é um dispositivo que compreende - uma coluna de cromatografia, - pelo menos um calcinador móvel, e - pelo menos um suporte, tal como aqui relatado, em que o calcinador móvel e o suporte de coluna de cromatografia estão dentro da coluna de cromatografia, e em que o calcinador móvel está acima do suporte de coluna de cromatografia, quando a coluna de cromatografia é colocada verticalmente e vista de lado.

[024] Outro aspecto tal como aqui relatado é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado para a estabilização de um empacotamento de coluna de cromatografia a partir do interior do empacotamento.

Descrição Detalhada da Invenção

[025] É descrito aqui um suporte de coluna de cromatografia compreendendo - um eixo geométrico de simetria, - pelo menos um plano de simetria que é perpendicular ao eixo geométrico de simetria, - pelo menos três pernas que são perpendiculares ao plano de simetria, - pelo menos três conectores retos, em que os conectores definem o plano de simetria que é perpendicular ao eixo geométrico de simetria do suporte, em que os conectores são conectados uns aos outros ou em torno do eixo geométrico de simetria, em que cada perna está conectada a um conector, em que cada uma das pernas é perpendicular ao plano definido pelos conectores, em que todas as pernas estão no mesmo lado do plano definido pelos conectores, em que o plano definido pelos conectores não é sólido.

[026] Verificou-se que a interface de contato entre o calcinador móvel colocado sobre o suporte de coluna de cromatografia e a coluna de cromatografia, na qual o dispositivo é colocado, não devem interferir com as propriedades do calcinador móvel suportado.

[027] Verificou-se que para a construção do suporte de coluna de cromatografia tem de ser considerado o fato de que ele é colocado no interior do material de cromatografia e, assim, é rodeado por este. Assim, o suporte de coluna de cromatografia é construído de modo a minimizar a perturbação do material de cromatografia durante o processo de empacotamento da coluna. Além disso, é construído de uma maneira a minimizar a perturbação do fluxo da fase móvel através do material de cromatografia durante o processo de separação cromatográfica.

[028] Verificou-se que o suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado pode ser feito como uma peça única (por exemplo, por fundição do material moldado em um molde de fundição), ou a partir de peças múltiplas (por exemplo, pela conexão das peças juntas, tais como aparafusando ou colando).

[029] O suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado não está fixado à coluna de cromatografia. Ele pode ser removido da coluna sem a necessidade de primeiro separá-lo da coluna.

[030] O suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado suporta o empacotamento da coluna de cromatografia no interior do empacotamento. Em contraste a isso, colunas de cromatografia, bem como placas superior e/ou inferior no interior do suporte de coluna de cromatografia do empacotamento da coluna de cromatografia a partir do exterior. O suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado forma uma estrutura no interior do empacotamento da coluna de cromatografia. Esta estrutura suporta a estabilidade e a homogeneidade do empacotamento do material de cromatografia a partir do interior do empacotamento. Em contraste, uma coluna de cromatografia comum suporta o empacotamento do material de cromatografia apenas a partir do exterior.

[031] Assim, um empacotamento de coluna de cromatografia compreendendo um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado tem uma estabilidade melhorada em comparação com um empacotamento de coluna de cromatografia em uma coluna de cromatografia convencional, sem o suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado.

[032] O termo "um conector e uma perna são combinados em uma única unidade" indica que a presença de um conector adicional é obsoleta, pois a perna tem o mesmo comprimento que o conector e está conectada a outros conectores/pernas em ou em torno do eixo geométrico de simetria.

[033] Em um método de purificação de cromatografia de coluna de líquido, o material de cromatografia é localizado dentro de um compartimento de coluna (coluna de cromatografia) e indicado como "fase estacionária". Para permitir uma fase estacionária para interagir com substâncias/polipeptídeos em uma solução aplicada a ele, a fase estacionária é rodeada por/incorporada em uma "fase móvel". O termo "fase móvel"denota um líquido, por exemplo, uma solução aquosa tamponada, uma mistura de água e um solvente orgânico ou um solvente orgânico, que é utilizado no método de purificação cromatográfica, no qual é empregada uma fase estacionária.

[034] Diferentes métodos de cromatografia são bem estabelecidos e amplamente utilizados para a recuperação de polipeptídeo e purificação, tais como cromatografia por afinidade com proteínas microbianas (por exemplo, cromatografia por afinidade com proteína A ou proteína G), cromatografia de troca iônica (por exemplo, troca catiônica (resinas de carboximetila), troca aniônica (resinas de amino etila) e troca de modo misto), adsorção tiofílica (por exemplo, com beta-mercaptoetanol e outros ligantes SH), interação hidrofóbica ou cromatografia de adsorção aromática (por exemplo, com fenil-sefarose, resinas aza-arenofílicas ou ácido m-aminofenilborônico), cromatografia por afinidade com quelato de metal (por exemplo, com material de afinidade com Ni(II) e Cu(II)), cromatografia de exclusão por tamanho e métodos eletroforéticos (tais como eletroforese em gel, eletroforese capilar) (ver, por exemplo, Vijayalakshmi, M.A., Appl. Biochem. Biotech. 75 (1998) 93-102).

[035] Em uma separação ou purificação com coluna de cromatografia de um polipeptídeo bruto normalmente é empregada uma coluna de cromatografia que compreende um material de cromatografia e uma fase móvel. A fase móvel é forçada a passar através da coluna de cromatografia e, deste modo, através do material de cromatografia por aplicação de pressão à fase móvel. Mediada pela fase móvel, a pressão é também aplicada ao material de cromatografia em que a redução da pressão a partir da entrada da coluna de cromatografia para saída da coluna de cromatografia é estabelecida. Na saída da coluna de cromatografia, a pressão é inferior à pressão atmosférica no exterior. Assim, à fração superior do material de cromatografia na coluna de cromatografia é aplicada a força de pressão mais elevada.

[036] A pressão aplicada depende normalmente por um lado do tamanho das partículas do material de cromatografia, bem como da viscosidade da fase móvel como um fluxo constante através da coluna de cromatografia é definido, mas não uma pressão constante. Geralmente, a pressão aumenta com a diminuição do tamanho de partícula do material de cromatografia. A uma taxa de fluxo constante através do material de cromatografia, uma alteração na viscosidade da fase móvel, por exemplo, durante a regeneração ou limpeza do material de cromatografia, resulta em uma alteração da pressão aplicada ao material de cromatografia. O material de cromatografia, em geral, não é um material insensível à pressão, isto é, pode ser comprimido e se expande após uma compressão. Portanto, com o aumento da pressão aplicada, o material de cromatografia é comprimido e a altura do material de cromatografia no interior da coluna de cromatografia, ou seja, a altura do leito é reduzida. Da mesma forma, com uma diminuição da pressão aplicada, o material de cromatografia se expande novamente e a altura do material de cromatografia no interior da coluna de cromatografia aumenta ao máximo a altura antes da aplicação da pressão. Esta compressão e expansão do material de cromatografia é ao mesmo tempo um processo macroscópico de todo o material de cromatografia e um processo microscópico das partículas individuais do material de cromatografia. Com um número crescente de ciclos de compressão-expansão, as partículas do material de cromatografia se quebram em partículas menores. Com a diminuição do tamanho de partícula das partículas do material de cromatografia, o empacotamento do material de cromatografia fica mais compacto e, com isso, ao mesmo tempo, a pressão necessária para manter um fluxo constante de fase líquida através da coluna de cromatografia, ou seja, o material de cromatografia aumenta. Isto por sua vez resulta em mais uma quebra adicional das partículas de material de cromatografia resultando novamente em um aumento da pressão e assim por diante.

[037] Uma separação de coluna de cromatografia em geral pode ser operada a uma pressão máxima. Quando o limite superior de pressão é alcançado, o empacotamento da coluna de cromatografia tem de ser substituído na sua totalidade.

[038] O suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, provê uma série de vantagens.

[039] O suporte, como aqui relatado, é móvel dentro da coluna, isto é, pode ser colocado em qualquer lugar ao longo do eixo da coluna. Assim, a altura do suporte e com isso a altura da seção horizontal correspondente da coluna de cromatografia é variável e pode ser adaptada às propriedades do material de cromatografia utilizado com o suporte. Além disso, como o suporte é móvel dentro da coluna, danos à parede interior da coluna de cromatografia são impedidos.

[040] O suporte, como aqui relatado, pode ser feito de qualquer material que possa ser usado na coluna de cromatografia, tal como Teflon (politetrafluoroetileno), aço inoxidável, silicone ou vidro. Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, é feito de politetrafluoroetileno ou aço inoxidável ou silicone ou vidro. Isto permite o fornecimento de um suporte inerte que não interfira ou interaja com o material de cromatografia (empacotamento da coluna), bem como as substâncias a serem separadas. Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia é feito de um material inerte cromatograficamente.

[041] Devido ao suporte, tal como aqui relatado, não estar fixado à coluna de cromatografia, o suporte pode ser aplicado a, e também removido da coluna de uma maneira fácil. Além disso, devido ao suporte ser removível da coluna, ele pode ser facilmente e eficientemente limpo e desinfetado. Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia no dispositivo, tal como aqui relatado, é livremente móvel dentro da coluna de cromatografia. Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia no dispositivo, tal como aqui relatado, está dentro da coluna de cromatografia, mas não fixado à parede interna da coluna de cromatografia.

[042] Além disso, com o suporte, como aqui relatado, é possível proporcionar uma adição geralmente aplicável, flexível, a colunas de cromatografia existentes. Com isto, os custos necessários para expandir a aplicabilidade de colunas de cromatografia existentes são reduzidos.

[043] O suporte, tal como aqui relatado, pode ser fornecido em variações muito diferentes de diâmetro e altura e com isto é aplicável a um grande número de diferentes colunas de cromatografia. Mas, o diâmetro do suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, é sempre menor que o diâmetro interno da coluna de cromatografia, a fim de garantir uma mobilidade livre no interior da coluna, quer durante o empacotamento da coluna e/ou o uso da coluna.

[044] Se as pernas do suporte estão na forma de uma placa, um efeito de estabilização adicional do material cromatográfico pode ser fornecido. Nesta modalidade, as pernas e os conectores formam uma única unidade e, assim, o suporte de coluna de cromatografia compreende pelo menos três pernas, que estão conectadas umas às outras em ou em torno do eixo geométrico de simetria.

[045] Geralmente, o suporte, tal como aqui relatado, pode ser usado em combinação com um calcinador móvel. Nessa combinação, o suporte pode proporcionar um efeito de estabilização em todo o material de cromatografia no interior da coluna.

[046] O suporte, como aqui provido, melhora o processo de empacotamento, pois um empacotamento homogêneo do material de cromatografia pode ser efetuado já antes da aplicação do suporte. Após o uso da coluna (coluna de utilização única) ou quando o material de cromatografia tem de ser substituído (coluna de multi-uso), o suporte pode ser facilmente removido com o material de cromatografia, tal como com uma coluna que não compreende um suporte, tal como aqui relatado. Também é possível fazer o processo de empacotamento com o suporte, como aqui relatado, já introduzido na respectiva seção horizontal da coluna de cromatografia.

[047] Verificou-se que o suporte, tal como aqui relatado, pode ser usado com qualquer coluna de cromatografia fornecendo o material de cromatografia nela, uma estrutura interna e suporte sem a necessidade de modificar a coluna de cromatografia.

[048] Assim, um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, para apoiar o material de cromatografia em uma coluna de cromatografia.

[049] Em uma modalidade, o suporte é feito de aço inoxidável, ou silicone, ou politetrafluoroetileno, ou vidro.

[050] Em uma modalidade, o suporte compreende - pelo menos um plano de simetria, - um eixo geométrico de simetria, - pelo menos três pernas, - pelo menos três conectores retos, em que os conectores definem um plano que é perpendicular ao eixo geométrico de simetria do suporte, em que os conectores são conectados uns aos outros em ou em torno do eixo geométrico de simetria, em que cada perna está conectada a um conector, em que cada uma das pernas é perpendicular ao plano definido pelos conectores, em que todas as pernas estão no mesmo lado do plano definido pelos conectores.

[051] Em uma modalidade, as pernas são placas e os conectores e as pernas formam uma unidade na qual a borda superior da respectiva perna é o conector.

[052] Em uma modalidade, as pernas são placas perfuradas.

[053] Em uma modalidade, o suporte compreende uma ou mais pernas circulares que têm raios diferentes em relação uns aos outros e com relação ao eixo geométrico de simetria.

[054] Em uma modalidade, é possível um fluxo lateral entre as seções definidas pelas pernas do suporte.

[055] É adicionalmente vantajosa a estrutura simétrica única do suporte, especialmente quando é feita de um material inerte.

[056] Pela arquitetura aberta do suporte, ou seja, devido à ausência de uma fixação permanente à parede interna da coluna de cromatografia, o material de cromatografia é provido de uma estrutura interna, sem a introdução de compartimentos que estão hermeticamente fechados para outros compartimentos no interior da coluna. Pela estrutura aberta (i) o empacotamento do material de cromatografia pode ser obtido de uma forma mais homogênea, (ii) a formação de tensão no interior do empacotamento pode ser evitada, (iii) transporte de fluxo e de massa é assegurado ao longo de toda a seção transversal da coluna de cromatografia, (iv) um processo de empacotamento e desempacotamento fácil é possível. Assim, um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, conforme relatado aqui, para proporcionar uma estrutura interna de um material de cromatografia em uma coluna de cromatografia.

[057] Além disso, a região de empacotamento suportada pode ser a partir do fundo da coluna até o topo, sem quaisquer áreas não suportadas no meio ou acima ou abaixo do empacotamento do material de cromatografia.

[058] Além disso, cada uma das seções horizontais fornecidas por uma combinação de um suporte, tal como aqui relatado, e um calcinador móvel pode ser empacotada individualmente permitindo o empacotamento de uma coluna de cromatografia a partir do fundo para o topo. Além disso, em cada seção horizontal, um material de cromatografia diferente pode ser introduzido, por conseguinte, fornecendo um meio para uma denominada cromatografia híbrida.

[059] Em combinação com um calcinador móvel, o suporte, tal como aqui relatado, fornece um apoio vertical, bem como horizontal do material de cromatografia no interior da coluna de cromatografia. Assim, um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, para prover apoio vertical e horizontal do material de cromatografia dentro de em coluna de cromatografia.

[060] Assim, o suporte, tal como aqui relatado, proporciona um meio para utilizar as colunas de cromatografia utilizadas atualmente de uma forma mais flexível e, ao mesmo tempo minimiza os custos associados com a flexibilidade como apenas o novo suporte tem ao ser adicionado.

[061] Na parte superior da Figura 1, uma modalidade do suporte, tal como aqui relatado, que tem quatro pernas, sob a forma de planos (áreas completas) é mostrada. Nesta modalidade, as pernas e os conectores são combinados em uma única unidade e o suporte não compreende conectores adicionais. A borda superior da perna corresponde ao conector. Os planos das pernas estão em um ângulo de 90° entre si e em relação ao plano definido pelas bordas superiores das pernas (isto é, os conectores). O diâmetro do suporte e da área exterior das pernas (isto é, a borda externa das pernas que é a borda na direção da coluna e é perpendicular ao plano definido pelas bordas/conectores superiores) pode ser adaptado para qualquer diâmetro da coluna, de modo que o suporte pode ser introduzido e removido de dentro de qualquer coluna, sem atrito e danos na superfície interna da coluna. A altura do suporte, tal como aqui relatado, é variável e pode ser ajustada para a aplicação específica. A área de fundo do suporte pode ser adaptada à base na qual o suporte deve ser colocado. A base é um calcinador na maioria dos casos. A base apoia o suporte e carrega seu peso sem a parede da coluna sendo envolvida. A área superior do suporte da coluna de cromatografia é formada de uma maneira que ela é adequada como uma base para um calcinador de coluna móvel (separador de coluna de cromatografia que se move) ou o adaptador superior da coluna pode ser colocado no mesmo. Por isso, é assegurado que a empacotamento completo é estabilizado pelo suporte, tal como aqui relatado. Assim, um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte, tal como aqui relatado, para estabilizar o empacotamento de uma coluna de cromatografia. Se um separador de coluna móvel é utilizado, outro suporte, opcionalmente de uma forma diferente, pode ser colocado sobre o separador de, no máximo, até o comprimento máximo de coluna alcançado. No entanto, é também possível que apenas uma parte do empacotamento da coluna de cromatografia seja equipada com o suporte, tal como aqui relatado.

[062] Na parte inferior da Figura 1, uma modalidade do suporte, tal como aqui relatado, é mostrada. Este suporte compreende seis pernas, cada uma na forma de um plano, que são divididas de forma simétrica. A borda superior de cada uma das seis pernas representa os seis conectores com os quais as pernas formam uma unidade nesta modalidade. As pernas são ligadas umas às outras em um círculo em torno do eixo geométrico de simetria do suporte. A pressão esperada no interior de uma coluna e a função do suporte que é exigida determina o número de pernas. Estes são dependentes do meio de cromatografia utilizado e das condições do processo.

[063] Na parte superior da Figura 2, uma modalidade do suporte, tal como aqui relatado, é mostrada. Nesta modalidade as pernas estão na forma de um plano e formam uma unidade em conjunto com os conectores que são representados pelas bordas superiores de cada uma das pernas. A característica desta modalidade são as aberturas alongadas nos planos das pernas do suporte. Esta forma oferece um suporte melhorado para o material cromatográfico e é especialmente adequada para géis macios. Assim, um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado nesta modalidade para estabilizar o empacotamento de géis de cromatografia macios. Sem estar ligado pela teoria admite- se que o material cromatográfico pode encontrar mais apoio/área de contato nos compartimentos estreitos. A carga e a pressão são absorvidas pelo suporte e passadas para as camadas inferiores do empacotamento da coluna em forma reduzida. Assim, um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, para adsorver pressão no interior do empacotamento de uma coluna de cromatografia. Outra característica desta modalidade é a rede transversal que é obtida. Um fluxo lateral entre as seções individuais constituídas pelas pernas do suporte é, portanto, possível. Assim, em uma modalidade do suporte, tal como aqui relatado, um fluxo lateral entre as seções individuais definidas pelas pernas do suporte e do eixo geométrico de simetria do suporte é possível. Isso deve proporcionar uma transferência de massa e desempenho da coluna melhorados. A homogeneidade do empacotamento durante a vida da coluna também permanece inalterada. As tensões que aparecem se espalham melhor no leito da coluna, que é apenas parcialmente interrompida.

[064] No meio da Figura 2, uma modalidade específica do suporte, tal como aqui relatado, é mostrada. Nesta modalidade, as pernas estão na forma de uma placa perfurada. Também nesta modalidade, cada um dos conectores forma uma única unidade com as pernas individuais. Nesta modalidade, algumas das pernas estão conectadas umas às outras no eixo geométrico de simetria do suporte. Nesta modalidade, o suporte compreende pernas adicionais que não estão conectadas umas às outras em torno ou no eixo geométrico de simetria. Este suporte é caracterizado pelo fato de que orifícios no interior dos planos das pernas do suporte proporcionam a rede transversal. Nesta modalidade, as pernas são feitas de placas perfuradas. Nesta modalidade, o suporte compreende adicionalmente, pelo menos duas, especialmente três, pernas circulares (e conectores redondos) que têm raios diferentes em relação ao eixo geométrico de simetria do suporte. Assim, em uma modalidade, um primeiro número de pernas (conectores) está conectado entre si no eixo geométrico de simetria do suporte e todas as pernas (conectores) são conectadas umas às outras pelas pernas circulares (conectores redondos) do suporte. Em uma modalidade, o suporte compreende três pernas circulares (conectores redondos), em que a primeira perna circular (conector redondo) tem um raio em relação ao eixo geométrico de simetria do suporte de um sexto do diâmetro total do suporte, a segunda perna circular (conector redondo) tem um raio de um terço do diâmetro total do suporte, e a terceira perna circular (conector redondo) tem um raio de metade do diâmetro total do suporte. Todas as pernas estão também conectadas umas às outras com os conectores redondos adicionais. A relação das áreas livres e dos espaços da parede nesta modalidade é diferente do que nas modalidades descritas antes. Neste caso, mais seções resultam para o empacotamento aqui, o que pode ser benéfico para grandes diâmetros de coluna. Assim, um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um conector que compreende pernas circulares e placas perfuradas como pernas para estabilizar o empacotamento da coluna de colunas de cromatografia de diâmetro grande. O termo "coluna de cromatografia de diâmetro grande" indica uma coluna de cromatografia com um diâmetro interno de 15 cm ou mais.

[065] Na parte inferior da Figura 2, uma modalidade exemplificativa do suporte, tal como aqui relatado, é mostrada. Aqui, o suporte é mostrado dentro de uma coluna cromatográfica. A coluna compreende um suporte, tal como aqui relatado, e um calcinador de coluna de cromatografia móvel colocado nela. Estes elementos são flexíveis e não estão permanentemente conectados à parede da coluna ou outros componentes de coluna ou um ao outro. Nesta modalidade, o suporte compreende três pernas em forma de uma haste e três conectores conectados uns aos outros no eixo geométrico de simetria do suporte.

[066] Na Figura 3, uma coluna cromatográfica exemplificativa, que está equipada com diversos suportes diferentes, tal como aqui relatado, é mostrada. A coluna compreende, além disso, um número de separadores de coluna de cromatografia móveis. A parede da coluna oferece apenas a orientação para os suportes e os separadores de coluna móveis que deslizam ao longo da parede da coluna de cromatografia, enquanto eles são movidos. A parede da coluna não tem de ser modificada. Nenhum dos elementos está permanentemente conectado ou fixado na parede da coluna. Esta coluna também pode ser empacotada com diferentes materiais cromatográficos nas seções horizontais individuais constituídas de um par de suportes e separador. Assim, um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte, tal como aqui relatado, e um calcinador móvel para definir seções horizontais em uma coluna de cromatografia. A composição de todos os elementos utilizados pode ser mudada de forma muito simples todas as vezes. O desempacotamento da coluna pode ser efetuado de uma forma convencional. Os suportes e separadores de coluna de cromatografia móveis usados podem simplesmente ser removidos da coluna junto com o empacotamento da coluna. Todas as partes do equipamento usadas podem ser limpas ou parcialmente substituídas, independentemente umas das outras.

[067] Na Figura 4, um diagrama de fluxo de pressão de uma coluna de cromatografia que compreende um material cromatográfico de DEAE-Sepharose é mostrado. A curva da esquerda mostra o comportamento típico de um material cromatográfico de DEAE-Sepharose nas colunas que são empacotadas de uma maneira convencional. Na curva da direita, o comportamento de uma coluna equipada com dois suportes, tal como aqui relatado, e dois separadores de colunas cromatográficas, é mostrado. Pode ser visto que a taxa de fluxo máxima da coluna empacotada convencionalmente é menor do que à metade da taxa de fluxo que foi alcançada com a coluna que compreende um suporte, tal como aqui relatado, (24 l/h ao invés de 55 l/h). Pode ser visto que uma descompressão tripla ocorre (a partir de 1,5 bar a 0,5 bar) na área de fluxo de 22 l/h, o que representa um fluxo de processo típico (detalhes da coluna sem um suporte, tal como aqui relatado: 4 litros de suspensão de DEAE Sepharose, altura do leito: 24 cm; eluente usado: 0,0005 mole (condutividade 5 mS) de solução de KCl; detalhes da coluna que compreende um suporte, tal como aqui relatado: altura do suporte utilizado: 8 cm, força do separador utilizado: 5 mm; 4 l de suspensão de DEAE Sepharose distribuídos em três compartimentos, altura do leito:24 cm, eluente usado: 0,0005 mol (condutividade 5 mS) de solução KCl).

[068] Na Figura 5, um diagrama de fluxo de pressão de uma coluna de cromatografia que compreende um material cromatográfico HA-Ultrogel é mostrado. A curva da esquerda mostra o comportamento típico de HA-Ultrogel em colunas que são operadas sem um suporte, tal como é aqui relatado. Na curva da direita, o comportamento de uma coluna compreendendo dois suportes, tal como aqui relatado, e dois separadores de coluna cromatográfica móveis, é mostrado. Pode ser visto que o fluxo máximo da coluna sem o suporte, tal como aqui relatado, é menor do que a taxa de fluxo da coluna que compreende um suporte, tal como aqui relatado (8 l/h ao invés de 15 l/h) (detalhes da coluna sem um suporte, tal como aqui relatado: 4 l de suspensão de HA- Ultrogel, altura do leito: 24 cm; eluente usado: 0,0005 mol (condutividade 5 ms) de solução KCl; detalhes da coluna que compreende um suporte, tal como aqui relatado: altura do suporte utilizado: 8 cm, força do separador usado: 5 mm, 4l de suspensão de DEAE Sepharose distribuídos em três compartimentos, altura do leito: 24 cm, eluente usado: 0,0005 mol (condutividade 5 ms) de solução KCl).

[069] Assim, outro aspecto, tal como aqui relatado, é um dispositivo compreendendo - uma coluna de cromatografia, - pelo menos um separador de coluna de cromatografia móvel, e - pelo menos um suporte, tal como aqui relatado.

[070] Em uma modalidade, o dispositivo compreende dois separadores de coluna de cromatografia e dois suportes, tal como aqui relatado. Em outra modalidade, o dispositivo compreende três separadores de colunas de cromatografia e três suportes, tal como aqui relatado. Em uma outra modalidade, tanto o separador quanto o suporte têm um diâmetro externo que é menor do que o diâmetro interno da coluna de cromatografia. Em também uma modalidade, o diâmetro do suporte e do separador é de desde 90% a 99% do diâmetro interno da coluna de cromatografia. Todas as modalidades de suporte, tal como aqui relatado e descrito acima, também são modalidades de suporte compreendidas no dispositivo, tal como aqui relatado. Modalidades específicas dos separadores compreendidos no dispositivo, tal como aqui relatado, são descritas abaixo.

[071] A presença de um separador de coluna de cromatografia divide a coluna de cromatografia em uma câmara de coluna de cromatografia superior e uma câmara de coluna de cromatografia inferior. O separador tem uma posição variável dentro da coluna de cromatografia. Esta "mobilidade"é provida por um anel guia. Assim, o separador pode deslizar verticalmente dentro da coluna e o separador é embutido no material de cromatografia.

[072] Um separador de coluna de cromatografia que consiste de um anel guia e de um calcinador montado nele não interfere com o processo de separação cromatográfica. O separador permite, por exemplo, que apenas uma fração do material de cromatografia seja trocada quando a pressão máxima de trabalho é atingida, sem a necessidade de substituir todo o empacotamento da coluna de cromatografia. Isto é, o separador de coluna de cromatografia permite que o material de cromatografia em uma câmara de coluna de cromatografia superior possa ser trocado sem interferir com o material de cromatografia em uma câmara de coluna de cromatografia inferior. A remoção parcial do material de cromatografia é possível, pois o separador, por um lado, divide o total do material de cromatografia na coluna de cromatografia em frações distintas e, por outro lado, impede que o material de cromatografia empacotado na câmara de coluna de cromatografia inferior seja perturbado após a remoção do material de cromatografia na câmara de coluna de cromatografia superior. Assim, pelo menos a fração do material de cromatografia, que não está exposta a mudanças de pressão máxima e, portanto, não é arrancada, pode continuar a ser utilizada sem um impacto negativo na eficiência da separação. Mas, pela manutenção de uma fração do material de cromatografia, uma redução do custo do produto pode ser conseguida.

[073] O separador de coluna de cromatografia compreende um anel guia no qual um calcinador feito de qualquer material inerte, pode ser montado. Um "material inerte"é um material que não interfere no processo de separação por cromatografia, ou seja, um cromatograma obtido com uma coluna de cromatografia contendo um ou mais separadores de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, é idêntico ao de um cromatograma obtido com uma coluna de cromatografia contendo nenhum separador de coluna de cromatografia sob/com condições idênticas. Esses materiais inertes são, por exemplo, metal, especialmente aço inoxidável, silicone, polipropileno, polietileno, politetrafluoretileno, materiais sinterizados ou combinações dos mesmos, especialmente aço inoxidável revestido com politetrafluoretileno.

[074] Na Figura 6, separadores de coluna de cromatografia exemplificativas são mostrados. Na Figura 6a, um separador com um único calcinador é representado compreendendo um calcinador 1 e um adaptador 2. Na Figura 6b, um separador com um calcinador superior 3 e um calcinador inferior 4 e um adaptador 2 é mostrado. Na figura 6c, a seção transversal vertical do anel guia do separador, que compreende duas áreas de seção transversal axialmente simétricas 5, 6 é mostrado, em que cada uma das áreas de seção transversal axialmente simétricas tem a) uma estrutura afunilada, em que o afunilamento é a partir do exterior para o interior do anel guia, e b) um entalhe 8 com uma abertura dirigida para o interior do anel guia para a montagem de um calcinador.

[075] Em uma modalidade, o separador de coluna de cromatografia compreende um anel guia e um calcinador montado no anel guia.

[076] Em uma modalidade, o anel guia é de forma circular e para utilização em uma coluna de cromatografia líquida. Em outra modalidade, o anel guia tem uma seção transversal vertical, que compreende duas áreas de seção transversal axialmente simétricas 5 e 6, em que cada uma das áreas de seção transversal axialmente simétricas tem a) uma estrutura afunilada, em que o afunilamento é a partir do exterior para o interior do anel guia, e b) um entalhe 8 com uma abertura dirigida para o interior do anel guia para a montagem de um calcinador.

[077] Em uma modalidade, o entalhe é um entalhe retangular. Em uma modalidade adicional, cada uma das áreas de seção transversal tem uma forma triangular e o lado mais longo 7 tem um comprimento de pelo menos 1,5 vezes o diâmetro do entalhe 8. Em uma modalidade adicional, o anel é feito de borracha, plástico, silicone, politetrafluoroetileno, polietileno ou polipropileno.

[078] Em uma modalidade, o calcinador é a) um único calcinador, ou b) dois calcinadores com um calcinador superior e um calcinador inferior.

[079] Em outra modalidade, a) o calcinador tem um tamanho de poro de desde 1 μm a 20 μm, ou b) cada um dos calcinadores tem um tamanho de poro de desde 1 μm a 20 μm de forma independente um do outro em que o tamanho dos poros do calcinador superior é menor do que o tamanho dos poros do calcinador inferior. Em outra modalidade, o calcinador é feito de metal, silicone, polipropileno, polietileno, politetrafluoroetileno, materiais sinterizados ou suas combinações. Em outra modalidade, o separador compreende porta distância, todos eles ligados a um dos lados do separador.

[080] Em uma modalidade, o separador de coluna de cromatografia é caracterizado pelo fato de que a) o separador separa uma seção da coluna de cromatografia em uma câmara de coluna de cromatografia superior e uma câmara de coluna de cromatografia inferior, e b) o separador tem uma posição variável dentro da coluna de cromatografia, deslizando ao longo da parede interna da coluna de cromatografia.

[081] Em uma modalidade, o separador de coluna de cromatografia compreende um calcinador, em outra modalidade, o separador compreende um calcinador superior e um calcinador inferior. Em outra modalidade, o separador de coluna de cromatografia ou o calcinador superior ou o calcinador inferior tem um tamanho de poros de desde 1 μm a 20 μm, em que o tamanho de poros do calcinador superior é menor do que o tamanho dos poros do calcinador inferior. Em outra modalidade, o calcinador é feito de metal, silicone, polipropileno, polietileno, politetrafluoroetileno, materiais sinterizados ou suas combinações.

[082] O adaptador ou o anel guia tem uma forma circular com uma seção transversal que pode ter qualquer forma, desde que ele tenha um entalhe retangular, para levantar o calcinador. Por exemplo, em uma modalidade a seção transversal do adaptador tem a forma de um triângulo com um entalhe retangular, para levantar o calcinador no vértice do triângulo com o maior ângulo interno. Em outra modalidade, o adaptador ou o anel guia tem a seção transversal ou fornece as áreas de seção transversal em forma de um triângulo, em outra modalidade de um triângulo retangular, em que o calcinador está ligado ao vértice do triângulo com um ângulo interno de 90°. Em outra modalidade, a área da seção transversal do anel guia tem uma forma de trapézio com o entalhe retangular para levantar o calcinador que está no lado mais curto dos lados paralelos. Em uma modalidade, o adaptador tem a forma de um retângulo, em outra modalidade de um retângulo com ângulos internos de 90°, 90°, 80° e 100°. Em uma modalidade, os ângulos internos são de 80° e 100°, estão no lado superior ou no lado inferior do retângulo. Em uma modalidade, o lado mais comprido do anel guia é a borda externa do separador e está em contato com a parede da coluna de cromatografia, quando o separador é colocado dentro de uma coluna de cromatografia. Em outra modalidade, o lado mais longo tem uma orientação vertical. Ainda, em outra modalidade, as áreas de seção transversal do adaptador ou do anel guia tem a forma de um retângulo com ângulos internos de 90° com o entalhe retangular para levantar o calcinador em um dos lados mais curtos, ou no caso de um quadrado em um dos lados. O lado com o entalhe é o lado do adaptador em direção ao centro do separador e, da mesma forma, a coluna de cromatografia ou, em outras palavras, o entalhe está no lado do adaptador ou do anel guia que é paralelo à direção do fluxo da fase móvel e que tem um diâmetro menor do que o diâmetro externo do calcinador. O anel guia tem, além da prevenção da fase líquida e partículas de material de cromatografia que passam pelo separador ao lado do calcinador, a função de evitar a inclinação e com isso o bloqueio de todo o separador na coluna de cromatografia, durante a compressão e a expansão do material de cromatografia após a aplicação da pressão externa. O separador é colocado no interior do material de cromatografia empacotado em uma coluna de cromatografia. O separador pode ser movido livremente e colocado exatamente no interior da coluna, uma vez que pode deslizar ao longo da parede interna da coluna de cromatografia. Isto é útil, durante o empacotamento da coluna de cromatografia e para a remoção do separador da coluna de cromatografia. Em uma modalidade, as áreas em corte transversal vertical do anel guia tem a forma de um triângulo ou de trapézio, nas quais o anel guia tem uma estrutura afunilada, em que o afunilamento é a partir do exterior para o interior do anel guia, ou seja, o anel guia tem sua borda externa mais alta do que sua borda interna ou no entalhe, respectivamente. Em uma modalidade, a borda externa do anel guia tem uma altura que é pelo menos 1,5 vezes a altura do entalhe. Em outra modalidade, a borda externa do anel guia tem uma altura que é pelo menos 1,5 vezes, ou duas vezes, ou três vezes, ou mais de três vezes a altura do entalhe.

[083] Se o separador compreende um calcinador superior e um calcinador inferior, em uma modalidade, o adaptador ou um anel guia é um adaptador ou anel único e, em outra modalidade, o adaptador ou o anel guia é feito de um adaptador ou anel superior ou adaptador ou anel inferior. Neste último caso, os dois adaptadores ou anéis têm em uma modalidade uma área de contato que compreende o lado inferior do adaptador ou anel superior e o lado superior do adaptador ou anel inferior, em que os lados de contato são planos, ou seja, não têm nenhum entalhe ou ranhura, e estão em linha com o lado inferior do calcinador superior e o lado superior do calcinador inferior, ou seja, o lado inferior do adaptador superior e o lado inferior do calcinador superior formam uma única superfície sem deslocamento e, do mesmo modo, o lado superior do adaptador ou anel inferior e o lado superior do calcinador inferior formam uma única superfície sem deslocamento em que ambas as superfícies são paralelas.

[084] Geralmente, o menor diâmetro interno do adaptador ou anel guia ou do adaptador superior e do adaptador inferior é menor do que o diâmetro externo do calcinador, ou seja, o adaptador ou anel guia se estende ao longo do perímetro externo do calcinador em direção ao centro da coluna de cromatografia.

[085] O empacotamento de uma coluna de cromatografia com um material de cromatografia com um suporte e/ou um separador de coluna de cromatografia incorporado pode ser dividido em duas fases de empacotamento. O empacotamento pode ser iniciado com o empacotamento de uma primeira fração do material de cromatografia na coluna de acordo com os procedimentos gerais. Depois disso, o suporte e o separador de coluna de cromatografia podem ser colocados no e no topo da primeira fração do material de cromatografia. Finalmente, a segunda fração do material de cromatografia pode ser empacotado na coluna no topo do separador de acordo com os procedimentos gerais. Este método de empacotamento é um empacotamento a partir do fundo para o topo. Em contraste, as colunas não contêm um suporte e um separador são empacotadas a partir do topo requerendo, entre outras coisas, pressão mais elevada de empacotamento. Assim, o suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, proporciona meios para empacotamento de uma coluna de cromatografia em duas etapas sequenciais se um suporte e um separador são utilizados, ou em três ou mais etapas sequenciais se dois ou mais suportes e separadores são utilizados. Com o suporte e o separador, a coluna pode ser dividida em uma câmara superior e em uma câmara inferior (um suporte e um separador) ou uma câmara inferior, uma câmara intermediária e uma câmara superior (dois suportes e dois separadores) do qual cada um é equivalente a uma coluna de cromatografia com altura do leito de material de cromatografia reduzida. Com a divisão da coluna de cromatografia em câmaras menores, o volume (do material de cromatografia em uma câmara) para a superfície (da câmara) a proporção é alterada, isto é, reduzida, e a estabilidade do empacotamento do material de cromatografia é aumentada.

[086] Os exemplos e figuras que se seguem são fornecidos para auxiliar a compreensão da presente invenção, o verdadeiro escopo deles é definido nas reivindicações anexas. Entende-se que podem ser feitas modificações nos procedimentos apresentados sem afastamento do espírito da invenção. Aspectos e modalidades, tal como aqui relatado

[087] Um aspecto, tal como aqui relatado, é um suporte de coluna de cromatografia que compreende - pelo menos um plano de simetria, - um eixo geométrico de simetria, - pelo menos três pernas, - pelo menos três conectores retos, em que os conectores definem um plano que é perpendicular ao eixo geométrico de simetria do suporte, em que os conectores são conectados uns aos outros no eixo geométrico de simetria ou em um círculo em torno do eixo geométrico de simetria, em que cada perna está conectada a um conector, em que cada uma das pernas é perpendicular ao plano definido pelos conectores, em que todas as pernas estão no mesmo lado do plano definido pelos conectores.

[088] Um aspecto, tal como aqui relatado, é um suporte de coluna de cromatografia que compreende - um eixo geométrico de simetria, - pelo menos um plano de simetria que é perpendicular ao eixo geométrico de simetria, - pelo menos três pernas, que são perpendiculares ao plano de simetria, - pelo menos três conectores retos, em que os conectores definem um plano que é perpendicular ao eixo geométrico de simetria do suporte, em que os conectores são conectados uns aos outros no ou em torno do eixo geométrico de simetria, em que cada perna está conectada a um conector, em que cada uma das pernas é perpendicular ao plano definido pelos conectores, em que todas as pernas estão no mesmo lado do plano definido pelos conectores, em que o plano definido pelos conectores não é sólido.

[089] Em uma modalidade, os conectores são placas.

[090] Em uma modalidade, as pernas são placas e os conectores são a borda superior da respectiva placa.

[091] Em uma modalidade, pelo menos um dos conectores e uma das pernas formam uma única unidade, em que as pernas são placas e o conector é a borda superior da placa. Ou seja, o conector é definido pela borda superior da placa.

[092] Em uma modalidade, cada um dos conectores forma uma única unidade com uma perna individual.

[093] Em uma modalidade, cada um dos conectores forma uma única unidade com uma perna. Nesta modalidade, cada uma das pernas forma uma única unidade com um conector e, portanto, o suporte de coluna de cromatografia compreende unidades que estão conectadas umas às outras no ou em torno do eixo geométrico de simetria.

[094] Em uma modalidade, algumas das pernas são conectadas umas às outras no eixo geométrico de simetria do suporte.

[095] Em uma modalidade, as placas são placas perfuradas.

[096] Em uma modalidade, o suporte compreende pernas adicionais que não estão conectadas umas às outras no ou em torno do eixo geométrico de simetria.

[097] Em uma modalidade, o suporte compreende uma ou mais pernas circulares que têm raios diferentes em relação ao eixo geométrico de simetria do suporte.

[098] Em uma modalidade, é possível um fluxo lateral entre as seções definidas pelas pernas do suporte e o eixo geométrico de simetria do suporte.

[099] Em uma modalidade, o suporte compreende três pernas e um conector, em que o conector tem a forma de Y e as pernas são em forma de hastes.

[100] Em uma modalidade, o suporte consiste de três pernas em forma de hastes e um conector em forma de Y.

[101] Em uma modalidade, o suporte consiste de três pernas em forma de placas que são conectadas umas às outras no ou em torno do eixo geométrico de simetria.

[102] Em uma modalidade, o suporte consiste de quatro pernas em forma de hastes e um conector em forma de X.

[103] Em uma modalidade, o suporte consiste de quatro pernas em forma de placas que são conectadas umas às outras no ou em torno do eixo geométrico de simetria.

[104] Em uma modalidade, o suporte consiste de seis pernas em forma de hastes e um conector em forma de X.

[105] Em uma modalidade, o suporte consiste de seis pernas em forma de placas que são conectadas umas às outras no ou em torno do eixo geométrico de simetria.

[106] Em uma modalidade, o suporte consiste de i) quatro primeiras pernas na forma de placas que são conectadas umas às outras no eixo geométrico de simetria, ii) quatro segundas pernas em forma de placas, que não são conectadas umas às outras e às quatro primeiras pernas no eixo geométrico de simetria, e iii) três pernas circulares que são conectadas a cada uma das quatro primeiras e segundas pernas, mas não umas às outras e que têm raios diferentes em relação umas às outras e com o eixo geométrico de simetria.

[107] Em uma modalidade, as placas são placas perfuradas.

[108] Em uma modalidade, o suporte compreende pelo menos quatro pernas e no máximo dezesseis pernas, e compreende quatro conectores.

[109] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia compreende mais pernas do que conectores.

[110] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia compreende - pelo menos três pernas em que cada uma forma uma unidade com um conector, - pelo menos três pernas que não formam uma unidade com um conector, - pelo menos uma perna que é uma perna circular em torno do eixo geométrico de simetria.

[111] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia é uma entidade única.

[112] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia compreende várias entidades.

[113] Em uma modalidade, os conectores possuem uma largura menor do que 8,0 mm.

[114] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia tem um diâmetro menor do que 12,5 cm.

[115] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia é feito de um material cromatograficamente inerte.

[116] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia é feito de aço inoxidável, ou silicone, ou politetrafluoroetileno, ou vidro.

[117] Um aspecto, tal como aqui relatado, é um dispositivo que compreende - uma coluna de cromatografia, - pelo menos um calcinador móvel, e - pelo menos um suporte, tal como aqui relatado, em que o calcinador móvel e o suporte de coluna de cromatografia estão dentro da coluna de cromatografia, e em que o calcinador móvel está acima do suporte de coluna de cromatografia, quando a coluna de cromatografia é colocada verticalmente e vista de lado.

[118] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia é livremente móvel dentro da coluna de cromatografia.

[119] Em uma modalidade, o suporte de coluna de cromatografia no dispositivo, tal como aqui relatado, está dentro da coluna de cromatografia, mas não fixado à parede interna da coluna de cromatografia.

[120] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, para estabilizar um empacotamento de coluna de cromatografia no interior do empacotamento.

[121] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, para suportar o material de cromatografia dentro de uma coluna de cromatografia.

[122] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, para fornecer uma estrutura interna de um material de cromatografia em uma coluna de cromatografia.

[123] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia, tal como aqui relatado, para proporcionar suporte vertical e horizontal do material de cromatografia no interior de uma coluna de cromatografia.

[124] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte, tal como aqui relatado, para estabilizar o empacotamento de uma coluna de cromatografia.

[125] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia que compreende placas perfuradas, como pernas e conectores combinados ou que compreende placas como pernas que compreende aberturas alongadas para estabilizar o empacotamento de géis de cromatografia macios.

[126] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte de coluna de cromatografia para adsorção de pressão para dentro de um empacotamento de coluna de cromatografia.

[127] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um conector que compreende pernas circulares e placas perfuradas como pernas para estabilizar o empacotamento de colunas de cromatografia de diâmetro grande.

[128] Um aspecto, tal como aqui relatado, é o uso de um suporte, tal como aqui relatado, e um calcinador móvel para definir seções horizontais em uma coluna de cromatografia.

Descrição das Figuras

[129] Figura 1 - Modalidades exemplificativas do suporte, tal como aqui relatado: superior: elemento que tem quatro pernas em forma de áreas completas, estas em ângulos de 90° sustentada para cada; inferior: elemento que tem seis pernas.

[130] Figura 2 - Modalidades exemplificativas do suporte, tal como aqui relatado: superior: elemento com quatro pernas que compreendem aberturas alongadas nas áreas das pernas; médio: elemento com furos redondos nas pernas proporcionando rede transversal; inferior: elemento que tem três pernas no interior de uma coluna cromatográfica.

[131] Figura 3 - Esquema de uma coluna cromatográfica que compreende vários suportes diferentes, tal como aqui relatado, e vários separadores de colunas de cromatografia.

[132] Figura 4 - Diagrama de fluxo de uma coluna de cromatografia de DEAE-Sepharose: curva da esquerda: coluna sem um suporte, tal como aqui relatado; curva da direita: coluna com um suporte, tal como aqui relatado.

[133] Figura 5 - Diagrama de fluxo de uma coluna de cromatografia de HA-Ultrogel: curva da esquerda: coluna sem um suporte, tal como aqui relatado; curva da direita: coluna com um suporte, tal como aqui relatado.

[134] Figura 6 - Separadores de coluna de cromatografia exemplificativos: a) separador com um único calcinador compreendendo um calcinador 1 e um adaptador 2; b) separador com um calcinador superior 1 e um calcinador inferior 3 e um adaptador superior 2 e um adaptador inferior 4; c) seção transversal vertical do anel guia do separador, que compreende duas áreas de seção transversal axialmente simétricas 5, 6 cada uma tendo i) uma estrutura afunilada, em que o afunilamento é de fora para o interior do anel guia; e i) um entalhe 8 com uma abertura dirigida para o interior do anel guia para a montagem de um calcinador.

[135] Figura 7 - Valores de pressão durante as regenerações e números de ciclo de uma coluna de cromatografia que não compreende o suporte, tal como aqui relatado.

[136] Figura 8 - Valores de pressão durante as regenerações e números de ciclo de uma coluna de cromatografia que compreende o suporte, tal como aqui relatado.

Exemplos Exemplo 1

[137] Empacotamento de uma coluna de cromatografia que compreende um suporte, tal como aqui relatado.

[138] Durante o processo de empacotamento de colunas que estão equipadas com os elementos de suporte flexíveis de leito, tal como aqui relatado, a inserção e distribuição homogêneas de meios de cromatografia são muito importantes. Há duas possibilidades para alcançar um empacotamento homogêneo. A primeira é colocar o elemento de suporte flexível de leito na coluna em primeiro lugar e depois inserir a suspensão. Neste caso, a suspensão deve ser homogeneamente trazida para dentro da coluna. A outra possibilidade é trazer a suspensão para dentro da coluna em primeiro lugar, homogeneizando-a na coluna e depois introduzir o elemento de suporte de leito, colocando-o diretamente na suspensão na coluna. Durante o assentamento, um leito de coluna homogêneo se forma e encerra o elemento. Após o tempo de assentamento especificado, pode um calcinador de coluna intermediária ser colocado sobre o elemento de suporte de leito ou a coluna pode ser bloqueada com um adaptador. Se um calcinador de coluna intermediária é usado, outro elemento de suporte flexível de leito pode ser colocado no topo e o empacotamento do próximo compartimento da coluna pode ser iniciado. O processo pode ser repetido até que a altura total da coluna esteja cheia/empacotada.

Exemplo 2

[139] Separação cromatográfica utilizando uma coluna de cromatografia convencional que não compreende um suporte, tal como aqui relatado - número de ciclo e características de pressão para a utilização do material de cromatografia.

[140] Aqui, o ciclo de vida de uma coluna de HPLC convencionalmente empacotada é mostrado. Pode ser visto, a partir da Figura 7, que a pressão diretamente após o empacotamento é de cerca de 40 bars. Isto aumenta após o quadragésimo ciclo de regeneração a cerca de 70 bars.

[141] Detalhes de empacotamento: Diâmetro da coluna: 30 cm Tipo de coluna: compressão dinâmica sem elementos de suporte de leito e calcinadores de coluna intermediários Altura do leito: cerca de 40 cm Material cromatográfico utilizado: Vydac C4 Taxa de fluxo: 162 l/h

[142] Os valores de pressão durante as regenerações e números de ciclo são ilustrados na Figura 7.

Exemplo 3

[143] Separação cromatográfica utilizando uma coluna de cromatografia convencional que compreende um suporte, tal como aqui relatado - número de ciclo e as características de pressão para a utilização do material de cromatografia.

[144] Aqui, é mostrada uma coluna de HPLC com um suporte, tal como aqui relatado, e um calcinador de coluna intermediária. Pode ser visto que uma pressão inicial inferior depois do empacotamento em comparação com a coluna do Exemplo 2 pode ser obtida. No total, um curso de pressão mais estável pode ser obtido ao longo dos ciclos de utilização. Além disso, um número de ciclo máximo de 98 pode ser atingido sem a necessidade de reempacotar a coluna. O calcinador de coluna intermediária sem o suporte, tal como aqui relatado, cumpre uma função de apoio de leito no meio de HPLC que são compressíveis apenas em uma medida muito baixa.

[145] Detalhes da empacotamento: Diâmetro da coluna: 15 cm Tipo de coluna: compressão dinâmica com calcinador de coluna intermediária Altura do leito: cerca de 40 cm Material cromatográfico utilizado: Vydac C4 Taxa de fluxo: 35 l/h

[146] Os valores de pressão durante as regenerações e números de ciclo são ilustrados na Figura 8.

Claims

1. Uso de um suporte de coluna de cromatografia (1), para suportar material de cromatografia em uma coluna de cromatografia, o suporte de coluna de cromatografia sendo de aço inoxidável, silicone, politetrafluoroetileno ou vidro e compreendendo: - um plano de simetria (12); - um eixo geométrico de simetria (9); - três pernas (10); - três conectores retos (11); em que os conectores (11) formam um plano (12) que é perpendicular ao eixo (9) geométrico de simetria do suporte; em que os conectores (11) são conectados uns aos outros no eixo (9) geométrico de simetria; em que cada perna (10) é conectada a um conector (11); em que cada perna (10) é perpendicular ao plano (12) definido pelos conectores (11); em que todas as pernas (10) estão no mesmo lado do plano (12) definido pelos conectores; o suporte de coluna de cromatografia sendo caracterizado pelo fato de que as pernas (10) são placas perfuradas.

2. Uso de um suporte de coluna de cromatografia, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as pernas (10) são placas e que os conectores (11) e as pernas (10) formam uma unidade na qual a borda superior da respectiva perna é o conector.

3. Uso de um suporte de coluna de cromatografia, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser possível um fluxo lateral entre as seções definidas pelas pernas do suporte.

4. Suporte de coluna de cromatografia, compreendendo: - um plano de simetria (12); - um eixo geométrico de simetria (9); - três pernas (10); - três conectores retos (11); em que os conectores (11) formam um plano (12) que é perpendicular ao eixo (9) geométrico de simetria do suporte; em que os conectores (11) são conectados uns aos outros no eixo geométrico de simetria (9); em que cada perna (10) é conectada a um conector (11); em que cada perna (10) é perpendicular ao plano (12) definido pelos conectores (11); em que todas as pernas (10) estão no mesmo lado do plano (12) definido pelos conectores. o suporte de coluna de cromatografia sendo caracterizado pelo fato de que as pernas (10) são placas perfuradas.

5. Suporte, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que as pernas (10) são placas e que os conectores (11) e as pernas (10) formam uma unidade na qual a borda superior da respectiva perna é o conector.

6. Suporte, de acordo a reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de ser possível um fluxo lateral entre as secções definidas pelas pernas (10) do suporte.

7. Suporte, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 6, caracterizado pelo fato de compreender três pernas (10) e um conector (11), em que o conector é em forma de Y e as pernas são hastes.

8. Dispositivo para suportar coluna de cromatografia, caracterizado pelo fato de que compreende: - uma coluna de cromatografia (2); - pelo menos um calcinador móvel (3); e - pelo menos um suporte do tipo definido em qualquer uma das reivindicações 4 a 7; em que o calcinador móvel (3) e o suporte de coluna de cromatografia (1) estão dentro da coluna de cromatografia (2); e em que o calcinador móvel (3) está acima do suporte de coluna de cromatografia (2), quando a coluna de cromatografia (2) é colocada verticalmente e vista de lado.