BR112013014575B1 - Uso in vitro ou ex vivo, processo in vitro ou ex vivo e processo cosmético in vitro ou ex vivo - Google Patents

Abstract

USO IN VITRO OU EX VIVO, USO COSMÉTICO, PROCESSO, PROCESSO COSMÉTICO, PEPTÍDEO ISOLADO, COMPOSIÇÃO E MODELO DE PELE IN VITRO OU EX VIVO MULTICELULAR A matéria de objeto da presente invenção é, em particular, o uso de uma sequência de aminoácido de IDE, ou de um análogo ou fragmento do mesmo, ou de pelo menos uma sequência de ácido nucleico codificando essa sequência, como um marcador biológico, ou como um agente ativo, com relação a uma condição de caspa do couro cabeludo.

Description

A presente invenção refere-se ao campo dos marcadores biológicos cosméticos e/ou terapêuticos e direciona-se para a pele, em particular para uma condição de caspa do couro cabeludo, e também ao uso do mesmo como agentes ativos.

Para os propósitos da invenção, o termo "pele" significa toda a epiderme de um corpo humano, incluindo membranas de muscosas e áreas da pele cobertas com cabelo corporal ou cabelo de cabeça. Mais particularmente, a pele considerada na presente invenção é preferencialmente os lábios e a pele da face, a linha do pescoço ou do couro cabeludo, e ainda mais preferencialmente a pele do couro cabeludo.

A pele é um tecido em que as células são unidas e integralmente anexadas umas às outras. Esta forma um revestimento externo compreendendo glândulas sebáceas ou de suor, e folículos capilares. A pele e, em particular, o couro cabeludo são epitélios que sofrem renovação contínua. A renovação, ou descamação, é um processo regulado coordenado e finamente resultando na remoção imperceptível e invisível das células superficiais.

No entanto, descamação anormal ou irregular das células do estrato córneo, por várias razões, pode resultar na formação de aglomerados de células espessas, grandes que são visíveis a olho nu e chamados "escamas" ou "caspa" no caso do couro cabeludo, ou em outras situações em um adegalçamento do estrato córneo. Desordens de descamação, resultantes da descamação anormal ou irregular, podem resultar na fragilidade ou até mesmo na falta de propriedades de barreira da epiderme.

A título de exemplo dos fatores que promovem o aparecimento de escamas ou caspa, pode ser feito menção ao estresse, o período de inverno, um excesso de sebo, um defeito de hidratação ou colonização da pele ou dos folículos capilares pela levedura Malassezia sp. Esses fatores têm especialmente a característica em comum de provocar e/ou promover inflamação de pele. Tal inflamação reforça o aparecimento ou até mesmo aumenta a presença de escamas ou da caspa. Em particular, leveduras do tipo Malassezia sp., que compõem parte da flora de comensais normal na superfície do couro cabeludo em indivíduos livres de caspa, experimentam um aumento susbstancial em suas proporções no caso de caspa, ou no caso de dermatite seborréica associada. f F ' Desequilíbrio da ecoflora do couro cabeludo é um fator que promove ou até reforça a presença de caspa.

A presença de escamas ou condições de caspa pode ser condições recorrentes, frequentes, crônicas que são socialmente debilitantes devido a sua 5 natureza obviamente feia. Ainda, condições de caspa do couro cabeludo ou descamação anormal da pele podem ser refletidas por um prejuízo da função de barreira da epiderme, ou gerar sensações de coceira ou prurido, resultando no coçar que amplifica o fenômero da aparência de escamas ou caspa, e, por sua vez, irritação do couro cabeludo ou da pele.

As condições de caspa do couro cabeludo podem ser de tipo gorduroso ou do tipo seco. Condições de caspa seca do couro cabeludo são mais frequentemente manifestadas, e são ampliadas durante desordens de hidratação de pele, e especialmente durante secura substancial da epiderme do couro cabeludo. Além disso, considerando que o couro cabeludo é rico em glândulas 15 sebáceas, uma condição de caspa pode se desenvolver mais prontamente na presença excessiva de sebo e ser mais prontamente pruriginosa. Consequentemente, uma secreção excessiva de sebo, ou hiperseborréia, promove o aparecimento de uma condição de caspa gordurosa do couro cabeludo, ou caspa gordurosa, geralmente associada com descontentamento, 20 sensações de desconforto, desordens estéticas, ou até uma patologia cutânea.

Condições de caspa geralmente respondem a vários tratamentos locais ou sistêmicos. No entanto, a eficácia desses tratamentos é apenas suspensiva e demanda aderência rigorosa da parte do usuário (frequência suficiente de uso e tempo de aplicação suficiente). No entanto, uso diário e de longo prazo desses 25 tratamentos pode levar a um fenômeno de habituação, reduzindo suas eficácias, e geralmente estando associado com um fenômeno de ricochete ocorrendo quando o tratamento é interrompido. Este fenômeno manifesta-se ele mesmo através de hiperseborréia, que piora a condição de caspa e prejudica a função de barreira do couro cabeludo. Além disso, a agressividade de certos agentes ativos 30 anticaspa com relação às células epidérmicas ou a ecoflora de couro cabeludo pode também afetar as funções de barreira de couro cabeludo e levar à piora da condição de caspa. Finalmente, a eficácia dos tratamentos anticaspa é frequentemente devagar para desenvolver e requer aplicação rigorosa em um longo período de duração. Esse intervalo de tempo frequentemente leva à falha 35 no seguimento do tratamento. Consequentemente, muitas falhas surgem no uso desses tratamentos.

Muitos fatores epidérmicos, a expressão, atividade biológica ou cuja maturação são modificados, diminuídos ou elevados, são conhecidos por estarem envolvidos, diretamente ou indiretamente, no processo de renovação ou descamação da pele, e especialmente do couro cabeludo.

Esses fatores podem ser utilizados como marcadores biológicos para a pele, como alvos de seleção ou até como agentes ativos cosméticos. No entanto, muitos fatores desconhecidos ainda permanecem em relação ao mecanismo íntimo e os fatores envolvidos na descamação de pele, e em particular no surgimento da caspa.

Há, assim, uma necessidade por marcadores biológicos novos para caracterizar descamação de pele, e mais particularmente a condição de caspa do couro cabeludo.

Há também uma necessidade por novos alvos para agentes ativos de seleção ou tratamentos físicos para cuidado da pele, em particular para evitar 15 e/ou tratar a desordem de descamação de pele, e mais particularmente a condição de caspa do couro cabeludo. Há também uma necessidade por novos agentes ativos ou novos tratamentos para evitar e/ou tratar a desordem de descamação de pele, e mais particularmente a condição de caspa do couro cabeludo. Há também uma necessidade pos alvos cosméticos novos para cuidado com a pele, em particular para evitar e/ou tratar a desordem de descamação de pele, e mais particularmente a condição de caspa do couro cabeludo.

Há ainda uma necessidade por novos tratamentos cosméticos para evitar, reduzir e/ou tratar condições de caspa do couro cabeludo, que são eficientes e 25 livres de efeiros colaterais passíveis de afetar de modo adverso a aderência ao tratamento.

Há também uma necessidade por um tratamento para a condição de caspas do couro cabeludo que não afetam adversamente a ecoflora do couro cabeludo, ou até reforce a presença da ecoflora saudável.

Há também uma necessidade por um tratamento para condição de caspas que é capaz de manter, ou até reforçar, a hidratação do couro cabeludo. Há uma necessidade por um tratamento para condição de caspas que é capaz de manter, ou até reforçar, as propriedades de barreira do couro cabeludo.

Há uma necessidade por tratamentos para condição de caspas que sejam 35 livres dos efeitos colaterais mencionados acima, e em particular que não induzam hiperseborréia, dermatite seborreica ou condições pruriginosas.í . k

Há também uma necessidade por um tratamento para condição de caspas que não induza inflamação. É um objetivo da presente invenção satisfazer essas necessidades.

Assim, de acordo com um de seus primeiros objetos, a presente invenção 5 refere-se ao uso (i) de pelo menos uma sequência de aminoácido codificada por uma sequência de ácido nucleico representada por SEQ ID No.: 1, ou um análogo ou fragmento da SEQ ID No.: 1, ou (ii) de pelo menos referida sequência de ácido nucleico, para selecionar agentes ativos ou tratamentos físicos que sejam capazes de modular a atividade, expressão ou maturação da referida sequência 10 de aminoácido ou da referida sequência de ácido nucleico, para evitar e/ou tratar descamação anormal da pele, e preferencialmente uma condição de caspa do couro cabeludo.

No curso de uma análise proteômica por eletroforese de difereça 2D, os inventores observaram, utilizando amostras de couro cabeludo não invasivas, que 15 aquela enzima degradante de insulina, ou insulisina, ou insulinase ou IDE, provou ser um marcador biológico sensível e específico da condição de caspa do couro cabeludo.

Mais especificamente, os inventores observaram que o nível de expressão de IDE, e mais particularmente de peptídeos derivados de IDE e identificado pelas 20 sequências de SEQ ID No.: 8 a SEQ ID No.: 14, foi sistematicamente elevado nos couros cabeludos apresentando uma condição de caspa quando comparados com os couros cabeludos livres de caspa. Essa é a primeira vez que uma relação foi estabelecida entre uma variação na expressão de IDE e descamação anormal da pele. Consequentemente, o conhecimento do inventor, essa enzima nunca foi 25 identificada como um marcador de descamação anormal, e muito menos de uma condição de caspa.

Essa observação valida o uso de IDE ou dos fragmentos de peptídeo derivados dele, ou dos ácidos nucleicos codificando esses polipeptídeos, como marcador biológico de pele ou para a seleção de novos agentes que são ativos 30 em direção à descamação anormal da pele, e especialmente condição de caspas, e também o uso de agentes para modular a atividade dessa enzima, para a prevenção e/ou tratamento da condição de caspa do couro cabeludo.

Para os propósitos da invenção, o termo "expressão" significa, com relação a uma sequência de aminoácido, por exemplo uma proteína ou um peptídeo, ou a 35 uma sequência de ácido nucleico, por exemplo um mRNA, seu conteúdo ou a variação de seu conteúdo em relação a uma referência.

Para os propósitos da invenção, o termo "maturação" significa, com relação a uma sequência de aminoácido, por exemplo uma proteína ou um peptídeo, ou a uma sequência de ácido nucléico, por exemplo um mRNA, as modificações que seguem suas síntese em um ambiente celular. Por exemplo, no caso de uma 5 sequência de aminoácido, o termo "maturação" significa as modificações pós translacionais, tal como glicosilação, farnesilação ou acetilação de certos aminoácidos, ou as etapas proteolíticas resultando na eliminação do "sinal" ou sequências de "secretor" ou na liberação de sequências tendo propriedades biológicas particulares. No caso de uma sequência de ácido nucléico, o termo 10 "maturação " significa, por exemplo, a junção alternativa de um pre-mRNA.

Para os propósitos da invenção, o termo "atividade" significa, com relação a uma sequência de aminoácido, por exemplo uma proteína ou um peptídeo, a atividade biológica da sequência de aminoácido, onde apropriada após maturação, tal como uma atividade enzimática, uma atividade agonista ou 15 antagonista com relação a um receptor, uma atividade ativante de ou inibidora de enzima, ou uma atividade "estrutural".

Mais particularmente, para os propósitos da invenção, o termo "atividade" com relação a uma sequência de aminoácido da invenção representada pela SEQ ID No. 8 significa sua atividade proteolítica, especialmente com relação aos seus 20 substratos usuais, tal como insulina, glucagon, bradiquinina ou calidina. Para os propósitos da invenção, o termo "atividade" significa, com relação a uma sequência de ácido nucléico, por exemplo um mRNA, sua translação.

IDE, também conhecido como insulisina ou insulinase, é uma meta lo protease de zinco (P14735; EC = 3.4.24.56) de 1019 aminoácidos e de 110 25 kDa, que pertence à família de protease M16A. Está envolvida na hidrólise de peptídeos bioativos pequenos, tal como uma insulina, β-amiloide, amilina, glucagon, fator de crescimento de insulina II (IGF-II), β-endorfina, somatoestatina e peptídeo natriurético atrial (Guo et al. 2009).

A expressão de IDE é particularmente abundante no cérebro, o fígado e 30 músculos, e estiveram especialmente localizadas na camada granular e é descrito como estando presente no estrato córneo (Radulescu et al., 2007). IDE foram particularmente implicados na degradação da característica de depósitos de β- amiloide da doença de Alzheimer (Kim et al. 2007; Miners et al. 2009). Também está envolvida na patologia da diabetes do tipo II e hiperinsulinemia (Groves et al. 35 2003).

É também descrito como estando associado com defeitos de cicatrização no epitélio, que pode ser compensado por meio de suprimento de insulina e por inibidores de IDE (Shearer et al. 1997). IDE também pode estar associado com uma sensibilidade virai (Ali et al. 2009).

Ainda de acordo com outro de seus objetivos, a presente invenção refere- se ao uso cosmético de uma quantidade efetiva de pelo menos um agente que modula a atividade, expressão ou maturação de uma sequência de aminoácido da invenção, ou de uma sequência de ácido nucléico da invenção, como um agente ativo para evitar e/ou tratar uma desordem de propriedades de barreira do couro 10 cabeludo.

Preferencialmente, um agente modulatório é um agente que inibe a atividade enzimática de uma sequência de aminoácido da invenção. Mais preferencialmente, tal agente inibitório pode ser utilizado para evitar e/ou tratar a condição de caspa do couro cabeludo.

Para os fins da presente invenção, o termo "quantidade eficaz" de um composto da invenção significa uma quantidade desse composto que é suficiente e necessária para obtenção de um efeito desejado, e mais particularmente um efeito cosmético ou de cuidado com relação à descamação anormal ou irregular da pele, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo.

Para os propósitos da invenção, o termo "evitar" significa reduzir o risco de ocorrência ou diminuir a ocorrência de um dado fehômeno, notadamente, na presente invenção, descamação anormal ou irregular da pele, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo.

Ainda de acordo com outro de seus objetivos, a presente invenção refere- 25 se ao uso (i) de pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção, ou (ii) de pelo menos uma sequência de ácido nucléico da invenção, como um marcador biológico para descamação da pele, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo.

Para os propósitos da invenção, o termo "marcador biológico" significa uma 30 molécula ou a atividade de uma molécula, a presença ou ausência, cujo conteúdo ou o grau de atividade, ou uma variação desses parâmetros, é característica de um processo biológico, fisiológico ou patológico, ou do impacto ou o efeito pela administração de um agente ativo ou de um tratamento físico em tal processo.

De acordo com outro desses objetivos, a presente invenção refere-se ao 35 uso (i) de pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção, ou (ii) de pelo menos uma sequência de ácido nucleico da invenção, para caracterizar a eficácia de um tratamento cosmético para pele.

De acordo com uma modalidade preferencial, um tratamento cosmético cuja eficácia é caracterizada pode ser um tratamento cosmético de descamação 5 anormal da pele, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo.

De acordo com outra modalidade, a presente invenção refere-se ao uso (i) de pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção, ou (ii) de pelo menos uma sequência de ácido nucleico da invenção, para selecionar, dentre um conjunto de agentes ativos conhecidos para evitar e/ou tratar descamação 10 anormal da pele, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo, um agente ativo presumido para exercer um efeito de benefício máximo com relação à referida descamação ou referida condição de caspa.

Ainda de acordo com outro de seus objetivos, a presente invenção refere- se ao uso de uma quantidade eficaz (i) de pelo menos uma sequência de 15 aminoácido da invenção, ou (ii) da pelo menos uma sequência de ácido nucleico da invenção, ou (iii) do pelo menos um agente modulatório da invenção, para preparar uma pele reconstruída isolada.

Vantajosamente, um modelo de pele isolado da invenção pode ser utilizado para reproduzir desordem de descamação da pele, e especialmente uma 20 condição de caspa do couro cabeludo.

Ainda de acordo com outro de seus objetivos, a presente invenção refere- se a um processo de caracterização de descamação anormal da pele, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo, compreendendo pelo menos as etapas consistindo em: a) realizar, em uma amostra isolada da pele, e preferencialmente de um couro cabeludo, uma medição qualitativa ou quantitativa da expressão, maturação ou atividade da referida sequência de aminoácido ou da referida sequência de ácido nucleico, e b) comparar referida medição executada na etapa a) com uma medição de 30 referência. Ainda de acordo com outro de seus objetivos, a presente invenção refere- se a um processo para seleção dos agentes ativos ou dos tratamentos físicos que sejam capazes de modular a atividade, expressão ou maturação de uma sequência de aminoácido da invenção, ou de uma sequência de ácido nucleico da 35 invenção, para evitar e/ou tratar descamação anormal da pele, e 4- ’it a * preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo, compreendendo pelo menos as etapas consistindo em: a) colocar referida sequência de aminoácido ou referida sequência de ácido nucléico sob condições favoráveis para a atividade, expressão ou maturação das 5 referidas sequências, b) trazer referida sequência de aminoácido ou referida sequência de ácido nucléico em contato com pelo menos um agente ativo a ser testado, ou expor referida sequência de aminoácido ou referida sequência de ácido nucléico a um tratamento físico a ser testado; c) realizar uma medição qualitativa ou quantitiva da expressão, maturação ou atividade da referida sequência de aminoácido ou da referida sequência de ácido nucléico, e d) comparar referida medição com uma medição de referência.

Ainda de acordo com outro desses objetivos, a presente invenção refere-se 15 a um processo cosmético para evitar e/ou tratar descamação anormal da pele, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo, em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo pelo menos uma etapa que consiste em administrar ao referido indivíduo pelo menos uma composição compreendendo, como agente ativo, pelo menos um agente que inclui modular a atividade, 20 expressão ou maturação das referidas sequências, preferencialmente como definido acima.

Ainda de acordo com outro desses objetivos, a presente invenção refere-se a um processo cosmético para caracterizar a eficácia de um tratamento cosmético de descamação anormal da pele, e preferencialmente a condição de caspa do 25 couro cabeludo, em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo pelo menos as etapas consistindo em: a) realizar, antes de implementar o tratamento cosmético, em uma primeira amostra de pele isolada, preferencialmente uma amostra de couro cabeludo isolada, tirada do referido indivíduo, pelo menos uma primeira medição qualitativa 30 ou quantitativa da expressão, maturação ou atividade de pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção ou de pelo menos uma sequência de ácido nucléico da invenção, b) realizar, após implementar o tratamento cosmético, em uma segunda amostra de pele isolada, preferencialmente uma amostra de couro cabeludo 35 isolada, tirada do referido indivíduo, pelo menos uma segunda medição qualitativa ou quantitativa da expressão, maturação ou atividade da referida sequência de aminoácido ou da referida sequência de ácido nucléico, e comparar a primeira e segunda medições, em particular para deduzir dela informação relacionada a pelo menos um efeito da implementação do tratamento cosmético.

De acordo com uma modalidade preferencial, um processo ou uso de 5 acordo com a invenção pode ser executado in vivo, in vitro ou ex vivo, e ainda mais preferencialmente in vitro ou ex vivo.

Ainda de acordo com outra modalidade, a presente invenção refere-se a um peptídeo isolado representado por uma sequência de aminoácido escolhida da SEQ ID No.: 9 a SEQ ID No.: 14, ou um análogo ou fragmento da mesma.

Ainda de acordo com outro desses objetivos, a presente invenção refere-se a uma composição compreendendo um peptídeo representado por uma sequência de aminoácido escolhida da SEQ ID No.: 8 a SEQ ID No.: 14, ou um análogo ou fragmento da mesma, ou uma sequência de ácido nucléico condificando tal peptídeo.

Ainda de acordo com outro desses objetivos, a presente invenção refere-se a um modelo de pele multicelular compreendendo pelo menos uma célula em que a expressão de uma proteína representada pela SEQ ID No.: 8, ou um fragmento ou análogo da mesma, é reprimida ou elevada. Preferencialmente, tal modelo celular é um modelo in vitro ou ex vivo.

A presente invenção tem a vantagem de propor um novo marcador biológico sensível e específico para a pele, e em particular para descamação, descamação especialmente anormal, da pele, e mais particularmente para uma condição de caspa do couro cabeludo.

A observação da presença de IDE no estrato córneo, e mais 25 particularmente de peptídeos derivados especificamente dessa proteína, torna vantajosamente possível uma determinação quantitativa ou qualitativa da expressão ou da atividade dessa proteína, ou dos peptídeos correspondentes, tomando simplesmente uma amostra tópica.

O método de amostragem pode, por exemplo, ser uma técnica do tipo 30 corneodisc ou desnudamento, consistindo na aplicação de um elemento de adesivo na epiderme sob consideração. Quando este elemento de adesivo é desanexado, uma fração da superfície de pele é removida. Após a extração de proteína, a última pode ser analisada por métodos convencionais, tal como ensaio imunoenzimático ELISA ou análise de Western blot, ou mais particularmente por 35 análise proteomítica por eletroforese de diferença 2D.

Similarmente, a presente invenção tem a vantagem de ser capaz de prover um novo marcador biológico que é adequado para a seleção dos novos agentes ativos ou novos tratamentos físicos para evitar e/ou tratar uma desordem de descamação de pele, e especialmente uma condição de caspa do couro 5 cabeludo. Similarmente, de acordo com outra vantagem, a presente invenção provê novos agentes ativos para evitar e/ou tratar uma desordem de descamação de pele, e especialmente uma condição de caspa do couro cabeludo. Vantajosamente, os novos agentes ativos propostos pela presente invenção reforçam as propriedades de barreira do couro cabeludo.

A proteção e reforço das propriedades de barreira do couro cabeludo permitem uma redução da inflamação de pele, a manutenção de uma barreira balanceada, integridade da barreira e conservação de uma ecoflora balanceada.

O couro cabeludo é então menos irritado e pruriginoso, menos frágil e mais hidratado, e o nível de caspa é reduzido.

Sequência de aminoácido e de ácido nucleico

Enzima de degradação de insulina (IDE) ou insulisina é uma proteína de 1019 aminoácidos (SEQ ID No.: 8) compreendendo uma metionina iniciante que é removida, e cujo gene é localizado no cromossomo 10, locus 10q23-q25.

A menos que indicado de outro modo, o termo "IDE" é destinado a denotar 20 no presente pedido de patente a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID No.: 8 a SEQ ID No.: 14, possivelmente sofrendo maturação pós translacional.

De acordo com uma modalidade preferencial, o termo "IDE" é mais particularmente destinado a denotar a sequência de aminoácido representada 25 pela SEQ ID No.: 8, e mais preferencialmente a sequência de aminoácido representada por uma sequência derivada da SEQ ID No.: 8 em que a metionina iniciante tenha sido removida.

De acordo com uma modalidade, uma sequência de aminoácido adequada para a invenção pode ser codificada por uma sequência de ácido nucleico 30 representada pela SEQ ID No.: 1, ou um análogo ou fragmento dessa sequência.

O termo "análogo" de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido nucleico de acordo com a invenção é destinado a denotar qualquer sequência de aminoácido ou sequência de ácido nucleico tendo identidade de sequência de pelo menos 85%, preferencialmente pelo menos 90% e mais 35 preferencialmente pelo menos 95% com referida sequência de referência, e, dependendo do caso, tendo atividade biológica da mesma natureza ou <: * codificando uma sequência de aminoácido tendo atividade biológica da mesma natureza. Como análogos que são adequados para uso na invenção, pode ser feito menção às sequências de homólogos identificadas nos bancos de dados Homologene (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/homologene). O termo "análogo de uma 5 sequência de ácido nucléico" é destinado em particular a denotar uma sequência de ácido nucléico resultante da degeneração do código de ácido nucléico, e codificando uma sequência de aminoácido de acordo com a invenção, em particular como definido anteriormente.

O termo "atividade biológica da mesma natureza" com relação a uma 10 sequência de aminoácido de acordo com a invenção significa especialmente as propriedades proteolíticas normalmente atribuídas ao IDE, por exemplo a capacidade de hidrolizar insulina, bradiquinina, calidina, peptídeo β-amiloide ou glucagon. Em particular, uma sequência de aminoácido de acordo com a invenção é mais particularmente caracterizada por sua capacidade de degradar 15 substratos formando estruturas do tipo amiloide.

A identidade de sequência pode ser determinada por comparação visual ou por meio de qualquer ferramenta de computador geralmente utilizada no campo, tal como os programas de BLAST disponíveis no www.ncbi.nlm.nih.gov e utilizados com os parâmetros de default.

Um análogo de uma sequência de aminoácido de acordo com a invenção pode ser um agente peptídeomimético. Um análogo de uma sequência de aminoácido da invenção pode resultar das modificações resultantes de uma ou mais mutações e/ou variações nas sequências dos peptídeos de acordo com a invenção originando ou da deleção ou 25 da inserção de um ou mais aminoácidos, ou da substituição de um ou mais aminoácidos, ou até mesmo do splicing alternativo. Várias dessas modificações podem ser combinadas.

Vantajosamente, um análogo de uma sequência de aminoácido da invenção pode compreender substituições conservadoras comparadas com essa 30 sequência de aminoácido de referência.

A título de exemplo das mutações que podem ser consideradas na presente invenção, pode ser feito menção, não exaustivamente, à substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos com resíduos de aminoácido tendo um índice hidropático similar sem, no entanto, afetar substancialmente as 35 propriedades biológicas do polipeptídeo. O índice hidropático é um índice atribuído aos aminoácidos de acordo com sua hidrofobicidade e suas cargas (Kyte et a!. 1982).

Uma sequência de aminoácido ou um análogo da mesma direcionado pela presente invenção pode ser uma sequência de aminoácido tendo sofrido uma ou 5 mais maturações pós translacionais.

O termo "maturação(ões) pós translacional” é destinado a abordar todas as modificações que uma sequência de aminoácido é capaz de sofrer no final de sua síntese em uma célula, tal como, por exemplo, uma ou mais fosforilação(ões), uma ou mais tiolações, uma ou mais acetilações, uma ou mais glicosilações, uma 10 ou mais lipidações, tal como uma farnesilação ou uma palmitoilação, um rearranjo estrutural tal como formulação de ponte de dissulfeto e/ou tal como clivagem dentro da sequência de peptídeo. Um análogo de uma sequência de aminoácido tem, no entanto, substancialmente a mesma atividade biológica como nessa sequência de aminoácido.

Isso é, além disso, conhecido como uma primeira sequência de aminoácido pode compreender sítios especificamente reconhecidos por enzimas do tipo protease, tal como tripsina, que, uma vez esses sítios tenham sido realmente reconhecidos, induzirá a divagem da sequência por proteólise. Essa proteólise resulta na produção de vários peptídeos, ou fragmentos da sequência de 20 aminoácidos da invenção. Consequentemente, a invenção também estende para os fragmentos de IDE resultando, onde adequado, de sua proteólide.

Para os propósitos da invenção, a expressão "fragmento de uma sequência de aminoácido" significa qualquer porção da sequência de aminoácido de acordo 25 com a invenção compreendendo pelo menos 3, ou até pelo menos 4 e ainda melhor pelo menos 6 aminoácidos consecutivos da referida sequência de referência, ou compreendendo de 3 a 100 aminoácidos consecutivos da referida sequência de referência, preferencialmente de 4 a 90, preferencialmente de 6 a 80 e mais preferencialmente de 9 a 70 aminoácidos consecutivos da referida 30 sequência e tendo atividade biológica da mesma natureza.

Para os fins da presente invenção, o termo "fragmento de uma sequência de ácido nucléico" significa uma sequência de ácido nucléico compreendendo pelo menos 9, ou até pelo menos 12 e ainda melhor pelo menos 18 pares de base consecutivas da referência sequência de referência, ou compreendendo de 9 a 35 300 pares de base consecutivas da referida sequência de referência, preferencialmente de 12 a 270, preferencialmente de 18 a 240 e mais preferencialmente de 27 a 210 pares de base consecutivos da referida sequência, e codificando uma sequência de aminoácido tendo atividade biológica da mesma natureza como a sequência de aminoácido codificada por referida sequência.

De acordo com uma modalidade, uma sequência de aminoácido adequada para a invenção pode ser uma sequência de aminoácido representada por uma sequência alterada da SEQ ID No.: 8 a 14, ou um análogo ou fragmento da mesma, e preferencialmente da SEQ ID No.: 9, SEQ ID No.: 10, SEQ ID No.: 11, SEQ ID No.: 12, SEQ ID No.: 13 e SEQ ID No.: 14, ou um análogo ou fragmento do mesmo.

De acordo com outra modalidade, uma sequência de aminoácido que é adequada para uso na invenção pode ser uma sequência de aminoácido natural ou sintética, que pode ser obtida, onde adequado, após lise enzimática ou química de IDE ou por síntese química ou biológica ou pela extração de um tecido biológico, por exemplo a pele, naturalmente expressando essa sequência de aminoácido ou após transfecção da mesma, e também as várias formas pós translacionais da mesma, ou mesmo qualquer sequência de aminoácido natural ou sintética, cuja sequência compreende totalmente ou parcialmente uma sequência de aminoácido mencionada acima, por exemplo as variações e os análogos.

Uma pessoa versada na técnica pode obter uma sequência de aminoácido de acordo com a invenção por meio dos processos a base de DNA recombinante, por exemplo aqueles descritos no manual Molecular Cloning - A Laboratory Manual (2a edição), Sambrook et a!., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook).

De acordo com outra modalidade, uma sequência de aminoácido adequada para a invenção pode também ser uma sequência de aminoácido como definida anteriormente, fundida com outra sequência de aminoácido, um agente de direcionamento hidrofílico ou hidrofóbico, um percursor de bioconversão, ou um agente luminescente, radioativo ou de rotulagem clorimétrica, ou alternativamente um agente de rotulagem de anticorpo.

De uma maneira não limitativa, pode ser feito menção, como exemplos de compostos que podem ser acoplados a uma sequência de aminoácido de acordo com a invenção, de proteínas fluorescentes tal como Proteína fluorescente verde (Green Fluorescent Protein), compostos químicos fluorescentes, tais como rodamina, fluoresceína ou Texas Red®, compostos fosforecentes, elementos radioativos, tais como 3H, 14C, 35S, 1211 ou 125l, ou agentes de rotulagem colorimétrica tais como substratos cromogênicos sensíveis à ação de galactosidase, de peroxidase, de cloramfenicol acetiltransferase, de luciferase ou de fosfatase alcalina, ou um agente de rotulagem de anticorpo, tal como His-Tag.

Dependendo da natureza dos compostos que podem ser acoplados com 5 uma sequência de aminoácido da invenção, o acoplamento pode ser realizado por meio de processos químicos, em particular por meio das funções químicas reativas, por meio de processos de biologia molecular conhecidos daqueles versados na técnica.

De acordo com uma modalidade, a presente invenção também refere-se às 10 sequências de ácido nucléico codificando uma sequência de aminoácido da invenção e a implementação da mesma nos vários usos e processos da invenção.

Consequementemente, a presente invenção também refere-se a uma sequência de ácido nucléico, em particular uma deóxiribosequência de ácido nucléico ou uma ribosequência de ácido nucléico, representada pela SEQ ID No.: 15 1, ou um análogo ou fragmento da mesma.

Vantajosamente, uma sequência de aminoácido da invenção pode ser codificada por uma sequência de ácido nucléico escolhida da sequência representada por SEQ ID No.: 1, SEQ ID No.: 2, SEQ ID No.: 3, SEQ ID No.: 4, SEQ ID No.: 5, SEQ ID No.: 6 ou SEQ ID No.: 7, ou um análgo ou fragmento da 20 mesma.

Preferencialmente, uma sequência de ácido nucléico da invenção pode ser representada por uma sequência escolhida da SEQ ID No.: 2, SEQ ID No.: 3, SEQ ID No.: 4, SEQ ID No.: 5, SEQ ID No.: 6 ou SEQ ID No.: 7, ou um análogo ou fragmento da mesma. Uma sequência de ácido nucléico da invenção pode ser 25 de qualquer origem possível, notadamente animal, em particular mamífera e até mais mais particularmente humana, ou vegetal, ou de microorganismos, tais como, por exemplo, vírus, fagos ou bactérias, entre outros, ou até de fungos, sem qualquer preconceito em relação a se eles estão ou não presentes naturalmente no referido organismo de origem.

De acordo com uma modalidade, a invenção também refere-se às sequências de ácido nucléico isoladas e purificadas codificando uma sequência de aminoácido sob consideração de acordo com a invenção, e também aos análogos e fragmentos das mesmas.

Uma sequência de ácido nucléico de acordo com a invenção pode 35 compreender uma sequência senso, antisenso ou de interferência correspondente à sequência codificando um polipeptídeo de acordo com a invenção.

Um objeto da invenção é também sequências de ácido nucléico, em particular ribosequências de ácido nucléico ou deóxiribosequências de ácido nucléico, compreendendo um senso ou antisenso, em particular sequência de RNA(siRNA) de interferência pequena, correspondente a pelo menos uma 5 sequência codificando uma proteína ou um peptídeo da invenção ou uma sequência de ácido nucléico da invenção, ou um fragmento ou análogo da mesma.

A invenção também refere-se às sequências de aptamer de RNA ou DNA capazes de modular a atividade da enzima.

A invenção também refere-se aos anticorpos monoclonais ou policlonais obtidos por meio de técnicas padrão, ou, preferencialmente, anticorpos humanos recombinantes selecionados contra IDE por meio de técnicas de visualização de fago, tal como aquelas propostas pela empresa AbD Serotec, ou "Nanocorpos", como proposto pela empresa Ablynx.

Descamação de pele and condição de caspa

Como indicado anteriormente, um couro cabeludo apresentando secura excessiva ou secreção excessiva de sebo pode manifestar uma condição de caspa, que dependendo do caso, pode ser caracterizada pela presença de flocos de caspa seca ou gordurosa, ou até pruridos e/ou inflamação da epiderme.

Condição de caspas secas refletem uma xerose do couro cabeludo, que pode ser combinada com renovação excessivamente rápida de seu estrato córneo. Flocos de caspa seca são geralmente pequenos e brancos ou cinza, e são espalhados ao longo do couro cabeludo e na roupa, dando origem a um efeito visual não estético. A coceira associada com secura do couro cabeludo pode 25 levar a eritema, prurido ou até inflamação.

Condição de caspas gordurosas são uma das formas de dermatite seborreica. Indivíduos sofrendo disso tem um couro cabeludo de eritema cobertos por escamas amarelas gordurosas, grandes que acumulam para formar pacotes. Elas têm um couro cabeludo pruriginoso, e frequentemente têm sesações de 30 queimação nas áreas afetadas. Condições de caspas gordurosas do couro cabeludo são manifestadas, e são ampliadas, durante secreção excessiva de sebo na epiderme do couro cabeludo. Condição de caspas gordurosas em suas formas severas podem ser formas de dermatite seborreica.

Esses fenômenos podem ser ampliados pela presença de microorganismos 35 patogênicos, especialmente Malassezia sp. Esses microorganismos tendo a propriedade de liberar ácidos graxos do sebo podem prejudicar a função de barreira da epiderme e dão origem à inflamação.

Durante ataques de caspa do couro cabeludo, a barreira de pele é desequilíbrio d, sua integridade e sua hidratação são prejudicadas e sua ecoflora 5 perturbada. A pele do couro cabeludo é irritada e pruriginosa, frágil, menos hidratada e sensível à infecção.

O uso de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido nucléico da invenção ou de um agente modulatório da invenção leva ao restabelecimento da hidratação e a ecoflora e a uma redução de pruridos do 10 couro cabeludo. Essa diminuição é refletida por uma redução nas fases de coçar o couro cabeludo e de prejudicar a função de barreira resultante dela. A eficácia do tratamento é assim marcadamente aprimorada e é desenvolvida muito mais rapidamente. A pele é então menos irritada e menos pruriginosa e a presença de caspa é reduzida ou até eliminada.

Os usos, processos e composições de acordo com a invenção provam, assim, ser mais particularmente eficazes: - para evitar e/ou tratar desordens, especialmente desordens estéticas, do couro cabeludo associadas com secura excessiva, ou até xerose, - para evitar e/ou tratar desordens, especialmente desordens estéticas, do couro cabeludo associadas com excreção excessiva e/ou secreção de sebo, - para evitar e/ou tratar condição de caspas, seja ela seca ou gordurosa, do couro cabeludo, - para aprimorar e/ou restabelecer as defesas antimicrobianas de um 25 couro cabeludo seco ou gorduroso, - para aprimorar o conforto da pele e o couro cabeludo, - para aprimorar a higiene e/ou cuidado do couro cabeludo, - para conceder ao couro cabeludo uma sensação de bem estar, - para preservar e/ou reforçar a integridade das funções de barreira da 30 pele do couro cabeludo, - para manter e/ou restaurar as propriedades bioquímicas do couro cabeludo, - para restabelecer uma ecoflora do couro cabeludo balanceada, para evitar e/ou tratar pruridos e/ou dermatite seborreica associada com condição de 35 caspas do couro cabeludo, e/ou - para evitar e/ou tratar as inflamações associadas com a condição de caspas do couro cabeludo. Vantajosamente, a invenção pode ser realizada para evitar e/ou tratar uma desordem das propriedades de barreira do couro cabeludo.

Como explicado aqui abaixo, as condições de caspa do couro cabeludo que estão sob consideração na invenção são diferentes da psoríase do couro cabeludo. Mais geralmente, a presente invenção pode ser realizada com relação à descamação, especialmente descamação anormal ou irregular, da pele, para o 10 fim de manter ou restaurar a homeostase da pele, e em particular as propriedades de barreira da epiderme. Assim, a presente invenção também pode ser realizada para evitar e/ou tratar uma desordem das propriedades de barreira do couro cabeludo.

Dependendo da gravidade da desregulação da descamação, as desordens 15 de descamação de pele subsequentes podem cair dentro do campo cosmético ou dentro do campo terapêutico. Isso cai para o conhecimento geral, e a prática usual, de uma pessoa versada na técnica para distinguir as desordens de descamação de pele como uma função do campo assim referido.

Descamação anormal ou irregular pode ser refletida por epessamento ou 20 afinamento do estrato córneo, ocasionalmente acompanhado por desordens da função de barreira da pele. Em termos estéticos, pele apresentando descamação anormal pode ser pele apresentando sinais de secura ou xerose cutânea, aspereza, caspa ou escamas.

Quando a descamação anormal é muito agravada, a condição da pele 25 pode cair dentro do campo terapêutico e apresentar dermatite atópica, ictiose ou psoríase.

Marcador biológico

Um marcador biológico da invenção vantajosamente torna possível caracterizar a descamação, especialmente descamação anormal, da pele, e 30 preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo.

De acordo com uma modalidade da invenção, um aumento ou diminuição na atividade, expressão ou maturação de um marcador biológico da invenção pode ser indicativo de descamação anormal ou irregular da pele, e preferencialmente de uma condição de caspa do couro cabeludo.

De acordo com uma modalidade preferencial, um aumento da atividade, expressão ou maturação de um marcador biológico da invenção pode ser indicativo de uma condição de caspa do couro cabeludo. Um marcador biológico pode ser utilizado para caracterizar a eficácia de um tratamento de pele cosmético, especialmente com relação à descamação anormal ou irregular da pele. Em particular, o tratamento cosmético cuja eficácia é caracterizada pode ser 5 um tratamento de uma condição de caspa do couro cabeludo.

Um aumento ou diminuição na atividade, expressão ou maturação do marcador biológico pode ser indicativo de um tratamento cosmético eficaz, e especialmente para exercer um efeito benéfico na descamação anormal ou irregular da pele, em particular com relação a uma condição de caspa do couro 10 cabeludo.

Uma diminuição ou aumento na atividade, expressão ou maturação do marcador biológico pode ser determinada por meio de comparação com uma medição de referência obtida de acordo com qualquer método conhecido daqueles versados na técnica.

Uma "medição de referência" do ponto de vista de um dado parâmetro é uma medição qualitativa ou quantitativa desse parâmetro executado sob condições de "controle" ou "normais", por exemplo determinadas em uma amostra de referência, ou determinada em uma amostra na ausência de um tratamento presumido para ter um efeito no parâmetro.

Uma amostra que é adequada para uso na invenção pode ser uma amostra de pele isolada tirada de um indivíduo ou de um modelo in vitro da pele reconstruída. Por exemplo, a medição de referência para uma sequência de aminoácido ou uma sequência de ácido nucléico de acordo com a invenção pode ser um valor 25 quantitativo ou qualitativo relativo à expressão, maturação ou atividade de referidas sequências, determinado em uma amostra de pele fisiologicamente saudável apresentando descamação normal ou regular, ou determinado em uma amostra de pele, em particular apresentando uma desordem de descamação de pele, antes de um tratamento cosmético.

Preferencialmente, a medição de referência é uma medição estatística, ou seja uma medição tendo sido repetida em várias amostras de modo a obter um meio. A medição de referência pode ser executada em paralelo com ou sequencialmente para testar medição. Também pode ser uma medição "histórica", ou seja alguma executada antes da medição de teste, e armazenada, por exemplo em um banco de dados para o fim de uso subsequente.

Uma comparação da medição de teste com uma medição de referência, e 5 observação de um desvio ou uma ausência de desvio entre as duas medições, torna possível extrair informação dependendo do parâmetro medido, por exemplo a diminuição ou aumento na expressão, na maturação ou na atividade de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido nucléico de acordo com a invenção. Tal informação pode subsequentemente ser utilizada para determinar 10 a presença de descamação normal or regular ou, ao contário, descamação anormal ou irregular da pele.

Quando um marcador biológico da invenção utilizado é uma sequência de aminoácido, descamação anormal ou irregular da pele pode ser refletida por um desvio da expressão dessa sequência por um fator de pelo menos 1,2, 15 preferencialmente de pelo menos 1,5 e mais preferencialmente de pelo menos duas vezes o valor de referência normal.

A invenção também pode ser realizada em uma amostra de pele, tirada de um modelo de célula epidérmico, ou de uma pele isolada reconstruída para descrever o seu estado. De acordo ainda com outro aspecto, um marcador biológico da invenção pode ser utilizado para selecionar, dentre um conjunto de agentes ativos para evitar e/ou tratar a desordem de descamação de pele, um agente ativo presumido para exercer o efeito de benefício máximo com relação à referida desordem.

O conjunto de agentes ativos em que uma seleção de um uso da invenção 25 pode ser o ajuste dos agentes ativos convencionalmente utilizados para tratar uma desordem de descamação. Mais particularmente, um marcador biológico da invenção pode ser utilizado para selecionar um agente ativo que é o mais adequado para o tratamento de um indivíduo apresentando a condição de caspa do couro cabeludo. Em tal caso, os agentes ativos que serão considerados são 30 aqueles normalmente utilizado para o tratamento da condição de caspas.

Assim, um marcador biológico da invenção pode vantajosamente ser utilizado para estabelecer um serviço de aconselhamento personalizado para um indivíduo apresentando uma desordem de descamação de pele, e em particular apresentando uma condição de caspa do couro cabeludo.

Dependendo do grau de desvio do marcador biológico em relação a uma referência normal, o aconselhador pode fazer uma escolha em direção ao produto mais adequado de modo a obter a melhor correção do marcador biológico em relação ao normal, enquanto ao mesmo tempo reduzindo o risco de ocorrência de efeitos adversos ou colaterais que podem provar ser prejudiciais a boa adesão ao tratamento.

De acordo com outro aspecto, um marcador biológico da invenção também pode ser utilizado em um processo para selecionar e constituir um grupo de indivíduos para realizar tentativas clínicas dedicadas a avaliar a eficácia de um produto presumido para ser ativo com relação à descamação anormal da pele, e preferencialmente uma condição de caspa do couro cabeludo.

Vantajosamente, para obter resultados significativos após uma tentativa clínica, um marcador biológico da invenção pode ser utilizado para definir grupos homogêneos de indivíduos tendo o mesmo grau de desvio do marcador biológico em relação a um valor de referência. De acordo com uma modalidade, a invenção refere-se a um processo, em particular um processo in vitro ou ex vivo, para caracterizar um estado de descamação da pele.

Um processo da invenção vantajosamente torna possível caracterizar uma desordem de descamação de pele resultando da descamação anormal ou irregular, e mais particularmente uma condição de caspa do couro cabeludo.

De acordo com outra modalidade, a invenção refere-se a um cosmético, ou 20 processo não terapêutico, em particular um processo in vitro ou ex vivo, para caracterizar a eficácia de um tratamento de pele cosmético, e preferencialmente um tratamento de descamação de pele anormal, e preferencialmente uma condição de caspa do couro cabeludo em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo pelo menos as etapas consistentes em: a) realizar , antes da implementação do tratamento cosmético, em uma primeira amostra de pele isolada, e preferencialmente uma amostra de couro cabeludo isolada, tirada do referido indivíduo, pelo menos uma primeira medição qualitativa ou quantitativa da expressão, maturação ou atividade de pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção ou de pelo menos uma sequência de ácido nucleico da invenção, b) realizar , após implementar o tratamento cosmético, em uma segunda amostra de pele isolada, e preferencialmente uma amostra de couro cabeludo isolada, tirada do referido indivíduo, pelo menos uma segunda medição qualitativa ou quantitativa da expressão, maturação ou atividade da referida sequência de 35 aminoácido da invenção ou da referida sequência de ácido nucleico da invenção, e c) comparar a primeira e segunda medições, em particular para deduzir dela informação relacionado-se a pelo menos um efeito da implementação do tratamento cosmético.

Isso ocorre sem dizer que as medições executadas na etapas a) e b) 5 devem ser comparáveis entre si, e portando referem-se ao mesmo parâmetro.

Preferencialmente, um processo da invenção torna possível demonstrar um efeito de um tratamento cosmético capaz de normalizar descamação anormal ou irregular da pele, e em particular a condição de caspa do couro cabeludo.

Mais preferencialmente, um processo da invenção torna possível 10 caracterizar a eficácia de um tratamento cosmético,e em particular um tratamento de uma condição de caspa do couro cabeludo.

Uma medição qualitativa ou quantitativa de uma expressão, maturação ou atividade de uma sequência de ácido nucléico da invenção pode ser determinada em qualquer métodos conhecido daqueles versados na técnica.

A título de exemplo dos métodos adequados para a invenção, pode ser feito menção à reação de cadeia de polimerase quantitativa (Q-PCR) ou reação de cadeia de polimerase não quantitativa (PCR), na presença ou ausência de transcriptase reversa (RT-PCR ou Q-RT-PCR), Northern blotting, o método de ensaio de proteção de ribonuclease, métodos com chips de DNA, métodos com chips de transcriptomo, métodos com chips de oligonucleotídeo, e métodos de hibridação in situ.

A título de exemplo dos agentes adequados para detectar uma sequência de ácido nucléico da invenção, e em particular uma sequência de mRNA, pode ser feito menção das sondas de ácido nucléico rotulados que podem hibridizar a 25 uma sequência de ácido nucléico da invenção.

Tal sonda de ácido nucléico pode ser facilmente obtida por qualquer método conhecido daqueles versados na técnica.

Assim, a sequência de ácido nucléicos de acordo com a invenção pode ser utilizada para preparar primers de oligonucleotídeo senso e/ou anti senso que hibridiza, sob condições de alto rigor, para pelo menos uma das sequências SEQ ID No.: 1, SEQ ID No.: 2, SEQ ID No.: 3, SEQ ID No.: 4, SEQ ID No.: 5, SEQ ID No.: 6, ou SEQ ID No.: 7, ou um análogo ou fragmento da mesma.

A expressão de uma sequência de ácido nucléico também pode ser determinada, indiretamente, por meio de determinação da expressão da 35 sequência de aminoácido codificada por referida sequência, pode meio de qualquer técnica conhecida no campo, tal como Western blotting, ELISA, o método BRADFORD ou o método LOWRY, ou como indicado adiante eletroforese 2D.

Uma medição qualitativa ou quantitativa de uma expressão, maturação ou atividade de uma sequência de aminoácido da invenção pode ser realizada por 5 qualquer método conhecido daqueles versados na técnica.

Por meio de métodos para detecção da expressão, da maturação ou da atividade de uma sequência de aminoácido, pode ser feito menção aos métodos Western blotting, slot blotting, dot blotting, ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay - Ensaio de Imunosorbância Ligado a Enzima) do tipo singleplex 10 ou multiplex, métodos proteômicos ou glicômicos, análise proteômica por eletroforese de diferença 2D, métodos para pigmentar polipeptídeos em um gel de poliacrilamida com um pigmento a base de prata, com azul Coomassie ou com SYPRO, métodos de imunofluorescência, métodos de absorção de UV, métodos imunohistoquímicos por miscroscopia convencional, de elétron ou confocal, 15 métodos FRET (fluorescence resonance energy transfer- transferência de energia de resssonância por fluorescência), métodos TR-FRET (FRET resolvido por tempo), FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy - microscopia por fluorescência de imagem ao vivo), métodos FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy - microscopia por fluorescência de imagem espectral), métodos FRAP 20 (recuperação de fluorescência após fotodegradação), métodos de gene reporter, métodos AFM (microscopia de força atômica), métodos de ressonância de plasmon de superfície, métodos de microcalorimetria, métodos de citometria de fluxo, métodos de biosensor, métodos de radioimunoensaio (RIA), métodos de focagem isoelétrica, e testes enzimáticos, métodos utilizando chips de peptídeo, 25 chips de açúcar, chips de anticorpo, métodos de espectrometria de massa, e métodos de espectrometria do tipo SELDI-TOF (Ciphergen), métodos de quantificação por meio de espectrometria de massa do tipo MRM (monitoramento de ração múltiplo).

Mais geralmente, métodos de ensaio imunoenzimático utilizando soluções 30 de proteínas, que são mais quantitativos e sensíveis, podem ser utilizados em particular. Esses métodos tipo ELISA combinam emparelhamentos de anticorpo de captura de específivo antígeno alvo e anticorpo de detecção. Anticorpos comerciais ou anticorpos especificamente policlonais, monoclonais ou recombinantes podem ser utilizados. Técnicas de ELISA multiplex de alta 35 capacidade podem ser utilizadas também. Pode ser feito menção da abordagem multiplex do tipo tal como anticorpos em esferas Luminex (por exemplo Bioplex da Bio-Rad), a abordagem singleplex ou multiplex por quimioluminescência da empresa MesoScale Discovery (MSD), ou do tipo tal como anticorpos em uma superfície plana (matrizes de anticorpo) (por exemplo a abordagem proposta pela empresa MesoScale Discovery). -

Em particular, pode ser vantajoso detectar a expressão de uma sequência de aminoácido da invenção por meio de um anticorpo, onde adequado na forma rotulada. Tal anticorpo pode ser rotulado por meio de uma substância que é diretamente detectável ou detectável por reação com outro reagente.

O termo "anticorpo" é destinado a denotar, geralmente, anticorpos 10 monoclonais ou policlonais, e também fragmentos de imunoglobulina capaz de ligar um antígeno e que podem ser' produzidos por qualquer técnica de engenharia técnica conhecidas daqueles versados na técnica ou por clivagem enzimática ou química de um anticorpo intacto.

Um anticorpo que pode ser utilizado como uma ferramenta para avaliar a 15 condição de uma epiderme pode'ser/obtido por meio de qualquer processo conhecido daqueles versados na técnica, como descrito no Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990).

De acordo com uma modalidade preferencial, pode ser vantajoso detectar 20 a expressão de uma sequência de aminoácido da invenção por meio de uma análise proteômica por eletroforese de diferença 2D ou via rotulagem isobárica iTRAQ, OU por meio de contagem espectral livre de rótulo, ou do tipo SILAC se culturas celulares estão envolvidas. ...

Tal método é conhecido daqueles versados na técnica e pode 25 vantajosamente ser executado como descrito nos exemplos adiante. Em particular, o termo "atividade" com relação a uma sequência de aminoácido da invenção significa atividade proteolítica como indicado anteriormente, ou atividade para reduzir, evitar ou tratar a desordem de descamação de pele, por exemplo como definido anteriormente, e especialmente 30 uma condição de caspa do couro cabeludo. Tal atividade pode ser determinada por meio de qualquer método conhecido daqueles versados na técnica, por exemplo por meio de avaliação da atividade proteolítica em um substrato comum de IDE tal como insulina, glucagon ou a proteína β-amiloide.

Preferencialmente, a determinação de um estado de pele ou a 35 caracterização da eficácia de um tratamento cosmético para a pele pode ser executado por meio da medição da variação na expressão de uma sequência de aminoácido da invenção, e que é preferencialmente representada por uma sequência escolhida da SEQ ID No.: 8 a SEQ ID No.: 14, ou um análogo ou fragmento da mesma.

Os processos da invenção são particularmente vantajosos desde que a 5 implementação deles não exija recurso a uma técnica invasiva. Uma amostra da epiderme pode, assim, ser obtida por técnicas de "desnudamento" e diretamente analisada por uma técnica de análise convencional conhecida daqueles versados na técnica.

Esses desnudamentos são superfícies adesivas aplicadas à superfície da 10 epiderme, tal como Blenderm® da 3M, D’squam (adesivo comercial da CuDERM), cola cianoacrilata ou o método de "desnudamento" de verniz ou corneodiscos. Em virtude desses desnudamentos, os corneócitos aderentes e o conteúdo de seus espaços intercelulares pode ser amostrado e subsequentemente sujeito à extração para avaliar o conteúdo de proteína.

A tirada de uma amostra adequada para um processo da invenção pode ser também executada mais diretamente por "lavagem" da superfície de pele, por meio, por exemplo, dos acessórios do tipo de turbina de pá ou do tipo de célula espiral como descrito na patente FR 2 667 778 combinada com um circuito de fluido, ou simplesmente pela adição/amostragem de uma queda de tampão na 20 superfície da pele.

Como um guia, outros métodos de amostragem adequados para implementação da invenção podem ser mencionados, tal como métodos por raspagem da parte superior do estrato córneo por meio de um sistema de lâmina gêmea. Essa técnica torna possível coletar escamas que podem então ser 25 diretamente analisadas por várias técnicas para determinar os conteúdos minerais, de aminoácidos ou lipídios.

Vantajosamente, um dos marcadores da invenção pode ser utilizado para fins de seleção pré-clínica mais eficiente e rigorosa, de indivíduos, com uma vista para avaliar a eficácia de um tratamento cosmético ou se um agente ativo 30 cosmético para cuidado da pele e especialmente cuidado do couro cabeludo.

Similarmente, um marcador biológico da invenção pode vantajosamente ser utilizado como anteriormente indicado para avaliar a eficácia de um agente ativo, in vitro, ex vivo ou in vivo. Similarmente, um marcador biológico da invenção pode ser utilizado para estabelecer conselho personalizado para um tratamento 35 cosmético para um indivíduo de acordo com referido perfil de expressão de marcador biológico de pele do indivíduo.

Seleção

De acordo com um de seus aspectos, a presente invenção refere-se ao uso de um marcador biológico da invenção, para a seleção ou em um processo de seleção, em particular in vitro ou ex vivo, de agentes ativos ou tratamentos físicos 5 para cuidado da pele.

Os agentes ativos ou tratamentos físicos selecionados podem especialmente ser utilizados para evitar e/ou tratar descamação anormal ou irregular da pele, e preferencialmente para evitar e/ou tratar a condição de caspa do couro cabeludo.

Um uso ou um processo de seleção da invenção pode compreender a comparação de uma medição da atividade, expressão ou maturação de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido nucleico de acordo com a invenção, com a medição de referência. A medição de referência pode ser uma definida anteriormente. Em particular, a medição de referência pode ser um valor quantitativo ou qualitativo em relação à expressão, maturação ou atividade das referidas sequências, determinado em uma amostra na ausência do agente ativo ou do tratamento físico testado.

Assim, uma medição de referência pode ser obtida por meio de repetição 20 das etapas de um processo da invenção, e especialmente as etapas a), b) e c) de um processo da invenção como definido anteriormente, na ausência de agentes ativos, ou tratamentos físicos a serem testados.

Uma comparação da medição de teste com uma medição de referência, e observação de um desvio ou de uma ausência de desvio entre as duas medições, 25 torna possível extrair informação com relação ao efeito do agente ativo ou do tratamento físico testado.

A determinação qualitativa ou quantitativa da expressão, da maturação ou da atividade de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido nucleico da invenção pode ser executada por qualquer método conhecido 30 daqueles versados na técnica, e em particular como descrito anteriormente.

De acordo com uma modalidade, a seleção para um agente ativo ou um tratamento físico capaz de modular a atividade de uma sequência de aminoácido da invenção pode ser executada por meio de medição da atividade ou da expressão de uma molécula alvo pertencente às vias de sinalização ou 35 metabólica em que referida sequência de aminoácido pode estar envolvida, tal como, por exemplo, um sistema de gene reporter. De acordo com uma JL modalidade, um processo da invenção pode ser realizado em um sistema acelular, ou seja em um sistema que não compreende células, mas que reproduz funções celulares, ou em uma amostra celular isolada.

Um processo de acordo com a invenção pode ser realizado em uma 5 amostra de célula isolada, uma amostra acelular, em uma sequência de aminoácido isolada ou uma sequência de ácido nucléico isolada da invenção. Essas amostras ou sequências podem ser obtidas por biópsia de pele, das células em cultura, especialmente de um modelo epidérmico, ou de uma amostragem de superfície de pele não invasiva, especialmente por adesivo 10 ("desnudamento por fita"), do estrato córneo ou por lavagem simples, como descrito anteriormente, ou altemativamente, no que respeita às sequências, por meio de síntese.

O uso desses exemplos ou sequências para a seleção dos agentes ativos ou de um tratamento físico de acordo com a invenção cai dentro do conhecimento 15 geral de uma pessoa versada na técnica neste campo.

Vantajosamente, pode meio de uma amostra de célula adequada para a invenção, pode ser feito menção da amostra de queratinócitos ou qualquer outro tipo de célula da pele expressando uma sequência de aminoácido da invenção.

Preferencialmente, a seleção de um agente ativo ou para um tratamento 20 físico pode ser realizada por medição da variação na expressão ou atividade, na presença e na ausência do agente ativo ou do tratamento físico selecionado, de uma sequência de aminoácido da invenção, e que é preferencialmente representado por uma sequência escolhida da SEQ ID No.: 8 a SEQ ID No.: 14, ou um análogo ou fragmento da mesma, e preferencialmente escolhida da SEQ 25 ID No.: 9 a SEQ ID No.: 14, ou um análogo ou fragmento da mesma.

Agente modulatório

Para os fins da presente invenção, a expressão "agente modulatório" ou "agente ativo ou um tratamento físico capaz de modular a expressão, a maturação ou a atividade de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido 30 nucléico de acordo com a invenção" significa qualquer composto ou fenômeno físico capaz de agir, direta ou indiretamente, em pelo menos uma sequência de aminoácido ou uma sequência de ácido nucléico de acordo com a invenção, ou em um elemento de uma via de sinalização intracelular ou extracelular, ou de uma via metabólica, ou para regular transcrição e/ou translação, envolvendo referida 35 sequência de aminoácido ou referida sequência de ácido nucléico. * Os agentes modulatórios ou tratamentos físicos que são preferenciais de acordo com a invenção podem ser compostos ou tratamentos físicos que agem diretamente em pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção ou pelo menos uma sequência de ácido nucléico da invenção para modular sua i 5 expressão, maturação ou atividade. Para os propósitos da invenção, o termo "modular" significa, de um ponto de vista de um dado efeito, a ação de estimular ou inibir esse efeito.

Os agentes ativos ou tratamentos físicos derivados de uma seleção de < acordo com a invenção podem ser vantajosamente utilizados para fins cosméticos, especialmente com respeito às desordens de descamação de pele, especialmente desordens das propriedades de barreira da pele, e em particular desordens das propriedades de barreira do couro cabeludo.

De acordo com uma modalidade preferencial, um agente modulatório da invenção é um agente para inibir a atividade, expressão ou maturação de uma 15 sequência de aminoácido da invenção. Ainda mais preferencialmente, um agente modulatório da invenção é um agente para inibir a atividade enzimática de uma sequência de aminoácido da invenção.

Um agente modulatório que inibe a atividade enzimática de uma sequência de aminoácido da invenção pode ser escolhida de ATP, ADP, N-etilmaleimida, 20 1,10-fenantrolina, bacitracina, insulina, hGH, PMSF, ácidos graxos tal como ácido palmítico, ácido linoleico, palmitoil-CoA, linoleoil-CoA, íons de metal tal como Mg2+, Mn2+, Zn2+, Li+, dinorfina, ubiquitina, agentes quelantes de metal, especialmente agentes quelantes de Zn tal como EDTA, peptídeos de hidroxamato tendo a fórmula geral seguintes:

em que R1t R2, R3, R4, R5 θ Re são independentes entre si, e em que: - Ri é H, OH, O-(Ci-C6)alquil ou (Ci-C6)alquil, - R2 é um (C5-Cio)aril, um (C5-Ci0)heteroaril compreendendo pelo menos N, O ou S, um fenil, um 1-naftill, um 2-naftill, onde apropriado substituído com um 35 halógeno, especialmente Cl ou F, um (Ci-Ce)alquil ou um O-(CrC6)alquil, uma nitrila, um CN, um (C5-Cio)aril, um (C5-Cio)heteroaril compreendendo pelo menos um N, O ou S, ou um CO2H, - R3 é NHC(=NH)NH2, NH2, NHC(O)(CrC6)alquil ou NHC(0)(C5-Cio)aril, - R4 é ÍC(=O)CH(CH2)OR7NH]PH ou [C(=O)CH(CH2)oR7NH]pC(=O)Me com R7 sendo 4-hidróxifenil, CO2H, 3-indolil, ou um fenil, o variando de 0 a 3 e p variando de 0 a 2, - Rs é H ou Me, - R6 é H ou Me, - m varia de 0 a 3 e n varia de 0 a 3.

Os peptídeos de hidroxamato que são adequados para uso na invenção são mais particularmente descritos no WO 2008/156 701. Preferencialmente, um peptídeo de hidroxamato que é adequado para uso na invenção pode ser um composto da fórmula geral anterior (I), em que R2 é um 2-naftill, e R3 é NHC(=NH)NH2, e Ri, R4, R5 e R6 são como definidos anteriormente.

Ainda mais preferencialmente, R2 pode ser um aril, um heteroaril, um aril substituído, um heteroaril substituído, um aril substituído com halo tal como um 2- fluorofenil, um 3-fluorofenil, um 4-fluorofenil, um heteroaril substituído com halo, um aril substituído com alquil ou com aril, um heteroaril substituído por alquil ou aril, tal como um 2-terc-butil, 34erc-butil, 4-terc-butil, fenil, um 1 -naftill, 2-naftill, 2- benzotiofeno, trans-CH=CH-fenil, 2-fenil, 3-fenil ou 4-fenil.

Ainda mais particularmente, um peptídeo de hidroxamato que é adequado para uso na invenção pode ser escolhido de:

Além dos agentes inibidores mencionados anteriormente, menção também pode ser feita, como inibidores de IDE, dos compostos do tipo fosfato de nucleosídeo ou fragmentos de peptídeo de IDE, e também interferindo RNAs, DNA ou RNA aptâmeros ou anticorpos que bloqueiam o sítio ativo ou o exósito da enzima.

De acordo com uma modalidade da invenção, um agente modulatório da invenção, especialmente um agente que inibe a atividade, expressão ou maturação de uma sequência de aminoácido da invenção, pode ser vantajosamente utilizada para evitar e/ou tratar uma condição de caspa do couro cabeludo. Mais preferencialmente, a invenção refere-se ao uso de um agente modulatório que inibe a atividade enzimática de uma sequência de aminoácido da invenção para evitar e/ou tratar uma condição de caspa do couro cabeludo.

De acordo com outro aspecto, a invenção também refere-se a agentes modulatórios da invenção escolhidas dos ativadores da atividade, expressão ou maturação de uma sequência de aminoácido da invenção e especialmente activadores da atividade enzimática de uma sequência de aminoácido da invenção.

De acordo com uma modalidade, um agente modulatório que ativa atividade enzimática pode ser escolhido da suramina, somatostatina, bradiquinina, β-endorfina, dinorfina, ATP, iPPP, ADP, AMP, ácidos graxos, especialmente tal como ácido docosahexaenoico, e os compostos tendo as fórmulas seguintes:

Esses compostos são especialmente descritos no Cabrol et al. (PLoSOne, 2009). Dentre os ativadores da atividade enzimática de IDE, menção também pode ser feito de fosfatos de nucleosídeo, fragmentos de peptídeo de IDE, ou anticorpos que ativam a enzima. Como agentes modulatórios que podem ser selecionados de acordo com um uso ou um processo de acordo com a invenção, menção pode ser feita também de anticorpos, derivado especialmente dos bancos de anticorpos recombinantes, por exemplo da empresa Antibodies By Design, e que são de bloqueio do sítio ativo ou exósito da enzima, ou da ativação da enzima, por exemplo por meio do efeito alostérica, ou interferindo RNAs, tal como siRNA, miRNA ou shRNA, ou RNA ou DNA aptâmeros. Composições

A presente invenção também refere-se às composições, em particular composições cosméticas, compreendendo, em um meio fisiologicamente ou cosmeticamente aceitável, uma quantidade eficaz de pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção, ou de pelo menos uma sequência de ácido nucléico da invenção, ou de pelo menos um agente ativo capaz de modular a atividade, expressão ou maturação da referida sequência de aminoácido da referida 5 sequência de ácido nucléico.

Mais particularmente, a invenção refere-se a uma composição cosmética compreendendo um peptídeo representado por uma sequência de aminoácido escolhida da SEQ ID No.: 9 a SEQ ID No.: 14, ou um análogo ou fragmento da mesma, ou uma sequência de ácido nucléico codificando tal peptídeo.

Para os fins da presente invenção, a expressão "meio fisiologicamente aceitável" é destinado a denotar um meio que é adequado para a administração de uma composição topicamente para a pele, o couro cabeludo ou os lábios, ou oralmente ou parenteralmente, tal como intradermalmente ou subcutaneamente.

Uma composição da invenção pode conter adjuvantes que são comuns no 15 campo sob consideração, tal como agentes gelificantes hidrofílicos ou lipofílicos, aditivos hidrofílicos ou lipofílicos, agentes conservantes, antioxidantes, solventes, fragrâncias, preenchedores, agentes de seleção, absorventes de odor e corantes.

As quantidades de vários constituintes das composições de acordo com a invenção são aquelas convencionalmente utilizadas nos campos sob 20 consideração.

A quantidade de sequência de aminoácido ou sequência de ácido nucléico da invenção ou do agente ativo de acordo com a invenção, contida em uma composição da invenção, também referida como "quantidade eficaz", depende do curso da natureza do agente ativo e no efeito desejado e pode, portanto, variar 25 em uma grande medida. Para concerder uma ordem de magnitude, uma composição pode conter uma sequência de aminoácido ou uma sequência de ácido nucléico ou um agente ativo de acordo com a invenção em uma quantidade representando de 0,00001% a 50% do peso total da composição, em particular em uma quantidade representando de 0,001% a 10% do peso total da 30 composição e mais particularmente em uma quantidade representando de 0,1% a 1% do peso total da composição.

De acordo com outra modalidade, uma composição coméstica da invenção também pode compreender pelo menos um agentes ativo cosmético e/ou terapêutico adicional.

Agentes ativos adicionais

Como exemplos dos agentes ativos adicionais que podem ser utilizados no contexto da presente invenção, pode ser feito menção aos óleos cosméticos, tal como óleos de silicone, óleos vegetais do tipo triglicerídeo, óleos a base de hidrocarboneto, tal como óleo de Parleam, e ésteres dos ácidos graxos e dos 5 álcoois graxos.

Pode ser possível utilizar outros agentes ativos para aprimorar o estado da pele e/ou de seus anexos, tal como agentes ativos de hidratação ou umidificação ou agentes ativos para aprimorar a barreira de lipídio natural, tal como ceramidas, sulfatos de colesterol e/ou ácidos graxos, e suas misturas.

Pode ser possível utilizar enzimas que têm uma atividade na pele e/ou seus anexos, tal como proteases, lipases, glucosidases, amidases, cerebrosidases e/ou melanases, e suas misturas.

Outros exemplos de agentes ativos que são adequados para a implementação da presente invenção incluem: agentes ativos analgésicos, 15 agentes ativos anti-levedura, agentes ativos antibacterianos, agentes ativos antiparasíticos, agentes ativos antifungos, agentes ativos antivirais, agentes ativos antiinflamatórios esteroidais, agentes ativos anestésicos, agentes ativos antipruríticos, agentes ativos queratolíticos, agentes ativos de eliminação de radicais livres, agentes ativos antiseborreicos, agentes ativos anticaspa, agentes 20 ativos antiacne, agentes ativos para evitar envelhecimento da pele e/ou para aprimorar o seu estado, agentes ativos antidermatite, agentes ativos antiirritantes, agentes ativos imunomodulatórios, agentes ativos para tratar pele seca, agentes ativos antiperspirantes, agentes ativos antipsoríaticos, agentes ativos de proteção UV, agentes ativos antihistaminas, agentes ativos cicatrizantes, agentes ativos de 25 auto bronzeamento, antioxidantes tal como chá verde ou seus fragmentos ativos, glicerol, laponita, cafeína, óleos essesnciais aromáticos, corantes, agentes ativos despigmentadores, liporeguladores, amaciantes, refrescantes, desodorizantes, dessensibilizadores, branqueadores ou agentes ativos nutritivos, agentes ativos para reduzir diferenciação de pele e/ou proliferação e/ou pigmentação, e suas 30 misturas. Também, como agentes ativos adicionais, pode ser feito menção do Tween 20 ou de outros detergentes suaves, agentes quelantes, agentes probióticos, Zn-piritiona ou outros agentes antifungos, ácido elágico, agentes pró descamativas e/ou agentes de peeling, compostos anti-pruridos, polifenóis e seus derivados, açúcares e reduzindo açúcares, agentes antiinflamatórios, 35 antiperspirantes ou agentes anti sebásicos, etc.

Por meio dos agentes ativos adicionais que podem ser mais particularmente adequados para uso na invenção, tabém pode ser feita menção dos microorganismos, agentes ativos prebióticos, agentes ativos para promover a síntese de fator de defesa de pele, agentes ativos para restabelecimento do 5 equilíbrio de diferenciação/proliferação de células epidérmicas, em particular tais agentes ativos de retinol ou tipo tipo retinol, ou agentes ativos hidratantes. Uso cosmético

A presente invenção refere-se ao uso cosmético de uma quantidade eficaz de pelo menos um agente que modula a atividade, expressão ou maturação da 10 referida sequência de aminoácido ou da referida sequência de ácido nucléico, e especialmente um agente modulatório como definido anteriormente, como um agente ativo para evitar e/ou tratar descamação anormal ou irregular da pele, em particular uma desordem das propriedades de barreira do couro cabeludo, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo.

De acordo com uma modalidade preferencial, um uso da invenção pode implementar um agente modulatório que inibe a atividade, expressão ou maturação de uma sequência de aminoácido da invenção, e preferencialmente um inibidor da atividade enzimática de um sequência de aminoácido da invenção. Tal agente pode ser escolhida especialmente dos inibidores definidos 20 anteriormente.

De acordo com outra modalidade, um uso da invenção podem implementar um agente modulatório que ativa a atividade enzimática de um sequência de aminoácido da invenção, vantajosamente escolhido dos ativadores anteriormente definidos.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção refere-se a um cosmético ou processo não terapêutico para evitar e/ou tratar descamação anormal ou irregular da pele, e em particular a condição de caspa do couro cabeludo, em um indivíduo em necessidade do mesmo.

Um processo da invenção pode compreender pelo menos uma etapa que 30 consiste na administração ao referido indivíduo pelo menos uma composição compreendendo, como agente ativo, pelo menos um agente que modula a atividade, expressão ou maturação das referidas sequências da invenção, especialmente como definido acima. Preferencialmente, um agente modulatório sob consideração é um agente que inibe a atividade enzimática de uma 35 sequência de aminoácido da invenção, especialmente como definido anteriormente.

Um processo ou um uso da invenção torna possível evitar e/ou tratar uma desordem de descamação de pele, especialmente como definidos anteriormente, e preferencialmente a condição de caspa do couro cabeludo. Um processo do uso da invenção pode tornar possível reduzir o número e 5 tamanho das escamas ou caspa.

Vantajosamente, um couro cabeludo pode ter sua aparência estética aprimorada e suas propriedades de função de barreira restauradas como um resultado da implementação de um uso ou um processo de acordo com a invenção.

Em geral, um processo ou uso da invenção torna possível reforçar as propriedades de barreira da pele, e em particular do couro cabeludo. Preferencialmente, um processo da invenção pode compreender a aplicação tópica, a pelo menos uma parte da pele de um indivíduo em necessidade da mesma, em particular para o couro cabeludo, de pelo menos um 15 revestimento de uma composição tópica da invenção.

Um processo cosmético por meio de aplicação tópica de acordo com a invenção pode compreender vantajosamente a aplicação de uma composição da invenção, em combinação, simultaneamente, sucessivamente ou separadamente ao longo do tempo, com uma composição cosmética ou dermatológica adicional 20 distinta da composition da invenção e destinada para cuidar e ou/ou maquear a pele, e preferencialmente para cuidar do couro cabeludo .

De acordo com outra modalidade preferencial, um processo cosmético da invenção pode ser implementado oralmente, em particular pela administração de pelo menos uma composição de alimento ou dietética para fins cosméticos.

De acordo com outra modalidade preferencial, um processo cosmético da invenção pode ser implementado parenteralmente. A implementação parenteral de um processo cosmético da invenção é realizada para a exclusão de qualquer intervenção cirúrgica e é meramente almejada na realização de um tratamento de superfície da pele para fins estéticos.

Consequentemente, um processo cosmético da invenção implementado parenteralmente é executado por qualquer técnica de injeção ou dispositivo adequado para uma injeção intraepidérmica e/ou intradérmica e/ou subcutânea.

Tal administração pode ser executada, por exemplo, por mesoterapia. Um processo cosmético implementado parenteralmente portanto resulta 35 apenas em uma penetração superficial da pele e está portanto fora de qualquer contexto médico ou terapêutico. É alternativamente possível, parenteralmente, favorecer administração utilizando um emplastro sistêmico.

Um processo cosmético de acordo com a invenção pode ser executado diariamente, por exemplo na taxa de uma única administração por dia ou de uma 5 administração dividida em duas ou três vezes por dia, por exemplo uma vez na manhã e uma vez no início da noite.

Um processo cosmético de acordo com a invenção pode ser implementado ao longo de um período variando de uma semana a várias semanas, ou até vários meses, esse período além disso sendo possivelmente repetido após períodos 10 sem tratamento, durante vários meses ou até muitos anos.

A título de exemplo de um processo cosmético de acordo com a invenção, é possível vislumbrar administração de uma composição da invenção, por exemplo, em uma taxa de 1, 2 ou 3 vezes por dia, ou mais, e geralmente ao longo de um período estendido de pelo menos 4 semanas, ou até 4 a 15 semanas, com, 15 onde apropriado, um ou mais períodos de paralisação.

Pele reconstruída

De acordo com outro aspecto, a presente invenção refere-se ao uso de uma quantidade eficaz de pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção, ou da pelo menos uma sequência de ácido nucleico da invenção, ou de 20 pelo menos um agente da invenção modulatório, para preparar uma pele reconstruída isolada.

Há uma grande vantagem no desenvolvimento de modelos organotípicos que são o mais próximo possível das condições in vivo para avaliar a seguridade e eficácia dos agentes ativos e fórmulas para aplicações cosméticas e 25 dermatológicas.

O uso de pelo menos uma sequência de aminoácido da invenção, ou de pelo menos uma sequência de ácido nucleico da invenção, ou de pelo menos um agente da invenção modulatório, em um meio de cultura, é capaz de aprimorar a qualidade dos modelos desenvolvidos.

Além disso, um uso da invenção pode possibiliar obter um modelo de pele reconstruído isolado que reproduz descamação da pele. Em particular, o uso de um agente modulatório de ativação, como definido anteriormente, pode ser considerado para a preapração do modelo de pele que reproduz descamação, e preferencialmente que reproduz uma condição de caspa.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção refere-se a um processo para preparar um modelo de célula epitelial multiestratificado isolado, e preferencialmente uma pele reconstruída isolada, compreendendo pelo menos a etapa de trazer pelo menos uma quantidade eficaz da pelo menos uma sequência de aminoácido, ou da pelo menos uma sequência de ácido nucléico, ou do pelo menos um agente modulatório de acordo com a invenção, em contato com células 5 capazes de gerar uma pele reconstruída isolada, e em particular queratinócitos.

Um modelo de pele reconstruído pode compreender vários tipos de célula, tal como queratinócitos, fibroblastos, células Langerhans e melanócitos. As células do tipo fibroblasto podem ser opcionalmente irradiadas.

Vantajosamente, um modelo de pele reconstruída da invenção pode ser 10 utlizado como um modelo de um couro cabeludo. Um modelo de couro cabeludo reconstruído isolado da invenção pode vantajosamente ser utilizado para os fins de seleção de novos agentes ativos que são adequados para cuidado do couro cabeludo, e mais particularmente novos agentes ativos anticaspa.

Tais modelos e sua preparação são conhecidos daqueles versados na 15 técnica. De acordo ainda com outro aspecto, a presente invenção também refere-se a um processo para preparar um modelo de célula epitelial multiestratificado, preferencialmente um modelo de pele reconstruído, compreendendo pelo menos uma etapa de cultivo de células de pelo menos um tipo celular do referido modelo, 20 referidas células sendo geneticamente modificadas de modo a suprimir ou aumentar a expressão de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido nucléico da invenção.

A produção de células geneticamente modificadas de modo a suprimir a expressão de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido 25 nucléico da invenção, cujas células são referidas como "knock-ouf, pode ser executada por qualquer método conhecido daqueles versados na técnica.

A título de exemplo, tais células podem ser obtidas por transfecção e recombinação homóloga de um fragmento de ácido nucléico que insere no ou assume o lugar do gene expressando a sequência de aminoácido da qual a 30 expressão é para ser suprimida.

Também é possível suprimir a expressão de um dado gene por meio de transfecção na célula de uma sequência de ácido nucléico codificando um RNA de interferência específico para o mRNA derivado do gene do qual a expressão é para ser suprimida.

A produção de células geneticamente modificadas de modo a aumentar a expressão de uma sequência de aminoácido ou de uma sequência de ácido £• nucléico da invenção pode ser realizada por meio de qualquer método conhecido daqueles versados na técnica.

A título de exemplo, tais células podem ser obtidas por transfecção de um plasmídeo compreendendo um gene codificando uma sequência de aminoácido 5 da invenção sob o controle de um promotor. O promotor utilizado pode permitir a expressão induzível ou constitutiva ou específica de tecido do gene.

Também, é possível utilizar vários vetores de transfecção que permitem a introdução do gene a ser expresso nos cromossomos das células a serem transfectadas.

Todas essas técnicas biológicas moleculares tornando possível reprimir ou aumentar a expressão de um gene são conhecidas daqueles versados na técnica e não precisam ser especificamente elaborados.

FIGURAS

Figura 1: mostra a magnificação de um sinal de proteína, obtido por 15 análise proteômica por eletroforese de diferença 2D, identificada como sendo IDE. Figura 2: é um gráfico da intensidade do volume de sinais observados na Figura 1.

Figura 3: mostra a imunodetecção por Western blotting de IDE. Figura 4: mostra a intendidade do meio das bandas detectadas durante o Western blotting ilustrado pela Figura 3. Para os fins da presente invenção, "um" pode ser entendido, a menos que indicado de outro modo, no sentido de "pelo menos um". Os exemplos e figuras adicante são apresentados a título de ilustração e 25 sem limitação implícita da invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1 Expressão de IDE no couro cabeludo 1 - Materiais e métodos Uma análise proteomítica por eletroforese de diferença 2D realizada utilizando amostras não invasivas de couro cabeludo portando caspa e livre de caspa foi realizada. O estudo é realizado em 6 voluntários livre de caspa (grau de caspa aderente de 0 a 0,25) e 6 voluntários portando caspa (grau de caspa aderente de 35 3,25 a 4). Os voluntários são homens de 36 a 39 anos de idade com cabelo curto. A graduação da condição de caspa dos voluntários é realizada por um especialista de acordo com a seguinte classificação padrão que provê uma escala de pontuações de caspa aderente de entre 0 e 5. As amostras são tirada s por corneodisco (refrência GODS100, CuDerm) em uma área de 2 cm. Quatro corneodiscos saturados são produzidos para cada 5 amostra. As proteínas solúveis são extraídas em um tampão nativo (TBS, 1M NaCI, 1%de Triton X100). Após filtragem, as proteínas são precipitadas pela adição de acetona. O pelete de proteína é dissolvido no tampão de extração III (BioRad; Ref.: 163-2104) suplementado com 40 mM de DTT. 10 Para cada amostra correspondente a um voluntário, eletroforese bidimensional é realizada ao longo da primeira dimensão por separação de IEF pH 3-11 em uma tira de 11 cm (GE-Healthcare) e ao longo de uma segunda dimensão em um gel de grau 10,5-14% de Criterion (Bio-Rad) de acordo com as recomendações do fornecedor. Após pigmentar os géis com SyproRuby (referência S4942, Invitrogen) utilizado de acordo com o protocolo do fornecedor, uma análise de imagem é realizada no software Progenesis™ após aquisição de imagem de acordo com os seguintes parâmetros: Excitação: 460/80; Emissão: 620/30; Resolução 50 μm; Exposição 3 s; Campo Plano: 1 s; Exposição 1. Em uma primeira etapa, as imagens são alinhadas juntas e as intensidades normalizadas. Em uma segunda etapa, após ter grupos definidos, uma análise estatística é realizada com software Progenesis Samespots (Nonlinear Dynamics). Uma seleção de sinais é feita como uma função do "valor de p" (menos do que 0,05), a "vez" (maios do que 2, razão de intensidade entre o sinal mais intenso de um grupo e o último sinal intenso de outro grupo) e o "valor de q" (maior do que 0,8). Os sinais selecionados são antão cortados e as proteínas digeridas com tripsina e analisadas por LC-MS/MS. O banco de dados da proteína UniRefl00.15.3.9606.homo-sapiensfoi interrogado para identificaras proteínas.

2- Resultados

IDE é identificado dentre os sinais selecionados em favor de uma superexpressão no grupo portando caspa de acordo com os critérios definidos anteriormente. Magnificação desse sinal de proteína para cada voluntário e a 35 representação gráfica do volume de sinais é dada pelas Figuras 1 e 2. Esses resulyados validam o uso de IDE como um marcador biológico para a pele, em particular para descamação de pele, e mais particularmente para uma condição de caspa do couro cabeludo. IDE pode, então, ser vantajosamente utilizado para a seleção dos agentes ativos para o tratamento de uma condição de caspa do couro cabeludo ou para a caracterização da eficácia de um tratamento de pele cosmético. Exemplo 2 Confirmação por Western blotting da expressão de IDE na pele 1- Materiais e métodos A concentração das amostras descritas anteriormente no exemplo 1 está alinhada, e 2 μg são depositados nos poços de um gel de 10-20% de Criterion (BioRad). As proteínas são, portanto, separadas por eletroforese de SDS-PAGE. Após transferência semi seca sobre uma membrana de PVDF de acordo com um protocolo padrão, as proteínas são incubadas com um anticorpo primário direcionado contra a proteína de interesse, durante a noite a 4°C. Uma segunda incubação é então realizada com um anticorpo secundário (acopaldo a uma peroxidase) direcionado contra o primeiro anticorpo. Um kit de eletro-quimio-luminescência é utilizado para revelar as proteínas alvo. A imagem é adquirida com FluorSmax (Biorad) e as bandas são quantificadas utilizando software Quantity-One (Biorad). Um anticorpo anti-IDE comercial foi utilizado em uma diluição de 1/5000 (referência AB28560, AbCam). 2- Resultados

Figura 3 mostra o a imagem de Western blot obtida. A intensidade de meio das bandas detectadas é representada pelo histograma na Figura 4.

A imunodetecção do IDE revela uma superexpressão nos indivíduos portando caspa. Essa observação confirma as identificações diferenciais observadas no exemplo 1.

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Claims (6)

1. Uso in vitro ou ex vivo: (i) de pelo menos uma sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID No.: 8 a SEQ ID No.: 14, ou (ii) de pelo menos uma sequência de ácido nucleico da SEQ ID No.: 1 ou fragmento da SEQ ID No.: 1, em que o referido fragmento compreende de 9 a 300 pares de base consecutivos da sequência SEQ ID No.: 1 e codificando uma sequência de aminoácidos tendo uma atividade biológica da mesma natureza que a sequência de aminoácidos pela sequência SEQ ID No.: 1, caracterizado pelo fato de ser como um marcador biológico para uma condição de caspa do couro cabeludo.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato da referida sequência de ácido nucleico ser escolhida da SEQ ID No.: 2 a SEQ ID No.: 7.

3. Uso in vitro ou ex vivo (i) de pelo menos uma sequência de aminoácidos como definida na reivindicação 1, ou (ii) de pelo menos uma sequência de ácido nucleico como definida na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser para caracterização da eficácia de um tratamento cosmético de uma condição de caspa do couro cabeludo.

4. Uso in vitro ou ex vivo (i) de pelo menos uma sequência de aminoácidos como definida na reivindicação 1, ou (ii) de pelo menos uma sequência de ácido nucleico como definida na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser para selecionar, dentre um conjunto de agentes ativos conhecidos para evitar e/ou tratar uma condição de caspa do couro cabeludo, um agente ativo presumido para exercer um efeito benéfico máximo com relação à referida condição de caspa.

5. Processo in vitro ou ex vivo para caracterização de uma condição de caspa do couro cabeludo, caracterizado pelo fato de compreender pelo menos as etapas consistindo em: a) realizar, em uma amostra isolada de um couro cabeludo, uma medição qualitativa ou quantitativa da expressão, maturação ou atividade de uma sequência de aminoácidos como definida na reivindicação 1 ou de uma sequência de ácido nucleico como definida na reivindicação 1 ou 2, e b) comparar a referida medição executada na etapa a) com uma medição de referência.

6. Processo cosmético in vitro ou ex vivo para caracterização da eficácia de um tratamento cosmético de uma condição de caspa do couro cabeludo em um indivíduo em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de compreender pelo menos as etapas consistindo em: a) realizar, antes de implementar o tratamento cosmético, em uma primeira amostra de couro cabeludo isolada tirada do referido indivíduo, pelo menos uma primeira medição qualitativa ou quantitativa da expressão, maturação ou atividade de pelo menos uma sequência de aminoácidos como definida na reivindicação 1 ou de pelo menos uma sequência de ácido nucleico como definida na reivindicação 1 ou 2, b) realizar, após implementar o tratamento cosmético, em uma segunda amostra de couro cabeludo isolada tirada do referido indivíduo, pelo menos uma segunda medição qualitativa ou quantitativa da expressão, maturação ou atividade da referida sequência de aminoácidos ou da referida sequência de ácido nucleico, e c) comparar a primeira e segunda medições, em particular para deduzir daí informação relacionada a pelo menos um efeito da implementação do tratamento cosmético.

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