FR2983868A1 - Klk6 comme biomarqueur du cuir chevelu - Google Patents

Klk6 comme biomarqueur du cuir chevelu Download PDF

Info

Publication number
FR2983868A1
FR2983868A1 FR1161283A FR1161283A FR2983868A1 FR 2983868 A1 FR2983868 A1 FR 2983868A1 FR 1161283 A FR1161283 A FR 1161283A FR 1161283 A FR1161283 A FR 1161283A FR 2983868 A1 FR2983868 A1 FR 2983868A1
Authority
FR
France
Prior art keywords
acid sequence
scalp
amino acid
nucleic acid
barrier function
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
FR1161283A
Other languages
English (en)
Other versions
FR2983868B1 (fr
Inventor
Caroline Delattre
Roland Jourdain
Dominique Bernard
Florence Pouradier
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LOreal SA
Original Assignee
LOreal SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LOreal SA filed Critical LOreal SA
Priority to FR1161283A priority Critical patent/FR2983868B1/fr
Publication of FR2983868A1 publication Critical patent/FR2983868A1/fr
Application granted granted Critical
Publication of FR2983868B1 publication Critical patent/FR2983868B1/fr
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6881—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4853—Kallikrein (3.4.21.34 or 3.4.21.35)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6445—Kallikreins (3.4.21.34; 3.4.21.35)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21008—Kallikrein (3.4.21.8)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/20—Dermatological disorders

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'une séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques consistant en SEQ ID NO: 1, d'un analogue ou d'un fragment de ladite séquence d'acides aminés, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ladite séquence d'acides aminés, ou un analogue ou un fragment de celle-ci, à titre de biomarqueur d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu.

Description

La présente invention se rapporte au domaine des biomarqueurs et des cibles cosmétiques et/ou thérapeutiques de la peau, et en particulier d'un état de la fonction barrière du cuir chevelu, et plus particulièrement d'un état pelliculaire du cuir chevelu, ainsi qu'à leur mise en oeuvre à titre d'agents actifs.
Au sens de l'invention, on entend désigner par « cuir chevelu » la partie de l'épiderme d'un corps humain couvrant le crâne et susceptible d'être couverte de cheveux. Le cuir chevelu, est un épithélium à renouvellement continuel, dont les cellules sont jointives, et solidaires les unes des autres. Le renouvellement, ou desquamation, est un processus coordonné et finement régulé aboutissant à l'élimination des cellules superficielles, de façon insensible et non visible. Le renouvellement continu du cuir chevelu participe de manière essentielle au maintien de l'intégrité de la fonction barrière de ce dernier. Au sens de l'invention, on entend par « fonction barrière du cuir chevelu », l'ensemble des propriétés du cuir chevelu permettant d'assurer une hydratation physiologique, de réguler la perte insensible en eau, d'assurer une protection et une défense contre différents phénomènes extérieurs agressifs, tels que des microorganismes, une exposition à la chaleur ou au froid, à une atmosphère sèche ou humide, aux UV, aux agents chimiques, etc. Toutefois, une altération de la fonction barrière du cuir chevelu peut conduire à une desquamation anormale ou irrégulière des cellules du stratum corneum du cuir chevelu, voire à la formation d'amas de cellules de grandes tailles, épais, visibles à l'oeil nu, et dénommés « pellicules ». Les états pelliculaires du cuir chevelu peuvent être de type gras ou de type sec. Les états pelliculaires secs du cuir chevelu se manifestent plus fréquemment, et sont amplifiés, lors de troubles de l'hydratation du cuir chevelu, et notamment lors de sécheresse importante du cuir chevelu. Par ailleurs, le cuir chevelu étant riche en glandes sébacées, un état pelliculaire peut se développer plus facilement en présence excessive de sébum et être plus facilement prurigineux. Ainsi, une sécrétion excessive de sébum, ou hyperséborrhée, favorise l'apparition d'un état pelliculaire gras du cuir chevelu, ou pellicules grasses, généralement associé à des désagréments, des sensations d'inconfort, des désordres esthétiques, voire, selon le degré d'intensité du phénomène, à une pathologie cutanée.
Les états pelliculaires peuvent être des états chroniques, fréquents, récidivants, et socialement invalidants du fait de leur caractère inesthétique manifeste. Qui plus est, ils peuvent se traduire par une altération, notamment une fragilité ou un défaut, des fonctions barrières du cuir chevelu ou générer des sensations de démangeaison ou prurit, conduisant à des comportements de grattage amplifiant le phénomène d'apparition de pellicules, et, en retour, l'irritation du cuir chevelu. Une altération de la fonction barrière du cuir chevelu et/ou l'apparition de pellicules peuvent être induites par de multiples facteurs extrinsèques ou intrinsèques.
A titre d'exemple de facteurs extrinsèques favorisant une altération de la fonction barrière du cuir chevelu et l'apparition de pellicules, on peut mentionner le stress, la période hivernale, un excès de sébum, un défaut d'hydratation, ou la colonisation du cuir chevelu ou des follicules pileux par la levure Malassezia sp.. De nombreux facteurs épidermiques intrinsèques, telles que des protéines de structures ou des enzymes, sont connus pour être impliqués, directement ou indirectement, dans le processus de renouvellement du cuir chevelu. Ainsi, par exemples, de nombreuses protéases sont connues ou suggérées comme étant impliquées dans le processus physiologique de desquamation de la peau (Meyer Hoffert, Arch Immunol Ther Exp, 2009, 57:345). Une altération dans la physiologie de ces facteurs épidermiques peut provoquer ou favoriser une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et/ou la formation de pellicules. Toutefois, il demeure encore de nombreuses inconnues quant au mécanisme intime et aux facteurs impliqués dans les altérations des fonctions barrières du cuir chevelu, et la formation de pellicules. Une meilleure connaissance de ces facteurs permettrait d'identifier de nouveaux biomarqueurs du cuir chevelu, et notamment de nouvelles cibles cosmétiques pour le traitement des états altérés de la fonction barrière du cuir chevelu, et notamment des états pelliculaires. Il existe donc un besoin de disposer de nouveaux biomarqueurs permettant de caractériser la fonction barrière du cuir chevelu, et plus particulièrement un état pelliculaire du cuir chevelu.
Il existe encore un besoin de disposer de nouvelles cibles pour le criblage d'agents actifs ou de traitements physiques pour le soin du cuir chevelu, en particulier pour prévenir et/ou traiter un trouble de la fonction barrière du cuir chevelu, et plus particulièrement un état pelliculaire du cuir chevelu. Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux actifs ou de nouveaux traitements pour prévenir et/ou traiter un trouble de la fonction barrière du cuir chevelu, et plus particulièrement un état pelliculaire du cuir chevelu. Il existe encore un besoin de disposer de nouvelles cibles cosmétiques pour le soin du cuir chevelu, en particulier pour la prévention et/ou le traitement d'un trouble de la fonction barrière du cuir chevelu, et plus particulièrement un état pelliculaire du cuir chevelu.
Il demeure également un besoin de disposer de nouveaux traitements cosmétiques pour prévenir, réduire et/ou traiter les états altérés de la fonction barrière du cuir chevelu, et notamment les états pelliculaires, qui soient efficaces et dépourvus d'effets secondaires susceptibles d'affecter une bonne observance.
Il existe encore un besoin de disposer d'un traitement des états altérés de la fonction barrière du cuir chevelu, et notamment des états pelliculaires, n'affectant pas l'écoflore du cuir chevelu, voire renforçant la présence d'une écoflore saine. Il existe également un besoin de disposer d'un traitement des états altérés de la fonction barrière du cuir chevelu, et notamment des états pelliculaires, apte à maintenir, voire à renforcer, l'hydratation du cuir chevelu. Il existe un besoin de disposer d'un traitement des états pelliculaires apte à maintenir, voire à renforcer, les propriétés barrières du cuir chevelu. Il existe un besoin de disposer de traitements des états pelliculaires qui comportent peu ou pas d'effets secondaires, et en particulier qui n'induisent pas d'hyperséborrhées, de dermites séborrhéiques ou d'états prurigineux. Il existe également un besoin de disposer d'un traitement des états altérés de la fonction barrière du cuir chevelu, et notamment des états pelliculaires qui n'induise pas d'états inflammatoires. La présente invention a pour objet de satisfaire à ces besoins.
Ainsi selon un de ces premiers objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques consistant en SEQ ID NO: 1, d'un analogue ou d'un fragment de ladite séquence d'acides aminés, ou (ii) d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ladite séquence d'acides aminés, ou un analogue ou un fragment de celle-ci, à titre de biomarqueur d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier d'un état pelliculaire du cuir chevelu. De manière inattendue, au cours d'une étude de protéomique différentielle par la technologie « iTRAQ », comparant le protéome de cuirs chevelus qualifiés de sain, ou de non-pelliculaire, à celui de cuirs chevelus présentant un état pelliculaire, les inventeurs ont observé à partir de protéines extraites par cornéodisque et issues du cuir chevelu que la Kallikréine 6 (KLK6) se révélait être un biomarqueur sensible et spécifique d'un état pelliculaire du cuir chevelu, et donc d'un état altéré de la fonction barrière du cuir chevelu. Plus particulièrement, comme le montre les exemples, des peptides spécifiques de la KLK6, figurés par les séquences d'acides aminés SEQ ID NO: 8 à 11, ont été identifiés dans les cuirs chevelus présentant un état pelliculaire. Cette caractérisation a permis de déterminer que l'expression de la protéase KLK6 était augmentée de 5 fois dans le cuir chevelu présentant un état pelliculaire au regard d'un cuir chevelu ne présentant pas d'état pelliculaire. JP 2009-153447 décrit l'utilisation de la Kallikréine 6 comme biomarqueur de la peau sensible.
La Kallikréine 6 a été décrite comme participant au processus physiologique de la desquamation de la peau, notamment au travers de la dégradation de la desmogléine 1 (DSG1) (Borgofio et al., J Biol Chem, 2007, 282:3640). Une augmentation de l'expression de différentes KLK, dont KLK6, a été observée dans la peau d'individus atteints de psoriasis ou de dermatite atopique (Komatsu et al., Br J Pharmacol, 2005, 153:274 ; Komatsu et al., Exp Dermatol, 2007, 16:513). Toutefois, c'est la première fois qu'est mise en relation une variation de l'expression de la KLK6 et une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu. Ainsi, à la connaissance des inventeurs, cette enzyme n'a jamais été identifiée comme marqueur d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et encore moins d'un état pelliculaire du cuir chevelu. Cette observation valide la mise en oeuvre de la KLK6, d'analogues, ou de fragments peptidiques issus de celle-ci, ou d'acides nucléiques codant pour cette protéine ou ces peptides comme biomarqueurs d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier d'un état pelliculaire du cuir chevelu, ou pour cribler de nouveaux agents actifs ou traitement physique actif à l'égard d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier actifs à l'égard des états pelliculaires, ainsi que l'utilisation d'agents modulateurs de l'expression, de l'activité ou de la maturation de cette protéine ou de ces peptides, ou des séquences d'acides nucléiques correspondantes, pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu. Au sens de l'invention, on entend par « biomarqueur », une molécule ou une activité d'une molécule, dont la présence ou l'absence, la teneur ou le degré d'activité, ou une variation de ces paramètres est caractéristique d'un processus biologique, physiologique ou pathologique, ou de l'impact ou de l'effet induit par l'administration d'un agent actif ou d'un traitement physique sur un tel processus. Au sens de l'invention on entend par « expression » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, ou d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, sa teneur ou la variation de sa teneur par rapport à une référence.
Au sens de l'invention on entend par « maturation » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, ou d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, les modifications qui suivent leur synthèse dans un environnement cellulaire. Par exemple, dans le cas d'une séquence d'acides aminés, on entend par « maturation », les modifications post-traductionnelles, telle la glycosylation, la farnésylation ou l'acétylation de certains acides aminés, ou les étapes protéolytiques conduisant à l'élimination de séquences dites « signal » ou « sécrétoire » ou à la libération de séquences présentant des propriétés biologiques particulières. Dans le cas d'une séquence d'acides nucléiques, on entend par « maturation », par exemple, l'épissage alternatif d'un pré-ARNm. Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, l'activité biologique de la séquence d'acides aminés, le cas échéant après maturation, telle qu'une activité enzymatique, une activité d'agoniste ou d'antagoniste vis-à-vis d'un récepteur, ou d'activateur ou d'inhibiteur d'une enzyme, ou une activité dite de « structure ». Plus particulièrement, au sens de l'invention, on entend par « activité » à l'égard d'une séquence d'acides aminés de l'invention représentée par SEQ ID NO: 7, son activité protéolytique, notamment à l'égard de ses substrats habituels, tels que la desmogléine 1 (DSG1).
Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, sa traduction. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, comme biomarqueur pour cribler des actifs ou des traitements physiques présumés convenir pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier d'un état pelliculaire du cuir chevelu. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, comme biomarqueur pour déterminer, dans une gamme d'actifs et/ou de procédés pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu, un actif et/ou un procédé présumé convenir à la prévention et/ou au traitement d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier à un état pelliculaire du cuir chevelu d'un individu donné.
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, comme biomarqueur pour sélectionner parmi des individus présentant une altération de la fonction barrière et présumés répondre à un actif et/ou à un procédé pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire, le ou lesdits individu(s) susceptible(s) de présenter une réponse efficace audit actif ou audit procédé. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour caractériser l'efficacité d'un actif ou d'un procédé pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu. De préférence, dans les utilisations précédentes, le(s) actif(s) ou le(s) procédé(s) considéré(s) est/sont un/des actif(s) et procédé(s) cosmétique(s).
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation cosmétique (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou (iii) d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu. Les séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques ou les agents modulateurs mis en oeuvre selon ce mode de réalisation sont avantageusement dotés de propriétés inhibitrices à l'égard de l'activité protéolytique de la KLK6. Il va de soi que les actifs, séquences d'acides aminés, séquences d'acides nucléiques, agents modulateurs, conformes à l'invention sont mis en oeuvre en quantité efficace en tenant compte, par exemple, de leur nature, du régime d'administration, de la voie d'administration, de la taille, du poids, du sexe l'individu considéré, et/ou de l'indication visée. Au sens de la présente invention, on entend par « quantité efficace » d'un composé de l'invention, une quantité suffisante et nécessaire de ce composé pour obtenir un effet recherché, et plus particulièrement un effet cosmétique ou de soin à l'égard d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, notamment un état pelliculaire. L'ajustement de cette quantité efficace au regard, notamment, des différents paramètres indiqués précédemment relève du travail de routine de l'homme de l'art.
Au sens de l'invention, on entend par « prévenir », le fait de réduire le risque de survenue ou de ralentir la survenue d'un phénomène donné, par exemple dans la présente invention, une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, notamment un état pelliculaire.
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation cosmétique (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou (iii) d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression, de la maturation desdites séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques pour préparer un modèle de cuir chevelu reconstruit apte à mimer une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu. Les séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques ou les agents modulateurs mis en oeuvre selon ce mode de réalisation sont avantageusement dotés de propriétés activatrices à l'égard de l'activité protéolytique de KLK6. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne un procédé pour caractériser une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu chez un individu comprenant au moins les étapes consistant à : a- effectuer, dans un échantillon d'un cuir chevelu isolé dudit individu, une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de l'activité ou de la maturation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, et b- comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne un procédé de criblage d'actifs ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu, comprenant au moins les étapes consistant à : a- disposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques dans des conditions propices à l'activité, l'expression ou la maturation desdites séquences, b- mettre en contact ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un actif à tester ou exposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques à un traitement physique à tester, c- effectuer une mesure qualitative ou quantitative ou de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et d- comparer ladite mesure à une mesure de référence.
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne un procédé pour caractériser l'efficacité d'un actif ou d'un procédé pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins les étapes consistant à : a- effectuer avant la mise en oeuvre dudit actif ou procédé, dans un premier échantillon de cuir chevelu isolé prélevé chez ledit individu, au moins une première mesure qualitative ou quantitative de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, b- effectuer, après la mise en oeuvre dudit actif ou procédé cosmétique, dans un second échantillon de cuir chevelu isolé prélevé chez ledit individu, au moins une seconde mesure, qualitative ou quantitative de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et c- comparer les première et deuxième mesures, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins de la mise en oeuvre dudit actif ou procédé.
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne un procédé cosmétique pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu, chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à titre d'actif au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention. De préférence, l'agent modulateur est tel que défini ci-après. Selon un mode préféré de réalisation, un procédé ou une utilisation conforme à l'invention peuvent être mis en oeuvre in vivo, in vitro, ou ex vivo, et de manière plus préférée encore in vitro ou ex vivo. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne un peptide isolé consistant en une séquence d'acides aminés choisie parmi celle SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, un analogue ou un fragment de celles-ci.
Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne une composition comprenant un peptide de l'invention ou une séquence d'acides nucléiques codant pour un tel peptide. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne un modèle de cuir chevelu reconstruit isolé comprenant au moins une cellule dans laquelle l'expression, l'activité ou la maturation d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, un fragment ou un analogue de celles-ci est réprimée ou augmentée. Selon un mode de réalisation préféré un modèle de cuir chevelu reconstruit de l'invention peut être tel que l'expression, l'activité ou la maturation de la séquence d'acides aminés de l'invention ou du fragment ou de l'analogue est augmentée, et le modèle peut être apte à mimer une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu. De préférence, un modèle de cuir chevelu de l'invention est un modèle in vitro ou ex vivo.
La présente invention a pour avantage de proposer un nouveau biomarqueur sensible et spécifique du cuir chevelu, et en particulier d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et plus particulièrement d'un état pelliculaire du cuir chevelu. L'observation de la présence de la kallikréine 6 (KLK6) dans le stratum corneum, et plus particulièrement de peptides issus spécifiquement de cette protéine, rend avantageusement possible une détermination quantitative ou qualitative de l'expression ou de l'activité de cette protéine, ou des peptides correspondant, par simple prélèvement topique. La méthode de prélèvement peut par exemple être une technique de type corneodisque ou stripping consistant à appliquer sur l'épiderme considéré un élément adhésif. En décollant cet élément adhésif, une fraction de la surface du cuir chevelu est prélevée. Après extraction protéique, celle-ci peut être ensuite analysée par des méthodes conventionnelles, telles que le dosage immuno-enzymatique ELISA, ou une analyse Western-Blot, ou plus particulièrement par la méthode de protéomique différentielle par électrophorèse 2D. Egalement, la présente invention a pour avantage de pouvoir mettre à disposition un nouveau biomarqueur convenant au criblage de nouveaux actifs ou de nouveaux traitements physiques pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu. Egalement, selon un autre avantage, la présente invention permet de proposer de nouveaux actifs pour prévenir et/ou traiter un trouble d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et notamment un état pelliculaire du cuir chevelu.
Avantageusement, les nouveaux actifs proposés par la présente invention permettent de renforcer les propriétés barrières du cuir chevelu. La protection et le renforcement des propriétés barrières du cuir chevelu permettent une diminution de ses états inflammatoires, le maintien d'une barrière équilibrée, de son intégrité et la conservation d'une écoflore équilibrée. Le cuir chevelu est alors moins irrité et prurigineux, moins fragile et plus hydraté, et les états pelliculaires sont réduits. Séquences d'acides aminés et d'acides nucléiques Les Kallikréines humaines (KLKs) sont la famille la plus importante de protéases à sérine sécrétées de type trypsin-like et chymotrypsin-like. La Kallikréine 6 (KLK6) (protéase M / zyme / neurosin, hK6, EC 3.4.21.B10) fait partie de cette famille. Son processus d'autoactivation, certaines de ces spécificités de substrat, et certains inhibiteurs sont connus (Magklara, Mellati et al. 2003; Bayes, Tsetsenis et al. 2004; Angelo, Lima et al. 2006). Elle a été décrite comme étant un biomarqueur sérique du cancer de l'ovaire et a été impliquée dans certaines pathologies du system nerveux central (CNS) (Diamandis, Yousef et al. 2000; Diamandis, Yousef et al. 2000). Comme indiqué précédemment, elle a été montrée comme étant exprimée dans le stratum corneum (SC), l'épiderme et certaines annexes épidermiques telles que le cheveu et la glande sudoripare (Komatsu et al., 2005). Dans la peau, elle a été associée (comme pour de nombreuses autres KLKs) avec le phénomène de desquamation, elle est capable de dégrader la Desmogléine 1 et est inhibée par certains peptides de la protéine LEKTI-SPINK5 (Borgofio et al., 2007). Au moins un autre inhibiteur de cette famille de protéine SPINK6 présent dans la peau est capable de l'inhiber (Kantyka et al., 2011). Il a été démontré qu'elle était surexprimée dans le SC d'individus présentant une dermatite atopique (Komatsu et al., 2007). De façon générale, les protéases de type KLKs ont été impliquées, en cas de surexpression, dans le développement de la maladie atopique notamment par leur capacité à induire des hyperkératoses (perturbation de la desquamation, de la barrière lipidique et de la cornification), des phénomènes inflammatoires, et des prurits (Meyer-Hoffert, 2009).
A la connaissance des inventeurs, aucune étude n'a fait état jusqu'à présent quant à l'expression ou la surexpression de KLK6 à la surface d'un scalp pelliculaire. La Kallikréine 6 (KLK6) est une sérine protéase comportant, avant maturation, 244 acides aminés (SEQ ID NO: 4). La maturation de cette protéase conduit à l'élimination d'une séquence signal (SEQ ID NO: 5) conduisant à une séquence dite « propeptide » (SEQ ID NO: 6), dont la maturation par élimination de la séquence N-terminale EEQNK donne la forme active de la protéase KLK6 (SEQ ID NO: 7). KLK6 existe sous 3 isoformes. L'isoforme 1, prédominante, est figurée par les séquences peptidiques précurseur SEQ ID NO: 4 et mature SEQ ID NO: 7. Les isoformes 2 et 3, moins exprimées, et vraisemblablement inactives, sont issues d'un épissage alternatif de l'ARNm codant pour l'isoforme 1. Un variant naturel de l'isoforme 1 de KLK6 a été identifié dans lequel l'Arginine en position 78 est remplacée par un Tryptophane. Dans le présent texte, les numérotations d'acides aminés données en relation avec KLK6 sont données sur la base de la séquence peptidique précurseur de l'isoforme 1 de KLK6, à savoir SEQ ID NO: 4. Pour des raisons de concision et de simplification, et sauf indication contraire, le terme « KLK6 » vise à désigner dans le présent texte les séquences d'acides aminés représentées par SEQ ID NO: 4 à SEQ ID NO: 11, ayant ou non subi une maturation posttraductionnelle.
Selon un mode de réalisation préféré, on entend désigner par KLK6 plus particulièrement les séquences d'acides aminés représentées par SEQ ID NO: 4, 6 et 7, et SEQ ID NO: 8 à 11. Selon un autre mode de réalisation préféré, les séquences d'acides aminés plus particulièrement considérées dans la présente invention sont les séquences représentées par SEQ ID NO: 4 et 7 à 11, de préférence représentées par SEQ ID NO: 7 à 11, plus préférentiellement encore représentées par SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, ou des fragments ou des analogues de celles-ci. Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être codée par une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO: 1, ou un analogue ou un fragment de cette séquence. Par « analogue » d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention, on entend désigner toute séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques ayant une identité de séquence d'au moins 85 %, de préférence d'au moins 90 %, et plus préférentiellement d'au moins 95 % avec ladite séquence de référence, et, selon le cas, ayant une activité biologique de même nature ou codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature. A titre d'analogue convenant à l'invention, on peut citer les séquences homologues identifiées dans la base Homologene (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/homologene).
Par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques », on entend en particulier désigner une séquence d'acides nucléiques résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour une séquence d'acides aminés conforme à l'invention, notamment tel que défini précédemment.
Par « activité biologique de même nature » à l'égard d'une séquence d'acides aminés selon l'invention, on entend notamment les propriétés protéolytiques habituellement attribuées à KLK6, telles que, par exemple, sa capacité à hydrolyser la desmogléine 1 (DSG1), une protéine précurseur amyloïde, une protéine basique de myéline, la gélatine, la caséine et des protéines de la matrice extracellulaire, telles que la fibronectine, la laminine, la vitronectine et le collagène. A titre d'autres exemples de substrats de KLK6 convenant à l'invention, on peut citer ceux mentionnés dans la base de données MEROPS (http://merops. sanger. ac.uk/index. shtml). L'activité biologique à considérer sera naturellement à adapter au regard de la partie de la séquence d'acides aminés de KLK6 retenues. De tels ajustements relèvent des connaissances générales de l'homme de l'art. L'identité de séquence peut être déterminée par comparaison visuelle ou au moyen de tout outil informatique généralement utilisé dans le domaine, tel que les programmes BLAST disponibles sur www.ncbi.nlm.nih.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut.
Un analogue d'une séquence d'acides aminés conforme à l'invention peut être un agent peptidomimétique. Un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention, ou variant, peut résulter de modifications issues d'une ou plusieurs mutation(s) et/ou de variation(s) dans les séquences des peptides selon l'invention provenant soit de la délétion ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés, soit encore d'un épissage alternatif. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. Avantageusement, un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut comprendre des substitutions conservatrices par rapport à cette séquence d'acides aminés de référence.
A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, ou peut mentionner, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. 1982). Une séquence d'acides aminés ou un analogue de celle-ci visé par la présente invention peut être une séquence d'acides aminés ayant subi une ou plusieurs maturation(s) post-traductionnelle(s). Par « maturation(s) post-traductionnelle(s) », on entend englober l'ensemble des modifications qu'une séquence d'acides aminés est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation, un ou des réarrangements structural(aux) de type formation de ponts disulfures et/ou de type clivage à l'intérieur de la séquence peptidique. Un analogue d'une séquence d'acides aminés présente, par ailleurs, sensiblement la même activité biologique que cette séquence d'acides aminés. Il est par ailleurs connu qu'une séquence primaire d'acides aminés, peut comprendre des sites spécifiquement reconnus par des enzymes de type protéase, telle que la trypsine, qui, une fois la reconnaissance de ces sites effectuée vont induire le clivage de la séquence par protéolyse. Cette protéolyse résulte en la génération de divers peptides, ou fragments de séquences d'acides aminés de l'invention. En conséquence, l'invention s'étend également aux fragments de KLK6, issus le cas échéant de sa protéolyse. Au sens de l'invention, on entend par « fragment d'une séquence d'acides aminés » toute portion de la séquence d'acides aminés conforme à l'invention comprenant au moins 3, voire au moins 4, voire au moins 5, voire au moins 6, voire au moins 7, et mieux encore au moins 8 acides aminés consécutifs de ladite séquence de référence, ou comprenant de 3 à 100 acides aminés consécutifs de ladite séquence de référence, de préférence de 4 à 90, de préférence 6 à 80, et plus préférentiellement de 9 à 70 acides aminés consécutifs de ladite séquence, et a une activité biologique de même nature. Au sens de la présente invention, on entend par « fragment d'une séquence d'acides nucléiques », une séquence d'acides nucléiques comprenant au moins 9, voire au moins 12, voire au moins 15, voire au moins 18, voire au moins 21, et mieux encore au moins 24 paires de bases consécutives de ladite séquence de référence, ou comprenant de 9 à 300 paires de bases consécutives de ladite séquence de référence, de préférence de 12 à 270, de préférence 18 à 240, et plus préférentiellement de 27 à 210 paires de bases consécutives de ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés consistant en une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 4 à 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci, et de préférence parmi SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, et SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci, de préférence encore parmi SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 et SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci, plus préférentiellement encore parmi 10 SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 et SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci, et plus préférentiellement encore parmi SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 et SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci. Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être naturelle ou synthétique, le cas échéant susceptible d'être obtenue après 15 lyse enzymatique ou chimique de la KLK6 ou par synthèse chimique ou biologique ou par extraction à partir d'un tissu biologique, comme par exemple la peau ou le cuir chevelu, exprimant naturellement cette séquence d'acides aminés ou après transfection de celui-ci, ainsi que les différentes formes post-traductionnelles de celui-ci, ou encore toute séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement une 20 séquence d'acides aminés précitée, par exemple les variants ou analogues. L'homme de l'art peut obtenir une séquence d'acides aminés conforme à l'invention au moyen de procédés à base d'ADN recombinant, comme par exemple, ceux décrits dans le manuel « Molecular Cloning - A Laboratory Manual » (2ème édition), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, 25 NY, (Sambrook). Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut également être une séquence d'acides aminés telle que définie précédemment, fusionnée avec une autre séquence d'acides aminés, un agent de ciblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bioconversion, un agent de marquage luminescent, radioactif ou 30 colorimétrique, ou encore un agent de marquage pour anticorps. De manière non limitative, on peut citer comme exemple de composés susceptibles d'être couplés à une séquence d'acides aminés conforme à l'invention des protéines fluorescentes comme la « Green Fluorescent Protein », des composés chimiques fluorescents, tels que la rhodamine, la fluorescéine, ou le Texas Red®, des composés phosphorescents, des éléments radioactifs, tels que 3H, 14C, 35s, 1211 ou 1251, ou des agents de marquage colorimétrique comme les substrats chromogènes sensibles à l'action de la galactosidase, de la peroxydase, de la chloramphénicol acétyltransférase, de la luciférase ou de la phosphatase alcaline, ou un agent de marquage pour anticorps, tel que His-Tag.
Selon la nature des composés susceptibles d'être couplés avec une séquence d'acides aminés de l'invention, le couplage peut être opéré par des procédés chimiques, notamment au moyen de fonctions chimiques réactives ou par des procédés de biologie moléculaire connus de l'homme de l'art. Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne également des séquences d'acides nucléiques codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention, et leur mise en oeuvre dans les différentes utilisations et procédés de l'invention. Ainsi, la présente invention se rapporte également à une séquence d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides ribonucléiques, représentée par SEQ ID NO: 1, un analogue ou un fragment de celle-ci.
Egalement, la présente invention se rapporte à une séquence d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides ribonucléiques, consistant en une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, un analogue ou un fragment de celles-ci. Avantageusement, une séquence d'acides aminés de l'invention peut être codée par une séquence d'acides nucléiques choisie parmi une séquence consistant en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, un analogue ou un fragment de celles-ci. De manière préférée encore, une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut consister en une séquence codant pour une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 et SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci. Une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être de toutes origines possibles, à savoir soit animale, en particulier de mammifères et encore plus particulièrement humaine, soit végétale, soit de micro-organismes, tels que par exemple virus, phages, ou bactéries entre autres, ou encore de champignons, sans préjuger du fait qu'elles soient présentes de manière naturelle ou non dans ledit organisme d'origine. Selon un mode de réalisation, l'invention se rapporte également aux séquences d'acides nucléiques isolées et purifiées codant pour une séquence d'acides aminés considérés selon l'invention, ainsi qu'à leurs analogues et fragments.
Une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut comprendre une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à une séquence codant pour un polypeptide conforme à l'invention. L'invention a également pour objet des séquences d'acides nucléiques, notamment d'acides ribonucléiques ou désoxyribonucléiques, comprenant une séquence sens ou anti-sens, notamment « small interferent RNA » (siRNA), correspondant au moins à une séquence codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention ou à une séquence d'acides nucléiques de l'invention, un analogue ou un fragment de celle-ci. L'invention a également pour objet un microRNA favorisant l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention. L'invention concerne également une mise en oeuvre selon l'invention de l'antagomir, inhibant les effets de ce miRNA. L'invention concerne également des séquences RNA ou DNA aptamères capables de moduler l'activité de l'enzyme. L'invention concerne également des anticorps polyclonaux ou monoclonaux obtenus par des technologies classiques, ou de préférence des anticorps recombinants humains sélectionnés contre la KLK6 par des technologies de phage display, telles que celles proposées par la société AbD Serotec, ou des « Nanobodies », tels que proposés par la société Ablynx. Fonction barrière du cuir chevelu et états pelliculaires Un cuir chevelu plus particulièrement considéré dans la présente invention est un cuir chevelu présentant une altération de la fonction barrière, et en particulier un état pelliculaire. Comme signifié précédemment, un cuir chevelu présentant une sécheresse excessive ou une sécrétion excessive de sébum, peut présenter une fonction barrière altérée.
Une altération de la fonction barrière du cuir chevelu peut se manifester par un état pelliculaire, qui, selon le cas, peut se caractériser par la présence de pellicules sèches ou grasses. Les altérations de la fonction barrière du cuir chevelu considérée par l'invention, et notamment les états pelliculaires, sont distincts de ceux susceptibles de découler ou d'être associés ou d'être la conséquence d'un psoriasis ou d'une dermatite atopique ou d'un état inflammatoire affectant le cuir chevelu. Ainsi la présente invention concerne la mise en oeuvre de séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention, ou d'agents modulateurs de celles-ci, au regard de cuir chevelu d'individus ne présentant pas une affection choisie parmi une dermatite atopique, un psoriasis, ou un état inflammatoire. De manière préférée, la présente invention peut être mise en oeuvre en vue de maintenir ou restaurer l'homéostasie du cuir chevelu, et en particulier ses fonctions barrières.
Avantageusement, l'invention peut être mise en oeuvre pour prévenir et/ou traiter un trouble de la fonction barrière du cuir chevelu. Selon la sévérité de la dérégulation de l'altération de la fonction barrière du cuir chevelu, les troubles du cuir chevelu subséquents peuvent relever soit du domaine cosmétique, soit du domaine thérapeutique. Il relève des connaissances générales, et de la pratique habituelle, de l'homme de l'art de distinguer les altérations de la fonction barrière du cuir chevelu en fonction du domaine duquel il relève. Les altérations de la fonction barrière du cuir chevelu considérées par la présente invention relèvent de préférence du domaine cosmétique, et n'impliquent pas d'aspects thérapeutiques ou pathologiques.
Les altérations de la fonction barrière du cuir chevelu considérées par la présente invention sont en particulier choisies parmi un état du cuir chevelu déshydraté, ou irrité, ou présentant un état pelliculaire, et de préférence sont un état pelliculaire du cuir chevelu. Les états pelliculaires secs traduisent une xérose du cuir chevelu, associée à un renouvellement excessivement rapide de son stratum corneum. Les pellicules sèches sont généralement de petites tailles, blanches ou grises, et se répartissent sur le cuir chevelu et les vêtements générant un effet visuel inesthétique. Les démangeaisons associées à la sécheresse du cuir chevelu peuvent conduire à un érythème, un prurit, voire un état inflammatoire. Les états pelliculaires gras sont une des formes de dermites séborrhéiques. Les sujets qui en sont atteints ont un cuir chevelu érythémateux couvert par des squames larges, grasses et jaunes qui s'accumulent pour former des paquets. Ils ont un scalp prurigineux, et ont souvent des sensations de brulure sur les zones atteintes. Les états pelliculaires gras du cuir chevelu se manifestent, et sont amplifiés, lors d'une sécrétion excessive de sébum au niveau de l'épiderme du cuir chevelu. Les états pelliculaires gras dans leurs formes sévères peuvent être des formes de dermites séborrhéiques.
Ces phénomènes peuvent être amplifiés par la présence de microorganismes pathogènes, notamment Malassezia sp.. Ces microorganismes dotés de la propriété de libérer des acides gras à partir du sébum peuvent altérer la fonction barrière de l'épiderme et générer des états inflammatoires.
Lors des états pelliculaires du cuir chevelu, la barrière cutanée est déséquilibrée, son intégrité et son hydratation sont altérées et son écoflore perturbée. Le cuir chevelu est irrité et prurigineux, fragile, moins hydraté et sensible aux infections. La présente invention peut concerner plus particulièrement : - un état pelliculaire du cuir chevelu, - un désordre, notamment esthétique, du cuir chevelu dû à une altération de la fonction barrière du cuir chevelu associée à une sécheresse excessive, voire une xérose, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu, - un désordre, notamment esthétique, du cuir chevelu dû à une altération de la fonction barrière du cuir chevelu associée à un excès d'excrétion et/ou de sécrétion de sébum, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu, - le confort du cuir chevelu affecté d'une altération de la fonction barrière, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu, - l'hygiène et/ou le soin du cuir chevelu affecté d'une altération de la fonction barrière, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu, - une sensation de bien-être du cuir chevelu affecté d'une altération de la fonction barrière, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu, - l'intégrité des fonctions barrières du cuir chevelu affecté d'une desquamation anormale, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu, - les propriétés biomécaniques du cuir chevelu affecté d'une altération de la fonction barrière, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu, - une écoflore équilibrée du cuir chevelu affecté d'une altération de la fonction barrière, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu, et/ou - un prurit et/ou une dermite séborrhéique associé(e) aux altérations de la fonction barrière du cuir chevelu, notamment un état pelliculaire du cuir chevelu. En particulier, la présente invention vise notamment à prévenir et/ou traiter les désordres ou défauts indiqués ci-dessus, et/ou à favoriser, restaurer, améliorer ou renforcer les différentes propriétés ou états bénéfiques indiqués ci-dessus.
Biomarqueur Un biomarqueur de l'invention permet avantageusement, de caractériser, notamment in vitro ou ex vivo, une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et de préférence un état pelliculaire du cuir chevelu.
La caractérisation d'une altération de la fonction barrière, et en particulier d'un état pelliculaire, du cuir chevelu chez un individu peut comprendre au moins les étapes consistant à : a- effectuer, dans un échantillon d'un cuir chevelu isolé dudit individu, une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de l'activité ou de la maturation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, et b- comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence. Selon un mode de réalisation de l'invention, une augmentation ou une diminution de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'un biomarqueur de l'invention peut être indicative d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et de préférence d'un état pelliculaire du cuir chevelu. Selon un mode de réalisation préféré, une augmentation de l'expression, de l'activité ou de la maturation d'un biomarqueur de l'invention peut être indicative d'un état pelliculaire du cuir chevelu. Une diminution ou une augmentation de l'expression, de l'activité ou de la maturation du biomarqueur peut être déterminée par comparaison à une mesure de référence obtenue selon toute méthode connue de l'homme de l'art. Une « mesure de référence » au regard d'un paramètre donné, est une mesure qualitative ou quantitative de ce paramètre effectuée dans des conditions dites « contrôles » ou « normales », par exemple déterminée dans un échantillon de référence, ou déterminée dans un échantillon en l'absence d'un traitement présumé avoir un effet sur le paramètre. Un échantillon convenant à l'invention peut être un échantillon de cuir chevelu isolé prélevé chez un individu ou à partir d'un modèle de cuir chevelu reconstruit in vitro.
Par exemple, une mesure de référence pour une séquence d'acides aminés ou une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, l'activité ou la maturation desdites séquences déterminée dans un échantillon de cuir chevelu physiologiquement sain, et présentant une fonction barrière normale, ou déterminée dans un échantillon de cuir chevelu, notamment présentant altération de la fonction barrière, avant un traitement cosmétique. De préférence, une mesure de référence est une mesure statistique, c'est à dire ayant été répétée sur différents échantillons de sorte à obtenir une moyenne. La mesure de référence peut être effectuée parallèlement ou séquentiellement à la mesure test.
Elle peut également être une mesure « historique », c' est-à-dire effectuée antérieurement à la mesure test, et stockée, par exemple dans une base de données, en vue d'une utilisation ultérieure. Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant au paramètre mesuré, par exemple la diminution ou l'augmentation l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention. Une telle information peut être ultérieurement mise en oeuvre pour déterminer la présence d'une fonction barrière normale, ou a contrario, altérée d'un cuir chevelu. Lorsqu'un biomarqueur de l'invention mis en oeuvre est une séquence d'acides aminés, une altération de la fonction barrière d'un cuir chevelu peut se traduire par une déviation de l'expression de cette séquence d'un facteur d'au moins 1,2, de préférence d'au moins 1,5, et de manière préférée d'au moins deux fois la valeur de référence normale, de manière préférée encore d'au moins 4 fois, voire d'au moins 5 fois la valeur de référence normale. L'invention peut également être effectuée sur un échantillon de cuir chevelu, prélevé à partir d'un modèle de cuir chevelu isolé reconstruit afin d'en qualifier l'état.
Un biomarqueur de l'invention peut être utilisé pour déterminer, dans une gamme d'actifs et/ou de procédés, notamment cosmétiques, pour prévenir et/ou traiter un état pelliculaire du cuir chevelu, un actif et/ou un procédé présumé convenir pour prévenir et/ou traiter un état pelliculaire du cuir chevelu d'un individu donné. L'ensemble des actifs ou des procédés dans lequel peut être opérée la détermination peut être l'ensemble des actifs ou des procédés cosmétiques antipelliculaires classiquement utilisé pour prévenir et/ou traiter un état pelliculaire du cuir chevelu. Ceux-ci sont connus de l'homme de l'art et ne nécessite pas de développement particulier ici. La gamme d'actifs ou de procédés cosmétiques antipelliculaires considérée peut comprendre une pluralité d'actifs ou de procédés, à savoir au moins deux, de préférence au moins 3, et de préférence encore au moins cinq actifs ou procédés, pour lesquels, au regard de chacun d'entre eux, a été attribuée une recommandation d'utilisation en fonction d'une valeur ou d'une gamme de valeurs quantitative(s) ou qualitative(s) susceptible(s) d'être obtenu(e) lors de la détermination d'un biomarqueur de l'invention.
Ainsi, un biomarqueur de l'invention peut avantageusement être utilisé pour mettre en place un service de conseil personnalisé auprès d'un individu présentant une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier présentant un état pelliculaire du cuir chevelu. L'expression, l'activité ou la maturation d'un biomarqueur de l'invention est déterminée dans un échantillon de cuir chevelu isolé prélevé chez un individu, et selon la valeur quantitative ou qualitative obtenue lors de cette détermination, le cas échéant comparée à une valeur de référence, l'individu se verra proposer l'actif ou le procédé cosmétique antipelliculaire ayant la recommandation d'utilisation correspondante. Selon le degré de déviation du biomarqueur par rapport à une référence normale, le conseiller pourra opérer un choix vers l'actif ou le procédé le plus adapté de sorte à obtenir la meilleure correction du biomarqueur par rapport à la normale, tout en réduisant le risque de survenue d'effets secondaires ou indésirables qui pourraient s'avérer être délétères à la bonne compliance du traitement.
Selon un autre aspect, un biomarqueur de l'invention peut également être mis en oeuvre pour sélectionner parmi des individus présentant un état pelliculaire du cuir chevelu et présumés répondre à un actif et/ou à un procédé cosmétique antipelliculaire pour prévenir et/ou traiter un état pelliculaire, le ou lesdits individu(s) susceptible(s) de présenter une réponse efficace audit actif ou audit procédé.
Un biomarqueur de l'invention peut être utilisé dans un processus de sélection et de constitution de groupe d'individus pour la réalisation d'essais cliniques dédiés à l'évaluation de l'efficacité d'un composé ou d'un procédé présumé actif à l'égard d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et de préférence d'un état pelliculaire du cuir chevelu.
Avantageusement, pour obtenir des résultats significatifs à l'issue d'un essai clinique, un biomarqueur de l'invention peut être mis en oeuvre afin de définir des groupes d'individus homogènes présentant le même degré de déviation du biomarqueur par rapport à une valeur de référence.
Un biomarqueur de l'invention peut également être mis en oeuvre pour caractériser l'efficacité d'un procédé cosmétique, non thérapeutique, en particulier in vitro ou ex vivo, pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et plus particulièrement un état pelliculaire du cuir chevelu.
Avant la mise en oeuvre du procédé dont l'efficacité est à caractériser on effectue une première étape a), à savoir, réaliser, dans un premier échantillon de cuir chevelu isolé prélevé chez un individu à traiter, au moins une première mesure qualitative ou quantitative de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention. Puis, après mise en oeuvre du procédé dont l'efficacité est à caractériser on effectue une seconde étape b), à savoir, réaliser, dans un second échantillon de cuir chevelu isolé prélevé chez l'individu ayant reçu le traitement dont l'efficacité est à caractériser, au moins une seconde mesure, qualitative ou quantitative de l'activité, de l'expression ou de la maturation des séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques. Les première et deuxième mesures sont ensuite comparées, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins de la mise en oeuvre du procédé dont l'efficacité est à caractériser. Il va de soi que les mesures effectuées aux étapes a) et b) doivent être comparables l'une à l'autre, et donc être relatives au même paramètre. De manière préférée, l'invention permet de mettre en évidence un effet d'un procédé, notamment cosmétique, susceptible de normaliser, prévenir, réduire, ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu.
Une augmentation ou une diminution de l'expression, de l'activité ou de la maturation du biomarqueur peut être indicative d'un procédé efficace, notamment pour exercer un effet bénéfique sur une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier à l'égard d'un état pelliculaire du cuir chevelu.
Une mesure qualitative ou quantitative d'une expression, de la maturation ou d'une activité d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre d'exemple de méthodes convenant à l'invention, il peut être fait mention de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR), quantitative (Q-PCR) ou non, en présence ou non de transcriptase inverse (RT-PCR ou Q-RT-PCR), du Northern-blot, de la méthode « ribonuclease protection assay », des méthodes avec des puces à ADN, des méthodes avec des puces transcriptomiques, des méthodes avec des puces à oligonucléotides, des méthodes d'hybridation in situ.
A titre d'exemple d'agents convenant à la détection d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, et en particulier d'une séquence d'ARNm, il peut être fait mention de sondes d'acides nucléiques marquées pouvant s'hybrider à une séquence d'acides nucléiques de l'invention.
Une telle sonde d'acide nucléique peut être aisément obtenue par toute méthode connue de l'homme de l'art. Ainsi, les séquences d'acides nucléiques conformes à l'invention peuvent être utilisées pour réaliser des amorces oligonucléotidiques sens et/ou anti-sens, qui s'hybrident dans des conditions de forte stringence à au moins une des séquences SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, ou SEQ ID NO: 3, un analogue ou un fragment celles-ci. L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut également être déterminée, de manière indirecte, par la détermination de l'expression de la séquence d'acides aminées codée par ladite séquence, au moyen de toute technique connue dans le domaine, telle que le Western-Blot, l'ELISA, la méthode de BRADFORD ou de LOWRY, ou comme indiqué ci- après l'électrophorèse 2D. Une mesure qualitative ou quantitative, d'une expression, de la maturation, ou d'une activité d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut être effectuée au moyen de toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre de méthodes de détection de l'expression, de la maturation, ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés, il peut être fait mention du Western-blot, du Slot-blot, du Dot-blot, des méthodes ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de type singleplex ou multiplex, des méthodes de protéomique ou de glycomique, protéomique différentiel par approche 2D-électrophorèse, de coloration de polypeptides dans un gel de polyacrylamide par un colorant à base d'Argent, par le bleu de Coomassie ou par le SYPRO, de l'immunofluorescence, de l'absorption UV, de méthodes immunohistochimiques en microscopie classique, électronique ou confocale, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transfert d'énergie par résonance de fluorescence), des méthodes de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en résolution de temps), des méthodes de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagerie par microscopie en temps de fluorescence), des méthodes de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/imagerie par microscopie en spectre de fluorescence), des méthodes de FRAP (fluorescence recovery after photobleaching / recouvrement de fluorescence après photoblanchiment), des méthodes par gène rapporteur, des méthodes d'AFM (atomic force microscopy/microscopie par force atomique), des méthodes de résonance plasmonique de surface, des méthodes de microcalorimétrie, des méthodes de cytométrie en flux, des méthodes de biosenseurs, des méthodes de radioimmuno-essais (RIA), des méthodes de focalisation isoélectrique, et des tests enzymatiques, des méthodes mettant en oeuvre des puces à peptides, des puces à sucre, des puces d'anticorps, des méthodes de spectrométrie de masse, des méthodes de spectrométrie de type SELDI-TOF (Ciphergen), ou des méthodes quantification par spectrométrie de masse de type MRM (Multiple Reaction Monitoring). De façon plus générale, des méthodes de dosage immunoenzymatiques à partir de solutions de protéines, plus quantitatives et sensibles peuvent en particulier être utilisées. Ces méthodes de type ELISA associent des couples d'anticorps de capture et de détection spécifique de l'antigène ciblé. Des anticorps commerciaux ou des anticorps polyclonaux, monoclonaux ou recombinants développés spécifiquement peuvent être utilisés. Des techniques ELISA multiplexes de grande capacité peuvent également être mises en oeuvre. On peut ainsi citer l'approche multiplexe de type anticorps sur billes Luminex (par exemple Bioplex de Bio-Rad), l'approche singleplex ou multiplex par chemiluminescence de la société Mesoscale Discovery (MSD), ou de type anticorps sur surface plane (« antibodies-arrays ») (par exemple approche proposée par la société MesoScale Discovery). En particulier, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée. Un tel anticorps peut être marqué au moyen d'une substance détectable directement ou détectable par réaction avec un autre réactif. Par « anticorps », on entend désigner de manière générale des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, ainsi que des fragments d'immunoglobuline susceptibles de lier un antigène et qui peuvent être produits par toute technique de génie génétique connue de l'homme de l'art ou par coupure enzymatique ou chimique d'anticorps intact.
Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'outil d'évaluation d'un état d'un épiderme peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans « Antibodies: A Laboratory Manual », Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990). Selon un mode de réalisation préféré, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'une méthode protéomique différentielle par approche électrophorèse 2D ou par une approche de marquage isobarique iTRAQ, par une approche label free Spectral Counting ou de type SILAC si il s'agit de cultures cellulaires.
De telles méthodes sont connues de l'homme de l'art et peuvent avantageusement être mises en oeuvre comme décrit dans les exemples ci-après. De manière particulière, par « activité » à l'égard d'une séquence d'acides aminés de l'invention on entend une activité protéolytique comme indiqué précédemment, ou une activité de réduction, de prévention ou de traitement d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, par exemple tel que défini précédemment, et notamment un état pelliculaire du cuir chevelu. Une telle activité peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art, comme par exemple, par évaluation d'une activité protéolytique sur un substrat habituel de la KLK6 tels que la desmogléine 1 (DSG1), une protéine précurseur amyloïde, une protéine basique de myéline, la gélatine, la caséine et des protéines de la matrice extracellulaire, telles que la fibronectine, la laminine, la vitronectine ou le collagène. De manière préférée, la détermination d'un état altéré de la fonction barrière du cuir chevelu ou la caractérisation de l'efficacité d'un traitement cosmétique d'un état altéré de la fonction barrière du cuir chevelu peuvent être effectuées par mesure de la variation de l'expression d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 4 à SEQ ID NO: 11, un analogue ou un fragment de celle-ci. La mise en oeuvre d'un biomarqueur de l'invention est particulièrement avantageuse dans la mesure où il ne nécessite pas de recourir à une technique invasive. Un échantillon de cuir chevelu peut ainsi être obtenu par des techniques dites de « stripping » ou aux moyens de cornéodisques et directement analysé par une technique d'analyse conventionnelle connue de l'homme de l'art. Ces strippings sont des surfaces collantes appliquées à la surface de l'épiderme comme le Blenderm® de 3M, le D'squam (adhésif commercial de CuDERM), la colle cyanoacrylate, la méthode du « stripping » vernis ou les cornéodisques. Grâce à ces « strippings », les cornéocytes adhérents et le contenu de leurs espaces intercellulaires peuvent être prélevés et soumis par la suite à une extraction permettant d'avoir accès au contenu protéique.
Le prélèvement d'un échantillon convenant à un procédé de l'invention peut aussi être effectué de façon plus directe par « lavages » de la surface cutanée, au moyen par exemple d'accessoires de type turbine à ailette, de type cellule à spirale telle que décrit dans le brevet FR 2 667 778 associée à un circuit fluidique, ou simplement par ajout/prélèvement d'une goutte de tampon à la surface de la peau.
A titre indicatif, d'autres méthodes de prélèvement adaptées à la mise en oeuvre de l'invention peuvent être mentionnées, telles que des méthodes par grattage de la partie supérieure du stratum corneum au moyen d'un système bilames. Cette technique permet de recueillir des squames qui peuvent ensuite être directement analysés par différentes techniques pour déterminer les taux en minéraux, aminoacides ou lipides. Avantageusement, un biomarqueur de l'invention peut être mis en oeuvre à des fins de sélection préclinique, plus efficace et plus rigoureuse, d'individus, en vue d'évaluer l'efficacité de procédé ou d'actif, notamment cosmétique, pour le soin du cuir chevelu. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut avantageusement être mis en oeuvre comme indiqué précédemment pour évaluer l'efficacité d'un actif ou d'un procédé, in vitro, ex vivo ou in vivo. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut être mis en oeuvre pour établir un conseil personnalisé d'un traitement cosmétique pour un individu en fonction d'un profil d'expression d'une pluralité de différents biomarqueurs, incluant un biomarqueur de l'invention. Criblage Un biomarqueur de l'invention peut être mis en oeuvre pour cribler, notamment in vitro ou ex vivo, des actifs ou des traitements physiques présumés convenir pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et de préférence un état pelliculaire du cuir chevelu. Le criblage peut de préférence concerner des actifs ou des traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation d'une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention pour prévenir et/ou traiter un état pelliculaire du cuir chevelu. Il peut comprendre au moins des étapes consistant à : a- disposer une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention dans des conditions propices à l'activité, l'expression ou la maturation desdites séquences, b- mettre en contact une des séquences avec au moins un actif à tester ou exposer une des séquences à un traitement physique à tester, c- effectuer une mesure qualitative ou quantitative ou de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une des séquences, et d- comparer la mesure à une mesure de référence.
Les actifs ou les traitements physiques criblés peuvent notamment être utilisés pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et de préférence pour prévenir et/ou traiter un état pelliculaire du cuir chevelu. Un criblage selon l'invention peut comprendre la comparaison d'une mesure de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acide aminés ou d'acides nucléiques conforme à l'invention à une mesure de référence. Une mesure de référence peut être telle que définie précédemment. En particulier une mesure de référence peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon en l'absence d'actif ou de traitement physique testé. Ainsi, une mesure de référence peut être obtenue en réitérant les étapes d'un procédé de l'invention, et notamment les étapes a), b) et c) telles que définies précédemment, en l'absence d'actifs, ou de traitements physiques à tester. Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant à l'effet de l'actif ou du traitement physique testé. La détermination quantitative ou qualitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être effectuée par toute méthode connue de l'homme de l'art, et notamment 20 comme décrit précédemment. Selon un mode de réalisation, le criblage d'un actif ou d'un traitement physique susceptible de moduler l'activité d'une séquence d'acides aminées de l'invention peut se faire par mesure de l'activité ou de l'expression d'une molécule cible appartenant aux voies de 25 signalisation ou de métabolisme dans lesquelles peut être impliqué ladite d'une séquence d'acides aminées, tel que par exemple un système de gène reporteur. Selon un mode de réalisation, un procédé de l'invention peut être mis en oeuvre dans un système acellulaire, i.e. dans un système ne comprenant pas de cellules mais reproduisant des fonctions cellulaires, ou dans un échantillon cellulaire isolé. 30 Un criblage conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire isolé, un échantillon acellulaire, sur une séquence d'acides aminés isolée ou sur une séquence d'acides nucléiques isolée de l'invention. Ces échantillons ou séquences peuvent être obtenus par biopsie d'un cuir chevelu, à partir de cellules en culture, notamment à partir d'un modèle de cuir chevelu, ou d'un prélèvement de surface d'un cuir chevelu non-invasif, notamment par adhésif (« tape-stripping ») de stratum corneum ou par simple lavage, comme décrit précédemment, voire, pour ce qui est des séquences, par synthèse. La mise en oeuvre de ces échantillons ou séquences pour la réalisation d'un criblage conforme à l'invention relève des connaissances générales de l'homme de l'art dans le domaine. Avantageusement, à titre d'échantillon cellulaire convenant à l'invention, on peut mentionner un échantillon de kératinocytes ou tout autre type cellulaire du cuir chevelu exprimant une séquence d'acides aminés de l'invention. De manière préférée, le criblage d'un actif ou d'un traitement physique peut être effectuée par mesure de la variation de l'expression ou de l'activité, en présence et en absence de l'agent actif ou du traitement physique criblé, d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 4 à SEQ ID NO: 11, un analogue ou un fragment de celles-ci, et de préférence parmi SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 et SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci, et plus préférentiellement encore parmi SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 et SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci, et plus préférentiellement encore parmi SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 et SEQ ID NO: 11, un analogue, ou un fragment de celles-ci.
Agent modulateur Au sens de la présente invention, on entend par « agent modulateur » ou « agent actif ou un traitement physique susceptible de moduler l'expression, la maturation ou l'activité d'une séquence d'acides aminées ou d'acides nucléiques conforme à l'invention », tout composé ou phénomène physique susceptible d'agir, directement ou indirectement, sur au moins une séquence d'acides aminées ou une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention, ou sur un élément d'une voie de signalisation intra ou extra-cellulaire, ou d'une voie métabolique, ou de régulation de la transcription et/ou de la traduction impliquant ladite séquence d'acides aminées ou ladite séquence d'acides nucléiques. Les agents modulateurs ou les traitements physiques préférés selon l'invention peuvent être des composés ou traitements physiques agissant directement sur au moins une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention en vue de moduler son expression, ou sa maturation, ou son activité. Au sens de l'invention, on entend par « moduler », au regard d'un effet donné, l'action de stimuler ou d'inhiber cet effet.
Les actifs ou les traitements physiques issus d'un criblage selon l'invention peuvent être avantageusement utilisés à des fins cosmétiques, notamment au regard d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu.
Selon un mode de réalisation préféré, un agent modulateur de l'invention est un agent inhibiteur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention. De manière plus préférée encore, un agent modulateur de l'invention est un agent inhibiteur de l'activité enzymatique ou de l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention.
De manière préférée, un agent modulateur inhibiteur convenant à l'invention peut être choisi parmi des serpins, en particulier la LEKTI ou la SPINK, telle que la SPINK5 ou la SPINK6, ou un fragment de celles-ci, du chlorure de sodium, une association de chlorure de sodium et d'acétate de sodium, un chlorure de potassium, d'ammonium, de magnésium, ou de calcium, un glycosaminoglycanne tel qu'une héparine, l'alpha-2-macroglobulin, le Ca2+, le , le NH4+, un RNAi, tel que le RNAi Santa Cruz SC-41532, un anticorps bloquant, un aptamère, du citrate de sodium, du sulfate de sodium, du Mg2+, un inhibiteur de la trypsine de soja, tel que l'inhibiteur Sigma T9008, ou un mélange de ceux-ci. Des agents inhibiteurs convenant à l'invention sont notamment décrits par Angelo et al. (J Biol Chem, 2006, 281:3116), ou Goettig et ai (Biochimie, 2010, 92: 1546).
Avantageusement, un agent modulateur activateur de l'invention peut être mis en oeuvre à des fins de prévention et/ou de traitement d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier d'un état pelliculaire du cuir chevelu. Selon un autre mode de réalisation préféré, un agent modulateur de l'invention est un agent activateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention. De manière plus préférée encore, un agent modulateur de l'invention est un agent activateur de l'activité enzymatique ou de l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention. De manière préférée, un agent modulateur activateur convenant à l'invention peut être choisi parmi un glycosaminoglycanne tel qu'une héparine, un héparane sulfate, une chondroïtine sulfate, un dermatane sulfate, ou un mélange de ceux-ci. Des agents activateurs convenant à l'invention sont notamment décrits par Angelo et ai (J Biol Chem, 2006, 281:3116). Avantageusement, un agent modulateur activateur de l'invention peut être mis en oeuvre à des fins de préparation d'un modèle de cuir chevelu reconstruit, notamment apte à mimer une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, et en particulier un état pelliculaire du cuir chevelu. Un tel agent peut être tel que défini précédemment. Compositions La présente invention concerne également des compositions, notamment cosmétiques, comprenant dans un milieu physiologiquement ou cosmétiquement acceptable, une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un actif apte à moduler l'activité, l'expression ou la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et notamment tel que défini ci-dessus. Les séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques ou les agents modulateurs mis en oeuvre selon ce mode de réalisation sont avantageusement dotés de propriétés inhibitrices à l'égard de l'activité protéolytique de la KLK6. Au sens de la présente invention, on entend désigner par « milieu physiologiquement acceptable », un milieu convenant à l'administration d'une composition par voie topique le cuir chevelu ou par voie orale ou par voie parentérale, telle que la voie intradermique ou sous-cutanée. Une composition de l'invention peut contenir des adjuvants habituels dans le domaine considéré, tels que des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des additifs hydrophiles ou lipophiles, des conservateurs, des antioxydants, des solvants, des parfums, des charges, des filtres, des absorbeurs d'odeurs et des matières colorantes. Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. La quantité de séquence d'acides aminés, ou de séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'actif conformes à l'invention contenue dans une composition de l'invention, encore dite « quantité efficace » est, bien entendu, fonction de la nature de l'actif et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure. Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir une séquence d'acides aminés, ou une séquence d'acides nucléiques, ou un actif conformes à l'invention en une quantité représentant de 0,00001 % à 50 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 10 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition. Selon un autre mode de réalisation, une composition cosmétique de l'invention peut comprendre, en outre, au moins un actif cosmétique et/ou thérapeutique additionnel.
Actifs additionnels Comme exemples d'agents actifs additionnels utilisables dans le cadre de la présente invention, il peut être fait mention d'huiles cosmétiques, telles que les huiles de silicone, les huiles végétales de type triglycérides, les huiles hydrocarbonées telles que l'huile de PARLEAM et les esters d'acides gras et d'alcool gras. Il peut également être possible d'utiliser d'autres agents actifs permettant d'améliorer l'état du cuir chevelu, tels que des actifs hydratants ou humidifiants ou des agents actifs permettant d'améliorer la barrière lipidique naturelle, tels que des céramides, des sulfates de cholestérol et/ou des acides gras, et leurs mélanges.
Il peut également être possible d'utiliser des enzymes ayant une activité sur le cuir chevelu, telles que des protéases, des lipases, des glucosidases, des amidases, des cérébrosidases et/ou des mélanases, et leurs mélanges. Comme autres exemples d'agents actifs convenant à la mise en oeuvre de la présente invention figurent : des actifs analgésiques, des actifs anti-levures, des actifs antibactériens, des actifs antiparasitaires, des actifs antifongiques, des actifs antiviraux, des actifs anti-inflammatoires stéroïdiens, des actifs anesthésiques, des actifs antiprurigineux, des actifs kératolytiques, des actifs anti-radicaux libres, des actifs anti-séborrhéiques, des actifs antipelliculaires, des actifs anti-acnéiques, des actifs visant à prévenir le vieillissement de la peau et/ou à améliorer son état, des actifs anti-dermatites, des actifs anti-irritants, des actifs immuno-modulateurs, des actifs pour le traitement de la peau sèche, des actifs anti- transpirants, des actifs anti-psoriatiques, des actifs protecteurs contre les UV, des actifs antihistaminiques, des actifs cicatrisants, des actifs auto-bronzants, des antioxydants tels que le thé vert ou des fractions actives de celui-ci, la glycérine, la laponite, la caféine, des huiles essentielles aromatiques, des colorants, des actifs dépigmentants, des lipo-régulateurs, des actifs adoucissants, rafraîchissants, déodorants, insensibilisants, blanchissants, nourrissants, des actifs diminuant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée, et leurs mélanges. Egalement, à titre d'actifs additionnels, on peut citer le Tween 20 ou d'autres détergents doux, des agents chélateurs, des probiotiques, du Zn-pyrithione ou d'autres antifongiques, l'acide élagique, des composés anti-prurit, des polyphénols et leurs dérivés, des sucres et des sucres réducteurs, des anti-inflammatoires, des anti-sudoraux, ou des antisébacés, etc. A titre d'actifs additionnels susceptibles de convenir plus particulièrement à l'invention, on peut mentionner également des microorganismes probiotiques, des actifs prébiotiques, des actifs favorisant la synthèse de facteur de défense de la peau, des actifs permettant de rétablir l'équilibre différentiation/prolifération des cellules de l'épiderme, en particulier tels que des actifs de type rétinol ou retinol-like, ou des actifs hydratants. Peuvent également convenir des actifs prodesquamants, tels que l'Hepes, les AHA, l'urée et ses dérivés, le salicylate et ses dérivés, notamment le lipohydroxyacide, le jasmonate et ses dérivés, tel que le LR2412, ainsi que des actifs favorisant les défenses anti-radicaux libres ou anti-oxydantes. Utilisation cosmétique La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et notamment un agent modulateur tel que défini précédemment, à titre d'actif pour prévenir et/ou traiter une altération des fonctions barrières du cuir chevelu, et de préférence un état pelliculaire du cuir chevelu. Les séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques ou les agents modulateurs mis en oeuvre selon ce mode de réalisation sont avantageusement dotés de propriétés inhibitrices à l'égard de l'activité protéolytique de la KLK6.
Selon un mode de réalisation préféré, une utilisation de l'invention peut mettre en oeuvre un agent modulateur inhibiteur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention, et de préférence inhibiteur de l'activité enzymatique ou de l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention. Un tel agent peut notamment être choisi parmi les agents inhibiteurs définis précédemment.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé cosmétique pour prévenir et/ou traiter un état pelliculaire du cuir chevelu chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à titre d'agent actif au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou au moins un agent modulateur, en particulier inhibiteur, de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, notamment tel que défini ci-dessus.
Les séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques ou les agents modulateurs mis en oeuvre selon ce mode de réalisation sont avantageusement dotés de propriétés inhibitrices à l'égard de l'activité protéolytique de la KLK6. Un procédé ou une utilisation de l'invention peut permettre de réduire le nombre et la taille des pellicules. Avantageusement, un cuir chevelu peut voir son aspect esthétique amélioré et ses propriétés de fonction barrières restaurées suite à la mise en oeuvre d'une utilisation ou d'un procédé conforme à l'invention. De manière générale, un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de renforcer les propriétés barrières du cuir chevelu affecté d'une desquamation anormale. De manière préférée, un procédé de l'invention peut comprendre l'application par voie topique sur au moins une partie du le cuir chevelu d'un individu en ayant besoin d'au moins une couche d'une composition topique de l'invention. Un procédé cosmétique par voie topique selon l'invention peut avantageusement comprendre l'application d'une composition de l'invention, en association de manière simultanée, successive ou séparée dans le temps avec une composition cosmétique ou dermatologique additionnelle distincte de la composition de l'invention et destinée au soin du cuir chevelu. Selon un autre mode de réalisation préféré, un procédé cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre par voie orale, notamment par administration d'au moins une composition alimentaire ou diététique à visée cosmétique. Selon un autre mode de réalisation préféré, un procédé cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre par voie parentérale. La mise en oeuvre par voie parentérale d'un procédé cosmétique de l'invention est effectuée à l'exclusion de toute intervention chirurgicale et ne vise qu'à exercer un traitement de surface du cuir chevelu à des fins esthétiques. Ainsi, un procédé cosmétique de l'invention par voie parentérale est mis en oeuvre par toute technique d'injection ou dispositif convenant à une injection intra-épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée. Une telle administration peut être effectuée, par exemple, par mésothérapie.
Un procédé cosmétique par voie parentérale ne se traduit donc que par une effraction superficielle du cuir chevelu et sort donc de tout cadre médical ou thérapeutique. Pour la voie parentérale, on pourra alternativement privilégier l'administration par patch à visée systémique.
Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre de façon journalière, par exemple à raison d'une administration unique par jour, ou d'une administration fractionnée en deux ou trois fois par jour, par exemple une fois le matin et une fois le soir. Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre sur une période de temps variant d'une semaine à plusieurs semaines, voire plusieurs mois, cette période pouvant par ailleurs être répétée après des périodes de non traitement pendant plusieurs mois, voire plusieurs années. A titre d'exemple de procédé cosmétique selon l'invention, on peut prévoir une administration d'une composition de l'invention, par exemple, à raison de 1, 2 ou 3 fois par 10 jour, ou plus, et généralement sur une durée prolongé d'au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes d'interruption. Cuir chevelu reconstruit L'intérêt de développer des modèles organotypiques les plus proches de conditions 15 in vivo est grand pour l'évaluation sécurité et efficacité des actifs et formules à applications cosmétiques et dermatologiques. L'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un agent modulateur de l'invention dans un milieu de culture est susceptible d'améliorer la qualité des modèles 20 développés. Les séquences d'acides aminés ou d'acides nucléiques ou les agents modulateurs mis en oeuvre selon ce mode de réalisation sont avantageusement dotés de propriétés activatrices à l'égard de l'activité protéolytique de la KLK6. Un modèle de cuir chevelu reconstruit isolé de l'invention peut permettre de 25 reproduire une altération de la fonction barrière du cuir chevelu. En particulier, la mise en oeuvre d'un agent modulateur activateur, tel que défini précédemment, peut être considéré pour la préparation d'un modèle de cuir chevelu reproduisant une altération de la fonction barrière, de préférence étant apte à mimer un état pelliculaire du cuir chevelu. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de préparation 30 d'un modèle de cuir chevelu reconstruit isolé comprenant, au moins l'étape de mettre en contact au moins une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques, ou d'au moins un agent modulateur conformes à l'invention, notamment dotés de propriétés activatrices à l'égard de l'activité protéolytique de la KLK6, avec des cellules susceptibles de générer un cuir chevelu reconstruit isolé, et notamment des kératinocytes. Un modèle de cuir chevelu reconstruit peut comprendre différents types cellulaires, tels des kératinocytes, des fibroblastes, des cellules de Langerhans et des mélanocytes. Les cellules de type fibroblastes peuvent être irradiées ou non. Avantageusement, un modèle de cuir chevelu reconstruit de l'invention peut être mis en oeuvre à des fins de criblage de nouveaux actifs convenant au soin du cuir chevelu, et plus particulièrement de nouveaux actifs antipelliculaires. Les procédés de préparation de tels modèles sont connus de l'homme de l'art.
Selon encore un autre aspect, la présente invention concerne également un procédé de préparation d'un modèle de cuir chevelu reconstruit comprenant au moins une étape de mise en culture de cellules d'au moins un type cellulaire dudit modèle, lesdites cellules ayant été génétiquement modifiées pour réprimer ou pour augmenter l'expression d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acide nucléiques de l'invention.
L'obtention de cellules génétiquement modifiées pour réprimer l'expression d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acide nucléiques de l'invention, cellules dites « knock-out », peut être réalisée par toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre d'exemple, de telles cellules peuvent être obtenues par transfection et recombinaison homologue d'un fragment d'acide nucléique venant s'insérer dans ou prendre la place du gène exprimant la séquence d'acides aminés dont l'expression est à supprimer. Egalement, il peut être possible de supprimer l'expression d'un gène donné par transfection dans la cellule d'une séquence d'acide nucléique codant pour un ARN interférant spécifique de l'ARNm issu du gène dont l'expression est à supprimer. L'obtention de cellules génétiquement modifiées pour augmenter l'expression d'une séquence d'acides aminés ou une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être réalisée par toutes méthodes connues de l'homme de l'art. A titre d'exemples, de telles cellules peuvent être obtenues par transfection de plasmide comprenant un gène codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention sous le contrôle d'un promoteur. Le promoteur utilisé peut permettre l'expression du gène de manière inductible ou constitutive, ou de manière tissu-spécifique. Egalement, il est possible d'utiliser différents vecteurs de transfection permettant l'introduction du gène à faire exprimer dans les chromosomes des cellules à transfecter.
Toutes ces techniques de biologie moléculaire permettant de réprimer ou d'augmenter l'expression d'un gène sont connues de l'homme de l'art et ne nécessitent pas de développement spécifique.
Les exemples donnés ci-après sont produits uniquement aux fins d'illustration de l'invention. EXEMPLES Exemple 1 Expression de la Kallikréine 6 dans le cuir chevelu 1- Matériels et méthodes a- Protocole iTRAQ La détection de l'expression de la Kallikréine 6 (KLK6) a été réalisée au moyen de la méthode iTRAQ (Isobaric Tagging Reagents for Quantitative Proteomic Analysis) développée par la société Applied Biosystems. Cette méthode permet la quantification de peptides préalablement marqués par un Tag isobarique. Il existe 4 tags différents et on peut comparer jusqu'à 4 types d'échantillons distincts dans une même analyse LC/MS-MS.
Le principe de cette méthode est le suivant : - Digestion d'extraits protéiques et marquage : Dans un premier temps, chaque extrait protéique est digéré par une enzyme protéolytique : la trypsine.
Dans un second temps, chaque mélange peptidique obtenu est marqué avec un Tag isobarique d'une masse totale 145, comprenant un groupe « reporter » de masse 114, 115, 116 ou 117, et un groupe « balance » de masse 31, 30, 29 ou 28, liés entre eux par un site de fragmentation MS. Le marquage est obtenu par réaction du Peptide Reactive Group de chaque tag avec les amines primaires des peptides (extrémité N-terminale des peptides ou la chaîne latérale des lysines ou des tyrosines. - Analyse LC/MS-MS et quantification : Après l'étape de marquage, les échantillons sont mis en commun et analysés par spectrométrie de masse. Un peptide donné, présent dans plusieurs échantillons, aura une masse parente identique mais son spectre de fragmentation MS/MS va générer la masse du groupe rapporteur caractéristique de chacun des réactifs iTRAQ. La comparaison de l'intensité de chaque ion rapporteur (114, 115, 116 ou 117) permet alors la quantification du peptide. La méthode iTRAQ est plus précisément décrite par Zieske (J. Exp. Bot., 2006, 57 :1501) ou Wiese et al. (Proteomics, 2007, 7 :340). b- Prélèvement et traitement des échantillons cutanés L'analyse protéomique différentielle par approche iTRAQ a été effectuée à partir de prélèvements non-invasifs de scalps non-pelliculaires et de scalps pelliculaires. Les prélèvements ont été effectués par cornéodisques sur deux zones de 2 cm2. Quatre cornéodisques à saturation sont réalisés sur chaque volontaire et conservés à -20 °C. Le kit iTRAQ Reagents Multiplex kit (4352135), d'Applied Biosystems, a été utilisé conformément aux instructions du fabricant. Deux groupes de sujets ont fait l'objet de l'essai, comprenant chacun des hommes et des femmes d'âge compris entre 22 et 63 ans : - Groupe non-pelliculaire (ou « non-Pell »): 10 volontaires non-pelliculaires (score moyen des pellicules adhérentes sur les zones de prélèvements compris entre 0 et 0,5), et - Groupe pelliculaire (ou « Pell »): 9 volontaires pelliculaires (score moyen des pellicules adhérentes sur les zones de prélèvements compris entre 2,75 et 5).
Des regroupements de sujets sont réalisés pour disposer d'une quantité suffisante de protéines pour l'analyse. Quatre sous-groupes (a, b, c, d) ont été préparés pour les deux groupes pelliculaire et non-pelliculaire. Chaque sous-groupe est constitué d'un cornéodisque de chaque volontaire soit 9 cornéodisques par sous-groupe pour les sujets pelliculaires et 10 cornéodisques par sous-groupe des sujets non pelliculaires.
Deux expériences de marquage iTRAQ ont été réalisées selon les schémas suivants : Expérience 1 Groupe A (NON Pelliculaire) Group( (PELLICULATIE) sous-groupe sous-groupe sous-groupe a b Réactif Réactif Réactif Réactif 114 116 115 117 Ratios 115/114 - 115/116 - 117/116 et 117/114 Expérience 2 Groupe A (NON Pelliculaire) Groupe B (PELLICULAIRE) sous-groupe C Réactif 114 sous-groupe d Réactif 116 sous-groupe c. Réactif 115 sous-groupe Réactif 117 Ratios 115/114 - 115/116 - 117/116 et 117/114 2- Résultats Pour chaque protéine identifiée, commune aux deux expériences, ont été sélectionnés les ratios possédant une valeur de p (ou «p value ») inférieure ou égale à 0,05 (95 % de chance que le ratio obtenu soit différent de 1 et non dû au hasard), et un facteur d'erreur inférieur à 2 (variabilité des valeurs). A partir de ces ratios sélectionnés ont été calculés des ratios moyens « Pell »/« non-Pell ». Ce calcul de ratios moyens a permis de déterminer deux groupes de protéines : a- Protéines sous-exprimées chez les sujets pelliculaires : protéines pour lesquelles le ratio moyen « Pell »/« non-Pell » est inférieur ou égal à 0,8 b- Protéines sur-exprimées chez les sujets pelliculaires : protéines pour lesquelles le ratio moyen « Pell »/« non-Pell » est supérieur ou égal à 1,2 Parmi les protéines identifiées, les peptides représentés par les séquences SEQ ID NO: 8 à SEQ ID NO: 11 issus de la Kallikréine (N° accession Q92876 - Réf.: Swissprot/Uniprot) sont détectés et quantifiés dans les deux expériences avec confiance. Les résultats de quantification sont donnés dans le tableau suivant : Expérience 1 Expérience 2 Ratio « Pell » / « non-Pell » Access. Nom 115:114 117:114 115:116 117:116 115 :114 Ratio moyen Ecarttype Q92876 KLK6 HUMAN Kallikrein-6 5,49 5,27 5,14 5,10 3,89 4,98 0,63 Ces résultats montrent que le ratio iTRAQ moyen « Pell » / « non-Pell » est égal à 4,98±0,63. Ainsi la Kallikréine 6 (KLK6) est majoritairement exprimée chez les sujets pelliculaires et par conséquent sous-exprimée chez les sujets non-pelliculaires. La Kallikréine 6 se révèle donc être un biomarqueur intéressant et spécifique d'un état pelliculaire du cuir chevelu.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1. Angelo, P. F., A. R. Lima, et al. (2006). "Substrate specificity of human kallikrein 6: sait and glycosaminoglycan activation effects." J Biol Chem 281(6): 3116-3126. 2. Bayes, A., T. Tsetsenis, et al. (2004). "Human kallikrein 6 activity is regulated via an autoproteolytic mechanism of activation/inactivation." Biol Chem 385(6): 517-524. 3. Borgono, C. A., I. P. Michael, et al. (2007). "A potential role for multiple tissue kallikrein serine proteases in epidermal desquamation." J Biol Chem 282(6): 3640-3652. 4. Diamandis, E. P., G. M. Yousef, et al. (2000). "Human kallikrein 6 as a biomarker of alzheimer's disease." Clin Biochem 33(8): 663-667. 5. Diamandis, E. P., G. M. Yousef, et al. (2000). "Human kallikrein 6 (zyme/protease M/neurosin): a new serum biomarker of ovarian carcinoma." Clin Biochem 33(7): 579-583. 6. Kantyka, T., J. Fischer, et al. (2011). "Inhibition of Kallikrein-related Peptidases by the Serine Protease Inhibitor of Kazal-type 6." Peptides. 7. Komatsu, N., K. Saijoh, et al. (2007). "Human tissue kallikrein expression in the stratum corneum and serum of atopic dermatitis patients." Exp Dermatol 16(6): 513-519. 8. Komatsu, N., K. Saijoh, et al. (2005). "Multiple tissue kallikrein mRNA and protein expression in normal skin and skin diseases." Br J Dermatol 153(2): 274-281. 9. Kyte J, Doolittle RF (1982). "A simple method for displaying the hydropathic character of a protein." J Mol Biol 157: 105-132. 10. Li, H. X., B. Y. Hwang, et al. (2008). "Substrate specificity of human kallikreins 1 and 6 determined by phage display." Protein Sci 17(4): 664-672. 11. Magklara, A., A. A. Mellati, et al. (2003). "Characterization of the enzymatic activity of human kallikrein 6: Autoactivation, substrate specificity, and regulation by inhibitors." Biochem Biophys Res Commun 307(4): 948-955. 12. Meyer-Hoffert, U. (2009). "Reddish, scaly, and itchy: how proteases and their inhibitors contribute to inflammatory skin diseases." Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 57(5): 345-354. 13. Sambrook et al., (1989). "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" (2ème édition), Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook) 14. Zieske, J. Exp. Bot., 2006, 57 :1501 15. Wiese et al. Proteomics, 2007, 7 :340 PR94261/KLP/HG/cf 07/12/11 - 3ème projet

Claims (19)

  1. REVENDICATIONS1. Utilisation in vitro ou ex vivo (i) d'au moins une REVENDICATIONS1. Utilisation in vitro ou ex vivo (i) d'au moins une séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques consistant en SEQ ID NO: 1, d'un analogue ou d'un fragment de ladite séquence d'acides aminés, ou (ii) d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ladite séquence d'acides aminés, ou un analogue ou un fragment de celle-ci, à titre de biomarqueur d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu.
  2. 2. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle ladite séquence d'acides nucléique consiste en une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, un analogue ou un fragment de celles-ci.
  3. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ladite séquence d'acides aminés consiste en une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 4 à SEQ ID NO: 11, un analogue ou un fragment de celles-ci, et de préférence est choisie parmi SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, un analogue ou un fragment de celles-ci.
  4. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle une augmentation de l'expression, de l'activité ou de la maturation dudit biomarqueur est indicative d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu.
  5. 5. Utilisation in vitro ou ex vivo (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que 20 définie en revendications 1 ou 2, comme biomarqueur pour cribler des agents actifs ou des traitements physiques présumés convenir pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu.
  6. 6. Utilisation in vitro ou ex vivo (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que 25 définie en revendications 1 ou 2, comme biomarqueur pour déterminer, dans une gamme d'actifs et/ou de procédés pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, un actif et/ou un procédé présumé convenir à la prévention ou au traitement d'une altération de la fonction barrière du cuir chevelu d'un individu donné.
  7. 7. Utilisation in vitro ou ex vivo (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle 30 que définie en revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie aux revendications 1 ou 2, comme biomarqueur pour sélectionner parmi des individus présentant une altération de la fonction barrière du cuir chevelu et présumés répondre à un actif et/ou à un procédé pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, le ou lesdits individu(s) susceptible(s) de présenter une réponse efficace audit actif ou audit 35 procédé.
  8. 8. Utilisation in vitro ou ex vivo (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, pour caractériser l'efficacité d'un actif ou d'un procédé cosmétique pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu.
  9. 9. Utilisation cosmétique (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, ou (iii) d'au moins un agent inhibiteur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre d'actif pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir 10 chevelu, ledit agent inhibiteur étant choisi parmi des serpins, en particulier la LEKTI ou la SPINK, telle que la SPINK5 ou la SPINK6, ou un fragment de celles-ci, du chlorure de sodium, une association de chlorure de sodium et d'acétate de sodium, un chlorure de potassium, d'ammonium, de magnésium, ou de calcium, un glycosaminoglycanne tel qu'une héparine, l'alpha-2-macroglobulin, le Ca2+, le K+ , le NH4+, un RNAi, un anticorps bloquant, un aptamère, du citrate de sodium, du sulfate de sodium, du Mg2+, un inhibiteur de la trypsine de soja, ou un mélange de ceux-ci..
  10. 10. Utilisation in vitro ou ex vivo (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie aux revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie aux revendications 1 ou 2, ou d'au moins un agent activateur de l'activité, de l'expression, de la maturation desdites séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques pour préparer un modèle de cuir chevelu reconstruit apte à mimer une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, ledit agent activateur étant choisi parmi un glycosaminoglycanne, tel qu'une héparine, un héparane sulfate, une chondroïtine sulfate, un dermatane sulfate, ou un mélange de ceux-ci. -
  11. 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle l'altération de la fonction barrière du cuir chevelu est choisie parmi un état du cuir chevelu déshydraté, et/ou irrité, et/ou présentant un état pelliculaire.
  12. 12. Procédé in vitro ou ex vivo pour caractériser une altération de la fonction barrière du cuir chevelu chez un individu comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, dans un échantillon d'un cuir chevelu isolé dudit individu, une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de l'activité ou de la maturation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie aux revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie aux revendications 1 ou 2, et b) comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence.
  13. 13. Procédé in vitro ou ex vivo de criblage d'actifs ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation d'une séquence d'acides aminéstelle que définie aux revendications 1 à 3 ou d'une séquence d'acides nucléiques telle que définie aux revendications 1 ou 2 pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques dans des conditions propices à l'activité, l'expression ou la maturation desdites séquences, b) mettre en contact ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un actif à tester ou exposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques à un traitement physique à tester, c) effectuer une mesure qualitative ou quantitative ou de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et d) comparer ladite mesure à une mesure de référence.
  14. 14. Procédé in vitro ou ex vivo pour caractériser l'efficacité d'un actif ou d'un procédé pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer avant la mise en oeuvre dudit actif ou procédé, dans un premier échantillon de cuir chevelu isolé prélevé chez ledit individu, au moins une première mesure qualitative ou quantitative de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie aux revendications 1 à 3, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie aux revendications 1 ou 2, b) effectuer, après la mise en oeuvre dudit actif ou procédé, dans un second échantillon de cuir chevelu isolé prélevé chez ledit individu, au moins une seconde mesure, qualitative ou quantitative de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et 111, c) comparer les première et deuxième mesures, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins de la mise en oeuvre dudit actif ou procédé cosmétique pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu.
  15. 15. Procédé cosmétique pour prévenir et/ou traiter une altération de la fonction barrière du cuir chevelu, chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à titre d'actif au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides aminés telle que définie aux revendications 1 à 3 ou d'une séquence d'acides nucléiques telle que définie aux revendications 1 ou 2, ledit agent modulateur étant un agent activateur tel que défini en revendication 10.
  16. 16. Peptide isolé représenté par une séquence d'acides aminés consistant en SEQ ID 35 NO: 8, SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, un analogue ou un fragment de celles-ci. -
  17. 17. Composition comprenant un peptide tel que défini selon la revendication précédente ou une séquence d'acides nucléiques codant pour un tel peptide.
  18. 18. Modèle de cuir chevelu reconstruit isolé comprenant au moins une cellule dans laquelle l'expression, l'activité ou la maturation d'une séquence d'acides nucléiques consistant en 5 SEQ. ID NO: 1 ou d'une séquence d'acides aminés consistant en SEQ. ID NO: 4, un fragment ou un analogue de celles-ci est réprimé ou augmenté, ledit modèle de cuir chevelu reconstruit isolé étant préparé à l'aide d'un procédé comprenant au moins l'étape de mettre en contact au moins une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3 ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, 10 ou d'au moins un agent modulateur tel que défini en revendication 10 avec des cellules susceptibles de générer un cuir chevelu reconstruit isolé.
  19. 19. Modèle de cuir chevelu reconstruit selon la revendication précédente, ledit modèle étant apte à mimer une altération de la fonction barrière du cuir chevelu.
FR1161283A 2011-12-07 2011-12-07 Klk6 comme biomarqueur du cuir chevelu Expired - Fee Related FR2983868B1 (fr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1161283A FR2983868B1 (fr) 2011-12-07 2011-12-07 Klk6 comme biomarqueur du cuir chevelu

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1161283A FR2983868B1 (fr) 2011-12-07 2011-12-07 Klk6 comme biomarqueur du cuir chevelu

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FR2983868A1 true FR2983868A1 (fr) 2013-06-14
FR2983868B1 FR2983868B1 (fr) 2016-09-02

Family

ID=46229528

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR1161283A Expired - Fee Related FR2983868B1 (fr) 2011-12-07 2011-12-07 Klk6 comme biomarqueur du cuir chevelu

Country Status (1)

Country Link
FR (1) FR2983868B1 (fr)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017103195A1 (fr) * 2015-12-16 2017-06-22 Laboratoires Expanscience Procedes d'evaluation des effets de la deshydratation sur la peau d'enfant

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111693716B (zh) * 2020-06-19 2021-07-13 中国科学院昆明动物研究所 Spink6在作为检测艾滋病的标志物中的应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07101831A (ja) * 1993-09-29 1995-04-18 Kanebo Ltd 養毛化粧料
WO2005078117A2 (fr) * 2004-02-18 2005-08-25 Bayer Healthcare Ag Agents diagnostiques et therapeutiques destines a des maladies associees a la kallikreine 6 (klk6)
WO2006086740A2 (fr) * 2005-02-11 2006-08-17 Genepharm, Inc. Compositions cosmetiques et cosmeceutiques destinees a la restauration de la fonction de barriere cutanee
WO2009053493A1 (fr) * 2007-10-26 2009-04-30 Galderma Research & Development Procédé non invasif pour études pharmaco-génomiques de maladies inflammatoires cutanées et leur procédé de diagnostic
US20090131265A1 (en) * 2005-10-27 2009-05-21 Jing Zhang Biomarkers for neurodegenerative disorders
JP2011083279A (ja) * 2009-09-16 2011-04-28 Institute Of Physical & Chemical Research 皮膚炎症性疾患の診断方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07101831A (ja) * 1993-09-29 1995-04-18 Kanebo Ltd 養毛化粧料
WO2005078117A2 (fr) * 2004-02-18 2005-08-25 Bayer Healthcare Ag Agents diagnostiques et therapeutiques destines a des maladies associees a la kallikreine 6 (klk6)
WO2006086740A2 (fr) * 2005-02-11 2006-08-17 Genepharm, Inc. Compositions cosmetiques et cosmeceutiques destinees a la restauration de la fonction de barriere cutanee
US20090131265A1 (en) * 2005-10-27 2009-05-21 Jing Zhang Biomarkers for neurodegenerative disorders
WO2009053493A1 (fr) * 2007-10-26 2009-04-30 Galderma Research & Development Procédé non invasif pour études pharmaco-génomiques de maladies inflammatoires cutanées et leur procédé de diagnostic
JP2011083279A (ja) * 2009-09-16 2011-04-28 Institute Of Physical & Chemical Research 皮膚炎症性疾患の診断方法
US20120034226A1 (en) * 2009-09-16 2012-02-09 Riken Diagnostic method of skin inflammatory disease

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
C. A. BORGONO ET AL: "A Potential Role for Multiple Tissue Kallikrein Serine Proteases in Epidermal Desquamation", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 282, no. 6, 30 November 2006 (2006-11-30), pages 3640 - 3652, XP055037491, ISSN: 0021-9258, DOI: 10.1074/jbc.M607567200 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017103195A1 (fr) * 2015-12-16 2017-06-22 Laboratoires Expanscience Procedes d'evaluation des effets de la deshydratation sur la peau d'enfant
FR3045669A1 (fr) * 2015-12-16 2017-06-23 Expanscience Lab Procedes d'evaluation des effets de la deshydratation sur la peau d'enfant
US11892447B2 (en) 2015-12-16 2024-02-06 Laboratoires Expanscience Method for evaluating the effects of dehydration on children's skin

Also Published As

Publication number Publication date
FR2983868B1 (fr) 2016-09-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2652512B1 (fr) Utilisation de l'ide comme biomarqueur d'un etat du cuir chevelu
EP2089720A2 (fr) Utilisation cosmetique d'une proteine de la famille des ribonucleases
FR2924946A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type ceramidase acide
FR2948021A1 (fr) Utilisation cosmetique de polypeptides de type lacritine
FR2925312A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type desmogleine i
EP2618808B1 (fr) Utilisation cosmétique de la dermcidine ou fragments de celle-ci
FR2925313A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type plakoglobine
FR2924947A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type calmodulin-like skin protein clsp
FR2924613A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type hsp27.
FR2917629A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type apolipoproteine d
FR2924614A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type calgranuline a.
FR2925314A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type transglutaminase 3
FR2983868A1 (fr) Klk6 comme biomarqueur du cuir chevelu
EP2349319B1 (fr) Utilisation de protéines de type dj-1 pour la caractérisation d'une sécheresse cutanée
FR2940976A1 (fr) Utilisation a des fins de criblage d'actifs anti-ages de formes solubles de la proteine de type desmogleine i
FR2965357A1 (fr) Utilisation cosmetique de la dermcidine, analogues ou fragments de celle-ci
WO2008068428A2 (fr) Utilisation cosmétique de protéines de type chitinase
FR2965358A1 (fr) Utilisation cosmetique de la dermcidine, analogues ou fragments de celle-ci
WO2014199106A2 (fr) Utilisation cosmétique de la dermicidine, analogues ou fragments de celle-ci pour la prévention et/ou le traitement et le diagnostic de la peau grasse et des désordres esthétiques cutanés qui y sont associés
EP2271357B1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type annexine ii pour le traitement de la secheresse cutanee
FR2940977A1 (fr) Utilisation de formes complexes de la proteine de type calmodulin-like skin protein clsp
FR2932087A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type desmoplakine pour le traitement de la secheresse cutanee
FR3006890A1 (fr) Utilisation cosmetique de la dermicidine, analogues ou fragments de celle-ci pour la prevention et/ou le traitement et le diagnostic de la peau grasse et des desordres esthetiques cutanes qui y sont associes
FR2938761A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type pbp pour le traitement de la secheresse cutanee
FR2929518A1 (fr) Utilisation cosmetique de proteines de type annexine ii pour le traitement du vieillissement cutane

Legal Events

Date Code Title Description
PLFP Fee payment

Year of fee payment: 5

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 6

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 7

ST Notification of lapse

Effective date: 20190906