CN103384830A - Ide 作为用于头皮病症的生物标记的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明的主题尤其是IDE的氨基酸序列或其类似物或片段或编码该序列的至少一种核酸序列作为用于头皮的头皮屑病症的生物标记或活性剂的用途。

Description

IDE 作为用于头皮病症的生物标记的用途
技术领域
本发明涉及用于皮肤、尤其是用于头皮的头皮屑病症的美容和/或治疗性生物标记和靶点的领域，本发明还涉及其作为活性剂的用途。
背景技术
出于本发明的目的，术语“皮肤”是指人体的所有表皮，包括粘膜和覆盖有体毛或头发的皮肤区域。尤其是，本发明中考虑的皮肤优选地是嘴唇和面部的皮肤、颈部的皮肤或头皮、甚至更优选是颈部的皮肤。
皮肤是一种组织，其中，细胞连接到一起并且彼此一体地附着。其形成包括皮脂腺或汗腺和毛囊的外层。皮肤、特别是头皮是经历持续再生的表皮。再生或脱屑是协调的且精细调节的过程，该过程导致表层细胞的察觉不到的且看不见的去除。
然而，由于各种原因造成的角质层的细胞的异常的或者不规律的脱落可以导致形成肉眼可以看见的大的、厚的细胞团且在头皮的情况中或者在角质层变薄的其他情形中被称为“鳞片”或“头皮屑”。由异常的或者不规律的脱落造成的脱屑失调可以导致脆性或者甚至缺失表皮的屏障性能。
就促进鳞片或头皮屑的出现的因素举例来说，可以提到的是压力、寒冬期、过量的皮脂、通过酵母菌马拉色氏霉菌属造成的皮肤或毛囊的水化缺陷或移植。这些因素尤其具有导致和/或促使皮肤炎症的共同特征。该炎症增强了鳞片或头皮屑的出现或甚至增加了鳞片或头皮屑的存在。具体而言，马拉色氏霉菌属类型的酵母菌构成没有头皮屑的个体中的头皮表面处的正常共生菌的一部分，在头皮屑的情况下或者在有关脂溢性皮炎的情况下，它们所占的比例大幅增加。头皮生物菌群的不平衡是促进或甚至增强头皮屑的出现的一个因素。
鳞片或头皮屑病症的出现可以是复发的、频繁发生的慢性病症，该慢性病症由于其明显不雅的性质而对社交不利。此外，头皮的头皮屑病症或皮肤的异常脱屑可反映为表皮的屏障功能受损、或产生发痒的感觉或导致瘙痒症，瘙痒症导致扩大了鳞片或头皮屑的出现的现象的瘙痒，从而刺激头皮或皮肤。
头皮的头皮屑病症可以是油脂类型或干燥类型。在皮肤水合障碍期间，尤其是在头皮表皮的基本上干燥期间，头皮的干燥的头皮屑病症较频繁地出现并且扩大。此外，由于头皮富有皮脂腺，故头皮屑病症在过量存在皮脂下更容易发展且更容易引起痒疹。因此，皮脂的过度分泌或者皮脂分泌过多促使头皮的油腻的头皮屑病症或油腻头皮屑出现，这通常与悲伤、不适感、美学失调或甚至皮肤病理学相关。
头皮屑病症通常对应于各种局部治疗或全身治疗。然而，这些治疗的功效仅是中止性的并且需要用户方面的严格坚持（足够的使用频率和足够的应用时间）。然而，这些治疗的每日和长期使用可以导致成瘾的现象、减少它们的功效，并且通常当治疗停止时与反弹现象出现相关。该现象通过皮脂分泌过多而显现，这加重了头皮屑病症且损害头皮的屏障功能。此外，关于表皮细胞或头皮生物菌群的一些抗头皮屑活性剂的攻击性也可以影响头皮的屏障功能并且导致加重头皮屑病症。最后，抗头皮屑治疗的功效通常减缓发展并且长期需要严格应用。该滞后时间通常导致不能坚持治疗。因此，在使用这些治疗中产生很多失败。
已知在皮肤、尤其是头皮的再生或脱屑的过程中直接或间接地涉及很多表皮因子，这些表皮因子的表达、生物活性或成熟被改动、降低或增强。
这些因子可以用作用于皮肤的生物标记、作为筛选靶点、或甚至作为美容活性剂。
然而，关于密切机制和在皮肤的脱屑中涉及的因子且特别是头皮屑发作时涉及的因子，很多未知的因子还不确定。
因此，需要用于表征皮肤的脱屑、尤其是头皮的头皮屑病症的新的生物标记。
还需要用于筛选护理皮肤的活性剂或物理治疗的新的靶点，尤其是用于预防和/或治疗皮肤脱屑病症、以及尤其是头皮的头皮屑病症。
还需要用于预防和/或治疗皮肤脱屑失调、尤其是头皮的头皮屑病症的新的活性剂或新的治疗。
还需要用于护理皮肤、尤其是用于预防和/或治疗皮肤脱屑失调、尤其是头皮的头皮屑病症的新的美容靶点。
还需要用于预防、降低和/或治疗头皮的头皮屑病症的新的美容治疗，其有效并且没有易于不利地影响坚持治疗的负面影响。
还需要用于头皮的头皮屑病症的治疗，该治疗没有负面影响头皮的生物菌群、或甚至增强了健康的生物菌群的存在。
还需要用于头皮屑病症的治疗，该治疗能够保持或者甚至增强头皮的水合。
还需要用于头皮屑病症的治疗，该治疗能够保持或者甚至增强头皮的屏障性能。
需要用于头皮屑病症的治疗，该治疗没有上述负面影响，且尤其不导致皮脂分泌过多、脂溢性皮炎或痒疹疾病。
还需要对于头皮屑病症的治疗，该治疗不引起炎症。
发明内容
本发明的目的是为了满足这些需要。
因此，根据第一主题，本发明涉及（i）通过由SEQ ID No.：1或者SEQ ID No.：1的类似物或片段表示的核酸序列编码的至少一种氨基酸序列或者（ii）至少所述核酸序列用于筛选能够调节所述氨基酸序列或所述核酸序列的活性、表达或成熟以预防和/或治疗皮肤的异常脱屑、优选地头皮的头皮屑病症的活性剂或物理治疗的用途。
意外地，在2D差异电泳蛋白质组分析的过程中，发明人已经发现，使用非创伤性头皮样品，证实胰岛素降解酶或insulysine、或胰岛素酶或IDE是头皮的头皮屑病症的灵敏的和特定的生物标记。
更具体地，发明人已经发现，当与没有头皮屑的头皮相比时，IDE的表达水平、尤其是从IDE获得且通过序列SEQ ID No.：8至SEQ ID No.：14所识别的肽的表达水平在出现头皮屑病症的头皮中系统地增大。这是第一次在IDE表达的变化和皮肤的异常脱屑之间建立关系。因此，就发明人的了解来说，该酶从来没有被识别为异常脱屑的标记，更不用说头皮屑病症的标记。
该观测证实了IDE或从IDE获取的肽片段或编码这些多肽的核酸作为皮肤生物标记的用途或者用于筛选对皮肤的异常脱屑、尤其头皮屑病症具有活性的新试剂的用途，以及还证实了用于调节该酶的活性的试剂用以预防和/或治疗头皮的头皮屑病症的用途。
出于本发明的目的，关于氨基酸序列，例如，蛋白质或肽，或关于核酸序列，例如mRNA，术语“表达”是指所述氨基酸序列和所述核酸序列的含量或者其含量相对于参考值的变化。
出于本发明的目的，关于氨基酸序列，例如，蛋白质或肽，或者关于核酸序列，例如mRNA，术语“成熟”是指在细胞环境中合成氨基酸序列或核酸序列之后的修饰。例如，在氨基酸序列的情况中，术语“成熟”是指翻译后修饰，诸如某些氨基酸的糖基化、法尼基化或乙酰化，或者导致消除“信号”或“分泌”序列或者导致释放具有特定生物性能的序列的蛋白水解步骤。在核酸序列的情况下，例如，术语“成熟”是指前-mRNA的选择性剪接。
出于本发明的目的，关于氨基酸序列，例如，蛋白质或肽，术语“活性”是指氨基酸序列的生物活性，合适的情况下为在成熟后的生物活性，诸如，酶活性、相对于受体的激动剂或拮抗剂活性、酶激活或抑制活性、或者“结构”活性。
尤其是，出于本发明的目的，关于由SEQ ID No.8表示的本发明的氨基酸序列的“活性”这一术语是指其蛋白水解活性、尤其是关于其常用底物，诸如，胰岛素、胰高血糖素、缓激肽或胰激肽。
出于本发明的目的，关于核酸序列，例如mRNA，术语“活性”是指其翻译。
IDE，也称为insulysine或胰岛素酶，是1019个氨基酸且110kDa的锌金属蛋白酶（P14735；EC=3.4.24.56），其属于M16A蛋白酶家族。其涉及小的生物活性的肽的水解，这些肽例如有胰岛素、β-淀粉样蛋白、糊精、胰高血糖素、胰岛素生长因子II（IGF-II）、β-内啡肽、生长抑素和心钠素（Guo等，2009年）。
IDE的表达特别地富含在大脑、肝脏和肌肉中，并且尤其定位在颗粒层中并且被描述成存在于角质层中（Radulescu等，2007）。IDE特别地涉及在表示Alzheimer疾病的β-淀粉样蛋白沉积物降解中（Kim等2007；Miners等，2009年）。其还涉及II型糖尿病和高胰岛素血症的病理学（Groves等，2003年）。
其还描述成关联于上皮细胞的瘢痕缺陷，瘢痕缺陷可以通过提供胰岛素和者通过IDE抑制剂来补偿（Shearer等，1997年）。IDE还可以关联于病毒敏感性（Ali等，2009年）。
根据另一主题，本发明涉及有效量的至少一种调节本发明的氨基酸序列或者本发明的核酸序列的活性、表达或成熟的试剂作为用于预防和/或治疗头皮的屏障性能的失调的活性剂的美容用途。
优选地，调节剂是抑制本发明的氨基酸序列的酶活性的试剂。
更优选地，该抑制剂可以用于预防和/或治疗头皮的头皮屑病症。
出于本发明的目的，本发明的化合物的“有效量”这一术语是指该化合物的用量对于获得所需的效果、尤其是关于皮肤的异常或不规律脱屑且优选地头皮的头皮屑病症的美容或护理效果是足够的且必要的。
出于本发明的目的，术语“预防”是指减少给定现象发生的危险或减缓给定现象的发生，在本发明中，给定现象是即指皮肤的异常或不规律脱屑且优选地头皮的头皮屑病症。
根据另一主题，本发明涉及（i）本发明的至少一种氨基酸序列或（ii）本发明的至少一种核酸序列作为用于皮肤的脱屑且优选地头皮的头皮屑病症的生物标记的用途。
出于本发明的目的，术语“生物标记”是指分子或分子的活性，其存在或不存在、含量或活性程度、或这些参数的变化是生物的、生理学的或者病理过程的特征或者通过给药活性剂或物理治疗对该过程的产生的影响或效果的特征。
根据另一主题，本发明涉及（i）本发明的至少一种氨基酸序列或（ii）本发明的至少一种核酸序列用于表征对于皮肤的美容治疗的功效的用途。
根据一个优选的实施方式，其功效被表征的美容治疗可以是皮肤的异常脱屑且优选地头皮的头皮屑病症的美容治疗。
根据另一实施方式，本发明涉及（i）本发明的至少一种氨基酸序列或（ii）本发明的至少一种核酸序列用于从已知用于预防和/或治疗皮肤的异常脱屑且优选地头皮的头皮屑病症的一组活性剂选择推测为关于所述脱屑或所述头皮屑病症产生最大有益效果的活性剂的用途。。
根据另一主题，本发明涉及有效量的（i）本发明的至少一种氨基酸序列或（ii）本发明的至少一种核酸序列或者（iii）本发明的至少一种调节剂用于制备分离的重建的皮肤的用途。
有利地，本发明的分离的皮肤的模型可以用来再现皮肤脱屑疾病且尤其是头皮的头皮屑病症。
根据另一主题，本发明涉及一种用于表征皮肤的异常脱屑、优选地头皮的头皮屑病症的方法，至少包括在于以下的步骤：
a）在分离的皮肤样品中，优选地在分离的头皮样品中，执行所述氨基酸序列或所述核酸序列的表达、成熟或活性的定性测量或定量测量，和
b）将在步骤a）中进行的所述测量与参考测量比较。
根据另一主题，本发明涉及一种用于筛选能够调节本发明的氨基酸序列或本发明的核酸序列的活性、表达或成熟以预防和/或治疗皮肤的异常脱屑、优选地头皮的头皮屑病症的活性剂或物理治疗的方法，至少包括在于以下的步骤：
a）使所述氨基酸序列或所述核酸序列处于有利于所述氨基酸序列或所述核酸序列的活性、表达或成熟的条件下，
b）使所述氨基酸序列或所述核酸序列与待测试的至少一种活性剂接触，或者使所述氨基酸序列或所述核酸序列经受待测试的物理治疗，
c）执行所述氨基酸序列或所述核酸序列的表达、成熟或活性的定性测量或定量测量，和
d）将所述测量与参考测量比较。
根据另一主题，本发明涉及一种用于在有需要的个体中预防和/或治疗皮肤的异常脱屑且优选地头皮的头皮屑病症的美容方法，该方法包括至少一个步骤，在于：对该个体施用至少一种组合物，该组合物包括作为活性剂的至少一种试剂，该试剂调节优选地如下文定义的所述序列的活性、表达或成熟。
根据另一主题，本发明涉及一种用于表征有需要的个体中的皮肤异常脱屑、优选地头皮的头皮屑病症的美容治疗的功效的美容方法，所述方法至少包括在于以下的步骤：
a）在实施所述美容治疗之前，在取自所述个体的第一分离的皮肤样品、优选地第一分离的头皮样品中执行本发明的至少一种氨基酸序列或本发明的至少一种核酸序列的表达、成熟或活性的至少第一定性测量或定量测量，
b）在实施所述美容治疗之后，在取自所述个体的第二分离的皮肤样品、优选地第二分离的头皮样品中执行所述氨基酸序列或所述核酸序列的表达、成熟或活性的至少第二定性测量或定量测量，和
c）比较所述第一测量和所述第二测量，尤其以便从中推断出关于所述美容治疗的实施的至少一种效果的信息。
根据一个优选的实施方式，根据本发明的方法或用途可以在体内、体外、或间接体内进行，且甚至更优选体外或间接体内进行。
根据另一实施方式，本发明涉及通过选自SEQ ID No.：9至SEQ ID No.：14的氨基酸序列或者其类似物或片段表示的分离的肽。
根据另一主题，本发明涉及一种组合物，该组合物包括通过选自SEQ ID No.：8至SEQ ID No.：14的氨基酸序列或者其类似物或片段表示的分离的肽或者编码该肽的核酸序列。
根据本发明的另一主题，其涉及多细胞皮肤模型，该模型包括至少一种细胞，在所述细胞中，通过SEQ ID No.：8、或其片段或类似物表示的蛋白质的表达受到阻遏或者增强。优选地，该细胞模型是体外模型或间接体内模型。
本发明具有的优点是：提出了用于皮肤且尤其皮肤的脱屑（尤其异常脱屑）以及尤其用于头皮的头皮屑病症的新的灵敏且特定的生物标记。
通过简单地取样局部样品，观察到在角质层中存在IDE且尤其是从该蛋白质具体获取的肽可有利地定性或定量确定该蛋白质或者相应的肽的表达或活性。
例如，该取样方法可以是角质盘或剥离类型的技术，其在于将粘合元件施加到考虑的表皮。当该粘合元件分离时，去除皮肤表面的一部分。在蛋白质提取之后，随后可以通过诸如ELISA免疫酶分析或蛋白质印迹分析或者尤其是通过2D差异电泳蛋白质组分析的常规方法来分析蛋白质。
类似地，本发明具有的优点是能够提供一种新的生物标记，该生物标记适用于筛选预防和/或治疗皮肤脱屑失调、尤其是头皮的头皮屑病症的新的活性剂或新的物理治疗。
类似地，根据另一优点，本发明提供了用于预防和/或治疗皮肤脱屑疾病且尤其是头皮的头皮屑病症的新的活性剂。
有利地，本发明提出的新的活性剂增强了头皮的屏障性能。
头皮的屏障性能的保护和增强可以减少皮肤炎症、保持平衡的屏障、屏障的完整性和保持平衡的生物菌群。
头皮随后发炎较少和痒疹较少、脆弱性减小和水合较强，以及头皮屑的程度降低。
氨基酸序列和核酸序列
胰岛素降解酶（IDE）或insulysine是1019个氨基酸的蛋白质（SEQ ID No.：8），初始蛋氨酸被去除且其基因位于染色体10基因座10q23-q25上。
除非另外指明，否则术语“IDE”旨在在本专利申请中表示通过SEQ ID No.：8至SEQ ID No.：14表示的氨基酸序列，所述氨基酸序列可以已经历翻译后成熟。
根据优选的实施方式，术语“IDE”尤其旨在表示通过SEQ ID No.：8表示的氨基酸序列，更优选地通过从SEQ ID No.：8获取的序列表示的其中初始蛋氨酸已被去除的氨基酸序列。
根据一个实施方式，可以通过SEQ ID No.：1所表示的核酸序列或者该核酸序列的类似物或片段编码适用于本发明的氨基酸序列。
根据本发明的氨基酸序列或核酸序列的“类似物”这一术语旨在表示与该参考序列具有至少85%、优选至少90%且更优选至少95%的序列同一性的任何氨基酸序列或核酸序列，并且根据情况，具有相同性质的生物活性或者编码具有相同性质的生物活性的氨基酸序列。就适于在本发明中使用的类似物而言，可以提到在数据库Homologene（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/homologene）中所识别的同源序列。术语“核酸序列的类似物”尤其旨在表示由核酸码的简并获得的且编码根据本发明的氨基酸序列（尤其是上文限定的氨基酸序列）的核酸序列。
关于根据本发明的氨基酸序列的“相同性质的生物活性”这一术语尤其是指通常归因于IDE的蛋白水解性能，例如，水解胰岛素、缓激肽、胰激肽、β-淀粉样肽或胰高血糖素的能力。尤其是，根据本发明的氨基酸序列尤其由其降解形成淀粉样蛋白类型的结构的基质的能力表征。
序列同一性可以通过视觉比较或者通过任何在该领域中通常使用的计算机工具来确定，例如，在网站www.ncbi.nlm.nih.gov上可买到的BLAST程序且使用其初始参数。
根据本发明的氨基酸序列的类似物可以是拟肽类试剂。
本发明的氨基酸序列的类似物可以由根据本发明的肽的序列中的一个或多个突变和/或变异所产生的修饰而形成，这些突变和/或变异源于一个或多个氨基酸的删除或插入，或者源于一个或多个氨基酸的置换，或者源于选择性剪接。这些修饰中的多个修饰可以组合。
有利地，本发明的氨基酸序列的类似物可以包括与该参照氨基酸序列相比的保守置换。
关于在本发明中可以考虑的突变，非详尽地，可以提到一个或多个氨基酸残基用具有类似的亲水指数然而基本上不影响多肽的生物性能的氨基酸残基取代。亲水指数是根据氨基酸的疏水性和电荷而指定给氨基酸的指数（Kyte等，1982年）。
本发明针对的氨基酸序列或其类似物可以是已经历一个或多个翻译后成熟的氨基酸序列。
术语“翻译后成熟”旨在涵盖氨基酸序列在细胞中合成结束时易于经受的所有修饰，例如一个或多个磷酸化作用、一个或多个硫醇化作用、一个或多个乙酰化作用、一个或多个糖基化作用、一个或多个脂化作用（例如，法尼基化作用或棕榈酰化作用）、结构重排（例如二硫键形成和/或诸如在肽序列内的裂解）。
此外，氨基酸序列的类似物具有基本上与该氨基酸序列相同的生物活性。
此外，已知，一级氨基酸序列可以包括特定地通过蛋白酶类型的酶（诸如，胰蛋白酶）所识别的位点，一旦这些位点实际已经被识别，所述蛋白酶类型的酶将通过蛋白质水解引起该序列裂解。该蛋白质水解作用导致产生多种肽或者本发明的氨基酸序列的片段。
因此，本发明还扩展到IDE片段，在合适的情况下，该IDE片段由IDE蛋白质水解作用产生。
出于本发明的目的，表述“氨基酸序列的片段”是指根据本发明的氨基酸序列的这样的任一部分，其中，该任一部分包括所述参照序列的至少3个、或者甚至至少4个、优选至少6个连续氨基酸或者包括所述参照序列的3个至100个、优选地4至90个、优选地6个至80个、甚至更优选9个至70个连续氨基酸并且具有相同性质的生物活性。
出于本发明的目的，术语“核酸序列的片段”是指这样的核酸序列，其包括所述参照序列的至少9个、或甚至至少12个、优选至少18个连续的碱基对，或者包括所述参照序列的9个至300个、优选地12个至270个、优选地18个至240个、更优选27个至210个连续碱基对，并且编码具有与所述参照序列编码的氨基酸序列相同性质的生物活性的氨基酸序列。
根据一个实施方式，适用于本发明的氨基酸序列可以是选自SEQ ID No.：8至SEQ ID No.：14或者其类似物或片段、且优选地选自SEQ ID No.：9、SEQ IDNo.：10、SEQ ID No.：11、SEQ ID No.：12、SEQ ID No.：13和SEQ ID No.：14或者其类似物或片段的序列表示的氨基酸序列。
根据另一实施方式，在本发明中适合使用的氨基酸序列可以是：天然的或者合成的氨基酸序列，在合适的情况下，其可以在IDE的酶裂解或化学裂解之后获得，或通过化学合成或生物合成获得，或者通过从自然表达该氨基酸序列的生物组织（例如皮肤）或其转染后进行提取而获得；以及其各种翻译后形式；或者其序列完全地或部分地包括上述氨基酸序列的任何天然的或合成的氨基酸序列，例如，变异体和类似物。
通过基于重组DNA的方法，本领域的技术人员可以获得根据本发明的氨基酸序列，例如，在手册Molecular Cloning-A Laboratory Manual（第二版），Sambrook等，1989，第I至III卷，Coldspring Harbor Laboratory，Coldspring HarborPress，NY，（Sambrook）中描述的方法。
根据另一实施方式，适用于本发明的氨基酸序列还可以是与另一氨基酸序列、亲水或疏水性的靶向剂、生物转化前体、或荧光剂、放射性标记剂或比色标记剂、或者可替选的抗体标记剂融合的如上文定义的氨基酸序列。
以非限制的方式，作为可以耦联至根据本发明的氨基酸序列的化合物的示例，可以提及荧光蛋白（例如，绿色荧光蛋白）、荧光化学化合物（例如，罗丹明、荧光素或Texas
Figure BDA00003654716300111
）、磷光化合物、放射性元素（例如3H、14C、35S、121I或125I）、或者比色标记剂（例如，对牛乳糖、过氧化物酶、氯霉素乙酰转移酶、荧光素酶或碱性磷酸酶的作用敏感的显色底物）、或者抗体标记剂（例如His-Tag）。
根据可以与本发明的氨基酸序列耦联的化合物的性质，耦联可以通过化学方法（尤其是通过反应性化学官能团）或者通过本领域的技术人员已知的分子生物方法来进行。
根据一个实施方式，本发明还涉及编码本发明的氨基酸序列的核酸序列以及其在本发明的各种用途和方法中的实现。
因此，本发明还涉及：核酸序列，尤其是通过SEQ ID No.：1表示的脱氧核糖核酸序列或者核糖核酸序列；或者其类似物或片段。
有利地，本发明的氨基酸序列可以通过选自以下序列的核酸序列编码：由SEQ ID No.：1、SEQ ID No.：2、SEQ ID No.：3、SEQ ID No.：4、SEQ ID No.：5、SEQ ID No.：6或SEQ ID No.：7表示的序列或其类似物或片段。
优选地，本发明的核酸序列可以通过选自以下序列的序列表示：SEQ ID No.：2、SEQ ID No.：3、SEQ ID No.：4、SEQ ID No.：5、SEQ ID No.：6或SEQ IDNo.：7、或其类似物或片段。
本发明的核酸序列可以是任何可能的来源，即：动物来源，尤其是哺乳动物且甚至尤其是人类；或者植物来源；或者来自微生物，例如，病毒、噬菌体或尤其细菌，或者来自真菌，而对于其是否天然存在于所述生物体来源中无任何预见。
根据一个实施方式，本发明还涉及编码根据本发明考虑的氨基酸序列的分离的且纯化的核酸序列以及其类似物和片段。
根据本发明的核酸序列可以包括对应于编码根据本发明的多肽的序列的有义序列、反义序列或干扰序列。
本发明的主题还在于核酸序列，尤其是核糖核酸序列或者脱氧核糖核酸序列，其包括至少对应于编码本发明的蛋白质或肽的序列或至少对应于本发明的核酸序列或者其片段或类似物的有义序列或反义序列、尤其是小干扰RNA（siRNA）序列。
本发明还涉及能够调节酶的活性的RNA适配体序列或DNA适配体序列。
本发明还涉及通过标准技术获得的单克隆抗体或者多克隆抗体，或者优选地，通过噬菌体显示技术（通过AbD Serotec公司提出的那些技术）根据IDE选择的重组人类抗体，或者如Ablynx公司提出的“纳米抗体”。
皮肤脱屑病症和头皮屑病症
如上文指出，呈现过分干燥或过度分泌皮脂的头皮可以表现头皮屑病症，根据情况，头皮屑病症可以通过干燥的或者油腻的头皮屑薄片、或甚至表皮的瘙痒和/或炎症的存在来表征。
干燥头皮屑病症反映了头皮的干燥症，该干燥症可以与头皮角质层的过快更新组合。干燥的头皮屑薄片通常是小的且白色的或灰色的，且遍布于头皮和衣服上，这引起了不美观的视觉效果。与头皮的干燥相关的发痒可导致红斑、瘙痒或甚至炎症。
油腻头皮屑病症是脂溢性皮炎的一种形式。患油腻头皮屑病症的个体具有由堆积形成包的大且油腻的黄色鳞片覆盖的红斑的头皮。他们具有痒疹的头皮，且通常在受影响的区域上具有灼烧感。在头皮表皮中的皮脂过度分泌期间，头皮的油腻头皮屑病症显现且增强。油腻头皮屑病症的严重形式可以是脂溢性皮炎的形式。
通过病原微生物尤其是马拉色氏霉菌种（Malassezia sp.）的存在，可以增强这些现象。具有从皮脂释放脂肪酸的性质的这些微生物可以损害表皮的屏障功能且引起炎症。
在头皮的头皮屑的发作期间，皮肤屏障是不均衡的，其整体性和其水合性被损害且其生物菌群被扰乱。头皮的皮肤被刺激且不舒服、脆弱、较少地水合且对感染敏感。
本发明的氨基酸序列或核酸序列或者本发明的调节剂的用途导致保湿和生物菌群的重建且减少头皮的瘙痒。该减少通过头皮的抓挠和由此产生的屏障功能的受损的方面的降低来反映。因此，治疗的功效明显改善且进展快得多。则皮肤的发炎减轻且痒疹减少以及存在的头皮屑减少，或甚至被消除。
因此，证实根据本发明的用途、方法和组合物对于以下是尤其有效的：
-用于预防和/或治疗与过度干燥或甚至干燥病相关的头皮的失调，尤其是美学失调，
-用于预防和/或治疗与皮脂的过度排泄和/或过度分泌相关的头皮的的失调，尤其是美学失调，
-用于预防和/或治疗无论是干燥的或油腻的头皮的头皮屑病症，
-用于改善和/或重建干燥或油腻的头皮的抗菌防护，
-用于改善皮肤和头皮的舒适性，
-用于改善头皮的卫生和/或护理，
-用于赋予头皮健康的感觉，
-用于保留和/或增强头皮的皮肤的屏障功能的完整性，
-用于保持和/或修复头皮的生物力学性能，
-用于重建头皮的平衡的生物菌群，
-用于预防和/或治疗与头皮的头皮屑病症相关的瘙痒和/或脂溢性皮炎，和/或
-用于预防和/或治疗与头皮的头皮屑过度相关的炎症。
有利地，可以执行本发明以预防和/或治疗头皮的屏障性能的失调。
如下文所述，本发明考虑的头皮的头皮屑病症与头皮的牛皮癣不同。
更通常地，出于保持或修复皮肤的稳态且尤其是表皮的屏障性能的目的，关于皮肤的脱屑、尤其是异常脱屑或不规律的脱屑，可以执行本发明。因此，本发明还可以被执行以预防和/或治疗头皮的屏障性能的失调。
根据脱屑异常的严重程度，后续的皮肤脱屑失调可落在美容领域中或落在医疗领域中。根据由此涉及的领域来区分皮肤脱屑失调在本领域的技术人员的常识和惯例内。
异常或不规律的脱屑可以反映为角质层的变厚或变薄，偶尔伴随皮肤的屏障功能的失调。就审美来看，出现异常脱屑的皮肤可以是显示干燥迹象或皮肤干燥症、粗糙、头皮屑或鳞片的皮肤。
当异常脱屑大大加重时，皮肤的状况可落在医疗领域且呈现特应性皮炎、鱼鳞癣或牛皮癣。
生物标记
本发明的生物标记有利地可以表征皮肤的脱屑、尤其是异常脱屑、且优选头皮的头皮屑病症。
根据本发明的一个实施方式，本发明的生物标记的活性、表达或成熟上的增强或降低可以表示皮肤的异常脱屑或不规律脱屑、且优选表示头皮的头皮屑病症。
根据一个优选的实施方式，本发明的生物标记的活性、表达或成熟上的增强可以表示头皮的头皮屑病症。
生物标记可以用来表征美容皮肤治疗的功效，尤其是关于皮肤的异常脱屑或不规律的脱屑。尤其是，其功效被表征的美容治疗可以是头皮的头皮屑病症的治疗。
生物标记的活性、表达或成熟上的增强或降低可以表示有效的美容治疗，尤其用于对皮肤的异常脱屑或不规律脱屑、且特别是关于头皮的头皮屑病症产生有益效果的有效的美容治疗。
通过与根据本领域的技术人员已知的任一方法获得的参考测量，可以确定生物标记的活性、表达或成熟上的增强或降低。
从给定参数的观点来看，“参考测量”是在“对照”条件或“标准”条件下进行的该参数的定性测量或定量测量，例如在参考样品中确定，或者在不存在假定对该参数产生作用的治疗的样品中确定。
本发明适合使用的样品可以是取自个体或再造的皮肤的体外模型的分离皮肤的样品。
例如，用于根据本发明的氨基酸序列或核酸序列的参考测量可以是在呈现正常脱屑或规律脱屑的生理上健康的皮肤的样品中确定的或者在尤其呈现皮肤脱屑失调的皮肤的样品中且在美容治疗之前确定的与所述序列的表达、成熟或活性相关的定性值或定量值。
优选地，参考测量是统计测量，即，在多个样品上重复进行测量以获得平均值。
参考测量可以与试验测量同时或依次进行。
参考测量还可以是“历史”测量，即，在进行试验测量之前进行的测量，且被存储在例如数据库中，用于后续使用。
试验测量与参考测量的比较和在两个测量之间观察到偏差或不存在偏差可以提取出与测量的参数（例如，根据本发明的氨基酸序列或核酸序列的表达、成熟或活性的增强或降低）相关的信息。
这样的信息随后可以用来确定皮肤的正常脱屑或规律脱屑的存在，或者相反，异常脱屑或不规律脱屑的存在。
当所用的本发明的生物标记是氨基酸序列时，皮肤的异常脱屑或不规律脱屑可以通过该序列的表达偏离了正常参考值的至少1.2倍、优选至少1.5倍且更优选至少两倍来体现。
还可以对取自表皮细胞模型或取自重建的分离的皮肤的皮肤样品执行本发明，以便描述其状态。
根据另一方面，本发明的生物标记可以用于从一组用于预防和/或治疗皮肤脱屑失调的活性剂中选择一种推测为关于所述失调产生最大有益效果的活性剂。
其中可以进行使用本发明的选择的所述组活性剂可以是常规地用于治疗脱屑失调的活性剂组。更具体地，本发明的生物标记可以用于选择最适于治疗存在头皮的头皮屑病症的个体的活性剂。在该情况下，将被考虑的活性剂是常用于治疗头皮屑病症的那些活性剂。
因此，本发明的生物标记可有利地用于建立对出现皮肤脱屑失调且尤其是出现头皮的头皮屑病症的个体个性化的咨询服务。
根据生物标记相对于正常参考的偏离程度，咨询顾问可以做出朝向最合适的产品的选择以便获得生物标记相对于正常的最佳校正，同时减少发生可能证实对良好遵守治疗有害的不利影响或负面影响的风险。
根据另一方面，本发明的生物标记还可用在用于选择且组成一组个体来进行临床试验的方法中，所述临床试验致力于评估推测为关于皮肤的异常脱屑且优选地头皮的头皮屑病症具有活性的产品的功效。
有利地，为了在临床试验后获得有意义的结果，可以使用本发明的生物标记以便限定其生物标记相对于参考值的偏离程度相同的个体的同质组。
根据一个实施方式，本发明涉及一种用于表征皮肤的脱屑状态的方法，尤其是体外或间接体内方法。
本发明的方法有利地可以表征由异常或不规律脱屑产生的皮肤脱屑失调，且尤其是头皮的头皮屑病症。
根据另一实施方式，本发明涉及一种美容的或者非医疗的方法，尤其体外或间接体内的方法，该方法用于表征有需要的个体中的美容皮肤治疗、优选异常皮肤脱屑的治疗、优选头皮的头皮屑病症的治疗的功效，所述方法至少包括在于以下的步骤：
a）在实施美容治疗之前，在取自所述个体的第一分离的皮肤样品中、优选地分离的头皮样品中执行本发明的至少一种氨基酸序列或本发明的至少一种核酸序列的表达、成熟或活性的至少第一定性测量或定量测量，
b）在实施美容治疗之后，在取自所述个体的第二分离的皮肤样品且优选分离的头皮样品中执行本发明的所述氨基酸序列或本发明的所述核酸序列的表达、成熟或活性的至少第二定性测量或定量测量，和
c）比较第一测量和第二测量，尤其以便从中推断出涉及所述美容治疗的实施的至少一种效果的信息。
理所当然地，在步骤a）和步骤b）中进行的测量必须彼此相当，因此涉及同一参数。
优选地，本发明的方法可以证实能够使皮肤的异常脱屑或不规律脱屑且尤其是头皮的头皮屑病症正常化的美容治疗的效果。
更优选地，本发明的方法可以表征美容治疗、尤其是头皮的头皮屑病症的治疗的功效。
本发明的核酸序列的表达、成熟或活性的定性测量或定量测量可以通过本领域的技术人员已知的任一方法来确定。
关于适合本发明的方法，可以提及定量聚合酶链式反应（Q-PCR）或非定量聚合酶链式反应（PCR）（在存在逆转录酶的情况下（RT-PCR）或不存在逆转录酶的情况下（Q-RT-PCR））、Northern印迹法、核糖核酸酶保护试验法、采用DNA芯片的方法、采用转录芯片的方法、采用寡核苷酸芯片的方法和原位杂交法。
关于适于检测本发明的核酸序列且尤其是mRNA序列的试剂，可以提到标记的核酸探针，该探针可以与本发明的核酸序列杂交。
通过本领域的技术人员已知的任一方法可以容易地获得这样的核酸探针。
因此，根据本发明的核酸序列可以用来制备正义和/或反义的寡核苷酸引物，该引物在高度严格条件下与序列SEQ ID No.：1、SEQ ID No.：2、SEQ ID No.：3、SEQ ID No.：4、SEQ ID No.：5、SEQ ID No.：6或SEQ ID No.：7中的至少一个序列或其类似物或片段杂交。
核酸序列的表达还可以利用本领域中已知的任何技术来通过确定所述序列所编码的氨基酸序列的表达而间接确定，所述技术为例如蛋白质印迹、ELISA、BRADFORD方法或LOWRY方法或者如下文指出的2D电泳法。
本发明的氨基酸序列的表达、成熟或活性的定性测量或定量测量可以通过本领域的技术人员已知的任一方法来进行。
就用于检测氨基酸序列的表达、成熟或活性的方法而言，可以提到：蛋白质印迹，狭线印迹法，斑点印迹法，单重或多重类型的ELISA（酶联免疫吸附试验）方法，蛋白质组方法或糖组方法，双向差异电泳蛋白质组分析，利用基于银的染色剂、考马斯蓝或SYPRO在聚丙烯酰胺凝胶中染色多肽的方法，免疫荧光方法，UV吸收方法，通过常规的电子显微镜或共焦显微镜的免疫组织化学方法，FRET（荧光共振能量转移）方法，TR-FRET（全时间分辨FRET）方法，FLIM（荧光寿命成像显微）方法，FSPIM（荧光光谱成像显微）方法，FRAP（光脱色后荧光恢复）方法，报告基因方法，AFM（原子力显微）方法，表面等离子共振方法，微量热方法，流式细胞术方法，生物传感器方法，放射免疫检定（RIA）方法，等电位聚焦方法，和酶测试，使用肽芯片、糖芯片、抗体芯片的方法，质朴分析方法、和SELDI-TOF类型（Ciphergen）的光谱方法、或借助NMR类型的质量光谱的定量方法（多反应监测）。
更通常，尤其可以使用更定量且更灵敏的免疫酶分析方法，该方法使用蛋白液。这些ELISA类型的方法组合靶体-抗原-特定的捕获抗体和检测抗体的配对。可以使用市售的抗体或特别开发的多克隆、单克隆或重组的抗体。还可以使用高容量的多重ELISA技术。因此可以提到该类型的多重方法，诸如在Luminex珠上的抗体（例如，来自Bio-Rad的Bioplex）、通过来自公司MesoScale Discovery（MSD）的化学发光的单重或多重方法、或者诸如在平坦的表面上的抗体（抗体阵列）（例如，由公司MesoScale Discovery提出的方法）的类型的方法。
具体地，可以有利的是，通过抗体（在合适的情况下，以标记的形式）检测本发明的氨基酸序列的表达。这样的抗体可以通过可直接检测到的物质或者通过与另一反应物反应而可检测到的物质来标记。
术语“抗体”通常旨在表示单克隆抗体或多克隆抗体以及免疫球蛋白片段，该免疫球蛋白片段能够结合抗原且可以通过本领域的技术人员已知的任一基因工程技术或者通过完整的抗体的酶裂解或化学裂解制备。
可以通过本领域的技术人员已知的任一方法获得可用作用于评估表皮状况的工具的抗体，如Antibodies:A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，冷泉港，纽约（1990）中描述的方法。
根据优选的实施方式，可以有利的是，通过2D差异电泳蛋白质组分析或借助iTRAQ同量异序标记或者借助无标记的光谱计数或者SILAC类型（如果涉及细胞培养物）检测本发明的氨基酸序列的表达。
这样的方法对于本领域的技术人员是已知的且可以如下文的实施例所述的有利地实施。
具体地，关于本发明的氨基酸序列的术语“活性”是指如上文指出的蛋白水解活性或者用于减轻、预防或治疗皮肤脱屑失调（如上文所述）且尤其头皮的头皮屑病症的活性。
这样的活性可以通过本领域的技术人员已知的任一方法来确定，例如，通过对IDE的常见基质（例如，胰岛素、胰高血糖素或β-淀粉样蛋白）的蛋白水解活性进行评估。
优选地，通过测量本发明的氨基酸序列的表达的变化可以进行皮肤状态的确定或者用于皮肤的美容治疗的功效的表征，本发明的氨基酸序列优选地通过选自SEQ ID No.：8至SEQ ID No.：14的序列或其类似物或片段表示。
由于本发明的方法的实施不需要依赖于侵入性技术，故本发明的方法是特别有利的。因此，表皮的样品可以通过“剥离”技术获得且通过本领域技术人员已知的常规分析技术来直接分析。
这些剥离物是施加到表皮的表面的粘性表面，例如来自3M的
Figure BDA00003654716300191
D’squam（来自CuDERM的市售粘合剂）、氰基丙烯酸酯胶粘剂或者清漆“剥离”方法或角质盘（cornéodisques）。借助这些剥离物，附着的角质细胞和它们的胞间隙的内容物可以被取样并且随后经过提取以便获得蛋白质内容物。
适用于本发明的方法的样品的获取也可以通过“洗涤”皮肤表面更直接地进行，例如，通过如法国专利FR2667778中所述的叶片涡轮机类型或者螺旋单元类型的附件结合液体电路进行，或者简单地通过在皮肤的表面处添加/取样一滴缓冲液而进行。
作为指导，可以提到适于实施本发明的其他取样方法，例如，通过双刀片系统刮擦角质层的上部的方法。该技术可以收集鳞片，随后可以通过各种技术直接分析鳞片以便确定矿物质、氨基酸或脂肪的含量。
有利地，以评估用于皮肤护理且尤其头皮护理的美容治疗或美容活性剂的功效为目的，本发明的标记之一可以用于个体的更有效且更严格的临床前选择。
类似地，如上文指出，本发明的生物标记可有利地用于体外、间接体内或体地评估活性剂的功效。
类似地，本发明的生物标记可以用于根据个体的皮肤生物标记表达概况来对所述个体的美容治疗建立个性化建议。
筛选
根据本发明的一个方面，本发明涉及本发明的生物标记用于筛选（尤其是体外或间接体内）用于皮肤的活性剂或物理治疗的用途或者用在筛选（尤其是体外或间接体内）用于皮肤护理的活性剂或物理治疗的方法中的用途。
所筛选的活性剂或物理治疗尤其可以用于预防和/或治疗皮肤的异常脱屑或不规律脱屑，优选用于预防和/或治疗头皮的头皮屑病症。
本发明的用途或筛选方法可包括，将根据本发明的氨基酸序列或核酸序列的活性、表达或成熟的测量与参考测量进行比较。
参考测量可以如上文限定。
具体地，参考测量可以是在不存在所测试的活性剂或物理治疗的样品中确定定的关于所述序列的表达、成熟或活性的定性值或定量值。
因此，可以通过在不存在待测试的活性剂或物理治疗的情况下重复本发明的方法的步骤、尤其是重复本发明的方法的步骤a）、b）和c），获得参考测量。
试验测量与参考测量的比较和观察到在两个测量之间存在偏差或不存在偏差可以提取关于测试的活性剂或物理治疗的效果的信息。
本发明的氨基酸序列或核酸序列的表达、成熟或活性的定性确定或定量确定可以通过本领域的技术人员已知的任一方法且尤其是如上文所述的方法来进行。
根据一个实施方式，对能够调节本发明的氨基酸序列的活性的活性剂或物理治疗的筛选可以通过测量属于所述氨基酸序列可参与的信号转导途径或代谢途径的靶分子（例如，报告基因系统）的活性或表达来进行。
根据一个实施方式，本发明的方法可以在非细胞系统（即，不包括细胞但再现细胞功能的系统）中或者在分离的细胞样品中执行。
根据本发明的方法可以在分离的细胞样品、非细胞样品上、在本发明的分离的氨基酸序列上或分离的核酸序列上执行。可以通过皮肤活检、从培养液中的细胞、尤其是从表皮模型或者从角质层的微创皮肤表面取样、尤其是通过粘合（“带状剥离”）或通过如上文所述的简单洗涤、或可替选地通过合成（就序列而言），获得这些样品或序列。
根据本发明，这些样品或序列用于筛选活性剂或物理治疗的用途落在该领域中的本领域技术人员的常识内。
有利地，关于适于本发明的细胞样品，可以提到表达本发明的氨基酸序列的角质细胞或任何其他皮肤细胞类型的样品。
优选地，对活性剂或对物理治疗的筛选可以如下执行：在存在和不存在所筛选的活性剂或物理治疗的情况下，测量本发明的氨基酸序列的表达或活性的变化，且本发明的氨基酸序列优选通过选自SEQ ID No.：8至SEQ ID No.：14或其类似物或片段、且优选选自SEQ ID No.：9至SEQ ID No.：14或其类似物或片段的序列来表示。
调节剂
出于本发明的目的，表述“调节剂”或“能够调节根据本发明的氨基酸序列或核酸序列的表达、成熟或活性的活性剂或者物理治疗”是指能够直接或间接地作用于根据本发明的至少一种氨基酸序列或至少一种核酸序列、或者作用于细胞内信号转导途径或细胞外信号转导途径或代谢途径的要素、或用于调节涉及所述氨基酸序列或所述核酸序列的转录和/或翻译的任何化合物或物理现象。
根据本发明优选的调节剂或物理治疗可以是直接作用于本发明的至少一种氨基酸序列或本发明的至少一种核酸序列以调节所述氨基酸序列或所述核酸序列的表达、成熟或活性的化合物或物理治疗。
出于本发明的目的，从给定效果的观点来看，术语“调节”是指刺激或抑制该效果的行为。
从根据本发明的筛选得出的活性剂或物理治疗可以有利地用于美容目的，尤其是关于皮肤脱屑失调、尤其是皮肤的屏障性能的失调，特别是头皮的屏障性能的失调。
根据优选的实施方式，本发明的调节剂是用于抑制本发明的氨基酸序列的活性、表达或成熟的试剂。甚至更优选地，本发明的调节剂是用于抑制本发明的氨基酸序列的酶活性的试剂。
抑制本发明的氨基酸序列的酶活性的调节剂可以选自三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、N-乙基马来酰亚胺、1,10-菲咯啉、杆菌肽、胰岛素、人体生长激素（hGH）、苯甲基磺酰氟（PMSF）、脂肪酸（诸如，棕榈酸、亚油酸、棕榈酰-辅酶A、亚麻酰-辅酶A）、金属离子（诸如，Mg2+、Mn2+、Zn2+、Li+）、强啡肽、泛素、金属螯合剂（尤其是Zn-螯合剂（诸如，乙二胺四乙酸（EDTA））、具有以下通式的异羟肟酸肽：
Figure BDA00003654716300221
其中R1、R2、R3、R4、R5和R6彼此独立，且
其中：
-R1是H、OH、O-（C1-C6）烷基或（C1-C6）烷基，
-R2是（C5-C10）芳基、包括至少一个N、O或S的（C5-C10）杂芳基、苯基、1-萘基、2-萘基，在合适的情况下，这些基团被卤素（尤其是Cl或F）、(C1-C6）烷基或O-(C1-C6）烷基、腈、CN、（C5-C10）芳基、包括至少一个N、O或S的（C5-C10）杂芳基、或CO2H取代，
-R3是NHC（=NH）NH2、NH2、NHC（O）（C1-C6）烷基或NHC（O）（C5-C10）芳基，
-R4是[C（=O）CH（CH2）oR7NH]pH或[C（=O）CH（CH2）oR7NH]pC（=O）Me，其中R7是4-羟基苯基、CO2H、3-吲哚基、或苯基、o在从0到3的范围中且p在从0到2的范围中，
-R5是H或Me，
-R6是H或Me，
-m在从0到3的范围中且n在从0到3的范围中。
在WO 2008/156 701中特别描述了本发明适合使用的异羟肟酸肽。
优选地，本发明适合使用的异羟肟酸肽可以是前述通式（I）的化合物，其中，R2是2-萘基，且R3是NHC（=NH）NH2，且R1、R4、R5和R6如上文所限定。
更优选地、R2可以是芳基、杂芳基、被取代的芳基、被取代的杂芳基、被卤素取代的芳基（诸如，2-氟代苯基、3-氟代苯基、4-氟代苯基）、被卤素取代的杂芳基、被烷基或芳基取代的芳基、被烷基或芳基取代的杂芳基，诸如2-叔丁基、3-叔丁基、4-叔丁基、苯基、1-萘基、2-萘基、2-苯并噻吩、-反式-CH=CH-苯基、2-苯基、3-苯基或4-苯基。
尤其是，本发明适合使用的异羟肟酸肽可以选自：
Figure BDA00003654716300251
除了上文所述的抑制剂之外，作为IDE抑制剂，还可以提到核苷磷酸类型的化合物或IDE的肽片段、以及干扰RNA、DNA适配子或RNA适配子或阻断酶的活性位点或外部位的抗体。
根据本发明的一个实施方式，本发明的调节剂，尤其是抑制本发明的氨基酸序列的活性、表达或成熟的试剂，可以有利地用于预防和/或治疗头皮的头皮屑病症。更优选地，本发明涉及抑制本发明的氨基酸序列的酶活性的调节剂用于预防和/或治疗头皮的头皮屑病症的用途。
根据另一方面，本发明还涉及本发明的调节剂，该调节剂选自本发明的氨基酸序列的活性、表达或成熟的激活剂、尤其是本发明的氨基酸序列的酶活性的激活剂。
根据一个实施方式，激活酶活性的调节剂可以选自苏拉明、生长抑制因子、缓激肽、β-内啡肽、强啡肽、ATP、iPPP、ADP、AMP、脂肪酸（尤其是例如二十二碳六烯酸）和具有下式的化合物：
Figure BDA00003654716300252
Cabrol等特别描述了这些化合物（PLoSOne，2009）。
在IDE的酶活性的激活剂中，还可以提到核苷磷酸、IDE的肽片段、或激活酶的抗体。
作为可以根据本发明的用途或方法筛选的调节剂，还可以提到：抗体，尤其是来自于重组抗体库的抗体，例如，来自公司Antibodies By Design，其能够阻断酶的活性位点或外部位、或者能够激活酶（例如借助变构效应）；或者干扰RNA（诸如siRNA、miRNA或shRNA）；或RNA适配子或DNA适配子。
组合物
本发明还涉及组合物，尤其是美容组合物，其包括在生理上或美容上可接受的介质中的有效量的本发明的至少一种氨基酸序列、或者本发明的至少一种核酸序列、至少一种能够调节所述氨基酸序列或所述核酸序列的活性、表达或成熟的活性剂。
尤其是，本发明涉及一种美容组合物，其包括选自SEQ ID No.：9至SEQ IDNo.：14的氨基酸序列或者其类似物或片段表示的肽、或者编码这样的肽的核酸序列。
出于本发明的目的，表述“生理上可接受的介质”旨在表示适于组合物局部施用到皮肤、头皮或嘴唇、或者适于口服或肠胃外给药（例如，皮内给药或皮下给药）的介质。
本发明的组合物可以含有考虑的领域中常见的佐剂，例如，亲水性或亲脂性的胶凝剂、亲水或亲脂性的添加剂、防腐剂、抗氧化剂、溶剂、芳香剂、填料、掩蔽剂、气味吸收剂和着色剂。
根据本发明的组合物的各种成分的用量是在考虑的领域中常规使用的用量。
当然，在本发明的组合物中含有的本发明的氨基酸序列或核酸序列或者根据本发明的活性剂的用量（也称为“有效量”）取决于活性剂的性质和所需的效果并且因此可以在很大程度上改变。
为了给出数量级，组合物可以含有的根据本发明的氨基酸序列或核酸序列或活性剂的用量占组合物的总重的0.00001%至50%、尤其是组合物的总重的0.001%至10%以及尤其占组合物总重的0.1%至1%。
根据另一实施方式，本发明的美容组合物还可以包括至少一种另外的美容和/或治疗活性剂。
另外的活性剂
作为可以在本发明的上下文中使用的另外的活性剂的示例，可以提到化妆品用油（例如，硅油、甘油三酸酯类型的植物油）、基于烃的油（例如，Parleam油）、以及脂肪酸和脂肪醇的酯。
还可以使用用于改善皮肤和/或其附属物的状态的其他活性剂，例如，保湿或增湿活性剂或者用于改善天然类脂屏障的活性剂（例如，神经酰胺、胆固醇硫酸盐和/或脂肪酸）和其混合物。
还可以使用对皮肤和/或其附属物具有活性的酶，例如，蛋白酶、脂肪酶、葡萄糖苷酶、酰胺酶、脑苷脂酶、和/或melanas、和其混合物。
适于实施本发明的活性剂的其他示例包括：止痛活性剂、抗酵母活性剂、抗菌活性剂、抗寄生物活性剂、抗真菌活性剂、抗病毒活性剂、甾族抗炎症活性剂、麻醉活性剂、止痒活性剂、褪皮活性剂、清除自由基活性剂、抗脂溢性活性剂、抗头皮屑活性剂、抗痤疮活性剂、用于预防皮肤老化和/或用于改善皮肤状态的活性剂、抗皮炎活性剂、抗刺激活性剂、免疫调节活性剂、用于治疗皮肤干燥的活性剂、防汗活性剂、抗银屑病活性剂、抗UV活性剂、抗组胺活性剂、愈合活性剂、仿晒活性剂、抗氧化剂（例如，绿茶或其活性片段）、甘油、锂皂石、咖啡因、芳香精油、染料、脱色活性剂、血脂调节剂、软化活性剂、提神活性剂、脱臭活性剂、脱敏活性剂、美白活性剂或营养活性剂、用于减少皮肤分化和/或增殖和/或色素沉积的活性剂及其混合物。
此外，作为另外的活性剂，可以提及Tween 20或其他温和的洗涤剂、螯合剂、益生菌剂、锌-羟基吡啶硫酮或其他抗真菌剂、鞣花酸、促脱皮剂和/或去皮剂、抗瘙痒化合物、多酚类和其衍生物、糖类和还原糖类、抗炎剂、止汗剂或抗静电剂等。
就可以特别适于在本发明中使用的另外的活性剂而言，还可以提到：益生菌微生物、益生元活性剂、用于促进皮肤防御因子的合成的活性剂、用于重建表皮细胞的分化/增殖平衡的活性剂（尤其例如视黄醇或类视黄醇的活性剂）、或者保湿活性剂。
美容用途
本发明涉及有效量的至少一种调节所述氨基酸序列或所述核酸序列的活性、表达或成熟的试剂、尤其是如上文所限定的调节剂作为用于预防和/或治疗皮肤的异常脱屑或不规律脱屑、尤其是头皮的屏障性能的失调且优选头皮的头皮屑病症的活性剂的美容用途。
根据优选的实施方式，本发明的用途可执行抑制本发明的氨基酸序列的活性、表达或成熟的调节剂，且优选本发明的氨基酸序列的酶活性的抑制剂。这样的试剂尤其可以选自如上文限定的抑制剂。
根据另一实施方式，本发明的用途可执行激活本发明的氨基酸序列的酶活性的调节剂，其有利地选自如上文限定的激活剂。
根据另一方面，本发明涉及用于预防和/或治疗有需要的个体的皮肤的异常或不规律脱屑且尤其是头皮的头皮屑病症的美容或非医疗方法。
本发明的方法可包括在于以下的至少一个步骤：向所述个体施用至少一种包括作为活性剂的调节本发明的所述序列的活性、表达或成熟的至少一种试剂（且尤其是上文所限定的试剂）的组合物。
优选地，考虑的调节剂是抑制本发明的氨基酸序列的活性的试剂，且尤其如上文所限定的试剂。
本发明的方法或用途可以预防和/或治疗尤其如上文所限定的皮肤脱屑失调，且优选头皮的头皮屑病症。
本发明的使用方法可以减少鳞片或头皮屑的数量和尺寸。
有利地，由于实施根据本发明的用途或方法，头皮可以具有改善的美学外观和修复的屏障功能性能。
通常，本发明的方法或用途可以增强皮肤、尤其头皮的屏障性能。
优选地，本发明的方法可包括将本发明的局部用组合物的至少一个涂层局部施加到有需求的个体的皮肤的至少一部分、尤其是头皮。
根据本发明的局部应用的美容方法可有利地包括将本发明的组合物与另外的不同于本发明的组合物且用于对皮肤进行护理和/或化妆的、优选地用于护理头皮的美容组合物或皮肤病用组合物联合施加、同时施加、相继施加或者在一段时间中分开施加。
根据另一优选的实施方式，本发明的美容方法可以口服实现，尤其是通过施用用于美容目的的至少一种食品或食用组合物。
根据另一优选的实施方式，本发明的美容方法可以肠胃外施用。本发明的美容方法的肠胃外施用被执行以排除任何外科手术且仅目标在于执行用于美学目的的皮肤的表面治疗。
因此，肠胃外实施的本发明美容方法通过适用于表皮内和/或真皮内和/或皮下注射的任一注射技术或装置来进行。
例如通过美塑疗法来进行这样的给药。
因此，肠胃外实施的美容方法仅导致皮肤的外层穿透且因此在任何医学或医疗范围外。
可替选地，肠胃外给药可以有助于使用全身贴片进行给药。
根据本发明的美容方法可每日进行，例如以每天施用一次或每天施用二次或三次的速率，例如，早上一次和晚上一次。
根据本发明的美容方法可在一周至几周、或者甚至几个月的时间段内进行，该时间段还可在没有进行治疗的几个月或者甚至几年的时间段后重复进行。
例如，根据本发明的美容方法可以构思本发明的组合物的施用例如以每天1次、2次或3次或更多次的速率进行，通常在至少4周、或甚至4周到15周的长时间段中例如每天1次、2次或3次更多次的速率进行，在适当的情况下，停用一个时间段或多个时间段。
重建的皮肤
根据另一方面，本发明涉及有效量的本发明的至少一种氨基酸序列或本发明的至少一种核酸序列或本发明的至少一种调节剂用于制备分离的重建的皮肤的用途。
对于评估用于美容应用和皮肤病学应用的活性剂和制剂的安全性和功效而言，形成尽可能地接近体内条件的器官模型是有很大益处的。
使用培养介质中的本发明的至少一种氨基酸序列、或本发明的至少一种核酸序列或本发明的至少一种调节剂能够改善所开发的模型的质量。
此外，使用本发明可以获得再现皮肤脱屑的分离的重建的皮肤的模型。尤其是，可以考虑使用激活调节剂，尤其是如上文限定的激活调节剂，以制备再现脱屑、优选再现头皮屑病症的皮肤模型。
根据另一方面，本发明涉及一种用于制备分离的多分层上皮细胞模型且优选分离的重建的皮肤的方法，该方法至少包括以下步骤：使至少有效量的根据本发明的至少一种氨基酸序列或至少一种核酸序列或至少一种调节剂与能够产生分离的重建的皮肤且尤其能够产生角化细胞的细胞接触。
重建的皮肤模型可包括多种细胞类型，例如，角化细胞、纤维母细胞、拉格汉斯（Langerhans）细胞和黑色素细胞。纤维母细胞类型的细胞可选地可以是受到辐射的。
有利地，本发明的重建的皮肤的模型可以用作头皮的模型。本发明的分离的重建的头皮的模型可有利地用于筛选适用于头皮护理的新型活性剂且尤其是新型抗头皮屑活性剂的目的。
该模型和其制备对于本领域的技术人员是已知的。
根据另一方面，本发明还涉及用于制备多分层的上皮细胞模型且优选重建的皮肤模型的方法，该方法包括至少一个步骤：培养所述模型的至少一个细胞类型的细胞，所述细胞已经被基因修饰以抑制或增强本发明的氨基酸序列或核酸序列的表达。
被基因修饰以抑制本发明的氨基酸序列或核酸序列的表达的细胞（这些细胞也称为“敲除（knock-out）”）的产生可以通过本领域的技术人员已知的任一方法来进行。
例如，通过核酸片段的转染和同源重组可以获得这样的细胞，该核酸片段插入或替换表达氨基酸序列（其表达待抑制）的基因。
同样地，通过将以下这样的核酸序列转染入细胞中，可以抑制其表达待抑制的给定基因的表达：该核酸序列编码对源于该基因的mRNA具有特异性的干扰RNA。
通过本领域的技术人员已知的任一方法可以执行被基因修饰以增强本发明的氨基酸序列或核酸序列的表达的细胞的产生。
例如，通过包括在启动子的控制下编码本发明的氨基酸序列的基因的质粒的转染可以获得这样的细胞。所用的启动子可以实现该基因的诱导表达或组成型表达或组织特异表达。
此外，可以使用多种转染载体，该转染载体允许将待表达的基因引入到待转染的细胞的染色体中。
可以抑制或增强基因表达的所有这些分子生物技术对于本领域的技术人员是已知的且不必详细说明。
附图说明
图1：示出通过2D差异电泳蛋白质组分析获得的识别为IDE的蛋白质斑点的放大图。
图2：是图1中观测的斑点的体积的强度的图。
图3：示出通过IDE的蛋白质印迹的免疫检测。
图4：示出在图3示出的蛋白质印迹期间检测的带的平均强度。
具体实施方式
出于本发明的目的，除非另外指明，“一个”应该被理解为“至少一个”的含义。
下文以说明的方式呈现实施例和附图而不意味着限制本发明。
实施例
实施例1
头皮中IDE的表达
1-材料和方法
执行使用无头皮屑的头皮和具有头皮屑的头皮的无创样品所执行的2D差异电泳蛋白质组分析。
对6个无头皮屑的志愿者（附着的头皮屑级别从0到0.25）和6个具有头皮屑的志愿者（附着的头皮屑级别从3.25到4）进行研究。志愿者是36岁至39岁的短发男士。志愿者的头皮屑病症的分级是由专家根据以下标准分类进行的，该标准分类提供了附着的头皮屑在0至5之间的记分量表。
在2cm的区域上通过角质盘（corneodisc）（标号GODS100，CuDerm）来进行取样。对于各个样品产生四个饱和的角质盘。提取出可溶的蛋白质，将其放进本地缓冲液（TBS，1M的NaCl，1%Triton X100）。
在过滤之后，蛋白质通过加入丙酮而沉淀。将蛋白质小球溶解在用40mM的DTT补充的提取缓冲液III（BioRad；Ref.：163-2104）中。
对于对应于志愿者的各个样品，根据供应商的推荐规范，通过在11cm的带（GE-Healthcare）上由IEF分离（pH 3-11）沿着第一维度且在10.5%-14%的标准梯度凝胶（Bio-Rad）上沿着第二维度执行二维电泳。
在用根据供应商协议所用的SyproRuby（标号S4942，Invitrogen）染色凝胶之后，在根据以下参数进行图像获取之后，采用ProgenesisTM软件进行图像分析：激发：460/80；发射：620/30；分辨率：50μm；曝光3s；平场：1s；曝光1s。
在第一步骤中，图像被排列到一起且强度被标准化。在第二步骤中，在已限定组之后，采用Progenesis Samespots软件（NonLinear Dynamics）来进行统计分析。根据“p值”（小于0.05）、“倍数”（大于2，在一个组的最强斑点和另一组的最弱斑点之间的强度的比率）和“q值（大于0.8）”来进行斑点选择。
接着，所选定的斑点被切除且蛋白质被胰蛋白酶消化且通过LC-MS/MS来分析。
查询蛋白质数据库UniRef100.15.3.9606.智人以识别蛋白质。
2-结果
根据上文限定的准则，在所选择的斑点中，IDE被识别为支持在具有头皮屑的组中过度表达。
图1和图2给出了对于各个志愿者的该蛋白质斑点的放大图和斑点的体积的图示。
这些结果证实了IDE作为用于皮肤、尤其是皮肤脱屑且尤其用于头皮的头皮屑病症的生物标记的用途。IDE因此可有利地用于筛选用于治疗头皮的头皮屑病症的活性剂或用于表征美容皮肤治疗的功效。
实施例2
通过皮肤中IDE的表达的蛋白质印迹来确认
1-材料和方法
实施例1中的上文所述的样品的浓度被排列，且2μg被置于10-20%标准凝胶（BioRad）的孔中。因此，蛋白质通过SDS-PAGE电泳来分离。在根据标准协议半干地转移在PVDF膜上之后，用针对关注的蛋白质的一抗在4℃下培养蛋白质整夜。然后用针对第一抗体的二抗（偶联至过氧化物酶）来进行第二培养。
电致化学发光试剂盒用于显示靶蛋白。
采用FluorSmax（Biorad）来获取图像，且使用Quantity-One软件（Biorad）来量化该带。市售的抗IDE抗体在1/5000（参考AB28560，AbCam）的稀释液中使用。
2-结果
图3示出获得的蛋白质印迹图像。所检测的带的平均强度通过图4中的直方图来表示。
IDE的免疫检测显示出在具有头皮屑的个体中的过度表达。该观测确认了在实施例1中观测的差异识别。
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Claims (17)

1.（i）由核酸序列SEQ ID No.：1或SEQ ID No.：1的类似物或片段编码的至少一种氨基酸序列或（ii）至少所述核酸序列用于筛选能够调节所述氨基酸序列或所述核酸序列的活性、表达或成熟以预防和/或治疗头皮的头皮屑病症的活性剂或物理治疗的体外用途或间接体内用途。
2.根据前一项权利要求所述的用途，其中，所述核酸序列选自SEQ ID No.：2至SEQ ID No.：7或其类似物或片段。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述氨基酸序列选自SEQ ID No.：8至SEQ ID No.：14或其类似物或片段。
4.有效量的至少一种调节如权利要求1至3中限定的氨基酸序列或权利要求1至2中限定的核酸序列的所述活性、表达或成熟的试剂作为用于预防和/或治疗头皮的头皮屑病症的活性剂的美容用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其中，所述调节剂是用于抑制所述氨基酸序列的酶活性的试剂，选自：三磷酸腺苷ATP；二磷酸腺苷ADP；N-乙基马来酰亚胺；1,10-菲咯啉；杆菌肽；胰岛素；人体生长激素hGH；苯甲基磺酰氟PMSF；脂肪酸，诸如，棕榈酸、亚油酸、棕榈酰-辅酶A、亚麻酰-辅酶A；金属离子，诸如，Mg2+、Mn2+、Zn2+、Li+；强啡肽；泛素；金属螯合剂，尤其是Zn-螯合剂，诸如，乙二胺四乙酸EDTA；具有以下通式的异羟肟酸肽：
其中，R1、R2、R3、R4、R5和R6彼此独立，且
其中：
-R1是H、OH、O-（C1-C6）烷基或（C1-C6）烷基，
-R2是（C5-C10）芳基、包括至少一个N、O或S的（C5-C10）杂芳基、苯基、1-萘基、2-萘基，在合适的情况下，这些基团被卤素、（C1-C6）烷基或O-（C1-C6）烷基、腈基、CN、（C5-C10）芳基、包括至少一个N、O或S的（C5-C10）杂芳基、或CO2H取代，所述卤素尤其是Cl或F，
-R3是NHC（=NH）NH2、NH2、NHC（O）（C1-C6）烷基或NHC（O）（C5-C10）芳基，
-R4是[C(=O)CH(CH2)oR7NH]pH或[C(=O)CH(CH2)oR7NH]pC(=O)Me，其中，R7是4-羟基苯基、CO2H、3-吲哚基、或苯基，o为0到3且p在为0到2，
-R5是H或Me，
-R6是H或Me，
-m在从0到3的范围且n在从0到3的范围。
6.有效量的至少一种调节如权利要求1至3中限定的氨基酸序列或权利要求1至2中限定的核酸序列的活性、表达或成熟的试剂作为用于预防和/或治疗头皮的屏障性能失调的活性剂的美容用途，所述调节剂是所述氨基酸序列的酶活性的激活剂，所述调节剂选自：苏拉明；生长抑素；缓激肽；β-内啡肽；强啡肽；三磷酸腺苷ATP；磷酸三异丙基苯酯iPPP；二磷酸腺苷ADP；一磷酸腺苷AMP；脂肪酸，尤其是例如二十二碳六烯酸；和化合物
Figure FDA00003654716200021
7.（i）根据权利要求1至3所限定的至少一种氨基酸序列或（ii）如权利要求1或2所限定的至少一种核酸序列作为用于头皮的头皮屑病症的生物标记的体外用途或间接体内用途。
8.（i）根据权利要求1至3所限定的至少一种氨基酸序列或（ii）如权利要求1或2所限定的至少一种核酸序列用于表征头皮的头皮屑病症的美容治疗的功效的体外用途或间接体内用途。
9.（i）根据权利要求1至3所限定的至少一种氨基酸序列或（ii）如权利要求1或2所限定的至少一种核酸序列用于从已知用于预防和/或治疗头皮的头皮屑病症的一组活性剂中选择推测为对于所述头皮屑病症产生最大有益效果的活性剂的体外用途或间接体内用途。
10.有效量的（i）根据权利要求1至3所限定的至少一种氨基酸序列或（ii）如权利要求1或2所限定的至少一种核酸序列或（iii）用于调节所述序列、优选如权利要求5或6中限定的所述序列的活性、表达或成熟的至少一种试剂用于制备再现头皮屑病症的分离的重建皮肤的体外用途或间接体内用途。
11.一种用于表征头皮的头皮屑病症的体外方法或间接体内方法，至少包括在于以下的步骤：
a）在分离的头皮样品中，执行如权利要求1至3所限定的氨基酸序列或权利要求1或2所限定的核酸序列的表达、成熟或活性的定性测量或定量测量，和
b）将在步骤a）中进行的所述测量与参考测量比较。
12.一种用于体外筛选或间接体内筛选能够调节如权利要求1至3所限定的氨基酸序列或权利要求1或2所限定的核酸序列的活性、表达或成熟以预防和/或治疗头皮的头皮屑病症的活性剂或物理治疗的方法，至少包括在于以下的步骤：
a）使所述氨基酸序列或所述核酸序列处于有利于所述氨基酸序列或所述核酸序列的活性、表达或成熟的条件下，
b）使所述氨基酸序列或所述核酸序列与待测试的至少一种活性剂接触，或者使所述氨基酸序列或所述核酸序列经受待测试的物理治疗，
c）执行所述氨基酸序列或所述核酸序列的表达、成熟或活性的定性测量或定量测量，和
d）将所述测量与参考测量比较。
13.一种用于预防和/或治疗有需要的个体中的头皮的头皮屑病症的美容方法，至少包括如下步骤：向所述个体施用至少一种包括作为活性剂的至少一种调节所述序列、优选地如权利要求5或7所限定的所述序列的活性、表达或成熟的试剂的组合物。
14.一种用于表征有需要的个体中的头皮的头皮屑病症的美容治疗的功效的体外美容方法或间接体内美容方法，所述方法至少包括在于以下的步骤：
a）在实施所述美容治疗之前，在取自所述个体的第一分离的头皮样品中执行如权利要求1至3所限定的至少一种氨基酸序列或如权利要求1或2所限定的至少一种核酸序列的表达、成熟或活性的至少第一定性测量或定量测量，
b）在实施所述美容治疗之后，在取自所述个体的第二分离的头皮样品中执行所述氨基酸序列或所述核酸序列的表达、成熟或活性的至少第二定性测量或定量测量，和
c）比较所述第一测量和所述第二测量，尤其以便从中推断出关于所述美容治疗的实施的至少一种效果的信息。
15.一种分离的肽，选自SEQ ID No.：9至SEQ ID No.：14、或其类似物或片段。
16.一种组合物，包括根据前一项权利要求所限定的肽或编码该肽的核酸序列。
17.一种多细胞体外皮肤模型或多细胞间接体内皮肤模型，包括至少一种细胞，在所述至少一种细胞中，SEQ ID No.：8或其片段或类似物的蛋白质的表达被抑制或增强。
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