BR112012032040B1 - COMPOSIÇÕES MICROBIANAS, PROCESSO MICROBIANO PARA USO AGRÍCOLA E HYTa ATIVADO - Google Patents

COMPOSIÇÕES MICROBIANAS, PROCESSO MICROBIANO PARA USO AGRÍCOLA E HYTa ATIVADO Download PDF

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Abstract

composição e processo microbiano para uso agrícola. composições microbianas comprendendo pelo menos dois componentes são reveladas. o primeiro componente hyta que é um consórcio de micróbios derivados de solos férteis e fontes comerciais. o segundo componente compreende pelo menos um de quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos. os vários micróbios em hyta são capazes de fixar nitrogênio, digerir proteínas e outros biopolímeros como quitina e quitosana, fornecer proteção contra patógenos de planta e suplementar a flora microbiana do solo. são também revelados processos onde as composições mocrobianas acima mencionadas ão utilizadas para tratar o solo, sementes, mudas e/ou folhagens de planta individualmente ou em combinação com quitina, quitosana, glucosamina e/ou aminoácidos.

Description

(54) Título: COMPOSIÇÕES MICROBIANAS, PROCESSO MICROBIANO PARA USO AGRÍCOLA E HYTA ATIVADO (51) Int.CI.: A01N 63/00; A01N 63/02; A01N 63/04; A01N 37/44; A01N 25/00; A01P 3/00; A01P 7/04 (52) CPC: A01N 63/00,A01N 63/02,A01N 63/04,A01N 37/44,A01N 25/00 (30) Prioridade Unionista: 16/06/2010 US 61/355,447 (73) Titular(es): AGRINOS AS (72) Inventor(es): JAMIE LÓPEZ-CERVANTES; KARL REINER FICK ROCHIN
1/33
COMPOSIÇÕES MICROBIANAS, PROCESSO MICROBIANO PARA USO AGRÍCOLA E HYTa ATIVADO
O presente pedido reivindica o benefício de acordo com 35 U.S.C. §119 do pedido provisional US número de série 61/355.447, depositado em 16 de junho de 2010.
CAMPO DA INVENÇÃO
Processos microbianos e composições microbianas são revelados que aumentam a produção de cultura, aumentam os processos defensivos de planta, diminuem o nível de patógenos de planta e reduzem a quantidade de fertilizante utilizado.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Micróbios foram anteriormente utilizados em agricultura. Os exemplos incluem aqueles revelados nas patentes US 4.952.229; 6.232.270 e 5.266.096.
Quitina também foi utilizada em agricultura como um complexo de proteína (patente US 4.536.207) ou em combinação com vários micróbios (patentes US 6.524.998 e 6.060.429).
Quitosana em combinação com outros componentes foi utilizada em aplicações agrícolas. Vide, por exemplo, as patentes US 6.649.566; 4.812.159; 6.407.040; 5.374.627 e 5.733.851. Foi também utilizada para tratar sementes de cultura de cereal. Vide patente US 4.978.381. A patente US 6.524.998 também revela que quitosana pode ser utilizada em combinação com micróbios específicos para uso agrícola.
Não obstante o acima, há necessidade de fornecer composições e processos microbianos aperfeiçoados que melhorem o rendimento da cultura e reduzam a quantidade de fungicidas e inseticidas convencionais utilizados em aplicações de agricultura e horticultura.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Composições microbianas que compreendem pelo menos dois componentes são reveladas. O primeiro componente compreende HYTa que é um consórcio de micróbios derivados de solos férteis e fontes comerciais. O segundo componente compreende pelo menos um de quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos. Os vários micróbios em HYTa são capazes de fixar nitrogênio, digerir proteínas e outros biopolímeros como quitina e quitosana, fornecendo proteção contra patógenos de plana e suplementar a flora microbiana de solo.
São também revelados processos onde as composições microbianas acima mencionadas ou seus componentes são utilizados para tratar solo, sementes, mudas e/ou
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2/33 folhagem de planta.
Em modalidades preferidas, HYTa é ativado em uma solução aquosa por 24 a 168 horas para permitir que os micróbios cresçam e reproduzam antes de serem utilizados no processo. As condições da incubação influenciam as propriedades iniciais gerais de HYTa.
Em uma modalidade preferida, HYTa é ativada na presença de quitina. Micróbios responsivos a quitina em HYTa proliferam nesse ambienta. Isso resulta em HYTa que tem todas as propriedades de HYTa. Entretanto, tem capacidade aumentada contra patógenos de planta que contêm quitina.
Em uma modalidade preferida, o HYTa é ativado na presença de quitina, quitosana, 10 glucosamina e aminoácidos. Nessa modalidade, após crescimento, o HYTa pode conter quitina, quitosana, glucosamina e/ou aminoácidos residuais. Sob tais circunstâncias, a cultura constitui a composição microbiana revelada e pode ser aplicada diretamente no solo, semente, mudas ou folhagem da planta. Alternativamente, um ou mais segundos componentes podem ser adicionados para suplementar os segundos componentes já na composição ou alterar os componentes presentes na composição microbiana desse modo formada.
Em algumas modalidades, o HYTa ativado é combinado com um ou mais segundos componentes e aplicado ao solo, semente, mudas ou folhagem de planta ou o HYTa e o(s) segundo(s) componente(s) são aplicados separadamente. Tais segundos componentes incluem quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos.
A aplicação das formulações microbianas reveladas permite a eliminação ou redução significativa na quantidade de fertilizante, fungicida e inseticida utilizado em aplicações agrícolas. Em algumas modalidades, o uso das formulações microbianas resulta em diminuição na quantidade de emissões de gás estufa.
É também revelada uma composição de solo tratada que compreende solo tratado com HYTa.
Também é revelada uma planta tratada que compreende planta tratada com HYTa.
São também reveladas sementes, mudas e plantas tratadas que compreendem semente, muda ou planta tratada com HYTa.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A figura 1 é um diagrama da área de teste envolvendo o crescimento de trigo durum em Sonora, México onde HYTa e HYTb foram utilizados.
A figura 2 é o mesmo diagrama que a figura 3 e mostra zonas que foram
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3/33 comprometidas e sofreram dano por fatores externos durante o experimento.
A figura 3 representa graficamente os resultados de tratar o solo e folhagem de trigo durum com HYTa e HYTb.
A figura 4 mostra o rendimento de melões como uma função de tamanho para solo 5 e folhagem que não foi tratado ou foi tratado com HYTa e HYTb.
A figura 5 mostra o rendimento de batatas tendo diâmetros maiores do que 42 mm que foram tratadas com HYTa, HYTb e HYTc em comparação com batatas não tratadas.
DESCRIÇÃO DETALHADA
Composições microbianas compreendendo HYTa e um segundo componente são 10 reveladas. HYTa é um consórcio de micróbios derivados de solos adicionais e fontes comerciais. O segundo componente compreende pelo menos um de quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos. Os vários micróbios em HYTa são capazes de fixar nitrogênio, digerir proteínas e outros biopolímeros como quitina e quitosana, fornecendo proteção contra patógenos de planta e suplementando a flora microbiana de solo. As composições microbianas ou seus componentes são utilizadas para tratar solo, sementes, mudas e/ou folhagem de planta.
HYTa
Como utilizado aqui, o termo “HYTa” se refere a um consórcio de micróbios derivados de amostras de solo férteis e fontes comerciais. HYTa foi depositado com o
American Tissue Type Culture (ATCC), Rockville, Maryland, em 19 de maio de 2010 com uma designação de depósito atribuída de PTA-10973.
A tabela 1 identifica alguns dos micróbios em HYTa que se acredita serem responsáveis pelos efeitos benéficos observados quando é utilizado para tratar solo e/ou folhagem.
Tabela 1
Bactérias
I. Azotobacter
1. Azotobacter vinlandii
II. Clostridium
1. Clostridium pasteurianum
2. Clostridium beijerinckii
3. Clostridium sphenoides
4. Clostridium bifermentans
III. Lactobacillus
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1. Lactobacillus paracasei ss. Paracasei
2. Lactobacillus acidophillus
3. Lactobacillus delbrueckii ss. Bulgaricus
4. Lactobacillus brevis
IV. Bacilos
1. Bacillus amyloliquefaciens (Bacillus subtilis ((SILoSil®
BS) )
2. Bacillus thuringiensis var. kurstakii (Bacillus thuringiensis (cepas HD-1) )
3. Bacillus thuringiensis var. canadensis (grupo Bacillus cereus)
4. Bacillus pasteurii (grupo Bacillus cereus)
5. Bacillus sphaericus (subgrupo I, III, e IV)
6. Bacillus megaterium (subgrupo A)
V. Acetobacter ou Gluconacetobacter
1. Acetobacter aceti ss. liquefaciens
2. Acetobacter aceti ss. xylimum
VI. Enterococcus
1. Enterococcus faecium (subgrupo A)
VII. Pediococcus
1. Pediococcus pentosaceus
VII. Rhizobium
1. Rhizobium japonicum
Fungos
I. Saccharomyces
1. Saccharomyces cerevisiae
II. Penicillium
1. Penicillium roqueforti
III. Monascus
1. Monascus ruber
IV. Aspergillus
1. Aspergillus oryzae
V. Trichoderma
1. Trichoderma harzianum (TRICHOSIL)
Plantae
I. Arthrospiro
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1. Arthrospira platensis
II. Ascophyllum
1. Ascophyllum nodosum
Outros microorganismos contidos em HYTa: Nitrobacter, Nitrosomonads, 5 Nitrococcus, Pseudomonas, Micrococcus luteus, Actinomycete, Azotobacter vinelandii, Lactobacillus casei, Trichoderma harzianum, Bacillus licheniformis, Pseudomonas fluorescens e Streptomyces.
Micróbios ativos em HYTa incluem microorganismos de fixação de nitrogênio nativos ao solo. Esses são Azotobacter vinelandii e Clostridium pasteurianum. Bacillus subtilis provê enzimas para romper o resíduo da planta. Bacillus cereus provê enzimas adicionais para romper resíduo de planta e penicilinase para matar bactérias indesejáveis. Bacillus megaterium degrada açucares complexos após ruptura de resíduo de cultura. Lactobacillus prove alimento para os micróbios em HYTa e controla o pH do ambiente. Os organismos Nitrobacter oxidam amônia em nitreto (NO2) enquanto os micróbios de
Nitrosomonas oxidam nitreto em nitrato (NO3).
Uma propriedade importante de HYTa é a fixação de nitrogênio atmosférico. A capacidade de fixação de nitrogênio dos micróbios em HYTa é aumentada pela assistência de outros organismos em HYTa. A fixação de nitrogênio requer que fósforo (P), potássio (K) e carbono (C) estejam disponíveis. HYTa contém micróbios que são capazes de decompor P, K e C no solo. Além disso, as bactérias de fixação de nitrogênio fornecem uma fonte de nitrogênio para os outros micróbios em HYTa.
A fixação de nitrogênio pode ocorrer em um modo não simbiótico pelas bactérias Nitrosomonas, Nitrobacter, Azotobacter vinelandii, e Clostridium pasteurinum presentes em HYTa ou em um modo simbiótico como ocorre em nódulos de raiz por meio de bactérias Rhyzobium.
O carbono necessário pelos micróbios de fixação de nitrogênio em HYTa é fornecido pelos decompositores de C que convertem os compostos orgânicos complexos em solo em compostos simples como açúcares, alcoóis e ácidos orgânicos. Os decompositores C incluem muitos dos micróbios acima identificados.
Fósforo é necessário para os micróbios de fixação de nitrogênio para proliferar e é obtido da atividade metabólica dos decompositores P que convertem fósforo imobilizado no solo em um nutriente de fósforo biodisponível. Decompositores de P em HYTa incluem Azotobacter, Bacillus subtilis, Pseudomonas fluorescens e Micrococcus luteus.
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O potássio exigido pelos fixadores de nitrogênio é fornecido pelos micróbios decompositores K presentes em HYTa que ativam o potássio do solo. Decompositores K em HYTa incluem Pseudomonas fluorescens.
Três micróbios importantes em HYTa são Bacillus subtilis (SILoSil® BS) Bacillus 5 thuringiensis cepas HD-1 e HD-73 (SILoSil® BT), e Trichoderma harzianum (TRICHOSIL). Esses organismos estão presentes em ATTC depósito PTA-10973. Foram originalmente obtidos de Biotecnologia Agroindustrial S.A. DE C.V., Morelia, Michoacan,
México.
Bacillus subtilis ((SILoSil® BS) é uma bactéria Gram positiva que é mesofílica e 10 cresce em uma temperatura ótima entre 25 e 35°C. é aeróbica e pode crescer em condições anaeróbicas e utiliza uma ampla variedade de fontes de carbono. Contém dois reductases de nitrato, um dos quais é utilizado para assimilação de nitrogênio. É capaz de secretar amilase, proteases, pululanases, quitinases, xilanases e lipases.
Bacillus thuringiensis (cepas HD-1 e HD-73 (SILoSil® BT)) são bactérias 15 facultativas anaeróbicas Gram positivas, na forma de um peritrichous flagella. cepas HD-1 e HD-73 sintetizam cristais com formas geométricas diversas de atividade protéica e inseticida durante o período de espório. Cepas HD-1 e HD-73 secretam exoquitanases quando em um meio contendo quitina e podem ser utilizadas para a degradação dos resíduos de crustáceo durante a produção de quitooligossacarídeos.
Trichoderma harzianum (TRICHOSIL) é um fungo saprófito. Apresenta ação antibiótica e competição biológica e por esse motivo tem propriedades de controle biológico. Produz enzimas que degradam paredes da célula ou uma combinação de tais atividades. Produz glucanases, quitinases, lípases e proteases extracelulares quando interage com alguns fungos patogênicos, como Fusarium.
Como mostrado acima o metabolismo de cada grupo de bactérias é estreitamente interdependente e vive em uma associação simbiótica estreita para o desempenho adequado de HYTa.
Além de carbono, hidrogênio, fósforo, potássio, enxofre e vários elementos residuais, uma mistura de fatores de crescimento especial, como complexo B, aminoácidos
L livres, e elementos residuais ultrassolúveis são importantes para crescimento bacteriano ótimo. Leveduras de fermentação são incorporadas em HYTa para fornecer esses componentes. O processo de fixação de N2 requer grandes quantidades de ATP. A quantidade de ATP naturalmente presente não é suficiente para promover fixação N2
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7/33 biológica. A fermentação da levedura em HYTa compensa o grande déficit de energia. Durante fermentação, ácidos orgânicos são formados no processo respiratório e juntamente com o fósforo liberado pelos decompositores de P, formam ATP. O ATP é utilizado no processo de fixação de nitrogênio biológico.
HYTa contém enzimas e microorganismos de solo benéficos que substituem aqueles que foram esgotados devido ao uso excessivo de produtos químicos que resultam em diminuição de rendimentos de cultura. Por aumentar a atividade microbiana no solo com HYTa, a bactéria faz com que os nutrientes e microelementos sejam absorvidos (mineralizados) mais eficientemente e eficazmente por plantas.
Húmus é transformado por alguns dos microorganismos em HYTa que impregnam tanto o solo como o aparelho radical da planta. Esse processo provê nutrição aumentada para a planta. Isso aumenta os nutrientes e os elementos essenciais disponíveis no solo que podem ser absorvidos por plantas.
O uso de HYTa individualmente ou em combinação com quitina, quitosana, glucosamina e/ou aminoácidos (1) provê nutrientes e elementos no solo que aumentam os rendimentos de cultura em 25 a 55%, (2) reduz emissões de gás estufa, (3) aumenta a eficiência de fertilizantes minerais (3) reduz o uso de fungicidas convencionais e outros pesticidas, (4) aumenta a produção de reguladores de crescimento de planta, (5) melhora a estrutura do solo, lavoura, e penetração e retenção de água, (6) limpa os resíduos químicos e (7) desloca o pH do solo em direção a pH neutro.
COMPOSIÇÕES MICROBIANAS
HYTa pode ser utilizado, individualmente ou em combinação, com um ou mais componentes selecionados do grupo de um ou mais aminoácidos, quitina, quitosana e/ou glucosamina. Em alguns casos, acetil-D-glucosamina pode ser incluído na composição microbiana. A composição microbiana inclui todas e quaisquer combinações dos componentes acima mencionados. Combinações particularmente preferidas incluem: (1) HYTa e quitina; (2) HYTa e quitosana; (3) HYTa e glucosamina; (4) HYTa e aminoácidos; (5) HYTa, quitina e aminoácidos; (6) HYTa, quitina, quitosana e aminoácidos; (7) HYTa, quitosana, glucosamina e aminoácidos; (8) HYTa, quitosana e glucosamina e (9) HYTa, quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos, o último sendo particularmente preferido.
Quanto HYTa é crescido na presença de quitina, quitosana e/ou aminoácidos pode conter quitina, quitosana e/ou aminoácidos residuais. Sob tais circunstâncias, a cultura de HYTa constitui a composição microbiana revelada e pode ser aplicada diretamente ao solo,
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8/33 semente, mudas ou folhagem de planta. Alternativamente, um ou mais dos segundos componentes ser adicionados para suplementar os segundos componentes na composição ou mudar sua composição.
Como utilizado aqui, o termo “aminoácidos” se refere a uma composição contendo 5 dois ou mais aminoácidos. Aminoácidos incluem triptofano, histidina, treonina, tirosina, valina, metionina, isoleucina, leucina, fenil alanina, lisina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, serina, glicina, alanina, prolina, asparagina e arginina. Em modalidades preferidas, aminoácidos são fornecidos pelo uso de HYTb (vide abaixo).
Como utilizado aqui, o termo “quitina” se refere a um biopolímero consistindo 10 predominantemente em unidades de repetição de N-acetil-D-glucosamina ligado beta-1-4-. Quitina é encontrada no ambiente natural como um material estrutural primário do exoesqueleto de animais como Artrópode, por exemplo, crustáceos, insetos, aranhas, etc., Molusca, por exemplo, lesmas, lula, etc., Coelentara, por exemplo, organismos como hidoides e água-viva, e Nematódea, como vermes não segmentados. Quitina também é encontrada em vários fungos incluindo membros do gênero Fusarium. Quitina pode ser extraída dessas fontes naturais por tratamento com álcali, ou por um processo de biodegradação. O peso molecular de quitina varia dependendo de sua fonte e método de isolamento. Em modalidades preferidas, a quitina é derivada como um sólido da biodegradação de quitina contendo Artrópodes como descrito nas aplicações Bioderpac.
Prefere-se que a quitina tenha um diâmetro de aproximadamente 50 a 75 micra para facilitar sua aplicação via sistemas de irrigação por pulverização e gotejamento.
Como utilizado aqui, o termo “quitosana” é um polissacarídeo que consiste predominantemente em unidades de repetição de D-glucosamina. Quitosana é obtida por desacetilação de quitina. O grau de desacetilação em comparação com quitina é preferivelmente maior do que 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90% e 95%. Prefere-se que o nível de desacetilação seja suficiente para tornar a quitosana solúvel em água em pH ácido. O peso molecular de quitosana varia dependendo de sua fonte e método de isolamento. Quitosana inclui oligômeros de quitosana. Em modalidades preferidas, quitosana é precipitada em pH 9,0 a partir da fração aquosa obtida da biodegradação de quitina contendo Artrópodes como descrito nas aplicações de Bioderpac.
Como utilizado aqui, o termo “oligômero de quitosana” se refere a quitosana tendo ou mais unidades de repetição de D-glucosamina e, no caso de desacetilação incompleta de quitina, uma ou mais unidades de N-acetil-D-glucosamina. Em modalidades preferidas,
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9/33 os oligômeros de quitosana são derivados da fração aquosa gerada na biodegradação de quitina contendo Artrópodes como descrito nas aplicações de Bioderpac. Em algumas modalidades oligômeros de quitosana são utilizados como o segundo componente da composição microbiana.
Como utilizado aqui, o termo “glucosamina” se refere a um monossacarídeo de amino. Em modalidades preferidas é o resíduo de açúcar que forma a espinha dorsal dos biopolímeros quitina e quitosana. Glucosamina está presente na fração aquosa gerada durante a biodegradação de quitina contendo Artrópodes como descrito nas aplicações de Bioderpac. Glucosamina induz plantas a tornar quitinase como uma defesa para patógenos contendo quitina.
HYTb e HYTc
Como utilizado aqui, o termo “HYTb” se refere à fração aquosa e “HYTc” se refere à fração sólida obtida da biodegradação de Artrópodes como refugo de camarão derivado da biodegradação ou Artrópodes contendo quitina como descrito no pedido de patente US número de série 61/289.706, depositado em 23/12/09 intitulado “Biodegradation of crustacean by-products”, pedido de patente US número de série 61/299.869, depositado em 29/1/10 intitulado “Biodegradation process e microbial composition” e pedido de patente US número de série 61/355.365, depositado em 16 de junho de 2010, intitulado “Biodegradtion process e composition” cada um dos quais é incorporado a título de referência aqui na íntegra.
Em resumo, no processo de biodegradação de artrópode uma composição microbiana é utilizada para degradar o artrópode ou componentes de refugo do artrópode. É um processo de fermentação de ácido láctico. A composição microbiana contém micróbios que produzem enzimas que podem degradar os componentes contendo quitina do artrópode para quitina, quitosana, N-acetil glucosamina e glucosamina. Também contém micróbios que produzem enzimas que podem degradar proteínas e gorduras para produzir aminoácidos e lipídeos. Uma composição microbiana preferida para degradação de artrópode é mencionada como HQE. HQE foi depositado com o American Type culture Collection (ATCC) Manassas, VA, EUA em 27 de abril de 2010 e recebeu a designação de depósito de patente PTA-10861.
Em uma modalidade preferida, o artrópode marítimo é um crustáceo e o crustáceo preferido é camarão. O subproduto de camarão compreende cefalotórax e/ou exoesqueleto de camarão.
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No processo de biodegradação, prefere-se que a fermentação seja fermentação aeróbica facultativa. Também se prefere que a fermentação seja realizada em uma temperatura de aproximadamente 30°C a 40°C. O pH é preferivelmente menor do que aproximadamente 6, mais preferivelmente menor do que aproximadamente 5,5. Entretanto, o pH deve ser mantido acima de aproximadamente 4,3. A fermentação é realizada por aproximadamente 24 a 96 horas. Em algumas modalidades, a fermentação é realizada por aproximadamente 24 a 48 horas e mais preferivelmente 24 a 36 horas. Esses tempos de fermentação são bem mais curtos do que os tempos de fermentação da técnica anterior, típicos de 10 a 15 dias para obter substancialmente a mesma quantidade de digestão, embora sem formação detectável de quitosana e glucosamina.
A separação da mistura é preferivelmente por centrifugação. (por exemplo, aproximadamente 920 g). A separação por gravidade pode ser também utilizada, porém não é preferida devido ao tempo necessário para obter separação.
A mistura separa em três frações: sólida, aquosa e lipídeo. A fração sólida 15 compreende quitina e é designada HYTc. A fração aquosa compreende hidrolisado de proteína, aminoácidos, quitosana e glucosamina e é designada HYTb. A fração de lipídeo compreende esteróis, vitamina A e E e pigmentos de carotenóide como astaxantina.
Prefere-se que HQE seja utilizado no processo de biodegradação. Em outras modalidades, prefere-se que HYTb anteriormente preparado seja adicionado a HQE ou o caldo de fermentação. Como descrito acima, HYTb contém aminoácidos, quitosana, glucosamina e elementos residuais incluindo cálcio, magnésio, zinco, cobre, ferro e manganês. HYTb também contém enzimas como enzimas lácticas, proteases, lípases, quitinases, ácido láctico, polipeptídios e outros carboidratos. HYTb pode conter também microorganismos dormentes de um processo de biodegradação anterior. Tais microorganismos podem se tornar reativados e, em combinação com HQE, contribuir para um processo de biodegradação mais robusto em comparação com quando HQE é utilizado por si só como de outro modo descrito aqui.
Mais particularmente, o processo inclui as seguintes etapas:
a. Ativação das células microbianas em uma solução de base de açúcar para aumentar seu crescimento e a formação de biomassa.
b. Moagem dos subprodutos de camarão (cefalotórax e exoesqueleto) para fazer uma pasta homogênea.
c. Mistura homogênea da pasta de subproduto de camarão com pelo menos
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10% do inoculo ativado.
d. Ajuste dos valores de pH a menos do que 6,0 na mistura utilizando uma solução de ácido cítrico para inibir o crescimento de microorganismos e promover o desenvolvimento de células microbianas que constituem o inoculo.
e. Fermentação da mistura em um sistema agitado não contínuo em temperaturas compreendidas em uma faixa de 30 a 40°C pelo menos por 96 horas mantendo o pH em menos do que 5,0. O pH é monitorado periodicamente. Se o pH elevar acima de 5,0, um tampão de ácido cítrico é adicionado em uma quantidade para manter o pH abaixo de 5,0.
f Centrifugação do fermento para separar as três frações principais: quitina, hidrolisado líquido e pasta pigmentada.
g. Enxágüe da quitina bruta e recoleta da água de enxágüe para recuperar sólidos finos ou minerais.
h. Secagem da quitina e armazenagem.
i. Secagem e armazenagem do hidrolisado líquido.
j. A pasta pigmentada (fração de lipídeo) é armazenada em recipientes fechados para conservação.
O processo e fundamentos operacionais são compreendidos de forma melhor com referência à seguinte descrição detalhada
Ativação de células microbianas
Uma composição microbiana como revelado aqui é utilizada como inoculo. O inoculo de HQE tem uma concentração de micróbios de aproximadamente 2,5 a 3,0% (peso/v). HQE é ativado por diluição a 5% em solução de cana de açúcar (3,75% de concentração final de cana de açúcar) e incubado a 37°C por 5 dias. HYTb (10 ml por litro de cultura) é preferivelmente adicionado para fornecer uma fonte de minerais e aminoácidos naturalmente derivados. O crescimento celular dos microorganismos foi estimado por densidade óptica medida a 540 nm. A ativação é completa em uma densidade óptica de aproximadamente 1,7. A concentração de micróbios após ativação é aproximadamente 1,9 a 3,0% (peso/v).
Preparação de amostras
As amostras de subprodutos de camarão são obtidas de plantas de processamento de camarão. Resíduo levemente descongelado e moído (1500 g por lote) é misturado com 99 gramas de concentração de cana de açúcar (concentração final 6,6% em peso) e 85,5 ml de
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HQE ativado 5% (v/peso) (densidade óptica de célula = 1,7). A seguir o pH é ajustado para
5.5 utilizando 2 M de ácido cítrico.
Controle de fermentação
A mistura é incubada a 36°C com uma agitação não contínua por 96 h. durante o processo de fermentação, o pH é monitorado utilizando um potenciômetro, e a acidez titulável total (TTA, %) foi determinada por titulação com 0.1 N NaOH até que um pH de
8.5 seja obtido. A TTA é expressa como uma percentagem de ácido láctico.
Condições de separação
O produto de fermentação é uma silagem viscosa que tem uma cor laranja intensa, devido a presença de astaxantina. A ensilagem é centrifugada (5°C) a 1250 rpm (930 g) por 15 min. para obter a quitina, os hidrolisados líquidos, e a pasta de pigmento. A fase superior (pasta de pigmento) é separada manualmente. Os hidrolisados líquidos são separados por decantação, e o sedimento que constitui a quitina bruta é lavado com água destilada para separar sólidos finos. O líquido resultante é coletado e seco. A quitina bruta, hidrolisados líquidos e sólidos finos são secos a 60°C. Todas as frações são armazenadas para proteger as mesmas contra luz.
Outras composições microbianas para a produção de HYTb e HYTc são expostas na tabela 2 a seguir.
Tabela 2
Composição de cultura
Microorganismo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Bacillus subtilis X X X X X X X X
Bacillus cereus X X X X X X
Bacillus megaterium X X
Azotobacter vinelandii X X X X X X
Lactobacillus acidophilus X X X X X X X X
Lactobacillus casei X X X X X X
Trichoderma harzianum X X X X X X X X
Rhizobium japonicum X X X X X X
Clostridium pasteurianum X X X X X X
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Bacillus licheniformis X X X X X X X X
Pseudomonas fluorescens X X X X X
Bacillus thuringiensis X X X X X X
Streptomyces X X X X X X X
Nitrobacter X X X X X
Micrococcus X X X X X
Proteus vulgaris X X X X X
Esses microorganismos são preferivelmente derivados de HQE e são mencionados como Bacillus subtilis ((SILoSil® BS), Bacillus cereus (Bioderpac, 2008), Bacillus megaterium (Bioderpac, 2008), Azotobacter vinelandii (Bioderpac, 2008), Lactobacillus acidophilus (Bioderpac, 2008), Lactobacillus casei (Bioderpac, 2008), Trichoderma harzianum (TRICHOSIL), Rhizobium japonicum (Bioderpac, 2008), Clostridium pasteurianum (Bioderpac, 2008), Bacillus licheniformis (Bioderpac, 2008), Pseudomonas fluorescens (Bioderpac, 2008), cepas Bacillus thuringiensis HD-1 e HD-73 (SILoSil® BT), Streptomyces (Bioderpac, 2008), Micrococcus (Bioderpac, 2008), Nitrobacter (Bioderpac, 2008) e Proteus (Bioderpac, 2008). Cada desses organismos pode ser prontamente isolado de HQE e recombinados para formar a composição microbiana revelada para degradar artrópodes para fazer HYTb e HYTc.
HYTb contém aminoácidos (aproximadamente 12% em peso), quitosana (aproximadamente 1,2% em peso), glucosamina (aproximadamente 1% em peso) e elementos residuais (aproximadamente 6% em peso) incluindo cálcio, magnésio, zinco, cobre, ferro e manganês. Também contém enzimas como enzimas lácticas, proteases, lípases, quitinases entre outras, acido láctico, polipeptídios e outros carboidratos. A gravidade específica de HYTb é tipicamente aproximadamente 1,050 - 1,054. O teor médio de aminoácido em HYTb para certos aminoácidos é exposto na tabela 2.
Tabela 3
Hidrolisados de pó seco de perfil de aminoácido (mg por g de peso seco)
aminoácido hidrolisados de pó seco
ácido aspártico 38
ácido glutâmico 39
Serina 16
Histidina 9
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aminoácido hidrolisados de pó seco
Glicina 28
Treonina 14
Alanina 36,1
Prolina 25,8
Tirosina 70
Arginina 22,2
Valina 20
Metionina 16,4
Isoleucina 18,3
Triptofano 3,1
Leucina 23
fenil alanina 39
Lisina 13
Total 431
Em algumas modalidades, HYTb pode constituir um segundo componente que é combinado com HYTa ou utilizado separado com uma correção de solo e/ou como uma pulverização de folhagem.
O componente primário de HYTc é quitina. Tem um peso molecular médio de 5 aproximadamente 2300 daltons e constitui aproximadamente 64% em peso da composição. Aproximadamente 6% de HYTc contém minerais incluindo cálcio, magnésio, zinco, cobre, ferro e manganês, aproximadamente 24% em peso de proteína e 6% de água. Tem uma gravidade específica de aproximadamente 272 kg/m3. Em algumas modalidades, HYTc pode constituir um segundo componente que é combinado com HYTa ou utilizado separadamente como uma correção de solo e/ou como uma pulverização de folhagem.
HYTa é preferivelmente utilizado com HYTb e HYTc em combinação ou separadamente como uma correção de solo ou pulverização de folhagem.
Os micróbios em HYTa exigem os elementos residuais cálcio, magnésio, enxofre, boro, manganês, zinco, molibdênio, ferro, cobre, sódio e silício. Esses elementos residuais importantes podem ser freqüentemente obtidos de reações químicas tóxicas que não são apropriadas para produtos certificados orgânicos. Por conseguinte, prefere-se que esses elementos residuais sejam obtidos de uma fonte orgânica como HYTb e/ou HYTc.
Ativação de HYTa
As composições microbianas acima mencionadas podem ser utilizadas para tratar
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15/33 solo, sementes, mudas, e/ou folhagem de plantas. Entretanto, HYTa é primeiramente ativado antes de uso.
Em modalidades preferidas, HYTa é ativado por incubar um inoculo de HYTa em uma solução aquosa por 24-168 horas para permitir que os micróbios cresçam e reproduzam antes de serem utilizados no processo de tratar solo, sementes, mudas e/ou folhagem de planta. As condições da incubação influenciam as propriedades iniciais gerais de HYTa.
Em uma modalidade, um inoculo de HYTa é diluído com água em uma razão de 1/100 e deixado incubar em uma temperatura de aproximadamente 36°C em um pH de 6,8 - 7,1 por aproximadamente 24 a aproximadamente 168 horas (7 dias). HYTb pode ser opcionalmente utilizado durante essa ativação. Os micróbios de fixação de nitrogênio Azotobacter vinelandii e Clostridium pasteurianum proliferam sob condições de crescimento de nitrogênio reduzidas. Além disso, à medida que a concentração de oxigênio diminui, Lactobacilo, incluindo Lactobacillus acidophilus e Lactobacillus casei, proliferam. As unidades de formação de colônia (CFUs) para algumas das bactérias em HYTa ativado são expostas na tabela 3:
Tabela 4
Azotobactervinelandii Clostridium pasteurianum Bacillus subtilis Bacillus cereus Bacillus megaterium Lactobacillus
Nitrobacter
Nitrosomonas
Total
101.050.000 Cfu/mL 104.275.000 Cfu/mL 1.100.000 Cfu/mL 25.000 Cfu/mL 10.000 Cfu/mL 500.000 Cfu/mL 5.000 Cfu/mL 2.500 Cfu/mL 206.967.000 Cfu/mL
O HYTa obtido após essa incubação retém as propriedades benéficas de HYTa porém é particularmente apropriado como uma correção de solo para tratamento de solos sem nitrogênio dadas as capacidades de fixação de nitrogênio de Azotobacter vinelandii e Clostridium pasteurianum.
Se patógenos de solo como fungos filamentosos a partir do gênero Fusarium ou nematódeos estiverem presentes, se acredita que estejam presentes, HYTa pode ser ativado sob condições substancialmente iguais porém na presença de quitina. A quitina estimula a expansão dos micróbios responsivos à quitina como Pseudomonas fluorescens,
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Trichoderma harzianum, Bacillus thuringiensis, Streptomyces sp., Nitrobacter sp., Micrococcus sp., e Bacillus subtilis. HYTa obtido sob essas condições tem propriedades antifúngicas, fungicidas, antinematódeos, nematodicidas e inseticidas até o ponto em que tais patógenos contêm quitina. Tais composições microbianas podem ser aplicadas diretamente no solo ou na semente, mudas e/ou folhagem de plantas. Tais composições microbianas têm também a capacidade de fixar nitrogênio como na incubação acima mencionada na ausência de quitina.
Além de incubar com quitina, HYTa pode ser ativado com quitina e aminoácidos. Uma fonte preferida de quitina é HYTc. Quando HYTc é utilizado a proteína e minerais em HYTc estão também presentes durante a ativação.
Além disso, HYTa pode ser ativada na presença de aminoácidos e quitosana. Uma fonte preferida de aminoácidos e quitosana é HYTb. Quando HYTb é utilizado glucosamina e os outros componentes de HYTb estão também presentes durante a ativação.
Opcionalmente, HYTa pode ser incubado com quitina, aminoácidos e quitosana.
Uma fonte preferida de quitina é HYTc. Uma fonte preferida para aminoácidos e quitosana é HYTb. Quando HYTb e HYTc são utilizados os outros componentes nessas formulações estão também presentes durante ativação.
Uso de HYTa ativado
HYTa ativado pode ser utilizado individualmente ou em combinação com outros componentes como quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos para tratar solo, semente, mudas ou folhagem. Em algumas modalidades, as combinações desses componentes podem ser aplicadas como uma mistura. Em outras modalidades, podem ser aplicadas separadamente. Ainda em outras modalidades, os componentes podem ser aplicados em tempos diferentes.
Em uma modalidade, HYTa ativado pode ser aplicado a solo, sementes ou mudas, ou utilizado em aplicações foliares por aplicação direta a folhagem. Entretanto, quando patógenos de planta estão presentes, prefere-se que a composição microbiana compreenda HYTa ativado, quitina e/ou quitosana. Alternativamente, o HYTa pode ser ativado na presença de quitina. Quitosana é conhecido por ter propriedades bactericidas, fungicidas e antivirais, bem como sua capacidade de estimular crescimento de planta e induzir resistência da planta a patógenos. Em outras modalidades, glucosamina é uma parte da composição microbiana.
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Em uma modalidade preferida, o HYTa ativado individualmente ou em combinação com quitina (preferivelmente HYTc) e/ou quitina, quitosana e aminoácidos (preferivelmente HYTb e HYTc) é aplicado em solo, sementes, mudas e/ou folhagem. Prefere-se que HYTa seja utilizado em combinação com quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos. HYTc é a fonte preferida de quitina enquanto HYTb é a fonte preferida de quitosana, glucosamina e aminoácidos. Entretanto, os componentes da composição microbiana a saber HYTa, quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos podem ser aplicados separadamente ou em qualquer combinação ou sub-cominação. Podem ser aplicados ao mesmo tempo ou seqüencialmente, em qualquer ordem dada. Entretanto, o modo de aplicação preferido é aplicar inicialmente tudo ao mesmo tempo. A aplicação dos componentes acima provê o tratamento direto de patógenos de planta, a indução de vias de resistência de patógeno de planta, e a nutrição dos micróbios de HYTa, a flora de solo não patogênica nativa e a planta.
Quando solo é inicialmente tratado com uma composição microbiana que compreende HYTa ativado individualmente, os micróbios presentes na composição têm uma oportunidade para povoar o solo e alterar sua composição taxonômica. Em algumas situações, a colonização inicial por HYTa provê poucos ou nenhum nutrientes para a planta. Em tais casos, é importante manter uma reserva de nutriente para manter tanto o crescimento dos micróbios enquanto coloniza a rizoesfera e o crescimento das plantas no solo. Pode ser necessário repetir a aplicação de HYTa, dependendo do ciclo de crescimento da planta e regime de nutrição. Em outros casos, pode ser suficiente fornecer aplicações adicionais de aminoácidos, quitina e/ou quitosana, por exemplo, HYTb e HYTc, ao solo previamente tratado.
Quando HYTa é utilizado em combinação com, por exemplo, HYTb e HYTc, nutrientes de adição são disponíveis para os micróbios de HYTa e as plantas presentes no solo tratado.
A tabela 5 expõe um programa típico de quatorze semanas para a aplicação de HYTa, HYTb e HYTc a culturas irrigadas por gotejamento cultivadas em solo. Os valores são por hectare. Para HYTa e HYTb, os valores representam litros por semana. Para
HYTc, os valores representam quilogramas por semana.
Tabela 5
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Lts/kg/ semana W1 W2 W3 W4 W5 W6 W7 W8 W9 W10 Wll W12 W13 W14
HYT-A 3 0 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1
HYT-B 10 5 0 3 2 3 2 3 2 3 2 3 2 3
HYT-C 1 1 1 1
O pulso no qual a composição microbiana é injetada no sistema de irrigação deve ser um no qual a composição microbiana seja capaz de atingir o sistema de raiz e permanecer lá durante a noite enquanto o sistema está desligado. Para desempenho máximo de HYTc, deve ser aplicado ao mesmo tempo como uma mistura com HYTa. O 5 protocolo deve ser continuado enquanto a planta continua em produção. Esse protocolo cobre todos os estágios da planta incluindo germinação, formação de raiz, crescimento de planta, florescimento, planta de frutas, formação de frutas colheita e nova colheita. Esse protocolo é projetado para potencial máximo de rendimento que cobre aspectos nutricionais, aspectos de bioestimulação e proteção contra doenças como nematódeos e fungos.
O processo pode ser realizado por contatar solo para formar um solo tratado. Em alguns casos, o processo é repetido. Em alguns casos, plantas, mudas ou sementes já estão presentes no solo antes do tratamento com a composição microbiana. Em outros casos, plantas, mudas ou sementes são transplantadas para o solo após tratamento com a composição microbiana.
Em geral, antes da aplicação o número de hectares ou acres a serem tratados é determinado. A seguir, a quantidade recomendada de HYTa ativado por hectare ou acre é multiplicada pela área a ser tratada e diluída em quantidade suficiente para irrigar ou pulverizar o solo ou cultura na área a ser tratada. O mesmo procedimento pode ser seguido para HYTb líquido. HYTc, sendo sólido, pode ser aplicado diretamente como um sólido ou como uma suspensão em água. HYTc é preferivelmente triturado até partículas de tamanho de mícron antes do uso.
O processo pode ser realizado com ser realizado com solo infértil. Tais solos são genericamente aqueles onde pelo menos um de capacidade de permuta de cátion baixa, baixa capacidade de retenção de água, baixo teor de matéria orgânica e baixos níveis de nutrientes disponíveis estão presentes. Em geral, solo infértil não suporta crescimento vigoroso da planta e/ou produz baixos rendimentos de cultura.
Para sistemas não de solo como hidropônicos, o mesmo protocolo se aplica porém
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19/33 com uma distribuição diária seguindo o programa de ferti-irrigação.
As composições microbianas podem ser utilizadas com relação a qualquer plana que inclui, porém não é limitada a alfafa, banana, cevada, brócolis, cenouras, milho, pepino, alho, uvas, alho-porro, melão, cebola, batata, framboesa, arroz, soja, abóbora, morango, cana de açúcar, tomate e melancia.
Quando aplicado como uma correção de solo, a composição microbiana contendo
HYTa, quitina, aminoácidos e quitosana aumenta a produção de cultura e média aproximadamente 25% - 55% em comparação com o aumento de 15 a 25% em produção de cultura observado para E2001. De Karl Co. SA de CV, Navojoa, Sonora, México.
Os compósitos microbianos também podem resultar em uma diminuição na quantidade de quitina utilizada. Por exemplo, quitina foi utilizada como uma correção de solo na técnica anterior. Tipicamente, aproximadamente 600 kg de quitina foram utilizados por hectare. Entretanto, efeitos benéficos de tal uso não foram observados por até seis meses. Quando HYTa foi ativado na presença de quitina e então combinado com quitina e aplicado como uma correção de solo, efeitos benéficos foram observados após sete dias com o uso somente de 4-6 kg de quitina por hectare.
Embora a revelação seja dirigida principalmente ao uso das composições microbianas reveladas para aplicações agrícolas, tais composições ou seus componentes e processos também podem ser utilizados em aplicações de horticultura para melhorar a produção de folhagem e flores e diminuir o uso de inseticidas e fungicidas convencionais.
Quando HYTa ativado é aplicado ao solo, semente, muda ou folhagem, forma solo tratado, semente tratada, muda tratada, folhagem tratada e plantas tratadas. HYTa é uma composição microbiana nova. Portanto, o solo, semente, muda, folhagem e plantas tratadas com HYTa são também novas.
Solo tratado é definido como solo que contém um ou mais micróbios que são exclusivos para HYTa dispersos no solo tratado. Tais micróbios podem ser detectados no solo tratado genericamente por utilizar um BioChip que detecta populações microbianas com base em DNA. Vide, por exemplo, a publicação de patente US 2007/0015175, incorporada aqui a título de referência. Outros métodos, como PCR, que são conhecidos por aqueles versados na técnica também podem ser utilizados. Micróbios em HYTa que são particularmente preferidos são Bacillus subtilis (SILoSil® BS), Bacillus thuringiensis cepa HD-1, Bacillus thuringiensis cepa HD-73 (SILoSil® BT) e Trichoderma harzianum (TRICHOSIL) cada um dos quais pode ser isolado do depósito de HYTa ou obtido da
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Biotecnologia Agroindustrial S.A. DE C.V., Morelia, Michoacan, México. Trichoderma harzianum (TRICHOSIL) é mais preferido visto que é importante durante a ativação de HYTa em que causa sinergias inter-componentes entre os outros micróbios em HYTa. A identificação de um ou mais desses microorganismos pode ser adicionalmente combinada com a identificação de outros micróbios em HYTa, se necessário, para confirmar a presença de HYTa ou que HYTa estava presente. Cada de Bacillus subtilis (SILoSil® BS), Bacillus thuringiensis cepas HD-1 e HD-73 (SILoSil® BT) e Trichoderma harzianum (TRICHOSIL) foram depositados com o ATCC em_e recebeu as designações de depósito de patente _, _ e _, respectivamente.
Semente, mudas, folhagem e plantas tratadas são similarmente definidas. Nesses casos, os micróbios de HYTa são encontrados nas superfícies da semente, mudas, folhagem e plantas tratadas.
Como utilizado aqui, o termo “consistindo essencialmente em” com relação a 15 HYTa, HYTb e HYTc significa qualquer de HYTa, HYTb e/ou HYTc individualmente ou em combinação sem micróbios adicionais.
Exemplo 1
O seguinte exemplo compara o crescimento de plantas de pepino persa utilizando HYTa, HYTb e quitosana em comparação com um controle que não foi tratado com
HYTa, HYTb e quitosana.
Durante o desenvolvimento de mudas de pepino persa, sementes foram incubadas por três horas em uma mistura de 1 litro de água e 250 gramas de HYTc. Um saco de musgo de turfa e 250 gramas de quitina de malha 200 micronizada (aproximadamente 75 micra de diâmetro) (HYTc) por saco de musgo de turfa foram misturados. As sementes foram plantadas na mistura de musgo de turfa/quitina a 18-24°C. o desenvolvimento da planta após cinco dias após tratamento com HYTc foi comparável com 9 dias de desenvolvimento sem o tratamento.
As mudas de controle e tratadas foram transplantadas em 1 hectare de solo em uma estufa. O solo de controle e HYTa foram tratados como exposto na tabela 5.
Tabela 6
HYT-A Controle
fertilizante de nitrogênio 150 Kg 280 Kg
Potassa 160 Kg 250 Kg
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Cálcio 80 Kg 130 Kg
fósforo 200 Kg 320 Kg
Magnésio 20 Kg 45 Kg
elementos residuais 10 litros 22 litros
Fungicidas 0 20 litros
Inseticidas 0 16 litros
sabão agrícola feito de azeite e óleo de palma 10 litros 0
O solo contendo as mudas tratadas com HYTa foi tratado com 2 litros de HYTa e 7 litros de HYTb com o passar do tempo.
HYTa foi diluído em 200 litros de água e ativado sem a presença de HYTb ou
HYTc.
Na semana dois, um litro de HYTa e três litros de HYTb foram aplicados ao solo e dois litros de HYTb foram aplicados à folhagem das plantas tratadas com HYT.
Houve um aumento significativo no rendimento de pepinos em relação ao controle. As plantas de controle produziram 3.000 caixas de 25 libras enquanto as plantas tratadas com HYT produziram 4.300 caixas. Por conseguinte, esse exemplo demonstra um aumento significativo em rendimento utilizando HYT e uma diminuição na quantidade de fertilizante, inseticidas, fungicidas e outros componentes de outro modo necessários.
Exemplo 2
Folha Septoria e ferrugem inicial bem como infecção de tomates Roma e beefsteak com Phytophthorainfestans podem ser tratados pelo protocolo exposto na tabela 7. Todos os valores são por hectare.
Tabela 7
início Por dia Duração Aplicação
HYTa 3 litros 0 10 dias pulverização
HYTa 2 litros 0 10 dias sistema pulverização de
HYTc 20 Kg 2 Kg 10 dias pulverização
HYTc 500 gramas 0 0 sistema pulverização de
HYTb 1 litro 1 litro 10 dias pulverização
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HYTa foi diluído em 200 litros de água e ativado com HYTc.
Esse tratamento resultou em controle dessas infecções.
Exemplo 3 acres de tomates Roma foram tratados com 4 litros de HYTa, 10 litros de HYTb 5 e 30 libras de quitina.
O protocolo de aplicação foi como a seguir para 10 acres:
Tabela 8
Lts/Lb/semana W1 W2 W3 W4 W5 W6 W7
*HYT-A 3 0 0 0 1 0 0
**HYT-A 2 0 0 0 1 0 0
*HYT-B 6 5 5 0
**HYT-B 4 2 2
* HYT-C 5 5
** HYT-C 10 5 5
* sistema de irrigação: pulverização (folhagem) ** sistema de irrigação: fita de gotejar
Os valores são em litros para HYTa e HYTb e libras para HYTc. O rendimento de cultura foi de 46 toneladas de tomates por acre em comparação com 31 toneladas por acre para o controle. Esse é um aumento de 36% em rendimento.
Exemplo 4
Nematódeo de nó de raiz Meloidogyne spp. E doença de fungo branco causada por
Sclerotiniasclerotiorum foram identificados como problemáticos para o crescimento de cenouras. A figura 2A mostra a folhagem e cenouras obtidas de tal solo.
O seguinte protocolo foi utilizado para tratar um hectare. Um kg de HYTc foi aplicado ao solo no momento de transplante. Duas semanas após 1 kg de HYTc e 1,5 litros de HYTa foram aplicados. Duas semanas após 2 kg de HYTc e 1 litro de HYTb foram aplicados. Trinta dias após 1,5 kg de HYTc, 1 litro de HYTb e 1 litro de HYTa foram aplicados.
As vesículas de raiz causadas pela infecção por nematódeo não mais estavam presentes nas cenouras após o tratamento. O apodrecimento macio de algodão causado por fungo branco estava também ausente das cenouras após tratamento.
Exemplo 5
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HYTa, HYTb e HYTc podem ser utilizados para erradicar e controlar ROYA (Puccinia dracunculina) em Tarragon (Artemisia dracunculus L.). um total de 6 litros de HYTa, 15 litros de HYTb e 900 gramas de HYTc foram aplicados em cada hectare.
O seguinte protocolo foi utilizado:
Tabela 9
Produto Dosagem Tempo curso de aplicação
HYTa 2 litros 5 dias pulverização
HYTb 5 litros 5 dias pulverização
HYTc 300 gramas 5 dias pulverização
O protocolo foi repetido duas vezes. Esse tratamento reduziu dano de ROYA em folhagem tratada.
Exemplo 6
Esse exemplo revela um sumário de testes feitos em cooperação com e sob a supervisão do Centre International of Maize e Wheat Improvement Center (conhecido e mencionado aqui como o CIMMYT) http://www.cimmyt.org/.
Esse exemplo apresenta os dados finais da colheita dos tratamentos diferentes. O pessoal CIMMYT realizou a coleta de amostras de acordo com suas metodologias científicas e informações.
Esses testes foram projetados para demonstrar os seguintes benefícios chave de utilizar HYTa sozinho ou em combinação com HYTb: (1) a capacidade de manter crescimento de alto desempenho com regimes diferentes de fertilizante e minerais, (2) melhorar o desempenho do sistema através do uso de HYTa ou HYTa em combinação com HYTa, e (3) a capacidade de recuperar saúde do solo e aumentar os níveis de fertilidade através do uso repetido dos programas de HYT.
O objetivo do teste foi determinar o efeito dos níveis de lavoura e a manipulação de palha em dois ambientes diferentes de solos (vizinhança e alúvio), investigar a eficiência das formas, tipos e doses diferentes de fertilizantes minerais em combinação com HYT de Agrinos para fazer uso mais eficiente dessas entradas para aumentar a rentabilidade do cultivo de trigo para o produtor.
Áreas de teste
Esses experimentos foram realizados em um campo agrícola associado à cessionária que tem sido utilizado amplamente para o desenvolvimento de produtos de
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24/33 remediação de solo, bem como para a produção de culturas cash. Esse campo agrícola foi tratado durante os últimos onze anos com E2001 e produtos relacionados da Karl Co. SA de CV, Navojoa, Sonora, México e mais recentemente com HYTa e HYTb.
Essa área de experimentos é identificada por CIMMYT sob o código de cupom Z 702 módulo Agirnos-CIMMYT e está no Distrito de irrigação no. 38, módulo 4, seção 15, rolos de irrigação 1049-0 e 1115-0.
Um dos atributos principais de produtos HYT™ é sua capacidade de melhorar (em vez de degradar) solos agrícolas com uso contínuo. Para demonstrar esse atributo do produto HYT™, os experimentos incluíram uma área de teste que não foi tratada com entradas minerais, E 2001 ou qualquer produto HYT. O desempenho de plantas da cultura nessa área depende totalmente do estado do solo antes do plantio.
Outras informações
- tipos de cultura: trigo;
- variedade: ATIL (trigo durum);
- data de semeadura: 23 de dezembro em solo seco e solo úmido em áreas 2 e 1 da figura 3. O plantio foi retardado até 14 de janeiro, do ano seguinte devido a uma inundação causada por um problema de irrigação no lote contíguo.
- data de colheita: 20-23 de maio (aproximadamente 4 meses após plantio)
- tamanho da área de teste: 15 hectares
- fertilização mineral: foi utilizada como a base para fertilização que é considerada com a melhor prática de desossificação de nutrientes minerais NPK genericamente aceitos na região (BNFP = melhor prática de fertilizante de nitrogênio).
Tabela 10
Fertilizantes minerais e protocolos de HYT™
Tratamento Descrição aplicação inicial segunda aplicação terceira aplicação
tratamento 1 área de controle; sem 0 unidade NPK, 0 unidade de NPK, 0 litro HYTa ou 0 litro de HYTa ou 0 unidades de NPK, 0 litro de HYTa ou
tratamento 2 fertilizante 50% BNFP + HYTa e HYTb HYTb 103 unidades de 52 unidades de HYTb N, 1 litro de HYTa; P, 1 litro de HYTb HYTb 1 litro de HYTa; 1 litro de HYTb
Tratamento 3 HYTa + HYTb 1 litro de HYTa 1 litro de HYTa 1 litro de HYTa; 1 litro de HYTb 1 litro de HYTa; 1 litro de HYTb
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100% BNFP 149 unidades de N, 61 unidades de N
Tratamento 4 unidades de P
Além dos protocolos principais descritos acima, algumas áreas foram testadas e colhidas separadamente com algum componente adicional, com o objetivo de obter um ponto de referência extra e expandir as possibilidades para análise. O teste designado foi como a seguir:
TRT 5: tratamento biológico HYT mais 100% de programa de fertilização mineral tradicional: aplicação inicial: 1 litro de HYT + 103-52-0 (NPK), segunda aplicação 1 litro de HYT + 1 litro de HYT B + 61-0-0 (NPK), terceira implementação 1 litro de HYT B. esse tratamento adicional foi recomendado por CIMMYT para observar o comportamento do programa tradicional de programa de nitrogênio mineral mais completo HYT a + b no desempenho do grão de trigo. Somente uma área de 4 fileiras foi dedicada a esse tratamento e as informações foram coletadas somente por pessoa da CIMMYT.
Um diagrama da área de teste é mostrado na figura 1 onde “TRT” se refere ao tratamento acima identificado.
Fatores externos na área de teste
Algumas áreas da zona de teste foram comprometidas e sofreram dano por fatores externos. Os resultados dessas áreas foram excluídos dos resultados finais da colheita para permitir uma comparação confiável. É feita referência à figura 2. Esses fatores externos foram como a seguir:
Área destacada 1 (zona 1): a variedade de trigo utilizada é muito suscetível a “Chahuistle”. Devido à proximidade de áreas 1 e 5 a linhas elétricas de voltagem elevada, o avião não pode aplicar o produto nessas áreas e conseqüentemente essas áreas sofreram uma incidência mais elevada do patógeno, causando perda significativa de potencial de desempenho.
Áreas destacadas 1 e 2 (zona 2) sofreram inundação devido a problemas de irrigação nos lotes em volta, retardando o planto em 20 dias e sendo afetado pelo “chauistle”.
Áreas destacadas 9 e 10 (zona 3) sofreram de irrigação irregular devido à topografia da terra que faz desempenho errático da cultura tendo áreas baixas e elevadas causando irrigação não uniforme que afeta a média do desempenho.
Tabela 11
Dados finais de colheita total relatados para tratamentos diferentes
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Lote toneladas métricas hectare por Lote toneladas métricas por hectare
Area 1 4,1* Área 9 5,4/6,6*
Área 2 4,1* Área 10 6,2*
Área 3 7,8 Área 11 6,8
Área 4 8,3 Área 12 8,3
Área 5 4* Área 13 8,3
Área 6 7,1 Área 14 7,7
Área 7 7,4 Área 15 8,2
Área 8 7,9 Área 16 9,0
*fatores externos afetaram esse resultado
Tabela 12
Resultados de experimento
Desempenho
Toneladas/Ha* Argila* Aluvial* Média*
100% BNFP 7,45 7,40 7,4
(Tratamento 4)
50% BNFP mais HYTa e HYTb 7,40 7,20 7,8
(Tratamento 2)
Controle 7,90 8,30 8,2
(tratamento 1)
HYTa e HYTb somente 8,30 6,50 8,7
(Tratamento 3) _
*resultados de áreas onde resultados afetados por fatores externos não são incluídos Em comparação com o rendimento médio de trigo esperado na região o uso histórico repetido E 2001 e HYT™ contribui para o aumento significativo em desempenho de 36% em comparação com fertilização padrão somente, vide a figura 3. Isso aconteceu sem adicionar nenhum elemento adicional de NPK ou HYT durante esse ciclo agrícola dado que aplicações anteriores de E 2001 e HYT já tinham recuperado a atividade e biodiversidade de colônias de micróbios de solo benignos criando níveis elevados de matéria orgânica e nutrientes disponíveis no solo.
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A adição de HYTa e HYTb ao sistema de ciclo de planta-solo continua o aperfeiçoamento da capacidade do solo para fornecer nutrientes a plantas, aumentando a capacidade de fixação de nitrogênio biológico. Vide a figura 3.
Várias combinações de regimes de fertilização padrão, individualmente ou em 5 combinação com HYTa e HYTb não parecem melhorar os resultados em comparação com o uso de HYTa e HYTb. Isso pode ser devido à existência de nutrientes armazenados suficientes como biomassa no solo de anos anteriores.
Quando o solo e ecossistema têm nutrientes disponíveis suficientes, através de FBN e/ou níveis elevados de biomassa no solo, a adição de mais fertilizante (NPK) desestabilizou o equilíbrio biológico e interferiu nos padrões de absorção de nutrientes das plantas, possivelmente alterando a capacidade do cultivo de orientar seu próprio programa nutricional dados os recursos disponíveis no solo e biomassa ativa em suas raízes.
Exemplo 7
Experimentos de campo foram conduzidos em Pantnagar Índia sob o projeto intitulado ‘Agronomic evaluation of HYT (HYTa, HYTb e HYTc e foliar spray of Suryamin). Os detalhes são fornecidos abaixo.
Cultura : trigo Projeto utilizado: RBD Replicação: 3
Data de semeadura: 19.11.2010
Variedade: PBW-550
Tamanho de lote bruto: 6,0 m x 4,0 m = 24 m2 Tratamentos: 12 Detalhes de tratamento
T-1: dose de NPK recomendada
T-2: aplicação de T-1+solo de HYTa (ativado por 72 h) @ 1L no momento de semeadura
T-3: aplicação T-1+ foliar de HYTb + 2L no momento de iniciação de flor/iniciação de panícula)
T-4: aplicação T-1+solo de HYTc @ 2 kg no momento de semeadura
T-5: T-1+ HYTa (ativado por 72 horas) @ 1 litro + HYTc @ 2 kg/ha como aplicação de solo em semeadura
T-6: T-1+ aplicação foliar de HYTb @ no momento de iniciação de flor / iniciação
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28/33 de panícula + 2L + HYTc @ 2 kg/ha como aplicação de solo em semeadura
T-7: T-1 + HYTa (ativado por 72 horas) @ 1L +HYTb @ 2L no momento de iniciação de flor / iniciação de panícula + HYTc @ 2 kg/ha como aplicação de solo em semeadura
T-8: % dose NPK + HYTa (ativado por 72 horas) @ 1L + aplicação foliar de HYTb @ 2L + HYTc @ 2 kg/ha como aplicação de solo em semeadura
T-9: T-1 + aplicação de solo de HYTa (ativado por 72 horas) @ 2L/ha+ aplicação foliar de HYTb @ 5L + HYTc @ 5 kg/ha em semeadura
T-10: % dose NPK + HYTa (ativado por 72 horas) @ 2L + aplicação foliar de 10 HYTb @ 5L+HTB-c @ 5kg/ha como aplicação de solo em semeadura
T-11: T-1 + 1L/ha de Shriram Suryamin como aplicação foliar em iniciação de flor T-12: T-1+1L/ha de Shriram Suryamin como aplicação foliar cada em broto e em iniciação de flor
Os rendimentos biológicos, grão e palha são expostos na tabela 13.
Tabela 13
Efeito de produto orgânico HYT diferente em rendimento biológico, grão e palha de cultura de trigo.
Tratamentos rendimento biológico (q/ha) rendimento de grão (q/ha) rendimento de palha (q/ha)
T1: Rec. NPK 82,63 32,00 50,63
T2: T1 + HYT-A @ 1,0 l/ha 85,43 33,99 51,50
T3: T1 + HYT-B@ 2,0 l/ha 87,50 35,30 52,20
T4: T1 + HYT-C @ 2,0 kg/ha 76,40 31,33 45,07
T5: T1 + HYT-A +C 87,63 37,90 49,73
T6: T1 + HYT-B+C 84,53 34,80 49,73
T7: T1 + HYT-A +B+C 86,93 35,80 51,93
T8: ANPK+HYT-A+B+C 56,90 27,13 29,77
T9: T1 + HYT-A +B+C (dose mais elevada) 88,60 40,27 48,33
T10: ANPK+HYT-A+B+C (dose mais elevada) 58,37 28,30 30,07
Tn:T1+ Suryamin (uma pulverização) 82,87 32,93 49,93
T12 :Tt+ Suryamin (duas 83,57 33,17 50,40
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Tratamentos rendimento biológico (q/ha) rendimento de grão (q/ha) rendimento de palha (q/ha)
pulverizações)
S.Em (5%) 4,33 0,92 4,27
CD (5%) 12,68 2,71 12,54
A tabela 14 compara os resultados para rendimento de grão para os vários tratamentos com os componentes de HYT e combinações diferentes.
Tabela 14
rendimento CD 2,71 erro padrão 0,92
de acima quilo/h grão de 32 ectare
Controle 0
HYTa 1 , 99 NS *
HYTb 3,3 * *
HYTc -0,67 NS NS
HYTa + c 5,9 * *
HYTb + c 2,8 * *
HYTa + b + c (1L/2L/2Kg) 3,8 * *
HYTa + b +c (dose elevada de a, b e c: 2L/5L/5Kg) 8,27 * *
NS = Não estatisticamente significativo em comparação com controle * = estatisticamente significativo em comparação com controle Como pode ser visto, o uso separado de HYTa e HYTb melhorou o rendimento de grão em 1,99 e 3,3 quilos por hectare respectivamente enquanto o uso de HYTc individualmente causou diminuição em rendimento. Quando HYTa foi combinado com
HYTc o aumento de rendimento foi de 5,9 quilos por hectare que é maior do que a soma dos resultados quando utilizados separadamente. O uso de HYTb e HYTc resultou em um aumento de 2,8 quilos por hectare enquanto o uso de HYTa, HYTb e HYTc causou um aumento de 3,8 quilos por hectare. O maior aumento em rendimento de grão foi observado
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30/33 para HYTa, HYTb e HYTc utilizado nas doses mais elevadas indicadas. Isso resultou em um aumento de mais de 25% em rendimento de grão em relação ao controle, isto é, um aumento de 8,3 quilos por hectare.
Exemplo 8
Esse exemplo expõe resultados do crescimento de abobora em solo infértil.
Nesses experimentos mudas de abobora foram plantadas em vasos de 5 galões contendo areia “Superstition” infértil. As combinações de HYT A, B, e C foram aplicadas como exposto na tabela 16. As mudas foram plantadas em 21 de dezembro e a colheita começou em 20 de janeiro e continuou até 27 de fevereiro do ano seguinte.
Tabela 15
Data taxas de tratamento aplicadas
16 dezembro 200 mL HYTA ativado, 10 mL HYT B, e 200 g de HYTC por pote.
23 dezembro 10 mL HYTB por vaso.
30 dezembro 5 mL HYTB por vaso.
5 janeiro 5 mL HYTA e 5 mL HYTB por vaso.
19 janeiro 10 mL HYTB por vaso.
27 janeiro 10 mL HYTA e HYTB por vaso.
3 fevereiro 10 mL HYTB por vaso.
10 fevereiro 10 mL HYTA e 10 mL HYTB
17 fevereiro 5 mL aplicado HYTA e 5 mL HYTB em cada vaso.
25 fevereiro 5 mL aplicado HYTB em cada vaso.
1 março 5 mL aplicado HYTA e 5 mL HYTB em cada vaso.
Os resultados são expostos na tabela 16.
Tabela 16
tratamento rendimento (g/vaso)
Controle 0
HYTa 251,6
HYTb 137,9
HYTc 62,6
HYTa + HYTb 472,1
HYTa + HYTc 0
HYTb + HYTc 0
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tratamento rendimento (g/vaso)
HYTa + HYTb + HYTc 62,3
Stat, A **
B **
C NS
A*B NS
A*C **
B*C NS
NS não é significante em P<0.05.
*, ** são estatisticamente significantes em P<0.05 e P<0.01, respectivamente.
Como pode ser visto, houve um aumento substancial em rendimento de abóbora zucchini quando HYTa e HYTb foram separadamente utilizados e quando HYTa e HYTb foram utilizados em combinação.
Exemplo 9
O seguinte protocolo foi utilizado para tratar melões.
Tabela 16
PRODU- TO ESTÁGIO > INÍCIO FLORESCIMENTO MATURAÇÃO 15 DIAS APÓS PRONTO PARA COLHEITA
APLICAÇÃO Dose (Kg ou Lt / Ha)
HYT-a
TERRA 3 0,3 0,25 1 0,5 0,25 0,25
HYT-b Foliar 1 1 1 1 1 1
TERRA 3 1 1 3 2 2 2
Os resultados são expostos na tabela 17 e figura 4.
Tabela 17
COM TRATAMENTO DE HYTa e HYTb
ACUMULADO INFORMAÇÕES POR HA
TAMANHO PEÇAS LBS CAIXAS PEÇAS LBS CAIXAS
9 299 1.289.860 33 7.407 31.958.395 823
12 838 2.859.835 70 20.790 71.007.580 1.733
15 543 1.719.652 36 13.593 43.059.160 906
18 241 604.131 13 6.074 15.266.914 337
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TOTAL 1.921 6.473 153
47.864 161.292 3.799
SEM TRATAMENTO
ACUMULADO INFORMAÇÕES POR HA
TAMANHO PEÇAS LBS CAIXAS PEÇAS LBS CAIXAS
9 181 727.936 20 4.481 18.026.691 498
12 493 1.650.330 41 12.247 41.030.815 1.021
15 463 1.489.587 31 11.568 37.168.321 771
18 176 465.597 10 4.432 11.725.728 246
TOTAL
1.313
4.333
102
32.728
107.952
2.536
AUMENTO DE PERCENTAGEM
46,25% 49,41% 49,81%
POR HA
Exemplo 10
Abóbora foi cultivada de acordo com o seguinte protocolo.
Tabela 18
PRODUTO APLICAÇÃO DOSE POR HECTARE
03/07 03/10 03/18 04/04 04/11 04/18
Hyt-a SOLO 2 1
Hyt-b Foliar 1 1 3 1 1
SOLAR 1 1 1 1 1
Os resultados são expostos na tabela 19.
Tabela 19
TAMANHO CAIXAS/HA DIFERENÇA EM CAIXAS/HA DIFERENÇA EM %
CONTROLE TRATADO,
X 188 228 40 17,54%
XX 63 145 82 56,55%
XXX 47 95 48 50,52%
BRUCE 29 30 1 3,33%
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Exemplo 11
Um experimento com HYTa e HYTb foi realizado na Noruega em uma cultura de batata. Os testes com e sem HYTa e HYTb foram tratados com 50 ou 100 kg de fertilizante de nitrogênio/ha. Pesticidas foram utilizados em quantidades normais.
No momento da primeira emergência (14 de junho), 0,2 litro de HYTa e 0,6 litro de HYTb foram aplicados por decare. Após a ultima aplicação de barro (20 de julho), 0,2 litro de HYTa, 0,2 litro de HYTb e 50 gramas de HYTc foram aplicados por decare. Os resultados são mostrados na figura 5.
O uso de HYTa e HYTb forneceu um aumento de rendimento de até 17% em comparação com o controle. Além disso, houve menos blight de batata na cultura tratada com HYTa e HYTb em comparação com o controle.
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1/3

Claims (3)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composição microbiana, caracterizada pelo fato de que compreende HYTa da designação de depósito de patente ATCC PTA-10973 e pelo menos um de quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos.
    5 2. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende HYTa e quitina.
    3. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende HYTa, quitosana, glucosamina e aminoácidos.
    4. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada 10 pelo fato de que compreende HYTa, quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos.
    5. Composição microbiana, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a quitina é de HYTc, em que a referida HYTc é a fração sólida obtida a partir da fermentação de Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da designação de depósito de patente ATCC
    15 PTA-10861.
    6. Composição microbiana, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a quitosana, glucosamina e aminoácidos são de HYTb, em que a referida HYTb é a fração sólida obtida a partir da fermentação de Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da designação de
    20 depósito de patente ATCC PTA-10861.
    7. Composição microbiana, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende HYTa e pelo menos um de HYTb e HYTc;
    em que a referida HYTb é a fração sólida obtida a partir da fermentação de Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da
    25 designação de depósito de patente ATCC PTA-10861; e em que a referida HYTc é a fração sólida obtida a partir da fermentação de
    Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da designação de depósito de patente ATCC PTA-10861.
    8. Composição microbiana de acordo com a reivindicação 7, caracterizada 30 pelo fato de que compreende HYTa, HYTb e HYTc.
    9. Processo, caracterizado pelo fato de que compreende contatar solo, semente, muda, ou folhagem de planta com HYTa da designação de depósito de patente ATCC PTA-10973.
    Petição 870180001588, de 08/01/2018, pág. 41/45
  2. 2/3
    10. Processo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que compreende ainda contatar solo, semente, muda, ou folhagem de planta com quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos.
    11. Processo, de acordo com a reivindicação 9 ou 10, caracterizado pelo fato 5 de que a dita quitina é de HYTc; em que a referida HYTc é a fração sólida obtida a partir da fermentação de Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da designação de depósito de patente ATCC PTA-10861.
    12. Processo, de acordo com a reivindicação 9 ou 10, caracterizado pelo fato de que a dita quitosana, glucosamina e aminoácidos são de HYTb, em que a referida HYTb
    10 é a fração sólida obtida a partir da fermentação de Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da designação de depósito de patente ATCC PTA-10861.
    13. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 12, caracterizado pelo fato de que o dito HYTa é ativado em uma solução aquosa por 24 a
    15 168 horas antes do dito contato.
    14. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 12, caracterizado pelo fato de que o dito contato é do dito solo para formar solo tratado.
    15. Processo, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o dito método compreende ainda contatar o dito solo tratado ou folhagem no dito solo com
    20 um ou mais de HYTa, quitina, ou HYTb.
    16. Processo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o dito contato é da dita folhagem para formar folhagem tratada.
    17. Processo, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o dito método compreende ainda contatar a dita folhagem tratada ou solo contendo uma
    25 planta com a dita folhagem tratada com um ou mais de HYTa, quitina, quitosana, glucosamina e aminoácidos.
    18. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 17, caracterizado pelo fato de que as ditas plantas, mudas ou sementes estão presentes no dito solo antes da dita etapa de contato.
    30 19. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 18, caracterizado pelo fato de que antes do dito contato do dito solo tratado, as plantas, mudas ou sementes são transplantadas para o dito solo tratado.
    20. HYTa ativado, caracterizado pelo fato de que é feito incubando HYTa da
    Petição 870180001588, de 08/01/2018, pág. 42/45
  3. 3/3 designação de depósito de patente ATCC PTA-10973 na presença de HYTc por 24 a 168 horas, em que a referida HYTc é a fração sólida obtida a partir da fermentação de Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da designação de depósito de patente ATCC PTA-10861.
    21. Processo, caracterizado pelo fato de que compreende combinar HYTa ativado, como definido na reivindicação 20, e pelo menos um de HYTb e HYTc para formar uma mistura, em que a referida HYTb é a fração sólida obtida a partir da fermentação de Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da designação de depósito de patente ATCC PTA-10861; e em que a referida HYTc é a fração sólida obtida a partir da fermentação de Artrópodes contendo quitina com uma composição microbiana compreendendo HQE da designação de depósito de patente ATCC PTA-10861.
    22. Processo, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que compreende ainda aplicar a dita mistura ao solo, folhagem, semente ou mudas.
    Petição 870180001588, de 08/01/2018, pág. 43/45
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