BR102016014767A2

BR102016014767A2 - Processo para produção de monossacarídeos fermentescíveis a partir de quitina e/ou quitosana por hidrólise química e/ou enzimática e seus usos

Info

Publication number: BR102016014767A2
Application number: BR102016014767-0A
Authority: BR
Inventors: Eurípedes De Souza Éber; Lincon Bezerra Montel Adão; Donizeti Ascêncio Sérgio
Original assignee: Fundação Universidade Federal Do Tocantins
Priority date: 2016-06-14
Filing date: 2016-06-14
Publication date: 2018-05-29
Also published as: WO2017219110A1; US20190256540A1; US11459350B2; WO2017219110A8; CN109689669A; JP2019518083A; BR102016014767B1

Abstract

processo para produção de monossacarídeos fermentescíveis a partir de quitina e/ou quitosana por hidrólise química e/ou enzimática e seus usos a presente invenção apresenta um processo para obtenção de monossacarídeos em solução aquosa ácida a partir de quitina ou quitosana por meio de hidrólise química e ou enzimática. este processo permite a obtenção de solução de açúcares fermentescíveis ou não fermentescíveis utilizando reagentes de baixo custo e de fácil aquisição, os quais possuem importância industrial. o setor técnico a que se refere esta invenção visa prover, por meio de um novo processo de produção, a indústria de alimentação e/ou indústria química, por meio de um método alternativo de fabricação de monossacarídeos mais simples e. portanto mais viável do ponto de vista técnico-econômico.

Description

(54) Título: PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS (51) Int. Cl.: C07H 1/08 (52) CPC: C07H 1/08 (73) Titular(es): FUNDAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL DO TOCANTINS (72) Inventor(es): ÉBER EURÍPEDES DE SOUZA; ADÃO LINCON BEZERRA MONTEL; SÉRGIO DONIZETI ASCÊNCIO (57) Resumo: PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS A presente invenção apresenta um processo para obtenção de monossacarídeos em solução aquosa ácida a partir de quitina ou quitosana por meio de hidrólise química e ou enzimática. Este processo permite a obtenção de solução de açúcares fermentescíveis ou não fermentescíveis utilizando reagentes de baixo custo e de fácil aquisição, os quais possuem importância industrial. O setor técnico a que se refere esta invenção visa prover, por meio de um novo processo de produção, a indústria de alimentação e/ou indústria química, por meio de um método alternativo de fabricação de monossacarídeos mais simples e. portanto mais viável do ponto de vista técnico-econômico.

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RELATÓRIO DESCRITIVO

Patente de Invenção: “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS”

Campo da invenção [001] A presente invenção apresenta um processo para obtenção de monossacarídeos (glicose, galactose e manose) em solução aquosa ácida a partir de quitina e/ou quitosana. O processo permite a obtenção de solução de hexoses utilizando reagentes de baixo custo e de fácil aquisição. O setor técnico a que se refere esta invenção visa prover, por meio de um processo de produção inovador a indústria de alimentação e/ou indústria química, por meio de um método alternativo de produção de açúcares mais viável do ponto de vista técnico-econômico.

Antecedentes da invenção [002] A produção de etanol de segunda geração é fortemente dependente da eficiência na obtenção de monossacarídeos fermentescíveis a partir da biomassa. Os métodos tradicionalmente utilizados recorrem à hidrólise química e/ou enzimática da lignocelulose, a mais abundante fonte de biomassa. Os maiores problemas associados ao etanol oriundo da biomassa lignocelulósica derivam da estrutura refratária da lignocelulose que exige um processo de deslignificação da biomassa (a lignina presente na biomassa interfere na atividade das enzimas celulases utilizadas) e da fermentação das pentoses produzidas no processo (tais como xilose e arabinose, as quais não são fermentescíveis pela maior parte dos organismos utilizados para produção de etanol, entre eles as leveduras do gênero Saccharomyces). Uma abordagem alternativa investigada para produção de etanol de segunda

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geração utiliza quitina. A quitina, o polissacarídeo natural poli-N-acetilglicosamina, é um componente estrutural de crustáceos e é o segundo biopolímero mais abundante na natureza, atrás apenas da celulose. Estima-se que 1 a 100 bilhões de toneladas de resíduo quitinoso sejam produzidos anualmente em todo o planeta originados principalmente pela indústria da pesca. A hidrólise de quitina causa sua desacetilação e produz a quitosana um polímero cuja unidade monomérica é a glicosamina. O processo de produção de quitosana a partir de quitina por hidrólise ácida ou alcalina sofre influência de vários fatores tais como temperatura e tempo de reação (REGE,

P. R.; BLOCK, L. H. Chitosan processing: influence of process parameters during acidic and alkaline hydrolysis and effect of the processing sequence on the resultant chitosarís properties. Carbohydrate Research, v. 321, p. 235<?>

245, 1999).

[003] A reação de despolimerização da quitosana tanto por via enzimática quanto por via química tem sido estudada por vários autores. Pan et. al. foram capazes de produzir glicosamina a partir de quitosana pelo uso de alfa-amilases e glicoamilases comerciais (PAN, SK.; et al., Preparation of glucosamine by hydrolysis of chitosan with commercial α-amylase and glucoamylase. J Zhejiang Univ-Sci B (Biomed & Biotechnol) 2011;12 (11): 931-934. doi: 10.1631/jzus.B1100065). O ácido nitroso (HNO₂) foi muito investigado para despolimerização da quitosana. Este ácido é capaz de reagir com aminas produzindo gás nitrogênio (N₂) e água. Devido ao grupo amino (NH₂) presente no monômero, a quitosana é especialmente susceptível a esta ração.

[004] Usando uma combinação de ácido acético (2,5%) e condições brandas (temperatura de 4°C, tempo de reação de 24h, ambiente escuro e concentrações de 1,5 mmol de NaNO₂) Tommeraas et al. (Preparation and characterisation of oligosaccharides produced by nitrous acid depolymerisation of chitosans. Carbohydrate Research, v. 333, n. 2, p. 137 144, Jul. 2001) foram capazes de obter oligômeros com uma cadeia

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possuindo como extremidade um monômero com a estrutura da 2,5-D- i manose.

[005] Usando condições mais vigorosas [temperatura ambiente, 24 h de reação, NaNO₂ em concentração de 0,66 M e HCI concentrado (37%)]. SALIM, E.; AILINCAI, D.; TROMBOTTO, S. Chitooligosaccharide-2,5-anhydroD-mannonic Acid. Molbank, v. 2014, n. 3, Agosto 2014. ISSN 1422-8599. conseguiram produzir oligômeros com a cadeia terminal 2,5-D-manofuranose.

[006] Um estudo pormenorizado do mecanismo de desacetilação e despolimerização conduzido por KNIGHT, D. K.; SHAPKA, S. N.; AMSDEN,

B. G. Structure, depolymerization, and cytocompatibility evaluation of glycol chitosan. Journal of Biomedical Materials Research Part A, v. 83A, n. 3, p. 787 - 798, Dezembro 2007, usando NaNO₂ em concentrações diluídas e diferentes valores de pH (1,6; 2,9 e 5,1) demonstrou que o pH afeta de forma determinante o produto da reação sendo que em valores muito baixos de pH há a formação de N-nitrosaminas.

[007] Em um estudo conduzido por Valum, Ottoyb, Smidsroda. Acid hydrolysis of chitosans. Carbohydrate Polymers, v. 46, n. 1, p. 89 - 90, Setembro 2001, foi demonstrado que, em meio de HCI concentrado, a reação de despolimerização da ligação glicosídica em quitosana parcialmente acetilada é 10 vezes mais rápida do que a reação de desacetilação enquanto que em ácido diluída as duas reações ocorrem em velocidades iguais.

[008] Na patente U.S. Pat. N° 3,922,260 (PENISTON, Q. P.; JOHNSON,

E. L. Process for depolymerization of chitosan. U.S. Pat. No. 3,922,260, Nov. 25, 1975) explicam a descoberta de um processo para obtenção de moléculas redutoras de cadeia curta utilizando a dissolução de quitosana em ácido acético diluído e solução diluídas de nitrito de sódio (com concentrações da ordem de 0,124 mol/L).

[009] Neste invento, relata-se a descoberta de combinações de condições de temperatura e concentração de ácido nitroso que permitem a hidrólise de quitosana e/ou da quitina para a produção de monossacárideos

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bem como a combinação desta hidrólise química com a hidrólise enzimática utilizando enzimas com atividade amilolítica (“amiloglucosidases”) para a obtenção de monossacarídeos a partir da quitina e/ou da quitosana.

[010] Enquanto os ácidos minerais, como HCl e / ou o ácido carboxílico de cadeia curta (como o ácido acético) em condições suaves induzem uma despolimerização com a formação de oligômeros, verificou-se que o ácido acético em condições vigorosas (altas concentrações de íon nitrito) na reação de despolimerização de quitosana em ácido acético é capaz de produzir monossacarídeos (pequenas alterações nesta condições de reação, como o uso de HCl de ácido mineral substituindo o ácido acético ou redução da concentração de nitrito gera produtos diferentes).

[011] De forma similar, a combinação da hidrólise química com ácido nitroso, isto é, da despolimerização da quitina e/ou da quitosana com ácido nitroso seguido por uma hidrólise enzimática com enzimas amilases com atividade amilolítica (as quais são capazes de promover a despolimerização dos oligômeros produzidos na hidrólise química com ácido nitroso) também produz monossacarídeos.

Metodologia de produção [012] Para reação de hidrólise ácida misturou-se 10,00 g de quitina ou quitosana em 500,0 ml de Ácido Acético (CH₃COOH) (2%) em agitação constante. Posteriormente adicionou-se 100,0 ml_ da solução de Nitrito de Sódio (NaNO₂) 0,66 mol/L e aqueceu-se em temperatura branda por ( 35°C a 55°C) 3 minutos. O produto final é uma suspensão de cor amarelada com baixa viscosidade.

[013] Para a hidrólise combinada (química e enzimática), a hidrólise química descrita no parágrafo anterior foi conduzida em uma amostra de quitina (exoesqueleto de crustáceo triturada, tal como exoesqueleto de camarão - crustáceos da ordem Decapoda) seguida por uma hidrólise com uma enzima amiloglucosidase (uma enzima com atividade amilolítica) nas

5/9 / S ^Fls ^ô'43tr:a/ condições otimizadas após a adequação da temperatura e da acidez ( pH ξ 5,0 e T = 52°C). Assim como na hidrólise química, o produto também é uma suspensão com cor amarela e baixa viscosidade.

[014] O isolamento das hexoses fermentescíveis foi realizado segundo Ascencio, S. D. Extração, quantificação e caracterização química de carboidratos de baixa massa molecular de algas vermelhas (Rhodophyta). Curitiba, 2002. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Setor de Ciências Biológicas, Universidade Federal do Paraná. 100 p, 2002. Orientador: Prof. Dr. Miguel Daniel Noseda, em cromatografia de filtração em gel usando uma coluna de vidro (50 x 1,5 cm d. i.) contendo BioGel P-2 (faixa de exclusão: 1800-100 Daltons) com volume total (Vt) de 88 ml e volume morto (V0) de 60 ml. O volume total da coluna foi medido através da adição de água na coluna até o nível determinado a ser preenchido pelo gel, sendo o eluente utilizado H₂O deionizada mQ (pH 6,51).

[015] Frações de 10 ml a cada 15min do filtrado foram coletadas através do coletor de frações CF-2 da Spectrum Labs, durante 9 horas. A técnica inicial utilizada para triagem cromatográfica foi a de cromatografia em camada delgada (CCD), conforme descrita por WAKSMUNDZKA-HAJNOS, M.; SHERMA, J.; KOWALSKA, T. Thin Layer Chromatography in Phytochemistry. Chromatographic Science Series: 99, 2008, consistiu na utilização de placas de sílica gel 60 (ALUGRAM®); previamente ativadas, 110°C por 30 minutos; utilizadas como fase estacionária. Foram aplicadas as diferentes amostras na parte inferior, em diferentes pontos (spots), em uma linha à 2,5 cm acima do início da placa, por meio de capilares de vidro. Após isto a base da placa foi imersa na fase móvel, dentro de cuba cromatográfica, e a corrida se deu até a fase móvel alcançar a altura máxima estipulada (2,5 cm abaixo do final da placa).

VV I X3 [016] A fase móvel utilizada nesta análise consistiu de: Acetato de etila : Álcool Isopropílico : Ácido acético : Água destilada e deionizada (4:2:2:1). A revelação foi feita a 100°C até atingir-se a coloração desejada (aprox. 5

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Rut minutos). O revelador consistiu de 250 mg de orcinol, solubilizado em 95 ml de etanol e 5 ml de ácido sulfúrico, o qual foi borrifado na placa antes desta ser levada à estufa. O padrão utilizado foi Glicose. Todos os reagentes utilizados, assim como o padrão, apresentam graus de pureza elevados.

[017] Após a triagem inicial por cromatografia em camada delgada (CCD) as frações identificadas com açúcares foram encaminhadas para análise por CI_AE. Em virtude da utilização do detector de índice de refração (RID) ao invés de detecção por UV-VIS, não se fez necessária à modificação das moléculas de carboidratos por derivatização.

[018] Utilizou-se um cromatógrafo líquido de alta eficiência marca Shimadzu (LC-10 Series Avp; desgaseificador: DGU-14A, integrador: CLASS LC-10), com eluição isocrática, pelo bombeamento (LC-10AD) de uma fase móvel composta de 5 mM de ácido sulfúrico em água ultrapura (destilada e deionizada). O fluxo do eluente foi de 0,6 mL/min, a 30°C (forno de coluna CTO-10A), com corrida de tempo total de 20 minutos. A detecção se deu em detector de índice de refração (Shimadzu, modelo RID-10A). Uma alíquota de 20,0 pl da amostra foi injetada manualmente (injetor Rheodyne - iL malha 20) e permeada por uma coluna Phenomenex Rezex ROA-Organic Acid H+ (300 x 7,8 mm) com conexão direta a Cartucho de segurança Phenomenex CarboH (4 x 3 mm) preenchida com material semelhante ao da coluna principal. Na amostra do frasco 9, apresentada na Figura 1 foi possível identificar a presença de hexose.

[019] Amostra também foi caracterizada através de um cromatógrafo a gás acoplado a espectrômetro de massa Saturn, modelo 4000, equipado com uma coluna FactorFour Capillary Column VF-1ms (30m x 0.25 mm x 0,25 um). A temperatura inicial foi de 50°C, aumentando gradativamente (fluxo de 40°C por minuto) até atingir 220°C, temperatura de análise dos acetatos de alditóis. A temperatura permaneceu constante durante o tempo de análise (25 minutos). O gás de arraste utilizado foi o hélio, com fluxo de 1 mL/min. As áreas dos picos de interesse foram determinadas por integração com o

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Fls _ co Rub ο software Varian WS, e os fragmentos de massa foram obtidos por impacto 'de ~-N elétrons a 70 meV, cujos valores podem ser visualizados no espectro de massas. A análise foi feita por meio da comparação entre os tempos de retenção e perfis de fragmentação das amostras e dos padrões.

[020] Por último realizou-se análises de ressonância magnética nuclear 1D e 2D em espectrômetro de modelo Bruker Avance DRX400 (Bruker Germany), em frequências base de 400 MHz (1H) e 100 MHz (13C), e em espectrômetro de modelo Bruker Avance III 600 (Bruker Germany), com frequências base de 150 MHz (13C) e 600 MHz (1H). As temperaturas de análise variaram de 30 a 50°C. As amostras foram solubilizadas em D2O 99%, a uma concentração de 80 mg/mL para as análises de 13C e 20 mg/mL para as análises de 1H e bidimensionais (HSQC), e colocadas em tubos de 5 mm de diâmetro externo. Os deslocamentos químicos, expressos em ppm, foram determinados utilizando acetona como padrão interno, tanto para as análises de 13C (30,20 ppm) como para 1H (2,224 ppm).

Descrição da invenção [021] Nesta invenção, reportamos a observação de uma efetiva despolimerização da quitina ou da quitosana em monossacarídeos fermentescíveis com a combinação de ácido acético ou ácidos minerais com soluções aquosas concentradas de nitrito de sódio com rendimentos elevados na conversão da biomassa em monossacarídeos. Alternativamente, o procedimento também mostra eficiência quando usadas combinações de hidrólise enzimática da quitina ou da quitosana com o uso de enzimas amiloglucosidase (isto é, enzimas com atividade amilolítica) combinada com a hidrólise química descrita anteriormente.

[022] Exemplo 1. Preparar uma solução 1-5% (massa/volume) de quitina ou quitosana em solução de ácido acético (1-5%) sob agitação à temperatura ambiente por um intervalo de tempo apropriado (1-30 minutos). A seguir adiciona-se 5-50% do volume da solução uma solução de nitrito de

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sódio (NaNO₂) concentrada (0,5 a 5 mol/L) recém-preparada (o nitrito tende a oxidar-se a nitrato por isso o uso de uma solução antiga reduz a eficiência do processo) sob agitação a temperatura ambiente. A reação produz nitrogênio gasoso o que pode ser observado pela vigorosa liberação de gás.

[023] Exemplo 2. Preparar a solução de quitina ou quitosana de acordo com o exemplo. 1 com a modificação de aquecer a mistura durante a agitação sob aquecimento brando (temperatura de 30°C a 55°C) durante o período de agitação. A temperatura acelera a reação reduzindo o tempo total para obtenção do produto.

[024] Exemplo 3. Preparar a solução de quitina ou quitosana de acordo com o exemplo. 1 com a modificação de aquecer a mistura durante a agitação sob aquecimento intenso (55°C-99°C) durante o período de agitação.

[025] Exemplo 4. Preparar uma solução 1-5% (massa/volume) de quitina ou quitosana em solução de ácido acético (1-5%) com uma rápida agitação à temperatura ambiente por um intervalo de tempo apropriado (1 segundo- 59 segundos). Adicionar uma solução de nitrito de sódio (NaNO₂) recém-preparada concentrada (0,5 a 5 mol/L) sem agitação e estocar a mistura por um período superior a 30 minutos. A reação procede normalmente obtendo-se a glicose em solução.

[026] Exemplo 5. Preparar a mistura de acordo com o exemplo.4 com aquecimento brando (30°C-55°C) durante a preparação da mistura quitosana com o ácido acético e da adição de solução de nitrito de sódio.

[027] Exemplo 6. Preparar a mistura de acordo com o exemplo.4 com aquecimento vigoroso (55°C-100°C) durante a preparação da mistura quitosana com o ácido acético e da adição de solução de nitrito de sódio.

[028] Exemplo 7. Preparar uma mistura de quitina ou quitosana em ácidos orgânicos de cadeia curta ou em ácidos minerais com concentração variando de 1-20%. A seguir, adicionar solução de nitrito de sódio (NaNO₂) concentrada ou diluída sob aquecimento (temperatura superior a 30°C) e

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[029] Exemplo 8. Preparar uma mistura de quitina ou quitosana de acordo com o exemplo 7. A seguir adicionar solução de nitrito de sódio concentrada ou diluída à temperatura ambiente sob agitação ou em repouso.

Logo após adicionar a enzima amiloglucosidase (enzima com atividade amilolítica) em condições de pH e temperaturas adequadas para a atividade enzimática sob agitação ou em repouso por período de tempo suficiente para otimização do rendimento.

[030] Exemplo 9. Preparar uma mistura de quitina ou quitosana de acordo com o exemplo 7. Adicionar a enzima amiloglucosidase (uma enzima com atividade amilolítica) em condições de pH e temperatura adequadas (para a atividade enzimática) sob agitação ou em repouso por período de tempo suficiente para otimização do rendimento. Logo após adicionar solução de nitrito de sódio (NaNO₂) concentrada ou diluída sob aquecimento (temperatura superior a 30°C) e agitação ou em repouso.

[031] Exemplo 10. Preparar uma mistura de quitina ou quitosana de acordo com o exemplo 7. Adicionar a enzima amiloglucosidase (enzima com atividade amilolítica) em condições de pH e temperaturas adequadas para a atividade enzimática sob agitação ou em repouso por período de tempo suficiente para otimização do rendimento. A seguir, adicionar solução de nitrito de sódio concentrada ou diluída à temperatura ambiente sob agitação ou em repouso.

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Claims

REIVINDICAÇÕES

Afinal

1. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” para produção de monossacarídeos em solução caracterizado por dissolução de quitina ou quitosana em solução de ácido acético e reação desta mistura com ácido nitroso concentrado conforme Etapa 1, uma solução 1 a 5% (massa/volume) de quitosana em solução de ácido acético (1 a 5%) sob agitação à temperatura ambiente por um intervalo de tempo apropriado (1 a 60 minutos) e Etapa 2, adição de 5 a 50% do volume da solução de nitrito de sódio (NaNO₂) na faixa de concentração (0,005 a 12 mol/L) recém-preparada sob agitação e aquecimento
2. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” produção de monossacarídeos em solução de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por agitação sob aquecimento brando na faixa de temperatura entre 30°C a 55°C
3. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” produção de monossacarídeos em solução de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizado por obtenção por diferentes condições de tempo na faixa de um minuto a uma hora
4. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR / Q t Fls Ç>_

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HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” para produçãol _RUb LlC <3 de monossacarídeos em solução de acordo com as reivindicações 1 e 3 _{( y} caracterizado por aquecer a mistura durante a agitação sob aquecimento intenso na faixa de temperatura entre 55°C a 99°C
5. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” para produção de monossacarídeos em solução de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por uma rápida agitação à temperatura ambiente por um intervalo de tempo apropriado 1 segundo a 59 segundos seguido de adição de uma solução de nitrito de sódio (NaNO₂) recém-preparada na faixa de concentração (0,005 a 12 mol/L) sem agitação
6. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” para produção de monossacarídeos em solução de acordo com as reivindicações 1 e 2 caracterizado por uma rápida agitação à temperatura ambiente por um intervalo de tempo apropriado 1 segundo a 59 segundos seguido de adição de uma solução de nitrito de sódio (NaNO₂) recém-preparada na faixa de concentração (0,005 a 12 mol/L) com possível formação de oligossacarídeos de importância industrial
7. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” para produção de monossacarídeos em solução de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por agitação à temperatura adequada por um intervalo de tempo apropriado 1 segundo a 59 segundos seguido de adição de uma

3/3 ^u⁵”¹⁹' solução de nitrito de sódio (NaNO₂) recém-preparada na faixâ de concentração (0,005 a 12 mol/L) com possível formação de pentoses ae importância industrial
8. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” para produção de monossacarídeos em solução de acordo com as reivindicações de 1 a 7 seguida por uma etapa adicional de hidrólise enzimática caracterizado por adição de enzima amiloglucosidase (uma enzima com atividade amilolítica) em condições de pH e temperatura adequadas (para a atividade enzimática) sob agitação ou em repouso por período de tempo suficiente para otimização do rendimento
9. “PROCESSO PARA PRODUÇÃO DE MONOSSACARÍDEOS FERMENTESCÍVEIS A PARTIR DE QUITINA E/OU QUITOSANA POR HIDRÓLISE QUÍMICA E/OU ENZIMÁTICA E SEUS USOS” para produção de monossacarídeos em solução de acordo com as reivindicações de 1 a 7 precedida por uma etapa adicional de hidrólise enzimática caracterizado por adição de enzima amiloglucosidase (uma enzima com atividade amilolítica) em condições de pH e temperatura adequadas (para a atividade enzimática) sob agitação ou em repouso por período de tempo suficiente para otimização do rendimento <yjstria/

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