BR102013029193A2 - Processo para a reação de um éster de ácido carboxílico - Google Patents
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Abstract
PROCESSO PARA REAÇAO DE UM ESTER DE ÁCIDO CARBOXÍLICO, USO DE UM NOCAUTE DE UM GENE QUE CODIFICA UM POLIPEPTÍDIO, CÉLULA RECOMBINANTE E SEU USO, E MISTURA DE REAÇÃO A invenção refere-se a um processo para a reação de um éster de ácido carboxílico da fórmula (1) R1-A-000R2 (1), em que R1 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, - CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e CH2NH2, em que R2 é selecionado do grupo, que compreende alquila, preferivelmente metila, etila e propila, em que R3 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila e em que no caso de A, se trata de um radical alquileno, alquenileno, arileno ou aralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono, por meio de uma célula, compreendendo a etapa a) contato da célula com o éster de ácido carboxílico em uma solução aquosa, sendo que no caso da célula, se trata de uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídio compreendendo SEQ ID NO 2 ou de uma variante deste em relação ao tipo selvagem da célula é reduzida, bem como uma célula apropriada para esse fim e seus usos.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PROCESSO PARA REAÇÃO DE UM ÉSTER DE ÁCIDO CARBOXÍLICO, USO DE UM NOCAUTE DE UM GENE QUE CODIFICA UM POLI-PEPTÍDIO, CÉLULA RECOMBINANTE E SEU USO, E MISTURA DE REAÇÃO". [0001] A invenção refere-se a um processo para a reação de um éster de ácido carboxílico da fórmula (I) R1 -A-COOR2 (I), em que R1 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, em que R2 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila, em que R3 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila e em que no caso de A, se trata de um radical alquileno, alque-nileno, arileno ou aralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono, por meio de uma célula, compreendendo a etapa contato da célula com o éster de ácido carboxílico em uma solução aquosa, sendo que no caso da célula, se trata de uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídeo com a SEQ ID NO 2 ou uma variante deste é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula, bem como uma célula adequada para esse fim e seus usos. [0002] A biotecnologia ocupa-se com a produção, entre outros, de produtos químicos finos com o uso de diversos organismos, que possuem capacidades de síntese interessantes. Comparados com processos químicos convencionais, os processos biotecnológicos possuem uma série de vantagens. Inicialmente, eles desistem, via de regra, completamente de substâncias perigosas para a saúde, tais como catalisadores à base de metais pesados e condições de reação com va- lores de pH, pressão e temperatura extremos. Além disso, na construção da infraestrutura necessária para o processo biotecnológico, muitas vezes feita com menores investimentos e medidas de segurança. A seletividade e especificidade de enzimas biotecnologicamente relevantes excedem muitas vezes consideravelmente a dos catalisadores químicos, de modo que a formação de produtos secundários indeseja-dos e muitas vezes dificilmente separáveis do produto pode ser reduzida, que resultariam necessariamente em uma síntese com o uso de processos sintético-orgânicos. Finalmente, os organismos biotecnologicamente relevantes aceitam como edutos, em muitos casos, compostos, tais como carboidratos complexos, que podem ser obtidos a partir de matérias-primas renováveis. A dependência de uma empresa produtora de matérias-primas fósseis tais como petróleo e gás natural pode, portanto, ser reduzida. [0003] A criação de processos biotecnológicos, contudo, está associada com consideráveis dificuldades, que levam a que, hoje em dia, apenas muito poucas substâncias são produzidas biotecnologicamente em escala industrial. O problema principal consiste em que uma célula com uma atividade de síntese desejada não só apresenta uma enzima responsável pela atividade de síntese, mas sim, muito mais milhares de enzimas, que coexistem na mesma célula e concorrem umas com as outras por substratos ou mesmo completamente catalisam reações opostas. Assim, somente no genoma de Escherichia coli estão codificados cerca de 80 polipeptídeos identificados como hidrolases com processos bioinformáticos, isto é, enzimas, que dissociam certas ligações consumindo uma molécula de água. Em quais condições uma enzima é produzida pela célula e quais reações com quais substratos essa catalisa é exaustivamente explicado, de fato, apenas em poucos casos. Com isso, em muitos casos, a seleção visada de uma enzima para a catálise de uma certa reação não é possível. [0004] Portanto, ao usar células como biocatalisadores ao invés de catalisadores químicos ou biológicos isolados, há sempre o perigo, que um produto ou produto intermediário preparado por uma enzima dotada de uma atividade desejada ou já o eduto original de uma outra enzima, seja transformado em um produto secundário indesejado. Se isso ocorre e quais das inúmeras enzimas neste caso apresentam a atividade indesejada, não pode ser previsto, apesar dos progressos tecnológicos no campo da bioinformática. [0005] Justamente no caso de substâncias quimicamente reativas, que são industrialmente pretendidas como materiais de partida, não é improvável, que essas reagem no interior da célula com componentes essenciais do organismo e, dessa maneira, sejam tóxicas. Se esse é o caso, então a capacidade de crescimento e síntese do organismo são prejudicadas até a morte da célula, sem que o desenvolvedor possa reconhecer imediatamente a toxicidade. Qual organismo tolera que concentração em uma substância quimicamente reativa, também não é previsível. [0006] Em processos com várias reações catalisadas por uma enzima, a complexidade do sistema dificulta a busca por fatores que limitam o rendimento ou a pureza. Caso o rendimento de produto seja muito baixo, então a causa pode ser que uma das enzimas esteja presente em uma concentração muito baixa, sem que se soubesse, de qual enzima em questão se trata, isto é, o reagente não é reagido no prazo previsto ou antes da degradação pelas enzimas concorrentes, devido à insuficiente capacidade de síntese. Alternativamente, é inteiramente possível, que uma enzima está, de fato, comprovadamente presente na célula na forma de um polipeptídeo, mas justamente nessa célula não apresenta a dobra essencial para a atividade ou falta um cofator até agora desconhecido, mas essencial para a atividade. Do mesmo modo, tal como já foi citado, o produto de metabolismo para a célula pode ser tóxico ou ser degradado. [0007] O técnico, que gostaria de estabelecer ou melhorar um processo biotecnológico, se vê confrontado, portanto, com inúmeros possíveis pontos de partida, mas não obtém do estado da técnica, na maioria dos casos, qualquer instrução concreta e convertível, em quais desses pontos de partida ele precisa se fixar, para alcançar o objetivo. [0008] Os ésteres do ácido carboxílico representam um grupo de compostos industrialmente muito demandados, que encontram utilização ou propriamente ou na forma de produtos processados como produtos farmacêuticos, cosméticos, materiais sintéticos e similares. [0009] Muitas vezes, contudo, para um processamento não é inicialmente necessária apenas uma função de éster a ser introduzida em um precursor, mas sim, no éster deve ser realizada uma outra derivati-zação, sem que a função de éster, nesse caso, ou a seguir seja hidro-lisada. A última não pode ser realizada de forma trivial, visto que muitos ésteres do ácido carboxílico já tendem à hidrólise, em particular, em soluções aquosas e com valores de pH que desviam muito do ponto neutro, mesmo com ausência de enzimas que catalisam tais reações. [0010] Uma possibilidade importante de continuar a derivatizar ésteres do ácido carboxílico, consiste na oxidação de cadeias de alquila contidas nesses. Nesse caso, forma-se inicialmente um álcool, que ou é usado como tal ou pode ser mais oxidado no aldeído ou cetona. O aldeído ou cetona pode ser ou aminado por redução ou ser mais oxidado no ácido carboxílico que, conforme a necessidade, por seu lado, pode ser novamente esterificado. [0011] Essas múltiplas possibilidades de reação, das quais muitas são catalisadas através de enzimas endógenas, isto é, naturalmente existentes em um organismo, mostram, que o problema da formação de produtos secundários descontrolados ou metabolismo na reação de ésteres do ácido carboxílico por meio de processos biotecnológicos é particularmente grave. [0012] Um exemplo de um éster do ácido carboxílico industrialmente muito demandado, que é convencionalmente produzido partindo de hidrocarbonetos contidos no petróleo, é o éster metílico do ácido 12-aminoláurico (ALSME). O ALSME é um importante produto de partida na produção de polímeros, por exemplo, na produção de sistemas de tubulação à base de nylon. Até agora, o ALSME é produzido em um processo com baixo rendimento partindo de combustíveis fósseis. [0013] Um novo caminho promissor para a produção biotecnológi-ca de ALS ou ALSME é descrito na WO 2009/077461. Nesse caso, o éster metílico do ácido láurico é oxidado em uma primeira etapa por uma mono-oxigenase e o aldeído resultante é reagido por meio de uma transaminase para formar o ALSME. Uma desvantagem desse processo consiste em que se formam produtos secundários, por e-xemplo, o ácido dicarboxílico, que somente com dificuldades podem ser separados do produto ALSME desejado. Isso diminui o rendimento e dificulta a reciclagem de solventes hidrófobos e trocadores de cá-tions líquidos hidrófobos, que de acordo com a PCT/EP2011/071491, podem ser usados para a separação do produto da mistura de reação aquosa, às custas da eficiência no uso de recursos. [0014] Contra esse fundamento, o objetivo que serve de base à invenção, consiste em disponibilizar um processo biotecnológico o mais eficiente possível com respeito ao rendimento, balanço de carbono e/ou nitrogênio e/ou pureza, para a reação de ésteres do ácido carboxílico. [0015] Um outro objetivo que serve de base à invenção, consiste em disponibilizar um processo biotecnológico o mais eficiente possível com respeito ao rendimento, balanço de carbono e/ou nitrogênio, reutilização de agentes usados e/ou pureza do produto, para a reação de ésteres de ácido carboxílico para ésteres de ácido carboxílico amina-dos. Nesse fundamento, entende-se preferivelmente por um balanço de carbono e/ou nitrogênio eficiente, que uma porção mais elevada do carbono e/ou do nitrogênio alimentado a uma célula para a reação de um éster de ácido carboxílico na forma de substratos adequados se reencontra no produto final desejado, ao invés, por exemplo, de ser reagido para formar outros produtos além dos desejados. [0016] Um outro objetivo que serve de base à invenção consiste em melhorar a capacidade de processamento de uma mistura de reação multifásica da reação de um éster de ácido carboxílico, particularmente com respeito à reutilização para o processamento de solventes hidrófobos usados e trocadores de cátions líquidos, bem como com respeito à formação e separação de fases em um sistema bifásico compreendendo uma fase aquosa, na qual decorre a reação do éster de ácido carboxílico e uma fase orgânica com solventes orgânicos e/ou trocadores de cátions líquidos. [0017] Esse e outros objetivos são resolvidos através do objetivo do presente pedido e, em particular, também através do objetivo das reivindicações independentes anexas, sendo que das sub-reivindicações resultam formas de concretização. [0018] Em um primeiro aspecto, o problema que serve de base à invenção é resolvido por um processo para a reação de um éster de ácido carboxílico da fórmula (I) R1 - A - COOR2 (I), em que R1 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, em que R2 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila, em que R3 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila e em que no caso de A, se trata de um radical alquileno, alque- nileno, arileno ou aralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono, por meio de uma célula, compreendendo a etapa contato da célula com o éster de ácido carboxílico em uma solução aquosa, sendo que no caso da célula, se trata de uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídeo compreendendo a SEQ ID NO 2 ou uma variante deste é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula. [0019] Em uma primeira forma de concretização do primeiro aspecto, o problema é resolvido por um processo, compreendendo adicionalmente a etapa contato da solução aquosa com uma solução orgânica hi-drófoba compreendendo um trocador de cátions. [0020] Em um segundo aspecto, o problema que serve de base à invenção é resolvido pelo uso de um nocaute (knock out) de um gene que codifica um polipeptídeo que compreende SEQ ID NO 2 ou uma variante deste, como parte da característica genética de uma célula recombinante para aumentar a produção de um éster de ácido carboxílico da fórmula (I) R1 - A - COOR2 (I), em que R1 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, em que R2 é selecionado do grupo, que compreende alquila, preferivelmente metila, etila e propila, em que R3 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila e em que no caso de A, se trata de um radical alquileno, alquenileno, arileno ou a-ralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono, em particular, de um radical alquileno com pelo menos quatro, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente, 8 átomos de carbono, em relação ao tipo selvagem correspondente da célula. [0021] Em um terceiro aspecto, o problema que serve de base à invenção é resolvido pelo uso de uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídeo com a SEQ ID NO 2 ou uma variante deste é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula, para a reação de um éster de ácido carboxílico da fórmula (I) R1 - A - COOR2 (I), em que R1 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, em que R2 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila, em que R3 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila e em que no caso de A, se trata de um radical alquileno, alque-nileno, arileno ou aralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono, preferivelmente de um radical alquileno com pelo menos oito átomos de carbono. [0022] Em uma outra forma de concretização do primeiro, segundo ou terceiro aspecto, o problema é resolvido por um processo ou uma utilização, em que no caso de A, se trata de um radical alquileno saturado, preferivelmente de um radical alquileno da fórmula -(CH2)n, em que n é pelo menos 4. [0023] Em uma outra forma de concretização do primeiro aspecto, o problema é resolvido por um processo, em que R1 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, -CH2OH, -CHO e -CH2NH2. [0024] Em um quarto aspecto, o problema que serve de base à invenção é resolvido por uma célula, que exprime uma alcano hidroxi-lase recombinante, em que a atividade de um polipeptídeo compreen- dendo SEQ ID NO 2 ou uma variante desse é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula. [0025] Em uma forma de concretização preferida do quarto aspecto, o problema é resolvido por uma célula, em que no caso da alcano hidroxilase, se trata de uma alcano hidroxilase do grupo compreendendo AlkB-mono-oxigenase e citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153. [0026] Em um quinto aspecto, o problema que serve de base à invenção é resolvido por uma mistura de reação compreendendo a célula de acordo com o quarto aspecto ou de uma de suas formas de concretização em solução aquosa, bem como um éster de ácido car-boxílico da fórmula (I) R1 -A-COOR2 (I), em que R1 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, em que R2 é selecionado do grupo, que compreende alquila, preferivelmente metila, etila e propila, em que R3 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila e em que no caso de A, se trata de um radical alquileno, alquenileno, arileno ou a-ralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono. [0027] Em uma outra forma de concretização do quinto aspecto, o problema é resolvido pela mistura de reação, em que no caso de A, se trata de um radical alquileno com pelo menos quatro átomos de carbono, em particular, de um radical alquileno saturado, preferivelmente de um radical alquileno da fórmula -(CH2)n-, em que n é pelo menos 4, em que R1 é preferivelmente selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, -CH2OH, -CHO e -CH2NH2. [0028] Em uma forma de concretização do quinto aspecto, o pro- blema é resolvido por uma mistura de reação, compreendendo ainda uma solução orgânica hidrófoba com um trocador de cátions. [0029] Em uma forma de concretização preferida do primeiro ao quinto aspecto, o problema é resolvido por um processo, uma célula ou uma utilização, em que a célula exprime, além disso, uma transa-minase. [0030] Em uma forma de concretização preferida do primeiro ao quinto aspecto, o problema é resolvido por um processo, uma célula ou uma utilização, em que a célula exprime, além disso, uma alanina desidrogenase. [0031] Em uma forma de concretização preferida do primeiro ao quinto aspecto, o problema é resolvido por um processo, uma célula ou uma utilização, em que a célula apresenta, além disso, uma proteína da família AlkL. [0032] Em uma forma de concretização preferida do primeiro ao quinto aspecto, o problema é resolvido por um processo, uma célula ou uma utilização, em que a célula apresenta uma atividade reduzida de pelo menos uma enzima em relação ao seu tipo selvagem, que catalisa uma das reações da beta-oxidação de ácidos graxos, sendo que se trata preferivelmente de uma enzima do grupo, que compreende ácido graxo-CoA-ligase, acil-CoA-desidrogenase, 2,4-dienoil-CoA-redutase, enoil-CoA-hidratase e 3-cetoacil-CoA-tiolase, um importador de ácido graxo ou suas variantes, se trata de modo particularmente preferido, de FadL ou de uma variante deste. [0033] Em uma forma de concretização preferida do primeiro ao quinto aspecto, o problema é resolvido por um processo, uma célula ou uma utilização, em que a célula apresenta e/ou superexprime pelo menos uma enzima do grupo compreendendo alcano hidroxilase, desidrogenase de álcool, transaminase, alanina desidrogenase e proteína da família AlkL em forma recombinante. [0034] Em uma forma de concretização preferida do primeiro ao quinto aspecto, o problema é resolvido por um processo, uma célula ou uma utilização, em que a atividade de um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste em relação ao tipo selvagem da célula, é reduzida através do nocaute de um gene que codifica um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste. [0035] A invenção se baseia no conhecimento surpreendente dos inventores, de que uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou de uma variante desse em relação ao tipo selvagem da célula é particularmente reduzida, é de tal modo adequada para a reação de ésteres de ácido carbo-xílico, que o rendimento, o balanço de carbono e de nitrogênio e a pureza dos produtos resultantes são supreendentemente maiores do que em uma célula, que, com respeito ao polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2, apresenta a mesma atividade do tipo selvagem da célula. Isso se refere, por exemplo, às reações, nas quais o éster de ácido carboxílico é oxidado usando pelo menos uma alcano hidroxilase e opcionalmente, outras enzimas. [0036] A invenção se baseia no outro conhecimento surpreendente dos inventores, de que uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou de uma variante desse é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula, é particularmente adequada de tal modo para a reação de ésteres de ácido carboxílico, que os solventes orgânicos usados para o processamento do produto de reação da reação do éster de ácido carboxílico e trocado-res de cátions líquidos são particularmente eficientes e/ou podem ser frequentemente recuperados através da reciclagem para um novo uso e que a separação da mistura de reação aquosa de uma solução hi-drófoba compreendendo solvente orgânico e/ou trocador de cátions líquido melhora. [0037] A invenção se refere a um processo para a reação de um éster de ácido carboxílico por meio de uma célula, sendo que no caso da reação, pode se tratar de qualquer reação química, que faz uso do éster de ácido carboxílico de interesse como reagente e na qual a hi-drólise ou hidróxido precoce do éster de ácido carboxílico ou de um composto resultante podería prejudicar o rendimento, o balanço de carbono e/ou nitrogênio e/ou a pureza do produto a ser produzido dessa. A célula de acordo com a invenção e o processo de acordo com a invenção,são particularmente adequados para reações, nas quais é reagida uma outra função química diferente do grupo de éster de ácido carboxílico, por exemplo, um grupo alquila em posição terminal e nas quais é válido obter o grupo de éster de ácido carboxílico. De acordo com a invenção, contudo, também podem ser realizadas reações, tais como transesterificações do grupo de éster de ácido carboxílico de a-cordo com a invenção, nas quais é válido, evitar uma reação precoce e inespecífica do grupo de éster de ácido carboxílico. Do mesmo modo, o estudo de acordo com a invenção é adequado para reações, nas quais um composto contendo o grupo de éster de ácido carboxílico não é propriamente o reagente a ser reagido, mas sim, meramente sua presença e estabilidade são necessárias durante um período mais longo, por exemplo, no caso, de se tratar de um indutor ou ativador de uma enzima com uma atividade essencial para o processo. [0038] Para a concretização da invenção é essencial, que a célula de acordo com a invenção ou a célula usada em um processo de a-cordo com a invenção seja uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante desse é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula. Essa sequência codifica BioH, uma enzima, que é conhecida por sua capacidade, como parte da biossíntese de biotina com a outra enzima, de transformar BioC alanina e/ou acetato em pimeloiol-CoA (Barker, D. F., e Campbell, A. M. (1980) J. Bacteriol. 143, 789-800). BioH é codificado na Escherichia coli por uma sequência de nucleotídeo compreendendo SEQ ID NO 1. Em uma forma de concretização preferida, a atividade do polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 é reduzida através de nocaute, por exemplo, deleção parcial ou outras medidas para a redução da expressão de uma sequência de nucleotídeo compreendendo SEQ ID NO 1 ou uma variante desse. [0039] Com o desenvolvimento de modernos métodos genéticos, microbiológicos e biológicos moleculares, há inúmeras ferramentas à disposição do técnico, com as quais ele pode medir e influenciar rotineiramente a atividade de polipeptídeos presentes em células vivas. Para a determinação da atividade de uma enzima, que está presente na forma de uma suspensão, de um pélete ou em forma processada pode ser retirada de uma cultura celular, podem ser usados e avaliados testes enzimáticos padronizados, tal como descrito em livros didáticos, por exemplo, Cornish-Bowden, 1995. Um ensaio para a determinação da atividade do polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 1 ou uma variante desse é descrito em X. Xie e colaboradores (2007) Me-tabolic Engineering 9; 379-386. [0040] Também processos aplicáveis rotineiramente para reduzir a atividade de uma enzima em uma célula, por exemplo, através de mu-tagênese indireta de células por meio de exposição à radiação radioativa, seguida de enriquecimento ou seleção dos mutantes, através de introdução sítio-dirigida de mutações pontuais ou através da interrupção do quadro de leitura ou deleção de uma parte do quadro de leitura de um gene integrado de forma cromossomal em uma célula que codifica uma enzima ativa, são descritos no estado da técnica, por exemplo, em Maniatis e colaboradores (1989) ou em Fuchs & Schlegl (2007) e que podem ser rotineiramente realizados pelo técnico. Uma redução da atividade à base de interferência de RNA (Tuschi, 2001) ou utilizando inibidores específicos, também é possível. Em uma forma de concretização preferida, a formulação "em que a célula apresenta uma atividade reduzida de um polipeptídeo em relação ao seu tipo selvagem", tal como entendido aqui, significa que a atividade do polipeptídeo na célula modificada é reduzida em relação à atividade da mesma enzima em uma célula de tipo selvagem. Em uma forma de concretização preferida, a redução relativa na ordem de crescente preferência, perfaz 5, 10, 20, 40, 50, 75, 90, 95, 99 ou mais porcentos da atividade. Em uma forma de concretização particularmente preferida, não pode ser detectada mais qualquer atividade da enzima em relação ao fundamento. [0041] A redução da atividade do polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante do mesmo através de um nocaute é particularmente preferida. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "nocaute" (knock out), tal como usado aqui, qualquer medida, que reduz de forma permanente e irreversível a atividade do polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste, em particular também nas respectivas gerações de células, preferivelmente através da interrupção do quadro de leitura da sequência que codifica a SEQ ID NO 2 ou uma variante desta, através da dele-ção de pelo menos uma parte da sequência que codifica a SEQ ID NO 2 ou uma variante desta, que induz uma perda da atividade enzimática do polipeptídeo codificado, mas não interrompe o quadro de leitura ou através da mutação de uma sequência de nucleotídeo essencial para a expressão, por exemplo, de um promotor, de um ponto de ligação do ribossomo ou similar. Medidas para produzir células com atividades reduzidas de polipeptídeos específicos suficientemente descritas são processos rotineiros acessíveis para o técnico e suficientemente descritas no estado da técnica, por exemplo, em Kamionka e colaboradores (2005) Appl Environ Microbiol. 2005 February; 71(2): 728-733, Geng e colaboradores (2009), Journal of Biomedicine and Biotechno-logy Volume 2009, Article ID 646380, doi:10.1155/2009/646380, e Murphy (2009) Mol Biol. 2011;765:27-42. Também são adequados kits comercialmente disponíveis, por exemplo, o Targe Tron™ Gene Knoc-kout System da Sigma Aldrich. [0042] A invenção se refere à reação de um éster de ácido carbo-xílico da fórmula (I) R1 -A-COOR2 (I), em que R1 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, em que R2 é selecionado do grupo, que compreende alquila, preferivelmente metila, etila e propila, em que R3 é selecionado do grupo, que compreende hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila e em que no caso de A, se trata de um radical alquileno, alquenileno, arileno ou a-ralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono. No caso do radical alquileno A pode se tratar, com a condição, de que ele compreenda pelo menos quatro átomos de carbono, de qualquer radical alquileno, em particular, linear, ramificado ou cíclico. Em uma forma de concretização particularmente preferida, no caso de A, se trata de uma cadeia alquileno da fórmula -(CH2)n-, em que n pode ser 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30. Em uma forma de concretização mais preferida, A representa um radical alquileno da fórmula -(CH2)n-, em que n é 4 a 24, mais preferivelmente 4 a 22 e ainda mais preferivelmente, 4 a 10, Ri é hidrogênio, -CH2OH, -CHO ou -COOH, ainda mais preferivelmente hidrogênio e R2 é metila ou etila. [0043] Em conexão com os materiais de partida dos ésteres de ácidos carboxílicos reagidos de acordo com a invenção, bem como todos os outros compostos aqui descritos, se aplica, que um composto designado com características estruturais, por exemplo, com uma fórmula química, designa, do mesmo modo, compostos protonizados como também desprotonizados ou outros dissociados. Por exemplo, pelo termo "acetato" é entendida, do mesmo modo, a forma protonizada, isto é, ácido acético, como também a forma dissociada, isto é, CH3-COO\ [0044] No caso da célula a ser usada de acordo com a invenção, trata-se preferivelmente de um catalisador de célula inteira na forma de uma célula metabolicamente ativa, que apresenta uma atividade enzimática necessária para a reação do éster de ácido carboxílico, de modo particularmente preferido, através da expressão de uma enzima recombinante. Em uma outra forma de concretização preferida, no caso da célula trata-se de um lisato, um extrato ou uma outra preparação da célula, que apresenta pelo menos uma atividade enzimática. [0045] Com respeito à escolha do organismo, a célula utilizável de acordo com a invenção não está sujeita a quaisquer limitações, desde que essa seja cultivável, estável e acessível a processos para enfraquecer atividades enzimáticas, por exemplo, nocautes. Assim, do mesmo modo, no caso da célula, pode se tratar de uma célula procari-ótica ou eucariótica. No caso de uma célula eucariótica, os eucariontes unicelulares são particularmente preferidos, particularmente leveduras, tais como Saccharomyces cerevisiae, Candida tropicalis, Candida albi-cans e Pichia pastoris. No caso de células procarióticas, pode se tratar, por exemplo, de uma bactéria, que é selecionada do grupo, que compreende Magnetococcus, Mariprofundus, Acetobacter, Acetobacte-rium, Acidiphilium, Afipia, Ahrensia, Asticcacaulis, Aurantimonas, Azo-rhizobium, Azospirillum, Bacillus, Bartortella, tribocorum, Beijerinckia, Bradyrhizobium, Brevundimonas, subvibrioides, Brucella, Caulobacter, Chelativorans, Citreicella, Citromicrobium, Clostridium, Corynebacteri-um, Dinoroseobacter, Erythrobacter, Fulvimarina, Gluconacetobacter, Granulibacter, Hirschia, Hoeflea, Hyphomicrobium, Hyphomonas, Ke-togulonicigenium, Labrenzia, Loktanella, Magnetospirillum, Maricaulis, Maritimibacter, Mesorhizobium, Methylobacterium, Methylocystis, Me-thylosinus, Nitrobacter, Novosphingobium, Oceanibulbus, Oceanicau-lis, Oceanicola, Ochrobactrum, Octadecabacter, Oligotropha, Paracoc-cus, Parvibaculum, Parvularcula, Peíagibaca, Phaeobacter, Phenylo-bacterium, Polymorphum, Pseudovibrio, fíhodobacter, Rhodomicrobi-um, Rhodopseudomonas, Rhodospirillum, Roseibium, Roseobacter, Roseomonas, Roseovarius, Ruegeria, Sagittula, Silicibacter, Sphingo-bium, Sphingomonas, Sphingopyxis, Starkeya, Sulfitobacter, Thalas-siobium, Xanthobacter, Zymomonas, Agrobacterium, Rhizobium, Sino-rhizobium, Anaplasma, Ehrlichia, Neorickettsia, Orientia, Rickettsia, Wolbachia, Bordetella, Burkholderia, Cupriavidus, Taiwanensis, Lau-tropia, Limnobacter, Polynucleobacter, Ralstonia, Chromobacterium, Eikenella, corrodens, Basfia, Kingella, Laribacter, Lutiella, Neisseria, Simonsiella, Achromobacter, Acidovorax, Alicycliphilus, Aromatoleum, Azoarcus, Comamonas, Dechloromonas, Delftia, Gallionella, Herbaspi-rillum, Herminiimonas, Hylemonella, Janthinobacterium, Leptothrix, Methylibium, Methylobacillus, Methylophilales, Methyloversatilis, Meth-ylovorus, Nitrosomonas, Nitrosospira, Oxalobacter, Parasutterella, Po-laromonas, Polaromonas, Pusillimonas, Rhodoferax, Rubrivivax, Side-roxydans, Sutterella, wadsworthensis, Taylorella, Thauera, Thiobacil-lus, Thiomonas, Variovorax, Verminephrobacter, Anaeromyxobacter, Bdellovibrio, bacteriovorus, Bilophila, Desulfarculus, Desulfatibacillum, Desulfobacca, Desulfobacterium, Desulfobulbus, Desulfococcus, De-sulfohalobium, Desulfitobacterium, Desulfomicrobium, Desulfonatro-nospira, Desulfotalea, Desulfovibrio, Desulfuromonas, Geobacter, Ha-íiangium, Hippea, Lawsonia, Myxococcus, Pelobacter, Plesiocystis, So-rangium, Stigmatella, Syntrophobacter, Syntrophus, Arcobacter, Cami-nibacter, Campylobacter, Helicobacter, Nitratifractor, Nitratiruptor, Sul- furicurvum, Su/furimonas, Sulfurospirillum, Sulfurovum, Wolinella, Bu-chnera, Blochmannia, Hamiltonella, Regiella, Riesia, Citrobacter, Cro-nobacter, Dickeya, Edwardsiella, Enterobacter, Erwinia, Escherichia, Klebsiella, Pantoea, Pectobacterium, Proteus, Providencia, Rahnella, Salmonella, Serratia, Shigella, Sodalis, Wigglesworthia, Glossina, Xe-norhabdus, Yersinia, Acidithiobacillus, Acinetobacter, Aeromonas, Al-canivorax, Alkalilimnicola, Allochromatium, Aíteromonadales, Altero-monas, Baumannia, Beggiatoa, Bermanella, Carsonella, Ruthia, Vesi-comyosocius, Cardiobacterium, Chromohalobacter, Colwellia, Congre-gibacter, Coxiella, Dichelobacter, Endoriftia, Enhydrobacter, Ferrimo-nas, Francisella, Glaciecola, Hahella, Halomonas, Halorhodospira, Ha-lothiobacillus, Idiomarina, Kangiella, Legionella, Marinobacter, Marino-monas, Methylobacter, Methylococcus, Methylomicrobium, Methylo-phaga, Moraxella, Moritella, Neptuniibacter, Nitrococcus, Pseudoalte-romonas, Psychrobacter, Psychromonas, Reinekea, Rickettsiella, Sac-charophagus, Shewanella, Succinatimonas, Teredinibacter, Thioalka-limicrobium, Thioalkalivibrio, Thiomicrospira, Tolumonas, Vibrionales, Actinobacillus, Aggregatibacter, GaUibacterium, Haemophilus, Histophi-lus, Mannheimia, Pasteurella, Azotobacter, Cellvibrio, Pseudomonas, Aliivibrio, Grimontia, Photobacterium, Photobacterium, Vibrio, Pseudo-xanthomonas, Stenotrophomonas, Xanthomonas, Xylella, Borrelia, Brachyspira, Leptospira, Spirochaeta, Treponema, Hodgkinia, Puni-ceispirillum, Liberibacter, Pelagibacter, Odyssella, Accumulibacter, em particular B. subtilis, B. megaterium, C. glutamicum, E. coli, Pseudomonas sp., Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, Pseudomonas stutzeri,, Acinetobacter sp., Burkholderia sp., Burkholderia thailandensis, Cyanobakterien, Klebsiella sp., Klebsiella oxytoca, Salmonella sp., Rhizobium sp. e Rhizobium meliloti. Em uma forma de concretização particularmente preferida, trata-se de uma enterobacté-rias, ainda mais preferivelmente, de Escherichia coli. [0046] O processo de acordo com a invenção requer, que a célula com o éster de ácido carboxílico seja contatada em uma solução a-quosa. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "contatada", tal como usado aqui, que a célula de acordo com a invenção entre em contato direto com o respectivo agente, por exemplo, com o éster de ácido carboxílico ou com um trocador de cátions líquido, em particular, sem a interposição de barreiras físicas, tais como membranas porosas ou similares. O contato ocorre no caso mais simples pelo fato, de que o agente, por exemplo, o éster de ácido carboxílico ou o trocador de cátions líquido, é adicionado a uma solução aquosa, na qual se encontra a célula. [0047] Como solução aquosa podem ser usadas todas as soluções à base de água, que são adequadas para a obtenção ou cultivo da célula e/ou de sua atividade necessária para a reação do éster de ácido carboxílico. Essas incluem tanto meios de cultura para microorganismos, entre esses meios completos, tais como meios LB, meios mínimos, tais como meios M9, bem como meios seletivos, por exemplo, aqueles, que contêm uma alta concentração de sal e, por isso, permitem apenas o crescimento de organismos halofílicos ou, pelo menos, halotolerantes. De modo particularmente preferido, esse é um meio mínimo, que contém o menor número de componentes possíveis, facilmente separáveis do produto da reação do éster de ácido carboxílico, para facilitar o processamento do produto. [0048] Desde que o produto da reação prevista apresente uma suficiente hidrofobicidade e uma carga adequada, faz sentido, extraí-lo em uma etapa b) através do contato da solução aquosa com uma solução orgânica hidrófoba compreendendo um trocador de cátions. Procedimentos adequados são descritos no pedido de patente internacional PCT/EP2011/071491 ou no pedido de patente europeu EP12181153.3. Em suma, a solução aquosa pode ser contatada durante ou depois da reação com uma solução hidrófoba compreendendo um éster de ácido graxo como solvente e um ácido graxo, preferivelmente um ácido gra-xo insaturado. [0049] Ao ajustar a temperatura e as condições na etapa a), devem ser observadas as reivindicações da célula, da reação de conversão e das enzimas necessárias. As reivindicações da temperatura de diversas células biotecnologicamente importantes podem ser tiradas de compêndios microbiológicos e de biologia molecular, por exemplo, Fuchs/Schlegl, Allgemeine Mikrobiologie, 2008 ou determinadas através de ensaios de crescimento no âmbito de trabalhos rotineiros. Em uma forma de concretização preferida, o valor de pH do meio de cultura aquoso no momento do contato, encontra-se entre 4 e 9, mais preferivelmente entre 4,5 a 8,5, ainda mais preferivelmente, entre 6,5 e 7,5. Em uma outra forma de concretização preferida, a temperatura encontra-se entre 0 e 45°C, mais preferivelmente entre 15 e 40°C, ainda mais preferivelmente, entre 20 e 37°C. [0050] Para o processo de acordo com a invenção, é preferivelmente usada uma célula, que exprime uma alcano hidroxilase recom-binante, em que a atividade de um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante desse é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula. Em uma forma de concretização preferida trata-se, no caso da alcano hidroxilase, de um citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153", uma oxidase citosílica, que é parte de um sistema de 3 componentes, que compreende, além disso, uma ferredoxina e uma ferredoxina-redutase, com um ponto de ligação no alcano e a capacidade de hi-droxilar alcanos. Em uma forma de concretização particularmente preferida, trata-se de uma enzima, que apresenta pelo menos 80, preferivelmente 90, mais preferivelmente 95 ou 99 por cento de identidade sequencial para o citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153 de Alcanivorax borkumensis SK2 (código do banco de dados YP_691921) ou de uma enzima, que compreende uma sequência de polipeptídeo, que apresenta pelo menos 80, preferivelmente 90, mais preferivelmente 95 ou 99 por cento de identidade sequencial para o citocromo P450-mono-oxigenase da família GYP153 de Alcanivorax borkumensis SK2 (código do banco de dados YP_691921) e, além disso, apresenta atividade de alcano hidroxilase. Os códigos dos bancos de dados mencionados referem-se, nesse caso, tal como continuamente nesse pedido, aos bancos de dados NCBI (National Center for Biotechnology Information, Bethesda, EUA), mais especificamente, à versão disponível online em 8 de novembro de 2012. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "atividade de alcano hidroxlase", tal como usado aqui, a capacidade para catalisar a hidroxi-lação de alcanos ou radicais alquila lineares não substituídos compreendendo pelo menos seis, preferivelmente doze radicais de carbono. Em outra forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153", uma oxidase não ligada à membrana, que compreende um ponto de ligação para alcanos, radicais alquila lineares não substituídos compreendendo pelo menos cinco, preferivelmente doze radicais de carbono ou simplesmente alcanos hidroxilados e cuja cadeia de polipeptídeo compreende o modelo LL(I/L)(V/I)GGNDTTRN. Em uma forma de concretização preferida, no caso de um "citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153", tal como usado aqui, trata-se de um citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153 de Alcanivorax borkumensis SK2 (código do banco de dados YP_691921) ou de uma variante, que apresenta preferivelmente atividade de alcano hidroxilase. [0051] No caso das enzimas usadas de acordo com a invenção, trata-se preferivelmente de enzimas recombinantes. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "recombinante", tal como usado aqui, que a molécula de ácido nucleico correspondente não ocorre na célula natural e/ou foi produzida usando métodos genéticos. Em uma forma de concretização preferida, fala-se de uma proteína recombinante, quando o polipeptídeo correspondente é codificado por um ácido nucleico recombinante. Em uma forma de concretização preferida, entende-se por uma célula recombinante, tal como é usada aqui, uma célula, que apresenta pelo menos um ácido nucleico recombinante ou um polipeptídeo recombinante. O técnico conhece processos adequados para produzir moléculas ou células recombinantes, por exemplo, os descritos em Sambrook/Fritsch/Maniatis (1989): Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd edition. Enzimas recombinantes são preferivelmente superexprimi-das, por exemplo, usando sistemas de vetor pET ou pGEX, que são conhecidos pelo técnico. [0052] Para o ótimo abastecimento do citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153 com elétrons do meio de redução, preferivelmente NADH, é preferível, que a célula exprima a mono-oxigenase juntamente com a ferredoxina-redutase funcionalmente interativa com essa e a ferredoxina funcionalmente interativa com essa. Nesse caso, pode tratar-se de polipeptídeos isolados ou de polipeptídeos coexpri-midos quando é usado um catalisador de célula inteira ou de peptideos fusionados na terminação N ou C com o citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153. Se uma ferredoxina-redutase ou uma ferredoxina com um dado citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153 interagem funcionalmente umas com as outras, o técnico pode verificar facilmente pelo fato, se o agente de redução é oxidado na presença de um substrato alcano ou dos três polipeptídeos. Alternativamente, pode ser usado o teste enzimático descrito por Scheps, D., Malca, H., Hoffmann, B., Nestl, B. M, und Hauer, B. (2011) Org. Bio- mo/. Chem., 9, 6727, que no caso de polipeptídeos interativos mostra um nítido aumento da velocidade de reação. Em uma forma de concretização particularmente preferida, o citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153, a ferredoxina e a ferredoxina-redutase são derivados do mesmo organismo. Em uma forma de concretização particularmente preferida, trata-se da ferredoxina-redutase de Alcanivorax borkumensis SK2 (código do banco de dados YP 691923) ou de uma variante deste, a ferredoxina de Alcanivorax borkumensis SK2 (código do banco de dados YP_691920) ou uma variante deste e o citocromo P450-mono-oxigenase da família CYP153 de Alcanivorax borkumensis SK2 (código do banco de dados YP_691921) ou uma variante deste. [0053] Em outra forma de concretização preferida, no caso da al-cano hidroxilase, trata-se de uma AlkB-mono-oxigenase. A AlkB representa uma oxidorredutase que ficou inicialmente conhecida do sistema AlkBGT de Pseudomonas putida Gpo1, que depende de dois outros polipeptídeos, AlkG e AlkT. AlkT é caracterizado como rubredoxina-redutase dependente de FAD, que passa os elétrons de NADH ao AlkG. No caso de AlkG trata-se de uma rubredoxina, uma proteína re-dox contendo ferro, que atua como doador de elétrons para o AlkB. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "AlkB-mono-oxigenase", um polipeptídeo com uma homologia sequencial de pelo menos, indicada na ordem crescente de preferência, 75, 80, 85, 90, 92, 94, 96, 98 ou 99% para a sequência do AlkB de Pseudomonas putida Gpo1 (código do banco de dados: CAB54050.1; este código do banco de dados é derivado, tal como todos os outros usados no pedido, do estado da técnica, a saber, do banco de dados NC-Bl, mais precisamente, da liberação disponível online em 15 de outubro de 2012) com a capacidade, de oxidar alcanos. Em uma forma de concretização particularmente preferida, trata-se, no caso da AlkB-mono-oxigenase, de uma oxidorredutase que oxida alcanos, que inte- rage funcionalmente com os polipeptídeos AlkG (CAB54052.1) e AlkT (CAB54063.1) de Pseudomonas putida Gpo1. Para o ótimo abastecimento da AlkB-alcano hidroxilase com elétrons, é preferível, que a célula exprima a mono-oxigenase juntamente com proteínas auxiliares que interagem funcionalmente com essa, preferivelmente AlkG e/ou AlkT ou com suas respectivas variantes, sendo que em uma forma de concretização particularmente preferida, trata-se novamente de polipeptídeos AlkG (CAB54052.1) e de AlkT (CAB54063.1) de Pseudomonas putida Gpo1. [0054] A capacidade da célula de acordo com a invenção ou usada no processo de acordo com a invenção para a oxidação de substratos, pode ser reforçada pelo fato, de que a célula exprime alternativa ou adicionalmente à alcano hidroxilase, uma desidrogenase de álcool. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "desidrogenase de álcool", tal como usado aqui, uma enzima, que oxida um alde-ído ou cetona para formar o álcool primário ou secundário correspondente. Exemplos compreendendo as desidrogenases de álcool de fíalstonia eutropha (ACB78191.1), Lactobacillus brevis (??_795183.1), Lactobacillus kefiri (ACF95832.1), de fígado de cavalo, de Paracoccus pantotrophus (ACB78182.1) e Sphingobium yanoikuyae (EU427523.1), bem como as respectivas variantes. [0055] Ao usar um catalisador de célula inteira, pode se apresentar o problema, de que um substrato precisa ser posto em contato com uma enzima localizada intracelularmente, para que ocorra a reação desejada. No caso de alcanos de cadeia longa e derivados destes, é preferível, que o catalisador de célula inteira apresente um polipeptí-deo da família AlkL. Em uma forma de concretização preferida, no caso do "polipeptídeo da família AlkL", tal como é usado aqui, trata-se de um polipeptídeo, que em um comprimento de 230 aminoácidos sucessivos, apresenta uma identidade sequencial de pelo menos 80, preferi- velmente 90, ainda mais preferivelmente, 90% em relação ao AlkL de Pseudomonas putida (código do banco de dados CAB69081) ou uma variante de AlkL de Pseudomonas putida e preferivelmente a capacidade, de suportar a importação de alcanos de cadeia longa para o interior de uma célula. Em outra forma de concretização, no caso de um "poli-peptídeo da família AlkL", tal como usado aqui, trata-se de um polipeptí-deo localizado na membrana externa de uma bactéria gram-negativa, o qual apresenta o modelo de sequência DXWAPAXQ(V/A)GXR, em que X representa um aminoácido proteinogênico e é preferivelmente adicionalmente AlkL de Pseudomonas putida (código do banco de dados CAB69081) ou uma variante deste. Participantes exemplares da família AlkL compreendem AlkL de Pseudomonas putida (código do banco de dados CAB69081), Marinobacter aquaeolei VT8 (código do banco de dados YP 957722), Oceanicaulis alexandrii HTCC2633 (código do banco de dados ZP 00953584), Marinobacter manganoxydans Mnl7-9 (código do banco de dados ZP_09158756), Caulobacter sp. K31 (código do banco de dados YP_001672217), Pseudomonas oleo-vorans (código do banco de dados Q00595) e suas variantes. [0056] O estudo da presente invenção pode ser executado usando não só macromoléculas com a sequência exata de aminoácidos ou ácidos nucleicos, que é aqui incorporada por referência ou usando não só uma célula com atividade relativamente reduzida de um polipeptí-deo em relação ao respectivo tipo selvagem com a sequência exata de aminoácidos, que é aqui incorporada por referência, mas sim, também usando uma variante de tais macromoléculas ou de uma célula com uma atividade relativamente reduzida de uma variante do polipeptídeo em relação ao respectivo tipo selvagem da respectiva célula, que pode ser obtida através de deleção, adição ou substituição de um ou mais de um aminoácido ou ácidos nucleicos. Em uma forma de concretização preferida, o termo "variante" de uma sequência de ácidos nuclei- cos ou de uma sequência de aminoácidos, usado, a seguir, como sinônimo e permutável com o termo "homologon", tal como é usado a-qui, significa uma outra sequência de ácidos nucleicos ou de aminoácidos que, com respeito à correspondente sequência original de ácidos nucleicos ou de aminoácidos de tipo selvagem, apresenta uma homo-logia, usada aqui como sinônimo com identidade, de 70, 75, 80, 85, 90, 92, 94, 96, 98, 99% ou mais porcentos, sendo que preferivelmente outros aminoácidos diferentes dos formadores do centro catai iticamen-te ativo ou aminoácidos essenciais para a estrutura ou dobra são dele-tados ou substituídos ou aqueles que são substituídos de forma meramente conservadora, por exemplo, um glutamato ao invés de um aspartato ou uma leucina ao invés de uma valina. O estado da técnica descreve algoritmos, que podem ser usados, para calcular a extensão da homologia de duas sequências, por exemplo, Arthur Lesk (2008), Introduction to bioinformatics, 3a edição. Em outra forma de concretização mais preferida da presente invenção, a variante de uma sequência de aminoácidos ou de ácidos nucleicos apresenta preferivelmente adicionalmente à homologia sequencial mencionada acima, essencialmente a mesma atividade enzimática da molécula de tipo selvagem ou da molécula original. Por exemplo, uma variante de um poli-peptídeo enzimaticamente ativo como protease, apresenta a mesma ou essencialmente a mesma atividade proteolítica da enzima de poli-peptídeo, isto é, a capacidade, de catalisar a hidrólise de uma ligação peptídica. Em uma forma de concretização particular, o termo "essencialmente a mesma atividade enzimática" significa uma atividade com respeito aos substratos do polipeptídeo de tipo selvagem, que se encontra nitidamente acima da atividade de fundo e/ou se distingue em menos de 3, mais preferivelmente 2, ainda mais preferivelmente em uma ordem de grandeza dos valores KM e/ou kcat, que apresenta o polipeptídeo de tipo selvagem com respeito aos mesmos substratos. Em outra forma de concretização preferida, o termo "variante" de uma sequência de ácidos nucleicos ou de aminoácidos compreende pelo menos uma parte ativa/ou fragmento da sequência de ácidos nucleicos ou aminoácidos. Em outra forma de concretização preferida, o termo "parte ativa", tal como é usado aqui, significa uma sequência de aminoácidos ou uma sequência de ácidos nucleicos, que apresenta uma sequência de aminoácidos menor do que o comprimento total ou codifica uma sequência de aminoácidos menor do que o comprimento total, sendo que a sequência de aminoácidos ou a sequência de aminoácidos codificada com comprimento menor do que a sequência de aminoácidos de tipo selvagem apresenta essencialmente a mesma atividade enzimática do polipeptídeo de tipo selvagem ou de uma variante deste, por exemplo, como protease. Em uma forma de concretização particular, o termo "variante" de um ácido nucleico compreende um ácido nucleico, cujo filamento complementar, preferivelmente em condições rigorosas, se liga ao ácido nucleico de tipo selvagem. O rigor da reação de hibridização pode ser facilmente determinada pelo técnico e depende, em geral, do comprimento da sonda, das temperaturas na lavagem e da concentração de sal. Em geral, sondas mais longas necessitam de temperaturas mais elevadas para hibridizar, ao passo de que amostras mais curtas contam com temperaturas mais baixas. Se ocorrer a hibridização, depende, em geral, da capacidade do DNA desnaturado, de se anelar aos filamentos complementares, que estão presentes no seu meio e, de fato, abaixo da temperatura de fusão. O rigor da reação de hibridização e correspondentes condições são detalhadamente descritos em F M Ausubel (1995), Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, Inc. Instruções para a identificação de sequências de DNA por meio de hibridização são encontradas pelo técnico, entre outras, no manual "The DIG System Users Guide for Filter Hybridization" da empresa Boehringer Mannheim Gm- bH (Mannheim, Alemanha, 1993) e em Liebl e colaboradores (International Journal of Systemic Bacteriology, 41: 255-260 (1991)). A hibridi-zação ocorre em uma forma de concretização preferida em condições rigorosas, isto é, são formados apenas híbridos, nos quais a sonda e sequência alvo, isto é, os polinucleotídios tratados com a sonda, são idênticos em pelo menos 70%. Sabe-se, que o rigor da hibridização inclusive das etapas de lavagem é influenciado ou determinado através da variação da composição do tampão, da temperatura e da concentração de sal. A reação de hibridização é efetuada, em geral, com rigor relativamente baixo em comparação com as etapas de lavagem (Hybaid-Hybridisation Guide, Hybaid Limited, Teddington, Reino Unido, 1996). Para a reação de hibridização pode ser usado, por exemplo, um tampão correspondente a 5x o tampão SSC a uma temperatura de a-proximadamente 50°C - 68°C. Nesse caso, as sondas podem hibridi-zar também com polinucleotídeos, que apresentam menos de 70% de identidade em relação à sequência da sonda. Tais híbridos são menos estáveis e são removidos por lavagem em condições rigorosas. Isso pode ser obtido, por exemplo, diminuindo a concentração de sal para 2 x SSC e opcionalmente, a seguir, 0,5x SSC (The DIG System User’s Guide for Filter Hybridisation, Boehringer Mannheim, Mannheim, Alemanha, 1995), sendo ajustada uma temperatura na ordem de crescente preferência, de cerca de 50 °C - 68°C, cerca de 52°C - 68°C, cerca de 54°C - 68°C, cerca de 56°C - 68°C, cerca de 58°C - 68°C, cerca de 60 °C - 68°C, cerca de 62°C - 68°C, cerca de 64°C - 68°C, cerca de 66°C - 68°C. Faixas de temperatura de cerca de 64°C - 68°C, ou cerca de 66°C - 68°C são preferidas. Opcionalmente, é possível diminuir a concentração de sal até uma concentração correspondente a 0,2 x SSC ou 0,1 x SSC. Através do aumento gradual da temperatura de hibridização em etapas de cerca de 1 - 2°C de 50°C para 68°C, podem ser isolados fragmentos de polinucleotídeos, que, por exemplo, na ordem de crescente preferência, pelo menos 70% ou pelo menos 80% ou pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade em relação à sequência da molécula de ácido nucleico usada. Outras instruções para a hibridização estão disponíveis no mercado na forma dos chamados kits (por exemplo, DIG Easy Hyb da empresa Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemanha, catálogo n° 1603558). Em uma forma de concretização preferida, o termo "variante" de um ácido nucleico, tal como usado aqui, compreende qualquer sequência de á-cido nucleico, que codifica a mesma sequência de aminoácidos do á-cido nucleico original ou uma variante dessa sequência de aminoácidos no âmbito da degeneração do código genético. [0057] Em uma forma de concretização preferida, a célula usada de acordo com a invenção apresenta uma atividade reduzida em relação ao seu tipo selvagem, que catalisa uma das reações da beta-oxidação de ácidos graxos, sendo que se trata preferivelmente de uma enzima do grupo, que compreende o ácido graxo-CoA-ligase, acil-CoA-desidrogenase, 2,4-dienoil-CoA-redutase, enoil-CoA-hidratase e 3-cetoacil-CoA-tiolase, um importador de ácido graxo ou suas variantes, de modo particularmente preferido, trata-se de FadL ou de uma variação deste. A beta-oxidação de ácidos graxos é uma via metabóli-ca amplamente divulgada, que permite aos organismos procatióticos e eucarióticos, do mesmo modo, oxidar ácidos graxos e disponibilizar a energia química contida nesses para o metabolismo. Em sentido amplo, essa começa com a absorção de um ácido graxo na célula, no caso de E. coli, através do transportador FadL, que o bloqueia através da membrana externa ou interna da célula de bactéria gram-negativa e o produto gênico FadD, que libera o ácido graxo na forma de um éster CoA no citosol. Ali, o ácido graxo, desde que as condições o exijam, é inicialmente oxidado na posição beta do éster de ácido CoA-graxo a-través de uma acil-CoA-desidrogenase, no caso de E. coli, FadE. Uma molécula semelhante pode ser formada alternativamente também a partir de um ácido graxo duplamente insaturado através da redução por meio de uma 2,4-dienoil-CoA-redutase, no caso da E. coli, FadH. Uma enzima multifuncional, a enoil-CoA-hidratase/3-hidroxiacil-CoA-desidrogenase, no caso de E. coli, FadB, catalisa subsequentemente a hidratação com formação do álcool secundário e sua subsequente oxi-dação na cetona. Na última etapa, uma 3-cetoacil-CoA-tiolase, no caso da E. coli, FadA, catalisa a dissociação da cetoacil-CoA com o resultado, de que a acetil-CoA e um éster de CoA do ácido graxo mais curto em dois átomos de carbono em comparação com a molécula de partida, são liberados. Desde que não se trate igualmente de acetil-CoA, a última pode ser novamente incorporada no ciclo da beta-oxidação e ser reduzida sob oxidação. O FadR participa também da regulação da beta-oxidação de ácidos graxos, um regulador do Fad-Operon, que compreende os genes necessários pela degradação de ácidos graxos, sem que o FadR catalise uma reação da beta-oxidação. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "enzima, que catalisa uma das reações da beta-oxidação de ácidos graxos", uma enzima qualquer, que interage diretamente com o substrato de ácido graxo ou com uma molécula resultante deste no trajeto para a acetil-CoA, preferivelmente essa é reconhecida como substrato e catalisa sua transformação em um produto de metabolismo localizado nesse trajeto de degradação próximo à acetil-CoA, preferivelmente inclusive o importador de ácido graxo, que realiza a absorção do ácido graxo na célula. Por exemplo, nessas enzimas, de acordo com a definição acima, inclui-se a acil-CoA-desidrogenase, visto que esta interage com o éster de ácido graxo-CoA e catalisa sua transformação na enoil-CoA, que se localiza no trajeto de metabolismo da beta-oxidação mais pró- ximo à acetil-CoA do que o éster de ácido graxo-CoA. Em uma forma de concretização particularmente preferida, entende-se pelo termo "enzima, que catalisa uma das reações da beta-oxidação de ácidos graxos" tal como usado aqui, qualquer enzima do grupo, que compreende os produtos gênicos FadA, FadB, FadD, FadL e FadE de E. coli e/ou suas variantes ou homólogos de outros organismos. Os produtos gênicos FadA, FadB, FadD, FadL e FadE de E. coli, igualmente como variantes e homólogos de inúmeros outros organismos biotecnologi-camente úteis e suas sequências de ácidos nucleicos e sequências de polipeptídeos, são descritos no estado da técnica, por exemplo, FadA com o número de acesso AP009048.1, Fab sob o número de acesso BAE77457.1, FadD sob o número de acesso BAA 15609.1, FaE sob o número de acesso BAA 77891.2 e FadL sob o número de acesso BAA 16205.1. [0058] Em uma outra forma de concretização preferida, a célula de acordo com a invenção ou usada no processo de acordo com a invenção, exprime uma transaminase. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "transaminase", tal como usado aqui, uma enzima, que catalisa a transmissão de grupos ?-amino de um doador, preferivelmente de um aminoácido para uma molécula de recepção, preferivelmente um ácido ?-cetocarboxílico. Por exemplo, pode ser usada uma transaminase do grupo compreendendo 3FIMU_A, A-AD41041.1, AAK15486.1, ABE03917.1, ADR60699.1, ADR61066.1, ADR62525.1, AEL07495.1, CAZ86955.1, EFW82310.1, EFW87681.1, EGC99983.1, EGD03176.1, EGE58369.1, EGH06681.1, EGH08331.1, EGH24301.1, EGH32343.1, EGH46412.1, EGH55033.1, EGH62152.1, EGH67339.1, EGH70821.1, EGH71404.1, EGH78772.1, EGH85312.1, EGH97105.1, EGP57596.1, NP_102850.1, NP_106560.1, NP_248912.1, NP 248990.1, NP_354026.2, NP_421926.1, NP_637699.1, NP_642792.1, NP_744329.1, NP_744732.1, NP_747283.1, NP_795039.1, ??_901695.1, (??_002943905.1, ??_001021095.1, ??_001059677.1, ??_001061726.1, ??_001066961.1, ??_001074671.1, ??_001120907.1, ??_001140117.1, ??_001170616.1, ??_001185848.1, ??_001188121.1, ??_001233688.1, ??_001268866.1, ??_001270391.1, ??_001345703.1, ??_001412573.1, ??_001417624.1, ??_001526058.1, ??_001579295.1, ??_001581170.1, ??_001668026.1, ??_001669478.1, ??_001671460.1, ??_001685569.1, ??_001747156.1, ??_001749732.1, ??_001765463.1, ??_001766294.1, ??_001790770.1, ??_001808775.1, ??_001809596.1, ??_001859758.1, ??_001888405.1, ??_001903233.1, ??_001977571.1, ??_002229759.1, ??_002231363.1, ??_002280472.1, ??_002297678.1, ??_002543874.1, ??_002549011.1, ??_002796201.1, ??_002801960.1, ??_002875335.1, ??_002897523.1, ?? 002912290.1, ??_002974935.1, ??_003060891.1, ?? 003264235.1, ??_003552364.1, ??_003578319.1, ??_003591946.1, ??_003607814.1, ??_003641922.1, ?? 003674025.1, ??_003692877.1, ??_003755112.1, ?? 003896973.1, ??_003907026.1, ??_003912421.1, ??_004086766.1, ??_004142571.1, ??_004147141.1, ??_004228105.1, ??_004278247.1, ??_004305252.1, ??_004356916.1, ??_004361407.1, ??_004378186.1, ??_004379856.1, ??_004390782.1, ??_004472442.1, ?? 004590892.1, ??_004612414.1, ??_004676537.1, ??_004693233.1, ??_004701580.1, ??_004701637.1, ??_004704442.1, ??_108931.1, ??_110490.1, ??_168667.1, ??_237931.1, ??_260624.1, ??_262985.1, ??_271307.1, ?? 276987.1, ??_334171.1, ??_337172.1, ??_350660.1, ??_351134.1, ??_364386.1, ??_366340.1, ??_369710.1, ?? 370582.1, ??_426342.1, ??_440141.1, ??_442361.1, ?? 468848.1, ??_521636.1, ??_554363.1, ??_608454.1, ??_610700.1, ??_614980.1, ??_622254.1, ??_625753.1, ??_680590.1, ??_751687.1, ??_767071.1, ??_774090.1, ??_774932.1, ??_788372.1, ??_858562.1, ??_928515.1, ?? 983084.1, ??_995622.1, ??_00948889.1, ??_00954344.1, ?? 00959736.1, ??_00998881.1, ??_01011725.1, ??_01037109.1, ??_01058030.1, ??_01076707.1, ??_01103959.1, ??_01167926.1, ??_01224713.1, ??_01442907.1, ??_01446892.1, ??_01550953.1, ??_01625518.1, ??_01745731.1, ??_01750280.1, ??_01754305.1, ??_01763880.1, ??_01769626.1, ??_01865961.1, ??_01881393.1, ??_01901558.1, ??_02145337.1, ??_02151268.1, ??_02152332.1, ??_02167267.1, ??_02190082.1, ??_02242934.1, ??_02360937.1, ?? 02367056.1, ??_02385477.1, ??_02456487.1, ??_02883670.1, ?? 03263915.1, ??_03263990.1, ??_03400081.1, ??_03452573.1, ?? 03456092.1, ??_03517291.1, ??_03529055.1, ??_03571515.1, ?? 03572809.1, ??_03587785.1, ??_03588560.1, ??_03697266.1, ?? 03697962.1, ??_04521092.1, ??_04590693.1, ??_04890914.1, ??_04891982.1, ??_04893793.1, ??_04902131.1, ??_04905327.1, ?? 04941068.1, ??_04944536.1, ??_04945255.1, ??_04959332.1, ?? 04964181.1, ??_05053721.1, ??_05063588.1, ??_05073059.1, ?? 05077806.1, ??_05082750.1, ??_05091128.1, ??_05095488.1, ??_05101701.1, ??_05116783.1, ??_05121836.1, ??_05127756.1, ?? 05637806.1, ??_05742087.1, ??_05783548.1, ??_05786246.1, ??_05843149.1, ??_05945960.1, ??_06459045.1, ??_06487195.1, ?? 06492453.1, ??_06493162.1, ??_06703644.1, ??_06731146.1, ?? 06839371.1, ??_07007312.1, ??_07266194.1, ??_07374050.1, ?? 07662787.1, ??_07778196.1, ??_07797983.1, ??_08099459.1, ??_08138203.1, ??_08141719.1, ??_08142973.1, ??_08177102.1, ??_08185821.1, ??_08186468.1, ??_08208888.1, ??_08266590.1, ??08402041.1, ??_08406891.1, ??_08522175.1, ??_08527488.1, ??_08631252.1, ??_08636687. ). [0059] Em outra forma de concretização preferida, a célula de a-cordo com a invenção ou usada no processo de acordo com a invenção, exprime uma alanina desidrogenase. Em uma forma de concretização preferida, entende-se pelo termo "alanina desidrogenase", tal como usado aqui, uma enzima, que catalisa a transformação de L-alanina com consumo de água e NAD+ em piruvato, amoníaco e NA-DH. Por exemplo, podem ser usadas as alanina desidrogenases do grupo compreendendo a alanina desidrogenase de Bacillus subtilis (código do banco de dados L20916), Rhizobium leguminosarum (código do banco de dados CP001622), Vibrio proteolyticus (código do banco de dados AF070716), Mycobacterium tuberculosis (código do banco de dados X63069), Enterobacter aerogenes (código do banco de dados AB013821), EGR93259.1, YP_003654745.1, YP_003651439.1, YP_003637111.1, YP_003631815.1, YP_001327051.1, YP_001262560.1, YP_886996.1, YP_882850.1, YP_704410.1, YP_703508.1, ZP_08624689.1, YP_001230376.1, P 17557.1, P 17556.1, CCB94892.1, CCB73698.1, YP_001168635.1, YP 004668736.1, YP_004569425.1, YP_003513168.1, YP_004561169.1, ZP_08554945.1, YP_400777.1, ZP_08311476.1, ZP 08310170.1, ZP_08267322.1, ZP_08263846.1, ZP_07898723.1, YP_149301.1, YP_148605.1, YP_004340432.1, EFT09946.1, EFS80513.1, EFS51332.1, EFS42459.1, YP_003060895.1, YP 003059033.1, ZP_03305373.1, YP_847214.1, YP_004095847.1, YP 003338282.1, YP_003337256.1, YP_355846.1, YP_253131.1, ZP_08197563.1, ZP_08196283.1, ADW06447.1, YP_734091.1, NP 372233.1, NP_102173.1, ZP_08170259.1, EGD36706.1, EGD32748.1, ZP_08155540.1, YP_004142849.1, YP_002417649.1, YP_001301040.1, YP_002992892.1, YP_081348.1, YP_080482.1, ??_002476349.1, ??_08115025.1, ??_08114403.1, ?? 003552869.1, ??_002358112.1, ??_575010.1, ??_477594.1, ?? 474564.1, ??_130399.1, ??_129373.1, ??_123314.1, ??_810467.1, ??_646469.1, ??_626044.1, ??_391071.1, ?? 08086822.1, ??_08084776.1, ??_08083119.1, ??_08020768.1, ??_08013590.1, ??_08011832.1, ??_003783744.1, ??_002781576.1, ??_002780533.1, ??_02195873.1, ??_797482.1, ?? 07645051.1, ??_07643260.1, ??_06611917.1, ???40119.1, ?? 07864946.1, ??_004068409.1, ??_002796203.1, ??_002774420.1, ??_003600348.1, ??_003599946.1, ??_003565624.1, ??_003565223.1, ??_335198.1, ??_423850.1, ??_155059.1, ??_07843538.1, ??_07841226.1, ??_06928932.1, ?? 05692073.1, ??_05687006.1, ??_04867480.1, ??_775531.1, CBE70214.1, ??_07721182.1, ??_04302850.1, ??_04298961.1, ?? 04287684.1, ??_04277177.1, ??_04248389.1, ??_04235899.1, ??_02159718.1, ??_02152178.1, ??_003974610.1, ?? 003546595.1, ??_002317127.1, ??_07313778.1, ?? 07302778.1, ??_07298850.1, CBK69442.1, ??_003413835.1, ?? 003595089.1, ??_06807811.1, ??_003582455.1, ?? 003464731.1, ??_003496397.1, ??_003421918.1, CBL07274.1, CBK64956.1, ??_003508515.1, AAL87460.1, AAC23579.1, ?- AC23578.1, AAC23577.1, ACU78652.1, ??_003471439.1, ??_003452777.1, ??_06384971.1, ACY25368.1, ABC26869.1, ?-??44334.1, ???80018.1, ??_05110458.1, 1PJB_A, ??_04717201.1, ??_04689103.1, CA090307.1, CAM75354.1, CAA44791.1, ??- ?77513.1, EGR96638.1, EGL90046.1, ??_004510847.1, ?? 08450330.1, ??_003387804.1, ??_003058152.1, EFS74272.1, EFS67128.1, ??_06844564.1, ??_826658.1, ??_001195249.1, ?? 003095978.1, ??_469292.1, ??_004442054.1, ??_004461174.1, ??_004055616.1, ??_003576656.1, ??_003094537.1, YP_001295973.1, ???71143.1, ??_004447480.1, ??_003761844.1, ?? 040853.1, ??_003154888.1, ??_003142045.1, ??_002280953.1, ??_371963.1, ??_422368.1, EGC98966.1, EGC76398.1, ??_004263661.1, ??_004252039.1, ??_679036.1, ??_499973.1, ?? 08054972.1, ??_08053009.1, ??_04067276.1, ??_03968868.1, ?? 03963857.1, ??_03933079.1, ??_03497046.1, ??_06668924.1, ??_06667106.1, ??_06324464.1, ??_06196777.1, ??_05114159.1, ?? 05083968.1, ??_05070370.1, ??_05030022.1, ??_04673064.1, ?? 03517011.1, ??_03505783.1, ??_001310698.1, ???27691.1 ou CAB59281.2. No caso, de a célula exprimir uma alanina desidrogena-se, é vantajoso adicionar uma fonte de nitrogênio inorgânico, preferivelmente um sal de amônio, tal como cloreto de amônio ou sulfato de amônio, em quantidade suficiente à solução aquosa. Um processo para aumentar a concentração de alanina é descrito na EP 12162846.5. [0060] Um aspecto da presente invenção prevê o uso de um nocaute de um gene que codifica um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste, como parte da característica genética de uma célula recombinante para aumentar a produção de um éster de ácido carboxílico da fórmula (I). Isso significa, que o nocaute de um gene que codifica um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste foi realizado como característica da célula com a finalidade de aumentar o rendimento, o balanço de carbono e/ou nitrogênio e/ou pureza do produto da reação do éster de ácido carboxílico da fórmula (I). [0061] Em uma forma de concretização mais preferida, a invenção prevê uma célula, no caso da qual se trata de uma célula de E. coli, que apresenta um nocaute do polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante, bem como do polímero FadL no genoma da célula, sendo que a célula exprime, além disso, uma alcano hidroxila-se, preferivelmente AlkB de Pseudomonas putida, uma transaminase, preferivelmente a transaminase de Chromobacterium violaceum ATCC 12472, uma alanina desidrogenase, preferivelmente a alanina desidro-genase de Bacillus subtilis e AlkL de Pseudomonas putida. Em uma outra forma de concretização mais preferida, essa célula é contatata em uma solução aquosa com um éster de ácido graxo, preferivelmente éster metílico do ácido láurico.
Figuras: [0062] A figura 1 mostra a produtividade do ácido ômega-aminoláurico de diversas linhagens.
Exemplo 1 Inativacão de bioH em E. coli W3110 e BW25113 [0063] Para o nocaute visado do gene bioH (b3412, SEQ ID 1) com o vetor de base pK03_E933, foi necessário um novo plasmídeo. A base é o vetor pK03_E933 (SEQ ID 14), foram usados 500 bp a montante (SEQ ID 3) ou 500 bp a jusante do gene bioH (SEQ ID 4); os quais estão presentes separados por uma interface PspXI (CCTC-GAGG). O plasmídeo terminado porta a designação interna AHp-LL-42 (SEQ ID 5). Para o acabamento, foram usados os seguintes oligonu-cleotídeos: o-LL-314, SEQ ID 6 5’-CCGGGGATCGCGGCCCGGCTTCGCTATCCCATTGGCAGT-3’ o-LL-315, SEQ ID 7 5’-CCT CT G CTT CAACGCCCT CG AG G CAT CCGCT ATT GTT CT CTTTT GACTT AC AAGGATG-3 ’ O-LL-316, SEQ ID 8 5’-GCGTTGAAGCAGAGGGTGTAGGTG-3’ O-LL-317, SEQ ID 9 5’-TAGAGGATCGCGGCCCAAACTGGCAAGGCAGCTTTATGC-3’. [0064] As faixas 500 bp foram postas à disposição com os primers acima do DNA cromossomal presente de E. coli W3110 por meio da reação em cadeia de polimerase (PC). O o-LL-314 + o-LL-315 foi usado para a faixa a montante (SEQ ID 3) e o o-LL-316 + o-LL-317 foi u-sado para a faixa a jusante (SEQ ID 4). Os seguintes parâmetros foram aplicados para a PCR.
Desnaturação inicial: 98°C, 10 s 30 x desnaturação: 98°C, 10 s 30 x recozimento: 57,9/58,8/59,7/60,6/61,4/62,3/63,2/64,1 °C (gradiente de temperatura) 30 x elongação: 72°C, 20 s elongação final: 72°C, 4 min. [0065] Para a multiplicação, foi usado o 2x Phusion HF Master Mix da New England Biolabs (NEB, M0531S) de acordo com as instruções do fabricante. Os produtos de PCR, dependendo do grau de pureza, foram diretamente purificados em coluna (QiaQuick Purification Kit, Qiagen, Hilden) ou purificados através de um gel de agarose e extraídos (QiaQuick Gel Extraction Kit, Qiagen, Hilden). A execução da P-CR, da eletroforese em gel de agarose, tingimento do DNA com brometo de etídio e a determinação dos tamanhos dos fragmentos de PCR foi realizada de modo e maneira conhecidos pelo técnico. Nos dois casos, os fragmentos de PCR puderam ser preparados no tamanho desejado. [0066] Os produtos de PCR purificados foram clonados no vetor pK03_E933 (SEQ ID 14) cortado com Notl por meio de recombinação usando o kit de clonagem In-Fusion HD de acordo com a instrução do fabricante (Clontech Laboratories Inc., Mountain View, CA, EUA). A transformação da E.coli DH10Dnnquimicamente competente (New England Biolabs, Frankfurt) foi realizada de modo e maneira conhecidos pelo técnico. A inserção correta das sequências alvo foi verificada a-través de análise de restrição e a autenticidade das sequências introduzidas foi confirmada através da sequenciação de DNA. O vetor formado foi designado com AHp-LL-42 (SEQ ID 5). [0067] A construção da linhagem E. coli W3110 AbiohHo\ realizada com auxílio do vetor AHp-LL-42 (SEQ ID 5) com métodos conhecidos pelo técnico (vide Link AJ, Phillips D, Church GM. J. Bacteriol. 1997. 179(20).). As linhagens BW25113, bem como BW25113 AbioH (JW3375) usadas nos experimentos foram adquiridas comercialmente como parte da coleção Keio (vide Construction of Escherichia coli K-12 in-frame, single-gene knockout mutants: the Keio collection, Tomoya Baba, Takeshi Ara, Miki Hasegawa, Yuki Takai, Yoshiko Okumara, Mi-ki Baba, Kirill A Datsenko, Masaru Tomita, Barry L Wanner and Hirota-da Mori, Molecular Systems Biology (2006), 2006 EMBO and Nature Publishing Group). A linhagem construída continuou sob a seguinte designação: linhagem descrição [0068] A sequência de DNA de bioH após a deleção em W3110 é reproduzida na SEQ ID 10.
Exemplo 2 Produção de éster metílico do ácido aminoláurico através de E. coli W3110 com delecão no gene bioH através do uso de vetores de expressão para o gene ald de Bacillus subtilis e Cv 2025 de Chromobac-terium violaceum em combinação com um vetor de expressão para os genes alkB, alkG, alkT e alkL do alk-Qperon de Pseudomonas outida.
[0069] Para a produção das linhagens de E. coli com vetores de expressão para os genes ald de Bacillus subtilis (que codificam uma alanina desidrogenase, códon-otimizada para E. coli), Cv_2025 de C-hromobacterium violaceum (que codifica uma transaminase, códon-otimizada para E. coli) em combinação com um vetor de expressão para os genes alkB, alkG, alkT (que codificam uma alcano-mono-oxigenase, uma rubredoxina e uma rubredoxina-redutase) e alkL (que codifica uma proteína de membrana/transporte) do alk-Operon de Pseudomonas putida, foram produzidas células eletrocompetentes de E. coli W3110 AbioH, bem como a correspondente linhagem de controle E. coli W3110. Isso ocorreu de modo e maneira conhecidos pelo técnico. As linhagens foram produzidas tal como descrito no exemplo 1. Essas foram transformadas com os plasmídeos pBT10_alkL (SEQ ID 11 ou WO/2011/131420 e a SEQ ID NO 8 ali citada) e pJ294[alaDH_Bs(co)TA_Cv(co)] (SEQ ID 12 ou exemplo 1 da WO/2013/024114 e a SEQ ID NO 17 ali citada) e semeados em placas de ágar LB com kanamicina (50 pg/ml). Os transformantes foram verificados através da preparação de plasmídeos e análise de restrição analítica com respeito à presença dos plasmídeos corretos. Dessa maneira, foram construídas as seguintes linhagens: ( Linhagens iniciais (de "Background"))...plasmídeos presentes [0070] As linhagens foram submetidas a uma fermentação fed-batch, para analisar a capacidade para a produção de éster metílico do ácido hidroxi-láurico, éster metílico do ácido oxo-láurico, éster metílico do ácido carboxi-láurico e éster metílico do ácido amino-láurico do éster metílico do ácido láurico. Isso foi realizado com o sistema óctuplo de fermentação paralela da empresa DASGIP. [0071] Para a fermentação foram usados reatores de 1 litro. As sondas de pH foram calibradas por meio de uma calibração de dois pontos com soluções de medição de pH 4,0 e pH 7. Os reatores foram enchidos com 300 ml de água potável e autoclavados a 121 °C durante 20 minutos, para garantir a esterilidade. Em seguida, as sondas p02 foram polarizadas durante a noite (ao longo de pelo menos 6 horas) no sistema DASGIP. Na manhã seguinte, a água foi removida sob a clean bench e substituída por 300 ml de meio de alta densidade celular com 100 mg/l de ampicilina, 50 mg/l de kanamicina e 5 mg/l de tetraciclina. A seguir, as sondas p02 foram calibradas com uma calibração de um ponto (agitador: 400 rpm / gaseificação: 10 sl/h de ar) e as vias de alimentação (feed), de agentes corretivos e de indução foram purificadas por meio de clean-in-place. Para esse fim, as mangueiras foram enxa- guadas com 70% de etanol, em seguida, com NaOH 1 M, depois com água desmineralizada estéril e, por fim, enchidas com os respectivos meios. [0072] As linhagens de E. coli produtoras de ALS e ALSME foram inicialmente cultivadas a partir das respectivas crioculturas em meio LB (25 ml em um balão de Erlenmeyer de 100 ml) com 100 mg/l de ampicilina durante a noite a 37°C e a 200 rpm durante cerca de 18 horas. Em seguida, 2 ml cada das culturas em meio de alta densidade celular (glicose 15 g/l (30 ml/l de 500 g/l de uma solução padrão auto-clavada separadamente com 1% de MgS04*7H20 e 2,2% de NH4CI), (NH4)2S04 1,76 g/l, K2HP04 19,08 g/l, KH2P04 12,5 g/l, extrato de levedura 6,66 g/l, di-hidrato de citrato trissódico 2,24 g/l, solução de ci-trato de amônio férrico 17 ml/l de uma solução padrão a 1% autocla-vada separadamente, solução de oligoelementos 5 ml/l de uma solução padrão autoclavada separadamente (HCI (37%)) 36,50 g/l, Mn-CI2*4H20 1,91 g/l, ZnS04*7H20 1,87 g/l, di-hidrato de ácido etilenodi-aminatetra-acético 0,84 g/l, H3B03 0,30 g/l. Na2Mo04*2H20 0,25 g/l, CaCI2*2H20 4,70 g/l, FeS04*7H20 17,80 g/l, CuCI2*2H20 0,15 g/l)) (cada linhagem de 25 ml em um balão de Erlenmeyer de 100 ml) foram inoculadas com 100 mg/l de ampicilina, 50 mg/l de kanamicina e 5 mg/l de tetraciclina e incubadas a 37°C / 200 rpm durante mais 5,5 horas. [0073] Os reatores foram inoculados com uma densidade ótica de 0,1, em que um volume correspondente da pré-cultura foi cultivada em uma seringa de 5 ml (em condições estéreis) e os reatores foram inoculados por meio de cânula através de um septo revestido com 70% de etanol. [0074] Os seguintes programas padrão foram usados: [0075] O experimento realizado pode ser dividido em duas fases, o cultivo, no qual as células devem alcançar uma certa densidade ótica e a subsequente biotransformação, na qual apos a adição do substrato éster metílico do ácido láurico, deve se realizar uma reação para o és-ter de ácido aminoláurico das enzimas formadas na expressão. Os valores de pH foram regulados unilateralmente com amoníaco (12,5) para pH 6,8. Durante o cultivo e a biotransformação, o oxigênio dissolvido (DO, dissolved oxygen) na cultura foi regulado através do número de rotações do agitador e a taxa de gaseificação para 30%. A fermentação foi realizada com fed-batch, sendo que o início da alimentação, 5 g/l h de fornecimento de glicose (500 g/l de glicose com 1% de Mg-S04*7H20 e 2,2% de NH4CI), foi impulsionado através de um pico de DO. Com o início da alimentação, a temperatura também foi baixada de 37°C prévios para 30°C. A expressão da transamin se, alanina de- sidrogenase e redutase de ácido graxo foi induzida 2 horas após o início da alimentação através da adição automática de IPTG (1 mM). A indução dos genes alk foi realizada através da adição manual de DCPK (0,025% em volume) 10 horas após o início da alimentação. Antes do início da biotransformação determinou-se a densidade ótica dos caldos de cultura. [0076] O início da fase de biotransformação foi realizado 14 horas após o início da alimentação. Para esse fim, 150 ml de uma mistura de éster metílico de ácido láurico e do trocador de íons ácido oleico (90% técnicos) foram acrescentados como mistura ao caldo de fermentação. Para disponibilizar um doador de grupos amino para a transaminase, acrescentaram-se 5 ml de uma solução de sulfato de amônio 3M ao caldo de fermentação meia hora antes do início da biotransformação. Para a amostragem, retiraram-se 2 ml do caldo de fermentação da caldeira e uma parte desse, 1/20, foram diluídos em uma mistura de acetona-HCI (c(HCI) = 0,1 mol/l) e extraídos. Amostras foram tiradas 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 7,5 horas, 10,5 horas, 19,5 horas e 21 horas após o início da biotransformação de todos os reatores. As taxas de conversão para oxigênio (OTR = oxygen transfer rate) e carbono (CTR = carbon transfer rate) foram determinadas durante a fermentação através da análise de gás residual nos sistemas DASGIP. A fermentação foi concluída 21 horas após o início da biotransformação. O agitador, a gaseificação, a regulagem de temperatura e a regu-lagem de pH foram expostos e a caldeira foi deixada em repouso durante 5-10 minutos. [0077] Para a quantificação de DDS (ácido C12-di-carboxílico), DDSME (éster metílico do ácido C12-di-carboxílico), LS (ácido láurico), LSME (éster metílico do ácido láurico), HLS (ácido ômega-hidroxi-láurico), HLSME (éster metílico do ácido ômega-hidroxi-láurico), OLS (ácido ômega-oxo-láurico), OLSME OLS (éster metílico do ácido ome- ga-oxo-láurico), ALS (ácido omega-amino-láurico) e ALSME (éster me-tílico do ácido omega-amino-láurico) em amostras de fermentação, tiraram-se amostras durante o cultivo. Essas amostras foram preparadas para a análise (vide quantificação de produtos à base de LC-ESI/MS2).
Quantificação de produtos à base de LC-ESI/MS2 [0078] A quantificação de ALS, ALSME, DDS, DDSME, LS, LSME, HLS, HLSME, OLS e OLSME em amostras de fermentação foi realizada por meio de LC-ES/MS2 com base em uma calibração externa para todos os analitos (0,1-50 mg/l) e com o uso do padrão interno ácido aminoundecanoico (AUD para HLS, DDS, OLS, HLSME, OLSME), d4-ALSME (para ALSME), 13C-DDSME (para DDSME), d3-LS (para LS) e d3-LSME (para LSME). [0079] Nesse caso, são usados os seguintes aparelhos: • instalação de HPLC 1260 (Agilent; Bõblingen) com amos-trador automático (G1367E), bomba binária (G1312B) e forno de coluna (G1316A) • espectrômetro de massa TripelQuad 6410 (Agilent; Bõblingen) com fonte ESI • coluna de HPLC: Kinetex C18, 100 x 2,1 mm, tamanho da partícula: 2,6 pm, tamanho do poro 100 Á (Phenomenex; Aschaf-fenburg) • pré-coluna KrudKatcher Ultra HPLC filtro in-line; 0,5 pm de profundidade do filtro e 0,004 mm de diâmetro interno (Phenomenex; Aschaffenburg). [0080] As amostras foram preparadas, em que 1900 pl de solvente (80% (v/v))) de ACN, 20% de H20 bidestilada (partes em volume), +0,1% de ácido fórmico) e 100 pl de amostra foram pipetados em um recipiente de reação de 2 ml. A mistura foi centrifugada durante cerca de 10 segundos e, em seguida, centrifugada a cerca de 13.00 rpm du- rante 5 minutos. O sobrenadante transparente foi removido com uma pipeta e após correspondente diluição com diluente (80% (v/v) de ACN, 20% de H20 bidestilada (v/v), + 0,1% de ácido fórmico), esse foi analisado. A cada 900 ?? de amostra, foram pipetados 100 ?? de ISTD (10 ?? com um volume de amostra de 90 ??). [0081] A separação por meio de HPLC foi realizada com a coluna ou pré-coluna mencionada acima. O volume de injeção importa em 0,7 ??, a temperatura da coluna é de 50°C, a taxa de fluxo, 0,6 ??/min. A fase móvel consiste em eluente A (a 0,1% (v/v)) ácido fórmico aquoso) e eluente B (acetonitrila com0,1% (v/v)) de ácido fórmico). O seguinte perfil de gradiente foi utilizado: [0082] A análise ESI-MS2 foi realizada no modo positivo com os seguintes parâmetros da fonte ESI: • temperatura do gás 280 °C • vazão do gás 11 l/min • pressão do nebulizador 344,7 KPa (50 psi) • tensão capilar 4000 V [0083] A detecção e quantificação dos compostos ALS, ALSME, DDS, DDSME, HLS, HLSME, OLS, OLSME foram realizadas com os seguintes parâmetros MRM, sendo que em cada caso, um íon de produto foi utilizado como qualificador e um como quantificador. [0084] Os analitos LS e LSME foram detectados no modo SIM (m/z 201 e 215).
Resultados Formação reduzida dos ácidos livres ácido aminoláurico, diácido do-decanoico e ácido láurico depois de nocaute de bioH em E. coli W3110 [0085] A linhagem com nocaute bioH mostrou uma formação nitidamente reduzida dos ácidos livres ácido aminoláurico, diácido dode-canoico e ácido láurico em comparação com a linhagem de controle com bioH intacto. Foram calculadas as proporções do título final absoluto do diácido dodecanoico (DDS) e do éster metílico do diácido do-decanoico (DDSME), ácido aminoláurico (ALS) e éster metílico do ácido aminoláurico (ALSME), bem como o ácido láurico (LS) e éster metílico do ácido láurico (LSME), expresso em porcentos. [0086] O efeito do nocaute bioH sobre a formação de ácidos livres era nitidamente visível e moveu-se entre uma redução em torno do fator 7,10 (DDS/DDSME) até um fator de 9,75 (ALS/ALSME).
Produto aperfeiçoado para a proporção do produto secundário após o nocaute de bioH em E. coli W3110 [0087] Os títulos absolutos obtidos foram avaliados depois de um tempo fixo (= final da biotransformação). Aqui, verifica-se n na linhagem inicial (de "Background") (Stammhintergrund) W3110 AbioH uma proporção nitidamente aperfeiçoada de produtos (ALS e ALSME) para os produtos secundários principais (DDS e DDSME) com título do produto final constante. A proporção aumenta de 49,17% (ALS(ME) para 82,10% (ALS(ME).
Exemplo 3 Produção de éster metílico do ácido aminoláurico através de uma linhagem de E. coli com uma delecão no gene bioH através do uso de um vetor de expressão para os genes ald de Bacillus subtilis e Cv 2025 de Chromobacterium violaceum e dos genes alkB. alkG, alkT e alkL do alk-Qperon de Pseudomonas outida. [0088] Para produzir linhagens de E. coli com um vetor de expressão para os genes ald de Bacillus subtilis (que codifica uma alanina desidrogenase, códon-otimizada para E. coli), Cv_2025 de Chromo-bacterium violaceum (que codifica uma transaminase, códon-otimizada para C. tropicalis), alkB, alkG, alkT (que codificam uma alcano mono-oxigenase, uma rubredoxina e uma rubredoxina-redutase) e alkL (que codifica uma proteína de membrana/transporte) do alk-Operon de Pseudomonas putida, foram preparadas células eletrocompetentes de E. coli BW25113 AbioH, bem como da correspondente linhagem de controle E. coli BW25113. Isso foi realizado de modo e maneira conhecidos pelo técnico. As linhagens derivam da coleção Keio comercialmente disponível. Essas foram transformadas com o plasmídeo pACYC184{MCS2.0}[alkST_BFGL][alaDH_Bs(co) {PspXI} TAcv(ct)] (SEQ ID 13 ou exemplo 1 da WO/2013/024114 e a SEQ ID NO 17 ali citada) e (ausplattiert)semeadas em placas de ágar LB com cloranfe-nicol (50 pg/ml). Os transformantes foram verificados através da preparação de plasmídeos e análise de restrição analítica com relação à presença dos plasmídeos corretos. Dessa maneira, foram construídas as seguintes linhagens: Linhagens iniciais (de "Background") (Stammhintergrund) plasmídeos presentes [0089] As linhagens foram submetidas à fermentação fed-batch, para analisar a capacidade para a produção de éster metílico do ácido hidroxi-láurico, éster metílico do ácido oxo-láurico, éster metílico do ácido carboxi-láurico e éster metílico do ácido amino-láurico a partir do éster metílico do ácido láurico. Isso foi realizado com um sistema óctu-plo de fermentação paralela da empresa DASGIP. A outra execução experimental realizou-se exatamente tal como descrito no exemplo 2. Resultados Formação reduzida dos ácidos livres ácido aminoláurico, diácido do-decanóico, ácido láurico e ácido hidroxiláurico após nocaute de bioH em E. coli [0090] A linhagem com nocaute bioH mostrou uma formação nitidamente reduzida dos ácidos livres ácido aminoláurico, diácido dode-canoico, ácido láurico e ácido hidróxi-láurico em comparação com a linhagem de controle com bioH intacto, em parte, abaixo do limite de detecção. Foram calculadas as proporções do título final absoluto do diácido dodecanoico (DDS) e do éster metílico do diácido dodecanoico (DDSME), ácido aminoláurico (ALS) e éster metílico do ácido aminoláurico (ALSME), o ácido hidróxi-láurico (HLS) e éster metílico do ácido hidróxi-láurico (FILSME), bem como ácido láurico (LS) e éster metílico do ácido láurico (LSME), expresso em porcentos. [0091] A proporção que pode ser mostrada unicamente matematicamente é DDS para DDSME. [0092] O nocaute bioH reduziu a formação de DDS em torno do fator 33,5, todos os outros ácidos livres estavam abaixo do limite de detecção inferior.
Fase de oxidacão prolongada após o nocaute de bioH em E. coli BW25113 [0093] Em comparação com a linhagem de controle, foi demonstrado, que a capacidade de oxidação inicial na linhagem nocaute bioH não perde em subida, mas sim, permanece quase constante em relação à formação de ALSME através do decurso do processo. [0094] A figura 1 mostra: O nocaute de bioH causou, em relação ao título final nas mesmas condições, uma produtividade maior em torno de 47%.
Taxa de formação aumentada de éster metílico do ácido aminoláurico após o nocaute de bioH em E. coli BW25113 [0095] Foram avaliados os títulos absolutos obtidos após um tempo fixo (= final da biotransformação). Aqui, na linhagem nocaute foi verificada uma taxa de formação de produto nitidamente maior de 0,75 g de ALSME por litro e hora, em comparação com 0,51 g de ALSME por litro e hora na linhagem de tipo selvagem.
Proporção produto-para-produto secundário aperfeiçoada após o nocaute de bioH em E. coli BW25113 [0096] Foram avaliados os títulos absolutos obtidos após um tempo fixo (= final da biotransformação). Aqui, na linhagem inicial (de "Background") de nocaute foi verificada uma proporção nitidamente aperfeiçoada de produto (ALS e ALSME) para o produto secundário principal (DDS e DDSME). [0097] A proporção subiu por meio do nocaute bioH em 43,9%. O título do produto subiu em 43,9% com título constante do produto secundário.
Coeficiente de rendimento de glicose aumentado (??/?) na produção de ácido aminoláurico e éster metílico do ácido aminoláurico após nocaute de bioH em E. coli BW25113. [0098] Os títulos absolutos acumulados finais de ácido aminoláurico e éster metílico do ácido aminoláurico foram examinados em comparação com a quantidade de glicose usada. [0099] O coeficiente de rendimento de glicose sobe de 0,21 g/l de ALS(ME) por grama de glicose em 46% para 0,30 g/l de ALS(ME) por grama de glicose induzida pelo nocaute bioH.
Claims (15)
1. Processo para reação de um éster de ácido carboxílico, que apresenta a fórmula (I) R1 -A-COOR2 (I), na qual R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, R2 é selecionado do grupo, que consiste em alquila, preferivelmente metila, etila e propila, R3 é selecionado do grupo, que consiste em hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila, e no caso de A, se trata de um radical alquileno, alquenileno, arileno ou aralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono, por meio de uma célula, o referido processo sendo caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de: (a) contato da célula com o éster de ácido carboxílico em uma solução aquosa, sendo que no caso da célula, se trata de uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídio compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste é reduzida em relação ao tipo selvagem.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que adicionalmente compreende a etapa de: (b) contato da solução aquosa com uma solução orgânica hidrófoba compreendendo um trocador de cátions.
3. Uso de um nocaute de um gene que codifica um polipeptídio que compreende SEQ ID NO 2 ou uma variante deste, como parte do equipamento genético de uma célula recombinante caracterizado pelo fato de ser para aumentar a produção de um éster de ácido car- boxílico da fórmula (I) R1 - A - COOR2 (I), na qual R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, R2 é selecionado do grupo, que consiste em alquila, preferivelmente metila, etila e propila, R3 é selecionado do grupo, que consiste em hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila, e no caso de A, se trata de um radical alquileno, alquenileno, arileno ou aralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono, em relação ao tipo selvagem correspondente da célula.
4. Uso de uma célula recombinante, na qual a atividade de um polipeptídio compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula, caracterizado pelo fato de ser para a reação de um éster de ácido carboxílico da fórmula (I) R1-A-COOR2 (I), na qual R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, R2 é selecionado do grupo, que consiste em alquila, preferivelmente metila, etila e propila, R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila, e no caso de A, se trata de um radical alquileno, alquenileno, arileno ou aralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais pre- ferivelmente 8 átomos de carbono.
5. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que, no caso de A, se trata de um radical alquileno saturado, preferivelmente de um radical alquileno da fórmula -(CH2)n, na qual n é pelo menos 4.
6. Uso de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que A se trata de um radical alquileno saturado, preferivelmente de um radical alquileno da fórmula -(CH2)n, na qual n é pelo menos 4.
7. Célula recombinante, caracterizada pelo fato de que exprime uma alcano-hidroxilase recombinante, sendo que a atividade de um polipeptídio compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste é reduzida em relação ao tipo selvagem da célula.
8. Célula recombinante, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que, no caso da alcano-hidroxilase, se trata de uma alcano-hidroxilase do grupo consistindo em uma AlkB-mono-oxigenase e de uma mono-oxigenase de citocromo P450 da família CYP153.
9. Mistura de reação, caracterizada pelo fato de que compreende a célula recombinante, como definida na reivindicação 7 ou 8, em solução aquosa, bem como um éster de ácido carboxílico da fórmula (I) R1 -A-COOR2 (I), na qual R1 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, -CH2OH, -CHO, -COOR3, -CH2SH, -CH2OR3 e -CH2NH2, R2 é selecionado do grupo, que consiste em alquila, preferivelmente metila, etila e propila, R3 é selecionado do grupo, que consiste em hidrogênio e alquila, preferivelmente metila, etila e propila, e no caso de A, se trata de um radical alquileno, alquenileno, arileno ou aralquileno substituído, não substituído, linear, ramificado e/ou cíclico com pelo menos 4, mais preferivelmente 6, ainda mais preferivelmente 8 átomos de carbono.
10. Mistura de reação de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente uma solução orgânica hidrófoba com um trocador de cátions.
11. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 e 5, caracterizado pelo fato de que a célula exprime, além disso, uma transaminase, uma alaninadesidrogenase, ou uma proteína da família AlkL.
12. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 5 e 11, caracterizado pelo fato de que a célula apresenta uma atividade reduzida de pelo menos uma enzima em relação ao seu tipo selvagem, de que uma das reações catalisa a beta-oxidação de ácidos graxos, sendo que se trata preferivelmente de uma enzima selecionada do grupo, que consiste em ácido graxo-CoA-ligase, acil-CoA-desidrogenase, 2,4-dienoil-CoA-redutase, enoil-CoA-hidratase e 3-cetoacil-CoA-tiolase, um importador de ácido graxo ou variante deste, se trata de modo particularmente preferido, de FadL ou de uma variante deste.
13. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1,2, 5, 11 e 12, caracterizado pelo fato de que a célula apresenta e/ou superexprime pelo menos uma enzima selecionada do grupo que consiste em alcano-hidroxilase, desidrogenase de álcool, transaminase, alaninodesidrogenase e proteína da família AlkL em forma recom-binante.
14. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 5 e 11 a 13, caracterizado pelo fato de que a atividade de um polipeptídio compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste em relação ao tipo selvagem da célula, é reduzida através do nocaute de um gene que codifica um polipeptídio compreendendo SEQ ID NO 2 ou uma variante deste.
15. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concretizações ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria inicialmente revelada no pedido de patente ou em seus exemplos aqui a-presentados.
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