BE828941A

BE828941A - Vaccin et procede pour le preparer

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Publication number: BE828941A
Application number: BE156238A
Authority: BE
Priority date: 1975-05-12
Filing date: 1975-05-12
Publication date: 1975-11-12

Description


  Vaccin et procédé pour le préparer 

  
La présente invention est relative à un vaccin contre la varicelle ainsi qu'à des procédés pour la préparation d'un tel vaccin.

  
La présente'invention concerne, plus particulièrement, un vaccin de virus de varicelle vivant atténué sûr, ainsi qu'un procédé pour la production du vaccin en question par propagation sérielle

  
de virus de la varicelle dans des systèmes de culture sur cellules.

  
La varicelle ou petite vérole*volante, est principalement une maladie des enfants fortement contagieuse. Cette maladie se caractérise typiquement par l'apparition de fièvres et par le développement d'un rash maculaire qui évolue rapidement vers les stades de formation de papules et de vésicules. La guérison s'effectue habituellement sans incidents, mais la maladie, même sous sa forme modérée, est d'un aspect désagréable et peut entraîner l'apparition d'un grand nombre de cicatrices provenant des vésicules rompues. Dans certains cas, la maladie peut être très grave en ce sens qu'elle peut se compliquer d'une pneumonie chez les enfants ou les adultes. Des complications du système nerveux central, comme une ataxie cérébelleuse aiguë avec tremblements et hypotonie musculaire peuvent précéder, accompagner ou suivre la varicelle. 

  
Plus rarement il y a atteinte généralisée.du sys-  tème nerveux central avec hémorragie, infiltration 

  
 <EMI ID=1.1> 

  
Une névrite et une myélite peuvent également se pro-  duire. La teinte de la peau peut également être gênante avec apparition de lésions hémorragiques, bulbeuses ou gangreneuses.

  
Par conséquent, la prévention de la maladie par vaccination est justifiée afin d'empêcher l'apparition des troubles et inconvénients susmentionnés

  
et l'invention a plus particulièrement pour objet un vaccin à virus de la varicelle vivant atténué ainsi qu'un procédé pour sa préparation.

  
Plusieurs chercheurs ont, dans le passé, tenté de procéder à des vaccinations de volontaires humains sensibles avec des résultats variables quant aux "prises " et pas mal de désagréments en ce qui concerne l'efficacité protectrice. Cependant, on n'a pas obtenu d'effets significatifs recherchés en dépit du fait que les vaccinations tentées l'ont été sur

  
des volontaires sensibles avec des virus pleinement virulents dans le liquide vésiculaire provenant de cas de varicelle-zoster. 

  
La technique antérieure a relaté que la propagation de la varicelle dans divers systèmes

  
de culture sur cellules, comme celles de l'amnios humain, de fibroblastes d'embryons humains, les cellules de Hela et les cellules de la thyroïde humaine, mais, antérieurement à la présente invention, on croyait généralement que la seule source de virus de la varicelle exempts de cellules, viables, était le liquide provenant des vésicules engendrées par

  
la maladie. Caunt et coll., Journal of Hygiene,

  
62, 413-424 (1964) ont rapporté l'isolement de

  
virus exempts de cellules du tissu thyroidien

  
humain et Brunell, Virolo&#65533;y, 31, 732-4 (1967) a décrit l'isolement de virus exempts de cellules

  
de fibroblastes d'embryons humains. Le liquide vésiculaire est manifestement une source inappropriée de virus vivants pour la production d'un vaccin en raison de leur virulence et de l'approvisionnement limité. Le tissu thyroidien humain est constitué d'une lignée de cellules humaines primaires et elle ne convient par conséquent pas comme système

  
de culture sur tissus pour la propagation et l'atténuation de virus afin de produire des vaccins à virus vivants.

  
On a découvert à présent, non sans surprise, que l'on pouvait obtenir un passage exempt de cellules dans des préparations de culture sur tissu convenables,que l'on pouvait obtenir en quantité des virus de la varicelle vivants extracellulaires pouvant être utilisés comme antigènes et que l'on pouvait en préparer un vaccin à base de virus de la varicelle vivants et atténués provoquant chez l'homme l'apparition d'une réponse en anticorps contre des virus de la varicelle virulents, sans pour autant provoquer les manifestations cliniques graves de cette maladie. 

  
Le procédé conforme à la présente invention est caractérisé en ce qu'il comprend des passages en série de virus de la varicelle virulents dans un système de culture sur tissu. Le système de culture sur tissu peut être n'importe lequel convenant à la production de vaccins et dont on sait qu'il supporte la croissance du virus, comme des souches de cellules humaines diploïdes, telles qu'illustrées par les cellules WI-38 et MRC-5, des souches de cellules animales diploïdes (rhésus foetal) et des cellules primaires d'origine simienne. Les systèmes préférés sont ceux constitués par du tissu testiculaire de singe et du tissu pulmonaire de foetus humain diploïde, comme les cellules WI-38, préparés selon des procédés connus.

  
On incube la culture à 30-38[deg.]C, de préférence à une température variant d'environ 32[deg.]C à 36[deg.]C, pendant une durée variant de 3.à environ 10 jours. La durée réelle de l'incubation varie et est déterminée

  
par l'ampleur de la propagation virale, telle qu'indi-

  
 <EMI ID=2.1> 

  
L'inoculum peut être une suspension de cellules infectées ou un virus libérés par des procédés classiques
(par exemple par traitement aux ultrasons).

  
Lorsque l'on constate que l'on a obtenu le degré d'infectiosité approprié, habituellement après environ 10 à environ 40 passages en série du virus,

  
on élimine de manière aseptique les liquides ayant servi à l'entretien. Il faut noter que le nombre de passages en série nécessaire peut dépendre de la source de virus ou de l'isolat particulier que l'on a utilisé pour la préparation du vaccin. Les feuilles de cellules sont ensuite rinçées à plusieurs reprises avec une solution physiologique exempte de sérum, comme une solution physiologique saline avec tampon au phosphate (PBS)

  
ou une solution de sel équilibrée de Hanks. Un agent de stabilisation approprié, comme une composition constituée de saccharose, d'albumine, de glutamine et de phosphate ou analogues est ajoutée en un volume cor-

  
 <EMI ID=3.1> 

  
original.

  
Les cellules infectées sont retirées de la surface du récipient dans le milieu stabilisateur par des moyens appropriés (par exemple par congélationdécongélation ou par grattage des cellules). Les suspensions stabilisant-cellules sont ensuite réunies et les cellules infectées sont davantage rompues par

  
des moyens appropriés, comme un traitement aux ultrasons. La suspension de cellules rompues ainsi obtenue est ensuite clarifiée par filtration de façon à la débarrasser des débris cellulaires afin de garantir l'obtention d'une préparation de virus exempts de cellules. La préparation de virus ainsi obtenue est alors subdivisée dans un récipient convenable afin d'être distribuée comme vaccin. La dose peut varier d'environ 0,1 à environ 2,0 ml contenant de 100 à environ 1000 unités infectées dans des ampoules scellées à la flamme ou bien le vaccin peut se présenter sous la forme d'un produit lyophilisé dans des fioles bouchées et prêt à être reconstitué dans de l'eau stérile. L'administration peut se faire par scarification (piqûres multiples) intradermique ou par des voies sous-cutanées.

  
Le virus d'ensemencement à utiliser pour- la mise en oeuvre du procédé ci-dessus est isolé du liquide de vésicules provenant d'un cas clinique de varicelle et conservé dans un bouillon d'infusion de veau

  
à -70[deg.]C.

  
EXEMPLE 1

  
Vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants, atténués, préparé par 20 passages en série sur tissu de cellules WI-38.

  
19 passages en série du virus de la varicelle dans une culture sur tissu WI-38 ont été effectués de la façon suivante:

  
L'isolement initial des virus de la varicelle a été réalisé à partir d'un échantillon de liquide de vésicule prélevé sur un enfant atteint de varicelle clinique. On a recueilli l'échantillon de liquide de vésicule dans du bouillon d'infusion de veau et on l'a conservé à -70[deg.]C; au moment de 7 'isolement on a décongelé l'échantillon, on l'a dilué avec un volume égal de bouillon d'infusion de veau contenant 100 mcg de néomycine et 100 mcg de polymixine par ml et on l'a incubé pendant 30 minutes à 25[deg.]C. On a inoculé l'échantillon dans des cultures de cellules WI-38 établies originaires de foetus humain-diploïde et on a procédé à l'incubation à 32[deg.]C, cette étape constituant le passage n[deg.] 1 d'une série de sub-cultures sérielles. 

  
On a observé une cytopathologie progressive  typique de la varicelle et lorsque la culture fut suffisamment avancée (13 jours après l'inoculation) on

  
a décanté les liquides surnageants et on a réculté les  cellules infectées par trypsinisation. Après l'élimination de la trypsine par centrifugation, on a remis

  
les cellules en suspension, on les a comptées et réinoculées à une série fraîche de cultures de cellules WI-38, cette opération constituant le second passage

  
sériel à 32[deg.]C. Les passages subséquents de suspensions

  
de cellules infectées se sont poursuivis de la même manière. Le passage du virus pouvait également être

  
amorcé au départ de suspensions de cellules infectées conservées à -70[deg.]C avec des additifs protecteurs  cryogéniques, comme le glycérol, le sorbitol ou le  sulfoxyde de diméthyle, dont on sait qu'ils conservent  la viabilité des cellules.

  
En utilisant une suspension de cellules

  
infectées du dix-neuvième passage comme virus d'ensemencement, on a préparé un vaccin de la varicelle

  
à base de virus exempts de cellules,vivants et atténués, de la façon suivante :

  
On a préparé des cultures de cellules WI-38

  
dans des bouteilles roulantes en verre en utilisant 

  
 <EMI ID=4.1> 

  
chauffé comme milieu de croissance. Deux jours après la plantation, on a ajouté le milieu de croissance et on a inoculé les cultures en bouteille avec appro-

  
 <EMI ID=5.1> 

  
tenant 2 % de sérum de veau agamma inactivé. 

  
Trois jours après l'inoculation, on a réalimen- 

  
 <EMI ID=6.1> 

  
de veau agamma inactivé. On a effectué l'incubation à
32[deg.]C dans un appareil permettant de faire rouler les bouteilles. 7 jours après l'ensemencement, on a rinçé les cultures en bouteilles à deux reprises avec une solution physiologique à tampon au phosphate, à raison de 100 ml par rinçage. On a ajouté 16 ml d'un stabilisant du type SPGA à chaque bouteille. Le stabilisant

  
du type SPGA était constitué des ingrédients suivants:

  

 <EMI ID=7.1> 


  
On a préparé le stabilisant en dissolvant

  
les ingrédients dans 800 ml d'eau distillée stérile

  
et en amenant le volume jusqu'à 1 litre avec de l'eau distillée supplémentaire. Le pH de.la composition doit varier de 6,9 à 7,1. On a incorporé de la néomycine

  
en une concentration de 50 mcg/ml aux milieux de croissance, de rinçage, d'entretien et de stabilisation. 

  
On a réalisé des titrages d'infectiosité 

  
de chaque récolte dans des cultures sur cellules 

  
WI-38. 

  
Après l'addition du stabilisant, on a con-  gelé les bouteilles individuelles dans un bain C02-  alcool (environ -70[deg.]C). On a ensuite rapidement décongelé les contenus congelés des bouteilles en les secouant vigoureusement, en rompant partiellement la feuille de cellules et en libérant les cellules dans l'agent de stabilisation liquide. On a réuni les contenus des bouteilles, on en a prélevé des échantillons

  
pour mesurer leur stérilité et leur infectiosité
(déterminées après traitement d'un petit échantillon

  
aux ultrasons) et on les a conservés à -70[deg.]C dans un congélateur à fonctionnement mécanique. Trois semaines

  
plus tard, après que les tests de stérilité et d'infectiosité préliminaires eurent donné satisfaction,

  
on a rapidement décongelé les suspensions stabilisantcellules réunies et on les a transférées dans un appareil de traitement aux ultrasons à passage continu.

  
En variante on aurait aussi pu omettre la conservation

  
des suspensions stabilisant-cellules réunies à -70[deg.]C

  
et on aurait pu poursuivre le procédé par un traitement aux ultra-sons continus et un remplissage achevés

  
en une seule opération continue.

  
L'appareil de traitement aux ultra-sons

  
à passage continu présentait les organes suivants: 

  
1) dispositif de rupture des cellules aux ultra-sons

  
et accessoires (wattmètre, corne de rupture filetée d'un demi pouce et accessoire d'écoulement continu en acier inoxydable);

  
2) récipient en verre pyrex d'une contenance de 4 litres à chemise d'eau spéciale;

  
3) échangeur de chaleur en une tubulure d'acier inoxydable, enroulé en spirale et chemisé;

  
4) bain réfrigéré et circulateur;

  
5) débit-mètre; et

  
6) micro-pompe, à vitesse variable.

  
Les conditions de fonctionnement étaient les suivantes:

  
 <EMI ID=8.1> 

  
le wattmètre monté sur l'appareil;

  
2) débit : 150 ml/minute (mesuré sur le débit-mètre et

  
contrôlé à l'extérieur à l'aide de la micro-pompe);

  
3) cycles de traitement aux ultra-sons: quatre, par

  
exemple volume total déplacé à travers le dispositif de traitement pour ultra&#65533;sons à quatre reprises; et

  
4) température de fonctionnement : 0-4[deg.]C.

  
L'accessoire de passage ou écoulement continu, le récipient d'une contenance de 4 litres, l'échangeur de chaleur, le débit-mètre et la prise d'entrée de la micro-pompe ont été assemblés sous la forme d'une unité avant l'utilisation et stérilisés. Les connexions externes entre le bain réfrigéré en circulation et les parties chemisées de l'appareil ont permis à l'appareil tout entier d'être refroidi jusqu'à 0-4[deg.]C et maintenu à cette température au cours de toute l'opération de traitement aux ultra-sons.

  
Après le traitement aux ultra-sons, qui a permis d'obtenir une rupture des cellules sensi-

  
 <EMI ID=9.1> 

  
lons du vaccin en vrac pré-clarifié à des fins de contrôle et pouvant tester la sécurité. On a clarifié

  
le vaccin résiduel par filtration à travers une

  
bougie filtrante en verre fritté de porosité moyenne

  
(15 microns) de 2,5 x 8,3 cm et on a recueilli le

  
vaccin ainsi obtenu dans un récipient pré-refroidi. Avant l'utilisation, on a garni la bougie filtrante

  
d'un litre d'agent stabilisant. On a prélevé des échantillons après la clarification afin de tester

  
la sécurité sur animal et on a centrifugé un échantillon de 50 ml et on a remis le sédiment en suspen-  sion dans 0,5 ml d'agent stabilisant (concentrat centuple) et on l'a transféré sur des lames à des 

  
fins d'examen microscopique en présence de cellules intactes. On n'en a pas observé. On a réparti le

  
vaccin de la varicelle à virus vivants exempts de cellules final dans des fioles bouchées de caoutchouc et on l'a

  
 <EMI ID=10.1> 

  
dans des fioles à des fins de conservation ultérieures par lyophilisation, en utilisant les techniques bien connues des techniciens, telles que décrites dans

  
 <EMI ID=11.1>  dans des préparations de vaccins congelés à l'état 

  
 <EMI ID=12.1> 

  
suivant la préparation.

  
On peut préparer une forme de dosage convenable en reconstituant la matière lyophilisée jus-

  
 <EMI ID=13.1> 

  
l'addition d'eau distillée stérile et en utilisant d'environ 0,1 ml à 1,0 ml de ladite substance reconstituée pour l'administration parentérale sous la forme d'un vaccin de la varicelle. La forme congelée à l'état humide du vaccin qui contient 0,7 à 1,2 ml de vaccin peut être décongelée avant l'utilisation, une dose variant d'environ 0,1 ml à 1,0 ml du vaccin étant administrée par la voie parentérale.

  
EXEMPLE 2

  
Vaccin de la varicelle à virus exempts de cellules, vivants et atténués, préparé par 15 passages en série

  
 <EMI ID=14.1> 

  
On peut préparer un vaccin de la varicelle

  
à base de virus exempts de cellules, vivants, atténués en utilisant sensiblement le même mode opératoire que celui décrit à l'exemple 1, sauf que l'on a réalisé un total de 15 passages dans la culture de tissu à base de cellules WI-38. 

  
EXEMPLE 3

  
 <EMI ID=15.1> 

  
à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, en répétant sensiblement le même mode opératoire que celui décrit dans les exemples 1 sx 2, sauf qu'après 6 passages en série à 32[deg.]C, on anan-js une nouvelle série de passages à 36[deg.]C à partir gel septième passage et que l'on poursuit les passages à

  
 <EMI ID=16.1> 

  
une préparation de vaccin au 15ème passage.

EXEMPLE 4

  
 <EMI ID=17.1> 

  
On peut préparer un vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, en répétant sensiblement le même mode

  
 <EMI ID=18.1> 

  
une préparation de vaccin au 20ème passage. 

  
EXEMPLE 5

  
Vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et.atténués, préparé par 30 passages en série dans des cellules WI-38.

  
On peut préparer un vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, en répétant sensiblement le même mode opératoire que celui décrit dans les exemples 1 et 4, sauf qu'après 6 passages en série à 32[deg.]C, on amorçe une nouvelle série de passages à 36[deg.]C à partir du 7ème passage et que l'on poursuit les passages à
36[deg.]C jusqu'au 29ème passage pour finalement obtenir une préparation de vaccin au 30ème passage.

  
EXEMPLE 6

  
Vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, préparé par 40 passages en série dans des cellules WI-38.

  
On peut préparer un vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, en répétant sensiblement le même mode opératoire que celui décrit dans les exemples 1 et 4, sauf qu'après 6 passages en série à 32[deg.]C, on amorçe une nouvelle série de passages à 36[deg.]C à partir du 7ème passage et que l'on poursuit les passages à
36[deg.]C jusqu'au 39ème passage pour finalement obtenir une préparation de vaccin au 40ème passage. 

  
EXEMPLE 7

  
Vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, préparé par 20 passages en série dans une culture de tissus de cellules de testicules de singe.

  
On peut préparer un vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, en répétant sensiblement le même mode opératoire que celui décrit à l'exemple 1, sauf que l'on utilise une culture de tissu de cellules de test icules de singe connue au lieu de la culture sur cellules WI-38, le nombre total des passages en série s'élevant à 20.

  
EXEMPLE 8

  
Vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, préparé par 20 passages en série dans une culture de tissu de cellules de testicules de singe.

  
On peut préparer un vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, en répétant sensiblement le même mode opératoire que celui décrit à l'exemple 4, sauf que l'on utilise une culture de tissu de cellules de testicules de singe connue au lieu de la culture sur cellules WI-38, le nombre total des passages en série s'élevant à 20. 

REVENDICATIONS 

  
1.- Procédé dé préparation de virus de

  
la varicelle exempts de cellules, vivants et atténués, pouvant être utilisés à titre d'antigène dans

  
un vaccin qui provoque une réponse en anticorps chez 

  
l'homme vis-à-vis d'un virus de la varicelle viru-

  
lant sans pour autant provoquer les manifestations

  
cliniques graves de la maladie, caractérisé en ce que

  
l'on fait passer en série des virus virulants à 30-

  
38[deg.]C dans une préparation de culture sur tissu choisie

  
dans le groupe formé par des souches de cellules diploïdes humaines et animales et des cellules primaires

  
d'origine simienne, les passages s'effectuant en nombre

  
suffisant pour atténuer les virus, cette opération

  
étant suivie de la libération des virus atténués des

  
cellules infectées, en présence d'un stabilisant.

Claims

2.- Procédé suivant la revendication 1,

caractérisé en ce que la température s'élève à 32[deg.]C.

3.- Procédé suivant la revendication 1,

caractérisé en ce que la température s'élève à 36[deg.]C.

4.- Procédé suivant la revendication 1,

caractérisé en ce que la préparation de culture

sur tissu est constituée de souches de cellules diploïdes humaines.

5.- Procédé suivant la revendication 4,

caractérisé en ce que la souche de cellules diploïdes

humaines est constitué de tissu pulmonaire foetal

humain. 6.- Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce que le tissu pulmonaire foetal humain est constitué de cellules WI-38.

7.- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la préparation de culture <EMI ID=19.1>

sur tissu est constituée de cellules primaires d'origine simienne.

8.- Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce que les cellules primaires d'origine simienne proviennent de tissus de testicules de singe.

9.- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la préparation de culture sur tissu est constituée d'une souche de cellules diploïdes animales.

10.- Procédé suivant la revendication 9, caractérisé en ce que la souche de cellules diploïdes animales est constituée de tissu foetal de rhésus.

<EMI ID=20.1>

caractérisé en ce que le stabilisant est le SPGA.

12.- Vaccin de la varicelle à base de virus exempts de cellules, vivants et atténués, caractérisé en ce qu'il comprend, à titre d'ingrédient essentiel, une quantité immunologiquement efficace de virus de la varicelle exempts de cellules vivants et atténués, préparés selon le procédé consistant à faire passer en série des virus virulants, à une température de 30 -38[deg.]C, dans une préparation de culture sur tissu choisie dans le groupe formé par des souches de cellules diploïdes humaines et animales et des cellules primaires d'origine simienne, les passages s'effectuant en nombre suffisant pour atténuer les virus, cette opération étant suivie de la libération des virus atténués des cellules infectées, en présence d'un stabilisant.

13.- Vaccin suivant la revendication 10, caractérisé en ce que la température est de 32[deg.]C.

14.- Vaccin suivant la revendication 12, caractérisé en ce que la préparation de cultures sur tissu est constituée de souches de'cellules diploîdes humaines.

15.- Vaccin suivant la revendication 14, caractérisé en ce que la souche de cellules diploldes humaines est constituée de tissu pulmonaire foetal humain.

16.- Vaccin suivant la revendication 15, caractérisé en ce que le tissu pulmonaire foetal est constitué de cellules WI-38.

17.- Vaccin suivant la revendication 16, caractérisé en ce que le stabilisant est le SPGA.

18.- Vaccin de la varicelle suivant la revendication 12, sous une forme congelée à l'état humide.

19.- Vaccin de la varicelle suivant la revendication 12, sous forme lyophilisée. 20.- Procédé pour induire une immunité contre la varicelle, caractérisé en ce que l'on administre le vaccin de la varicelle suivant l'une quelconque des revendications 12 à 19. La demanderesse désire faire remarquer que les erreurs suivantes figurent dans les mémoires descriptifs déposés à l'appui de la demande en rubrique :

- page 14, ligne 8 :

au lieu de "les exemples 1 et 2",

il faut lire "l'exemple 1";

- page 14, ligne 21 :

au lieu de "les exemples 1 et 2",

il faut lire "les exemples 1 et 3";

- page 15, lignes 8 et 21 :

au lieu de "les exemples 1 et 4",

il faut lire "les exemples 1 et 3";

- page 16, exemple 8, ligne 8 :

au lieu de "l'exemple 4",

il faut lire "l'exemple 3". <EMI ID=21.1>

Le soussigné n'ignore pas qu'aucun document joint

au dossier d'un brevet d'invention ne peut être de nature à apporter, soit à la description, soit aux dessins, des modifications de fond et déclare que le contenu de cette note n'apporte pas de telles modifications et n'a d'autre objet que de signaler une ou plusieurs erreurs matérielles.

Il reconnaît que le contenu de cette note ne peut avoir pour effet de rendre valable totalement ou partielle- ment la demande de brevet susdite si celle-ci ne l'était

pas en tout ou en partie en vertu de la législation actuellement en vigueur.

Il autorise l'administration à joindre cette note

au dossier du brevet et à en délivrer photocopie. "par un traitement aux ultra-sons".

Le soussigné n'ignore pas qu'aucun document joint au dossier d'un brevet d'invention ne peut être de nature à apporter, soit à la description, soit aux dessins, des modifications de fond et déclare que le contenu de cette note n'apporte pas de telles modifications et n'a d'autre objet que de signaler une ou plusieurs erreurs matérielles.

Il reconnaît que le contenu de cette note ne peut avoir pour effet de rendre valable totalement ou partiellement la demande de brevet susdite si celle-ci ne l'était pas en tout ou en partie en vertu de la législation actuellement en vigueur.

Il autorise l'administration à joindre cette note au ossier du brevet et à en délivrer photocopie.