<Desc/Clms Page number 1>
*'Procédé pour la préparation de nouveaux 4 1,4-16-méthyl- stéroides et produits obtenus" .
Dans le brevet principal, est décrit un procédé pour la préparation de nouveaux #1,4-16#-méthylstéroides, qui, à partir, entre autres, de composée (I) de formule
EMI1.1
<Desc/Clms Page number 2>
dans laquelle R représente l'hydrogène ou un reste acyle inférieur
EMI2.1
par hydroxylation k l'atome de,carbone Il par voie biochimique! dduhydrogénation en position 1 à l'aide de microorganisraes à action déohydrogénante ou d'agents de déshydrogéoaiiôn ehimiques et# le cas échéant aoylation odlective du groupe hydroxyle en position Sit l'ordre d*4 opérttient étant 'quelconque - conduit à des cc#po- tés (ïî) de romule générale
EMI2.2
.
Les produits du procédé mentionné possédant une importante signification thérapeutique pour le traitement des affections in- flammatoires.
On a maintenant trouvé que l'on parvient,de manière plus avantageuse} aux mêmes composée (II) si, au lieu d'appliquer le procédé du brevet principal aux composés dé formule I, on l'appli- que à des composée (III) de formule générale
EMI2.3
<Desc/Clms Page number 3>
c'est-à-dire à des matières premières qui ne contiennent pas encore l'atome de fluor en position 9[alpha] et que l'on introduit ce dernier dans le composé 11-hydroxylé, au cours du procédé du brevet princi- pal, seulement après hydroxylation subséquente en position 11, spécialement par transformation du groupe hydroxyle introduit en position 11 en (le) groupement 9[alpha]-fluoro-11ss-hydroxy,
Mien des méthodes connues en elles-mêmes
Le procédé conforme à 1'invention est expliqué dans la suite de formulai suivantes, données à titre d'exemple, dans les-. quelles les stades du procédé, conformée au précédé du brevet principal, se succédant depuis la matière première III jusqu'au produit intermédiaire 11-hydroxylé correspondant, ont été laissés de côté, afin de donner une meilleure vue d'ensemble*
Le nouveau procédé a, vis-à-vis du procédé du brevet principal, encore l'avantage qu'il importe peu que l'hydroxylation primaire en 11, conduise à un produit hydroxyle en lia ou en 11ss.
Les produits du procédé, préparables conformément à 1' invention, possèdent une grande signification thérapeutique pour le traitement des maladies inflammatoires.
<Desc/Clms Page number 4>
EMI4.1
<Desc/Clms Page number 5>
Particulièrement forte est en particulier l'action anti- inflammatoire des composés conformes à l'invention, part application orale, comme l'indique le tableau suivant ayant trait à l'exemple
EMI5.1
de la 16a..aéthyl-6a,9a-dit'uoro-1-d6bydrocoartioostrone (1) par comparaison ayez 6a,9a-difluoro-l-déhydroeorticoatérone et la I6o-méthyl-9a-fluoropredni8olon8 (III). L'action antiinflammatoire a été déterminée sur des rats radies pesant environ 150 gr après application orale de la substance active sous forme d'une suspen- sion dana de la gomme arabique, selon le "Qranuloma pouch-Test" connu, les valeurs obtenues lors du test étant rapportera l'acé- tate d'hydrocortisone (IV) comme substance standard (action anti- inflammatoire - 1).
TABLEAU
EMI5.2
<tb>
<tb>
EMI5.3
Subatan-, Pouvoir an4 0 ce act1-(t11nflam- Action glycogène Action cata- Action inhibi- Te matoire bolique trio* sur le ¯¯¯¯,. avatème rénal compara uo- compa- uo- cosapa Quotient
EMI5.4
<tb> son <SEP> avec <SEP> tient <SEP> raison <SEP> tient <SEP> raison <SEP> d'action
<tb>
EMI5.5
IV d'ac- avec d'ao avec tion V IV .,.,.
1 1300 x IV 0oxlv 0,023 UOxIV Q,c3û 200xI otl34 ¯¯¯,¯¯, à -aomwamum il use x IV 6%IV 1,6 )XIV 1,3 40xlV 1005 Ili 0 x ' 301% V 01079 <cxiv 0,11 lOOJtIV 016
EMI5.6
La signification d'un* substance active ne te déduit et pendantpas uniquement do la valeur absolu* supérieure trouvée de l'action considérées par exemple antiinflamtoirt& mais elle est déduite également essentiellement de l'importance des actions se-
EMI5.7
conaire8 non désirées d'une substance; on lait ta effet que pour une augmentation de l'action obtenue, on doit en règle générale prendre en considération également un accroissement correspondant des actions secondaires.
<Desc/Clms Page number 6>
Dans le cas présent, il était étonnant, que pour un ac-
EMI6.1
crois sèment significatif de l'action antiinflammatoire de t. on observât,pour l'action secondaire non désirée glycogène. catabo- llque et inhibitrice sur le système rénal, seulement un faible accroissement (comparez le tableau ci-dessus, colonnes B, C, D).
L'action glyconéogenétique a été déterminée selon le test courant du glycogène du foie sur des souris. L'action catabolique et inhi- bitrice sur le système rénal a été essayée sur des rats femelles en croissance, pesant environ 40-50 g, par application sous-cutanée de la substance test, pendant 14 jours. Les dosés appliquées pour l'établissement du degré des actions secondaires était choisi de telle manière que, avec I, II et III, une action antiinflammatoire identique fût obtenue.
Comme composé standard, on s'est servi à nouveau également ici de l'acétate d'hydrocortisone. Les résultats, en particulier les quotients d'action correspondants,étonnamment faibles,montrent que les substances conformes à l'invention présen- tent, vis-à-vis des substances de référence II et III, au point de vue des actions secondaires non désirées, des propriétés nette- ment plus favorables.
EMI6.2
Prdoîàdmtnt à cause des actions si sondai res infiniment faiblI', en particulier sur le oemportement l1yool'n1qul. l'effet catabolique et inhibiteur sur le ,y.,... rénal, lei compotes eenfeï'Ma A '1nY.n'1on ne sont pas seulement applicables au trato '.ment externe des affeetioas pAr exemple aaltditt de l'épiderme de toute nature mais également au traitement des in- flammations internes, comme par exemple des inflammations des reine, du foie, de la polyarthrite, et d'autres affections, par application orale.
Dans la pratique médicale, les substances con- formes à l'invention sont appliquées sous les formes d'adminis- tration usuelles, comme par exemple sous forme d'onguent, de pou- dre ou de teinture, pour l'application externe ou sous forme de tablettes, de poudre, de suspension, de capsules ou également août
<Desc/Clms Page number 7>
EMI7.1
forme de préparation pour injection pour l'application interne. Les médicaments sont préparés en mélangeant, selon des méthodes connues en elles-mômes, la substance active avec les substances supports usitées en pharmacie galénique.
EXEMPLE 1 (Méthode 1)
EMI7.2
Préparation du ,6a-fluoro-16a-mëthyl-4,911)-pregnadiéne21-0l 3 -d on -2 - aétate On dissout 10 g de 6a-fluoro-l6a-méthyl-4-pregnene- llp#21-diol-3t2O-dione-21-acétate dans $98 ml de pyridine et 50 ni de diméthylformamide et l'on chauffe à + 70 sous azote. On y ajouta alors 4>42 ml de chlorure de méthylène et maintient 308 A 80-g$.
Après refroidissement à 20*p on introduit en agitant, la solution dans 900 ml d'eau glacée. On essore le précipité et le sèche. Pro- duit brut 9,25 g (Rendement 97p5 % de la théorie).
P-Fq 160/64 - 67*. aD + 112930 CHC13 É-- 234 m 15 100. b) Préparation du 6a-fluoro-9a-bromo-l6<ï-Béthyl'-4''pregnen<)" 1M .2,2Ç-done-2.!.Eja¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ ! A une solution de 10 g de af',uoro-1-mdthl9i1) perrads8nei.ol3C-a,oner2yacdtate daoe lez ruez, der dione, oute À +C, une aoiut3or de b,ü g dans 125 tû de dioxane, on ajoute à +2000# une solution de 6#02 de dibroaodiaetïylhydantoïnt dans 10 ml d'eau distillée et 23,4 ai de dioxane et l'on continue
EMI7.3
à agiter pendant 10 minutes* On ajoute ensuite une solution de
EMI7.4
0#84µ Ml d'acide perchlorique dans 13<4 ml d'eau distillée, et, des Intervalles de l? minute , en titre chaque fois I xd du mélange de réaction avec une solution 1/10 n de N823203 en preaenae tante
EMI7.5
don. La durée de réaction (60-75 minutes) est atteinte lorsqu'il
EMI7.6
n'y a plus de consommation de HOBr.
Pour noutralitarl en ajoute 3#77 g d'acétate de sodium 3 H20 et 2,42 g de sulfite de sodium
EMI7.7
dissous dans 25 ml d'eau distillée, la température maximale de
EMI7.8
230 ne pouvant pas être dépassée. Après la neutralisation, l'essai
<Desc/Clms Page number 8>
avec le papier à l'iodure de potassium/amidon doit se révéler ni
EMI8.1
gatif et le pH ne situer entre 5 6 et 7. On ajoute ensuite 150 al de méthanol. On encore le précipité inorganique et on lave ensuite le résidu se trouvant sur le filtre avec un mélange de 26,8 ml méthanol : dioxane (1:1). Au filtrat, on ajoute en agitant à +15 C, 442 ml d'eau distillée.
On agite le précipité 2 h à +5 et l'on essore la substance précipitée, puis on sèche à 20 dans le vide, sur KOH.
Rendement ;10,8 g (86,5 % de la théorie) de produit brut.
P.F.: 162/164. Décomposition.
EMI8.2
c) Préparation du 6ac-i'luoro-16a-méthyl-9p,11-oxido-,1,'-pregnèns- 2-01-3.20-diope-21-acétate.
A une solution de 8,7 g d'acétate de potassium dans 104 ml d'tfeool éthylique, on ajoute à 50*C, 10 g de 6oc-fluoro- 9a-fluoro-9a..bromo-16a-méthyl-l-pregnine-11'21-diol-3,20dione- 21-acétate et l'on fait bouillir 75 minutes à reflux. Après re- froidissement à 10 C, on ajoute goutte à goutte 247 ml d'eau, de telle manière que la température de la solution de réaction ne monte pas à plus de +15 C. On continue ensuite à agiter pendant
EMI8.3
2 h en refroidissant avec de la glace et l'on essore. On recristal- lise le produit brut dans le méthanol avec addition de charbon.
EMI8.4
Rendement 1 7#U 9 (80 % de la théorie) (237 . 13 000 PWw 1 1,e/154,' . 156"" [Y] jj 78,1" (OHOlg), d) Préparation du 6xrqad',uaro6mâtbl prei,pr,. eri r r r A un mélange de 90 ml, de 0h10fotOr=, et 10 al d'e6hancl< on ajoute à 0'Or 0 ml d'acide fluorhydrique, puis, en 1* espace de 15 minutes, une solution de 10 g de a-3luoro-abamithl rll. oxi,do-4pregnne21-olr20 di,ane21-acétate dans 90 ml de chloro- forme. On continue ensuite à agiter pendant 2 h à 0 à 5 . Pour neutraliser, on ajoute à une température maximale de +5 C, 30,75 g de carbonate de potassium dissous dans 30 ml d'eau. La neutralisa.
<Desc/Clms Page number 9>
tion jusqu'à pH de 6,5 est complétée par addition d'une solution à 5 % de bicarbonate de sodium.
La solution dans le chloroforme est ensuite lavée à nouveau avec de l'eau, puis séché* et évaporée à siccité dans le ride, On recristallise le résidu tout d'abord dans le mélange méthanol-chloroforme avec addition de charbon, puis dans le mélange chloroforme-benzène.
Rendement : 5,0 g (47 % de la théorie}
EMI9.1
P. F. 229/3?-34' o # 133,S- CHC13 r a:53 . 16 000. e) Préparation de la 6tt|9a*âif3.uoro< 1.6a B4tiif|i4,f4**FP |ntâiint ..18.al,-dio-3.2D..dion... 1-1 On déshydrogène en position 1,2, le .6acwréthrlôac,9a difluoro-4-pregnène-lip,21-diol-3,20-dione 2l*acétate (P,Yo 229/ 232-234* avec décomposition) avec Bacillus lentus, Mutante MB 284, le groupe 21-acétate étant en même temps saponifié;
(On peut cepen- dant introduire également, dans les mômes conditions, la liaison libre 21-OH.) @
Dans ce but, on garnit un fermenteur en acier inoxyda-
EMI9.2
ble de 50 litres de capacité, avec 30 litres d'une 101utioQhutri- tive contenant 0,1 % d'extrait de levure, 0,5% de Comsteep et 0,2 % de glucose, on stérilise par chauffage d'une demi-heure à 120 C, puis, après refroidissement, on ensemence avec une suspens sion de bactéries de Bacillus lentus MB 284.
Après croissance pendant 24- heures, à 28 C, avec agita.
EMI9.3
tion (220 tours/minute) et aérage (1,65 rx/heure), on prélève dans des conditions stériles 1,8 litre de la culture obtenue, et 'on les transfère dans un fermenteur de môme capacité avec 28 litres de la même solution nutritive stérilisée.
EMI9.4
En même temps on ajoute 6 g de ,lbaméthyl6ac,9a.di.uoro 4-pregnène-lip,21-diol-3,2Q-dione-21¯acétat8 dans 200 nl de dlfflé- thylformamide et l'on fait fermenter dans les cernes conditions pendant 50 heures*
<Desc/Clms Page number 10>
On contrôle la marche de la fermentation par prélèvement .
EMI10.1
de prises d'essai, que l'on extrait avec la méthyliaobutylcétone.
On analyse les extraits par chromatographie en couche mince (Sys- tème : benzène/acétate d'éthyle 4:1).
Après achèvement de la fermentation, on essore le bouil- lon de culture sur un grand entonnoir-filtre* Le résidu mycélien fut lavé plusieurs fois à l'eau et le filtrat a été extrait avec
EMI10.2
3 fois 10 1 de méthyli3obutyloitonte L'extrait fut ensuite concen- tré sous vide dans un évaporateur de passage et évaporé dans un ballon rond avec précaution à siccité dans le vide. On obtient ainsi
EMI10.3
un résidu huileux cristallin que l'on 4hromatolrapbie au lil101111.
A l'aide du mélange acétate d'éthyle-chloroforme 1'2, en élue la .6a-mdthyl-6ac,9a-dif'luoro-1,4-pregnadiène-11,21-diol-,20-dioe, que l'on recristallise dans le mélange acétate d'éthyle/éther et qui forid/ra2tr0,242-2IsEC (Rendement 60 ) 237. 16 600.
'EXEMPLE 2 (Voie 2). a) Préparation du 6oc-fluoro-16a-méthyl-l,t,9(11.)-prdatriène- 2 .. -3 2 -d on -2 -a t a t On déshydrate, comme décrit dans l'exemple la), 10 g de 6a-fluo ro-16a-inéthyl-1, 4-pregnadiéne-11 , 2l.diol- i 20-di one-a aé tate.
P.F. 164-165 (dans le méthanol) a238 - 16 750. b) Préparation du 6a-fluoro-9<''''bromo-l6(t-méthyl-l,4-pregnadiene- 2 - i -3 20-d e-2 - t t On convertit,comme décrit dans l'exemple 1 b), 10 g de
EMI10.4
ba-luo ro-16a-méthyli, 4, 9 ( 11 ) -pregnadi ëno.l01 20di. one-21- acétate, en la bromhydrine.
Produit brut : P.F. 120-126*. Décomposition*
EMI10.5
c) Préparation du 6a-fluoro-16a-mêthyl-9,11-oxido.l,4-pregna. d1èn,-21-o1-3.20-dione-21-acétate.. 1.1 .
On transforme, comme décrit dans l'exemple 1 c)# 10 g de 6a-tluoro.9#-bromo-16a-méthyl-l,4.pr.gnad1èn..ll.21-d!ol.3.20.
<Desc/Clms Page number 11>
EMI11.1
di,obe 21-acétate en le 9#11P-époxyde.
Produit brut ; P.P. : ..5-149'. z9 . 4 3u0, d) Préparation du ba,,c-difluoro-lba-saéthpl1,4-rediè 821-diol-320-dione-21-acétate.¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ On traite avec l'acide fluorhydrique cooae décrit dans l'exemple 1 d), 10 g de 4cx-fluorô-16a-aéthxl-S'ril.-.ox3.do1i4.- pregnadiène-21'.ol-3,20-dione-21-acétate. On a recristallisé le produit brut dans l'acétate d'éthyle.
P.P. ; z59/xo-z6i,5 9-237 - 16 400.
EXEMPLE 3 (Voie 1) e) Préparation de la 6a-fluoro-lbac-méthyl-;.-pregnèns-lla=zl dlol..3.20-d.one .
On garnit un fermenteur en acier inoxydable de 50 11- Iras de capacité,avec 30 1 d'une solution nutritive contenant :
4,4 % de sucre d'amidon
1 % de Cornsteep liquor
EMI11.2
0,8 de NaN03 Oil % de Iffl2po4 en stérilise par chauffage d'une demi-heure à 120* et après refroidissement, on ensemence avec une suspension de spores d'
EMI11.3
Aspergillus ochraceus, qui a été obtenue par prélevent en aurfa- ce à une culture en ballon de maïs de 7 jours, (15 g de Mate) avec environ 100 ml de solution physiologique de chlorure de sodium.
Après croissance pendant 1 jour à 30 avec agitation (220 tours/minute) et aérage (1,65 m3/heure), on prélève dans des conditions stériles 1,8 1 de la culture produite (obtenue) et on les transfère dans un fermenteur de même capacité avec 28 2 1 d' une solution nutritive contenant :
1 % de sucre d'amidon
1 % de farine de soja.
<Desc/Clms Page number 12>
, @
EMI12.1
En même temps, on dissout 7,5 z de 6<t-fluoro-l6<t'-<tethyl'- 4-P&nneWl-ol.3ixt1-dione dans 100 al d'éthanol et l'en fait fer- enter dans les aimes conditions pendant environ 48 h.
On contrôle la marche de la fermentation par prélèvement
EMI12.2
de prises d'essai, que l'on extrait avec de la méthyl1sobutylcétone, On analyse *.,en extraits par chromatographie en couche mince, Apre achèvement de la fermentation, on traite comme
EMI12.3
décrit dans l'exemple 1 e). Le produit brut peut être recr1stal11sé, sans chromatographie, dans l'acétate dfitlyle.
(P.F. : Z7,5-179,5 z37 14 800.) b) Préparation du Faac-t'luoro-l6ac-mdthy.-4.-pregnène-h.a21-diol- 3 20' o -2 - at
EMI12.4
On dissout 10 g de 6a-t?-uoro-16#-mér.byl-4...prenène-ll#, 21-diaJ.-3,20-diona dans 20 ml de diméthylformamide et l'on ajoute, en agitant, 6M mg de Pb (OH3COO)2.3H20 et 6 d'anhydride acéti- que. Après avoir ensuite agité pendant 2 heures à la température @ ambiante, on verse la solution de réaction dans l'eau. On essore
EMI12.5
le pr#t# eemda en 04*bo et l'Ott i?9#?i aîH0t M 16 odlon4s acétate d'éthyle-éther isopropylique.
(P.F. .69f51%0"v ±23? - 14 900.) c) Préparation du 6a-fluoro-l6a--aéthyl-4,9(ll)-pregnadiène- - ¯3 2 - io -2 -a étata , ¯ .
A une solution de 10 g de 6a-fluoro-l6a-méthyl-. pregnène-llac,21-diol.3=20-dione-21-acétate dans 100 n7. de pyridine, on ajoute à 20.0, 4$22 g de broraacétamida et l'on agite ensuite pendant 10 minutes. Après refroidissement à +5 C, on introduit, à cette température, du gaz SO2 jusqu'au moment où l'essai du mélange de réaction avec le papier ioduré de potassium/amidon reste néga- est tif. Pendant l'introduction du gaz, de la substance/précipitée dans le mélange de réaction. Il se forme une bouillie cristalline épaisse. Pour compléter la précipitation, on ajoute, à -10 , après achèvement de l'introduction du gaz, 200 ml d'eau.
Après abandon pendant plusieurs heures, on essore le précipité, on lave avec
<Desc/Clms Page number 13>
l'acide chlorhydrique dilué, jusqu'absence de pyridine et on lave A neutralité avec de l'eau. On recristallise le produit brut dans le mélange chlorure de méthylène-acétate d'éthyle.
EMI13.1
P.F. 160/65-66* 1 15 200.
Son traitement ultérieur est décrit dans l'exemple 1 b) - e).
EXEMPLE 3 (Voie 2)
EMI13.2
a) Préparation de la ba-fluoro-16a-méthyl-1,1r-prenadil.lac,2, diol-3.20-dione.., ,¯.i)u] On fait fermenter, à l'aide de Bacillua lentuej coma. décrit dans l'exemple le), 7, 5 g de 6a-fluoro-l6a-iffléthyl-4-pregriene- llo,21-diol-3,20¯dione. Le produit brut peut être recristallisé, sans chromatographie, dans le mélange acétate d'éthyle*'éther isc- propylique.
EMI13.3
(P.F. 255/257-2600 237 '' 16 200). b) Préparation du 6a..tluoro-16a-méthyl-l,lt-pr8gnadi.ne-l1t6,21-d:101- 3 20- 3. ne- .. êtat On acétyle sélectivement en position 21, 10 a de 6o[ t'l uoro -l6a-méth 11-J., 4-pregnadi ène-lla. 21-diol-3,20-dione.
{P.F, i 230f 233-235' 6 23? - 15 800). c) Préparation du 6a-fluoro-16a-méthyl-l94p9(ll)-prognattiène-21- ..3 z0.. -z -acétate 1 ' On déshydrate, comme décrit dans l'exemple 3 c), 10 g de 6x-fluoro 16a.mé thyl-1,4-pregaa ài ëne-lla, 2l.idial3 0 diana.
P.F. ; 164w165 (dans le méthanol} ce 238 - 16 750.
Le traitement ultérieur go fait comme décrit dans l'exemple 2 c) " d).
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.