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" Préparation d'un nouvel antibiotique appelé Moenomycine".
La présente invention concerne un nouvel antibio= - tique nommé Moenomycine et sa préparation.
Ce nouvel antibiotique est obtenu à partie de la cul- ture du Streptomyces bambergiensis nov. spéc.3263 ( ATCC N 13879 ) qui a une certaine analogie avec le Streptomyces glau- cus, le Streptomyces prasinus et le Qtreptomyces hirsutus, for- mateurs de spores vertes, mais qui en diffèrent par certains points, comme le montre le Tableau comparatif 1 donné ci-des- sous: Tandis que Streptomyces glaucus appartient indubitable- ment au groupe Spira ( 3 à 5 spires) par son type sporophore, on ne peut constater qu'une spire dans le cas du Streptomyces bambergiensis, de sorte que cet organisme doit être rangé dans le groupe Retinaculum apertum. Il existe une autre différence dans la formation du pigment et la couleur du mycélium végéta-
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tif.
Streptomyces prasinus ( Ettlinger et autres) aprartient probablement aussi au groupe Retinaculum apertum.
Cependant, par son mycélium végétatif de teinte rou- ge c..:ivré sur agar-malate de calcium, par l'absence de li- quéfaction de la gélatine, et par la formation de l'antibiotique, cette espèce diffère aussi du Streptomyces bambergiensis. Comme l'organisme mentionné ci-dessus, Streptomyces hirsutus ( Ettlin- ger et autres) n'est pas non plus apte à produire des antibio- tiques, il appartient au groupe Spira, il ne dégrade pas la caséine ( peptonisation du lait) et il décolore le tournesol.
Etant donné que le Streptomyces bambergiensis nov. spec. 3263 n' est identique à aucune des espèces décrites dans le " Manual of
Determinative Bacteriology" de Bergey, 6 édition (1948), et dans le Code de Détermination par N.A.Krassilnikov, Moscou (1949), on lui a donné le nom de Streptomyces bambergiensis nov. spec.3263" qui rappelle son origine ( à partie d'un échan- tillon de sol prélevé aux environs de Bamberg).
On a pu isoler d'autres streptomyces formant le même antibiotique, à savoir Streptomyces ghanaensis nov. spéc.
4092 ( provenant du Ghana), dont les propriétés ressemblent à celles du Streptomyces bambergiensis, ainsi que Streptomyces ederensis nov. spec.2$61 ( provenant de l'Edertal) et Strepto- myces geysiriensis nov.spec.3888 ( provenant d'un geyser d'Is- lande).
Le tableau 2 donne une comparaison des streptomyces mentionnés ci-dessus et montre les propriétés morphologiques et physiologique's caractéristiques de ces organismes.
On peut obtenir le nouvel antibiotique Moenomycine en cultivant de manière convenable une souche de Streptomyces bambergiensis ou d'autres Streptomyces analogues, tels que, reptomyces ghanaensis par exemple, Streptomyces ederensis, Streptomyces geysiriensis ou leurs variantes ou mutantes, et en isolant l'antibiotique à partir du mycélium et d'une solution de culture.
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La culture est effectuée dans des conditions aérobies dans un milieu aqueux contenant, outre des sels organiques, de l'amidon, du glucose, du sucre de canne ou de la mélasse, comme . source de carbonée, et du gruau de soja, de la liqueur de macé- ration de blé, de l'extrait de levure, de la farine de germes de coton, des nitrates ou des sels d'ammonium, comme source d'azote, jusqu'à ce que soit atteinte une activité antibioti- que maximum qui est décelée dans l'essai contre le Staphylococcus aureus P 209.
L'antibiotique se trouve principalement dans le my- célium. Cependant, il y en a de petites quantités dans la so- lution de culture d'où elles sont isolées par extraction avec des solvants organiques tels que le butanol, ou à l'aide d'a- gents d'adsorption.
Pour obtenir l'antibiotique du mycélium, on sépare ce dernier de la solution de culture par centrifugation et on l'extrait avec des solvants organiques. On utilisera de préfé- rence des solvants miscibles ou partiellement miscibles à l' eau, tels que le méthanol, l'éthanol, le butanol, l'éther monométhylique de l'éthylène-glycol, l'acétone ou le dioxane.
On peut aussi effectuer l'extraction après la destruction des cellules, par exemple par une forte congélation et un ressuage subséquent ou par homogénéisation, avec de l'eau ou des solu- tions aqueuses de sels, des acides organiques ou des acides minéraux.
A partir des extraits de mycélium, l'antibiotique brut est avantageusement obtenu par évaporation des solvants sous vide. Pour éliminer des impuretés inactives, on extrait le résidu avec des solvants organiques polaires chauds, tels que le méthanol et on précipite l'antibiotique, de ltextrait concentré sous pression réduite, avec un solvant organique non polaire tel que l'éther diéthylique, l'éther diisopropyli-
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que ou l'acétate d'éthyle.
Pour isoler l'antibiotique de l'extrait de mycélium, on peut aussi précipiter et séparer la substance à partir du résidu aqueux ( que l'on obtient après avoir évaporé le solvant organique) par réglage du pH à 1-5, de préférence à 2-3, à 1' aide d'acides minéraux, ou extraire cette substance de la so- lution aqueuse acidifiée avec un solvant non miscible ou par- tiellement miscible à l'eau, tel que le butanol. On peut aussi adsorber de la manière connue l'antibiotique du résidu aqueux par des agents d'adsorption tels que les terres décolorantes.
L'élution est convenablement effectuée à l'aide de solvants organiques aqueux, tels que des mélanges de méthanol et d'eau, de méthyl-glycol et d'eau ou de pyridine et d'eau. La teneur en eau est alors comprise entre 30 et 70%, elle est de préfé- rence de 50%. On obtient l'antibiotique brut à partir du pro- duit élué par évaporation et précipitation effectuées de la manière décrite ci-dessus.
Le procédé d'adsorption peut aussi être appliqué pour la purification du produit brut, l'élution étant effectuée convenablement en plusieurs fractions.
Pour purifier le produit brut, on peut aussi appli- quer la distribution à contre-courant, par exemple avec le sys- tème butanol/eau.
Par ses propriétés, le nouvel antibiotique se dis- tingue des substances à activité antibiotique qui ont déjà été décrites dans la littérature. Ctest un acide incolore qui, par réaction avec 1 molécule d'un hydroxyde de métal, forme les sels correspondants.
L'acide est soluble dans l'eau, dans des alcools à bas poids moléculaire, dans la pyridine et dans le diméthyl- formamide, ainsi que dans le méthanol, il est peu soluble dans des alcools à poidsmoléculaire élevé et insoluble dans l'éther,
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dans l'acétate d'éthyle et dans d'autres solvants organiques non polaires.
La substance est stable en solution neutre aqueuse et méthanolique, mais elle se dégrade lentement dans des solu- tions acides et surtout dans des solutions alcalines.
L'antibiotique est constitué de carbone, d'hydrogè- ne et d'oxygène et il est dépourvu d'azote, de soufre et d'ha- logène. Les réactions suivantes sont négatives : biuret, Fehling, Ehrlich, Sakaguchi, phtalate d'aniline et chlorure ferrique. Il n'y a pas d'adsorption caractéristique à l'ultraviolet dans la gamme de 220 à 400 m #.
L'antibiotique est très bien toléré par l'homme et les animaux à sang chaud et il a une grande activité aussi bien in vitro et qu'in vivo contre des microbes pathogènes, à gram positif, plus particulièrement contre les staphyloco- ques qui sont résistants à la tétracyline, à la pénicilline, à la streptomycine, à la noviobocine et à l'érythromycine.
Après trois injections sous-cutanées, de chacune 3 mg/kg, l'an- tibiotique présente une activité totale sur la souris infectée avec des streptocoques.
Le Tableau 3 donne le spectre de l'activité.
L'exemple suivant illustre la présente invention sans aucunement la limiter. Les pourcentages indiqués dans cet e- xemple s'étendent en poids.
EXEMPLE :
1) Préparation de la matière d'ensemencement.
Dans un ballon Erlenmeyer ayant une capacité de
300 millilitres on introduit 80 millilitres de la solution nutritive spécifiée ci-après et on ajuste le pH de la solu- tion à 6,6 . On stérilise la solution pendant 30 minutes à 121 dans l'autoclave et, après refroidissement, on l'ense- mence avec une suspension de spores de Streptomyces bamber-
<Desc/Clms Page number 6>
giensis nov.spec.3263 que l'on a obtenue par lavage d'un fla- con Roux contenant un mélange de flocons d'avoine et d'agar.
EMI6.1
<tb> Solution <SEP> nutritive <SEP> contenant:
<SEP> Farine <SEP> de <SEP> soja
<tb>
<tb> Glucose <SEP> 1%
<tb>
<tb> NaCl <SEP> 0,25%
<tb>
La matière ensemencée dans l'Erlenmeyer est ensuite cultivée à 28 pendant 48 heures dans une machine à secousses puis utilisée pour l'ensemencement de la culture fermentaire spécifiée ci-après.
2) fermentation.
La culture sur une grande échelle est effectuée dans un fermenteur à l'aide d'une solution nutritive contenant:
EMI6.2
<tb> Sucre <SEP> d'amidon <SEP> 4%
<tb>
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 3,4%
<tb>
<tb> NaCl <SEP> 0,25%
<tb>
On stérilise pendant 30 minutes à 1210 50 litres de cette solution nutritive dans un fermenteur d'une capacité de 100 litres, on refroidit à 28 et on charge la solution avec 1-2% de la matière d'ensemencement obtenue de la manière décri- te sous 1). La culture est effectuée sous aération( 50 litres d'air par litre de liquide et par heure). Le pH de la solution ------- nutritive tombe de 6,8 à environ 6,0- 6,2 pendan'- les premières 48 heures, puis il s'élève lentement à 7,5-8,0 ( 96- 120 heures).
3) Isolement par extraction neutre.
Après avoir recueilli le mycélium, on le sépare de la solution fermentaire par centrifugation ou filtration et on l'extrait, en agitant bien, avec environ 10 litres de métha- nol. L'extrait métnanolique séparé du mycélium est évaporé à sec sous pression réduite¯et le résidu est extrait à reflux avec 1,5 litre de méthanol bouillant. Après refroidissement, on sé- pare par filtration le résidu inactif et on concentre la solution
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méthanolique à environ 50 m1 . On ajoute 250 cm3 d'éther dié- thylique pour précipiter l'antibiotique brut. en le sépare par centrifugation, on le lave à l'éther et on le sèche sous pression réduite. On obtient environ 20 g d'un produit amorphe gris clair.
Pour purifier ce produit, on le dissout dans 2 litres d'eau, on ajoute à cette solution, en agitant, 200 g de terre décolorante, la substance active étant alors retenue par l'agent d'adsorption. On filtre la solution et on extrait l'agent d'ad- sorption deux fois à la température ambiante, en agitant chaque fois avec 2 litres d'éther monométhylique et de ltéthylène-gly- col aqueux à 50%( méthyl-glycol). On sépare les extraits par filtration, on les concentre sous vide à environ 40 ml et on précipite la substance active par addition de 200 ml d'éther.
De cette manière, on obtient à partir de ces extraits 6g d'une poudre amorphe incolore. L'activité in vitro représente 2 à 3 fois l'activité du produit brut (voir tableau 3).
4) Isolement par précipitation avec un acide.
De l'extrait méthanolique obtenu selon 3) on chasse le méthanol par distillation sous vide et on porte le résidu a- queux à pH 2-2,5 avec de l'acide chlorhydrique dilué. L'anti- biotique précipite. on l'essore à la trompe après avoir intro- duit, en agitant, 50 g de terre d'infusoires, on le lave à l'eau et on sèche le gâteau de filtration sous pression réduite. La couche de terre d'infusoires contenant l'antibiotique est ex- traite deux fois à la température ambiante, chaque fois avec 100 ml de méthanol, et l'extrait méthanolique est concentré à 20 ml sous pression réduite.
On précipite l'antibiotique par addition de 50 ml d'éther diéthylique. Après séparation par centrifugation, lava- ge à l'éther et séchage, on obtient 8- 10 g de Moenomycine.
5) Isolement par extraction du milieu acide.
On porte le résidu aqueux obtenu selon 4) à pH 2- 3
<Desc/Clms Page number 8>
avec l'aide de l'acide sulfurique dilué et on l'extrait 2 fois, chaque fois avec un quant de son volume de n-butanol. Après évaporation du butanol à un faible volume ( environ 20 ml) sous pression réduite, on précipite le produit brut par addition d'éther diéthylique ( 50 à 100 ml) ou d'éther de pétrole. On obtient 10 à 12 g de Moenomycine.
<Desc/Clms Page number 9>
TABLEAU 1 Comparaison des streptomyces à spores vertes décrits dans la littérature .
EMI9.1
Caractéristiques S.bamberg. S.virido- S.glaucus* S.viridans* S,alki- S.prasinus B.hireutus S.prasino- 3263 chrom. m ridis m un un pilosusiat
EMI9.2
<tb> Sporophore <SEP> Retinacu- <SEP> Spira(jus- <SEP> Spira <SEP> Spira <SEP> Spira <SEP> Spira <SEP> R.- <SEP> Spira <SEP> (3) <SEP> Spira
<tb> lum <SEP> ap.
<SEP> qu'à <SEP> 10) <SEP> (3-5) <SEP> (5-12) <SEP> (3-4) <SEP> apert.(1-2) <SEP> (1-3)
<tb> Forme <SEP> des <SEP> spores <SEP> ovale, <SEP> cou- <SEP> ovale, <SEP> hé- <SEP> ovale <SEP> cylindri- <SEP> cylin- <SEP> ovale <SEP> al- <SEP> ovale,hé- <SEP> ovale,couvert <SEP> de <SEP> rissé <SEP> de <SEP> que <SEP> drique <SEP> longé,
hé- <SEP> rissé <SEP> de <SEP> vert <SEP> de
<tb> poils <SEP> piquants <SEP> rissé <SEP> de <SEP> piquants <SEP> poils
<tb> piquants
<tb> Couleur <SEP> des <SEP> spores <SEP> vert <SEP> foncé- <SEP> vert <SEP> clair- <SEP> gris <SEP> vert <SEP> gris <SEP> foncé- <SEP> gris <SEP> vert- <SEP> vert <SEP> vert
<tb> vert <SEP> vert <SEP> gris- <SEP> vert <SEP> gris <SEP> verdatre <SEP> vert <SEP> foncé <SEP> foncé <SEP> foncé
<tb> bleu <SEP> fumé
<tb> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> clair- <SEP> brun <SEP> vert <SEP> incolore <SEP> brun <SEP> vert <SEP> brun <SEP> brun <SEP> incolore- <SEP> rouge
<tb> crème <SEP> vert <SEP> clair <SEP> jaune <SEP> blanc <SEP> brique
<tb> Pigment <SEP> soluble- <SEP> brun <SEP> brun <SEP> brun <SEP> vert <SEP> Pigment <SEP> de <SEP> mêlas <SEP> ine <SEP> - <SEP> + <SEP> +Hydrolyse <SEP> de <SEP> l'amidon <SEP> +++ <SEP> + <SEP>
++++ <SEP> + <SEP> ++++ <SEP> + <SEP> +
<tb> Dégradation <SEP> de <SEP> la
<tb> gélatine <SEP> + <SEP> +(lentement) <SEP> + <SEP> ++++ <SEP> +(lentement) <SEP> .- <SEP> + <SEP> (lentement) <SEP> + <SEP> (lent.)
<tb> Hydrolyse <SEP> de <SEP> la <SEP> caséine <SEP> +(faible) <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> +(lentement) <SEP> - <SEP> ++
<tb> Réduction <SEP> du <SEP> nitrate <SEP> ++++ <SEP> + <SEP> ++ <SEP> + <SEP>
<tb> Tournesol <SEP> bleu <SEP> bleu <SEP> blen <SEP> incolore <SEP> rouge
<tb>
<Desc/Clms Page number 10>
TABLEAU 1 suite Comparaison des streptomyces à spores vertes décrits dans la littérature
EMI10.1
<tb> Caractéristiques <SEP> S.bamberg <SEP> S.virido- <SEP> S.glaucus <SEP> S. <SEP> viridans <SEP> S.alvi- <SEP> S.prasinus <SEP> S.hirsutus <SEP> S.prasino-
<tb> 3263 <SEP> chrom.
<SEP> @ <SEP> @ <SEP> ridis <SEP> @ <SEP> @ <SEP> @ <SEP> pilosus <SEP> @
<tb> Agar-malate <SEP> de <SEP> crème <SEP> rouge <SEP> blanc <SEP> rouge
<tb> calcium <SEP> (couleur <SEP> du <SEP> cuivre <SEP> brique
<tb> Mycélium <SEP> végétatif)
<tb> Activité <SEP> existe <SEP> fait <SEP> dé- <SEP> existe <SEP> aucune <SEP> aucune <SEP> aucune <SEP> faible
<tb> antibiotique <SEP> faut <SEP> ou <SEP> contre <SEP> les
<tb> est <SEP> bactéries
<tb> faible <SEP> à <SEP> gram
<tb> positif
<tb>
*) d'après N.A. Krassilnkov **) d'après Ettlinger et ses collaborateurs.
<Desc/Clms Page number 11>
TABLEAU 2 Propriétés morphologiques et physiologiques des streptomyces nouvellement décrits
EMI11.1
<tb> Milieu <SEP> nutritif <SEP> Propriétés <SEP> S.ederensis <SEP> S.bambergiensis <SEP> S.geysiriensis <SEP> S.ghanaensis
<tb> ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ <SEP> ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ <SEP> nov.sp.2861 <SEP> nov.sp.3263 <SEP> nov.ep.3888 <SEP> nov.sp.4092
<tb> Gélatine-bouillon <SEP> Croissance <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> ++
<tb> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> crème <SEP> crème <SEP> crème
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> légèrement <SEP> blancs <SEP> blancs <SEP> blancs
<tb> blancs
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> Liquéfaction <SEP> ++ <SEP> ++ <SEP> ++ <SEP> +
<tb> Agar-amidon <SEP> Croissance <SEP> ++ <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> ++
<tb> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP>
gris <SEP> crème <SEP> blanc <SEP> blanc
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> absents <SEP> verte <SEP> gris <SEP> clair <SEP> verts
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brunâtre <SEP> - <SEP> Dégradation <SEP> de <SEP> l'amidon <SEP> +++ <SEP> K:Z <SEP> = <SEP> +++ <SEP> K:Z- <SEP> ++ <SEP> K:Z- <SEP> + <SEP> K:Z-
<tb> 20 <SEP> : <SEP> 62 <SEP> 22 <SEP> : <SEP> 53 <SEP> 25 <SEP> : <SEP> 31 <SEP> 25 <SEP> :
<SEP> 25
<tb> Agar-glucose <SEP> Croissance <SEP> +++ <SEP> ++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> crème <SEP> jaune <SEP> brun <SEP> jaune
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> blanc <SEP> gris <SEP> blancs <SEP> gris <SEP> clair(lanata) <SEP> blancs
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brun <SEP> foncéAgar <SEP> synthétique <SEP> Croissance <SEP> ++ <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> clair <SEP> brun <SEP> clair <SEP> brun <SEP> clair <SEP> brun <SEP> clair
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> absents <SEP> brun <SEP> pâle <SEP> gris <SEP> clair <SEP> blancs
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brun <SEP> clair <SEP> brun <SEP> clair <SEP> jaune <SEP> pale <SEP> Réduction <SEP> de <SEP> nitrate- <SEP> ++++- <SEP> ..
<tb>
Agar-malate <SEP> de <SEP> Croissance <SEP> +++ <SEP> ++ <SEP> +++
<tb> calcium <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> crème <SEP> brun <SEP> jaune <SEP> crème <SEP> jaune
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> brun <SEP> gris <SEP> verts <SEP> blancs <SEP> blanc <SEP> brunâtre
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> - <SEP> - <SEP> Dégradation <SEP> du <SEP> malate <SEP> +(au-dessous <SEP> + <SEP> K:Z-23:29 <SEP> +K:Z-23:
26 <SEP> de <SEP> la <SEP> colonie)
<tb>
<Desc/Clms Page number 12>
EMI12.1
<tb> TABLEAU <SEP> 2 <SEP> (suite)
<tb> Milleu <SEP> nutritif <SEP> Propriétés <SEP> S.edernsis <SEP> S.bambergiensis <SEP> S.geysiriensis <SEP> S.ghaensis
<tb> nov.sp.2861 <SEP> nov.sp.3263 <SEP> nov.sp.3888 <SEP> nov.sp.4092
<tb> Glucose-asparagi- <SEP> Croissance <SEP> +++ <SEP> + <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> ne-Agar <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> crème <SEP> crème <SEP> jaune <SEP> crème <SEP> jaune
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> absents <SEP> verts <SEP> gris <SEP> clair <SEP> verts
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brun <SEP> foncé- <SEP> - <SEP> Agar <SEP> nutritif <SEP> Croissance <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> ++++
<tb> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> crème <SEP> crème <SEP> crème
<tb> Mycélium <SEP>
aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> absents <SEP> blancs <SEP> gris <SEP> clair <SEP> vert <SEP> blanc
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> Agar <SEP> d'Emerson <SEP> Croissance <SEP> +++ <SEP> ++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> jaune <SEP> crème <SEP> crème
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> absents <SEP> verts <SEP> graiclair <SEP> blancs
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> - <SEP> -.
<tb>
Cellulose-agar <SEP> Croissance <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> ++
<tb> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> gris <SEP> blanc <SEP> blanc <SEP> crème
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> absents <SEP> verts <SEP> blanc <SEP> brunâtre <SEP> verts
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brun <SEP> foncé <SEP> - <SEP> - <SEP> Dégradation <SEP> de <SEP> la <SEP> cellulose <SEP> - <SEP> Caséine-Tourne- <SEP> Croissance <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> ++++ <SEP> ++++
<tb> sol-Agar <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> gris <SEP> grix <SEP> clair <SEP> crème <SEP> crème
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> absents <SEP> gris <SEP> clair <SEP> gris <SEP> gris <SEP> clair-blanc
<tb> Couleur <SEP> du <SEP> tournesol <SEP> rouge <SEP> K:Z- <SEP> bleu <SEP> bleu <SEP> bleu
<tb> 25:52
<tb>
EMI12.2
Dégradation de la caséine +++ X;
Z-25$52 + K:Z=22:28 ++ g:Z=25s44 ++ KsZ-25:42
EMI12.3
<tb> Peptone-Agar <SEP> Pigment <SEP> de <SEP> mélamine <SEP> ++++ <SEP> - <SEP> Disque <SEP> de <SEP> pomme <SEP> Croissance <SEP> +++ <SEP> ++ <SEP> ++++ <SEP> +++
<tb> de <SEP> terre <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> brun <SEP> gris <SEP> brun <SEP> jaune <SEP> crème <SEP> jaune <SEP> d'or
<tb> Mycélium <SEP> aérien <SEP> et <SEP> spores <SEP> absents <SEP> absents <SEP> blanc <SEP> gris <SEP> verts
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> noir <SEP> - <SEP> - <SEP> ..
<tb>
EMI12.4
Type de sporophores Rectue Retinaoulun 8pira Retinaculun apertum
EMI12.5
<tb> apertum <SEP> (Rectus)(Monovert.-Spira)
<tb> Spores <SEP> ovales, <SEP> ovales,couverts <SEP> cylindriques, <SEP> ovales,hérissés
<tb> lisses <SEP> de <SEP> poils <SEP> couvert.. <SEP> de <SEP> de <SEP> piquants
<tb> poile
<tb> Explication <SEP> des <SEP> symboles <SEP> :
<SEP> K <SEP> = <SEP> diamètre <SEP> de <SEP> la <SEP> colonie <SEP> en <SEP> mm <SEP> .. <SEP> Z <SEP> = <SEP> diamètre <SEP> de <SEP> la <SEP> zone <SEP> en <SEP> mm.
<tb>
<Desc/Clms Page number 13>
TABLEAU 13 Spectre d'activité antibiotique
EMI13.1
<tb> Organisme <SEP> soumis <SEP> à <SEP> l'essai <SEP> Inhibition <SEP> (bactériosta-
<tb>
<tb>
<tb> se) <SEP> pour <SEP> [alpha]/ml
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Staphylococcus <SEP> aureus <SEP> P.
<SEP> 209 <SEP> 0,5 <SEP> - <SEP> 1,0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> résistant <SEP> à <SEP> la
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tétracycline <SEP> 0,5 <SEP> - <SEP> 1,0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> résistant <SEP> à <SEP> la
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> streptomycine <SEP> 0,5 <SEP> - <SEP> 1,0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> résistant <SEP> à <SEP> la
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> péniciline <SEP> 0,5 <SEP> - <SEP> 1,0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> résistant <SEP> à <SEP> la
<tb>
<tb>
<tb> novobiocine <SEP> 0,5 <SEP> - <SEP> 1,0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> " <SEP> " <SEP> résistant <SEP> à
<tb>
<tb>
<tb> l'érythromycine <SEP> 0,5 <SEP> - <SEP> 1,0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Streptococcus <SEP> haemolyticus <SEP> 0,25 <SEP> - <SEP> 0,
5
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Saroina <SEP> lutea <SEP> >50
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Bac. <SEP> Subtilis <SEP> 0,5 <SEP> - <SEP> 1,0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> > <SEP> 50 <SEP>
<tb>
<Desc / Clms Page number 1>
"Preparation of a new antibiotic called Moenomycin".
The present invention relates to a novel antibiotic = - tick called Moenomycin and its preparation.
This new antibiotic is obtained from the culture of Streptomyces bambergiensis nov. Spec. 3263 (ATCC N 13879) which has a certain analogy with Streptomyces glaucus, Streptomyces prasinus and Qtreptomyces hirsutus, which form spores. green, but which differ from it in certain points, as shown in Comparative Table 1 given below: While Streptomyces glaucus undoubtedly belongs to the Spira group (3 to 5 turns) by its sporophore type, we cannot than a coil in the case of Streptomyces bambergiensis, so that this organism must be classified in the group Retinaculum apertum. There is another difference in the formation of the pigment and the color of the vegetal mycelium.
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tif.
Streptomyces prasinus (Ettlinger et al.) Probably also belongs to the Retinaculum apertum group.
However, by its red-colored vegetative mycelium: drunk on calcium agar-malate, by the absence of gelatin liquefaction, and by the formation of the antibiotic, this species also differs from Streptomyces bambergiensis. As the organism mentioned above, Streptomyces hirsutus (Ettlin- ger et al.) Is also not able to produce antibiotics, it belongs to the Spira group, it does not degrade casein (peptonization of milk) and it discolors the sunflower.
Since Streptomyces bambergiensis nov. Spec. 3263 is not identical to any of the species described in the "Manual of
Determinative Bacteriology "by Bergey, 6 edition (1948), and in the Code of Determination by NAKrassilnikov, Moscow (1949), it was given the name of Streptomyces bambergiensis nov. Spec. 3263" which recalls its origin (from 'a soil sample taken in the vicinity of Bamberg).
It has been possible to isolate other streptomyces forming the same antibiotic, namely Streptomyces ghanaensis nov. Spec.
4092 (from Ghana), whose properties resemble those of Streptomyces bambergiensis, as well as Streptomyces ederensis nov. Spec. $ 2 61 (from Edertal) and Streptomyces geysiriensis nov.spec. 3888 (from a geyser Iceland).
Table 2 gives a comparison of the streptomyces mentioned above and shows the characteristic morphological and physiological properties of these organisms.
The novel antibiotic Moenomycin can be obtained by suitably culturing a strain of Streptomyces bambergiensis or other analogous Streptomyces, such as, e.g., reptomyces ghanaensis, Streptomyces ederensis, Streptomyces geysiriensis or their variants or mutants, and isolating the antibiotic from from the mycelium and a culture solution.
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The cultivation is carried out under aerobic conditions in an aqueous medium containing, in addition to organic salts, starch, glucose, cane sugar or molasses, such as. source of carbon, and soybean porridge, wheat maceration liquor, yeast extract, cotton germ flour, nitrates or ammonium salts, as a source of nitrogen, until a maximum antibiotic activity is achieved which is detected in the Staphylococcus aureus P 209 test.
The antibiotic is mainly found in the mycelium. However, there are small amounts of it in the culture solution from which it is isolated by extraction with organic solvents such as butanol, or with adsorption agents.
To obtain the antibiotic from the mycelium, the latter is separated from the culture solution by centrifugation and extracted with organic solvents. Preferably, solvents which are miscible or partially miscible with water, such as methanol, ethanol, butanol, ethylene glycol monomethyl ether, acetone or dioxane, will be used.
The extraction can also be carried out after destruction of the cells, for example by deep freezing and subsequent sweating or by homogenization, with water or aqueous solutions of salts, organic acids or mineral acids.
From the extracts of mycelium, the crude antibiotic is advantageously obtained by evaporation of the solvents under vacuum. To remove inactive impurities, the residue is extracted with hot polar organic solvents, such as methanol, and the antibiotic is precipitated from the concentrated extract under reduced pressure with a non-polar organic solvent such as diethyl ether. diisopropyl ether
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that or ethyl acetate.
To isolate the antibiotic from the mycelium extract, one can also precipitate and separate the substance from the aqueous residue (which is obtained after evaporating the organic solvent) by adjusting the pH to 1-5, preferably at 2-3, using mineral acids, or extracting this substance from the aqueous solution acidified with a solvent immiscible or partially miscible with water, such as butanol. The antibiotic can also be adsorbed in the known manner from the aqueous residue by adsorption agents such as bleaching earths.
Elution is conveniently carried out using aqueous organic solvents, such as mixtures of methanol and water, methyl glycol and water or pyridine and water. The water content is then between 30 and 70%, it is preferably 50%. The crude antibiotic is obtained from the eluted product by evaporation and precipitation carried out as described above.
The adsorption process can also be applied for the purification of the crude product, the elution being suitably carried out in several fractions.
To purify the crude product, it is also possible to apply countercurrent distribution, for example with the butanol / water system.
By its properties, the new antibiotic differs from substances with antibiotic activity which have already been described in the literature. It is a colorless acid which, on reaction with 1 molecule of a metal hydroxide, forms the corresponding salts.
The acid is soluble in water, in low molecular weight alcohols, in pyridine and in dimethylformamide, as well as in methanol, it is sparingly soluble in high molecular weight alcohols and insoluble in ether. ,
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in ethyl acetate and other nonpolar organic solvents.
The substance is stable in neutral aqueous and methanolic solutions, but it degrades slowly in acidic solutions and especially in alkaline solutions.
The antibiotic is made up of carbon, hydrogen and oxygen and is free from nitrogen, sulfur and halogen. The following reactions are negative: biuret, Fehling, Ehrlich, Sakaguchi, aniline phthalate and ferric chloride. There is no characteristic ultraviolet adsorption in the range of 220 to 400 m #.
The antibiotic is very well tolerated by man and warm-blooded animals and has great activity both in vitro and in vivo against pathogenic, gram-positive microbes, more particularly against staphylococci which are resistant to tetracyline, penicillin, streptomycin, noviobocin and erythromycin.
After three subcutaneous injections, each of 3 mg / kg, the antibiotic shows full activity in the mouse infected with streptococci.
Table 3 gives the spectrum of activity.
The following example illustrates the present invention without in any way limiting it. The percentages given in this example are by weight.
EXAMPLE:
1) Preparation of the seed material.
In an Erlenmeyer flask having a capacity of
300 milliliters are introduced 80 milliliters of the nutrient solution specified below and the pH of the solution is adjusted to 6.6. The solution was sterilized for 30 minutes at 121 in the autoclave and, after cooling, inoculated with a suspension of Streptomyces bamber spores.
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giensis nov.spec.3263 which was obtained by washing a Roux flask containing a mixture of oatmeal and agar.
EMI6.1
<tb> Nutrient <SEP> solution <SEP> containing:
<SEP> Soybean <SEP> <SEP> flour
<tb>
<tb> Glucose <SEP> 1%
<tb>
<tb> NaCl <SEP> 0.25%
<tb>
The material sown in the Erlenmeyer flask is then cultured at 28 for 48 hours in a shaking machine and then used for seeding the fermentation culture specified below.
2) fermentation.
Large-scale cultivation is carried out in a fermenter using a nutrient solution containing:
EMI6.2
<tb> Starch <SEP> sugar <SEP> 4%
<tb>
<tb> Soybean <SEP> <SEP> <SEP> 3.4% oatmeal
<tb>
<tb> NaCl <SEP> 0.25%
<tb>
50 liters of this nutrient solution are sterilized for 30 minutes at 1210 in a fermenter with a capacity of 100 liters, cooled to 28 and the solution is charged with 1-2% of the seed material obtained as described. te under 1). The culture is carried out under aeration (50 liters of air per liter of liquid and per hour). The pH of the nutrient solution drops from 6.8 to about 6.0-6.2 during the first 48 hours, then slowly rises to 7.5-8.0 ( 96-120 hours).
3) Isolation by neutral extraction.
After collecting the mycelium, it is separated from the fermentation solution by centrifugation or filtration and extracted, with good stirring, with about 10 liters of methanol. The metnanolic extract separated from the mycelium is evaporated to dryness under reduced pressure and the residue is extracted under reflux with 1.5 liters of boiling methanol. After cooling, the inactive residue is filtered off and the solution concentrated.
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methanolic to about 50 m1. 250 cm3 of diethyl ether are added to precipitate the crude antibiotic. it is separated by centrifugation, washed with ether and dried under reduced pressure. About 20 g of a light gray amorphous product are obtained.
To purify this product, it is dissolved in 2 liters of water, 200 g of bleaching earth are added to this solution, with stirring, the active substance then being retained by the adsorption agent. The solution was filtered and the adsorbent extracted twice at room temperature, each time stirring with 2 liters of monomethyl ether and 50% aqueous ethylene glycol (methyl glycol). The extracts are separated by filtration, concentrated in vacuo to about 40 ml and the active substance is precipitated by adding 200 ml of ether.
In this way, 6 g of a colorless amorphous powder are obtained from these extracts. The in vitro activity represents 2 to 3 times the activity of the crude product (see Table 3).
4) Isolation by precipitation with an acid.
From the methanolic extract obtained according to 3) the methanol is removed by vacuum distillation and the aqueous residue is brought to pH 2-2.5 with dilute hydrochloric acid. The antibiotic precipitates. After having introduced with stirring 50 g of diatomaceous earth, it is filtered off with suction, washed with water and the filter cake dried under reduced pressure. The diatomaceous earth layer containing the antibiotic is extracted twice at room temperature, each time with 100 ml of methanol, and the methanolic extract is concentrated to 20 ml under reduced pressure.
The antibiotic is precipitated by adding 50 ml of diethyl ether. After separation by centrifugation, washing with ether and drying, 8-10 g of Moenomycin are obtained.
5) Isolation by extraction from the acid medium.
The aqueous residue obtained according to 4) is brought to pH 2 - 3
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with the help of dilute sulfuric acid and extracted twice, each time with a quantity of its volume of n-butanol. After evaporating the butanol to a small volume (about 20 ml) under reduced pressure, the crude product is precipitated by adding diethyl ether (50 to 100 ml) or petroleum ether. 10 to 12 g of Moenomycin are obtained.
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TABLE 1 Comparison of streptomyces with green spores described in the literature.
EMI9.1
Features S.bamberg. S. virido- S. glaucus * S. viridans * S, alki- S. prasinus B. hireutus S. prasino- 3263 chrom. m ridis m a pilosusiat
EMI9.2
<tb> Sporophore <SEP> Retinacu- <SEP> Spira (jus- <SEP> Spira <SEP> Spira <SEP> Spira <SEP> Spira <SEP> R.- <SEP> Spira <SEP> (3) <SEP > Spira
<tb> lum <SEP> ap.
<SEP> than <SEP> 10) <SEP> (3-5) <SEP> (5-12) <SEP> (3-4) <SEP> apert. (1-2) <SEP> (1 -3)
<tb> Shape <SEP> of the <SEP> spores <SEP> oval, <SEP> neck- <SEP> oval, <SEP> h- <SEP> oval <SEP> cylindri- <SEP> cylin- <SEP> oval <SEP> al- <SEP> oval, h- <SEP> oval, covered <SEP> with <SEP> rissed <SEP> with <SEP> that <SEP> drique <SEP> along,
h- <SEP> rissé <SEP> from <SEP> green <SEP> from
<tb> spiky <SEP> bristles <SEP> wrinkled <SEP> of spiky <SEP> bristles <SEP> bristles
<tb> prickly
<tb> Color <SEP> of <SEP> spores <SEP> dark <SEP> green- <SEP> green <SEP> light- <SEP> gray <SEP> green <SEP> gray <SEP> dark- <SEP> gray <SEP> green- <SEP> green <SEP> green
<tb> green <SEP> green <SEP> gray- <SEP> green <SEP> gray <SEP> greenish <SEP> green <SEP> dark <SEP> dark <SEP> dark
<tb> blue <SEP> smoked
<tb> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP> light- <SEP> brown <SEP> green <SEP> colorless <SEP> brown <SEP> green <SEP> brown <SEP> brown <SEP> colorless- <SEP> red
<tb> cream <SEP> green <SEP> light <SEP> yellow <SEP> white <SEP> brick
<tb> Pigment <SEP> soluble- <SEP> brown <SEP> brown <SEP> brown <SEP> green <SEP> Pigment <SEP> from <SEP> melas <SEP> ine <SEP> - <SEP> + < SEP> + Hydrolysis <SEP> of <SEP> starch <SEP> +++ <SEP> + <SEP>
++++ <SEP> + <SEP> ++++ <SEP> + <SEP> +
<tb> Degradation <SEP> of <SEP> the
<tb> gelatin <SEP> + <SEP> + (slowly) <SEP> + <SEP> ++++ <SEP> + (slowly) <SEP> .- <SEP> + <SEP> (slowly) <SEP > + <SEP> (slow.)
<tb> Hydrolysis <SEP> of <SEP> the <SEP> casein <SEP> + (weak) <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> + (slowly) <SEP> - <SEP> + +
<tb> <SEP> reduction of <SEP> nitrate <SEP> ++++ <SEP> + <SEP> ++ <SEP> + <SEP>
<tb> Sunflower <SEP> blue <SEP> blue <SEP> blen <SEP> colorless <SEP> red
<tb>
<Desc / Clms Page number 10>
TABLE 1 continued Comparison of streptomyces with green spores described in the literature
EMI10.1
<tb> Characteristics <SEP> S.bamberg <SEP> S.virido- <SEP> S.glaucus <SEP> S. <SEP> viridans <SEP> S.alvi- <SEP> S.prasinus <SEP> S. hirsutus <SEP> S.prasino-
<tb> 3263 <SEP> chrom.
<SEP> @ <SEP> @ <SEP> ridis <SEP> @ <SEP> @ <SEP> @ <SEP> pilosus <SEP> @
<tb> Agar-malate <SEP> of <SEP> cream <SEP> red <SEP> white <SEP> red
<tb> calcium <SEP> (color <SEP> of the <SEP> copper <SEP> brick
<tb> Vegetative mycelium <SEP>)
<tb> Activity <SEP> exists <SEP> done <SEP> de- <SEP> exists <SEP> none <SEP> none <SEP> none <SEP> low
<tb> antibiotic <SEP> must be <SEP> or <SEP> against <SEP> the
<tb> is <SEP> bacteria
<tb> low <SEP> to <SEP> gram
<tb> positive
<tb>
*) according to N.A. Krassilnkov **) according to Ettlinger and his collaborators.
<Desc / Clms Page number 11>
TABLE 2 Morphological and physiological properties of newly described streptomyces
EMI11.1
<tb> Nutrient <SEP> medium <SEP> Properties <SEP> S.ederensis <SEP> S.bambergiensis <SEP> S.geysiriensis <SEP> S.ghanaensis
<tb> ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ <SEP> ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ <SEP> nov.sp.2861 <SEP> nov.sp.3263 <SEP> nov.ep.3888 <SEP> nov.sp.4092
<tb> Gelatin-broth <SEP> Growth <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> ++
<tb> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> dark <SEP> brown <SEP> cream <SEP> cream <SEP> cream
<tb> Mycelium <SEP> aerial <SEP> and <SEP> spores <SEP> slightly white <SEP> <SEP> white <SEP> white
<tb> white
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brown <SEP> dark <SEP> Liquefaction <SEP> ++ <SEP> ++ <SEP> ++ <SEP> +
<tb> Agar-starch <SEP> Growth <SEP> ++ <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> ++
<tb> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP>
gray <SEP> cream <SEP> white <SEP> white
<tb> Aerial <SEP> mycelium <SEP> and <SEP> spores <SEP> absent <SEP> green <SEP> gray <SEP> light <SEP> green
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brownish <SEP> - <SEP> Degradation <SEP> of <SEP> starch <SEP> +++ <SEP> K: Z <SEP> = <SEP> + ++ <SEP> K: Z- <SEP> ++ <SEP> K: Z- <SEP> + <SEP> K: Z-
<tb> 20 <SEP>: <SEP> 62 <SEP> 22 <SEP>: <SEP> 53 <SEP> 25 <SEP>: <SEP> 31 <SEP> 25 <SEP>:
<SEP> 25
<tb> Agar-glucose <SEP> Growth <SEP> +++ <SEP> ++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP> cream <SEP> yellow <SEP> brown <SEP> yellow
<tb> Aerial <SEP> mycelium <SEP> and <SEP> spores <SEP> white <SEP> gray <SEP> white <SEP> gray <SEP> light (lanata) <SEP> white
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brown <SEP> dark Agar <SEP> synthetic <SEP> Growth <SEP> ++ <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP> light <SEP> brown <SEP> light <SEP> brown <SEP> light <SEP> brown <SEP> light
<tb> Aerial <SEP> mycelium <SEP> and <SEP> spores <SEP> absent <SEP> light brown <SEP> <SEP> gray <SEP> light <SEP> white
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brown <SEP> light <SEP> brown <SEP> light <SEP> yellow <SEP> pale <SEP> Reduction <SEP> of <SEP> nitrate- <SEP> ++ ++ - <SEP> ..
<tb>
Agar-malate <SEP> of <SEP> Growth <SEP> +++ <SEP> ++ <SEP> +++
<tb> calcium <SEP> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP> dark <SEP> cream <SEP> brown <SEP> yellow <SEP> cream <SEP> yellow
<tb> Mycelium <SEP> aerial <SEP> and <SEP> spores <SEP> brown <SEP> gray <SEP> green <SEP> white <SEP> white <SEP> brownish
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brown <SEP> dark <SEP> - <SEP> - <SEP> Degradation <SEP> of <SEP> malate <SEP> + (below <SEP> + <SEP > K: Z-23: 29 <SEP> + K: Z-23:
26 <SEP> of <SEP> the <SEP> colony)
<tb>
<Desc / Clms Page number 12>
EMI12.1
<tb> TABLE <SEP> 2 <SEP> (continued)
<tb> Milleu <SEP> nutritious <SEP> Properties <SEP> S.edernsis <SEP> S.bambergiensis <SEP> S.geysiriensis <SEP> S.ghaensis
<tb> nov.sp.2861 <SEP> nov.sp.3263 <SEP> nov.sp.3888 <SEP> nov.sp.4092
<tb> Glucose-asparagi- <SEP> Growth <SEP> +++ <SEP> + <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> ne-Agar <SEP> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP> cream <SEP> cream <SEP> yellow <SEP> cream <SEP> yellow
<tb> Aerial <SEP> mycelium <SEP> and <SEP> spores <SEP> absent <SEP> green <SEP> gray <SEP> light <SEP> green
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brown <SEP> dark- <SEP> - <SEP> Agar <SEP> nutrient <SEP> Growth <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> ++ + <SEP> ++++
<tb> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> dark <SEP> brown <SEP> cream <SEP> cream <SEP> cream
<tb> Mycelium <SEP>
aerial <SEP> and <SEP> spores <SEP> absent <SEP> white <SEP> gray <SEP> light <SEP> green <SEP> white
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brown <SEP> dark <SEP> Emerson's agar <SEP> <SEP> Growth <SEP> +++ <SEP> ++ <SEP> +++ <SEP> +++
<tb> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP> dark <SEP> yellow <SEP> cream <SEP> cream
<tb> Aerial <SEP> mycelium <SEP> and <SEP> spores <SEP> absent <SEP> green <SEP> graiclair <SEP> white
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brown <SEP> dark <SEP> - <SEP> -.
<tb>
Cellulose-agar <SEP> Growth <SEP> + <SEP> + <SEP> + <SEP> ++
<tb> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP> gray <SEP> white <SEP> white <SEP> cream
<tb> Aerial <SEP> mycelium <SEP> and <SEP> spores <SEP> absent <SEP> green <SEP> white <SEP> brownish <SEP> green
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> brown <SEP> dark <SEP> - <SEP> - <SEP> Degradation <SEP> of <SEP> the <SEP> cellulose <SEP> - <SEP> Casein-Turns - <SEP> Growth <SEP> +++ <SEP> +++ <SEP> ++++ <SEP> ++++
<tb> soil-Agar <SEP> Vegetative <SEP> mycelium <SEP> brown <SEP> gray <SEP> grix <SEP> light <SEP> cream <SEP> cream
<tb> Aerial <SEP> mycelium <SEP> and <SEP> spores <SEP> absent <SEP> gray <SEP> light <SEP> gray <SEP> gray <SEP> light-white
<tb> Color <SEP> of the <SEP> sunflower <SEP> red <SEP> K: Z- <SEP> blue <SEP> blue <SEP> blue
<tb> 25:52
<tb>
EMI12.2
Degradation of casein +++ X;
Z-25 $ 52 + K: Z = 22: 28 ++ g: Z = 25s44 ++ KsZ-25: 42
EMI12.3
<tb> Peptone-Agar <SEP> Pigment <SEP> of <SEP> melamine <SEP> ++++ <SEP> - <SEP> Disk <SEP> of <SEP> apple <SEP> Growth <SEP> ++ + <SEP> ++ <SEP> ++++ <SEP> +++
<tb> of <SEP> earth <SEP> Mycelium <SEP> vegetative <SEP> brown <SEP> gray <SEP> brown <SEP> yellow <SEP> cream <SEP> yellow <SEP> gold
<tb> Aerial <SEP> mycelium <SEP> and <SEP> spores <SEP> absent <SEP> absent <SEP> white <SEP> gray <SEP> green
<tb> Pigment <SEP> soluble <SEP> black <SEP> - <SEP> - <SEP> ..
<tb>
EMI12.4
Type of sporophores Rectue Retinaoulun 8pira Retinaculun apertum
EMI12.5
<tb> apertum <SEP> (Rectus) (Monovert.-Spira)
<tb> Spores <SEP> oval, <SEP> oval, covered <SEP> cylindrical, <SEP> oval, spiky
<tb> smooth <SEP> of <SEP> bristles <SEP> covered .. <SEP> of <SEP> of <SEP> quills
<tb> furry
<tb> Explanation <SEP> of the <SEP> symbols <SEP>:
<SEP> K <SEP> = <SEP> diameter <SEP> of <SEP> the <SEP> colony <SEP> in <SEP> mm <SEP> .. <SEP> Z <SEP> = <SEP> diameter < SEP> of <SEP> the <SEP> zone <SEP> in <SEP> mm.
<tb>
<Desc / Clms Page number 13>
TABLE 13 Spectrum of antibiotic activity
EMI13.1
<tb> Organism <SEP> subjected <SEP> to <SEP> test <SEP> Inhibition <SEP> (bacteriosta-
<tb>
<tb>
<tb> se) <SEP> for <SEP> [alpha] / ml
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Staphylococcus <SEP> aureus <SEP> P.
<SEP> 209 <SEP> 0.5 <SEP> - <SEP> 1.0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> resistant <SEP> to <SEP> the
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tetracycline <SEP> 0.5 <SEP> - <SEP> 1.0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> resistant <SEP> to <SEP> the
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> streptomycin <SEP> 0.5 <SEP> - <SEP> 1.0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> resistant <SEP> to <SEP> the
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> penicilin <SEP> 0.5 <SEP> - <SEP> 1.0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> resistant <SEP> to <SEP> the
<tb>
<tb>
<tb> novobiocin <SEP> 0.5 <SEP> - <SEP> 1.0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> "<SEP>" <SEP> resistant <SEP> to
<tb>
<tb>
<tb> erythromycin <SEP> 0.5 <SEP> - <SEP> 1.0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Streptococcus <SEP> haemolyticus <SEP> 0.25 <SEP> - <SEP> 0,
5
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Saroina <SEP> lutea <SEP>> 50
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Bac. <SEP> Subtilis <SEP> 0.5 <SEP> - <SEP> 1.0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> E. <SEP> coli <SEP>> <SEP> 50 <SEP>
<tb>