BE1026469B1 - Dispositif microfluidique pour selectionner des bacteriophages capables d'infecter des bacteries contenues dans un echantillon - Google Patents

Dispositif microfluidique pour selectionner des bacteriophages capables d'infecter des bacteries contenues dans un echantillon Download PDF

Info

Publication number
BE1026469B1
BE1026469B1 BE20185508A BE201805508A BE1026469B1 BE 1026469 B1 BE1026469 B1 BE 1026469B1 BE 20185508 A BE20185508 A BE 20185508A BE 201805508 A BE201805508 A BE 201805508A BE 1026469 B1 BE1026469 B1 BE 1026469B1
Authority
BE
Belgium
Prior art keywords
microfluidic device
sample
bacteriophage
inlet
channel
Prior art date
Application number
BE20185508A
Other languages
English (en)
Other versions
BE1026469A1 (fr
Inventor
Van Lidth De Jeude Jehan Lienart
Johan Quintens
Jean-Paul Pirnay
Olivier Vandenberg
Maya Merabishvili
Herman Jacobus Blok
Original Assignee
Van Lidth De Jeude Jehan Lienart
Vesale Bioscience Sprl
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Van Lidth De Jeude Jehan Lienart, Vesale Bioscience Sprl filed Critical Van Lidth De Jeude Jehan Lienart
Priority to BE20185508A priority Critical patent/BE1026469B1/fr
Priority to PCT/EP2019/068858 priority patent/WO2020011994A1/fr
Publication of BE1026469A1 publication Critical patent/BE1026469A1/fr
Application granted granted Critical
Publication of BE1026469B1 publication Critical patent/BE1026469B1/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
    • B01F25/00—Flow mixers; Mixers for falling materials, e.g. solid particles
    • B01F25/40—Static mixers
    • B01F25/42—Static mixers in which the mixing is affected by moving the components jointly in changing directions, e.g. in tubes provided with baffles or obstructions
    • B01F25/43—Mixing tubes, e.g. wherein the material is moved in a radial or partly reversed direction
    • B01F25/431—Straight mixing tubes with baffles or obstructions that do not cause substantial pressure drop; Baffles therefor
    • B01F25/43197—Straight mixing tubes with baffles or obstructions that do not cause substantial pressure drop; Baffles therefor characterised by the mounting of the baffles or obstructions
    • B01F25/431971—Mounted on the wall
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
    • B01F25/00—Flow mixers; Mixers for falling materials, e.g. solid particles
    • B01F25/40—Static mixers
    • B01F25/42—Static mixers in which the mixing is affected by moving the components jointly in changing directions, e.g. in tubes provided with baffles or obstructions
    • B01F25/43—Mixing tubes, e.g. wherein the material is moved in a radial or partly reversed direction
    • B01F25/432—Mixing tubes, e.g. wherein the material is moved in a radial or partly reversed direction with means for dividing the material flow into separate sub-flows and for repositioning and recombining these sub-flows; Cross-mixing, e.g. conducting the outer layer of the material nearer to the axis of the tube or vice-versa
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
    • B01F25/00—Flow mixers; Mixers for falling materials, e.g. solid particles
    • B01F25/40—Static mixers
    • B01F25/42—Static mixers in which the mixing is affected by moving the components jointly in changing directions, e.g. in tubes provided with baffles or obstructions
    • B01F25/43—Mixing tubes, e.g. wherein the material is moved in a radial or partly reversed direction
    • B01F25/433—Mixing tubes wherein the shape of the tube influences the mixing, e.g. mixing tubes with varying cross-section or provided with inwardly extending profiles
    • B01F25/4333—Mixers with scallop-shaped tubes or surfaces facing each other
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
    • B01F33/00—Other mixers; Mixing plants; Combinations of mixers
    • B01F33/30—Micromixers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
    • B01F33/00—Other mixers; Mixing plants; Combinations of mixers
    • B01F33/30—Micromixers
    • B01F33/3038—Micromixers using ciliary stirrers to move or stir the fluids
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
    • B01F33/00—Other mixers; Mixing plants; Combinations of mixers
    • B01F33/80—Mixing plants; Combinations of mixers
    • B01F33/82—Combinations of dissimilar mixers
    • B01F33/824—Combinations of dissimilar mixers mixing simultaneously in two or more mixing receptacles
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502746—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by the means for controlling flow resistance, e.g. flow controllers, baffles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0816—Cards, e.g. flat sample carriers usually with flow in two horizontal directions
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/0867—Multiple inlets and one sample wells, e.g. mixing, dilution
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/088—Channel loops
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/0883—Serpentine channels
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
    • B01L2400/0478—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure pistons
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
    • B01L2400/0487—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

Dispositif microfluidique (1) pour sélectionner des bactériophages capables d’infecter des bactéries contenues dans un échantillon, comprenant : – une première entrée (21) destinée à recevoir l’échantillon à tester ; – au moins une seconde entrée (22) destinée à recevoir au moins un type de bactériophage, – au moins une sortie (23) destinée à recevoir un mélange comprenant le au moins un type de bactériophage et l’échantillon à tester ; ladite première entrée (21) et ladite au moins une seconde entrée (22) étant raccordées pour permettre audit échantillon de migrer vers ladite au moins une seconde entrée (22), ladite au moins une seconde entrée (22) étant raccordée à ladite sortie (23) pour permettre au mélange du au moins un type de bactériophage et dudit échantillon de migrer vers ladite sortie.

Description

Dispositif microfluidique pour sélectionner des bactériophages capables d’infecter des bactéries contenues dans un échantillon
La présente description concerne des dispositifs microfluidiques pour sélectionner des bactériophages capables d'infecter des bactéries, par exemple pour sélectionner des bactériophages particuliers utilisables au plan thérapeutique pour traiter des infections bactériennes ; la présente invention concerne également des procédés faisant usage de ces dispositifs.
Des bactéries provoquant des maladies peuvent menacer la santé d'humains, d'animaux et de plantes. La tuberculose, la dysenterie, la pneumonie, la méningite, le choléra, l'anthrax, la maladie de Lyme et la brucellose sont juste un petit nombre des nombreuses maladies bactériennes qui peuvent être nocives pour les humains et les animaux.
Traditionnellement, des antibiotiques chimiques, tels que la pénicilline, la streptomycine et la céphalosporine, ont été utilisés pour traiter une variété d'infections bactériennes. Cependant, la résistance bactérienne aux antibiotiques est de plus en plus un problème en santé humaine et en santé vétérinaire. Les bactériophages offrent une alternative thérapeutique prometteuse aux antibiotiques.
La thérapie par phages ou la thérapie par phages viraux est l'utilisation thérapeutique de bactériophages pour traiter une infection bactérienne pathogène. La thérapie par phages a de nombreuses applications potentielles en médecine humaine ainsi qu'en dentisterie, en science vétérinaire et en agriculture.
Les bactériophages sont beaucoup plus spécifiques que les antibiotiques. Ils sont typiquement inoffensifs non seulement pour l'organisme hôte, mais également pour d'autres bactéries bénéfiques, telles que la flore intestinale, en réduisant les chances d'infections opportunistes. Ils ont un indice thérapeutique élevé, c'est-à-dire qu'une thérapie par phages serait censée donner lieu à peu d'effets secondaires.
BE2018/5508
Du fait que les phages se répliquent in vivo, on peut utiliser une petite dose efficace.
Pour éviter la progression prolongée d'une maladie bactérienne, il est important d'identifier les bactériophages spécifiques qui conviennent au traitement d'une infection bactérienne particulière. Comme de nombreux pathogènes bactériens peuvent créer une infection sérieuse en quelques jours, ou même en quelques heures, il existe un besoin d'un procédé permettant de s'assurer rapidement si une souche particulière de bactéries est sensible à un bactériophage potentiellement thérapeutique.
Un procédé d'identification de bactériophages spécifiques est décrit dans le document WO 2004/041156, dans lequel un nombre de différents bactériophages recombinants est fourni, chaque bactériophage contenant un acide nucléique reporter capable d'être exprimé lorsque le bactériophage infecte une cellule bactérienne, lesdits bactériophages sont mis en contact avec un échantillon contaminé par une bactérie dans un récipient de laboratoire classique tel que des bouteilles, des tubes ou dans des puits individuels d'une plaque à puits multiples. Cependant, ce procédé requiert la préparation d'une bibliothèque de bactériophages recombinants et nécessite d'organiser des équipements de laboratoire.
Pour pallier l'inconvénient des procédés existants, les inventeurs ont développé un dispositif microfluidique permettant une détermination rapide et aisée de bactériophages convenant au traitement d'une infection bactérienne particulière.
La présente invention concerne donc un dispositif microfluidique pour sélectionner des bactériophages capables d'infecter des bactéries contenues dans un échantillon, comprenant :
- une première entrée destinée à recevoir l'échantillon ou la bactérie à tester ;
BE2018/5508
- au moins une seconde entrée destinée à recevoir au moins un type de bactériophage,
- au moins une sortie destinée à recevoir un mélange comprenant le au moins un type de bactériophage et l'échantillon à tester ;
ladite première entrée et ladite au moins une seconde entrée étant raccordées pour permettre audit échantillon de migrer vers ladite au moins une seconde entrée, ladite au moins une seconde entrée étant raccordée à ladite sortie pour permettre au mélange dudit au moins un type de bactériophage et dudit échantillon de migrer vers ladite sortie.
Un dispositif microfluidique selon l'invention permet une identification rapide et aisée de bactériophages convenant au traitement d'une infection bactérienne particulière sans nécessiter d'équipements de laboratoire.
L'invention peut également comprendre l'une quelconque des caractéristiques suivantes prises individuellement ou dans n'importe quelle combinaison techniquement possible :
- la première entrée est raccordée à la au moins une seconde entrée par un premier canal,
- la au moins une seconde entrée est raccordée à la au moins une sortie par un second canal,
- le premier canal est un canal résistif configuré de manière à réduire le reflux,
- la sortie est configurée de sorte que ledit mélange puisse être recueilli dans ladite sortie pour être encore analysé par un moyen de lecture,
- la première entrée comprend une forme sensiblement tronconique avec un diamètre interne compris entre 1 et 5 mm,
BE2018/5508
- le dispositif microfluidique comprend au moins 8 secondes entrées, de préférence entre 8 et 12, chaque seconde entrée étant destinée à recevoir un type différent de bactériophage,
- la première entrée se scinde en une pluralité de premiers canaux de sorte que ladite première entrée soit raccordée à chaque seconde entrée par un premier canal différent,
- chaque seconde entrée est raccordée à une sortie par un second canal,
- la taille, la forme et la conception du second canal sont configurées de manière à améliorer le mélange de l'échantillon et du bactériophage,
- au moins l'un des seconds canaux comprend une section sensiblement tubulaire ayant un diamètre compris entre 0,3 et 1,5 mm,
- au moins l'un des seconds canaux comprend une forme courbe,
- au moins l'un des seconds canaux comprend une forme rectiligne,
- au moins l'un des seconds canaux comprend des courbes en forme de u,
- au moins l'un des seconds canaux comprend une forme de bloc,
- au moins l'un des seconds canaux se scinde en deux sections, lesdites deux sections se rejoignant en une section unique en aval du second canal de sorte que ledit second canal comprenne en alternance une et deux sections,
- au moins l'un des seconds canaux comprend des aspérités internes permettant une perturbation d'écoulement du mélange au cours de la migration,
- au moins l'un des seconds canaux comprend des aspérités internes avec un motif en chevrons,
BE2018/5508
- au moins l'un des seconds canaux comprend des aspérités internes avec un motif de type nervure,
- une seconde entrée est vide et fonctionne à blanc, chacune des autres secondes entrées comprenant un bactériophage.
L'invention concerne également un appareil pour sélectionner un bactériophage comprenant :
- une unité d'injection 110 pour injecter des bactéries/échantillon cible pour investigation,
- un dispositif microfluidique 1 pour sélectionner des bactériophages capables d'infecter les bactéries contenues dans l'échantillon selon les revendications précédentes,
- un dispositif de lecture 120 pour lire l'activité des bactéries.
Enfin, l'invention concerne également un procédé de sélection de bactériophages capables d'infecter des bactéries contenues dans un échantillon, comprenant :
- une étape (E1) de fourniture un dispositif microfluidique tel que décrit ci-dessus ;
- une étape (E2) d'introduction dudit échantillon à tester dans la première entrée,
- une étape (E3) de mise en contact et d'incubation dudit échantillon avec au moins un bactériophage dans le second canal correspondant ;
- une étape (E4) de collecte du mélange d'échantillon et du bactériophage et de détection si le bactériophage est capable d'infecter des bactéries contenues dans l'échantillon.
L'invention sera mieux comprise à la lumière de la description suivante qui est seulement indicative et qui n'est pas destinée à limiter ladite invention, accompagnée des figures suivantes sur lesquelles :
BE2018/5508
- la Figure 1 illustre sur une vue du dessus un dispositif microfluidique selon l'invention,
- la Fig. 2 illustre sur une vue du dessus un appareil selon l'invention.
Description détaillée
Comme illustré sur la figure 1, l'invention concerne un dispositif microfluidique 1 pour sélectionner des bactériophages capables d'infecter des bactéries contenues dans un échantillon. Ledit dispositif microfluidique comprend :
- une première entrée 21 destinée à recevoir l'échantillon à tester ;
- au moins une seconde entrée 22 destinée à recevoir au moins un type de bactériophage,
- au moins une sortie 23 destinée à recevoir un mélange comprenant le au moins un type de bactériophage et l'échantillon à tester ;
ladite première entrée 21 et ladite au moins une seconde entrée 22 étant raccordées pour permettre audit échantillon de migrer vers ladite au moins une seconde entrée 22, ladite au moins une seconde entrée 22 étant raccordée à ladite sortie 23 pour permettre au mélange du au moins un type de bactériophage et dudit échantillon de migrer vers ladite sortie.
La première entrée 21 est destinée à recevoir l'échantillon à tester. Sa taille et sa forme sont donc adaptées pour recevoir une injection d'un échantillon contenant des bactéries. Le fond de ladite première entrée 21 est raccordé à au moins un premier canal 31 pour permettre à l'échantillon à tester de migrer vers la seconde entrée 22.
De préférence, la première entrée 21 comprend une forme sensiblement tronconique avec un diamètre interne compris entre 0,1 et 5 mm, de préférence entre 0,4 et 0,6 mm. L'ouverture supérieure de la
BE2018/5508 première entrée 21 est avantageusement circulaire. La profondeur de la première entrée 21 est de préférence comprise entre 2 et 4 mm.
Avantageusement, la première entrée 21 est raccordée à la au moins une seconde entrée 22 par un premier canal 31.
Avantageusement, le dispositif microfluidique 1 selon l'invention comprend une pluralité de secondes entrées 22. Dans ce cas, le premier canal 31 se scinde en une pluralité de premiers canaux 31 de sorte que ladite première entrée 21 soit raccordée à chaque seconde entrée 22 par un premier canal différent 31. La même quantité d'échantillon migre vers chaque seconde entrée 22.
Le premier canal 31 permet à l'échantillon de migrer de la première entrée 21 à la ou aux secondes entrées 22. Ledit premier canal 31 est raccordé au fond de la première entrée 21 et au fond de la seconde entrée 22.
La forme et la taille du premier canal 31 sont choisies de manière à empêcher le mélange d'échantillon et de bactériophage de refluer vers la première entrée 21.
Avantageusement, les premiers canaux 31 sont des canaux résistifs configurés pour réduire le reflux.
Dans le cas où le dispositif microfluidique 1 de l'invention comprend plusieurs secondes entrées 22, la première entrée 21 est raccordée à chacune des secondes entrées 22 par un premier canal qui se scinde en une pluralité de premiers canaux 31. La même quantité d'échantillon migre vers chaque seconde entrée 22.
Avantageusement, au moins l'un des premiers canaux 31 présente une section sensiblement tubulaire. Ladite section tubulaire a un diamètre compris entre 0,05 et 0,3 mm, de préférence entre 0,1 et 0,2 mm.
De préférence, au moins l'un des premiers canaux 31 a une forme rectiligne.
BE2018/5508
La seconde entrée 22 est destinée à recevoir ou à être remplie d'un bactériophage spécifique qui est mis en contact avec l'échantillon contenant des bactéries pour tester sa capacité d'infection desdites bactéries.
La taille et la forme de la seconde entrée 22 sont adaptées pour recevoir une injection d'un bactériophage. Le fond de ladite seconde entrée 22 est raccordé à au moins un premier canal 31 et à au moins un second canal 32 de manière à permettre au mélange dudit au moins un type de bactériophage et dudit échantillon de migrer vers la sortie 23.
De préférence, la seconde entrée 22 comprend une forme sensiblement tronconique avec un diamètre interne compris entre 0,1 et 5 mm, de préférence entre 0,4 et 0,6 mm. L'ouverture supérieure de la seconde entrée 22 est avantageusement circulaire. La profondeur de la première entrée 21 est de préférence comprise entre 2 et 4 mm.
Avantageusement, le dispositif microfluidique 1 comprend une pluralité de secondes entrées 22. Dans un tel cas, une seconde entrée 22 est destinée à rester vide et à être utilisée à blanc. Chacune des autres secondes entrées 22 est destinée à recevoir ou à être remplie d'un bactériophage spécifique différent.
De préférence, le dispositif microfluidique 1 comprend au moins 8 secondes entrées 22. De manière plus préférée, le dispositif microfluidique 1 comprend entre 8 et 12 secondes entrées 22, chaque seconde entrée 22 étant destinée à recevoir ou à être remplie d'un type différent de bactériophage.
Selon un mode de réalisation, les secondes entrées 22 du dispositif microfluidique 1 selon l'invention sont préremplies d'une pluralité de différents bactériophages.
Avantageusement, le dispositif microfluidique comprend une pluralité de secondes entrées 22. L'une de ces secondes entrées 22
BE2018/5508 reste vide et fonctionne à blanc. Chacune des autres secondes entrées 22 comprend un bactériophage spécifique différent.
Ces bactériophages sont choisis en fonction du type de bactéries comprises dans l'échantillon.
Le dispositif microfluidique selon ce mode de réalisation est jetable et est avantageusement destiné à un seul usage. La seconde entrée différente 22 du dispositif microfluidique 1 contient des phages réactifs à une espèce spécifique de bactéries contenues dans l'échantillon. Par exemple, un dispositif microfluidique 1 selon ce mode de réalisation peut comprendre des phages contre Staphylococcus aureus, un second dispositif microfluidique 1 peut comprendre des phages contre Pseudomonas et un autre dispositif microfluidique 1 peut comprendre des phages contre Klebsiella, etc.
L'échantillon est obtenu auprès d'un sujet mammifère, de préférence un sujet humain qui est suspecté d'être infecté par des bactéries.
En plus d'une suspension bactérienne, l'échantillon peut également comprendre une cellule, un tissu, une biopsie, une sécrétion, un exsudat, un fluide ou un contenu gastrique ; par exemple, l'échantillon peut comprendre du sang, de la lymphe, de l'urine, une éraflure de peau d'un écouvillon, du sérum, un lavage de surface, un plasma, un fluide cérébrospinal, de la salive, un crachat, des selles, une vomissure, du lait, des larmes, de la sueur ou un tissu biopsié.
L'échantillon peut être directement introduit dans la première entrée, ou l'échantillon peut être traité d'une certaine manière avant d'être introduit dans la première entrée afin d'être mis en contact avec le ou les bactériophages.
Par exemple, l'échantillon peut être dilué avec un solvant, ou le nombre de bactéries peut être développé en culture avant d'être
BE2018/5508 introduit dans la première entrée pour venir au contact avec le ou les bactériophages.
Les bactériophages qui peuvent être utilisés dans le présent dispositif microfluidique peuvent être n'importe quel bactériophage de type sauvage.
Un bactériophage est un virus qui infecte sélectivement des procaryotes, tels que des bactéries. De nombreux bactériophages sont spécifiques à un genre ou une espèce particulière de bactéries hôtes, notamment un mycobactériophage qui infecte des bactéries du genre Mycobacterium.
Le bactériophage est un bactériophage lytique ; un bactériophage lytique est un bactériophage qui suit la voie lytique lors de l'achèvement du cycle lytique, plutôt que d'entrer dans la voie lysogénique. Un bactériophage lytique subit une réplication virale menant à la lyse de la membrane cellulaire de la bactérie hôte, à la destruction de la bactérie et à la libération de particules bactériophages de progéniture capables d'infecter d'autres cellules bactériennes. Le terme « bactériophage » peut être raccourci en « phage ». De préférence, le bactériophage est choisi parmi un usage clinique pour traiter une infection (thérapie par les phages). En particulier, le bactériophage est sélectionné parmi des phages qui se sont révélés cliniquement utiles pour traiter des infections provoquées par les bactéries cibles spécifiées.
Le bactériophage à l'intérieur de la seconde entrée 22 peut se présenter sous forme liquide, sous forme de gel, sous forme de poudre sèche ou conditionné dans des biopolymères.
De préférence, le bactériophage à l'intérieur de la seconde entrée 22 est sous forme sèche, par exemple une forme lyophilisée. En variante, les phages sont amenés à l'état liquide dans la au moins une seconde entrée 22 et ensuite le dispositif microfluidique est lyophilisé dans son ensemble afin d'obtenir des phages séchés.
BE2018/5508
La quantité de phages est déterminée pour permettre une incubation suffisante, ladite incubation menant à une dégradation de l'échantillon dans le cas où le phage convient à l'infection des bactéries particulières à tester. De préférence, chaque échantillon de phage contient entre 105 et 109 pfu. Avantageusement, chaque échantillon de phage contient une concentration d'au moins 108 pfu.
Avantageusement, la au moins une seconde entrée 22 est raccordée à la au moins une sortie 23 par un second canal 32. Le second canal 32 permet au mélange d'échantillon et de bactériophage de migrer d'une seconde entrée 22 à une sortie 23. L'incubation se produisant au cours de cette migration du mélange permet de texter le bactériophage quant à sa capacité à infecter des bactéries contenues dans l'échantillon. Ledit second canal 32 est raccordé au fond de la seconde entrée 22 et à la sortie 23.
Dans le cas où le dispositif microfluidique 1 contient plusieurs secondes entrées 22, chaque seconde entrée 22 est raccordée à une sortie 23 par un second canal 32.
La forme, la taille et la conception du second canal 32 et de sa surface interne sont choisies pour promouvoir le mélange de l'échantillon et du bactériophage. Une pluralité de tailles, de formes et de conceptions peut améliorer un tel mélange. En particulier, les seconds canaux 32 peuvent avoir une forme rectiligne, une forme courbe, des courbes en forme de u, une forme de bloc ou toute autre forme permettant une distribution de fluide de la combinaison d'échantillon et de phage.
La figure 1 montre certains exemples particulièrement efficaces.
Avantageusement, au moins l'un des seconds canaux 32 présente une section sensiblement tubulaire. Ladite section tubulaire a
BE2018/5508 un diamètre compris entre 0,1 et 1,5 mm, de préférence entre 0,4 et 0,6 mm.
De préférence, au moins l'un des seconds canaux 32 comprend une forme courbe avec une section tubulaire et un diamètre aux environs de 0,5 mm. La pluralité de courbes du second canal 32 favorise le mélange de l'échantillon et du bactériophage.
Avantageusement, au moins l'un des seconds canaux 32 comprend une paroi interne texturisée. En particulier, cette paroi interne peut comprendre des aspérités internes permettant une perturbation d'écoulement du mélange au cours de la migration. Lesdites aspérités peuvent avoir une forme de ruban, une forme de puits, une forme de D, une forme de bande, une forme de chevron ou n'importe quelle autre forme appropriée permettant une perturbation d'écoulement du mélange au cours de la migration.
De préférence, au moins l'un des seconds canaux 32 comprend une forme rectiligne avec une section tubulaire ayant un diamètre aux environs de 1,20 mm, ledit second canal 32 comprenant des aspérités internes avec un motif en chevrons.
Avantageusement, au moins l'un des seconds canaux 32 se scinde en deux sections, lesdites deux sections se rejoignant en une seule section en aval du canal de sorte que ledit second canal 32 comprenne en alternance une et deux sections. Lesdites sections ont un diamètre aux environs de 0,6 mm et comprennent des aspérités internes avec un motif de bandes, lesdites bandes étant orientées en oblique visà-vis du canal. Les aspérités en bandes peuvent être espacées l'une de l'autre de 0,2 mm.
N'importe quelle autre forme, taille et conception du second canal et de sa surface interne qui favorise le mélange de l'échantillon et du bactériophage reste compatible avec le dispositif microfluidique 1 selon l'invention.
BE2018/5508
Avantageusement, dans le cas où le dispositif microfluidique 1 comprend plusieurs secondes entrées 22 et plusieurs seconds canaux 32, chaque second canal 32 a la même taille, la même forme et la même conception.
La forme, la taille et la conception du second canal 32 et de sa surface interne sont choisies par rapport au type de bactériophage et/ou d'échantillon passant à travers ledit second canal 32.
La longueur des seconds canaux 32 correspond à la distance de migration, c'est-à-dire à la distance au cours de laquelle le mélange dudit au moins un type de bactériophage et dudit échantillon migre à l'intérieur dudit second canal 32. Cette longueur peut être choisie selon le type de bactériophage et d'échantillon.
La sortie 23 est raccordée au second canal 32 et reçoit le mélange comprenant ledit type de bactériophage et l'échantillon à tester.
Avantageusement, la sortie 23 est configurée de sorte que ledit mélange puisse être recueilli dans ladite sortie 23 pour être encore analysé par un moyen de lecture. Ainsi, le mélange arrivant dans la sortie 23 est ensuite recueilli dans la sortie et analysé par un dispositif de lecture.
De préférence, la sortie 23 comprend une forme sensiblement tronconique avec un diamètre interne compris entre 0,1 et 5 mm, de préférence entre 0,4 et 0,6 mm. L'ouverture supérieure de la sortie 23 est avantageusement circulaire. La profondeur de la sortie 23 est de préférence comprise entre 2 et 4 mm.
Le dispositif microfluidique 1 selon l'invention comprend avantageusement une pluralité de secondes entrées 22, de premiers canaux 31, de seconds canaux 32 et de sorties 23. Dans ce cas, le dispositif microfluidique 1 comprend le même nombre de secondes entrées 22, de premiers canaux 31, de seconds canaux 32 et de sorties 23. La taille globale du dispositif microfluidique 1 est
BE2018/5508 généralement corrélée au nombre d'ensembles de seconde entrée 22, de second canal 32 et de sortie 23.
Le dispositif microfluidique 1 selon l'invention comprend de préférence plus d'un ensemble de seconde entrée 22, de second canal 32 et de sortie 23.
De manière plus préférée, le dispositif microfluidique 1 selon l'invention comprend entre 8 et 12 ensembles de seconde entrée 22, de second canal 32 et de sortie 23.
La figure 1 est une illustration d'un dispositif microfluidique 1 selon l'invention. Ce dispositif microfluidique 1 comprend huit secondes entrées 22, huit premiers canaux 31, huit seconds canaux 32 et huit sorties 23. Deux desdits seconds canaux 32 comprennent une forme incurvée avec une section tubulaire ayant un diamètre autour de 0,5 mm. Trois desdits seconds canaux 32 comprennent une forme rectiligne avec une section tubulaire ayant un diamètre d'environ 1,20 mm, ledit second canal 32 comprenant des aspérités internes avec un motif en chevrons. Trois desdits seconds canaux 32 se scindent en deux sections, lesdites deux sections se rejoignant dans une seule section en aval du canal de sorte que ledit second canal 32 comprenne en alternance une et deux sections, lesdites sections ayant un diamètre d'environ 0,6 mm et comprenant des aspérités internes avec un motif en bandes, lesdites bandes étant orientées en oblique vis-à-vis du canal.
La longueur totale du dispositif microfluidique 1 illustré sur la figure 1 est de 90 mm. Sa largeur est d'environ 50 mm. Son épaisseur est d'environ 4 mm. La distance entre la seconde entrée 22 et la sortie 23 est d'environ 70 mm. Dans le cas où ledit second canal 32 est rectiligne, cette distance correspond à la distance de migration.
Le dispositif microfluidique peut comprendre une longueur et une largeur différentes, par exemple une longueur d'environ 140 mm et une longueur d'environ 140 mm. Des dimensions plus grandes
BE2018/5508 impliquent une distance de migration plus longue et un temps d’incubation plus long. Ces dimensions peuvent varier selon le type d'échantillon et le type de bactériophage.
Le dispositif microfluidique selon la figure 1 comprend une pluralité de différents seconds canaux 32. Cependant, le dispositif microfluidique 1 selon l’invention comprend de préférence une pluralité de seconds canaux identiques 32 de sorte que la distance de migration et le temps d’incubation restent les mêmes dans tous les seconds canaux 32.
Si nécessaire, plusieurs dispositifs microfluidiques peuvent être juxtaposés.
Le dispositif microfluidique 1 selon l’invention peut être fabriqué en un matériau sensiblement transparent quelconque. Avantageusement, le dispositif microfluidique 1 peut être constitué de poly(méthacrylate de méthyle) (PMMA), de polycarbonate (PC) ou de copolymère d’oléfine cyclique (COC).
Le matériau du dispositif microfluidique 1 est sensiblement transparent et permet d’observer les bactéries au microscope ou avec n’importe quel détecteur optique.
Selon un mode de réalisation, le fond du dispositif microfluidique peut comprendre une couche de verre. Ladite couche de verre a avantageusement une épaisseur comprise entre 100 et 150 μm.
Lesdits matériaux peuvent être revêtus ou activés avec un traitement au plasma de manière à améliorer leurs propriétés mouillantes.
En service, l’échantillon qui a été introduit dans la première entrée 21 du dispositif microfluidique 1 migre à travers le premier canal 31 vers la seconde entrée 22 et le bactériophage. Ensuite, l’échantillon et le bactériophage migrent lentement à travers le second canal 32 et sont mélangés l’un à l’autre. Au cours de la migration, la bactérie et les
BE2018/5508 phages ont le temps d'interagir mutuellement, ce qui entraîne un nombre élevé de bactéries intactes lorsque les phages ne sont pas actifs, ou un nombre élevé de phages et aucune bactérie lorsque les phages sont actifs. Cette migration prend environ une à deux heures, mais peut être plus longue pour des phages typiques (facteur dépendant du phage). À la fin du second canal 32, le mélange arrive à la sortie 23. Le mélange est ensuite recueilli dans la sortie 23 et analysé par un dispositif de lecture pour lire l'activité des bactéries contenues dans le mélange.
Comme illustré sur la figure 2, l'invention concerne également un appareil 100 pour sélectionner un bactériophage. Le dispositif microfluidique 1 décrit ci-dessus est destiné à être intégré à l'appareil 100. L'appareil 100 pour la sélection d'un bactériophage comprend :
- une unité d'injection 110 pour injecter des bactéries/échantillon cibles pour investigation,
- un dispositif microfluidique 1 pour sélectionner des bactériophages capables d'infecter les bactéries contenues dans l'échantillon comme décrit ci-dessus,
- un dispositif de lecture 120 pour lire l'activité des bactéries.
L'unité d'injection 110 peut être n'importe quel moyen approprié pour injecter les bactéries/échantillon cibles pour investigation. L'unité d'injection peut être automatisée ou manuelle. En particulier, ladite unité d'injection 110 peut comprendre une pompe à seringue. L'unité d'injection comprend avantageusement une pompe de manière à placer l'échantillon sous une pression suffisante pour permettre son déplacement vers la première entrée 21 du dispositif microfluidique 1. En service, l'échantillon peut être préparé dans un flacon raccordé à l'unité d'injection, par exemple par un tuyau. Ensuite, la pompe d'injection
BE2018/5508 amène l'échantillon dans la première entrée 21. Puis l'échantillon migre de la première entrée 21 à la sortie 23 grâce à l'aspiration de Bernoulli.
L'échantillon est donc injecté dans un dispositif microfluidique 1 comme décrit ci-dessus grâce à l'unité d'injection 110.
L'appareil 100 comprend également un dispositif de lecture 120 pour lire l'activité des bactériophages. Ledit dispositif de lecture est raccordé à la sortie 23 de sorte que le mélange d'échantillon et d'un bactériophage spécifique arrivant dans ladite sortie 23 soit transféré au dispositif de lecture 120. Ledit dispositif de lecture 120 permet la lecture de l'activité des bactéries et le fait de déterminer ainsi si le bactériophage convient pour traiter une infection bactérienne particulière.
Si le dispositif de lecture 120 détecte une absence de bactéries ou une quantité relativement faible de bactéries, cela signifie que le bactériophage a infecté les bactéries, ledit bactériophage étant donc approprié pour traiter l'infection bactérienne particulière. Au contraire, si le dispositif de lecture 120 détecte une présence notable de bactéries, cela signifie que le bactériophage n'a pas infecté les bactéries, ledit bactériophage ne convenant pas au traitement de l'infection bactérienne particulière.
Avantageusement, le dispositif de lecture 120 comprend une spectroscopie à impédance électrochimique (EIS).
En variante, le dispositif de lecture 120 comprend un cytomètre en flux. Le dispositif de lecture 120 peut comprendre n'importe quelle autre solution différente mesurant une présence ou absence bactérienne.
De préférence, le dispositif 120 est couplé à un logiciel analytique permettant un stockage ou un autre développement des résultats.
BE2018/5508
La présente invention concerne également un procédé de sélection de bactériophages capables d'infecter des bactéries contenues dans un échantillon. Ledit procédé comprend :
- une étape (E1) de fourniture d'un dispositif microfluidique comme décrit ci-dessus ;
- une étape (E2) d'introduction dudit échantillon à tester dans la première entrée ;
- une étape (E3) de mise en contact et d'incubation dudit échantillon avec au moins un bactériophage dans le second canal correspondant ;
- une étape (E4) de recueil du mélange d'échantillon et du bactériophage et de détection pour voir si le bactériophage est capable d'infecter des bactéries contenues dans l'échantillon.
L'étape E1 du procédé de sélection de bactériophages consiste à fournir un dispositif microfluidique 1 comme décrit ci-dessus.
Selon un mode de réalisation, cette étape consiste à introduire au moins un bactériophage spécifique dans au moins une seconde entrée 22.
Avantageusement, le dispositif microfluidique 1 comprend une pluralité de secondes entrées 22. Dans ce cas, une seconde entrée 22 est destinée à rester vide et à être utilisée à blanc. Chacune des autres secondes entrées 22 est remplie d'un bactériophage spécifique différent.
Avantageusement, le bactériophage est choisi parmi des phages cliniquement utilisables pour traiter une infection.
De préférence, le bactériophage est utilisé sous une forme sèche, par exemple sous une forme lyophilisée. Le séchage du bactériophage peut être effectué de n'importe quelle manière classique avant d'être introduit dans la seconde entrée.
BE2018/5508
En variante, les phages sont amenés en phase liquide dans la au moins une seconde entrée 22, puis le dispositif microfluidique est lyophilisé dans son ensemble afin d'obtenir des phages séchés.
La quantité de phages est déterminée de manière à permettre une incubation suffisante, ladite incubation menant à une dégradation de l'échantillon dans le cas où le phage convient au traitement de l'infection bactérienne particulière. Avantageusement, chaque échantillon de phage contient une concentration d'au moins 108 pfu.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif microfluidique 1 comprend déjà des bactériophages à l'intérieur des secondes entrées 22. Lesdits phages peuvent être sous forme de liquide ou de gel ou conditionnés dans des biopolymères. Dans un tel cas, il n'est pas nécessaire d'introduire des phages au sein desdites secondes entrées 22.
L'étape E2 d'introduction de l'échantillon à tester dans la première entrée 21 peut être réalisée par n'importe quel moyen approprié pour injecter les bactéries/échantillon cibles pour investigation.
L'introduction de l'échantillon peut être automatisée ou manuelle. En particulier, l'échantillon peut être introduit au moyen d'une pompe à seringue. Dans ce cas, l'échantillon sera aspiré dans une seringue qui serait alors placée dans une pompe pour amener lentement l'échantillon de manière précise à sa place. En variante, l'échantillon peut être introduit dans la première entrée 21 avec une micropipette ou une pipette d'Eppendorf.
Avantageusement, l'échantillon peut être prétraité avant son introduction dans la première entrée 21. En particulier, ledit échantillon peut être dilué dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avant d'être introduit dans la première entrée 21.
BE2018/5508
L'étape E3 de mise en contact et d'incubation dudit échantillon avec chacun des bactériophages spécifiques est réalisée via le dispositif microfluidique 1. Une fois que l'échantillon avantageusement dissous dans du PBS est introduit dans la première entrée 21 du dispositif microfluidique 1, le fluide (avec les bactéries) est automatiquement aspiré au moyen d'une aspiration de Bernoulli vers les secondes entrées 22. À ce niveau, l'échantillon entre en contact avec le au moins un bactériophage contenu dans la seconde entrée 22. Le mélange dudit au moins un type de bactériophage et dudit échantillon migre ensuite à travers les seconds canaux 32 du dispositif microfluidique 1. L'incubation se produit au cours de cette migration.
Avantageusement, le temps d'incubation est typiquement de 1 à 2 heures à part pour certains phages qui nécessitent un temps de réaction plus long. Tous les canaux s'écoulent avantageusement à la même vitesse. La température est de préférence d'environ 36 à 38 °C et est établie par la machine.
L'étape E4 de recueil de chaque mélange d'échantillon et d'un bactériophage spécifique est réalisée en aval du dispositif microfluidique 1. Après sa migration à travers le second canal 32, le mélange arrive à la sortie 23. Ainsi, ledit mélange est recueilli par un dispositif de lecture 120. Ledit dispositif de lecture 120 permet la lecture de l'activité des bactéries et détermine donc si le bactériophage est capable d'infecter des bactéries contenues dans l'échantillon.
Dans un mode de réalisation spécifique, un sujet est connu pour avoir une infection bactérienne, ou suspecté d'avoir une infection bactérienne, et le procédé permet l'identification d'un ou plusieurs bactériophages qui peuvent être choisis pour traiter le sujet.

Claims (22)

  1. Revendications
    1. Dispositif microfluidique (1) pour sélectionner des bactériophages capables d'infecter des bactéries contenues dans un échantillon, comprenant :
    - une première entrée (21) destinée à recevoir l'échantillon à tester ;
    - au moins une seconde entrée (22) destinée à recevoir au moins un type de bactériophage,
    - au moins une sortie (23) destinée à recevoir un mélange comprenant le au moins un type de bactériophage et l'échantillon à tester ;
    ladite première entrée (21) et ladite au moins une seconde entrée (22) étant raccordées pour permettre audit échantillon de migrer vers ladite au moins une seconde entrée (22), ladite au moins une seconde entrée (22) étant raccordée à ladite sortie (23) pour permettre au mélange du au moins un type de bactériophage et dudit échantillon de migrer vers ladite sortie.
  2. 2. Dispositif microfluidique (1) selon la revendication 1, dans lequel la première entrée (21) est raccordée à la au moins une seconde entrée (22) par un premier canal (31), ladite au moins une seconde entrée (22) étant raccordée à la au moins une sortie (23) par un second canal (32).
  3. 3. Dispositif microfluidique (1) selon la revendication 2, dans lequel le premier canal (31) est un canal résistif configuré de manière à réduire le reflux.
  4. 4. Dispositif microfluidique (1) selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel ladite sortie (23) est configurée de sorte que ledit mélange puisse être recueilli dans ladite sortie (23) pour être encore analysé par un moyen de lecture.
    BE2018/5508
  5. 5. Dispositif microfluidique (1) selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel la première entrée (21) comprend une forme sensiblement tronconique avec un diamètre interne compris entre 1 et 5 mm.
  6. 6. Dispositif microfluidique (1) selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le dispositif microfluidique comprend au moins 8 secondes entrées (22), de préférence entre 8 et 12, chaque seconde entrée (22) étant destinée à recevoir un type de bactériophage différent.
  7. 7. Dispositif microfluidique (1) selon la revendication 6, dans lequel la première entrée (21) se scinde en une pluralité de premiers canaux (31) de sorte que ladite première entrée (21) soit raccordée à chaque seconde entrée (22) par un premier canal différent (31).
  8. 8. Dispositif microfluidique (1) selon les revendications 6 à
    7, dans lequel chaque seconde entrée (22) est raccordée à une sortie (23) par un second canal (32).
  9. 9. Dispositif microfluidique (1) selon les revendications 2 à
    8, dans lequel la taille, la forme et la conception du second canal (32) sont configurées de manière à améliorer le mélange de l'échantillon et du bactériophage.
  10. 10. Dispositif microfluidique selon les revendications 6 à 9, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) comprend une section sensiblement tubulaire ayant un diamètre compris entre 0,3 et
    1,5 mm.
  11. 11. Dispositif microfluidique selon les revendications 6 à 10, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) comprend une forme courbe.
  12. 12. Dispositif microfluidique selon les revendications 6 à 10, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) comprend une forme rectiligne.
    BE2018/5508
  13. 13. Dispositif microfluidique selon les revendications 6 à 10, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) comprend des courbes en forme de u.
  14. 14. Dispositif microfluidique selon les revendications 6 à 10, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) comprend une forme de bloc.
  15. 15. Dispositif microfluidique selon les revendications 6 à 10, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) se scinde en deux sections, lesdites deux sections se rejoignant en une seule section en aval du second canal (32) de sorte que ledit second canal (32) comprenne en alternance une et deux sections.
  16. 16. Dispositif microfluidique (1) selon les revendications 6 à 15, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) comprend des aspérités internes permettant une perturbation d'écoulement du mélange au cours de la migration.
  17. 17. Dispositif microfluidique selon les revendications 6 à 16, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) comprend des aspérités internes avec un motif en chevrons.
  18. 18. Dispositif microfluidique selon les revendications 6 à 17, dans lequel au moins l'un des seconds canaux (32) comprend des aspérités internes avec un motif de type nervures.
  19. 19. Dispositif microfluidique 1 selon les revendications 6 à 18, dans lequel une seconde entrée (22) est vide et fonctionne à blanc, chacune des autres secondes entrées (22) comprenant un bactériophage.
  20. 20. Appareil 100 pour une sélection d'un bactériophage comprenant :
    - une unité d'injection 110 pour injecter des bactéries/échantillon cibles pour investigation,
    BE2018/5508
    - un dispositif microfluidique 1 pour sélectionner des bactériophages capables d'infecter les bactéries contenues dans l'échantillon selon les revendications précédentes,
    - un dispositif de lecture 120 pour lire l'activité des bactéries.
  21. 21. Appareil 100 selon la revendication 20, dans lequel le dispositif de lecture 120 comprend une spectroscopie à impédance électrochimique (EIS).
  22. 22. Procédé de sélection de bactériophages capables d'infecter des bactéries contenues dans un échantillon, comprenant :
    - une étape (E1) de fourniture d'un dispositif microfluidique comme décrit ci-dessus ;
    - une étape (E2) d'introduction dudit échantillon à tester dans la première entrée ;
    - une étape (E3) de mise en contact et d'incubation dudit échantillon avec au moins un bactériophage dans le second canal correspondant ;
    - une étape (E4) de collecte du mélange d'échantillon et du bactériophage et de détection pour voir si le bactériophage est capable d'infecter des bactéries contenues dans l'échantillon.
BE20185508A 2018-07-13 2018-07-13 Dispositif microfluidique pour selectionner des bacteriophages capables d'infecter des bacteries contenues dans un echantillon BE1026469B1 (fr)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE20185508A BE1026469B1 (fr) 2018-07-13 2018-07-13 Dispositif microfluidique pour selectionner des bacteriophages capables d'infecter des bacteries contenues dans un echantillon
PCT/EP2019/068858 WO2020011994A1 (fr) 2018-07-13 2019-07-12 Dispositif microfluidique pour sélectionner des bactériophages capables d'infecter des bactéries contenues dans un échantillon

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE20185508A BE1026469B1 (fr) 2018-07-13 2018-07-13 Dispositif microfluidique pour selectionner des bacteriophages capables d'infecter des bacteries contenues dans un echantillon

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BE1026469A1 BE1026469A1 (fr) 2020-02-05
BE1026469B1 true BE1026469B1 (fr) 2020-02-11

Family

ID=63244336

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BE20185508A BE1026469B1 (fr) 2018-07-13 2018-07-13 Dispositif microfluidique pour selectionner des bacteriophages capables d'infecter des bacteries contenues dans un echantillon

Country Status (2)

Country Link
BE (1) BE1026469B1 (fr)
WO (1) WO2020011994A1 (fr)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE1028631B1 (fr) * 2021-02-04 2022-04-19 Vesale Bioscience Phagogramme automatique

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007050040A1 (fr) * 2005-10-28 2007-05-03 Agency For Science, Technology And Research Unité d'immobilisation et dispositif pour l'isolement de molécules d'acides nucléiques
US20180142279A1 (en) * 2016-11-24 2018-05-24 National Tsing Hua University Automatic microfluidic system for antibiotic susceptibility testing and method of operating thereof

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003299451A1 (en) 2002-01-23 2004-06-07 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health Andhuman Services Method for determining sensitivity to a bacteriophage

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007050040A1 (fr) * 2005-10-28 2007-05-03 Agency For Science, Technology And Research Unité d'immobilisation et dispositif pour l'isolement de molécules d'acides nucléiques
US20180142279A1 (en) * 2016-11-24 2018-05-24 National Tsing Hua University Automatic microfluidic system for antibiotic susceptibility testing and method of operating thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. Q. YU ET AL: "Droplet optofluidic imaging for [lambda]-bacteriophage detection via co-culture with host cell Escherichia coli", LAB ON A CHIP, vol. 14, no. 18, 1 January 2014 (2014-01-01), pages 3519 - 3524, XP055563499, ISSN: 1473-0197, DOI: 10.1039/C4LC00042K *
MERABISHVILI MAYA ET AL: "Quality-controlled small-scale production of a well-defined bacteriophage cocktail for use in human clinical trials", PLOS ONE, PUBLIC LIBRARY OF SCIENCE, US, vol. 4, no. 3, 1 March 2009 (2009-03-01), pages e4944 - 1, XP002543299, ISSN: 1932-6203, DOI: 10.1371/JOURNAL.PONE.0004944 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020011994A1 (fr) 2020-01-16
BE1026469A1 (fr) 2020-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101711105B1 (ko) 신속한 항생제 감수성 검사를 위한 멀티-웰 기반의 세포배양검사 장치
EP2542662B1 (fr) Boite multi-reacteurs pour culture cellulaire dynamique
CN106238110B (zh) 使用过滤和样品转移装置离析、积聚、表征和/或确定微生物的方法
FR2587488A1 (fr) Dispositif d'examen comportant une carte d'examen pour determiner la presence de matieres organiques, et procede d'utilisation de celui-ci
KR101770610B1 (ko) 고정화제를 이용한 단일 세포 추적을 위한 신규한 생리 활성 검사용 구조물
EP3185782B1 (fr) Dispositif d'obtention de matière biologique et/ou d'information biologique a partir d'un échantillon a matrice hétérogene
WO2010012941A2 (fr) Dispositif pour la capture de particules biologiques et utilisation
US8900843B2 (en) Kit and method for the capture of tumor cells
EP3728556A1 (fr) Puce micro-fluidique, laboratoire sur puce micro-fluidique, procédé de fabrication d'une telle puce et procédé d'analyse
BE1026469B1 (fr) Dispositif microfluidique pour selectionner des bacteriophages capables d'infecter des bacteries contenues dans un echantillon
EP3766580A1 (fr) Dispositif micro-fluidique de préparation et d'analyse d'un échantillon biologique
KR102127765B1 (ko) 고형화된 유체의 이탈을 방지할 수 있는 신속한 세포배양검사 장치
WO1989008714A1 (fr) Procede de recherche, qualitatif ou quantitatif de micro-organismes, installation pour la mise en oeuvre dudit procede
WO2018185439A1 (fr) Microcompartiment de cellules hématopoïétiques malignes et procédé de préparation d'un tel microcompartiment
FR2993281A1 (fr) Systeme automatise de lyse de microorganismes presents dans un echantillon, d'extraction et de purification des acides nucleiques desdits microorganismes aux fins d'analyse
EP3177922A1 (fr) Procédé pour le dépistage de la drépanocytose et kit pour sa mise en oeuvre
KR102145842B1 (ko) 정확한 관찰이 용이한 신속한 세포배양검사 장치
EP3766581B1 (fr) Système micro-fluidique incluant une chambre de réaction d'amplification
BE1028631B1 (fr) Phagogramme automatique
EA201800291A1 (ru) Биочип для мультиплексного анализа и способ исследования клеток при диагностике онкологических заболеваний
FR3075823A1 (fr) Procede d’analyse d’un echantillon cellulaire au moyen d’un laboratoire sur puce-micro-fluidique
FR3094016A1 (fr) Billes de verre fonctionnalisées, leur utilisation pour capter des micro-organismes et les dispositifs correspondants.
EP3523624A1 (fr) Procédé et dispositif de préparation d'échantillons
EP2524030B1 (fr) Cellules endotheliales felines organospecifiques et utilisations
WO2010084273A1 (fr) Dispositif microfluidique, systeme et procede de mise en oeuvre

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Effective date: 20200211