WO2026014359A1 - 細胞保存容器及び細胞収納方法 - Google Patents

細胞保存容器及び細胞収納方法

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WO2026014359A1
WO2026014359A1 PCT/JP2025/024057 JP2025024057W WO2026014359A1 WO 2026014359 A1 WO2026014359 A1 WO 2026014359A1 JP 2025024057 W JP2025024057 W JP 2025024057W WO 2026014359 A1 WO2026014359 A1 WO 2026014359A1
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WO
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cell
cell storage
section
storage section
container
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PCT/JP2025/024057
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French (fr)
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慎 澁谷
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JMS Co Ltd
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JMS Co Ltd
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Publication date
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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues

Definitions

  • the present invention relates to a cell storage container and cell storage method for storing cells such as stem cells and umbilical cord blood collected from biological samples.
  • stem cells collected from biological samples have been used for a variety of purposes, such as hematopoietic stem cell transplantation and the reconstruction of various tissues. After being collected from the biological sample, the stem cells are cryopreserved in a cell storage container until they are used in regenerative medicine (see, for example, Patent Document 1).
  • the cell storage container proposed in Patent Document 1 comprises a container body having a cell storage section capable of storing cells, a cell introduction tube connected to the container body for introducing cells into the cell storage section, and a cell extraction section for extracting the cells stored in the cell storage section.
  • cells When cells are stored in the above cell storage container, they are first introduced through the cell introduction tube. Next, the cell introduction tube is welded and cut (fused) midway through the cell introduction tube to seal it. The cell storage container with the cells stored therein is then cryopreserved. When the cells are introduced into the cell storage section, they are introduced through the cell introduction tube in an airtight state, so that as the cells are introduced, the air present inside the cell storage section is expelled from the cell introduction tube.
  • an object of the present invention is to provide a cell storage container that allows cells to be easily introduced into the cell storage portion.
  • the volume V1 of the internal space of the cell storage section is 0.5 to 1.2 mL.
  • the cell introduction section has a cell introduction tube connected to the container body, and that the length of the cell introduction tube from the connection part with the container body is 30 mm or more.
  • the cross-sectional shape in the planar direction and the cross-sectional shape in the thickness direction of the cell storage section be formed into an elliptical shape.
  • the present invention provides a cell storage container that allows cells to be easily introduced into the cell storage compartment.
  • FIG. 1 is a perspective view showing a cell preservation container according to an embodiment of the present invention, viewed obliquely from above.
  • 1 is a perspective view showing a cell preservation container according to one embodiment, viewed obliquely from below.
  • 2 is a cross-sectional view taken along line AA in FIG. 1.
  • 2 is a cross-sectional view taken along line BB in FIG. 1.
  • FIG. 10 is a diagram showing the state in which cells are introduced into the cell containing section and sealed.
  • FIG. 2 is a perspective view showing a state in which the cell storage container is housed in a cell container housing box.
  • FIG. 2 is a plan view showing the cell storage container housed in the cell container housing box.
  • FIG. 2 is an enlarged plan view of the portion where the cell storage container is housed in the cell container housing box.
  • the cell storage container 1 of the present invention is used when cryopreserving cells such as stem cells collected from a biological sample. Furthermore, the cell storage container 1 of the present invention is particularly suitable for storing small volumes of liquid cells, approximately 1 mL in volume.
  • the X direction is the minor axis direction of the three-dimensional portion of the cell storage section 11 (see Figures 1 and 2), which is the width direction of the container body 10 of the cell storage container 1
  • the Y direction is the major axis direction of the three-dimensional portion of the cell storage container 1, which is the longitudinal direction of the container body 10.
  • One side of the Y direction (the front left side in Figure 1, the rear left side in Figure 2) is the Y1 side
  • the other side of the Y direction (the rear right side in Figure 1, the front right side in Figure 2) is the Y2 side.
  • the Y direction coincides with the axial direction of the cell introduction tube 20.
  • the X direction and the Y direction are perpendicular to each other.
  • the Z direction is the stacking direction of the first sheet-like member 50 and the second sheet-like member 60 of the container body 10, which is the thickness direction of the cell storage section 11.
  • one embodiment of the cell storage container 1 comprises a container body 10, a cylindrical cell introduction section 100, and a port member 40.
  • the cell introduction section 100 has a cell introduction tube 20 and an introduction port 30.
  • the container body 10 is made of a soft member formed from a soft material.
  • the soft member is made of a material that is soft enough to allow the cell storage section 11 to collapse easily when the three-dimensional shape of the cell storage section 11 is compressed to remove air, and to allow the cell storage section 11 to expand easily from its collapsed state when cells are introduced into the cell storage section 11.
  • soft members include resin materials such as soft PVC (polyvinyl chloride), PP (polypropylene), PE (polyethylene), PVA (polyvinyl alcohol), EVA (ethylene-vinyl acetate copolymer resin), and FEP (tetrafluoroethylene-hexafluoropropylene copolymer).
  • the container body 10 is made of a first sheet-like member 50 and a second sheet-like member 60 that are stacked together and have most of their peripheral edges joined together.
  • the first sheet-like member 50 and the second sheet-like member 60 are made of a soft material.
  • the container body 10 comprises a cell storage section 11, a cell extraction section 12, a sealing section 13, and a tube protection section 14.
  • the cell storage section 11 is formed by a space surrounded by the first sheet-like member 50 and the second sheet-like member 60, and a space for storing cells is formed inside.
  • the cell storage section 11 is formed by bulging out in a curved shape in the width direction (X direction) and thickness direction (Z direction).
  • the cell storage section 11 has an internal space volume V1 of, for example, 1.0 mL, and is configured to be able to store a predetermined amount (for example, 1.0 mL) of liquid cells.
  • the cell storage section 11 When viewed in the Z direction, the cell storage section 11 is formed into an elliptical shape with its minor axis in the X direction and its major axis in the Y direction, and when viewed in the X direction, it is formed into an elliptical shape with its minor axis in the Z direction and its major axis in the Y direction.
  • the volume V1 of the internal space of the cell storage section 11 is configured to be a small volume of 1.0 mL, but it may also be configured to be a small volume of 0.5 to 1.2 mL.
  • the sealing section 13 is formed by the portion where the first sheet-like member 50 and the second sheet-like member 60 are joined around the periphery of the cell storage section 11.
  • the sealing section 13 is formed in a sheet shape with a thickness in the Z direction, and its outer shape (outer edge) is formed in a roughly rectangular shape with a width in the X direction and extending in the Y direction.
  • the sealing section 13 has a pair of extension sections 131 that extend outward in a plane from both ends of the cell storage section 11 in the X direction. The outer edges of both ends of the pair of extension sections 131 in the X direction extend linearly in the Y direction.
  • the end of the sealing section 13 on the Y2 side in the Y direction is connected to the end of the cell introduction tube 20 of the cell introduction section 100 on the Y1 side in the Y direction.
  • the tube protection section 14 is connected to the end of the sealing section 13 on the Y2 side in the Y direction, and is composed of the portion where the first sheet-like member 50 and the second sheet-like member 60 are not joined.
  • the tube protection section 14 is composed of a pair of protective sheets 141.
  • the pair of protective sheets 141 are arranged on both outer sides in the Z direction so as to sandwich the welded joint portion 21a (see Figure 5) of the welded section 21 formed by welding and cutting (fusing) the cell introduction tube 20 on the container body 10 side, and protect the welded joint portion 21a of the welded section 21 on the cell introduction tube 20.
  • the first sheet-shaped member 50 and the second sheet-shaped member 60 each have a three-dimensional portion. More specifically, the first sheet-shaped member 50 and the second sheet-shaped member 60 are each formed with cell-accommodating recesses 51, 61, cell-introduction grooves 52, 62, and cell-extraction grooves 53, 63 of the same shape and size.
  • the cell-containing recesses 51, 61 are formed so that they have an elliptical shape in plan view and a semi-elliptical cross section in the thickness direction. In other words, the cell-containing recesses 51, 61 are formed with a concave curved surface that does not have corners.
  • the cell extraction grooves 53, 63 are located at the Y1-side ends of the cell-accommodating recesses 51, 61 in the Y direction.
  • the cross-sectional shape of the cell extraction grooves 53, 63 cut along the XY plane is cylindrical on the Y2 side in the Y direction and hemispherical on the Y1 side in the Y direction
  • the cross-sectional shape of the cell extraction grooves 53, 63 cut along the YZ plane is cylindrical on the Y2 side in the Y direction and triangular on the Y1 side in the Y direction that gradually narrows from the Y2 side toward the Y1 side.
  • the cell extraction grooves 53, 63 connect to the cell-accommodating recesses 51, 61 on the Y2 side in the Y direction, and are located inside the outer edges of the first sheet-like member 50 and the second sheet-like member 60 on the Y1 side in the Y direction.
  • a pair of cut sections 101 are provided at both outer ends in the X direction.
  • the pair of cut sections 101 are formed at both outer ends in the width direction (X direction) of the sealing unit 13, sandwiching the cell extraction section 12 in the X direction, so that the cell extraction section 12 can be cut midway in the Y direction, with the cell extraction section 12 positioned on an imaginary line connecting the pair of cut sections 101.
  • the first sheet-like member 50 and second sheet-like member 60 are stacked so that their three-dimensional portions face each other, with the Y1-side end of the cell introduction tube 20 positioned in the cell introduction grooves 52, 62 formed at the Y2-side end in the Y direction, and the port member 40 positioned in the cell extraction grooves 53, 63 formed at the Y1-side end in the Y direction, and the peripheries of the three-dimensional portions are joined.
  • a tube protection section 14 having a pair of protective sheets 141 is provided at the Y2-side end in the Y direction. This forms a container body 10 having a cell storage section 11, cell extraction section 12, seal section 13, and tube protection section 14.
  • a cylindrical cell introduction part 100 is connected to the cell storage part 11 of the container body 10.
  • the cell introduction part 100 is composed of a cell introduction tube 20 and an introduction port 30, and introduces cells into the cell storage part 11.
  • the cell introduction tube 20 is connected to the end on the Y2 side in the Y direction, which is perpendicular to the width direction of the container body 10.
  • the cell introduction tube 20 is arranged along the surface direction of the pair of extension portions 131 of the seal portion 13.
  • the cell introduction tube 20 guides cells collected from a biological sample into the cell storage portion 11 in a sterile and airtight state. In this way, the cell introduction tube 20 introduces the cells into the cell storage portion 11.
  • the cell introduction tube 20 is made of a thermoplastic resin such as EVA resin (ethylene-vinyl acetate copolymer resin).
  • EVA resin ethylene-vinyl acetate copolymer resin
  • the cell introduction tube 20 is placed in the cell introduction grooves 52, 62 formed in the first sheet-like member 50 and the second sheet-like member 60 so that the Y1 side in the Y direction is connected to the cell storage section 11.
  • the other end of the cell introduction tube 20 is connected to the introduction port 30.
  • the cell introduction tube 20 used has, for example, an inner diameter of 3.3 mm ( ⁇ 0.1 mm) and an outer diameter of 4.0 mm ( ⁇ 0.1 mm).
  • the introduction port 30 is connected in a sterile and airtight manner to, for example, a syringe 80 (see Figures 3 and 4) for introducing cells or the like into the cell storage container 1.
  • the introduction port 30 is formed in a cylindrical shape extending in the Y direction, and has a tube-side inner cylindrical portion 31 located on the Y1 side of the Y direction, an intermediate cylindrical portion 32 located in the middle in the Y direction, and a syringe-side cylindrical portion 33 located on the Y2 side of the Y direction.
  • the introduction port 30 is made of a thermoplastic resin such as EVA resin, similar to the cell introduction tube 20.
  • the tube-side inner cylinder portion 31 is formed in a cylindrical shape and is placed inside the Y2 end of the cell introduction tube 20 in the Y direction, thereby connecting to the cell introduction tube 20.
  • the intermediate cylinder portion 32 is formed in a cylindrical shape and connected to the Y2 end of the tube-side inner cylinder portion 31 in the Y direction.
  • the syringe side tube portion 33 is formed in a cylindrical shape and is connected to the end of the intermediate tube portion 32 on the Y2 side in the Y direction.
  • a syringe 80 is connected to the syringe side tube portion 33.
  • the syringe side tube portion 33 and the syringe 80 are connected in an airtight manner.
  • the syringe 80 may be connected to the syringe side tube portion 33 as in this embodiment, or it may be a tube with a connector connected to the tip that can fit into the syringe side tube portion 33.
  • a protective cap (not shown) is attached to the end of the syringe side tube portion 33 on the Y2 side in the Y direction of the cell storage container 1.
  • the port member 40 functions as a cell extraction member, and is disposed on the Y2 side in the Y direction of the cell extraction section 12, which extracts cells contained in the cell storage section 11.
  • the port member 40 is made of the same thermoplastic resin as the cell introduction tube 20, such as EVA resin. 3 and 4 , the port member 40 includes a cylindrical portion 41 and a closing wall portion 42 that closes the Y2-side end of the cylindrical portion 41 in the Y direction. In this embodiment, the port member 40 is disposed at the Y2-side end of the cell extraction grooves 53, 63 in the Y direction.
  • the Y1-side end of the port member 40 in the Y direction is disposed inside the outer edges of the first sheet-like member 50 and the second sheet-like member 60, and inside the Y1-side end of the cell extraction grooves 53, 63 in the Y direction.
  • the container body 10 When cells contained in the cell storage section 11 are removed, the container body 10 is cut at the pair of cut portions 101, and the cell extraction section 12 is cut partway in the Y direction. This exposes the Y1-side end of the cell extraction section 12 at the cut portion in the Y direction.
  • the closing wall section 42 When cells are removed from the cell storage section 11 with the Y1-side end of the port member 40 exposed, the closing wall section 42 is pierced by an injection needle attached to the tip of a syringe (not shown). By piercing the closing wall section 42 with an injection needle or the like, cells can be removed from the cell storage section 11 using a syringe with an injection needle attached to its tip.
  • the cell storage section 11 is formed three-dimensionally so that the inner wall side of the cross section of the cell storage section 11 has a curved shape. More specifically, as shown in FIG. 3, the cell storage section 11 is formed so that the cross section in the planar direction when cut along the planar direction has an elliptical shape, and as shown in FIG. 4, the cross section in the thickness direction (Z direction) has an elliptical shape. In other words, the inner surface of the cell storage section 11 is formed as a concave curved surface with no corners.
  • the cell storage section 11 is formed with, for example, a minor axis length (width) W1 of 11 mm, a major axis length W2 of 19 mm, and a thickness H of 11 mm (before refilling with liquid), and is configured to be able to store 1.0 mL of cells.
  • the minor axis length (width) W1 of the cell storage section 11 is preferably 8 to 12 mm. Note that the values of the minor axis length (width) W1, major axis length W2, and thickness H are examples and are not limited to these numerical values.
  • the maximum thickness H of the cell storage section 11 in the thickness direction (Z direction) is the same as or smaller than the width direction (X direction) length W1 of the cell storage section 11, making it easy to crush the cell storage section 11 in the thickness direction (Z direction).
  • the internal space capacity of the cell storage unit 11 is reduced to approximately 1.0 mL.
  • the volume V2 of the internal space of the cell introduction unit 100 is the sum of the volume V2a of the internal space of the cell introduction tube 20 and the volume V2b of the internal space of the introduction port 30.
  • the volume V2 of the internal space of the cell introduction unit 100 is the volume of the internal space from the tip of the syringe 80, which is the cell injection means, to the cell storage unit 11 in the internal space of the introduction port 30 and the cell introduction tube 20 when cells are introduced using the syringe 80, which is the cell injection means.
  • the length L of the cell introduction tube 20 is 60 mm and the volume V2a of the internal space of the cell introduction tube 20 is 0.3603 mL (when the length L of the cell introduction tube 20 is 60 mm) (when the volume V2 of the internal space of the cell introduction section 100, obtained by adding the volume V2a (0.3603 mL) of the internal space of the cell introduction tube 20 to the volume V2b (0.11134 mL) of the internal space of the introduction port 30, is 0.4717 mL), even if cells (liquid) are to be introduced via the cell introduction tube 20, the air present in the internal space of the cell introduction tube 20 will be introduced into the internal space of the cell storage section 11 first, and the air present in the internal space of the cell storage section 11 will block the air from being replaced by the cells (liquid) introduced via the cell introduction tube 20.
  • the long length of the cell introduction tube 20 causes the air present in the internal space of the cell introduction section 100 to be introduced into the internal space of the cell storage section 11 first, and the air contained in the cell storage section 11 is blocked by the air present in the internal space of the cell storage section 11, so it cannot be replaced by the cells (liquid) introduced via the cell introduction section 100. Therefore, it is preferable that the length of the cell introduction tube 20 be less than 60 mm.
  • the length L of the cell introduction tube 20 is less than 60 mm
  • the volume V2a of the internal space of the cell introduction tube 20 is less than 0.3603 mL (the length L of the cell introduction tube 20 is less than 60 mm)
  • the volume V2 of the internal space of the cell introduction section 100 which is the sum of the volume V2a (0.3603 mL) of the internal space of the cell introduction tube 20 and the volume V2b (0.11134 mL) of the internal space of the introduction port 30, is less than 0.4717 mL.
  • the volume V1 of the internal space of the cell storage section 11 is set to 1.0 mL
  • the volume V2 of the internal space of the portion of the cell introduction section 100 through which the cells flow (pass) when being introduced is preferably 0.43 mL or less
  • the cell introduction tube 20 is sealed at the welded section 21 on the container body 10 side midway in the axial direction, as shown in Figure 5. Because the cell introduction tube 20 is welded midway in the axial direction, it is preferable that the length of the portion of the cell introduction tube 20 through which the cells flow (pass through), which is the length from the connection between the cell introduction tube 20 and the container body 10, is 30 mm or more. However, the length of the portion of the cell introduction tube 20 through which the cells flow (pass through) may be less than 30 mm.
  • the cell storage container 1A is stored in the square container storage section S of the cell container storage box 70, with cells stored in the internal space and sealed at the welded joint 21a on the cell storage section 11 side of the welded section 21.
  • the cell storage container 1A is stored in the square container storage section S of the cell container storage box 70.
  • the width direction (X direction) of the container body 10 which is composed of the cell storage section 11 and a pair of extension sections 131 arranged along the X direction of the cell storage container 1A, is aligned along one diagonal of the square-shaped container storage section S in a plan view, and the cell storage container 1A is inserted and stored in the container storage section S by moving it from the upper side to the lower side so that the Y1 side of the cell storage container 1A in the Y direction is positioned downward and the Y2 side of the cell storage container 1A in the Y direction is positioned upward, as shown in Figure 6.
  • the thickest part of the cell storage section 11 of the container body 10 of the cell storage container 1A is positioned on the other diagonal of the square-shaped container storage section S.
  • the widthwise (X-direction) length W4 of the extension portion 131 of the sealing portion 13 is preferably 2 mm or more from the standpoint of ensuring the strength of the cell storage container 1 (cell storage portion 11) and from the standpoint of ensuring the strength when storing the cell storage container 1 in the container storage portion S of the cell container storage box 70. If the widthwise (X-direction) length W4 of the extension portion 131 of the sealing portion 13 is 2 mm or more, the strength of the cell storage container 1 (cell storage portion 11) can be improved, and the risk of contents leaking can be reduced even if excessive pressure is applied to the cell storage container 1 (cell storage portion 11).
  • the length W5 from the end of the seal portion 13 on the Y1 side in the Y direction to the end of the tube protection portion 14 on the Y2 side in the Y direction is set to 49 mm.
  • the widthwise (X-direction) length W3 of the container body 10, which is composed of the cell storage section 11 and a pair of extension sections 131 arranged along the X-direction of the cell storage container 1A, is approximately the same as the length b of one diagonal of the square container storage section S in a planar view, because it is arranged on one diagonal of the square container storage section S.
  • the widthwise (X-direction) length W3 of the container body 10 being approximately the same as the diagonal length b of the square container storage section S in a planar view means that the widthwise (X-direction) length W3 of the container body 10 and the diagonal length of the square container storage section S are the same length, or that the widthwise (X-direction) length W3 of the container body 10 is slightly shorter than the diagonal length of the square container storage section S. This includes, for example, a case where the widthwise (X-direction) length W3 of the container body 10 is approximately 10% shorter than the diagonal length of the square container storage section S.
  • the width direction (X direction) of the container body 10, which is composed of the cell storage section 11 and the pair of extension portions 131 arranged along the X direction of the cell storage container 1A, is positioned on one diagonal of the square-shaped container storage section S.
  • the cell storage container 1A can be stored in the square-shaped container storage section S of the cell container storage box 70 with the thickest part of the cell storage section 11 of the container body 10 of the cell storage container 1A positioned on the other diagonal of the square-shaped container storage section S when the cell storage section 11 is filled with cells. Therefore, because the tip portions of the pair of extension portions 131 are positioned at the internal corners of the container storage section S, the cell storage container 1A can be easily stored in the square-shaped container storage section S of the cell container storage box 70.
  • the cell storage section 11 is formed from a soft material, as shown in the upper diagram of Figure 5, an external force is applied to the soft material of the cell storage section 11 to crush the cell storage section 11 and remove the air from the internal space of the cell storage section 11, reducing the space within the soft material of the cell storage section 11.
  • a syringe 80 is attached to the introduction port 30.
  • the syringe 80 is connected to the introduction port 30 in a sterile and airtight manner.
  • the cells placed inside the syringe 80 are then introduced into the cell introduction section 100 via the syringe 80 attached to the introduction port 30. As a result, the cells are introduced into the cell storage section 11 by the cell introduction section 100.
  • the cell storage section 11 is made of a soft material, external force can be applied to the soft material of the cell storage section 11 to crush the cell storage section 11, removing the air in the internal space of the cell storage section 11 and reducing the space within the soft material of the cell storage section 11. In this state, liquid cells can be easily introduced into the cell storage section 11 using the cell introduction section 100.
  • the volume V1 of the internal space of the cell storage section 11 is 1.0 mL
  • the volume V2 of the internal space of the portion through which the cells flow (pass) when introducing the cells into the cell introduction section 100 is 0.43 mL or less
  • the inner wall (inner surface) of the cell storage section 11 is configured as a curved surface with no corners. This allows air to be smoothly expelled from the cell storage section 11 as cells are introduced into the cell storage section 11, making it less likely that air bubbles will remain in the cell storage section 11. Therefore, a set amount of cells can be preferably introduced into the cell storage section 11.
  • the cell introduction tube 20 is sealed at the welded section 21 located inside the tube protection section 14 of the container body 10, as shown in the middle diagram of Figure 5.
  • the cell storage container 1 is hermetically sealed at the welded section 21 midway along the cell introduction tube 20.
  • the sealed welded section 21 on the cell introduction tube 20 is cut at the center of the welded section 21 with a cutting tool such as scissors.
  • the cell storage container 1A is sealed at the welded joint 21a on the cell storage section 11 side of the welded section 21, with cells accommodated in the cell storage section 11.
  • the cell storage container 1 is housed in a cell container storage box 70.
  • the cell container storage box 70 has a bottom plate 71, peripheral wall plates 72 formed at a predetermined height and arranged around all four sides, and partition walls 73 that divide the inside of the peripheral wall plates 72 into a plurality of square grids.
  • each of the multiple container storage sections S is formed in a square shape with a side length of length a and a diagonal length of length b in plan view.
  • the cell storage container 1A When storing the cell storage container 1A in the container storage section S of the cell container storage box 70, as shown in Figures 6 and 7, the cell storage container 1A is inserted and stored in the container storage section S by moving it from the upper side to the lower side so that the Y1 side of the cell storage container 1A in the Y direction is positioned downward and the Y2 side of the cell storage container 1A in the Y direction is positioned upward.
  • the cell storage container 1A is stored in the container storage section S of the cell container storage box 70 by inserting it so that the width direction (X direction) in which the pair of extension portions 131 of the seal portion 13 of the container body 10 of the cell storage container 1 extends is aligned along one diagonal line of the container storage section S.
  • the width direction (X direction) of the container body 10, which is composed of the cell storage section 11 and a pair of extension sections 131 arranged along the X direction of the cell storage container 1A, is positioned on one diagonal of the square-shaped container storage section S, and the maximum thickness H portion of the cell storage section 11 of the container body 10 of the cell storage container 1A is positioned on the other diagonal of the square-shaped container storage section S, so that the cell storage container 1A can be stored stably in the square-shaped container storage section S of the cell container storage box 70.
  • the cell storage container 1A is cryopreserved.
  • the cell preservation container 1 of this embodiment described above provides the following advantages:
  • V2/V1 0.43 or less
  • the volume V1 of the internal space of the cell storage section 11 is set to 0.5 to 1.2 mL. This makes the cell storage container 1 of this embodiment suitable for use as a cell storage container for storing small volumes of cells, approximately 1 mL in size.
  • the length of the cell introduction tube 20 from the connection point with the container body 10 is set to 30 mm or more. This makes it possible to easily seal the cell introduction tube 20 at the welded portion 21 midway along the cell introduction tube 20 after the cells are contained in the cell containing section 11.
  • the cell storage section 11 is formed so that its cross-sectional shape in the planar direction and cross-sectional shape in the thickness direction are elliptical. As a result, the cell storage section 11 is formed in an elliptical shape, which makes it easier to crush than if it were formed as a perfect circle. Therefore, before introducing cells into the cell storage section 11, the cell storage section 11 can be easily crushed, and the air in the internal space of the cell storage section 11 can be easily removed.
  • the present invention is not limited to the above-described embodiments and can be modified as appropriate.
  • the cell holding section 11 is formed to have an elliptical shape in a plan view, but this is not limiting.
  • the cell holding section may be formed to have a circular shape in a plan view.
  • the cell storage section 11 is formed into an elliptical shape in a plan view, and the cell introduction section 100 is connected to the end on the long axis side, but this is not limited to this.

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Abstract

細胞を細胞収容部に容易に導入可能な細胞保存容器を提供すること。　細胞保存容器１は、細胞を収容する空間が内部に形成された細胞収容部１１を有する容器本体１０と、容器本体１０に接続され細胞収容部１１に細胞を導入する筒状の細胞導入部１００と、を備え、細胞収容部１１は、軟質材料により形成された軟質部材で構成され、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下である。

Description

細胞保存容器及び細胞収納方法
　本発明は、生体試料から採取された幹細胞や臍帯血等の細胞を保存する細胞保存容器及び細胞収納方法に関する。
　従来、再生医療分野においては、生体試料から採取された幹細胞が、例えば、造血幹細胞移植や各種組織の再構築等の様々な用途に用いられている。幹細胞は、生体試料から採取された後、再生医療に用いられるまでの間、細胞保存容器に収容された状態で凍結保存される（例えば、特許文献１参照）。
　特許文献１で提案された細胞保存容器は、細胞を収容可能な細胞収容部を有する容器本体と、この容器本体に接続され細胞収容部に細胞を導入する細胞導入チューブと、細胞収容部に収容された細胞を導出する細胞導出部と、を備える。
特許第６８９２６４３号公報
　以上の細胞保存容器に細胞を収容して保存する場合には、まず、細胞導入チューブから細胞が導入される。次いで、細胞導入チューブの途中において細胞導入チューブが溶着されると共に切断されて（溶断されて）密閉される。その後、細胞が収容された細胞保存容器は、凍結保存される。細胞収容部に細胞を導入するときには、気密状態で、細胞導入チューブから細胞が導入されるため、細胞の導入と入れ替わって細胞収容部の内部に存在する空気が細胞導入チューブから排出される。
　ここで、比較的小容量の細胞を収容するために、細胞収容部の内部空間の容量を小さくしたいという要望がある。従来、細胞収容部の内部空間の容量を、例えば２．５ｍＬとしたものが存在するが、例えば１．０ｍＬ程度に小さくしたいという要望がある。細胞収容部の内部空間の容量を例えば１．０ｍＬ程度に小さくすると、液状の細胞を一定容量注入する際に、細胞導入チューブの内部空間に存在する空気が細胞収容部の内部に押し込まれることで、大きな力が必要となってしまう。
　従って、本発明は、細胞を細胞収容部に容易に導入可能な細胞保存容器を提供することを目的とする。
　本発明は、細胞を収容する空間が内部に形成された細胞収容部を有する容器本体と、前記容器本体に接続され前記細胞収容部に細胞を導入する筒状の細胞導入部と、を備える細胞保存容器であって、前記細胞収容部は、軟質材料により形成された軟質部材で構成され、前記細胞収容部の内部空間の容量Ｖ１に対する前記細胞導入部の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下である、細胞保存容器に関する。
　また、前記細胞収容部の内部空間の容量Ｖ１は、０．５～１．２ｍＬであることが好ましい。
　また、前記細胞導入部は、前記容器本体に接続される細胞導入チューブを有し、前記細胞導入チューブにおける前記容器本体との接続部分からの長さは、３０ｍｍ以上であることが好ましい。
　また、前記細胞収容部は、平面方向の断面形状及び厚さ方向の断面形状が楕円形状に形成されることが好ましい。
　また、本発明は、細胞を収容する空間が内部に形成された細胞収容部を有する容器本体と、前記容器本体に接続され前記細胞収容部に細胞を導入する筒状の細胞導入部と、を備える細胞保存容器に細胞を収納する細胞収納方法であって、前記細胞収容部の内部空間の容量Ｖ１に対する前記細胞導入部の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下であり、軟質材料により形成された軟質部材で構成された前記細胞収容部の前記軟質部材に外部から力を加えて前記軟質部材内の空間を小さくした状態で前記細胞保存容器に細胞を収納する細胞収納方法に関する。
　本発明によれば、細胞を細胞収容部に容易に導入可能な細胞保存容器を提供できる。
本発明の一実施形態に係る細胞保存容器を示す斜め上方から見た斜視図である。 一実施形態に係る細胞保存容器を示す斜め下方から見た斜視図である。 図１のＡ－Ａ線断面図である。 図１のＢ－Ｂ線断面図である。 細胞を細胞収容部に導入してシールする状態を示す図である。 細胞保存容器を細胞容器収容箱に収容した状態を示す斜視図である。 細胞保存容器を細胞容器収容箱に収容した状態を示す平面図である。 細胞保存容器を細胞容器収容箱に収容した部分を拡大した平面図である。
　以下、本発明の細胞保存容器１の好ましい一実施形態について、図面を参照しながら説明する。本発明の細胞保存容器１は、生体試料から採取された幹細胞等の細胞を凍結保存する場合に用いられる。また、本発明の細胞保存容器１は、１ｍＬ程度の小容量の液状の細胞を保存する場合に特に好適に用いられる。
　なお、本実施形態の説明においては、細胞保存容器１において、細胞収容部１１（図１及び図２参照）の立体形状部分の短径方向であって細胞保存容器１の容器本体１０の幅方向をＸ方向とし、細胞保存容器１の立体形状部分の長径方向であって容器本体１０の長手方向をＹ方向とする。Ｙ方向の一方側（図１の左手前側、図２の左奥側）をＹ１側とし、Ｙ方向の他方側（図１の右奥側、図２の右手前側）をＹ２側とする。Ｙ方向は、細胞導入チューブ２０の軸方向と一致する。Ｘ方向とＹ方向とは直交する。容器本体１０の第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０の積層方向であって細胞収容部１１の厚さ方向をＺ方向という。
　一実施形態の細胞保存容器１は、図１～図４に示すように、容器本体１０と、筒状の細胞導入部１００と、ポート部材４０と、を備える。細胞導入部１００は、細胞導入チューブ２０と、導入ポート３０と、を有する。
　容器本体１０は、軟質材料により形成された軟質部材により構成される。軟質部材は、細胞収容部１１の立体形状部分を潰して空気を抜く際に細胞収容部１１が潰れやすく、且つ、細胞収容部１１の内部に細胞を導入する際に細胞収容部１１が潰れた状態から膨らみやすい程度の軟質の材料により形成される。軟質部材としては、例えば、軟質のＰＶＣ（ポリ塩化ビニル）、ＰＰ（ポリプロピレン）、ＰＥ（ポリエチレン）、ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、ＥＶＡ（エチレン－酢酸ビニル共重合樹脂）、ＦＥＰ（テトラフルオロエチレン－ヘキサフルオロプロピレン共重合体）等の樹脂材料が挙げられる。容器本体１０は、第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０が重ね合わせられると共に、それぞれの周縁部の大部分が接合されて構成される。第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０は、軟質の軟質部材から構成される。
　容器本体１０は、細胞収容部１１と、細胞導出部１２と、シール部１３と、チューブ保護部１４と、を備える。
　細胞収容部１１は、第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０に囲まれた空間により形成され、細胞を収容する空間が内部に形成される。細胞収容部１１は、幅方向（Ｘ方向）及び厚さ方向（Ｚ方向）に曲面状に膨出して形成される。細胞収容部１１は、内部空間の容量Ｖ１が例えば１．０ｍＬの容量で構成され、所定の量（例えば、１．０ｍＬ）の液状の細胞を収容可能に構成される。
　細胞収容部１１は、Ｚ方向に見た場合に、Ｘ方向に短径でＹ方向に長径の楕円形状に形成され、Ｘ方向に見た場合に、Ｚ方向に短径でＹ方向に長径の楕円形状に形成される。なお、本実施形態においては、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１を１．０ｍＬの小容量で構成したが、０．５～１．２ｍＬの小容量で構成してもよい。
　シール部１３は、細胞収容部１１の周縁において第１シート状部材５０と第２シート状部材６０とが接合された部分により構成される。シール部１３は、Ｚ方向に厚さを有するシート状に形成され、外形（外縁）が、Ｘ方向に幅を有して、Ｙ方向に延びる略長方形状に形成される。シール部１３は、細胞収容部１１のＸ方向の両端部から外方に平面状に延出する一対の延出部１３１を有する。一対の延出部１３１のＸ方向の両端部の外縁は、Ｙ方向に直線状に延びる。シール部１３のＹ方向のＹ２側の端部には、細胞導入部１００の細胞導入チューブ２０のＹ方向のＹ１側の端部が接続される。
　チューブ保護部１４は、シール部１３のＹ方向のＹ２側の端部に接続され、第１シート状部材５０と第２シート状部材６０とが接合されていない部分により構成される。チューブ保護部１４は、一対の保護シート１４１により構成される。一対の保護シート１４１は、細胞導入チューブ２０が容器本体１０側において溶着されると共に切断されて（溶断されて）形成された溶着部２１の溶着接合部分２１ａ（図５参照）をＺ方向に挟むようにＺ方向の両方の外側に配置され、細胞導入チューブ２０における溶着部２１の溶着接合部分２１ａを保護する。
　本実施形態では、図１～図４に示すように、第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０は、それぞれ、立体形状部分を有している。より詳細には、第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０には、それぞれ同形同大の細胞収容凹部５１，６１、細胞導入凹溝５２，６２、及び細胞導出凹溝５３，６３が形成される。
　細胞収容凹部５１，６１は、平面視における形状が楕円形状を有し、かつ、厚さ方向の断面が半楕円形状を有する形状に形成される。即ち、細胞収容凹部５１，６１は、角部を有さない凹曲面により構成される。
　細胞導入凹溝５２，６２は、細胞収容凹部５１，６１におけるＹ方向のＹ２側の端部に配置される。細胞導入凹溝５２，６２は、断面形状が半円形の直線状に延びる溝により構成される。細胞導入凹溝５２，６２は、Ｙ方向のＹ１側の端部側が細胞収容凹部５１，６１につながり、Ｙ方向のＹ２側の端部側が第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０のＹ２側に延びる。
　細胞導出凹溝５３，６３は、細胞収容凹部５１，６１におけるＹ方向のＹ１側の端部に配置される。細胞導出凹溝５３，６３は、ＸＹ平面に沿って切断した断面形状が、図３に示すように、Ｙ方向のＹ２側が円筒状に形成され、Ｙ方向のＹ１側が半球状に形成され、ＹＺ平面に沿って切断した断面形状が、図４に示すように、Ｙ方向のＹ２側が円筒状に形成され、Ｙ方向のＹ１側が、Ｙ２側からＹ１側に向かうに従って徐々に狭まる三角形状に形成される。細胞導出凹溝５３，６３は、Ｙ方向のＹ２側が細胞収容凹部５１，６１につながり、Ｙ方向のＹ１側は第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０の外縁よりも内側に位置する。
　シール部１３のＹ方向のＹ１側において、Ｘ方向の外側の両端部には、一対のカット部１０１が設けられる。一対のカット部１０１は、細胞導出部１２をＹ方向の途中で切断できるように、一対のカット部１０１同士を繋ぐ仮想ライン上に細胞導出部１２が配置されるように、Ｘ方向において細胞導出部１２を挟んで、シール部１３の幅方向（Ｘ方向）の外側の両端部に形成されている。
　以上の第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０は、図４に示すように、Ｙ方向のＹ２側の端部に形成された細胞導入凹溝５２，６２に細胞導入チューブ２０のＹ１側の端部が配置され、Ｙ方向のＹ１側の端部に形成された細胞導出凹溝５３，６３にポート部材４０が配置された状態で、これらの立体形状部分が向かい合うように重ね合わせられ、立体形状部分の周囲が接合される。Ｙ方向のＹ２側の端部には、一対の保護シート１４１を有するチューブ保護部１４が設けられている。これにより、細胞収容部１１、細胞導出部１２、シール部１３及びチューブ保護部１４を有する容器本体１０が形成される。
　容器本体１０の細胞収容部１１には、筒状の細胞導入部１００が接続される。細胞導入部１００は、細胞導入チューブ２０及び導入ポート３０により構成され、細胞収容部１１に細胞を導入する。
　細胞導入チューブ２０は、容器本体１０の幅方向に直交するＹ方向のＹ２側の端部側に接続される。細胞導入チューブ２０は、シール部１３の一対の延出部１３１の面方向に沿って配置される。細胞導入チューブ２０は、生体試料から採取された細胞を無菌的かつ気密の状態で細胞収容部１１に導く。これにより、細胞導入チューブ２０は、細胞収容部１１に細胞を導入する。
　細胞導入チューブ２０は、ＥＶＡ樹脂（エチレン－酢酸ビニル共重合樹脂）等の熱可塑性樹脂により構成される。本実施形態では、細胞導入チューブ２０は、Ｙ方向のＹ１側が細胞収容部１１に連通するように、第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０に形成された細胞導入凹溝５２，６２に配置される。細胞導入チューブ２０の他端側は、導入ポート３０に接続される。細胞導入チューブ２０は、例えば、内径の直径が３．３ｍｍ（±０．１ｍｍ）で、外径の直径が４．０ｍｍ（±０．１ｍｍ）のものを使用している。
　導入ポート３０は、例えば、細胞等を細胞保存容器１に導入するためのシリンジ８０（図３及び図４参照）等に無菌的かつ気密に接続される。導入ポート３０は、Ｙ方向に延びる筒状に形成され、Ｙ方向のＹ１側に配置されるチューブ側内筒部３１と、Ｙ方向の中間に配置される中間筒部３２と、Ｙ方向のＹ２側に配置されるシリンジ側筒部３３と、を有する。導入ポート３０は、細胞導入チューブ２０と同様のＥＶＡ樹脂等の熱可塑性樹脂により構成される。
　チューブ側内筒部３１は、筒状に形成され、細胞導入チューブ２０のＹ方向のＹ２側の端部の内部に配置されることで、細胞導入チューブ２０に接続される。中間筒部３２は、筒状に形成され、チューブ側内筒部３１のＹ方向のＹ２側の端部に接続される。
　シリンジ側筒部３３は、筒状に形成され、中間筒部３２のＹ方向のＹ２側の端部に接続される。シリンジ側筒部３３には、シリンジ８０が結合される。シリンジ側筒部３３とシリンジ８０とは、気密がとれた状態で結合される。シリンジ側筒部３３には、本実施形態のようにシリンジ８０を結合してもよいし、先端にシリンジ側筒部３３と嵌合可能なコネクタが接続されたチューブなどでもよい。細胞保存容器１は、使用前においては、シリンジ側筒部３３のＹ方向のＹ２側の端部には、保護キャップ（図示せず）が取り付けられる。
　ポート部材４０は、細胞収容部１１に収容された細胞を取り出す細胞導出部１２のＹ方向のＹ２側に配置されて細胞導出部材として機能する。ポート部材４０は、細胞導入チューブ２０と同様のＥＶＡ樹脂等の熱可塑性樹脂により構成される。
　ポート部材４０は、図３及び図４に示すように、筒状部４１と、この筒状部４１のＹ方向のＹ２側の端部を閉鎖する閉鎖壁部４２と、を備える。本実施形態では、ポート部材４０は、細胞導出凹溝５３，６３のＹ方向のＹ２側の端部に配置される。また、ポート部材４０のＹ方向のＹ１側の端部は、第１シート状部材５０及び第２シート状部材６０の外縁よりも内側、かつ、細胞導出凹溝５３，６３のＹ方向のＹ１側の端部よりも内側に配置される。
　ポート部材４０は、細胞収容部１１に収容された細胞を取り出す際に、一対のカット部１０１において容器本体１０が切断されて、細胞導出部１２がＹ方向の途中で切断された場合に、細胞導出部１２の切断部分においてＹ方向のＹ１側の端部が露出される。閉鎖壁部４２は、ポート部材４０のＹ１側の端部が露出された状態で、細胞収容部１１から細胞を取り出す際に、シリンジ（図示せず）の先端に設けられた注射針が貫通される。閉鎖壁部４２に注射針等が貫通されることで、先端に注射針が設けられたシリンジにより、細胞収容部１１から、細胞を取り出すことができる。
　以上の細胞保存容器１によれば、細胞収容部１１は、細胞収容部１１の断面の内壁側が曲線形状となるように立体的に形成される。より具体的には、細胞収容部１１は、図３に示すように、平面方向に沿って切断した場合の平面方向の断面形状が楕円形状に形成されると共に、図４に示すように、厚さ方向（Ｚ方向）に沿って切断した場合の厚さ方向の断面形状が楕円形状となるように形成される。言い換えれば、細胞収容部１１の内面は、角部を有さない凹曲面により構成されている。
　本実施形態においては、細胞収容部１１は、図３及び図４に示すように、例えば、短径方向の長さ（幅）Ｗ１が１１ｍｍ、長径方向の長さＷ２が１９ｍｍ、厚さＨが１１ｍｍ（液を補充填する前）に形成され、１．０ｍＬの細胞を収容可能に構成される。細胞収容部１１の短径方向の長さ（幅）Ｗ１は、８～１２ｍｍであることが好ましい。なお、短径方向の長さ（幅）Ｗ１、長径方向の長さＷ２、厚さＨの値は、例示であり、この数値に限定されない。細胞収容部１１の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ１に対する細胞収容部１１の厚さ方向（Ｚ方向）の最大の厚さＨの比率は、Ｈ／Ｗ１＝０．５～１．０であることが好ましい。これにより、細胞収容部１１の厚さ方向（Ｚ方向）の最大の厚さＨが、細胞収容部１１の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ１と同じ又は小さいため、細胞収容部１１を厚さ方向（Ｚ方向）に潰しやすい。
　ここで、比較的小容量の細胞を収容するために、細胞収容部１１の内部空間の容量を小さくしたいという要望があるため、細胞収容部の内部空間の容量を、例えば２．５ｍＬとしたものが従来存在するのに対して、本実施形態においては、細胞収容部１１の内部空間の容量を、１．０ｍＬ程度に小さくしている。細胞収容部１１の内部空間の容量を例えば１．０ｍＬ程度に小さくすると、細胞収容部１１の内部空間に外気を入れずに細胞収容部１１を気密状態に保つ構造（細胞収容部を閉鎖系に保つ構造）にしながら液状の細胞を一定容量注入する際に、細胞導入部１００の内部空間に存在する空気が細胞収容部１１の内部に押し込まれることで、細胞の導入が、細胞収容部１１の内部空間に存在する空気にブロックされて、大きな力が必要となってしまう。そのため、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下であることが好ましい。細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２は、細胞導入チューブ２０の内部空間の容量Ｖ２ａと、導入ポート３０の内部空間の容量Ｖ２ｂと、の合計の容量である。細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２は、細胞を細胞注入手段であるシリンジ８０により導入する際に、導入ポート３０及び細胞導入チューブ２０の内部空間において、細胞注入手段であるシリンジ８０の先端から細胞収容部１１までの内部空間の容量である。
　ここで、細胞収容部１１の内部空間の容量が１．０ｍＬである場合において、導入ポート３０の内部空間の容量Ｖ２ｂを固定した状態で、細胞導入チューブ２０の長さを変化させることで細胞導入部１００の内部空間の容量を変化させた場合に、細胞収容部１１に細胞（液）が入る際の圧力を測定することで、細胞収容部１１に細胞を容易に導入可能であるために好適な、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率（Ｖ２／Ｖ１）を求めるための実験を行った。以下の表１には、実感結果を示している。本実験にあたっては、細胞導入チューブ２０は、内径が３．３ｍｍ（±０．１ｍｍ）で、外径が４．０ｍｍ（±０．１ｍｍ）のものを使用している。また、導入ポート３０の内部空間の容量Ｖ２ｂが０．１１１３４ｍＬのものを使用している。
　表１に示すように、実験において、導入ポート３０の内部空間の容量Ｖ２ｂを０．１１１３４ｍＬに固定した状態で、細胞導入チューブ２０の長さＬを変化させた場合に、細胞導入チューブ２０の長さＬを１０～６０ｍｍの間で変化させることで、細胞導入チューブ２０の内部空間の容量Ｖ２ａを０．００７１～０．３６０３ｍＬの間で変化させている。表１の実験結果においては、細胞導入チューブ２０の内部空間の容量Ｖ２ａが０．００７１～０．２８９７ｍＬの場合（細胞導入チューブ２０の長さＬが１０～５０ｍｍの場合）（細胞導入チューブ２０の内部空間の容量Ｖ２ａ（０．００７１～０．２８９７ｍＬ）に導入ポート３０の内部空間の容量Ｖ２ｂ（０．１１１３４ｍＬ）を加えた細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２が０．１１８４～０．４０１０ｍＬである場合）には、検体１～３を導入する際の平均圧力は、３１～６３ｋＰａであり、細胞収容部１１に収容される空気が、細胞導入チューブ２０を介して導入される細胞（液）と十分に入れ替わることができる。一方で、細胞導入チューブ２０の長さＬが６０ｍｍである細胞導入チューブ２０の内部空間の容量Ｖ２ａが０．３６０３ｍＬの場合（細胞導入チューブ２０の長さＬが６０ｍｍの場合）（細胞導入チューブ２０の内部空間の容量Ｖ２ａ（０．３６０３ｍＬ）に導入ポート３０の内部空間の容量Ｖ２ｂ（０．１１１３４ｍＬ）を加えた細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２が０．４７１７ｍＬである場合）には、細胞導入チューブ２０を介して細胞（液）を導入しようとしても、細胞導入チューブ２０の内部空間に存在する空気が細胞収容部１１の内部空間に先に導入されてしまうため、細胞収容部１１の内部空間に存在する空気にブロックされて、細胞収容部１１に収容される空気が、細胞導入チューブ２０を介して導入される細胞（液）と入れ替わることができない。
　そのため、細胞導入チューブ２０は、本実施形態のように、例えば、内径の直径が３．３ｍｍ（±０．１ｍｍ）である場合、細胞が流通する部分（通る部分）の長さが、６０ｍｍ以上である場合には、細胞収容部１１を押しつぶしても、細胞導入チューブ２０の長さが長いため、細胞導入部１００の内部空間に存在する空気が細胞収容部１１の内部空間に先に導入されてしまうため、細胞収容部１１の内部空間に存在する空気にブロックされて、細胞収容部１１に収容される空気が、細胞導入部１００を介して導入される細胞（液）と入れ替わることができない。よって、細胞導入チューブ２０の長さは、６０ｍｍ未満であることが好ましい。つまり、細胞導入チューブ２０の長さＬは６０ｍｍ未満であることが好ましいことから、細胞導入チューブ２０の内部空間の容量Ｖ２ａが、０．３６０３ｍＬ未満（細胞導入チューブ２０の長さＬは６０ｍｍ未満）であって、細胞導入チューブ２０の内部空間の容量Ｖ２ａ（０．３６０３ｍＬ）に導入ポート３０の内部空間の容量Ｖ２ｂ（０．１１１３４ｍＬ）を加えた細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２が０．４７１７ｍＬ未満であることが好ましい。よって、本実施形態においては、細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２が０．４３ｍＬ以下である場合、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下であり、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率を、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下とすることにより、細胞収容部１１に細胞を導入する際に、細胞収容部１１への細胞が導入されるのと入れ替わりに細胞収容部１１からスムーズに空気が排出され、細胞収容部１１に設定された量の細胞を好適に導入できる。
　以上の実験結果により、本実施形態においては、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１は、１．０ｍＬとし、細胞導入部１００における細胞を導入する際に細胞が流通する部分（通る部分）の内部空間の容量Ｖ２は、０．４３ｍＬ以下であることが好ましく、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率を、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下であることが好ましい。
　細胞導入チューブ２０は、細胞収容部１１に細胞を導入した後に、図５に示すように、軸方向の途中における容器本体１０側の溶着部２１において、シールされる。そのため、細胞導入チューブ２０は、軸方向の途中において溶着するため、細胞導入チューブ２０と容器本体１０との接続部分からの長さであって細胞導入チューブ２０の細胞が流通する部分（通る部分）の長さは、３０ｍｍ以上であることが好ましい。なお、細胞導入チューブ２０の細胞が流通する部分（通る部分）の長さを、３０ｍｍ未満としてもよい。
　細胞保存容器１は、図５に示すように、内部空間に細胞が収容されて溶着部２１の細胞収容部１１側の溶着接合部分２１ａにおいてシールされて密封された状態で、細胞保存容器１Ａは、図６に示すように、細胞容器収容箱７０の正方形状の容器収容部Ｓに収容される。
　細胞保存容器１Ａを細胞容器収容箱７０の正方形状の容器収容部Ｓに収容する場合に、細胞保存容器１ＡのＸ方向に沿って配置される細胞収容部１１及び一対の延出部１３１を含んで構成される容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）が、平面視で正方形状の容器収容部Ｓの一方の対角線上に沿った状態で、図６に示すように、細胞保存容器１ＡのＹ方向のＹ１側が下方に位置すると共にＹ方向のＹ２側が上方に位置するように細胞保存容器１Ａを容器収容部Ｓに上方側から下方側に移動させることで、容器収容部Ｓに挿入して収容する。この場合、細胞保存容器１Ａの容器本体１０の細胞収容部１１の最大厚さの部分は、正方形状の容器収容部Ｓの他方の対角線上に配置される。
　図３に示すように、シール部１３の延出部１３１の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ４は、細胞保存容器１（細胞収容部１１）の強度を確保する観点、及び、細胞保存容器１を細胞容器収容箱７０の容器収容部Ｓに収容する際の強度を確保する観点から、２ｍｍ以上であることが好ましい。シール部１３の延出部１３１の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ４が２ｍｍ以上である場合には、細胞保存容器１（細胞収容部１１）の強度を向上させることができ、細胞保存容器１（細胞収容部１１）に圧力をかけ過ぎた場合であっても、内容物が漏れるリスクを低減できる。
　図８に示すように、細胞収容部１１に細胞を充填した状態において、細胞導入チューブ２０の軸方向に見た場合に、細胞収容部１１と一対の延出部１３１とを含んで構成される容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３に対する細胞収容部１１の厚さ方向（Ｚ方向）の最大の厚さＨの比率は、Ｈ／Ｗ３＝０．７～０．９５であることが好ましい。容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３に対する細胞収容部１１の厚さ方向（Ｚ方向）の最大の厚さＨの比率Ｈ／Ｗ３を０．７以上にすることで、細胞導入チューブ２０を細胞容器収容箱７０の正方形状の容器収容部Ｓにフィットさせて収容させることができる。また、図３に示すように、シール部１３のＹ方向のＹ１側の端部からチューブ保護部１４のＹ方向のＹ２側の端部までの長さＷ５は、Ｗ５＝４６～５０ｍｍであることが好ましい。本実施形態においては、例えば、シール部１３のＹ方向のＹ１側の端部からチューブ保護部１４のＹ方向のＹ２側の端部までの長さをＷ５＝４９ｍｍとしている。
　細胞保存容器１ＡのＸ方向に沿って配置される細胞収容部１１と一対の延出部１３１とを含んで構成される容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３は、正方形状の容器収容部Ｓの一方の対角線上に配置されるため、平面視で正方形状の容器収容部Ｓの一方の対角線の長さｂと同程度の長さである。容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３が、平面視で正方形状の容器収容部Ｓの対角線の長さｂと同程度の長さとであるとは、容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３と正方形状の容器収容部Ｓの対角線の長さとが同じ長さである場合や、容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３が、正方形状の容器収容部Ｓの対角線の長さよりも僅かに短い場合ことを意味し、例えば、容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３が、正方形状の容器収容部Ｓの対角線の長さに対して１０％程度短い長さである場合を含む。
　これにより、細胞保存容器１Ａを細胞容器収容箱７０の正方形状の容器収容部Ｓに収容する場合に、細胞保存容器１ＡのＸ方向に沿って配置される細胞収容部１１及び一対の延出部１３１を含んで構成される容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）を、正方形状の容器収容部Ｓの一方の対角線上に配置することで、細胞収容部１１に細胞を充填した状態で、細胞保存容器１Ａの容器本体１０の細胞収容部１１の最大厚さの部分を、正方形状の容器収容部Ｓの他方の対角線上に配置した状態で、細胞保存容器１Ａを細胞容器収容箱７０の正方形状の容器収容部Ｓに収容できる。よって、容器収容部Ｓの内部の角部に一対の延出部１３１の先端部分が配置されるため、細胞保存容器１Ａを細胞容器収容箱７０の正方形状の容器収容部Ｓに容易に収容できる。
　細胞収容部１１と一対の延出部１３１とを含んで構成される容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３に対する細胞収容部１１の厚さ方向（Ｚ方向）の最大の厚さＨの比率（Ｈ／Ｗ３）の値が大きいほど、容器収容部Ｓの正方形形状に近づくため、細胞収容部１１を容器収容部Ｓに安定した状態で収容できる。
　以上の細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１が１．０ｍＬである小容量の細胞保存容器１に細胞を収容して保存する場合について説明する。まず、細胞収容部１１が軟質部材により形成されているため、図５の上段の図に示すように、細胞収容部１１の軟質部材に外部から力を加えて、細胞収容部１１を潰して細胞収容部１１の内部空間の空気を除去して細胞収容部１１の軟質部材内の空間を小さくした後に、シリンジ８０を、導入ポート３０に装着する。シリンジ８０は、導入ポート３０に無菌的かつ気密に接続される。そして、シリンジ８０の内部に配置された細胞を、導入ポート３０に装着されたシリンジ８０を介して細胞導入部１００に導入する。これにより、細胞は、細胞導入部１００により、細胞収容部１１に導入される。
　ここで、細胞収容部１１が軟質部材により構成されるため、細胞収容部１１の軟質部材に外部から力を加えて細胞収容部１１を潰して細胞収容部１１の内部空間の空気を除去して細胞収容部１１の軟質部材内の空間を小さくした状態で、液状の細胞を、細胞導入部１００により、細胞収容部１１に容易に導入できる。
　また、本実施形態においては、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１は、１．０ｍＬであり、細胞導入部１００における細胞を導入する際に細胞が流通する部分（通る部分）の内部空間の容量Ｖ２は、０．４３ｍＬ以下であるため、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下である。これにより、細胞収容部１１への細胞が導入されるのと入れ替わりに細胞収容部１１からスムーズに空気が排出され、細胞収容部１１に設定された量の細胞を好適に導入できる。
　また、本実施形態では、細胞収容部１１の内壁（内面）が角部を有さない曲面により構成されている。これにより、細胞収容部１１への細胞が導入されるのと入れ替わりに細胞収容部１１からスムーズに空気が排出され、細胞収容部１１に気泡を残存しにくくできる。よって、細胞収容部１１に設定された量の細胞を好適に導入できる。
　次いで、細胞導入部１００により、細胞収容部１１に細胞が収容された後、細胞導入チューブ２０は、図５の中段の図に示すように、容器本体１０のチューブ保護部１４の内側に配置された溶着部２１においてシールされる。これにより、細胞保存容器１は、細胞導入チューブ２０の途中の溶着部２１において密閉される。細胞導入チューブ２０においてシールされた溶着部２１は、溶着部２１の中央においてハサミなどの切断具などにより切断される。そして、図５の下段の図に示すように、細胞保存容器１Ａは、細胞収容部１１に細胞が収容された状態で、溶着部２１の細胞収容部１１側の溶着接合部分２１ａにおいてシールされて密封される。
　細胞保存容器１は、この状態で、細胞容器収容箱７０に収容される。細胞容器収容箱７０は、図６及び図７に示すように、底板７１と、所定の高さで形成され四周を囲んで配置される周壁板７２と、周壁板７２の内側を複数の正方形状の格子に仕切る仕切壁７３と、を有する。
　本実施形態においては、複数の容器収容部Ｓは、図６及び図７に示すように、平面視で、縦に１０個、横に１０個に仕切られて計１００個の格子状に設けられる。これにより、細胞容器収容箱７０には、最大１００個の細胞保存容器１Ａを収容できる。本実施形態においては、図８に示すように、複数の容器収容部Ｓは、それぞれ、平面視で、一辺の長さが長さａで対角線の長さが長さｂの正方形形状に形成されている。
　細胞保存容器１Ａを細胞容器収容箱７０の容器収容部Ｓに収容する場合には、図６及び図７に示すように、細胞保存容器１ＡのＹ方向のＹ１側が下方に位置すると共にＹ方向のＹ２側が上方に位置するように細胞保存容器１Ａを容器収容部Ｓに上方側から下方側に移動させることで、容器収容部Ｓに挿入して収容する。細胞保存容器１Ａは、細胞保存容器１の容器本体１０のシール部１３の一対の延出部１３１が延びる幅方向（Ｘ方向）が、容器収容部Ｓの一方の対角線に沿うように挿入されることで、細胞容器収容箱７０の容器収容部Ｓに収容される。
　本実施形態においては、図８に示すように、細胞導入チューブ２０の軸方向に見た場合に、細胞収容部１１と一対の延出部１３１とを含んで構成される容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）の長さＷ３に対する細胞収容部１１の厚さ方向（Ｚ方向）の最大の厚さＨの比率は、Ｈ／Ｗ３＝０．７～０．９５である。
　そのため、細胞保存容器１Ａを細胞容器収容箱７０の正方形状の容器収容部Ｓに収容する場合に、細胞保存容器１ＡのＸ方向に沿って配置される細胞収容部１１及び一対の延出部１３１を含んで構成される容器本体１０の幅方向（Ｘ方向）を、正方形状の容器収容部Ｓの一方の対角線上に配置すると共に、細胞保存容器１Ａの容器本体１０の細胞収容部１１の最大厚さＨの部分を、正方形状の容器収容部Ｓの他方の対角線上に配置することで、細胞保存容器１Ａを細胞容器収容箱７０の正方形状の容器収容部Ｓに安定した状態で収容できる。細胞保存容器１Ａが細胞容器収容箱７０の容器収容部Ｓに収容された状態で、細胞保存容器１Ａは、凍結保存される。
　凍結保存された細胞保存容器１に収容された細胞を使用する場合には、まず、細胞収容部１１に収容された細胞を解凍する。次いで、容器本体１０の細胞導出部１２を切断するように容器本体１０の一対のカット部１０１（図５の下段の図参照）においてハサミ等で切断して、細胞導出部１２を介してポート部材４０のＹ方向のＹ２側の端部を露出させる。その後、先端に注射針が取り付けられたシリンジ（図示せず）等を用いて、ポート部材４０の閉鎖壁部４２（図３及び図４参照）に注射針を刺して、細胞収容部１１から、解凍された細胞を採取する。
　以上説明した本実施形態の細胞保存容器１によれば、以下のような効果を奏する。
　（１）細胞収容部１１を、軟質材料により形成された軟質部材で構成し、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下の構成とした。これにより、細胞収容部１１が軟質部材により形成されるため、細胞収容部１１を潰して細胞収容部１１の内部空間の空気を除去した状態で、細胞を、細胞導入部１００により、細胞収容部１１に容易に導入できる。また、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下の構成としたため、細胞収容部１１への細胞が導入されるのと入れ替わりに細胞収容部１１からスムーズに空気が排出され、細胞収容部１１に設定された量の細胞を好適に導入できる。
　特に、細胞収容部１１の内部空間の容量が１ｍＬ程度の小容量の場合において、細胞収容部１１に細胞を導入しようとしても、細胞導入部１００の内部空間の容量が大きい場合には、細胞収容部１１の内部空間の容量が１ｍＬ程度の小容量であるため、細胞の導入が、細胞収容部１１の内部空間に存在する空気にブロックされて、細胞収容部１１の内部空間に細胞が入っていかないことがある。これに対して、細胞収容部１１が軟質部材により構成されるため、細胞収容部１１を潰して細胞収容部１１の内部空間の空気を除去した状態で、細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１に対する細胞導入部１００の内部空間の容量Ｖ２の比率を、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下とすることで、細胞収容部１１への細胞が導入されるのと入れ替わりに細胞収容部１１からスムーズに空気が排出され、細胞収容部１１に設定された量の細胞を好適に導入できる。よって、本実施形態の細胞保存容器１を、１ｍＬ程度の小容量の細胞を保存する細胞保存容器に好適に適用できる。
　（２）細胞収容部１１の内部空間の容量Ｖ１を、０．５～１．２ｍＬとした。これにより、本実施形態の細胞保存容器１を、１ｍＬ程度の小容量の細胞を保存する細胞保存容器に好適に適用できる。
　（３）細胞導入チューブ２０における容器本体１０との接続部分からの長さを、３０ｍｍ以上とした。これにより、細胞を細胞収容部１１に収容した後に、細胞導入チューブ２０の途中の溶着部２１において、細胞導入チューブ２０を容易にシールできる。
　（４）細胞収容部１１を、平面方向の断面形状及び厚さ方向の断面形状が楕円形状に形成した。これにより、細胞収容部１１が楕円形状に形成されるため、真円で形成されるよりも、細胞収容部１１を容易に潰すことができる。よって、細胞収容部１１に細胞を導入する前に、細胞収容部１１を容易に潰すことができ、細胞収容部１１の内部空間の空気を容易に除去することができる。
　以上、本発明の細胞保存容器の好ましい実施形態につき説明したが、本発明は、上述の実施形態に制限されるものではなく、適宜変更が可能である。
　例えば、前記実施形態では、細胞収容部１１を平面視で楕円形状に形成したがこれに限らない。例えば、細胞収容部を平面視で円形に形成してもよい。
　また、前記実施形態では、細胞収容部１１を平面視で楕円形状に形成し、長軸側の端部に細胞導入部１００を接続したが、これに限らない。
　１　細胞保存容器
　１０　容器本体
　１１　細胞収容部
　２０　細胞導入チューブ
　１００　細胞導入部

Claims (5)

  1. 　細胞を収容する空間が内部に形成された細胞収容部を有する容器本体と、
    　前記容器本体に接続され前記細胞収容部に細胞を導入する筒状の細胞導入部と、を備える細胞保存容器であって、
    　前記細胞収容部は、軟質材料により形成された軟質部材で構成され、
    　前記細胞収容部の内部空間の容量Ｖ１に対する前記細胞導入部の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下である、細胞保存容器。
  2. 　前記細胞収容部の内部空間の容量Ｖ１は、０．５～１．２ｍＬである、請求項１に記載の細胞保存容器。
  3. 　前記細胞導入部は、前記容器本体に接続される細胞導入チューブを有し、
    　前記細胞導入チューブにおける前記容器本体との接続部分からの長さは、３０ｍｍ以上である、請求項１又は２に記載の細胞保存容器。
  4. 　前記細胞収容部は、平面方向の断面形状及び厚さ方向の断面形状が楕円形状に形成される、請求項１又は２に記載の細胞保存容器。
  5. 　細胞を収容する空間が内部に形成された細胞収容部を有する容器本体と、前記容器本体に接続され前記細胞収容部に細胞を導入する筒状の細胞導入部と、を備える細胞保存容器に細胞を収納する細胞収納方法であって、
    　前記細胞収容部の内部空間の容量Ｖ１に対する前記細胞導入部の内部空間の容量Ｖ２の比率は、Ｖ２／Ｖ１＝０．４３以下であり、
    　軟質材料により形成された軟質部材で構成された前記細胞収容部の前記軟質部材に外部から力を加えて前記軟質部材内の空間を小さくした状態で前記細胞保存容器に細胞を収納する細胞収納方法。
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