WO2025005240A1 - 活性炭材料を使用する精製工程を含む抗体－薬物コンジュゲートの製造方法 - Google Patents

活性炭材料を使用する精製工程を含む抗体－薬物コンジュゲートの製造方法 Download PDF

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政敏 本泉
昇平 白石
孝樹 飯田
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    • C07K16/32—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing an antibody-drug conjugate, the method including a purification step using an activated carbon material.
  • the present invention relates to a method for producing an antibody-drug conjugate, the method including a purification step for removing by-products derived from an exatecan compound, the method including a purification step using an activated carbon material.
  • Antibody-drug conjugates which combine cytotoxic drugs with antibodies that can bind to antigens expressed on the surface of cancer cells and be internalized into the cells, are expected to selectively deliver drugs to cancer cells, accumulating the drugs within the cancer cells and killing the cancer cells (Non-Patent Documents 1-5).
  • An antibody-drug conjugate is an antibody-drug conjugate (hereinafter referred to as "DXd-ADC") that consists of an antibody and a derivative of exatecan, a topoisomerase I inhibitor (Patent Documents 1-6 and Non-Patent Documents 6-9).
  • DXd-ADC antibody-drug conjugate
  • a drug with high cytotoxic activity is bound to the antibody, and it is preferable to remove as much of the highly active impurities derived from the drug that is not bound to the antibody from the antibody-drug conjugate drug substance as possible, which is an extremely important requirement for the quality of the drug substance.
  • Patent Documents 7 to 15 describe methods for producing antibody-drug conjugates other than DXd-ADC. These methods include a purification step using chromatography, such as hydrophobic chromatography or gel filtration chromatography.
  • Patent documents 1 to 6 describe a method for producing the antibody-drug conjugate DXd-ADC, which involves conjugating an antibody with a drug linker intermediate and purifying the resulting crude antibody-drug conjugate.
  • Examples in patent documents 2 to 4 describe that the crude antibody-drug conjugate was purified by ultrafiltration using a sorbitol-containing acetate buffer.
  • Patent document 5 describes that the crude antibody-drug conjugate can be purified by ultrafiltration using an acetate buffer, a histidine buffer, or a phosphate buffer.
  • Patent document 6 describes that the crude antibody-drug conjugate can be effectively purified by ultrafiltration using a buffer containing a salt.
  • Patent Document 16 describe a method for removing pyrrolobenzodiazepine-related impurities from a product mixture of pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates (hereinafter also referred to as "PBD-ADCs") by activated carbon filtration.
  • PBD-ADCs pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
  • the inventors conducted extensive research to solve the above problems and discovered that by using activated carbon materials in the purification process of antibody-drug conjugates, it is possible to efficiently remove by-products derived from the highly active exatecan compound derived from the exatecan derivative of DXd-ADC, thus completing the present invention.
  • a manufacturing method comprising the steps of: [2] The method of [1], wherein the step (i) is a step of filtering a solution containing the antibody-drug conjugate through an activated carbon filter. [3] The manufacturing method according to [1] or [2], wherein the step (i) is a step of filtering a solution containing an antibody-drug conjugate using an activated carbon filter, and the solution is passed through the activated carbon filter only once.
  • step (ii) reacting the compound represented by the formula: with the antibody reduced in step (ii); (iv) adding a reagent having a thiol group to react with the compound represented by formula (2) remaining from step (iii);
  • a by-product derived from the exatecan compound is represented by the formula (3)
  • [36] A method for producing [35], comprising step (i) followed by step (vi).
  • [37] The production method according to [35] or [36], wherein a histidine buffer is used in step (vi).
  • [38] The manufacturing method of any one of [35] to [37], wherein 8.5 mmol/L L-histidine buffer is used in step (vi).
  • [39] The method for producing any one of [1] to [28] and [30] to [38], wherein the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate is in the range of 7 to 8.
  • [43] A method for producing [41] or [42], in which the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-GPR20 antibody is deleted. [44] The method of any one of [1] to [28] and [30] to [40], wherein the antibody is an anti-CD37 antibody. [45] The method for producing an anti-CD37 antibody according to [44], wherein the anti-CD37 antibody comprises a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 468 of SEQ ID NO: 3 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 4.
  • [46] A method for producing [44] or [45], in which the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-CD37 antibody is deleted. [47] The method of any one of [1] to [28] and [30] to [40], wherein the antibody is an anti-MUC1 antibody. [48] The method for producing an anti-MUC1 antibody according to [47], wherein the anti-MUC1 antibody comprises a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 447 of SEQ ID NO: 5 or the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 447 of SEQ ID NO: 6, and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 219 of SEQ ID NO: 7.
  • [55] A method for producing the anti-HER3 antibody according to [53] or [54], wherein the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain is deleted. [56] The method of any one of [1] to [28] and [30] to [40], wherein the antibody is an anti-CDH6 antibody. [57] The method for producing an anti-CDH6 antibody according to [56], wherein the anti-CDH6 antibody comprises a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 of SEQ ID NO: 16 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 of SEQ ID NO: 17.
  • [58] A method for producing the anti-CDH6 antibody according to [56] or [57], in which the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain is deleted.
  • [61] The method of any one of [1] to [26], [29] to [38], [59] and [60], wherein the antibody is an anti-TROP2 antibody.
  • [62] The method for producing [61], wherein the anti-TROP2 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 470 of SEQ ID NO: 10 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 11.
  • [64] The method of any one of [1] to [26], [29] to [38], [59] and [60], wherein the antibody is an anti-B7-H3 antibody.
  • [65] The method for producing an anti-B7-H3 antibody according to [64], wherein the anti-B7-H3 antibody comprises a heavy chain having an amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 of SEQ ID NO: 14 and a light chain having an amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 of SEQ ID NO: 15.
  • a method for producing the antibody according to [64] or [65] wherein the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-B7-H3 antibody is deleted.
  • [69] Producing an antibody-drug conjugate by any one of the production methods of [1] to [68], and further comprising: (vii) adding a buffer solution to the solution containing the antibody-drug conjugate; (viii) concentrating the solution containing the antibody-drug conjugate; and (ix) adjusting the solution containing the antibody-drug conjugate to a predetermined pH; At least one step selected from the group consisting of: and, (x) adding an excipient to the solution containing the antibody-drug conjugate; By carrying out a process including A method for making a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate, a buffer, and an excipient. [70] The method according to [69], wherein the buffer solution is a histidine buffer solution.
  • a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate, a buffer solution, and an excipient, produced by any one of the production methods of [69] to [72], further comprising: (xi) adding a surfactant to the pharmaceutical composition; By carrying out a process including A method for making a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate, a buffer, an excipient, and a surfactant.
  • the surfactant is polysorbate 80.
  • the present invention also includes the following inventions.
  • a method for producing an antibody-drug conjugate comprising the steps of: (i) removing by-products derived from the exatecan compound from a solution containing the antibody-drug conjugate using an activated carbon material; A manufacturing method comprising the steps of: [A2] The method for producing [A1], wherein the drug of the antibody-drug conjugate is a topoisomerase I inhibitor.
  • the antibody-drug conjugate comprises a drug represented by the following formula:
  • the antibody-drug conjugate is an antitumor compound represented by the following formula:
  • A represents the binding site to the antibody
  • an antibody via a thioether bond (i) removing by-products derived from the exatecan compound from a solution containing the antibody-drug conjugate using an activated carbon material;
  • [A10] A method for producing [A8] or [A9], comprising, prior to step (i), a step of washing an activated carbon filter before use.
  • [A11] The manufacturing method of [A10], wherein an aqueous solution containing a surfactant is used in the step of washing before use.
  • [A12] The production method of [A10] or [A11], wherein an aqueous solution of polysorbate 20 or an aqueous solution of polysorbate 80 is used in the step of washing before use.
  • [A13] The production method of [A10] or [A11], wherein an aqueous solution of polysorbate 20 is used in the step of washing before use.
  • [A14] The manufacturing method of [A10] or [A11], wherein an aqueous solution of polysorbate 80 is used in the step of washing before use.
  • [A15] The method for producing any one of [A7] to [A14], wherein the activated carbon contained in the activated carbon material has a surface area of 10 to 10,000 m 2 /g.
  • [A16] The method for producing any one of [A7] to [A15], wherein the activated carbon contained in the activated carbon material has an average particle diameter of 2 ⁇ m or more.
  • [A17] The method for producing any one of [A7] to [A16], wherein the activated carbon contained in the activated carbon material has an average particle size of 5 to 40 ⁇ m at least 90% by weight.
  • [A18] The manufacturing method of any one of [A7] to [A17], wherein the temperature of the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is 0°C to 30°C.
  • [A19] The manufacturing method of any one of [A7] to [A18], wherein the temperature of the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is 10°C to 20°C.
  • [A20] The manufacturing method of any one of [A7] to [A19], wherein the temperature of the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is about 15°C.
  • [A21] The manufacturing method of any one of [A7] to [A20], wherein the pH of the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is 4.0 to 6.0.
  • [A22] The manufacturing method of any one of [A7] to [A21], wherein the pH of the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is about 5.
  • [A23] The manufacturing method of any one of [A7] to [A21], wherein the pH of the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is about 4.5.
  • (ii) reducing the antibody with a reducing agent; (iii) Equation (2)
  • step (ii) reacting the compound represented by the formula: with the antibody reduced in step (ii); (iv) adding a reagent having a thiol group to react with the compound represented by formula (2) remaining from step (iii);
  • the manufacturing method of any one of [A7] to [A23], [A25] The manufacturing method of any one of [A7] to [A24], comprising step (i) after step (iv).
  • [A26] A manufacturing method according to any one of [A7] to [A25], wherein the by-product derived from the exatecan compound includes a compound in which the reducing agent used in step (ii) is added to the maleimidyl group of the compound represented by formula (2), and/or a compound in which the reagent having a thiol group used in step (iv) is added to the maleimidyl group of the compound represented by formula (2).
  • a by-product derived from the exatecan compound is represented by the formula (3)
  • a method for producing any one of [A7] to [A26], which comprises a compound represented by the following formula: [A28] The production method of [A27], wherein the content of the compound represented by formula (3) in the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is 300 ⁇ M or less.
  • [A29] The production method of [A27] or [A28], wherein the content of the compound represented by formula (3) in the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is 0 to 150 ⁇ M.
  • the manufacturing method of any one of [A27] to [A29], wherein the content of the compound represented by formula (4) in the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is 160 ⁇ M or less.
  • [A34] The method for producing any one of [A7] to [A33], wherein the reducing agent used in step (ii) is tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride.
  • [A35] The method for producing any one of [A7] to [A34], wherein step (ii) is carried out in a buffer solution.
  • [A36] The method for producing [A35], wherein the buffer solution is a histidine buffer solution.
  • [A37] The method according to [A35] or [A36], wherein the buffer solution is an aqueous L-histidine solution.
  • [A38] The method for producing [A35], wherein the buffer solution is an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate.
  • [A39] The method for producing [A35], wherein the buffer solution is an acetate buffer solution.
  • [A40] The method for producing [A35] or [A39], wherein the buffer solution is an aqueous sodium acetate solution.
  • [A41] The method for producing any one of [A7] to [A40], wherein the step (ii) is carried out in the presence of a chelating agent.
  • [A42] The method for producing [A41], wherein the chelating agent is ethylenediaminetetraacetic acid.
  • [A43] The method for producing any one of [A35] to [A42], wherein the buffer solution used in step (ii) contains a surfactant.
  • [A44] The method for producing [A43], wherein the surfactant is polysorbate 20.
  • [A45] The method for producing [A43], wherein the surfactant is polysorbate 80.
  • [A46] The manufacturing method of any one of [A35] to [A42], wherein the buffer solution used in the step (ii) does not contain a surfactant.
  • [A47] The method for producing any one of [A7] to [A46], wherein the compound represented by formula (2) used in the step (iii) is 2.0 to 10.0 equivalents.
  • [A48] The method for producing any one of [A7] to [A47], wherein the compound represented by formula (2) used in the step (iii) is 8.0 to 10.0 equivalents.
  • [A49] The method for producing any one of [A7] to [A48], wherein the compound represented by formula (2) used in the step (iii) is 8.9 to 10.0 equivalents.
  • [A50] The method for producing any one of [A7] to [A47], wherein the compound represented by formula (2) used in the step (iii) is 4.0 to 6.0 equivalents.
  • [A51] The method for producing any one of [A7] to [A50], wherein the reagent having a thiol group used in step (iv) is N-acetylcysteine.
  • (v) The method for producing any one of [A7] to [A51], which comprises a step of adjusting the pH of the reaction solution.
  • [A53] A method for producing any one of [A7] to [A52], comprising step (v) following step (iv).
  • [A54] The method for producing [A52] or [A53], wherein the step (v) is a step of adjusting the pH of the reaction solution to a range of 4 to 6.
  • [A55] The production method of any one of [A52] to [A54], wherein the step (v) is a step of adjusting the pH of the reaction solution to about 5.
  • the step (v) is a step of adjusting the pH of the reaction solution to about 4.5.
  • [A57] The method for producing any one of [A52] to [A56], wherein the step (v) is a step of adjusting the pH of the reaction solution using an aqueous acetic acid solution.
  • step (v) is a step of adjusting the pH of the reaction solution using an aqueous acetic acid solution.
  • [A58] (vi) The manufacturing method of any one of [A7] to [A57], comprising a step of rinsing the activated carbon filter.
  • a method for producing [A58] comprising step (i) and then step (vi).
  • [A60] The production method of [A58] or [A59], wherein a histidine buffer is used in step (vi).
  • step (vi) The production method of any one of [A58] to [A60], wherein 8.5 mmol/L L-histidine buffer is used in step (vi).
  • [A62] The method for producing any one of [A7] to [A61], wherein the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate is in the range of 7 to 8.
  • [A63] The method for producing any one of [A7] to [A62], wherein the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate is in the range of 7.5 to 8.
  • [A64] The method for producing any one of [A7] to [A63], wherein the antibody is an anti-GPR20 antibody.
  • [A65] A method for producing [A64], wherein the anti-GPR20 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 472 of SEQ ID NO: 1 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 2.
  • [A66] The method for producing either one of [A64] or [A65], wherein the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-GPR20 antibody is deleted.
  • [A67] The method for producing any one of [A7] to [A63], wherein the antibody is an anti-CD37 antibody.
  • [A68] A method for producing [A67], wherein the anti-CD37 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 468 of SEQ ID NO: 3 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 4.
  • [A69] A method for producing [A67] or [A68], in which the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-CD37 antibody is deleted.
  • [A70] The method for producing any one of [A7] to [A63], wherein the antibody is an anti-MUC1 antibody.
  • [A71] A method for producing [A70], wherein the anti-MUC1 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 447 of SEQ ID NO:5 or the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 447 of SEQ ID NO:6, and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 219 of SEQ ID NO:7.
  • [A72] A method for producing [A70] or [A71], wherein the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-MUC1 antibody is deleted.
  • [A74] A method for producing [A73], wherein the anti-HER2 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 449 of SEQ ID NO: 8 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 214 of SEQ ID NO: 9.
  • [A75] The method for producing [A73] or [A74], wherein the anti-HER2 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 8 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9.
  • [A76] The method for producing any one of [A7] to [A63], wherein the antibody is an anti-HER3 antibody.
  • [A77] The method for producing [A76], wherein the anti-HER3 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 12 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 13.
  • [A78] A method for producing either one of [A76] or [A77], wherein the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-HER3 antibody is deleted.
  • [A79] The method for producing any one of [A7] to [A63], wherein the antibody is an anti-CDH6 antibody.
  • [A80] A method for producing [A79], wherein the anti-CDH6 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 of SEQ ID NO: 16 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 of SEQ ID NO: 17.
  • [A81] A method for producing [A79] or [A80], in which the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-CDH6 antibody is deleted.
  • [A83] The method for producing any one of [A7] to [A61] and [A82], wherein the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate is in the range of 3.5 to 4.
  • [A84] The method for producing any one of [A7] to [A61], [A82] and [A83], wherein the antibody is an anti-TROP2 antibody.
  • a method for producing [A84], wherein the anti-TROP2 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 470 of SEQ ID NO: 10 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 of SEQ ID NO: 11.
  • [A86] A method for producing [A84] or [A85], in which the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-TROP2 antibody is deleted. [A87] The method for producing any one of [A7] to [A61], [A82] and [A83], wherein the antibody is an anti-B7-H3 antibody. [A88] A method for producing [A87], wherein the anti-B7-H3 antibody is an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 of SEQ ID NO: 14 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 of SEQ ID NO: 15.
  • [A89] A method for producing [A87] or [A88], in which the lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain of the anti-B7-H3 antibody is deleted.
  • [A90] A method for producing any one of [A7] to [A89], characterized in that it does not include a purification step by chromatography.
  • An antibody-drug conjugate is produced by any one of the production methods [A7] to [A92], and further (vii) adding a buffer solution to the solution containing the antibody-drug conjugate; (viii) concentrating the solution containing the antibody-drug conjugate; and (ix) adjusting the solution containing the antibody-drug conjugate to a predetermined pH; At least one step selected from the group consisting of: and, (x) adding an excipient to the solution containing the antibody-drug conjugate; By carrying out a process including A method for making a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate, a buffer, and an excipient.
  • [A94] The method for producing [A93], wherein the buffer solution is a histidine buffer solution.
  • [A95] The method for producing [A93] or [A94], wherein the excipient is sucrose.
  • [A96] The method for producing [A93] or [A94], wherein the excipient is trehalose.
  • a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate, a buffer solution, and an excipient is produced by any one of the production methods of [A93] to [A96], and further comprising: (xi) adding a surfactant to the pharmaceutical composition; By carrying out a process including A method for making a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate, a buffer, an excipient, and a surfactant.
  • [A98] The method for producing [A97], wherein the surfactant is polysorbate 80.
  • [A99] The method for producing [A97], wherein the surfactant is polysorbate 20.
  • [A100] The method for producing any one of [A93] to [A99], wherein the pharmaceutical composition contains 0.3% or less of a by-product derived from compound (2).
  • [A101] An activated carbon material for removing by-products from an exatecan compound, comprising activated carbon having a surface area of 10-10000 m 2 /g.
  • An activated carbon material according to [A101], wherein the activated carbon contained therein has an average particle size of 2 ⁇ m or more.
  • the purification step using an activated carbon material included in the manufacturing method of the present invention can efficiently remove by-products derived from the highly active exatecan compound derived from the exatecan derivative of DXd-ADC.
  • a part of the target antibody-drug conjugate may be adsorbed on the activated carbon, but it is possible to recover the antibody-drug conjugate from the activated carbon by rinsing with a buffer solution without elution of by-products derived from the exatecan compound.
  • the purification step included in the manufacturing method of the present invention can reduce the amount of waste liquid containing highly active impurities compared to existing purification methods.
  • the present invention can provide an efficient manufacturing method for antibody-drug conjugates and pharmaceutical compositions containing antibody-drug conjugates. According to the purification step included in the manufacturing method of the present invention, low molecular weight impurities can be removed.
  • FIG. 1 shows the by-product concentration and protein recovery rate derived from compound (2) with and without an activated carbon filter in the filtration process of a reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate.
  • FIG. 1 shows the concentration of by-products derived from compound (2) and the protein recovery rate when a reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate was passed through an activated carbon filter at liquid temperatures of 0° C. and 30° C. in the filtration process.
  • FIG. 1 shows the concentration of by-products derived from compound (2) and the protein recovery rate when a reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate was passed through an activated carbon filter at pH 4.0 and 6.0 in the filtration process.
  • FIG. 1 shows the concentration of by-products derived from compound (2) and the protein recovery rate when the by-products derived from compound (2) were made highly concentrated and passed through an activated carbon filter in the filtration process of a reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate.
  • FIG. 1 shows the concentration of by-products derived from compound (2) and the protein recovery rate when an acetate buffer solution and a phosphate buffer solution were passed through an activated carbon filter in the filtration process of a reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate.
  • FIG. 1 shows the by-product concentration and protein recovery rate derived from compound (2) in the presence or absence of an additive (polysorbate 20) during the filtration process of a reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate.
  • FIG. 1 shows the concentration of by-products derived from compound (2) and the protein recovery rate when the activated carbon filter was rinsed with a buffer solution in the filtration step of a reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate.
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 1) of the anti-GPR20 antibody heavy chain (h046-H4e).
  • FIG. 2 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 2) of the anti-GPR20 antibody light chain (h046-L7).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO:3) of the anti-CD37 antibody heavy chain (hmAb-H541).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 4) of the anti-CD37 antibody light chain (hmAb-L11).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence of anti-MUC1 antibody heavy chain (N54Q) (SEQ ID NO:5).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 6) of the anti-MUC1 antibody heavy chain (PankoMab).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 7) of the anti-MUC1 antibody light chain (N54Q and PankoMab).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence of the anti-HER2 antibody heavy chain (SEQ ID NO: 8).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence of the anti-HER2 antibody light chain (SEQ ID NO: 9).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 10) of the anti-TROP2 antibody heavy chain (hTINA1-H1).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 11) of the anti-TROP2 antibody light chain (hTINA1-L1).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence of the anti-HER3 antibody heavy chain (SEQ ID NO: 12).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence of the anti-HER3 antibody light chain (SEQ ID NO: 13).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 14) of the anti-B7-H3 antibody heavy chain (M30-H1).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 15) of the anti-B7-H3 antibody light chain (M30-L4).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 16) of the anti-CDH6 antibody heavy chain (hH01).
  • FIG. 1 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 17) of the anti-CDH6 antibody light chain (hL02).
  • FIG. 1 shows the concentration of by-products derived from compound (2) and the protein recovery rate when an activated carbon filter was rinsed with a buffer solution in the filtration step of a reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate.
  • FIG. 1 shows the concentration of by-products derived from compound (2) and the protein recovery rate when an activated carbon filter was rinsed with a buffer solution in the filtration step of a reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate.
  • FIG. 1 shows the concentration of by-products derived from compound (2) and the protein recovery rate when the activated carbon filter was rinsed with a buffer solution in the filtration step of a reaction solution containing an anti-MUC1 antibody-drug conjugate.
  • This figure shows the by-product concentration and protein recovery rate derived from compound (2) when the activated carbon filter was washed with 15 mL of aqueous polysorbate 80 solution before use in the filtration process of a reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate.
  • This figure shows the by-product concentration and protein recovery rate derived from compound (2) when the activated carbon filter was washed with 40 mL of polysorbate 80 aqueous solution before use in the filtration process of a reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate.
  • antibody refers to a monoclonal antibody, a polyclonal antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, a human antibody, a multispecific antibody (including a bispecific antibody) formed from at least two intact antibodies, an Fc fusion protein, and a functional fragment of an antibody exhibiting biological activity.
  • monoclonal antibody refers to an antibody derived from a single clone, including any eukaryotic, prokaryotic, or phage clone, and is not limited to antibodies produced by hybridoma technology.
  • the term "functional antibody fragment” refers to an antibody fragment that exhibits at least a part of the function exhibited by the original antibody.
  • “functional antibody fragments” include, but are not limited to, Fab, F(ab') 2 , scFv, Fab', and single-chain immunoglobulin.
  • Such antibody functional fragments may be obtained by treating a full-length antibody protein molecule with an enzyme such as papain or pepsin, as well as recombinant proteins produced in suitable host cells using recombinant genes.
  • “functional antibody fragments” those that have binding activity to antigens are referred to as "antigen-binding antibody fragments”.
  • antibody-drug conjugate refers to a complex of an antibody and a drug, typically a complex in which a drug is linked to an antibody via a linker.
  • the drug is not particularly limited, but a drug having cytotoxic activity (e.g., exatecan, described below, etc.) is typically used.
  • the linker may contain a cleavable unit, and examples of the cleavable unit include disulfide-containing linkers that can be cleaved by disulfide exchange, acid-labile linkers that can be cleaved at acidic pH, and linkers that can be cleaved by hydrolases, esterases, peptidases, or glucoronidases (e.g., peptide linkers, glucoronide linkers), etc.
  • disulfide-containing linkers that can be cleaved by disulfide exchange
  • acid-labile linkers that can be cleaved at acidic pH
  • linkers that can be cleaved by hydrolases, esterases, peptidases, or glucoronidases (e.g., peptide linkers, glucoronide linkers), etc.
  • Exatecan is a topoisomerase I inhibitor represented by the IUPAC name: (1S,9S)-1-amino-9-ethyl-5-fluoro-1,2,3,9,12,15-hexahydro-9-hydroxy-4-methyl-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione, and the chemical name: (1S,9S)-1-amino-9-ethyl-5-fluoro-2,3-dihydro-9-hydroxy-4-methyl-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13(9H,15H)-dione.
  • Exatecan is represented by the following formula (5):
  • camptothecin derivative with antitumor effects represented by the formula:
  • a "by-product derived from an exatecan compound” refers to a by-product that contains at least the exatecan structure and is generated during the process of producing an antibody-drug conjugate that has as its components an antibody and an exatecan derivative.
  • the by-products derived from compound (2) include, but are not limited to, dimers, trimers, and multimers of trimers or more in which compound (2) is bound intermolecularly, as well as adducts of other molecules (e.g., N-hydroxysuccinimide) to the maleimide moiety of compound (2), oxidized forms of compound (2), reduced forms of compound (2), and linkers in which the exatecan moiety is cleaved at the hemiaminal moiety.
  • the by-products derived from compound (2) contain highly active exatecan derivatives in their structure, and are therefore one of the important control items in the production of antibody-drug conjugates.
  • the purification step included in the production method of the present invention can remove host cell-derived impurities (host cell proteins; HCPs) such as proteins and DNA, target substance-derived impurities (aggregates, related substances, etc.), and virus-like particles present in the culture supernatant of an antibody produced by a production system using cells as hosts, in the same manner as the by-products derived from compound (2).
  • host cell-derived impurities host cell proteins; HCPs
  • target substance-derived impurities aggregates, related substances, etc.
  • virus-like particles present in the culture supernatant of an antibody produced by a production system using cells as hosts
  • low molecular weight impurities include tris(2-carboxyethyl)phosphine (hereinafter also referred to as “TCEP”) and N-acetylcysteine (hereinafter also referred to as “NAC”).
  • TCEP tris(2-carboxyethyl)phosphine
  • NAC N-acetylcysteine
  • activated carbon material means any substance composed of or containing carbon, including activated carbon.
  • activated carbon or “activated charcoal” refers to a carbonaceous material that has been treated to enhance its pore structure.
  • Activated carbons are porous solids with very high surface areas. They can be obtained from a variety of sources, including coal, wood, coconut shells, nut shells, and peat. Activated carbons can be produced from these materials using physical activation, which involves heating in a controlled environment, or chemical activation, which uses strong acids, bases, or oxidizing agents. The activation process creates a porous structure with a high surface area that gives the activated carbon high impurity clearance capacity. In contrast to most other adsorbent materials, activated carbon is believed to interact with molecules using relatively weak van der Waals forces.
  • the activated carbon used in the purification process of the present invention may be one type of activated carbon alone or two or more types of activated carbons, either alone or in mixtures.
  • an “activated carbon filter” is a filter that contains activated carbon material.
  • it is a depth filter that is filled with activated carbon material in advance and formed as an integrated unit.
  • process liquid a mixed liquid that contains the substance to be removed, and then the activated carbon material is removed using a filter.
  • the filter There are no particular limitations on the filter that can be used in this case, but examples include depth filters, Celite filtration filters, and centrifugal filtration filters.
  • the term “activated carbon filter” is used in both the narrow and broad senses.
  • depth filter refers to a series of serially arranged filters with decreasing pore size used to remove particles from solutions containing antibody-drug conjugates.
  • the three-dimensional matrix of a depth filter forms a labyrinth-like path through which a solution containing antibody-drug conjugates passes, adsorbing and mechanically trapping particles randomly throughout the depth of the matrix.
  • Various depth filters are constructed from activated charcoal, rolled cotton, polypropylene, rayon cellulose, glass fiber, sintered metal, porcelain, diatomaceous earth, or other known components.
  • buffer refers to a solution in which the change in pH due to the addition or release of an acidic or basic substance is leveled out by a dissolved buffer substance. Any buffer substance having such properties can be used. In general, a pharma- ceutically acceptable buffer substance is used.
  • the buffer used in the present invention is not particularly limited, and examples of the buffer that can be used include a phosphate buffer consisting of phosphoric acid and/or its salts, an acetate buffer consisting of acetic acid and its salts, a histidine buffer consisting of histidine and/or its salts, a citric acid buffer consisting of citric acid and/or its salts, a morpholine buffer, a 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid buffer, a glycine buffer, a tris(hydroxymethyl)aminomethane (TRIS) buffer, a piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid) (hereinafter also referred to as "PIPES”) buffer, and a 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazine ethanesulfonic acid (hereinafter also referred to as "HEPES”) buffer.
  • the buffers used in the present invention may optionally contain additional salts, such as sodium chloride
  • chelating agent refers to a bidentate or multidentate ligand having at least two groups that can bind to a metal ion (preferably a divalent or polyvalent metal ion).
  • groups that can bind to a metal ion include a carboxy group, a hydroxy group, and an amino group.
  • the chelating agent used in the present invention is not particularly limited and can be appropriately selected from among chelating agents commonly used by those skilled in the art.
  • chelating agent examples include EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), DOTA (1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid), HEDTA (N-(2-hydroxyethyl)ethylenediamine-N,N',N'-triacetic acid), DHEDDA (dihydroxyethylethylenediaminediacetic acid), 1,3-PDTA (1,3-propanediaminetetraacetic acid), DTPA (diethylenediaminetetraacetic acid), and the like.
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • DOTA 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid
  • HEDTA N-(2-hydroxyethyl)ethylenediamine-N,N',N'-triacetic acid
  • DHEDDA dihydroxyethylethylenediaminediacetic acid
  • nitrilotriaminepentaacetic acid nitrilotriaminepentaacetic acid
  • TTHA triethylenetetramine-N,N,N',N'',N-hydroxy'''-hexaacetic acid
  • NTA nitrilotriacetic acid
  • gluconic acid HIMDA (hydroxyethyliminodiacetic acid)
  • ASDA L-aspartic acid diacetic acid
  • NTMP nitrilotrismethylenephosphonic acid
  • HEDP 1-hydroxyethylidene-1,1-diphosphonic acid
  • surfactant refers to a substance that has a hydrophilic group and a hydrophobic group and is used as one of the components of a pharmaceutical preparation.
  • the surfactants used in the present invention are not particularly limited, but examples thereof include polysorbates (including polysorbate 80 (Tween 80 (registered trademark)), polysorbate 20 (Tween 20 (registered trademark)), and polysorbate 60 (Tween 60 (registered trademark))), polyoxyethylene (160) polyoxypropylene (30) glycol, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 60, polyoxyethylene castor oil, sodium lauryl sulfate, polyoxyethylene-sorbitan fatty acid ester, polyethylene-polypropylene glycol, polyoxyethylene-stearic acid, polyoxyethylene alkyl ethers (e.g., polyoxyethylene monolauryl ether, alkylphenyl polyoxy-ethylene ether (Triton-X), polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymers (pol
  • gel filtration chromatography refers to a liquid chromatography technique in which a column is filled with a porous gel, and the components contained therein are separated by the molecular weight difference due to the molecular sieving effect.
  • Gel filtration chromatography is not only used for the precise separation of biological components such as proteins, peptides, nucleic acids, and polysaccharides, but is also widely used for molecular weight measurement.
  • Gel filtration chromatography is also used for desalting and buffer exchange of samples for ion exchange chromatography, and in some manufacturing applications, for preparing the components of final purified products.
  • ion exchange chromatography refers to a method of separating components that utilizes the difference in charge state (electrostatic interaction) in the mobile phase/sample relative to the stationary phase in a column, and is primarily used for the analysis of ionic compounds.
  • anion exchange chromatography anion exchange chromatography and cation exchange chromatography, and the stationary phase used varies depending on the ionic strength of the ion exchange group.
  • cation exchange material or “CEX (;Cation EXchange) material” are used interchangeably to refer to a solid phase that is negatively charged and thus has free cations for exchange with cations in an aqueous solution that has been passed over or through the solid phase.
  • anion exchange material or “AEX (;Anion EXchange) material” are used interchangeably to refer to a positively charged solid phase that has one or more positively charged ligands, such as primary, secondary, tertiary or quaternary amino groups, attached to the solid phase.
  • Strong ion-exchange functional groups are always ionized, while weak ion-exchange functional groups change the ion dissociation state depending on the pH of the mobile phase.
  • the appropriate stationary phase type can be selected according to the charge and characteristics of the target components to be analyzed.
  • Examples of stationary phases for cation exchange chromatography include sulfonic acid as a strong ion-exchange functional group and carboxylic acid as a weak ion-type functional group.
  • stationary phases for anion exchange chromatography include quaternary ammonium as a strong ion-exchange functional group and tertiary amine as a weak ion-type functional group.
  • hydrophobic interaction chromatography refers to a process for separating molecules based on their hydrophobicity, i.e., their ability to adsorb to hydrophobic surfaces from an aqueous solution. Hydrophobic interaction chromatography typically relies on differences in hydrophobic groups on the surface of solute molecules. These hydrophobic groups have a tendency to bind to hydrophobic groups on the surface of an insoluble matrix. HIC uses a more polar, less denaturing environment than reversed-phase liquid chromatography and is therefore commonly used in antibody purification, often in combination with ion exchange or gel filtration chromatography.
  • affinity chromatography refers to a protein separation technique in which a target protein (e.g., an antibody or a protein containing an Fc region of interest) is specifically bound to a ligand specific for the target protein.
  • a target protein e.g., an antibody or a protein containing an Fc region of interest
  • a ligand is Protein A or Protein G, or a functional variant thereof, which is covalently attached to a chromatographic solid phase material and binds to antibodies in solution when the antibody solution contacts the chromatographic solid phase material.
  • excipient refers to a substance that is added to a pharmaceutical product to achieve a certain size or concentration in order to improve the ease of molding, handling, and administration.
  • excipients are not particularly limited as long as they exhibit the effects of the present invention, but examples include sucrose, trehalose, sorbitol, etc.
  • removal As used herein, “removal,” “reduction,” and “clearance” are used interchangeably and refer to lowering the amount of one or more impurities in a sample containing the antibody-drug conjugate to be purified.
  • purify or “remove impurities” are used interchangeably and refer to reducing by removal one or more impurities from a sample, for example, reducing the impurities in a sample to 1 ⁇ M or less, 0.5 ⁇ M or less, 0.25 ⁇ M or less, or 0.1 ⁇ M or less.
  • the term “purification process” refers to a process for purifying a sample or a process for removing impurities from a sample.
  • the term “purification process” refers to a process for reducing one or more impurities by removing them from a sample, for example, a process for reducing the impurities contained in a sample to 1 ⁇ M or less, 0.5 ⁇ M or less, 0.25 ⁇ M or less, or 0.1 ⁇ M or less.
  • irreversible adsorption means that a solute is irreversibly adsorbed to activated carbon.
  • irreversibly means that a solute once adsorbed cannot easily dissociate from activated carbon.
  • reversible adsorption means that a solute is reversibly adsorbed to activated carbon.
  • Reversibly means that a solute once adsorbed can dissociate from activated carbon and be adsorbed.
  • “Irreversible adsorption” and “reversible adsorption” are not absolute phenomena between activated carbon and solute, but are relative phenomena that depend on the affinity (solvation power) between the eluent and the solute with respect to the adsorption of the activated carbon and solute.
  • the solute when rinsing activated carbon with a certain eluent, the solute may be irreversibly adsorbed without being eluted, and even if the same activated carbon and solute are used, when rinsing activated carbon with a different eluent, the solute may be eluted and reversibly adsorbed.
  • a manufacturing method, pharmaceutical composition, etc. that "comprises" one or more recited elements may also include other elements that are not recited.
  • a numerical range (e.g., "X to Y”) includes the starting point, the ending point, and all values within the range that define the range.
  • Antibody-drug conjugates are not particularly limited.
  • the antibody-drug conjugates in which the drug is a topoisomerase I inhibitor the drug represented by the following formula:
  • Preferred antibody-drug conjugates produced according to the present invention include The following formula (1)
  • the antibody-drug conjugate is an antibody-drug conjugate in which a drug linker represented by the formula:
  • the partial structure of the antibody-drug conjugate consisting of a linker and a drug is called the "drug linker.”
  • This drug linker is bonded to a thiol group (in other words, the sulfur atom of a cysteine residue) generated at the disulfide bond site between the antibody chains (two sites between the heavy chains and two sites between the heavy chains and the light chains).
  • the drug linker of the antibody-drug conjugates produced by the present invention is comprised of the topoisomerase I inhibitor exatecan.
  • camptothecin derivative with antitumor effects represented by the formula:
  • the antibody-drug conjugate produced by the present invention comprises: The following equation (6)
  • n is synonymous with the so-called average number of drug bonds (DAR; Drug-to-Antibody Ratio), and indicates the average number of drug linkers bound per antibody.
  • the number of drugs or attached drug linkers per antibody molecule in the antibody-drug conjugate produced in the present invention is preferably an integer in the range of 2 to 8, more preferably 2, 4, 6 or 8, and even more preferably 4 or 8.
  • the antibody-drug conjugate produced by the present invention is expressed by the following formula (7) after being transferred into cancer cells.
  • the compound represented by formula (7) is believed to be the main component of the antitumor activity of the antibody-drug conjugate produced by the present invention, and has been confirmed to have a topoisomerase I inhibitory effect (Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research, 2016, Oct. 15; 22(20): 5097-5108, Epub. 2016 Mar. 29).
  • the compound represented by formula (7) is, for example, the following formula (8), which is believed to be generated by cleavage of the linker portion of the antibody-drug conjugate produced by the present invention.
  • the antibody-drug conjugate produced by the present invention is also known to have a bystander effect (Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046). This bystander effect is exerted when the antibody-drug conjugate produced by the present invention is internalized into a target-expressing cancer cell, and the compound represented by formula (7) is released, exerting an antitumor effect on nearby cancer cells that do not express the target.
  • the antibody-drug conjugates produced by the present invention include, for example, antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugates described in WO 2019/065964, U.S. Patent Publication No. 2020/0261594, WO 2020/196474, or U.S. Patent Publication No. 2022/0168440 (the disclosures of which are incorporated herein by reference), or antibody-cyclic dinucleotide derivative conjugates described in WO 2020/050406, U.S. Patent Publication No. 2022/0008549, WO 2021/177438, or U.S. Patent Publication No. 2023/0330248 (the disclosures of which are incorporated herein by reference).
  • GGFG represents an amino acid sequence linked by peptide bonds consisting of glycine-glycine-phenylalanine-glycine
  • -(NH-DX) is a compound of the formula:
  • the antibodies used in the preparation of the antibody-drug conjugates of the present invention may be derived from any species, but are preferably derived from human, rat, mouse, or rabbit. When the antibody is derived from a species other than human, it is preferably chimerized or humanized using well-known techniques.
  • the antibodies of the present invention may be polyclonal or monoclonal, but are preferably monoclonal.
  • the antibody used in the production of the antibody-drug conjugate of the present invention is preferably one that has the property of targeting cancer cells, and preferably has the ability to recognize cancer cells, the ability to bind to cancer cells, the ability to be taken up and internalized within cancer cells, and/or cytocidal activity against cancer cells.
  • Binding of antibodies to cancer cells can be confirmed using flow cytometry.
  • Antibody uptake into cancer cells can be confirmed using (1) an assay in which a secondary antibody (fluorescently labeled) that binds to the therapeutic antibody is used to visualize the antibody taken up into the cell using a fluorescent microscope (Cell Death and Differentiation (2008) 15, 751-761), (2) an assay in which a secondary antibody (fluorescently labeled) that binds to the therapeutic antibody is used to measure the amount of fluorescence taken up into the cell (Molecular Biology of the Cell Vol.
  • the antitumor activity of an antibody can be confirmed in vitro by measuring its inhibitory activity against cell proliferation.
  • a cancer cell line that overexpresses the antibody's target protein can be cultured, and the antibody can be added to the culture system at various concentrations to measure the inhibitory activity against focus formation, colony formation, and spheroid proliferation.
  • the antitumor activity can be confirmed, for example, by administering the antibody to nude mice transplanted with a cancer cell line that highly expresses the target protein, and measuring changes in the cancer cells.
  • the antibody itself has an antitumor effect, but since the antibody-drug conjugate is bound to a compound that exerts an antitumor effect, the antibody itself does not necessarily have an antitumor effect.
  • the antibody For the purpose of exerting the cytotoxicity of the antitumor compound specifically and selectively in cancer cells, it is important and preferable that the antibody has the property of being internalized and transferred into the cancer cell.
  • the antibodies used in the manufacture of the antibody-drug conjugate of the present invention can be obtained by known means. For example, they can be obtained by immunizing an animal with an antigenic polypeptide and collecting and purifying the antibodies produced in the body using methods commonly used in this field.
  • the origin of the antigen is not limited to humans, and animals can also be immunized with antigens derived from animals other than humans, such as mice and rats.
  • antibodies applicable to human diseases can be selected by testing the cross-reactivity of the obtained antibodies that bind to heterologous antigens with human antigens.
  • hybridomas can be established by fusing antibody-producing cells that produce antibodies against an antigen with myeloma cells, thereby obtaining monoclonal antibodies.
  • Antigens can be obtained by genetically manipulating a gene that codes for an antigen protein to produce it in a host cell. Specifically, a vector capable of expressing an antigen gene is prepared, introduced into a host cell to express the gene, and the expressed antigen is purified. Antibodies can also be obtained by immunizing an animal with the above genetically engineered antigen-expressing cells or a cell line expressing the antigen.
  • the antibody used in the production of the antibody-drug conjugate of the present invention is preferably a genetically engineered antibody that has been artificially modified for the purpose of reducing heterologous antigenicity to humans, such as a chimeric antibody or a humanized antibody, or an antibody that has only the genetic sequence of an antibody of human origin, i.e., a human antibody.
  • a genetically engineered antibody that has been artificially modified for the purpose of reducing heterologous antigenicity to humans, such as a chimeric antibody or a humanized antibody, or an antibody that has only the genetic sequence of an antibody of human origin, i.e., a human antibody.
  • These antibodies can be produced using known methods.
  • Chimeric antibodies include antibodies whose variable and constant regions are of different species, such as chimeric antibodies in which the variable region of a mouse or rat antibody is joined to a constant region of human origin (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 6851-6855, (1984)).
  • humanized antibodies include antibodies in which only the complementarity determining region (CDR) of a heterologous antibody has been incorporated into an antibody of human origin (Nature (1986) 321, p. 522-525), antibodies in which not only the CDR sequence of a heterologous antibody but also some of the amino acid residues in the framework of the heterologous antibody have been transplanted into a human antibody using the CDR grafting method (International Publication No. 90/07861), and antibodies humanized using a gene conversion mutagenesis strategy (U.S. Patent No. 5,821,337).
  • CDR complementarity determining region
  • Human antibodies were produced using human antibody-producing mice carrying human chromosomal fragments containing the genes for the heavy and light chains of human antibodies (Tomizuka, K. et al., Nature Genetics (1997) 16, p. 133-143; Kuroiwa, Y. et al., Nucl. Acids Res. (1998) 26, p. 3447-3448; Yoshida, H. et al., Animal Cell Techn see, for example, Ecology: Basic and Applied Aspects vol.10, p.69-73 (Kitagawa, Y., Matsuda, T. and Iijima, S. eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999; Tomizuka, K.
  • antibodies obtained by phage display selected from a human antibody library can also be used (see Wormstone, I. M. et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002) 43 (7), p. 2301-2308; Mé, S. et al., Briefings in Functional Genomics and Proteomics (2002), 1 (2), p. 189-203; Siriwardena, D. et al., Ophthalmology (2002) 109 (3), p. 427-431, etc.).
  • the antibody used in the manufacture of the antibody-drug conjugate of the present invention also includes modified antibodies.
  • the modified antibody means an antibody according to the present invention that has been chemically or biologically modified. Chemical modifications include those having a chemical moiety bonded to the amino acid backbone, or a chemical moiety bonded to an N- or O-linked carbohydrate chain. Biological modifications include those that have been post-translationally modified (e.g., addition of an N- or O-linked glycan, processing of the N- or C-terminus, deamidation, isomerization of aspartic acid, oxidation of methionine, etc.), and those that have been expressed using a prokaryotic host cell to add a methionine residue to the N-terminus.
  • Chemical modifications include those having a chemical moiety bonded to the amino acid backbone, or a chemical moiety bonded to an N- or O-linked carbohydrate chain.
  • Biological modifications include those that have been post-translationally modified (e.g., addition
  • Modifications also include those labeled to enable detection or isolation of the antibody or antigen according to the present invention, such as enzyme-labeled, fluorescent-labeled, and affinity-labeled antibodies.
  • modified antibodies according to the present invention are useful for improving antibody stability and blood retention, reducing antigenicity, and detecting or isolating antibodies or antigens.
  • antibody-dependent cellular cytotoxicity can be enhanced by adjusting the sugar chain modification bound to the antibody of the present invention (glycosylation, defucosylation, etc.).
  • sugar chain modification bound to the antibody of the present invention glycosylation, defucosylation, etc.
  • Known techniques for adjusting the sugar chain modification of antibodies include, but are not limited to, those disclosed in International Publication Nos. 99/54342, 00/61739, and 02/31140.
  • the antibodies of the present invention also include antibodies in which the sugar chain modification has been adjusted.
  • the antibodies of the present invention also include antibodies that have been modified in this way and functional fragments of the antibodies, and also include deletion bodies in which one or two amino acids are deleted from the carboxyl terminus of the heavy chain, and deletion bodies that have been amidated (for example, heavy chains in which the proline residue at the carboxyl terminus is amidated).
  • deletion bodies in which one or two amino acids are deleted from the carboxyl terminus of the heavy chain and deletion bodies that have been amidated (for example, heavy chains in which the proline residue at the carboxyl terminus is amidated).
  • the deletion of the carboxyl terminus of the heavy chain of the antibody of the present invention is not limited to the above types.
  • the two heavy chains constituting the antibody of the present invention may be any one type of heavy chain selected from the group consisting of full-length and the above deletions, or a combination of any two types.
  • the quantitative ratio of each deletion may be influenced by the type and culture conditions of the cultured mammalian cells that produce the antibody of the present invention, but the antibody of the present invention is preferably one in which one amino acid residue is deleted at the carboxyl terminus of both of the two heavy chains.
  • the isotype of the antibody according to the present invention can be, for example, IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), and preferably IgG1 or IgG2.
  • IgG1 is used as the isotype of the antibody according to the present invention
  • the IgG1 antibody may have a mutation, and the effector function can be adjusted by substituting a portion of the amino acid residues in the constant region (see WO88/007089, WO94/28027, WO94/29351).
  • IgG1 mutants with reduced effector function examples include IgG1 LALA mutations (IgG1-L234A, L235A) and IgG1 LALA-PA mutations (IgG1-L234A, L235A, P329A).
  • the above L234A, L235A, and P329A indicate the substitution of leucine at positions 234 and 235 with alanine, and the substitution of proline at position 329 with alanine, respectively, as identified by the EU index (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 63, No. 1 (May 15, 1969), pp. 78-85).
  • the antibody in the antibody-drug conjugate used in the present invention is not particularly limited, but examples thereof include anti-HER2 antibody, anti-TROP2 antibody, anti-HER3 antibody, anti-B7-H3 antibody, anti-GPR20 antibody, anti-CDH6 antibody, anti-MUC1 antibody, anti-CD37 antibody, anti-CD3 antibody, anti-CD30 antibody, anti-CD33 antibody, anti-CD56 antibody, anti-CD98 antibody, anti-DR5 antibody, anti-EGFR antibody, anti-EPHA2 antibody, anti-FGFR2 antibody, anti-FGFR4 antibody, anti-FOLR1 antibody, anti-VEGF antibody, anti-CD20 antibody, anti Examples of antibodies include CD22 antibodies, anti-CD70 antibodies, anti-PSMA antibodies, anti-CEA antibodies, anti-Mesothelin antibodies, anti-A33 antibodies, anti-CanAg antibodies, anti-Cripto antibodies, anti-G250 antibodies, anti-GPNMB antibodies, anti-Integrin antibodies, anti-Tenascin-C antibodies, and anti
  • anti-HER2 antibody refers to an antibody that specifically binds to HER2 (Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 2; ErbB-2) and preferably has the activity of being internalized into HER2-expressing cells by binding to HER2.
  • anti-HER2 antibodies examples include trastuzumab (U.S. Pat. No. 5,821,337) and pertuzumab (International Publication No. WO 01/00245), with trastuzumab being preferred.
  • anti-TROP2 antibody refers to an antibody that specifically binds to TROP2 (TACSTD2: Tumor-associated calcium signal transducer 2; EGP-1), and preferably has the activity of being internalized into TROP2-expressing cells by binding to TROP2.
  • TROP2 Tumor-associated calcium signal transducer 2
  • an anti-TROP2 antibody is hTINA1-H1L1 (International Publication No. 2015/098099).
  • anti-HER3 antibody refers to an antibody that specifically binds to HER3 (Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 3; ErbB-3) and preferably has the activity of being internalized into HER3-expressing cells upon binding to HER3.
  • HER3 Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 3; ErbB-3
  • anti-HER3 antibodies examples include Patritumab (U3-1287), U1-59 (WO 2007/077028), MM-121 (Seribantumab), the anti-ERBB3 antibodies described in WO 2008/100624, RG-7116 (Lumretuzumab) and LJM-716 (Elgemtumab), with Patritumab and U1-59 being preferred.
  • anti-B7-H3 antibody refers to an antibody that specifically binds to B7-H3 (B cell antigen #7 homolog 3; PD-L3; CD276), and preferably has the activity of being internalized into B7-H3-expressing cells by binding to B7-H3.
  • An example of an anti-B7-H3 antibody is M30-H1-L4 (WO 2014/057687).
  • anti-GPR20 antibody refers to an antibody that specifically binds to GPR20 (G protein-coupled receptor 20) and preferably has the activity of being internalized into GPR20-expressing cells by binding to GPR20.
  • An example of an anti-GPR20 antibody is h046-H4e/L7 (WO 2018/135501).
  • anti-CDH6 antibody refers to an antibody that specifically binds to CDH6 (Cadherin-6), and preferably has the activity of being internalized into CDH6-expressing cells by binding to CDH6.
  • An example of an anti-CDH6 antibody is H01L02 (International Publication No. 2018/212136).
  • anti-MUC1 antibody refers to an antibody that specifically binds to MUC1, and preferably has the activity of being internalized into MUC1-expressing cells by binding to MUC1.
  • anti-MUC1 antibodies examples include PankoMab and PankoMab variant (PM-N54Q) (WO 2019/219891).
  • anti-CD37 antibody refers to an antibody that specifically binds to CD37, and preferably has the activity of being internalized into CD37-expressing cells upon binding to CD37.
  • An example of an anti-CD37 antibody is hmAb-H541L11 (WO 2023/068226).
  • the antibodies used in the manufacture of the antibody-drug conjugates of the present invention include, for example, the antibodies described in WO 2014/057687 or U.S. Patent Publication No. 2015/0297748 (the disclosures of which are incorporated herein by reference), WO 2019/065964, U.S. Patent Publication No. 2020/0261594, WO 2020/196474 or U.S. Patent Publication No. 2022/0168440 (the disclosures of which are incorporated herein by reference), or the antibodies described in WO 2020/050406, U.S. Patent Publication No. 2022/0008549, WO 2021/177438 or U.S. Patent Publication No. 2023/0330248 (the disclosures of which are incorporated herein by reference).
  • the drug linker intermediate used in the production of the antibody-drug conjugates of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include the drug linker intermediates used in the production of antibody-drug conjugates described in "2.
  • Antibody-drug conjugates and are preferably compounds represented by the following formula (2):
  • the compound represented by formula (2) can be produced by referring to the descriptions in WO 2014/057687, WO 2015/098099, WO 2015/115091, WO 2015/155998, WO 2019/044947, etc.
  • the drug linker intermediate used in the production of the antibody-drug conjugate of the present invention may be a drug linker described in WO 2019/065964, U.S. Patent Publication No. 2020/0261594, WO 2020/196474, or U.S. Patent Publication No. 2022/0168440. These drug linkers can be produced with reference to the descriptions in the publications, etc.
  • the drug linker intermediate used in the production of the antibody-drug conjugate of the present invention may be a drug linker described in WO 2020/050406, U.S. Patent Publication No. 2022/0008549, WO 2021/177438, or U.S. Patent Publication No. 2023/0330248. These drug linkers can be produced with reference to the descriptions in the publications, etc.
  • the conjugation of the antibody and the drug linker intermediate is carried out by: (ii) reducing the antibody with a reducing agent; (iii) reacting the compound represented by formula (2) with the antibody reduced in step (ii); (iv) adding a reagent having a thiol group to react with the compound represented by formula (2) remaining from step (iii); Includes.
  • the reducing agent used in step (ii) is not particularly limited as long as it can reduce the interchain disulfides of the antibody.
  • tris(2-carboxyethyl)phosphine or a salt thereof, dithiothreitol, or 2-mercaptoethanol can be used.
  • tris(2-carboxyethyl)phosphine or a salt thereof can be used.
  • tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride can be used.
  • equivalent amount of the reducing agent used in step (ii) per antibody molecule (hereinafter, in the present invention, "equivalent amount” means molar equivalent amount) can be appropriately selected depending on the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate to be produced and the type of antibody.
  • the optimal amount of the reducing agent for each antibody used is described below, but the optimal amount is a parameter that can vary depending on the cell line from which the antibody is derived, the production method, etc.
  • the reducing agent can be preferably used in an amount of 4.1 to 5.1 equivalents, more preferably 4.4 to 4.8 equivalents, and even more preferably about 4.6 equivalents per antibody molecule.
  • “about 4.6 equivalents” preferably means 4.5 to 4.7 equivalents, and more preferably 4.6 equivalents.
  • the antibody is an anti-TROP2 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 470 in SEQ ID NO: 10 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 11, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the reducing agent is preferably 1.9 to 2.5 equivalents, more preferably 2.1 to 2.3 equivalents, per antibody molecule.
  • the reducing agent can be preferably used in an amount of 5.5 to 6.5 equivalents, more preferably 5.8 to 6.2 equivalents, and even more preferably about 6 equivalents per antibody molecule.
  • “about 6 equivalents” preferably means 5.9 to 6.1 equivalents, and more preferably 6.0 equivalents.
  • the antibody is an anti-B7-H3 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 14 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 in SEQ ID NO: 15, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the reducing agent is preferably 1.9 to 2.5 equivalents, more preferably 2.1 to 2.3 equivalents per antibody molecule.
  • the reducing agent can be preferably used in an amount of 4.3 to 5.3 equivalents, more preferably 4.6 to 5 equivalents, and even more preferably about 4.75 equivalents per antibody molecule.
  • “about 4.75 equivalents” preferably means 4.65 to 4.85 equivalents, and more preferably 4.75 equivalents.
  • the reducing agent can be preferably used in an amount of 4.3 to 5.3 equivalents, more preferably 4.6 to 5 equivalents, and even more preferably about 4.8 equivalents per antibody molecule.
  • “about 4.8 equivalents” preferably means 4.7 to 4.9 equivalents, and more preferably 4.8 equivalents.
  • the reducing agent can be preferably used in an amount of 4.3 to 5.3 equivalents, more preferably 4.6 to 5.0 equivalents, and even more preferably about 4.75 equivalents per antibody molecule.
  • “about 4.75 equivalents” preferably means 4.65 to 4.85 equivalents, and more preferably 4.75 equivalents.
  • the reducing agent can be preferably used in an amount of 4.3 to 5.3 equivalents, more preferably 4.6 to 5.0 equivalents, and even more preferably about 4.75 equivalents per antibody molecule.
  • “about 4.75 equivalents” preferably means 4.65 to 4.85 equivalents, and more preferably 4.75 equivalents.
  • Step (ii) can preferably be carried out in a buffer solution.
  • the pH of the buffer used in step (ii) is preferably 6 to 8, more preferably 6.5 to 7.5, even more preferably 6.9 to 7.4, and even more preferably 7.0 to 7.3.
  • the buffer used in step (ii) is not particularly limited as long as it can be used in reducing the interchain disulfides of the antibody.
  • acetate buffer, histidine buffer, phosphate buffer, PIPES buffer, HEPES buffer, etc. can be used, and preferably acetate buffer, histidine buffer, or phosphate buffer can be used.
  • an acetate buffer adjusted to a pH of 6 to 8 can be preferably used, more preferably an acetate buffer adjusted to a pH of 6 to 8 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, even more preferably an acetate buffer adjusted to a pH of 6.8 to 7.8 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, and even more preferably an acetate buffer adjusted to a pH of 6.8 to 7.8 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, and even more preferably an acetate buffer adjusted to a pH of 6.8 to 7.8 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, and even more preferably an acetate buffer adjusted to a pH of 6.8 to 7.8 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, and even more preferably an acetate buffer adjusted to a pH of 6.8 to 7.8 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used
  • the antibody is an anti-TROP2 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 470 in SEQ ID NO: 10 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 11, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain), preferably, an aqueous solution of L-histidine adjusted to pH 6.4 to 7.4 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, more preferably, an aqueous solution of L-histidine adjusted to pH 6.7 to 7.1 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, and even more preferably, an aqueous solution of L-histidine adjusted to pH 6.9 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphat
  • an acetate buffer adjusted to pH 6 to 8 can be preferably used, more preferably an acetate buffer adjusted to pH 6 to 8 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, even more preferably an acetate buffer adjusted to pH 6.5 to 7.5 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used, and even more preferably an acetate buffer adjusted to pH about 7 with an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate can be used.
  • "about 7" preferably means a range of 6.8 to 7.2, more preferably
  • the antibody is an anti-B7-H3 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 14 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 in SEQ ID NO: 15, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain), preferably, an aqueous L-histidine solution of 0.005 mol/L to 0.3 mol/L can be used, more preferably, an aqueous L-histidine solution of 0.025 mol/L to 0.1 mol/L can be used, and even more preferably, an aqueous L-histidine solution of 0.05 mol/L can be used.
  • the buffer used in step (ii) is preferably a buffer adjusted to pH 6 to 8.
  • a buffer solution adjusted to pH 6.5 to 7.5 can be used, even more preferably, a buffer solution adjusted to pH 6.8 to 7.2 can be used, even more preferably, a buffer solution adjusted to pH 7.0 to 7.1 can be used, even more preferably, an acetate buffer solution, a histidine buffer solution, or a phosphate buffer solution adjusted to pH 7.0 to 7.1 can be used, and even more preferably, a sodium acetate buffer solution, an L-histidine buffer solution, or an aqueous disodium hydrogen phosphate solution adjusted to pH 7.0 to 7.1 can be used.
  • the buffer used in step (ii) is preferably a buffer having a pH of 6 to A buffer solution adjusted to pH 6.8 can be used, more preferably a buffer solution adjusted to pH 6.5 to 7.5 can be used, even more preferably a buffer solution adjusted to pH 6.8 to 7.2 can be used, even more preferably a buffer solution adjusted to pH 7.0 to 7.1 can be used, even more preferably an a
  • the antibody is an anti-CD37 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 468 in SEQ ID NO: 3 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 4, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the buffer used in step (ii) is preferably a buffer adjusted to pH 6 to 8.
  • a buffer solution adjusted to pH 6.5 to 7.5 can be used, even more preferably, a buffer solution adjusted to pH 6.8 to 7.2 can be used, even more preferably, a buffer solution adjusted to pH 7.0 to 7.1 can be used, even more preferably, an acetate buffer solution, a histidine buffer solution, or a phosphate buffer solution adjusted to pH 7.0 to 7.1 can be used, and even more preferably, a sodium acetate buffer solution, an L-histidine buffer solution, or an aqueous disodium hydrogen phosphate solution adjusted to pH 7.0 to 7.1 can be used.
  • the buffer used in step (ii) may contain a buffer derived from the antibody production.
  • the step (ii) is preferably carried out in the presence of a chelating agent.
  • the chelating agent is not particularly limited as long as it can be used in reducing interchain disulfides of an antibody.
  • ethylenediaminetetraacetic acid hereinafter also referred to as "EDTA”
  • diethylenetriaminepentaacetic acid or glycoletherdiaminetetraacetic acid
  • ethylenediaminetetraacetic acid can be used, and preferably ethylenediaminetetraacetic acid can be used.
  • the chelating agent can be used preferably in an amount of 1 to 20 equivalents per antibody molecule, more preferably in an amount of 3 to 8 equivalents per antibody molecule, even more preferably in an amount of 4 to 6 equivalents per antibody molecule, and even more preferably in an amount of 5 equivalents per antibody molecule.
  • the buffer used in step (ii) may contain a surfactant.
  • surfactant refers to a substance that has a hydrophilic group and a hydrophobic group and can be used as one of the components of a pharmaceutical formulation.
  • the surfactant contained in the buffer used in step (ii) is not particularly limited, but examples thereof include polysorbates (including polysorbate 80 (Tween 80), polysorbate 20 (Tween 20) and polysorbate 60 (Tween 60)), polyoxyethylene (160) polyoxypropylene (30) glycol, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 60, polyoxyethylene castor oil, sodium lauryl sulfate, etc., and preferably polysorbate 20 or polysorbate 80.
  • the buffer used in step (ii) contains a surfactant and the type of surfactant can be appropriately selected depending on the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate to be produced and the type of antibody.
  • the antibody is an anti-HER2 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 449 in SEQ ID NO:8 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 214 in SEQ ID NO:9, or an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:8 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:9)
  • the buffer used in step (ii) preferably does not contain a surfactant.
  • the antibody is an anti-TROP2 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 470 in SEQ ID NO: 10 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 11, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the buffer used in step (ii) contains polysorbate 80 and can be suitably used.
  • the buffer used in step (ii) contains polysorbate 20 and can be suitably used.
  • the antibody is an anti-B7-H3 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 14 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 in SEQ ID NO: 15, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the buffer used in step (ii) contains polysorbate 20 and can be suitably used.
  • the buffer used in step (ii) contains polysorbate 80 and can be suitably used.
  • the buffer used in step (ii) contains polysorbate 80 and can be suitably used.
  • the antibody is an anti-MUC1 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 447 in SEQ ID NO:5 or the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 447 in SEQ ID NO:6 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 219 in SEQ ID NO:7, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain), the buffer used in step (ii) contains polysorbate 80 and can be suitably used.
  • the buffer used in step (ii) contains polysorbate 80 and can be suitably used.
  • step (ii) can be appropriately selected depending on the type of antibody in the antibody-drug conjugate composition to be produced.
  • step (ii) can be preferably carried out at an internal temperature of 25 to 50°C.
  • step (ii) can be preferably carried out at -5°C to 35°C, more preferably at 0 to 20°C, even more preferably at 5 to 20°C, and even more preferably at 5 to 10°C or about 10°C.
  • “about 10°C” is preferably 8°C to 12°C, more preferably 9°C to 11°C, and even more preferably 10°C to 11°C, or 10°C.
  • the reaction time in step (ii) can be appropriately selected depending on the type of antibody in the antibody-drug conjugate composition to be produced.
  • the reaction time in step (ii) is preferably 1 to 4 hours.
  • the reaction time in step (ii) is preferably 6 to 50 hours, 12 to 48 hours, 20 to 51 hours, 24 to 48 hours (or 36 to 48 hours), or 48 to 50 hours.
  • step (ii) can be preferably carried out at an internal temperature of 30 to 40°C, more preferably at an internal temperature of about 35°C.
  • “about 35°C” preferably means 33°C to 37°C, more preferably 34°C to 36°C, and even more preferably 35°C.
  • step (ii) can be preferably carried out at about 10°C for 20 hours or more, and inclusive of the upper limit, can be preferably carried out at about 10°C for 20 to 51 hours.
  • step (ii) can be preferably carried out at an internal temperature of 30 to 40°C, more preferably at about 35°C.
  • "about 35°C” preferably means 33°C to 37°C, more preferably 34°C to 36°C, and even more preferably 35°C.
  • step (ii) can be preferably carried out at 5 to 10°C (more preferably, 6°C, 7°C, 8°C, 9°C, or 10°C) for 12 hours or more, or at 5°C for 20 hours or more, and in the form including the upper limit, preferably, it can be carried out at 5 to 10°C (more preferably, 6°C, 7°C, 8°C, 9°C, or 10°C) for 12 hours to 48 hours, or at 5°
  • step (ii) can be preferably carried out at an internal temperature of 25 to 35°C, more preferably at about 30°C.
  • "about 30°C” preferably means 28°C to 32°C, more preferably 29°C to 31°C, and even more preferably 30°C.
  • step (ii) can be preferably carried out at an internal temperature of 25 to 35°C, more preferably at about 30°C.
  • "about 30°C” preferably means 28°C to 32°C, more preferably 29°C to 31°C, and even more preferably 30°C.
  • step (ii) can be preferably carried out at an internal temperature of 25 to 35°C, more preferably at about 30°C.
  • “about 30°C” preferably means 28°C to 32°C, more preferably 29°C to 31°C, and even more preferably 30°C.
  • step (ii) can be preferably carried out at an internal temperature of 25 to 35°C, more preferably at about 30°C.
  • "about 30°C” preferably means 28°C to 32°C, more preferably 29°C to 31°C, and even more preferably 30°C.
  • the equivalent amount per antibody molecule of the compound represented by formula (2) used in step (iii) can be appropriately selected depending on the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate to be produced and the type of antibody.
  • the optimal amount of drug linker for each antibody used is described below, but the optimal amount is a parameter that can vary depending on the cell line from which the antibody is derived, the production method, etc.
  • the antibody is an anti-HER2 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 449 in SEQ ID NO: 8 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 214 in SEQ ID NO: 9, or an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 8 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 9), the compound represented by formula (2) can be preferably used in an amount of 8 to 10 equivalents, more preferably 8.2 to 9.2 equivalents, and even more preferably about 8.7 equivalents per antibody molecule.
  • “about 8.7 equivalents” preferably means 8.5 to 8.9 equivalents, more preferably 8.6 to 8.8 equivalents, and even more preferably 8.7 equivalents.
  • the antibody is an anti-TROP2 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 470 in SEQ ID NO: 10 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 11, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the compound represented by formula (2) is preferably used in an amount of 4 to 5 equivalents, more preferably 4.2 to 4.6 equivalents, and even more preferably 4.4 equivalents per antibody molecule.
  • the compound represented by formula (2) can be used preferably in an amount of 8 to 10 equivalents, more preferably 9 to 10 equivalents, and even more preferably about 9.5 equivalents per antibody molecule.
  • “about 9.5 equivalents” preferably means 9.3 to 9.7 equivalents, more preferably 9.4 to 9.6 equivalents, and even more preferably 9.5 equivalents.
  • the antibody is an anti-B7-H3 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 14 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 in SEQ ID NO: 15, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the compound represented by formula (2) is preferably 4 to 5 equivalents, more preferably 4.2 to 4.6 equivalents, and even more preferably 4.4 equivalents per antibody molecule.
  • the antibody-drug conjugate to be produced is in the range of 7 to 8
  • the antibody is an anti-GPR20 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 472 in SEQ ID NO: 1 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 2, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the compound represented by formula (2) can be used preferably in an amount of 8 to 10 equivalents, more preferably 8.3 to 9.3 equivalents, and even more preferably about 8.9 equivalents per antibody molecule.
  • “about 8.9 equivalents” preferably means 8.7 to 9.1 equivalents, more preferably 8.8 to 9.0 equivalents, and even more preferably 8.9 equivalents.
  • the antibody is an anti-CDH6 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 16 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 in SEQ ID NO: 17, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the compound represented by formula (2) can be used preferably in an amount of 8 to 10 equivalents, more preferably 8.6 to 9.6 equivalents, and even more preferably about 9.1 equivalents per antibody molecule.
  • “about 9.1 equivalents” preferably means 8.9 to 9.3 equivalents, more preferably 9.0 to 9.2 equivalents, and even more preferably 9.1 equivalents.
  • the antibody is an anti-MUC1 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 447 in SEQ ID NO:5 or the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 447 in SEQ ID NO:6 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 1 to 219 in SEQ ID NO:7, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the compound represented by formula (2) can be used preferably in an amount of 8 to 10 equivalents, more preferably 8.3 to 9.3 equivalents, and even more preferably about 8.9 equivalents per antibody molecule.
  • “about 8.9 equivalents” preferably means 8.7 to 9.1 equivalents, more preferably 8.8 to 9.0 equivalents, and even more preferably 8.9 equivalents.
  • the antibody-drug conjugate to be produced is in the range of 7 to 8
  • the antibody is an anti-CD37 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 468 in SEQ ID NO: 3 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 4, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the compound represented by formula (2) can be used preferably in an amount of 8 to 10 equivalents, more preferably 8.3 to 9.3 equivalents, and even more preferably about 8.9 equivalents per antibody molecule.
  • “about 8.9 equivalents” preferably means 8.7 to 9.1 equivalents, more preferably 8.8 to 9.0 equivalents, and even more preferably 8.9 equivalents.
  • step (iii) can be preferably carried out at an internal temperature of 5 to 25°C, more preferably at an internal temperature of 10 to 20°C, and even more preferably at an internal temperature of about 15°C.
  • “about 15°C” preferably means 13°C to 17°C, more preferably 14°C to 16°C, and even more preferably 15°C.
  • step (iii) can be preferably carried out at 0 to 20°C, more preferably at 5 to 20°C, and even more preferably at 5 to 10°C or about 10°C.
  • the reaction time in step (iii) is preferably 0.5 to 2 hours.
  • the reaction time in step (iii) is preferably 20 minutes to 4 hours, more preferably 0.5 to 2 hours.
  • the reagent having a thiol group used in step (iv) can be used to react with the compound represented by formula (2) remaining in step (iii).
  • the reagent having a thiol group used in step (iv) can be used to quench the excess compound represented by formula (2).
  • the reagent having a thiol group used in step (iv) is not particularly limited as long as it can react with the maleimidyl group of the compound represented by formula (2).
  • N-acetylcysteine or cysteine can be used, and preferably N-acetylcysteine can be used.
  • the reagent having a thiol group used in step (iv) can be preferably used in an amount of 10 to 50 equivalents per antibody molecule, and more preferably 10 to 30 equivalents.
  • the reagent having a thiol group used in step (iv) can be preferably used in an amount of 2 to 8 equivalents, more preferably 3 to 7 equivalents, and even more preferably 3 to 5 equivalents.
  • step (iv) can be preferably carried out at 0 to 20°C, more preferably at 5 to 20°C, and even more preferably at 5 to 10°C or about 10°C.
  • reaction time for step (iv) is preferably 0.5 to 2 hours.
  • the pH of the solution adjusted in step (v) may be within the range of, for example, 4 to 6, from the viewpoint of the stability of the antibody moiety and the drug linker moiety contained in the antibody-drug conjugate, and may be 4.2 to 5.8, 4.4 to 5.6, 4.6 to 5.4, 4.8 to 5.2, about 5, 5.0, 4.0 to 5.0, 4.1 to 4.9, 4.2 to 4.8, 4.3 to 4.7, 4.4 to 4.6, about 4.5, or 4.5.
  • the solution used to adjust the pH in step (v) is not particularly limited as long as it can be used to adjust the pH of the reaction solution, but for example, an aqueous solution of acetic acid, an aqueous solution of hydrochloric acid, or a buffer solution can be used.
  • An aqueous solution of acetic acid is preferably used, and a 10% aqueous solution of acetic acid is more preferably used.
  • the conjugation of the antibody of the present invention to the drug linker intermediate can be carried out by the methods described in WO 2019/065964, U.S. Patent Publication No. 2020/0261594, WO 2020/196474 or U.S. Patent Publication No. 2022/0168440, the disclosures of which are incorporated herein by reference.
  • the conjugation of the antibody of the present invention to the drug linker intermediate can be performed by the methods described in WO 2020/050406, U.S. Patent Publication No. 2022/0008549, WO 2021/177438 or U.S. Patent Publication No. 2023/0330248, the disclosures of which are incorporated herein by reference.
  • conjugation of the antibody of the present invention to a drug linker intermediate can be performed by the methods described in WO 2014/057687 or U.S. Patent Publication No. 2015/0297748, the disclosures of which are incorporated herein by reference.
  • the method for producing the antibody-drug conjugate of the present invention includes the following steps: (i) removing by-products derived from the exatecan compound contained in a solution containing the antibody-drug conjugate using an activated carbon material. In one embodiment of the present invention, the step (i) is included after the step (iv).
  • the step (i) included in the present invention not only provides a method for efficiently purifying the antibody-drug conjugate from highly active impurities, but also reduces the amount of waste liquid containing highly active impurities compared to conventional purification steps using diafiltration (e.g., the method described in WO 2020/022363).
  • the step (i) included in the present invention can also remove low molecular weight impurities.
  • Activated carbon is a substance whose main component is porous carbon that has been subjected to chemical or physical treatment (activation, activation) to increase its adsorption efficiency. For example, it is used for purposes such as selectively separating, removing, and purifying specific substances. Activated carbon has a very large surface area-to-mass ratio, making it possible for the physical adsorption of solutes.
  • the activated carbon used in the present invention preferably has a surface area of 10 to 10000 m 2 /g, more preferably 100 to 5000 m 2 /g, and most preferably 1000 to 2000 m 2 /g.
  • the average particle size of the activated carbon used in the present invention is preferably 2 ⁇ m or more, more preferably 2 to 550 ⁇ m, and most preferably 5 to 40 ⁇ m.
  • the particle size range of the activated carbon used in the present invention is, for example, such that the proportion of the average particle size of 5 to 40 ⁇ m is preferably at least 90% by weight, more preferably at least 95% by weight, and most preferably at least 98% by weight, based on the total weight of the activated carbon.
  • the form of the activated carbon in step (i) there are no particular limitations on the form of the activated carbon in step (i), but any form suitable for the manufacture of pharmaceuticals can be used, including, for example, granular activated carbon such as crushed carbon, granular carbon, spherical carbon, or pelleted carbon, fibrous activated carbon such as fiber or cloth, specially formed activated carbon such as a sheet, molded body, or honeycomb, and powdered activated carbon.
  • granular activated carbon such as crushed carbon, granular carbon, spherical carbon, or pelleted carbon
  • fibrous activated carbon such as fiber or cloth
  • specially formed activated carbon such as a sheet, molded body, or honeycomb
  • powdered activated carbon powdered activated carbon.
  • step (i) uses a depth filter (activated carbon filter in the narrow sense) that is molded as a carrier that is filled with activated carbon material in advance and formed as an integral part.
  • Activated carbon filters that are preferably used are those made of activated carbon, cellulose fibers, etc. Also, filtering a solution containing a crude antibody-drug conjugate through an activated carbon filter is sometimes called activated carbon filtration.
  • the activated carbon filter used in the present invention is not particularly limited, but examples of commercially available activated carbon filters include Millistak+ (registered trademark) Pod CR40 (Merck Millipore), Zeta Plus activated carbon adsorption depth filter (3M), SUPRAcap 50 Seitz (registered trademark) AKS filter (PALL), Supracap (registered trademark) 50 depth filter capsules activated carbon series AKS depth filter media (Cytiva), etc.
  • Millistak+ Depth Filter CR40 media a filter with an area of 5 cm2 composed of the same activated carbon, cellulose fiber, etc., or Supracap (registered trademark) 50 depth filter capsules activated carbon series AKS depth filter media (Cytiva) can be preferably used.
  • Activated carbon filtration may be, for example, any of the following: (1) a method in which a solution containing a crude antibody-drug conjugate is passed through an activated carbon filter only once; (2) a method in which a solution containing a crude antibody-drug conjugate that has been filtered through activated carbon one or more times is recirculated and passed through an activated carbon filter multiple times; (3) a method in which a solution containing a crude antibody-drug conjugate that has been filtered through activated carbon one or more times is passed through the same activated carbon filter multiple times without being recirculated; or (4) a method in which a solution containing a crude antibody-drug conjugate that has been filtered through activated carbon one or more times is passed through different activated carbon filters multiple times without being recirculated.
  • a preferred embodiment of step (i) of the present invention is (1) a method in which a solution containing a crude antibody-drug conjugate is passed through an activated carbon filter only once.
  • WO 2014/024514 describes a method for purifying antibodies from cell culture supernatant containing the antibodies using activated carbon in the production of antibodies.
  • this technology is for purifying antibodies, and the impurities to be removed are protein-derived substances such as host cell proteins (HCPs), and no technology is disclosed for purifying highly active drug-derived impurities from crude antibody-drug conjugates in which antibodies have been chemically modified.
  • HCPs host cell proteins
  • Matthew S., et al., Langmuir (2014), 30(27), 8046-8055 describes an activated carbon purification technology that sets an appropriate pH by focusing on the isoelectric point of a substance, but this document also targets protein-derived impurities such as HCPs for removal.
  • WO 2020/153390 describes a method for purifying antibodies by treating them with activated carbon after virus inactivation in the production of antibodies.
  • This purification method is a technology that shows that activated carbon purification can function as an alternative to an anion exchange (AEX) chromatography step that has virus clearance capabilities, but does not disclose a technology for purifying a crude antibody-drug conjugate in which the antibody has been chemically modified.
  • AEX anion exchange
  • WO 2014/143622 describes a method for removing pyrrolobenzodiazepine-related impurities from a PBD-ADC product mixture using activated carbon. It is generally known that the adsorption of solutes by activated carbon filters depends on the time of contact with the liquid, since the extraction efficiency depends on the flow rate (paragraph [0060] of the same publication).
  • the flow rate of the mixture passing through the activated carbon filter needs to be increased or decreased according to the desired purity level (paragraph [0060] of the same publication), and it is described that in the activated carbon filtration of PBD-ADC, the clearance of reaction process intermediates decreases at high flow rates exceeding 6 L/min/m 2 (paragraph [0061] of the same publication, Example 5 paragraph [0081], Figure 4).
  • the flow rate in activated carbon filtration is unlikely to be affected by the impurity removal efficiency and can be appropriately selected, for example, within the range of 1 L/min/m 2 to 10 L/min/m 2 , preferably 6 L/min/m 2 to 10 L/min/m 2 , more preferably 7 L/min/m 2 to 10 L/min/m 2 , even more preferably 8 L/min/m 2 to 10 L/min/m 2 , and particularly preferably 9 L/min/m 2 to 10 L/min/m 2 .
  • the main impurity in the product mixture of PBD-ADC is a compound in which N-acetylcysteine is added to a drug linker (hereinafter also referred to as "PBD-NAC") (paragraph [0072] of International Publication No. 2014/143622). N-acetylcysteine is used to quench unreacted drug linkers.
  • PBD-NAC drug linker
  • One of the main impurities in the present invention is a compound represented by formula (3), i.e., a compound in which N-acetylcysteine is added to a drug linker containing exatecan (hereinafter also referred to as "DXd-NAC").
  • LogPow refers to the octanol-water partition coefficient, a physicochemical index that expresses the hydrophobicity of a chemical substance.
  • cLogP (calculated LogP) is an index that is widely used as a predicted value of a molecule's LogPow; it can also be calculated using ChemDraw, the most common software for drawing chemical structure formulas.
  • the cLogP (PCMODELS CLOGP, Daylight Version 4.82) of PBD-NAC is calculated to be 3.042
  • the cLogP of DXd-NAC is calculated to be -0.203. From the cLogP calculation results and Table 1 and Fig.
  • DXd-NAC has a lower lipid solubility than PBD-NAC, and therefore a person skilled in the art would expect that DXd-NAC would be adsorbed to activated carbon at a significantly lower level or not at all.
  • the temperature (internal temperature) of the reaction solution containing the antibody-drug conjugate in step (i) is not particularly limited, but may be within the range of 0 to 30°C, for example, from the viewpoint of suppressing the formation of aggregates of the antibody-drug conjugate, and may also be 2 to 28°C, 4 to 26°C, 6 to 24°C, 8 to 22°C, 10 to 20°C, 12 to 18°C, or 14 to 16°C, about 15°C, or 15°C.
  • the pH of the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is not particularly limited, but may be within the range of 4 to 6, for example, from the viewpoint of the stability of the antibody moiety and the drug linker moiety contained in the antibody-drug conjugate, and may be 4.2 to 5.8, 4.4 to 5.6, 4.6 to 5.4, 4.8 to 5.2, about 5, 5.0, 4.0 to 5.0, 4.1 to 4.9, 4.2 to 4.8, 4.3 to 4.7, 4.4 to 4.6, about 4.5, or 4.5.
  • the content of the by-product derived from the exatecan compound contained in the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is not particularly limited, but may be within the range of 0 to 300 ⁇ M for compound (3), and may be within the range of 0 to 150 ⁇ M, 0 to 140 ⁇ M, 0 to 130 ⁇ M, 0 to 120 ⁇ M, 0 to 110 ⁇ M, 0 to 100 ⁇ M, 0 to 90 ⁇ M, or 0 to 80 ⁇ M for compound (4), and may be within the range of 0 to 160 ⁇ M, and may be within the range of 0 to 80 ⁇ M, 0 to 75 ⁇ M, 0 to 70 ⁇ M, 0 to 65 ⁇ M, 0 to 60 ⁇ M, 0 to 55 ⁇ M, 0 to 50 ⁇ M, or 0 to 45 ⁇ M for compound (4).
  • the buffer solution contained in the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) may be, for example, an acetate buffer, a histidine buffer, or a phosphate buffer, and may be, for example, an aqueous solution of sodium acetate, an aqueous solution of L-histidine, or an aqueous solution of disodium hydrogen phosphate.
  • the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) may or may not contain a surfactant. If it contains a surfactant, the surfactant is not particularly limited and may be, for example, polysorbate 20 or polysorbate 80.
  • the method for producing the antibody-drug conjugate of the present invention may include a step (vi) of rinsing the activated carbon filter.
  • the present invention preferably includes step (vi) following step (i).
  • rinsing refers to eluting the small amount of antibody-drug conjugate adsorbed to the activated carbon filter.
  • the inventors have found a buffer solution suitable for rinsing the activated carbon filter, in which by-products derived from the exatecan compound are irreversibly adsorbed to the activated carbon, and the desired antibody-drug conjugate is reversibly adsorbed to the activated carbon.
  • the recovery rate of the antibody-drug conjugate by rinsing is about 1-3%.
  • the buffer used in step (vi) is not particularly limited as long as it allows recovery of the desired antibody-drug conjugate, and examples include acetate buffer, histidine buffer, phosphate buffer, PIPES buffer, HEPES buffer, etc., but is preferably a buffer that allows recovery of the desired antibody-drug conjugate without elution of by-products derived from the exatecan compound, more preferably a histidine buffer, even more preferably a 5 to 15 mmol/L L-histidine buffer, and most preferably an 8.5 mmol/L L-histidine buffer.
  • Example 3 in paragraph [0077] of the same publication describes that even if the activated carbon filter is filled with a buffer solution beforehand, the target antibody-drug conjugate is adsorbed to the activated carbon, suggesting that recovery of the adsorbed antibody-drug conjugate is difficult even if it is rinsed with a buffer solution.
  • the buffer used in step (iv) is preferably a histidine buffer, more preferably a 5 to 15 mmol/L L-histidine buffer, and even more preferably an 8.5 mmol/L L-histidine buffer (pH 5.3).
  • the method of rinsing with a buffer solution in step (vi) is not particularly limited, but may involve passing a certain amount of buffer solution through an activated carbon filter once or multiple times and recovering the resulting buffer solution containing the desired antibody-drug conjugate, or may involve circulating a certain amount of buffer solution and passing it through an activated carbon filter multiple times and recovering the resulting buffer solution containing the desired antibody-drug conjugate, or may involve other rinsing methods.
  • the buffer used in step (iv) is preferably a histidine buffer, more preferably a 5 to 15 mmol/L L-histidine buffer, and even more preferably an 8.5 mmol/L L-histidine buffer (pH 5.3).
  • the method of rinsing with a buffer solution in step (vi) is not particularly limited, but may involve passing a certain amount of buffer solution through an activated carbon filter once or multiple times and recovering the resulting buffer solution containing the desired antibody-drug conjugate, or may involve circulating a certain amount of buffer solution and passing it through an activated carbon filter multiple times and recovering the resulting buffer solution containing the desired antibody-drug conjugate, or may involve other rinsing methods.
  • the buffer used in step (iv) is preferably a histidine buffer, more preferably a 5 to 15 mmol/L L-histidine buffer, and even more preferably an 8.5 mmol/L L-histidine buffer (pH 5.3).
  • the method of rinsing with a buffer solution in step (vi) is not particularly limited, but may involve passing a certain amount of buffer solution through an activated carbon filter once or multiple times and recovering the resulting buffer solution containing the desired antibody-drug conjugate, or may involve circulating a certain amount of buffer solution and passing it through an activated carbon filter multiple times and recovering the resulting buffer solution containing the desired antibody-drug conjugate, or may involve other rinsing methods.
  • the method for purifying by-products derived from compound (2) by steps (i) and (vi) of the present invention can reduce the amount of waste liquid containing highly active impurities at an industrial level, compared to conventional methods for purifying by-products derived from compound (2) by diafiltration (e.g., the method described in WO 2020/022363).
  • diafiltration e.g., the method described in WO 2020/022363.
  • 1 DV Diafiltration Volume
  • the highly active waste liquid generated by the conventional method needs to be stored for a certain period of time before being treated, not only is it necessary to secure space to store the waste liquid according to the number of times the antibody-drug conjugate is manufactured, but management that takes into account the risk of leakage of the waste liquid is also necessary.
  • the activated carbon filter used in step (i) of the present invention requires a relatively small storage space compared to the volume occupied by the waste liquid, and the highly active impurities adsorbed to the activated carbon filter have a relatively smaller risk of leakage than the waste liquid.
  • the concentration of the by-products derived from the exatecan compound (e.g., the compounds represented by formula (3) and formula (4)) in the reaction solution after step (i) of the present invention is preferably about 1 ⁇ M or less, more preferably 0.1 ⁇ M or less, and even more preferably 0.06 ⁇ M or less. According to the present invention, it is possible to provide a pharmaceutical composition containing by-products derived from the exatecan compound at a concentration of preferably about 1 ⁇ M or less, more preferably 0.1 ⁇ M or less, and even more preferably 0.06 ⁇ M or less.
  • a solution containing an antibody-drug conjugate from which by-products derived from compound (2) have been removed can be produced.
  • the solution containing the antibody-drug conjugate obtained by the production method of the present invention is characterized by containing 0.3% or less, preferably 0.1% or less, more preferably 0.05% or less, and even more preferably 0.03% or less of by-products derived from compound (2).
  • a pharmaceutical composition containing an antibody-drug conjugate containing 0.3% or less, preferably 0.1% or less, more preferably 0.05% or less, and even more preferably 0.03% or less of by-products derived from compound (2) can be provided.
  • Such a content can be calculated, for example, by the method described below.
  • the step (i) of the present invention can be used for both small-scale and large-scale production of the desired antibody-drug conjugate.
  • the step (i) of the present invention can be applied to milligram to kilogram scales of the resulting antibody-drug conjugate.
  • step (i) of the present invention can remove by-products derived from the exatecan compound, the present invention can be applied to any by-product that has a common structure, regardless of the antibody portion of the target antibody-drug conjugate.
  • the activated carbon material used in step (i) is powdered activated carbon.
  • the antibody-drug conjugate can be purified by adding powdered activated carbon or a suspension thereof to the crude antibody-drug conjugate, and after a certain period of time, filtering or otherwise removing the mixture of the antibody-drug conjugate, by-products derived from the exatecan compound, and activated carbon to remove the activated carbon powder to which the by-products have been adsorbed.
  • the concentration of the antibody-drug conjugate in the solution can be measured by known methods, for example, using the SoloVPE Variable Pathlength System (C Technologies, Inc., Bridgewater, NJ). In this specification, the measurement method using this device is sometimes referred to as the SoloVPE method.
  • the antibody-drug conjugate concentration measured by this method is equivalent to the antibody concentration in the antibody-drug conjugate, since it is converted into the antibody concentration.
  • the concentration and content (%) of the by-product derived from compound (2), including the compound represented by formula (3) and the compound represented by formula (4), in the solution can be measured by a known method, for example, by the method shown below.
  • Mobile phase A 0.01 M ammonium sulfate phosphate buffer, pH 3.4
  • Mobile phase B methanol/acetonitrile (1:1)
  • Mobile phase C Dilute perchloric acid (500 times diluted)
  • Mobile phase D Acetonitrile Wavelength: 370 nm, Flow rate: 0.5 mL/min, Sample injection volume: 2 ⁇ L Sampling rate: 5Hz (H-Class), 10Hz (Agilent1290) Elution mode: gradient, 40 min gradient program
  • an aqueous solution of riboflavin prepared as follows can be used. 1) Accurately measure 40 mg of riboflavin standard. 2) Add water/acetonitrile mixture (1:1) to dissolve, then make up to exactly 200 mL. 3) Take 1 mL of the above solution and add a water/acetonitrile mixture (9:1) to make exactly 50 mL.
  • the drug concentration in the antibody-drug conjugate can be calculated from the antibody concentration in the antibody-drug conjugate obtained by the SoloVPE method using the following formula.
  • the average number of drugs bound per antibody molecule in an antibody-drug conjugate can be calculated, for example, by a method in which the UV absorbance of the antibody-drug conjugate and its conjugation precursor is measured at two wavelengths, 280 nm and 370 nm (UV method), or by a method in which the antibody-drug conjugate is treated with a reducing agent, and each of the resulting fragments is quantified by HPLC measurement and then calculated (HPLC method).
  • the average number of drugs bound per antibody molecule of an antibody-drug conjugate can be calculated by referring to the descriptions in WO 2014/057687, WO 2015/098099, WO 2015/115091, WO 2015/155998, WO 2018/135501, WO 2018/212136, WO 2019/219891, WO 2020/022363, WO 2022/014698, and WO 2023/068226, etc.
  • the amount (%) of each by-product derived from compound (2) can be calculated from the concentration of the by-product derived from compound (2) and the drug concentration in the antibody-drug conjugate using the following formula.
  • the content of TCEP in the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is not particularly limited, but may be within the range of 0 to 300 ⁇ g/mL, for example, and may be within the range of 0 to 290 ⁇ g/mL, 0 to 280 ⁇ g/mL, 0 to 270 ⁇ g/mL, 0 to 260 ⁇ g/mL, 0 to 250 ⁇ g/mL, 0 to 240 ⁇ g/mL, 0 to 230 ⁇ g/mL, 0 to 220 ⁇ g/mL, 0 to 210 ⁇ g/mL, or 0 to 200 ⁇ g/mL.
  • the step (i) of the present invention can remove not only by-products derived from the exatecan compound but also TCEP from the reaction solution.
  • concentration of TCEP in the solution can be measured by a known method, for example, it can be measured as tris(2-carboxyethyl)phosphine oxide (hereinafter also referred to as "TCEPO") by the method shown below.
  • a TCEP standard can be prepared, for example, as follows. 1) Accurately measure 50 mg of TCEP. 2) Add purified water to dissolve completely, then make up to exactly 250 mL. 3) Add 10 ⁇ L of hydrogen peroxide to 1000 ⁇ L of solution 2) and incubate at room temperature for 10 minutes. 4) Add 7 ⁇ L of ammonia water and 983 ⁇ L of purified water to 3) to make a standard solution.
  • the concentration of TCEP in the reaction solution after step (i) of the present invention is preferably 140 ⁇ g/mL or less. According to the present invention, it is possible to provide a pharmaceutical composition that preferably contains 140 ⁇ g/mL or less of TCEP.
  • the removal rate of TCEP after step (i) of the present invention is preferably 16% or more, more preferably 20% or more, and even more preferably 24% or more.
  • the amount of NAC contained in the solution containing the antibody-drug conjugate used in step (i) is not particularly limited, but may be within the range of 0 to 300 ⁇ g/mL, for example, and may be within the range of 0 to 290 ⁇ g/mL, 0 to 280 ⁇ g/mL, 0 to 270 ⁇ g/mL, 0 to 260 ⁇ g/mL, 0 to 250 ⁇ g/mL, 0 to 240 ⁇ g/mL, 0 to 230 ⁇ g/mL, or 0 to 220 ⁇ g/mL.
  • the concentration of NAC can be measured by known methods, for example, by the method described below.
  • the concentration of NAC in the reaction solution after step (i) of the present invention is preferably about 100 ⁇ g/mL or less, more preferably 70 ⁇ g/mL or less, and even more preferably 40 ⁇ g/mL or less.
  • a pharmaceutical composition can be provided that contains NAC of preferably about 100 ⁇ g/mL or less, more preferably 70 ⁇ g/mL or less, and even more preferably 40 ⁇ g/mL.
  • the removal rate of NAC by step (i) of the present invention is preferably 60% or more, more preferably 70% or more, and even more preferably 80% or more.
  • the present invention may include a step of pre-washing the activated carbon filter used for the activated carbon filtration prior to step (i). It is recommended that the activated carbon filter be pre-washed with water before use to prevent contamination of the reaction solution with eluates from the activated carbon.
  • the inventors have thoroughly investigated the solution used for pre-washing and have succeeded in improving the recovery rate of the desired antibody-drug conjugate without reducing the efficiency of removing by-products derived from the exatecan compound.
  • the solution used for pre-washing is preferably an aqueous solution containing a surfactant, more preferably an aqueous solution of polysorbate 20 or polysorbate 80, and even more preferably an aqueous solution of polysorbate 80.
  • the amount of solution used for the pre-use washing can be appropriately selected by a person skilled in the art depending on the amount of by-products derived from the exatecan compound eluted and the desired recovery rate of the antibody-drug conjugate, but using an excessive amount of solution will result in a decrease in the amount of by-products derived from the exatecan compound adsorbed, resulting in insufficient purification effect. Therefore, it is desirable to precisely adjust the amount of solution depending on the target amount of by-products to be removed and the recovery rate of the antibody-drug conjugate.
  • the purification process using the activated carbon material is not limited to the removal of by-products derived from the exatecan compound, and can also be applied to the removal of by-products derived from other drugs different from the exatecan compound from a solution containing an antibody-drug conjugate using the other drug.
  • the purification process using the activated carbon material of the present invention can be carried out using, for example, an antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate described in WO 2019/065964, U.S. Patent Publication No. 2020/0261594, WO 2020/196474 or U.S. Patent Publication No. 2022/0168440, the disclosures of which are incorporated herein by reference, or an antibody-cyclic dinucleotide derivative conjugate described in WO 2020/050406, U.S. Patent Publication No. 2022/0008549, WO 2021/177438 or U.S. Patent Publication No. 2023/0330248, the disclosures of which are incorporated herein by reference.
  • composition of the present invention comprises an antibody-drug conjugate of the present invention, a buffer and an excipient.
  • Such pharmaceutical compositions further comprise an antibody-drug conjugate produced (including purification) by the above-mentioned method, (vii) adding a buffer solution to the solution containing the antibody-drug conjugate; (viii) concentrating the solution containing the antibody-drug conjugate; and (ix) adjusting the pH of the solution containing the antibody-drug conjugate to a predetermined value; At least one step selected from the group consisting of: and, (x) adding an excipient to the solution containing the antibody-drug conjugate;
  • the present invention can be produced by carrying out a process including the steps of:
  • the buffer added in step (vii) is preferably the same as the buffer used in step (ii). Therefore, the buffer used in step (vii) is preferably a histidine buffer.
  • step (ix) When the buffer used in step (vii) is a histidine buffer, the pH adjustment in step (ix) can be preferably performed using an aqueous histidine solution.
  • excipient refers to a substance that is added to a pharmaceutical product to achieve a certain size or concentration in order to improve the ease of molding, handling, and administration.
  • excipients are not particularly limited as long as they exhibit the effects of the present invention, but examples include sucrose, trehalose, and sorbitol.
  • the excipient added in step (x) can preferably be sucrose or trehalose.
  • the pharmaceutical composition of the present invention preferably further comprises a surfactant. That is, the pharmaceutical composition of the present invention is more preferably a pharmaceutical composition comprising an antibody-drug conjugate, a buffer, an excipient, and a surfactant.
  • Such a pharmaceutical composition can be produced by carrying out the above-mentioned step (x) followed by a step including the step (xi) of adding a surfactant.
  • the surfactant added in step (xi) can preferably be polysorbate 80 or polysorbate 20.
  • concentrations of the buffer, excipient, surfactant, and antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition can be appropriately selected depending on the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate to be produced, and the type of antibody.
  • the buffer, excipient, and surfactant in the pharmaceutical composition may preferably be histidine buffer (preferably 25 mM histidine buffer), sucrose (preferably 9% sucrose), and polysorbate 80 (preferably 0.03% polysorbate 80), the concentration of the antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition is preferably 20 mg/mL, and the pH of the pharmaceutical composition is preferably 5.5.
  • the antibody is an anti-TROP2 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 470 in SEQ ID NO: 10 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 11, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the buffer, excipient, and surfactant used in the pharmaceutical composition are preferably histidine buffer (preferably 10 mM histidine buffer), sucrose (preferably 9% sucrose), and polysorbate 80 (preferably 0.02 or 0.03% polysorbate 80)
  • the concentration of the antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition is preferably 20 mg/mL
  • the pH of the pharmaceutical composition is preferably 6.0.
  • the buffer, excipient, and surfactant in the pharmaceutical composition may preferably be histidine buffer (preferably 25 mM histidine buffer), sucrose (preferably 9% sucrose), and polysorbate 20 (preferably 0.03% polysorbate 20), the concentration of the antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition is preferably 20 mg/mL, and the pH of the pharmaceutical composition is preferably 5.4.
  • the antibody is an anti-B7-H3 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 14 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 in SEQ ID NO: 15, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • the buffer, excipient, and surfactant used in the pharmaceutical composition are preferably histidine buffer (preferably 10 mM histidine buffer), sucrose (preferably 9% sucrose), and polysorbate 20 (preferably 0.02 or 0.03% polysorbate 20)
  • the concentration of the antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition is preferably 20 mg/mL
  • the pH of the pharmaceutical composition is preferably 5.9.
  • the buffer, excipient, and surfactant used in the pharmaceutical composition are preferably histidine buffer (preferably 10 mM histidine buffer), sucrose (preferably 9% sucrose), and polysorbate 80 (preferably 0.03% polysorbate 80), the concentration of the antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition is preferably 20 mg/mL, and the pH of the pharmaceutical composition is preferably 5.4.
  • the buffer, excipient, and surfactant used in the pharmaceutical composition are preferably histidine buffer (preferably 10 mM histidine buffer), sucrose (preferably 9% sucrose), and polysorbate 80 (preferably 0.03% polysorbate 80), the concentration of the antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition is preferably 20 mg/mL, and the pH of the pharmaceutical composition is preferably 5.4.
  • the buffer, excipient, and surfactant used in the pharmaceutical composition are preferably histidine buffer (preferably 10 mM histidine buffer), sucrose (preferably 9% sucrose), and polysorbate 80 (preferably 0.03% polysorbate 80), the concentration of the antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition is preferably 25 mg/mL, and the pH of the pharmaceutical composition is preferably 5.2.
  • the buffer, excipient, and surfactant used in the pharmaceutical composition are preferably histidine buffer (preferably 8 mM histidine buffer), sucrose (preferably 9% sucrose), and polysorbate 80 (preferably 0.03% polysorbate 80), the concentration of the antibody-drug conjugate in the pharmaceutical composition is preferably 25 mg/mL, and the pH of the pharmaceutical composition is preferably 5.3.
  • composition of the present invention can be applied to patients as a systemic therapy, and can also be applied locally to cancer tissue to achieve therapeutic effects.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be preferably used in mammals, but more preferably in humans.
  • the introduction routes that can be used to administer the pharmaceutical composition of the present invention include, for example, intravenous, intradermal, subcutaneous, intramuscular, and intraperitoneal routes, with intravenous being preferred.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is an aqueous injection, it can be preferably administered intravenously by drip infusion after diluting with an appropriate diluent.
  • diluents include glucose solution and saline solution, preferably glucose solution, and more preferably 5% glucose solution.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a lyophilized injection, it is preferably dissolved in water for injection, and then the required amount is diluted with an appropriate diluent and administered by intravenous drip.
  • the diluent include glucose solution and physiological saline solution, and preferably glucose solution, and more preferably 5% glucose solution.
  • the dose of the pharmaceutical composition of the present invention can be set based on the affinity with the antigen.
  • the pharmaceutical composition of the present invention When the pharmaceutical composition of the present invention is administered to a human, for example, about 0.001 to 100 mg/kg (here, "mg/kg” means the dose of antibody-drug conjugate per kg of human body weight) of the antibody-drug conjugate may be administered once or multiple times at intervals of once every 1 to 180 days, and preferably, 0.8 mg/kg to 8 mg/kg is administered once every three weeks.
  • the dosage and administration interval of the antibody-drug conjugate can be appropriately selected depending on the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate to be produced and the type of antibody.
  • the preferred dose is 0.8 mg/kg, 1.6
  • suitable methods include administering 5.4 mg/kg, 6.4 mg/kg, 7.4 mg/kg, or 8 mg/kg of the antibody-drug conjugate once every three weeks, more preferably administering 5.4 mg/kg, 6.4 mg/kg, 7.4 mg/kg, or 8 mg/kg of the antibody-drug conjugate once every three weeks, and even more preferably administering 5.4 mg/kg or
  • the antibody is an anti-TROP2 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 470 in SEQ ID NO: 10 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 11, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain)
  • preferred methods include administering 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, or 10 mg/kg of the antibody-drug conjugate once every three weeks, and more preferred methods include administering 4 mg/kg, 6 mg/kg, or 8 mg/kg of the antibody-drug conjugate once every three weeks.
  • preferred methods include administering 1.6 mg/kg, 3.2 mg/kg, 4.8 mg/kg, 5.6 mg/kg, 6.4 mg/kg, 8.0 mg/kg, 9.6 mg/kg, or 12.8 mg/kg of the antibody-drug conjugate once every three weeks, and more preferred methods include administering 4.8 mg/kg, 5.6 mg/kg, or 6.4 mg/kg of the antibody-drug conjugate once every three weeks.
  • the antibody when the average number of drug linkers bound per antibody in the antibody-drug conjugate produced is in the range of 7 to 8, and the antibody is an anti-B7-H3 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 14 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 in SEQ ID NO: 15, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain), the antibody can be preferably administered at a dose of 0.8 mg/kg, 1.6 mg/kg, 3.2 mg/kg, 4.8 mg/kg, 6.4 mg/kg, or 8.0 mg/kg per administration at intervals of once every three weeks.
  • the antibody is an anti-CDH6 antibody (preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 16 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 233 in SEQ ID NO: 17, or an antibody lacking a lysine residue at the carboxyl terminus of the heavy chain), preferably 0.1 to 50 mg/kg, more preferably 1 to 50 mg/kg, 1 to 30 mg/kg, 1 to 20 mg/kg, 1 to 15 mg/kg, 2 to 50 mg/kg, 2 to 30 mg/kg, 2 to 20 mg/kg, or 2 to 15 mg/kg may be administered multiple times at intervals of once every 1 to 4 weeks, preferably once every 2 to 3 weeks.
  • an anti-CDH6 antibody preferably an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 471 in SEQ ID NO: 16 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used for the treatment of cancer, and can be preferably used for the treatment of at least one cancer selected from the group consisting of breast cancer, gastric cancer (sometimes called gastric adenocarcinoma), colon cancer (sometimes called colorectal cancer, including colon cancer and rectal cancer), lung cancer (including small cell lung cancer and non-small cell lung cancer), esophageal cancer, head and neck cancer (including salivary gland cancer and pharyngeal cancer), gastroesophageal junction adenocarcinoma, biliary tract cancer (including bile duct cancer), Paget's disease, pancreatic cancer, ovarian cancer, uterine carcinosarcoma, urothelial cancer, prostate cancer, bladder cancer, gastrointestinal stromal tumor, cervical cancer, squamous cell carcinoma, peritoneal cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma, uterine cancer, kidney cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, penile cancer, leukemia, malignant lymphoma,
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be selected and used as a drug for drug therapy, which is the main method of cancer treatment, and as a result, it can slow the growth of cancer cells, suppress their proliferation, and even destroy them. These actions can relieve cancer patients from symptoms caused by cancer and improve their QOL, thereby preserving the lives of cancer patients and achieving therapeutic effects. Even if the destruction of cancer cells is not achieved, the inhibition and control of cancer cell proliferation can enable cancer patients to achieve a higher QOL and longer survival.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also be used in adjuvant therapy in combination with other therapies, such as surgery, radiation therapy, and hormone therapy. It can also be used as a drug therapy in neoadjuvant therapy.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also be expected to have a preventive effect, such as suppressing the proliferation of and even destroying microscopic metastatic cancer cells.
  • a preventive effect such as suppressing the proliferation of and even destroying microscopic metastatic cancer cells.
  • it can be expected to have an effect of suppressing and destroying cancer cells in bodily fluids during the metastasis process, as well as an effect of suppressing and destroying microscopic cancer cells immediately after implantation in any tissue. Therefore, it can be expected to have an effect of suppressing and preventing cancer metastasis, particularly after surgical removal of cancer.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also be administered in combination with other cancer therapeutic agents, thereby enhancing the antitumor effect.
  • Other cancer therapeutic agents used for such purposes may be administered to an individual simultaneously with the pharmaceutical composition of the present invention, separately, or consecutively, or may be administered at different administration intervals.
  • Such cancer therapeutic agents are not limited to drugs that have antitumor activity, but include, for example, irinotecan (CPT-11), cisplatin, carboplatin, oxaliplatin, fluorouracil (5-FU), gemcitabine, capecitabine, paclitaxel, docetaxel, and the like.
  • the agent may be at least one selected from the group consisting of Pertuzumab, Tamoxifen, Toremifene, Fulvestrant, Leuprorelin, Goserelin, Letrozole, Anastrozole, and a progesterone formulation.
  • the compound represented by the formula (8.90 equivalents per antibody molecule) was dissolved in an aqueous solution of dimethyl sulfoxide containing acetic acid and added to react with the antibody having a thiol group.
  • A represents the binding site to the anti-GPR20 antibody.
  • the by-product derived from compound (2) is a compound in which tris(2-carboxyethyl)phosphine is added to the maleimidyl group of compound (2), that is, the following formula (3):
  • the content (%) of by-products derived from compound (2) was calculated from the content of by-products derived from compound (2) and the drug concentration in the antibody-drug conjugate, and the results are shown in Table 3.
  • Example 2 Temperature study A reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate was obtained by the method described in 1)-1 and 1)-2 of Example 1. After measuring the content of by-products derived from compound (2) in the obtained reaction solution, the reaction solution was cooled to 0°C or heated to 30°C, and filtered while pumping with a rotary pump using an activated carbon filter and a sterile filtration filter with an area of 5 cm2 composed of activated carbon and cellulose fibers, etc., similar to Millistak+ (registered trademark) Depth Filter CR40 media (Merck), which is a depth filter molded with activated carbon powder as a carrier. The concentration of the anti-GPR20 antibody-drug conjugate and the content of by-products derived from compound (2) were measured for the reaction solution after filtration, and the change in content before and after filtration was tracked.
  • Millistak+ registered trademark
  • Depth Filter CR40 media Merck
  • the antibody-drug conjugate concentration and the amount of by-products derived from compound (2) were measured before and after the activated carbon filter using the method described in 1)-4 of Example 1.
  • the results of the amount of by-products derived from compound (2) and the recovery rate of the antibody-drug conjugate are shown in Table 4 and Figure 2. Sufficient removal efficiency was confirmed in the liquid temperature range of 0 to 30°C. Although the difference was small, the removal efficiency was better at 30°C.
  • Example 3 pH Study The antibody was reduced and the antibody was conjugated with a drug linker by the method described in 1)-1 of Example 1. Next, a 0.03 mol/L N-acetylcysteine aqueous solution (15.0 equivalents per antibody molecule) was added and stirred at the same temperature for 30 minutes to quench excess compound (2), and the reaction solution was then adjusted to pH 6.0 using a 10% acetic acid aqueous solution, or to pH 4.0 using a 10% acetic acid aqueous solution and acetic acid. This resulted in the formation of the compound represented by the following formula (1):
  • A represents the binding site to the anti-GPR20 antibody.
  • the resulting reaction solution was roughly purified using a filter by the method described in 1)-3 of Example 1, and the concentration of the antibody-drug conjugate and the content of by-products derived from compound (2) before and after the activated carbon filter were measured by the method described in 1)-4 of Example 1.
  • the results of the content of by-products derived from compound (2) and the recovery rate of the antibody-drug conjugate are shown in Table 5 and Figure 3. Sufficient removal efficiency was confirmed in the solution pH range of 4.0 to 6.0. Although the difference was slight, the removal efficiency was higher at pH 4.0.
  • Example 4 Examination of the amount of by-products derived from compound (2) A solution containing the same anti-GPR20 antibody as the antibody used in Example 1 (corresponding to 1.00 g of antibody) was placed in a glass flask, and a 150 mmol/L L-histidine aqueous solution (17 mL) containing 0.07 g/g polysorbate 80 and 2.0 mmol/L EDTA was added. Next, an aqueous solution containing 10 mmol/L TCEP hydrochloride (6.00 equivalents per antibody molecule) was added under stirring at 30°C, and an antibody having a thiol group was produced by stirring at the same temperature. After 3 hours, the reaction solution was cooled to an internal temperature of 15°C, and compound (2) (10.00 equivalents per antibody molecule) was added under stirring to react with the antibody having a thiol group.
  • the reaction solution was quenched by the method described in 1)-2 of Example 1, and the reaction solution was roughly purified using a filter by the method described in 1)-3 of Example 1.
  • the concentration of the antibody-drug conjugate and the content of by-products derived from compound (2) were measured before and after the activated carbon filter by the method described in 1)-4 of Example 1.
  • the results of the content of by-products derived from compound (2) and the recovery rate of the antibody-drug conjugate are shown in Table 6 and Figure 4. Even when the concentration of by-products derived from compound (2) was more than twice that of the standard experiment of Example 1, sufficient removal efficiency was observed.
  • Example 5 Study of aqueous solution A solution containing the same anti-GPR20 antibody as the antibody used in Example 1 (corresponding to 1.00 g of antibody) was placed in a glass flask, and a 1 mol/L aqueous sodium acetate solution (17 mL) containing 0.07 g/g polysorbate 80 and 2.0 mmol/L EDTA, or a 28 mmol/L aqueous disodium hydrogen phosphate solution (17 mL) containing 0.07 g/g polysorbate 80 and 2.0 mol/L EDTA was added.
  • the reaction solution was quenched by the method described in 1)-2 of Example 1, and the reaction solution was roughly purified using a filter by the method described in 1)-3 of Example 1.
  • the antibody-drug conjugate concentration and the amount of by-product derived from compound (2) were measured before and after the activated carbon filter by the method described in 1)-4 of Example 1.
  • the results of the amount of by-product derived from compound (2) and the recovery rate of the antibody-drug conjugate are shown in Table 7 and Figure 5. Sufficient removal efficiency equivalent to that of the histidine buffer was also confirmed in acetate buffer and phosphate buffer.
  • Example 6 Examination of additives A solution containing the same anti-GPR20 antibody as the antibody used in Example 1 (corresponding to 1.00 g of antibody) was placed in a glass flask, and a 150 mmol/L L-histidine aqueous solution (17 mL) containing 2.0 mmol/L EDTA, or a 150 mmol/L L-histidine aqueous solution (17 mL) containing 0.07 g/g polysorbate 20 and 2.0 mmol/L EDTA was added.
  • the reaction solution was quenched by the method described in 1)-2 of Example 1, and the reaction solution was roughly purified using a filter by the method described in 1)-3 of Example 1.
  • the antibody-drug conjugate concentration and the amount of by-product derived from compound (2) were measured before and after the activated carbon filter by the method described in 1)-4 of Example 1.
  • the results of the amount of by-product derived from compound (2) and the recovery rate of the antibody-drug conjugate are shown in Table 8 and Figure 6. A sufficient removal effect was confirmed regardless of the type and presence or absence of additives (polysorbate 20 or polysorbate 80).
  • Example 7 Study of activated carbon filter rinsing method 1 A reaction solution containing an anti-GPR20 antibody-drug conjugate was obtained by the method described in 1)-1 and 1)-2 of Example 1. The reaction solution was roughly purified using an activated carbon filter by the method described in 1)-3 of Example 1. Then, 8.5 mmol/L L-histidine buffer (pH 5.3) (6.0 mL) was pumped to the activated carbon filter used for the crude purification, and the pump tube and the activated carbon filter were rinsed.
  • L-histidine buffer pH 5.3
  • the compound represented by the formula (8.90 equivalents per antibody molecule) is dissolved in an aqueous solution of dimethyl sulfoxide containing acetic acid and added to react with the antibody having a thiol group.
  • a reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate in which the drug linker represented by the formula (I) is linked to the anti-CD37 antibody via a thioether bond is obtained.
  • reaction solution adjusted to 15°C is filtered using an activated carbon filter with an area of 5 cm2 composed of activated carbon and cellulose fibers, etc., similar to Millistak+ (registered trademark) Depth Filter CR40 media (Merck), which is a depth filter formed using activated carbon powder as a carrier, and a sterile filtration filter, while pumping the liquid with a rotary pump.
  • Millistak+ registered trademark
  • Depth Filter CR40 media Merck
  • concentration of the anti-CD37 antibody-drug conjugate and the content of by-products derived from compound (2) are measured for the reaction solution after filtration, and the change in content before and after filtration is tracked.
  • the by-product derived from compound (2) is a compound in which tris(2-carboxyethyl)phosphine is added to the maleimidyl group of compound (2), that is, the following formula (3):
  • Example 9 Temperature study 2 A reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate is obtained by the method described in 8)-1 and 8)-2 of Example 8. After measuring the content of by-products derived from compound (2) in the obtained reaction solution, the reaction solution is cooled to 0°C or heated to 30°C, and filtered using an activated carbon filter and a sterile filtration filter with an area of 5 cm2 composed of activated carbon and cellulose fibers, etc., similar to Millistak+ (registered trademark) Depth Filter CR40 media (Merck), which is a depth filter molded with activated carbon powder as a carrier, while being pumped with a rotary pump. The concentration of the anti-CD37 antibody-drug conjugate and the content of by-products derived from compound (2) are measured for the reaction solution after filtration, and the change in content before and after filtration is tracked.
  • Millistak+ registered trademark
  • Depth Filter CR40 media Merck
  • the concentration of the antibody-drug conjugate before and after the activated carbon filter and the content of by-products derived from compound (2) are measured using the method described in 8)-4 of Example 8.
  • Example 10 pH Study 2
  • the antibody is reduced and the antibody is conjugated with a drug linker by the method described in 8)-1 of Example 8.
  • a 0.03 mol/L N-acetylcysteine aqueous solution (15.0 equivalents per antibody molecule) is added, and the mixture is stirred at the same temperature for 30 minutes to quench excess compound (2), and the reaction solution is adjusted to pH 6.0 using a 10% aqueous acetic acid solution, or to pH 4.0 using a 10% aqueous acetic acid solution and acetic acid.
  • a reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate in which the drug linker represented by the formula (I) is linked to the anti-CD37 antibody via a thioether bond is obtained.
  • the resulting reaction solution is roughly purified using a filter by the method described in 8)-3 of Example 8, and the concentration of the antibody-drug conjugate before and after the activated carbon filter and the content of by-products derived from compound (2) are measured by the method described in 8)-4 of Example 8.
  • Example 11 Examination of the amount of by-products derived from compound (2) 2 A solution containing the same anti-CD37 antibody as that used in Example 8 (corresponding to 1.00 g of antibody) is placed in a glass flask, and a 120 mmol/L L-histidine aqueous solution (17 mL) containing 0.07 g/g polysorbate 80 and 2.0 mol/L EDTA is added. Next, an aqueous solution containing 10 mmol/L TCEP hydrochloride (6.00 equivalents per antibody molecule) is added under stirring at 30°C, and the antibody having a thiol group is produced by stirring at the same temperature. After 3 hours, the reaction solution is cooled to an internal temperature of 15°C, and compound (2) (10.00 equivalents per antibody molecule) is added under stirring to react with the antibody having a thiol group.
  • the reaction solution is quenched by the method described in 8)-2 of Example 8, the reaction solution is roughly purified by a filter by the method described in 8)-3 of Example 8, and the concentration of the antibody-drug conjugate before and after the activated carbon filter and the content of by-products derived from compound (2) are measured by the method described in 8)-4 of Example 8.
  • Example 12 Study of activated carbon filter rinsing method 2 A reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate is prepared and the resulting reaction solution is roughly purified by the method described in Example 8, 8)-1 to 8)-3, and the concentration of the antibody-drug conjugate and the content of by-products derived from compound (2) are measured by the method described in Example 8, 8)-4.
  • Example 13 Study of activated carbon filter rinsing method 3 A reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate is prepared and the resulting reaction solution is roughly purified by the method described in Example 8, 8)-1 to 8)-3, and the concentration of the antibody-drug conjugate and the content of by-products derived from compound (2) are measured by the method described in Example 8, 8)-4.
  • the antibody-drug conjugate concentration and the content of by-products derived from compound (2) in the rinse solution obtained before and after the activated carbon filter are measured using the method described in 8)-4 of Example 8.
  • Example 14 Production of antibody-drug conjugate drug substance including a purification step using an activated carbon filter A reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate is prepared and the resulting reaction solution is roughly purified by the methods described in 8)-1 of Example 8 to 8)-3 of Example 8. Next, the pump tube and the activated carbon filter are rinsed with 8.5 mmol/L L-histidine buffer (pH 5.3) (4.7 mL).
  • the resulting reaction solution is ultrafiltered using a Pellicon 3 (registered trademark) Cassette Ultracel (registered trademark) ultrafiltration membrane while being circulated using a diaphragm pump to concentrate the antibody-drug conjugate.
  • the concentrated reaction solution is then diafiltered using a five-fold volume of 10.8 mmol/L L-histidine buffer (pH 5.2), and then concentrated again by ultrafiltration to obtain a solution containing the anti-CD37 antibody-drug conjugate.
  • the histidine buffer solution (pH 5.3) containing sucrose and histidine buffer solution (pH 5.3) containing polysorbate 80 are added to the resulting reaction solution to adjust the anti-CD37 antibody-drug conjugate concentration to 25 g/L, yielding the anti-CD37 antibody-drug conjugate drug substance.
  • Example 15 Removal of by-products derived from compound (2) using an activated carbon filter 3 An experiment similar to that of Example 1 was performed using the anti-CD37 antibody described in WO 2023/068226 (an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 20 to 468 in SEQ ID NO: 3 and a light chain consisting of the amino acid sequence set forth in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 4).
  • Example 16 Removal of by-products derived from compound (2) using an activated carbon filter 4 An experiment similar to that in Example 1 was carried out using the anti-MUC1 antibody described in WO 2023/068226 (an antibody comprising a heavy chain consisting of the amino acid sequence described in amino acid numbers 20 to 468 in SEQ ID NO: 3 and a light chain consisting of the amino acid sequence described in amino acid numbers 21 to 234 in SEQ ID NO: 4).
  • Example 17 Effect of pre-use washing with polysorbate 80 aqueous solution 1
  • a reaction solution containing an anti-CD37 antibody-drug conjugate was obtained by the method of Example 15. Before subjecting the solution to "crude purification of the reaction solution using a filter", the activated charcoal filter was washed with an aqueous polysorbate 80 solution before use, and the effect of washing was evaluated.
  • the activated carbon filter be washed with water before use to prevent contamination of the reaction solution with eluates from the activated carbon.
  • the activated carbon filter was washed with 80 mL of water before use, but in this experiment, a part of this 80 mL was replaced with a 1% polysorbate 80 aqueous solution to wash it before use. That is, 50 mL of water was pumped using a rotary pump to wash the activated carbon filter, and then 15 mL of 1% polysorbate 80 aqueous solution and 15 mL of water were pumped to the activated carbon filter in that order to wash it. After that, the reaction solution was roughly purified using a filter and the antibody-drug conjugate and by-products derived from compound (2) were measured using the method of Example 15.
  • Example 18 Effect of pre-use washing with polysorbate 80 aqueous solution 2
  • the conditions for pre-use washing were partially changed from those in Example 17. That is, in the step of washing the activated carbon filter before use, 80 mL of water was pumped by a rotary pump to wash the activated carbon filter, and then 40 mL of a 1% polysorbate 80 aqueous solution and 10 mL of water were pumped in this order to the activated carbon filter for washing.
  • Example 19 Removal of low molecular weight impurities
  • the TCEP, TCEPO, and NAC contents in the reaction solution containing the anti-GPR20 antibody-drug conjugate before and after activated carbon filter filtration obtained in Example 1)-3, the reaction solution containing the anti-CD37 antibody-drug conjugate before and after activated carbon filter filtration obtained in Example 15, and the reaction solution containing the anti-MUC1 antibody-drug conjugate before and after activated carbon filter filtration obtained in Example 16 were measured.
  • the TCEP, TCEPO, and NAC contents in the reaction solution containing the anti-GPR20 antibody-drug conjugate before and after filtration without using an activated carbon filter obtained in Example 1)-3 were similarly measured.
  • the contents of each impurity are shown in Table 16. It was confirmed that TCEP, TCEPO, and NAC can be removed by the activated carbon filter.
  • the manufacturing method of the present invention makes it possible to reduce manufacturing costs and/or labor compared to conventional manufacturing methods for antibody-drug conjugates.
  • a purification process that can remove impurities more efficiently than conventional purification processes for antibody-drug conjugates, particularly a purification process for antibody-drug conjugates that replaces ultrafiltration, and a manufacturing method for antibody-drug conjugates that includes the purification process, are provided.
  • the manufacturing method of the present invention makes it possible to reduce the amount of waste liquid discharged from the production of antibody-drug conjugates.
  • the antibody-drug conjugates manufactured by the present invention are useful as pharmaceuticals.
  • SEQ ID NO:1 Amino acid sequence of anti-GPR20 antibody heavy chain (h046-H4e)
  • SEQ ID NO:2 Amino acid sequence of anti-GPR20 antibody light chain (h046-L7)
  • SEQ ID NO:3 Amino acid sequence of anti-CD37 antibody heavy chain (hmAb-H541)
  • SEQ ID NO:4 Amino acid sequence of anti-CD37 antibody light chain (hmAb-L11)
  • SEQ ID NO:6 Amino acid sequence of anti-MUC1 antibody heavy chain (PankoMab)
  • SEQ ID NO:7 Amino acid sequence of anti-MUC1 antibody light chain (N54Q and PankoMab)
  • SEQ ID NO:8 Amino acid sequence of anti-HER2 antibody heavy chain
  • SEQ ID NO:9 Amino acid sequence of anti-TROP2 antibody heavy chain (hTINA

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Abstract

エキサテカン化合物由来の副生成物を効率的に除去するための精製法を含む、抗体－薬物コンジュゲートの製造方法を提供すること。　下式(式中、Aは抗体との結合位置を示す)で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体－薬物コンジュゲートの製造方法であって、(i)抗体-薬物コンジュゲートを含む溶液から、活性炭材料を用いて、前記溶液に含まれるエキサテカン化合物由来の副生成物を除去する工程、を含むことを特徴とする、製造方法。

Description

活性炭材料を使用する精製工程を含む抗体－薬物コンジュゲートの製造方法
　本発明は、活性炭材料を使用する精製工程を含む、抗体－薬物コンジュゲートの製造方法に関する。特に本発明は、活性炭材料を使用するエキサテカン化合物由来の副生成物を除去するための精製工程を含む、抗体－薬物コンジュゲートの製造方法に関する。
　がん細胞表面に発現する抗原に結合し、かつ細胞に内在化できる抗体に、細胞毒性を有する薬物を結合させた抗体－薬物コンジュゲート(Antibody-Drug Conjugate;ADC)は、がん細胞に選択的に薬物を送達できることによって、がん細胞内に薬物を蓄積させ、がん細胞を死滅させることが期待できる(非特許文献1～5)。抗体－薬物コンジュゲートの一つの例として、抗体とトポイソメラーゼI阻害剤であるエキサテカンの誘導体を構成要素とする抗体－薬物コンジュゲート(以下「DXd-ADC」とも呼ぶ)が知られている(特許文献1～6及び非特許文献6～9)。これらの抗体－薬物コンジュゲートは、優れた抗腫瘍効果と安全性を有することから、例えばトラスツズマブ デルクステカンは世界各国で医薬品として既に承認され、現在でも多くの臨床試験が進行中である。
　一般に、抗体－薬物コンジュゲートにおいては、細胞毒性活性の高い薬物を抗体に結合させており、抗体に結合していない前記薬物に由来する高活性不純物は、前記抗体－薬物コンジュゲート原薬から可能な限り除去することが好ましく、その原薬品質として極めて重要な要件となっている。
　特許文献7～15の実施例には、DXd-ADC以外の抗体－薬物コンジュゲートの製造方法が記載されている。これらの製造方法では、疎水性クロマトグラフィーやゲル濾過クロマトグラフィー等のクロマトグラフィーによる精製工程が含まれている。
　特許文献1～6には、抗体－薬物コンジュゲートであるDXd-ADCを製造するための方法として、抗体と薬物リンカー中間体とをコンジュゲーションする方法及び得られた抗体－薬物コンジュゲート粗体を精製する方法が記載されている。特許文献2～4の実施例には、前記抗体－薬物コンジュゲート粗体を、ソルビトール含有酢酸緩衝液を用いた限外濾過により精製した旨が記載されている。特許文献5には、前記抗体－薬物コンジュゲート粗体を、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液又はリン酸緩衝液を用いた限外濾過により精製することができる旨が記載されている。また、特許文献6には、前記抗体－薬物コンジュゲート粗体を、塩を含む緩衝液を用いた限外濾過により、効果的に精製できる旨が記載されている。
　特許文献16の実施例には、ピロロベンゾジアゼピンと抗体とのコンジュゲート(以下「PBD-ADC」とも呼ぶ)の生成混合物から、ピロロベンゾジアゼピン関連の不純物を、活性炭濾過によって除去する方法が記載されている。
　上述のように抗体－薬物コンジュゲートの精製方法に関連する技術がいくつか知られているが、DXd-ADCに関して、高活性な薬物由来の不純物を精製するための改良法の開発が望まれていた。
国際公開第2014/057687号 国際公開第2015/098099号 国際公開第2015/115091号 国際公開第2015/155998号 国際公開第2017/002776号 国際公開第2020/022363号 国際公開第2002/098883号 国際公開第2005/037992号 国際公開第2005/084390号 国際公開第2006/086733号 国際公開第2007/024536号 国際公開第2010/141566号 国際公開第2011/039724号 国際公開第2012/135517号 国際公開第2015/104359号 国際公開第2014/143622号
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　本発明の課題は、エキサテカン化合物由来の副生成物を効率的に除去するための精製工程を含む抗体－薬物コンジュゲートの製造方法を提供することである。また、別の本発明の課題は、抗体－薬物コンジュゲートの製造において生じ得る高活性不純物を含む廃液を低減した製造方法を提供することである。
　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行ったところ、抗体－薬物コンジュゲートの精製工程において活性炭材料を用いることにより、DXd-ADCのエキサテカン誘導体に由来する高活性なエキサテカン化合物由来の副生成物を効率的に除去可能であることを見出し、本発明を完成させた。
即ち、本発明は以下の発明を包含する。
[1] 式(1)
(式中、Aは抗体との結合位置を示す)
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体－薬物コンジュゲートの製造方法であって、
(i)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液から、活性炭材料を用いて、前記溶液に含まれるエキサテカン化合物由来の副生成物を除去する工程、
を含むことを特徴とする、製造方法。
[2] (i)の工程が、抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を、活性炭フィルターを用いて濾過する工程である、[1]の製造方法。
[3] (i)の工程が、抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を、活性炭フィルターを用いて濾過する工程であって、前記溶液を活性炭フィルターに1回のみ通液させる工程である、[1]又は[2]の製造方法。
[4] 活性炭材料に含まれる活性炭が、1000～2000m2/gの表面積を有する、[1]～[3]のいずれか1つの製造方法。
[5] 活性炭材料に含まれる活性炭が、5～40μmの平均粒子径を有する、[1]～[4]のいずれか1つの製造方法。
[6] 活性炭材料に含まれる活性炭が、5～40μmの平均粒子径を有する割合が少なくとも98重量％である、[1]～[5]のいずれか1つの製造方法。
[7] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液の温度が、0℃～30℃である、[1]～[6]のいずれか1つの製造方法。
[8] (ii)抗体を、還元剤で還元する工程、
(iii)式(2)
で表される化合物を、(ii)の工程で還元された抗体と反応させる工程、
(iv)チオール基を有する試薬を添加し、(iii)の工程で残存した式(2)で表される化合物と反応させる工程、
を含む、[1]～[7]のいずれか1つの製造方法。
[9] (iv)の工程の後の工程に、(i)の工程を含む、[1]～[8]のいずれか1つの製造方法。
[10] エキサテカン化合物由来の副生成物が、式(2)で表される化合物のマレイミジル基に(ii)の工程で使用される還元剤が付加した化合物、及び/又は、式(2)で表される化合物のマレイミジル基に(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬が付加した化合物を含む、[1]～[9]のいずれか1つの製造方法。
[11] エキサテカン化合物由来の副生成物が、式(3)
で示される化合物、及び/又は、式(4)
で示される化合物を含む、[1]～[10]のいずれか1つの製造方法。
[12] (ii)の工程で使用される還元剤が、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン又はその塩である、[1]～[11]のいずれか1つの製造方法。
[13] (ii)の工程で使用される還元剤が、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩である、[1]～[12]のいずれか1つの製造方法。
[14] (ii)の工程が緩衝液中で行われる、[1]～[13]のいずれか1つの製造方法。
[15] 緩衝液が、ヒスチジン緩衝液である、[14]の製造方法。
[16] 緩衝液が、L-ヒスチジン水溶液である、[14]又は[15]の製造方法。
[17] 緩衝液が、リン酸水素二ナトリウム水溶液である、[14]の製造方法。
[18] 緩衝液が、酢酸緩衝液である、[14]の製造方法。
[19] 緩衝液が、酢酸ナトリウム水溶液である、[14]又は[18]の製造方法。
[20] (i)の工程が、キレート剤の存在下で行われる、[1]～[19]のいずれか1つの製造方法。
[21] キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸である、[20]の製造方法。
[22] (ii)の工程で使用される緩衝液が、界面活性剤を含有する、[14]～[21]のいずれか1つの製造方法。
[23] 界面活性剤が、ポリソルベート20である、[22]の製造方法。
[24] 界面活性剤が、ポリソルベート80である、[22]の製造方法。
[25] (ii)の工程で使用される緩衝液が、界面活性剤を含有しない、[14]～[21]のいずれか1つの製造方法。
[26] (ii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、2.0～10.0当量である、[1]～[25]のいずれか1つの製造方法。
[27] (ii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、8.0～10.0当量である、[1]～[26]のいずれか1つの製造方法。
[28] (ii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、8.9～10.0当量である、[1]～[27]のいずれか1つの製造方法。
[29] (ii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、4.0～6.0当量である、[1]～[26]のいずれか1つの製造方法。
[30] (iii)の工程で使用されるチオール基を有する試薬が、N-アセチルシステインである、[1]～[29]のいずれか1つの製造方法。
[31] (v)反応液のpHを調整する工程を含む、[1]～[30]のいずれか1つの製造方法。
[32] (iv)の工程に次いで、(v)の工程を含む、[1]～[31]のいずれか1つの製造方法。
[33] (v)の工程が、反応液のpHを4～6の範囲に調整する工程である、[31]又は[32]の製造方法。
[34] (v)の工程が、酢酸水溶液を用いて反応液のpHが調整される工程である、[31]～[33]のいずれか1つの製造方法。
[35] (vi)活性炭フィルターを洗浄する工程を含む、[1]～[34]のいずれか1つの製造方法。
[36] (i)の工程に次いで、(vi)の工程を含む、[35]の製造方法。
[37] (vi)の工程において、ヒスチジン緩衝液が使用される、[35]又は[36]の製造方法。
[38] (vi)の工程において、8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液が使用される、[35]～[37]のいずれか1つの製造方法。
[39] 抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である、[1]～[28]及び[30]～[38]のいずれか1つの製造方法。
[40] 抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7.5から8個の範囲である、[1]～[28]及び[30]～[39]のいずれか1つの製造方法。
[41] 抗体が、抗GPR20抗体である、[1]～[28]及び[30]～[40]のいずれか1つの製造方法。
[42] 抗GPR20抗体が、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[41]の製造方法。
[43] 抗GPR20抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[41]又は[42]の製造方法。
[44] 抗体が、抗CD37抗体である、[1]～[28]及び[30]～[40]のいずれか1つの製造方法。
[45] 抗CD37抗体が、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[44]の製造方法。
[46] 抗CD37抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[44]又は[45]の製造方法。
[47] 抗体が、抗MUC1抗体である、[1]～[28]及び[30]～[40]のいずれか1つの製造方法。
[48] 抗MUC1抗体が、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列又は配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[47]の製造方法。
[49] 抗MUC1抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[47]又は[48]の製造方法。
[50] 抗体が、抗HER2抗体である、[1]～[28]及び[30]～[40]のいずれか1つの製造方法。
[51] 抗HER2抗体が、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[50]の製造方法。
[52] 抗HER2抗体が、配列番号8に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[50]又は[51]の製造方法。
[53] 抗体が、抗HER3抗体である、[1]～[28]及び[30]～[40]のいずれか1つの製造方法。
[54] 抗HER3抗体が、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[53]の製造方法。
[55] 抗HER3抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[53]又は[54]の製造方法。
[56] 抗体が、抗CDH6抗体である、[1]～[28]及び[30]～[40]のいずれか1つの製造方法。
[57] 抗CDH6抗体が、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[56]の製造方法。
[58] 抗CDH6抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[56]又は[57]の製造方法。
[59] 抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3から4個の範囲である、[1]～[26]及び[29]～[38]のいずれか1つの製造方法。
[60] 抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4個の範囲である、[1]～[26]、[29]～[38]及び[59]のいずれか1つの製造方法。
[61] 抗体が、抗TROP2抗体である、[1]～[26]、[29]～[38]、[59]及び[60]のいずれか1つの製造方法。
[62] 抗TROP2抗体が、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[61]の製造方法。
[63] 抗TROP2抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[61]又は[62]の製造方法。
[64] 抗体が、抗B7-H3抗体である、[1]～[26]、[29]～[38]、[59]及び[60]のいずれか1つの製造方法。
[65] 抗B7-H3抗体が、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[64]の製造方法。
[66] 抗B7-H3抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[64]又は[65]の製造方法。
[67] クロマトグラフィーによる精製工程を含まないことを特徴とする、[1]～[66]のいずれか1つの製造方法。
[68] クロマトグラフィーが、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びアフィニティークロマトグラフィーからなる群より選択される少なくとも一つである、[67]の製造方法。
[69] [1]～[68]のいずれか1つの製造方法により、抗体－薬物コンジュゲートを製造し、さらに、
 (vii)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に緩衝液を添加する工程、
 (viii)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を濃縮する工程、及び、
 (ix)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を所定のpHに調整する工程、
からなる群より選択される少なくとも一つの工程、
並びに、
 (x)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に賦形剤を添加する工程、
を含む工程を施すことによる、
抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、及び賦形剤を含む医薬組成物の製造方法。
[70] 緩衝液がヒスチジン緩衝液である、[69]の製造方法。
[71] 賦形剤がスクロースである、[69]又は[70]の製造方法。
[72] 賦形剤がトレハロースである、[69]又は[70]の製造方法。
[73] [69]～[72]のいずれか1つの製造方法により、抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、及び賦形剤を含む医薬組成物を製造し、さらに、
 (xi)該医薬組成物に界面活性剤を添加する工程、
を含む工程を施すことによる、
抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤を含む医薬組成物の製造方法。
[74] 界面活性剤が、ポリソルベート80である、[73]の製造方法。
[75] 界面活性剤が、ポリソルベート20である、[73]の製造方法。
[76] エキサテカン化合物由来の副生成物を除去するための、1000～2000m2/gの表面積を有する活性炭を含む、活性炭材料。
[77] 含まれる活性炭が、5～40μmの平均粒子径を有する、[76]の活性炭材料。
[78] 含まれる活性炭が、5～40μmの平均粒子径を有する割合が少なくとも98重量%である、[76]又は[77]の活性炭材料。
　さらに、本発明は以下の発明も包含する。
[A1] 抗体－薬物コンジュゲートの製造方法であって、
(i)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液から、活性炭材料を用いて、前記溶液に含まれるエキサテカン化合物由来の副生成物を除去する工程、
を含むことを特徴とする、製造方法。
[A2] 抗体－薬物コンジュゲートの薬物が、トポイソメラーゼＩ阻害剤である[A1]の製造方法。
[A3] 抗体－薬物コンジュゲートが、以下の式で表される薬物
を放出することにより抗腫瘍活性を発揮する、[A2]の製造方法。
[A4] 抗体－薬物コンジュゲートが、以下の式で表される抗腫瘍化合物
の1位のアミノ基の窒素原子を結合位置としてリンカーを介して抗体と結合している、[A2]の製造方法。
[A5] 抗体－薬物コンジュゲートが、抗体に存在するジスルフィド結合部分に形成されるチオエーテル結合によってリンカーを介して抗体に抗腫瘍化合物が結合している、[A4]の製造方法。
[A6] 抗体－薬物コンジュゲートのリンカーが、-Gly-Gly-Phe-Gly-のテトラペプチド残基を含む、[A4]又は[A5]の製造方法。
[A7] 式(1)
(式中、Aは抗体との結合位置を示す)
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体－薬物コンジュゲートの製造方法であって、
(i)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液から、活性炭材料を用いて、前記溶液に含まれるエキサテカン化合物由来の副生成物を除去する工程、
を含むことを特徴とする、[A1]～[A6]のいずれか1つの製造方法。
[A8] (i)の工程が、抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を、活性炭フィルターを用いて濾過する工程である、[A7]の製造方法。
[A9] (i)の工程が、抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を、活性炭フィルターを用いて濾過する工程であって、前記溶液を活性炭フィルターに1回のみ通液させる工程である、[A7]又は[A8]の製造方法。
[A10] (i)の工程の前に、活性炭フィルターを使用前洗浄する工程を含む、[A8]又は[A9]の製造方法。
[A11] 使用前洗浄する工程において、界面活性剤を含む水溶液が使用される、[A10]の製造方法。
[A12] 使用前洗浄する工程において、ポリソルベート20水溶液又はポリソルベート80水溶液が使用される、[A10]又は[A11]の製造方法。
[A13] 使用前洗浄する工程において、ポリソルベート20水溶液が使用される、[A10]又は[A11]の製造方法。
[A14] 使用前洗浄する工程において、ポリソルベート80水溶液が使用される、[A10]又は[A11]の製造方法。
[A15] 活性炭材料に含まれる活性炭が、10～10000 m2/gの表面積を有する、[A7]～[A14]のいずれか1つの製造方法。
[A16] 活性炭材料に含まれる活性炭が、2 μm以上の平均粒子径を有する、[A7]～[A15]のいずれか1つの製造方法。
[A17] 活性炭材料に含まれる活性炭が、5～40 μmの平均粒子径を有する割合が少なくとも90重量%である、[A7]～[A16]のいずれか1つの製造方法。
[A18] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液の温度が、0℃～30℃である、[A7]～[A17]のいずれか1つの製造方法。
[A19] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液の温度が、10℃～20℃である、[A7]～[A18]のいずれか1つの製造方法。
[A20] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液の温度が、約15℃である、[A7]～[A19]のいずれか1つの製造方法。
[A21] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液のpHが、4.0～6.0である、[A7]～[A20]のいずれか1つの製造方法。
[A22] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液のpHが、約5である、[A7]～[A21]のいずれか1つの製造方法。
[A23] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液のpHが、約4.5である、[A7]～[A21]のいずれか1つの製造方法。
[A24] (ii)抗体を、還元剤で還元する工程、
(iii)式(2)
で表される化合物を、(ii)の工程で還元された抗体と反応させる工程、
(iv)チオール基を有する試薬を添加し、(iii)の工程で残存した式(2)で表される化合物と反応させる工程、
を含む、[A7]～[A23]のいずれか1つの製造方法。
[A25] (iv)の工程の後の工程に、(i)の工程を含む、[A7]～[A24]のいずれか1つの製造方法。
[A26] エキサテカン化合物由来の副生成物が、式(2)で表される化合物のマレイミジル基に(ii)の工程で使用される還元剤が付加した化合物、及び/又は、式(2)で表される化合物のマレイミジル基に(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬が付加した化合物を含む、[A7]～[A25]のいずれか1つの製造方法。
[A27] エキサテカン化合物由来の副生成物が、式(3)
で示される化合物、及び/又は、式(4)
で示される化合物を含む、[A7]～[A26]のいずれか1つの製造方法。
[A28] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液における、式(3)で示される化合物の含有量が、300 μM以下である、[A27]の製造方法。
[A29] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液における、式(3)で示される化合物の含有量が、0～150 μMである、[A27]又は[A28]の製造方法。
[A30] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液における、式(4)で示される化合物の含有量が、160 μM以下である、[A27]～[A29]のいずれか1つの製造方法。
[A31] (i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液における、式(4)で示される化合物の含有量が、0～80 μMである、[A27]～[A30]のいずれか1つの製造方法。
[A32] (i)の工程により得られる抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液が、0.3%以下の化合物(2)由来の副生成物を含有する、[A7]～[A31]のいずれか1つの製造方法。
[A33] (ii)の工程で使用される還元剤が、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン又はその塩である、[A7]～[A32]のいずれか1つの製造方法。
[A34] (ii)の工程で使用される還元剤が、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩である、[A7]～[A33]のいずれか1つの製造方法。
[A35] (ii)の工程が緩衝液中で行われる、[A7]～[A34]のいずれか1つの製造方法。
[A36] 緩衝液が、ヒスチジン緩衝液である、[A35]の製造方法。
[A37] 緩衝液が、L-ヒスチジン水溶液である、[A35]又は[A36]の製造方法。
[A38] 緩衝液が、リン酸水素二ナトリウム水溶液である、[A35]の製造方法。
[A39] 緩衝液が、酢酸緩衝液である、[A35]の製造方法。
[A40] 緩衝液が、酢酸ナトリウム水溶液である、[A35]又は[A39]の製造方法。
[A41] (ii)の工程が、キレート剤の存在下で行われる、[A7]～[A40]のいずれか1つの製造方法。
[A42] キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸である、[A41]の製造方法。
[A43] (ii)の工程で使用される緩衝液が、界面活性剤を含有する、[A35]～[A42]のいずれかの1つの製造方法。
[A44] 界面活性剤が、ポリソルベート20である、[A43]の製造方法。
[A45] 界面活性剤が、ポリソルベート80である、[A43]の製造方法。
[A46] (ii)の工程で使用される緩衝液が、界面活性剤を含有しない、[A35]～[A42]のいずれか1つの製造方法。
[A47] (iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、2.0～10.0当量である、[A7]～[A46]のいずれか1つの製造方法。
[A48] (iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、8.0～10.0当量である、[A7]～[A47]のいずれか1つの製造方法。
[A49] (iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、8.9～10.0当量である、[A7]～[A48]のいずれか1つの製造方法。
[A50] (iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、4.0～6.0当量である、[A7]～[A47]のいずれか1つの製造方法。
[A51] (iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬が、N-アセチルシステインである、[A7]～[A50]のいずれか1つの製造方法。
[A52] (v)反応液のpHを調整する工程を含む、[A7]～[A51]のいずれか1つの製造方法。
[A53] (iv)の工程に次いで、(v)の工程を含む、[A7]～[A52]のいずれか1つの製造方法。
[A54] (v)の工程が、反応液のpHを4～6の範囲に調整する工程である、[A52]又は[A53]の製造方法。
[A55] (v)の工程が、反応液のpHを約5に調整する工程である、[A52]～[A54]のいずれか1つの製造方法。
[A56] (v)の工程が、反応液のpHを約4.5に調整する工程である、[A52]～[A54]のいずれか1つの製造方法。
[A57] (v)の工程が、酢酸水溶液を用いて反応液のpHが調整される工程である、[A52]～[A56]のいずれか1つの製造方法。
[A58] (vi)活性炭フィルターをリンスする工程を含む、[A7]～[A57]のいずれか1つの製造方法。
[A59] (i)の工程に次いで、(vi)の工程を含む、[A58]の製造方法。
[A60] (vi)の工程において、ヒスチジン緩衝液が使用される、[A58]又は[A59]の製造方法。
[A61] (vi)の工程において、8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液が使用される、[A58]～[A60]のいずれか1つの製造方法。
[A62] 抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である、[A7]～[A61]のいずれか1つの製造方法。
[A63] 抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7.5から8個の範囲である、[A7]～[A62]のいずれか1つの製造方法。
[A64] 抗体が、抗GPR20抗体である、[A7]～[A63]のいずれか1つの製造方法。
[A65] 抗GPR20抗体が、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A64]の製造方法。
[A66] 抗GPR20抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[A64]又は[A65]のいずれか1つの製造方法。
[A67] 抗体が、抗CD37抗体である、[A7]～[A63]のいずれか1つの製造方法。
[A68] 抗CD37抗体が、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A67]の製造方法。
[A69] 抗CD37抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[A67]又は[A68]の製造方法。
[A70] 抗体が、抗MUC1抗体である、[A7]～[A63]のいずれか1つの製造方法。
[A71] 抗MUC1抗体が、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列又は配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A70]の製造方法。
[A72] 抗MUC1抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[A70]又は[A71]の製造方法。
[A73] 抗体が、抗HER2抗体である、[A7]～[A63]のいずれか1つの製造方法。
[A74] 抗HER2抗体が、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A73]の製造方法。
[A75] 抗HER2抗体が、配列番号8に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A73]又は[A74]の製造方法。
[A76] 抗体が、抗HER3抗体である、[A7]～[A63]のいずれか1つの製造方法。
[A77] 抗HER3抗体が、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A76]の製造方法。
[A78] 抗HER3抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[A76]又は[A77]のいずれか1つの製造方法。
[A79] 抗体が、抗CDH6抗体である、[A7]～[A63]のいずれか1つの製造方法。
[A80] 抗CDH6抗体が、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A79]の製造方法。
[A81] 抗CDH6抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[A79]又は[A80]の製造方法。
[A82] 抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3から4個の範囲である、[A7]～[A61]のいずれか1つの製造方法。
[A83] 抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4個の範囲である、[A7]～[A61]及び[A82]のいずれか1つの製造方法。
[A84] 抗体が、抗TROP2抗体である、[A7]～[A61]、[A82]及び[A83]のいずれか1つの製造方法。
[A85] 抗TROP2抗体が、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A84]の製造方法。
[A86] 抗TROP2抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[A84]又は[A85]の製造方法。
[A87] 抗体が、抗B7-H3抗体である、[A7]～[A61]、[A82]及び[A83]のいずれかの製造方法。
[A88] 抗B7-H3抗体が、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、[A87]の製造方法。
[A89] 抗B7-H3抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、[A87]又は[A88]の製造方法。
[A90] クロマトグラフィーによる精製工程を含まないことを特徴とする、[A7]～[A89]のいずれか1つの製造方法。
[A91] クロマトグラフィーが、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びアフィニティークロマトグラフィーからなる群より選択される少なくとも一つである、[A90]の製造方法。
[A92] 式(1)
(式中、Aは抗体との結合位置を示す)
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体－薬物コンジュゲートの製造方法であって、
(ii)抗体を、ポリソルベート20若しくはポリソルベート80を含有するか又は含有しないL-ヒスチジン水溶液中で、エチレンジアミン四酢酸の存在下でトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩で還元する工程、
(iii)式(2)
で表される化合物8.9～10.0当量又は4.0～6.0当量を、(ii)の工程で還元された抗体と反応させる工程、
(iv)N-アセチルシステインを添加し、(iii)の工程で残存した式(2)で表される化合物と反応させる工程、
(v)反応液のpHを、酢酸水溶液を用いて約5又は約4.5に調整する工程、
(i)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を、約15℃で活性炭フィルターを用いて1回のみ通液させて濾過して式(3)
で示される化合物、及び、式(4)
で示される化合物を除去する工程、
(vi)活性炭フィルターを8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液を使用してリンスする工程、
を上記の順に含む、製造方法。
[A93] [A7]～[A92]のいずれか1つの製造方法により、抗体－薬物コンジュゲートを製造し、さらに、
　(vii)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に緩衝液を添加する工程、
　(viii)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を濃縮する工程、及び、
　(ix)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を所定のpHに調整する工程、
からなる群より選択される少なくとも一つの工程、
並びに、
　(x)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に賦形剤を添加する工程、
を含む工程を施すことによる、
抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、及び賦形剤を含む医薬組成物の製造方法。
[A94] 緩衝液がヒスチジン緩衝液である、[A93]の製造方法。
[A95] 賦形剤がスクロースである、[A93]又は[A94]の製造方法。
[A96] 賦形剤がトレハロースである、[A93]又は[A94]の製造方法。
[A97] [A93]～[A96]のいずれか1つの製造方法により、抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、及び賦形剤を含む医薬組成物を製造し、さらに、
　(xi)該医薬組成物に界面活性剤を添加する工程、
を含む工程を施すことによる、
抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤を含む医薬組成物の製造方法。
[A98] 界面活性剤が、ポリソルベート80である、[A97]の製造方法。
[A99] 界面活性剤が、ポリソルベート20である、[A97]の製造方法。
[A100] 医薬組成物が、0.3%以下の化合物(2)由来の副生成物を含有する、[A93]～[A99]のいずれか1つの製造方法。
[A101] エキサテカン化合物由来の副生成物を除去するための、10～10000 m2/gの表面積を有する活性炭を含む、活性炭材料。
[A102] 含まれる活性炭が、2 μm以上の平均粒子径を有する、[A101]の活性炭材料。
[A103] 含まれる活性炭が、5～40 μmの平均粒子径を有する割合が少なくとも90重量％である、[A101]又は[A102]の活性炭材料。
　本発明の製造方法に含まれる活性炭材料を用いる精製工程は、DXd-ADCのエキサテカン誘導体に由来する高活性なエキサテカン化合物由来の副生成物を効率的に除去することができる。本発明の製造方法に含まれる精製工程によれば、目的の抗体－薬物コンジュゲートの一部が活性炭に吸着され得るが、緩衝液によりリンスすることで活性炭からエキサテカン化合物由来の副生成物の溶出を伴うことなく前記抗体－薬物コンジュゲートを回収することが可能である。また、本発明の製造方法に含まれる精製工程は、既存の精製法と比較して、高活性不純物を含有する廃液量を削減することができる。さらに本発明は、抗体－薬物コンジュゲート及び抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物の効率的な製造方法を提供することができる。本発明の製造方法に含まれる精製工程によれば、低分子不純物を除去することができる。
抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、活性炭フィルターを含む場合及び含まない場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、液温0℃及び30℃で活性炭フィルターを通液した場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、pH4.0及び6.0で活性炭フィルターを通液した場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、化合物(2)由来の副生成物を高濃度にして活性炭フィルターを通液した場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液で活性炭フィルターを通液した場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、添加物(ポリソルベート20)の有無による化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、緩衝液によって活性炭フィルターをリンスした場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗GPR20抗体重鎖(h046-H4e)のアミノ酸配列(配列番号1)を示した図である。 抗GPR20抗体軽鎖(h046-L7)のアミノ酸配列(配列番号2)を示した図である。 抗CD37抗体重鎖(hmAb-H541)のアミノ酸配列(配列番号3)を示した図である。 抗CD37抗体軽鎖(hmAb-L11)のアミノ酸配列(配列番号4)を示した図である。 抗MUC1抗体重鎖(N54Q)のアミノ酸配列(配列番号5)を示した図である。 抗MUC1抗体重鎖(PankoMab)のアミノ酸配列(配列番号6)を示した図である。 抗MUC1抗体軽鎖(N54Q及びPankoMab)のアミノ酸配列(配列番号7)を示した図である。 抗HER2抗体重鎖のアミノ酸配列(配列番号8)を示した図である。 抗HER2抗体軽鎖のアミノ酸配列(配列番号9)を示した図である。 抗TROP2抗体重鎖(hTINA1-H1)のアミノ酸配列(配列番号10)を示した図である。 抗TROP2抗体軽鎖(hTINA1-L1)のアミノ酸配列(配列番号11)を示した図である。 抗HER3抗体重鎖のアミノ酸配列(配列番号12)を示した図である。 抗HER3抗体軽鎖のアミノ酸配列(配列番号13)を示した図である。 抗B7-H3抗体重鎖(M30-H1)のアミノ酸配列(配列番号14)を示した図である。 抗B7-H3抗体軽鎖(M30-L4)のアミノ酸配列(配列番号15)を示した図である。 抗CDH6抗体重鎖(hH01)のアミノ酸配列(配列番号16)を示した図である。 抗CDH6抗体軽鎖(hL02)のアミノ酸配列(配列番号17)を示した図である。 抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、緩衝液によって活性炭フィルターをリンスした場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗MUC1抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、緩衝液によって活性炭フィルターをリンスした場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、活性炭フィルターをポリソルベート80水溶液15 mLで使用前洗浄した場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。 抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の濾過工程において、活性炭フィルターをポリソルベート80水溶液40 mLで使用前洗浄した場合の化合物(2)由来の副生成物濃度及びタンパク回収率を示した図である。
１.定義
　本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、特に定義されない限り、本発明が属する技術分野の通常の知識を有する者によって一般に理解される意味と同義である。本明細書において、以下で定義される用語及び語句は、定義された意味に解釈される。
　本明細書において、「抗体」とは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、少なくとも2つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体(二重特異性抗体を含む)、Fc融合タンパク質及び生物学的活性を呈する抗体の機能性断片等を意味する。
　本明細書において、「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術によって産生される抗体に限定されず、任意の真核生物、原核生物又はファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体をいう。
　本明細書において、「抗体の機能性断片」とは、元の抗体が奏する機能の少なくとも一部を奏する抗体断片を意味する。「抗体の機能性断片」としては、例えば、Fab、F(ab’)2、scFv、Fab’、一本鎖免疫グロブリン等を挙げることができるが、それらに限定されるものではない。かかる抗体の機能性断片は、抗体タンパク質の全長分子をパパイン、ペプシン等の酵素で処理することによって得られたものに加え、組換え遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された組換えタンパク質であってもよい。「抗体の機能性断片」のうち、抗原への結合活性を有するものを、「抗体の抗原結合断片」という。
　本明細書において、「抗体－薬物コンジュゲート」とは、抗体と薬物の複合体を指し、典型的には抗体にリンカーを介して薬物が連結された複合体を指す。薬物は特に限定されないが、細胞毒性活性を有する薬物(例えば、後述のエキサテカン等)が典型的に用いられる。リンカーは、切断可能な単位を含んでいてもよく、切断可能な単位としては、例えば、ジスルフィド交換により切断可能なジスルフィド含有リンカー、酸性pHで切断可能な酸不安定リンカー、ヒドロラーゼ、エステラーゼ、ペプチダーゼ又はグルコロニダーゼにより切断可能なリンカー(例えば、ペプチドリンカー、グルコロニドリンカー)等が挙げられる。
　本明細書において、「エキサテカン」とは、IUPAC名:(1S,9S)-1-アミノ-9-エチル-5-フルオロ-1,2,3,9,12,15-ヘキサヒドロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10H,13H-ベンゾ[de]ピラノ[3’,4’:6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-10,13-ジオン、化学名:(1S,9S)-1-アミノ-9-エチル-5-フルオロ-2,3-ジヒドロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-1H,12H-ベンゾ[de]ピラノ[3’,4’:6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-10,13(9H,15H)-ジオンとして表されるトポイソメラーゼI阻害剤である。エキサテカンは、次式(5)
で示される、抗腫瘍効果を有するカンプトテシン誘導体である。
　本明細書において、「エキサテカン化合物由来の副生成物」とは、抗体とエキサテカンの誘導体を構成要素とする抗体－薬物コンジュゲートを製造する過程で生じる、少なくともエキサテカン構造を含む副生成物である。
　本明細書において、「化合物(2)由来の副生成物」とは、次式(2)
で示される化合物(以下「化合物(2)」とも呼ぶ)に由来する副生成物のことであり、例えば、次式(3)
で示される化合物、及び、次式(4)
で示される化合物を挙げられるが、これらに限定されない。化合物(2)由来の副生成物には、上記の化合物以外にも、例えば、化合物(2)が分子間で結合した二量体、三量体、三量体以上の多量体、化合物(2)のマレイミド部分への他の分子(例えば、N-ヒドロキシコハク酸イミド)の付加体、化合物(2)の酸化体、化合物(2)の還元体、エキサテカン部分がヘミアミナール部分で切断されたリンカー等も含まれる。化合物(2)由来の副生成物は高活性なエキサテカン誘導体を構造中に含むため、抗体－薬物コンジュゲートを製造するうえでの重要な管理項目の一つとなる。本発明の製造方法に含まれる精製工程により、細胞を宿主とした生産系によって製造された抗体の培養上清に存在する、タンパク質やDNA等の宿主細胞由来不純物(Host cell protein;HCP)、目的物質由来不純物(凝集体、類縁物質等)及びウイルス様粒子も化合物(2)由来の副生成物と同様に除去され得る。また、本明細書において、「化合物(2)由来の副生成物」は「エキサテカン化合物由来の副生成物」に含まれる。
　本明細書において、「低分子不純物」には、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(以下「TCEP」とも呼ぶ)、及びN-アセチルシステイン(以下「NAC」とも呼ぶ)が含まれる。
　本明細書において、「活性炭材料」とは、炭素から構成された又は炭素を含有する任意の物質、活性炭を含む材料を意味する。
　本明細書において、「活性炭(activated carbon又はactivated charcoal)」とは、その細孔構造を強化するために処理された炭素質材料を意味する。活性炭は、非常に高い表面積を有する多孔質の固体である。これらは石炭、木材、ヤシ殻、木の実の殻、泥炭をはじめとする種々の供給源から得ることができる。活性炭は、制御された環境下での加熱を伴う物理的な活性化又は強酸、塩基若しくは酸化剤を使用する化学的活性化を使用して、これらの材料から製造することができる。活性化方法は、高い不純物クリアランス能を活性炭に与えるための高い表面積を有する多孔質構造を作り出す。ほとんどの他の吸着材料とは対照的に、活性炭は、比較的弱いファンデルワールス力を使用して分子と相互作用をすると考えられている。本発明の精製工程に用いられる活性炭としては、1種類の活性炭を単独で使用しても、2種類以上の活性炭を単独で又はそれらを混合して用いてもよい。
　本明細書において、「活性炭フィルター」とは、活性炭材料を含むフィルターである。狭義には、予め活性炭材料を充填して一体として形成されているデプスフィルターである。広義には、除去対象物を含む混合液(以下「プロセス液」とも呼ぶ)に活性炭を懸濁させたのちにフィルターを用いて活性炭材料を除去するような、フィルターと一体となっていない場合も含む。その場合に用いられるフィルターとしては特に限定されないが、例えば、デプスフィルター、セライト濾過、遠心濾過フィルター等が挙げられる。本明細書における「活性炭フィルター」は、狭義及び広義の両方を含む意味で用いられる。
　本明細書において、「デプスフィルター」とは、抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液から粒子を除去する目的で使用される、次第に減少する孔径を有する連続的に配置された一連のフィルターを意味する。デプスフィルターの三次元マトリックスは抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液が通過する迷路状経路を形成し、該マトリックスの深さ全体にわたってランダムに粒子を吸着し機械的に捕捉する。種々のデプスフィルターは、活性炭、巻かれた綿、ポリプロピレン、レーヨンセルロース、ガラス繊維、焼結金属、磁器、珪藻土又は他の公知成分で構成される。
　本明細書において、「緩衝液」とは、酸性物質若しくは塩基性物質の付加又は遊離に起因するpHの変化が、溶解した緩衝物質によって水平化される溶液を意味する。そのような性質を有する任意の緩衝物質を用いることができる。一般的に、薬学的に許容される緩衝物質が用いられる。本発明において使用される緩衝液は特に限定されず、例えば、リン酸及び/若しくはその塩からなるリン酸緩衝液、酢酸及びその塩からなる酢酸緩衝液、ヒスチジン及び/若しくはその塩からなるヒスチジン緩衝液、クエン酸及び/若しくはその塩からなるクエン酸緩衝液、モルホリン緩衝液、2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)緩衝液、Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid)(以下「PIPES」とも呼ぶ)緩衝液、4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine ethanesulfonic acid(以下「HEPES」とも呼ぶ)緩衝液等が用いられる。本発明において使用される緩衝液は、追加の塩、例えば、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム等を任意で含んでいてもよい。
　本明細書において、「キレート剤」とは、金属イオン(好ましくは、二価又は多価金属イオン)に結合することができ、少なくとも2つの基を有する二座配位子又は多座配位子を意味する。金属イオンに結合可能な基としては、カルボキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基等が挙げられる。本発明において使用されるキレート剤は特に限定されず、当業者が通常用いるキレート剤の中から適宜選択することができるが、例えば、EDTA(エチレンジアミン四酢酸)、DOTA(1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1,4,7,10-四酢酸)、HEDTA(N-(2-ヒドロキシエチル)エチレンジアミン-N，N’，N’-三酢酸)、DHEDDA(ジヒドロキシエチルエチレンジアミン二酢酸)、1,3-PDTA(1,3-プロパンジアミン四酢酸)、DTPA(ジエチレントリアミン五酢酸)、TTHA(トリエチレンテトラミン-N，N，N’，N’’，Nヒドロキシ’’’-六酢酸)、NTA(ニトリロ三酢酸)、グルコン酸、HIMDA(ヒドロキシエチルイミノ二酢酸)、ASDA(L-アスパラギン酸二酢酸)、NTMP(ニトリロトリスメチレンホスホン酸)、HEDP(1-ヒドロキシエチリデン-1,1-ジホスホン酸)、3-ヒドロキシ-2,2’-イミノジコハク酸4ナトリウム、フェナントロリン、ポルフィリン、クラウンエーテル等が挙げられる。
　本明細書において、「界面活性剤」とは、親水性基と疎水性基を有し、医薬品製剤の構成成分の一つとして使用される物質を示す。本発明において使用される界面活性剤は特に限定されないが、ポリソルベート(ポリソルベート80(Tween80(登録商標))、ポリソルベート20(Tween20(登録商標))及びポリソルベート60(Tween60(登録商標))を含む)、ポリオキシエチレン(160)ポリオキシプロピレン(30)グリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、ポリオキシエチレンヒマシ油、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン-ソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレン-ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン-ステアリン酸、ポリオキシエチレンアルキルエーテル(例えばポリオキシエチレンモノラウリルエーテル、アルキルフェニルポリオキシ-エチレンエーテル(トリトン-X)、ポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレン共重合体(ポロクサマー、プルロニック(登録商標))、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)）等が挙げられる。
　本明細書において、「ゲル濾過クロマトグラフィー」とは、カラムに多孔性ゲルを充填し、分子ふるい効果により含まれる成分をその分子の分子量の差によって分離する液体クロマトグラフィーの一手法である。ゲル濾過クロマトグラフィーは、タンパク質やペプチド及び核酸や多糖類など生体成分の精密分離に用いられるばかりではなく、分子量測定にも広く用いられる。ゲル濾過クロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィー用サンプルの脱塩やバッファー交換又は一部の製造の用途では最終精製品の成分調製等にも用いられることがある。試料が溶液状態であって、分離しようとする成分の分子サイズに差があれば原理的には分離が可能であり、他の液体クロマトグラフィー手法よりも試料の適用範囲が広いことが大きな特徴である。
　本明細書において、「イオン交換クロマトグラフィー」とは、カラム内の固定相に対する移動相/試料中の荷電状態(静電的相互作用)の差を利用した成分の分離法で、主にイオン性化合物の分析に用いられる。イオン交換クロマトグラフィーには、陰イオン交換クロマトグラフィーと陽イオン交換クロマトグラフィーの2つのタイプがあり、またイオン交換基のイオン強度によって使用する固定相は異なる。本明細書において、「陽イオン交換材料」又は「CEX(;Cation EXchange)材料」なる用語は互換的に使用され、負に荷電し、かくして、固相上を又は固相中を通過した水性溶液中の陽イオンとの交換のための遊離陽イオンを有する固相を意味する。本明細書において、「陰イオン交換材料」又は「AEX(;Anion EXchange)材料」なる用語は互換的に使用され、固相に結合した、第一級、第二級、第三級又は第四級アミノ基等の1又は複数の正に荷電したリガンドを有する、正に荷電した固相を意味する。強イオン交換型の官能基は常にイオン化し、弱イオン交換型の官能基は移動相のpHによってイオンの解離状態が変化する。分析の対象成分の電荷や特性にあわせて適切な固定相のタイプを選択することができる。陽イオン交換クロマトグラフィーの固定相は、強イオン交換型の官能基としてスルホン酸が、弱イオン型の官能基としてカルボン酸が例示される。陰イオン交換クロマトグラフィーの固定相は、強イオン交換型の官能基として第四級アンモニウムが、弱イオン型の官能基として第三級アミンが例示される。
　本明細書において、「疎水性相互作用クロマトグラフィー」又は「HIC(;Hydrophobic Interaction Chromatography)」とは、分子の疎水性、すなわち、水性溶液から疎水性表面に吸着する分子の能力に基づいて分子を分離するためのプロセスを意味する。疎水性相互作用クロマトグラフィー、典型的には、溶質分子の表面上の疎水性基の差異に依存する。これらの疎水性基は、不溶性マトリックスの表面上の疎水性基に結合する傾向を有する。HICは逆相液体クロマトグラフィーよりも極性が高く、変性が少ない環境を用いるため、しばしばイオン交換又はゲル濾過クロマトグラフィーと組合せることによって、抗体精製において一般的に使用される。
　本明細書において、「アフィニティークロマトグラフィー」とは、標的タンパク質(例えば、目的のFc領域を含有するタンパク質又は抗体)が、標的タンパク質に特異的なリガンドに特異的に結合されるタンパク質分離技術を指す。抗体を精製する場合には、そのようなリガンドは、プロテインA若しくはプロテインG又はその機能的変異体であり、これはクロマトグラフィー固相材料に共有結合し、抗体溶液がクロマトグラフィー固相材料と接触する際に溶液中の抗体と結合する。
　本明細書において、「賦形剤」とは、医薬品の成形、取扱い、及び服薬における利便性の向上等のために、一定の大きさや濃度にする目的で添加される物質を示す。このような賦形剤としては、本発明の効果を示す限りにおいて特に限定されないが、例えば、スクロース、トレハロース、ソルビトール等を挙げることができる。
　本明細書において、「除去」、「低減」、「クリアランス」とは互換的に使用され、精製されるべき抗体－薬物コンジュゲートを含む試料中の1つ以上の不純物量を低下させることを意味する。
　本明細書において、「精製する」又は「不純物を除去する」とは互換的に使用され、試料から1つ以上の不純物を除去することにより減少させることを意味し、例えば、試料に含まれる不純物を1 μM以下、0.5 μM以下、0.25 μM以下、又は0.1 μM以下に減少させることを意味する。
　本明細書において、「精製工程」とは、試料を精製する工程又は試料から不純物を除去する工程を指す。すなわち、「精製工程」とは、試料から1つ以上の不純物を除去することにより減少させる工程を意味し、例えば、試料に含まれる不純物を1 μM以下、0.5 μM以下、0.25 μM以下、又は0.1 μM以下に減少させる工程を意味する。
　本明細書において、「不可逆的な吸着」とは、溶質が活性炭に不可逆的に吸着することを意味する。「不可逆的に」とは、一度吸着した溶質が活性炭から容易に解離し得ないことを指す。本明細書において、「可逆的な吸着」とは、溶質が活性炭に可逆的に吸着することを意味する。「可逆的に」とは、一度吸着した溶質が活性炭から解離・吸着し得ることを指す。「不可逆的な吸着」及び「可逆的な吸着」は、活性炭と溶質との間の絶対的な現象ではなく、活性炭と溶質との吸着に対する溶出液と溶質との親和性(溶媒和力)に依存する相対的な現象である。すなわち、ある溶出液による活性炭のリンスでは、溶質は溶出せずに不可逆的な吸着をすることがあり、同じ活性炭と溶質であっても、別の溶出液による活性炭のリンスにおいては、溶質は溶出して可逆的な吸着をすることがあり得る。
　本明細書において、1つ以上の列挙された要素を「含む」製造方法又は医薬組成物等は、列挙されていない他の要素を含み得る。
　本明細書において、数値範囲(例えば、「X～Y」)は、その範囲を規定する始点、終点及びその範囲に含まれる全ての値を含む。
　本明細書中、「約」とは、基準値に対してプラス又はマイナスそれぞれ10%、8%、6%、5%、4%、3%、2%又は1%まで変動する値を示す。好適には、「約」は、基準値に対してプラス又はマイナスそれぞれ10%、5%又は1%の範囲を示す。
２.抗体－薬物コンジュゲート
　本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートは特に限定されないが、例えば、薬物がトポイソメラーゼＩ阻害剤である抗体－薬物コンジュゲート、次式で表される薬物
を放出することにより抗腫瘍活性を発揮する抗体－薬物コンジュゲート、次式で表される抗腫瘍化合物
の1位のアミノ基の窒素原子を結合位置としてリンカーを介して抗体と結合している抗体－薬物コンジュゲート、該抗体に存在するジスルフィド結合部分に形成されるチオエーテル結合によってリンカーを介して抗体に抗腫瘍化合物が結合している抗体－薬物コンジュゲート、前記リンカーが-Gly-Gly-Phe-Gly-のテトラペプチド残基を含む抗体－薬物コンジュゲートが挙げられる。
　本発明によって製造される好適な抗体－薬物コンジュゲートは、
次式(1)
(式中、Aは抗体との結合位置を示す)
で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体－薬物コンジュゲートである。
　本発明においては、抗体－薬物コンジュゲートのうち、リンカー及び薬物からなる部分構造を「薬物リンカー」と称する。この薬物リンカーは抗体の鎖間のジスルフィド結合部位(2箇所の重鎖－重鎖間及び2箇所の重鎖－軽鎖間)において生じたチオール基(言い換えれば、システイン残基の硫黄原子)に結合している。
　本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートの薬物リンカーは、トポイソメラーゼI阻害剤であるエキサテカンを構成要素としている。エキサテカンは、
次式(5)
で示される、抗腫瘍効果を有するカンプトテシン誘導体である。
　本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートは、
次式(6)
で表すこともできる。
　ここで、薬物リンカーは抗体とチオエーテル結合によって結合している。また、nはいわゆる平均薬物結合数(DAR;Drug-to-Antibody Ratio)と同義であり、1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数を示す。
　ある実施形態において、本発明において製造される抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体分子あたりの薬物又は結合された薬物リンカーの数は、好適には2から8の範囲内の整数であり、より好適には2、4、6又は8であり、さらにより好適には4又は8である。
　本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートは、がん細胞内に移行した後に、次式(7)
で表される化合物を遊離する。
　式(7)で表される化合物は、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートの抗腫瘍活性の本体であると考えられ、トポイソメラーゼI阻害作用を有することが確認されている(Ogitani Y.et al.,Clinical Cancer Research,2016,Oct.15;22(20):5097-5108,Epub.2016 Mar.29)。
　式(7)で表される化合物は、例えば、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートのリンカー部分が切断されることにより生じると考えられる、次式(8)
で表される化合物のアミナール構造が分解することにより生じると考えられる。
　本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートは、バイスタンダー効果を有することも知られている(Ogitani Y.et al.,Cancer Science(2016)107,1039-1046)。このバイスタンダー効果は、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートが、標的発現がん細胞に内在化した後、式(7)で表される化合物が遊離され、標的を発現していない近傍のがん細胞に対しても抗腫瘍効果を及ぼすことにより発揮される。
　本発明のある実施態様において、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートとしては、例えば、国際公開第2019/065964号、米国出願公開第2020/0261594号明細書、国際公開第2020/196474号若しくは米国出願公開第2022/0168440号明細書に記載されている抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)又は国際公開第2020/050406号、米国出願公開第2022/0008549号明細書、国際公開第2021/177438号若しくは米国出願公開第2023/0330248号明細書に記載されている抗体－環状ジヌクレオチド誘導体コンジュゲート(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)が挙げられる。
　本発明のある実施態様において、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートとしては、例えば、国際公開第2014/057687号又は米国出願公開第2015/0297748号明細書に記載されている抗体－薬物コンジュゲート(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)が挙げられ、下記の構造を薬物－リンカー構造部分を抗体に結合させたものが好ましい：
-(Succinimid-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、
-(Succinimid-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、
-(Succinimid-3-yl-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
　ここで、-(Succinimid-3-yl-N)-は次式：
で示される構造であり、このものの3位で抗体と結合し、1位の窒素原子上でこれを含むリンカー構造内のメチレン基と結合し、
GGFGは、グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシンからなるペプチド結合で連結しているアミノ酸配列を示し、
-(NH-DX)は、次式：
で示される、１位のアミノ基の窒素原子が結合部位となっている基である。
３.抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体は、いずれの種に由来してもよいが、好適には、ヒト、ラット、マウス及びウサギに由来する抗体である。抗体がヒト以外の種に由来する場合は、周知の技術を用いて、キメラ化又はヒト化することが好ましい。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体であっても、モノクローナル抗体であってもよいが、モノクローナル抗体であることが好ましい。
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体は、好適にはがん細胞を標的にできる性質を有するものであり、がん細胞を認識できる特性、がん細胞に結合できる特性、がん細胞内に取り込まれて内在化する特性及び/又はがん細胞に対する殺細胞活性等を備えているものが好ましい。
　抗体のがん細胞への結合性は、フローサイトメトリーを用いて確認できる。がん細胞内への抗体の取り込みは、(1)治療抗体に結合する二次抗体(蛍光標識)を用いて細胞内に取り込まれた抗体を蛍光顕微鏡で可視化するアッセイ(Cell Death and Differentiation (2008)15,751-761)、(2)治療抗体に結合する二次抗体(蛍光標識)を用いて細胞内に取り込まれた蛍光量を測定するアッセイ(Molecular Biology of the Cell Vol.15,5268-5282,December 2004)、又は(3)治療抗体に結合するイムノトキシンを用いて、細胞内に取り込まれると毒素が放出されて細胞増殖が抑制されるというMab-ZAPアッセイ(Bio Techniques 28:162-165,January 2000)を用いて確認できる。イムノトキシンとしては、ジフテテリア毒素の触媒領域とプロテインGとのリコンビナント複合タンパク質も使用可能である。
　抗体の抗腫瘍活性は、in vitroでは、細胞の増殖の抑制活性を測定することで確認できる。例えば、抗体の標的タンパク質を過剰発現しているがん細胞株を培養し、培養系に種々の濃度で抗体を添加し、フォーカス形成、コロニー形成及びスフェロイド増殖に対する抑制活性を測定することができる。in vivoでは、例えば、標的タンパク質を高発現しているがん細胞株を移植したヌードマウスに抗体を投与し、がん細胞の変化を測定することによって、抗腫瘍活性を確認できる。
　抗体自体が抗腫瘍効果を有することは、好ましいが、抗体－薬物コンジュゲートは抗腫瘍効果を発揮する化合物を結合させてあるので、抗体自体の抗腫瘍効果は必須ではない。抗腫瘍性化合物の細胞障害性をがん細胞において特異的・選択的に発揮させる目的からは、抗体が内在化してがん細胞内に移行する性質のあることが重要であり、好ましい。
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体は、公知の手段によって取得することができる。例えば、この分野で通常実施される方法を用いて、抗原となるポリペプチドを動物に免疫し、生体内に産生される抗体を採取、精製することによって得ることができる。抗原の由来はヒトに限定されず、マウス、ラット等のヒト以外の動物に由来する抗原を動物に免疫することもできる。この場合には、取得された異種抗原に結合する抗体とヒト抗原との交差性を試験することによって、ヒトの疾患に適用可能な抗体を選別できる。
　また、公知の方法(例えば、Kohler and Milstein,Nature(1975)256,p.495-497;Kennet,R.ed.,Monoclonal Antibodies,p.365-367,Plenum Press,N.Y.(1980))に従って、抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞とミエローマ細胞とを融合させることによってハイブリドーマを樹立し、モノクローナル抗体を得ることもできる。
　なお、抗原は抗原タンパク質をコードする遺伝子を遺伝子操作によって宿主細胞に産生させることによって得ることができる。具体的には、抗原遺伝子を発現可能なベクターを作製し、これを宿主細胞に導入して該遺伝子を発現させ、発現した抗原を精製すればよい。上記の遺伝子操作による抗原発現細胞、或は抗原を発現している細胞株、を動物に免疫する方法を用いることによっても抗体を取得できる。
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体は、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ(Chimeric)抗体、ヒト化(Humanized)抗体であることが好ましく、又はヒト由来の抗体の遺伝子配列のみを有する抗体、すなわちヒト抗体であることが好ましい。これらの抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。
　キメラ抗体としては、抗体の可変領域と定常領域が互いに異種である抗体、例えばマウス又はラット由来抗体の可変領域をヒト由来の定常領域に接合したキメラ抗体を挙げることができる(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81,6851-6855,(1984))。
　ヒト化抗体としては、異種抗体の相補性決定領域(CDR；complementarity determining region)のみをヒト由来の抗体に組み込んだ抗体(Nature(1986)321,p.522-525)、CDR移植法によって、異種抗体のCDRの配列に加えて、異種抗体の一部のフレームワークのアミノ酸残基もヒト抗体に移植した抗体(国際公開第90/07861号)、遺伝子変換突然変異誘発(gene conversion mutagenesis)ストラテジーを用いてヒト化した抗体(米国特許第5821337号)を挙げることができる。
　ヒト抗体としては、ヒト抗体の重鎖と軽鎖の遺伝子を含むヒト染色体断片を有するヒト抗体産生マウスを用いて作成した抗体(Tomizuka,K.et al.,Nature Genetics(1997)16,p.133-143;Kuroiwa,Y.et al.,Nucl. Acids Res.(1998)26,p.3447-3448;Yoshida,H.et al.,Animal Cell Technology:Basic and Applied Aspects vol.10,p.69-73(Kitagawa,Y.,Matsuda,T.and Iijima,S.eds.),Kluwer Academic Publishers,1999;Tomizuka,K.et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA(2000)97,p.722-727等を参照。)を挙げることができる。あるいは、ヒト抗体ライブラリーより選別したファージディスプレイにより取得した抗体(Wormstone, I. M. et al.,Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002)43 (7), p.2301-2308;Carmen, S. et al.,Briefings in Functional Genomics and Proteomics(2002), 1(2), p.189-203;Siriwardena, D. et al.,Ophthalmology(2002) 109(3), p.427-431等参照。)も挙げることができる。
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体には、抗体の修飾体も含まれる。当該修飾体とは、本発明に係る抗体に化学的又は生物学的な修飾が施されてなるものを意味する。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、N-結合又はO-結合炭水化物鎖への化学部分の結合を有する化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾(例えば、N-結合又はO-結合型糖鎖の付加、N末端又はC末端のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化等)されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによってN末にメチオニン残基が付加されたもの等が含まれる。また、本発明に係る抗体又は抗原の検出又は単離を可能にするために標識されたもの、例えば、酵素標識体、蛍光標識体、アフィニティ標識体もかかる修飾体の意味に含まれる。この様な本発明に係る抗体の修飾体は、抗体の安定性及び血中滞留性の改善、抗原性の低減、抗体又は抗原の検出又は単離等に有用である。
　また、本発明に係る抗体に結合している糖鎖修飾を調節すること(グリコシル化、脱フコース化等)によって、抗体依存性細胞傷害活性を増強することが可能である。抗体の糖鎖修飾の調節技術としては、国際公開第99/54342号、国際公開第00/61739号、国際公開第02/31140号等が知られているが、これらに限定されるものではない。本発明に係る抗体には当該糖鎖修飾が調節された抗体も含まれる。
　なお、哺乳類培養細胞で生産される抗体では、その重鎖のカルボキシル末端のリシン残基が欠失することが知られており(Journal of Chromatography A,705:129-134(1995))、また、同じく重鎖カルボキシル末端のグリシン、リシンの2アミノ酸残基が欠失し、新たにカルボキシル末端に位置するプロリン残基がアミド化されることが知られている(Analytical Biochemistry,360:75-83(2007))。しかし、これらの重鎖配列の欠失及び修飾は、抗体の抗原結合能及びエフェクター機能(補体の活性化や抗体依存性細胞障害作用等)には影響を及ぼさない。したがって、本発明に係る抗体には、当該修飾を受けた抗体及び当該抗体の機能性断片も含まれ、重鎖カルボキシル末端において1又は2のアミノ酸が欠失した欠失体、及びアミド化された当該欠失体(例えば、カルボキシル末端部位のプロリン残基がアミド化された重鎖)等も包含される。但し、抗原結合能及びエフェクター機能が保たれている限り、本発明に係る抗体の重鎖のカルボキシル末端の欠失体は上記の種類に限定されない。本発明に係る抗体を構成する2本の重鎖は、完全長及び上記の欠失体からなる群から選択される重鎖のいずれか一種であってもよいし、いずれか二種を組み合わせたものであってもよい。各欠失体の量比は本発明に係る抗体を産生する哺乳類培養細胞の種類及び培養条件に影響を受け得るが、本発明に係る抗体は、好ましくは2本の重鎖の双方でカルボキシル末端のひとつのアミノ酸残基が欠失しているものを挙げることができる。
　本発明に係る抗体のアイソタイプとしては、例えばIgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)等を挙げることができるが、好ましくはIgG1又はIgG2を挙げることができる。本発明の抗体のアイソタイプとしてIgG1を用いる場合は、IgG1抗体は変異を有していてもよく、定常領域のアミノ酸残基の一部を置換することによって、エフェクター機能を調整することが可能である(WO88/007089、WO94/28027、WO94/29351参照)。エフェクター機能を減弱させたIgG1の変異体としては、IgG1 LALA変異(IgG1-L234A、L235A)、IgG1 LALA-PA変異(IgG1-L234A、L235A、P329A)等が挙げられる。前記L234A、L235A、P329AはEU index(Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,Vol.63,No.1(May 15,1969),pp.78-85)により特定される、234位及び235位のロイシンのアラニンへの置換、329位のプロリンのアラニンへの置換をそれぞれ示す。
　本発明で使用される抗体－薬物コンジュゲートにおける抗体は、特に限定はないが、例えば、抗HER2抗体、抗TROP2抗体、抗HER3抗体、抗B7-H3抗体、抗GPR20抗体、抗CDH6抗体、抗MUC1抗体、抗CD37抗体、抗CD3抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD98抗体、抗DR5抗体、抗EGFR抗体、抗EPHA2抗体、抗FGFR2抗体、抗FGFR4抗体、抗FOLR1抗体、抗VEGF抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD70抗体、抗PSMA抗体、抗CEA抗体、抗Mesothelin抗体、抗A33抗体、抗CanAg抗体、抗Cripto抗体、抗G250抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗Tenascin-C抗体、及び抗SLC44A4抗体を挙げることができ、好適には、抗HER2抗体、抗TROP2抗体、抗HER3抗体、抗B7-H3抗体、抗GPR20抗体、抗CDH6抗体、抗MUC1抗体及び抗CD37抗体を挙げることができる。
　本発明において、「抗HER2抗体」とは、HER2(Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 2;ErbB-2)に特異的に結合し、好ましくは、HER2と結合することによってHER2発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
　抗HER2抗体としては、例えば、トラスツズマブ(Trastuzumab)(米国特許第5821337号)、ペルツズマブ(Pertuzumab)(国際公開第01/00245号)を挙げることができ、好適にはトラスツズマブである。
　本発明において、「抗TROP2抗体」とは、TROP2(TACSTD2：Tumor-associated calcium signal transducer 2;EGP-1)に特異的に結合し、好ましくは、TROP2と結合することによってTROP2発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
　抗TROP2抗体としては、例えば、hTINA1-H1L1(国際公開第2015/098099号)を挙げることができる。
　本発明において、「抗HER3抗体」とは、HER3(Human Epidermal Growth Factor Receptor Type 3;ErbB-3)に特異的に結合し、好ましくは、HER3と結合することによってHER3発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
　抗HER3抗体としては、例えば、パトリツマブ(Patritumab;U3-1287)、U1-59(国際公開第2007/077028号)、MM-121(Seribantumab)、国際公開2008/100624号記載の抗ERBB3抗体、RG-7116(Lumretuzumab)及びLJM-716(Elgemtumab)を挙げることができ、好適には、パトリツマブ及びU1-59である。
　本発明において、「抗B7-H3抗体」とは、B7-H3(B cell antigen #7 homolog 3;PD-L3;CD276)に特異的に結合し、好ましくは、B7-H3と結合することによってB7-H3発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
　抗B7-H3抗体としては、例えば、M30-H1-L4(国際公開第2014/057687号)を挙げることができる。
　本発明において、「抗GPR20抗体」とは、GPR20(G Protein-coupled receptor 20)に特異的に結合し、好ましくは、GPR20と結合することによってGPR20発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
　抗GPR20抗体としては、例えば、h046-H4e/L7(国際公開第2018/135501号)を挙げることができる。
　本発明において、「抗CDH6抗体」とは、CDH6(Cadherin-6)に特異的に結合し、好ましくは、CDH6と結合することによってCDH6発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
　抗CDH6抗体としては、例えば、H01L02(国際公開第2018/212136号)を挙げることができる。
　本発明において、「抗MUC1抗体」とは、MUC1に特異的に結合し、好ましくは、MUC1と結合することによってMUC1発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
　抗MUC1抗体としては、例えば、PankoMab及びPankoMabバリアント(PM-N54Q)(国際公開第2019/219891号)を挙げることができる。
　本発明において、「抗CD37抗体」とは、CD37に特異的に結合し、好ましくは、CD37と結合することによってCD37発現細胞に内在化する活性を有する抗体を示す。
　抗CD37抗体としては、例えば、hmAb-H541L11(国際公開第2023/068226号)を挙げることができる。
　本発明のある実施態様において、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される抗体としては、例えば、国際公開第2014/057687号若しくは米国出願公開第2015/0297748号明細書(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)、国際公開第2019/065964号、米国出願公開第2020/0261594号明細書、国際公開第2020/196474号若しくは米国出願公開第2022/0168440号明細書に記載されている抗体(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)又は国際公開第2020/050406号、米国出願公開第2022/0008549号明細書、国際公開第2021/177438号若しくは米国出願公開第2023/0330248号明細書に記載されている抗体(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)が挙げられる。
４.抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される薬物リンカー中間体
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される薬物リンカー中間体は特に限定されないが、例えば、「２.抗体－薬物コンジュゲート」に記載の抗体－薬物コンジュゲートの製造に用いられる薬物リンカー中間体が挙げられ、好ましくは、次式(2)で表される化合物である。
式(2)で表される化合物は、国際公開第2014/057687号、国際公開第2015/098099号、国際公開第2015/115091号、国際公開第2015/155998号及び国際公開第2019/044947号等の記載を参考に製造することができる。
　本発明のある実施態様において、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートが抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲートである場合、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される薬物リンカー中間体は、国際公開第2019/065964号、米国出願公開第2020/0261594号明細書、国際公開第2020/196474号又は米国出願公開第2022/0168440号明細書に記載の薬物リンカーであり得る。これらの薬物リンカーは、同公報等の記載を参考に製造することができる。
　本発明のある実施態様において、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートが抗体－環状ジヌクレオチド誘導体コンジュゲートである場合、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される薬物リンカー中間体は、国際公開第2020/050406号、米国出願公開第2022/0008549号明細書、国際公開第2021/177438号又は米国出願公開第2023/0330248号明細書に記載の薬物リンカーであり得る。これらの薬物リンカーは、同公報等の記載を参考に製造することができる。
　本発明のある実施態様において、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用される薬物リンカー中間体は、国際公開第2014/057687号又は米国出願公開第2015/0297748号明細書に記載の薬物リンカー(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)が挙げられ、下記の構造の薬物－リンカーであることが好ましい：
(maleimide-N-yl)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、
(maleimide-N-yl)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、
(maleimide-N-yl)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。これらの薬物リンカーは、同公報等の記載を参考に製造することができる。
　ここで、(maleimide-N-yl)-は次式：
で示される、窒素原子が結合部位である基である。
５.抗体と薬物リンカー中間体のコンジュゲーション
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造における、抗体と薬物リンカー中間体のコンジュゲーションは、
(ii)抗体を、還元剤で還元する工程、
(iii)式(2)で表される化合物を、(ii)の工程で還元された抗体と反応させる工程、
(iv)チオール基を有する試薬を添加し、(iii)の工程で残存した式(2)で表される化合物と反応させる工程、
を含む。
　(ii)の工程で使用される還元剤は、抗体の鎖間ジスルフィドを還元できるものであれば特に限定されないが、例えば、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン若しくはその塩、ジチオトレイトール、又は2-メルカプトエタノールを用いることができ、好適には、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン若しくはその塩を用いることができ、より好適には、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩を用いることができる。
　(ii)の工程で使用される還元剤の抗体1分子あたりの当量(以下、本発明において「当量」とは、モル当量を意味する)は、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数及び抗体の種類に応じて、適宜選択することができる。以下、用いる抗体毎に還元剤の至適当量を記載するが、当該至適当量は抗体の由来細胞株や製造方法等によって変動し得るパラメータである。
　例えば、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER2抗体(好適には、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は配列番号8に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)である場合、還元剤は、好適には、抗体1分子に対して4.1～5.1当量、より好適には、4.4～4.8当量、更により好適には、約4.6当量用いることができる。ここで、「約4.6当量」とは、好適には、4.5～4.7当量であり、より好適には4.6当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗TROP2抗体(好適には、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、還元剤は、好適には、抗体1分子に対して1.9～2.5当量、より好適には、2.1～2.3当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER3抗体(好適には、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、還元剤は、好適には、抗体1分子に対して5.5～6.5当量、より好適には、5.8～6.2当量、更により好適には、約6当量用いることができる。ここで、「約6当量」とは、好適には、5.9～6.1当量であり、より好適には6.0当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗B7-H3抗体(好適には、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、還元剤は、好適には、抗体1分子に対して1.9～2.5当量、より好適には、2.1～2.3当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗GPR20抗体(好適には、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、還元剤は、好適には、抗体1分子に対して4.3～5.3当量、より好適には、4.6～5当量、更により好適には、約4.75当量用いることができる。ここで、「約4.75当量」とは、好適には、4.65～4.85当量であり、より好適には4.75当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CDH6抗体(好適には、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、還元剤は、好適には、抗体1分子に対して4.3～5.3当量、より好適には、4.6～5当量、更により好適には、約4.8当量用いることができる。ここで、「約4.8当量」とは、好適には、4.7～4.9当量であり、より好適には4.8当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗MUC1抗体(好適には、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、還元剤は、好適には、抗体1分子に対して4.3～5.3当量、より好適には、4.6～5.0当量、更により好適には、約4.75当量用いることができる。ここで、「約4.75当量」とは、好適には、4.65～4.85当量であり、より好適には4.75当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CD37抗体(好適には、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、還元剤は、好適には、抗体1分子に対して4.3～5.3当量、より好適には、4.6～5.0当量、更により好適には、約4.75当量用いることができる。ここで、「約4.75当量」とは、好適には、4.65～4.85当量であり、より好適には4.75当量である。
　(ii)の工程は、好適には、緩衝液中で行うことができる。
　(ii)の工程で使用される緩衝液のpHは、好適には6～8であり、より好適には6.5～7.5であり、更により好適には6.9～7.4であり、更により好適には、7.0～7.3である。
　(ii)の工程で使用される緩衝液は、抗体の鎖間ジスルフィドの還元の際に使用され得るものであれば特に限定されないが、例えば、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、PIPES緩衝液、HEPES緩衝液等を用いることができ、好適には、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液又はリン酸緩衝液を用いることができる。
　例えば、製造する抗体－薬物コンジュゲートの１抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER2抗体(好適には、配列番号1においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)である場合、好適には、pH6～8に調整された酢酸緩衝液を用いることができ、より好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpH6～8に調整された酢酸緩衝液を用いることができ、更により好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpH6.8～7.8に調整された酢酸緩衝液を用いることができ、更により好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpHが約7.3に調整された酢酸緩衝液を用いることができる。ここで、「約7.3」とは、好適には、7.1～7.5の範囲であり、より好適には、7.2～7.4の範囲であり、更により好適には、7.3である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗TROP2抗体(好適には、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpH6.4～7.4に調整されたL-ヒスチジン水溶液を用いることができ、より好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpH6.7～7.1に調整されたL-ヒスチジン水溶液を用いることができ、更により好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpH6.9に調整されたL-ヒスチジン水溶液を用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER3抗体(好適には、配列番号3に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、好適には、pH6～8に調整された酢酸緩衝液を用いることができ、より好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpH6～8に調整された酢酸緩衝液を用いることができ、更により好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpH6.5～7.5に調整された酢酸緩衝液を用いることができ、更により好適には、リン酸水素二ナトリウム水溶液でpHが約7に調整された酢酸緩衝液を用いることができる。ここで、「約7」とは、好適には、6.8～7.2の範囲であり、より好適には、6.9～7.1の範囲であり、更により好適には7.0である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗B7-H3抗体(好適には、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、好適には、0.005mol/L～0.3mol/LのL-ヒスチジン水溶液を用いることができ、より好適には、0.025mol/L～0.1mol/LのL-ヒスチジン水溶液を用いることができ、更により好適には、0.05mol/LのL-ヒスチジン水溶液を用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗GPR20抗体(好適には、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、好適には、pH6～8に調整された緩衝液を用いることができ、より好適には、pH6.5～7.5に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH6.8～7.2に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された酢酸ナトリウム緩衝液、L-ヒスチジン緩衝液、リン酸水素二ナトリウム水溶液を用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗MUC1抗体(好適には、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、好適には、pH6～8に調整された緩衝液を用いることができ、より好適には、pH6.5～7.5に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH6.8～7.2に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された酢酸ナトリウム緩衝液、L-ヒスチジン緩衝液、リン酸水素二ナトリウム水溶液を用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CD37抗体(好適には、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、好適には、pH6～8に調整された緩衝液を用いることができ、より好適には、pH6.5～7.5に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH6.8～7.2に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液を用いることができ、更により好適には、pH7.0～7.1に調整された酢酸ナトリウム緩衝液、L-ヒスチジン緩衝液、リン酸水素二ナトリウム水溶液を用いることができる。
　かかる緩衝液を用いることにより、凝集体の生成を最小化することができる。なお、(ii)の工程で使用される緩衝液は、抗体製造由来の緩衝液を含有していてもよい。
　(ii)の工程は、好適には、キレート剤の存在下で行われる。キレート剤は、抗体の鎖間ジスルフィドの還元の際に使用され得るものであれば特に限定されないが、例えば、エチレンジアミン四酢酸(以下「EDTA」とも呼ぶ)、ジエチレントリアミン五酢酸又はグリコールエーテルジアミン四酢酸を用いることができ、好適には、エチレンジアミン四酢酸を用いることができる。
　キレート剤は、好適には、抗体1分子に対して1～20当量用いることができ、より好適には、抗体1分子に対して3～8当量用いることができ、更により好適には、抗体1分子に対して4～6当量用いることができ、更により好適には、抗体1分子に対して5当量用いることができる。
　(ii)の工程で使用される緩衝液は、界面活性剤を含有していてもよい。本発明において「界面活性剤」とは、親水性基と疎水性基を有し、医薬品製剤の構成成分の一つとして使用され得る物質を示す。(ii)の工程で使用される緩衝液に含まれる界面活性剤は特に限定されないが、例えば、ポリソルベート(ポリソルベート80(Tween80)、ポリソルベート20(Tween20)及びポリソルベート60(Tween60)を含む)、ポリオキシエチレン(160)ポリオキシプロピレン(30)グリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60、ポリオキシエチレンヒマシ油又はラウリル硫酸ナトリウム等を挙げることができ、好適には、ポリソルベート20又はポリソルベート80を挙げることができる。
　(ii)の工程で使用される緩衝液が界面活性剤を含有するか否か及び界面活性剤の種類は、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数及び抗体の種類に応じて、適宜選択することができる。
　例えば、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER2抗体(好適には、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は配列番号8に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、好適には界面活性剤を含有しない。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗TROP2抗体(好適には、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、ポリソルベート80を含有し、好適に用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER3抗体(好適には、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、ポリソルベート20を含有し、好適に用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗B7-H3抗体(好適には、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、ポリソルベート20を含有し、好適に用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗GPR20抗体(好適には、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、ポリソルベート80を含有し、好適に用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CDH6抗体(好適には、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、ポリソルベート80を含有し、好適に用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗MUC1抗体(好適には、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、ポリソルベート80を含有し、好適に用いることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CD37抗体(好適には、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程で使用される緩衝液は、ポリソルベート80を含有し、好適に用いることができる。
　(ii)の工程の反応温度は、製造される抗体－薬物コンジュゲート組成物における抗体の種類に応じて適宜選択することができる。(ii)の工程は、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である場合、好適には、25～50℃の内温下で行うことができ、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲である場合、好適には、-5℃～35℃で行うことができ、より好適には、0～20℃で行うことができ、更により好適には、5～20℃で行うことができ、更により好適には、5～10℃、又は約10℃で行うことができる。本発明において、「約10℃」とは、好適には、8℃～12℃であり、より好適には、9℃～11℃であり、更により好適には、10℃～11℃、又は10℃である。
　(ii)の工程の反応時間は、製造される抗体－薬物コンジュゲート組成物における抗体の種類に応じて適宜選択することができる。製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である場合、(ii)の工程の反応時間は、好適には、1～4時間である。製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲である場合、(ii)の工程の反応時間は、好適には、6～50時間、12～48時間、20～51時間、24～48時間(又は36～48時間)、又は48～50時間である。
　例えば、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER2抗体(好適には、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は配列番号8に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)である場合、(ii)の工程は、好適には、30～40℃の内温下で行うことができ、より好適には、約35℃の内温下で行うことができる。ここで、「約35℃」とは、好適には、33℃～37℃であり、より好適には、34℃～36℃であり、更により好適には35℃である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗TROP2抗体(好適には、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程は、好適には、約10℃で20時間以上かけて行うことができ、上限値を含む形では、好適には、約10℃で20時間～51時間かけて行うことができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER3抗体(好適には、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程は、好適には、30～40℃の内温下で行うことができ、より好適には、約35℃の内温下で行うことができる。ここで、「約35℃」とは、好適には、33℃～37℃であり、より好適には、34℃～36℃であり、更により好適には35℃である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗B7-H3抗体(好適には、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程は、好適には、5～10℃(より好適には、6℃、7℃、8℃、9℃、又は10℃)で12時間以上、又は5℃で20時間以上かけて行うことができ、上限値を含む形では、好適には、5～10℃(より好適には、6℃、7℃、8℃、9℃、又は10℃）で12時間～48時間、又は5℃で20時間～48時間かけて行うことができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗GPR20抗体(好適には、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程は、好適には、25～35℃の内温下で行うことができ、より好適には、約30℃の内温下で行うことができる。ここで、「約30℃」とは、好適には、28℃～32℃であり、より好適には、29℃～31℃であり、更により好適には30℃である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CDH6抗体(好適には、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程は、好適には、25～35℃の内温下で行うことができ、より好適には、約30℃の内温下で行うことができる。ここで、「約30℃」とは、好適には、28℃～32℃であり、より好適には、29℃～31℃であり、更により好適には30℃である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗MUC1抗体(好適には、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程は、好適には、25～35℃の内温下で行うことができ、より好適には、約30℃の内温下で行うことができる。ここで、「約30℃」とは、好適には、28℃～32℃であり、より好適には、29℃～31℃であり、更により好適には30℃である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CD37抗体(好適には、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(ii)の工程は、好適には、25～35℃の内温下で行うことができ、より好適には、約30℃の内温下で行うことができる。ここで、「約30℃」とは、好適には、28℃～32℃であり、より好適には、29℃～31℃であり、更により好適には30℃である。
　(iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物の抗体1分子あたりの当量は、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数及び抗体の種類に応じて、適宜選択することができる。以下、用いる抗体毎に薬物リンカーの至適当量を記載するが、当該至適当量は抗体の由来細胞株や製造方法等によって変動し得るパラメータである。
　例えば、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER2抗体(好適には、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は配列番号8に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)である場合、式(2)で表される化合物は、好適には、抗体1分子に対して8～10当量、より好適には、8.2～9.2当量、更により好適には、約8.7当量用いることができる。ここで、「約8.7当量」とは、好適には、8.5～8.9当量であり、より好適には、8.6～8.8当量であり、更により好適には8.7当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗TROP2抗体(好適には、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、式(2)で表される化合物は、好適には、抗体1分子に対して4～5当量、より好適には、4.2～4.6当量、更により好適には4.4当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER3抗体(好適には、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、式(2)で表される化合物は、好適には、抗体1分子に対して8～10当量、より好適には、9～10当量、更により好適には、約9.5当量用いることができる。ここで、「約9.5当量」とは、好適には、9.3～9.7当量であり、より好適には、9.4～9.6当量であり、更により好適には9.5当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲であり、抗体が、抗B7-H3抗体(好適には、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、式(2)で表される化合物は、好適には、抗体1分子に対して4～5当量、より好適には、4.2～4.6当量、更により好適には4.4当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗GPR20抗体(好適には、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、式(2)で表される化合物は、好適には、抗体1分子に対して8～10当量、より好適には、8.3～9.3当量、更により好適には、約8.9当量用いることができる。ここで、「約8.9当量」とは、好適には、8.7～9.1当量であり、より好適には、8.8～9.0当量であり、更により好適には8.9当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CDH6抗体(好適には、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、式(2)で表される化合物は、好適には、抗体1分子に対して8～10当量、より好適には、8.6～9.6当量、更により好適には、約9.1当量用いることができる。ここで、「約9.1当量」とは、好適には、8.9～9.3当量であり、より好適には、9.0～9.2当量であり、更により好適には9.1当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗MUC1抗体(好適には、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、式(2)で表される化合物は、好適には、抗体1分子に対して8～10当量、より好適には、8.3～9.3当量、更により好適には、約8.9当量用いることができる。ここで、「約8.9当量」とは、好適には、8.7～9.1当量であり、より好適には、8.8～9.0当量であり、更により好適には8.9当量である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CD37抗体(好適には、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は、該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、式(2)で表される化合物は、好適には、抗体1分子に対して8～10当量、より好適には、8.3～9.3当量、更により好適には、約8.9当量用いることができる。ここで、「約8.9当量」とは、好適には、8.7～9.1当量であり、より好適には、8.8～9.0当量であり、更により好適には8.9当量である。
　式(2)で表される化合物は、好適には、溶媒に溶解した状態で(ii)の工程で得られた反応液に添加することができる。かかる溶媒としては、抗体との結合反応の際に使用され得るものであれば特に限定されないが、好適には、ジメチルスルホキシド、ジメチルスルホキシド水溶液、アセトン又はアセトン水溶液を用いることができ、より好適には、ジメチルスルホキシド水溶液を用いることができる。更に、これらの溶媒は、好適には酢酸を含有した状態で用いることができる。
　製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である場合、(iii)の工程は、好適には、5～25℃の内温下で行うことができ、より好適には、10～20℃の内温下で行うことができ、更により好適には、約15℃の内温下で行うことができる。ここで、「約15℃」とは、好適には、13℃～17℃であり、より好適には、14℃～16℃であり、更により好適には15℃である。製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲である場合、好適には、0～20℃で行うことができ、より好適には、5～20℃で行うことができ、更により好適には、5～10℃、又は約10℃で行うことができる。
　製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である場合、(iii)の工程の反応時間は、好適には0.5～2時間である。製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲である場合、(iii)の工程の反応時間は、好適には、20分間～4時間であり、より好適には0.5～2時間である。
　(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬は、(iii)の工程で残存した式(2)で表される化合物と反応させるために用いることができる。言い換えれば、(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬は、余剰の式(2)で表される化合物をクエンチさせるために用いることができる。
　(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬としては、式(2)で表される化合物のマレイミジル基と反応できるものであれば特に限定されないが、例えば、N-アセチルシステイン又はシステインを用いることができ、好適には、N-アセチルシステインを用いることができる。
　製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である場合、(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬は、好適には、抗体1分子に対して10～50当量用いることができ、より好適には、10～30当量用いることができる。製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲である場合、(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬は、好適には、2～8当量用いることができ、より好適には、3～7当量用いることができ、更により好適には3～5当量用いることができる。
　製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である場合、(iv)の工程は、好適には、5～25℃の内温下で行うことができ、より好適には、10～20℃の内温下で行うことができ、更により好適には、約15℃の内温下で行うことができる。ここで、「約15℃」とは、好適には、13℃～17℃であり、より好適には、14℃～16℃であり、更により好適には15℃である。製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4.5個の範囲である場合、(iv)の工程は、好適には、0～20℃で行うことができ、より好適には、5～20℃で行うことができ、更により好適には、5～10℃、又は約10℃で行うことができる。
　(iv)の工程の反応時間は、好適には0.5～2時間である。
　本発明の製造方法は、(v)反応液のpHを調整する工程を含むことができる。
　(v)の工程により調整された溶液のpHは、抗体－薬物コンジュゲートに含まれる抗体部分の安定性及び薬物リンカー部分の安定性の観点から、例えば、4～6の範囲内であればよく、4.2～5.8、4.4～5.6、4.6～5.4、4.8～5.2、約5、5.0、4.0～5.0、4.1～4.9、4.2～4.8、4.3～4.7、4.4～4.6、約4.5又は4.5であってもよい。
　(v)の工程でpHを調整するために使用される溶液は、反応液のpHを調整するために使用され得るものであれば特に限定されないが、例えば、酢酸水溶液、塩酸水溶液又は緩衝液等を用いることができ、好適には、酢酸水溶液が用いられ、より好適には、10％酢酸水溶液が用いられる。
　本発明のある実施態様において、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートが抗体-ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲートである場合、本発明の抗体と薬物リンカー中間体のコンジュゲーションは、国際公開第2019/065964号、米国出願公開第2020/0261594号明細書、国際公開第2020/196474号又は米国出願公開第2022/0168440号明細書に記載の方法(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)で行うことができる。
　本発明のある実施態様において、本発明によって製造される抗体－薬物コンジュゲートが抗体-環状ジヌクレオチド誘導体コンジュゲートである場合、本発明の抗体と薬物リンカー中間体のコンジュゲーションは、国際公開第2020/050406号、米国出願公開第2022/0008549号明細書、国際公開第2021/177438号又は米国出願公開第2023/0330248号明細書に記載の方法(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)で行うことができる。
　本発明のある実施態様において、本発明の抗体と薬物リンカー中間体のコンジュゲーションは、国際公開第2014/057687号又は米国出願公開第2015/0297748号明細書に記載の方法(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)で行うことができる。
６.活性炭材料を用いる精製工程
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造方法は、
(i)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液から、活性炭材料を用いて、前記溶液に含まれるエキサテカン化合物由来の副生成物を除去する工程、を含む。本発明のある実施態様において、(iv)の工程の後に、(i)の工程が含まれる。
　一般に、抗体－薬物コンジュゲートにおいては、細胞毒性活性の高い薬物を抗体に結合させており、抗体に結合していない該薬物に由来する高活性不純物は、前記抗体－薬物コンジュゲート原薬から可能な限り除去することが好ましく、原薬品質として極めて重要な要件となっている。本発明に含まれる(i)の工程は、抗体－薬物コンジュゲートを高活性不純物から効率的に精製する方法を提供するだけでなく、従来の透析濾過による精製工程(例えば、国際公開第2020/022363号に記載の方法)と比較して高活性不純物を含む廃液量を削減することができる。また、本発明に含まれる(i)の工程によれば、低分子不純物も除去することができる。
　活性炭(activated carbon又はactivated charcoal)とは、吸着効率を高めるために化学的または物理的な処理(活性化、賦活)を施した多孔質の炭素を主な成分とする物質である。例えば、特定の物質を選択的に分離、除去、精製するなどの目的で用いられる。活性炭は、表面積対質量比が非常に大きく、溶質の物理吸着が可能である。
　本発明に用いられる活性炭は、好ましくは10～10000 m2/g、より好ましくは100～5000 m2/g、最も好ましくは1000～2000 m2/gの表面積を有する。
　本発明に用いられる活性炭の平均粒子径は、好ましくは2 μm以上、より好ましくは2～550 μm、最も好ましくは5～40 μmである。
　本発明に用いられる活性炭の粒径範囲は、例えば、平均粒子径5～40 μmの割合が、全活性炭の重量に対して、好ましくは少なくとも90重量％、より好ましくは少なくとも95重量％、最も好ましくは少なくとも98重量％である。
　(i)の工程における活性炭の形態は特に限定されないが、医薬品の製造に適した形状であればいずれも用いることができ、例えば、粉砕炭、顆粒炭、球状炭若しくはペレット炭等の粒状活性炭、ファイバー若しくはクロス等の繊維状活性炭又はシート状、成形体若しくはハニカム状等の特殊成形活性炭、粉末活性炭等が挙げられる。
　本発明のある実施態様において、(i)の工程では予め活性炭材料を充填して一体として形成されている担体として成型したデプスフィルター（狭義の活性炭フィルター）が用いられる。活性炭フィルターは、活性炭やセルロース繊維等から構成されるものを好適に用いることができる。また、抗体－薬物コンジュゲート粗体を含む溶液を活性炭フィルターで濾過することを、活性炭濾過と呼ぶことがある。
　本発明で使用される活性炭フィルターは特に限定されないが、市販の活性炭フィルターの例として、Millistak+(登録商標) Pod CR40(Merck Millipore)、Zeta Plus 活性炭吸着デプスフィルター(3M)、SUPRAcap 50 Seitz(登録商標) AKS filter(PALL)、Supracap(登録商標) 50 depth filter capsules activated carbon series AKS depth filter media(Cytiva)等を挙げることができる。本発明の活性炭フィルターとしては、好適にはMillistak+ Depth Filter CR40 media、それと同様の活性炭、セルロース繊維等から構成された面積が5 cm2のフィルター又はSupracap(登録商標) 50 depth filter capsules activated carbon series AKS depth filter media(Cytiva)を用いることができる。
　活性炭濾過は、例えば、(1)抗体－薬物コンジュゲート粗体を含む溶液を活性炭フィルターに1回のみ通液させる方法、(2)1回以上活性炭濾過を行った抗体－薬物コンジュゲート粗体を含む溶液を再循環させて活性炭フィルターに複数回通液させる方法、(3)1回以上活性炭濾過を行った抗体－薬物コンジュゲート粗体を含む溶液を再循環させずに同じ活性炭フィルターに複数回通液させる方法、(4)1回以上活性炭濾過を行った抗体－薬物コンジュゲート粗体を含む溶液を再循環させずに異なる活性炭フィルターに複数回通液させる方法等のいずれであってもよいが、本発明の(i)の工程における好適な実施形態は、(1)抗体－薬物コンジュゲート粗体を含む溶液を活性炭フィルターに1回のみ通液させる方法である。
　国際公開第2014/024514号の実施例には、抗体の製造において、抗体を含む細胞培養上清液から活性炭を用いて抗体を精製する方法が記載されている。しかしながら、本技術は抗体を精製する技術であり、除去対象の不純物は宿主細胞由来タンパク質(Host Cell Protein;HCP)等のタンパク由来物であって、抗体に化学的な修飾を施した抗体－薬物コンジュゲート粗体から高活性な薬物由来の不純物を精製するための技術は開示されていない。Matthew S.,et al.,Langmuir(2014)，30(27)，8046-8055には、物質の等電点に着目して適切なpHを設定する活性炭精製技術が記載されているが、本文献もHCPなどのタンパク由来不純物を除去対象としたものである。
　国際公開第2020/153390号の実施例には、抗体の製造において、ウイルス不活化後に活性炭処理を行い、抗体を精製する方法が記載されている。本精製法は、活性炭精製がウイルスクリアランス能を有する陰イオン交換(AEX)クロマトグラフィー工程の代替として機能し得ることを示す技術であり、抗体に化学的な修飾を施した抗体－薬物コンジュゲート粗体を精製するための技術は開示されていない。
　国際公開第2014/143622号には、PBD-ADCの生成混合物から、ピロロベンゾジアゼピン関連の不純物を活性炭によって除去する方法が記載されている。一般に、活性炭フィルターによる溶質の吸着は、抽出効率が流速に依存するため、その接液時間に依存することが知られている(同公報［0060］段落)。従って、活性炭フィルターを通過する混合物の流速は目的の純度レベルに合わせて増減させる必要があり(同公報［0060］段落)、PBD-ADCの活性炭濾過においては、流速が6 L/min/m2を超える高い流速では、反応プロセス中間体のクリアランスが低下することが記載されている(同公報［0061］段落、Example 5［0081］段落、Figure 4)。本発明の(i)の工程においては、活性炭濾過における流速は不純物の除去効率に影響を受け難く、例えば、1 L/min/m2～10 L/min/m2の範囲で適宜選択することができ、好ましくは6 L/min/m2～10 L/min/m2、より好ましくは7 L/min/m2～10 L/min/m2、さらにより好ましくは8 L/min/m2～10 L/min/m2、特に好ましくは9 L/min/m2～10 L/min/m2である。
　また、PBD-ADCの生成混合物中の主な不純物は、薬物リンカーにN-アセチルシステインが付加した化合物(以下「PBD-NAC」とも呼ぶ)であることが記載されている(国際公開第2014/143622号の［0072］段落)。N-アセチルシステインは、未反応の薬物リンカーをクエンチするために用いられる。本発明の主な不純物の1つは、式(3)で表される化合物、すなわち、エキサテカンを含む薬物リンカーにN-アセチルシステインが付加した化合物(以下「DXd-NAC」とも呼ぶ)である。
　一般にLogPowが大きく、芳香環を有している化合物ほど活性炭への吸着率は高くなることが知られており、特に、LogPowが3よりも大きく、芳香環を有し、その芳香環の置換基が立体障害の少ないものであるときに、活性炭への吸着率が高くなる傾向が見られることが知られている(環境化学(Journal of Environmental Chemistry)Vol.19，No.4，pp.519-525，2009のTable 1及びFig.1等)。ここで、LogPowとはオクタノール-水分配係数のことであり、化学物質の疎水性を表す物理化学的な指標である。
　cLogP(calculated LogP)は、最も一般的な化学構造式描画ソフトであるChemDrawでも計算可能である等、分子のLogPowの予測値として広く用いられている指標である。ここで、PBD-NACのcLogP(PCMODELS CLOGP、Daylight Version 4.82)は3.042、DXd-NACのcLogPは-0.203と算出される。前記cLogPの計算結果並びに前記文献に記載のTable 1及びFig.1から、DXd-NACはPBD-NACに比較して脂溶性が低いため、当業者であればDXd-NACの活性炭への吸着は著しく低いか又は吸着しないことが想起されていたところ、本発明者らは驚くべきことに、活性炭濾過により効率的にDXd-NACを除去することができることを見出した。
　さらに、PBD-ADCの生成混合物から、不純物であるPBD-NACの濃度を低下させるには、1回の活性炭フィルターでの単回濾過では不十分であることが記載されている(国際公開第2014/143622号の［0059］段落)。PBD-NACの濃度を十分に低下させるためには、PBD-ADCの生成混合物を活性炭フィルターに複数回通液させる必要がある。DXd-NACはPBD-NACに比較して脂溶性が低いため、当業者であれば、DXd-NACを除去するためにはPBD-NACと同様か又はそれ以上に、複数回の活性炭濾過が必要であると想定されるところ、本発明者らは驚くべきことに、1回のみの活性炭濾過により効率的にDXd-NACを除去することができることを見出した。
　(i)の工程における抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の温度(内温)は特に限定されないが、抗体－薬物コンジュゲートの凝集体の生成抑制等の観点から、例えば、0～30℃の範囲内であればよく、2～28℃、4～26℃、6～24℃、8～22℃、10～20℃、12～18℃又は14～16℃、約15℃、15℃であってもよい。
　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液のpHは特に限定されないが、抗体－薬物コンジュゲートに含まれる抗体部分の安定性及び薬物リンカー部分の安定性等の観点から、例えば、4～6の範囲内であればよく、4.2～5.8、4.4～5.6、4.6～5.4、4.8～5.2、約5、5.0、4.0～5.0、4.1～4.9、4.2～4.8、4.3～4.7、4.4～4.6、約4.5又は4.5であってもよい。
　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に含まれるエキサテカン化合物由来の副生成物の含有量は特に限定されないが、例えば、化合物(3)については0～300 μMの範囲内であればよく、0～150 μM、0～140 μM、0～130 μM、0～120 μM、0～110 μM、0～100 μM、0～90 μM又は0～80 μMの範囲であってもよく、化合物(4)については0～160 μMの範囲内であればよく、0～80 μM、0～75 μM、0～70 μM、0～65 μM、0～60 μM、0～55 μM、0～50 μM又は0～45 μMの範囲であってもよい。
　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に含まれる緩衝液は、例えば、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液であってよく、例えば、酢酸ナトリウム水溶液、L-ヒスチジン水溶液、リン酸水素二ナトリウム水溶液であってよい。
　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液には、界面活性剤を含有していても、界面活性剤を含有していなくても、いずれであってもよい。界面活性剤を含有している場合、該界面活性剤は特に限定されないが、例えば、ポリソルベート20又はポリソルベート80であってもよい。
　本発明の抗体－薬物コンジュゲートの製造方法は、(vi)活性炭フィルターをリンスする工程を含み得る。本発明には、好適には、(i)の工程に次いで、(vi)の工程が含まれる。ここで「リンス」とは、活性炭フィルターに吸着したわずかな抗体－薬物コンジュゲートを溶出させることを指す。
　抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を活性炭濾過すると、濾過後の溶液に含まれる抗体－薬物コンジュゲートは、濾過前の溶液に含まれる抗体－薬物コンジュゲートの93～95％程度である。5～7％の抗体－薬物コンジュゲートは活性炭に吸着されて、濾過後の溶液に溶出しないことがあり得るためである。本発明者らは、濾過に用いた活性炭フィルターを特定の緩衝液でリンスすることにより、エキサテカン化合物由来の副生成物の溶出を伴うことなく目的の抗体－薬物コンジュゲートの回収が可能であることを見出した。すなわち、本発明者らは、エキサテカン化合物由来の副生成物が活性炭に不可逆的に吸着し、目的の抗体－薬物コンジュゲートが活性炭に可逆的に吸着する、活性炭フィルターのリンスに適した緩衝液を見出した。リンスによる抗体－薬物コンジュゲートの回収率は1～3％程度である。
　(vi)の工程で用いられる緩衝液は、目的の抗体－薬物コンジュゲートの回収することができるものであれば特に限定されないが、例えば、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、PIPES緩衝液、HEPES緩衝液等が挙げられるが、好適には、エキサテカン化合物由来の副生成物の溶出を伴うことなく目的の抗体－薬物コンジュゲートの回収が可能な緩衝液であり、より好適には、ヒスチジン緩衝液であり、更により好適には、5～15 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液、最も好適には、8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液である。
　国際公開第2014/143622号によると、PBD-ADCの活性炭濾過による精製工程において、薬物リンカー由来不純物を十分に除去するためには、複数回の活性炭濾過が必要であり(同公報［0010］段落、［0011］段落、Example 4)、濾過後も不純物が少なくとも0.06 μM含まれており(同公報Example 4のTable 1)、目的のPBD-ADCの回収率が高々80％代に留まること(同公報Example 4のTable 1)が記載されている。活性炭濾過を行う溶液は薬物リンカーを溶解させるためにプロピレングリコールのような有機溶媒を含んでいる(同公報［0054］段落、Example 1)。該薬物リンカー及びそれに由来する不純物に対する溶出性が高い有機溶媒を含む溶液では、薬物リンカー由来の不純物を活性炭に不可逆的に吸着させ、PBD-ADCを活性炭に可逆的に吸着させることは困難であると考えられる。また、同公報［0077］段落のExample 3において、緩衝液を活性炭フィルターに予め満たしておいたとしても、目的の抗体－薬物コンジュゲートは活性炭に吸着されることが記載されており、吸着した抗体－薬物コンジュゲートを緩衝液でリンスしたとしても、回収が困難であることが示唆されている。
　例えば、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗GPR20抗体(好適には、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(iv)の工程で用いられる緩衝液は、好適には、ヒスチジン緩衝液であり、より好適には、5～15 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液であり、更により好適には8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.3)である。(vi)の工程における緩衝液によるリンス方法は特に限定されないが、一定量の緩衝液を活性炭フィルターに1回又は複数回通液し、それにより得られた目的の抗体－薬物コンジュゲートを含む緩衝液を回収してもよく、一定量の緩衝液を循環させて活性炭フィルターに複数回通液し、それにより得られた目的の抗体－薬物コンジュゲートを含む緩衝液を回収してもよく、それ以外のリンス方法であってもよい。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗MUC1抗体(好適には、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(iv)の工程で用いられる緩衝液は、好適には、ヒスチジン緩衝液であり、より好適には、5～15 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液であり、更により好適には8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.3)である。(vi)の工程における緩衝液によるリンス方法は特に限定されないが、一定量の緩衝液を活性炭フィルターに1回又は複数回通液し、それにより得られた目的の抗体－薬物コンジュゲートを含む緩衝液を回収してもよく、一定量の緩衝液を循環させて活性炭フィルターに複数回通液し、それにより得られた目的の抗体－薬物コンジュゲートを含む緩衝液を回収してもよく、それ以外のリンス方法であってもよい。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CD37抗体(好適には、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、(iv)の工程で用いられる緩衝液は、好適には、ヒスチジン緩衝液であり、より好適には、5～15 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液であり、更により好適には8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.3)である。(vi)の工程における緩衝液によるリンス方法は特に限定されないが、一定量の緩衝液を活性炭フィルターに1回又は複数回通液し、それにより得られた目的の抗体－薬物コンジュゲートを含む緩衝液を回収してもよく、一定量の緩衝液を循環させて活性炭フィルターに複数回通液し、それにより得られた目的の抗体－薬物コンジュゲートを含む緩衝液を回収してもよく、それ以外のリンス方法であってもよい。
　本発明の(i)及び(vi)の工程による化合物(2)由来の副生成物の精製方法は、従来の透析濾過による化合物(2)由来の副生成物の精製方法(例えば、国際公開第2020/022363号に記載の方法が挙げられる)と比較して、高活性不純物を含む廃液量を工業的なレベルで削減することができる。例えば、2 kg(20 g/L)の抗体－薬物コンジュゲート溶液をタンジェンシャルフロー・フィルトレーションで透析濾過精製する場合、一般的には透析濾過用量1 DV(Diafiltration Volume)は100 Lである。化合物(2)由来の副生成物の除去に5 DV～15 DVの緩衝液を用いる必要がある場合、500 L～1500 Lの高活性不純物を含む廃液（以下「高活性廃液」とも呼ぶ）が排出されると計算できる。一方、本願発明の製造方法に含まれる活性炭材料を用いる精製工程の場合、プロセス液本体を通液後、リンスに必要な緩衝液を使用するのみである。すなわち、リンスに1 DVの緩衝液を使用して、後に所定の濃度まで濃縮した場合、廃液は100 Lにとどまる。高活性廃液処理の際には、無毒化や水分の除去などの処理負荷がかかるため、総廃液量が削減されることは環境への負荷削減に繋がる。
　従来法により生じた高活性廃液を処理するまで一定期間保管する必要がある場合、抗体－薬物コンジュゲートを製造する回数に応じた廃液を保管できるスペースを確保する必要性があるだけでなく、当該廃液の漏洩リスクを考慮した管理が必要となる。本発明の(i)の工程で使用される活性炭フィルターは、廃液が占める体積の大きさと比較すると必要な保管スペースは比較的小さくてもよく、活性炭フィルターに吸着した高活性不純物は廃液よりも漏洩のリスクが比較的小さい。
　本発明の(i)の工程後の反応液における、エキサテカン化合物由来の副生成物(例えば、式(3)で表される化合物及び式(4)で表される化合物)の濃度は、好適には、約1 μM以下、より好適には、0.1 μM以下、さらに好適には、0.06 μM以下である。本発明によると、好適には、約1 μM以下、より好適には、0.1 μM以下、さらに好適には、0.06 μM以下のエキサテカン化合物由来の副生成物を含む医薬組成物を提供することができる。
　本発明の(i)の工程によれば、化合物(2)由来の副生成物が除去された抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を製造することができる。本発明の製造方法により得られる抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液は、0.3%以下、好適には0.1%以下、より好適には0.05%以下、さらにより好適には0.03%以下の化合物(2)由来の副生成物を含有することを特徴とする。本発明によると、0.3%以下、好適には0.1%以下、より好適には0.05%以下、さらにより好適には0.03%以下の化合物(2)由来の副生成物を含有する、抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供することができる。かかる含有量は、例えば、後述する方法により算出することができる。
　本発明の(i)の工程は、目的の抗体－薬物コンジュゲートの小規模な製造及び大規模な製造の両方に使用することができる。例えば、本発明の(i)の工程は、得られる抗体－薬物コンジュゲートについてミリグラムスケールからキログラムまで適用することができる。
　本発明の(i)の工程によるとエキサテカン化合物由来の副生成物を除去することができるため、当該副生成物の構造が共通するのであれば、目的の抗体－薬物コンジュゲートの抗体部分に依存せず本発明を適用することができる。
　本発明のある実施形態において、(i)の工程で用いられる活性炭材料は粉末活性炭である。活性炭の粉末又はその懸濁液を抗体－薬物コンジュゲート粗体に添加し、一定時間経過後、抗体－薬物コンジュゲート、エキサテカン化合物由来の副生成物及び活性炭からなる混合物を濾過等して、該副生成物が吸着した活性炭粉末を除去することにより、抗体－薬物コンジュゲートを精製することができる。
　溶液中の抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、公知の方法により測定することができるが、例えば、SoloVPE Variable Pathlength System(C Technologies，Inc、Bridgewater、NJ)を用いて測定することができる。本明細書において、該装置を用いる測定方法をSoloVPE法と呼ぶことがある。この方法により測定される抗体－薬物コンジュゲート濃度は、抗体濃度に換算されたものであることから抗体－薬物コンジュゲート中の抗体濃度に等しい。
　溶液中の式(3)で示される化合物及び式(4)で示される化合物を含む化合物(2)由来の副生成物の濃度及びその含有量(%)は、公知の方法により測定することができるが、例えば、以下に示す方法により測定することができる。
機器：H-Class，Acquity Arc(Path 2),Agilent1290
カラム：BioReslove RP mAb Polyphenyl(2.1×50 mm、2.7 μm)
カラム温度：45℃、試料保管温度：10℃
移動相A：0.01 M 硫酸アンモニウムリン酸緩衝液、pH3.4
移動相B：メタノール/アセトニトリル(1：1)
移動相C：希釈過塩素酸(500倍希釈)
移動相D：アセトニトリル
波長：370 nm、流速：0.5 mL/min、サンプル注入量：2 μL
サンプリングレート：5Hz(H-Class)、10Hz(Agilent1290)
溶出モード：グラジエント、40分
グラジエントプログラム
　化合物(2)由来の副生成物の標品としては、例えば以下のように調製されたリボフラビン水溶液を用いることができる。
1)リボフラビン標準品40 mgを精密に量る。
2)水/アセトニトリル混液(1：1)を加えて溶解させたのち、正確に200 mLとする。
3)上記溶液1 mLを分取し、水/アセトニトリル混液(9：1)を加えて正確に50 mLとする。
　上記リボフラビン溶液を用いた場合、化合物(2)由来の副生成物濃度の算出方法として以下の式を用いることができる。
　抗体－薬物コンジュゲート中の薬物濃度は、SoloVPE法により得られる抗体－薬物コンジュゲート中の抗体濃度から、以下の式を用いて算出することができる。
　ここで、抗体－薬物コンジュゲートの抗体一分子あたりの平均薬物結合数の算出は、例えば、280 nm及び370 nmの二波長における抗体－薬物コンジュゲートとそのコンジュゲーション前駆体のUV吸光度を測定することにより算出する方法(UV法)や、抗体－薬物コンジュゲートを還元剤で処理し得られた各フラグメントをHPLC測定により定量し算出する方法(HPLC法)により行うことができる。
　抗体－薬物コンジュゲートの抗体一分子あたりの平均薬物結合数の算出は、国際公開第2014/057687号、国際公開第2015/098099号、国際公開第2015/115091号、国際公開第2015/155998号、国際公開第2018/135501号、国際公開第2018/212136号、国際公開第2019/219891号、国際公開第2020/022363号、国際公開第2022/014698号、及び国際公開第2023/068226号等の記載を参考に実施することができる。
　各化合物(2)由来の副生成物の量(%)は、前記化合物(2)由来の副生成物濃度及び抗体－薬物コンジュゲート中の薬物濃度から以下の式を用いて算出することができる。
　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に含まれるTCEPの含有量は特に限定されないが、例えば、0～300 μg/mLの範囲内であればよく、0～290 μg/mL、0～280 μg/mL、0～270 μg/mL、0～260 μg/mL、0～250 μg/mL、0～240 μg/mL、0～230 μg/mL、0～220 μg/mL、0～210 μg/mL又は0～200 μg/mLの範囲であってもよい。
　本発明者らは、本発明の(i)の工程により、エキサテカン化合物由来の副生成物だけでなくTCEPが反応液から除去できることを見出した。溶液中のTCEPの濃度は、公知の方法により測定することができるが、例えば、以下に示す方法によりトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィンオキシド（以下「TCEPO」とも呼ぶ）として測定することができる。
機器:Acquity UPLC H-Class及びQda（Waters）
検出器:Mass spectormeter (ESI positivem Selected ion m/z 267 monitoring)
カラム:Inertsil AX (4.6 mm ID x 120 mm, 5 μm)
カラム温度:40℃
移動相:A mixture of 250mM formic acid aq., 250mM ammonium formate aq. And methanol (19:19:2)
流速:1.0 mL/min
溶出モード:Isocratic, 15 min
　TCEP標品としては、例えば以下のように調製することができる。
1) TCEP 50 mgを精密に量る
2) 精製水を加えて完全に溶解させたのち、正確に250 mLとする
3) 2)の液1000 μLに過酸化水素水 10 μLを加え、室温で10分間インキュベートする
4) 3)にアンモニア水7 μLと精製水983 μLを加えて標準溶液とする
　本発明の(i)の工程後の反応液における、TCEPの濃度は、好適には、140 μg/mL以下である。本発明によると、好適には、140 μg/mL以下のTCEPを含む医薬組成物を提供することができる。本発明の(i)の工程後のTCEPの除去率は、好適には16%以上、より好適には、20%以上、さらに好適には、24%以上である。
　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に含まれるNACの含有量は特に限定されないが、例えば、0～300 μg/mLの範囲内であればよく、0～290 μg/mL、0～280 μg/mL、0～270 μg/mL、0～260 μg/mL、0～250 μg/mL、0～240 μg/mL、0～230 μg/mL又は0～220 μg/mLの範囲であってもよい。
　NACの濃度は、公知の方法により測定することができるが、例えば、以下に示す方法により測定することができる。
機器:SpectraMax Spectra Maxi3x（Molecular Devices）
定量キット:Measure-IT Thiol Assay Kit
キットの使用方法としてマニュアルに記載されている実験プロトコルに従って標準溶液・試料溶液を調製し測定する。
　本発明の(i)の工程後の反応液における、NACの濃度は、好適には、約100 μg/mL以下、より好適には、70 μg/mL以下、さらに好適には、40 μg/mL以下である。本発明によると、好適には、約100 μg/mL以下、より好適には、70 μg/mL以下、さらに好適には、40 μg/mLのNACを含む医薬組成物を提供することができる。本発明の(i)の工程によるNACの除去率は、好適には60%以上、より好適には、70%以上、さらに好適には、80%以上である。
　本発明は(i)の工程の前に、活性炭濾過に使用する活性炭フィルターを使用前洗浄する工程を含み得る。活性炭フィルターは活性炭からの溶出物が反応液にコンタミネーションすることを防ぐため、使用前に水で使用前洗浄することが推奨されている。発明者らは、使用前洗浄する溶液を鋭意検討し、エキサテカン化合物由来の副生成物の除去効率を低下させず、目的とする抗体－薬物コンジュゲートの回収率を向上させることに成功した。使用前洗浄する溶液は、好適には、界面活性剤を含む水溶液であり、より好適には、ポリソルベート20水溶液又はポリソルベート80水溶液であり、更により好適には、ポリソルベート80水溶液である。
　前記使用前洗浄に用いる溶液量は、溶出するエキサテカン化合物由来の副生成物量及び目的とする抗体－薬物コンジュゲートの回収率に応じて当業者が適宜選択することができるが、過剰な溶液量を用いるとエキサテカン化合物由来の副生成物の吸着量の低下を招き十分な精製効果が得られないこととなるため、目標とする副生成物除去量及び抗体－薬物コンジュゲートの回収率に応じて精密に調整することが望ましい。
　なお、上述の通りエキサテカン化合物を使用した抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液から、エキサテカン化合物由来の副生成物を除去する場合について記載したが、当該活性炭材料を用いる精製工程はエキサテカン化合物由来の副生成物を除去する場合に限定されるものではなく、エキサテカン化合物とは相違する他の薬物を使用した抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液から当該他の薬物由来の副生成物を除去するためにも適用できる。
　本発明のある実施態様において、本発明の活性炭材料を用いる精製工程は、例えば、国際公開第2019/065964号、米国出願公開第2020/0261594号明細書、国際公開第2020/196474号若しくは米国出願公開第2022/0168440号明細書に記載されている抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)又は国際公開第2020/050406号、米国出願公開第2022/0008549号明細書、国際公開第2021/177438号若しくは米国出願公開第2023/0330248号明細書に記載されている抗体－環状ジヌクレオチド誘導体コンジュゲート(その開示が本明細書に参照により組み込まれる)を用いて行うことができる。
　本発明のある実施態様において、本発明の活性炭材料を用いる精製工程は、例えば、国際公開第2014/057687号又は米国出願公開第2015/0297748号明細書に記載されている抗体－薬物コンジュゲート(それらの開示が本明細書に参照により組み込まれる)を用いて行うことができ、下記の構造を薬物－リンカー構造部分を抗体に結合させたものが好ましい：
-(Succinimid-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、
-(Succinimid-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、
-(Succinimid-3-yl-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
７.医薬組成物の製造
　本発明にかかる医薬組成物は、本発明にかかる抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液及び賦形剤を含む医薬組成物である。
　かかる医薬組成物は、上述の方法により製造(精製を含む)した、抗体－薬物コンジュゲートを、さらに、
 (vii)抗体－薬物コンジュゲート含む溶液に緩衝液を添加する工程、
 (viii)抗体－薬物コンジュゲート含む溶液を濃縮する工程、及び、
 (ix)抗体－薬物コンジュゲート含む溶液を所定のpHに調整する工程、
からなる群より選択される少なくとも一つの工程、
並びに、
 (x)抗体－薬物コンジュゲート含む溶液に賦形剤を添加する工程、
を含む工程を施すことにより、製造することができる。
　(vii)の工程で添加される緩衝液は、好適には、(ii)の工程で用いられる緩衝液と同一である。従って、(vii)の工程で用いられる緩衝液としては、好適には、ヒスチジン緩衝液を用いることができる。
　(ix)の工程で行われるpHの調整は、(vii)の工程で用いられる緩衝液がヒスチジン緩衝液である場合、好適には、ヒスチジン水溶液を用いて行うことができる。
　本発明において「賦形剤」とは、医薬品の成形、取扱い、及び服薬における利便性の向上等のために、一定の大きさや濃度にする目的で添加される物質を示す。このような賦形剤としては、本発明の効果を示す限りにおいて特に限定されないが、例えば、スクロース、トレハロース、ソルビトールを挙げることができる。
　(x)の工程で添加される賦形剤としては、好適には、スクロース又はトレハロースを用いることができる。
　さらに、本発明にかかる医薬組成物は、好適には、さらに界面活性剤を含む。すなわち、本発明にかかる医薬組成物は、より好適には、抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤を含む医薬組成物である。
　かかる医薬組成物は、上述の(x)の工程の後、さらに、(xi)界面活性剤を添加する工程、を含む工程を施すことにより、製造することができる。
　(xi)の工程で添加される界面活性剤としては、好適には、ポリソルベート80又はポリソルベート20を用いることができる。
　医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、界面活性剤、及び、抗体－薬物コンジュゲートの濃度、並びに、医薬組成物のpHは、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数、及び抗体の種類に応じて、適宜選択することができる。
　例えば、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER2抗体(好適には、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)である場合、医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤としては、好適には、ヒスチジン緩衝液(好適には25 mMヒスチジン緩衝液)、スクロース(好適には9％スクロース)、及びポリソルベート80(好適には0.03％ポリソルベート80)を用いることができ、医薬組成物における抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、好適には、20 mg/mLであり、医薬組成物のpHは、好適には、5.5である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4個の範囲であり、抗体が、抗TROP2抗体(好適には、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤としては、好適には、ヒスチジン緩衝液(好適には10 mMヒスチジン緩衝液)、スクロース(好適には9％スクロース)、及びポリソルベート80(好適には0.02又は0.03％ポリソルベート80)を用いることができ、医薬組成物における抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、好適には、20 mg/mLであり、医薬組成物のpHは、好適には、6.0である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER3抗体(好適には、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤としては、好適には、ヒスチジン緩衝液(好適には25 mMヒスチジン緩衝液)、スクロース(好適には9％スクロース)、及びポリソルベート20(好適には0.03％ポリソルベート20)を用いることができ、医薬組成物における抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、好適には、20 mg/mLであり、医薬組成物のpHは、好適には、5.4である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4個の範囲であり、抗体が、抗B7-H3抗体(好適には、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤としては、好適には、ヒスチジン緩衝液(好適には10 mMヒスチジン緩衝液)、スクロース(好適には9％スクロース)、及びポリソルベート20(好適には0.02又は0.03％ポリソルベート20)を用いることができ、医薬組成物における抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、好適には、20 mg/mLであり、医薬組成物のpHは、好適には、5.9である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗GPR20抗体(好適には、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤としては、好適には、ヒスチジン緩衝液(好適には10 mMヒスチジン緩衝液)、スクロース(好適には9％スクロース)、及びポリソルベート80(好適には0.03％ポリソルベート80)を用いることができ、医薬組成物における抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、好適には、20 mg/mLであり、医薬組成物のpHは、好適には、5.4である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CDH6抗体(好適には、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤としては、好適には、ヒスチジン緩衝液(好適には10 mMヒスチジン緩衝液)、スクロース(好適には9％スクロース)、及びポリソルベート80(好適には0.03％ポリソルベート80)を用いることができ、医薬組成物における抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、好適には、20 mg/mLであり、医薬組成物のpHは、好適には、5.4である。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗MUC1抗体(好適には、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤としては、好適には、ヒスチジン緩衝液(好適には10 mMヒスチジン緩衝液)、スクロース(好適には9％スクロース)、及びポリソルベート80(好適には0.03％ポリソルベート80)を用いることができ、医薬組成物における抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、好適には、25 mg/mLであり、医薬組成物のpHは、好適には、5.2である。。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CD37抗体(好適には、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、医薬組成物における、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤としては、好適には、ヒスチジン緩衝液(好適には8 mMヒスチジン緩衝液)、スクロース(好適には9％スクロース)、及びポリソルベート80(好適には0.03％ポリソルベート80)を用いることができ、医薬組成物における抗体－薬物コンジュゲートの濃度は、好適には、25 mg/mLであり、医薬組成物のpHは、好適には、5.3である。
８.医薬組成物の使用
　本発明の医薬組成物は、患者に対しては全身療法として適用する他、がん組織に局所的に適用して治療効果を期待することができる。
　本発明の医薬組成物は、哺乳動物に対して好適に使用することができるが、より好適にはヒトに対して使用することができる。
　本発明の医薬組成物を投与するために使用され得る導入経路としては、例えば、静脈内、皮内、皮下、筋肉内、及び腹腔内の経路を挙げることができるが、好適には、静脈内である。
　本発明の医薬組成物が水性注射剤である場合、好適には、適切な希釈液で希釈した後、静脈内に点滴投与することができる。希釈液としては、ブドウ糖溶液や、生理食塩液、等を挙げることができ、好適には、ブドウ糖溶液を挙げることができ、より好適には5％ブドウ糖溶液を挙げることができる。
　本発明の医薬組成物が凍結乾燥注射剤である場合、好適には、注射用水により溶解した後、必要量を適切な希釈液で希釈し、静脈内に点滴投与することができる。希釈液としては、ブドウ糖溶液や、生理食塩液、等を挙げることができ、好適には、ブドウ糖溶液を挙げることができ、より好適には5％ブドウ糖溶液を挙げることができる。
　本発明の医薬組成物は、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの抗原に対する親和性、すなわち、抗原に対する解離定数(Kd値)の点において、親和性が高い(Kd値が低い)ほど、少量の投与量であっても薬効を発揮させことができる。したがって、本発明の医薬組成物の投与量は、抗原との親和性の状況に基づいて設定することもできる。本発明の医薬組成物をヒトに対して投与する際には、例えば、抗体－薬物コンジュゲートとして、約0.001～100 mg/kg(ここで、「mg/kg」とは、ヒトの体重1kgあたりの抗体－薬物コンジュゲートの投与量を意味する)を1回或は1～180日間に1回の間隔で複数回投与すればよいが、好適には、0.8 mg/kg～8 mg/kgを3週に1回投与する方法を挙げることができる。
　抗体－薬物コンジュゲートの投与量及び投与間隔は、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数、及び抗体の種類に応じて、適宜選択することができる。
　例えば、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER2抗体(好適には、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は配列番号8に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)である場合、好適には、0.8 mg/kg、1.6 mg/kg、3.2 mg/kg、5.4 mg/kg、6.4 mg/kg、7.4 mg/kg、又は8 mg/kgの抗体－薬物コンジュゲートを3週に1回投与する方法を挙げることができ、より好適には、5.4 mg/kg、6.4 mg/kg、7.4 mg/kg、又は8 mg/kgの抗体－薬物コンジュゲートを3週に1回投与する方法を挙げることができ、更により好適には、5.4 mg/kg、又は6.4 mg/kgの抗体－薬物コンジュゲートを3週に1回投与する方法を挙げることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4個の範囲であり、抗体が、抗TROP2抗体(好適には、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、好適には、2 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、5 mg/kg、6 mg/kg、7 mg/kg、8 mg/kg、9 mg/kg、又は10 mg/kgの抗体－薬物コンジュゲートを3週に1回投与する方法を挙げることができ、より好適には、4 mg/kg、6 mg/kg、又は8 mg/kgの抗体－薬物コンジュゲートを3週に1回投与する方法を挙げることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗HER3抗体(好適には、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、好適には、1.6 mg/kg、3.2 mg/kg、4.8 mg/kg、5.6 mg/kg、6.4 mg/kg、8.0 mg/kg、9.6 mg/kg、又は12.8 mg/kgの抗体－薬物コンジュゲートを3週に1回投与する方法を挙げることができ、より好適には、4.8 mg/kg、5.6 mg/kg、又は6.4 mg/kgの抗体－薬物コンジュゲートを3週に1回投与する方法を挙げることができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗B7-H3抗体(好適には、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、好適には、1回あたり、0.8 mg/kg、1.6 mg/kg、3.2 mg/kg、4.8 mg/kg、6.4 mg/kg、又は8.0 mg/kgの投与量を3週に1回の間隔で投与することができる。
　また、製造する抗体－薬物コンジュゲートの1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲であり、抗体が、抗CDH6抗体(好適には、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体、又は該抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している抗体)である場合、好適には、0.1～50 mg/kgを、さらに好適には、1～50 mg/kg、1～30 mg/kg、1～20 mg/kg、1～15 mg/kg、2～50 mg/kg、2～30 mg/kg、2～20 mg/kg又は2～15 mg/kgを1～4週間に1回、好ましくは2～3週間に1回の間隔で複数回投与すればよい。
　本発明の医薬組成物は、がんの治療のために使用することができ、好適には、乳がん、胃がん(胃腺がんと呼ぶこともある)、大腸がん(結腸直腸がんと呼ぶこともあり、結腸がん及び直腸がんを含む)、肺がん(小細胞肺がん及び非小細胞肺がんを含む)、食道がん、頭頚部がん(唾液腺がん及び咽頭がんを含む)、胃食道接合部腺がん、胆道がん(胆管がんを含む)、ページェット病、膵臓がん、卵巣がん、子宮がん肉腫、尿路上皮がん、前立腺がん、膀胱がん、消化管間質腫瘍、子宮頸がん、扁平上皮がん、腹膜がん、肝臓がん、肝細胞がん、子宮体がん、腎臓がん、外陰部がん、甲状腺がん、陰茎がん、白血病、悪性リンパ腫、形質細胞腫、骨髄腫、多型神経膠芽腫、骨肉腫、及びメラノーマからなる群より選択される少なくとも一つのがんの治療のために使用することができる。
　本発明の医薬組成物は、がん治療の主要な治療法である薬物療法のための薬剤として選択して使用することができ、その結果として、がん細胞の成長を遅らせ、増殖を抑え、さらにはがん細胞を破壊することができる。これらの作用によって、がん患者において、がんによる症状からの解放や、QOLの改善を達成でき、がん患者の生命を保って治療効果が達成される。がん細胞の破壊には至らない場合であっても、がん細胞の増殖の抑制やコントロールによってがん患者においてより高いQOLを達成しつつより長期の生存を達成させることができる。
　このような薬物療法においての薬物単独での使用の他、本発明の医薬組成物は、アジュバント療法において他の療法と組み合わせて使用することもでき、外科手術や、放射線療法、ホルモン療法等と組み合わせることができる。さらにはネオアジュバント療法における薬物療法として使用することもできる。
　以上のような治療的使用の他、本発明の医薬組成物は、微細な転移がん細胞の増殖を押さえ、さらには破壊するといった予防効果も期待することができる。例えば、転移過程で体液中にあるがん細胞を抑制し破壊する効果や、いずれかの組織に着床した直後の微細ながん細胞に対する抑制、破壊等の効果が期待できる。したがって、特に外科的ながんの除去後においてのがん転移の抑制、予防効果が期待できる。
　本発明の医薬組成物は、他のがん治療剤と併用して投与することもでき、これによって抗腫瘍効果を増強させることができる。この様な目的で使用される他のがん治療剤は、本発明の医薬組成物と同時に、別々に、或は連続して個体に投与されてもよいし、それぞれの投与間隔を変えて投与されてもよい。この様ながん治療剤としては、抗腫瘍活性を有する薬剤であれば限定されることはないが、例えば、イリノテカン(Irinotecan、CPT-11)、シスプラチン(Cisplatin)、カルボプラチン(Carboplatin)、オキサリプラチン(Oxaliplatin)、フルオロウラシル(Fluorouracil、5-FU)、ゲムシタビン(Gemcitabine)、カペシタビン(Capecitabine)、パクリタキセル(Paclitaxel)、ドセタキセル(Docetaxel)、ドキソルビシン(Doxorubicin)、エピルビシン(Epirubicin)、シクロフォスファミド(Cyclophosphamide)、マイトマイシンC(Mitomycin C)、テガフール(Tegafur)・ギメラシル(Gimeracil)・オテラシル(Oteracil)配合剤、セツキシマブ(Cetuximab)、パニツムマブ(Panitumumab)、ベバシズマブ(Bevacizumab)、ラムシルマブ(Ramucirumab)、レゴラフェニブ(Regorafenib)、トリフルリジン(Trifluridine)・チピラシル(Tipiracil)配合剤、ゲフィチニブ(Gefitinib)、エルロチニブ(Erlotinib)、アファチニブ(Afatinib)、メトトレキサート(Methotrexate)、ペメトレキセド(Pemetrexed)、トラスツズマブエムタンシン(Trastuzumab emtansin)、トラスツズマブ(Trastuzumab)、ペルツズマブ(Pertuzumab)、タモキシフェン(Tamoxifen)、トレミフェン(Toremifene)、フルベストラント(Fulvestrant)、リュープロレリン(Leuprorelin)、ゴセレリン(Goserelin)、レトロゾール(Letrozole)、アナストロゾール(Anastrozole)、及びプロゲステロン製剤(Progesterone formulation)からなる群より選択される少なくとも一つを挙げることができる。
　本明細書において文脈に反せず、特に限定して記載しておらず、かつ、技術的に矛盾しない限り、単数形で記載された用語は複数形をも包含し、逆も然りである。
　以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
[実施例1]活性炭フィルターによる化合物(2)由来の副生成物の除去
1)-1 抗体の還元及び抗体と薬物リンカーとのコンジュゲーション
　国際公開第2018/135501号に記載の抗GPR20抗体(配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)を含む溶液(抗体1.00 g相当)をガラス製フラスコに入れ、更に、0.07 g/gポリソルベート80及び2.0 mmol/L EDTAを含む150 mmol/L L-ヒスチジン水溶液(17 mL)を加えた。次いで、30℃攪拌下で、10 mmol/L TCEP塩酸塩を含む水溶液(抗体一分子に対して4.75当量)を加え、同温にて攪拌することによりチオール基を有する抗体を生じさせた。3時間が経過した時点で、反応液を内温15℃へと冷却し、攪拌下で次式(2)
で示される化合物(抗体一分子に対して8.90当量)を、酢酸を含有するジメチルスルホキシド水溶液に溶解して加え、チオール基を有する抗体と反応させた。
1)-2 反応液のクエンチ
　次に、0.03 mol/L N-アセチルシステイン水溶液(抗体一分子に対して15.0当量)を加え、さらに同温で30分間攪拌して余剰の化合物(2)をクエンチさせたのち、10％酢酸水溶液を用いて反応液をpH5.0へと調整した。これにより、次式(1)
(式中、Aは抗GPR20抗体との結合位置を示す)
で示される薬物リンカーと、抗GPR20抗体をチオエーテル結合によって結合させた抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液を得た。
1)-3 フィルターによる反応液の粗精製
　得られた反応液中の化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定したのち、15℃に調整した反応液を、活性炭粉末を担体として成型したデプスフィルターであるMillistak+(登録商標) Depth Filter CR40 media(Merck)と同様の活性炭及びセルロース繊維等から構成された面積が5 cm2の活性炭フィルター及び滅菌濾過フィルターを用い、ロータリーポンプにて送液しながら濾過を行った。濾過後の反応液について抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定し、濾過前後での含有量の変化を追跡した。また、比較として、活性炭フィルターを使用しなかった場合の、化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定した。
　ここで、化合物(2)由来の副生成物としては、化合物(2)のマレイミジル基にトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィンが付加した化合物、すなわち、次式(3)
で示される化合物及び化合物(2)のマレイミジル基にN-アセチルシステインが付加した化合物、すなわち、次式(4)
で示される化合物を挙げることができる。
1)-4 抗体－薬物コンジュゲート及び化合物(2)由来の副生成物の測定
　活性炭濾過フィルター前後での、抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートの濃度はSoloVPE法にて、化合物(3)及び化合物(4)を含む化合物(2)由来の副生成物の含有量はHPLC法にて、それぞれ測定することにより算出した。
　化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表2及び図1に示す。活性炭フィルターにより、化合物(3)および(4)をほぼ完全に除去可能であることを確認した。
 
　また、化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲート中の薬物濃度から、化合物(2)由来の副生成物の含有量(%)を算出した結果を表3に示す。
［実施例2］温度の検討
　実施例1の1)-1及び1)-2に記載の方法により、抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液を得た。得られた反応液中の化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定したのち、0℃に冷却、または30℃に加温した反応液を、活性炭粉末を担体として成型したデプスフィルターであるMillistak+(登録商標) Depth Filter CR40 media(Merck)と同様の活性炭及びセルロース繊維等から構成された面積が5cm2の活性炭フィルター及び滅菌濾過フィルターを用い、ロータリーポンプにて送液しながら濾過を行った。濾過後の反応液について抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定し、濾過前後での含有量の変化を追跡した。
　実施例1の1)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定した。化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表4及び図2に示す。液温0～30℃の範囲において、十分な除去効率が確認された。わずかな差ではあるが、除去効率は30℃のほうが良好であった。
 
［実施例3］pHの検討
　実施例1の1)-1に記載の方法により抗体の還元及び抗体と薬物リンカーとのコンジュゲーションを行った。次に、0.03 mol/L N-アセチルシステイン水溶液(抗体一分子に対して15.0当量)を加え、さらに同温で30分間攪拌して余剰の化合物(2)をクエンチさせたのち、10％酢酸水溶液を用いて反応液をpH6.0、または、10％酢酸水溶液及び酢酸を用いてpH4.0へと調整した。これにより、次式(1)
(式中、Aは抗GPR20抗体との結合位置を示す)
で示される薬物リンカーと、抗GPR20抗体をチオエーテル結合によって結合させた抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液を得た。
　得られた反応液を実施例1の1)-3に記載の方法でフィルターによる反応液の粗精製を行い、実施例1の1)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定した。化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表5及び図3に示す。溶液pH4.0～6.0の範囲において、十分な除去効率が確認された。わずかな差であるが、pH4.0のほうが除去効率は高かった。
［実施例4］化合物(2)由来の副生成物量の検討
　実施例1で用いた抗体と同じ抗GPR20抗体を含む溶液(抗体1.00 g相当)をガラス製フラスコに入れ、更に、0.07 g/gポリソルベート80及び2.0 mmol/L EDTAを含む150 mmol/L L-ヒスチジン水溶液(17 mL)を加えた。次いで、30℃攪拌下で、10 mmol/L TCEP塩酸塩を含む水溶液(抗体一分子に対して6.00当量)を加え、同温にて攪拌することによりチオール基を有する抗体を生じさせた。3時間が経過した時点で、反応液を内温15℃へと冷却し、攪拌下で化合物(2)(抗体一分子に対して10.00当量)を加え、チオール基を有する抗体と反応させた。
　実施例1の1)-2に記載の方法により反応液をクエンチし、実施例1の1)-3に記載の方法でフィルターによる反応液の粗精製を行い、実施例1の1)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定した。化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表6及び図4に示す。実施例1の標準実験よりも化合物(2)由来の副生成物の濃度を2倍以上とした場合にも、十分な除去効率が認められた。
  
［実施例5］水溶液の検討
　実施例1で用いた抗体と同じ抗GPR20抗体を含む溶液(抗体1.00 g相当)をガラス製フラスコに入れ、更に、0.07 g/gポリソルベート80及び2.0 mmol/L EDTAを含む1 mol/L酢酸ナトリウム水溶液(17mL)、または、0.07 g/gポリソルベート80及び2.0 mol/L EDTAを含む28 mmol/Lリン酸水素二ナトリウム水溶液(17 mL)を加えた。次いで、30℃攪拌下で、10 mmol/L TCEP塩酸塩を含む水溶液(抗体一分子に対して4.75当量)を加え、同温にて攪拌することによりチオール基を有する抗体を生じさせた。3時間が経過した時点で、反応液を内温15℃へと冷却し、攪拌下で化合物(2)(抗体一分子に対して8.90当量)を加え、チオール基を有する抗体と反応させた。
　実施例1の1)-2に記載の方法により反応液をクエンチし、実施例1の1)-3に記載の方法でフィルターによる反応液の粗精製を行い、実施例1の1)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定した。化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表7及び図5に示す。酢酸緩衝液、リン酸緩衝液においても、ヒスチジン緩衝液と同等の十分な除去効率が確認された。
   
［実施例6］添加物の検討
　実施例1で用いた抗体と同じ抗GPR20抗体を含む溶液(抗体1.00 g相当)をガラス製フラスコに入れ、更に、2.0 mmol/L EDTAを含む150 mmol/L L-ヒスチジン水溶液(17 mL)、または、0.07 g/gポリソルベート20及び2.0 mmol/L EDTAを含む150 mmol/L L-ヒスチジン水溶液(17 mL)を加えた。次いで、30℃攪拌下で、10 mmol/L TCEP塩酸塩を含む水溶液(抗体一分子に対して4.75当量)を加え、同温にて攪拌することによりチオール基を有する抗体を生じさせた。3時間が経過した時点で、反応液を内温15℃へと冷却し、化合物(2)(抗体一分子に対して8.90当量)を加え、チオール基を有する抗体と反応させた。
　実施例1の1)-2に記載の方法により反応液をクエンチし、実施例1の1)-3に記載の方法でフィルターによる反応液の粗精製を行い、実施例1の1)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定した。化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表8及び図6に示す。添加物(ポリソルベート20又はポリソルベート80)の種類や有無に関わらず、十分な除去効果が確認された。
    
［実施例7］活性炭フィルターのリンス方法の検討1
　実施例1の1)-1及び1)-2に記載の方法で抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液を得た。実施例1の1)-3に記載の方法で活性炭フィルターによる反応液の粗精製を行った。続いて、8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.3)(6.0 mL)を粗精製に使用した活性炭フィルターへと送液し、ポンプチューブ及び活性炭フィルターをリンスした。実施例1の1)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での反応液中の抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量、並びに、活性炭濾過フィルター後のリンス液中の抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定した。化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果は表9及び図7に示す。8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.3)によるリンスによって不純物の溶出を伴わずに抗GRP20抗体－薬物コンジュゲートを回収できることが確認された。濾過後の反応液及びリンス液を合わせた場合の、抗体－薬物コンジュゲート回収率は97.3％であった。
［実施例8］活性炭フィルターによる化合物(2)由来の副生成物の除去2
8)-1 抗体の還元及び抗体と薬物リンカーとのコンジュゲーション
　国際公開第2023/068226号に記載の抗CD37抗体(配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)を含む溶液(抗体1.00 g相当)をガラス製フラスコに入れ、更に、0.07 g/gポリソルベート80及び2.0 mmol/L EDTAを含む120 mmol/L L-ヒスチジン水溶液(17 mL)を加える。次いで、30℃攪拌下で、10 mmol/L TCEP塩酸塩を含む水溶液(抗体一分子に対して4.75当量)を加え、同温にて攪拌することによりチオール基を有する抗体を生じさせる。3時間が経過した時点で、反応液を内温15℃へと冷却し、攪拌下で次式(2)
で示される化合物(抗体一分子に対して8.90当量)を、酢酸を含有するジメチルスルホキシド水溶液に溶解して加え、チオール基を有する抗体と反応させる。
8)-2 反応液のクエンチ
　次に、0.03 mol/L N-アセチルシステイン水溶液(抗体一分子に対して15.0当量)を加え、さらに同温で30分間攪拌して余剰の化合物(2)をクエンチさせたのち、10％酢酸水溶液を用いて反応液をpH5.0へと調整する。これにより、次式(1)
(式中、Aは抗CD37抗体との結合位置を示す)
で示される薬物リンカーと、抗CD37抗体をチオエーテル結合によって結合させた抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液を得る。
8)-3　フィルターによる反応液の粗精製
　得られた反応液中の化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定したのち、15℃に調整した反応液を、活性炭粉末を担体として成型したデプスフィルターであるMillistak+(登録商標) Depth Filter CR40 media(Merck)と同様の活性炭及びセルロース繊維等から構成された面積が5cm2の活性炭フィルター及び滅菌濾過フィルターを用い、ロータリーポンプにて送液しながら濾過を行う。濾過後の反応液について抗CD37抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定し、濾過前後での含有量の変化を追跡する。
　ここで、化合物(2)由来の副生成物としては、化合物(2)のマレイミジル基にトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィンが付加した化合物、すなわち、次式(3)
で示される化合物及び化合物(2)のマレイミジル基にN-アセチルシステインが付加した化合物、すなわち、式(4)
で示される化合物を挙げることができる。
8)-4　抗体－薬物コンジュゲート及び化合物(2)由来の副生成物の測定
活性炭濾過フィルター前後での、抗CD37体-薬物コンジュゲートの濃度はSoloVPE法にて、化合物(3)及び化合物(4)を含む化合物(2)由来の副生成物の含有量はHPLC法にてそれぞれ測定することにより算出する。
［実施例9］温度の検討2
　実施例8の8)-1及び8)-2に記載の方法により、抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液を得る。得られた反応液中の化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定したのち、0℃に冷却、または30℃に加温した反応液を、活性炭粉末を担体として成型したデプスフィルターであるMillistak+(登録商標) Depth Filter CR40 media(Merck)と同様の活性炭及びセルロース繊維等から構成された面積が5cm2の活性炭フィルター及び滅菌濾過フィルターを用い、ロータリーポンプにて送液しながら濾過を行う。濾過後の反応液について抗CD37抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定し、濾過前後での含有量の変化を追跡する。
　実施例8の8)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定する。
［実施例10］pHの検討2
　実施例8の8)-1に記載の方法により抗体の還元及び抗体と薬物リンカーとのコンジュゲーションを行う。次に、0.03 mol/L N-アセチルシステイン水溶液(抗体一分子に対して15.0当量)を加え、さらに同温で30分間攪拌して余剰の化合物(2)をクエンチさせたのち、10％酢酸水溶液を用いて反応液をpH6.0、または、10％酢酸水溶液及び酢酸を用いてpH4.0へと調整する。これにより、次式(1)
(式中、Aは抗CD37抗体との結合位置を示す)
で示される薬物リンカーと、抗CD37抗体をチオエーテル結合によって結合させた抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液を得る。
　得られた反応液を実施例8の8)-3に記載の方法でフィルターによる反応液の粗精製を行い、実施例8の8)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定する。
［実施例11］化合物(2)由来の副生成物量の検討2
　実施例8で用いた抗体と同じ抗CD37抗体を含む溶液(抗体1.00g相当)をガラス製フラスコに入れ、更に、0.07 g/gポリソルベート80及び2.0 mol/L EDTAを含む120 mmol/L L-ヒスチジン水溶液(17 mL)を加える。次いで、30℃攪拌下で、10 mmol/L TCEP塩酸塩を含む水溶液(抗体一分子に対して6.00当量)を加え、同温にて攪拌することによりチオール基を有する抗体を生じさせる。3時間が経過した時点で、反応液を内温15℃へと冷却し、攪拌下で化合物(2)(抗体一分子に対して10.00当量)を加え、チオール基を有する抗体と反応させる。
　実施例8の8)-2に記載の方法により反応液をクエンチし、実施例8の8)-3に記載の方法でフィルターによる反応液の粗精製を行い、実施例8の8)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定する。
［実施例12］活性炭フィルターのリンス方法の検討2
　実施例8の8)-1から実施例8の8)-3に記載の方法で抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の調製と得られた反応液の粗精製を行い、実施例8の8)-4に記載の方法により抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定する。
　次に、8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.3)(1.5 mL)を活性炭フィルターへと送液し、ポンプチューブ及び活性炭フィルターをリンスする。
　実施例8の8)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での得られたリンス液の抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定する。この操作を3回繰り返す。
［実施例13］活性炭フィルターのリンス方法の検討3
　実施例8の8)-1から実施例8の8)-3に記載の方法で抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の調製と得られた反応液の粗精製を行い、実施例8の8)-4に記載の方法により抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定する。
　次に、8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.3)(4.5 mL)を10分間循環しながら送液することで活性炭フィルター及びポンプチューブをリンスする。
　実施例8の8)-4に記載の方法により、活性炭濾過フィルター前後での得られたリンス液の抗体－薬物コンジュゲートの濃度及び化合物(2)由来の副生成物の含有量を測定する。
［実施例14］活性炭フィルターを使用する精製工程を含む抗体－薬物コンジュゲート原薬の製造
　実施例8の8)-1から実施例8の8)-3に記載の方法で抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液の調製と得られた反応液の粗精製を行う。次に、8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.3)(4.7 mL)でポンプチューブ及び活性炭フィルターをリンスする。
　次に、得られた反応液を、限外濾過膜であるPellicon 3(登録商標)Cassette Ultracel(登録商標)を用い、ダイアフラムポンプにて循環させながら限外濾過を行い、抗体－薬物コンジュゲートを濃縮する。濃縮した反応液に対して、5倍量の10.8 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液(pH5.2)を用いて透析濾過を行ったのち、再度限外濾過による濃縮を行うことで抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含有する溶液を取得する。
　得られた反応液に、スクロースを含むヒスチジン緩衝液(pH5.3)及びポリソルベート80を含むヒスチジン緩衝液(pH5.3)を加えて抗CD37抗体－薬物コンジュゲート濃度を25 g/Lへと調整し、抗CD37抗体－薬物コンジュゲート原薬を得る。
［実施例15］活性炭フィルターによる化合物(2)由来の副生成物の除去3
　国際公開第2023/068226号に記載の抗CD37抗体(配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)を用いて、実施例1と同様の実験を行った。
　化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗CD37抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表10及び図25に示す。活性炭フィルターにより、化合物(3)および(4)をほぼ完全に除去可能であることを確認した。
　また、化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲート中の薬物濃度から、化合物(2)由来の副生成物の含有量(%)を算出した結果を表11に示す。
[実施例16]活性炭フィルターによる化合物(2)由来の副生成物の除去4
　国際公開第2023/068226号に記載の抗MUC1抗体(配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体)を用いて、実施例1と同様の実験を行った。
　化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗MUC1抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表12及び図26に示す。活性炭フィルターにより、化合物(3)および(4)をほぼ完全に除去可能であることを確認した。 
　また、化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗体－薬物コンジュゲート中の薬物濃度から、化合物(2)由来の副生成物の含有量(%)を算出した結果を表13に示す。
［実施例17］ポリソルベート80水溶液による使用前洗浄効果1
　実施例15の方法で抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液を得た。当該溶液について「フィルターによる反応液の粗精製」を行う前に、ポリソルベート80水溶液による活性炭フィルターの使用前洗浄を行いその効果を評価した。
　活性炭フィルターは活性炭からの溶出物が反応液にコンタミネーションすることを防ぐため、使用前に水で洗浄することを推奨されている。実施例1～7、15及び16についてはいずれも水80 mLで活性炭フィルターを洗浄してから使用していたが、本実験においてはこの80 mLの一部を1%ポリソルベート80水溶液に置き換えて使用前洗浄を実施した。すなわち、水50 mLをロータリーポンプで送液して活性炭フィルターを洗浄した後、1%ポリソルベート80水溶液15 mL、水15 mLの順で活性炭フィルターに送液し、洗浄を行った。その後、実施例15の方法でフィルターによる反応液の粗精製と抗体－薬物コンジュゲート及び化合物(2)由来の副生成物の測定を行った。
　化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗CD37抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表14及び図27に示す。活性炭フィルターにより、化合物(3)および(4)をほぼ完全に除去可能であることを確認した。ポリソルベート80水溶液を用いて使用前洗浄することにより、化合物(3)の含有量は実施例15と同程度の水準を維持したまま、抗CD37抗体－薬物コンジュゲートの回収率が実施例15よりも向上した。
[実施例18]ポリソルベート80水溶液による使用前洗浄効果2
　実施例17において使用前洗浄の条件を一部変更して実施した。すなわち、活性炭フィルターの使用前洗浄の工程において、水80 mLをロータリーポンプで送液して活性炭フィルターを洗浄した後、1%ポリソルベート80水溶液40 mL、水10 mLの順で活性炭フィルターに送液し、洗浄を行った。
　化合物(2)由来の副生成物の含有量及び抗CD37抗体－薬物コンジュゲートの回収率の結果を表15及び図28に示す。活性炭フィルターにより、化合物(3)および(4)を除去可能であることを確認した。ポリソルベート80水溶液の増量により、化合物(3)の含有量は実施例17よりも増加したが、抗CD37抗体－薬物コンジュゲートの回収率は実施例17よりも向上した。
[実施例19]低分子不純物の除去
　実施例1)-3で取得した活性炭フィルター濾過前後の抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液、実施例15で取得した活性炭フィルター濾過前後の抗CD37抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液、及び実施例16で取得した活性炭フィルター濾過前後の抗MUC１抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液につき、反応液中のTCEP及びTCEPO、及びNAC含有量について測定した。また、比較対象として、実施例1)-3で取得した活性炭フィルターを使用していない濾過前後の抗GPR20抗体－薬物コンジュゲートを含む反応液についても同様に反応液中のTCEP、TCEPO、及びNAC含有量について測定した。各不純物の含有量は表16に示す。活性炭フィルターにより、TCEP、TCEPO、及びNACを除去可能であることを確認した。
　本発明の製造方法により、従来の抗体－薬物コンジュゲートの製造方法より製造コストの低減及び/又は労力の軽減が可能である。従来の抗体－薬物コンジュゲートの精製工程よりも効率的に不純物を除去することができる精製工程、特に抗体－薬物コンジュゲートの精製工程において、限外濾過に代わる精製工程及び該精製工程を含む抗体－薬物コンジュゲートの製造方法が提供される。本発明の製造方法により、抗体－薬物コンジュゲートの製造により排出される廃液量を削減することができる。本発明により製造された抗体－薬物コンジュゲートは、医薬品として有用である。
配列番号1:抗GPR20抗体重鎖(h046-H4e)のアミノ酸配列
配列番号2:抗GPR20抗体軽鎖(h046-L7)のアミノ酸配列
配列番号3:抗CD37抗体重鎖(hmAb-H541)のアミノ酸配列
配列番号4:抗CD37抗体軽鎖(hmAb-L11)のアミノ酸配列
配列番号5:抗MUC1抗体重鎖(N54Q)のアミノ酸配列
配列番号6:抗MUC1抗体重鎖(PankoMab)のアミノ酸配列
配列番号7:抗MUC1抗体軽鎖(N54Q及びPankoMab)のアミノ酸配列
配列番号8:抗HER2抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号9:抗HER2抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号10:抗TROP2抗体重鎖(hTINA1-H1)のアミノ酸配列
配列番号11:抗TROP2抗体軽鎖(hTINA1-L1)のアミノ酸配列
配列番号12:抗HER3抗体重鎖のアミノ酸配列
配列番号13:抗HER3抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号14:抗B7-H3抗体重鎖(M30-H1)のアミノ酸配列
配列番号15:抗B7-H3抗体軽鎖(M30-L4)のアミノ酸配列
配列番号16:抗CDH6抗体重鎖(hH01)のアミノ酸配列
配列番号17:抗CDH6抗体軽鎖(hL02)のアミノ酸配列

Claims (97)

  1. 　式(1)
    (式中、Aは抗体との結合位置を示す)
    で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体－薬物コンジュゲートの製造方法であって、
    (i)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液から、活性炭材料を用いて、前記溶液に含まれるエキサテカン化合物由来の副生成物を除去する工程、
    を含むことを特徴とする、製造方法。
  2. 　(i)の工程が、抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を、活性炭フィルターを用いて濾過する工程である、請求項1に記載の製造方法。
  3. 　(i)の工程が、抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を、活性炭フィルターを用いて濾過する工程であって、前記溶液を活性炭フィルターに1回のみ通液させる工程である、請求項1又は2に記載の製造方法。
  4. 　(i)の工程の前に、活性炭フィルターを使用前洗浄する工程を含む、請求項2又は3に記載の製造方法。
  5. 　使用前洗浄する工程において、界面活性剤を含む水溶液が使用される、請求項4に記載の製造方法。
  6. 　使用前洗浄する工程において、ポリソルベート20水溶液又はポリソルベート80水溶液が使用される、請求項4又は5に記載の製造方法。
  7. 　使用前洗浄する工程において、ポリソルベート20水溶液が使用される、請求項4又は5に記載の製造方法。
  8. 　使用前洗浄する工程において、ポリソルベート80水溶液が使用される、請求項4又は5に記載の製造方法。
  9. 　活性炭材料に含まれる活性炭が、10～10000 m2/gの表面積を有する、請求項1～8のいずれか1項に記載の製造方法。
  10. 　活性炭材料に含まれる活性炭が、2 μm以上の平均粒子径を有する、請求項1～9のいずれか1項に記載の製造方法。
  11. 　活性炭材料に含まれる活性炭が、5～40 μmの平均粒子径を有する割合が少なくとも90重量%である、請求項1～10のいずれか1項に記載の製造方法。
  12. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液の温度が、0℃～30℃である、請求項1～11のいずれか1項に記載の製造方法。
  13. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液の温度が、10℃～20℃である、請求項1～12のいずれか1項に記載の製造方法。
  14. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液の温度が、約15℃である、請求項1～13のいずれか1項に記載の製造方法。
  15. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液のpHが、4.0～6.0である、請求項1～14のいずれか1項に記載の製造方法。
  16. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液のpHが、約5である、請求項1～15のいずれか1項に記載の製造方法。
  17. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液のpHが、約4.5である、請求項1～15のいずれか1項に記載の製造方法。
  18. 　(ii)抗体を、還元剤で還元する工程、
    (iii)式(2)
    で表される化合物を、(ii)の工程で還元された抗体と反応させる工程、
    (iv)チオール基を有する試薬を添加し、(iii)の工程で残存した式(2)で表される化合物と反応させる工程、
    を含む、請求項1～17のいずれか1項に記載の製造方法。
  19. 　(iv)の工程の後の工程に、(i)の工程を含む、請求項1～18のいずれか1項に記載の製造方法。
  20. 　エキサテカン化合物由来の副生成物が、式(2)で表される化合物のマレイミジル基に(ii)の工程で使用される還元剤が付加した化合物、及び/又は、式(2)で表される化合物のマレイミジル基に(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬が付加した化合物を含む、請求項1～19のいずれか1項に記載の製造方法。
  21. 　エキサテカン化合物由来の副生成物が、式(3)
    で示される化合物、及び/又は、式(4)
    で示される化合物を含む、請求項1～20のいずれか1項に記載の製造方法。
  22. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液における、式(3)で示される化合物の含有量が、300 μM以下である、請求項21に記載の製造方法。
  23. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液における、式(3)で示される化合物の含有量が、0～150 μMである、請求項21又は22に記載の製造方法。
  24. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液における、式(4)で示される化合物の含有量が、160 μM以下である、請求項21～23のいずれか1項に記載の製造方法。
  25. 　(i)の工程で使用される抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液における、式(4)で示される化合物の含有量が、0～80 μMである、請求項21～24のいずれか1項に記載の製造方法。
  26. 　(i)の工程により得られる抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液が、0.3%以下の化合物(2)由来の副生成物を含有する、請求項1～25のいずれか1項に記載の製造方法。
  27. 　(ii)の工程で使用される還元剤が、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン又はその塩である、請求項1～26のいずれか1項に記載の製造方法。
  28. 　(ii)の工程で使用される還元剤が、トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩である、請求項1～27のいずれか1項に記載の製造方法。
  29. 　(ii)の工程が緩衝液中で行われる、請求項1～28のいずれか1項に記載の製造方法。
  30. 　緩衝液が、ヒスチジン緩衝液である、請求項29に記載の製造方法。
  31. 　緩衝液が、L-ヒスチジン水溶液である、請求項29又は30に記載の製造方法。
  32. 　緩衝液が、リン酸水素二ナトリウム水溶液である、請求項29に記載の製造方法。
  33. 　緩衝液が、酢酸緩衝液である、請求項29に記載の製造方法。
  34. 　緩衝液が、酢酸ナトリウム水溶液である、請求項29又は33に記載の製造方法。
  35. 　(ii)の工程が、キレート剤の存在下で行われる、請求項1～34のいずれか1項に記載の製造方法。
  36. 　キレート剤が、エチレンジアミン四酢酸である、請求項35に記載の製造方法。
  37. 　(ii)の工程で使用される緩衝液が、界面活性剤を含有する、請求項29～36のいずれか1項に記載の製造方法。
  38. 　界面活性剤が、ポリソルベート20である、請求項37に記載の製造方法。
  39. 　界面活性剤が、ポリソルベート80である、請求項37に記載の製造方法。
  40. 　(ii)の工程で使用される緩衝液が、界面活性剤を含有しない、請求項29～36のいずれか1項に記載の製造方法。
  41. 　(iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、2.0～10.0当量である、請求項1～40のいずれか1項に記載の製造方法。
  42. 　(iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、8.0～10.0当量である、請求項1～41のいずれか1項に記載の製造方法。
  43. 　(iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、8.9～10.0当量である、請求項1～42のいずれか1項に記載の製造方法。
  44. 　(iii)の工程で使用される式(2)で表される化合物が、4.0～6.0当量である、請求項1～41のいずれか1項に記載の製造方法。
  45. 　(iv)の工程で使用されるチオール基を有する試薬が、N-アセチルシステインである、請求項1～44のいずれか1項に記載の製造方法。
  46. 　(v)反応液のpHを調整する工程を含む、請求項1～45のいずれか1項に記載の製造方法。
  47. 　(iv)の工程に次いで、(v)の工程を含む、請求項1～46のいずれか1項に記載の製造方法。
  48. 　(v)の工程が、反応液のpHを4～6の範囲に調整する工程である、請求項46又は47に記載の製造方法。
  49. 　(v)の工程が、反応液のpHを約5に調整する工程である、請求項46～48のいずれか1項に記載の製造方法。
  50. 　(v)の工程が、反応液のpHを約4.5に調整する工程である、請求項46～48のいずれか1項に記載の製造方法。
  51. 　(v)の工程が、酢酸水溶液を用いて反応液のpHが調整される工程である、請求項46～50のいずれか1項に記載の製造方法。
  52. 　(vi)活性炭フィルターをリンスする工程を含む、請求項1～51のいずれか1項に記載の製造方法。
  53. 　(i)の工程に次いで、(vi)の工程を含む、請求項52記載の製造方法。
  54. 　(vi)の工程において、ヒスチジン緩衝液が使用される、請求項52又は53に記載の製造方法。
  55. 　(vi)の工程において、8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液が使用される、請求項52～54のいずれか1項に記載の製造方法。
  56. 　抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7から8個の範囲である、請求項1～55のいずれか1項に記載の製造方法。
  57. 　抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が7.5から8個の範囲である、請求項1～56のいずれか1項に記載の製造方法。
  58. 　抗体が、抗GPR20抗体である、請求項1～57のいずれか1項に記載の製造方法。
  59. 　抗GPR20抗体が、配列番号1においてアミノ酸番号20乃至472に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号2においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項58に記載の製造方法。
  60. 　抗GPR20抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項58又は59に記載の製造方法。
  61. 　抗体が、抗CD37抗体である、請求項1～57のいずれか1項に記載の製造方法。
  62. 　抗CD37抗体が、配列番号3においてアミノ酸番号20乃至468に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号4においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項61に記載の製造方法。
  63. 　抗CD37抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項61又は62に記載の製造方法。
  64. 　抗体が、抗MUC1抗体である、請求項1～57のいずれか1項に記載の製造方法。
  65. 　抗MUC1抗体が、配列番号5においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列又は配列番号6においてアミノ酸番号1乃至447に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号7においてアミノ酸番号1乃至219に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項64に記載の製造方法。
  66. 　抗MUC1抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項64又は65に記載の製造方法。
  67. 　抗体が、抗HER2抗体である、請求項1～57のいずれか1項に記載の製造方法。
  68. 　抗HER2抗体が、配列番号8においてアミノ酸番号1乃至449に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9においてアミノ酸番号1乃至214に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項67に記載の製造方法。
  69. 　抗HER2抗体が、配列番号8に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号9に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項67又は68に記載の製造方法。
  70. 　抗体が、抗HER3抗体である、請求項1～57のいずれか1項に記載の製造方法。
  71. 　抗HER3抗体が、配列番号12に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号13に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項70に記載の製造方法。
  72. 　抗HER3抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項70又は71に記載の製造方法。
  73. 　抗体が、抗CDH6抗体である、請求項1～57のいずれか1項に記載の製造方法。
  74. 　抗CDH6抗体が、配列番号16においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号17においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項73に記載の製造方法。
  75. 　抗CDH6抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項73又は74に記載の製造方法。
  76. 　抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3から4個の範囲である、請求項1～55のいずれか1項に記載の製造方法。
  77. 　抗体－薬物コンジュゲートにおける1抗体あたりの薬物リンカーの平均結合数が3.5から4個の範囲である、請求項1～55及び76のいずれか1項に記載の製造方法。
  78. 　抗体が、抗TROP2抗体である、請求項1～55、76及び77のいずれか1項に記載の製造方法。
  79. 　抗TROP2抗体が、配列番号10においてアミノ酸番号20乃至470に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号11においてアミノ酸番号21乃至234に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項78に記載の製造方法。
  80. 　抗TROP2抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項78又は79に記載の製造方法。
  81. 　抗体が、抗B7-H3抗体である、請求項1～55、76及び77のいずれか1項に記載の製造方法。
  82. 　抗B7-H3抗体が、配列番号14においてアミノ酸番号20乃至471に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号15においてアミノ酸番号21乃至233に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含んでなる抗体である、請求項81に記載の製造方法。
  83. 　抗B7-H3抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項81又は82に記載の製造方法。
  84. 　クロマトグラフィーによる精製工程を含まないことを特徴とする、請求項1～83のいずれか1項に記載の製造方法。
  85. 　クロマトグラフィーが、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びアフィニティークロマトグラフィーからなる群より選択される少なくとも一つである、請求項84に記載の製造方法。
  86. 　式(1)
    (式中、Aは抗体との結合位置を示す)
    で示される薬物リンカーと、抗体とがチオエーテル結合によって結合した抗体－薬物コンジュゲートの製造方法であって、
    (ii)抗体を、ポリソルベート20若しくはポリソルベート80を含有するか又は含有しないL-ヒスチジン水溶液中で、エチレンジアミン四酢酸の存在下でトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩で還元する工程、
    (iii)式(2)
    で表される化合物8.9～10.0当量又は4.0～6.0当量を、(ii)の工程で還元された抗体と反応させる工程、
    (iv)N-アセチルシステインを添加し、(iii)の工程で残存した式(2)で表される化合物と反応させる工程、
    (v)反応液のpHを、酢酸水溶液を用いて約5又は約4.5に調整する工程、
    (i)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を、約15℃で活性炭フィルターを用いて1回のみ通液させて濾過して式(3)
    で示される化合物、及び、式(4)
    で示される化合物を除去する工程、
    (vi)活性炭フィルターを8.5 mmol/L L-ヒスチジン緩衝液を使用してリンスする工程、
    を上記の順に含む、製造方法。
  87. 　請求項1～86のいずれか1項に記載の製造方法により、抗体－薬物コンジュゲートを製造し、さらに、
    　(vii)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に緩衝液を添加する工程、
    　(viii)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を濃縮する工程、及び、
    　(ix)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液を所定のpHに調整する工程、
    からなる群より選択される少なくとも一つの工程、
    並びに、
    　(x)抗体－薬物コンジュゲートを含む溶液に賦形剤を添加する工程、
    を含む工程を施すことによる、
    抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、及び賦形剤を含む医薬組成物の製造方法。
  88. 　緩衝液がヒスチジン緩衝液である、請求項87に記載の製造方法。
  89. 　賦形剤がスクロースである、請求項87又は88に記載の製造方法。
  90. 　賦形剤がトレハロースである、請求項87又は88に記載の製造方法。
  91. 　請求項87～90のいずれか1項に記載の製造方法により、抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、及び賦形剤を含む医薬組成物を製造し、さらに、
    　(xi)該医薬組成物に界面活性剤を添加する工程、
    を含む工程を施すことによる、
    抗体－薬物コンジュゲート、緩衝液、賦形剤、及び界面活性剤を含む医薬組成物の製造方法。
  92. 　界面活性剤が、ポリソルベート80である、請求項91に記載の製造方法。
  93. 　界面活性剤が、ポリソルベート20である、請求項91に記載の製造方法。
  94. 　医薬組成物が、0.3%以下の化合物(2)由来の副生成物を含有する、請求項87～93のいずれか1項に記載の製造方法。
  95. 　エキサテカン化合物由来の副生成物を除去するための、10～10000 m2/gの表面積を有する活性炭を含む、活性炭材料。
  96. 　含まれる活性炭が、2 μm以上の平均粒子径を有する、請求項95に記載の活性炭材料。
  97. 　含まれる活性炭が、5～40 μmの平均粒子径を有する割合が少なくとも90重量％である、請求項95又は96に記載の活性炭材料。
     
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