WO2024071629A1 - 신규한 플루오렌 유도체 및 이의 용도 - Google Patents

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WO2024071629A1 PCT/KR2023/011089 KR2023011089W WO2024071629A1 WO 2024071629 A1 WO2024071629 A1 WO 2024071629A1 KR 2023011089 W KR2023011089 W KR 2023011089W WO 2024071629 A1 WO2024071629 A1 WO 2024071629A1
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pyrazol
fluoro
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시바지 파기레하우샤바우
이인규
전재한
하우샤바우 파기레수바나
김평근
오창주
전용현
손광희
안진희
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(주)제이디바이오사이언스
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    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms

Definitions

  • the present invention relates to a novel fluorene derivative compound and its use in the prevention or treatment of metabolic diseases and/or cancer diseases due to its action as a PDK4 inhibitor.
  • Glycolysis the initial step in glucose metabolism, produces 2 ATP, 2 NADH, and 2 three-carbon compounds, pyruvate, from glucose. Thereafter, the pyruvic acid produced in the process is converted to acetyl CoA through the action of pyruvate dehydrogenase complex (PDC) (Non-patent Document 1). Acetyl CoA enters the citric acid cycle and ultimately produces ATP. Complete aerobic oxidation of glucose produces 36 ATP molecules.
  • PDC is a gatekeeping enzyme that plays an important regulatory role in cellular metabolism by linking the citric acid cycle and glycolysis, and gluconeogenesis and oxidative phosphorylation processes (Non-patent Document 2).
  • the activity of the enzyme is site-specific phosphorylation of three serine residues of the E1 ⁇ subunit (Ser232, Ser293 and Ser300) catalyzed by pyruvate dehydrogenase kinase 1 to 4 (PDK 1 to 4). /regulated by the dephosphorylation cycle.
  • PDK 1 to 4 pyruvate dehydrogenase kinase 1 to 4
  • PDK 1 to 4 pyruvate dehydrogenase kinase 1 to 4
  • Dysregulation of the PDH/PDK system is associated with the pathogenesis of various diseases such as cancer, metabolic diseases, and inflammation, suggesting that PDKs are potent therapeutic targets for these diseases.
  • PDK4 has rapidly increased expression in the liver, skeletal muscle, heart, adipose tissue, and kidney of fasting or diabetic mammals. It has been reported that PDK4 knock out mice have lower blood sugar levels than wild type mice. Additionally, PDK4 knockout mice receiving high-fat diet therapy have lower blood sugar levels and higher insulin sensitivity than wild-type mice. Naturally, PDK4 deficiency increases pyruvate oxidation in muscle, limiting the levels of alanine, lactate, and pyruvate needed for glucose production in the liver. Recently, it has been reported that PDK4 levels are increased in type 2 diabetes patients.
  • PDK4 activation is associated with metabolic diseases, including hyperglycemia and insulin resistance.
  • inhibition of PDK4 has also been shown to be effective in non-alcoholic steatohepatitis, cisplatin-induced nephrotoxicity, vascular calcification, and diabetic cardiomyopathy.
  • mast cells are considered effector cells that play a central role in acute allergic reactions (Non-patent Document 3). Strong aggregation of mast cells and IgE receptors, as well as stimulation by neuropeptides such as Substance P, triggers the release of preforming mediators, including histamine, proteases, and newly synthesized inflammatory mediators. Activation of mast cells causes several types of diseases such as passive cutaneous anaphylaxis, asthma, rhinitis, and atopic dermatitis.
  • DCA dichloroacetic acid
  • cancer cells are characterized by a metabolic switch from mitochondrial oxidation/phosphorylation to cytoplasmic aerobic glycolysis even under normoxic conditions. This metabolic shift provides cancer cells with an advantage in proliferation by enhancing sugar breakdown and inhibiting glucose oxidation. Disruption of this unique cancer cell metabolic pathway offers therapeutic opportunities in anticancer treatment.
  • PDK4 increases cancer cell proliferation, suggesting that inhibition of PDK4 may have beneficial effects in cancer treatment. Recent studies have shown that PDK4 can upregulate mutant KRAS activity through post-translational regulation. Genetic PDK4 deficiency or pharmacological PDK4 inhibition inhibits tumor growth in colorectal and lung cancers caused by KRAS mutations by reducing glucose and fatty acid oxidation.
  • the present inventors synthesized a series of fluorene derivatives containing hydrazinylene in the molecule, By confirming that these compounds exert PDK4 inhibitory activity, the present invention was completed.
  • One object of the present invention is to provide a compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • R 1 and R 1 ' are each independently hydrogen, C 1-4 alkoxy, or halogen;
  • R 2 and R 3 are each independently hydrogen, C 3-10 cycloalkyl-C 1-4 alkyl, or C 1-4 alkyl;
  • R 4 is hydrogen
  • R 5 is C 6-10 unsubstituted or substituted with one or more substituents selected from the group consisting of oxo, halogen, C 1-4 haloalkyl, C 0-4 alkylsulfonyl, carboxy and C 1-4 alkoxycarbonyl Aryl, 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl;
  • R 4 and R 5 are linked together to form a 5- to 10-membered heterocyclyl together with the nitrogen atom to which they are bonded.
  • Another object of the present invention is to provide a method for producing the compound, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising the step of reacting the compound represented by the following formula (2) with the compound represented by the formula (3):
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical product for the prevention or treatment of diseases related to pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) activity, comprising the above compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a composition is provided.
  • a series of fluorene derivatives containing hydrazinylene in the newly synthesized molecule according to the present invention exhibits the effect of inhibiting PDK4 activity, and thus, diseases related thereto, such as metabolic diseases such as obesity, diabetes, fatty liver, and/or cancer diseases. It can be useful in the prevention or treatment of.
  • Figure 1 shows the results of an intraperitoneal glucose tolerance test conducted 10 weeks after drug administration in a diabetic animal model.
  • Figure 2 is a diagram showing the results of H&E and TUNEL staining on kidney tissue of an acute ischemic nephropathy animal model.
  • Figure 3 is a diagram showing NGAL expression in kidney tissue and creatinine level in serum of an acute ischemic nephropathy animal model.
  • Figure 4 is a diagram showing apoptosis and mitochondrial oxygen radical levels in a myocardial infarction disease cell model.
  • Figure 5 is a diagram showing intracellular calcium changes over time in a myocardial infarction disease cell model.
  • Figure 6 is a diagram showing the results of analysis of colon inflammation in an inflammatory bowel disease animal model.
  • A represents the H&E staining result
  • B represents the tissue score
  • C and D represent the recovered entire colon photograph and the colon length measured therefrom.
  • Figure 7 is a diagram showing inflammatory cytokine mRNA expression in colon tissue of an inflammatory bowel disease animal model.
  • Figure 8 is a diagram showing serum amylase and lipase activities in an acute pancreatitis animal model.
  • Figure 9 is a diagram showing the survival rate in an LPS-induced sepsis animal model.
  • Figure 10 is a diagram showing the effect of suppressing inflammation complex (inflammasome) formation in bone marrow-derived dendritic cells in an LPS-induced sepsis animal model.
  • Figure 11 is a diagram showing the effect of weight recovery in a graft-versus-host disease animal model.
  • Figure 12 is a diagram showing the production of allogeneic CD4 + IFNg + T cells in a graft-versus-host disease animal model.
  • Figure 13 is a diagram showing the mitochondrial oxygen consumption rate measured in a Charcot-Marie-Tooth disease animal model.
  • Figure 14 is a diagram showing the effect of inhibiting cortisol production in a Cushing's syndrome animal model.
  • Figure 15 is a diagram showing the growth inhibition effect on normal cells.
  • Figure 16 is a diagram showing the growth inhibition effect on colon cancer cells.
  • Figure 17 is a diagram showing the growth inhibition effect on thyroid cancer cells.
  • Figure 18 is a diagram showing the growth inhibition effect on prostate cancer cells and lung cancer cells.
  • Figure 19 is a diagram showing the growth inhibition effect on breast cancer cells and bladder cancer cells.
  • Figure 20 is a diagram showing the growth inhibition effect on liver cancer cells, brain cancer cells, and ovarian cancer cells.
  • Figure 21 is a diagram showing the anticancer effect and body weight change 21 days after drug administration in the HCT-116 colon cancer model.
  • Figure 22 is a diagram showing the anticancer effect, TUNEL analysis, and body weight change 21 days after drug administration in the CT26 colon cancer model.
  • a first aspect of the present invention provides a compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • R 1 and R 1 ' are each independently hydrogen, C 1-4 alkoxy, or halogen;
  • R 2 and R 3 are each independently hydrogen, C 3-10 cycloalkyl-C 1-4 alkyl, or C 1-4 alkyl;
  • R 4 is hydrogen
  • R 5 is C 6-10 unsubstituted or substituted with one or more substituents selected from the group consisting of oxo, halogen, C 1-4 haloalkyl, C 0-4 alkylsulfonyl, carboxy and C 1-4 alkoxycarbonyl Aryl, 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl;
  • R 4 and R 5 are linked together to form a 5- to 10-membered heterocyclyl together with the nitrogen atom to which they are bonded.
  • the compound may be a compound represented by the following formula 1-1, but is not limited thereto:
  • R 1 and R 1 ' may each independently be methoxy or fluoro, but are not limited thereto.
  • R 2 may be hydrogen or methyl
  • R 3 may be hydrogen, methyl, ethyl, isopropyl, isobutyl, or cyclohexylmethyl, but is not limited thereto.
  • R 4 is hydrogen
  • R 5 is unsubstituted or oxo, fluoro, chloro, trifluoromethyl, methylsulfonyl, carboxy, and tert-butoxycarbonyl.
  • phenyl, naphthyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, quinoxalinyl, quinolinyl, quinazolinyl, or dihydroquinolinyl substituted with one or more substituents selected from the group consisting of, or R 4 and R 5 may be linked together to form piperidinyl or azepanyl together with the nitrogen atom to which they are bonded, but is not limited thereto.
  • the compound is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N
  • N'-(4-fluorophenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H- Pyrazol-1-yl) propanehydrazide N'-(4-fluorophenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H -pyrazol-1-yl)propanehydrazide
  • N'-(2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluorene -4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide N'-(2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9 -(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide
  • N'-(2-Fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluorene -4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide N'-(2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9 -(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide
  • N'-(3-Chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)- 9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide N'-(3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)-2-(4-(2 -fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide
  • N'-(3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)- 9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide N'-(3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)-2-(4-(9 -hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide
  • N-(azepan-1-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H- Pyrazol-1-yl)propanamide N-(azepan-1-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H -pyrazol-1-yl)propanamide), but is not limited thereto.
  • the compounds of the present invention may exist in the form of pharmaceutically acceptable salts.
  • a salt an acid salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to any of the compounds at a concentration that is relatively non-toxic and harmless to patients and has an effective effect, and side effects due to the salt do not reduce the beneficial efficacy of the compound represented by Formula 1. refers to all organic or inorganic addition salts of
  • Acid addition salts are prepared by conventional methods, for example, by dissolving the compound in an excess of aqueous acid and precipitating the salt using a water-miscible organic solvent, such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile.
  • a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile.
  • Equimolar amounts of the compound and an acid or alcohol (e.g., glycol monomethyl ether) in water can be heated, and the mixture can then be evaporated to dryness, or the precipitated salt can be suction filtered.
  • organic acids and inorganic acids can be used as free acids.
  • Hydrochloric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, nitric acid, tartaric acid, etc. can be used as inorganic acids, and methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, and maleic acid can be used as organic acids.
  • maleic acid succinic acid, oxalic acid, benzoic acid, tartaric acid, fumaric acid, manderic acid, propionic acid, citric acid, lactic acid, glycolic acid, gluconic acid.
  • gluconic acid galacturonic acid
  • glutamic acid glutaric acid
  • glucuronic acid aspartic acid
  • ascorbic acid carbonic acid
  • vanillic acid hydroiodic acid, etc.
  • a pharmaceutically acceptable metal salt can be prepared using a base.
  • the alkali metal salt or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and then evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare metal salts, especially sodium, potassium, or calcium salts, but is not limited to these.
  • the corresponding silver salt can be obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with an appropriate silver salt (e.g., silver nitrate).
  • Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention include salts of acidic or basic groups that may be present in the compound of formula (1), unless otherwise indicated.
  • pharmaceutically acceptable salts may include sodium, calcium, and potassium salts of hydroxy groups
  • other pharmaceutically acceptable salts of amino groups include hydrobromide, sulfate, hydrogen sulfate, phosphate, and hydrogen phosphate.
  • the salt of the fluorene derivative compound of the present invention is a pharmaceutically acceptable salt, and any salt of the fluorene derivative that exhibits pharmacological activity equivalent to that of the fluorene derivative compound can be used without limitation.
  • the compound represented by Formula 1 according to the present invention includes, without limitation, not only its pharmaceutically acceptable salts, but also solvates such as possible hydrates that can be prepared therefrom, and all possible stereoisomers. Solvates and stereoisomers of the compound represented by Formula 1 can be prepared from the compound represented by Formula 1 using methods known in the art.
  • the compound represented by Formula 1 according to the present invention can be prepared in crystalline form or amorphous form, and when prepared in crystalline form, it can be arbitrarily hydrated or solvated.
  • the present invention not only the stoichiometric hydrate of the compound represented by Formula 1, but also compounds containing various amounts of water may be included.
  • Solvates of the compound represented by Formula 1 according to the present invention include both stoichiometric solvates and non-stoichiometric solvates.
  • a second aspect of the present invention provides a method for producing the compound of the first aspect, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising reacting a compound represented by the following formula (2) with a compound represented by the formula (3):
  • R 1 ' and R 1 to R 5 are as defined above.
  • reaction may be performed in the presence of TBTU (2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium tetrafluoroborate) and DIPEA (N,N-Diisopropylethylamine), but is not limited thereto. .
  • the compound of Formula 2 can be prepared by a process including one or more of the reactions in Schemes 1 to 7 below, but is not limited thereto.
  • R 1 to R 3 are as defined above.
  • X 1 and X 2 may each independently be halogen, specifically, X 1 may be chloro and X 2 may be bromo, but are not limited thereto.
  • the reaction of Scheme 1 may be performed by heating to 90 to 130°C in the presence of K 3 PO 4 and PdCl 2 (PPh 3 ) 2 in a sealed container, but is not limited thereto.
  • the solvent may be a mixed solvent of toluene and water, but is not limited thereto.
  • the reaction of Scheme 2 may be performed by adding a base such as sodium hydroxide and heating to 60 to 100° C., but is not limited thereto.
  • the solvent may be a lower alcohol, such as ethanol, but is not limited thereto.
  • the reaction of Scheme 3 can be performed by mixing with Eaton's reagent and heating to 60 to 100°C, but is not limited thereto.
  • the reaction of Scheme 5 may be performed by heating to 70 to 100° C. in the presence of cesium carbonate, but is not limited thereto. At this time, the organic solvent acetonitrile may be used as the solvent, but is not limited thereto.
  • the reaction of Scheme 6 can be performed by mixing Pd(OAc) 2 and Sphos in a sealed container and heating to 80 to 120° C., but is not limited thereto.
  • the solvent may be a mixed solvent of toluene and water, but is not limited thereto.
  • the reaction of Scheme 7 can be performed by adding a base, such as sodium hydroxide, and reacting at room temperature, but is not limited thereto.
  • a base such as sodium hydroxide
  • the solvent may be a mixed solvent of THF and water, but is not limited thereto.
  • the product after each reaction may be used as is in subsequent reactions, or steps of washing, separating, and/or purifying the product may be additionally performed. It is not limited to this.
  • the third aspect of the present invention is the prevention or treatment of diseases related to pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) activity, comprising the compound of the first aspect, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as an active ingredient.
  • PDK4 pyruvate dehydrogenase kinase 4
  • prevention refers to any action that inhibits or delays the occurrence, spread, and recurrence of a disease related to PDK4 activity by administering the composition of the present invention
  • treatment refers to any action that inhibits or delays the occurrence, spread, and recurrence of a disease related to PDK4 activity by administering the composition of the present invention. It refers to any action that improves or changes the symptoms of a disease to a beneficial effect.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can prevent or treat diseases related thereto by inhibiting PDK4 activity.
  • PDK4 Pyruvate dehydrogenase kinase 4
  • PDK4 is a mitochondrial protein present in the matrix of the mitochondria, it is one of four types of pyruvate dehydrogenase kinase isozymes. It is one.
  • PDK4 is overexpressed in insulin-deficient or insulin-insensitive cells, and by reducing metabolism, pyruvate formed from glycolysis cannot be oxidized, so glucose in the blood cannot be consumed efficiently, which can lead to hyperglycaemia. It may be a target for the treatment of type 2 diabetes.
  • PDK4 activity-related diseases that can be prevented or treated with the pharmaceutical composition of the present invention may be metabolic diseases, inflammatory diseases, or cancer diseases.
  • the metabolic diseases include obesity, type 1 diabetes, type 2 diabetes, diabetic nephropathy, diabetic neuropathy, metabolic syndrome, hyperlipidemia, hyperlactic acidosis, arteriosclerosis, angina pectoris, acute ischemic nephropathy, ischemic heart disease, It may be myocardial infarction, heart failure, chemotherapy-induced cardiomyopathy, viral myocarditis, peripheral vascular disease, intermittent claudication, stroke, mitochondrial disease, pulmonary hypertension, fatty liver, hypertension, or Cushing's syndrome.
  • the fatty liver may include alcoholic fatty liver disease, non-alcoholic fatty liver diseases (NAFLDs), and non-alcoholic steatohepatitis (NASH).
  • NAFLDs non-alcoholic fatty liver diseases
  • NASH non-alcoholic steatohepatitis
  • the inflammatory disease may be acute or chronic pancreatitis, inflammatory bowel disease, sepsis, graft-versus-host disease, or Charcot-Marie-Tooth disease.
  • the cancer disease may be colon cancer, thyroid cancer, brain cancer, liver cancer, prostate cancer, breast cancer, pancreatic cancer, lung cancer, bladder cancer, or ovarian cancer.
  • diseases that can be prevented or treated using the pharmaceutical composition of the present invention are not limited thereto, and any disease that can exhibit a preventive or therapeutic effect by inhibiting PDK4 activity may be included in the scope of the present invention.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention contains a compound represented by Formula 1, a tautomer thereof, a stereoisomer thereof, a mixture of stereoisomers thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, based on the total weight of the composition. It can be contained at 0.1 to 75% by weight, more preferably at 1 to 50% by weight.
  • composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient, and may be formulated into powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, etc. according to conventional methods to suit each purpose of use. It can be formulated and used in a variety of forms, such as oral formulations such as aerosols and injections of sterile injectable solutions, and can be administered orally or through various routes including intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, rectal, and topical administration.
  • compositions examples include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginates, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Examples include cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil.
  • the composition of the present invention may further include fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers, preservatives, etc.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and these solid preparations contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, etc. Formulated by mixing. Additionally, in addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may be used.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, oral solutions, emulsions, and syrups.
  • simple diluents such as water and liquid paraffin, they may contain various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives. You can.
  • Preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories.
  • Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate.
  • injectables may contain conventional additives such as solubilizers, isotonic agents, suspending agents, emulsifiers, stabilizers, preservatives, etc.
  • composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount refers to an amount that is sufficient to treat a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment and does not cause side effects
  • the effective dose level refers to the patient's health condition, Factors including the type of disease, severity, activity of the drug, sensitivity to the drug, method of administration, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, drugs combined or used simultaneously, and other factors well known in the medical field. You can.
  • the composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art.
  • the dosage may increase or decrease depending on the route of administration, severity of disease, gender, weight, age, etc., so the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.
  • the effective amount of the compound in the composition of the present invention may vary depending on the patient's age, gender, and body weight, and is generally administered at 1 to 100 mg per kg of body weight, preferably 5 to 60 mg per kg of body weight every day or every other day, or 1 It can be administered in divided doses 1 to 3 times a day. However, since it may increase or decrease depending on the route of administration, severity of disease, gender, weight, age, etc., the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.
  • a third aspect of the present invention provides a method for treating diseases related to PDK4 activity, comprising administering the pharmaceutical composition of the second aspect to an individual in need thereof.
  • composition of the second embodiment and “PDK4 activity-related disease” are as described above.
  • the term "individual" of the present invention refers to monkeys, cows, horses, sheep, pigs, chickens, turkeys, quail, cats, dogs, mice, rats, rabbits, or monkeys, including humans, in which the disease related to PDK4 activity has been invented or can be developed. This refers to all animals, including guinea pigs, and the disease can be effectively prevented or treated by administering the pharmaceutical composition of the present invention to the subject.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered in combination with existing therapeutic agents.
  • administration of the present invention means providing a predetermined substance to a patient by any suitable method, and the administration route of the composition of the present invention can be administered through any general route as long as it can reach the target tissue. there is. It may be administered intraperitoneally, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, orally, topically, intranasally, intrapulmonaryly, or rectally, but is not limited thereto. Additionally, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered by any device that allows the active agent to move to target cells. Preferred administration methods and formulations include intravenous injection, subcutaneous injection, intradermal injection, intramuscular injection, and drip injection.
  • Injections include aqueous solvents such as physiological saline solution and Ringer's solution, non-aqueous solvents such as vegetable oil, higher fatty acid esters (e.g., ethyl oleate, etc.), and alcohols (e.g., ethanol, benzyl alcohol, propylene glycol, glycerin, etc.). It can be manufactured using stabilizers to prevent deterioration (e.g., ascorbic acid, sodium bisulfite, sodium pyrosulphite, BHA, tocopherol, EDTA, etc.), emulsifiers, buffers for pH adjustment, and agents to prevent microbial growth. It may contain pharmaceutical carriers such as preservatives (e.g., phenylmercuric nitrate, thimerosal, benzalkonium chloride, phenol, cresol, benzyl alcohol, etc.).
  • preservatives e.g., phenylmercuric nitrate,
  • terapéuticaally effective amount used in combination with an active ingredient in the present invention refers to a fluorene derivative compound, a stereoisomer thereof, a mixture of stereoisomers thereof, or a pharmaceutically acceptable compound thereof that is effective in preventing or treating the target disease. It refers to the amount of salt.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains, as an active ingredient, a fluorene derivative compound, a stereoisomer thereof, a mixture of stereoisomers thereof, or a known pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Known drugs used for the prevention or treatment of diseases may additionally be included.
  • known drugs when used in the prevention or treatment of cancer diseases, known drugs may be additionally included as active ingredients in addition to fluorene derivative compounds, stereoisomers thereof, mixtures of stereoisomers thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof. , can be used in combination with other known treatments for the treatment of these diseases.
  • Step 1-1 Preparation of ethyl 2'-chloro-4'-fluorobiphenyl-2-carboxylate
  • Step 1-2 Preparation of 2'-chloro-4'-fluorobiphenyl-2-carboxylic acid
  • Step 1-3 Preparation of 4-chloro-2-fluoro-9H-fluorene-9-one
  • Ethyl 2'-chloro-4'-fluorobiphenyl-2-carboxylic acid (870 mg, 3.47 mmol) was added to the Eaton's reagent (5 mL) solution, and the mixture was stirred at 80°C for 2 hours. . The reaction mixture was then cooled to 0°C. The solution was diluted with brine (50 mL) and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated in vacuo. The product was purified by column chromatography using ethyl acetate and hexane as solvents to obtain the title compound (626 mg, 77%).
  • Step 1-4 Preparation of 4-chloro-2-fluoro-9-(trifluoromethyl)-9H-fluorene-9-ol
  • Step 1-5 Ethyl 2-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propano manufacture of eight
  • Step 1-6 Ethyl 2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl) Preparation of propanoate
  • the solution was diluted with saline (200 mL) and extracted with ethyl acetate. The recovered organic layers were combined, dried over anhydrous Na 2 SO 4 and concentrated in vacuum. The product was purified by column chromatography using ethyl acetate and hexane as solvents and used in the next step.
  • Step 1-7 2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propane manufacture of acids
  • Steps 1-8 2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)- Preparation of N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide
  • Example 1 except that 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene in step 1-1 of Example 1.
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner.
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that phenylhydrazine was used instead of (4-fluorophenyl)hydrazine in steps 1-8 of Example 1.
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that naphthalen-1-ylhydrazine was used instead of (4-fluorophenyl)hydrazine in steps 1-8 of Example 1.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that (2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)hydrazine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that (4-chlorophenyl)hydrazine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that naphthalen-1-ylhydrazine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that (2-chlorophenyl)hydrazine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • Example 14 6-(2-(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazole- 1-day) Preparation of propanoyl) hydrazinyl) nicotinic acid
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 6-hydrazinylnicotinic acid was used instead of (4-fluorophenyl)hydrazine in steps 1-8 of Example 1. Obtained.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that tert-butyl 6-hydrazinylnicotinate was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • Example 16 6-(2-(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazole- 1-day) Preparation of propanoyl) hydrazinyl) nicotinic acid
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 6-hydrazinylnicotinic acid was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 2-hydrazinylpyridine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • Example 20 6-(2-(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazole- 1-day) Preparation of acetyl) hydrazinyl) nicotinic acid
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that ethyl 2-bromoacetate was used instead of ethyl 2-bromopropanoate in steps 1-5 of Example 1.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that (4-(methylsulfonyl)phenyl)hydrazine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 2-hydrazinylpyrazine was used instead of (4-fluorophenyl)hydrazine in steps 1-8 of Example 1.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 2-hydrazinylpyrazine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 2-hydrazinyl-5-(trifluoromethyl)pyrazine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 2-hydrazinylpyrimidine was used instead of (4-fluorophenyl)hydrazine in steps 1-8 of Example 1.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 2-hydrazinylpyrimidine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 3-hydrazinylpyridine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 3-chloro-2-hydrazinyl-5-(trifluoromethyl)pyridine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 4-hydrazinylpyridine was used instead of (4-fluorophenyl)hydrazine in steps 1-8 of Example 1.
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 4-hydrazinylquinazoline was used instead of (4-fluorophenyl)hydrazine in steps 1-8 of Example 1.
  • the title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that 4-hydrazinylquinoline was used instead of (4-fluorophenyl)hydrazine in steps 1-8 of Example 1.
  • Example 2 The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that ethyl 2-bromobutanoate was used instead of ethyl 2-bromopropanoate in steps 1-5 of Example 1.
  • Example 2 The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that ethyl 2-bromo-3-methylbutanoate was used instead of ethyl 2-bromopropanoate in steps 1-5 of Example 1. was obtained.
  • Example 2 The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that ethyl 2-bromo-4-methylpentanoate was used instead of ethyl 2-bromopropanoate in steps 1-5 of Example 1. was obtained.
  • Example 2 The title product was reacted in a similar manner to Example 1, except that ethyl 2-bromo-3-cyclohexylpropanoate was used instead of ethyl 2-bromopropanoate in steps 1-5 of Example 1. The compound was obtained.
  • Example 2 The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that ethyl 2-bromo-2-methylpropanoate was used instead of ethyl 2-bromopropanoate in steps 1-5 of Example 1. was obtained.
  • step 1-1 of Example 1 1-bromo-2-chloro-4-methoxybenzene was used instead of 1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, and in step 1-8, (4- The title compound was obtained by reacting in a similar manner to Example 1, except that piperidin-1-amine was used instead of fluorophenyl)hydrazine.
  • Vehicle (10% DMSO + 0.5% methylcellulose) and the compound of Example 1 (Compound 1) were orally administered at a dose of 0.5 mg/kg once a day to 6-week-old male KKAy diabetic mice (6 mice per group). administered.
  • IPGTT intraperitoneal glucose tolerance test
  • Vehicle and compound 1 (4 ⁇ g/kg or 8 ⁇ g/kg) were administered to 8-week-old male C57BL6J mice through the tail vein 24 hours before, 1 hour before, and 12 hours after ischemic reperfusion (IR) surgery, respectively.
  • the surgery involved blocking the artery leading to the kidney to induce ischemia for 37 minutes, then releasing the blocked artery again and performing an autopsy under anesthesia 24 hours later.
  • a portion of the isolated kidney was subjected to H&E staining and TUNEL staining and is shown in Figure 2.
  • RNA expression of NGAL a mouse kidney tissue damage marker
  • vehicle-treated IR group 4 ⁇ g/kg and 8 ⁇ g/kg
  • the increase decreased significantly.
  • the amount of serum creatinine, another kidney tissue damage marker also significantly increased in the IR group treated with vehicle, and this increase was significantly decreased in the IR group treated with Compound 1 (4 ⁇ g/kg and 8 ⁇ g/kg) (*p ⁇ 0.01 versus Sham, **p ⁇ 0.01 versus IR+Vehicle).
  • H9C2 cells a rat cardioblastoma cell line
  • H9C2 cells a rat cardioblastoma cell line
  • the medium was replaced with DMEM without FBS and cultured for an additional 24 hours.
  • the medium was replaced with DMEM without FBS, treated with 1 ⁇ M of Compound 1, and cultured in a hypoxia chamber (1% oxygen, 5% CO 2 ) for 2 hours (hypoxia).
  • the medium was replaced with DMEM containing 10% FBS, treated with 1 ⁇ M of Compound 1, cultured in a CO 2 incubator for 1 hour (reoxygenation), and cell death, mitochondrial reactive oxygen species, and intracellular calcium were measured. And the results are shown in Figures 4 and 5, respectively.
  • Colitis was induced in 8-week-old male C57BL6J JmcSlc mice by drinking 3.5% dextran sodium sulfate (DSS) ad libitum for 9 days and then replacing it with regular drinking water.
  • the experimental animal model prepared as described above was orally administered vehicle and Compound 1 (0.5 mg/kg or 1 mg/kg) daily from 2 days before DSS drinking until the end of drinking.
  • Compound 1 0.5 mg/kg or 1 mg/kg
  • Acute pancreatitis was induced in 8-week-old male mice by intraperitoneal administration of cerulein (50 ⁇ g/kg) dissolved in physiological saline.
  • Compound 1 was administered into the tail vein at concentrations of 5 ⁇ g/kg and 10 ⁇ g/kg 24 hours and 1 hour before cerulein administration, and cerulein was administered intraperitoneally six times at 1-hour intervals. 18 hours after the first cerulein administration, the mouse was anesthetized, the serum was separated, and the amylase and lipase activities in the serum were measured and shown in Figure 8.
  • LPS lipopolysaccharide
  • bone marrow derived dendritic cells were treated 6 days after treating bone marrow cells of C57BL6 mice with 20 ng/mL GM-CSF and IL-4. collected.
  • the BMCD was prepared at 1 ⁇ 10 6 cells/mL, stabilized for one day, and then further experiments were performed.
  • the dendritic cells were treated with 500 ng/mL LPS for 3 hours to prime pro-IL1 ⁇ , and then treated with Compound 1 (0, 0.01, 0.1, 1, and 10 ⁇ M) for 15 minutes.
  • the Compound 1 treatment group significantly suppressed IL-1 ⁇ expression by about 83.802% at a concentration of 0.1 ⁇ M and about 53.7504% at a concentration of 10 ⁇ M compared to the vehicle control group (** *p ⁇ 0.01 versus con, *p ⁇ 0.05, **p ⁇ 0.01 versus LPS+ATP).
  • a 5-week-old BALB/c male mouse was acclimatized for 1 week, irradiated with 800 cGy whole body radiation, and then 5 ⁇ 10 6 C57BL/6J-derived bone marrow cells and 1 ⁇ 10 7 spleen cells were injected by IV injection.
  • a GvHD in vivo model positive control, Positive
  • a syngeneic control group (Syngeneic) was constructed in the same manner as above, but the injected bone marrow cells were selected as BALB/c-derived bone marrow cells.
  • the daily Compound 1 administration group (Compound 1 Daily) was established by daily oral gavage of Compound 1 at 1 mg/kg to the GvHD in vivo model.
  • the initial Compound 1 administration group (Compound 1 Initial only) was established by orally administering Compound 1 to the GvHD in vivo model at 1 mg/kg only until the 6th day after model induction.
  • the treatment effect of Compound 1 was confirmed by measuring body weight changes every 3 days for each control and experimental group constructed as above, and the results are shown in Figure 11 and Table 4.
  • the production of CD4 + IFNg + T cells, a major factor causing GvHD was measured in the spleen isolated from mice, and the results are shown in Figure 12 and Table 5.
  • the body weight of the GvHD in vivo model was significantly recovered in the daily Compound 1 administration group and the initial Compound 1 administration group compared to the control group.
  • the production of allogeneic CD4 + IFNg + T cells was significantly reduced in the daily Compound 1 administration group and the initial Compound 1 administration group compared to the control group (**p ⁇ 0.01, *** 0.001 versus Positive).
  • Mfn2 +/+ MEF cells normal cells
  • Mfn2 +/+ MEF cells mouse embryonic fibroblasts that express Mfn2
  • Mfn2 -/- MEF cells that do not express Mfn2
  • the cells were cultured at 1 ⁇ 10 4 cells for 24 hours using DMEM medium supplemented with penicillin/streptomycin.
  • the cells were treated with vehicle DMSO and compound 1 (1 ⁇ M) and cultured for an additional 24 hours.
  • the oxygen consumption rate of mitochondria was measured using a Seahorse XFe96 analyzer (Agilent Technologies) and is shown in Figure 13.
  • the mitochondrial oxygen consumption rate was drastically reduced in Mfn2 -/- MEF cells, which do not express Mfn2, compared to normal Mfn2 +/+ MEF cells.
  • Mfn2 -/- MEF cells treated with Compound 1 the oxygen consumption rate was noticeably restored to a level similar to that of normal cells, indicating that Compound 1 can improve the function of lost mitochondria (*p ⁇ 0.01 versus Mfn2 -/- +DMSO, **p ⁇ 0.01 versus Mfn2 +/+ +DMSO).
  • NCI-H295R cells ATCC #CRL-2128
  • a human adrenocortical carcinoma cell line were distributed at a density of 2.5 ⁇ 10 5 cells/well in a 24-well plate.
  • the cells were cultured for 48 hours and then pretreated with compound 1 (0.1, 0.5, and 1 ⁇ M) for 12 hours.
  • compound 1 0.1, 0.5, and 1 ⁇ M
  • cells were treated with 8-bromoadenosine 3',4'-cyclic monophosphate (8-Br-cAMP) at a concentration of 0.5 mM, and compound 1 was retreated and reacted for 24 hours. After the reaction, the cell culture was collected and the amount of cortisol produced in the cells was measured using an ELISA kit, and the results are shown in Figure 14.
  • HEK293 cells which are human embryonic kidney cells, were distributed at a density of 2 ⁇ 10 6 cells in a 60 mm dish and cultured for 24 hours, then replaced with medium containing 0.5% FBS and followed in Examples 1 to 54.
  • the compounds prepared accordingly were treated according to concentration. After 5 h, cells were scraped into a 15 mL conical tube and centrifuged at 1500 rpm for 10 min. The supernatant was discarded, washed with 1 ⁇ PBS, transferred to a 1.5 mL e-tube, and centrifuged at 10,000 rpm for 5 minutes. The supernatant was discarded again, lysis buffer was added, and the cells were lysed by placing them on ice for 30 minutes.
  • Example PDH S293 Inhibition of phosphorylation Example PDH S293 Inhibition of phosphorylation Example PDH S293 Inhibition of phosphorylation Example PDH S293 Inhibition of phosphorylation Example PDH S293 Inhibition of phosphorylation
  • each cell was distributed in a 96-well plate at a density of 2 ⁇ 10 4 cells/well and cultured for 24 hours, then replaced with medium containing 0.5% (cancer cells) or 10% (normal cells) FBS, and compound 1 was processed according to concentration. After 24 hours, 10 ⁇ L Cell Counting Kit-8 (Dojindo Molecular Technologies) was added, and 1 hour later, the absorbance at 480 nm was measured with a microplate reader (TECAN SPARK), and the results are shown in Figures 15 to 21. It was.
  • compound 1 when treated with normal cells, compound 1 showed a survival rate of more than 70% up to less than 40 ⁇ M.
  • Compound 1 reduced the survival rate of cancer cells in a concentration-dependent manner, specifically, colon cancer, thyroid cancer, prostate cancer, lung cancer, breast cancer, bladder cancer, liver cancer, brain cancer, and ovary. Cancer cells were treated with compound 1 at concentrations of 5 to 15 ⁇ M, 1 to 10 ⁇ M, 10 to 15 ⁇ M, 3 to 7 ⁇ M, 1 to 15 ⁇ M, less than 1.2 ⁇ M, 10 ⁇ M, and 1 to 10 ⁇ M or more, respectively. The survival rate began to decline rapidly below 70%.
  • the compound of the present invention is not toxic to normal cells at a concentration of less than 40 ⁇ M, it inhibits cell viability by less than 70% for various cancer cells at a much lower concentration, making it suitable for the treatment of these cancer diseases. This indicates that it can be usefully used.
  • a colon cancer model was established by subcutaneously transplanting the HCT-116 colon cancer cell line into nude mice.
  • the colon cancer model was divided into the following three groups, group 1 was given vehicle as a control, group 2 was given compound 1 at a dose of 0.5 mg/kg, and group 3 was given compound 1 at a dose of 1.0 mg/kg. Each was administered. The drug was administered orally once a day, a total of 21 times. To evaluate treatment efficacy, measurements were made before drug administration and on days 3, 7, 10, 14, 17, 21, and 24 after drug administration. Tumor size was calculated as follows:
  • a and B are the long and short axis of the tumor, respectively.
  • body weight was measured before and on days 7, 14, and 21 after drug administration.
  • the calculated tumor volume and measured body weight are shown in FIG. 21.
  • the vehicle-administered group showed a continuous and accelerated tumor growth trend until day 24.
  • all Compound 1 administration groups showed significantly delayed and reduced tumor growth compared to the vehicle administration group, and showed a statistically significant concentration-dependent tumor growth inhibition effect (compared to the vehicle administration group *p ⁇ 0.05).
  • the tumor volume measured on day 24, the last day of observation showed reduced tumor growth of 41% and 49% in the 0.5 mg/kg and 1.0 mg/kg Compound 1 administration groups, respectively, compared to the vehicle administration group. Meanwhile, no significant body weight change was observed in both the vehicle control group and the Compound 1 administration group.
  • a colon cancer model was established by subcutaneously transplanting the CT26 colon cancer cell line into nude mice.
  • the colon cancer model was divided into two groups, a vehicle administration group and a Compound 1 administration group.
  • Compound 1 was administered at a dose of 1.0 mg/kg, which showed a higher tumor growth inhibition effect than in Experimental Example 13.
  • tumor size was calculated before drug administration and at 3, 7, 10, 14, 18, 22, and 24 days after drug administration, and at 7, 14, and 22 days before drug administration and after drug administration.
  • the body weight was measured and shown in Figure 22.
  • tumor growth was statistically significantly delayed and suppressed in the Compound 1-administered group compared to the vehicle-administered group (*p ⁇ 0.05 compared to the vehicle-administered group), and the tumor volume measured on day 24 was 1.0 mg compared to the vehicle-administered group. /kg Compound 1 administration group showed a 55% reduction in tumor growth.
  • the vehicle-administered group nor the compound 1-administered group showed any change in body weight in the CT26 colon cancer model.

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Abstract

본 발명은 신규한 플루오렌 유도체 화합물에 관한 것으로, 이의 PDK4 억제제로서의 작용에 의한 대사성 질환 및/또는 암질환의 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.

Description

신규한 플루오렌 유도체 및 이의 용도
본 발명은 신규한 플루오렌 유도체 화합물에 관한 것으로, 이의 PDK4 억제제로서의 작용에 의한 대사성 질환 및/또는 암질환의 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.
글루코오스 대사의 초기 단계인 당 분해(해당, 解糖, glycolysis)는 글루코오스로부터 2개의 ATP, 2개의 NADH 및 2개의 3 탄소 화합물인 피루브산을 생성한다. 이후, 해당 과정에서 생성된 피루브산은 피루브산 탈수소효소 복합체(pyruvate dehydrogenase complex; PDC)의 작용을 통해 아세틸 CoA로 전환된다(비특허문헌 1). 아세틸 CoA가 시트르산 사이클에 들어가서 최종적으로 ATP를 생성한다. 글루코오스의 완전한 호기성 산화는 36개의 ATP 분자를 생성한다. 이와 관련하여, PDC는 시트르산 사이클과 해당 작용, 및 포도당 신생합성과 산화적 인산화 과정을 연결함으로써 세포 대사에 중요한 조절 역할을 하는 게이트키핑(gatekeeping) 효소이다(비특허문헌 2). 상기 효소의 활성은 피루베이트 탈수소효소 키나아제 1 내지 4(pyruvate dehydrogenase kinase 1 to 4, PDK 1 내지 4)에 의해 촉매되는 E1α 서브 유닛(Ser232, Ser293 및 Ser300)의 3개의 세린 잔기의 부위 특이적 인산화/탈인산화 사이클에 의해 조절된다. 이들 PDK1-4는 각각 3개의 부위에 대하여 상이한 반응성을 가지며, 임의의 부위에서의 인산화는 PDH의 활성 저해를 유도한다. PDH/PDK 시스템의 조절 장애는 암, 대사성 질환 및 염증과 같은 다양한 질병의 발병과 관련이 있으며 PDKs가 이러한 질병의 강력한 치료 표적임을 시사한다.
4종의 PDK 동종 중 PDK4는 금식 중이거나 당뇨병을 가진 포유류의 간, 골격근, 심장, 지방 조직 및 신장에서의 발현이 급격히 증가한다. PDK4 녹아웃(knock out) 마우스는 야생형 마우스보다 혈당 수치가 낮다는 보고가 있다. 또한, 고지방식 요법을 받은 PDK4 녹아웃 마우스는 혈당 수치가 낮고 야생형 마우스보다 인슐린 민감성이 높다. 자연적으로 PDK4 결핍은 근육의 피루브산 산화를 증가시켜 간에서 포도당 생성에 필요한 알라닌, 젖산, 피루브산의 수치를 제한한다. 최근에는 제2형 당뇨 환자에서 PDK4의 수치가 증가하는 것이 보고되었다. 이러한 결과는 PDK4의 활성화가 고혈당증과 인슐린 저항성을 포함한 대사성 질환과 연관되어 있음을 시사한다. 또한, PDK4의 저해는 비알콜성 지방간염, 시스플라틴 유발성 신장 독성, 혈관 석회화 및 당뇨병성 심근 병증에서도 효과가 있는 것으로 나타났다.
한편, 비만 세포는 급성 알레르기 반응에서 중심 역할을 하는 작동 세포로 간주된다(비특허문헌 3). 비만세포와 IgE 수용체의 강한 응집은 물질 P(Substances P) 같은 신경 펩타이드에 의한 자극과 마찬가지로 히스타민, 프로테아제 및 새로 합성된 염증 매개체 등을 포함하는 예비 형성 매개체의 방출을 유발한다. 비만 세포의 활성화는 수동 피부 아나필락시스, 천식, 비염, 아토피성 피부염과 같은 몇 가지 유형의 질병을 유발한다. 최근의 발견으로 PDK 저해제인 다이클로로아세트산(DCA)이 IgE/Ag로 자극 유도된 비만 세포의 탈과립 및 염증 사이토카인 농도를 효과적으로 저하할 수 있다고 밝혀져, PDK 조절에 의한 대사 개입이 비만세포 매개 알레르기 질환의 유망한 치료 방법임이 강하게 시사되고 있다.
또한, 대부분의 암세포는 정상 산소 조건 하에서도 미토콘드리아 산화/인산화에서 세포질 호기성 분해로의 신진 대사 전환을 하는 것이 특징이다. 이러한 대사의 전환은 당 분해를 증진시키고 포도당 산화를 저해함으로써 암세포로 하여금 증식에 이점을 제공한다. 이 독특한 암세포 대사 경로의 파괴는 항암 치료에서 치료적 기회를 준다. PDK4는 암세포 증식을 증가시켜 PDK4의 저해가 암 치료에 유익한 효과를 나타낼 수 있음을 암시한다. 최근의 연구에 의하면 PDK4가 번역 후 조절을 통해 돌연변이 KRAS 활동을 상향 조절할 수 있다는 것이 밝혀졌다. 유전적 PDK4 결핍 또는 약리학적 PDK4 저해는 글루코오스 및 지방산 산화를 감소시켜 KRAS 돌연변이에 의한 직장암 및 폐암의 종양 증식을 억제한다.
본 발명자들은 비만, 당뇨 등의 대사성 질환 및/또는 암질환의 예방 또는 치료를 위한 소분자 PDK4 저해제를 발굴하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 분자 내에 히드라지닐렌을 포함하는 일련의 플루오렌 유도체를 합성하고, 이들 화합물이 PDK4 저해 활성을 발휘함을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000001
상기 화학식 1에서,
R1 및 R1'은 각각 독립적으로 수소, C1-4 알콕시, 또는 할로겐;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, C3-10 사이클로알킬-C1-4 알킬 또는 C1-4 알킬;
R4는 수소;
R5는 비치환 또는 옥소, 할로겐, C1-4 할로알킬, C0-4 알킬설포닐, 카르복시 및 C1-4 알콕시카보닐로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 C6-10 아릴, 5-10원 헤테로아릴 또는 5-10원 헤테로사이클릴;
또는 R4 및 R5는 서로 연결되어 이들이 결합된 질소원자 함께 5원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성함.
본 발명의 다른 하나의 목적은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는, 상기 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조방법을 제공하는 것이다:
[화학식 2]
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000002
[화학식 3]
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000003
.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 피루브산 탈수소효소 키나아제 4(Pyruvate dehydrogenase kinase 4; PDK4) 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에 따라 새롭게 합성된 분자 내에 히드라지닐렌을 포함하는 일련의 플루오렌 유도체는 PDK4 활성을 억제하는 효과를 나타내므로 이와 관련된 질환, 예컨대, 비만, 당뇨, 지방간 등의 대사성 질환 및/또는 암질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 당뇨병 동물 모델에서 약물 투여 10주 후 실시한 복강 내 당부하 검사 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 급성 허혈성 신증 동물 모델의 신장 조직에 대한 H&E 및 TUNEL 염색 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 급성 허혈성 신증 동물 모델의 신장 조직에서의 NGAL 발현 및 혈청 내 크레아티닌 수준을 나타낸 도이다.
도 4는 심근경색질환 세포모델에서 세포사멸, 및 미토콘드리아 활성산소 수준을 나타낸 도이다.
도 5는 심근경색질환 세포모델에서 시간별 세포 내 칼슘 변화를 나타낸 도이다.
도 6은 염증성 장질환 동물 모델의 대장염증 분석 결과를 나타낸 도이다. A는 H&E 염색 결과를, B는 조직 점수를, C 및 D는 회수한 전체 대장 사진 및 이로부터 측정한 대장 길이를 나타낸다.
도 7은 염증성 장질환 동물 모델의 대장 조직에서의 염증성 사이토카인 mRNA 발현을 나타낸 도이다.
도 8은 급성 췌장염 동물 모델에서의 혈청 아밀라아제 및 리파아제 활성을 나타낸 도이다.
도 9는 LPS 유도 패혈증 동물 모델에서 생존율을 나타낸 도이다.
도 10은 LPS 유도 패혈증 동물 모델의 골수 유래 수지상 세포에서의 염증조절복합체(inflammasome) 형성 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 11은 이식편대숙주질환 동물 모델에서 체중 회복 효과를 나타낸 도이다.
도 12는 이식편대숙주질환 동물 모델에서 동종이계 CD4+IFNg+ T 세포의 생성을 나타낸 도이다.
도 13은 샤르코-마리-투스 질환 동물 모델에서 측정한 미토콘드리아 산소 소모율을 나타낸 도이다.
도 14는 쿠싱 증후군 동물 모델에서의 코리티솔 생성 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 15는 정상 세포에 대한 성장억제 효과를 나타낸 도이다.
도 16은 대장암 세포에 대한 성장억제 효과를 나타낸 도이다.
도 17은 갑상선암 세포에 대한 성장억제 효과를 나타낸 도이다.
도 18은 전립선암 세포 및 폐암 세포에 대한 성장억제 효과를 나타낸 도이다.
도 19는 유방암 세포 및 방광암 세포에 대한 성장억제 효과를 나타낸 도이다.
도 20은 간암 세포, 뇌암 세포, 및 난소암 세포에 대한 성장억제 효과를 나타낸 도이다.
도 21은 HCT-116 대장암 모델에서 약물 투여 21일 후 항암 효과 및 체중 변화를 나타낸 도이다.
도 22는 CT26 대장암 모델에서 약물 투여 21일 후 항암 효과, TUNEL 분석 및 체중 변화를 나타낸 도이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
본 발명의 제1양태는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000004
상기 화학식 1에서,
R1 및 R1'은 각각 독립적으로 수소, C1-4 알콕시, 또는 할로겐;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, C3-10 사이클로알킬-C1-4 알킬 또는 C1-4 알킬;
R4는 수소;
R5는 비치환 또는 옥소, 할로겐, C1-4 할로알킬, C0-4 알킬설포닐, 카르복시 및 C1-4 알콕시카보닐로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 C6-10 아릴, 5-10원 헤테로아릴 또는 5-10원 헤테로사이클릴;
또는 R4 및 R5는 서로 연결되어 이들이 결합된 질소원자 함께 5원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성함.
예컨대, 상기 화합물은 하기 화학식 1-1로 표시되는 화합물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다:
[화학식 1-1]
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000005
.
예컨대, 상기 화학식 1 또는 화학식 1-1에서, R1 및 R1'은 각각 독립적으로 메톡시, 또는 플루오로일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
예컨대, 상기 화학식 1 또는 화학식 1-1에서, R2는 수소, 또는 메틸이고, R3은 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸 또는 사이클로헥실메틸일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
예컨대, 상기 화학식 1 또는 화학식 1-1에서, R4는 수소이고, R5는 비치환 또는 옥소, 플루오로, 클로로, 트리플루오로메틸, 메틸설포닐, 카르복시, 및 tert-부톡시카보닐로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 페닐, 나프틸, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 퀴나졸리닐, 또는 디하이드로퀴놀리닐이거나, R4 및 R5는 서로 연결되어 이들이 결합된 질소원자 함께 피페리디닐 또는 아제파닐을 형성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
구체적으로, 상기 화합물은
1. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
2. N'-(4-플루오로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(4-fluorophenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
3. N'-(2-플루오로-4-(메틸설포닐)페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
4. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-페닐프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-phenylpropanehydrazide),
5. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(나프탈렌-1-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(naphthalen-1-yl)propanehydrazide),
6. N'-(2-클로로페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(2-chlorophenyl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
7. N'-(4-클로로페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(4-chlorophenyl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
8. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-2-yl)propanehydrazide),
9. N'-(2-플루오로-4-(메틸설포닐)페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
10. N'-(4-클로로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(4-chlorophenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
11. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(나프탈렌-1-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(naphthalen-1-yl)propanehydrazide),
12. N'-(2-클로로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(2-chlorophenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
13. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(2-플루오로페닐)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(2-fluorophenyl)propanehydrazide),
14. 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코틴산(6-(2-(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanoyl)hydrazinyl)nicotinic acid),
15. tert-부틸 6-(2-(2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코티네이트(tert-butyl 6-(2-(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanoyl)hydrazinyl)nicotinate),
16. 6-(2-(2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코틴산(6-(2-(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanoyl)hydrazinyl)nicotinic acid),
17. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-2-yl)propanehydrazide),
18. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)아세토히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-2-yl)acetohydrazide),
19. tert-부틸 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세틸)히드라지닐)니코티네이트(tert-butyl 6-(2-(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)acetyl)hydrazinyl)nicotinate),
20. 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세틸)히드라지닐)니코틴산(6-(2-(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)acetyl)hydrazinyl)nicotinic acid),
21. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)아세토히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)acetohydrazide),
22. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-(메틸설포닐)페닐)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-(methylsulfonyl)phenyl)propanehydrazide),
23. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-(메틸설포닐)페닐)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-(methylsulfonyl)phenyl)propanehydrazide),
24. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피라진-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyrazin-2-yl)propanehydrazide),
25. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피라진-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyrazin-2-yl)propanehydrazide),
26. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)propanehydrazide),
27. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)propanehydrazide),
28. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리미딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyrimidin-2-yl)propanehydrazide),
29. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리미딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyrimidin-2-yl)propanehydrazide),
30. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-3-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-3-yl)propanehydrazide),
31. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-3-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-3-yl)propanehydrazide),
32. N'-(3-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
33. N'-(3-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
34. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-4-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-4-yl)propanehydrazide),
35. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴나졸린-4-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(quinazolin-4-yl)propanehydrazide),
36. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴놀린-4-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(quinolin-4-yl)propanehydrazide),
37. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴녹살린린-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(quinoxalin-2-yl)propanehydrazide),
38. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(2-옥소-1,2-디하이드로퀴놀린-3-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(2-oxo-1,2-dihydroquinolin-3-yl)propanehydrazide),
39. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴놀린-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(quinolin-2-yl)propanehydrazide),
40. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로퀴놀린-4-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(1-methyl-2-oxo-1,2-dihydroquinolin-4-yl)propanehydrazide),
41. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(imidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl)propanehydrazide),
42. N'-(벤조[d]티아졸-2-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(benzo[d]thiazol-2-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
43. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)부탄히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)butanehydrazide),
44. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-3-메틸부탄히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)-3-methylbutanehydrazide),
45. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-4-메틸펜탄히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)-4-methylpentanehydrazide),
46. 3-사이클로헥실-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드(3-cyclohexyl-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
47. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-2-메틸프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)-2-methylpropanehydrazide),
48. (S)-2-(4-((S)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드((S)-2-(4-((S)-2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
49. (R)-2-(4-((R)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드((R)-2-(4-((R)-2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
50. (S)-2-(4-((R)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드((S)-2-(4-((R)-2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
51. (R)-2-(4-((S)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드((R)-2-(4-((S)-2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
52. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N-(피페리딘-1-일)프로판아미드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N-(piperidin-1-yl)propanamide),
53. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N-(피페리딘-1-일)프로판아미드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N-(piperidin-1-yl)propanamide), 또는
54. N-(아제판-1-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판아미드(N-(azepan-1-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanamide)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
나아가, 이들 화합물은 하기 표 1에 개시한 화학식으로 표시될 수 있다.
화합물 구조식 화합물 구조식
1
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 2
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3
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 4
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5
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7
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 8
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9
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 10
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 54
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본 발명의 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 존재할 수 있다. 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산가염이 유용하다. 본 발명의 용어 "약학적으로 허용가능한 염"이란 환자에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 갖는 농도로서 이 염에 기인한 부작용이 화학식 1로 표시되는 화합물의 이로운 효능을 저하시키지 않는 상기 화합물의 임의의 모든 유기 또는 무기 부가염을 의미한다.
산부가염은 통상의 방법, 예를 들어 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고, 이어서 상기 혼합물을 증발시켜 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.
이때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산(fumaric acid), 만데르산, 프로피온산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 요오드화수소산(hydroiodic acid) 등을 사용할 수 있으며, 이들에 제한되지 않는다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염은, 예를 들어 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해시키고, 비용해 화합물 염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 특히 나트륨, 칼륨, 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하나 이들에 제한되는 것은 아니다. 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.
본 발명의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 상기 화학식 1의 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성 기의 염을 포함한다. 예를 들어, 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨염 등이 포함될 수 있고, 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브롬화물, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄술포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔술포네이트(토실레이트) 염 등이 있으며, 당업계에 알려진 염의 제조방법을 통하여 제조될 수 있다.
본 발명의 플루오렌 유도체 화합물의 염으로는 약학적으로 허용가능한 염으로서, 플루오렌 유도체 화합물과 동등한 약리활성을 나타내는 플루오렌 유도체의 염이면 제한없이 모두 사용 가능하다.
또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은, 이의 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라 이로부터 제조될 수 있는 가능한 수화물 등의 용매화물 및 가능한 모든 입체 이성질체를 제한없이 포함한다. 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 용매화물 및 입체이성질체는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 화학식 1로 표시되는 화합물로부터 제조할 수 있다.
나아가, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 결정 형태 또는 비결정 형태로 제조될 수 있으며, 결정 형태로 제조될 경우 임의로 수화되거나 용매화될 수 있다. 본 발명에서는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 화학양론적 수화물뿐만 아니라 다양한 양의 물을 함유하는 화합물이 포함될 수 있다. 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 용매화물은 화학양론적 용매화물 및 비화학양론적 용매화물 모두를 포함한다.
본 발명의 제2양태는 하기 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는, 제1양태의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조방법을 제공한다:
[화학식 2]
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[화학식 3]
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.
상기 화학식 2 및 3에서, R1' 및 R1 내지 R5는 이상에서 정의한 바와 같다.
예컨대, 상기 반응은 TBTU(2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium tetrafluoroborate) 및 DIPEA(N,N-Diisopropylethylamine) 존재 하에 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 화학식 2의 화합물은 하기 반응식 1 내지 7 중 하나 이상의 반응을 포함하는 공정에 의해 준비할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
[반응식 1]
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[반응식 2]
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[반응식 3]
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[반응식 4]
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[반응식 5]
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[반응식 6]
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[반응식 7]
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상기 반응식 1 내지 7에서, R1 내지 R3은 이상에서 정의한 바와 같다.
상기 반응식 1 내지 7에서, X1 및 X2는 각각 독립적으로 할로겐일 수 있고, 구체적으로, X1은 클로로, X2는 브로모일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 반응식 1의 반응은, 밀봉된 용기에서 K3PO4, 및 PdCl2(PPh3)2 존재 하에 90 내지 130℃로 가열하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이때 용매로는 톨루엔과 물의 혼합 용매를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 반응식 2의 반응은, 염기 예컨대, 수산화나트륨을 첨가하고, 60 내지 100℃로 가열하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이때 용매로는 저급 알코올, 예컨대, 에탄올을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 반응식 3의 반응은, 이튼 시약(Eaton's reagent)과 혼합하여 60 내지 100℃로 가열하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 반응식 4의 반응은, 반응물 중 플루오렌 유도체와 과량의 플루오르화세슘, 및 K2CO3의 혼합물을 0℃로 냉각하고, 온도를 유지하면서 다른 반응물인 트리메틸(트리플루오로메틸)실란을 적가하고 혼합물을 서서히 실온에 이르도록 하고 교반하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이때 용매로는 유기용매인 DMF를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 반응식 5의 반응은, 탄산세슘 존재 하에 70 내지 100℃로 가열하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이때 용매로는 유기용매인 아세토니트릴을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 반응식 6의 반응은, 밀봉된 용기에서 Pd(OAc)2, 및 Sphos와 혼합하고, 80 내지 120℃로 가열하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이때 용매로는 톨루엔과 물의 혼합 용매를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 반응식 7의 반응은, 염기, 예컨대, 수산화나트륨을 첨가하여 상온에서 반응시킴으로써 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이때 용매로는 THF와 물의 혼합 용매를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 순도 및/또는 수율을 높이기 위하여, 각각의 반응 이후 생성물을 그대로 이후 반응에 사용하거나, 생성물을 세척, 분리, 및/또는 정제하는 단계를 추가로 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제3양태는 상기 제1양태의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 피루브산 탈수소효소 키나아제 4(Pyruvate dehydrogenase kinase 4; 이하 PDK4) 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어, "제1양태의 화합물", 및 "약학적으로 허용 가능한 염"은 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 용어, "예방"이란 본 발명의 조성물의 투여로 PDK4 활성 관련 질환의 발생, 확산 및 재발을 억제시키거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"란 본 발명의 조성물의 투여로 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 PDK4 활성을 억제함으로써 이와 관련 질환을 예방 또는 치료할 수 있다.
본 발명의 용어, "피루브산 탈수소효소 키나아제 4(Pyruvate dehydrogenase kinase 4; PDK4)"는 미토콘드리아의 기질(matrix of the mitochondria) 내에 존재하는 미토콘드리아 단백질로, 4종의 피루브산 탈수소효소 키나아제 동질효소(isozyme) 중 하나이다. 이는 인슐린 부족 또는 인슐린 둔감성 세포에서 PDK4 과발현되며, 대사를 감소시킴으로써 해당 반응(glycolysis)으로부터 형성되는 피루베이트가 산화되지 못하므로 혈액 중 글루코오스가 효율적으로 소비되지 못하여 과혈당증(hyperglycaemia)을 유도할 수 있으므로, 제2형 당뇨병 치료의 표적이 될 수 있다.
이때, 본 발명의 약학적 조성물로 예방 또는 치료 가능한 PDK4 활성 관련 질환은 대사성 질환, 염증성 질환 또는 암 질환일 수 있다.
구체적으로, 상기 대사성 질환은 비만, 제1형당뇨병, 제2형당뇨병, 당뇨병성 신증, 당뇨병성 신경병증, 대사 증후군, 고지혈증, 고젖산증, 동맥경화증, 협심증, 급성 허혈성 신증, 허혈성 심장 질환, 심근경색, 심부전, 항암제 유발 심근병증, 바이러스성 심근염, 말초 혈관 질환, 간헐적 파행증, 뇌졸중, 미토콘드리아병증, 폐동맥 고혈압, 지방간, 고혈압, 또는 쿠싱 증후군일 수 있다.
보다 구체적으로 상기 지방간은 알콜성 지방간 질환, 비알콜성 지방간 질환(non-alcoholic fatty liver diseases; NAFLDs) 및 비알콜성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis; NASH)을 포함할 수 있다.
구체적으로, 상기 염증성 질환은 급성 또는 만성 췌장염, 염증성 장질환, 패혈증, 이식편대숙주질환, 또는 샤르코마리투스질환일 수 있다.
구체적으로, 상기 암 질환은 대장암, 갑상선암, 뇌암, 간암, 전립선암, 유방암, 췌장암, 폐암, 방광암 또는 난소암일 수 있다.
그러나, 본 발명의 약학적 조성물을 이용하여 예방 또는 치료할 수 있는 질환은 이에 제한되는 것은 아니며, PDK4 활성을 억제하여 예방 또는 치료 효과를 나타낼 수 있는 질환이면 본 발명의 범주에 포함될 수 있다.
바람직하게, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분으로서 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 토토머, 이의 입체이성질체, 이의 입체이성질체의 혼합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 조성물의 총중량을 기준으로 0.1 내지 75 중량%로, 보다 바람직하게는 1 내지 50 중량%로 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사 용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥내, 복강내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 이러한 조성물에 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토즈, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제가 사용될 수 있다.
경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈61. 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 한편, 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.
이때, 본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
예컨대, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
구체적으로, 본 발명의 조성물에서 화합물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 kg 당 1 내지 100 mg, 바람직하게는 5 내지 60 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 제3양태는 상기 제2양태의 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, PDK4 활성 관련 질환의 치료방법을 제공한다.
본 발명의 용어, "제2양태의 약학적 조성물" 및 "PDK4 활성 관련 질환"은 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 용어 "개체"란, 상기 PDK4 활성 관련 질환이 발명하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함한 모든 동물을 의미하고, 본 발명의 약학적 조성물을 개체에게 투여함으로써 상기 질환을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 기존의 치료제와 병행하여 투여될 수 있다.
본 발명의 용어 "투여"란, 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수도 있다. 바람직한 투여방식 및 제제는 정맥 주사제, 피하 주사제, 피내 주사제, 근육 주사제, 점적 주사제 등이다. 주사제는 생리식염액, 링겔액 등의 수성 용제, 식물유, 고급 지방산 에스테르(예, 올레인산에칠 등), 알코올 류(예, 에탄올, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등) 등의 비수성 용제 등을 이용하여 제조할 수 있고, 변질 방지를 위한 안정화제(예, 아스코르빈산, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨, BHA, 토코페롤, EDTA 등), 유화제, pH 조절을 위한 완충제, 미생물 발육을 저지하기 위한 보존제(예, 질산페닐수은, 치메로살, 염화벤잘코늄, 페놀, 크레솔, 벤질알코올 등) 등의 약학적 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에서 유효성분과 결합하여 사용된 "치료학적으로 유효한 양"이란 용어는 대상 질환을 예방 또는 치료하는데 유효한 플루오렌 유도체 화합물, 이의 입체이성질체, 이의 입체이성질체의 혼합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염의 양을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 예방 또는 치료하고자 하는 질환의 종류에 따라, 유효성분으로서 플루오렌 유도체 화합물, 이의 입체이성질체, 이의 입체이성질체의 혼합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 이외의 공지된 각 질환의 예방 또는 치료에 사용되는 공지의 약물을 추가로 포함할 수 있다. 예컨대, 암질환의 예방 또는 치료에 사용되는 경우 유효성분으로서 플루오렌 유도체 화합물, 이의 입체이성질체, 이의 입체이성질체의 혼합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 이외에 공지된 약물을 추가로 포함할 수 있고, 이들 질환의 치료를 위해 공지된 다른 치료와 병용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드(화합물 1)의 합성
단계 1-1: 에틸 2'-클로로-4'-플루오로바이페닐-2-카르복실레이트의 제조
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000069
10 mL의 톨루엔:물(1:1) 중의 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠(1-bromo-2-chloro-4-fluorobenzene, 1 g, 4.775 mmol), 에틸 2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조에이트(ethyl 2-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzoate, 1.58 g, 5.73 mmol), K3PO4(2.03 g, 9.55 mmol), 및 PdCl2(PPh3)2(67.03 mg, 0.095 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 3시간 동안 110℃에서 가열하였다. 상기 용액을 염수(brine, 200 mL)로 희석하고 에틸아세테이트(ethyl acetate; EtOAC)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고 진공에서 농축시켰다. 용매로서 에틸아세테이트와 헥산을 이용한 컬럼 크로마토그래피로 생성물을 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(1.1 g, 82 %).
단계 1-2: 2'-클로로-4'-플루오로바이페닐-2-카르복시산의 제조
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000070
에탄올(150 mL)에 용해시킨 에틸 2'-클로로-4'-플루오로바이페닐-2-카르복실레이트(1.1 g, 9.67 mmol) 용액에 2N NaOH 수용액(4.74 mL)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 80℃에서 24시간 동안 교반하였다. 진공에서 에탄올을 제거하고 수득한 용액은 1N 염산으로 pH 3까지 산성화하였다. 물을 더 첨가하고(100 mL) 상기 수용액을 EtOAC(3×200 mL)로 추출하였다. 회수한 유기층을 합하여 염수로 세척하여, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축하였다. 수득한 조 생성물(crude product)은 추가적인 정제 없이 다음 단계에 사용하였다(870 mg, 87%).
단계 1-3: 4-클로로-2-플루오로-9H-플루오렌-9-온의 제조
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000071
이튼 시약(Eaton's reagent, 5 mL) 용액에 에틸 2'-클로로-4'-플루오로바이페닐-2-카르복시산(870 mg, 3.47 mmol)을 첨가하고, 상기 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이후 상기 반응 혼합물을 0℃까지 냉각하였다. 상기 용액을 염수(50 mL)로 희석하고 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고 진공에서 농축시켰다. 용매로서 에틸아세테이트와 헥산을 이용한 컬럼 크로마토그래피로 생성물을 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(626 mg, 77%).
단계 1-4: 4-클로로-2-플루오로-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-9-올의 제조
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000072
DMF(12 mL) 중의 4-클로로-2-플루오로-9H-플루오렌-9-온(2.9 g, 12.47 mmol),플루오르화세슘(cesium fluoride, 4.74 g, 31.17 mmol, 2.5 eq), 및 K2CO3(5.62 g, 40.69 mmol, 2.5 eq) 혼합물을 불활성 분위기 하에서(under inert atmosphere) 0℃로 냉각하였다. 0℃ 미만으로 온도를 유지하면서 트리메틸(트리플루오로메틸)실란(trimethyl(trifluoromethyl)silane, 4.6 mL, 31.17 mmol, 2.5 eq)을 적가하였다. 수득한 혼합물은 서서히 실온에 이르도록 하고 24시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물 물로 희석하고(100 mL) 에틸아세테이트로 추출하였다(3×100mL). 회수한 유기층을 합하여 염수로 세척하고(100 mL), Na2SO4 상에서 건조시켜 여과하고 진공에서 휘발성 물질(volatiles)을 증발시켰다. 용매로서 에틸아세테이트와 헥산을 이용한 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(3 g, 79%).
단계 1-5: 에틸 2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트의 제조
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000073
아세토니트릴(acetonitrile, 8 mL) 중의 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole, 0.40 g, 2.1 mmol), 에틸 2-브로모프로파노에이트(ethyl 2-bromopropanoate, 290 μL, 2.3 mmol), 및 탄산세슘(cesium carbonate, 1.5 g, 4.6 mmol) 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 Na2CO3, 수용액으로 처리하고(worked up), 에틸아세테이트로 추출하여(3×50 mL), 염수로 세척하였다. 회수한 유기층을 합하여 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하여 감압 하에 농축하였다. 용매로서 에틸아세테이트와 헥산을 이용한 컬럼 크로마토그래피로 잔사(residue)를 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(420 mg, 61%).
단계 1-6: 에틸 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트의 제조
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000074
30 mL의 톨루엔:물(1:1) 중의 4-클로로-2-플루오로-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-9-올(4-chloro-2-fluoro-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-9-ol, 1.5 g, 4.96 mmol), 에틸 2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트(2.9 g, 9.9 mmol, 2 eq), NaHCO3(1.25 g, 14.87 mmol), Pd(OAc)2(111.27 mg, 0.496 mmol), 및 Sphos(610.4 mg, 1.487 mmol) 혼합물을 밀봉된 튜브에 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 상기 용액을 염수로 희석하고(200 mL), 에틸아세테이트로 추출하였다. 회수한 유기층을 합하여 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공에서 농축하였다. 용매로서 에틸아세테이트와 헥산을 이용한 컬럼 크로마토그래피로 상기 생성물을 정제하여 다음 단계에 사용하였다.
단계 1-7: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판산의 제조
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000075
THF/물(3:1, 100 mL) 중의 에틸 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트(2 g, 4.6 mmol) 용액에 NaOH(736.67 g, 18.42 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 진공으로 THF를 제거하고 수득한 용액은 1N 염산으로 pH 5까지 산성화하였다. 물을 더 첨가하고(50 mL) 상기 수용액을 EtOAC(3×100 mL)로 추출하였다. 회수한 유기층을 합하여 염수로 세척하여, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축하였다. 용매로서 DCM과 메탄올을 이용한 컬럼 크로마토그래피로 상기 조 생성물을 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(1.4 g, 74.8%).
단계 1-8: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드의 제조
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000076
-25℃까지 냉각시킨 DMF(3 mL) 중의 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판산(500 mg, 1.23 mmol), (4-플루오로페닐)히드라진((4-fluorophenyl)hydrazine, 220 mg, 1.35 mmol) 및 TBTU(474.2 mg, 1.48 mmol) 용액에 DIPEA(N,N-diisopropylethylamine, 0.752 mL, 4.31 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이후 상기 반응 혼합물을 염수에 붓고(50 mL), EtOAc로 추출하였다(3×50 mL). 회수한 유기층을 합하여 1M KHSO4 수용액(50 mL), NaHCO3 수용액(50 mL), 및 염수 용액(50 mL)으로 연속하여 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시킨 후, 감압 하에 용매를 증발시켰다. 용매로서 에틸아세테이트와 헥산을 이용한 컬럼 크로마토그래피로 상기 조 생성물을 정제하여 노란색 고체로서 표제 화합물을 수득하였다(444 mg, 70%).
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.47 (s, 1H), 7.73 (d, J = 1.83 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.68 (d, J = 1.37 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 6.41 Hz, 1H), 7.32 - 7.24 (m, 1H), 7.22 - 7.14 ( m, 2H), 6.99 (dd, J = 9.62, 2.29 Hz, 1H), 6.90 (t, J = 8.70 Hz, 2H), 6.69 (dd, J = 8.42 , 4.12 Hz, 2H), 6.04 (s, 1H), 5.08 (q, J = 3.66 Hz, 1H), 1.89 (d, J = 6.87 Hz, 3H).
실시예 2: N'-(4-플루오로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.49 (s, 1H), 7.75 (d, J = 3.66 Hz, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 2H), 7.30 - 7.10 (m, 5H), 6.90 (t, J = 8.54 Hz, 2H), 6.78 (d, J = 2.44 Hz, 1H), 6.71 (dd, J = 8.20, 4.27 Hz, 2H), 6.05 (s, 1H), 5.09 (q, J = 7.17, 3.66 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.91 (d, J = 7.32 Hz, 3H).
실시예 3: N'-(2-플루오로-4-(메틸설포닐)페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (2-플루오로-4-(메틸설포닐)페닐)히드라진((2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)hydrazine)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.45 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.21 (d, J = 9.39 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 2.75 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 2H), 7.56 - 7.48 (m, 1H), 7.41 (d, J = 6.87 Hz, 2H), 7.39 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 2H), 6.95 - 6.85 (m, 1H), 5.23 (q, J = 7.10 Hz, 1H), 3.09 (s, 3H), 1.75 (dd, J = 6.98 , 2.29 Hz, 3H).
실시예 4: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-페닐프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 페닐히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.82 (d, J = 6.10 Hz, 1H), 8.41 - 8.35 (m, 2H), 7.94 (s, 1H), 7.74 - 7.62 (m, 2H), 7.42 (t, J = 6.87 Hz, 1H), 7.30 - 7.10 (m, 5H), 6.99 - 6.91 (m, 1H), 6.88 (t, J = 7.63 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.39 Hz, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.12 (q, J = 6.87 Hz, 1H), 1.86 (d, J = 6.87 Hz, 3H).
실시예 5: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(나프탈렌-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 나프탈렌-1-일히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.76 (d, J = 3.81 Hz, 1H), 7.83 (t, J = 6.87 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.63 Hz, 1H), 7.70 - 7.53 (m, 3H), 7.52 - 7.33 (m, 4H), 7.26 - 7.00 (m, 5H), 6.94 - 6.80 (m, 2H), 6.65 (d, J = 7.63 Hz, 1H), 5.09 (q, J = 7.63 Hz, 1H), 1.83 (d, J = 6.87 Hz, 3H).
실시예 6: N'-(2-클로로페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (2-클로로페닐)히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.31 (s, 1H), 8.19 (d, J = 9.62 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 5.50 Hz, 1H), 7.48 - 7.08 (m, 6H), 6.81 - 6.70 (m, 3H), 5.26 (q, J = 6.41 Hz, 1H), 1.78 (d, J = 6.41 Hz, 3H).
실시예 7: N'-(4-클로로페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (4-클로로페닐)히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.20 (s, 1H), 8.18 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 8.15 - 8.10 (m, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.73 (d, J = 3.21 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 6.41 Hz, 1H), 7.46 - 7.12 (m, 8H), 6.72 (d, J = 8.70 Hz, 1H), 5.22 (q, J = 6.41 Hz, 1H), 1.76 (dd, J = 7.33, 3.66 Hz, 3H).
실시예 8: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐피리딘(2-hydrazinylpyridine)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.23 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.21(d, J = 8.70 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.10 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 8.01 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 6.87 Hz, 2H), 7.37 - 7.15 (m, 4H), 6.69 (t, J = 5.95 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 5.25 (q, J = 7.33 Hz, 1H), 1.77 (d, J = 5.50 Hz, 3H).
실시예 9: N'-(2-플루오로-4-(메틸설포닐)페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (2-플루오로-4-(메틸설포닐)페닐)히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.45 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.15 (d, J = 7.33 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.62 (dd, J = 10.99, 1.83 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 5.95 Hz, 1H), 7.55 - 7.49 (m, 1H), 7.31 - 7.21 (m,2H), 7.19 - 7.11 (m,2H), 6.95 - 6.87 (m,1H), 6.85 (d, J = 2.29 Hz, 1H), 5.26 (q, J = 6.87 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 1.79 (dd, J = 6.87,2.75 Hz, 3H).
실시예 10: N'-(4-클로로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (4-클로로페닐)히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.19 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 8.11 (d, J = 5.04 Hz, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.58 (d, J = 5.95 Hz, 1H), 7.31 - 7.12 (m, 5H), 6.85 (d, J = 2.29 Hz, 1H), 6.77 - 6.75 (m, 2H), 5.21 (q, J = 6.87 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 1.72 (dd, J = 7.10, 3.21 Hz, 3H).
실시예 11: 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(나프탈렌-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 나프탈렌-1-일히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.28 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.24 Hz, 2H), 7.83 - 7.75 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.54 (d, J = 5.04 Hz, 1H), 7.50 - 7.36 (m, 2H), 7.32 - 7.05 (m, 7H), 6.82 (d, J = 2.29 Hz, 1H), 6.72 - 6.62 (m, 1H), 5.30 (q, J = 6.87 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 1.79 (dd, J = 6.87 , 2.75 Hz, 3H).
실시예 12: N'-(2-클로로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (2-클로로페닐)히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.30 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 8.13 (d, J = 6.87 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.68 (d, J = 15.11 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 6.41 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.33 - 7.09 (m, 5H), 6.85 (d, J = 2.29 Hz, 1H), 6.82 - 6.70 (m, 2H), 5.25 (q, J = 6.87 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 1.74 (dd, J = 7.10, 3.18 Hz, 3H).
실시예 13: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(2-플루오로페닐)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (2-플루오로페닐)히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.51 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 1H), 7.75 - 7.65 (m, 2H), 7.44 (d, J = 7.63 Hz, 1H), 7.34 - 7.16 (m, 3H), 7.08 - 6.92 (m,3H), 6.90 - 6.80 (m, 1H), 6.73 (t, J = 6.87 Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.13 (q, J = 6.87 Hz, 1H), 1.94 (d, J = 7.63 Hz, 3H).
실시예 14: 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코틴산의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 6-히드라지닐니코틴산(6-hydrazinylnicotinic acid)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 542.1.
실시예 15: tert-부틸 6-(2-(2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코티네이트의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 tert-부틸 6-히드라지닐니코티네이트(tert-butyl 6-hydrazinylnicotinate)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 610.2.
실시예 16: 6-(2-(2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코틴산의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 6-히드라지닐니코틴산(6-hydrazinylnicotinic acid)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 554.14.
실시예 17: 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐피리딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 510.2.
실시예 18: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)아세토히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모아세테이트를, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐피리딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 484.1.
실시예 19: tert-부틸 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세틸)히드라지닐)니코티네이트의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모아세테이트를, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 tert-부틸 6-히드라지닐니코티네이트을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 584.2.
실시예 20: 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세틸)히드라지닐)니코틴산의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모아세테이트를, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 6-히드라지닐니코틴산을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 528.1.
실시예 21: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)아세토히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모아세테이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 501.1.
실시예 22: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-(메틸설포닐)페닐)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (4-(메틸설포닐)페닐)히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 575.1.
실시예 23: 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-(메틸설포닐)페닐)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 (4-(메틸설포닐)페닐)히드라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 587.2.
실시예 24: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피라진-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐피라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]499.4.
실시예 25: 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피라진-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐피라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]511.4.
실시예 26: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐-5-(트리플루오로메틸)피라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]566.4.
실시예 27: 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐-5-(트리플루오로메틸)피라진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]578.5.
실시예 28: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리미딘-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐피리미딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]499.4.
실시예 29: 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리미딘-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐피리미딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]511.4.
실시예 30: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-3-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 3-히드라지닐피리딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]498.4.
실시예 31: 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-3-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 3-히드라지닐피리딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]510.3.
실시예 32: N'-(3-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 3-클로로-2-히드라지닐-5-(트리플루오로메틸)피리딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]600.7.
실시예 33: N'-(3-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 3-클로로-2-히드라지닐-5-(트리플루오로메틸)피리딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]612.8.
실시예 34: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-4-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 4-히드라지닐피리딘을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]498.4.
실시예 35: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴나졸린-4-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 4-히드라지닐퀴나졸린을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]549.2.
실시예 36: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴놀린-4-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 4-히드라지닐퀴놀린을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]548.4.
실시예 37: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴녹살린린-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐퀴녹살린을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]549.5.
실시예 38: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(2-옥소-1,2-디하이드로퀴놀린-3-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 3-히드라지닐퀴놀린-2(1H)-온을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H] 564.5.
실시예 39: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴놀린-2-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 2-히드라지닐퀴놀린을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]548.4.
실시예 40: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로퀴놀린-4-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 4-히드라지닐-1-메틸퀴놀린-2(1H)-온을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]578.3.
실시예 41: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 6-히드라지닐이미다조[1,2-b]피리다진을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]538.4.
실시예 42: N'-(벤조[d]티아졸-2-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드의 제조
LCMS [M+H]554.4.
실시예 43: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)부탄히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모부타노에이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]529.4.
실시예 44: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-3-메틸부탄히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모-3-메틸부타노에이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]543.5.
실시예 45: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-4-메틸펜탄히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모-4-메틸펜타노에이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]557.5.
실시예 46: 3-사이클로헥실-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모-3-사이클로헥실프로파노에이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]597.6.
실시예 47: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-2-메틸프로판히드라자이드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-5에서 에틸 2-브로모프로파노에이트 대신에 에틸 2-브로모-2-메틸프로파노에이트를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]529.4.
실시예 48: (S)-2-(4-((S)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드의 제조
LCMS [M+H]515.46.
실시예 49: (R)-2-(4-((R)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드의 제조
LCMS [M+H]515.46.
실시예 50: (S)-2-(4-((R)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드의 제조
LCMS [M+H]515.46.
실시예 51: (R)-2-(4-((S)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드의 제조
LCMS [M+H]515.46.
실시예 52: 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N-(피페리딘-1-일)프로판아미드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-1에서 1-브로모-2-클로로-4-플루오로벤젠 대신에 1-브로모-2-클로로-4-메톡시벤젠을, 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 피페리딘-1-아민을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]501.5.
실시예 53: 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N-(피페리딘-1-일)프로판아미드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 피페리딘-1-아민을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]489.4.
실시예 54: N-(아제판-1-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판아미드의 제조
상기 실시예 1의 단계 1-8에서 (4-플루오로페닐)히드라진 대신에 아제판-1-아민을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1과 유사한 방법으로 반응시켜 표제 화합물을 수득하였다.
LCMS [M+H]503.5
실험예 1: 당뇨병(diabetes) 동물모델에서의 치료효과 검증
6주령의 수컷 KKAy 당뇨병 마우스(군당 6마리)에 비히클(10% DMSO+0.5% 메틸셀룰로오스) 및 실시예 1의 화합물(화합물 1)을 0.5 mg/kg 용량으로 하루 1회 경구(oral gavage)로 투여하였다. 투여 10주째에는 복강 내 1 g/kg의 글루코스를 투여하는 복강 내 당부하 검사(intraperitoneal glucose tolerance test; IPGTT)를 실시하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타난 바와 같이, 0.5 mg/kg 용량의 화합물 1 투여군에서 비히클 투여군에 비해 혈당 상승을 유의미하게 억제하는 것을 확인하였다(*p<0.01 versus B6/J Control. **p<0.01, ***p<0.05 versus KKAy Control).
실험예 2: 급성 허혈성 신증(acute kidney ischemic reperfusion(IR) injury) 동물모델에서의 치료효과 검증
8주령 수컷 C57BL6J 마우스에 각각 비히클, 화합물 1(4 μg/kg 또는 8 μg/kg)을 허혈성 재관류(ischemic reperfusion; IR) 수술 전 24시간, 1시간 전 및 수술 후 12시간에 꼬리정맥으로 투여하였다. 수술은 신장으로 들어가는 동맥을 차단하여 37분 동안 허혈을 유도한 뒤, 차단했던 동맥을 다시 풀어주고 24시간 뒤에 마취하여 부검하였다. 분리한 신장의 일부는 H&E 염색과 TUNEL 염색을 수행하여 도 2에 나타내었다. 다른 일부는 cDNA를 합성하여 실시간 PCR로 신장 손상 표지자인 NGAL을 확인하고, 혈액으로부터 혈청을 분리하여 혈청 내 신장 손상 표지자인 크레아티닌(creatinine)을 확인하여 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 2에 나타난 바와 같이, 마우스 신장의 H&E 염색으로 IR 수술 후 비히클을 처리한 IR 군에서 신세뇨관 조직의 손상이 확인되었으며, 화합물 1 처리한 IR 군(4 μg/kg 및 8 μg/kg)에서는 신세뇨관 조직의 손상이 현저히 감소한 것을 확인하였다. 조직의 세포사멸을 확인하기 위한 TUNEL 염색에서도 비히클을 처리한 IR 군에 비해 화합물 1을 처리한 IR 군(4 μg/kg 및 8 μg/kg)에서 세포사멸 역시 현저히 감소된 것으로 나타났다.
도 3에 나타난 바와 같이, 마우스 신장조직 손상 표지자인 NGAL의 RNA 발현은 비히클을 처리한 IR 군에서 눈에 띄게 증가하였으며, 화합물 1 처리한 IR 군(4 μg/kg 및 8 μg/kg)에서는 이러한 증가폭이 유의미하게 감소하였다. 다른 신장조직의 손상 표지자인 혈청 크레아티닌의 양도 비히클을 처리한 IR 군에서 상당히 증가하였으며, 화합물 1 처리한 IR 군(4 μg/kg 및 8 μg/kg)에서는 이러한 증가폭이 유의미하게 감소하였다(*p<0.01 versus Sham, **p<0.01 versus IR+Vehicle).
실험예 3: 심근경색질환(myocardial infarction disease) 세포모델에서의 치료효과 검증
랫드 심장모세포종 세포주(rat cardioblastoma cell line)인 H9C2 세포를 96웰 플레이트에 3×103 세포/웰의 밀도로 분주하여 24시간 동안 배양하였다. 다음날 FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지로 교체하여 24시간 추가 배양하였다. 이후 FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지로 다시 교체하면서 화합물 1 1 μM을 처리한 후 저산소 챔버(hypoxia chamber; 1% 산소, 5% CO2)에 2시간 동안 배양하였다(hypoxia; 저산소증). 이후, 10% FBS가 포함된 DMEM 배지로 교체하면서 화합물 1 1 μM을 처리한 뒤 1시간 동안 CO2 인큐베이터에 배양하고(reoxygenation; 재산소화), 세포사멸, 미토콘드리아 활성산소량 및 세포 내 칼슘양을 측정하고, 그 결과를 각각 도 4 및 5에 나타내었다.
도 4에 나타난 바와 같이, TUNEL 염색을 통해 저산소증-재산소화(hypoxia-reoxygenation; H/R)로 증가된 세포사멸은 화합물 1 1 μM을 처리한 세포군에서 눈에 띄게 감소함을 확인하였으며(도 4 상단), 미토콘드리아 활성산소를 측정하기 위해 처리한 형광염색시약인 MitoSOX 염색(5 μM, 10분)을 통해 저산소증-재산소화로 증가된 미토콘드리아 활성산소 역시 화합물 1 1 μM을 처리한 세포군에서 현저히 감소하였음을 확인하였다(도 4 하단).
또한, 도 5에 나타난 바와 같이, 세포손상을 유발하는 세포 내 칼슘양을 측정하기 위해 처리한 형광염색시약인 Rhod2 염색(5 μM, 1시간)을 통해, 저산소증-재산소화로 증가된 세포 내 칼슘양은 화합물 1 1 μM을 처리한 세포군에서 역시 현저히 감소하였다.
실험예 4: 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease) 동물모델에서의 치료효과 검증
8주령의 수컷 C57BL6J JmcSlc 마우스에 3.5% 덱스트란 황산나트륨(dextran sodium sulfate; DSS)을 ad libitum으로 9일 동안 음수한 뒤, 일반 식수로 교체하여 대장염(colitis)을 유도하였다. 상기와 같이 제조한 실험동물모델에 DSS 음수 2일 전부터 음수 종료일까지 비히클, 및 화합물 1(0.5 mg/kg 또는 1 mg/kg)을 매일 경구 투여하였다. 대장의 염증정도를 파악하기 위하여 분리된 대장의 길이 수축 정도를 측정하고, H&E 염색을 통해 조직학 점수를 확인하여 도 6에 나타내었다. 나아가 분리된 대장으로부터 토탈 RNA를 분리하여 cDNA를 합성하고, qPCR을 통해 대표 사이토카인(IFNγ, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12β, IL-17a, 및 TNFα)의 발현양을 측정하여 비교 분석하고, 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 6에 나타난 바와 같이, DSS 처리한 마우스는 대장 상피세포의 손상(도 6A의 노란색 화살표)가 관찰되었으며, 0.5 mg/kg 화합물 1 투여군에서 회복 정도는 미미하였으나, 1 mg/kg 화합물 1 투여군에서는 눈에 띄는 상피세포 회복(도 6A의 빨간색 화살표)이 확인되었다. 조직점수 또는 이와 유사한 패턴으로 1 mg/kg 화합물 1 투여군에서 가장 낮은 점수를 나타내었다(도 6B). 나아가, 대장 염증에 동반되는 길이 수축을 육안으로 관찰한 결과, 0.5 mg/kg 화합물 1 투여군 및 1 mg/kg 화합물 1 투여군 모두에서 비히클 투여군에 비해 수축이 완화된 것이 관찰되었으며, 투여량이 증가함에 따라 그 효과는 증가하였다(도 6C 및 6D).
도 7에 나타난 바와 같이, 비히클 투여군에 비해 화합물 1 투여군에서 정도의 차이는 있으나 염증성 사이토카인인 IFNγ, IL-6, IL-12b, IL-17a 및 TNFα의 mRNA 발현은 모두 현저하게 감소되었다. 한편, 조직 상처 치유 사이토카인인 IL-4의 경우 비히클 투여군에 비해 화합물 1 투여군에서 mRNA 발현이 증가하였다(*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 versus Vehicle).
실험예 5: 급성 췌장염(acute pancreatitis) 동물모델에서의 치료효과 검증
8주령의 수컷 마우스에 생리식염수에 녹인 세룰레인(Cerulein, 50 μg/kg)을 복강 투여하여 급성 췌장염을 유도하였다. 세룰레인 투여 24시간 전 및 1시간 전에 5 μg/kg 및 10 μg/kg 농도로 화합물 1을 꼬리정맥에 투여하고, 세룰레인은 1시간 간격으로 6회 복강 투여하였다. 첫번째 세룰레인 투여 후 18시간에 마우스를 마취하여 혈청을 분리하고, 혈청 내 아밀라아제와 리파아제 활성을 측정하여 도 8에 나타내었다.
도 8에 나타난 바와 같이, 급성 췌장염 유발로 증가된 혈청 아밀라아제 및 리파아제 활성은 화합물 1 투여로 인해 농도의존적으로 감소하였다0.01 versus Control. **p<0.01 versus Cerulein).
실험예 6: 패혈증(sepsis) 동물모델에서의 치료효과 검증
지질다당질(lipopolysaccharide; LPS) 투여용량 50 mg/kg은 24시간 내에 개체군의 절반이 사망하는 '반수 치사량'에 해당한다. 50 mg/kg 용량의 LPS를 1×PBS를 비히클 대조군으로 복강 주입하고, 움직임이 없거나, 호흡이 힘들거나, 자세를 유지하기 힘든 병적 상태의 징후를 보일 때, CO2 가스로 안락사 시키고, 그 시점을 종료시점(humane endpoint)로 기록하였다. 동물실험은 8주령 수컷 C57BL6J 마우스 6마리씩을 한개 군으로 하였다. 각 마우스에 15 mg/kg 화합물 1을 복강 투여 또는 10% DMSO 100 μL(비히클 대조군)로 전처리 하였다. 30분 후, 각 마우스에 50 mg/kg 지질다당질을 복강 주입한 후, 80시간 동안 생존율을 확인하여, 그 결과를 도 9 및 표 2에 나타내었다.
생존율 (%)
시간(h) 0 20 24 28 32 36 40 44 48 50 60 70 80
화합물 1 100 100 83.3 83.3 83.3 66.7 66.7 66.7 66.7 66.7 50 50 50
비히클 대조군 100 100 50 50 33.3 0 0 0 0 0 0 0 0
도 9 및 표 2에 나타난 바와 같이, LPS 주입 전 화합물 1을 투여한 경우 LPS 주입 후 36시간이 경과하더라도 66.7%가 생존한 반면, 약물로의 선처리 없이 LPS만을 주입한 대조군(비히클 대조군)은 모두 사망한 것으로 나타난 바, 화합물 1의 투여는 패혈증 유도 동물모델에서 생존율을 향상시키는 효과가 있음을 확인하였다(*p<0.01 versus LPS+V.C, V.C: Vehicle).
나아가, 세포 수준에서 염증 억제 효과를 확인하기 위하여, C57BL6 마우스의 골수세포에 20 ng/mL GM-CSF 및 IL-4를 처리하고 6일 후 골수유래 수지상세포(bone marrow derived dendritic cell; BMDC)를 수집하였다. 상기 BMCD를 1×106 cells/mL로 준비하여 하루 동안 안정화시킨 후 이후 실험을 진행하였다. 상기 수지상 세포를 500 ng/mL LPS로 3시간 동안 처리하여 pro-IL1β를 프라이밍(priming)시킨 후, 화합물 1(0, 0.01, 0.1, 1 및 10 μM)로 15분 동안 처리하였다. 다음으로, pro-IL1β 절단(cleavage)을 통해 pro-IL1β를 IL-1β로 전환시켜 염증조절복합체(inflammasome) 형성을 유도하는 ATP 5 mM을 처리하고, 30분 후 상층액 내 IL-1β 농도를 ELISA로 측정하여, 그 결과를 도 10 및 표 3에 나타내었다.
IL-1β(pg/mL)
화합물 1
(μM)		 0 0 0 0.01 0.1 1 10
15.83775 14.93956 1205.011 1131.823 1009.825 907.2636 647.6982
도 10 및 표 3에 나타난 바와 같이, 화합물 1 처리군은 비히클 대조군에 비해 0.1 μM 농도에서 약 83.802% 수준으로, 10 μM 농도에서는 약 53.7504% 수준까지 IL-1β 발현을 유의미하게 억제하였다(***p<0.01 versus con, *p<0.05, **p<0.01 versus LPS+ATP).
실험예 7: 이식편대숙주질환(graft-versus-host disease; GvHD) 동물모델에서의 치료효과 검증
5주령 BALB/c 수컷 마우스를 1주 동안 순화시키고, 800 cGy 전신 방사선을 조사한 후, C57BL/6J 유래 골수세포 5×106개 및 비장세포 1×107개를 정맥주사(IV injection)으로 주입하여 GvHD in vivo 모델(양성 대조군, Positive)을 구축하였다. 동계 대조군(Syngeneic)은 상기와 동일한 방법으로 구축하되, 주입되는 골수세포를 BALB/c 유래 골수세포로 선택하여 수행하였다. 매일 화합물 1 투여군(화합물 1 Daily)은 GvHD in vivo 모델에 화합물 1을 1 mg/kg로 매일 경구 투여(daily oral gavage)하여 구축하였다. 초기 화합물 1 투여군(화합물 1 Initial only)은 GvHD in vivo 모델에 화합물 1을 1 mg/kg로 모델 유도 후 6일째까지만 경구투여함으로써 구축하였다. 상기와 같이 구축한 각 대조군 및 실험군에 대해 체중 변화를 3일마다 측정함으로써 화합물 1에 의한 치료 효과를 확인하고, 그 결과를 도 11 및 표 4에 나타내었다. 14일째에 마우스로부터 분리한 비장에서 GvHD를 유발하는 주요 요인인 CD4+IFNg+ T 세포의 생성량을 측정하여, 그 결과를 도 12 및 표 5에 나타내었다.
측정일 Syngeneic Positive Daily 화합물 1 화합물 1 Initial only
D0 0 0 0 0
D3 -14.34132 -12.50228 -14.77473 -11.14954
D6 -18.23346 -21.62782222 -22.94925 -19.00776
D9 -12.11754 -19.48265714 -19.06935714 -14.6667
D12 -8.443326 -20.24557143 -16.1959 -11.98814
Syngeneic Positive Daily 화합물 1 화합물 1 Initial only
평균값 3.16 18.06666667 10.27666667 13.04333333
도 11 및 표 4에 나타난 바와 같이, 매일 화합물 1 투여군 및 초기 화합물 1 투여군에서 대조군에 비해 GvHD in vivo 모델의 체중이 유의미하게 회복되었다. 또한, 도 12 및 표 5에 나타난 바와 같이, 매일 화합물 1 투여군 및 초기 화합물 1 투여군에서 대조군에 비해 동종이계 CD4+IFNg+ T 세포의 생성량이 유의미하게 감소하였다(**p<0.01, ***0.001 versus Positive).
실험예 8: 샤르코-마리-투스 질환(Charcot-Marie-Tooth disease) 동물모델에서의 치료효과 검증
샤르코-마리-투스 질환의 주된 원인인 미토콘드리아 외막에 존재하는 MFN2의 변이로 인한 기능상실을 확인하기 위하여, 미토콘드리아의 산소 소모율(oxygen consumption rate; OCR)을 측정하였다. 구체적으로, Mfn2가 발현되는 마우스 배아 섬유아세포(mouse embryonic fibroblasts)인 Mfn2+/+ MEF 세포(정상세포)와 Mfn2가 발현되지 않는 Mfn2-/- MEF 세포를 Seahorse XF24 전용 배양접시에 10% FBS와 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)이 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 1×104 개수로 24시간 동안 배양하였다. 상기 세포에 비히클인 DMSO와 화합물 1(1 μM)을 처리하고, 24시간 더 배양하였다. 미토콘드리아의 산소 소모율을 Seahorse XFe96 분석기(Agilent Technologies)로 측정하여, 도 13에 나타내었다.
도 13에 나타난 바와 같이, 정상세포인 Mfn2+/+ MEF 세포에 비해 Mfn2가 발현되지 않는 Mfn2-/- MEF 세포에서 미토콘드리아의 산소 소모율이 급격히 감소하였다. 반면, 화합물 1을 처리한 Mfn2-/- MEF 세포는 정상세포에 준하는 수준까지 산소 소모율이 눈에 띄게 회복되었으며, 이는 화합물 1이 소실된 미토콘드리아의 기능을 개선할 수 있음을 나타내는 것이다(*p<0.01 versus Mfn2-/-+DMSO, **p<0.01 versus Mfn2+/++DMSO).
실험예 9: 쿠싱 증후군(Cushing's syndrome) 세포모델에서의 치료효과 검증
인간 부신피질암(human adrenocortical carcinoma) 세포주인 NCI-H295R 세포(ATCC #CRL-2128)를 24-웰 플레이트에 2.5×105 cells/well 밀도로 분주하였다. 상기 세포를 48시간 동안 배양한 후, 화합물 1(0.1, 0.5, 및 1 μM)을 12시간 동안 전처리하였다. 나아가 코르티솔 합성을 증가시키기 위하여 8-브로모아데노신 3',4'-사이클릭 모노포스페이트(8-Br-cAMP)를 0.5 mM 농도로 세포에 처리하면서 화합물 1을 재처리하여 24시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 세포 배양액을 수거하여 ELISA 키트로 세포에서 생성된 코르티솔의 양을 측정하고, 그 결과를 도 14에 나타내었다.
도 14에 나타난 바와 같이, NCI-H295R 세포에서 cAMP 첨가에 의해 현저히 증가된 코르티솔 생성은 화합물 1의 투여로 유의미하게 억제되었으며, 이러한 억제는 농도의존적 경향을 나타내었다(*p<0.01 versus non-treatment, **0.05, ***p<0.01 versus cAMP).
실험예 10: in vitro PDH S293 인산화 억제 효과
인간 배아 신장(human embryonic kidney) 세포인 HEK293 세포를 60 mm 접시에 2×106개 밀도로 분주하고 24시간 동안 배양한 후, 0.5% FBS가 포함된 배지로 교체하면서 상기 실시예 1 내지 54에 따라 준비한 화합물들을 농도별로 처리하였다. 5시간 후, 세포를 15 mL 코니칼 튜브에 긁어 모으고 1500 rpm에서 10분 동안 원심 분리하였다. 상등액을 버리고 1×PBS로 수세한 후, 1.5 mL e-튜브에 옮겨 담아 10,000 rpm에서 5분 동안 원심 분리하였다. 다시 상등액은 버리고, 용해 완충액(lysis buffer)을 넣어준 뒤, 얼음에 30분 동안 두어 세포를 용해시켰다. 10분 마다 볼텍스(vortex)하여 세포가 완전히 용해되도록 하였다. 다시 10,000 rpm로 15분 동안 4℃에서 원심 분리한 후, 상등액을 모았다. BCA 기법으로 상등액 중의 단백질을 정량하고, 20 μg 단백질에 샘플 완충액을 넣고 70℃에서 5분 동안 반응시켰다. PDHE1α S232, S293, S300 및 총 PDHE1α 단백질의 발현을 웨스턴블롯으로 검출하고, 산출된 PDH S293 인산화 억제를 하기 표 6에 나타내었다. 표 6에 나타난 바와 같이, 다수의 화합물은 50% 이상의 PHDE1α S293 발현 저해율을 나타내었으며, 일부 화합물은 80% 이상의 높은 저해율을 나타내었다.
실시예 PDH S293
인산화 억제		 실시예 PDH S293
인산화 억제		 실시예 PDH S293
인산화 억제		 실시예 PDH S293
인산화 억제
1 +++ 2 ++ 3 ++ 4 +++
5 ++ 6 ++ 7 ++ 8 +++
9 +++ 10 ++ 11 ++ 12 ++
13 ++ 14 ++ 15 ++ 16 ++
17 ++ 18 +++ 19 ++ 20 ++
21 ++ 22 ++ 23 ++ 24 ++
25 ++ 26 ++ 27 ++ 28 ++
29 ++ 30 ++ 31 ++ 32 ++
33 ++ 34 ++ 35 ++ 36 ++
37 ++ 38 ++ 39 ++ 40 ++
41 ++ 42 ++ 43 ++ 44 ++
45 ++ 46 ++ 47 ++ 48 ++
49 ++ 50 ++ 51 ++ 52 ++
53 ++ 54 ++
+++: 1 μM에서 PHDE1α S293 발현 저해율 80% 이상++: 1 μM에서 PHDE1α S293 발현 저해율 50% 이상
+: 1 μM에서 PHDE1α S293 발현 저해율 50% 미만
실험예 11: 정상 세포 및 다양한 암 세포에 대한 성장 억제 효과
다양한 정상 및 암 세포주에 대한 화합물 1의 성장 억제 효과를 확인하기 위하여 하기 표 7에 개시한 25종 세포주를 테스트하였다. 구체적으로, 각 세포를 96-웰 플레이트에 2×104 세포/웰의 밀도로 분주하여 24시간 동안 배양한 후, 0.5%(암세포) 또는 10%(정상세포) FBS 함유 배지로 교체하고, 화합물 1을 농도별로 처리하였다. 24시간 후 10 μL 세포 계수 키트-8(Cell Counting Kit-8, Dojindo Molecular Technologies)을 넣고 1시간 뒤 마이크로플레이트 리더(TECAN SPARK)로 480 nm 흡광도를 측정하고, 그 결과를 도 15 내지 21에 나타내었다.
세포주(cell lines) 생물원(biological sources)
BJ 인간 정상 섬유아세포(Human normal fibroblast cell)
CHO 햄스터 상피 난소(hamster epithelial ovary)
Raw264.7 뮤린 대식세포(Murine macrophage cell)
L929 마우스 섬유아세포(Mouse fibroblast cell)
PC3 전립선암(Prostate cancer)
DU145 전립선암
LNCaP 전립선암
HCT116 대장암(Colorectal cancer)
RKO 대장암
SW480 대장암
CT26 대장암
C42B 전립선암
A549 폐암(Lung cancer)
H460 폐암
Huh7 간암(Liver cancer)
4T1 유방암(Breast cancer)
MDA-MB231 유방암
A2780 난소암(Ovary cancer)
SKOV3 난소암
U87MG 신경교종(Glioma)
HTB-9 방광암(Bladder cancer)
T24 방광암
CAL62 악성 갑상선암(Anaplastic thyroid cancer)
BHT-101 악성 갑상선암
BHP103scp 저분화 갑상선암(Poorly differentiated thyroid cancer)
도 15에 나타난 바와 같이, 정상 세포에 처리시 40 μM 미만까지 화합물 1에 대해 70% 이상의 생존율을 나타내었다. 반면, 도 16 내지 20에 차례로 나타난 바와 같이, 화합물 1은 농도 의존적으로 암 세포의 생존율을 감소시켰으며, 구체적으로, 대장암, 갑상선암, 전립선암, 폐암, 유방암, 방광암, 간암, 뇌암, 및 난소암 세포는 각각 5 내지 15 μM, 1 내지 10 μM, 10 내지 15 μM, 3 내지 7 μM, 1 내지 15 μM, 1.2 μM 미만, 10 μM, 및 1 내지 10 μM 또는 그 이상 농도의 화합물 1로 처리시 생존율이 70% 이하로 급격히 감소하기 시작하였다. 이는 본 발명의 화합물이 정상 세포에 대해서는 40 μM 미만까지의 농도에서 독성을 나타내지 않는 반면, 다양한 암 세포에 대해서는 이보다 훨씬 적은 농도에서 세포 생존율을 70% 이하로 저해시키는 바, 이들 암 질환의 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 나타내는 것이다.
실험예 12: HCT-116 대장암 종양 모델에서의 항암 유효성 평가
HCT-116 대장암 세포주를 누드 마우스에 피하 이식하여 대장암 모델을 확립하였다. 상기 대장암 모델을 다음의 3개 군으로 구분하여, 제1군에는 대조군으로서 비히클을, 제2군에는 0.5 mg/kg 용량의 화합물 1을, 제3군에는 1.0 mg/kg 용량의 화합물 1을 각각 투여하였다. 약물은 1일 1회씩 총 21회 경구투여하였다. 치료 효능을 평가하기 위하여, 약물 투여 전, 및 약물 투여 후 3, 7, 10, 14, 17, 21 및 24일에 측정하였다. 종양크기는 다음과 같이 산출하였다:
Figure PCTKR2023011089-appb-img-000077
이때, A 및 B는 각각 종양 장축 및 단축임.
아울러, 약물 투여 전과 약물 투여 후 7, 14 및 21일에 체중을 측정하였다. 상기 산출된 종양 부피 및 측정된 체중을 도 21에 나타내었다. 비히클 투여군은 24일까지 지속적이며 가속화된 종양 성장 추세를 나타내었다. 반면 화합물 1 투여군은 모두 상기 비히클 투여군에 비해 현저히 지연되고 감소된 종양 성장세를 나타내었으며, 통계적으로 유의하게 농도 의존적인 종양 성장 억제 효과를 나타내었다(비히클 투여군 대비 *p＜0.05). 구체적으로, 관찰 마지막 날인 24일에 측정된 종양 부피는 비히클 투여군에 비해 0.5 mg/kg 및 1.0 mg/kg 화합물 1 투여군에서 각각 41% 및 49%의 감소된 종양 성장을 나타내었다. 한편, 비히클 대조군 및 화합물 1 투여군 모두에서 유의적인 체중 변화는 관찰되지 않았다.
실험예 13: CT26 대장암 종양 모델에서의 항암 유효성 평가
CT26 대장암 세포주를 누드 마우스에 피하 이식하여 대장암 모델을 확립하였다. 상기 대장암 모델은 비히클 투여군과 화합물 1 투여군의 2개 군으로 구분하였으며, 이때 화합물 1의 투여량은 상기 실험예 13에서 보다 높은 종양 성장 억제 효과를 나타낸 1.0 mg/kg 용량으로 투여하였다. 상기 실험예 13에서와 유사하게 약물 투여 전 및 약물 투여 후 3, 7, 10, 14, 18, 22, 및 24일에 종양 크기를 산출하고, 약물 투여 전 및 약물 투여 후 7, 14 및 22일에 체중을 측정하여, 도 22에 나타내었다. CT26 대장암 종양 모델에서도 비히클 투여군에 비해 화합물 1 투여군에서 통계적으로 유의하게 종양 성장은 현저히 지연되고 억제되었으며(비히클 투여군 대비 *p＜0.05), 24일에 측정된 종양 부피는 비히클 투여군에 비해 1.0 mg/kg 화합물 1 투여군에서 55%의 감소된 종양 성장을 나타내었다. HCT-116 대장암 모델에서와 마찬가지로 CT26 대장암 모델에서도 비히클 투여군과 화합물 1 투여군 모두 체중 변화를 나타내지 않았다.
추가적으로, 상기 대장암 모델로부터 종양을 적출하여 4% PFA 용액으로 고정한 후, TUNEL 분석을 수행하여 세포사멸 유발 정도를 확인하고, 그 결과를 도 22에 함께 나타내었다. 도 22의 중간에 나타난 바와 같이, 비히클 투여군에서는 28%의 세포사멸이, 1.0 mg/kg 화합물 1 투여군에서는 72%의 세포사멸이 유도되었으며, 이들 수치 간의 통계적 유의성 또한 검증되었다(비히클 투여군 대비 *p＜0.01).
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (15)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2023011089-appb-img-000078
    상기 화학식 1에서,
    R1 및 R1'은 각각 독립적으로 수소, C1-4 알콕시, 또는 할로겐;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, C3-10 사이클로알킬-C1-4 알킬 또는 C1-4 알킬;
    R4는 수소;
    R5는 비치환 또는 옥소, 할로겐, C1-4 할로알킬, C0-4 알킬설포닐, 카르복시 및 C1-4 알콕시카보닐로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 C6-10 아릴, 5-10원 헤테로아릴 또는 5-10원 헤테로사이클릴;
    또는 R4 및 R5는 서로 연결되어 이들이 결합된 질소원자 함께 5원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성함.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 화합물은 하기 화학식 1-1로 표시되는 화합물인 것인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    [화학식 1-1]
    Figure PCTKR2023011089-appb-img-000079
    .
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    R1 및 R1'은 각각 독립적으로 메톡시, 또는 플루오로인 것인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    R2는 수소, 또는 메틸이고,
    R3은 수소, 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸 또는 사이클로헥실메틸인 것인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    R4는 수소이고,
    R5는 비치환 또는 옥소, 플루오로, 클로로, 트리플루오로메틸, 메틸설포닐, 카르복시, 및 tert-부톡시카보닐로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 페닐, 나프틸, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 퀴나졸리닐, 또는 디하이드로퀴놀리닐이거나,
    R4 및 R5는 서로 연결되어 이들이 결합된 질소원자 함께 피페리디닐 또는 아제파닐을 형성하는 것인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 화합물은
    1. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
    2. N'-(4-플루오로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(4-fluorophenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    3. N'-(2-플루오로-4-(메틸설포닐)페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    4. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-페닐프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-phenylpropanehydrazide),
    5. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(나프탈렌-1-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(naphthalen-1-yl)propanehydrazide),
    6. N'-(2-클로로페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(2-chlorophenyl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    7. N'-(4-클로로페닐)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(4-chlorophenyl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    8. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-2-yl)propanehydrazide),
    9. N'-(2-플루오로-4-(메틸설포닐)페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(2-fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    10. N'-(4-클로로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(4-chlorophenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    11. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(나프탈렌-1-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(naphthalen-1-yl)propanehydrazide),
    12. N'-(2-클로로페닐)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(2-chlorophenyl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    13. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(2-플루오로페닐)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(2-fluorophenyl)propanehydrazide),
    14. 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코틴산(6-(2-(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanoyl)hydrazinyl)nicotinic acid),
    15. tert-부틸 6-(2-(2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코티네이트(tert-butyl 6-(2-(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanoyl)hydrazinyl)nicotinate),
    16. 6-(2-(2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로파노일)히드라지닐)니코틴산(6-(2-(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanoyl)hydrazinyl)nicotinic acid),
    17. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-2-yl)propanehydrazide),
    18. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-2-일)아세토히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-2-yl)acetohydrazide),
    19. tert-부틸 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세틸)히드라지닐)니코티네이트(tert-butyl 6-(2-(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)acetyl)hydrazinyl)nicotinate),
    20. 6-(2-(2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세틸)히드라지닐)니코틴산(6-(2-(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)acetyl)hydrazinyl)nicotinic acid),
    21. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)아세토히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)acetohydrazide),
    22. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-(메틸설포닐)페닐)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-(methylsulfonyl)phenyl)propanehydrazide),
    23. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-(메틸설포닐)페닐)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-(methylsulfonyl)phenyl)propanehydrazide),
    24. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피라진-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyrazin-2-yl)propanehydrazide),
    25. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피라진-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyrazin-2-yl)propanehydrazide),
    26. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)propanehydrazide),
    27. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)propanehydrazide),
    28. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리미딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyrimidin-2-yl)propanehydrazide),
    29. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리미딘-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyrimidin-2-yl)propanehydrazide),
    30. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-3-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-3-yl)propanehydrazide),
    31. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-3-일)프로판히드라자이드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-3-yl)propanehydrazide),
    32. N'-(3-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    33. N'-(3-클로로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)-2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    34. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(피리딘-4-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(pyridin-4-yl)propanehydrazide),
    35. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴나졸린-4-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(quinazolin-4-yl)propanehydrazide),
    36. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴놀린-4-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(quinolin-4-yl)propanehydrazide),
    37. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴녹살린린-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(quinoxalin-2-yl)propanehydrazide),
    38. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(2-옥소-1,2-디하이드로퀴놀린-3-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(2-oxo-1,2-dihydroquinolin-3-yl)propanehydrazide),
    39. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(퀴놀린-2-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(quinolin-2-yl)propanehydrazide),
    40. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(1-메틸-2-옥소-1,2-디하이드로퀴놀린-4-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(1-methyl-2-oxo-1,2-dihydroquinolin-4-yl)propanehydrazide),
    41. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(이미다조[1,2-b]피리다진-6-일)프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(imidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl)propanehydrazide),
    42. N'-(벤조[d]티아졸-2-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판히드라자이드(N'-(benzo[d]thiazol-2-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanehydrazide),
    43. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)부탄히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)butanehydrazide),
    44. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-3-메틸부탄히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)-3-methylbutanehydrazide),
    45. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-4-메틸펜탄히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)-4-methylpentanehydrazide),
    46. 3-사이클로헥실-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드(3-cyclohexyl-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
    47. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)-2-메틸프로판히드라자이드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)-2-methylpropanehydrazide),
    48. (S)-2-(4-((S)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드((S)-2-(4-((S)-2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
    49. (R)-2-(4-((R)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드((R)-2-(4-((R)-2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
    50. (S)-2-(4-((R)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드((S)-2-(4-((R)-2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
    51. (R)-2-(4-((S)-2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N'-(4-플루오로페닐)프로판히드라자이드((R)-2-(4-((S)-2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N'-(4-fluorophenyl)propanehydrazide),
    52. 2-(4-(9-히드록시-2-메톡시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N-(피페리딘-1-일)프로판아미드(2-(4-(9-hydroxy-2-methoxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N-(piperidin-1-yl)propanamide),
    53. 2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N-(피페리딘-1-일)프로판아미드(2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)-N-(piperidin-1-yl)propanamide), 또는
    54. N-(아제판-1-일)-2-(4-(2-플루오로-9-히드록시-9-(트리플루오로메틸)-9H-플루오렌-4-일)-1H-피라졸-1-일)프로판아미드(N-(azepan-1-yl)-2-(4-(2-fluoro-9-hydroxy-9-(trifluoromethyl)-9H-fluoren-4-yl)-1H-pyrazol-1-yl)propanamide)인 것인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  7. 하기 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는,
    제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조방법:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2023011089-appb-img-000080
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2023011089-appb-img-000081
    .
  8. 제7항에 있어서,
    상기 반응은 TBTU(2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium tetrafluoroborate) 및 DIPEA(N,N-Diisopropylethylamine) 존재 하에 수행하는 것인, 제조방법.
  9. 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 피루브산 탈수소효소 키나아제 4(Pyruvate dehydrogenase kinase 4; PDK4) 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 조성물은 PDK4의 활성을 억제하는 것인, 약학적 조성물.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 PDK4 활성 관련 질환은 대사성 질환, 염증성 질환 또는 암 질환인 것인, 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 대사성 질환은 비만, 제1형당뇨병, 제2형당뇨병, 당뇨병성 신증, 당뇨병성 신경병증, 대사 증후군, 고지혈증, 고젖산증, 동맥경화증, 협심증, 급성 허혈성 신증, 허혈성 심장 질환, 심근경색, 심부전, 항암제 유발 심근병증, 바이러스성 심근염, 말초 혈관 질환, 간헐적 파행증, 뇌졸중, 미토콘드리아병증, 폐동맥 고혈압, 지방간, 고혈압, 또는 쿠싱 증후군인 것인, 약학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 지방간은 알콜성 지방간 질환, 비알콜성 지방간 질환(non-alcoholic fatty liver diseases; NAFLDs) 및 비알콜성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis; NASH)을 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  14. 제11항에 있어서,
    상기 염증성 질환은 급성 또는 만성 췌장염, 염증성 장질환, 패혈증, 이식편대숙주질환, 또는 샤르코마리투스질환인 것인, 약학적 조성물.
  15. 제11항에 있어서,
    상기 암 질환은 대장암, 갑상선암, 뇌암, 간암, 전립선암, 유방암, 췌장암, 폐암, 방광암 또는 난소암인 것인, 약학적 조성물.
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