WO2024039151A1 - 면역 치료용 초상자성 산화철 나노입자 - Google Patents

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WO2024039151A1
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immune
cells
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clause
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PCT/KR2023/011974
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백선하
박순범
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서울대학교산학협력단
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for immunotherapy of cancer containing superparamagnetic nanoparticles as an active ingredient, a composition for the treatment of immune diseases, a composition for enhancing immunity, and a composition for suppressing decline in immune function or enhancing immune function administered in combination with a chemotherapy anticancer agent. It relates to a composition for suppressing or enhancing immune function due to anticancer treatment and a composition for alleviating, treating, or preventing the decline in immune response in an individual with cancer.
  • cancer unlike other disease treatments, requires very difficult and complex treatment, and the complex treatments are also not completely effective.
  • the methods currently used to treat cancer include surgery, radiation therapy, and chemotherapy. If you have cancer, surgery is performed to remove the cancer. If the cancer is localized and has not spread far, it can be completely cured through surgery. However, since cancer metastasis tends to occur in more than 70% of patients, adjuvant treatments are used concurrently.
  • Radiation therapy one of the adjuvant treatments, is a treatment that kills cancer cells using high-energy radiation. When radiation is applied to cancer, it does not immediately kill cancer cells, but it destroys the ability of cancer cells to proliferate, preventing new cancer cells from being created and dividing further.
  • Chemotherapy is an auxiliary treatment that uses drugs to kill cancer cells after surgery and is performed to kill invisible cancer cells.
  • chemotherapy can also cause side effects such as vomiting, diarrhea, and hair loss.
  • Immunotherapy is a method of treating disease using the patient's body's immune response.
  • most treatments for autoimmune diseases used to date tend to prescribe immunosuppressants that suppress excessive inflammatory responses rather than treatments that suppress the underlying cause of the disease, and biological agents developed through recent research are also used to provide a complete cure. It is not a fundamental treatment.
  • magnetic nanoparticles have self-induced heating characteristics when exposed to an alternating magnetic field, and the hyperthermic effect specifically exposed to a desired area can be applied to various treatments.
  • a new type of treatment method that combines hyperthermia therapy, chemotherapy, and radiation therapy has been in the spotlight.
  • the present inventors have made extensive research efforts to find a medium that can overcome side effects caused by cancer, immune diseases, or anticancer therapy by enhancing immune function, and as a result, Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 , a superparamagnetic nanoparticle, has been developed.
  • the present invention was completed by confirming that immune function can be enhanced.
  • the present invention aims to solve the above-described problems and other problems associated therewith.
  • An exemplary object of the present invention is to provide a composition for cancer immunotherapy containing superparamagnetic nanoparticles represented by the following general formula 1 as an active ingredient.
  • K or L is lithium (Li) or sodium (Na).
  • Monovalent to trivalent cationic metals including magnesium (Mg), calcium (Ca), manganese (Mn), zinc (Zn), aluminum (Al), or gallium (Ga).
  • Another exemplary object of the present invention is to provide a composition for cancer immunotherapy containing superparamagnetic nanoparticles represented by the following general formula 2 as an active ingredient.
  • K, L or M are lithium (Li) or sodium (Na).
  • Monovalent to trivalent cationic metals including magnesium (Mg), calcium (Ca), manganese (Mn), zinc (Zn), aluminum (Al), or gallium (Ga).
  • Another exemplary object of the present invention is to provide a composition for treating immune diseases containing superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.
  • Another exemplary object of the present invention is to provide a composition for enhancing immunity containing superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.
  • Another exemplary object of the present invention is to provide a composition for suppressing decline in immune function or enhancing immune function administered in combination with a chemotherapy anticancer agent, which contains superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient. It is provided.
  • Another exemplary object of the present invention is to provide a composition for suppressing decline in immune function due to anticancer treatment or enhancing immune function, comprising superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient. .
  • Another exemplary object of the present invention is to provide a composition for alleviating, treating or preventing a decrease in immune response in an individual with cancer, comprising superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.
  • the present invention provides a composition for cancer immunotherapy comprising superparamagnetic nanoparticles represented by the following general formula 1 as an active ingredient.
  • K or L is lithium (Li) or sodium (Na).
  • Monovalent to trivalent cationic metals including magnesium (Mg), calcium (Ca), manganese (Mn), zinc (Zn), aluminum (Al), or gallium (Ga).
  • x and y are numbers between 0 and 3, for example, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9. It can be 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 or 3.0.
  • the superparamagnetic nanoparticles may be Mn x Zn 1-x Fe 2 O 4 , and more specifically, the superparamagnetic nanoparticles may be Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 .
  • the present invention provides a composition for cancer immunotherapy comprising superparamagnetic nanoparticles represented by the following general formula 2 as an active ingredient.
  • K, L or M are lithium (Li) or sodium (Na).
  • Monovalent to trivalent cationic metals including magnesium (Mg), calcium (Ca), manganese (Mn), zinc (Zn), aluminum (Al), or gallium (Ga).
  • x, y and z are numbers between 0 and 3, for example, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9. It can be 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 or 3.0.
  • the superparamagnetic nanoparticles may be coated with a biocompatible polymer.
  • Biocompatible polymer materials useful to the human body that can be used in the present invention include polymers that can be easily dissolved in various solvents, such as Poly Ethyleneglycol (PEG), poly(lactide-co-glycolide) (PLGA), Poly( It may be one or more selected from the group of DL-lactide-co-glycolide (PDLGA), poly(hydroxybutyrate), and Polycaprolactone (PCL), and may specifically be Poly Ethyleneglycol.
  • PEG Poly Ethyleneglycol
  • PLGA poly(lactide-co-glycolide)
  • PCL Polycaprolactone
  • cancer immunotherapy refers to a method of treating cancer using the immune response within the patient's body. After activating cancer-specific immune cells, the activated immune cells specifically attack the cancer in the body. This is how to treat it.
  • the cancer immunotherapy may be achieved by injecting superparamagnetic nanoparticles into the subject's body, and specifically, it may be achieved by increasing immune cells by superparamagnetic nanoparticles, and the immune cells are macrophages. It may be one or more selected from the group consisting of macrophages, natural killer cells, and T cells, but is not limited thereto.
  • composition for cancer immunotherapy containing superparamagnetic nanoparticles according to the present invention as an active ingredient can achieve therapeutic efficacy by direct injection into the body.
  • composition for cancer immunotherapy containing superparamagnetic nanoparticles according to the present invention can selectively and uniformly generate high temperatures because it can continuously react with an external magnetic field when applying the magnetic nanoparticles dispersed in target organs.
  • This treatment method can be performed as a stand-alone treatment method or in combination with or auxiliary to conventional treatment methods.
  • superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 were injected into a fibrosarcoma mouse model and a glioblastoma mouse model, respectively, and an alternating magnetic field was applied, resulting in the formation of macrophages and natural cells around the cancer cells. It was confirmed that immune cells such as killer cells and T cells increased and the size of the tumor decreased.
  • composition for cancer immunotherapy of the present invention is typically provided as a pharmaceutical composition. Therefore, the composition for cancer immunotherapy of the present invention includes a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Pharmaceutically acceptable carriers are those commonly used in preparation, and include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, gum acacia, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, Includes, but is not limited to, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, or mineral oil. Suitable pharmaceutically acceptable carriers and agents are described in detail in Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., 1995.
  • the composition for cancer immunotherapy of the present invention is preferably administered parenterally.
  • parenterally When administered parenterally, it can be administered by intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, or intralesional injection.
  • the appropriate dosage of the composition of the present invention can be prescribed in various ways depending on factors such as formulation method, administration method, patient's age, weight, sex, pathological condition, food, administration time, administration route, excretion rate, and reaction sensitivity. there is.
  • the composition for cancer immunotherapy of the present invention includes a therapeutically effective amount of superparamagnetic nanoparticles that exhibit a self-induced heating effect.
  • therapeutically effective amount refers to an amount sufficient to treat the disease for which treatment is intended, and is generally 0.0001-100 mg/kg.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is prepared in unit dosage form by formulating it using a pharmaceutically acceptable carrier and/or excipient according to a method that can be easily performed by a person skilled in the art. Alternatively, it can be manufactured by placing it in a multi-capacity container. At this time, the formulation may be in the form of a solution, suspension, or emulsion in an oil or aqueous medium, or may be in the form of an extract, powder, granule, tablet, or capsule, and may additionally contain a dispersant or stabilizer.
  • the cancer may be fibrosarcoma, brain cancer, lung cancer, colon cancer, liver cancer, breast cancer, stomach cancer, ovarian cancer, skin cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, kidney cancer, or thyroid cancer, but is not limited thereto.
  • the present invention provides a composition for treating immune diseases comprising superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.
  • the superparamagnetic nanoparticles are as described above.
  • the treatment of the immune disease may be achieved by injecting superparamagnetic nanoparticles into the body of the subject, and specifically, it may be achieved by increasing immune cells by superparamagnetic nanoparticles, and the immune cells are macrophages. It may be one or more selected from the group consisting of macrophages, natural killer cells, and T cells, but is not limited thereto.
  • composition for treating immune diseases containing superparamagnetic nanoparticles according to the present invention as an active ingredient can achieve therapeutic efficacy by direct injection into the body.
  • composition for treating immune diseases containing superparamagnetic nanoparticles according to the present invention can selectively and uniformly generate high temperatures because it can continuously react with an external magnetic field when applying the magnetic nanoparticles dispersed in target organs.
  • This treatment method can be performed as a stand-alone treatment method or in combination with or auxiliary to conventional treatment methods.
  • composition for treating immune diseases of the present invention is usually provided as a pharmaceutical composition.
  • Acceptable carriers, administration and preparation of the pharmaceutical composition are as described above.
  • the immune disease may include a disease in which the body's immunity is reduced or a disease in which the body's immunity is enhanced, and may specifically include an immunodeficiency disease, an infectious disease, or an autoimmune disease.
  • Representative diseases in which the body's immunity is reduced include congenital immune deficiency disease, acquired immune deficiency disease, bacterial and viral infectious diseases (e.g., various bacterial infectious diseases, incurable viruses including COVID-19, SARS, MERS, etc.) infection), but is not limited thereto.
  • the temperature can be appropriately adjusted using supermagnetic nanoparticles applied with an alternating magnetic field to prevent excessive heat generation and activate dysfunctional immune cells.
  • the disease in which the body's immunity is enhanced may include, but is not limited to, an autoimmune disease.
  • the disease can be treated by generating heat using supermagnetic nanoparticles applied with an alternating magnetic field to destroy the hyperfunctioning immune cells.
  • the autoimmune diseases include lupus (systemic lupus erythematosus), rheumatoid arthritis, progressive systemic sclerosis (Scleroderma), atopic dermatitis, alopecia areata, psoriasis, pemphigus, Asthma, aphthous stomatitis, chronic thyroiditis, inflammatory enteritis, Behcet's disease, Crohn's disease, dermatomyositis, polymyositis, multiple sclerosis, autoimmune hemolytic anemia, autoimmune hemolytic anemia A group consisting of immune encephalomyelitis, myasthenia gravis, Grave's disease, polyarteritis nodosa, ankylosing spondylitis, fibromyalgia syndrome, and temporal arteritis. It may be selected from .
  • the present invention provides a composition for enhancing immunity containing superparamagnetic nanoparticles represented by the above general formula 1 or general formula 2 as an active ingredient.
  • the superparamagnetic nanoparticles are as described above.
  • immune enhancement refers to the function of promoting an immune response to an antigen non-specifically during the initial activation of immune cells or the function of strengthening immunity by increasing the activity of immune system cells, increasing the activity of immune cells.
  • An immune-enhancing effect can be achieved by stimulating the immune response.
  • macrophages play a major role in the immune response. Phagocytosis, a major role of macrophages, absorbs microorganisms and other pyrogenic particles, and also induces tumor necrosis factor- ⁇ (TNF- ⁇ ).
  • TNF- ⁇ tumor necrosis factor- ⁇
  • cytokines such as interleukin-1 ⁇ (IL-1 ⁇ ), interleukin-12 (IL-12), and cytotoxic and inflammatory substances such as nitric oxide (NO) thereby stimulating the immune response
  • IL-1 ⁇ interleukin-1 ⁇
  • IL-12 interleukin-12
  • NO nitric oxide
  • the immune enhancement may be achieved by injecting superparamagnetic nanoparticles into the body of the subject, and specifically may be achieved by increasing immune cells by superparamagnetic nanoparticles, and the immune cells are macrophages ( It may be one or more selected from the group consisting of Macrophage, Natural killer cell, and T cell, but is not limited thereto.
  • composition for immune enhancement containing superparamagnetic nanoparticles according to the present invention as an active ingredient can achieve therapeutic efficacy by direct injection into the body.
  • composition for immune enhancement containing superparamagnetic nanoparticles according to the present invention can selectively and uniformly generate high temperatures because it can continuously react with an external magnetic field when applying the magnetic nanoparticles dispersed in target organs.
  • This treatment method can be performed as a stand-alone treatment method or in combination with or auxiliary to conventional treatment methods.
  • composition for enhancing immunity of the present invention is usually provided as a pharmaceutical composition.
  • Acceptable carriers, administration and preparation of the pharmaceutical composition are as described above.
  • the present invention provides a method for suppressing immune function decline or suppressing immune function administered in combination with a chemotherapy anticancer agent, comprising superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.
  • a composition for augmentation is provided.
  • the term “combined administration” can be achieved by administering the individual components of the treatment simultaneously, sequentially, or individually.
  • the combination treatment effect is obtained by administering two or more drugs or compositions simultaneously or sequentially, or alternately at regular or undetermined intervals.
  • the combination treatment method is not limited to this, but includes, for example, degree of response, Efficacy measured through response rate, time to disease progression, or survival period is therapeutically superior to the efficacy that can be obtained by administering one or the remaining components of the combination therapy at a typical dose and can provide a synergistic effect. can be defined.
  • the superparamagnetic nanoparticles of the present invention are administered in combination with an anticancer agent, the number of immune cells increases, thereby effectively killing cancer cells, resulting in synergistic anticancer treatment.
  • the anticancer agents include eribulin, carboplatin, cisplatin, Halaven, 5-fluorouracil (5-FU), Gleevec, vincristine, vinblastine, vinorelbine, paclitaxel, and docetaxel. , etoposide, topotecan, irinotecan, dactinomycin, doxorubicin, daunorubicin, valrubicin, flotamide, gemcitabine, mitomycin, or bleomycin, but is not limited thereto.
  • the suppression of immune function decline or the enhancement of immune function may be achieved by injecting superparamagnetic nanoparticles into the body of the subject, and specifically, may be achieved by increasing immune cells by superparamagnetic nanoparticles,
  • the immune cells may be one or more selected from the group consisting of macrophages, natural killer cells, and T cells, but are not limited thereto.
  • composition for suppressing decline in immune function or enhancing immune function which contains superparamagnetic nanoparticles according to the present invention as an active ingredient and is administered in combination with a chemotherapy anticancer agent, can achieve therapeutic efficacy by direct injection into the body.
  • composition for suppressing decline in immune function or enhancing immune function administered in combination with a chemotherapy anticancer agent containing superparamagnetic nanoparticles according to the present invention may continuously react with an external magnetic field when applying magnetic nanoparticles dispersed in target organs. Therefore, high temperatures can be selectively and uniformly generated.
  • This treatment method can be performed as a stand-alone treatment method or in combination with or auxiliary to conventional treatment methods.
  • a composition for suppressing decline in immune function or enhancing immune function which contains the superparamagnetic nanoparticle according to the present invention as an active ingredient and is administered in combination with a chemotherapy anticancer agent, is usually provided as a pharmaceutical composition.
  • Acceptable carriers, administration and preparation of the pharmaceutical composition are as described above.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for suppressing decline in immune function caused by anticancer treatment or enhancing immune function, comprising superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.
  • a composition is provided.
  • the superparamagnetic nanoparticles are as described above.
  • the anti-cancer treatment may be, for example, chemotherapy or radiotherapy administering an anti-cancer agent, but is not limited thereto.
  • the suppression of immune function decline or the enhancement of immune function may be achieved by injecting superparamagnetic nanoparticles into the body of the subject, and specifically, may be achieved by increasing immune cells by superparamagnetic nanoparticles,
  • the immune cells may be one or more selected from the group consisting of macrophages, natural killer cells, and T cells, but are not limited thereto.
  • compositions for suppressing decline in immune function due to anticancer treatment or enhancing immune function containing the superparamagnetic nanoparticles according to the present invention as an active ingredient, are typically provided as pharmaceutical compositions.
  • Acceptable carriers, administration and preparation of the pharmaceutical composition are as described above.
  • the present invention provides a method for alleviating, treating or preventing a decrease in immune response in an individual with cancer, comprising superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.
  • a composition for alleviating, treating or preventing a decrease in immune response in an individual with cancer comprising superparamagnetic nanoparticles represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.
  • the superparamagnetic nanoparticles are as described above.
  • Cancer cells for example, are known to suppress the body's immune function and weaken the activity of immune cells by stimulating immune checkpoint-related proteins. Therefore, when the superparamagnetic nanoparticles of the present invention are administered to an individual with cancer, the number of immune cells increases, thereby suppressing the decline in immune function caused by cancer cells or effectively enhancing immune function.
  • the suppression of immune function decline or the enhancement of immune function may be achieved by injecting superparamagnetic nanoparticles into the body of the subject, and specifically, may be achieved by increasing immune cells by superparamagnetic nanoparticles,
  • the immune cells may be one or more selected from the group consisting of macrophages, natural killer cells, and T cells, but are not limited thereto.
  • a composition for alleviating, treating or preventing a decrease in immune response in an individual with cancer, comprising the superparamagnetic nanoparticle according to the present invention as an active ingredient, is typically provided as a pharmaceutical composition.
  • Acceptable carriers, administration and preparation of the pharmaceutical composition are as described above.
  • the cancer may be fibrosarcoma, brain cancer, lung cancer, colon cancer, liver cancer, breast cancer, stomach cancer, ovarian cancer, skin cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, kidney cancer, or thyroid cancer, but is not limited thereto.
  • the present invention provides a method for producing the superparamagnetic nanoparticles, comprising the following steps.
  • the heating in step (b) may be performed at a rate of 12 to 13°C/min for 10 to 30 minutes, and specifically, may be performed at a rate of 12 to 13°C/min for 20 minutes.
  • the cooling in step (b) may be performed for 30 to 120 minutes, specifically 30 to 90 minutes, and more specifically 30 to 60 minutes.
  • the heating in step (c) may be performed at a rate of 2 to 3°C/min for 5 to 20 minutes, specifically for 5 to 10 minutes.
  • step (c) may be performed for 10 to 60 minutes, specifically 20 to 50 minutes, more specifically 30 to 50 minutes, and more specifically 40 to 50 minutes. You can.
  • the present invention provides a cancer immunotherapy method comprising administering a composition containing the superparamagnetic nanoparticles as an active ingredient to a subject (including mammals such as humans, animals, and mice). provides.
  • the present invention provides a use of the superparamagnetic nanoparticles for cancer immunotherapy.
  • the superparamagnetic nanoparticles according to the present invention have self-induced heating characteristics and high biocompatibility, so they can be applied through in vivo injection and can be usefully used in the treatment of cancer and immune diseases by inducing an increase in immune cells.
  • Figure 1 shows the thermal characteristic curves of superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 produced by the manufacturing method of the present invention and the conventional method, respectively.
  • Figure 2 shows the yield based on the self-induced heating characteristics of superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 produced by the manufacturing method of the present invention and the conventional method, respectively.
  • Figure 3 is an AC magnetic field generation system for magnetically inducing heat generation in the superparamagnetic nanoparticles of the present invention.
  • Figure 4 is a graph showing alternating current magnetic induction self-heating characteristics of superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 synthesized in an example of the present invention.
  • Figure 5 shows the results of visual observation of changes in tumor size over time in the control FSaLL mouse tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field.
  • Figure 6 shows the tumor size of the control FSaLL mouse tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applied an alternating magnetic field through tissue staining.
  • Figure 7 shows the results of confirming the expression levels of Ki67, Active-caspase3, and TUNEL in the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field compared to the control FSaLL mouse tumor model.
  • Figure 8 shows the results of confirming the expression levels of CD31 (PECAM-1) and CD3 (T cells) in the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field compared to the control FSaLL mouse tumor model.
  • Figure 9 shows the results of confirming the expression levels of CD4 and CD8 in the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field compared to the control FSaLL mouse tumor model.
  • Figure 10 shows the results of confirming the expression levels of CD161a and Iba1 in the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field compared to the control FSaLL mouse tumor model.
  • Figure 11 shows the results of confirming the expression levels of CD45RA, CD138, and Ly6c in the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field compared to the control FSaLL mouse tumor model.
  • Figure 12 shows the results of confirming the expression levels of HSP60 and HSP70 in the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field compared to the control FSaLL mouse tumor model.
  • Figure 13 shows the change in tumor temperature over time after superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 were administered to the U87MG mouse tumor model and a magnetic field was applied.
  • Figure 14 shows the experimental group in which superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 were administered and an alternating magnetic field was applied (experimental group 1: 3 alternating magnetic fields applied, experimental group 2: 6 alternating magnetic fields applied) compared to the control FSaLL mouse tumor model. This shows the change in tumor size.
  • Figure 15 shows the U87MG tumor model (control), a group administered Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles to the U87MG tumor model (MNP group), and Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles to the U87MG tumor model.
  • This shows the brain MR image of the group (MNP + AMF group) that was administered and the magnetic field was applied three times.
  • Figure 16 shows the change in tumor size in the control U87MG tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applied an alternating magnetic field.
  • Figure 17 shows the results of confirming the expression levels of Ki67, Active-caspase3, and TUNEL in the U87MG tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applied an alternating magnetic field.
  • Figure 18 shows the results of confirming the expression levels of CD45RA and CD138 in the control U87MG tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field.
  • Figure 19 shows the results of confirming the expression levels of CD3 and Ly6C in the control U87MG tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field.
  • Figure 20 shows the results of confirming the expression levels of CD4 and CD8 in the control U87MG tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field.
  • Figure 21 shows the results of confirming the expression levels of CD161 and Iba1 in the control U87MG tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applying an alternating magnetic field.
  • Figure 22 shows the results of confirming the expression levels of HSP60 and HSP70 in the control U87MG tumor model and the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and applied an alternating magnetic field.
  • Figures 23 to 25 show the results of observing the distribution of nanoparticles and immune cells on the surface of cancer tissue before and after administration of superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and application of an alternating magnetic field to the U87MG tumor model using a fluorescence microscope (red) : nanoparticles, green: fluorescent marker, blue: blood vessels, white: immune cells).
  • Figures 26 to 31 show the results of observing the distribution of nanoparticles and immune cells inside cancer tissue before and after administration of superparamagnetic nanoparticles Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 and application of an alternating magnetic field to the U87MG tumor model using a fluorescence microscope (red) : nanoparticles, green: fluorescent marker, blue: blood vessels, white: immune cells).
  • Fe (III) acetylacetonate Fe(acac) 3 , Aldrich Chemical Co.
  • Mn (II) acetate tetrahydrate Aldrich Chemical Co.
  • Zn (II) acetate dihydrate Zn acetate dihydrate, Aldrich Chemical Co.
  • Oleic acid Aldrich Chemical Co.
  • Oleylamine Aldrich Chemical Co.
  • Benzylether Aldrich Chemical Co.
  • 1,2-hexadecanediol 1,2-hexadecanediol
  • the flask was fixed inside the heating mantle for round bottom flasks, heated to 280°C for 20 minutes at a rate of 12 to 13°C/min, and then cooled to 270°C for 1 hour (step 2). . Afterwards, it was heated to 296.5°C for 10 minutes at a rate of 2 to 3°C/min and the temperature was maintained for 46.5 minutes (step 3). After lowering the temperature to 80°C, 40 mL of ethanol was added to prepare Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 (step 4).
  • the synthesized nanoparticles were coated with Methoxy-PEG-Silane, a biocompatible polymer of 500 Da (Dalton).
  • Methoxy-PEG-Silane a biocompatible polymer of 500 Da (Dalton).
  • the surface of the synthesized nanoparticles was first modified with oleic acid. Oleic acid (3 mL) and NH 4 Cl (0.7 mL) were added together with the nanoparticles in the ethanol solution. The mixture was stirred vigorously for 2 hours, and then the nanoparticles were precipitated by a permanent magnet and washed with acetone to obtain oleic acid-coated nanoparticles.
  • Nanoparticles coated with oleic acid were dispersed in toluene (7.5 mL), and then triethylamine (3.75 mL) and methoxy-PEG-silane 500 Da (0.75 mL) were added. The mixed solution was stirred well for 24 hours. The PEG-coated nanoparticles in the solution were washed with pentane and dispersed in water to create a nanofluid solution.
  • the thermal properties of Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 prepared by the method of Example 1-1 and Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 prepared by the conventional method were compared.
  • the conventional method uses a hot plate instead of a heating mantle in the manufacturing method of Example 1-1, and in the second step, it is heated to 200°C for 20 minutes at a rate of 8 to 9°C/min and maintained for 1 hour, and in the third step, the temperature is 9 to 9°C/min. The difference is that it is heated to 296.5°C for 10 minutes at a rate of 10°C/min.
  • thermal properties were measured using a specially designed AC magnetic field generation system consisting of an AC coil, capacitor, DC power source, wave generator, and PC system.
  • AC magnetic field generation systems operate in a wide frequency range of 0 to 380 KHz with magnetic field strengths of up to 350 Oe and without harmful effects on the human body.
  • nanoparticles have different AC heating capabilities depending on the material, particle size, and size distribution, it is necessary to be able to evaluate the AC heating capacity of various nanoparticles over a wide range of frequencies and magnetic fields.
  • the total amount of solid nanoparticles measured for AC heating properties was fixed at 60 mg in an Eppendorf-tube.
  • each sample was placed on insulating Styrofoam in the center of the sample bed.
  • the tip of the optical fiber was placed inside an Eppendorf tube containing solid Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles.
  • Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles prepared by the method of Example 1-1 and the conventional method, respectively, were subjected to 8 different frequencies (31.9, 47.0, 98.9, 140.0, 168.1, 195.5, 239.9, 360.2 kHz) and 5 Four different magnetic field strengths (80, 100, 120, 140, 160 Oe) were investigated.
  • the total magnetic field generation time is 600 seconds for each measurement.
  • the AC heating temperature was measured with an optical thermometer and cooled when the magnetic field was turned off.
  • Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 prepared by the method of Example 1-1 showed stable thermal properties compared to Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 prepared by the conventional method ( Figure 1, a: Conventional method, b: Method of Example 1-1), all samples showed heat generation above 50°C, confirming that excellent superparamagnetic nanoparticles were produced with 100% yield, and when manufactured by the conventional method, heat generation above 50°C with 49% yield. It was confirmed that superparamagnetic nanoparticles were produced ( Figure 2, a: conventional method, b: method of Example 1-1).
  • the heating characteristics induced by an alternating current (AC) magnetic field of the Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles prepared by the method of Example 1-1 were obtained using a specially designed device consisting of an AC coil, a capacitor, a DC power source, a wave generator, and a PC system. Measurements were made using an AC magnetic field generation system (Figure 3).
  • AC alternating current
  • mice used in this experiment were anesthetized and FSaLL cells (radiation-induced fibrosarcoma from C3H mice created in the Dr. Herman Suit laboratory at Massachusetts General Hospital) were used, and early generation cells were donated by Dr. Suit. used) (5 x 10 6 cells/50 ⁇ L) was administered by subcutaneous injection into the proximal femur of Balb/c nude mice (FSaLL mouse tumor model).
  • glioblastoma model 5 x 10 5 cells/5 ⁇ L of glioblastoma cells (U87MG) were injected into the brain of a nude mouse (U87MG mouse tumor model).
  • the FSaLL mouse tumor model was anesthetized and 100 ⁇ L (30 mg/mL) of PEG-coated Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles were injected into the center of the induced tumor.
  • the mouse was placed in the center of the AC coil system for magnetic hyperthermia, and a magnetic field was applied at an intensity of 140 Oe and a frequency of 100 kHz.
  • a magnetic field was applied six times, for 20 minutes each time.
  • tissue staining using H&E staining and Prussian Blue confirmed that the size of the tumor was significantly reduced ( Figure 6).
  • H&E and Prussian Blue staining methods are widely used in medical diagnosis, and the composition of the tissue can be confirmed by biopsying tissue suspected of cancer through pathology and staining tissue sections with H&E and Prussian Blue staining methods.
  • CD161a a natural killer cell (NK cell), and Iba1, a macrophage, significantly increased in the experimental group compared to the control group ( Figure 10), CD45RA (naive T cell, B cell), and CD138 (plasma cell). ), Ly6c, a macrophage, significantly increased ( Figure 11), confirming that immune cells increased in the experimental group administered superparamagnetic nanoparticles.
  • HSP60 and HSP70 are representative heat shock proteins (HSP) that are responsible for the activation of immune cells such as macrophages and lymphocytes, and dendrite cells. It is well known to activate antigen presentation through activation and maturation of cells.
  • the U87MG mouse tumor model was anesthetized and 5 ⁇ L (30 mg/mL) of Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles was injected into the mouse brain.
  • the mouse was placed in the center of the AC coil system for magnetic hyperthermia, and a magnetic field was applied at an intensity of 140 Oe and a frequency of 100 kHz.
  • a magnetic field was applied 6 times for 20 minutes each time, and while the magnetic field was applied, the temperature of the tumor increased from 36.63°C to a maximum of 38.65°C and then decreased, as shown in Figure 13.
  • Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles were administered to the control U87MG tumor model (control) and U87MG tumor model, and 5 ⁇ L of Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles were treated and then an alternating magnetic field was applied 3 or 6 times.
  • IVIS images stained with GFP and luciferase in experimental groups 1 and 2 that underwent heat treatment MHT
  • the size of the tumor significantly increased in the control group, while the size of the tumor decreased in experimental groups 1 and 2. This was confirmed ( Figure 14).
  • the U87MG tumor model (control), a group administered Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles to the U87MG tumor model (MNP group), and the group administered Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles to the U87MG tumor model.
  • Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles had immunotherapy efficacy by inducing an increase in immune cells such as macrophages, natural killer cells, and T cells.
  • Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles were administered to the U87MG tumor model, and then the distribution of nanoparticles and immune cells in the cancer tissue before and after applying an alternating magnetic field was observed using a fluorescence microscope.
  • Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticles 10 mg/kg were intraarterially injected into the carotid artery of the mouse model ( It was administered by intra-arterial injection and imaged with IVM-CM (Fontocal & Two-photon convertible microscopy) at 1-day intervals for a total of 4 days starting the day after administration. The same location was tracked and imaged at each time point, and the excitation laser source (Ex) and emission spectra (Em) for each fluorescent marker are as follows.
  • Blood vessels (fluorescent marker: CD31-mFluor405) Ex. 405, Em. 425-465; Tumor (fluorescent marker: U87MG-GFP) Ex. 488, Em. 500-550l; Mn 0.5 Zn 0.5 Fe 2 O 4 nanoparticle Ex. 640, Em. 663-733.

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Abstract

본 발명은 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물, 면역질환 치료용 조성물, 면역증강용 조성물, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물. 항암 치료에 의한 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물 및 암을 갖는 개체의 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 초상자성 나노입자는 자기 유도 발열 특성 및 높은 생체적합성을 가지고 있어, 생체 내 주입을 통한 적용이 가능하며, 면역세포의 증가를 유도하여 암 및 면역질환 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

면역 치료용 초상자성 산화철 나노입자
본 발명은 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물, 면역질환 치료용 조성물, 면역증강용 조성물, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물. 항암 치료에 의한 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물 및 암을 갖는 개체의 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.
현대에 들어서 많은 질병들이 치료가 쉽게 가능하게 되었고, 치료가 불가능한 병은 거의 없어졌지만, 암은 다른 질병치료와는 달리 매우 힘들고 복잡한 치료가 요구되고 있으며, 그 복잡한 치료들 또한 완벽하게 효과적이지 못하다. 현재 암 치료에 사용되고 있는 방법은 크게 수술, 방사선 치료와 화학치료가 있다. 암에 걸리면 암을 제거하기 위하여 수술을 하게 되는데, 암이 멀리 퍼지지 않고 국소적으로만 있을 경우에는 수술로도 완치가 가능하다. 하지만 환자의 70%이상이 암 전이가 일어나는 경향이 있어서 보조 치료요법들이 병행된다. 보조 치료요법 중 하나인 방사선 치료는 고 에너지 방사선을 이용하여 암세포를 죽이는 치료법으로서 방사선을 암에 쪼일 경우, 암세포를 즉각 죽이지는 못하나 암세포가 증식하는 기능을 파괴하여 새로운 암세포가 생성되지 못하고 더 이상 분열하지 못하게 한다. 하지만 이 방법은 암세포뿐만 아니라 정상세포에도 영향을 끼친다는 부작용이 존재한다. 화학치료는 수술 후에 약을 사용하여 암세포를 죽이는 보조 치료법으로서 눈에 보이지 않는 암세포를 죽이기 위해 시행한다. 하지만 화학요법 역시 화학요법을 시행하면 구토, 설사, 탈모 등의 부작용이 뒤따를 수 있다.
이러한 부작용들을 최소화하고자, 최근 면역치료 방법이 대두되고 있다. 또한 앞서 언급했듯이 암 전이율은 전체환자의 70%가 넘기 때문에 전이암을 치료하는 것이 암을 완치하는 데에 있어서 필수적이라 볼 수 있고, 면역치료는 이러한 면에서 매우 효과적인 치료 방법이다.
면역치료는 환자 체내의 면역반응을 이용하여 질병을 치료하는 방법이다. 그러나 현재까지 사용되는 대부분의 자가면역질환 치료제로는 근본적인 질병의 원인을 억제하는 치료제가 아닌 과도한 염증 반응을 억제하는 면역 억제제를 처방하는 경향이 있으며, 최근 연구를 통해 개발된 생물학적 제제 또한 완치를 위한 근본적인 치료제가 되지 못하는 실정이다.
한편, 자성 나노입자는 교류 자기장에 노출되었을 시에 자기 유도 발열 특성을 가지게 되며, 원하는 부위에 특이적으로 노출된 고열 효과는 다양한 치료에 응용될 수 있다. 최근에는 온열 치료(Hyperthermia therapy)와 화학적 요법, 방사선 요법을 조합한 새로운 형태의 치료 방법이 각광받고 있다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 면역 기능을 증강시켜 암, 면역질환 또는 항암요법에 의한 부작용을 극복할 수 있는 매체에 대해 예의 연구 노력한 결과, 초상자성 나노입자인 Mn0.5Zn0.5Fe2O4에 의하여 면역기능이 증강될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 전술한 문제 및 이와 연관된 다른 문제를 해결하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 예시적 목적은 하기 일반식 1로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
일반식 1
KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
본 발명의 다른 예시적 목적은 하기 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
일반식 2
KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
본 발명의 다른 예시적 목적은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역질환 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 항암 치료에 의한 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 암을 갖는 개체의 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방용 조성물을 제공하는 것이다.
본 명세서에 개시된 발명의 기술적 사상에 따라 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 문제점을 해결하기 위한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제는 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
상기 목적을 달성하기 위한 일 양태로서, 본 발명은 하기 일반식 1로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물을 제공한다.
일반식 1
KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
구체적으로, 상기 x 및 y는 0과 3사이의 수로, 예컨대, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9. 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3.0일 수 있다.
더욱 구체적으로 상기 초상자성 나노입자는 MnxZn1-xFe2O4일 수 있으며, 더욱 구체적으로, 상기 초상자성 나노입자는 Mn0.5Zn0.5Fe2O4일 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 다른 양태로서, 본 발명은 하기 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물을 제공한다.
일반식 2
KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
구체적으로, 상기 x, y 및 z는 0과 3사이의 수로, 예컨대, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9. 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 또는 3.0일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 초상자성 나노입자는 생체적합성 고분자로 코팅될 수 있다.
본 발명에 사용될 수 있는 인체에 유용한 생체적합성 고분자 물질로는, 다양한 용매에 쉽게 용해될 수 있는 고분자로서, 예를 들어 Poly Ethyleneglycol (PEG), poly(lactide-co-glycolide) (PLGA), Poly(DL-lactide-co-glycolide) (PDLGA), poly(hydroxybutyrate) 및 Polycaprolactone (PCL) 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있고, 구체적으로 Poly Ethyleneglycol일 수 있다.
본 발명의 용어 "암 면역 치료"는 환자 체내의 면역 반응을 이용하여 암을 치료하는 방법으로, 암에 특이적인 면역 세포들을 활성화시킨 후, 활성화된 면역 세포들이 체내에서 암을 특이적으로 공격하게 하여 치료하는 방법이다.
본 발명에 있어서, 상기 암 면역 치료는 초상자성 나노입자를 대상의 신체에 주입하여 이루어지는 것일 수 있고, 구체적으로 초상자성 나노입자에 의한 면역세포 증가에 의해 이루어지는 것일 수 있으며, 상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물은 직접 체내 주입에 의한 방식으로 치료 효능을 달성할 수 있다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 포함하는 암 면역 치료용 조성물은, 표적 기관에 분산되어있는 자성 나노입자 적용시 외부 자기장과 지속적으로 반응할 수 있기 때문에 고온을 선택적으로 균일하게 발생시킬 수 있다. 이러한 치료 방법은 단독의 치료 방법으로서 또는 종래의 치료 방법과 병행하여, 또는 보조적으로 수행될 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 실시예에서는, 섬유육종 마우스 모델 및 교모세포종 마우스 모델에 각각 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 주입하고 교류 자기장을 인가한 결과, 암세포 주변에 대식세포, 자연살상세포 및 T 세포 등의 면역세포의 증가가 발생하고 종양의 크기가 줄어드는 것을 확인하였다.
본 발명의 암 면역 치료용 조성물은 통상적으로 약제학적 조성물로 제공된다. 따라서, 본 발명의 암 면역 치료용 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것 으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록 시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 또는 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., 1995에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 암 면역 치료용 조성물은 비경구 방식으로 투여되는 것이 바람직하다. 비경구 투여를 하는 경우, 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 또는 병변내(intralesional) 주입 등으로 투여할 수 있다. 본 발명의 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 암 면역 치료용 조성물은 치료학적 유효량의 자기 유도 발열 효과를 나타내는 초상자성 나노입자를 포함한다. 용어 "치료학적 유효량" 은 치료 목적의 질환을 치료할 수 있는 충분한 양을 의미하며, 일반적으로 0.0001-100 mg/kg이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나, 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일, 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제, 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제, 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 암은 섬유육종, 뇌암, 폐암, 대장암, 간암, 유방암, 위암, 난소암, 피부암, 췌장암, 전립선, 신장암 또는 갑상선암일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 목적을 달성하기 위한 다른 양태로서, 본 발명은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역질환 치료용 조성물을 제공한다.
상기 초상자성 나노입자는 전술한 바와 같다.
본 발명에 있어서, 상기 면역질환 치료는 초상자성 나노입자를 대상의 신체에 주입하여 이루어지는 것일 수 있고, 구체적으로 초상자성 나노입자에 의한 면역세포 증가에 의해 이루어지는 것일 수 있으며, 상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역질환 치료용 조성물은 직접 체내 주입에 의한 방식으로 치료 효능을 달성할 수 있다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 포함하는 면역질환 치료용 조성물은, 표적 기관에 분산되어있는 자성 나노입자 적용시 외부 자기장과 지속적으로 반응할 수 있기 때문에 고온을 선택적으로 균일하게 발생시킬 수 있다. 이러한 치료 방법은 단독의 치료 방법으로서 또는 종래의 치료 방법과 병행하여, 또는 보조적으로 수행될 수 있다.
본 발명의 면역질환 치료용 조성물은 통상적으로 약제학적 조성물로 제공된다. 상기 약제학적 조성물의 허용되는 담체, 투여 및 제조는 전술한 바와 같다.
상기 면역질환은 인체의 면역이 저하된 질환 또는 인체의 면역이 항진된 질환을 포함할 수 있으며, 구체적으로 면역결핍질환, 감염질환 또는 자가면역질환을 포함할 수 있다.
상기 인체의 면역이 저하된 질환으로는 대표적으로 선천성 면역 결핍질환, 후천성 면역 결핍 질환, 세균성 및 바이러스성 감염질환 (예를 들어, 각종 세균성 감염질환, COVID-19, SARS, MERS 등을 포함한 난치성 바이러스 감염)을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 인체의 면역이 제한된 질환의 경우 교류 자기장을 인가한 초자성 나노입자에 의해 온도를 적당히 조절하여 발열이 많이 나지 않게 하여 기능이 손상된 면역세포를 활성화시킬 수 있다.
상기 인체의 면역이 항진된 질환은 자가면역질환을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 이러한 인체의 면역이 항진된 질환의 경우 교류 자기장을 인가한 초자성 나노입자에 의해 열을 발생시켜 기능이 항진된 면역세포를 파괴하여 질환을 치료할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 자가면역질환은 루푸스(전신 홍반성 낭창), 류머티스성 관절염(rheumatoid arthritis), 전신성 경피증 (Progressive systemic sclerosis,Scleroderma), 아토피 피부염, 원형탈모증(alopecia areata), 건선, 천포창, 천식, 아프타구내염, 만성 갑상선염, 염증성 장염, 베체씨병(Behcet's disease), 크론씨병, 피부근염 (dermatomyositis), 다발성 근염(polymyositis), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 자가면역성 용혈성 빈혈 (Autoimmune hemolytic anemia), 자가면역성 뇌척수염, 중증 근무력증(Myasthenia gravis), 그레이브씨 갑상선 항진증(Grave's disease), 결절성 다발성 동맥염(Polyarteritis nodosa), 강직성 척추염(Ankylosing spondylitis), 섬유조직염(Fibromyalgia syndrome) 및 측두동맥염(Temporal arteritis)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물을 제공한다.
상기 초상자성 나노입자는 전술한 바와 같다.
본 발명의 용어 "면역증강"은 면역세포의 초기활성화 과정에서 비특이적으로 항원에 대해 면역반응을 촉진하는 기능 또는 면역계 세포의 활성을 증대시킴으로써 면역을 강화하는 기능을 의미하며, 면역세포의 활성을 증가시켜 면역반응을 자극함으로써 면역증강 효과를 얻을 수 있다. 예컨데, 대식세포(Macrophage)는 면역반응에서 주요한 역할을 수행하는데 대식세포에서의 주요한 역할인 식세포 작용은 미생물 및 기타 발열성 입자들을 흡수하고, 또한 종양괴사인자-α(tumor necrosis factor; TNF-α), 인터루킨-1β(interleukin; IL-1β), 인터루킨-12(interleukin; IL-12)와 같은 다수의 시토킨(cytokin) 및 일산화질소 (nitric oxide; NO)와 같은 세포독성 및 염증성 물질을 분비함으로써 면역 반응을 자극시킨다 (Wolf et al., 1994; Lee and Hong, 2011; Murray and Wynn, 2011). 따라서 대식세포 활성을 증가시키는 것은 면역증강을 위한 하나의 수단이 될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 면역증강은 초상자성 나노입자를 대상의 신체에 주입하여 이루어지는 것일 수 있고, 구체적으로 초상자성 나노입자에 의한 면역세포 증가에 의해 이루어지는 것일 수 있으며, 상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나 이에 제한되지 않는다
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물은 직접 체내 주입에 의한 방식으로 치료 효능을 달성할 수 있다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 포함하는 면역증강용 조성물은, 표적 기관에 분산되어있는 자성 나노입자 적용시 외부 자기장과 지속적으로 반응할 수 있기 때문에 고온을 선택적으로 균일하게 발생시킬 수 있다. 이러한 치료 방법은 단독의 치료 방법으로서 또는 종래의 치료 방법과 병행하여, 또는 보조적으로 수행될 수 있다.
본 발명의 면역증강용 조성물은 통상적으로 약제학적 조성물로 제공된다. 상기 약제학적 조성물의 허용되는 담체, 투여 및 제조는 전술한 바와 같다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어 "병용 투여"는 치료요법의 개별성분들을 동시, 순차적으로, 또는 개별적으로 투여하는 방식으로 이룰 수 있다. 2 이상의 약물 또는 조성물을 동시에 또는 순차적으로 투여하거나, 또는 일정한 또는 정해지지 않은 간격으로 교대로 투여하는 등의 방법으로 병용 치료 효과를 얻는 것으로, 병용치료법은 이에 한정되지 아니하지만, 예를 들어 반응정도, 반응 속도, 질병 진행까지의 기간 또는 생존 기간을 통해 측정된 효능이 병용치료법의 성분 중 하나 또는 나머지를 통상적인 용량으로 투약하여 얻을 수 있는 효능보다 치료학적으로 우수하면서 상승 효과를 제공할 수 있는 것으로 정의될 수 있다.
본 발명의 초상자성 나노입자를 항암제와 병용하여 투여할 경우, 면역세포 수가 증가함으로써 암세포를 효과적으로 사멸하여 상승적인 항암 치료를 나타낼 수 있다.
본 발명에 있어서, 예를 들어, 상기 항암제는 에리불린, 카보플라틴, 시스플라틴, 할라벤, 5-플루오로우라실(5-FU), 글리벡, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에토포사이드, 토포테칸, 이리노테칸, 닥티노마이신, 독소루비신, 다우노루비신, 발루비신, 플로타미드, 젬시타빈, 미토마이신 또는 블레오마이신일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강은 초상자성 나노입자를 대상의 신체에 주입하여 이루어지는 것일 수 있고, 구체적으로 초상자성 나노입자에 의한 면역세포 증가에 의해 이루어지는 것일 수 있으며, 상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물은 직접 체내 주입에 의한 방식으로 치료 효능을 달성할 수 있다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 포함하는, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물은, 표적 기관에 분산되어있는 자성 나노입자 적용시 외부 자기장과 지속적으로 반응할 수 있기 때문에 고온을 선택적으로 균일하게 발생시킬 수 있다. 이러한 치료 방법은 단독의 치료 방법으로서 또는 종래의 치료 방법과 병행하여, 또는 보조적으로 수행될 수 있다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물은 통상적으로 약제학적 조성물로 제공된다. 상기 약제학적 조성물의 허용되는 담체, 투여 및 제조는 전술한 바와 같다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 항암치료에 의한 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물을 제공한다.
상기 초상자성 나노입자는 전술한 바와 같다.
본 발명에 있어서 상기 항암치료는, 예를 들어 항암제를 투여하는 화학요법 또는 방사선요법일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
종래 항암치료는 암세포뿐만 아니라 정상세포에도 치명적인 손상을 주어 면역기능 저하는 물론 탈모, 설사, 위장장애, 간, 신장독성 등의 부작용을 초래하며, 상기 면역기능 저하는 면역세포의 수가 줄어들고 면역세포 활성도가 감소하는 것을 말한다. 따라서 본 발명의 초상자성 나노입자를, 항암치료를 받고 있는 개체에 투여할 경우, 항암치료에 의해 발생한 면역기능 저하를 억제하거나 면역기능을 효과적으로 증강시킬 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강은 초상자성 나노입자를 대상의 신체에 주입하여 이루어지는 것일 수 있고, 구체적으로 초상자성 나노입자에 의한 면역세포 증가에 의해 이루어지는 것일 수 있으며, 상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 항암치료에 의한 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물은 통상적으로 약제학적 조성물로 제공된다. 상기 약제학적 조성물의 허용되는 담체, 투여 및 제조는 전술한 바와 같다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 암을 갖는 개체의 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.
상기 초상자성 나노입자는 전술한 바와 같다.
암세포는, 예를 들어 면역관문 관련 단백질들을 자극하여 인체의 면역기능을 억제시키며, 면역세포의 활성을 약화시키는 것으로 알려져 있다. 따라서, 본 발명의 초상자성 나노입자를, 암을 갖는 개체에 투여할 경우, 면역세포가 증가하므로 암세포에 의해 발생한 면역기능 저하를 억제하거나 면역기능을 효과적으로 증강시킬 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강은 초상자성 나노입자를 대상의 신체에 주입하여 이루어지는 것일 수 있고, 구체적으로 초상자성 나노입자에 의한 면역세포 증가에 의해 이루어지는 것일 수 있으며, 상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 암을 갖는 개체의 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방용 조성물은 통상적으로 약제학적 조성물로 제공된다. 상기 약제학적 조성물의 허용되는 담체, 투여 및 제조는 전술한 바와 같다.
본 발명에 있어서, 예를 들어, 상기 암은 섬유육종, 뇌암, 폐암, 대장암, 간암, 유방암, 위암, 난소암, 피부암, 췌장암, 전립선, 신장암 또는 갑상선암일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는, 상기 초상자성 나노입자의 제조방법을 제공한다.
(a) Fe (III) 아세틸아세토네이트, Mn (II) 아세테이트 테트라하이드레이트, Zn (II) 아세테이트 디하이드레이트, 1,2-헥사데칸디올, 올레산, 올레일아민 및 벤젤 에테르를 용기에서 혼합하는 단계;
(b) 상기 용기를 270 내지 300℃로 가열한 후, 250 내지 280℃로 냉각시키는 단계;
(c) 상기 냉각 이후 용기를 290 내지 310℃로 가열하고 온도를 유지하는 단계; 및
(d) 상기 유지 이후 온도를 70 내지 90℃로 냉각하는 단계.
본 발명에 있어서, 상기 (b)단계의 가열은 12 내지 13℃/min 속도로 10 내지 30분간 이루어질 수 있고, 구체적으로 12 내지 13℃/min 속도로 20분간 이루어질 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (b)단계의 냉각은 30분 내지 120분간 이루어질 수 있고, 구체적으로 30 내지 90분간 이루어질 수 있으며, 더욱 구체적으로 30분 내지 60분간 이루어질 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (c)단계의 가열은 2 내지 3℃/min 속도로 5 내지 20분간 이루어질 수 있고, 구체적으로 5 내지 10분간 이루어질 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (c)단계의 유지는 10 내지 60분간 이루어질 수 있고, 구체적으로 20 내지 50분간 이루어질 수 있으며, 더욱 구체적으로 30분 내지 50분간 이루어질 수 있고 더욱 구체적으로 40 내지 50분간 이루어질 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 조성물을 대상(인간, 동물, 마우스 등의 포유류을 포함)에 투여하는 단계를 포함하는 암 면역 치료 방법을 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 초상자성 나노입자의 암 면역 치료 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 초상자성 나노입자는 자기 유도 발열 특성 및 높은 생체적합성을 가지고 있어, 생체 내 주입을 통한 적용이 가능하며, 면역세포의 증가를 유도하여 암 및 면역질환 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 제조방법과 종래 방법으로 각각 제조된 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4의 열특성 커브를 나타낸 것이다. (a: 종래 방법, b: 실시예 1-1의 방법)
도 2는 본 발명의 제조방법과 종래 방법으로 각각 제조된 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4의 자기 유도 발열 특성에 의한 수율을 나타낸 것이다. (a: 종래 방법, b: 실시예 1-1의 방법).
도 3은 본 발명의 초상자성 나노입자에 자기적으로 발열을 유도하기 위한 AC 자기장 생성 시스템이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 의해 합성된 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4의 교류 자기 유도 자기 발열 특성을 나타낸 그래프이다.
도 5는 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 시간에 따른 종양 크기 변화를 육안으로 관찰한 결과이다.
도 6은 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 종양 크기를 조직염색을 통해 나타낸 것이다.
도 7은 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 대비 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 Ki67, Active-caspase3 및 TUNEL 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 8은 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 대비 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 CD31(PECAM-1) 및 CD3(T 세포) 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 9는 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 대비 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 CD4 및 CD8 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 10은 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 대비 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 CD161a 및 Iba1의 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 11은 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 대비 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 CD45RA, CD138 및 Ly6c의 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 12는 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 대비 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 HSP60 및 HSP70 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 13은 U87MG 마우스 종양 모델에 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 자기장을 인가한 후 시간에 따른 종양 온도 변화를 나타낸 거이다.
도 14는 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 대비 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군(실험군 1 : 3번 교류 자기장 인가, 실험군 2 : 6번 교류 자기장 인가)의 종양 크기 변화를 나타낸 것이다.
도 15는 대조군인 U87MG 종양 모델(control), U87MG 종양 모델에 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 투여한 그룹(MNP group) 및 U87MG 종양 모델에 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 투여하고 3회 자기장을 인가한 그룹(MNP + AMF group)의 뇌 MR 이미지를 나타낸 것이다.
도 16은 대조군인 U87MG 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 종양 크기 변화를 나타낸 것이다.
도 17은 U87MG 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 Ki67, Active-caspase3 및 TUNEL 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 18은 대조군인 U87MG 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 CD45RA 및 CD138의 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 19는 대조군인 U87MG 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 CD3 및 Ly6C의 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 20은 대조군인 U87MG 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 CD4 및 CD8의 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 21은 대조군인 U87MG 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 CD161 및 Iba1의 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 22는 대조군인 U87MG 종양 모델 및 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군의 HSP60 및 HSP70 발현 정도를 확인한 결과이다.
도 23 내지 25는 U87MG 종양 모델에 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 투여 및 교류 자기장 인가 전후 암조직 표면부의 나노입자 및 면역세포 분포를 형광 현미경을 이용하여 관찰한 결과이다(붉은색: 나노입자, 녹색: 형광표지자, 청색: 혈관, 백색: 면역세포).
도 26 내지 31은 U87MG 종양 모델에 초상자성 나노입자 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 투여 및 교류 자기장 인가 전후 암조직 내부의 나노입자 및 면역세포 분포를 형광 현미경을 이용하여 관찰한 결과이다(붉은색: 나노입자, 녹색: 형광표지자, 청색: 혈관, 백색: 면역세포).
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 나노입자의 합성 및 표면 개질
1-1. 초상자성 나노입자 제조
Fe (III) 아세틸아세토네이트(Fe(acac)3, Aldrich Chemical Co.), Mn (II) 아세테이트 테트라하이드레이트(Mn acetate tetrahydrate, Aldrich Chemical Co.), Zn (II) 아세테이트 디하이드레이트(Zn acetate dihydrate, Aldrich Chemical Co.), 올레산(Oleic acid, Aldrich Chemical Co.), 올레일아민(Oleylamine, Aldrich Chemical Co.), 벤질 에테르(Benzylether, Aldrich Chemical Co.) 및 1,2-헥사데칸디올(1,2-hexadecanediol, Tokyo Chemical Industries Co.)을 혼합하여 고체 상태 MnxZn1-xFe2O4 나노입자를 합성하였다.
구체적으로, 3구 둥근 바닥 플라스크에서 Fe (III) 아세틸아세토네이트(2 mmol), Mn (II) 아세테이트 테트라하이드레이트(0.5 mmol), Zn (II) 아세테이트 디하이드레이트(0.5 mmol) 및 1,2-헥사데칸디올(10 mmol)을 파우더 형태로 혼합한 후 올레산 2.4 mL 및 올레일아민 3.5 mL을 추가하였다(1단계). 이후 벤질 에테르를 20 mL 추가한 후 둥근 바닥 플라스크용 Heating mantle 내부에 플라스크를 고정시키고 12 내지 13℃/min 속도로 20분간 280℃로 가열한 후 1시간 동안 270℃가 되도록 식혀주었다(2단계). 이후 2 내지 3℃/min 속도로 10분간 296.5℃가 되도록 가열한 뒤 46.5분간 온도를 유지시켰다(3단계). 80℃까지 온도를 낮춘 뒤 에탄올 40 mL를 첨가하여 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 를 제조하였다(4단계).
1-2. 합성된 초상자성 나노입자의 표면 개질
합성된 나노입자는 생체 적합성 고분자인 500 Da(Dalton)의 메톡시-PEG-실레인(Methoxy-PEG-Silane)으로 코팅되었다. PEG 층을 코팅하기 위해, 합성된 나노입자의 표면을 올레산에 의해 먼저 변형시켰다. 올레산(3mL)과 NH4Cl(0.7mL)을 에탄올 용액에 나노입자들과 함께 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 격렬하게 교반한 다음, 나노입자가 영구 자석에 의해 침전된 후 아세톤으로 세척하여 올레산으로 코팅된 나노입자를 얻었다. 올레산으로 코팅된 나노입자를 톨루엔(7.5mL)에 분산시킨 후 트리에틸아민(3.75mL)과 메톡시-PEG-실레인 500 Da(0.75mL)을 첨가하였다. 혼합 용액을 24 시간 동안 잘 교반하였다. 용액에 PEG 코팅된 나노입자를 펜테인으로 세척하고 물에 분산시켜 나노유체 용액을 생성시켰다.
실시예 2: 합성된 초상자성 나노입자의 특성 분석
2-1. 제조방법에 따른 열특성 및 수율 비교
상기 실시예 1-1의 방법으로 제조된 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 와 종래 방법으로 제조된 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 의 열특성을 비교하였다. 종래 방법은 실시예 1-1의 제조방법에서 heating mantle 대신 hot plate를 사용하며, 2단계에서 8 내지 9℃/min 속도로 20분간 200℃로 가열하여 1시간동안 유지시키고, 3단계에서 9 내지 10℃/min 속도로 10분간 296.5℃가 되도록 가열하는 차이가 있다.
실시예 1-1의 방법과 종래 방법으로 각각 제조된 Mn0.5Zn0.5Fe2O4의 열특성 및 수율을 비교하였다.
구체적으로, AC 코일, 커패시터, DC 전원, 웨이브 생성기 및 PC 시스템으로 구성된 특수 설계된 AC 자기장 생성 시스템을 사용하여 열특성을 측정하였다. AC 자기장 생성 시스템은 최대 350 Oe의 자기 장 강도로 인체에 유해한 영향을 미치지 않는 0~ 380 KHz의 넓은 주파수 범위에서 작동한다. 나노입자는 물질, 입자 크기 및 크기 분포에 따라 다 른 AC 발열 능력을 갖기 때문에 광범위한 주파수 및 자기장에 걸쳐 다양한 나노입자의 AC 발열 용량을 평가할 수 있어야 한다. AC 발열 특성에 대해 측정된 고체 나노입자의 총량은 에펜도르프 튜브 (Eppendorf-tube)에서 60mg으로 고정되었 다. 격리된 시스템으로 측정 환경을 설계하기 위해 (주변 대기로부터의 AC 가열 측정 간섭을 방지하기 위해) 각 각의 샘플은 샘플 베드 중앙의 절연 스티로폼에 위치되었다. 광섬유의 팁은 고체 상태의 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 함유하는 에펜도르프 튜브의 내부에 위치되었다. 실시예 1-1의 방법과 종래 방법으로 각각 제조된 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 8개의 서로 다른 주파수 (31.9, 47.0, 98.9, 140.0, 168.1, 195.5, 239.9, 360.2 kHz)와 5개의 서로 다른 자기장 세기 (80,100,120,140,160 Oe)로 조사하였다. 총 자기장 발생 시간은 각 측정에서 600 초이다. 자기장이 켜지면, 광학 온도계로 AC 가열 온도를 측정하고 자기장이 꺼지면 냉각시켰다.
그 결과, 실시예 1-1의 방법으로 제조된 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 가 종래 방법으로 제조된 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 대비 안정적인 열특성을 나타내며(도 1, a: 종래 방법, b: 실시예 1-1의 방법), 모든 샘플에서 50℃ 이상의 발열을 나타내어 100% 수율로 우수한 초상자성 나노입자가 제조됨을 확인하였고, 종래 방법으로 제조된 경우 49%의 수율로 50℃ 이상의 발열을 나타내는 초상자성 나노입자가 제조됨을 확인하였다(도 2, a: 종래 방법, b: 실시예 1-1의 방법).
2-2. 자기적으로 유도된 발열 특성 측정
실시예 1-1의 방법으로 제조된 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자의 교류(AC) 자기장에 의해 유도된 발열 특성은 AC 코일, 커패시터, DC 전원, 웨이브 생성기 및 PC 시스템으로 구성된 특수 설계된 AC 자기장 생성 시스템을 사용하여 측정되었다(도 3).
7nm 크기의 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 60mg을 100 kHz 의 주파수 및 140 Oe 세기의 교류 자기장에서 10회 반복적으로 노출시킨 결과, 동일하게 최대 80 ℃의 열이 발생함을 확인하였다(도 4).
실시예 3: 합성된 초상자성 나노입자의 암 면역 치료 효능 확인
3-1. 마우스 종양 모델
동물 치료, 피하 섬유 육종 세포 주입, 교모세포종 주입 및 생체 내 고온 증체 실험은 서울대학교 병원 동물 실험위원회(IACUC) (IACUC No. SNU-161129-2)의 승인을 받은 지침에 따라 수행되었다. 모든 절차는 Balb/c 누드 마우스로 인한 통증의 양을 줄이기 위해 수행되었다. 섬유육종 마우스 종양 모델의 경우, 본 실험에서 사용된 마우스를 마취시키고 FSaLL 세포 (Massachusetts General Hospital의 Dr. Herman Suit laboratory에서 만든 C3H 마우스의 radiation-induced fibrosarcoma으로, Early generation cells을 Dr. Suit로부터 기증받아 사용함) (5 x 106 cell/50 μL)를 Balb/c 누드 마우스 근위 대퇴 부위에 피하 주사하여 투여하였다(FSaLL 마우스 종양 모델).
교모세포종 모델의 경우, 교모세포종 세포(U87MG) 5 x 105 cell/5 μL를 누드 마우스의 뇌에 주입하여 투여하였다(U87MG 마우스 종양 모델).
3-2. 면역세포 증가 분석
각 마우스 모델에서 합성된 초상자성 나노입자에 의한 암 면역 치료 효능을 확인하였다.
먼저, FSaLL 마우스 종양 모델을 마취시키고 PEG-코팅된 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자 100μL(30mg/mL)를 유도된 종양의 중심에 주사하였다. 마우스를 자기 고열을 위해 AC 코일 시스템의 중앙에 놓고 140 Oe 세기 및 100 kHz 주파수로 자기장을 인가하였다. 온열 치료를 위해 6회, 회당 20분씩 교류 자기장을 가하였다.
그 결과, 대조군인 FSaLL 마우스 종양 모델 대비 초상자성 나노입자를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군에서 시간이 지날수록 종양의 크기가 감소함을 육안을 통해 확인하였다(도 5).
또한 H&E staining 및 Prussian Blue를 이용한 조직염색에서도 종양의 크기가 현저히 감소함을 확인하였다(도 6). H&E 및 Prussian Blue 염색법은 의학 진단에서 널리 이용되며, 병리학을 통해 암으로 의심되는 조직을 생검하여 조직 절편을 H&E 및 Prussian Blue 염색법으로 염색함으로써 해당 조직의 구성을 확인할 수 있다.
아울러, 면역조직화학적 검사(immunohistochemistry)를 통해 Ki67, Active-caspase3 및 TUNEL 발현의 변화를 확인하였다. Ki67을 통하여 종양 세포의 핵 단백질의 분포 정도를 확인함으로써, 종양 세포의 세포 분열이 얼마나 활발히 진행되고 있는지 확인할 수 있다. 그와 상반되는 Active-caspase3 및 TUNEL은, 세포 사멸을 의미하는 표지자로서, 세포 사멸(Apoptosis)로 불리는, 세포가 스스로 죽어가는 자살 기전의 진행을 나타낸다. 따라서, 이와 같은 표지자가 활성되어 표시될수록, 종양 세포가 감소하는 결과를 나타내는 것으로 해석할 수 있다.
실험 결과, 대조군 대비 실험군에서 Ki67의 발현은 감소하고, Active-caspase3 및 TUNEL의 발현은 증가함을 확인하였다(도 7).
또한, 대조군 대비 실험군에서 CD31(PECAM-1)의 발현은 감소하나, CD3(T 세포)이 현저히 증가함을 확인하였으며(도 8), CD4 및 CD8의 발현이 증가함을 확인하였다(도 9).
또한, 대조군 대비 실험군에서 자연살상세포(Natural killer cell, NK cell)인 CD161a, 대식세포인 Iba1이 현저히 증가함을 확인하였으며(도 10), CD45RA(naive T 세포, B 세포), CD138(플라즈마 세포), 대식세포인 Ly6c이 현저히 증가하여(도 11), 초상자성 나노입자를 투여한 실험군에서 면역세포가 증가되었음을 확인하였다.
아울러 면역화학염색에 의해 대조군 대비 실험군에서 HSP60 및 HSP70의 발현이 증가하는 것을 확인하였다(도 12). HSP(heat shock protein)60, HSP(heat shock protein)70는 대표적인 열 충격 단백질(heat shock protein, HSP)로 대식세포 및 림프구(lymphocyte) 등과 같은 면역세포들의 활성화(activation), 수상돌기 세포(dendrite cell)의 활성화(activation) 및 성숙화(maturation)를 통하여 항원제시(antigen presentation)를 활성화시키는 것으로 잘 알려져 있다.
이후, U87MG 마우스 종양 모델을 마취시키고 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자 5μL(30mg/mL)를 마우스의 뇌에 주사하였다. 마우스를 자기 고열을 위해 AC 코일 시스템의 중앙에 놓고 140 Oe 세기 및 100 kHz 주파수로 자기장을 인가하였다. 온열 치료를 위해 6회, 회당 20분씩 교류 자기장을 가하였으며, 자기장을 가하는 동안 종양의 온도 변화는 도 13에 나타낸 바와 같이 처음 36.63℃에서 최대 38.65℃까지 증가하였다가 감소하는 양상을 나타내었다.
대조군인 U87MG 종양 모델(control)과 U87MG 종양 모델에 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 투여하고 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자 5μL를 처리한 후 3번 또는 6번 교류 자기장을 인가하여 온열 치료(magnetic hyperthermia, MHT)를 수행한 실험군 1 및 2에 GFP 및 루시퍼레이즈로 염색하여 나타낸 IVIS 이미지 결과, 대조군에서는 종양의 크기가 현저히 증가하는 반면 실험군1 및 2에서는 종양의 크기가 감소하는 것을 확인하였다(도 14).
또한 대조군인 U87MG 종양 모델(control), U87MG 종양 모델에 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 투여한 그룹(MNP group), U87MG 종양 모델에 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 투여하고 3번 자기장을 인가한 그룹(MNP + AMF group)을 GFP 및 루시퍼레이즈로 처리하고 촬영한 뇌 MR 이미지(촬영조건: TR:2000ms/TE:48ms, FA:90o , 1.0mm thickness, spin echo)는 도 15에 나타낸 바와 같다.
대조군인 U87MG 종양 모델 대비 초상자성 나노입자를 투여하고 교류 자기장을 가한 실험군에서 종양의 크기가 현저히 감소하였으며(도 16), 면역조직화학적 검사 결과 대조군 대비 실험군에서 Ki67의 발현량이 감소하고 Active-caspase3 및 TUNEL의 발현량이 증가함을 확인하였으며(도 17), 마찬가지로 대조군 대비 실험군에서 CD45RA(B 세포, naive T 세포) 및 CD138(플라즈마 세포)이 현저히 증가함을 확인하였다(도 18). 또한 대조군 대비 실험군에서 CD3(T 세포) 및 대식세포인 Ly6C이 증가함을 확인하였으며(도 19), CD4(도움 T 세포) 및 CD8(세포독성 T 세포)이 증가함을 확인하였고(도 20), 자연살상세포(Natural killer cell, NK cell)인 CD161 및 미세아교세포 Iba1이 증가함을 확인하였다(도 21).
아울러, 대조군 대비 실험군에서 HSP60 및 HSP70의 발현이 증가함을 확인하였다(도 22).
따라서, 상기 결과로부터, Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자가 대식세포, 자연살상세포 및 T 세포 등 면역세포의 증가를 유도하여 면역 치료 효능을 가짐을 확인하였다.
3-3. 동물모델의 암조직 내 초상자성 나노입자 분포 분석
U87MG 종양 모델에 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 투여한 다음, 교류 자기장을 인가하기 전과 후의 암조직 내 나노입자 및 면역세포의 분포를 형광 형미경을 이용하여 관찰하였다.
구체적으로, U87MG 종양 모델의 종양 세포와 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자, 혈관에 형광표지 후, Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자 10mg/kg을 마우스 모델의 경동맥에 동맥 내 주사(intra-arterial injection)로 투여하고 투여 다음날부터 총 4일간, 1일 간격으로 IVM-CM(Fontocal & Two-photon convertible microscopy)으로 영상화하였다. 동일 위치를 각 시점별로 추적 영상화하였으며, 형광 표지자 별 여기 레이저 소스(excitation laser source, Ex) 및 방출 스펙트라(emission spectra, Em)은 다음과 같다. 혈관(형광 표지자: CD31-mFluor405) Ex. 405, Em. 425-465; 종양(형광 표지자: U87MG-GFP) Ex. 488, Em. 500-550l; Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자 Ex. 640, Em. 663-733.
그 결과, 암조직 표면부의 경우 도 23 내지 25에 나타낸 것처럼, 초기(1 내지 2일)에는 대부분의 나노입자가 암 세포 사이 빈 공간이나 혈관 주변부에 위치하고 있으며, 시간이 경과함에 따라 많은 양의 나노입자가 면역세포에 포획된 형태로 관찰되었다. 또한 1일 내지 2일에는 교류 자기장 인가 후 관찰되는 나노입자가 증가하였으며, 3일 내지 4일 시점에는 교류 자기장 인가 전후 시점간 나노입자 분포에 큰 차이가 없는 것으로 나타났다(붉은색: 나노입자, 녹색: 형광표지자, 청색: 혈관, 백색: 면역세포).
암조직 내부의 경우 도 26 내지 31에 나타낸 것처럼, 대부분의 나노입자가 암세포 사이 빈 공간 또는 형관신호로 구분되는 면역세포에 포획된 형태로 관찰되었으며, 일부 위치에서는 시일이 경과함에 따라 나노입자의 관찰범위가 감소하다가 다시 증가하는 양상이 나타났다.
이러한 결과를 통해, 생체 내 암세포에 Mn0.5Zn0.5Fe2O4 나노입자를 투여하면 면역세포의 증가가 유도된다는 것을 확인하였다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (40)

  1. 하기 일반식 1로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물:
    일반식 1
    KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
    여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 암 면역 치료는 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 암 면역 치료용 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 암 면역 치료용 조성물.
  4. 하기 일반식 1로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역질환 치료용 조성물:
    일반식 1
    KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
    여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 면역질환 치료는 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 면역질환 치료용 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 면역질환 치료용 조성물.
  7. 제4항에 있어서,
    상기 면역질환은 면역결핍질환, 감염질환 또는 자가면역질환인, 면역질환 치료용 조성물.
  8. 하기 일반식 1로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물:
    일반식 1
    KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
    여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 면역 증강은 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 면역증강용 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 면역증강용 조성물.
  11. 하기 일반식 1로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물:
    일반식 1
    KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
    여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강은 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 조성물.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 조성물.
  14. 하기 일반식 1로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 항암 치료에 의한 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물:
    일반식 1
    KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
    여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강은 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 조성물.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 조성물.
  17. 하기 일반식 1로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 암을 갖는 개체의 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방용 조성물:
    일반식 1
    KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
    여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방은 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 조성물.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 조성물.
  20. 하기 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 암 면역 치료용 조성물:
    일반식 2
    KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
    여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  21. 제20항에 있어서,
    상기 암 면역 치료는 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 암 면역 치료용 조성물.
  22. 제21항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 암 면역 치료용 조성물.
  23. 하기 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역질환 치료용 조성물:
    일반식 2
    KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
    여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  24. 제23항에 있어서,
    상기 면역질환 치료는 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 면역질환 치료용 조성물.
  25. 제24항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 면역질환 치료용 조성물.
  26. 제23항에 있어서,
    상기 면역질환은 면역결핍질환, 감염질환 또는 자가면역질환인, 면역질환 치료용 조성물.
  27. 하기 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물:
    일반식 2
    KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
    여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  28. 제27항에 있어서,
    상기 면역증강은 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 면역증강용 조성물.
  29. 제28항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 면역증강용 조성물.
  30. 하기 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 화학요법 항암제와 병용 투여되는 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물:
    일반식 2
    KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
    여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  31. 제30항에 있어서,
    상기 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강은 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 조성물.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 조성물.
  33. 하기 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 항암 치료에 의한 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강을 위한 조성물:
    일반식 2
    KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
    여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  34. 제33항에 있어서,
    상기 면역기능 저하 억제 또는 면역기능 증강은 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 조성물.
  35. 제34항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 조성물.
  36. 하기 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는, 암을 갖는 개체의 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방용 조성물:
    일반식 2
    KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
    여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  37. 제36항에 있어서,
    상기 면역 반응 저하의 완화, 치료 또는 예방은 면역세포의 증가에 의해 이루어지는 것인, 조성물.
  38. 제37항에 있어서,
    상기 면역세포는 대식세포(Macrophage), 자연살상세포(Natural killer cell) 및 T 세포로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 조성물.
  39. 하기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자를 유효성분으로 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는 암 면역 치료 방법:
    일반식 1
    KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
    여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속,
    일반식 2
    KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
    여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
  40. 하기 일반식 1 또는 일반식 2로 표시되는 초상자성 나노입자의 암 면역 치료 용도:
    일반식 1
    KxLyFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3)
    여기서, K 또는 L은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속,
    일반식 2
    KxLyMzFe2(3)O4 (0 ≤ x ≤ 3, 0 ≤ y ≤ 3, 0 ≤ z ≤ 3)
    여기서, K, L 또는 M은 리튬(Li), 나트륨(Na). 마그네슘(Mg), 칼슘(Ca), 망간(Mn), 아연(Zn), 알루미늄 (Al) 또는 갈륨(Ga)을 포함하는 1가 내지 3가의 양이온 금속.
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