WO2024010365A1 - 신규한 tctp 결합분자 - Google Patents

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WO2024010365A1
WO2024010365A1 PCT/KR2023/009510 KR2023009510W WO2024010365A1 WO 2024010365 A1 WO2024010365 A1 WO 2024010365A1 KR 2023009510 W KR2023009510 W KR 2023009510W WO 2024010365 A1 WO2024010365 A1 WO 2024010365A1
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WO
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amino acid
acid sequence
seq
heavy chain
light chain
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Application number
PCT/KR2023/009510
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English (en)
French (fr)
Inventor
이광희
유정현
전형수
김원태
Original Assignee
주식회사 부스트이뮨
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Publication date
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer

Definitions

  • the present invention relates to a novel binding molecule or fragment thereof that specifically binds to extracellular TCTP (translationally controlled tumor protein).
  • the binding molecule and its fragment according to the present invention can be used to diagnose, treat or prevent cancer.
  • the binding molecules and fragments thereof according to the present invention can be used to alleviate or prevent immune suppression in the tumor immune microenvironment.
  • the binding molecule and its fragment according to the present invention can be used to diagnose, treat, or prevent cancer in patients who do not respond, have a limited response, or are likely to respond to treatment using anticancer immunotherapy.
  • the tumor immune microenvironment promotes or inhibits the growth of tumor cells through various interactions that occur between tumor cells and various surrounding cells.
  • Different cell types exist in the tumor immune microenvironment including various fibroblasts, endothelial cells, mast cells, and immune cells.
  • Immune cells present in the tumor immune microenvironment include T lymphocytes, natural killer (NK) cells, tumor-associated macrophages (TAM), dendritic cells (DC), myeloid-derived immunosuppressive cells (MDSC), and regulatory T cells (Treg). and neutrophils.
  • T lymphocytes natural killer (NK) cells
  • TAM tumor-associated macrophages
  • DC dendritic cells
  • MDSC myeloid-derived immunosuppressive cells
  • Reg regulatory T cells
  • neutrophils neutrophils.
  • TCTP is a highly conserved protein in eukaryotes. TCTP is located in both the cytoplasm and the nucleus, is expressed in a variety of tissues, and is regulated in response to a diverse range of extracellular stimuli. TCTP is also found as a dimer and is known to interact with other proteins, including MCL1 and p53 (e.g., Acunzo et al. (2014) Cancer treatment reviews 40.6: 760-769). It has been reported that dimers of TCTP can be formed between intact TCTP or its N-terminal truncated forms (Kim et al. (2009): PloS one 4.7: e6464).
  • TCTP intracellularly using nucleic acid molecules targeting the mRNA encoding TCTP, such as antisense oligonucleotides, siRNA and shRNA, have been proposed (e.g. WO 2012/080509), but extracellularly The function of TCTP has not yet been established.
  • nucleic acid molecules targeting the mRNA encoding TCTP such as antisense oligonucleotides, siRNA and shRNA
  • TCTP is released from tumor cells, and that the released TCTP is an immune system that regulates the function or balance (aspects such as the number and lifespan of cells) of immune cells such as T cells, NK cells, and/or MDSCs in the tumor immune microenvironment.
  • immune cells such as T cells, NK cells, and/or MDSCs in the tumor immune microenvironment.
  • T cells T cells
  • NK cells NK cells
  • MDSCs in the tumor immune microenvironment.
  • the novel binding molecules according to the present invention specifically bind to extracellular TCTP and inhibit its function outside the cell, thereby inhibiting the function of suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment and/or activating the function of anti-cancer immune cells. You can.
  • the present invention provides a novel binding molecule or fragment thereof that specifically binds to extracellular TCTP.
  • the present invention provides a binding molecule or fragment thereof that binds to human TCTP with a dissociation constant (Kd) of about 1 x 10 -7 M or less or 5 x 10 -8 M or less as measured by surface plasmon resonance.
  • Kd dissociation constant
  • the binding molecule or fragment thereof may bind to TCTP, a truncated product thereof, or a multimer thereof to inhibit its function outside the cell, thereby inhibiting the function of suppressive immune cells and/or activating anti-cancer immune cells.
  • the present invention relates to TCTP or a post-translational variant thereof, comprising one or more CDR sequences of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 as defined in (a) to (f) below, or A binding molecule or fragment thereof that specifically binds to a truncated fragment or multimer thereof is provided.
  • the light chain CDR2 has the amino acid sequence of X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (wherein V, X3 is N, S or T, X4 is I, K, N, Q, S or T, X5 is L, R, S or W, P, Q or Y, and X7 is F, S or T) or a conservative amino acid substitution thereof,
  • Figures 1A and 1B show the results of an ELISA test to assay the binding of anti-TCTP antibodies to human TCTP.
  • Figure 2 shows the results of testing the binding ability of variants of anti-TCTP Ab10 antibody to mouse TCTP and human TCTP through ELISA.
  • Figure 3A is an ELISA test result showing that anti-TCTP antibody inhibits TCTP-TLR2 binding.
  • Figure 3b shows the results of the HEK BlueJet hTLR2 reporter cell test showing that anti-TCTP antibody inhibits TLR2 signaling.
  • Figures 4A-4F are representative plots showing FACS analysis of single cell suspensions from HT29 tumors implanted subcutaneously in T cell-free BALB/c nude mice.
  • Figure 5 shows the results of measuring the level of PMN-MDSC through FACS analysis when anti-TCTP antibody was treated with an HT29 tumor subcutaneously implanted in BALB/c nude mice without T cells.
  • Figure 6a shows the change in tumor volume over time when human TCTP knock-in SL4 cells were treated with anti-TCTP antibody alone.
  • Figures 6b to 6e show changes in tumor volume over time when four different types of cancer cells (Pan02, Hepa1-6, B16BL6, MC38) were treated with anti-TCTP antibody or anti-PD-1 antibody.
  • Figure 7 shows the change in tumor volume over time when B16F10 cells were treated with anti-PD-1 antibody and anti-TCTP antibody alone or in combination.
  • Figure 8 shows the change in tumor volume over time when SL4 cells were treated with anti-CTLA-4 antibody and anti-TCTP antibody alone or in combination.
  • the present invention relates to a combination that specifically binds to extracellular TCTP and inhibits its function outside the cell, thereby suppressing the function of suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment and/or activating the function of anti-cancer immune cells. It relates to molecules or fragments thereof.
  • extracellular preferably refers to the tumor immune microenvironment. According to previous studies of the present invention, it was confirmed that TCTP is released from tumor cells, especially damaged or dead tumor cells under stress conditions. Accordingly, “extracellular” may mean released from such tumor cells, but such tumor cells are not necessarily limited to damaged or dead cells.
  • Tumors are known to exert a variety of strategies to slow down immune responses that can impede their own growth, including activation of suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment, suppression of anticancer immune cells, or immunosuppressive cytokines. /Includes upregulation of chemokines.
  • Suppressive immune cells include, for example, tumor-associated macrophages (TAMs), myeloid-derived immune suppressor cells (MDSCs), tumor-associated neutrophils (TANs), cancer-associated fibroblasts (CAFs), and regulatory T cells (Tregs).
  • TAMs tumor-associated macrophages
  • MDSCs myeloid-derived immune suppressor cells
  • TANs tumor-associated neutrophils
  • CAFs cancer-associated fibroblasts
  • Regs regulatory T cells
  • Anticancer immune cells in the tumor immune microenvironment include, for example, T cells and NK cells, but are not limited to these.
  • Immunosuppressive cytokines and chemokines secreted into the tumor immune microenvironment include, for example, CCL2, CCL3, CCL5, CCL17, CCL19, CCL21, CCL22, CCL28, CXCL5, CXCL8, CXCL12, CXCL15, CXCL17, MIF, HMGB1, These include CSF, CSF2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-13, G-CSF, PGE2 and TGF- ⁇ .
  • alleviating or suppressing immune suppression in the tumor immune microenvironment means reducing, suppressing, or inhibiting the activity of suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment, and/or increasing, enhancing, or activating the activity of anticancer immune cells. / Alternatively, it means that the activity of immunosuppressive cytokines or chemokines is downregulated.
  • the “extracellular function” of TCTP may include, for example, binding to immunomodulatory receptors (e.g., TLR2) present on suppressive immune cells (e.g., bone marrow-derived immunosuppressive cells), or It may be by inducing the secretion of cytokines (eg, CXCL1 and CXCL2) from suppressive immune cells (eg, bone marrow-derived immunosuppressive cells).
  • TLR2 immunomodulatory receptors
  • suppressive immune cells e.g., bone marrow-derived immunosuppressive cells
  • cytokines eg, CXCL1 and CXCL2
  • suppressive immune cells eg, bone marrow-derived immunosuppressive cells
  • Inhibiting the function of suppressive immune cells means that the immunosuppressive activity of suppressive immune cells is directly or indirectly reduced, suppressed, or inhibited.
  • Such reduction, suppression or inhibition of immunosuppressive activity may mean that the accumulation or recruitment of suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment is reduced, suppressed or inhibited.
  • the immunosuppressive activity of suppressive immune cells is reduced, suppressed, or inhibited, for example, by inducing death of suppressive immune cells, reducing the survival rate of suppressive immune cells, and secreting cytokines that suppress anticancer immunity by suppressive immune cells. This can occur due to decreased secretion of T cell inhibitory substances by suppressive immune cells, decreased differentiation into suppressive immune cells, and suppression of immune checkpoint expression by suppressive immune cells.
  • the effect of suppressing the function of suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment and/or activating the function of anti-cancer immune cells by specifically binding to extracellular TCTP and inhibiting its function outside the cell is detailed below. This can be achieved by the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention.
  • the binding molecule or fragment thereof according to the present invention is human TCTP or a truncated product thereof with a dissociation constant (Kd) of about 1 x 10 -7 M or less or about 5 x 10 -8 M or less as measured by surface plasmon resonance.
  • Kd dissociation constant
  • surface plasmon resonance refers to an optical phenomenon that allows analysis of interactions conducted by detecting protein concentration in a biosensor matrix, for example, using the BIAcore TM system.
  • the binding molecule or fragment thereof according to the present invention may also include one or more CDR sequences of heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2 and light chain CDR3 as defined in (a) to (f) below. You can.
  • the light chain CDR2 has the amino acid sequence of X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (wherein V, X3 is N, S or T, X4 is I, K, N, Q, S or T, X5 is L, R, S or W, P, Q or Y, and X7 is F, S or T) or a conservative amino acid substitution thereof,
  • a “conservative amino acid substitution” is one in which an amino acid residue is replaced by another amino acid residue having a side chain (R group) with similar chemical properties (e.g., charge or hydrophobicity).
  • conservative amino acid substitutions do not substantially change the functional properties of the protein.
  • the percent sequence identity or degree of similarity may be adjusted upward to correct for the conservative nature of the substitutions. Means for performing this adjustment are well known to those skilled in the art. See Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331].
  • Examples of groups of amino acids with side chains with similar chemical properties include (1) aliphatic side chains: glycine, alanine, valine, leucine, and isoleucine; (2) Aliphatic-hydroxyl side chains: serine and threonine; (3) Amide-containing side chains: asparagine and glutamine; (4) aromatic side chains: phenylalanine, tyrosine, and tryptophan; (5) basic side chains: lysine, arginine, and histidine; (6) acidic side chains: aspartate and glutamate, and (7) sulfur-containing side chains: cysteine and methionine.
  • Preferred conservative amino acid substitution groups are: valine-leucine-isoleucine, phenylalanine-tyrosine, lysine-arginine, alanine-valine, glutamate-aspartate, and asparagine-glutamine.
  • conservative substitutions can be made as described in Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-45. It can be any change with a positive value in the PAM250 log-likelihood matrix.
  • the binding molecule or fragment thereof of the present invention may include heavy chain CDR1, heavy chain CDR2, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2, and light chain CDR3 containing the following amino acid sequences or conservative amino acid substitutions thereof.
  • Antibody Ab1 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYYMH (SEQ ID NO: 1) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 2) GITGTTPFDY (SEQ ID NO: 3) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 RASQGIRNDLG (SEQ ID NO: 4) AASSLQS (SEQ ID NO: 5) LQHNSYPYT (SEQ ID NO:6)
  • Antibody Ab3 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYYMH (SEQ ID NO: 13) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 14) LGTTGYYYFDY (SEQ ID NO: 15) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 RASQSIGSSLH (SEQ ID NO:16) YASQSFS (SEQ ID NO:17) HQSSSLPRT (SEQ ID NO:18)
  • Antibody Ab4 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 SNAMH (SEQ ID NO:19) WINAGNGNTKYSQKFQG (SEQ ID NO: 20) GYYDILTGYYTTDAFDI (SEQ ID NO: 21) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 RSSQSLVYSDGNTYLN (SEQ ID NO: 22) KVSNRDS (SEQ ID NO:23) MQGTHWPYT (SEQ ID NO:24)
  • Antibody Ab5 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 SYAMH (SEQ ID NO:25) WINAGNGYTEYSQKFQG (SEQ ID NO: 26) RGYFDWWAFDY (SEQ ID NO:27) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 RASQSIGSSLH (SEQ ID NO:28) YASQSFS (SEQ ID NO:29) HQSSSLPQT (SEQ ID NO:30)
  • Antibody Ab6 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 SSNWWS (SEQ ID NO:31) EIDHSGTTTYNPSLKS (SEQ ID NO: 32) DGSGSYEGY (SEQ ID NO: 33) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 RASQAISNHLA (SEQ ID NO:34) AASSLQS (SEQ ID NO:35) QQYHSYPIT (SEQ ID NO:36)
  • Antibody Ab7 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 SSNWWS (SEQ ID NO:37) EIYHGVTTYNPSLKS (SEQ ID NO:38) DGSGSYEGY (SEQ ID NO:39) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 RASQDISNYLA (SEQ ID NO: 40) AASSLQS (SEQ ID NO:41) QQYHYYPIT (SEQ ID NO: 42)
  • Antibody Ab8 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 SYAMH (SEQ ID NO: 43) WINAGNGNTKYSQKFQD (SEQ ID NO: 44) WVFDY (SEQ ID NO:45) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 RSSQSLVHRDGNTYLS (SEQ ID NO: 46) KISNRFF (SEQ ID NO:47) MQATQFPHT (SEQ ID NO:48)
  • Antibody Ab9 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 SNSAAWN (SEQ ID NO: 49) RTYYRSKWYNDYAVSVKS (SEQ ID NO: 50) EGITVGRGVMLYFDL (SEQ ID NO: 51) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 RSSQSLVYSDGNTHLK (SEQ ID NO: 52) KVSKWDS (SEQ ID NO: 53) MQGTHWPPT (SEQ ID NO:54)
  • Antibody Ab10 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 56) PAPRRGAFDI (SEQ ID NO: 57) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • Antibody Ab15 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 VNAMH (SEQ ID NO:79) WINAGTGKTKYSQKFQG (SEQ ID NO: 80) GRAVAFDP (SEQ ID NO: 81) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 TGTSSDVGGYDYVS (SEQ ID NO: 82) EVNKRPS (SEQ ID NO:83) NSYAGNNNLV (SEQ ID NO:84)
  • Antibody Ab10-1 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNSSGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 127) PAPRRGAFDI (SEQ ID NO: 57) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • Antibody Ab10-2 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 56) LAPRLRGAFDI (SEQ ID NO: 128) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • Antibody Ab10-3 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 56) PAWRLRGAFDI (SEQ ID NO: 129) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • Antibody Ab10-4 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 56) PAPRLRMAFDI (SEQ ID NO: 130) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • Antibody Ab10-5 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 56) PAPRLRGAYDI (SEQ ID NO: 131) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • Antibody Ab10-6 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 56) PAPRRGAFDI (SEQ ID NO: 57) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGTKKVS (SEQ ID NO: 132) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • Antibody Ab10-8 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 56) PAPRRGAFDI (SEQ ID NO: 57) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) VTWDSSLRAVV (SEQ ID NO: 134)
  • Antibody Ab10-9 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPISGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 135) PAPRRGAFDI (SEQ ID NO: 57) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • Antibody Ab10-10 CDR sequence Heavy chain CDR1 Heavy chain CDR2 Heavy chain CDR3 GYTFTGYYMH (SEQ ID NO:55) WINPNTGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 136) PAPRRGAFDI (SEQ ID NO: 57) Light chain CDR1 Light chain CDR2 Light chain CDR3 SGSSSNIGNKKVS (SEQ ID NO: 58) DDNKRPS (SEQ ID NO:59) ATWDSSLRAV (SEQ ID NO:60)
  • the binding molecule or fragment thereof of the present invention may also have a heavy chain variable region comprising the following amino acid sequence or an amino acid sequence that is at least 70%, 80%, or 90% homologous thereto.
  • Heavy chain variable region sequences of TCTP-specific antibodies according to the present invention Antibody ID Heavy chain variable region sequence Ab1 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT GYYMH WVRQAPGQGLEWMG WINPNSGGTNYAQKFQG WVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR GITGTTPFDY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 137) Ab2 MDTLCYTLLLLTTPSWVLSQVTLKESGPVLVKPTETLTTLTCTVSGFSLS NARMGVS WIRQPPGKALEWLA HIFSNDEKSYSTSLKS RLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR VLLWFGELYFDY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 139) Ab3 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT GYYMH
  • variable region sequence correspond to the heavy chain CDR1, CDR2, and CDR3 of the antibody in question.
  • the binding molecule or fragment thereof of the present invention may also have a light chain variable region comprising the following amino acid sequence or an amino acid sequence that is at least 70%, 80%, or 90% homologous thereto.
  • Light chain variable region sequences of TCTP-specific antibodies according to the present invention
  • Antibody ID Light chain variable region sequence
  • Ab1 MRVPAQLLGLLLLWFPGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGIRNDLG WYQQKPGKAPKRLIY AASSLQS GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYY LQHNSYPYT FGQGTKLEIK
  • Ab2 MEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVMTQSPATLSVFPGERATLSC RASQSVSSNLA WYQQKPGQAPRLLIY GASTRAT GIPARFSGSGSGTECTLTISSLQSEDFAVYYC QQYNNWPRT FSQGTKVEIK
  • Ab3 MLPSQLIGFLLLWVPASRGEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITC RASQSIGSSLH WYQQKPDQSPKLLIK Y
  • variable region sequence correspond, in order, to the light chain CDR1, CDR2, and CDR3 of the antibody.
  • Sequence homology for a polypeptide is also referred to as sequence similarity or sequence identity and is usually determined using sequence analysis software. Protein analysis software matches similar sequences using similarity measures that assign various substitutions, deletions, and other modifications, including conservative amino acid substitutions.
  • the GCG software includes default parameters for determining sequence homology or sequence identity between closely related polypeptides, e.g., homologous polypeptides from different species of an organism, or between a wild-type protein and its mute. Includes programs such as Gap and Bestfit that can be used together (GCG Version 6.1). Polypeptide sequences can also be compared using FASTA using default or recommended parameters or using the program in GCG version 6.1.
  • the light chain CDR2 is SEQ ID NO: 5
  • the light chain CDR3 has the sequence containing the amino acid sequence numbered 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 or 134 It may be a binding molecule or fragment thereof that competes with the antibody for binding to human TCTP.
  • the term “compete for binding” means that a binding molecule, especially an antibody or antigen-binding fragment thereof, binds to an antigen and inhibits or blocks the binding of another antibody or antigen-binding fragment thereof.
  • the term also includes competition in both directions between two antibodies, i.e., the first antibody binds and blocks the binding of the second antibody, and vice versa.
  • the first antibody and the second antibody can bind the same epitope.
  • the first and second antibodies may bind different but overlapping epitopes such that binding of one blocks and inhibits binding of the second antibody, for example, through steric hindrance.
  • Cross-competition between antibodies can be measured by methods known in the art, for example, by real-time, label-free biolayer interferometric analysis.
  • variant may refer to a form in which the polypeptide backbone (e.g., amino acid sequence) of TCTP has been altered, or a form in which the TCTP polypeptide has undergone post-translational modification (e.g., glycosylation or phosphorylation).
  • post-translational modification e.g., glycosylation or phosphorylation
  • the term “specifically binds” means binding that is measurably different from a non-specific interaction. Specific binding can be determined by competing with a target-like control molecule that has no binding activity. Assay of “specific binding” can be performed through methods known in the art, including, for example, Western blotting, ELISA, RIA, ECL, IRMA, SPR (surface plasmon resonance ) tests and peptide scans.
  • affinity refers to the strength of interaction between an antibody or antigen-binding fragment thereof and an antigen, and refers to characteristics of the antigen such as its size, shape, and/or charge. and the CDR sequence of the antibody or antigen-binding fragment. Methods for determining such affinity are known in the art.
  • binding molecule refers to any molecule capable of recognizing or interacting with and specifically binding TCTP.
  • the binding molecule according to the present invention is preferably a polypeptide, and may include a protein portion and a non-protein portion (eg, chemical linker, cross-linking agent, drug, etc.).
  • the polypeptide is an antibody.
  • Antibodies or antigen-binding fragments thereof can be produced by hybridomas (e.g., Kohler and Milstein 1975), recombinant DNA techniques (e.g., US Pat. No. 4,816,567), or enzymatic or chemical cleavage of intact antibodies. there is. Alternatively, they may be isolated in the same manner as phage antibody libraries (e.g., Clarkson et al., 1991; Marks et al., 1991). Antibodies can also be obtained by performing B cell screening or hybridoma screening using mice obtained through genetic engineering techniques, such as humanized mice (e.g., CAMouse®) (https://www.
  • light chain includes full-length light chains and fragments thereof having sufficient variable region sequence to provide binding specificity for an antigen or epitope.
  • the full-length light chain includes the variable region domain VL, and the constant region domain CL.
  • the variable region domain of the light chain is located at the amino terminus of the light chain polypeptide.
  • Types of light chains include kappa and lambda chains.
  • heavy chain includes full-length heavy chains and fragments thereof having sufficient variable region sequence to provide binding specificity for an antigen or epitope.
  • the full-length heavy chain includes a variable region domain VH and three constant region domains CH1, CH2, and CH3.
  • the VH domain is at the amino terminus of the heavy chain polypeptide
  • the CH domain is at the carboxy terminus
  • CH3 is located closest to the carboxy terminus.
  • Heavy chains include isotypes of IgG (including the IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, and IgG4 subtypes), IgA (including the IgA1 and IgA2 subtypes), IgM, and IgE.
  • fragment means an “antigen-binding fragment,” and an “antigen-binding fragment” of a binding molecule, especially an antibody or immunoglobulin chain (heavy chain or light chain), is a partial fragment compared to the full-length chain. Although it lacks amino acids, it contains a portion of an antibody that can specifically bind to an antigen. These fragments can be said to be biologically active in that they can specifically bind to a target antigen or compete with other antibodies or antigen-binding fragments for binding to a specific epitope. In one aspect, such fragments comprise at least one CDR present in a full-length light or heavy chain, and in some embodiments, comprise short heavy and/or light chains, or portions thereof.
  • Immunologically functional immunoglobulin fragments include, but are not limited to, Fab, Fab', F(ab') 2 , Fv, domain antibodies, and single chain antibodies. It can also be derived from any mammal, including but not limited to human, mouse, rat, camelid or rabbit.
  • the functional portion of the antibody, such as one or more CDRs disclosed herein, can be covalently linked to a second protein or small molecule compound and used as a targeted therapeutic agent for a specific target.
  • a “Fab fragment” consists of one light chain and one heavy chain containing only the CH1 and variable regions.
  • the heavy chain of a Fab molecule cannot form disulfide bonds with other heavy chain molecules.
  • the “Fc” region contains two molecules of heavy chain fragments containing the CH2 and CH3 domains of the antibody. These two heavy chain fragments are linked to each other by two or more disulfide bonds and hydrophobic interactions of the CH3 domain.
  • the "F(ab') 2 fragment” refers to a fragment of two molecules of a heavy chain, including two light chains and two molecules of a heavy chain, including the variable region, CH1, and a portion of the constant region between the CH1 and CH2 domains, as previously described. Interchain disulfide bonds are formed between them. Therefore, the F(ab') 2 fragment is composed of two Fab' fragments, and the two Fab' fragments are associated with each other by a disulfide bond between them.
  • “Fv region” is an antibody that includes the variable regions of the heavy and light chains, but not the constant region.
  • a “single chain antibody” is a single polypeptide chain with an antigen binding region where the heavy and light chain variable regions are linked by a flexible linker.
  • single chain antibodies see, for example, US Pat. No. 5,260,203.
  • Domain antibodies are immunologically functional immunoglobulin fragments that contain only the variable region of the heavy chain or the variable region of the light chain.
  • two or more VH regions are covalently linked by a peptide linker to form a bivalent domain antibody.
  • the two VH regions of these bivalent domain antibodies can target the same or different antigens.
  • bivalent antigen binding protein or “bivalent antibody” contains two antigen binding sites.
  • the two antigen binding sites included in such a bivalent antibody may have the same antigen specificity, or may be bispecific antibodies that each bind to different antigens.
  • a “multispecific antigen binding protein” or “multispecific antibody” is one that targets two or more antigens or epitopes.
  • a “bispecific” or “dual specific” antigen binding protein or antibody is a hybrid antigen binding protein or antibody that has two different antigen binding sites.
  • This bispecific antibody is a type of multispecific antigen binding protein or multispecific antibody, and can be produced by various known methods, such as fusion of hybridomas or linking of Fab' fragments. For example, Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 1990, 79:315-321; Kostelny et al. J Immunol. 1992, 148:1547-1553, etc.
  • the two different epitopes to which the two antigen-binding sites of a bispecific antigen-binding protein or antibody bind may be located on the same or different protein targets.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention binds to TCTP released from tumor cells and inhibits the function of TCTP extracellularly, preferably in the tumor immune microenvironment, thereby suppressing the suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment. Functions may be inhibited.
  • the suppressive immune cells may preferably be myeloid derived suppressor cells (MDSC).
  • the myeloid-derived suppressor cells (MDSC) may be polymorphonuclear myeloid-derived suppressor cells (PMN-MDSC) or monocytic myeloid-derived suppressor cells (M-MDSC).
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention can activate the function of anti-cancer immune cells and inhibit tumor growth by inhibiting the function of TCTP outside the cell, preferably in the tumor immune microenvironment.
  • Anti-cancer immune cells may preferably be T cells or NK cells.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention inhibits the function of TCTP outside the cell, preferably in the tumor immune microenvironment, thereby acting as an antagonist for suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment and inhibiting tumor proliferation. It can be suppressed.
  • the suppressive immune cells may preferably be myeloid derived suppressor cells (MDSC).
  • the myeloid-derived suppressor cells (MDSC) may be PMN-MDSC or M-MDSC.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention inhibits the accumulation or recruitment of suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment by inhibiting the function of TCTP outside the cell, preferably in the tumor immune microenvironment. and can inhibit tumor growth.
  • the suppressive immune cells may preferably be myeloid derived suppressor cells (MDSC).
  • the myeloid-derived suppressor cells (MDSC) may be PMN-MDSC or M-MDSC.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention inhibits the function of TCTP extracellularly, preferably in the tumor immune microenvironment, thereby binding to immunoregulatory receptors present on suppressive immune cells in the tumor immune microenvironment. and can inhibit tumor growth.
  • the suppressive immune cell may be myeloid derived suppressor cell (MDSC) and the immunomodulatory receptor may be Toll-like receptor 2 (TLR2).
  • the myeloid-derived suppressor cells (MDSC) may be PMN-MDSC or M-MDSC.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention interferes with the binding of TCTP with the immunoregulatory receptor present on suppressive immune cells in the extracellular, preferably tumor immune microenvironment, thereby inhibiting the binding of the immunoregulatory receptor. It can inhibit activation and inhibit tumor growth.
  • the suppressive immune cells may preferably be myeloid derived suppressor cells (MDSC) and the immunomodulatory receptor may be Toll-like receptor 2 (TLR2).
  • the myeloid-derived suppressor cells (MDSC) may be PMN-MDSC or M-MDSC.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention may be useful in treating or preventing cancer.
  • the present invention provides a method for treating or preventing cancer using a TCTP-specific binding molecule or fragment thereof.
  • treatment means preventing or alleviating the progression and worsening of the disease condition caused in a mammal suffering from cancer. Additionally, “prevention” means preventing the development of cancer in advance in mammalian patients at risk of developing cancer.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention can also be applied to individuals in need of treatment for cancer, who have not responded or are likely to not respond to treatment using an immunotherapy agent, or who have responded or responded limitedly. It may be useful in enhancing responsiveness to immunotherapy agents in individuals at risk for cancer.
  • the present invention provides a method for enhancing responsiveness to anti-cancer immunotherapy agents using a TCTP-specific binding molecule or fragment thereof.
  • immuno-anticancer agent refers to drugs used to treat patients suffering from cancer or at risk of recurrence of cancer through methods that include inducing, enhancing, suppressing, or modifying the immune response. By doing so, it may have a mechanism to restore or strengthen the tumor recognition or destruction ability of the immune system to overcome the immunosuppression or immune evasion mechanism acquired by cancer cells.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention may also be useful for eliminating, alleviating or preventing immune suppression in the tumor microenvironment of cancer patients.
  • the present invention provides a method for eliminating, alleviating, or preventing immunosuppression using a TCTP-specific binding molecule or fragment thereof.
  • the TCTP-specific binding molecule or fragment thereof according to the present invention may also be useful in suppressing suppressive immune cells in the tumor microenvironment of cancer patients.
  • the present invention provides a method for suppressing suppressive immune cells using a TCTP-specific binding molecule or fragment thereof.
  • the suppressive immune cells may preferably be myeloid-derived suppressor cells (MDSC).
  • the myeloid-derived suppressor cells (MDSC) may be PMN-MDSC or M-MDSC.
  • cancer includes, for example, hepatocellular carcinoma, cholangiocarcinoma, renal cell carcinoma, squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, transitional cell carcinoma, adenocarcinoma, gastrinoma, melanoma, fibrosarcoma, myxosarcoma, liposarcoma, Leiomyosarcoma, rhabdomyosarcoma, teratoma, angiosarcoma, Kaposi's sarcoma, osteosarcoma, chondrosarcoma, lymphangiosarcoma, meningioma, non-Hodgkin's lymphoma, Hodgkin's lymphoma, leukemia, brain tumor, head and neck cancer, epithelial cell-derived neoplasm (epithelial cell carcinoma) , lip cancer, oral cancer, esophagus cancer, gastrointestinal cancer, such as small intestine and stomach cancer, colon cancer, colon cancer,
  • Examples may include, but are not limited to, squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, and prostate cancer. It also includes other known cancers that affect blood cells. Preferably, the cancer is colorectal cancer, melanoma fibrosarcoma, pancreatic cancer, liver cancer or skin cancer.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition containing a TCTP-specific binding molecule or a fragment thereof as an active ingredient for therapeutic or preventive use.
  • composition may contain pharmaceutically acceptable inactive ingredients [see Handbook of Pharmaceutical Excipients, etc.].
  • the composition can be prepared, for example, by mixing with a physiologically acceptable carrier, excipient or stabilizer in the form of a freeze-dried powder, slurry, aqueous solution or suspension.
  • Pharmaceutically acceptable carriers included in the pharmaceutical composition of the present invention are those commonly used in preparation, and include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, gum acacia, calcium phosphate, alginate, gelatin, and silicic acid. Contains calcium, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil. It is not limited.
  • Binding molecule or fragment thereof Binding molecule or fragment thereof.
  • the heavy chain CDR1 is SEQ ID NO: 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91 , 97, 103, 109, 115, 115 or 121 or a conservative amino acid substitution thereof
  • the heavy chain CDR2 is SEQ ID NO: 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38, 44, 50, 56, Comprising the amino acid sequence of 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 127, 135 or 136 or a conservative amino acid substitution thereof
  • the heavy chain CDR3 is SEQ ID NO: 3, 9, 15 , 21, 27, 33, 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 128, 129, 130 or 131 or conservation thereof It contains an amino acid substitution
  • the light chain CDR1 is SEQ ID NO:
  • the light chain CDR3 is SEQ ID NO: 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, A binding molecule or fragment thereof containing the amino acid sequence of 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 or 134 or a conservative amino acid substitution thereof.
  • the heavy chain variable region is SEQ ID NO: 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163 , 165, 167, 169, 171, 173, 175, and 177, or an amino acid sequence that is at least 90% homologous thereto
  • the light chain variable region is SEQ ID NO: 138, 140, An amino acid sequence selected from the group consisting of amino acid sequences 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176 and 178, or A binding molecule or fragment thereof containing an amino acid sequence that is at least 90% homologous thereto.
  • the heavy chain CDR1 is SEQ ID NO: 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, It contains the amino acid sequence of 85, 91, 97, 103, 109, 115, 115 or 121
  • the heavy chain CDR2 is SEQ ID NO: 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38, 44, 50, 56, 62, 68.
  • the heavy chain CDR3 is SEQ ID NO: 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, It contains the amino acid sequence of 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 128, 129, 130 or 131, and the light chain CDR1 is SEQ ID NO: 4, 10
  • a light chain CDR2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119 or 125
  • the light chain CDR3 is SEQ ID NO: 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 or 134.
  • the heavy chain CDR1 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43
  • the heavy chain CDR2 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44
  • the heavy chain CDR3 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 45
  • An antibody or antigen-binding fragment thereof comprising an amino acid sequence
  • light chain CDR1 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 46
  • light chain CDR2 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 47
  • light chain CDR3 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 48 Phosphorus binding molecule or fragment thereof.
  • the heavy chain CDR1 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 55
  • the heavy chain CDR2 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 56
  • the heavy chain CDR3 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57
  • An antibody or antigen-binding fragment thereof comprising an amino acid sequence
  • light chain CDR1 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58
  • light chain CDR2 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59
  • light chain CDR3 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60 Phosphorus binding molecule or fragment thereof.
  • the heavy chain CDR1 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61
  • the heavy chain CDR2 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62
  • the heavy chain CDR3 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63
  • An antibody or antigen binding thereof comprising an amino acid sequence
  • light chain CDR1 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 64
  • light chain CDR2 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65
  • light chain CDR3 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 66
  • the heavy chain CDR1 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109
  • the heavy chain CDR2 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110
  • the heavy chain CDR3 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 111
  • An antibody or antigen binding thereof comprising an amino acid sequence
  • light chain CDR1 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112
  • light chain CDR2 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113
  • light chain CDR3 includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114
  • a binding molecule that is a fragment or a fragment thereof.
  • Responsiveness to cancer immunotherapy in an individual in need of treatment for cancer that has not responded, is likely to not respond, or has responded or is likely to respond limitedly to treatment using an immunotherapy agent.
  • a method of eliminating, alleviating, or preventing immunosuppression comprising administering the binding molecule or fragment thereof to a cancer patient in need of eliminating, alleviating, or preventing immunosuppression in the tumor microenvironment;
  • a pharmaceutical composition for eliminating, alleviating, or preventing immune suppression comprising the binding molecule or fragment thereof.
  • Example 1-1 Humanized mouse monoclonal antibody
  • humanized mice producing human antibodies were immunized.
  • human TCTP As an antigen, human TCTP with the following amino acid sequence was used.
  • Hybridomas producing monoclonal antibodies against human TCTP were obtained by fusion of SP2/0 mouse myeloma cells with spleen cells isolated from mice immunized with human TCTP, according to a standardized protocol. After fusion, fusion with mouse B cells producing antibodies was confirmed using an ELISA method for antigens administered to mice using cell culture medium. Then, single-cell cloning was performed using hybridomas to select hybridomas that produce monoclonal antibodies. Antibodies were then produced and purified from hybridomas, and antibodies against human TCTP were selected using a standard ELISA method to test binding to TCTP. As a result, antibodies Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, and Ab22 were obtained, and their sequences were analyzed. The sequences of these antibodies are as disclosed herein.
  • the Beacon screening method (Beacon® Optofluidic System) was used as a method to select antibodies against TCTP from mice immunized with human TCTP. Isolated mouse spleen cells were selected for producing antibodies against TCTP using beacon screening, and the variable region sequences of the selected antibodies were analyzed. Antibodies were produced and purified by adding the human IgG1 constant region to the analyzed variable region sequences. Antibodies that bind to human TCTP were selected using an ELISA method to assay binding to TCTP. As a result, antibodies Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, and Ab9 were obtained, and their sequences were analyzed. The sequences of these antibodies are as disclosed herein.
  • Antibodies Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, and Ab22 were purchased from CAMAB (China) and GenScript (China). Obtained from CAMouse® in collaboration with .
  • Example 1-2 Phage library screening
  • single-chain antibodies against human TCTP were selected from the phage library using the biopanning technique.
  • a diverse human-derived single-chain antibody library (Wuxi Biologics) was used.
  • a total of four rounds of biopanning were performed to select single-chain antibodies that bind to TCTP from the phage library.
  • bovine serum albumin (BSA) buffer solution was added to the test tube to protect the surface to which TCTP was not adsorbed.
  • the phage library was placed in an immune test tube and reacted at room temperature to extract phage that binds to TCTP.
  • the extracted phages were used for the next round of panning. This process was repeated a total of 4 rounds to amplify antigen-specific phages. Polyclonal phages extracted from each round were confirmed to bind to antigens through ELISA.
  • Example 2-1 ELISA analysis using human TCTP antibody
  • ELISA was performed to quantitatively analyze the binding ability of the selected antibodies to the antigen.
  • human TCTP was attached to the ELISA plate at a concentration of 1 ⁇ g/ml, and then treated with various concentrations of antibodies to check the relative binding affinity.
  • Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21 and Ab22 antibodies all bound well to human TCTP. confirmed ( Figures 1a and 1b).
  • Example 2-2 SPR analysis using human TCTP antibody
  • the antigen-binding ability of the antibodies selected in Example 1 was analyzed using SPR technique.
  • the device used was Biacore 8K (GEHealthcare). Human TCTP was immobilized on the chip, and antibodies were flowed at 6-7 different concentrations.
  • CM5 chip GE Healthcare, Cat. 29-1275-56
  • regeneration buffer (10 mM glycine-HCl (GE Healthcare), running buffer HBS-EP+, etc. were used.
  • the binding time was set to 100 or 120 in the binding phase.
  • the flow rate was set to 30 or 50 ⁇ l/min
  • the dissociation time was set to 300 or 360 seconds, and the flow rate was set to 30 or 50 ⁇ l/min. Fitting was performed using a 1:1 binding model, and the evaluation software was BIACore Evaluation. software (GE healthcare) was used.
  • Example 3 Development of mutant antibodies to improve binding affinity of TCTP antibody and prevent post-translational modification
  • Example 3-1 Confirmation of difference in binding ability of TCTP antibody to human TCTP and mouse TCTP
  • Example 3-3 Development of a mutant antibody to enhance the binding affinity of TCTP antibody (Ab10) and prevent post-translational modification
  • variants in which one amino acid in the CDR sequence was mutated were prepared using a phage library as follows.
  • the underlined amino acids correspond to residues mutated from Ab10, the parent antibody.
  • CDR sequences not shown for a given variant antibody are identical to those of the parent antibody, Ab10.
  • the Ab10-1 antibody induces mutations only in the heavy chain CDR2, and the sequences of the remaining CDRs, heavy chain CDR1, heavy chain CDR3, light chain CDR1, light chain CDR2, and light chain CDR3, are identical to those of Ab10.
  • the underlined amino acids correspond to residues mutated from Ab10, the parent antibody.
  • the CDR sequences not shown for a given variant antibody are identical to those of the parent antibody, Ab10.
  • Ab10-1, Ab10-2, Ab10-3, and Ab10 As a result of testing these variants for binding to TCTP through ELISA, Ab10-1, Ab10-2, Ab10-3, and Ab10 It was confirmed that the binding affinity of -4, Ab10-5, Ab10-6, Ab10-7 and Ab10-8 antibodies to human TCTP was equivalent to that of Ab10, the parent antibody, but that the binding affinity to mouse TCTP was increased compared to Ab10, the parent antibody ( Figure 2).
  • Ab10 antibody variants are those in which one amino acid is mutated from the Ab10 antibody, and the mutations can be performed in the form of two or more mutations simultaneously.
  • Example 4 Inhibition of binding between TCTP and TLR2 by TCTP antibody
  • Example 4-1 ELISA
  • TCTP is known to have extracellular biological functions through the cell membrane receptor TLR2. ELISA analysis was performed to confirm whether the selected TCTP antibody could inhibit the binding between TCTP and TLR2.
  • human TCTP was attached to the ELISA plate at a concentration of 1 ⁇ g/ml, and then 150 nM of TLR2 and various concentrations of antibodies Ab8, Ab10-3, Ab12, and Ab20 were added to each well, and then bound to human TCTP.
  • the ability to inhibit the binding between TCTP and TLR2 was confirmed by detecting TLR2 present. As a result, it was confirmed that Ab10-3, Ab12, and Ab20 inhibited the binding between TCTP and TLR2 ( Figure 3a).
  • TLR2 is known to regulate immune cells using NF- ⁇ B signaling through ligand binding.
  • analysis was performed using HEK Bluejet hTLR2 Reporter cells.
  • HEK Bluejet hTLR2 Reporter cells were cultured in 5x10 cells per well of a 96-well plate, simultaneously treated with 9 ⁇ g/ml human TCTP and various concentrations of antibodies Ab10-3, Ab12, and Ab20, and then incubated with NF.
  • the activity of secreted alkaline phosphatase (SEAP) regulated by - ⁇ B was confirmed.
  • SEAP alkaline phosphatase
  • TCTP has the effect of suppressing anticancer immunity in the tumor immune microenvironment by stimulating M-MDSCs extracellularly.
  • One of its effects is to recruit PMN-MDSCs into the tumor immune microenvironment.
  • An experiment was conducted to determine whether the anti-TCTP antibody according to the present invention has the effect of alleviating the anti-cancer immunosuppressive environment by suppressing the accumulation of PMN-MDSC in the tumor immune microenvironment by inhibiting the action of TCTP.
  • HT29 cell line human colon cancer cell line
  • FACS FACS analysis
  • Example 6 Tumor growth inhibition effect of TCTP antibody
  • the SL4 cell line (SL4 hTCTP KI), in which human TCTP is knocked-in, was used.
  • SL4 hTCTP KI cells (2 x 10 5 ) were subcutaneously inoculated into C57BL/6 mice, and anti-TCTP antibodies (Ab12 or Ab20, 100 ⁇ g, i.p.) or control isotype IgG antibody (BioXCell; 100 ⁇ g, i.p.) were administered.
  • anti-TCTP antibodies (Ab12 or Ab20, 100 ⁇ g, i.p.) or control isotype IgG antibody (BioXCell; 100 ⁇ g, i.p.) were administered.
  • Ab12 or Ab20 100 ⁇ g, i.p.
  • control isotype IgG antibody BioXCell; 100 ⁇ g, i.p.
  • Mouse tumor cell lines Pan02 (pancreas), Hepa1-6 (liver cancer), B16BL6 (skin cancer), and MC38 (colon cancer) were subcutaneously inoculated into C57BL/6 mice (3x10 5 , 5x10 5 , 2x10 5 , and 1x10 6 cells, respectively).
  • 100 ⁇ g of Ab12, Ab20, or anti-PD-1 antibody was administered intraperitoneally at twice-weekly administration intervals for 2 or 3 weeks.
  • the tumor growth rate was reduced by Ab12 or Ab20 in all four cancer cell lines (FIGS. 6b to 6e).
  • a group administered anti-PD-1 antibody was included, and it was found that Ab20 suppressed tumor growth higher than that of anti-PD-1 antibody.
  • Example 6-2 Combined administration
  • B16F10 (1 x 10 5 cells) cells were inoculated subcutaneously into C57BL/6 mice. Based on the day of vaccination (Day 1), anti-TCTP antibody Ab8 (100 ⁇ g, intraperitoneal administration) and anti-PD-1 antibody (BioXCell; 100 ⁇ g, intravenous administration) were administered on days 1, 4, 8, 11, 15, 18, and 22. injection) were administered alone or in combination. As a result, it was confirmed that the tumor size was further reduced when anti-TCTP antibody was additionally administered to anti-PD-1 antibody compared to when anti-PD-1 antibody alone was administered (FIG. 7).
  • SL4 cells (2 x 10 5 cells) were inoculated subcutaneously into C57BL/6 mice. Based on the day of vaccination (Day 1), anti-TCTP antibody Ab8 (100 ⁇ g, intraperitoneal administration) and anti-CTLA-4 antibody (BioXCell; 100 ⁇ g, intravenous administration) were administered on days 1, 4, 8, 11, 15, 18, and 22. injection) were administered alone or in combination. As a result, it was confirmed that the tumor size was further reduced when anti-TCTP antibody was additionally administered to anti-CTLA-4 antibody compared to when anti-CTLA-4 antibody alone was administered (FIG. 8). These results show that the TCTP-specific antibody according to the present invention not only effectively inhibits tumor growth by itself, but can also synergistically improve the tumor growth inhibition effect when combined with an immune checkpoint inhibitor.

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Abstract

본 발명은 세포외 TCTP (translationally controlled tumor protein)에 특이적으로 결합하는 신규한 결합분자 또는 그의 단편에 관한 것이다. 본 발명에 따른 결합분자 또는 그의 단편, 및 그의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 결합분자 및 그의 단편은 암을 진단, 치료 또는 예방하는데 이용될 수 있다. 본 발명에 따른 결합분자 및 그의 단편은 종양 면역 미세 환경 중 면역 억제를 완화시키거나 예방하는데 이용될 수 있다. 본 발명에 따른 결합분자 및 그의 단편은 면역항암제를 이용한 치료에 반응하지 않거나 제한적으로 반응하였거나, 그러할 가능성이 있는 환자에서 암을 진단하거나 치료하거나 예방하는 데에 이용될 수 있다.

Description

신규한 TCTP 결합분자
본 발명은 세포외 TCTP (translationally controlled tumor protein)에 특이적으로 결합하는 신규한 결합분자 또는 그의 단편에 관한 것이다. 본 발명에 따른 결합분자 및 그의 단편은 암을 진단, 치료 또는 예방하는데 이용될 수 있다. 본 발명에 따른 결합분자 및 그의 단편은 종양 면역 미세 환경 중 면역 억제를 완화시키거나 예방하는데 이용될 수 있다. 본 발명에 따른 결합분자 및 그의 단편은 면역항암제를 이용한 치료에 반응하지 않거나 제한적으로 반응하였거나, 그러할 가능성이 있는 환자에서 암을 진단하거나 치료하거나 예방하는 데에 이용될 수 있다.
종양 면역 미세환경(tumor immune microenvironment, "TIME")은 종양 세포들과 그를 둘러싼 주변의 다양한 세포들 사이에서 일어나는 다양한 상호작용을 통해 종양 세포들의 성장을 촉진시키기도 하고 억제하기도 한다. 종양 면역 미세환경에는 서로 다른 유형의 세포들이 존재하는데, 여기에는 다양한 섬유아세포, 내피세포, 비만세포 및 면역 세포들이 포함된다. 종양 면역 미세환경 중에 존재하는 면역 세포들로는 T 림프구, 자연킬러(NK) 세포, 종양-연관 마크로파지(TAM), 수지상세포(DC), 골수-유래 면역 억제 세포(MDSC), 조절 T 세포(Treg) 및 중성구를 들 수 있다. 종양 면역 미세환경 중에는 종양 세포에 대한 면역 반응을 억제하는 메커니즘이 존재하고, 이는 면역 항암요법의 효능을 제한하는 주요한 원인으로 알려져 있다.
TCTP는 진핵생물에서 고도로 보존된 단백질이다. TCTP는 세포질과 핵 모두에 위치하고 다양한 조직들에서 발현되며, 다양한 범위의 세포외 자극들에 반응하여 조절된다. TCTP는 이량체로도 발견되며, MCL1 및 p53을 포함한 다른 단백질들과 상호작용하는 것으로 알려져 있다(예를 들어, Acunzo et al. (2014) Cancer treatment reviews 40.6: 760-769). TCTP의 이량체는 온전한 TCTP 또는 그의 N-말단 절단형들 사이에서 형성될 수 있다고 보고된 바 있다(Kim et al. (2009): PloS one 4.7: e6464). 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA 및 shRNA와 같은, TCTP를 암호화하는 mRNA를 타겟팅하는 핵산 분자를 이용하여 세포내 TCTP의 발현을 억제하는 치료 전략들이 제안되기도 하였지만(예를 들어, WO 2012/080509), 세포 외에서의 TCTP의 기능에 관해서는 아직까지 확립되어 있지 않다.
본 발명자들은 종양세포로부터 TCTP가 방출되고, 방출된 TCTP가 종양 면역 미세환경 중에서 T 세포, NK 세포 및/또는 MDSC와 같은 면역 세포들의 기능이나 균형(세포의 수나 수명 등의 측면)을 조절하는 면역 조절인자로서 작동한다는 사실의 발견에 기초하여, TCTP에 특이적으로 결합하는 신규한 결합분자를 제공하고자 하였다. 본 발명에 따른 신규한 결합분자들은 세포외 TCTP에 특이적으로 결합하여 세포 외에서의 그의 기능을 억제함으로써 종양 면역 미세 환경 중 억제성 면역세포의 기능을 억제하고/거나 항암 면역세포의 기능을 활성화할 수 있다.
본 발명은 세포외 TCTP에 특이적으로 결합하는 신규한 결합분자 또는 그의 단편을 제공한다.
본 발명은 표면 플라스몬 공명에 의한 측정시 약 1 x 10-7 M 이하 또는 5 x 10-8 M 이하의 해리 상수(Kd)로 인간 TCTP에 결합하는 결합분자 또는 그의 단편을 제공한다. 상기 결합분자 또는 그의 단편은 또는 TCTP 또는 그의 절단체, 또는 그의 다량체에 결합하여 세포 외에서의 그의 기능을 억제함으로써 억제성 면역세포의 기능을 억제하고/거나 항암 면역세포를 활성화할 수 있다.
본 발명은 하기 (a) 내지 (f)에 정의된 바와 같은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3 중 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는, TCTP 또는 그의 번역후 변형체, 또는 그의 절단체 또는 다량체에 특이적으로 결합하는 결합분자 또는 그의 단편을 제공한다.
(a) 상기 중쇄 CDR1은
(a1) X1-X2-X3-X4-H의 아미노산 서열(여기서 X1은 S, G 또는 V이고, X2는 Y, H, 또는 N이고, X3은 A 또는 Y이고, X4는 M 또는 V임),
(a2) S-X5-X6-X7-X8-W-X9의 아미노산 서열(여기서 X5는 S 또는 N이고, X6는 N 또는 S이고, X7는 A 또는 W이고, X8은 A이거나 존재하지 않고, X9는 N 또는 S임),
(a3) G-Y-T-F-T-G-Y-Y-M-H의 아미노산 서열, 또는
(a4) N-A-R-M-G-V-S의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(b) 상기 중쇄 CDR2는
(b1) E-I-X1-H-X2-G-X3-T-T-Y-N-P-S-L-K-S의 아미노산 서열(여기서 X1은 D 또는 Y이고, X2는 S이거나 존재하지 않고, X3은 T 또는 V임),
(b2) W-I-N-X4-X5-X6-X7-X8-T-X9-Y-X10-Q-K-F-Q-X11의 아미노산 서열(여기서 X4는 A 또는 P이고, X5는 G, I 또는 N이고, X6은 K, N, S 또는 T이고, X7은 G 또는 S이고, X8은 G, N, Y, D 또는 K이고, X9는 K, N 또는 E이고, X10은 A 또는 S이고, X11은 D 또는 G임),
(b3) R-T-X12-Y-X13-S-K-W-Y-N-D-Y-A-X14-S-V-K-S의 아미노산 서열(여기서 X12는 F 또는 Y이고, X13은 K 또는 R이고, X14는 E 또는 V임), 또는
(b4) H-I-F-S-N-D-E-K-S-Y-S-Y-S-L-K-S의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(c) 상기 중쇄 CDR3은
(c1) G-X1-X2-X3-X4-F-D-X5의 아미노산 서열(여기서 X1은 R 또는 G이고, X2는 A 또는 S이고, X3은 A 또는 V이고, X4는 A 또는 V이고, X5는 P 또는 Y임),
(c2) D-G-S-G-S-Y-E-G-Y의 아미노산 서열,
(c3) W-V-F-D-Y의 아미노산 서열,
(c4) X6-A-X7-R-L-R-X8-A-X9-D-I의 아미노산 서열(여기서 X6은 L 또는 P이고, X7은 P 또는 W이고, X8은 G 또는 M이고, X9는 F 또는 Y임),
(c5) R-L-T-I-V-R-G-V-M-R-G-G-M-D-V의 아미노산 서열,
(c6) G-Y-Y-D-I-L-T-G-Y-Y-T-T-D-A-F-D-I의 아미노산 서열,
(c7) X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-F-D-Y의 아미노산 서열(여기서 X10은 V이거나 존재하지 않고, X11은 R 또는 L이거나 존재하지 않고, X12는G 또는 L이고, X13은 Y, I, T 또는 W이고, X14는 F 또는 T이고, X15는 D 또는 G이고, X16은 W, T, Y 또는 E이고, X17은 W, T, Y 또는 L이고, X18은 A, P 또는 Y임),
(c8) G-G-V-L-L-Y-F-G-E-L-S-R-F-D-Y의 아미노산 서열, 또는
(c8) E-G-I-T-V-G-R-G-V-M-L-Y-F-D-L의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(d) 상기 경쇄 CDR1은
(d1) R-A-S-Q-X1-X2-X3-X4-X5-L-X6의 아미노산 서열(여기서 X1은 A, D 또는 G이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 S, R 또는 G이고, X4는 N 또는 S이고, X5는 H, Y, D, N 또는 S이고, X6은 A, G 또는 H임),
(d2) X7-G-X8-X9-S-X10-X11-G-X12-X13-X14-X15-V-S의 아미노산 서열(여기서 X7은 S 또는 T이고, X8은 S 또는 T 이고, X9는 N 또는 S이고, X10은 D 또는 N이고, X11은 I 또는 V이고, X12는 G, N 또는 T이고, X13은F, K 또는 Y이고, X14는 N 또는 D이거나 존재하지 않고, X15는 K 또는 Y임),
(d3) K-S-S-Q-X16-X17-L-Y-X18-X19-N-N-K-X20-Y-X21-A의 아미노산 서열(여기서 X16은 N 또는 S이고, X17은 I, L 또는 V이고, X18은 N 또는 S이고, X19는 A 또는 S이고, X20은 D 또는 N이고, X21은 I 또는 L임), 또는
(d4) R-S-S-Q-S-L-V-X22-X23-D-G-N-T-X24-L-X25의 아미노산 서열(여기서 X22는 H 또는 Y이고, X23은 R 또는 S이고, X24는 Y 또는 H이고, X25는 S, N 또는 K임), 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고,
(e) 상기 경쇄 CDR2는 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7의 아미노산 서열(여기서 X1은 A, D, E, G, K, W 또는 Y이고, X2 는 A, D, I 또는 V이고, X3은 N, S 또는 T이고, X4는 I, K, N, Q, S 또는 T이고, X5는 L, R, S 또는 W이고, X6은 A, D, F, G, K, P, Q 또는 Y 이고, X7은 F, S 또는 T임) 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고,
(f) 상기 경쇄 CDR3은
(f1) X1-Q-X2-X3-X4-X5-P-X6-T의 아미노산 서열(여기서 X1은 M 또는 Q이고, X2는 A, G 또는 Y이고, X3은 F, H, N, T 또는 Y이고, X4는 G, H, Q, N, S 또는 Y이고, X5는 F, I, L, T, Y 또는 W이고, X6은 H, I, L, P, R, W 또는 Y임),
(f2) X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-V의 아미노산 서열(여기서 X7은 A, N 또는 V이고, X8은 S 또는 T이고, X9는 W 또는 Y이고, X10은 A 또는 D이고, X11은 G 또는 S이고, X12는 D, N 또는 S이고, X13은 L 또는 N이고, X14는 N 또는 R이고, X15는 A 또는 L임), 또는
(f3) X16-Q-X17-X18-S-X19-P-X20-T의 아미노산 서열(여기서 X16은 L 또는 H이고, X17은 H 또는 S이고, X18은 N 또는 S이고, X19는 Y 또는 L이고, X20은 Y, R 또는 Q임), 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함한다.
도 1a 및 1b는 항-TCTP 항체들의 인간 TCTP에 대한 결합 검정을 위한 ELISA 시험 결과를 나타낸다.
도 2는 항-TCTP Ab10 항체의 변이체들을 대상으로 ELISA를 통해 마우스 TCTP 및 인간 TCTP에 결합능력을 검정한 결과를 나타낸다.
도 3a는 항-TCTP 항체가 TCTP-TLR2 결합을 억제함을 보여주는 ELISA 시험 결과이다.
도 3b는 항-TCTP 항체가 TLR2 신호를 억제함을 보여주는 HEK Blue쪠 hTLR2 리포터 세포 시험 결과이다.
도 4a 내지 도 4f는 T 세포가 없는 BALB/c 누드 마우스에 피하 이식된 HT29 종양으로부터 얻은 단일 세포 현탁액의 FACS 분석을 보여주는 대표 플롯이다.
도 5는 T 세포가 없는 BALB/c 누드 마우스에 피하 이식된 HT29 종양에 항-TCTP 항체를 처리했을 때 PMN-MDSC의 수준을 FACS 분석을 통해 측정한 결과를 보여준다.
도 6a는 인간 TCTP가 knock-in된 SL4 세포에 항-TCTP 항체를 단독으로 처리했을 때 시간에 따른 종양 부피의 변화를 보여준다.
도 6b 내지 도 6e는 각각 서로 다른 4종의 암세포(Pan02, Hepa1-6, B16BL6, MC38)에 항-TCTP 항체 또는 항 PD-1 항체를 처리했을 때 시간에 따른 종양의 부피 변화를 보여준다.
도 7은 B16F10 세포에 항-PD-1 항체와 항-TCTP 항체를 각각 단독으로 또는 병용하여 처리했을 때 시간에 따른 종양 부피의 변화를 보여준다.
도 8은 SL4세포에 항-CTLA-4 항체와 항-TCTP 항체를 각각 단독으로 또는 병용하여 처리했을 때 시간에 따른 종양 부피의 변화를 보여준다.
본 발명은 세포외 TCTP에 특이적으로 결합하여 세포 외에서의 그의 기능을 억제함으로써 종양 면역 미세 환경(tumor immune microenvironment) 중 억제성 면역세포의 기능을 억제하고/거나 항암 면역세포의 기능을 활성화하는 결합분자 또는 그의 단편에 관한 것이다.
상기 "세포외"는 바람직하게는 종양 면역 미세환경을 의미한다. 본 발명의 선행연구에 따르면, TCTP는 종양 세포, 특히 스트레스 조건 하에서 손상되거나 죽은 종양 세포로부터 방출되는 것이 확인되었다. 따라서, 상기 "세포외"는 그와 같은 종양 세포로부터 방출되었음을 의미할 수 있지만, 상기 종양 세포가 반드시 손상되거나 죽은 세포로 한정되지는 않는다.
종양은 자신의 증식을 방해할 수 있는 면역 반응을 늦추기 위한 다양한 전략들을 발휘하는 것으로 알려져 있는데, 여기에는 종양 면역 미세환경 중 억제성 면역세포의 활성화, 항암 면역세포의 억제, 또는 면역억제성 사이토카인/케모카인의 상향조절이 포함된다. 억제성 면역세포로는, 예를 들어 종양-연관 마크로파지(TAM), 골수-유래 면역 억제세포(MDSC), 종양-연관 중성구(TAN), 암-연관 섬유아세포(CAF) 및 조절 T 세포(Treg)를 들 수 있다. 종양 면역 미세환경 중 항암 면역세포로는, 예를 들어 T 세포 및 NK 세포 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지는 않는다. 종양 면역 미세환경 중으로 분비되는 면역억제성 사이토카인 및 케모카인으로는, 예를 들어 CCL2, CCL3, CCL5, CCL17, CCL19, CCL21, CCL22, CCL28, CXCL5, CXCL8, CXCL12, CXCL15, CXCL17, MIF, HMGB1, CSF, CSF2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-13, G-CSF, PGE2 및 TGF-β를 들 수 있다. 본 명세서에서 종양 면역 미세환경 중 면역 억제를 완화하거나 억제한다는 것은, 종양 면역 미세환경 중 억제성 면역세포의 활성이 감소, 억제 또는 저해되고/거나, 항암 면역세포의 활성이 증가, 향상 또는 활성화되고/거나, 면역억제성 사이토카인이나 케모카인의 활성이 하향조절된다는 것을 의미한다.
상기 TCTP의 "세포 외에서의 기능"은 예를 들어, 억제성 면역세포(예를 들어, 골수-유래 면역 억제 세포) 상에 존재하는 면역조절 수용체(예를 들어, TLR2)에 결합하는 것, 또는 억제성 면역세포(예를 들어, 골수-유래 면역 억제 세포)로부터 사이토카인(예를 들어, CXCL1 및 CXCL2)의 분비를 유도하는 것일 수 있다. 이러한 세포 외에서의 TCTP의 기능이 억제됨에 따라 억제성 면역세포의 기능이 억제될 수 있다. 억제성 면역세포의 기능이 억제된다는 것은, 억제성 면역세포의 면역억제 활성이 직접적으로 또는 간접적으로 감소되거나, 억제되거나, 저해됨을 의미한다. 그러한 면역억제 활성의 감소, 억제 또는 저해는 종양 면역 미세환경 중 억제성 면역세포의 축적 또는 모집(recruitment)이 감소, 억제 또는 저해되는 것을 의미할 수 있다. 억제성 면역세포의 면역억제 활성이 감소되거나, 억제되거나, 저해된다는 것은 예를 들어, 억제성 면역세포의 사멸 유도, 억제성 면역세포의 생존율 저하, 억제성 면역세포의 항암면역 억제성 사이토카인 분비 저하, 억제성 면역세포의 T세포 억제 물질 분비 저하, 억제성 면역세포로의 분화 저하, 억제성 면역세포의 면역관문(immune checkpoint) 발현 억제 등으로 나타날 수 있다.
상기한 바와 같이 세포외 TCTP에 특이적으로 결합하여 세포 외에서의 그의 기능을 억제함으로써 종양 면역 미세 환경 중 억제성 면역세포의 기능을 억제하고/거나 항암 면역세포의 기능을 활성화하는 효과는 아래 상술하는 바와 같은 본 발명에 따른 TCTP 특이적 결합분자 또는 그의 단편에 의해 달성될 수 있다.
본 발명에 따른 결합분자 또는 그의 단편은 표면 플라스몬 공명에 의한 측정시 약 1 x 10-7 M 이하 또는 약 5 x 10-8 M 이하의 해리 상수(Kd)로 인간 TCTP 또는 그의 절단체, 또는 그의 다량체에 결합하여 세포 외에서의 그의 기능을 억제함으로써 억제성 면역세포의 기능을 억제하고/거나 항암 면역세포를 활성화할 수 있다.　
본 명세서에서 사용된 용어 "표면 플라스몬 공명"은 예를 들어, BIAcoreTM 시스템을 사용하여, 바이오센서 매트릭스내 단백질 농도를 검출하여 실시한 상호작용에 대한 분석을 가능하게 하는 광학 현상을 말한다.
본 발명에 따른 결합분자 또는 그의 단편은 또한, 하기 (a) 내지 (f)에 정의된 바와 같은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3 중 하나 이상의 CDR 서열을 포함할 수 있다.
(a) 상기 중쇄 CDR1은
(a1) X1-X2-X3-X4-H의 아미노산 서열(여기서 X1은 S, G 또는 V이고, X2는 Y, H, 또는 N이고, X3은 A 또는 Y이고, X4는 M 또는 V임),
(a2) S-X5-X6-X7-X8-W-X9의 아미노산 서열(여기서 X5는 S 또는 N이고, X6는 N 또는 S이고, X7는 A 또는 W이고, X8은 A이거나 존재하지 않고, X9는 N 또는 S임),
(a3) G-Y-T-F-T-G-Y-Y-M-H의 아미노산 서열, 또는
(a4) N-A-R-M-G-V-S의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(b) 상기 중쇄 CDR2는
(b1) E-I-X1-H-X2-G-X3-T-T-Y-N-P-S-L-K-S의 아미노산 서열(여기서 X1은 D 또는 Y이고, X2는 S이거나 존재하지 않고, X3은 T 또는 V임),
(b2) W-I-N-X4-X5-X6-X7-X8-T-X9-Y-X10-Q-K-F-Q-X11의 아미노산 서열(여기서 X4는 A 또는 P이고, X5는 G, I 또는 N이고, X6은 K, N, S 또는 T이고, X7은 G 또는 S이고, X8은 G, N, Y, D 또는 K이고, X9는 K, N 또는 E이고, X10은 A 또는 S이고, X11은 D 또는 G임),
(b3) R-T-X12-Y-X13-S-K-W-Y-N-D-Y-A-X14-S-V-K-S의 아미노산 서열(여기서 X12는 F 또는 Y이고, X13은 K 또는 R이고, X14는 E 또는 V임), 또는
(b4) H-I-F-S-N-D-E-K-S-Y-S-Y-S-L-K-S의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(c) 상기 중쇄 CDR3은
(c1) G-X1-X2-X3-X4-F-D-X5의 아미노산 서열(여기서 X1은 R 또는 G이고, X2는 A 또는 S이고, X3은 A 또는 V이고, X4는 A 또는 V이고, X5는 P 또는 Y임),
(c2) D-G-S-G-S-Y-E-G-Y의 아미노산 서열,
(c3) W-V-F-D-Y의 아미노산 서열,
(c4) X6-A-X7-R-L-R-X8-A-X9-D-I의 아미노산 서열(여기서 X6은 L 또는 P이고, X7은 P 또는 W이고, X8은 G 또는 M이고, X9는 F 또는 Y임),
(c5) R-L-T-I-V-R-G-V-M-R-G-G-M-D-V의 아미노산 서열,
(c6) G-Y-Y-D-I-L-T-G-Y-Y-T-T-D-A-F-D-I의 아미노산 서열,
(c7) X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-F-D-Y의 아미노산 서열(여기서 X10은 V이거나 존재하지 않고, X11은 R 또는 L이거나 존재하지 않고, X12는 G 또는 L이고, X13은 Y, I, T 또는 W이고, X14는 F 또는 T이고, X15는 D 또는 G이고, X16은 W, T, Y 또는 E이고, X17은 W, T, Y 또는 L이고, X18은 A, P 또는 Y임),
(c8) G-G-V-L-L-Y-F-G-E-L-S-R-F-D-Y의 아미노산 서열, 또는
(c8) E-G-I-T-V-G-R-G-V-M-L-Y-F-D-L의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(d) 상기 경쇄 CDR1은
(d1) R-A-S-Q-X1-X2-X3-X4-X5-L-X6의 아미노산 서열(여기서 X1은 A, D 또는 G이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 S, R 또는 G이고, X4는 N 또는 S이고, X5는 H, Y, D, N 또는 S이고, X6은 A, G 또는 H임),
(d2) X7-G-X8-X9-S-X10-X11-G-X12-X13-X14-X15-V-S의 아미노산 서열(여기서 X7은 S 또는 T이고, X8은 S 또는 T 이고, X9는 N 또는 S이고, X10은 D 또는 N이고, X11은 I 또는 V이고, X12는 G, N 또는 T이고, X13은F, K 또는 Y이고, X14는 N 또는 D이거나 존재하지 않고, X15는 K 또는 Y임),
(d3) K-S-S-Q-X16-X17-L-Y-X18-X19-N-N-K-X20-Y-X21-A의 아미노산 서열(여기서 X16은 N 또는 S이고, X17은 I, L 또는 V이고, X18은 N 또는 S이고, X19는 A 또는 S이고, X20은 D 또는 N이고, X21은 I 또는 L임), 또는
(d4) R-S-S-Q-S-L-V-X22-X23-D-G-N-T-X24-L-X25의 아미노산 서열(여기서 X22는 H 또는 Y이고, X23은 R 또는 S이고, X24는 Y 또는 H이고, X25는 S, N 또는 K임), 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고,
(e) 상기 경쇄 CDR2는 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7의 아미노산 서열(여기서 X1은 A, D, E, G, K, W 또는 Y이고, X2 는 A, D, I 또는 V이고, X3은 N, S 또는 T이고, X4는 I, K, N, Q, S 또는 T이고, X5는 L, R, S 또는 W이고, X6은 A, D, F, G, K, P, Q 또는 Y 이고, X7은 F, S 또는 T임) 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고,
(f) 상기 경쇄 CDR3은
(f1) X1-Q-X2-X3-X4-X5-P-X6-T의 아미노산 서열(여기서 X1은 M 또는 Q이고, X2는 A, G 또는 Y이고, X3은 F, H, N, T 또는 Y이고, X4는 G, H, Q, N, S 또는 Y이고, X5는 F, I, L, T, Y 또는 W이고, X6은 H, I, L, P, R, W 또는 Y임),
(f2) X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-V의 아미노산 서열(여기서 X7은 A, N 또는 V이고, X8은 S 또는 T이고, X9는 W 또는 Y이고, X10은 A 또는 D이고, X11은 G 또는 S이고, X12는 D, N 또는 S이고, X13은 L 또는 N이고, X14는 N 또는 R이고, X15는 A 또는 L임), 또는
(f3) X16-Q-X17-X18-S-X19-P-X20-T의 아미노산 서열(여기서 X16은 L 또는 H이고, X17은 H 또는 S이고, X18은 N 또는 S이고, X19는 Y 또는 L이고, X20은 Y, R 또는 Q임), 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함한다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 성질(예를 들어, 전하 또는 소수성)을 갖는 측쇄(R 그룹)를 갖는 또 다른 아미노산 잔기에 의해 치환된 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 실질적으로 단백질의 기능적 성질을 변화시키지 않는다. 2개 이상의 아미노산 서열이 보존적 치환에 의해 서로 차이가 있는 경우, % 서열 동일성 또는 유사성 정도는 치환의 보존적 성질을 보정하기 위해 상향 조정될 수 있다. 당해 조정을 수행하는 수단은 당업자에게 널리 공지되어 있다[문헌 Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331]. 화학적 성질이 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 그룹의 예는 (1) 지방족 측쇄: 글라이신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; (2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; (3) 아미드 함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; (4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판; (5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌, 및 히스티딘; (6) 산성 측쇄: 아스파르테이트 및 글루타메이트, 및 (7) 황 함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 바람직한 보존적 아미노산 치환 그룹은 다음과 같다: 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-타이로신, 라이신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파르테이트, 및 아스파라긴-글루타민. 또는, 보존적 치환은 문헌 Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-45에 기재된 PAM250 로그-가능성 매트릭스에서 양의 값을 갖는 임의의 변화일 수 있다.
본 발명의 결합분자 또는 그의 단편은 하기와 같은 서열의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하는 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함할 수 있다.
항체 Ab1 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYYMH (서열 1) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 2) GITGTTPFDY (서열 3)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RASQGIRNDLG (서열 4) AASSLQS (서열 5) LQHNSYPYT (서열 6)
항체 Ab2 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
NARMGVS (서열 7) HIFSNDEKSYSTSLKS (서열 8) VLLWFGELYFDY (서열 9)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RASQSVSSNLA (서열 10) GASTRAT (서열 11) QQYNNWPRT (서열 12)
항체 Ab3 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYYMH (서열 13) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 14) LGTTGYYYFDY (서열 15)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RASQSIGSSLH (서열 16) YASQSFS (서열 17) HQSSSLPRT (서열 18)
항체 Ab4 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SNAMH (서열 19) WINAGNGNTKYSQKFQG (서열 20) GYYDILTGYYTTDAFDI (서열 21)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RSSQSLVYSDGNTYLN (서열 22) KVSNRDS (서열 23) MQGTHWPYT (서열 24)
항체 Ab5 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SYAMH (서열 25) WINAGNGYTEYSQKFQG (서열 26) RGYFDWWAFDY (서열 27)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RASQSIGSSLH (서열 28) YASQSFS (서열 29) HQSSSLPQT (서열 30)
항체 Ab6 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SSNWWS (서열 31) EIDHSGTTTYNPSLKS (서열 32) DGSGSYEGY (서열 33)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RASQAISNHLA (서열 34) AASSLQS (서열 35) QQYHSYPIT (서열 36)
항체 Ab7 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SSNWWS (서열 37) EIYHGVTTYNPSLKS (서열 38) DGSGSYEGY (서열 39)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RASQDISNYLA (서열 40) AASSLQS (서열 41) QQYHYYPIT (서열 42)
항체 Ab8 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SYAMH (서열 43) WINAGNGNTKYSQKFQD (서열 44) WVFDY (서열 45)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RSSQSLVHRDGNTYLS (서열 46) KISNRFF (서열 47) MQATQFPHT (서열 48)
항체 Ab9 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SNSAAWN (서열 49) RTYYRSKWYNDYAVSVKS (서열 50) EGITVGRGVMLYFDL (서열 51)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
RSSQSLVYSDGNTHLK (서열 52) KVSKWDS (서열 53) MQGTHWPPT (서열 54)
항체 Ab10 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 56) PAPRLRGAFDI (서열 57)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab12 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SHAVH (서열 61) WINAGKGNTKYSQKFQG (서열 62) GRAVAFDP (서열 63)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
TGTNSDIGGYNYVS (서열 64) EVNKRPS (서열 65) ASYAGDNNLV (서열 66)
항체 Ab13 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SNSAAWN (서열 67) RTYYRSKWYNDYAVSVKS (서열 68) GGAAVFDY (서열 69)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
KSSQSILYNSNNKNYLA (서열 70) WASTRGS (서열 71) QQYYSTPLT (서열 72)
항체 Ab14 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYYMH (서열 73) WINPNSGDTNYAQKFQG (서열 74) GGVLLYFGELSRFDY (서열 75)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
TGTSSDVGGYNYVS (서열 76) EVTKRPS (서열 77) ASYAGDNNLV (서열 78)
항체 Ab15 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
VNAMH (서열 79) WINAGTGKTKYSQKFQG (서열 80) GRAVAFDP (서열 81)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
TGTSSDVGGYDYVS (서열 82) EVNKRPS (서열 83) NSYAGNNNLV (서열 84)
항체 Ab16 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SNSAAWN (서열 85) RTYYKSKWYNDYAVSVKS (서열 86) GGSAVFDY (서열 87)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
KSSQSILYSSNNKNYLA (서열 88) WASTRKS (서열 89) QQYYGLPLT (서열 90)
항체 Ab17 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SNSAAWN (서열 91) RTYYKSKWYNDYAVSVKS (서열 92) GGSAVFDY (서열 93)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
KSSQSVLYSSNNKNYLA (서열 94) WASTRKS (서열 95) QQYYGIPLT (서열 96)
항체 Ab18 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SNSAAWN (서열 97) RTYYRSKWYNDYAVSVKS (서열 98) GGAAVFDY (서열 99)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
KSSQSILYSSNNKNYLA (서열 100) WASTRGS (서열 101) QQYYSTPLT (서열 102)
항체 Ab19 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SSSAAWN (서열 103) RTYYRSKWYNDYAESVKS (서열 104) RLTIVRGVMRGGMDV (서열 105)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
KSSQNLLYSANNKDYLA (서열 106) WASTRYS (서열 107) QQYYSTPWT (서열 108)
항체 Ab20 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SSSAAWN (서열 109) RTFYRSKWYNDYAESVKS (서열 110) RLTIVRGVMRGGMDV (서열 111)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
KSSQNLLYSANNKDYIA (서열 112) WASIRYS (서열 113) QQYFSTPWT (서열 114)
항체 Ab21 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SSSAAWN (서열 115) RTYYRSKWYNDYAESVKS (서열 116) RLTIVRGVMRGGMDV (서열 117)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
KSSQNLLYSANNKDYLA (서열 118) WASTRYS (서열 119) QQYYSTPWT (서열 120)
항체 Ab22 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
SSSAAWN (서열 121) RTYYRSKWYNDYAESVKS (서열 122) RLTIVRGVMRGGMDV (서열 123)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
KSSQNLLYSANNKDYLA (서열 124) WASTRYS (서열 125) QQYYSTPWT (서열 126)
항체 Ab10-1 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSSGTNYAQKFQG (서열 127) PAPRLRGAFDI (서열 57)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab10-2 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 56) LAPRLRGAFDI (서열 128)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab10-3 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 56) PAWRLRGAFDI (서열 129)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab10-4 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 56) PAPRLRMAFDI (서열 130)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab10-5 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 56) PAPRLRGAYDI (서열 131)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab10-6 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 56) PAPRLRGAFDI (서열 57)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGTKKVS (서열 132) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab10-7 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 56) PAPRLRGAFDI (서열 57)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNFKVS (서열 133) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab10-8 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNSGGTNYAQKFQG (서열 56) PAPRLRGAFDI (서열 57)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) VTWDSSLRAVV (서열 134)
항체 Ab10-9 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPISGGTNYAQKFQG (서열 135) PAPRLRGAFDI (서열 57)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
항체 Ab10-10 CDR 서열
중쇄 CDR1 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3
GYTFTGYYMH (서열 55) WINPNTGGTNYAQKFQG (서열 136) PAPRLRGAFDI (서열 57)
경쇄 CDR1 경쇄 CDR2 경쇄 CDR3
SGSSSNIGNKKVS (서열 58) DDNKRPS (서열 59) ATWDSSLRAV (서열 60)
본 발명의 결합분자 또는 그의 단편은 또한, 하기와 같은 서열의 아미노산 서열 또는 그와 70% 이상, 80% 이상, 또는 90% 이상 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적 항체들의 중쇄 가변영역 서열
항체 ID 중쇄 가변영역 서열
Ab1 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGWVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGITGTTPFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 137)
Ab2 MDTLCYTLLLLTTPSWVLSQVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGVSWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARVLLWFGELYFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 139)
Ab3 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGWVTMTRDTSISTAYMELRLRSDDTAVYYCARLGTTGYYYFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 141)
Ab4 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSNAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYYDILTGYYTTDAFDIWGQGTMVTVSS (서열번호 143)
Ab5 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFISYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGYTEYSQKFQGRVTITRDTSALTAYMELRSLRSEDTAVYYCARRGYFDWWAFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 145)
Ab6 MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGGSISSSNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIDHSGTTTYNPSLKSRVTMSVDQSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSGSYEGYWGQGTLVTVSS (서열번호 147)
Ab7 MKHLWFFLLLVAAPRWVLSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGGSISSSNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIYHGVTTYNPSLKSRVTISVDNSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSGSYEGYWGQGTLVTVSS (서열번호 149)
Ab8 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFFSYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQDRVTITRDTSATTAYMELSSLRSEDTAVYYCASWVFDYWGQGTPVTVSS (서열번호 151)
Ab9 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCAREGITVGRGVMLYFDLWGRGTLVTVSS (서열번호 153)
Ab10 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARPAPRLRGAFDIWGQGTLVTVSS (서열번호 155)
Ab12 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHAVHWVRQAPGQRLEWMGWINAGKGNTKYSQKFQGRVTITRDTSATTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRAVAFDPWGQGTLVTVSS (서열번호 157)
Ab13 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGGAAVFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 159)
Ab14 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGDTNYAQKFQGWVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGGVLLYFGELSRFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 161)
Ab15 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKAAGYTFTVNAMHWVRQAPGQGLEWMGWINAGTGKTKYSQKFQGRLTITRDTSASTAYMHLSGLRSEDTAVYYCARGRAVAFDPWGQGTLVTVSS (서열번호 163)
Ab16 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYKSKWYNDYAVSVKSRMTINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGGSAVFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 165)
Ab17 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYKSKWYNDYAVSVKSRMTINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGGSAVFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 167)
Ab18 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGGAAVFDYWGQGTLVTVSS (서열번호 169)
Ab19 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSSSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAESVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARRLTIVRGVMRGGMDVWGQGTTVTVSS (서열번호 171)
Ab20 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSSSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTFYRSKWYNDYAESVKSRITINADTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARRLTIVRGVMRGGMDVWGQGTTVTVSS (서열번호 173)
Ab21 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSSSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAESVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARRLTIVRGVMRGGMDVWGQGTTVTVSS (서열번호 175)
Ab22 MSVSFLIFLPVLGLPWGVLSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSSSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAESVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARRLTIVRGVMRGGMDVWGQGTTVTVSS (서열번호 177)
상기 가변영역 서열 중 밑줄친 부분은 순서대로, 해당 항체의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3에 해당한다.
본 발명의 결합분자 또는 그의 단편은 또한, 하기와 같은 서열의 아미노산 서열 또는 그와 70% 이상, 80% 이상, 또는 90% 이상 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적 항체들의 경쇄 가변영역 서열
항체 ID 경쇄 가변영역 서열
Ab1 MRVPAQLLGLLLLWFPGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYYLQHNSYPYTFGQGTKLEIK (서열번호 138)
Ab2 MEAPAQLLFLLLLWLPDTTGEIVMTQSPATLSVFPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTECTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPRTFSQGTKVEIK (서열번호 140)
Ab3 MLPSQLIGFLLLWVPASRGEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCHQSSSLPRTFGQGTKVEIK (서열번호 142)
Ab4 MRLPAQLLGLLMLWVPGSSGDVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTYLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKITRVEAEDVGVYYCMQGTHWPYTFGQGTKLEIK (서열번호 144)
Ab5 MLPSQLIGFLLLWVPASRGEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCHQSSSLPQTFGQGTKVEIK (서열번호 146)
Ab6 MRVLAQLLGLLLLCFPGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQAISNHLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYHSYPITFGQGTRLEIK (서열번호 148)
Ab7 MRVLAQLLGLLLLCFPGARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYHYYPITFGQGTRLEIK (서열번호 150)
Ab8 MRLLAQLLGLLMLWVPGSSGDIVMTQTPLSSLVTLGQPASISCRSSQSLVHRDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKISNRFFGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATQFPHTFGQGTKLEIK (서열번호 152)
Ab9 MRLPAQLLGLLMLWVPGSSGDVLMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVYSDGNTHLKWFQQRPGQSPRRLIYKVSKWDSGVPDRVSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPPTFGQGTKVEIK (서열번호 154)
Ab10 QSVVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNKKVSWYQQLPVTAPKLLIYDDNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCATWDSSLRAVVFGGGTKLTVL (서열번호 156)
Ab12 MAWALLLLTLLTQGTGSWARSALTQPPSASGSPGQSVTVSCTGTNSDIGGYNYVSWYKQHPGNAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQTEDEADYYCASYAGDNNLVFGGGTKLTVL (서열번호 158)
Ab13 MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSILYNSNNKNYLAWYQQNPGQPPKLLFYWASTRGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGGGTKVEIK (서열번호 160)
Ab14 MAWALLLLTLLTQGTGSWAQSALTQPPSASGSPGQSVAISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPQLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASYAGDNNLVFGGGTKLTVL (서열번호 162)
Ab15 MAWALLLLTLLTQGTGSWAQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYDYVSWYQQHPDKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCNSYAGNNNLVFGGGTKLTVL (서열번호 164)
Ab16 MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMTQSSDSLAVSLGERATINCKSSQSILYSSNNKNYLAWYQQKLGQPPNLLIYWASTRKSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYGLPLTFGGGTKVEIK (서열번호 166)
Ab17 MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMTQSSDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKLGQPPNLLIYWASTRKSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYGIPLTFGGGTKVEIK (서열번호 168)
Ab18 MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSILYSSNNKNYLAWYQQNPGQPPKLLFYWASTRGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGGGTKVEIK (서열번호 170)
Ab19 MVLQTQVFISLLLWISGASGDIVMTQSPDSLAVSLDERATINCKSSQNLLYSANNKDYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRYSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPWTFGQGTKVEIK (서열번호 172)
Ab20 MVLQTQVFISLLLWISGASGDIVMTQSPDSLTGSLDERATINCKSSQNLLYSANNKDYIAWYQQKPGQSPKLLIYWASIRYSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFSTPWTFGQGTKVEIK (서열번호 174)
Ab21 MVLQTQVFISLLLWISGASGDIVMTQSPDSLAVSLDERATINCKSSQNLLYSANNKDYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRYSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPWTFGQGTKVEIK (서열번호 176)
Ab22 MVLQTQVFISLLLWISGASGDIVMTQSPDSLAVSLDERATINCKSSQNLLYSANNKDYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRYSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPWTFGQGTKVEIK (서열번호 178)
상기 가변영역 서열 중 밑줄친 부분은 순서대로, 해당 항체의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3에 해당한다.
폴리펩타이드에 대한 서열 상동성은 서율 유사성 또는 서열 동일성으로서 언급되기도 하고 일반적으로 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정된다. 단백질 분석 소프트웨어는 보존적 아미노산 치환을 포함하는, 다양한 치환, 결실 및 기타 변형에 할당된 유사성 측정을 사용하여 유사한 서열을 일치시킨다. 예를 들어, GCG 소프트웨어는 밀접하게 관련된 폴리펩타이드, 예를 들어, 유기체의 상이한 종으로부터의 상동성 폴리펩타이드간의, 또는 야생형 단백질과 이의 뮤테인간의 서열 상동성 또는 서열 동일성을 측정하기 위한 디폴트 파라미터와 함께 사용될 수 있는Gap 및 Bestfit과 같은 프로그램을 포함한다(GCG Version 6.1). 폴리펩타이드 서열은 또한 디폴트 또는 추천된 파라미터를 사용하는 FASTA를 사용하거나 GCG 버전 6.1의 프로그램을 사용하여 비교할 수 있다. FASTA (예를 들어, FASTA2 및 FASTA3)는 미지의 서열과 탐색 서열간의 최대의 오버랩 영역에 대한 정렬 및 % 서열 동일성을 제공한다 (Pearson 2000). 본 발명의 서열을, 상이한 유기체로부터의 다수의 서열을 포함하는 데이터베이스와 비교하는 경우 또 다른 바람직한 알고리듬은 디폴트 파라미터를 사용하는 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히 BLASTP 또는 TBLASTN이다[문헌 Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 및 Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402].
본 발명에 따른 결합분자 또는 그의 단편은, 중쇄 CDR1이 서열번호 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 115 또는 121의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38, 44, 50, 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 127, 135 또는 136의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 128, 129, 130 또는 131의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40, 46, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 132 또는 133의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119 또는 125의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 또는 134의 아미노산 서열을 포함하는 항체와 인간 TCTP에 대한 결합에 대해 경쟁하는 결합분자 또는 그의 단편일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "결합에 대해 경쟁"은 결합분자, 특히 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 항원에 결합하고 다른 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 억제 또는 차단하는 것을 의미한다. 이 용어는 또한 두 항체 사이에서 양 방향으로의 경쟁을 포함하는데, 즉, 제1 항체가 제2 항체의 결합을 차단하고 결합하고, 역도 또한 같다. 특정 구현예에서, 제1 항체와 제2 항체는 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안으로서, 제1 및 제2 항체는, 예를 들어 입체 장해를 통해, 하나의 결합이 제2 항체의 결합을 차단하고 억제하도록 상이하지만 중첩되는 에피토프에 결합할 수 있다. 항체 사이의 교차-경쟁은 해당 분야에 알려진 방법에 의해, 예를 들어 실-시간, 무-표지 바이오층 간섭측정 분석에 의해 측정될 수 있다.
TCTP는 히스타민 분비 인자(HRF), Tpt1, p23 또는 포르틸린이라고도 불린다. TCTP의 아미노산 서열 및 핵산 서열은 accession no. CCDS9397.1 (cDNA) 및 NP_003286.1 (아미노산)의 번호를 통해 NCBI에서 찾을 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "TCTP"는 TCTP(변형체 포함)의 전장 형태는 물론, 그의 절단체 또는 다량체(예를 들어, 이량체)를 모두 포함하는 것으로 해석된다. 용어 "변형체"는 TCTP의 폴리펩티드 골격(예를 들어, 아미노산 서열)에 변경이 생긴 형태, 또는 TCTP 폴리펩티드가 번역후 변형(예를 들어, 글리코실화 또는 인산화)을 거친 형태를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "특이적으로 결합하는"은 비-특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은 결합 활성을 갖지 않는 표적과 유사한 대조군 분자와 경쟁함으로써 결정될 수 있다. "특이적 결합"의 검정은 당 분야에 공지된 방법을 통해 수행될 수 있으며, 그러한 방법에는 예를 들어 웨스턴 블럿팅(Western blotting), ELISA, RIA, ECL, IRMA, SPR(표면플라스몬공명법) 검사 및 펩티드 스캔이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에 사용되는 용어 "친화성" 또는 "친화도" 또는 "결합력"은 항체 또는 그 항원 결합단편과 항원 사이의 상호작용의 강도이며, 항원의 크기, 모양 및/또는 전하와 같은 항원의 특징 및 항체 또는 항원결합 단편의 CDR 서열에 의해 결정된다. 이러한 친화도를 결정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "결합분자"는 TCTP를 인지하거나 그와 상호작용하여 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 분자를 의미한다. 본 발명에 따른 결합분자는 바람직하게는 폴리펩티드이며, 단백질 부분과 비-단백질 부분(예를 들어, 화학적 링커, 가교제, 약물 등)을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 폴리펩티드는 항체이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "항체"는 임의의 아이소타입의 온전한 면역글로불린, 또는 표적 항원에의 결합을 위해 온전한 항체와 경쟁을 할 수 있는 항원 결합 단편을 의미한다. 예를 들면, 키메라, 인간화, 완전 인간 또는 이중특이적 항체 또는 이들의 항원 결합 단편을 포함한다. 항체는 그 자체로 항원 결합 단백질의 일종이기도 하다. 온전한 항체는 일반적으로 적어도 2개의 전장 중쇄와 2개의 전장 경쇄를 포함하지만, 낙타과 동물에서 자연적으로 발견되는 바와 같이 일부 경우에 항체가 단지 중쇄만을 포함할 수도 있다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 오직 단일원(source)로부터 유래될 수 있거나, 또는 키메라일 수 있다. 키메라 항체는 2종류의 상이한 항체로부터 유래된 부분을 포함하며, 아래 보다 상세하게 기술된다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하이브리도마(예를 들어, 문헌 Kohler and Milstein 1975), 재조합 DNA 기술(예를 들어, 미국특허 제4816567호) 또는 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생산될 수 있다. 다른 방법으로는, 파지 항체 라이브러리와 같은 방식으로 단리될 수도 있다(예를 들어, Clarkson et al., 1991; Marks et al., 1991). 항체는 또한, 유전공학 기법으로 얻어진 마우스, 예를 들어 인간화된 마우스(예를 들어, CAMouse®)를 이용하여 B 세포 스크리닝 또는 하이브리도마 스크리닝을 수행함으로써 얻어질 수도 있다(https:// www.berkeleylights.com/systems/Beacon/, Rapid single B cell antibody discovery and structured light, mABs, https:// doi. Org/10.1080/19420862.2019.1624126). 다른 언급이 없다면, 본 명세서에서 용어 "항체"는 2개의 전장 중쇄와 2개의 전장 경쇄를 포함하는 항체는 물론, 이들의 유도체, 변이체, 단편, 및 돌연변이체를 포함하고, 이들의 예는 아래 기술된 바와 같다.
본 명세서에서 "경쇄"는 항원 또는 에피토프에 대한 결합 특이성을 제공하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장의 경쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 경쇄는 가변 영역 도메인 VL, 및 불변 영역 도메인 CL을 포함한다. 경쇄의 가변 영역 도메인은 경쇄 폴리펩타이드의 아미노 말단에 존재한다. 경쇄의 종류에는 카파 및 람다 사슬이 포함된다.
본 명세서에서 "중쇄"는 항원 또는 에피토프에 대한 결합 특이성을 제공하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장 중쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 중쇄는 가변 영역 도메인 VH 및 3개의 불변 영역 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. VH 도메인은 중쇄 폴리펩타이드의 아미노 말단에 존재하고, CH 도메인은 카복시 말단에 존재하며, CH3가 카복시-말단에 가장 가깝게 위치한다. 중쇄는 IgG (IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3 및 IgG4 서브타입 포함), IgA (IgA1 및 IgA2 서브타입 포함), IgM 및 IgE의 아이소타입을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "단편"은 "항원 결합 단편"을 의미하는 것으로서, 결합분자, 특히 항체 또는 면역글로불린의 사슬(중쇄 또는 경쇄)의 "항원 결합 단편"은 전장 사슬과 비교하여 일부 아미노산이 결여되었지만, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 일부를 포함하는 것이다. 이러한 단편은 표적 항원에 특이적으로 결합할 수 있고, 또는 다른 항체 또는 항원 결합 단편과 특정 에피토프에 결합하기 위해 경쟁할 수 있다는 측면에서 생물학적으로 활성이 있다고 할 수 있다. 한 양태에서, 이러한 단편은 전장 경쇄 또는 중쇄 내에 존재하는 적어도 하나의 CDR을 포함하고, 일부 구현예에서, 단쇄 중쇄 및/또는 경쇄, 또는 이의 일부를 포함한다. 이러한 생물학적 활성 단편은 재조합 DNA 기술에 의해 생산되거나, 또는 예를 들면 온전한 항체를 효소적 또는 화학적 절단하여 생산될 수 있다. 면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편에는 이로 제한하는 것은 아니나, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 도메인 항체 및 단쇄 항체를 포함한다. 또한 이로 제한하는 것은 아니나, 인간, 마우스, 랫트, 카멜리드 또는 토끼를 포함하는 임의의 포유동물에서 유래될 수 있다. 본원에 개시된 하나 이상의 CDR과 같은 항체의 기능적인 부분은 제2의 단백질 또는 저분자 화합물과 공유결합으로 연결되어 특정 표적에 대한 표적 치료제로서 사용될 수 있다.
"Fab 단편"은 1개의 경쇄와 CH1 및 가변 영역만을 포함하는 1개 중쇄로 구성된다. Fab 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와 디설파이드 결합을 형성할 수 없다.
"Fc" 영역은 항체의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 중쇄 단편을 두 분자 포함한다. 이들 2개의 중쇄 단편은 2개 이상의 디설파이드 결합 및 CH3 도메인의 소수성 상호작용에 의해 서로 결합되어 있다.
"Fab' 단편"은 Fab 단편에 중쇄의 CH1과 CH2 도메인 사이에 존재하는 영역을 추가로 포함하여, 두 분자의 Fab' 단편의 두 개의 중쇄사이에서 사슬간 다이설파이드 결합이 형성되어, F(ab')2 분자를 형성할 수 있다.
"F(ab')2 단편"은 앞서 기술한 바와 같이, 2개의 경쇄, 및 가변영역, CH1과 CH1과 CH2 도메인 사이에 불변 영역의 일부를 포함하는 중쇄 2 분자를 포함하여, 2 분자의 중쇄 사이에서 사슬간 다이설파이드 결합이 형성된다. 따라서, F(ab')2 단편은 2개의 Fab' 단편으로 구성되며, 상기 두 개의 Fab' 단편은 이들 간의 다이설파이드 결합에 의해 서로 회합되어 있다.
"Fv 영역"은 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 포함하지만 불변 영역은 포함하지 않는 항체이다.
"단쇄 항체"는 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 유연한 링커에 의해 연결된 항원 결합 영역의 단일 폴리펩타이드 사슬이다. 단쇄 항체는 예를 들면 미국 특허 제5,260,203호를 참조할 수 있다.
"도메인 항체"는 중쇄의 가변 영역 또는 경쇄의 가변 영역만을 포함하는 면역학적으로 기능적인 면역글로불린 단편이다. 일 구현예에서는 2개 이상의 VH 영역이 펩타이드 링커에 의한 공유결합으로 연결되어, 2가(bivalent)의 도메인 항체를 형성한다. 이러한 2가 도메인 항체의 2개의 VH 영역은 동일 또는 상이한 항원을 표적으로 할 수 있다.
"2가의 항원 결합 단백질" 또는 "2가 항체"는 2개의 항원 결합 부위를 포함한다. 이러한 2가 항체에 포함된 2개의 항원 결합 부위는 동일한 항원 특이성을 갖거나, 또는 각각 상이한 항원에 결합하는 이중특이적 항체일 수 있다.
"다중 특이적 항원 결합 단백질" 또는 "다중 특이적 항체"는 두 개 이상의 항원 또는 에피토프를 표적으로 하는 것이다.
"이특이적" 또는 "이중 특이적" 항원 결합 단백질 또는 항체는 2개의 상이한 항원 결합 부위를 갖는 하이브리드 항원 결합 단백질 또는 항체이다. 이러한 이특이적 항체는 다중 특이적 항원 결합 단백질 또는 다중 특이적 항체의 일종으로, 공지된 다양한 방법 예를 들면 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결에 의해 생산될 수 있다. 예를 들면, Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 1990, 79:315-321; Kostelny et al. J. Immunol. 1992, 148:1547-1553 등을 참조할 수 있다. 이특이적 항원 결합 단백질 또는 항체의 2개의 항원결합 부위가 결합하는 2개의 서로 상이한 에피토프는 동일 또는 상이한 단백질 표적에 위치할 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 종양세포로부터 방출된 TCTP에 결합하여 세포외, 바람직하게는 종양 면역 미세환경 중에서의 TCTP의 기능을 억제함으로써 종양 면역 미세 환경 중 억제성 면역세포의 기능을 억제할 수 있다. 억제성 면역세포는 바람직하게는 골수 유래 억제 세포(MDSC)일 수 있다. 상기 골수 유래 억제 세포(MDSC)는 다형핵 골수 유래 억제 세포(polymorphonuclear myeloid-derived suppressor cell, PMN-MDSC) 또는 단핵구성 골수 유래 억제 세포(monocytic myeloid-derived suppressor cell, M-MDSC)일 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 세포 외, 바람직하게는 종양 면역 미세환경 중에서의 TCTP의 기능을 억제함으로써 항암 면역세포의 기능을 활성화하고 종양의 증식을 억제할 수 있다. T 세포 및/또는 NK 세포를 활성화시키거나 증강시킬 수 있다. 항암 면역세포는 바람직하게는 T 세포 또는 NK 세포일 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 세포 외, 바람직하게는 종양 면역 미세환경 중에서의 TCTP의 기능을 억제함으로써 종양 면역 미세환경 중에서 억제성 면역세포에 대한 길항제로서 작용하고 종양의 증식을 억제할 수 있다. 억제성 면역세포는 바람직하게는 골수 유래 억제 세포(MDSC)일 수 있다. 상기 골수 유래 억제 세포(MDSC)는 PMN-MDSC 또는 M-MDSC일 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 세포 외, 바람직하게는 종양 면역 미세환경 중에서의 TCTP의 기능을 억제함으로써 종양 면역 미세환경 중에서 억제성 면역세포가 축적 또는 모집(recruitment)되는 것을 저해하고 종양의 증식을 억제할 수 있다. 억제성 면역세포는 바람직하게는 골수 유래 억제 세포(MDSC)일 수 있다. 상기 골수 유래 억제 세포(MDSC)는 PMN-MDSC 또는 M-MDSC일 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 세포 외, 바람직하게는 종양 면역 미세환경 중에서의TCTP의 기능을 억제함으로써 종양 면역 미세환경 중에서 억제성 면역세포 상에 존재하는 면역조절 수용체와의 결합을 방해하고 종양의 증식을 억제할 수 있다. 억제성 면역세포는 골수 유래 억제 세포(MDSC)일 수 있고, 면역조절 수용체는 톨-유사 수용체 2(TLR2)일 수 있다. 상기 골수 유래 억제 세포(MDSC)는 PMN-MDSC 또는 M-MDSC일 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 세포 외, 바람직하게는 종양 면역 미세환경 중에서의 TCTP가 억제성 면역세포 상에 존재하는 면역조절 수용체와의 결합을 방해함으로써, 상기 면역조절 수용체의 활성화를 억제하고 종양의 증식을 억제할 수 있다. 억제성 면역세포는 바람직하게는 골수 유래 억제 세포(MDSC)일 수 있고, 면역조절 수용체는 톨-유사 수용체 2(TLR2)일 수 있다. 상기 골수 유래 억제 세포(MDSC)는 PMN-MDSC 또는 M-MDSC일 수 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 암을 치료 또는 예방하는데 유용할 수 있다. 이러한 측면에서, 본 발명은 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 이용한 암을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.
본 명세서에서 "치료"라 함은, 암에 걸린 포유 동물에 있어서 야기되는 병의 용태의 진행 및 악화를 저지 또는 완화하는 것을 의미한다. 또한, "예방"이라 함은, 암이 발병될 우려가 있는 포유 동물 환자에 있어서, 그 발병을 미리 저지하는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 또한, 암의 치료를 필요로 하는 개체로서, 면역항암제를 이용한 치료에 반응하지 않았거나 반응하지 않을 가능성이 있거나, 또는 제한적으로 반응하였거나 제한적으로 반응할 가능성이 있는 개체의 면역항암제에 대한 반응성을 증진시키는데 유용할 수 있다. 이러한 측면에서, 본 발명은 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 이용한 면역항암제에 대한 반응성을 증진하는 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "면역항암제"는 면역 반응을 유도, 증강, 억제, 또는 변형하는 것을 포함하는 방법을 통해 암을 겪고 있거나 암의 재발의 위험이 있는 환자를 치료하기 위해 사용되는 약제를 총징하는 것으로, 암세포가 획득한 면역억제 또는 면역회피 기전을 극복하기 위하여 면역체계의 종양 인지능력 또는 파괴능력을 회복 또는 강화시키는 기전을 가질 수 있다.
면역관문 억제제는 그러한 면역항암제의 한 가지 예이다. 용어 "면역관문 억제제"는 면역 세포 억제에 관여하는 면역관문 단백질(immune checkpoint protein)의 활성을 차단하여 면역 세포를 활성화시켜 암세포를 공격하는 약제이다. 면역관문 억제제의 표적이 될 수 있는 면역관문으로는 CTLA-4, PD-1, PD-L1, TIM3, LAG3, BTLA, TIGIT, VISTA, GITR, CD47, 및 KIR 등이 알려져 있다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 또한, 암 환자의 종양 미세 환경 중 면역 억제를 제거, 완화 또는 예방하는데 유용할 수 있다. 이러한 측면에서, 본 발명은 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 이용한 면역 억제를 제거, 완화 또는 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편은 또한, 암 환자의 종양 미세 환경 중 억제성 면역세포를 억제하는데 유용할 수 있다. 이러한 측면에서, 본 발명은 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 이용한 억제성 면역세포를 억제하는 방법을 제공한다. 상기 억제성 면역세포는 바람직하게는 골수 유래 억제 세포(MDSC)일 수 있다. 상기 골수 유래 억제 세포(MDSC)는 PMN-MDSC 또는 M-MDSC일 수 있다.
본 발명에서, 암은 예를 들어, 간세포암종, 담관세포암종, 신세포암종, 편평세포암종, 기저세포암종, 전이세포암종, 선암종, 가스트린종, 흑색종, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 평활근육종, 횡문근육종, 기형종, 혈관육종, 카포시육종, 골육종, 연골육종, 림프관육종, 뇌수막종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 백혈병, 뇌종양, 두경부암, 상피세포 유도 신생물(상피세포암종), 구순암, 구강암, 식도암, 위장관암, 예를 들어 소장암 및 위암, 대장암, 결장암, 간암, 방광암, 췌장암, 난소암, 자궁경부암, 자궁내막암, 폐암, 유방암, 갑상선암, 피부암, 예를 들어 편평세포암종 및 기저세포암종 및 전립선암을 포함할 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 암은 혈액세포에 영향주는 알려진 다른 암들도 포함한다. 바람직하게는, 암은 대장결장암, 흑색종 섬유육종, 췌장암, 간암 또는 피부암이다.
본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 이용한 방법들은 치료적 유효량의 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 개체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 본 발명에서 예방 또는 치료의 대상이 되는 "포유 동물"은, 포유류로 분류되는 임의의 동물을 의미하고, 특별히 한정은 하지 않으나, 예를 들어 인간 외에, 개, 고양이, 토끼, 페럿 등의 애완 동물, 소, 돼지, 양, 말 등의 가축 동물 등이다. 특히 바람직한 "포유 동물"은, 인간이다.
본 발명은 또한, 치료적 또는 예방적 용도를 위한 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 유효성분으로서 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 약제학적으로 허용되는 비활성성분을 포함할 수 있다[Handbook of Pharmaceutical Excipients 등 참조]. 상기 조성물은 예를 들면, 냉동건조된 분말, 슬러리, 수성용액 또는 현탁액의 형태로 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합합으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀루로오스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로오스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 통상적으로 사용할 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 예컨대 정맥내 주입, 피하 주입, 피내 주입, 근육내 주입, 복강내 주입, 흉골 내 주입, 종양 내 주입, 국소 투여, 비내 투여, 뇌내 투여, 두개골 내 투여, 폐내 투여 및 직장내 투여 등으로 투여할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 질환의 종류, 질환의 중증도, 약학 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류, 투여방식 및 환자의 연령, 체중, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로, 치료기간 및 동시에 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있으며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 0.001 내지 1000mg(유효 성분 중량)일 수 있으며, 연속 투여 또는 간헐 투여하는 것이 바람직하다. 본 명세서에서 용어 "치료적 유효량"은 문맥에 따른 질환이나 병태를 치료하는데 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 함유시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 좌제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편 외에 추가의 치료적 유효성분을 포함할 수 있다. 상기 추가의 치료적 유효성분은 예를 들어, 다른 항암제 또는 면역관문 억제제일 수 있으며, 예를 들어 항-PD-1 항체 또는 항-CTLA-4 항체일 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 상기 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 단리된 세포를 제공한다. 본 발명은 또한, 상기 단리된 세포를 배양함으로써 본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 발현시키고 상기 세포로부터 발현된 결합분자 또는 그의 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 본 발명에 따른 TCTP 특이적인 결합분자 또는 그의 단편을 제조하는 방법을 제공한다. 그러한 방법은 생명공학 분야의 통상의 기술자에게 널리 알려져 있다.
본 발명은 상기한 바와 같은 내용을 바탕으로, 하기 (1) 내지 (21)에 관한 것일 수 있지만, 여기에 제한되는 것은 아니다.
(1) 표면 플라스몬 공명에 의한 측정시 약 1 x 10-7 이하의 해리 상수(Kd)로 인간 TCTP(translationally controlled tumor protein) 또는 그의 절단체, 또는 그의 다량체에 결합하여 세포 외에서의 그의 기능을 억제함으로써 억제성 면역세포의 기능을 억제하고/거나 항암 면역세포를 활성화하는 결합분자 또는 그의 단편.
(2) 하기 (a) 내지 (f)에 정의된 바와 같은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하는, TCTP 또는 그의 번역후 변형체, 또는 그의 절단체 또는 다량체에 특이적으로 결합하는 결합분자 또는 그의 단편으로서,
(a) 상기 중쇄 CDR1은
(a1) X1-X2-X3-X4-H의 아미노산 서열(여기서 X1은 S, G 또는 V이고, X2는 Y, H, 또는 N이고, X3은 A 또는 Y이고, X4는 M 또는 V임),
(a2) S-X5-X6-X7-X8-W-X9의 아미노산 서열(여기서 X5는 S 또는 N이고, X6는 N 또는 S이고, X7는 A 또는 W이고, X8은 A이거나 존재하지 않고, X9는 N 또는 S임),
(a3) G-Y-T-F-T-G-Y-Y-M-H의 아미노산 서열, 또는
(a4) N-A-R-M-G-V-S의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(b) 상기 중쇄 CDR2는
(b1) E-I-X1-H-X2-G-X3-T-T-Y-N-P-S-L-K-S의 아미노산 서열(여기서 X1은 D 또는 Y이고, X2는 S이거나 존재하지 않고, X3은 T 또는 V임),
(b2) W-I-N-X4-X5-X6-X7-X8-T-X9-Y-X10-Q-K-F-Q-X11의 아미노산 서열(여기서 X4는 A 또는 P이고, X5는 G, I 또는 N이고, X6은 K, N, S 또는 T이고, X7은 G 또는 S이고, X8은 G, N, Y, D 또는 K이고, X9는 K, N 또는 E이고, X10은 A 또는 S이고, X11은 D 또는 G임),
(b3) R-T-X12-Y-X13-S-K-W-Y-N-D-Y-A-X14-S-V-K-S의 아미노산 서열(여기서 X12는 F 또는 Y이고, X13은 K 또는 R이고, X14는 E 또는 V임), 또는
(b4) H-I-F-S-N-D-E-K-S-Y-S-Y-S-L-K-S의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(c) 상기 중쇄 CDR3은
(c1) G-X1-X2-X3-X4-F-D-X5의 아미노산 서열(여기서 X1은 R 또는 G이고, X2는 A 또는 S이고, X3은 A 또는 V이고, X4는 A 또는 V이고, X5는 P 또는 Y임),
(c2) D-G-S-G-S-Y-E-G-Y의 아미노산 서열,
(c3) W-V-F-D-Y의 아미노산 서열,
(c4) X6-A-X7-R-L-R-X8-A-X9-D-I의 아미노산 서열(여기서 X6은 L 또는 P이고, X7은 P 또는 W이고, X8은 G 또는 M이고, X9는 F 또는 Y임),
(c5) R-L-T-I-V-R-G-V-M-R-G-G-M-D-V의 아미노산 서열,
(c6) G-Y-Y-D-I-L-T-G-Y-Y-T-T-D-A-F-D-I의 아미노산 서열,
(c7) X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-F-D-Y의 아미노산 서열(여기서 X10은 V이거나 존재하지 않고, X11은 R 또는 L이거나 존재하지 않고, X12는 G 또는 L이고, X13은 Y, I, T 또는 W이고, X14는 F 또는 T이고, X15는 D 또는 G이고, X16은 W, T, Y 또는 E이고, X17은 W, T, Y 또는 L이고, X18은 A, P 또는 Y임),
(c8) G-G-V-L-L-Y-F-G-E-L-S-R-F-D-Y의 아미노산 서열, 또는
(c8) E-G-I-T-V-G-R-G-V-M-L-Y-F-D-L의 아미노산 서열, 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
(d) 상기 경쇄 CDR1은
(d1) R-A-S-Q-X1-X2-X3-X4-X5-L-X6의 아미노산 서열(여기서 X1은 A, D 또는 G이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 S, R 또는 G이고, X4는 N 또는 S이고, X5는 H, Y, D, N 또는 S이고, X6은 A, G 또는 H임),
(d2) X7-G-X8-X9-S-X10-X11-G-X12-X13-X14-X15-V-S의 아미노산 서열(여기서 X7은 S 또는 T이고, X8은 S 또는 T 이고, X9는 N 또는 S이고, X10은 D 또는 N이고, X11은 I 또는 V이고, X12는 G, N 또는 T이고, X13은F, K 또는 Y이고, X14는 N 또는 D이거나 존재하지 않고, X15는 K 또는 Y임),
(d3) K-S-S-Q-X16-X17-L-Y-X18-X19-N-N-K-X20-Y-X21-A의 아미노산 서열(여기서 X16은 N 또는 S이고, X17은 I, L 또는 V이고, X18은 N 또는 S이고, X19는 A 또는 S이고, X20은 D 또는 N이고, X21은 I 또는 L임), 또는
(d4) R-S-S-Q-S-L-V-X22-X23-D-G-N-T-X24-L-X25의 아미노산 서열(여기서 X22는 H 또는 Y이고, X23은 R 또는 S이고, X24는 Y 또는 H이고, X25는 S, N 또는 K임), 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고,
(e) 상기 경쇄 CDR2는 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7의 아미노산 서열(여기서 X1은 A, D, E, G, K, W 또는 Y이고, X2 는 A, D, I 또는 V이고, X3은 N, S 또는 T이고, X4는 I, K, N, Q, S 또는 T이고, X5는 L, R, S 또는 W이고, X6은 A, D, F, G, K, P, Q 또는 Y 이고, X7은 F, S 또는 T임) 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고,
(f) 상기 경쇄 CDR3은
(f1) X1-Q-X2-X3-X4-X5-P-X6-T의 아미노산 서열(여기서 X1은 M 또는 Q이고, X2는 A, G 또는 Y이고, X3은 F, H, N, T 또는 Y이고, X4는 G, H, Q, N, S 또는 Y이고, X5는 F, I, L, T, Y 또는 W이고, X6은 H, I, L, P, R, W 또는 Y임),
(f2) X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-V의 아미노산 서열(여기서 X7은 A, N 또는 V이고, X8은 S 또는 T이고, X9는 W 또는 Y이고, X10은 A 또는 D이고, X11은 G 또는 S이고, X12는 D, N 또는 S이고, X13은 L 또는 N이고, X14는 N 또는 R이고, X15는 A 또는 L임), 또는
(f3) X16-Q-X17-X18-S-X19-P-X20-T의 아미노산 서열(여기서 X16은 L 또는 H이고, X17은 H 또는 S이고, X18은 N 또는 S이고, X19는 Y 또는 L이고, X20은 Y, R 또는 Q임), 또는
그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하는,
결합분자 또는 그의 단편.
(3) 상기 (1) 또는 (2)에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 115 또는 121의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38, 44, 50, 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 127, 135 또는 136의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 128, 129, 130 또는 131의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40, 46, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 132 또는 133의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119 또는 125의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 또는 134의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하는, 결합분자 또는 그의 단편.
(4) 상기 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175 및 177의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 또는 그와 90% 이상 상동성인 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변영역은 서열번호 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176 및 178의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 또는 그와 90% 이상 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 것인 결합분자 또는 그의 단편.
(5) 상기 (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 115 또는 121의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38, 44, 50, 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 127, 135 또는 136의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 128, 129, 130 또는 131의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40, 46, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 132 또는 133의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119 또는 125의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 또는 134의 아미노산 서열을 포함하는 항체와 인간 TCTP에 대한 결합에 대해 경쟁하는 결합분자 또는 그의 단편.
(6) 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합단편인 결합분자 또는 그의 단편.
(7) 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합단편인 결합분자 또는 그의 단편.
(8) 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 한 하나에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합단편인 결합분자 또는 그의 단편.
(9) 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 한 하나에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합단편인 결합분자 또는 그의 단편.
(10) 상기 (1) 내지 (9) 중 어느 하나에 있어서, 상기 결합분자가 항체이고, 그의 단편이 항원 결합 단편인, 결합분자 또는 그의 단편.
(11) 상기 (1) 내지 (9) 중 어느 하나의 결합분자 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
(12) 상기 (1) 내지 (9) 중 어느 하나의 결합분자 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에서 발현시키고, 발현된 결합분자 또는 그의 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)의 결합분자 또는 그의 단편을 제조하는 방법.
(13) 암을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 상기 (1) 내지 (9) 중 어느 하나의 결합분자 또는 그의 단편; 상기 결합분자 또는 그의 단편을 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법; 또는 상기 결합분자 또는 그의 단편을 포함하는 암을 치료 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물.
(14) 암의 치료를 필요로 하는 개체로서, 면역항암제를 이용한 치료에 반응하지 않았거나 반응하지 않을 가능성이 있거나, 또는 제한적으로 반응하였거나 제한적으로 반응할 가능성이 있는 개체의 면역항암제에 대한 반응성을 증진시키기 위한 상기 (1) 내지 (9) 중 어느 하나의 결합분자 또는 그의 단편; 상기 결합분자 또는 그의 단편을 면역항암제를 이용한 치료에 반응하지 않았거나 반응하지 않을 가능성이 있거나, 또는 제한적으로 반응하였거나 제한적으로 반응할 가능성이 있는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 면역항암제에 대한 반응성을 증진시키는 방법; 또는 상기 결합분자 또는 그의 단편을 포함하는 면역항암제에 대한 반응성을 증진시키기 위한 약제학적 조성물.
(15) 암 환자의 종양 미세 환경 중 면역 억제를 제거, 완화 또는 예방하는데 사용하기 위한 상기 (1) 내지 (9) 중 어느 하나의 결합분자 또는 그의 단편; 상기 결합분자 또는 그의 단편을 종양 미세 환경 중 면역 억제의 제거, 완화 또는 예방을 필요로 하는 암 환자에게 투여하는 것을 포함하는 면역 억제를 제거, 완화 또는 예방하는 방법; 또는 상기 결합분자 또는 그의 단편을 포함하는 면역 억제를 제거, 완화, 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물.
(16) 암 환자의 종양 미세 환경 중 억제성 면역세포를 억제하는데 사용하기 위한 상기 (1) 내지 (9) 중 어느 하나의 결합분자 또는 그의 단편; 상기 결합분자 또는 그의 단편을 암 환자에게 투여하는 것을 포함하는 종양 미세 환경 중 억제성 면역세포를 억제하는 방법; 또는 상기 결합분자 또는 그의 단편을 포함하는 종양 미세 환경 중 억제성 면역세포를 억제하기 위한 약제학적 조성물.
(17) 상기 (16)에 있어서, 억제성 면역세포가 골수-유래 면역 억제 세포(MDSC)인 결합분자 또는 그의 단편, 방법, 또는 조성물.
(18) 상기 (13) 내지 (17) 중 어느 하나에 있어서, 암이 대장결장암, 흑색종, 섬유육종, 췌장암, 간암 및 피부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 결합분자 또는 그의 단편, 방법, 또는 조성물.
(19) 상기 (13) 내지 (17) 중 어느 하나에 있어서, 면역관문 억제제가 함께 사용되는 방법 또는 조성물.
이하, 본 발명을 하기실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 이들에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1: TCTP에 대한 항체의 제조　
실시예 1-1: 인간화 마우스 모노클로날 항체　
면역화
TCTP에 결합하는 항체를 만들기 위하여, 인간 항체를 생산하는 인간화 마우스(CAMouse®)를 면역화시켰다. 항원으로는 다음과 같은 아미노산 서열을 갖는 인간 TCTP을 사용하였다.　　
인간 TCTP:　
MIIYRDLISHDEMFSDIYKIREIADGLCLEVEGKMVSRTEGNIDDSLIGGNASAEGPEGEGTESTVITGVDIVMNHHLQETSFTKEAYKKYIKDYMKSIKGKLEEQRPERVKPFMTGAAEQIKHILANFKNYQFFIGENMNPDGMVALLDYREDGVTPYMIFFKDGLEMEKC　
C-말단이 MYC/DDK로 표지된 인간 TCTP 50 μg을 수컷 인간화 마우스의 피하에 주사하였고, 이후 2주 간격으로 여섯 번 인간 TCTP 25 μg를 추가로 피하주사 하여 부스팅하였다. 부스팅 1주일 후에 혈액을 채취하여 투여 항원에 대한 결합을 검정하는 표준적인 ELISA 방법을 사용하여 면역화 적정(immunization titration)을 수행하였다.　　
하이브리도마　
표준화된 프로토콜에 따라, SP2/0 마우스 골수종 세포와 인간 TCTP로 면역화된 마우스로부터 단리된 비장 세포의 융합에 의해, 인간 TCTP에 대한 모노클로날 항체를 생성하는 하이브리도마를 얻었다. 융합 후에, 세포 배양 배지를 이용하여 마우스에 투여한 항원에 대한 ELISA 방법을 사용하여 항체를 생산하는 마우스 B 세포와의 융합을 확인하였다. 이어 하이브리도마를 이용하여 단세포 클로닝을 수행하여 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마를 선별하였다. 이후 하이브리도마에서 항체를 생산 및 정제하여, TCTP에 대한 결합을 검정하기 위한 표준적인 ELISA 방법을 사용하여 인간 TCTP에 대한 항체를 선별하였다. 그 결과, 항체 Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22를 얻었고, 이들의 서열을 분석하였다.　 이들 항체들의 서열은 본 명세서에 개시된 것과 같다.
비콘(Beacon) 스크리닝　
하이브리도마 방법 이외에도, 인간 TCTP로 면역화된 마우스로부터 TCTP에 대한 항체를 선별하는 방법으로 비콘 스크리닝 방법(Beacon® Optofluidic System)을 이용하였다. 단리된 마우스의 비장 세포를 비콘 스크리닝을 이용하여 TCTP에 대한 항체를 생산하는 비장 세포를 선별한 후, 선별된 항체의 가변영역 서열을 분석하였다. 분석된 가변영역 서열에 인간 IgG1 불변 영역을 추가하여 항체를 생산 및 정제하였다. TCTP에 대한 결합을 검정하기 위한 ELISA 방법을 사용하여 인간 TCTP에 결합하는 항체를 선별하였다. 그 결과, 항체 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 및 Ab9를 얻었고, 이들의 서열을 분석하였다.　 이들 항체들의 서열은 본원 명세서에 개시된 것과 같다.　　
항체 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21 및 Ab22는 CAMAB(중국)과 GenScript(중국)과의 협력 하에 CAMouse®에서 확보하였다.　
실시예 1-2: 파지 라이브러리 스크리닝
면역화 방법 이외에도, 바이오패닝의 기법을 이용하여 파지 라이브러리로부터 인간 TCTP에 대한 단일사슬항체를 선별하였다. 다양성을 가진 인간 유래 단일사슬항체 라이브러리 (Wuxi Biologics)를 활용하였다. 파지 라이브러리에서 TCTP에 결합하는 단일사슬항체를 선별하기 위하여 총 4회의 바이오패닝을 진행하였다. 구체적으로 10㎍/㎖ 농도의 인간 TCTP 단백질을 면역시험관 표면에 흡착시킨 후, 우혈청 알부민(BSA) 완충용액을 시험관에 첨가하여 TCTP가 흡착되지 않은 표면을 보호하였다. 파지 라이브러리를 면역시험관에 넣고 상온에서 반응시켜서 TCTP에 결합하는 파지를 추출하였다. 추출된 파지는 다음 라운드 패닝에 활용되었다. 이러한 과정을 총 4라운드 반복하여 항원 특이적인 파지를 증폭시켰다. 각 라운드에서 추출된 폴리클로날 파지는 ELISA를 통하여 항원에 대한 결합을 확인하였다.
상기 패닝을 통해 수득한 파지 풀(phage pool)로부터 인간 TCTP에 특이적으로 결합하는 단일클론파지를 선별하기 위해, 상기 파지 풀로부터 단일 콜로니를 확보하였다. 확보된 단일 콜로니로부터 단일클론 파지를 생산한 후, 인간 TCTP에 대한 결합을 검정하는 ELISA 방법을 이용하여 인간 TCTP에 결합하는 파지를 선별하였다. 선별된 파지의 서열을 분석하여 중복되는 클론을 제거한 후, 인간 IgG 불변 영역을 추가하여 항체를 생산 및 정제하였다. TCTP에 대한 결합을 검정하는 ELISA 방법을 사용하여 인간 TCTP에 결합하는 항체를 선별하였다. 그 결과, 항체 Ab10을 얻었고 서열을 분석하였다. 이 항체의 서열은 본원 명세서에 개시된 것과 같다.
실시예 2: TCTP에 대한 결합능 분석
실시예 2-1: 인간 TCTP 항체를 이용한 ELISA 분석
선별된 항체들의 항원에 대한 결합력을 정량적으로 분석하기 위해 ELISA를 수행하였다. 이를 위해 인간 TCTP를 1 μg/ml의 농도로 ELISA 플레이트에 붙인 후, 다양한 농도의 항체를 처리하여 상대적 결합력을 확인하였다. 측정 결과, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21 및 Ab22 항체들 모두 인간 TCTP에 잘 결합함이 확인되었다(도 1a 및 1b).
실시예 2-2: 인간 TCTP 항체를 이용한 SPR 분석
실시예 1에서 선별된 항체들의 항원 결합력을 SPR 기법을 통해 분석하였다. 기기는 Biacore 8K (GEHealthcare)을 사용하였다. 인간 TCTP를 칩 위에 고정하고, 6-7가지의 농도로 항체를 흘려주었다. CM5 칩(GE Healthcare, Cat. 29-1275-56), 재생 완충액(10 mM 글리신-HCl (GE Healthcare), 구동 완충액HBS-EP+ 등을 사용하였다. 동역학 분석을 위해서 결합상에서는 결합 시간을 100 또는 120초로, 유속을 30 또는 50 μl/분으로 하였으며, 해리상에서는 해리 시간을 300 또는 360초로, 유속을 30 또는 50 μl/분으로 하였다. 1:1 결합 모델을 사용하여 피팅하였으며, 평가 소프트웨어는 BIACore Evaluation software(GE healthcare)를 사용하였다.
SPR 결합 친화도 분석 결과
항체 인간 TCTP에 대한 결합 친화도 Kd (M) 측정에 사용된 농도 (nM)
Ab6 7.28E-08 800, 400,200,100,50,25,12.5
Ab7 1.07E-07 1600, 800, 400,200,100,50,25
Ab8 1.40E-08 400,200,100,50,25,12.5,6.25
Ab10 2.24E-10 0.078, 0.156, 0.313, 0.625, 1.25, 2.5
Ab12 1.68E-10 2.5, 1.25, 0.625, 0.3125, 0.15625, 0.078125, 0.0390625
Ab17 1.23E-09 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.5625, 0.78125
Ab19 2.77E-09 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.5625
Ab20 7.04E-10 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.5625, 0.78125
55F3 2.63E-07 50, 100, 200, 400, 800, 1600, 3200
실시예 3: TCTP 항체의 결합력 개선 및 번역 후 변형(post-translational modification) 방지를 위한 변이 항체 개발
실시예 3-1: TCTP 항체의 인간 TCTP 와 마우스 TCTP에 대한 결합력 차이 확인
선별된 항체의 인간 TCTP 와 마우스 TCTP에 대한 결합력의 차이를 확인하기 위해 실시예 2-1과 같은 방법으로 ELISA를 수행한 결과, 항체 Ab10의 마우스 TCTP에 대한 결합력이 낮은 것을 확인하였다.
인간 TCTP와 마우스 TCTP의 서열은 7개의 아미노산이 서로 다르기 때문에, 마우스 TCTP의 서열을 인간 TCTP 서열로 교체한 변이를 만들어서 얻어진 Ab10 변이체들의 결합력을 확인하였다. 그 결과, 마우스 TCTP의 13번째 류신을 인간 TCTP와 같은 메티오닌으로 교체한 변이에서 마우스 TCTP에 대한 결합력이 회복되는 것을 확인하였다.
실시예 3-2: TCTP 항체(Ab10)의 번역 후 변형
선별된 항체 Ab10을 40℃ 조건에서 14 일간 보관한 후 iCIEF (imaging Capillary isoelectric Focusing) 검사를 수행한 결과, 산성 변형체 피크 비율이 35.3%에서 64.8%로 증가하는 것을 확인하였다. 이는 항체 Ab10의 번역 후 변형으로 인한 것으로 추정되었고, 항체 Ab10의 중쇄 CDR2의 5-6번째 아미노산들인 아스파라진과 세린에서 번역 후 변형이 발생할 가능성이 있음이 확인되었다.
실시예 3-3: TCTP 항체(Ab10)의 결합력 강화 및 번역 후 변형 방지를 위한 변이 항체 개발
항체 Ab10의 마우스 TCTP에 대한 결합능을 개선하기 위해 다음과 같이 CDR 서열 중 1개의 아미노산을 변이시킨 변이체들을 파지 라이브러리를 이용하여 제작하였다.
항체 Ab10-1 내지 10-8의 CDR 서열
Antibody ID 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3 경쇄 CDR1 경쇄 CDR3
Ab10 WINPNSGGTNYAQKFQG PAPRLRGAFDI SGSSSNIGNKKVS ATWDSSLRAVV
Ab10-1 WINPNSSGTNYAQKFQG 　 　 　
Ab10-2 　 LAPRLRGAFDI 　 　
Ab10-3 　 PAWRLRGAFDI 　 　
Ab10-4 　 PAPRLRMAFDI 　 　
Ab10-5 　 PAPRLRGAYDI 　 　
Ab10-6 　 　 SGSSSNIGTKKVS 　
Ab10-7 　 　 SGSSSNIGNFKVS 　
Ab10-8 　 　 　 VTWDSSLRAVV
상기 밑줄친 아미노산이 모 항체인 Ab10으로부터 변이된 잔기에 해당한다. 주어진 변이체 항체에 대해 표시되지 않은 CDR 서열들은 모 항체인 Ab10의 것과 동일하다. 예를 들어, Ab10-1 항체는 중쇄 CDR2에서만 변이를 유도한 것이고, 나머지 CDR들인 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3의 서열은 Ab10의 것들과 동일하다.또한, 항체 Ab10의 번역후 변형을 방지하도록 중쇄 CDR2 중 5번째 잔기인 아스파라진을 이소류신으로 치환한 변이체(Ab10-9)와 동일한 CDR2 중 6번째 잔기인 세린을 트레오닌으로 치환한 변이체(Ab10-10)를 제작하였다.
항체 Ab10-9 및 10-10의 CDR 서열
Antibody ID 중쇄 CDR2 중쇄 CDR3 경쇄 CDR1 경쇄 CDR3
Ab10 WINPNSGGTNYAQKFQG PAPRLRGAFDI SGSSSNIGNKKVS ATWDSSLRAVV
Ab10-9 WINPISGGTNYAQKFQG 　 　 　
Ab10-10 WINPNTGGTNYAQKFQG 　 　 　
상기 밑줄친 아미노산이 모 항체인 Ab10으로부터 변이된 잔기에 해당한다. 주어진 변이체 항체에 대해 표시되지 않은 CDR 서열들은 모 항체인 Ab10의 것과 동일하다.이들 변이체들을 대상으로 ELISA를 통해 TCTP에 대한 결합을 검정한 결과, Ab10-1, Ab10-2, Ab10-3, Ab10-4, Ab10-5, Ab10-6, Ab10-7 및 Ab10-8 항체들이 인간 TCTP에 대한 결합력이 모 항체인 Ab10과 동등하면서도 마우스 TCTP에 대한 결합력이 모 항체인 Ab10보다 증가되었음을 확인할 수 있었다(도 2). 또한, Ab10-9 및 Ab10-10의 경우, 산성 변형체의 가능성이 낮으면서도 인간 TCTP에 대한 결합력이 동등하게 유지되었음을 확인하였다(도 2). Ab10 항체의 변이체들은 Ab10 항체로부터 1개의 아미노산이 변이된 것들로서, 해당 변이들은 2개 이상이 동시에 변이된 형태로도 실시할 수 있다.
실시예 4: TCTP 항체의 TCTP와 TLR2 사이의 결합 저해
실시예 4-1: ELISA
TCTP는 세포 외에서 세포막 수용체인 TLR2를 통한 생물학적 기능이 알려져 있다. 선별된 TCTP 항체가 TCTP와 TLR2 사이의 결합을 저해할 수 있는지 확인하기 위하여 ELISA 분석을 진행하였다.
이를 위해 인간 TCTP를 1 μg/ml의 농도로 ELISA 플레이트에 붙인 후, 150 nM의 TLR2와 다양한 농도의 항체 Ab8, Ab10-3, Ab12, Ab20을 각각의 well에 처리한 후, 인간 TCTP에 결합되어 있는 TLR2를 검출하는 방법으로 TCTP와 TLR2 사이의 결합 저해능을 확인하였다. 그 결과, Ab10-3, Ab12, Ab20이 TCTP와 TLR2 사이의 결합을 저해하는 것을 확인하였다 (도 3a).
실시예 4-2: Reporter Cell assay
TLR2는 리간드 결합을 통해 NF-κB 신호 전달을 이용해 면역세포를 조절함이 알려져 있다. 실시예 4-1에서 TCTP-TLR2 결합 저해능이 검증된 항체를 이용해 세포 수준에서 신호전달 억제하는지 확인하기 위해 HEK Blue쪠 hTLR2 Reporter cell을 이용하여 분석하였다.
이를 위해 HEK Blue쪠 hTLR2 Reporter cell을 96-well plate의 well 당 5x104 개씩 분주하여 배양하여, 9 μg/ml의 인간 TCTP와 다양한 농도의 항체 Ab10-3, Ab12, Ab20을 동시에 처리한 후, NF-κB에 의해 조절되는 분비형 알칼라인 포스파타제(SEAP)의 활성을 확인하였다. 그 결과, Ab10, Ab12, Ab20이 TLR2에 의한 신호를 억제하는 것을 확인하였다. (도 3b).
실시예 5: TCTP 항체의 PMN-MDSC 저해 효과
TCTP는 세포 외에서 M-MDSC를 자극하여 종양 면역 미세환경의 항암면역을 억제하는 효과가 있다. 그 효과 중 하나는 PMN-MDSC를 종양 면역 미세환경 중으로 불러들이는 것이다. 본 발명에 따른 항-TCTP 항체가 TCTP의 작용을 억제하여 종양 면역 미세환경 내 PMN-MDSC 축적 억제 등을 통해 항암 면역억제 환경을 완화하는 효과가 있는지 확인하기 위한 실험을 진행하였다.
이를 위해 HT29 세포주 (인간 대장암 세포주) 종양에서 종양 면역 미세환경 내 면역세포를 채취하여 FACS 분석하였다. T세포로 인한 종양성장 억제는 정확한 PMN-MDSC 측정에 영향을 줄 수 있기 때문에, HT29 세포주(2 × 106 개)를 T세포가 없는 BALB/c 누드 마우스에 피하 이식하였다. 이식 13일 후 종양을 채취하고 단일세포로 분리 후, FACS 분석을 실시하였다(도 4a 내지 도 4f). PMN-MDSC는 CD45+CD11b+Ly6G+인 세포 수를 측정하여 평가하였다. 도 5에서 보는 바와 같이 HT29 종양에서 CXCR2 억제제(AZD5069) 또는 항-TCTP 항체 55F3 및 A10을 처리하였을 때 PMN-MDSC가 감소하는 것을 확인하였다. 55F3은 공지의 항-TCTP 항체이다. CXCR2 억제제는 PMN-MDSC의 축적을 억제하는 대조군으로서 사용한 것이다.
실시예 6: TCTP 항체의 종양 증식 저해 효과
실시예 6-1: 단독 투여
항-TCTP 항체의 종양 증식 억제능을 확인하기 위하여, 인간 TCTP가 knock-in 되어있는 SL4 세포주(SL4 hTCTP KI)를 이용하였다. SL4 hTCTP KI 세포(2 x 105 개)를 C57BL/6 마우스에 피하 접종하고, 접종일(Day 1)을 기준으로 1, 4, 8, 11, 15일에 항-TCTP 항체 (Ab12 또는 Ab20, 100 μg, 복강내 투여) 또는 대조군 아이소타입 IgG 항체(BioXCell; 100 μg 복강내 투여)를 투여하였다. 그 결과, Ab12 또는 Ab20을 투여한 동물 모델에서 종양 성장 억제능이 확인되었다(도 6a)
마우스 종양 세포주 Pan02(췌장), Hepa1-6(간암), B16BL6(피부암), MC38(대장암)을 C57BL/6 마우스에 피하 접종하고(각각 3x105, 5x105, 2x105, 1x106개의 세포), 접종일(Day 1)을 기준으로 항체 Ab12, Ab20 또는 항 PD-1 항체를 주 2회 투여 간격으로 2주 또는 3주간 100 μg 복강내 투여하였다. 그 결과, 4종의 암세포주 모두에서 Ab12 또는 Ab20에 의해 종양 성장의 성장속도가 감소됨이 확인되었다(도 6b 내지 6e). MC38을 이용한 실험에서는 항-PD-1 항체 투여군이 포함되었는데, Ab20의 종양 성장 억제가 항-PD-1 항체보다 높음을 알 수 있었다.
실시예 6-2: 병용 투여
본 발명에 따른 항-TCTP 항체의 종양 면역 미세환경 중 면역억제 환경 완화 효과가 종양 증식에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 항-TCTP 항체와 항PD-1 항체의 조합이 종양 억제에 미치는 영향을 연구하였다. B16F10 (1 x 105 개) 세포를 C57BL/6 마우스에 피하 접종하였다. 접종일(Day 1)을 기준으로 1, 4, 8, 11, 15, 18, 22일에 항-TCTP 항체 Ab8 (100 μg, 복강내 투여) 와 항PD-1 항체(BioXCell; 100 μg, 정맥주사)를 단독 또는 병용 투여했다. 그 결과, 항-PD-1 항체만을 투여했을 때에 비해 항-PD-1 항체에 항-TCTP 항체를 추가로 투여하였을 때 종양 크기가 더욱 줄어들었음이 확인되었다(도 7).
SL4 세포를 이용한 또다른 면역관문 억제제와의 병용투여 실험에서도 동일한 효과 관찰되었다. SL4 세포(2 x 105 개) 를 C57BL/6 마우스에 피하 접종하였다. 접종일(Day 1)을 기준으로 1, 4, 8, 11, 15, 18, 22일에 항-TCTP 항체 Ab8 (100 μg, 복강내 투여) 와 항CTLA-4 항체(BioXCell; 100 μg, 정맥주사)를 단독 또는 병용 투여했다. 그 결과, 항-CTLA-4 항체만을 투여했을 때에 비해 항-CTLA-4 항체에 항-TCTP 항체를 추가로 투여하였을 때 종양 크기가 더욱 줄어들었음이 확인되었다(도 8). 이러한 결과들은 본 발명에 따른 TCTP 특이적 항체가 그 자체로 종양 증식을 효과적으로 저해할 뿐 아니라, 면역관문 억제제와 병용되었을 때 종양 증식 저해 효과를 상승적으로 개선시킬 수 있을 보여준다.

Claims (19)

  1. 표면 플라스몬 공명에 의한 측정시 약 1 x 10-7 이하의 해리 상수(Kd)로 인간 TCTP(translationally controlled tumor protein) 또는 그의 절단체, 또는 그의 다량체에 결합하여 세포 외에서의 그의 기능을 억제함으로써 억제성 면역세포의 기능을 억제하고/거나 항암 면역세포를 활성화하는 결합분자 또는 그의 단편.
  2. 하기 (a) 내지 (f)에 정의된 바와 같은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하는, TCTP 또는 그의 번역후 변형체, 또는 그의 절단체 또는 다량체에 특이적으로 결합하는 결합분자 또는 그의 단편으로서,
    (a) 상기 중쇄 CDR1은
    (a1) X1-X2-X3-X4-H의 아미노산 서열(여기서 X1은 S, G 또는 V이고, X2는 Y, H, 또는 N이고, X3은 A 또는 Y이고, X4는 M 또는 V임),
    (a2) S-X5-X6-X7-X8-W-X9의 아미노산 서열(여기서 X5는 S 또는 N이고, X6는 N 또는 S이고, X7는 A 또는 W이고, X8은 A이거나 존재하지 않고, X9는 N 또는 S임),
    (a3) G-Y-T-F-T-G-Y-Y-M-H의 아미노산 서열, 또는
    (a4) N-A-R-M-G-V-S의 아미노산 서열, 또는
    그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
    (b) 상기 중쇄 CDR2는
    (b1) E-I-X1-H-X2-G-X3-T-T-Y-N-P-S-L-K-S의 아미노산 서열(여기서 X1은 D 또는 Y이고, X2는 S이거나 존재하지 않고, X3은 T 또는 V임),
    (b2) W-I-N-X4-X5-X6-X7-X8-T-X9-Y-X10-Q-K-F-Q-X11의 아미노산 서열(여기서 X4는 A 또는 P이고, X5는 G, I 또는 N이고, X6은 K, N, S 또는 T이고, X7은 G 또는 S이고, X8은 G, N, Y, D 또는 K이고, X9는 K, N 또는 E이고, X10은 A 또는 S이고, X11은 D 또는 G임),
    (b3) R-T-X12-Y-X13-S-K-W-Y-N-D-Y-A-X14-S-V-K-S의 아미노산 서열(여기서 X12는 F 또는 Y이고, X13은 K 또는 R이고, X14는 E 또는 V임), 또는
    (b4) H-I-F-S-N-D-E-K-S-Y-S-Y-S-L-K-S의 아미노산 서열, 또는
    그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
    (c) 상기 중쇄 CDR3은
    (c1) G-X1-X2-X3-X4-F-D-X5의 아미노산 서열(여기서 X1은 R 또는 G이고, X2는 A 또는 S이고, X3은 A 또는 V이고, X4는 A 또는 V이고, X5는 P 또는 Y임),
    (c2) D-G-S-G-S-Y-E-G-Y의 아미노산 서열,
    (c3) W-V-F-D-Y의 아미노산 서열,
    (c4) X6-A-X7-R-L-R-X8-A-X9-D-I의 아미노산 서열(여기서 X6은 L 또는 P이고, X7은 P 또는 W이고, X8은 G 또는 M이고, X9는 F 또는 Y임),
    (c5) R-L-T-I-V-R-G-V-M-R-G-G-M-D-V의 아미노산 서열,
    (c6) G-Y-Y-D-I-L-T-G-Y-Y-T-T-D-A-F-D-I의 아미노산 서열,
    (c7) X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-F-D-Y의 아미노산 서열(여기서 X10은 V이거나 존재하지 않고, X11은 R 또는 L이거나 존재하지 않고, X12는G 또는 L이고, X13은 Y, I, T 또는 W이고, X14는 F 또는 T이고, X15는 D 또는 G이고, X16은 W, T, Y 또는 E이고, X17은 W, T, Y 또는 L이고, X18은 A, P 또는 Y임),
    (c8) G-G-V-L-L-Y-F-G-E-L-S-R-F-D-Y의 아미노산 서열, 또는
    (c8) E-G-I-T-V-G-R-G-V-M-L-Y-F-D-L의 아미노산 서열, 또는
    그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고;
    (d) 상기 경쇄 CDR1은
    (d1) R-A-S-Q-X1-X2-X3-X4-X5-L-X6의 아미노산 서열(여기서 X1은 A, D 또는 G이고, X2는 I 또는 V이고, X3은 S, R 또는 G이고, X4는 N 또는 S이고, X5는 H, Y, D, N 또는 S이고, X6은 A, G 또는 H임),
    (d2) X7-G-X8-X9-S-X10-X11-G-X12-X13-X14-X15-V-S의 아미노산 서열(여기서 X7은 S 또는 T이고, X8은 S 또는 T 이고, X9는 N 또는 S이고, X10은 D 또는 N이고, X11은 I 또는 V이고, X12는 G, N 또는 T이고, X13은F, K 또는 Y이고, X14는 N 또는 D이거나 존재하지 않고, X15는 K 또는 Y임),
    (d3) K-S-S-Q-X16-X17-L-Y-X18-X19-N-N-K-X20-Y-X21-A의 아미노산 서열(여기서 X16은 N 또는 S이고, X17은 I, L 또는 V이고, X18은 N 또는 S이고, X19는 A 또는 S이고, X20은 D 또는 N이고, X21은 I 또는 L임), 또는
    (d4) R-S-S-Q-S-L-V-X22-X23-D-G-N-T-X24-L-X25의 아미노산 서열(여기서 X22는 H 또는 Y이고, X23은 R 또는 S이고, X24는 Y 또는 H이고, X25는 S, N 또는 K임), 또는
    그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고,
    (e) 상기 경쇄 CDR2는 X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7의 아미노산 서열(여기서 X1은 A, D, E, G, K, W 또는 Y이고, X2 는 A, D, I 또는 V이고, X3은 N, S 또는 T이고, X4는 I, K, N, Q, S 또는 T이고, X5는 L, R, S 또는 W이고, X6은 A, D, F, G, K, P, Q 또는 Y 이고, X7은 F, S 또는 T임) 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고,
    (f) 상기 경쇄 CDR3은
    (f1) X1-Q-X2-X3-X4-X5-P-X6-T의 아미노산 서열(여기서 X1은 M 또는 Q이고, X2는 A, G 또는 Y이고, X3은 F, H, N, T 또는 Y이고, X4는 G, H, Q, N, S 또는 Y이고, X5는 F, I, L, T, Y 또는 W이고, X6은 H, I, L, P, R, W 또는 Y임),
    (f2) X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-V의 아미노산 서열(여기서 X7은 A, N 또는 V이고, X8은 S 또는 T이고, X9는 W 또는 Y이고, X10은 A 또는 D이고, X11은 G 또는 S이고, X12는 D, N 또는 S이고, X13은 L 또는 N이고, X14는 N 또는 R이고, X15는 A 또는 L임), 또는
    (f3) X16-Q-X17-X18-S-X19-P-X20-T의 아미노산 서열(여기서 X16은 L 또는 H이고, X17은 H 또는 S이고, X18은 N 또는 S이고, X19는 Y 또는 L이고, X20은 Y, R 또는 Q임), 또는
    그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하는,
    결합분자 또는 그의 단편.
  3. 제1항 또는 제2항(바람직하게는 제2항)에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 115 또는 121의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38, 44, 50, 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 127, 135 또는 136의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 128, 129, 130 또는 131의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40, 46, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 132 또는 133의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119 또는 125의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 또는 134의 아미노산 서열 또는 그의 보존적 아미노산 치환체를 포함하는, 결합분자 또는 그의 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)에 있어서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175 및 177의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 또는 그와 90% 이상 상동성인 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변영역은 서열번호 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176 및 178의 아미노산 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열 또는 그와 90% 이상 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 것인 결합분자 또는 그의 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37, 43, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 115 또는 121의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38, 44, 50, 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 127, 135 또는 136의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 128, 129, 130 또는 131의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40, 46, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 132 또는 133의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119 또는 125의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 또는 134의 아미노산 서열을 포함하는 항체와 인간 TCTP에 대한 결합에 대해 경쟁하는 결합분자 또는 그의 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합단편인 결합분자 또는 그의 단편.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합단편인 결합분자 또는 그의 단편.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합단편인 결합분자 또는 그의 단편.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)에 있어서, 중쇄 CDR1이 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2가 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3가 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1이 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2가 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3이 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합단편인 결합분자 또는 그의 단편.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)에 있어서, 상기 결합분자가 항체이고, 그의 단편이 항원 결합 단편인, 결합분자 또는 그의 단편.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)의 결합분자 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)의 결합분자 또는 그의 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에서 발현시키고, 발현된 결합분자 또는 그의 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)의 결합분자 또는 그의 단편을 제조하는 방법.
  13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)의 결합분자 또는 그의 단편을 포함하는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물.
  14. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)의 결합분자 또는 그의 단편을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 개체로서, 면역항암제를 이용한 치료에 반응하지 않았거나 반응하지 않을 가능성이 있거나, 또는 제한적으로 반응하였거나 제한적으로 반응할 가능성이 있는 개체의 면역항암제에 대한 반응성을 증진시키기 위한 약제학적 조성물.
  15. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)의 결합분자 또는 그의 단편을 포함하는, 암 환자의 종양 미세 환경 중 면역 억제를 제거, 완화 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물.
  16. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항(바람직하게는 제2항)의 결합분자 또는 그의 단편을 포함하는, 암 환자의 종양 미세 환경 중 억제성 면역세포를 억제하기 위한 약제학적 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 억제성 면역세포가 골수-유래 면역 억제 세포(MDSC)인 약제학적 조성물.
  18. 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항(바람직하게는 제13항)에 있어서, 암이 대장결장암, 흑색종, 섬유육종, 췌장암, 간암 및 피부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
  19. 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항(바람직하게는 제13항)에 있어서, 면역관문 억제제와 함께 사용되는 약제학적 조성물.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012080509A1 (en) * 2010-12-17 2012-06-21 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Nucleic acids targeting tctp for use in the treatment of chemo-or hormone-resistant cancers
KR20170026421A (ko) * 2014-06-16 2017-03-08 이화여자대학교 산학협력단 TCTP 이량체형 IgE-의존성 히스타민 방출인자와 이의 수용체간의 결합을 억제하는 TCTP 유래 C-말단 도메인 및 이의 용도
WO2022049867A1 (ja) * 2020-09-02 2022-03-10 国立大学法人東京大学 がん免疫微小環境の調節物質およびそれによる予防・診断・治療的利用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012080509A1 (en) * 2010-12-17 2012-06-21 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Nucleic acids targeting tctp for use in the treatment of chemo-or hormone-resistant cancers
KR20170026421A (ko) * 2014-06-16 2017-03-08 이화여자대학교 산학협력단 TCTP 이량체형 IgE-의존성 히스타민 방출인자와 이의 수용체간의 결합을 억제하는 TCTP 유래 C-말단 도메인 및 이의 용도
WO2022049867A1 (ja) * 2020-09-02 2022-03-10 国立大学法人東京大学 がん免疫微小環境の調節物質およびそれによる予防・診断・治療的利用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LEE HYO-JUNG, SONG KWON-HO, OH SE JIN, KIM SUYEON, CHO EUNHO, KIM JUNGWON, PARK YUN GYU, LEE KYUNG-MI, YEE CASSIAN, SONG SEUNG-HWA: "Targeting TCTP sensitizes tumor to T cell-mediated therapy by reversing immune-refractory phenotypes", NATURE COMMUNICATIONS, NATURE PUBLISHING GROUP, UK, vol. 13, no. 1, 19 April 2022 (2022-04-19), UK, pages 2127, XP093125800, ISSN: 2041-1723, DOI: 10.1038/s41467-022-29611-y *
RYOU JEONG-HYUN, LEE GWANGHEE, TANIGUCHI TADATSUGU, YANAI HIDEYUKI, HANGAI SHO: "Abstract 242: TCTP is a target for cancer immunotherapy modulating myeloid-derived suppressor cells", CANCER RESEARCH, AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, US, vol. 82, no. 12_Supplement, 15 June 2022 (2022-06-15), US , pages 242 - 242, XP093125795, ISSN: 1538-7445, DOI: 10.1158/1538-7445.AM2022-242 *

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