WO2023095568A1 - オリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法、及びヒドロキシチロソール含有組成物 - Google Patents

オリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法、及びヒドロキシチロソール含有組成物 Download PDF

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hydroxytyrosol
olive leaves
extraction
olive
extract
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佳樹 ▲高▼石
俊良 吾妻
詩織 福崎
佳奈 内海
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大倉工業株式会社
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    • C07C39/11—Alkylated hydroxy benzenes containing also acyclically bound hydroxy groups, e.g. saligenol

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing hydroxytyrosol from olive leaves, and a hydroxytyrosol-containing composition containing such an extract containing hydroxytyrosol.
  • Patent Documents 1 and 2 disclose a method of obtaining hydroxytyrosol by first extracting oleuropein from olive leaves and then hydrolyzing the extracted oleuropein using hydrochloric acid, an organic solvent, or the like.
  • Patent Documents 1 and 2 describe obtaining hydroxytyrosol by secondary chemical treatment of leaves, which are parts other than the fruits of olives, but obtaining hydroxytyrosol directly from leaves. No method is disclosed or suggested. Concerning the use of hydroxytyrosol obtained in Patent Documents 1 and 2, there are concerns about the effects of drugs and the like used on health.
  • the present invention provides a method for producing hydroxytyrosol that can extract hydroxytyrosol directly from olive leaves using water, and a hydroxytyrosol-containing composition containing the extract obtained by the production method. intended to provide
  • the inventors of the present invention have made intensive studies to solve the above problems, and as a result, have found a method for obtaining hydroxytyrosol directly from olive leaves by subjecting them to pressurized hot water extraction using water.
  • the present invention has been completed.
  • the method for producing hydroxytyrosol from olive leaves of the present invention is a method for producing hydroxytyrosol from olive leaves, and includes the step of extracting a mixture containing olive leaves and water with pressurized hot water.
  • the extraction temperature of the mixture is 120° C. or higher and 250° C. or lower.
  • the hydroxytyrosol-containing composition of the present invention is a composition containing a pressurized hot water extract of olive leaves, and the content of hydroxytyrosol in the pressurized hot water extract is a predetermined value or more. It is characterized by
  • hydroxytyrosol can be produced directly from olive leaves by pressurized hot water extraction at 100°C or higher.
  • FIG. 1 is a diagram showing experimental analysis results of Examples 1 to 8 and Comparative Example 1.
  • FIG. (A) is an example of the LC/MS chromatogram of the extract of this experiment, and (B) is an example of the chromatogram of the standard substance.
  • FIG. 10 is a diagram showing experimental analysis results of Examples 9 to 20;
  • the method for producing hydroxytyrosol from olive leaves of the present embodiment includes a step of extracting olive leaves with pressurized hot water at 100 ° C. or higher, It is characterized by being able to produce hydroxytyrosol directly from olive leaves. Since hydroxytyrosol contained in the extract obtained by this production method has a high antioxidant effect, if a person ingests the extract obtained by this production method, oxidized LDL- It is expected that the production of cholesterol can be suppressed.
  • the hydroxytyrosol-containing composition of the present embodiment contains the extract obtained by the present production method.
  • the hydroxytyrosol-containing composition of the present embodiment is characterized by containing an extract containing hydroxytyrosol obtained directly from olive leaves, and is used in various applications (for example, foods ( (including health foods), medicines, pharmaceuticals (including quasi-drugs), cosmetics, etc.).
  • olive refers to a plant belonging to the genus Olive of the family Oleaceae, and the type thereof is not particularly limited.
  • the part of the olive to be extracted is the leaf, and these can be used singly or in combination.
  • the object to be extracted in this production method includes, of course, olive leaves alone, as well as olive leaves with a part of a branch attached to a leaf, and a branch with multiple leaves attached. It is not particularly limited as long as it is in a state of mainly existing. Therefore, in the present specification, the term "olive leaf” includes not only the olive leaf but also the branch including the branches.
  • the cultivation state of the olives to be extracted is not particularly limited. For example, if leaves attached to olive branches that are to be pruned and discarded during the harvesting process of olive fruits are used, there is an advantage that unused biomass resources can be effectively utilized.
  • this production method includes a step of hot water extraction with hot water that does not boil even at a temperature exceeding 100° C. in a mixture containing olive leaves and water.
  • the extract obtained by this production method corresponds to the pressurized hot water extract in the claims.
  • an extractor equipped with a pressurized container is used.
  • the pressurized container of this extraction device has a storage space inside which can store water and olive leaves to be extracted, so that the mixture stored in the storage space can be pressurized and heated. ing.
  • the temperature and pressure in this pressurized container can be controlled by an extraction device.
  • this extraction device is capable of processing a mixture containing olive leaves and water, which is housed in the housing space of the pressurized container, under predetermined high-temperature and high-pressure conditions.
  • This extraction device is not particularly limited as long as it has the above functions, and for example, a known device can be adopted.
  • the extraction temperature of the mixture is adjusted to a temperature at which the components contained in the olive leaves can be hydrolyzed.
  • This extraction temperature is not particularly limited as long as it is a temperature having the above functions.
  • the extraction temperature is adjusted to be higher than 100°C.
  • the temperature is adjusted to preferably 110° C. or higher, more preferably 120° C. or higher, and even more preferably 140° C. or higher.
  • by increasing the extraction temperature it becomes easier to dissolve the olive leaf components into the water in the mixture. That is, since the solubility of the target component can be improved, the concentration of the target component in the extract can be increased.
  • the extraction temperature by raising the extraction temperature, there is a tendency that unnecessary components (components other than the target components, hereinafter referred to as impurities) can be reduced. It is presumed that this phenomenon is caused by the impurities being further decomposed by the high-temperature treatment and becoming insoluble in water.
  • the upper limit of the extraction temperature is preferably 300°C or lower, more preferably 250°C or lower. Therefore, the extraction temperature in this production method is higher than 100° C. and 300° C. or lower, more preferably 110° C. or higher and 250° C. or lower.
  • the solid content mass per 100 ml of the extract will be 4000 mg to 8000 mg of extract components can be obtained.
  • the solid content mass is the value of the weight of the object to be measured in an absolute dry state (completely dry state) after being dried in a dryer (for example, 130°C for 1 hour).
  • the extraction temperature is preferably 120°C or higher, more preferably 140°C or higher, and even more preferably 160°C or higher. It is more preferably 170° C. or higher, more preferably 180° C., and even more preferably 190° C. or higher.
  • the extraction temperature is higher than 250°C, the decomposition of hydroxytyrosol (for example, thermal decomposition) may proceed. Therefore, the upper limit of the extraction temperature of hydroxytyrosol is preferably 250°C or lower, more preferably 220°C or lower, and still more preferably 200°C or lower.
  • the extraction temperature is more preferably 140°C to 220°C, more preferably 170°C to 200°C, even more preferably 180°C to 200°C.
  • the rate (concentration) of impurities tends to increase when the extraction temperature is lower than 140°C or higher than 220°C. Conversely, when the extraction temperature is 140° C. to 220° C., the ratio (concentration) of impurities tends to decrease. Therefore, from the viewpoint of increasing the concentration of hydroxytyrosol (concentration of solids) in the extract and suppressing the concentration of impurities (concentration of solids), the extraction temperature is adjusted to 140°C to 220°C.
  • the temperature is preferably 160°C to 220°C, more preferably 160°C to 200°C, even more preferably 170°C to 200°C, still more preferably 180°C to 200°C. adjust to
  • the solid content concentration (% by mass) is a percentage value obtained by dividing the mass of hydroxytyrosol contained in the dry solidified product by the mass of the dry solidified product.
  • hydroxytyrosol which originally does not exist in olive leaves, can be mentioned as such a target component.
  • This hydroxytyrosol can be obtained directly from olive leaves by adjusting the extraction temperature in this production method within a predetermined range.
  • this production method compared to the conventional method (method of extracting polyphenols such as oleuropein from olives and then chemically treating these polyphenols to produce hydroxytyrosol), it is possible to produce hydroxytyrosol from olive leaves. Since hydroxytyrosol can be produced directly, hydroxytyrosol can be produced efficiently and simply.
  • the extraction solvent in this production method is water. Therefore, the extract containing the target component can be used as it is. For example, by using this production method, an extract containing highly safe hydroxytyrosol can be easily prepared. Moreover, since water is used as the extraction solvent in this production method, there is also the advantage that the effects of organic solvents and the like on humans can be reduced compared to conventional techniques.
  • the desired component can be obtained directly from the olive leaf by extracting the desired component not present in the olive leaf with hot water at a predetermined temperature.
  • hydroxytyrosol does not originally exist in olive leaves, but by using this production method, hydroxytyrosol can be produced directly from olive leaves. .
  • the method for producing hydroxytyrosol as described above was clarified for the first time by the present inventors. Although the definite mechanism by which hydroxytyrosol can be produced from olive leaves in which hydroxytyrosol does not exist is unknown, it is speculated as follows. Olive leaves contain many polyphenols such as oleuropein having a hydroxytyrosol skeleton in the molecule.
  • the extraction pressure can be obtained as a theoretical value at the extraction temperature. This theoretical value can be obtained from the vapor pressure curve of water at each extraction temperature. For example, when the extraction temperature is 90° C., the extraction pressure is 0.1 Mpa, which is the same as the atmospheric pressure, 0.2 Mpa when the extraction temperature is 120° C., 0.36 Mpa when the extraction temperature is 140° C., When the extraction temperature is 200° C., it becomes 1.55 MPa. See Examples for pressures at other temperatures.
  • the extraction time is not particularly limited as long as the target component can be extracted, and can be appropriately adjusted by the extraction temperature and extraction pressure.
  • the extraction time is 10 minutes or longer, more preferably 60 minutes or longer.
  • the upper limit is not particularly limited, there is a tendency that the rate of increase in the recovery rate of the extract does not improve even if it is carried out for 120 minutes or longer. Therefore, from the viewpoint of workability and efficiency, the extraction time is preferably 10 minutes or more and 120 minutes or less, more preferably 60 minutes or more and 120 minutes or less.
  • the extraction time does not include the time required to reach the predetermined extraction temperature. For example, when the extraction temperature is 180° C. and the extraction pressure is 1.00 MPa, the extraction time can be adjusted to 60 minutes or longer.
  • the liquid extract, water-insoluble components, olive leaves after the extraction process, etc. are obtained as residues (solid contents).
  • the mixture (extract and solid content) after this extraction treatment can be separated from each other by treatment such as filtration and centrifugation.
  • the separated extract can be used as it is because the extraction solvent is water, as described above, or it can be concentrated and the concentration of the components (especially hydroxytyrosol) contained in the extract ( It may be used in a state (extract of extract) in which the solid content concentration) is increased.
  • the composition containing this extract is the hydroxytyrosol-containing composition of the present embodiment.
  • the mixing ratio of the olive leaves and water contained in the pressurized container of the extraction device is not particularly limited.
  • the amount of water is adjusted to 100 parts by mass or more with respect to 100 parts by mass of olive leaves, which are the object to be extracted.
  • the amount is preferably 300 parts by mass or more, more preferably 500 parts by mass or more.
  • the upper limit ratio of water is preferably 2000 parts by mass or less, more preferably 500 parts by mass or less with respect to 100 parts by mass of olive leaves.
  • 10 g of olive leaves can contain 50 ml of water in a pressurized container. In this case, the amount of water is adjusted to 500 parts by mass with respect to 100 parts by mass of olive leaves.
  • the solvent supplied into the pressurized container of the extraction device is not limited to water only.
  • solvents other than water include ethanol, butylene glycol, and hexane.
  • the mixing ratio of such a solvent other than water is not particularly limited as long as it is adjusted to be lower than the mixing ratio of water. For example, it can be adjusted to 100 parts by mass or less with respect to 100 parts by mass of water.
  • Acids such as citric acid, succinic acid, gluconic acid and acetic acid can be added to the solvent water. By adding each of these acids, the pH of the solvent during extraction can be adjusted.
  • the amount of acid added is not particularly limited as long as the pH of the solvent before mixing the olive leaves and before extraction is adjusted to about 1 to 4, preferably about 2 to 3. is added to adjust the pH value of the solvent to the above range, the amount of hydroxytyrosol produced can be increased compared to the case where the solvent is only water.
  • the shape and size of the olive leaf used in the present production method are not particularly limited as long as the shape and size can be accommodated in the accommodation space of the pressurized container of the extraction device.
  • the olive leaves may be left as they are in the harvested state, or may be pulverized into small pieces. In the latter case, processing time and processing efficiency can be improved.
  • a known method can be used to reduce the size of olive leaves. For example, if the olive leaves are cut, crushed, or otherwise processed, the olive leaves can be supplied as crushed products such as chips or powder.
  • the olive leaves may be used in a state of being pressed using a press or the like.
  • pressed olive leaves and/or juice collected after pressing can be supplied to the pressurized vessel of the device.
  • an improvement in the recovery rate of the extract can be expected.
  • a step of irradiating microwaves to the olive leaves supplied to the press may be provided. By irradiating with microwaves, the cell walls that make up the olive leaves can be easily destroyed, so the extraction rate of the target component is improved, and hydrolysis is improved to improve the production rate of hydroxytyrosol. becomes possible.
  • the condition of the olive leaves is not particularly limited. Specifically, it may be in a state containing water, or may be in a dry state from which water is removed to some extent.
  • the olive leaves preferably include a step of inactivating the enzymes present in the leaves before they are placed in the pressurized container of the extraction device.
  • the enzyme deactivation step By providing the step of deactivating this enzyme (hereinafter simply referred to as the enzyme deactivation step), it is possible to suppress the enzymatic decomposition of the components present in the olive leaves. In this case, since the influence of the enzymes contained in the leaves can be suppressed, it is possible to improve the production rate of the target component (eg, hydroxytyrosol) contained in the extract.
  • the target component eg, hydroxytyrosol
  • This enzyme deactivation step is not particularly limited as long as it is a method capable of deactivating the enzymes contained in the olive leaves as described above.
  • methods such as heating olive leaves at a temperature higher than the temperature at which the enzyme is deactivated or drying to a state at which the enzyme is deactivated can be used.
  • drying not only heat drying but also freeze drying and the like can be employed.
  • the hydroxytyrosol-containing composition of the present embodiment contains the extract obtained by the production method described above.
  • This extract contains hydroxytyrosol as described above, and water is used as the extraction solvent. Therefore, the hydroxytyrosol-containing composition of the present embodiment can be used in various applications that can exhibit the functions of hydroxytyrosol.
  • the hydroxytyrosol-containing composition of the present embodiment can be used for cosmetics, pharmaceuticals (including quasi-drugs), drugs, foods (including health foods), and the like.
  • the extract contained in the hydroxytyrosol-containing composition of the present embodiment can reduce the amount of chemicals, etc. used in the production process as described above, compared to the conventional technology, so that it is possible to reduce the effects of chemicals on health. concerns can be dispelled. Therefore, it is possible to improve the degree of freedom of use as a health food.
  • the hydroxytyrosol-containing composition of the present embodiment may contain other substances as long as it contains the extract described above.
  • preservatives, stabilizers, pH adjusters and the like may be added as appropriate.
  • Examples 1 to 8 Comparative Example 1 (Collecting olive leaves)
  • the olive leaves used in the experiment were obtained by pruning branches and leaves from an olive tree and separating the branches and leaves.
  • the olive leaves were harvested in July, and the olive trees at that time were in a state of partially beginning to bear fruit.
  • pressurized hot water extraction 20 g of olive leaf powder and 100 ml of water were placed in a pressure vessel of a high-pressure microreactor (MMJ-500, manufactured by O-M Labotech Co., Ltd.), and pressurized hot water extraction was performed under the conditions shown in Table 1. After the extraction treatment, the extraction residue (solid content) was removed by filtration to obtain an extract.
  • the extraction pressure is a theoretical value at each extraction temperature. This theoretical value is a value obtained by pressure at each temperature from the vapor pressure curve of water.
  • the extract described above corresponds to the extract in this embodiment.
  • the concentration (mg/100 ml) of hydroxytyrosol in the extract was calculated as the solid mass (mg) of hydroxytyrosol per 100 ml of the extract. This value was calculated based on the quantitative analysis results of LS-MS. Also, based on the olive leaves used, the concentration of hydroxytyrosol per 1 kg of dry mass of olive leaves (mg/1 kg of dry leaves) was calculated. That is, the content of hydroxytyrosol in the extract was evaluated by converting it into 1 kg of the dry weight of the olive leaves used as the raw material.
  • a standard substance (3-hydroxytyrosol ( ⁇ 98% (HPLC), CAS: 10597-60-1, manufactured by SigmaAldrich) was used to prepare a calibration curve.
  • the correlation coefficient R 2 of the prepared calibration curve was , 1.0000.
  • FIG. 2 shows an example of an LC-MS chromatogram.
  • FIG. 2(A) is an example of a sample
  • FIG. 2(B) is an example of a standard substance.
  • FIG. 2 shows an example of the mass spectrum of hydroxytyrosol of the example and the standard substance.
  • HT in Table 2 means hydroxytyrosol.
  • concentration (mg/100 ml) of the total solid content in the extract was calculated as the total mass of solid content (mg) per 100 ml of the extract.
  • This total solids content includes hydroxytyrosol and other ingredients (referred to as impurities).
  • impurities For analysis of total solid content, first, a certain volume of the extract was heated at 130° C. to absolute dryness, and the mass of the dried solid was measured. Next, the total solid mass (mg) per 100 ml of the extract was calculated from the volume of the extract before drying and the mass of the dried solid matter.
  • a dry solidified product can be obtained by removing water from the extract.
  • the solid content concentration (% by mass) of hydroxytyrosol (bar graph of "HT solid content concentration in total solid content” in FIG. ) was not detected under the conditions of ).
  • the solid content concentration (% by mass) of hydroxytyrosol decreased. It is considered that the generated hydroxytyrosol was thermally decomposed and the extraction amount decreased.
  • the concentration of total solids (dissolved component amount) (mg/100 ml) (line graph of "concentration of total solids" in FIG. 1) is increased by temperature rise up to 140 ° C. Increased due to improved solubility in pressurized water. At 140° C. to 190° C., the total solid concentration (mg/100 ml) decreases as the temperature rises. It is considered that the reason for this is that the dissolved component thermally decomposes into an insoluble component and precipitates out of the extract. On the other hand, when the extraction temperature exceeds 190°C, the concentration of total solids (mg/100ml) tends to increase again. It is considered that the reason for this is that the insoluble components are further decomposed to become easily soluble.
  • the extraction temperature is adjusted to 140° C. or higher, the impurities extracted during the pressurized hot water extraction treatment can be precipitated as insoluble components, and the production amount of hydroxytyrosol can be increased. .
  • the concentration of hydroxytyrosol and impurities As for the relationship between the concentration of hydroxytyrosol and impurities, it can be confirmed that favorable conditions for both are overlapped when the extraction temperature is around 170°C to 200°C. In other words, it was confirmed that an extract with low impurities and high concentration of hydroxytyrosol can be obtained by pressurized hot water extraction under these conditions. In particular, when the extraction temperature is 180° C. or higher and 190° C. or lower, the concentration of total solids rapidly decreases (that is, the impurities sharply decrease), while the solids concentration of hydroxytyrosol (in FIG. 1, " It was confirmed that the HT solid content concentration in the total solid content”) increased.
  • Example 9 to 20 pressurized hot water extraction 5 g of olive leaves were powdered, and citric acid, succinic acid, gluconic acid and acetic acid were added as acids in 100 ml of water in the amounts shown in Table 3 to adjust the number of moles of acidic groups, except for using an extraction solvent. was subjected to pressurized hot water extraction in the same manner as in Example 5 under the conditions shown in Table 3.
  • Examples 10 to 20 in which various acids were added to the water of the extraction solvent, contained more hydroxytyrosol than Example 9, in which no acid was added to the water of the extraction solvent. It was confirmed that the production amount of hydroxytyrosol can be increased by increasing the concentration and adding various acids. Among them, it was confirmed that when citric acid and succinic acid were used as acids, the production amount of hydroxytyrosol could be increased by increasing the amount added.
  • Example 12 citric acid
  • Example 15 succinic acid
  • Example 18 gluconic acid
  • the number of moles of acidic groups was adjusted to 0.156 mol/L
  • the number of moles of acidic groups of 0.157 mol/L
  • the amount produced was citric acid, succinic acid, gluconic acid, and acetic acid in descending order.
  • hydroxytyrosol which should not exist in olive leaves, can be directly produced from olive leaves by using the method for producing hydroxytyrosol from olive leaves of the present invention. It is considered that this is due to hydrolysis or the like of polyphenol components such as oleuropein present in olive leaves. Moreover, by controlling the extraction temperature, it is possible to obtain an extract containing a high concentration of hydroxytyrosol or a dried solidified product thereof. It was also confirmed that the impurities contained in this extract or its dried solidified substance can be controlled by controlling the extraction conditions.
  • hydroxytyrosol can be produced directly from olive leaves by controlling the extraction temperature even if the extraction solvent is water. Furthermore, by using water containing any one of citric acid, succinic acid, gluconic acid and acetic acid as an extraction solvent, the amount of hydroxytyrosol produced can be increased compared to when the solvent is only water. It was confirmed that Moreover, since the extraction solvent is water, it is safer than the method of extracting hydroxytyrosol from olives using chemicals or the method of chemically processing oleuropein to obtain hydroxytyrosol secondarily. High hydroxytyrosol content compositions can be produced.
  • hydroxytyrosol can be extracted directly from olive leaves, workability can be improved compared to the conventional method of extracting oleuropein from olives and then chemically treating this oleuropein.
  • olive leaves that have conventionally been discarded can be effectively used.
  • the method for producing hydroxytyrosol from olive leaves of the present invention is suitable for producing hydroxytyrosol.
  • the hydroxytyrosol-containing composition of the present invention is suitable for various uses in which the antioxidant function of hydroxytyrosol is exhibited.

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Abstract

【課題】オリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法、及びヒドロキシチロソール含有組成物を提供する。 【解決手段】本発明のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法は、オリーブの葉からヒドロキシチロソールを製造する方法であり、オリーブの葉と水を含む混合物を加圧熱水抽出する工程を含んでおり、この混合物の抽出温度が、１２０℃以上、２５０℃以下である。加圧熱水抽出法による水の抽出温度を調整することにより、オリーブの葉から、直接、ヒドロキシチロソールを製造することができる。

Description

オリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法、及びヒドロキシチロソール含有組成物
　本発明は、オリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法、及びかかるヒドロキシチロソールを含有する抽出物を含むヒドロキシチロソール含有組成物に関する。
　近年、バランスの取れた食生活を送ることが大切であり、その上で、「健康食品」を利用する意識も高まってきている。植物由来の健康食品も多くあり、なかでもオリーブは健康効果の高い栄養分を多く含んでいることが知られている。
　オリーブには、抗酸化活性を有するポリフェノール類が多く含まれていることが知られており、その中で近年注目されているのが、ヒドロキシチロソールである。ヒドロキシチロソールは抗酸化作用を持ち、血中のＬＤＬ－コレステロール（悪玉コレステロール）が酸化され酸化ＬＤＬ－コレステロールになることを抑制させる機能を有していることが報告されている。
　オリーブのヒドロキシチロソールが存在する部位は、果実であり、葉や幹にはほとんど存在していないことが知られている。そこで、オリーブからヒドロキシチロソールを直接抽出する方法としては、オリーブの果汁から得る方法が提案されており、その他のヒドロキシチロソールが存在しない部位（葉など）は廃棄されている。
　一方、このような廃棄されているオリーブの葉にはヒドロキシチロソールと同様に抗酸化活性を有するオレウロペインが存在することが知られていることから、このオレウロペインを化学的に加水分解することにより、ヒドロキシチロソールを製造する方法が開発されている（例えば、特許文献１、２）。特許文献１、２には、まずオリーブの葉からオレウロペインを抽出し、ついで抽出したオレウロペインを塩酸や有機溶媒等を用いて加水分解処理することによりヒドロキシチロソールを得る方法が開示されている。
特開２００８－１３３２５４号公報 特開２００８－１２０７１６号公報
　しかしながら、従来の技術では、オリーブから直接ヒドロキシチロソールを抽出できる部位は果実のみであり、それ以外の部位から直接抽出されたという報告例は存在しない。また、特許文献１、２には、オリーブの果実以外の部位である葉を２次的に化学処理することによりヒドロキシチロソールを得ることが記載されているが、葉から直接ヒドロキシチロソールを得る方法は開示も示唆もない。特許文献１、２で得られたヒドロキシチロソールの利用に関しては、用いられる薬品等による健康への影響が懸念されている。
　本発明は上記事情に鑑み、水を用いてオリーブの葉から直接ヒドロキシチロソールを抽出することができるヒドロキシチロソール製造方法、当該製造方法で得られる抽出物を含有するヒドロキシチロソール含有組成物を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、オリーブの葉を水を用いて加圧熱水抽出することにより、オリーブの葉から直接ヒドロキシチロソールを得る方法を見出し、本発明を完成させるに至った。
　本発明のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法は、オリーブの葉からヒドロキシチロソールを製造する方法であり、オリーブの葉と水を含む混合物を加圧熱水抽出する工程を含んでおり、前記混合物の抽出温度が、１２０℃以上、２５０℃以下であることを特徴とする。
　本発明のヒドロキシチロソール含有組成物は、オリーブの葉の加圧熱水抽出物を含有する組成物であり、該加圧熱水抽出物中のヒドロキシチロソールの含有量が、所定の値以上であることを特徴とする。
　本発明によれば、１００℃以上の加圧熱水抽出により、オリーブの葉から、直接、ヒドロキシチロソールを製造することができる。
実施例１～８、比較例１の実験分析結果を示した図である。 （Ａ）は本実験の抽出物のＬＣ／ＭＳのクロマトグラムの一例であり、（Ｂ）は標準物質のクロマトグラムの一例である。 実施例９～実施例２０の実験分析結果を示した図である。
　本実施形態のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法（なお、以下、本製造方法と称する場合もある）は、オリーブの葉を１００℃以上の加圧熱水で抽出する工程を含むことにより、オリーブの葉から、直接、ヒドロキシチロソールを製造できるようにしたことに特徴を有している。
　本製造方法で得られる抽出物に含まれるヒドロキシチロソールは、高い抗酸化作用を持つことから、本製造方法で得られる抽出物を人が摂取すれば、摂取した人の血中の酸化ＬＤＬ－コレステロールの生成を抑制できることが期待される。そして、このような本製造方法で得られる抽出物を含有するものが、本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物である。つまり、本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物は、オリーブの葉から直接得られたヒドロキシチロソールを含有する抽出物を含有することに特徴を有しており、様々な用途（例えば、食品（健康食品を含む）や薬品、医薬品（医薬部外品を含む）、化粧品など）に用いることができる。
　本明細書において、オリーブとは、モクセイ科のオリーブ属に属する植物であり、その種類はとくに限定されない。また、抽出対象となるオリーブの部位は、葉であり、これらを単独または混合して使用することができる。
　つまり、本製造方法における抽出対象物は、オリーブの葉のみからなるものはもちろん、葉に枝の一部がついたもの、枝に複数枚の葉がついた状態のもの、などオリーブの葉が主として存在する状態のものであれば、とくに限定されない。
　したがって、本明細書において、オリーブの葉と称する場合には、オリーブの葉のみからなるもの以外に、上記枝などを含んだ状態のものも含む概念である。
　また、抽出対象物となるオリーブの栽培状態も、とくに限定されない。例えば、オリーブの果実の収穫過程で剪定し廃棄される予定のオリーブの枝についた葉などを用いれば、未利用のバイオマス資源を有効に活用することができるという利点が得られる。
（本実施形態のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法）
　本実施形態のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法（本製造方法）は、オリーブの葉と水を含む混合物を加圧熱水抽出処理を行う工程に供することにより所望の目的成分を含有する抽出物を得る方法である。具体的には、本製造方法は、オリーブの葉と水を含む混合物が１００℃を超える温度でも沸騰しない状態の高温の水で熱水抽出する工程を含む製造方法である。
　なお、本製造方法により得られる抽出物が、特許請求の範囲の加圧熱水抽出物に相当する。
　本製造方法における加圧熱水抽出処理を行う工程では、加圧容器を備えた抽出装置が用いられる。
　この抽出装置の加圧容器は、内部に水と抽出対象物であるオリーブの葉を収容することができる収容空間を備えており、収容空間内に収容した混合物を加圧・加熱できるようになっている。この加圧容器内の温度や圧力は、抽出装置により制御できるようになっている。つまり、この抽出装置は、加圧容器内の収容空間内に収容したオリーブの葉と水を含む混合物を所定の高温高圧の条件下で処理することができるようになっている。この抽出装置は、上記機能を有するものであれば、とくに限定されず、例えば、公知のものを採用することができる。
（抽出温度）
　本製造方法において、上記混合物（オリーブの葉と水を含む混合物）の抽出温度は、オリーブの葉に含まれる成分を加水分解し得る温度になるように調整されている。
　この抽出温度は、上記機能を有する温度であれば、とくに限定されない。例えば、抽出温度が、１００℃よりも高くなるように調整する。好ましくは、１１０℃以上であり、より好ましくは１２０℃以上であり、さらに好ましくは１４０℃以上となるように調整する。
　また、抽出温度を高くすることにより、オリーブの葉の成分を混合物中の水へ溶解させ易くなる。つまり、目的成分の溶解度を向上させることができるので、抽出物中における目的成分の濃度を向上させることができる。さらに、抽出温度を高くすることにより、不要な成分（目的成分以外の成分、以下、不純物という）を少なくできる傾向にある。この現象は、不純物が高温処理によりさらに分解されて水に不溶な状態になるものと推測される。
　一方、抽出温度が高くなりすぎると、加水分解の進行により目的成分がさらに低分子化される可能性がある。このため、抽出温度の上限値は、３００℃以下が好ましく、より好ましくは２５０℃以下である。
　したがって、本製造方法における抽出温度は、１００℃よりも高く３００℃以下であり、より好ましくは１１０℃以上、２５０℃以下である。
　例えば、抽出装置の加圧容器内に収容空間内にオリーブの葉と水を収容し、所定の抽出温度の範囲内で加圧熱水抽出処理を行えば、抽出物１００ｍｌあたり、固形分質量として４０００ｍｇ～８０００ｍｇの抽出成分を得ることができる。
　なお、固形分質量とは、測定対象物を乾燥機（例えば、１３０℃、１時間）で乾燥させて絶乾状態（全乾状態）の重量の値である。
　とくに、目的成分がヒドロキシチロソールの場合、抽出温度は、１２０℃以上が好ましく、より好ましくは１４０℃以上であり、さらに好ましくは１６０℃以上である。さらに好ましくは１７０℃以上であり、より好ましく１８０℃であり、さらにより好ましくは１９０℃以上である。一方、抽出温度が、２５０℃よりも高くなるとヒドロキシチロソールの分解（例えば、加熱分解）が進行してしまう可能性がある。このため、ヒドロキシチロソールの抽出温度の上限値は、２５０℃以下が好ましく、より好ましくは２２０℃以下であり、さらに好ましく２００℃以下である。
　したがって、抽出物中におけるヒドロキシチロソールの濃度（固形分濃度）を向上させるという観点では、抽出温度を１２０℃～２５０℃となるように調整するのが好ましい。この抽出温度は、より好ましくは１４０℃～２２０℃であり、さらに好ましくは１７０℃～２００℃であり、よりさらに好ましくは１８０℃～２００℃である。
　なお、抽出物中におけるヒドロキシチロソールと不純物との関係においては、抽出温度を１４０℃よりも低くしたり、２２０℃よりも高くすると不純物の割合（濃度）が増加する傾向にある。その逆に、抽出温度を１４０℃～２２０℃にすると、不純物の割合（濃度）が低下する傾向にある。
　したがって、抽出物中におけるヒドロキシチロソールの濃度（固形分濃度）を増加させ、かつ不純物の濃度（固形分濃度）を抑制するという観点では、抽出温度を、１４０℃～２２０℃となるように調整するのが好ましく、より好ましくは１６０℃～２２０℃であり、さらに好ましくは１６０℃～２００℃であり、よりさらに好ましく１７０℃～２００℃であり、さらにより好ましくは１８０℃～２００℃となるように調整する。
　なお、固形分濃度（質量％）とは、乾燥固化物に含まれるヒドロキシチロソールの質量を乾燥固化物の質量で除したものを百分率で表した値である。
　以上のごとく、本製造方法を用いれば、オリーブの葉を加圧熱水抽出処理という工程に供することにより、オリーブの葉には存在しない目的成分をオリーブの葉から直接得ることができる。このような目的成分としては、本来オリーブの葉には存在しないヒドロキシチロソールを挙げることができる。このヒドロキシチロソールは、本製造方法における抽出温度を所定の範囲内に調整することにより、オリーブの葉から直接得ることができる。
　つまり、本製造方法を用いれば、従来の製法（オリーブからオレウロペインなどのポリフェノール類を抽出した後、これらのポリフェノール類を化学処理してヒドロキシチロソールを製造する方法）と比べて、オリーブの葉からヒドロキシチロソールを直接生成することができるので、ヒドロキシチロソールを効率よく、しかも簡便に製造できる。
　しかも、本製造方法における抽出温度の温度範囲を上記のごとく調整することにより、抽出物中に含まれる不純物の濃度も制御することができるようになる。このため、抽出温度の温度範囲を上記のごとく調整することにより、ヒドロキシチロソールの精製効率を向上させることができる。
　また、本製造方法の抽出溶媒は、水である。このため、目的成分を含有した抽出物をそのまま利用することができる。例えば、本製造方法を用いれば、安全性の高いヒドロキシチロソールが含有する抽出物を簡単に調製することができる。しかも、本製造方法では抽出溶媒が水であるので、従来の技術と比べて、有機溶媒等による人への影響を低くできるという利点もある。
　そして、オリーブの葉から、直接、上記のごとき付加価値の高い成分（例えば、ヒドロキシチロソール）を抽出することができるので、従来廃棄されているオリーブの葉をより有効的に活用することができる。
　上述したように、本製造方法を用いれば、オリーブの葉に存在しない目的成分を所定の温度の熱水で抽出処理することにより、オリーブの葉から直接目的の成分を得ることができる。具体的には、オリーブの葉には、本来、ヒドロキシチロソールは存在していないことは前記のとおりであるが、本製造方法を用いればオリーブの葉から直接ヒドロキシチロソールを製造することができる。
　上記ごときヒドロキシチロソールの製造方法は、本発明らによって初めて明らかにされたものである。ヒドロキシチロソールが存在しないオリーブの葉からヒドロキシチロソールが製造できる明確な機序は不明であるが、以下のように推察される。
　オリーブの葉には、分子中にヒドロキシチロソール骨格を有するオレウロペインなどのポリフェノール類が多数存在している。そこで、このオリーブの葉を上記のごとく所定の温度範囲内で高圧熱水抽出処理工程に供することにより、オレウロペインなどのポリフェノール類に対してヒドロキシチロソールが生成できるような適切な加水分解反応を誘発させることができているものと推察される。その結果、所定の抽出温度で高圧熱水処理をすることにより、オリーブの葉から直接ヒドロキシチロソールを生成することができるものと推察される。
（抽出圧力）
　本製造方法における抽出条件において、抽出圧力は、抽出温度での理論値として得ることができる。この理論値は、水の蒸気圧曲線から、各抽出温度での圧力を求めることができる。例えば、抽出温度が９０℃の場合には抽出圧力が大気圧と同じ０．１Ｍｐａであり、抽出温度が１２０℃の場合には０．２Ｍｐａ、抽出温度が１４０℃の場合には０．３６Ｍｐａ、抽出温度が２００℃の場合には１．５５Ｍｐａ、となる。他の温度における圧力は、実施例を参照。
　なお、本製造方法における抽出条件において、抽出時間は、目的成分を抽出することができれば、とくに限定されず、抽出温度や抽出圧力により適宜調整することができる。
　例えば、抽出時間は１０分以上であり、より好ましくは６０分以上である。上限はとくに限定されないが、１２０分以上行っても抽出物の回収率の増加率が向上しない傾向にある。このため、作業性や効率性の観点では、抽出時間は、１０分以上、１２０分以下が好ましく、より好ましくは６０分以上、１２０分以下である。なお、この抽出時間には、所定の抽出温度に到達するまでの時間は含まれない。
　例えば、抽出温度が１８０℃、抽出圧力が１．００ＭＰａの場合、抽出時間は６０分以上となるように調整することができる。
　また、本製造方法の抽出処理後の加圧容器内には、液状の抽出物と、水に不溶な成分や抽出処理後のオリーブの葉などが残渣（固形分）として得られる。
　この抽出処理後の混合物（抽出物と固形分）は、ろ過や遠心分離等の処理をすることにより互いに分離することができる。なお、分離された抽出物は、上述したように抽出溶媒が水であるのでそのままで利用してもよいし、濃縮等を行って抽出物中に含まれる成分（とくにヒドロキシチロソール）の濃度（固形分濃度）を高めた状態（抽出物のエキス）にして利用してもよい。
　なお、この抽出物を含むものが本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物である。
　本製造方法において、抽出装置の加圧容器内に収容するオリーブの葉と水の混合割合は、とくに限定されない。
　例えば、水が、抽出対象物であるオリーブの葉１００質量部に対して、１００質量部以上となるように調整する。好ましくは３００質量部以上であり、より好ましくは５００質量部以上となるように調整する。
　なお、上記混合割合において、水の割合を多くすれば、抽出効率を向上させることができるが、目的成分の濃度が低下してしまう。このため、水の上限割合は、オリーブの葉１００質量部に対して、２０００質量部以下が好ましく、より好ましくは５００質量部以下である。例えば、加圧容器内に、オリーブの葉１０ｇに対して水を５０ｍｌとなるように収容することができる。この場合、水がオリーブの葉１００質量部に対して５００質量部となるように調整されている。
　なお、本製造方法において、抽出装置の加圧容器内に供給する溶媒は、水のみに限定されない。例えば、水以外の溶媒としては、エタノール、ブチレングリコールやヘキサンなどを挙げることができる。このような水以外の溶媒の混合割合は、水の混合割合よりも低くなるように調整されていればとくに限定されない。例えば、水１００質量部に対して、１００質量部以下となるように調整することができる。また溶媒である水に、クエン酸、コハク酸、グルコン酸、酢酸などの酸を添加することができる。これらの各酸を添加することにより、抽出時の溶媒のｐＨを調整することができる。酸の添加量はオリーブ葉を混合前であり且つ抽出前の溶媒のｐＨを１～４、好ましくは２～３程度となるように調整されていれてば特に限定されることはなく、前記酸を添加して溶媒のｐＨ値を前記範囲にすることで溶媒が水のみである場合と比べると、ヒドロキシチロソールの生成量を増加させることができる。
　また、本製造方法に用いられるオリーブの葉の形状や大きさは、上記抽出装置の加圧容器の収容空間内に収容できる形状や大きさであれば、とくに限定されない。
　例えば、オリーブの葉は、採取した状態のそのままであってもよいし、粉砕等の処理をして小さくした状態のものであってもよい。後者の場合、処理時間や処理効率を向上させることが可能となる。オリーブの葉を小さくする方法は、公知の方法を用いることができる。例えば、裁断や粉砕等の処理を行えば、オリーブの葉をチップ状や粉状などの粉砕物として供給することができる。
　オリーブの葉は、圧搾機等を用いて圧搾した状態のものを用いてもよい。具体的には、圧搾されたオリーブの葉および／または圧搾後に回収される搾汁液を上記装置の加圧容器に供給することができる。この場合、抽出物の回収率の向上が期待できる。
　また、圧搾機に供給するオリーブの葉に対してマイクロ波を照射する工程を設けてもよい。マイクロ波を照射することにより、オリーブの葉を構成する細胞壁が破壊されやすい状態にすることができるので、目的成分の抽出率の向上や、加水分解の向上によりヒドロキシチロソールの生成率を向上させることが可能となる。
　また、オリーブの葉の状態もとくに限定されない。具体的には、水分が含んだ状態であってもよいし、水分をある程度除去した乾燥状態のものであってもよい。
　とくに、本製造方法において、オリーブの葉は、抽出装置の加圧容器内に収容する前に葉に存在する酵素を失活させる工程を含んでいるのが好ましい。この酵素を失活させる工程（以下、単に酵素失活工程という）を設けることにより、オリーブの葉に存在する成分が酵素により分解されるのを抑制することができる。この場合、葉に含まれる酵素の影響を抑制できるので、抽出物中に含まれる目的成分（例えば、ヒドロキシチロソール）の生成率を向上させることが可能となる。
　この酵素失活工程は、上記のようなオリーブの葉に含まれる酵素を失活できる方法であれば、とくに限定されない。例えば、オリーブの葉を酵素が失活する温度以上で加熱したり、酵素が失活する状態にまで乾燥するなどの方法を挙げることができる。このような乾燥には、加熱乾燥はもちろん、凍結乾燥などを採用することができる。
（本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物）
　本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物は、上述した本製造方法で得られる抽出物を含有するものである。そして、この抽出物には、上述したようにヒドロキシチロソールが含有しており、抽出溶媒としては水を用いている。
　このため、本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物は、ヒドロキシチロソールが有する機能を発揮させることができる様々な用途に用いることができる。例えば、本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物は、化粧品や、医薬品（医薬部外品を含む）、薬品、食品（健康食品を含む）などに用いることができる。
　とくに、本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物に含有される抽出物は、上述したように生成過程において、従来技術と比べて化学薬品等の使用量を少なくできるので、化学薬品等による健康への懸念を払拭することができる。このため、健康食品としての用途の自由度を向上させることができる。
　なお、本実施形態のヒドロキシチロソール含有組成物は、上述した抽出物を含有していれば、他の物質を含有してもよいのはいうまでもない。例えば、防腐剤、安定化剤、ｐＨ調整剤などを適宜配合してもよい。
　つぎに、実施例によりさらに詳細に本発明を説明する。
　なお、これらの実施例は、本実施形態の一例を示すものであり、本発明は、以下の実施例によってなんら制限を受けるものではない。
［実施例１～８、比較例１］
（オリーブ葉の採取）
　実験に用いるオリーブ葉は、オリーブの樹木から枝葉を剪定し、枝と葉を分離することで取得した。オリーブ葉の採取時期は７月で、その際のオリーブ樹木は部分的に果実がなり始めている状態であった。
（オリーブの葉の乾燥、粉砕、分級）
　実験では、乾燥したオリーブの葉を用いた。
　原料となるオリーブの葉は、オリーブの木から採取したオリーブの生葉を乾燥機を用いて温度１００℃で３時間乾燥した。
　乾燥したオリーブの葉をワンダーブレンダー（大阪ケミカル（株）ＷＢ－１）で粉砕した。そして、粉砕物を目開き７１０μｍの篩に掛けた。篩を通過したオリーブの葉（表１ではオリーブ葉という）の粉末を用いて抽出処理を行った。
（加圧熱水抽出）
　オリーブの葉の粉末２０gと水１００ｍｌを高圧マイクロリアクター（オーエムラボテック（株）製、ＭＭＪ－５００）の加圧容器内に収容し、表１の条件で加圧熱水抽出を行った。
　抽出処理後、抽出残渣（固形分）を濾過で取り除いて抽出液を得た。
　なお、抽出圧力は、各抽出温度での理論値である。この理論値は、水の蒸気圧曲線から、各温度での圧力が求められる値である。
　上記の抽出液が、本実施形態における抽出物に相当する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
（ヒドロキシチロソールの定量）
　抽出液中におけるヒドロキシチロソールの濃度（ｍｇ／１００ｍｌ）は、抽出液１００ｍｌあたりのヒドロキシチロソールの固形分質量（ｍｇ）として算出した。この値は、ＬＳ－ＭＳの定量分析結果に基づいて算出した。
　また、使用したオリーブの葉に基づいて、オリーブの葉の乾燥質量１ｋｇあたりのヒドロキシチロソールの濃度（ｍｇ／乾燥葉１ｋｇ）を算出した。つまり、抽出物中のヒドロキシチロソールの含有量を、原料としたオリーブの葉の乾燥質量１ｋｇに換算して評価した。
　得られた抽出物から所定量を分取し、ＬＣ－ＭＳを用いて定量分析を行った。
　ヒドロキシチロソールの定量には、検量法を用いた。
　使用した装置・条件は以下の通りである。
・装置　　　　　：ＬＣ（Ｔｈｅｒｍｏ社製、Ｕｌｔｉ　Ｍａｔｅ　３０００）
・質量分析機器　：ＭＳ（Ｔｈｅｒｍｏ社製、ＬＣＱ　ＦＬＥＥＴ）
・カラム　　　　：ＯＤＳ　Ｃ１８（Ｔｈｅｒｍｏ社製）
・移動相　　　　：Ａ）０．１％　ギ酸、Ｂ）アセトニトリル、Ｃ）超純水
・グラジエント条件：０分(Ａ：Ｂ：Ｃ=５：０：９５)→３０分(５：９５：０)→３５分(５：９５：０)→３６分(５：０：９５)→３９分(５：０：９５)
・流速　　　　　：０．３　ｍｌ／ｍｉｎ
・サンプル温度　：１５℃
・カラム温度　　：４５℃
・測定波長ＵＶ　：２８０ｎｍ
　検量線の作成には、標準物質（３－ヒドロキシチロソール（≧９８％（ＨＰＬＣ）、ＣＡＳ：１０５９７－６０－１、ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ社製）を用いた。作成した検量線の相関係数Ｒ２は、１．００００であった。
　表２及び図１に実験分析結果を示す。
　図２には、ＬＣ－ＭＳのクロマトグラムの一例を示す。図２（Ａ）はサンプルの一例であり、図２（Ｂ）は標準物質の一例である。また、図２には、実施例と標準物質のヒドロキシチロソールのマススペクトルの一例を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　表２中のＨＴはヒドロキシチロソールを意味する。
　抽出液中における総固形分の濃度（ｍｇ／１００ｍｌ）は、抽出液１００ｍｌあたりの総固形分質量（ｍｇ）として算出した。この総固形分には、ヒドロキシチロソールとその他の成分（不純物という）が含まれるものである。
　総固形分の分析では、まず、一定容積の抽出物を１３０℃で加熱して絶乾状態にして、この乾燥固化物の質量を測定した。ついで、乾燥前の抽出物の容積と乾燥固化物の質量から、抽出物１００ｍｌあたりの総固形分質量（ｍｇ）を算出した。
　なお、抽出液から水分を除去すると乾燥固化物が得られる。この乾燥固化物中のヒドロキシチロソールの固形分濃度（質量％）（表２中では「総固形分中のＨＴ固形分濃度（質量％）」）は、下記式により算出した。
 
乾燥固化物中のヒドロキシチロソールの固形分濃度（質量％）＝｛（抽出物中のＨＴ固形分質量）／（抽出物中の総固形分質量）｝×１００
　表２及び図１に示すように、ヒドロキシチロソールの固形分濃度（質量％）（図１では「総固形分中のＨＴ固形分濃度」の棒グラフ）は、抽出温度が９０℃（比較例１）の条件では検出されなかったのに対して、実施例では、抽出温度が１２０℃付近で徐々に生成抽出され、１６０℃以上で生成抽出量が増え、１９０℃で最大量となる。なお、抽出温度が２００℃を超えるとヒドロキシチロソールの固形分濃度（質量％）が減少した。これは、生成したヒドロキシチロソールが熱分解して抽出量が減ったものと考察される。
　表２及び図１に示すように、総固形分の濃度（溶解成分量）（ｍｇ／１００ｍｌ）（図１では「総固形分の濃度」の折れ線グラフ）は、１４０℃までは温度上昇による加圧熱水の溶解性の向上により増加する。そして、１４０℃～１９０℃では温度上昇に伴って総固形分の濃度（ｍｇ／１００ｍｌ）は減少する。この理由としては、溶解成分が熱分解して不溶成分となり、抽出液中から析出したためと考察される。
　一方、抽出温度が１９０℃を超えると総固形分の濃度（ｍｇ／１００ｍｌ）が再度増加する傾向にある。この理由としては、不溶成分がさらに分解することで溶解しやすい状態になったためと考察される。
　したがって、抽出温度を１４０℃以上に調整すれば、加圧熱水抽出処理した際に抽出された不純物が不溶成分として析出できる一方、ヒドロキシチロソールの生成量を増加させることができることが確認できた。
　そして、ヒドロキシチロソールの濃度と不純物の関係では、抽出温度が１７０℃～２００℃あたりで、双方の好条件が重なっていることが確認できる。つまり、この条件で加圧熱水抽出することにより、不純物が低く、ヒドロキシチロソールの濃度が高い抽出物を得ることができることが確認できた。
　とくに、抽出温度が１８０℃以上、１９０℃以下の条件では、総固形分の濃度が急激に減少する（つまり不純物が急激に減少する）一方、ヒドロキシチロソールの固形分濃度（図１では、「総固形分中のＨＴ固形分濃度」）が上昇することが確認された。
　よって、抽出温度が１７０℃以上、２００℃以下の条件下では、ヒドロキシチロソールの固形分質量が１４．５質量％～２１．８質量％の乾燥固化物を得られることが確認できた。とくに抽出温度が１８０℃以上、２００℃以下の条件下では、ヒドロキシチロソールの固形分質量が３４．３質量％～２１．８質量％の乾燥固化物を得られ、抽出温度が１８０℃以上、１９０℃以下の条件下では、ヒドロキシチロソールの固形分質量が３４．３質量％～４１．７質量％の乾燥固化物を得られることが確認できた。
［実施例９～２０］
（加圧熱水抽出）
　オリーブの葉は粉末５gとし、また水１００ｍｌに酸としてクエン酸、コハク酸、グルコン酸及び酢酸を表３に示す添加量を添加して、酸性基のモル数を調整した抽出溶媒を用いた以外は、表３の条件で実施例５と同様にして加圧熱水抽出を行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　表４及び図３に実験分析結果を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　表４及び図３に示すように、抽出溶媒の水に各種酸を添加した実施例１０～実施例２０は、抽出溶媒の水に酸を添加していない実施例９より多くのヒドロキシチロソールの濃度が高くなり、各種酸の添加をすることでヒドロキシチロソールの生成量を増加させることができることが確認できた。その中でも、酸としてクエン酸とコハク酸を用いた場合は、添加量を増加させることで、ヒドロキシチロソールの生成量を増加させることができることが確認できた。また、酸性基のモル数を０．１５６ｍｏｌ/Ｌに調整した実施例１２（クエン酸）、実施例１５（コハク酸）、実施例１８（グルコン酸）及び酸性基のモル数を０．１５７ｍｏｌ/Ｌに調整した実施例２０（酢酸）のヒドロキシチロソールの生成量を比較すると、生成量が多い順にクエン酸、コハク酸、グルコン酸、酢酸となることが確認できた。
　以上の実験の結果から、本発明のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法を用いれば、オリーブの葉から、オリーブの葉には本来存在しないはずのヒドロキシチロソールを直接製造できることが確認できた。これは、オリーブの葉に存在するオレウロペインなどのポリフェノール成分が加水分解等によって生成されたものと考える。
　しかも、抽出温度をコントロールすれば、ヒドロキシチロソールを高濃度に含む抽出物又はその乾燥固化物を得ることができる。そして、この抽出物又はその乾燥固化物中に含まれる不純物は、抽出条件をコントロールすることにより制御できることが確認できた。
　また、本発明のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法では、抽出温度をコントロールすることにより、抽出溶媒が水であってもオリーブの葉から直接ヒドロキシチロソールを製造できることが確認できた。さらには、抽出溶媒としてクエン酸、コハク酸、グルコン酸および酢酸のいずれか一つを含む水を用いることで、溶媒が水のみである場合と比べると、ヒドロキシチロソールの生成量を増加させることができることが確認できた。
　しかも、抽出溶媒が水であるので、化学薬品を用いてオリーブからヒドロキシチロソールを抽出する方法や、２次的にオレウロペインからヒドロキシチロソールを化学処理して得る方法と比べて、より安全性の高いヒドロキシチロソール含有組成物を製造できる。さらに、オリーブの葉から直接ヒドロキシチロソールを抽出できるので、従来の方法のように、オリーブからオレウロペインを抽出し、ついでこのオレウロペインを化学処理する方法と比べて、作業性を向上させることができる。
　そして、本発明を用いれば、従来廃棄されているオリーブの葉を有効利用することができる。
　本発明のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法は、ヒドロキシチロソールの製造に適している。また、本発明のヒドロキシチロソール含有組成物は、ヒドロキシチロソールの抗酸化活性機能を発揮させた様々な用途に適している。

 

Claims (8)

  1. 　オリーブの葉からヒドロキシチロソールを製造する方法であり、
    オリーブの葉と水を含む混合物を加圧熱水抽出する工程を含んでおり、
    前記混合物の抽出温度が、１２０℃以上、２５０℃以下である
    ことを特徴とするオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法。
  2. 　前記圧力が、０．２ＭＰａ以上である
    ことを特徴とする請求項1記載のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法。
  3. 　前記抽出温度が、１４０℃以上、２２０℃以下である
    ことを特徴とする請求項1または２記載のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法。
  4. 　前記混合物にクエン酸、コハク酸、グルコン酸および酢酸のいずれか一つを含む
    ことを特徴とする請求項１、２または３記載のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法。
  5. 　前記加圧熱水抽出を行う前にオリーブの葉に含まれる酵素を失活させる酵素失活工程を含む
    ことを特徴とする請求項１、２、３または４記載のオリーブ葉からのヒドロキシチロソール製造方法。
  6. 　オリーブの葉の加圧熱水抽出物を含有する組成物であり、
    該加圧熱水抽出物中のヒドロキシチロソールの含有量が、固形分濃度において１０質量％以上である
    ことを特徴とするヒドロキシチロソール含有組成物。
  7. 　オリーブの葉の加圧熱水抽出物を含有する組成物であり、
    該加圧熱水抽出物中のヒドロキシチロソールの含有量が、前記オリーブの葉の乾燥質量１ｋｇあたり、１０００ｍｇ以上である
    ことを特徴とするヒドロキシチロソール含有組成物。
  8. 　化粧品、医薬品、薬品、又は、食品に用いられる
    ことを特徴とする請求項６または７記載のヒドロキシチロソール含有組成物。
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