WO2023033015A1 - Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法 - Google Patents

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WO2023033015A1
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acid
amines
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真也 矢野
卓 松本
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積水メディカル株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a method for producing an Fmoc-protected amino group-containing compound.
  • a 9-fluorenylmethoxycarbonyl group (hereinafter referred to as Fmoc) is a protective group commonly used as a protective group for amino groups.
  • This method for producing a compound having an amino group protected with Fmoc involves adding 9-fluorenylmethoxycarbonyl chloride or N- to a compound having an amino group in the presence of an inorganic base such as sodium carbonate.
  • a method of reacting (9-fluorenylmethoxycarbonyloxy)succinimide (Fmoc-OSu) is widely used.
  • the amount (chemical equivalent) of Fmoc-OSu used is less than that of the amino group-containing compound as a raw material.
  • the Fmoc amino group-containing compound is purified by silica gel column chromatography or recrystallization to remove Fmoc-OSu and Fmoc- ⁇ -Ala-OH.
  • the next step is carried out while Fmoc- ⁇ -Ala-OH is mixed, and it is removed in the next step.
  • many structures have been investigated as alternatives to Fmoc-OSu so that Fmoc- ⁇ -Ala-OH is not produced as a by-product (Non-Patent Documents 3 and 4).
  • Fmoc-2-mercaptobenzothiazole was one of the compounds studied, but the solubility of the by-product 2-MBT is low, so it is necessary to perform multiple separate washings to remove it. There is a problem that the yield of the target product is lowered.
  • the method (1) has a problem that a part of the starting amino group-containing compound is wasted. Purification by means (2) is difficult when the physical properties of the Fmoc-protected amino group-containing compound and Fmoc-OSu or Fmoc- ⁇ -Ala-OH are similar. In the means of (3), if part of the raw material in the next step reacts with Fmoc- ⁇ -Ala-OH, the raw material will be wasted, and if the physical properties of the original target product are similar, separation and purification will be required. There was a problem of difficulty.
  • the present inventors suppress the by-production of Fmoc- ⁇ -Ala-OH without using the means (1) to (3) above, and easily produce an Fmoc-protected amino group-containing compound with high purity.
  • the amino group-containing compound as a raw material is not wasted, the purification of the Fmoc-protected amino group-containing compound is not difficult, and the raw material for the next step is not wasted. Furthermore, the present inventors have found that when this method is used for the production of peptides, the purification of the peptides becomes easier and the purity of the peptides is improved, and the present invention has been completed.
  • the present invention provides the following inventions [1] to [9].
  • [1] A method for producing an Fmoc-protected amino group-containing compound in which the amino group of a compound having an amino group is converted to Fmoc using Fmoc-OSu, wherein the primary or A method for producing an Fmoc-protected amino group-containing compound, comprising adding a secondary amine.
  • the amine to be added is hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ammonia, amidophosphoric acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, or an alkyl group, alkenyl group, cycloalkyl group, or cycloalkenyl group.
  • the amine to be added is hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ammonia, amidophosphoric acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, or an alkyl group, alkenyl group, cycloalkyl group, or cycloalkenyl group.
  • the amine to be added is at least one selected from propylamine, ethylenediamine, 2-(2-aminoethoxy)ethanol (AEE), 2-aminoethyl hydrogen sulfate (AEHS) and taurine [1]- The production method according to any one of [4].
  • AEE 2-(2-aminoethoxy)ethanol
  • AEHS 2-aminoethyl hydrogen sulfate
  • taurine [1]- The production method according to any one of [4].
  • the amine to be added is hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ammonia, amidophosphoric acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, or an alkyl group, alkenyl group, cycloalkyl group, or cycloalkenyl group. , an aryl group, an aralkyl group and a heterocyclic group.
  • the production method according to [6] which is an amine optionally having one or more substituents selected from a group, a phosphonic acid group and a phosphoric acid group.
  • the amine to be added is hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ammonia, amidophosphoric acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, or an alkyl group, alkenyl group, cycloalkyl group, or cycloalkenyl group.
  • the amine to be added is at least one selected from propylamine, ethylenediamine, 2-(2-aminoethoxy)ethanol (AEE), 2-aminoethyl hydrogen sulfate (AEHS) and taurine [6]- The production method according to any one of [9].
  • the production method of the present invention since Fmoc- ⁇ -Ala-OH is not produced as a by-product, the raw amino group-containing compound is not wasted, and purification of the Fmoc-protected amino group-containing compound is not difficult. , and raw materials for the next process are not wasted. Furthermore, the use of the production method of the present invention for peptide production facilitates peptide purification and improves peptide purity.
  • Example 1-1 The results of analysis (1) in Example 1-1 are shown.
  • the results of analysis (3) in Example 1-1 are shown.
  • 3 shows the results of analysis (3) in Comparative Example 1.
  • FIG. 2 shows the results of analysis (1) in Example 2-1.
  • the results of analysis (3) in Example 2-1 are shown.
  • the results of analysis (3) in Comparative Example 2-1 are shown.
  • 2 shows the results of analysis (1) in Example 3-2.
  • 3 shows the results of analysis (3) in Example 3-2.
  • the results of analysis (3) in Comparative Example 3 are shown.
  • the present invention is a method for producing an Fmoc-protected amino group-containing compound by converting the amino group of a compound having an amino group to Fmoc using Fmoc-OSu, wherein amines other than the compound having an amino group as a raw material are added to the reaction system. It is characterized by adding
  • the compound having an amino group as a starting material is preferably an organic compound having an amino group (H 2 N--), and preferably an organic compound having a reactive functional group other than the amino group.
  • reactive functional groups other than amino groups include functional groups such as hydroxyl group, guanidyl group, carboxyl group, thiol group, indole group, imidazole group, sulfonic acid group, and sulfate group.
  • These functional groups may be introduced with protective groups commonly used in peptide synthesis, and the target compounds can be obtained by removing the protective groups as necessary at any point after the completion of the reaction. can.
  • hydroxyl-protecting groups include tBu (tert-butyl) group, Trt (trityl) group, Bz (benzoyl) group, acetyl group, and silyl group.
  • guanidyl-protecting groups include Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl) group, Boc (tert-butoxycarbonyl) group, Pmc (2,2,5,7, 8-pentamethylchroman-6-sulfonyl) group, nitro group and the like.
  • a tBu group, a methyl group, an ethyl group, a Bz group and the like can be mentioned as the carboxyl group-protecting group.
  • Thiol protecting groups include Trt group, Acm (acetamidomethyl) group, tBu group, S-tBu (dithio-tert-butyl) group, Dpm (diphenylmethyl) group, MBom (4-methoxybenzyloxymethyl) group. etc.
  • a Boc group etc. are mentioned as a protecting group of an indole group.
  • protective groups for imidazole groups include Boc group, Bom (benzyloxymethyl) group, Bum (tert-butoxymethyl) group, Trt group, Ddm (4,4'-dimethoxydiphenyl) group, MBom group and the like.
  • Preferred amino group-containing compounds include amino acids and peptides.
  • the amino acid may be either a natural amino acid or an unnatural amino acid, either an L-type amino acid or a D-type amino acid, or a mixture of these amino acids.
  • non-natural amino acid any known non-natural amino acid, or any modified amino acid with reference to a known technique may be used.
  • Examples of known unnatural amino acids include N-methyl modified amino acids, N-2,4-dimethoxybenzyl modified amino acids, ⁇ -methylalanine, D-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid, and L-octahydroindoline-2-carboxylic acid, 3-(3-pyridyl)-D-alanine, D-3-(2-naphthyl)-alanine, D-3-(4-chloro)phenylalanine, (N ,N'-diethyl)homoarginine, D-(N,N'-diethyl)homoarginine and the like.
  • amino acids obtained by adding low-molecular-weight organic compounds, phosphorylation, biotinylation, PEGylation, sugar chain modification, fluorescence modification, etc. can also be used.
  • Specific natural amino acids include isoleucine, leucine, valine, histidine, lysine, methionine, tryptophan, phenylalanine, threonine, asparagine, aspartic acid, alanine, arginine, cysteine, cystine, glutamine, glutamic acid, glycine, proline, serine, tyrosine. etc.
  • the peptide include peptides in which a plurality of the aforementioned amino acids are bonded.
  • the peptide may be subjected to addition of a low-molecular-weight organic compound, phosphorylation, biotinylation, PEGylation, sugar chain modification, fluorescence modification, and the like.
  • Fmoc-OSu that is already widely available on the market can be used, but it may also be produced by reacting Fmoc chloride with N-hydroxysuccinimide.
  • the amount of Fmoc-OSu used in Fmoc-converting a compound having an amino group, which is a starting material is preferably 1.0 to 3.0 equivalents, more preferably 1.0 equivalent, relative to the compound having an amino group, which is a starting material. 0 to 2.0 equivalents, but not limited thereto.
  • amines other than the compound having an amino group as a raw material are added to the reaction system (the amines added to this reaction system are sometimes called Fmoc-OSu quenching amines).
  • Fmoc-OSu quenching amines By adding the above amines to the reaction system, Fmoc- ⁇ -Ala-OH is not produced as a by-product, so that the raw material amino group-containing compound is not wasted, and purification of the Fmoc-protected amino group-containing compound becomes difficult. The raw material for the next process is not wasted.
  • the use of the production method of the present invention for peptide production facilitates peptide purification and improves peptide purity.
  • the Fmoc-OSu quenching amines added to the reaction system are amines different from the compound having an amino group as a raw material, and the compound having an amino group as a raw material can be separated and purified from the Fmoc compound. is preferred.
  • amines for Fmoc-OSu quenching are added, and the main compounds present in the reaction solution at the completion of quenching of Fmoc-OSu are amino
  • a target compound in which a compound having a group is Fmoc-modified an Fmoc-OSu quenching amine
  • a compound in which an Fmoc-OSu quenching amine is Fmoc-modified is Fmoc-modified.
  • the method for separating and purifying the Fmoc-OSu quenching amines may be any separation method utilizing the difference in physical properties such as solubility, polarity, molecular size, chirality or boiling point of the compound.
  • solubility is different, separation and purification by liquid-liquid separation or recrystallization are possible.
  • polarities are different, separation and purification by column chromatography is possible. If they have different molecular sizes, they can be separated and purified by gel filtration chromatography.
  • the amines to be added have a structure that does not contain a functional group that affects the subsequent steps.
  • the compound in which the Fmoc-OSu quenching amines are Fmoc-modified may be removed during the separation and purification, may be removed by further purification different from the separation and purification, or may be removed as it is mixed. You can proceed to the process. From the viewpoint of industrial production, it is preferable to be able to remove it during the separation and purification, or to proceed to the next step while it is mixed. When proceeding to the next step while it is mixed, it may be removed in one of the steps after the next step. It is desirable to have a structure that does not allow
  • Fmoc-OSu quenching amines to be added include hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ammonia, amidophosphoric acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, or alkyl groups, alkenyl groups, cyclo Primary or secondary amines having one or more selected from an alkyl group, a cycloalkenyl group, an aryl group, an aralkyl group and a heterocyclic group, and comprising a hydroxy group, an ether bond, an alkoxy group and a sulfonyl group , a sulfonic acid group, a sulfuric acid group, a phosphonic acid group, a phosphoric acid group and a carboxyl group.
  • Hydroxylamine is CAS number [7803-49-8]
  • amidosulfuric acid is CAS number [5329-14-6]
  • hydroxylamine-O-sulfonic acid is CAS number [2950-43-8]
  • amidophosphoric acid is CAS number [ 2817-45-0]
  • hydroxylamine-O-phosphonic acid are compounds represented by CAS number [20292-78-8].
  • the alkyl group possessed by the primary or secondary amines includes a linear or branched alkyl group having 1 to 30 carbon atoms, preferably an alkyl group having 1 to 14 carbon atoms, more preferably a carbon It is an alkyl group having 2 to 10 numbers, more preferably an alkyl group having 2 to 8 carbon atoms, more preferably an alkyl group having 3 to 4 carbon atoms. Examples include methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, pentyl group, hexyl group, heptyl group and octyl group.
  • the alkenyl group possessed by the primary or secondary amine includes a linear or branched alkenyl group having 2 to 30 carbon atoms, preferably an alkenyl group having 2 to 14 carbon atoms, more preferably 2 to 10 carbon atoms. is more preferably an alkenyl group having 2 to 8 carbon atoms. Examples thereof include vinyl groups and allyl groups.
  • a cycloalkyl group having 3 to 13 carbon atoms is preferable as the cycloalkyl group possessed by the primary or secondary amines. Examples include cyclopropyl group, cyclobutanyl group, cyclopentyl group, cyclohexyl group, cyclooctyl group, dicyclohexyl group and the like.
  • Cycloalkenyl groups possessed by primary or secondary amines include cyclobutenyl groups, cyclopentenyl groups, and cyclohexenyl groups.
  • the aryl group possessed by the primary or secondary amines is preferably an aryl group having 6 to 14 carbon atoms, such as a phenyl group and a naphthyl group.
  • the aralkyl group possessed by primary or secondary amines is preferably a phenyl-C1-4 alkyl group in which an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms is bonded to a benzene ring, and examples thereof include a benzyl group and a phenylethyl group. .
  • Heterocyclic groups possessed by primary or secondary amines include heterocyclic groups having 1 to 3 heteroatoms selected from a nitrogen atom, an oxygen atom and a sulfur atom, specifically a furanyl group. , pyrrole group, thienyl group, pyridyl group, piperidinyl group, piperazinyl group and the like.
  • the primary or secondary amines have one or more groups selected from these alkyl groups, alkenyl groups, cycloalkyl groups, cycloalkenyl groups, aryl groups, aralkyl groups and heterocyclic groups. Further, these primary or secondary amines may have 1 to 4 amino groups.
  • the primary or secondary amines are substituted with one or more selected from a hydroxyl group, an ether bond, an alkoxy group, a sulfonyl group, a sulfonic acid group, a sulfuric acid group, a phosphonic acid group, a phosphoric acid group and a carboxyl group.
  • the ether bond includes an oxyethylene group, an oxypropylene group, and the like, a monooxyethylene group, a di(oxyethylene) group, a tri(oxyethylene) group, a tetra(oxyethylene) group, and a polyoxyethylene and the like.
  • More preferred amines include hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ammonia, amidophosphoric acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, or alkyl groups, alkenyl groups, cycloalkyl groups, cycloalkenyl groups, and aryl groups. hydroxy group, ether bond, alkoxy group, sulfonyl group, sulfonic acid group, sulfuric acid group, phosphonic acid group , phosphate group and carboxyl group, and amines optionally having one or more substituents.
  • More preferred amines are primary amines having one or more selected from hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, alkyl groups, aryl groups and aralkyl groups. Furthermore, amines having one or more substituents selected from hydroxyl groups, ether bonds, sulfonic acid groups, sulfuric acid groups and carboxyl groups are preferred. The number of amino groups contained in the amines to be added is preferably 1-2.
  • Amines having an alkyl group, an aryl group, or an aralkyl group include propylamine, butylamine, pentylamine, hexylamine, aniline, toluidine, 2,4,6-trimethylaniline, anisidine, phenetidine, benzylamine, and phenylethylamine. , preferably propylamine.
  • Examples of water-soluble amines having two or more amino groups, which are amines having an alkyl group include ethylenediamine, 2,2′,2′′-triaminotriethylamine, and N,N-dimethylethylenediamine. preferably ethylenediamine.
  • Amines having a hydroxyl group and an ether bond include 2-aminoethanol, trishydroxymethylaminomethane, 2-(2-aminoethoxy)ethanol (AEE), and triethylene glycolamine, preferably AEE. .
  • amines having a sulfonic acid group and a sulfate group include taurine and 2-aminoethyl hydrogen sulfate (AEHS), both of which are preferred.
  • AEHS 2-aminoethyl hydrogen sulfate
  • An amino acid can be mentioned as an amine which has a carboxyl group.
  • the amines to be added are more preferably at least one selected from propylamine, ethylenediamine, 2-(2-aminoethoxy)ethanol (AEE), 2-aminoethyl hydrogensulfate (AEHS) and taurine.
  • the Fmoc-OSu quenching amines preferably have a structure that does not contain a carboxyl group. Furthermore, when the starting compound having an amino group is an amino acid, and the subsequent steps are amino acid elongation reactions (peptide synthesis) using a carrier for liquid-phase peptide synthesis, the amines for Fmoc-OSu quenching are water-soluble amines. preferably of the same type. This is because surplus Fmoc-OSu quenching amines can also be removed during liquid-liquid separation.
  • Fmoc-OSu quenching amines include hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ammonia, amidophosphoric acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, or alkyl groups, alkenyl groups, Primary or secondary amines having one or more selected from a cycloalkyl group, a cycloalkenyl group, an aryl group, an aralkyl group and a heterocyclic group, and comprising a hydroxy group, an ether bond, an alkoxy group, and a sulfonyl group Amines optionally having one or more substituents selected from a group, a sulfonic acid group, a sulfuric acid group, a phosphonic acid group and a phosphoric acid group are preferred.
  • amines include hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ammonia, amidophosphoric acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, or alkyl groups, alkenyl groups, cycloalkyl groups and cycloalkenyl groups. hydroxy group, ether bond, alkoxy group, sulfonyl group, sulfonic acid group, sulfate group, Amines optionally having one or more substituents selected from phosphonic acid groups and phosphoric acid groups are preferred.
  • More preferred amines are one selected from hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, alkyl groups, alkenyl groups, cycloalkyl groups, cycloalkenyl groups, aryl groups, aralkyl groups and heterocyclic groups.
  • primary amines having two or more types one or more selected from a hydroxyl group, an ether bond, an alkoxy group, a sulfonyl group, a sulfonic acid group, a sulfuric acid group, a phosphonic acid group and a phosphoric acid group
  • Amines optionally having a substituent are exemplified.
  • water-soluble amines having an alkyl group, aryl group or aralkyl group examples include propylamine, butylamine, pentylamine, aniline, toluidine and benzylamine, with propylamine being particularly preferred.
  • water-soluble amines having two or more amino groups, which are amines having an alkyl group include ethylenediamine, 2,2′,2′′-triaminotriethylamine, and N,N-dimethylethylenediamine. preferably ethylenediamine.
  • Amines having a hydroxyl group and an ether bond include 2-aminoethanol, trishydroxymethylaminomethane, 2-(2-aminoethoxy)ethanol (AEE), and triethylene glycolamine, preferably AEE.
  • Examples of amines having a sulfonic acid group and a sulfate group include taurine and 2-aminoethyl hydrogen sulfate (AEHS), both of which are preferred.
  • the amines to be added are more preferably at least one selected from propylamine, ethylenediamine, 2-(2-aminoethoxy)ethanol (AEE), 2-aminoethyl hydrogensulfate (AEHS) and taurine.
  • the amines for Fmoc-OSu quenching are water-soluble amines.
  • the Fmoc-modified Fmoc-OSu quenching amines are also water-soluble. This is because, during the liquid-liquid separation, in addition to the surplus Fmoc-OSu quenching amines, the Fmoc-modified Fmoc-OSu quenching amines can also be removed.
  • Fmoc-OSu quenching amines include, for example, hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, ethylenediamine, 2-aminoethanol, 2-(2-aminoethoxy)ethanol (AEE). ), taurine, and 2-aminoethyl hydrogen sulfate (AEHS), all of which are preferred.
  • the amount of the amine added is preferably 1.0 to 3.0 equivalents, more preferably 1.0 to 2.0 equivalents, relative to the theoretical value of residual Fmoc-OSu.
  • the solvent used in the method of the present invention may be a solvent conventionally used in a method for producing an Fmoc-protected amino group-containing compound in which the amino group of a compound having an amino group is converted to Fmoc using Fmoc-OSu.
  • THF tetrahydrofuran
  • 1,4-dioxane 2-methylTHF
  • chloroform dichloromethane
  • dimethylformamide DMF
  • NFM N-formylmorpholine
  • acetonitrile acetone
  • N-methylpyrrolidone dimethylacetamide
  • DMAc dimethylacetamide
  • the amount of the solvent used is preferably such that the concentration of the compound having an amino group as a starting material is 0.05 to 0.50 mmol/L, more preferably 0.10 to 0.20 mmol/L. .
  • the method of the invention is preferably carried out in the presence of a base.
  • Inorganic bases that can be used include alkali metal carbonates, alkali metal hydrogen carbonates, and the like.
  • lithium carbonate, sodium carbonate, potassium carbonate, cesium carbonate, lithium hydrogen carbonate, sodium hydrogen carbonate, potassium hydrogen carbonate, and cesium hydrogen carbonate can be used.
  • Organic bases that can be used include N,N-diisopropylethylamine, triethylamine, and the like.
  • the amount of the base to be used is preferably 1.0 to 4.0 equivalents, more preferably 1.0 to 2.5 equivalents, still more preferably 1.5 to 2.0 equivalents, relative to the starting compound having an amino group. 5 equivalents.
  • the reaction temperature of the method of the present invention is preferably -20 to 40°C, more preferably 0 to 30°C.
  • the reaction time of the method of the present invention is preferably 0.5 to 30 hours within the above temperature range.
  • the by-production of Fmoc- ⁇ -Ala-OH due to the decomposition of Fmoc-OSu can be almost completely suppressed.
  • the target substance, the Fmoc-protected amino group-containing compound can be easily purified from the reaction mixture by liquid separation, silica gel column chromatography, recrystallization, and the like.
  • the content of Fmoc- ⁇ -Ala-OH in the resulting Fmoc-protected amino group-containing compound is preferably less than 1.0%, more preferably less than 0.5%, and still more preferably less than 0.10%. can.
  • the compound having an amino group is an amino acid
  • Fmoc-ylating the amino acid with Fmoc-OSu Fmoc-OSu quenching amines are added, and when the quenching of Fmoc-OSu is completed.
  • the target Fmoc-amino acid Fmoc-OSu quenching amines
  • Fmoc-modified Fmoc-OSu quenching amines There are three major compounds present: the target Fmoc-amino acid, Fmoc-OSu quenching amines, and Fmoc-modified Fmoc-OSu quenching amines. From this, at least the Fmoc-OSu quenching amines are separated and purified from the Fmoc-amino acids so as not to affect the next step.
  • the compound in which the Fmoc-OSu quenching amines are Fmoc-modified may be removed during the separation and purification, may be removed by further purification different from the separation and purification, or may be removed as it is mixed. You can proceed to the process. From the viewpoint of industrial production, it is preferable to be able to remove it during the separation and purification, or to proceed to the next step while it is mixed. When proceeding to the next step while the particles are mixed, they may be removed in one of the steps after the next step.
  • the purity of the Fmoc-protected amino acid itself is high, so that both solid-phase and liquid-phase peptide synthesis methods can be used to produce high-yield, high-purity peptides. can do.
  • solid-phase peptide synthesis may be performed by conventional means except for using the Fmoc-protected amino acid obtained by the method of the present invention.
  • liquid-phase peptide synthesis usual liquid-phase peptide synthesis may be carried out, except that the Fmoc-protected amino acid obtained by the method of the present invention is used.
  • Solid-phase peptide synthesis is carried out by sequentially binding ⁇ -amino acids with protected side chains to an insoluble resin carrier.
  • the compound in which the Fmoc-OSu quenching amines are Fmoc-modified can be removed by washing the insoluble resin carrier after the solid-phase peptide synthesis.
  • the amino acid or the like bound to the carrier is dissolved in the organic layer, and unnecessary components such as surplus raw material amino acids used in the peptide elongation reaction and its By dissolving in the aqueous layer the decomposition products and compounds produced as by-products when the protective groups of the starting amino acids are deprotected, there is an advantage that the amino acids bound to the carrier can be simply purified by liquid-liquid separation.
  • the compound in which the Fmoc-OSu quenching amines are Fmoc-ized can be removed by the aforementioned liquid-liquid separation.
  • amino acid amide means a structure in which the C-terminal carboxy group (--COOH) of an amino acid is replaced by an amide group (--CONH 2 ).
  • peptide amide means a structure in which the C-terminal carboxyl group of a peptide is an amide group.
  • a liquid phase peptide manufacturing method comprising the following steps ac.
  • the order of step b and step c does not matter, and step b may be followed by step c, that is, the organic solvent layer containing the condensate may be obtained after removing the Fmoc group, or step c may be followed by step b. , that is, after obtaining the organic solvent layer containing the condensate, the Fmoc group may be removed.
  • a solvent including an organic solvent, 1.
  • a step of condensing an amino acid, peptide, amino acid amide, or peptide amide obtained in the present invention the amino group of which is protected with an Fmoc group, with a carrier for liquid-phase peptide synthesis; or 2.
  • step a the condensate obtained in step a from which the Fmoc group was eliminated, that is, 1. 2. a condensate of any of the amino acid, peptide, amino acid amide or peptide amide from which the Fmoc group has been removed and a carrier for liquid-phase peptide synthesis; A step of obtaining an organic solvent layer containing either the amino acid or peptide from which the Fmoc group has been eliminated and either the amino acid, peptide, amino acid amide, or peptide amide condensate bound to a carrier for liquid-phase peptide synthesis.
  • a step of adding a quenching agent for the amino acid active ester produced in step a to the reaction solution after the condensation reaction in step a may be included.
  • Quenching agents for amino acid active esters are compounds having an amino group in the molecule, and are disclosed in Japanese Patent No. 6703668, Japanese Patent No. 6713983, International Publication No. 2021/132545, Molecules 2021, 26, 3497-3505. and the like can be used.
  • quenching agents include hydroxylamine, amidosulfuric acid, hydroxylamine-O-sulfonic acid, hydroxylamine-O-phosphonic acid, alkylamines having primary or secondary amines, fragrances having primary or secondary amines.
  • Group amines can be used, and tertiary amines can also be used. Furthermore, since excess quenching agent can be removed to the aqueous layer by liquid-liquid separation, it is preferably water-soluble, and amines having hydrophilic substituents such as hydroxyl group, sulfo group, sulfate group and phosphoric acid group are preferred. Further, the number of amino groups in the compound may be one (monovalent), or may be bivalent or more.
  • NMI N-methylimidazole
  • DMAP dimethylaminopyridine
  • trimethylamine some of the amines found in the present invention can be used as quenching agents for amino acid active esters.
  • the quenching agent for the Fmoc-amino acid active ester has the function of suppressing the side production of double-hit and triple-hit amino acids in peptide synthesis by reacting with and removing the Fmoc-amino acid active ester. Its purpose and reaction mechanism are different from the Fmoc-OSu quenching amines of the present invention.
  • the carrier for liquid phase peptide synthesis used in step a is a carrier that protects an amino acid, peptide, amino acid amide or peptide amide and solubilizes the protected amino acid, peptide, amino acid amide or peptide amide in an organic solvent.
  • Examples of such carriers for liquid-phase peptide synthesis include compounds represented by the following formula (I).
  • Ring A represents a C4-20 aromatic ring which may contain heteroatoms and may be polycyclic;
  • R 11 is a hydrogen atom, or when ring A is a benzene ring and Rb is a group represented by the following formula (a), together with R 13 represents a single bond, and ring A and may form a fluorene ring together with ring B, or may form a xanthene ring together with ring A and ring B via an oxygen atom;
  • p R 12 are each independently an aliphatic hydrocarbon group, an aliphatic hydrocarbon group substituted with an aliphatic hydrocarbon group via an oxygen atom, or an
  • R 16 represents a linear or branched alkylene group having 6 to 16 carbon atoms
  • R 17 is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms.
  • A represents either a silyl group or an alkyl group to which a silyloxy group is attached; p represents an integer of 1 to 4; Ring A is, in addition to p X 1 R 12 , a halogen atom, a C1-6 alkyl group optionally substituted with a halogen atom, and a C1-6 alkoxy group optionally substituted with a halogen atom It may have a substituent selected from the group consisting of; Ra represents a hydrogen atom or an aromatic ring optionally substituted with a halogen atom; Rb represents a hydrogen atom, an aromatic ring optionally substituted with a halogen atom, or a group represented by formula (b);
  • R 16 represents a linear or branched alkylene group having 6 to 16 carbon atoms
  • R 17 is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms
  • A represents either a silyl group or an alkyl group to which a silyloxy group is attached
  • R 13 represents a hydrogen atom, represents a single bond together with R 11 to form a fluorene ring together with ring A and ring B, or forms a xanthene ring together with ring A and ring B through an oxygen atom.
  • Ring B in addition to q X 2 R 14 , further comprises a halogen atom, a C1-6 alkyl group optionally substituted with a halogen atom, and a C1-6 alkoxy group optionally substituted with a halogen atom may have a substituent selected from the group consisting of ) Y represents a hydroxy group, a thiol group, NHR 20 (R 20 represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aralkyl group) or a halogen atom. ]
  • Ring A in formula (I) represents a C4-20 aromatic ring which may contain a heteroatom and may be monocyclic or polycyclic.
  • the aromatic ring includes a C6-20 aromatic hydrocarbon ring and a C4-10 aromatic heterocyclic ring.
  • Specific C6-20 aromatic hydrocarbon rings include benzene ring, naphthalene ring, anthracene ring, phenanthrene ring, triphenylene ring, tetracene ring, indane ring, indene ring, fluorene ring, biphenyl ring, 1,1′- A binaphthalene ring and the like can be mentioned.
  • the C4-10 aromatic heterocycle is preferably a 5- to 10-membered aromatic heterocycle containing 1 to 3 heteroatoms selected from nitrogen, oxygen and sulfur atoms, specifically , pyrrole ring, furan ring, thiophene ring, indole ring, benzofuran ring, benzothiophene ring, carbazole ring, pyrazole ring, indazole ring, imidazole ring, pyridine ring, quinoline ring, isoquinoline ring and the like.
  • a 5- to 8-membered aromatic heterocyclic ring containing 1 to 3 atoms selected from a nitrogen atom, an oxygen atom and a sulfur atom as a heteroatom is preferable, a pyrrole ring, a furan ring, a thiophene ring, an indole ring, A benzofuran ring, a benzothiophene ring, a carbazole ring, a pyrazole ring, and an indazole ring are more preferred.
  • R 11 represents a hydrogen atom, or represents a single bond together with R 13 when ring A is a benzene ring and Rb is a group represented by the formula (b); and ring B together to form a fluorene ring, or may form a xanthene ring together with ring A and ring B via an oxygen atom.
  • the ring which may be formed by R 11 and R 13 together is preferably a fluorene ring or a xanthene ring.
  • R 15 represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aralkyl group
  • R 15 is preferably a hydrogen atom, a C1-10 alkyl group or a C7-20 aralkyl group.
  • Alkyl groups include linear or branched C1- Ten alkyl groups are mentioned.
  • Aralkyl groups include C7-16 aralkyl groups such as benzyl, 1-phenylethyl, 2-phenylethyl, 1-phenylpropyl, naphthylmethyl and 1-naphthylethyl groups.
  • p R 12 are each independently an aliphatic hydrocarbon group, an aliphatic hydrocarbon group substituted with an aliphatic hydrocarbon group via an oxygen atom, or an organic group represented by formula (a) indicate;
  • R 16 represents a linear or branched alkylene group having 6 to 16 carbon atoms
  • R 17 is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms
  • A represents either a silyl group or an alkyl group to which a silyloxy group is attached.
  • p represents an integer of 1-4.
  • an organic group having an aliphatic hydrocarbon group is a monovalent organic group having an aliphatic hydrocarbon group in its molecular structure.
  • the site of the aliphatic hydrocarbon group in the organic group having the aliphatic hydrocarbon group is not particularly limited, and may be present at the terminal or at any other site.
  • the aliphatic hydrocarbon group present in the organic group is a linear, branched or cyclic saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon group.
  • a hydrogen group is preferred, a C5-50 aliphatic hydrocarbon group is more preferred, and a C8-30 aliphatic hydrocarbon group is even more preferred.
  • the aliphatic hydrocarbon group examples include an alkyl group, a cycloalkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group and the like, with alkyl groups, cycloalkyl groups and alkenyl groups being particularly preferred, and alkyl groups being more preferred.
  • a C5-30 linear or branched alkyl group, a C3-8 cycloalkyl group, a C5-30 linear or branched alkenyl group are preferred, and a C5-30 linear or branched alkyl group.
  • a C3-8 cycloalkyl group is more preferred, a C5-30 linear or branched alkyl group is more preferred, and a C8-30 linear or branched alkyl group is even more preferred.
  • alkyl group examples include alkyl groups having 1 to 30 carbon atoms, such as methyl group, ethyl group, propyl group, isopropyl group, butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group and pentyl group.
  • branched alkyl group includes 2,3-dihydrophytyl group and 3,7,11-trimethyldodecyl group.
  • X 1 R 12 includes 2,2,4,8,10,10-hexamethyl-5-dodecanoic acid amide.
  • the alkenyl group includes monovalent groups such as vinyl group, 1-propenyl group, allyl group, isopropenyl group, butenyl group, isobutenyl group and oleyl group, and divalent groups derived therefrom.
  • the alkynyl group includes an ethynyl group, a propargyl group, a 1-propynyl group and the like.
  • the above aliphatic hydrocarbon group may be substituted with an aliphatic hydrocarbon group via an oxygen atom.
  • the aliphatic hydrocarbon group capable of substituting an oxygen atom on the aliphatic hydrocarbon group include straight-chain or branched-chain alkoxy groups having 1 to 20 carbon atoms, alkenyloxy groups having 2 to 20 carbon atoms, and 3 carbon atoms. monovalent groups such as cycloalkyloxy groups of up to 6, divalent groups derived therefrom, and the like. Further, it may have a repeating structure in which an aliphatic hydrocarbon group substituted with an aliphatic hydrocarbon group through an oxygen atom is further substituted with an aliphatic hydrocarbon group through an oxygen atom.
  • R 12 12-docosyloxy-1-dodecyl group, 3,4,5-tris(octadecyloxy)benzyl group, 2,2,2-tris(octadecyloxymethyl)ethyl group, 3,4 , 5-tris(octadecyloxy)cyclohexylmethyl group and the like.
  • the above aliphatic hydrocarbon group may be substituted with an organic group represented by formula (a).
  • R 16 represents a linear or branched alkylene group having 6 to 16 carbon atoms
  • X 3 is an oxygen atom or —C( ⁇ O)NR 17 —(R 17 is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms
  • A represents a silyl group or an alkyl group to which a silyloxy group is bonded
  • the silyl group is preferably a silyl group substituted by three groups selected from linear or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms and aryl groups which may have a substituent.
  • examples of the aryl group which may have a substituent include a phenyl group and a naphthyl group.
  • a preferred silyl group is a silyl group substituted with three linear or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms, more preferably three linear or branched alkyl groups having 1 to 4 carbon atoms. It is a substituted silyl group.
  • the three alkyl groups or aryl groups substituting on the silyl group may be the same or different.
  • one silyloxy group substituted by three selected from linear or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms and aryl groups which may have substituents is used as the alkyl group to which the silyloxy group is bonded.
  • a linear or branched alkyl group having 1 to 13 carbon atoms with ⁇ 3 bonds is preferred.
  • a preferred silyloxy group is a silyloxy group substituted with three linear or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms, more preferably three linear or branched alkyl groups having 1 to 4 carbon atoms. It is a substituted silyloxy group.
  • the three alkyl groups or aryl groups substituted on the silyloxy group may be the same or different.
  • the linear or branched alkyl group having 1 to 13 carbon atoms is preferably branched, and more preferably has a quaternary carbon atom.
  • p represents an integer of 1 to 4.
  • p is preferably 1 to 4, more preferably 1 to 3, even more preferably 1 to 2.
  • Ring A is, in addition to p XR 12 , a group consisting of a halogen atom, a C1-6 alkyl group optionally substituted with a halogen atom, and a C1-6 alkoxy group optionally substituted with a halogen atom You may have a substituent selected from.
  • Halogen atoms include chlorine, fluorine, bromine and iodine atoms.
  • the C1-6 alkyl group optionally substituted with a halogen atom includes a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, a tert-butyl group, a pentyl group and a hexyl group. , a dichloromethyl group, a trichloromethyl group, a trifluoromethyl group, and the like.
  • the C1-6 alkoxy group optionally substituted with a halogen atom includes a methoxy group, an ethoxy group, a propyloxy group, an isopropyloxy group, a butyloxy group, an isobutyloxy group, a sec-butyloxy group, a tert-butyloxy group, and a trichloromethoxy group. groups, trifluoromethoxy groups, and the like.
  • Ra represents a hydrogen atom or an aromatic ring optionally substituted with a halogen atom.
  • the aromatic ring includes a C6-18 aromatic hydrocarbon ring and a C4-10 aromatic heterocyclic ring.
  • Specific C6-18 aromatic hydrocarbon rings include benzene ring, naphthalene ring, anthracene ring, phenanthrene ring, triphenylene ring, tetracene ring, indane ring, indene ring, fluorene ring and biphenyl ring.
  • a benzene ring, a naphthalene ring, a phenanthrene ring, and a fluorene ring are more preferable.
  • the C4-10 aromatic heterocyclic ring is preferably a 5- to 10-membered heterocyclic ring containing 1 to 3 heteroatoms selected from a nitrogen atom, an oxygen atom and a sulfur atom, and specifically, pyrrole. ring, furan ring, thiophene ring, indole ring, benzofuran ring, benzothiophene ring, carbazole ring, pyrazole ring, indazole ring, imidazole ring, pyridine ring, quinoline ring, isoquinoline ring and the like.
  • a 5- to 8-membered heterocyclic ring containing 1 to 3 atoms selected from a nitrogen atom, an oxygen atom and a sulfur atom as a heteroatom is preferable, and a pyrrole ring, a furan ring, a thiophene ring, an indole ring, and a benzofuran ring.
  • benzothiophene ring, carbazole ring, pyrazole ring and indazole ring are more preferred.
  • the aromatic ring of Ra may be substituted with 1 to 3 halogen atoms.
  • Rb represents a hydrogen atom, an aromatic ring optionally substituted with a halogen atom, or a group represented by the above formula (b).
  • q in the formula (b) represents an integer of 0-4. q is preferably 0 to 3, more preferably 1 to 3, even more preferably 1 to 2.
  • R 18 represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aralkyl group
  • R 18 is preferably a hydrogen atom, a C1-10 alkyl group or a C7-20 aralkyl group.
  • alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl and hexyl groups.
  • Aralkyl groups include C7-16 aralkyl groups such as benzyl, 1-phenylethyl, 2-phenylethyl, 1-phenylpropyl, naphthylmethyl and 1-naphthylethyl groups.
  • q R 14 are independently an aliphatic hydrocarbon group, an aliphatic hydrocarbon group substituted with an aliphatic hydrocarbon group via an oxygen atom, or an organic group represented by formula (a) show.
  • R 16 represents a linear or branched alkylene group having 6 to 16 carbon atoms
  • R 17 is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms
  • A represents either a silyl group or an alkyl group to which a silyloxy group is bonded.
  • Examples of the organic group represented by R 14 include the same groups as those for R 12 above, and preferably the same groups as those for R 12 above.
  • R 13 represents a hydrogen atom, represents a single bond together with R 11 to form a fluorene ring together with ring A and ring B, or forms a xanthene ring together with ring A and ring B through an oxygen atom. may be formed.
  • Ring B in addition to q X 2 R 14 , further comprises a halogen atom, a C1-6 alkyl group optionally substituted with a halogen atom, and a C1-6 alkoxy group optionally substituted with a halogen atom may have a substituent selected from the group consisting of Halogen atoms include chlorine, fluorine, bromine and iodine atoms.
  • the C1-6 alkyl group optionally substituted with a halogen atom includes a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, a tert-butyl group, a pentyl group and a hexyl group. , a dichloromethyl group, a trichloromethyl group, a trifluoromethyl group, and the like.
  • the C1-6 alkoxy group optionally substituted with a halogen atom includes a methoxy group, an ethoxy group, a propyloxy group, an isopropyloxy group, a butyloxy group, an isobutyloxy group, a sec-butyloxy group, a tert-butyloxy group, and a trichloromethoxy group. groups, trifluoromethoxy groups, and the like.
  • Y represents a hydroxy group, a thiol group, NHR 20 (R 20 represents a hydrogen atom, an alkyl group or an aralkyl group) or a halogen atom.
  • R 20 is preferably a hydrogen atom, a C1-10 alkyl group or a C7-20 aralkyl group.
  • alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl and hexyl groups.
  • Aralkyl groups include C7-16 aralkyl groups such as benzyl, 1-phenylethyl, 2-phenylethyl, 1-phenylpropyl, naphthylmethyl and 1-naphthylethyl groups.
  • 106 g, 1.26 mmol, 2.24 eq. was added, stirred under ice-cooling, and a THF solution (2.73 mL) in which Fmoc-OSu (0.371 g, 1.10 mmol, 1.96 eq.) was dissolved was added. , and stirred for 1 hour under ice-cooling.
  • Example 1-2 Quenching agent AEHS with additional base HD-Ala-OH (0.0500 g, 0.561 mmol) was mixed with water (2.48 mL), NaHCO 3 (0.106 g, 1.26 mmol, 2. 24 eq.) was added and stirred under ice cooling, Fmoc-OSu (0.371 g, 1.10 mmol, 1.96 eq.) dissolved in THF (2.73 mL) was added, and the mixture was stirred for 1 hour under ice cooling. bottom. Subsequently, after stirring at room temperature for 1 hour, the solution was analyzed by LC-MS (analysis (1)).
  • Example 1-1 When AEHS was used as a quenching agent, Fmoc-OSu, which was 47.3% in the solution at the time of analysis (1), decreased to 4.5% in 1 hour after the addition of the quenching agent. It decreased to 0.487% in time.
  • Fmoc-AEHS increased at the time of analysis (3) (FIG. 2), and surplus Fmoc-OSu was quenched with AEHS and converted to Fmoc-AEHS.
  • the content of Fmoc- ⁇ -Ala-OH which is an unfavorable by-product of Fmoc-OSu, was extremely low at 0.007% to 0.008%.
  • Fmoc- ⁇ -Ala-OH which is an unfavorable by-product
  • Fmoc- ⁇ -Ala-OH may be produced as a by-product.
  • Fmoc-OSu can be rapidly converted to Fmoc-AEHS.
  • AEHS is water-soluble, it is a compound that can be removed during liquid-liquid separation and purification of Fmoc-D-Ala-OH.
  • Fmoc-AEHS can be removed to the aqueous layer by a liquid separation operation under neutral or alkaline conditions.
  • Fmoc-AEHS does not have a carboxyl group
  • the next step is a peptide synthesis reaction, even if the next step is carried out while it is mixed, it does not cause undesirable side reactions such as Fmoc- ⁇ -Ala-OH. is a compound.
  • Example 2 Fmoc reaction of amino acids: HL-Phe-OH, HL-Val-OH
  • Comparative Example 2-1 No quenching agent, no additional base Fmoc-ized in the same manner as in Comparative Example 1 using HL-Phe-OH.
  • the reaction liquid was sampled at the same timing as in Comparative Example 1 and analyzed under LC-MS analysis conditions-2.
  • Comparative Example 2-2 No quenching agent, no additional base Fmoc-ized in the same manner as in Comparative Example 1 using HL-Val-OH.
  • the reaction liquid was sampled at the same timing as in Comparative Example 1 and analyzed under LC-MS analysis conditions-2.
  • Fmoc-OSu and Fmoc- ⁇ -Ala-OH which is a problematic impurity, can be separated from other peaks. Analyzed as area%. Since HL-Val-OH cannot be detected by UV, when the molecular weight was observed by mass chromatogram, it was judged that it did not remain because it was hardly observed. The peak at 17.8 minutes is 9-fluorenylmethanol, which is a degradation product of Fmoc-OSu. Analysis of Examples 2-1 to 2-4 and Comparative Examples 2-1 to 2-2 Fmoc-OSu content in solutions (1), (2) and (3), and Fmoc- ⁇ -Ala-OH Contents are shown in Table 2. The HPLC chart of Example 2-1 Analysis (1) is shown in FIG. 4, the HPLC chart of (3) is shown in FIG. 5, and the HPLC chart of Comparative Example 2-1 Analysis (3) is shown in FIG.
  • Example 1 When HL-Phe-OH and HL-Val-OH were used as raw materials, the same tendency as Example 1 and Comparative Example 1 was shown. That is, when AEHS was added as a quenching agent, Fmoc-OSu quickly disappeared after addition of the quenching agent and was converted to Fmoc-AEHS regardless of the presence or absence of the additional base (Figs. 4 and 5). Furthermore, the amount of Fmoc- ⁇ -Ala-OH, which is an undesirable by-product, is 0.005-0.011% for HL-Phe-OH and 0.005% for HL-Val-OH. 018 to 0.019%, which is very small. It should be noted that Fmoc-OSu was converted to Fmoc-AEHS more quickly when the base was added.
  • Fmoc-OSu HL-hArg(Et) 2 (Boc) 2 -OH and Fmoc-L-hArg(Et) 2 (Boc) 2 -OH represent the structures in the above formulas.
  • Example 3-1 Quenching agent: AEHS, no addition of base Using HL-hArg(Et) 2 (Boc) 2 -OH, Fmoc formation was carried out in the same manner as in Example 1-1. The reaction solution was sampled at the same timing as in Example 1-1 and analyzed under LC-MS analysis conditions-2.
  • Example 3-2 Quenching Agent AEE (2-(2-aminoethoxyethanol), no added base Using HL-hArg(Et) 2 (Boc) 2 -OH as starting material and AEE as quenching agent, Fmoc conversion was performed in the same manner as in Example 1-1, and the reaction solution was sampled at the same timing as in Example 1-1 and analyzed under LC-MS analysis conditions-2.
  • Example 3-4 Quenching agent AEE with addition of base Using HL-hArg(Et) 2 (Boc) 2 -OH as a raw material and AEE as a quenching agent, Fmoc conversion was performed in the same manner as in Example 1-2. carried out. The reaction solution was sampled at the same timing as in Example 1-2 and analyzed under LC-MS analysis conditions-2.
  • Comparative Example 3 No quenching agent, no addition of base Fmocification was carried out in the same manner as in Comparative Example 1 using HL-hArg(Et) 2 (Boc) 2 -OH. The reaction liquid was sampled at the same timing as in Comparative Example 1 and analyzed under LC-MS analysis conditions-2.
  • Fmoc- ⁇ -Ala-OH which is a decomposition product of Fmoc-OSu
  • Fmoc-AEHS which is a combination of Fmoc-OSu and AEHS, which is a quenching agent
  • Fmoc-OSu and a quenching agent Fmoc-AEE to which AEE was bound was eluted at 17.2 minutes.
  • Fmoc- ⁇ -Ala-OH was separable from other peaks, and the content in the solution at each time point of analysis (1), (2), and (3) was analyzed as HPLC area%.
  • Fmoc-AEHS or Fmoc-AEE the compound (Fmoc-AEHS or Fmoc-AEE) in which Fmoc-OSu and a quenching agent were bound was also analyzed for the content in the solution at each time point as HPLC area %.
  • the content of Fmoc-OSu was not calculated because it could not be separated from the target product.
  • Table 3 shows the Fmoc-OSu content and the Fmoc- ⁇ -Ala-OH content in the solutions (1), (2), and (3) analyzed in Examples 3-1 to 3-4 and Comparative Example 3. rice field.
  • the Fmoc-quenched form is Fmoc-AEHS in Examples 3-1 and 3-3, and Fmoc-AEE in Examples 3-2 and 3-4.
  • the HPLC chart of analysis (1) of Example 3-2 is shown in FIG. 7
  • the HPLC chart of analysis (3) is shown in FIG. 8
  • the HPLC chart of analysis (3) of Comparative Example 3 is shown in FIG.
  • AEE is water-soluble, it is a compound that can be removed during liquid-liquid separation and purification of the target Fmoc-L-hArg(Et) 2 (Boc) 2 -OH. Also, Fmoc-AEE can be removed to the aqueous layer by liquid separation under neutral or alkaline conditions. Furthermore, since Fmoc-AEE does not have a carboxyl group, if the next step is a peptide synthesis reaction, even if the next step is carried out while it is mixed, undesirable side reactions such as Fmoc- ⁇ -Ala-OH will occur. It is a compound that does not have
  • amines such as AEHS and AEE, which are different from the starting compound having an amino group, are added to the reaction system in which the amino group of the compound having an amino group is converted to Fmoc using Fmoc-OSu. was shown to be able to almost completely suppress the by-production of Fmoc- ⁇ -Ala-OH. If such amines are water-soluble, they can be removed during liquid-liquid separation of the target product.

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Abstract

原料アミノ基含有化合物が無駄にならず、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの副生を抑制し、目的物の精製が容易になる、Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法を提供する。　本発明は、アミノ基を有する化合物のアミノ基をＦｍｏｃ－ＯＳｕを用いてＦｍｏｃ化するＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法であって、反応系に原料のアミノ基を有する化合物とは異なるアミン類を添加することを特徴とするＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法に関する。

Description

Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法
　本発明は、Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法に関する。
　９－フルオレニルメトキシカルボニル基（以下、Ｆｍｏｃという）は、アミノ基の保護基として汎用される保護基である。このＦｍｏｃでアミノ基が保護された化合物（Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物）の製造法は、炭酸ナトリウムなどの無機塩基の存在下でアミノ基を有する化合物に９－フルオレニルメトキシカルボニルクロリドやＮ－（９－フルオレニルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ）を反応させる方法が広く用いられている。
　このうち、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕを用いる方法は、反応条件が穏和であり、収率も高いので、特に汎用されているが、余剰のＦｍｏｃ－ＯＳｕが塩基性条件下、水により分解され、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨ［３５７３７-１０-１］を副生することが知られている（非特許文献１、２）。
　副生したＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが次の工程に影響を与える場合は、除去する必要がある。例えばアミノ基を含む化合物がアミノ酸であって、次工程がアミノ酸伸長反応である場合、目的物のほかにＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが次工程のアミノ酸と結合した化合物が副生するという問題があった。
　このため、従来は、次のうちいずれか、又は組み合わせた操作が必要であった。
（１）Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが副生しないように、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕの使用量（化学当量）を原料のアミノ基含有化合物より少なくする。
（２）Ｆｍｏｃアミノ基含有化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーや再結晶により精製し、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕやＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨを除去する。
（３）Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが混入したまま次工程を実施し、次工程にて除去する。
　また、副生成物としてＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが副生しないよう、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕに代わる構造として、数多くの構造が検討されてきた（非特許文献３、４）。例えば、Ｆｍｏｃ－２－ｍｅｒｃａｐｔｏｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｅ（Ｆｍｏｃ－ＭＢＴ）は検討された化合物の１つであったが、副生する２－ＭＢＴの溶解性が低いことから、その除去のため複数回分液洗浄をおこなう必要があり、目的物の収率が低下するという問題があった。
Ｊ Ｐｅｐｔ　Ｒｅｓ．　２００５　Ｊａｎ；６５（１）：９０－７． Ｊ Ｐｅｐｔ　Ｓｃｉ．　２００８　Ｊｕｎ；１４（６）：７６３－６． Ｊ Ｐｅｐｔ　Ｓｃｉ．　２０１６　Ｊａｎ；２２（１）：４－２７． Ｏｒｇ．　Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｒｅｓ．　Ｄｅｖ．　２０１７，　２１（１０），　１５３３－４１．
　しかしながら、それぞれの手段では以下に示す課題があった。まず（１）の手段では、原料であるアミノ基含有化合物の一部が無駄になるという課題があった。（２）の手段では、Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物とＦｍｏｃ－ＯＳｕやＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの物性が類似である場合に精製が困難であった。（３）の手段では、次工程の原料の一部がＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨと反応する場合は原料の無駄が生じる、また本来の目的物との物性が類似である場合は分離精製が困難になるというという課題があった。
　そこで、本発明者らは、前記（１）～（３）などの手段を用いることなく、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの副生を抑制し、簡便にＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物を高純度で製造する方法を検討した。すると、全く意外にも、アミノ基を有する化合物のアミノ基をＦｍｏｃ－ＯＳｕを用いてＦｍｏｃ化する反応系に、当該原料のアミノ基を有する化合物とは異なる特定のアミン類を添加すれば、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの副生をほぼ完全に抑制できることを見出した。この方法では、原料であるアミノ基含有化合物が無駄になることがなく、Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の精製が困難になることがなく、また次工程の原料が無駄にならない。さらにこの方法をペプチドの製造に使用した場合には、ペプチドの精製が容易になり、さらにペプチドの純度が向上することを見出し、本発明を完成した。
　すなわち、本発明は、次の発明［１］～［９］を提供するものである。
［１］アミノ基を有する化合物のアミノ基をＦｍｏｃ－ＯＳｕを用いてＦｍｏｃ化するＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法であって、反応系に原料のアミノ基を有する化合物とは異なる１級又は２級アミン類を添加することを特徴とするＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法。
［２］添加するアミン類が、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級若しくは２級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基、リン酸基及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である［１］に記載の製造方法。
［３］添加するアミン類が、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基、リン酸基及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である［１］に記載の製造方法。
［４］添加するアミン類が、水溶性である［１］～［３］のいずれかに記載の製造方法。
［５］添加するアミン類が、プロピルアミン、エチレンジアミン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）及びタウリンから選ばれる少なくとも１種である［１］～［４］のいずれかに記載の製造方法。
［６］アミノ基を有する化合物がアミノ酸であり、Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物がＦｍｏｃ保護アミノ酸であり、添加するアミン類がアミノ酸以外のアミン類である［１］に記載の製造方法。
［７］添加するアミン類が、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級若しくは２級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である［６］に記載の製造方法。
［８］添加するアミン類が、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である［６］に記載の製造方法。
［９］添加するアミン類が、水溶性である［６］～［８］のいずれかに記載の製造方法。
［１０］添加するアミン類が、プロピルアミン、エチレンジアミン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）及びタウリンから選ばれる少なくとも１種である［６］～［９］のいずれかに記載の製造方法。
［１１］［６］～［１０］のいずれか１項に記載の方法で製造されたＦｍｏｃ保護アミノ酸を原料として用いる、ペプチドの製造法。
　本発明の製造法によれば、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが副生しないので、原料アミノ基含有化合物が無駄になることがなく、Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の精製が困難になることがなく、また次工程の原料が無駄にならない。さらに本発明の製造法をペプチドの製造に使用すると、ペプチドの精製が容易になり、ペプチドの純度も向上する。
実施例１－１における分析（１）の結果を示す。 実施例１－１における分析（３）の結果を示す。 比較例１における分析（３）の結果を示す。 実施例２－１における分析（１）の結果を示す。 実施例２－１における分析（３）の結果を示す。 比較例２－１における分析（３）の結果を示す。 実施例３－２における分析（１）の結果を示す。 実施例３－２における分析（３）の結果を示す。 比較例３における分析（３）の結果を示す。
　本発明は、アミノ基を有する化合物のアミノ基をＦｍｏｃ－ＯＳｕを用いてＦｍｏｃ化するＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法であって、反応系に原料のアミノ基を有する化合物以外のアミン類を添加することを特徴とする。
　まず、原料であるアミノ基を有する化合物は、アミノ基（Ｈ2Ｎ－）を有する有機化合物であって、当該アミノ基以外に反応性官能基を有する有機化合物であるのが好ましい。アミノ基以外の反応性官能基としては、水酸基、グアニジル基、カルボキシル基、チオール基、インドール基、イミダゾール基、スルホン酸基、硫酸基などの官能基が挙げられる。これらの官能基は、ペプチド合成で用いられる一般的な保護基が導入されていてもよく、反応終了後の任意の時点で、必要に応じて保護基を除去することで目的化合物を得ることができる。
　水酸基の保護基としてはｔＢｕ（ｔｅｒｔ－ブチル）基、Ｔｒｔ（トリチル）基、Ｂｚ（ベンゾイル）基、アセチル基、シリル基等が挙げられる。グアニジル基の保護基としては、Ｐｂｆ（２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル）基、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）基、Ｐｍｃ（２，２，５，７，８－ペンタメチルクロマン－６－スルホニル）基、ニトロ基等が挙げられる。カルボキシル基の保護基としてはｔＢｕ基、メチル基、エチル基、Ｂｚ基等が挙げられる。チオール基の保護基としては、Ｔｒｔ基、Ａｃｍ（アセトアミドメチル）基、ｔＢｕ基、Ｓ－ｔＢｕ（ジチオ－ｔｅｒｔ－ブチル）基、Ｄｐｍ（ジフェニルメチル）基、ＭＢｏｍ（４―メトキシベンジルオキシメチル）基等が挙げられる。インドール基の保護基としては、Ｂｏｃ基等が挙げられる。イミダゾール基の保護基としては、Ｂｏｃ基、Ｂｏｍ（ベンジルオキシメチル）基、Ｂｕｍ（ｔｅｒｔ－ブトキシメチル）基、Ｔｒｔ基、Ｄｄｍ（４，４'－ジメトキシジフェニル）基、ＭＢｏｍ基等を挙げられる。
　好ましいアミノ基を有する化合物としては、アミノ酸やペプチドが挙げられる。当該アミノ酸としては、天然のアミノ酸又は非天然のアミノ酸のいずれもよく、Ｌ型又はＤ型のいずれのアミノ酸でもよく、また、それらのアミノ酸が混合したものでもよい。非天然アミノ酸としては、公知の非天然の任意のアミノ酸、又は、公知の技術を参照して任意の修飾を加えたアミノ酸を用いてもよい。
　公知の非天然アミノ酸としては、例えば、Ｎ－メチル修飾アミノ酸、Ｎ－２，４－ジメトキシベンジル修飾アミノ酸、α－メチルアラニン、Ｄ－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、及び、Ｌ－オクタヒドロインドリン－２－カルボン酸、３－（３－ピリジル）－Ｄ－アラニン、Ｄ－３－（２－ナフチル）－アラニン、Ｄ－３－（４－クロロ）フェニルアラニン、（Ｎ，Ｎ’－ジエチル）ホモアルギニン、Ｄ－（Ｎ，Ｎ’－ジエチル）ホモアルギニン等を挙げることができる。
　また、天然の又は非天然のアミノ酸に、低分子の有機化合物の付加、リン酸化、ビオチン化、ＰＥＧ化、糖鎖修飾、蛍光修飾等をしたアミノ酸も用いることができる。
　具体的な天然アミノ酸としては、イソロイシン、ロイシン、バリン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、スレオニン、アスパラギン、アスパラギン酸、アラニン、アルギニン、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、プロリン、セリン、チロシンなどが挙げられる。
　当該ペプチドとしては、前述のアミノ酸を複数結合したペプチドを挙げることができる。また当該ペプチドは、低分子の有機化合物の付加、リン酸化、ビオチン化、ＰＥＧ化、糖鎖修飾、蛍光修飾等がされていてもよい。
　Ｆｍｏｃ－ＯＳｕは、既に広く市販されているものを用いることができるが、ＦｍｏｃクロリドにＮ－ヒドロキシスクシンイミドを反応させて製造してもよい。
　原料であるアミノ基を有する化合物をＦｍｏｃ化する際のＦｍｏｃ－ＯＳｕの使用量は、原料であるアミノ基を有する化合物に対して、好ましくは１．０～３．０当量、より好ましくは１．０～２．０当量であるが、これに限定されない。
　本発明の製造方法においては、原料のアミノ基を有する化合物以外のアミン類を反応系に添加する（この反応系に添加するアミン類を、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類ということもある）。
　反応系に上記のアミン類を添加することにより、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが副生しないので、原料アミノ基含有化合物が無駄になることがなく、Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の精製が困難になることがなく、また次工程の原料が無駄にならない。さらに本発明の製造法をペプチドの製造に使用すると、ペプチドの精製が容易になり、ペプチドの純度も向上する。
　反応系に添加するＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類は、原料であるアミノ基を有する化合物とは異なるアミン類であり、原料であるアミノ基を有する化合物がＦｍｏｃ化された化合物と分離精製可能であることが好ましい。
　アミノ基を有する化合物をＦｍｏｃ－ＯＳｕを用いてＦｍｏｃ化した後、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類を添加し、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕのクエンチが完了した時点の反応溶液中に存在する主要な化合物は、アミノ基を有する化合物がＦｍｏｃ化された目的化合物、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類、及びＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類がＦｍｏｃ化された化合物の３種である。ここから、次工程に影響を及ぼさないよう、アミノ基を有する化合物がＦｍｏｃ化された目的化合物から、少なくともＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類を分離精製する必要がある。
　Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類を分離精製する方法は、化合物の溶解度、極性、分子サイズ、キラリティー又は沸点等の物性の違いを利用した分離方法であれば何でもよい。溶解度が異なる場合、液液分離や再結晶操作による分離精製が可能である。極性が異なる場合、カラムクロマトグラフィーによる分離精製が可能である。分子サイズが異なる場合、ゲルろ過クロマトグラフィーによる分離精製が可能である。キラリティーが異なる場合、キラルカラムクロマトグラフィーによる分離精製が可能である。沸点が異なる場合、蒸留や分留による分離精製が可能である。これらのうち、液液分離又は再結晶操作による分離精製が好ましく、液液分離による分離精製がさらに好ましい。
　さらに添加するアミン類は、その構造に、次工程以降に影響する官能基が含まれない構造であることが好ましい。Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類がＦｍｏｃ化された化合物は前記の分離精製時に除去してもよいし、前記の分離精製とは異なる精製をさらに実施して除去してもよいし、混入したまま次工程に進んでもよい。工業生産の観点からは前記の分離精製時に除去できるか、又は混入したまま次工程に進むことが好ましい。混入したまま次工程に進む場合は、次工程以降のいずれかの工程で除去すればよいが、その場合、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類には次工程以降の合成反応に影響する官能基が含まれない構造であるのが望ましい。
　添加するＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類の具体例としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級若しくは２級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基、リン酸基及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類であるのが好ましい。
　ヒドロキシルアミンはＣＡＳ番号［７８０３－４９－８］、アミド硫酸はＣＡＳ番号［５３２９－１４－６］、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸はＣＡＳ番号［２９５０－４３－８］、アミドリン酸はＣＡＳ番号［２８１７－４５－０］、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸はＣＡＳ番号［２０２９２－７８－８］で表される化合物である。
　ここで、１級又は２級アミン類が有するアルキル基としては、炭素数１～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が挙げられ、好ましくは炭素数１～１４のアルキル基、より好ましくは炭素数２～１０のアルキル基、さらに好ましくは炭素数２～８のアルキル基、さらに好ましくは炭素数３～４のアルキル基である。例えばメチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基などが挙げられる。
　１級又は２級アミンが有するアルケニル基としては、炭素数２～３０の直鎖又は分岐鎖のアルケニル基が挙げられ、好ましくは炭素数２～１４のアルケニル基、より好ましくは炭素数２～１０のアルケニル基、さらに好ましくは炭素数２～８のアルケニル基である。例えば、ビニル基、アリル基などが挙げられる。
　１級又は２級アミン類が有するシクロアルキル基としては、炭素数３～１３のシクロアルキル基が好ましい。例えば、シクロプロピル基、シクロブタニル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロオクチル基、ジシクロへキシル基などが挙げられる。
　１級又は２級アミン類が有するシクロアルケニル基としては、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基などが挙げられる。
　１級又は２級アミン類が有するアリール基としては、炭素数６～１４のアリール基が好ましく、フェニル基、ナフチル基などが挙げられる。
　１級又は２級アミン類が有するアラルキル基としては、ベンゼン環に炭素数１～４のアルキル基が結合しているフェニル－Ｃ１－４アルキル基が好ましく、ベンジル基、フェニルエチル基などが挙げられる。
　１級又は２級アミン類が有する複素環式基としては、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれるヘテロ原子を１～３個有する複素環式基が挙げられ、具体的には、フラニル基、ピロール基、チエニル基、ピリジル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基などが挙げられる。
　また、１級又は２級アミン類は、これらのアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる基を１種又は２種以上有する。また、これらの１級又は２級アミン類は、アミノ基を１～４個有していてもよい。
　前記１級又は２級アミン類は、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基、リン酸基及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよい。
　ここで、エーテル結合としては、オキシエチレン基、オキシプロプレン基などが挙げられ、モノオキシエチレン基、ジ（オキシエチレン）基、トリ（オキシエチレン）基、テトラ（オキシエチレン）基、ポリオキシエチレン基などが挙げられる。
　アルコキシ基としては、炭素数１～６のアルコキシ基が挙げられ、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、ブチルオキシ基などが挙げられる。
　また、ヒドロキシ基、スルホニル基（－ＳＯ2－）、スルホン酸基（－ＳＯ3Ｈ）、硫酸基（－ＯＳＯ3Ｈ）、ホスホン酸基（－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）2）、リン酸基（－Ｏ－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）2）、及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基も有していてもよい。
　より好ましいアミン類としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基、リン酸基及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類が挙げられる。
　さらに好ましいアミン類としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アルキル基、アリール基及びアラルキル基から選ばれる１種又は２種以上を有する１級アミン類が好ましい。さらに、ヒドロキシ基、エーテル結合、スルホン酸基、硫酸基及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有するアミン類であるのが好ましい。添加するアミン類に含まれるアミノ基の数は、１～２個であるのが好ましい。
　アルキル基、アリール基、アラルキル基を有するアミンとしては、プロピルアミン、ブチルアミン、ペンチルアミン、ヘキシルアミン、アニリン、トルイジン、２，４，６－トリメチルアニリン、アニシジン、フェネチジン、ベンジルアミン、フェニルエチルアミンを挙げることができ、好ましくはプロピルアミンである。
　また、アルキル基を有するアミンであって、アミノ基を２つ以上有する水溶性アミンとして、例えば、エチレンジアミン、２，２’，２’’－トリアミノトリエチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミンを挙げることができ、好ましくはエチレンジアミンである。
　ヒドロキシ基、エーテル結合を有するアミンとしては、２－アミノエタノール、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、トリエチレングリコールアミンを挙げることができ、好ましくはＡＥＥである。
　スルホン酸基、硫酸基を有するアミンとしては、タウリン、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）を挙げることができ、双方とも好ましい。カルボキシル基を有するアミンとしては、アミノ酸を挙げることができる。
　添加するアミン類としては、プロピルアミン、エチレンジアミン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）及びタウリンから選ばれる少なくとも１種であるのがさらに好ましい。
　さらに原料であるアミノ基を有する化合物がアミノ酸で、次工程以降がアミノ酸伸長反応（ペプチド合成）である場合、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類はカルボキシル基が含まれない構造であることが好ましい。さらに原料であるアミノ基を有する化合物がアミノ酸で、次工程以降が液相ペプチド合成用担体を使用したアミノ酸伸長反応（ペプチド合成）である場合、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類は、水溶性のアミン類であることが好ましい。これは、液液分離の際に、余剰のＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類も除去可能であるためである。
　このようなＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類の具体例としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級若しくは２級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類であるのが好ましい。
　より好ましいアミン類の具体例としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類であるのが好ましい。
　さらに好ましいアミン類としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種又は２種以上を有する１級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類が挙げられる。
　アルキル基、アリール基、アラルキル基を有する水溶性のアミンとしては、プロピルアミン、ブチルアミン、ペンチルアミン、アニリン、トルイジン、ベンジルアミン等を挙げることができ、特に好ましくはプロピルアミンである。
　また、アルキル基を有するアミンであって、アミノ基を２つ以上有する水溶性アミンとして、例えば、エチレンジアミン、２，２’，２’’－トリアミノトリエチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミンを挙げることができ、好ましくはエチレンジアミンである。
　ヒドロキシ基、エーテル結合を有するアミンとしては、２－アミノエタノール、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、トリエチレングリコールアミンを挙げることができ、好ましくはＡＥＥである。スルホン酸基、硫酸基を有するアミンとしては、タウリン、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）を挙げることができ、双方とも好ましい。
　添加するアミン類としては、プロピルアミン、エチレンジアミン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）及びタウリンから選ばれる少なくとも１種であるのがさらに好ましい。
　原料であるアミノ基を有する化合物がアミノ酸で、次工程以降が液相ペプチド合成用担体を使用したアミノ酸伸長反応（ペプチド合成）である場合、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類が水溶性のアミン類であることに加えて、さらにＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類がＦｍｏｃ化された化合物も水溶性であることが好ましい。これは、液液分離の際に、余剰のＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類に加えて、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類がＦｍｏｃ化された化合物も除去可能であるためである。
　このようなＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類の具体例としては、例えば、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、エチレンジアミン、２－アミノエタノール、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、タウリン、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）を挙げることができ、いずれも好ましい。
　前記アミン類の添加量は、残存Ｆｍｏｃ－ＯＳｕの理論値に対して１．０～３．０当量が好ましく、１．０～２．０当量であるのがより好ましい。
　本発明方法に用いられる溶媒は、従来からアミノ基を有する化合物のアミノ基をＦｍｏｃ－ＯＳｕを用いてＦｍｏｃ化するＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法に用いられている溶媒であってもよく、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４－ジオキサン、２－メチルＴＨＦ、クロロホルム、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ＮＦＭ（Ｎ－ｆｏｒｍｙｌｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ）、アセトニトリル、アセトン、Ｎ－メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）又はこれらの溶媒と水の混合溶媒を挙げることができ、好ましくは、ＴＨＦ、１，４－ジオキサン、ＤＭＦ、アセトン、Ｎ－メチルピロリドン又はこれらの溶媒と水の混合溶媒である。
　前記溶媒の使用量は、原料であるアミノ基を有する化合物の濃度が０．０５～０．５０ｍｍｏｌ／Ｌとなる量が好ましく、より好ましくは０．１０～０．２０ｍｍｏｌ／Ｌとなる量である。
　本発明方法は、塩基の存在下に行うのが好ましい。使用できる無機塩基としては、炭酸アルカリ金属塩、炭酸水素アルカリ金属塩などが挙げられる。例えば、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素セシウムが使用できる。使用できる有機塩基としては、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミンなどが挙げられる。
　前記塩基の使用量は、原料であるアミノ基を有する化合物に対して１．０～４．０当量が好ましく、より好ましくは１．０～２．５当量、さらに好ましくは１．５～２．５当量である。
　本発明方法の反応温度は、－２０～４０℃が好ましく、より好ましくは０～３０℃である。本発明方法の反応時間は、上記温度範囲内で、０．５～３０時間が好ましい。
　前記の反応によれば、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕの分解によるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの副生をほぼ完全に抑制できる。反応混合物から目的物質であるＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物は、分液操作、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、再結晶等により、容易に精製することができる。得られるＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物中のＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの含有量を好ましくは１．０％未満、より好ましくは０．５％未満、さらに好ましくは０．１０%未満とすることができる。
　アミノ基を有する化合物がアミノ酸である場合、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕを用いてアミノ酸をＦｍｏｃ化した後、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類を添加し、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕのクエンチが完了した際の、反応溶液中に存在する主要な化合物は、目的物であるＦｍｏｃ化アミノ酸、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類、及びＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類がＦｍｏｃ化された化合物の３種である。ここから、次工程に影響を及ぼさないよう、Ｆｍｏｃ化アミノ酸から、少なくともＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類は分離精製される。Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類がＦｍｏｃ化された化合物は前記の分離精製時に除去してもよいし、前記の分離精製とは異なる精製をさらに実施して除去してもよいし、混入したまま次工程に進んでもよい。工業生産の観点からは前記の分離精製時に除去できるか、又は混入したまま次工程に進むことが好ましい。混入したまま次工程に進む場合は、次工程以降のいずれかの工程で除去すればよい。
　本発明方法により得られるＦｍｏｃ保護アミノ酸を用いれば、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸それ自体の純度が高いため、固相法及び液相法のいずれのペプチド合成法によっても、高収率で高純度のペプチドを製造することができる。固相法の場合には、本発明方法により得られたＦｍｏｃ保護アミノ酸を用いる以外は、通常の手段により固相ペプチド合成を行えばよい。液相ペプチド合成の場合も、本発明方法により得られたＦｍｏｃ保護アミノ酸を用いる以外は、通常の液相ペプチド合成を行えばよい。
　ペプチド固相合成は、側鎖を保護したα－アミノ酸を不溶性樹脂担体に順次結合させていくことで実施する。次工程がペプチド固相合成である場合、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類がＦｍｏｃ化された化合物は、ペプチド固相合成後に不溶性樹脂担体を洗浄する工程で除去することができる。
　一方で、近年、液相ペプチド合成において、液相ペプチド合成用担体（Ｔａｇ）が報告されている。本担体は疎水性が高い化合物であるため、親水性の高いアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミド（以下、アミノ酸等ということがある）を本担体に結合することで、有機溶媒への溶解性を大きく向上させることができる。従って、本担体にアミノ酸等を結合した状態でペプチド伸長反応を実施した場合、担体に結合したアミノ酸等を有機層に溶解させ、不要成分、たとえばペプチド伸長反応に使用した余剰の原料アミノ酸や、その分解物、原料アミノ酸の保護基を脱保護した際に副生する化合物等を水層に溶解させることで、液液分離により、担体に結合したアミノ酸等を簡便に精製できるという利点がある。
　次工程が、液相ペプチド合成用担体（Ｔａｇ）を使用したペプチド液相合成である場合、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類がＦｍｏｃ化された化合物は、前述の液液分離により除去することができる。
　なお、本明細書で「アミノ酸アミド」とは、アミノ酸のＣ末端のカルボキシ基（－ＣＯＯＨ）がアミド基（－ＣＯＮＨ2）となった構造を意味する。また、「ペプチドアミド」とは、ペプチドのＣ末端のカルボキシ基がアミド基となった構造を意味する。
　液相ペプチド合成に適用する場合、次の工程ａ～ｃを含む、液相ペプチド製造法が好ましい。なお、工程ｂ、工程ｃの順序は不問であり、工程ｂ次いで工程ｃの順、すなわちＦｍｏｃ基を除去してから縮合体を含有する有機溶媒層を得てもよいし、工程ｃ次いで工程ｂの順、すなわち縮合体を含有する有機溶媒層を得た後にＦｍｏｃ基を除去してもよい。
ａ．有機溶媒を含む溶媒中で、
１．本発明で得られたＦｍｏｃ基でアミノ基が保護されたアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドのいずれかと、液相ペプチド合成用担体を縮合させる工程、
又は
２．本発明で得られたＦｍｏｃ基でアミノ基が保護されたアミノ酸又はペプチドのいずれかと液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミド
のいずれかとを縮合させる工程、
ｂ．反応液中の前記Ｆｍｏｃ基でアミノ基が保護された化合物のＦｍｏｃ基を除去する工程、
ｃ．反応液に水溶液を添加した後、分液して、Ｆｍｏｃ基が脱離した工程ａで得られた縮合体、すなわち
１．前記Ｆｍｏｃ基が脱離したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドのいずれかと、液相ペプチド合成用担体の縮合体
又は
２．前記Ｆｍｏｃ基が脱離したアミノ酸、ペプチドのいずれかと、液相ペプチド合成用担体と結合したアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド、又はペプチドアミドとの縮合体
のいずれかを含有する有機溶媒層を得る工程。
　ここで、工程ａの縮合反応後の反応液に、工程ａにおいて生じたアミノ酸活性エステルに対するクエンチ剤を添加する工程を含んでもよい。アミノ酸活性エステルのクエンチ剤は、分子内にアミノ基を有する化合物であり、特許第６７０３６６８号公報、特許第６７１３９８３号公報、国際公開第２０２１／１３２５４５号公報、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０２１, ２６, ３４９７－３５０５．などに記載の化合物を用いることができる。
　当該クエンチ剤としては、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、１級アミン又は２級アミンを有するアルキルアミン、１級アミン又は２級アミンを有する芳香族アミンを使用することができ、３級アミンを使用することもできる。さらに、余剰のクエンチ剤を液液分離にて水層に除去できることから水溶性であることが好ましく、水酸基、スルホ基、硫酸基、リン酸基といった親水性置換基を有するアミンが好ましい。また、化合物中のアミノ基の数は１つ（１価）でもよく、２価以上でもよい。具体的には、プロピルアミン、メチルアミン、ヘキシルアミン、アニリン、トルイジン、２，４，６－トリメチルアニリン、アニシジン、フェネチジン、ベンジルアミン、ヒドロキシルアミン、１－メチルピペラジン、４－アミノピペリジン、ジエチレントリアミン、トリアミノエチルアミン、１－エチルピペラジン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、エチレンジアミン、ピペラジン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、タウリン、硫酸水素２－アミノエチル（２－アミノエチル硫酸、ＡＥＨＳ）などを挙げることができる。また、ＮＭＩ（Ｎ－メチルイミダゾール）、ＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン）、トリメチルアミンを挙げることができる。
　すなわち、アミノ酸活性エステルのクエンチ剤としては、本発明で見いだされた前記アミン類の一部を用いることができる。しかし、Ｆｍｏｃ化アミノ酸活性エステルのクエンチ剤は、Ｆｍｏｃ化アミノ酸活性エステルと反応し除去することで、ペプチド合成におけるアミン酸のダブルヒット体、トリプルヒット体の副生を抑制する機能を有するもので、その目的や反応機構は本発明のＦｍｏｃ－ＯＳｕクエンチ用アミン類とは異なる。
　工程ａで用いられる液相ペプチド合成用担体は、アミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドを保護して、当該保護されたアミノ酸、ペプチド、アミノ酸アミド又はペプチドアミドを有機溶媒に可溶化する担体である。例えば、特許第５１１３１１８号公報、特許第４５００８５４号公報、特許第５９２９７５６号公報、特許第６０９２５１３号公報、特許第５７６８７１２号公報、特許第５８０３６７４号公報、特許第６１１６７８２号公報、特許第６２０１０７６号公報、特許第６２８３７７４号公報、特許第６２８３７７５号公報、特許第６３２２３５０号公報、特許第６３９３８５７号公報、特許第６５３１２３５号公報、国際公開第２０１９／００９３１７号、国際公開第２０２０／１７５４７２号、国際公開第２０２０／１７５４７３号などに記載の化合物を使用することができる。
　このような液相ペプチド合成用担体としては、下記式（Ｉ）で表される化合物が挙げられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
［式中、
環Ａはヘテロ原子を含んでいてもよく、多環性でもよいＣ４～２０の芳香環を示し；
Ｒ11は、水素原子であるか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが下記式（ａ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
ｐは、１～４の整数を示し；
環Ａは、ｐ個のＸ1Ｒ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよく；
Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示し；
Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は式（ｂ）で表される基を示し；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
（式中、＊は結合位置を示し；
ｑは、０～４の整数を示し；
ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示し；
ｑ個のＲ14は、それぞれ独立して、脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す；
Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよく；
環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。）
Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。］
　式（Ｉ）中の環Ａは、ヘテロ原子を含んでいてもよく、単環性でも、多環性でよいＣ４～２０の芳香環を示す。当該芳香環としては、Ｃ６～２０の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
　具体的なＣ６～２０の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環、１，１’－ビナフタレン環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
　Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の芳香族複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の芳香族複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
　Ｒ11は、水素原子を示すか、又は環Ａがベンゼン環でＲｂが前記式（ｂ）で表される基である場合には、Ｒ13と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか、又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよい。Ｒ11とＲ13が一緒になって形成してもよい環としては、フルオレン環又はキサンテン環が好ましい。
　ｐ個のＸ1は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ15－（Ｒ15は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示す。
　ここで、Ｒ15としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などの直鎖又は分岐鎖のＣ1～１０のアルキル基が挙げられる。
　アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
　ｐ個のＲ12は、それぞれ独立して脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示し；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
　但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す。
　ｐは、１～４の整数を示す。
　本明細書において、脂肪族炭化水素基を有する有機基とは、その分子構造中に脂肪族炭化水素基を有する一価の有機基である。当該脂肪族炭化水素基を有する有機基中の脂肪族炭化水素基の部位は、特に限定されず、末端に存在してもよく、それ以外の部位に存在してもよい。
　当該有機基中に存在する脂肪族炭化水素基とは、直鎖、分岐状若しくは環状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基であり、有機溶媒溶解性の点から、Ｃ５以上の脂肪族炭化水素基が好ましく、Ｃ５～５０の脂肪族炭化水素基がより好ましく、Ｃ８～３０の脂肪族炭化水素基がさらに好ましい。当該脂肪族炭化水素基の具体例としては、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が挙げられるが、特にアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基が好ましく、アルキル基がより好ましい。さらに、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルケニル基が好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、Ｃ３～８のシクロアルキル基がより好ましく、Ｃ５～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がさらに好ましく、Ｃ８～３０の直鎖又は分岐鎖のアルキル基がよりさらに好ましい。
　アルキル基の具体例としては、炭素数１～３０のアルキル基が挙げられ、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、デシル基、ラウリル基、トリデシル基、ミリスチル基、セチル基、ステアリル基、アラキル基、べへニル基、テトラコサニル基、ヘキサコサニル基、イソステアリル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基、各種ステロイド基から水酸基などを除外した基が挙げられる。
　分岐鎖を有するアルキル基としては、２、３―ジヒドロフィチル基、３，７，１１－トリメチルドデシル基が挙げられる。またＸ1が－ＮＨＣ（＝Ｏ）－の場合、Ｘ1Ｒ12として２，２，４，８，１０，１０－ヘキサメチル－５－ドデカン酸アミドが挙げられる。
　アルケニル基としては、ビニル基、１－プロぺニル基、アリル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、オレイル基などの一価の基、それらから誘導される二価の基が挙げられる。
　アルキニル基としては、エチニル基、プロパルギル基、１－プロピニル基などが挙げられる。
　上記の脂肪族炭化水素基には、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換していてもよい。脂肪族炭化水素基に酸素原子を介して置換し得る脂肪族炭化水素基としては、炭素数１～２０の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基、炭素数２～２０のアルケニルオキシ基、炭素数３～６のシクロアルキルオキシ基などの一価の基、それらから誘導される二価の基などが挙げられる。また、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換している脂肪族炭化水素基に、さらに酸素原子を介して脂肪族炭化水素基が置換した繰り返し構造を有していてもよい。
　具体的には、Ｒ12として１２－ドコシルオキシー１－ドデシル基、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）ベンジル基、２，２，２－トリス（オクタデシルオキシメチル）エチル基、３，４，５－トリス（オクタデシルオキシ）シクロへキシルメチル基などが挙げられる。
　上記の脂肪族炭化水素基には、式（a）で表される有機基が置換していてもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
（Ｒ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基、又はシリルオキシ基が結合したアルキル基を示す）
　シリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリル基が好ましい。ここで、置換基を有していてもよいアリール基としては、フェニル基、ナフチル基などが挙げられる。
　好ましいシリル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリル基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリル基である。シリル基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。
　また、シリルオキシ基が結合したアルキル基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び置換基を有していてもよいアリール基から選ばれる３個が置換したシリルオキシ基が１～３個結合した、炭素数１～１３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が好ましい。好ましいシリルオキシ基としては、炭素数１～６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基であり、より好ましくは炭素数１～４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が３個置換したシリルオキシ基である。シリルオキシ基に置換する３個のアルキル基又はアリール基は、同一でも異なっていてもよい。
　炭素数１～１３の直鎖又は分岐鎖のアルキル基は、分岐鎖であることが好ましく、４級炭素原子を有することがさらに好ましい。
　ｐは、１～４の整数を示す。ここで、ｐは、１～４が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
　環Ａは、ｐ個のＸＲ12に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
　ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
　Ｒａは、水素原子、又はハロゲン原子により置換されていてもよい芳香族環を示す。
　ここで、芳香族環としては、Ｃ６～１８の芳香族炭化水素環、及びＣ４～１０の芳香族複素環が挙げられる。
　具体的なＣ６～１８の芳香族炭化水素環としては、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環、トリフェニレン環、テトラセン環、インダン環、インデン環、フルオレン環、ビフェニル環などが挙げられる。このうち、ベンゼン環、ナフタレン環、フェナントレン環、フルオレン環がより好ましい。
　Ｃ４～１０の芳香族複素環としては、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～１０員環の複素環が好ましく、具体的には、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環、イミダゾール環、ピリジン環、キノリン環、イソキノリン環などが挙げられる。このうち、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選ばれる１～３個を含む５員環～８員環の複素環が好ましく、ピロール環、フラン環、チオフェン環、インドール環、ベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、カルバゾール環、ピラゾール環、インダゾール環がより好ましい。
　Ｒａの芳香族環には、１～３個のハロゲン原子が置換していてもよい。
　Ｒｂは、水素原子、ハロゲン原子により置換されていてもよい芳香環、又は前記式（ｂ）で表される基を示す。
　式（ｂ）中のｑは、０～４の整数を示す。
　ｑは、０～３が好ましく、１～３がより好ましく、１～２がさらに好ましい。
　ｑ個のＸ2は、それぞれ独立して単結合、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、又は－ＮＲ18－（Ｒ18は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）を示す。
　ここで、Ｒ18としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
　アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
　ｑ個のＲ14は、独立して脂肪族炭化水素基、酸素原子を介して脂肪族炭化水素基で置換されている脂肪族炭化水素基、又は式（ａ）のいずれかである有機基を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　但しＲ16は炭素数６～１６の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基を示し、Ｘ3は酸素原子若しくは－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ17－（Ｒ17は水素原子又は炭素数１～４のアルキル基を示す）を示し、Ａはシリル基若しくはシリルオキシ基が結合したアルキル基のいずれかを示す。
　Ｒ14で表される有機基は、前記のＲ12と同じものが挙げられ、前記のＲ12と同じものが好ましい。
　Ｒ13は、水素原子を示すか、Ｒ11と一緒になって単結合を示して、環Ａ及び環Ｂと共にフルオレン環を形成するか，又は酸素原子を介して環Ａ及び環Ｂと共にキサンテン環を形成してもよい。
　環Ｂは、ｑ個のＸ2Ｒ14に加えて、さらにハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、及びハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基からなる群から選択される置換基を有していてもよい。
　ハロゲン原子としては、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１-６アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、トリフルオロメチル基などが挙げられる。ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１－６アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ－ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ－ブチルオキシ基、トリクロロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基などが挙げられる。
　Ｙは、ヒドロキシ基、チオール基、ＮＨＲ20（Ｒ20は水素原子、アルキル基又はアラルキル基を示す。）又はハロゲン原子を示す。
　ここで、Ｒ20としては、水素原子、Ｃ１～１０のアルキル基又はＣ７～２０のアラルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられる。
　アラルキル基としては、Ｃ７～１６アラルキル基、例えば、ベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、ナフチルメチル基、１－ナフチルエチル基などが挙げられる。
　次に実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１　アミノ酸のＦｍｏｃ化反応：Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨ
実施例１－１　クエンチ剤：ＡＥＨＳ（硫酸水素２－アミノエチル）、塩基追加なし
　Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨ（０．０５００ｇ ，０．５６１ｍｍｏｌ）に水（２．４８ｍＬ）、ＮａＨＣＯ3（０．１０６ｇ，１．２６ｍｍｏｌ，２．２４ｅｑ.）を加え、氷冷下で攪拌し、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ（０．３７１ｇ，１．１０ｍｍｏｌ ，１．９６eq.）を溶解したＴＨＦ溶液（２．７３ｍＬ）を加え、氷冷下で１時間攪拌した。続けて、室温下で１時間攪拌した後、本液をＬＣ－ＭＳにて分析した（分析（１））。分析（１）サンプリングから１時間経過後、クエンチ剤としてＡＥＨＳ（０．１０７ｇ，０．７５５ｍｍｏｌ）を添加した。再び室温下で攪拌し、クエンチ剤添加から１時間と３時間経過した時点で本液をＬＣ－ＭＳ分析条件―１にて分析した（分析（２）（３））。
ＬＣ－ＭＳ分析条件－１
カラム：ＫＩＮＥＴＥＸ　Ｂｉｐｈｅｎｙｌ、１．７μｍ、２．１×１００ｍｍ（株式会社島津ジーエルシー、製品番号００Ｄ－４６２８－ＡＮ）
移動相Ａ：０．１%ギ酸水溶液
移動相Ｂ：アセトニトリル
流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：２５４ｎｍ
グラジエント条件：０%Ｂ（０ｍｉｎ）→２０%Ｂ（３ｍｉｎ）→９５%Ｂ（１５ｍｉｎ）→２０%Ｂ（２０ｍｉｎ）→２０%Ｂ（３０ｍｉｎ）
実施例１－２　クエンチ剤：ＡＥＨＳ、塩基追加あり
　Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨ（０．０５００ｇ,０．５６１ｍｍｏｌ）に水（２．４８ｍＬ）、ＮａＨＣＯ3（０．１０６ｇ,１．２６ｍｍｏｌ,２．２４eq.）を加え、氷冷下で攪拌し、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ（０．３７１ｇ,１．１０ｍｍｏｌ,１．９６eq.）を溶解したＴＨＦ溶液（２．７３ｍＬ）を加え、氷冷下で１時間攪拌した。続けて、室温下で１時間攪拌した後、本液をＬＣ－ＭＳにて分析した（分析（１））。分析（１）サンプリングから１時間経過後、クエンチ剤としてＡＥＨＳ（０．１０７ｇ,０．７５５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１５分攪拌後、さらに追加塩基としてＮａＨＣＯ3（０．０３８１ｇ,０．４５３ｍｍｏｌ）を添加した。再び室温下で攪拌し、クエンチ剤添加から１時間と３時間経過した時点で本液をＬＣ－ＭＳ分析条件―１にて分析した（分析（２）（３））。
比較例１　クエンチ剤なし、塩基追加なし
　Ｈ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨ（０．０５００ｇ,０．５６１ｍｍｏｌ）に水（２．４８ｍＬ）、ＮａＨＣＯ3（０．１０６ｇ，１．２６ｍｍｏｌ,２．２４eq.）を加え、氷冷下で攪拌し、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ（０．３７１ｇ,１．１０ｍｍｏｌ,１．９６eq.）を溶解したＴＨＦ溶液（２．７３ｍＬ）を加え、氷冷下で１時間攪拌した。続けて、室温下で１時間攪拌した後、本液をＬＣ－ＭＳにて分析した（分析（１））。分析（１）サンプリングから２時間と４時間経過した時点で本液をＬＣ－ＭＳ分析条件―１にて分析した（分析（２）（３））。
　ＬＣ－ＭＳ分析条件－１において、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕは１０．４分、目的物であるＦｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨは８．９分に溶出された。また、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕの分解物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨは８．６分、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕとクエンチ剤であるＡＥＨＳとのが結合したＦｍｏｃ－ＡＥＨＳは６．１分に溶出された。これらのピークは互いに分離可能であり、分析（１）、（２）、（３）それぞれの時点における溶液中の含量をＨＰＬＣ　ａｒｅａ％として解析した。
　なお、原料であるＨ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨはＵＶで検出されないため、マスクロマトグラムにて当該分子量を観測したところ、ほとんど観測されなかったことから残存していないと判断した。また、８．６分のピークはＦｍｏｃ－ＯＳｕの分解物である９－フルオレニルメタノールである。Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨは、渡辺化学社製（製品コードＫ００４１０）を標品として使用し、溶出時間を検証した。
　実施例１－１、１－２、比較例１の分析（１）、（２）、（３）の溶液中のＦｍｏｃ－ＯＳｕ含量、およびＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの含量を、表１に示した。また、実施例１－１分析（１）のＨＰＬＣチャートを図１に、（３）のＨＰＬＣチャートを図２に、比較例１分析（３）のＨＰＬＣチャートを図３に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　まず実施例１－１の結果を説明する。クエンチ剤としてＡＥＨＳを用いた場合、分析（１）時点で溶液中に４７．３％含まれていたＦｍｏｃ－ＯＳｕは、クエンチ剤を添加して１時間で４．５％まで減少し、さらに３時間で０．４８７％まで減少した。一方、図１、２を比較すると、分析（３）時点では（図２）Ｆｍｏｃ－ＡＥＨＳが増加し、余剰のＦｍｏｃ－ＯＳｕはＡＥＨＳでクエンチされＦｍｏｃ－ＡＥＨＳに変換されたことがわかった。Ｆｍｏｃ－ＯＳｕの好ましくない副生成物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの含量は０．００７％～０．００８％と極めてわずかであった。
　次にクエンチ剤添加後に塩基を追加した場合、分析（１）時点で溶液中に４７．０％含まれていたＦｍｏｃ－ＯＳｕは、クエンチ剤を添加して１時間で検出限界未満となった。余剰のＦｍｏｃ－ＯＳｕは、塩基を添加することで、実施例１－１と比較して速やかにＦｍｏｃ－ＡＥＨＳに変換された。Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの含量は０．０１０％～０．０１２％と極めてわずかであった
　一方、クエンチ剤を添加しない比較例１では、分析（１）で４６．１％含まれていたＦｍｏｃ－ＯＳｕは、分析（３）でも３６．０％残っていた（図３）。さらにＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの含量は、分析（２）で０．１８５％、分析（３）で０．７５０％と徐々に増加した。
　以上の結果から、クエンチ剤としてＡＥＨＳを添加することで、好ましくない副生成物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの副生を抑制しつつ、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨを副生する恐れのあるＦｍｏｃ－ＯＳｕを、速やかにＦｍｏｃ－ＡＥＨＳへ変換できることが示された。なお、ＡＥＨＳは水溶性であるため、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｌａ－ＯＨを液液分離精製する際に除去できる化合物である。さらに、Ｆｍｏｃ－ＡＥＨＳは中性またはアルカリ性条件下の分液操作で水層へ除去可能である。Ｆｍｏｃ－ＡＥＨＳはカルボキシル基を有さないため、次工程がペプチド合成反応である場合、混入したまま次工程を実施しても、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨのような好ましくない副反応を引き起こさない化合物である。
実施例２　アミノ酸のＦｍｏｃ化反応：Ｈ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｈ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＨ
実施例２－１　クエンチ剤：ＡＥＨＳ、塩基追加なし
　Ｈ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨを用いて、実施例１－１と同様にＦｍｏｃ化を実施した。実施例１－１と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
ＬＣ－ＭＳ分析条件－２
カラム：ｗａｔｅｒｓ　Ａｔｌａｎｔｉｓ　Ｔ３　３μｍ　２．１×１５０ｍｍ（日本ウォーターズ株式会社、製品番号１８６００３７１９）
移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液
移動相Ｂ：アセトニトリル
流速：０．４ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：３０℃
検出波長：２５４ｎｍ
グラジエント条件：０%Ｂ（０ｍｉｎ）→７５%Ｂ（２５ｍｉｎ）→９０%Ｂ（２５．５ｍｉｎ）→９０%Ｂ（３０ｍｉｎ）→０%Ｂ（３１ｍｉｎ）→０%Ｂ（５０ｍｉｎ）
実施例２－２　クエンチ剤：ＡＥＨＳ、塩基追加あり
　Ｈ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨを用いて、実施例１－２と同様にＦｍｏｃ化を実施した。実施例１－２と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
比較例２－１　クエンチ剤なし、塩基追加なし
　Ｈ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨを用いて、比較例１と同様にＦｍｏｃ化を実施した。比較例１と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
実施例２－３　クエンチ剤：ＡＥＨＳ、塩基追加なし
　Ｈ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＨを用いて、実施例１－１と同様にＦｍｏｃ化を実施した。実施例１－１と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
実施例２－４　クエンチ剤：ＡＥＨＳ、塩基追加あり
　Ｈ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＨを用いて、実施例１－２と同様にＦｍｏｃ化を実施した。実施例１－２と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
比較例２－２　クエンチ剤なし、塩基追加なし
　Ｈ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＨを用いて、比較例１と同様にＦｍｏｃ化を実施した。比較例１と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
　ＬＣ－ＭＳ分析条件－２において、原料であるＨ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨは４．７分、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕは２１．２分、目的物であるＦｍｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨは１５．８分、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＨは１４．５分に溶出された。また、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕの分解物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨは１３．４分、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕとクエンチ剤であるＡＥＨＳとが結合したＦｍｏｃ－ＡＥＨＳは１４．５分に溶出された。Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ及び問題となる不純物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨは、その他のピークと分離可能であり、分析（１）、（２）、（３）それぞれの時点における溶液中の含量をＨＰＬＣ　ａｒｅａ%として解析した。なお、Ｈ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＨはＵＶで検出できないため、マスクロマトグラムにて当該分子量を観測したところ、ほとんど観測されなかったことから残存していないと判断した。また、１７．８分のピークはＦｍｏｃ－ＯＳｕの分解物である９－フルオレニルメタノールである。
　実施例２－１～２－４、比較例２－１～２－２の分析（１）、（２）、（３）の溶液中のＦｍｏｃ－ＯＳｕ含量、およびＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの含量を、表２に示した。また、実施例２－１分析（１）のＨＰＬＣチャートを図４に、（３）のＨＰＬＣチャートを図５に、比較例２－１分析（３）のＨＰＬＣチャートを図６に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　原料としてＨ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｈ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＨを用いた場合も、実施例１、比較例１と同様の傾向を示した。すなわち、クエンチ剤としてＡＥＨＳを添加した場合、追加塩基の有無によらず、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕはクエンチ剤添加後速やかに消失し、Ｆｍｏｃ－ＡＥＨＳへ変換された（図４、５）。さらに好ましくない副生成物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの生成量はＨ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨの場合は０．００５～０．０１１％、Ｈ－Ｌ－Ｖａｌ－ＯＨの場合は０．０１８～０．０１９％と極めて僅かであった。なお、塩基を追加したほうが、より早くＦｍｏｃ－ＯＳｕがＦｍｏｃ－ＡＥＨＳへ変換された。
　一方、クエンチ剤を添加しない比較例２－１、２－２では、好ましくない副生成物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの生成量は時間経過と共に増加した（図６）。また分析（３）の時点においてもＦｍｏｃ－ＯＳｕが多量に残存し、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨがさらに副生する可能性が示唆された。
実施例３　アミノ酸のＦｍｏｃ化反応：Ｈ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　以下、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ、Ｈ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨは上記式中の構造を示すこととする。
実施例３－１　クエンチ剤：ＡＥＨＳ、塩基追加なし
　Ｈ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いて、実施例１－１と同様にＦｍｏｃ化を実施した。実施例１－１と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
実施例３－２　クエンチ剤：ＡＥＥ（２－（２－アミノエトキシエタノール）、塩基追加なし
　原料としてＨ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ、クエンチ剤としてＡＥＥを用いて、実施例１－１と同様にＦｍｏｃ化を実施した。実施例１－１と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
実施例３－３　クエンチ剤：ＡＥＨＳ、塩基追加あり
　Ｈ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いて、実施例１－２と同様にＦｍｏｃ化を実施した。実施例１－２と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
実施例３－４　クエンチ剤：ＡＥＥ、塩基追加あり
　原料としてＨ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨ、クエンチ剤としてＡＥＥを用いて、実施例１－２と同様にＦｍｏｃ化を実施した。実施例１－２と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
比較例３　クエンチ剤なし、塩基追加なし
　Ｈ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いて、比較例１と同様にＦｍｏｃ化を実施した。比較例１と同一のタイミングで反応液をサンプリングし、ＬＣ－ＭＳ分析条件―２にて分析した。
　ＬＣ－ＭＳ分析条件－２において、原料であるＨ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨは１４．７分、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕは２１．２分、目的物であるＦｍｏｃ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨは２１．４分に溶出された。また、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕの分解物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨは１３．４分、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕとクエンチ剤であるＡＥＨＳが結合したＦｍｏｃ－ＡＥＨＳは１４．５分、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕとクエンチ剤であるＡＥＥが結合したＦｍｏｃ－ＡＥＥは１７．２分に溶出された。Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨは、その他のピークと分離可能であり、分析（１）、（２）、（３）それぞれの時点における溶液中の含量をＨＰＬＣ　ａｒｅａ%として解析した。さらに、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕとクエンチ剤が結合した化合物（Ｆｍｏｃ－ＡＥＨＳまたはＦｍｏｃ－ＡＥＥ）についても、それぞれの時点における溶液中の含量をＨＰＬＣ　ａｒｅａ%として解析した。なお、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕは目的物と分離できなかったため、含量を算出しなかった。
　実施例３－１～３－４、比較例３の分析（１）、（２）、（３）の溶液中のＦｍｏｃ－ＯＳｕ含量、およびＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの含量を表３に示した。Ｆｍｏｃ－クエンチ体は、実施例３－１、３－３はＦｍｏｃ－ＡＥＨＳを、実施例３－２、３－４はＦｍｏｃ－ＡＥＥを示す。また、実施例３－２分析（１）のＨＰＬＣチャートを図７に、（３）のＨＰＬＣチャートを図８に、比較例３分析（３）のＨＰＬＣチャートを図９に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　原料としてＨ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを用いた場合も、実施例１、２、比較例１、２と同様の傾向を示した。すなわち、クエンチ剤を添加しなかった比較例３は、好ましくない副生成物であるＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの生成量は０．０４０～０．１５０％であった。これに対し、クエンチ剤としてＡＥＨＳ、ＡＥＥのいずれを添加した場合も、追加塩基の有無によらず、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの生成量は０．００４～０．０６％と極めて僅かな量に抑制された。これは、Ｆｍｏｃ－ＯＳｕがＦｍｏｃ－クエンチ体に変換されたためと考えられた。
　なお、ＡＥＥは水溶性であるため、目的物であるＦｍｏｃ－Ｌ－ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2（Ｂｏｃ）2－ＯＨを液液分離精製する際に除去できる化合物である。また、Ｆｍｏｃ－ＡＥＥは中性またはアルカリ性条件下の分液操作で水層へ除去可能である。さらにＦｍｏｃ－ＡＥＥはカルボキシル基を有さないため、次工程がペプチド合成反応である場合、混入したまま次工程を実施しても、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨのような好ましくない副反応を引き起こさない化合物である。
　以上のように、アミノ基を有する化合物のアミノ基をＦｍｏｃ－ＯＳｕを用いてＦｍｏｃ化する反応系に、ＡＥＨＳやＡＥＥのような、原料のアミノ基を有する化合物とは異なるアミン類を添加するアミンを添加すれば、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨの副生をほぼ完全に抑制できることが示された。そして、そのようなアミン類が水溶性である場合、目的物を液液分離する際に除去可能である。Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが副生した場合、次工程がペプチド伸長反応である場合、意図したＦｍｏｃ化アミノ酸に代わってＦｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨが結合したペプチドが副生するという問題が生じるが、本願の方法でＦｍｏｃ化アミノ酸を製造すれば、そのような副生成物が生じず、ペプチド精製が簡便になる。

Claims (11)

  1. 　アミノ基を有する化合物のアミノ基をＦｍｏｃ－ＯＳｕを用いてＦｍｏｃ化するＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法であって、反応系に原料のアミノ基を有する化合物とは異なる１級又は２級アミン類を添加することを特徴とするＦｍｏｃ保護アミノ基含有化合物の製造法。
  2. 　添加するアミン類が、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級若しくは２級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基、リン酸基及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である請求項１に記載の製造方法。
  3. 　添加するアミン類が、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基、リン酸基及びカルボキシル基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である請求項１に記載の製造方法。
  4. 　添加するアミン類が、水溶性である請求項１～３のいずれか１項に記載の製造方法。
  5. 　添加するアミン類が、プロピルアミン、エチレンジアミン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）及びタウリンから選ばれる少なくとも１種である請求項１～３のいずれか１項に記載の製造方法。
  6. 　アミノ基を有する化合物がアミノ酸であり、Ｆｍｏｃ保護アミノ基含有化合物がＦｍｏｃ保護アミノ酸であり、添加するアミン類がアミノ酸以外のアミン類である請求項１に記載の製造方法。
  7. 　添加するアミン類が、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級若しくは２級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である請求項６に記載の製造方法。
  8. 　添加するアミン類が、ヒドロキシルアミン、アミド硫酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－スルホン酸、アンモニア、アミドリン酸、ヒドロキシルアミン－Ｏ－ホスホン酸、又はアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基、アラルキル基及び複素環式基から選ばれる１種若しくは２種以上を有する１級アミン類であって、ヒドロキシ基、エーテル結合、アルコキシ基、スルホニル基、スルホン酸基、硫酸基、ホスホン酸基及びリン酸基から選ばれる１種又は２種以上の置換基を有していてもよいアミン類である請求項６に記載の製造方法。
  9. 　添加するアミン類が、水溶性である請求項６に記載の製造方法。
  10. 　添加するアミン類が、プロピルアミン、エチレンジアミン、２－（２－アミノエトキシ）エタノール（ＡＥＥ）、硫酸水素２－アミノエチル（ＡＥＨＳ）及びタウリンから選ばれる少なくとも１種である請求項６に記載の製造方法。
  11. 　請求項６～１０のいずれか１項に記載の方法で製造されたＦｍｏｃ保護アミノ酸を原料として用いる、ペプチドの製造法。
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