WO2023025244A1 - Sarm1酶活性抑制剂及其应用 - Google Patents

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WO2023025244A1
WO2023025244A1 PCT/CN2022/114815 CN2022114815W WO2023025244A1 WO 2023025244 A1 WO2023025244 A1 WO 2023025244A1 CN 2022114815 W CN2022114815 W CN 2022114815W WO 2023025244 A1 WO2023025244 A1 WO 2023025244A1
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synthesis
alkyl
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pyridin
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牛德强
朱振东
凡明
李旭珂
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科辉智药生物科技(深圳)有限公司
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    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic

Definitions

  • the present application relates to compounds useful for inhibiting SARM1 enzymatic activity, and/or the use of these compounds in the treatment and/or prevention of neurodegenerative or neurological diseases or conditions associated with SARM1 enzymatic activity.
  • Neurodegenerative diseases are a class of diseases that can seriously harm humans, which can cause devastating damage, such as progressive diseases of nerve cell death.
  • Central nervous system diseases such as Alzheimer's disease, Parkinson's disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), and Huntington's disease are known as the primary neurodegenerative diseases and peripheral neurological diseases such as diabetes. Most of these are related to aging, and in fact the onset of these diseases increases with age, although there are also cases of middle-aged and even younger people.
  • L-dopa the precursor of dopamine, has been used as a drug for alleviating neurological symptoms and restoring neurological functions.
  • L-dopa cannot inhibit the development of neurodegeneration, and gradually loses its effect with the development of the disease, that is, the degeneration and defect of dopamine-based nerve cells.
  • Alzheimer's disease is also caused by the degeneration and defect of various nerve cells such as acetylcholine-based nerve cells and monoamine-based nerve cells.
  • various nerve cells such as acetylcholine-based nerve cells and monoamine-based nerve cells.
  • cholinesterase inhibitors have been put on the market or are being developed develop.
  • L-dopa for the treatment of Parkinson's disease is still limited to symptomatic treatment to temporarily improve neurological symptoms.
  • Axon damage occurs in a variety of neurodegenerative diseases, accidental injuries and other nervous system diseases.
  • Axonal degeneration can cause structural necrosis and dysfunction of the peripheral nervous system, eventually leading to acquired or inherited central nervous system degeneration.
  • the inventors unexpectedly discovered a class of compounds with significant inhibitory effect on SARM1 enzyme activity, and found that the compounds can improve axonal degeneration and be used for treating or preventing neurodegenerative diseases and related conditions.
  • SARM1 consists of three structural domains, which are the nitrogen-terminal ARM (Armadillo/HEAT repeat) domain, two tandem SAM (Sterile alpha motif) domains and the carbon-terminal TIR (Toll/Interleukin Receptor) domain. There is also a mitochondrial positioning signal peptide at the end.
  • SARM1-TIR TIR domain of SARM1
  • ADPR adenosine diphosphate ribose
  • cADPR cyclic adenosine Cyclic adenosine 5'-diphosphate ribose
  • SARM1 is a multifunctional signal enzyme that can catalyze various substrates NAD + , NADP + and NA to generate signal molecules cADPR, ADPR and NAADP.
  • SARM1 is activated, leading to NAD + depletion, and then initiates a new cell death mechanism; knocking out SARM1 can inhibit axonal degeneration and disease progression, so it is considered as a potential drug target for related neurological diseases Points, including TBI, AD, CIPN, ASL, etc.
  • the inventors prepared the full-length SARM1 for NAD enzyme activity experiment, and used it to screen and obtain the compound molecules with enzyme activity inhibitory ability of the present invention.
  • the present invention provides the use of a SARM1 enzyme activity inhibitor for the treatment or prevention of neurodegenerative or neurological diseases or conditions.
  • the present invention provides the use of an inhibitor of SARM1 enzyme activity for the treatment or prevention of axonal degeneration-related diseases or conditions.
  • the present invention provides compounds of formula I that can be used as SARM1 enzyme activity inhibitors:
  • A stands for CH or N;
  • R 1 is independently selected from hydrogen, halogen, CF 3 , CN, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 heterocycloalkyl , amino, CF 3 C(O)-NH-, CF 3 C(O)-N(CH 3 )-, C 1 -C 6 alkylamino, C 3 -C 6 cycloalkylamino, C 6 -C 14 aryl, C 5 -C 14 heteroaryl, C 6 -C 14 arylamino, C 6 -C 14 heteroarylamino, -OH, C 6 -C 14 aryloxy, -CONH 2 , - SO 2 NH 2 , C 1 -C 6 alkyl-C(O)NR 5 -, C 3 -C 6 cycloalkyl-C(O)NR 5 - and C 3 -C 6 heterocycloalkyl-C(
  • X represents a ring structure, selected from C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkenyl, C 3 -C 6 heterocycloalkyl, C 6 -C 14 aryl and C 5 -C 14 hetero Aryl, or X is missing; preferably, X is selected from phenyl, pyridyl, methoxy-substituted pyridyl, thiazolyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, wherein the phenyl may be substituted by the following substituents: -SO 2 -NH 2 , -NH-COCH 3 , -NH 2 , -CO-NH 2 , -OCH 3 , halogen, C 1 -C 4 alkyl, -SO 2 -N(BoC)CH 3 and C 1 -C 4 alkyl-NH-SO 2 -;
  • R 2 is independently selected from hydrogen, halogen, -NH 2 , -N(R 5 )-CO-R, -CO-N(R 5 )-R, -N(R 5 )-SO 2 -R, -SO 2 -N(R 5 )-R, -COOR, -COR, -(C 1 -C 4 alkyl) -OR, -(C 1 -C 4 alkyl) -N(CH 3 ) 2 , NH-( C 1 -C 4 alkyl) R-, -N(R 5 )-R, -NHCO-(C 3 -C 6 cycloalkyl)-(C 3 -C 6 heterocycloalkyl), -OR, - O-(C 1 -C 4 alkyl)-R and R;
  • R is selected from C 1 -C 4 alkoxy, C 1 -C 12 alkyl, -CONH 2 , -SO 2 -NH-R, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 heterocycloalkyl , -(C 1 -C 12 alkyl)-(C 6 -C 14 )aryl, C 6 -C 14 aryl and C 5 -C 14 heteroaryl, wherein the C 1 -C 12 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 heterocycloalkyl, C 6 -C 14 aryl and C 5 -C 14 heteroaryl are optionally substituted by 1, 2 or 3 halogens, and the 1 to 4 -CH 2 - units in the C 1 -C 12 alkyl group are optionally replaced by O atoms, S atoms, -CO- or -NH-;
  • R 5 is selected from H, C 1 -C 4 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 heterocycloalkyl, C 1 -C 4 alkoxy, C 6 -C 14 aryl and C 5 -C 14 heteroaryl;
  • R 3 is independently selected from hydrogen, C 1 -C 4 alkyl and C 1 -C 4 alkoxycarbonyl;
  • C 3 -C 6 heterocycloalkyl and C 5 -C 14 heteroaryl contain 1 or 2 heteroatoms selected from N, O and S atoms;
  • the R 1 and R 2 can be connected to form a 14 to 16-membered ring through a carbon-carbon bond or an ether bond, and the ring contains 1-4 heteroatoms selected from N, O and S, preferably, the ring contains 3-4 N atoms and 1-2 O or S atoms;
  • n and n are positive integers selected from 1, 2 and 3.
  • the compound of formula I of the present invention has the following structure of formula II:
  • the compound of formula I of the present invention has the following structure of formula III:
  • Y 1 and Y 1 ′ are CH or N independently of each other.
  • the compound of formula I of the present invention has the following structure of formula IV:
  • Y 1 and Y 1 ' are independently CH or N;
  • Y 2 is selected from -O-, -NH-, -NR 5 -, -NR 5 -(C 1 -C 4 alkyl)- and -NR 5 (C 3 -C 6 cycloalkyl)-, or Y 2 does not exist;
  • the compound of formula I of the present invention has the following structure of formula V:
  • Y 3 is selected from N(R 5 )CO-, -CO-N(R 5 )-, -N(R 5 )-SO 2 -, -SO 2 -N(R 5 )-, -CO 2 -, - CO-, -NH-(C 1 -C 4 alkyl)-, -N(R 5 )-, -O-(C 1 -C 4 alkyl)- and -O-, or Y 3 is absent;
  • R 4 is selected from C 1 -C 12 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 heterocycloalkyl, C 6 -C 14 aryl and C 5 -C 14 heteroaryl, wherein The C 1 -C 12 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 3 -C 6 heterocycloalkyl, C 6 -C 14 aryl and C 5 -C 14 heteroaryl are optionally replaced by 1, 2 or 3 halogen substitutions; the C 3 -C 6 heterocycloalkyl and C 5 -C 14 heteroaryl contain 1 or 2 heteroatoms selected from N, O and S atoms; and the C 1 1 to 4 -CH 2 - units in the -C 12 alkyl group are optionally replaced by O atoms, S atoms, -CO- or -NH-.
  • compounds of the invention have the following structure of Formula VI:
  • R 1 , R 2 , Y 1 , Y 1 ′, Y 2 , Y 3 and R 4 have the aforementioned definitions;
  • L is C 2 -C 12 alkylene, wherein 1, 2, 3 or 4 -CH 2 - units in said C 2 -C 12 alkylene are optionally replaced by 1, 2, 3 or 4 O atom, N atom, -CO-, -CONH- or -NHCO-;
  • Q is an E3 ligase ligand, preferably a VHL ligand
  • compounds of the invention have the following structure of Formula VII:
  • R 1 , R 2 , R 1 ', Y 1 , Y 1 ' and Y 2 have the aforementioned definitions;
  • Y 3 is selected from -N(R 5 )CO-, -CO-N(R 5 )-, -N(R 5 )-SO 2 -, -SO 2 -N(R 5 )-, -CO 2 -, -CO-, -NH-(C 1 -C 4 alkyl)-, -N(R 5 )-, -O-(C 1 -C 4 alkyl)-, and -O-, or Y 3 is absent ;
  • L is C 2 -C 12 alkylene, wherein 1, 2, 3 or 4 -CH 2 - units in said C 2 -C 12 alkylene are optionally replaced by 1, 2, 3 or 4 O atom, N atom, -CO-, -CONH- or -NHCO-;
  • Q is an E3 ligase ligand, preferably a VHL ligand
  • Q is a structural unit selected from the following:
  • the compound of the present invention is selected from the following compounds, or pharmaceutically acceptable salts or stereoisomers thereof:
  • a compound of formula I-VII when referring to a compound of formula I-VII, it also includes a pharmaceutically acceptable salt of a compound of formula I-VII or a stereoisomer thereof.
  • the present invention also relates to a method for treating or preventing neurodegenerative diseases or neurodegenerative diseases or conditions related thereto, comprising administering the compound of the present invention as an inhibitor of SARM1 enzyme activity to a subject in need thereof.
  • the present invention relates to a method for treating or preventing diseases or conditions related to axonal degeneration, comprising administering the compound of the present invention as an inhibitor of SARM1 enzyme activity to a subject in need thereof.
  • the present invention relates to a method for inhibiting SARM1 enzymatic activity, comprising administering the compound of the present invention to a subject in need; more particularly, the present invention relates to a method for inhibiting axon degeneration, comprising administering to a subject in need A subject is administered a compound of the invention.
  • a compound or composition of the present invention may be administered to a subject or patient in need thereof in an effective amount.
  • this paper also relates to the application of the compound of the present invention or its pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer in the preparation for treating or preventing neurodegenerative or neurological diseases or conditions.
  • This paper also relates to the application of the compound of the present invention or its pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer in the preparation of SARM1 enzyme activity inhibitor.
  • This article also relates to the application of the compound of the present invention or its pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer in the preparation for treating or preventing axonal degeneration related diseases or conditions.
  • the neurodegenerative disease or neurological disease or disorder or axon degeneration-related disease or disorder is selected from Alzheimer's disease, Parkinson's disease, multiple sclerosis (multiple sclerosis) ), amyotrophic lateral sclerosis, peripheral neuropathy.
  • the pharmaceutically acceptable salts of the present invention may be formed using, for example, the following inorganic or organic acids:
  • “Pharmaceutically acceptable salt” means a salt which, within the scope of sound medical judgment, is suitable for use in contact with humans and mammals tissue, without undue toxicity, irritation, allergic reactions, etc., can be called a reasonable benefit / risk ratio.
  • the salts can be prepared in situ during the final isolation and purification of the compounds of the invention, or alone by reacting the free base or acid with a suitable reagent. For example, the free base can be reacted with a suitable acid.
  • Examples of pharmaceutically acceptable acid addition salts are amino (amino) acids with inorganic acids (e.g., hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, sulfuric, and perchloric) or organic acids (e.g., acetic, oxalic, maleic, tartaric acid, citric acid, succinic acid or malonic acid), or by using other methods known in the art such as ion exchange.
  • inorganic acids e.g., hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, sulfuric, and perchloric
  • organic acids e.g., acetic, oxalic, maleic, tartaric acid, citric acid, succinic acid or malonic acid
  • salts include sodium alginate, ascorbate, besylate, adipate, camphorsulfonate, aspartate, benzoate, bisulfate, borate, butyrate , camphorate, citrate, lauryl sulfate, ethanesulfonate, formate, fumarate, glucoheptonate, glycerophosphate, gluconate, heptanoate, caproic acid Salt, hydroiodide, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, Nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pamoate, pectate, persulfate, 3-phenylpropionate, phosphate, bitter salt, pivalate, Propionate, stearate, succinate, sulfate
  • the pharmaceutically acceptable salts of the present invention can be prepared by conventional methods, for example, by dissolving the compound of the present invention in a water-miscible organic solvent (such as methanol, ethanol, acetone and acetonitrile), adding an excess of organic acid or inorganic Aqueous acid solution, so that the salt is precipitated from the resulting mixture, the solvent and remaining free acid are removed therefrom, and the precipitated salt is isolated.
  • a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone and acetonitrile
  • Solvate as used herein means a physical association of a compound of the present invention with one or more solvent molecules, whether organic or inorganic. This physical association includes hydrogen bonding. In some cases, for example, when one or more solvent molecules are incorporated into the crystal lattice of a crystalline solid, solvates will be able to be isolated. Solvent molecules in solvates may exist in regular and/or disordered arrangements. Solvates may contain stoichiometric or non-stoichiometric amounts of solvent molecules. "Solvate” encompasses both solution-phase and isolatable solvates. Exemplary solvates include, but are not limited to, hydrates, ethanolates, methanolates, and isopropanolates. Solvation methods are well known in the art.
  • Steps of “Stereoisomerism” described in the present invention is divided into conformational isomerism and configurational isomerism, and configurational isomerism can also be divided into cis-trans isomerism and optical isomerism (i.e. optical isomerism), conformational isomerism refers to having Due to the rotation or twisting of carbon and carbon single bonds in organic molecules of a certain configuration, a stereoisomerism phenomenon in which each atom or atomic group of the molecule has a different arrangement in space, the common structures are alkanes and cycloalkanes. Such as the chair conformation and boat conformation that appear in the structure of cyclohexane.
  • Stepoisomer means when a compound of the present invention contains one or more asymmetric centers and is thus available as racemates and racemic mixtures, single enantiomers, diastereomeric mixtures and single Diastereomers.
  • the compound of the present invention has an asymmetric center, and each asymmetric center can produce two optical isomers, and the scope of the present invention includes all possible optical isomers and diastereoisomer mixtures and pure or partially pure compounds .
  • the compounds described herein may exist in tautomeric forms which have different points of attachment of hydrogens by displacement of one or more double bonds.
  • a ketone and its enol form are keto-enol tautomers.
  • Each tautomer and mixtures thereof are included in the compounds of the present invention.
  • Enantiomers, diastereoisomers, racemates, mesoisomers, cis-trans isomers, tautomers, geometric isomers, epimers and their Mixtures and the like are included in the scope of the present invention.
  • the “isotopic derivatives” of the present invention refer to molecules that are labeled with isotopes of the compounds in this patent.
  • Isotopes commonly used for isotopic labeling are: hydrogen isotopes, 2H and 3H; carbon isotopes: 11C, 13C and 14C; chlorine isotopes: 35Cl and 37Cl; fluorine isotopes: 18F; iodine isotopes: 123I and 125I; nitrogen isotopes: 13N and 15N ; Oxygen isotopes: 15O, 17O and 18O and sulfur isotope 35S.
  • These isotope-labeled compounds can be used to study the distribution of pharmaceutical molecules in tissues.
  • Isotopically labeled compounds are generally synthesized starting from labeled starting materials and carried out in the same way as non-isotopically labeled compounds using known synthetic techniques.
  • the compound of the present invention can be used in combination with other SARM1 enzyme activity inhibitors for the treatment or prevention of neurodegenerative diseases or related neurological diseases or disorders, or can be used in combination with other SARM1 enzyme activity inhibitors for the treatment or prevention of neurodegenerative diseases or related A combination of active drugs for neurodegenerative diseases or disorders, for the treatment or prevention of neurodegenerative diseases or related diseases or disorders.
  • the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be administered orally or parenterally as an active ingredient, and its effective amount ranges from 0.1 to 2000 mg/kg body weight/day in mammals including humans (about 70 kg in body weight), preferably 0.1 to 100 mg/kg body weight/day and administered in single or divided doses daily, or with or without a scheduled time.
  • the dose of the active ingredient may be adjusted according to a number of relevant factors such as the condition of the subject to be treated, the type and severity of the disease, the rate of administration and the opinion of the physician. In some cases, amounts less than the above dosages may be appropriate.
  • compositions of the present invention can be formulated into dosage forms for oral administration or parenteral administration (including intramuscular, intravenous and subcutaneous routes, intratumoral injection) according to any of conventional methods, such as tablets, granules, powders , capsules, syrups, emulsions, microemulsions, solutions or suspensions.
  • compositions of the present invention for oral administration can be prepared by mixing the active ingredient with carriers such as cellulose, calcium silicate, magnesium stearate, calcium stearate, corn starch, lactose, sucrose, dextromethorphan, Sugar, calcium phosphate, stearic acid, surfactant, suspending agent, gelatin, talc, emulsifier and diluent.
  • carriers employed in the injectable compositions of the present invention are water, glycerides, saline solutions, alcohols, glycols, glucose solutions, ethers (eg, polyethylene glycol 400), oils, fatty acids, fatty acid esters, topical Active agent, suspending agent and emulsifying agent.
  • the present invention describes cis- and trans- (or E- and Z-) geometric isomers of the compounds of the invention and which may be isolated as a mixture of isomers or as separated isomeric forms.
  • the compounds of the invention may be isolated in optically active or racemic forms. All methods used to prepare the compounds of the invention and intermediates prepared therein are considered part of the invention. When preparing enantiomeric or diastereomeric products, they may be separated by customary methods, for example by chromatography or fractional crystallization. It is to be understood that all tautomeric forms which may exist are included within the present invention.
  • the compounds of the present invention are commercially available as known compounds from the prior art.
  • substituent when a substituent is noted as “optionally substituted”, the substituent is selected from, for example, the following substituents, such as alkyl, cycloalkyl, aryl, heterocyclyl, halogen, hydroxy, alkane Oxy, nitro, cyano, oxo, alkanoyl, aryloxy, alkanoyloxy, amino, alkylamino, arylamino, alkylthio, etc.
  • substituents such as alkyl, cycloalkyl, aryl, heterocyclyl, halogen, hydroxy, alkane Oxy, nitro, cyano, oxo, alkanoyl, aryloxy, alkanoyloxy, amino, alkylamino, arylamino, alkylthio, etc.
  • alkyl or "alkylene” as used herein is intended to include both branched and straight chain saturated aliphatic hydrocarbon groups having the indicated number of carbon atoms.
  • the alkyl group in the present invention is preferably C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 8 alkyl, more preferably C 1 -C 6 alkyl, especially preferably C 1 -C 4 alkyl , especially C 1 -C 3 alkyl.
  • C 1 -C 6 alkyl means an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
  • alkyl groups include, but are not limited to, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (such as n-propyl and isopropyl), butyl (such as n-butyl, isobutyl, t-butyl), and Pentyl (eg n-pentyl, isopentyl, neopentyl).
  • Me methyl
  • Et ethyl
  • propyl such as n-propyl and isopropyl
  • butyl such as n-butyl, isobutyl, t-butyl
  • Pentyl eg n-pentyl, isopentyl, neopentyl
  • 1 to 4 -CH 2 - units therein are optionally replaced by O atoms, S atoms or -NH-.
  • alkoxy refers to -O-alkyl.
  • C 1 -C 6 alkoxy (or alkyloxy) is intended to include C 1 , C 2 , C 3 , C 4 , C 5 , C 6 alkoxy.
  • Preferred alkoxy groups are C 1 -C 10 alkoxy, C 1 -C 8 alkoxy, more preferably C 1 -C 6 alkoxy, particularly preferably C 1 -C 4 alkoxy, especially C 1 -C 3 alkoxy.
  • alkoxy include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy (eg, n-propoxy and isopropoxy), and tert-butoxy.
  • alkylthio or “thioalkoxy” denotes an alkyl group as defined above having the indicated number of carbon atoms attached through a sulfur bridge; eg methyl-S- and ethyl-S-.
  • preferred alkylthio groups are C 1 -C 10 alkylthio, C 1 -C 8 alkylthio, more preferably C 1 -C 6 alkylthio, particularly preferably C 1 -C 4 alkyl Thio, especially C 1 -C 3 alkylthio.
  • aryl alone or as part of a larger moiety such as “aralkyl”, “aralkoxy” or “aryloxyalkyl”, refers to a single ring having a total of 6 to 14 ring members , a bicyclic or tricyclic ring system, wherein at least one ring in the system is aromatic and wherein each ring in the system contains 3 to 7 ring members.
  • aryl refers to an aromatic ring system including, but not limited to, phenyl, naphthyl, biphenyl, indanyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl, and Tetrahydronaphthyl.
  • the aryl group of the present invention is preferably a C 6 -C 10 aryl group.
  • aralkyl or “arylalkyl” refers to an alkyl residue attached to an aryl ring. Non-limiting examples include benzyl, phenethyl.
  • cycloalkyl refers to a cyclic alkyl group, which may be monocyclic or bicyclic.
  • the cycloalkyl group in the present invention is preferably a C 3 -C 8 cycloalkyl group, including but not limited to cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and norbornyl.
  • Halo or halogen includes fluoro, chloro, bromo and iodo.
  • Haloalkyl is intended to include branched and straight chain saturated aliphatic hydrocarbon groups having the indicated number of carbon atoms substituted with one or more halogens. Examples of haloalkyl include, but are not limited to, fluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, trichloromethyl, pentafluoroethyl, pentachloroethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, heptafluoro Propyl and Heptachloropropyl.
  • haloalkyl group also include fluoroalkyl groups intended to include branched and straight-chain saturated aliphatic hydrocarbon groups having the specified number of carbon atoms substituted with 1 or more fluorine atoms, particularly preferably trifluoromethyl.
  • Haloalkoxy denotes a haloalkyl group as defined above having the indicated number of carbon atoms attached via an oxygen bridge.
  • C 1 -C 6 haloalkoxy is intended to include C 1 , C 2 , C 3 , C 4 , C 5 , C 6 haloalkoxy.
  • Examples of haloalkoxy include, but are not limited to, trifluoromethoxy, 2,2,2-trifluoroethoxy, and pentafluoroethoxy.
  • haloalkylthio or “thiohaloalkoxy” denotes a haloalkyl group as defined above having the indicated number of carbon atoms attached through a sulfur bridge; for example trifluoromethyl-S- and pentafluoroethyl -S-.
  • the one or more halogens may each be independently selected from fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • heteroaryl means a stable 3-membered, 4-membered, 5-membered, 6-membered, or 7-membered aromatic monocyclic ring or a 7-, 8-, 9-, 10-membered aromatic bicyclic or aromatic polycyclic heterocyclic ring , which is fully unsaturated, partially unsaturated, and which contains carbon atoms and 1, 2, 3 or 4 heteroatoms independently selected from N, O and S.
  • Nitrogen and sulfur heteroatoms can be optionally oxidized.
  • the nitrogen atom is substituted or unsubstituted (ie N or NR, where R is H or another substituent if defined).
  • a heterocycle can be attached to its pendant group at any heteroatom or carbon atom that results in a stable structure.
  • heterocyclyl groups described herein may be substituted on carbon or nitrogen atoms if the resulting compound is stable.
  • the nitrogen in the heterocycle can optionally be quaternized.
  • the total number of S and O atoms in the heterocycle exceeds 1, then these heteroatoms are not adjacent to each other.
  • the total number of S and O atoms in the heterocycle is not greater than one.
  • heterocycle it is intended to include heteroaryl.
  • heteroaryl groups include, but are not limited to, acridinyl, azetidinyl, aziocinyl, benzimidazolyl, benzofuryl, benzothiofuranyl, benzothienyl, benzooxa Azolyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, benzotriazolyl, benzotetrazolyl, benzisoxazolyl, benzisothiazolyl, benzimidazolyl, carbazolyl, 4aH-carbazolyl, carbolinyl, chromanyl, chromenyl, cinnolinyl, decahydroquinolyl, 2H,6H-1,5,2-dithiazinyl, dihydrofuro[2, 3-b] Tetrahydrofuryl, furyl, furanyl, imidazolidinyl, imidazolinyl, imidazolyl, 1H-indazolyl, imidazopyr
  • heteroaryl may also include biaryl structures formed by the above-defined “aryl” and a monocyclic “heteroaryl”, such as but not limited to "-phenylbipyridyl-", “- "Phenyl bipyrimidyl”, “-pyridyl biphenyl”, “-pyridyl bipyrimidyl-”, “-pyrimidyl biphenyl-”; wherein the present invention also includes condensed rings containing, for example, the above-mentioned heterocycles and Spiro compounds.
  • substituted means that at least one hydrogen atom is replaced by a non-hydrogen group, provided that normal valences are maintained and that the substitution results in a stable compound.
  • any variable occurs more than one time in any composition or formula of a compound, its definition on each occurrence is independent of its definition at every other occurrence.
  • a group is shown to be substituted with 0-3 R, then said group may be optionally substituted with up to three R groups, and R at each occurrence is independently selected from the definition of R.
  • combinations of substituents and/or variables are permissible only if such combinations result in stable compounds.
  • an effective amount means an amount of a drug or agent (ie, a compound of the invention) that will elicit a biological or medical response in a tissue, system, animal or human being sought, eg, by a researcher or clinician.
  • a therapeutically effective amount means an amount which results in improved treatment, cure, prevention or alleviation of a disease, disorder or side effect, or a reduction in the or the rate of disease progression.
  • An effective amount may be given in one or more administrations, applications or doses and is not intended to be limited by a particular formulation or route of administration. The term also includes within its scope amounts effective to enhance normal physiological function.
  • treating includes any effect that results in amelioration of a condition, disease, disorder, etc., such as alleviation, reduction, regulation, amelioration or elimination, or amelioration of the symptoms thereof.
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, substances, compositions and/or dosage forms: within the scope of sound medical judgment, they are suitable for use in contact with human and animal tissues without excessive toxicity, irritation sex, allergic reactions, and/or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • the phrase "pharmaceutically acceptable carrier” means a pharmaceutically acceptable substance, composition or vehicle, such as a liquid or solid filler, diluent, excipient, manufacturing aid (e.g. lubricant, talc, magnesium stearate, , calcium stearate, or zinc stearate, or stearic acid) or solvent-encapsulated substances involved in the carrying or transport of a subject compound from one organ or body part to another.
  • manufacturing aid e.g. lubricant, talc, magnesium stearate, , calcium stearate, or zinc stearate, or stearic acid
  • solvent-encapsulated substances involved in the carrying or transport of a subject compound from one organ or body part to another.
  • Each carrier must be “acceptable” in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not injurious to the patient.
  • composition means a composition comprising a compound of the present invention together with at least one other pharmaceutically acceptable carrier.
  • pharmaceutically acceptable carrier means a medium generally accepted in the art for the delivery of biologically active agents to animals, particularly mammals, including (ie) adjuvants, excipients or vehicles, such as diluents, preservatives , fillers, flow regulators, disintegrants, wetting agents, emulsifiers, suspending agents, sweeteners, flavoring agents, fragrances, antibacterial agents, antifungal agents, lubricants and dispersants, depending on Mode of administration and nature of dosage form.
  • a certain compound or pharmaceutical composition after administration, can improve a certain disease, symptom or situation, especially improve its severity, delay the onset, slow down the progression of the disease, or reduce the duration of the disease. Circumstances that may be attributable to or related to the administration, whether fixed or episodic, continuous or intermittent.
  • Suitable routes of administration include, but are not limited to, oral, intravenous, rectal, aerosol, parenteral, ocular, pulmonary, transdermal, vaginal, ear canal , nasal administration and topical administration.
  • parenteral administration includes intramuscular injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramedullary injection, intraventricular injection, intraperitoneal injection, intralymphatic injection, and intranasal injection.
  • the compounds described herein are administered locally rather than systemically.
  • the depot formulation is administered by implantation (eg, subcutaneously or intramuscularly) or by intramuscular injection.
  • the drug is administered via a targeted drug delivery system.
  • liposomes coated with organ-specific antibodies In such embodiments, the liposomes are selectively directed to and taken up by specific organs.
  • the pharmaceutical carrier can be formulated according to many factors within the range recognized by those skilled in the art. These factors include, but are not limited to: the type and nature of the active agent being formulated; the subject to whom the composition containing the active agent is to be administered; the intended route of administration of the composition; and the therapeutic indication being targeted.
  • Pharmaceutical carriers include aqueous and non-aqueous liquid media and various solid and semisolid dosage forms.
  • Such carriers may include many different ingredients and additives other than the active agent, which are included in the formulation for various reasons known to those skilled in the art, such as to stabilize the active agent, binders, and the like.
  • suitable pharmaceutical carriers and the factors involved in carrier selection can be found in several readily available sources, for example Allen LVJr. et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2 Volumes), 22 nd Edition (2012) , Pharmaceutical Press.
  • the compounds are usually formulated with a suitable pharmaceutical diluent, excipient or carrier (herein collectively referred to as drug carriers) in the form of mixtures for administration.
  • a suitable pharmaceutical diluent, excipient or carrier herein collectively referred to as drug carriers
  • compositions may be administered alone, it is preferred to administer the compounds in the form of pharmaceutical formulations (compositions).
  • Kits/product packaging are also described herein for use in the treatment of the above indications. These kits may consist of transporters, packs, or container boxes, which may be divided into compartments to accommodate one or more types of containers, such as vials, test tubes, and the like, each container containing the A single component in the method described above. Suitable containers include bottles, vials, syringes, test tubes and the like. Containers are made of acceptable materials such as glass or plastic.
  • a container may contain one or more compounds described herein, either as a pharmaceutical composition or in admixture with other ingredients described herein.
  • the container can have a sterile outlet (eg, the container can be an IV bag or bottle, the stopper of which can be pierced by a hypodermic needle).
  • a kit may contain a compound, and instructions for use, labels or instructions for use described herein.
  • a typical kit may include one or more containers, each containing one or more materials (such as reagents, concentrated stock solutions, and/or or equipment). These materials include, but are not limited to, buffers, diluents, filters, needles, syringes, transporters, bags, containers, bottles and/or test tubes, accompanied by a list of contents and/or instructions for use, and inner packaging also accompanied by instructions. Instructions for the entire set are to be included.
  • the unit of weight volume percentage in the present invention is well known to those skilled in the art, for example, it refers to the weight of solute in 100 ml of solution. Unless otherwise defined, all professional and scientific terms used herein have the same meanings as commonly understood by those skilled in the art. In addition, any methods and materials similar or equivalent to those described can be applied to the method of the present invention. The preferred implementation methods and materials described herein are for demonstration purposes only.
  • neurodegenerative disease has the same meaning as “neurodegenerative disease”
  • axon degeneration has the same meaning as “axon degeneration”.
  • the preparative HPLC purification process was carried out on Shimadzu LC-6AD. All purifications were performed using Shim-pack PREP-DDS(H)KIT columns. The mobile phases were water (containing 0.1% HCO2H) and acetonitrile; all reagents used were HPLC grade. The flow rate is 10ml/min.
  • LC-MS was carried out on Agilent 1260infinityII; mobile phase: A: water (0.1% trifluoroacetic acid), B: ACN; 3.5 minutes to run the column; column: YMC-Triart C18 50*3mm, 3um; flow rate: 1.8ml/min ; Oven temperature: 40°C; Gradient: 5-100 (ACN%).
  • Preparative TLC was carried out on WhatmanLK6F Silica Gel 60A size 20x20cm plate with a thickness of 500 ⁇ m.
  • the first step Compound BB1-B bis-tert-butylimidazo[1,2-b]pyridazin-6-ylcarbamate
  • reaction mixture was extracted with water (10ml) and dichloromethane (10ml x 2), the organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was separated and purified by preparative TLC (elution with dichloromethane containing 4.76% methanol ) gave compound BB1-B bis-tert-butylimidazo[1,2-b]pyridazin-6-ylcarbamate (85 mg) as a white solid.
  • reaction mixture was extracted with water (10ml) and dichloromethane (10ml x 2), the combined organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was separated and purified by preparative TLC (using dichloromethane containing 2.38% methanol elution) afforded compound BB1 (3-bromoimidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl)carbamate tert-butyl ester (55 mg) as a white solid.
  • Step 3 Compound BB5-F tert-butylimidazo[1,2-a]pyridin-6-ylcarbamate
  • Step 5 Compound BB6(3-bromoimidazo[1,2-a]pyridin-6-yl)(methyl)carbamate tert-butyl ester
  • the first step compound BB7-C di-tert-butyl (4,11-dioxo-6,9-dioxin-3,12-diazatetradecane-1,14-diyl) dicarbamic acid ester
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure to obtain crude compound BB72,2'-(ethane-1,2-diylbis(oxyl))bis(N-(2-aminoethyl)acetamide (80mg) as black oil, After further purification, it was directly used in the next step.
  • Embodiment 1 the synthesis of compound 1
  • Embodiment 2 the synthesis of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 3-C refers to the synthesis method of the third step of intermediate BB5
  • the second step: the synthesis of compound 3-D refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the third step: the synthesis of compound 3 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step the synthesis of compound 4-B using compound 4-A and NIS as raw materials, refer to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the second step: the synthesis of compound 4 refers to the synthetic method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 5 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 6 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 7 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 8 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 9 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 10 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 11 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 12 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 13 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 14 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 15 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 16 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 17 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 18 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 19 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 20 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 21 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 22 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 23 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 24 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 25 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 26 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 27 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 28-C refers to the synthesis method of the third step of intermediate BB5
  • the second step: the synthesis of compound 28 refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the first step: the synthesis of compound 29-C refers to the synthesis method of the third step of intermediate BB5
  • the second step: the synthesis of compound 29-D refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the third step: the synthesis of compound 29 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 30-C refers to the synthesis method of the third step of intermediate BB5
  • the second step: the synthesis of compound 30-D refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the third step: the synthesis of compound 30 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 31 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 32 refers to the synthesis method of the third step of intermediate BB5
  • the first step: the synthesis of compound 32 refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the first step: the synthesis of compound 34 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 35 refers to the synthesis method of the third step of intermediate BB5
  • the first step: the synthesis of compound 36 refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the first step: the synthesis of compound 37 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 38 refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the first step: the synthesis of compound 39 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 40 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 41 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 42 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 43 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step the synthesis of compound 44, using BB5-F and NIS as raw materials, refer to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 45 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the first step: the synthesis of compound 46 refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • Embodiment 3 the synthesis of compound 47
  • the first step: the synthesis of compound 48 refers to the synthesis method of the first step of compound 47
  • the first step: the synthesis of compound 49 refers to the synthesis method of the first step of compound 47
  • the first step: the synthesis of compound 50 refers to the synthesis method of the first step of compound 47
  • the first step the synthesis of compound 51 using compound 41 and compound 51-A as raw materials, refer to the synthesis method of compound 47 in the first step
  • the first step the synthesis of compound 52 refers to the synthesis method of the first step of compound 47
  • the first step: the synthesis of compound 53-C refers to the synthesis method of the third step of intermediate BB5
  • the second step: the synthesis of compound 53-D refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the third step: the synthesis of compound 53-F refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the fourth step the synthesis of compound 53 using compound 53-F and compound 53-G as raw materials, refer to the synthesis method of the first step of compound 47
  • Step 1 Synthesis of Compound 54 Using compound 53-F and compound 54-A as raw materials, refer to the synthesis method of compound 47 in the first step
  • the second step: the synthesis of compound 55-C refers to the synthesis method of the second step of intermediate BB5
  • the third step: the synthesis of compound 55-E refers to the synthesis method of the third step of intermediate BB5
  • the fourth step: the synthesis of compound 55-F refers to the synthesis method of the fourth step of intermediate BB5
  • the fifth step: the synthesis of compound 55-H refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • Step 6 Synthesis of compound 55 Using compound 55-H and compound 55-I as raw materials, refer to the synthesis method of the first step of compound 47
  • Step 1 Synthesis of Compound 56 Using Compound 45 and Compound 56-A as raw materials, refer to the synthesis method of Compound 47 in the first step
  • Step 1 Synthesis of Compound 57 Using Compound 45 and Compound 57-A as raw materials, refer to the synthesis method of Compound 47 in the first step
  • Step 1 Synthesis of Compound 58 Using Compound 46 and Compound 58-A as raw materials, refer to the synthesis method of Compound 47 in the first step
  • Embodiment 4 compound 59, the synthesis of compound 60
  • the first step: the synthesis of compound 59-C refers to the synthesis method of the first step of compound 2
  • the third step Compound 59-E tert-butyl ((3-(6-bromoimidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)phenyl)sulfonyl)(methyl)carbamate
  • reaction solution was extracted with water and ethyl acetate, the combined organic layer was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated under reduced pressure, and the obtained residue was subjected to silica gel column chromatography (dichloromethane containing 1.9%-4.7% methanol Elution) separation and purification to obtain yellow solid compound 59-E tert-butyl ((3-(6-bromoimidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)phenyl)sulfonyl)(methyl)aminomethyl acid ester (220mg).
  • 1,4-bis BrettPhos-Pd-G3 (54.39 mg, 0.2 mmol) was added to the solution of oxyhexane (4 ml), the reaction mixture was replaced with nitrogen three times, and the reaction was stirred at 110° C. for 48 hours. TLC monitored the completion of the reaction.
  • the reaction solution was extracted with water and dichloromethane, the combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • the obtained crude product was separated and purified by preparative TLC (eluted with dichloromethane containing 4.76% methanol) to obtain brown solid compound 59 tert. Butylmethyl ((3-(6-(methylamino)imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)phenyl)sulfonyl)carbamate (15 mg).
  • Step 5 Compound 60N-methyl-3-(6-(methylamino)imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)benzenesulfonamide
  • Embodiment 5 the synthesis of compound 61 and compound 62:
  • 1,4-dioxane (2ml) and Pd(PPh 3 ) 4 (10.84 mg, 0.01 mmol) was added to the water (600 ⁇ l) solution, the reaction mixture was replaced with nitrogen three times, and stirred at 90° C. for 18 hours. TLC monitored the complete reaction. The reaction solution was extracted with water and dichloromethane, the combined organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • Embodiment 6 the synthetic route of compound 63:
  • the first step: the synthesis of compound 64 refers to the synthetic method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 65 refers to the synthetic method of the first step of compound 63
  • the first step the synthesis of compound 66 refers to the synthetic method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 67 refers to the synthetic method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 68 refers to the synthetic method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 69 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 70 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step the synthesis of compound 72 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 73 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 74 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 75 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 76 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 77 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 78 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • the first step: the synthesis of compound 79 refers to the synthesis method of the first step of compound 63
  • Embodiment 7 the synthesis of compound 80 and compound 81:
  • Embodiment 8 compound 82 synthesis:
  • Embodiment 9 the synthesis of compound 83, compound 84 and compound 85:
  • Embodiment 10 the synthesis of compound 86 and compound 87:
  • Embodiment 11 the synthesis of compound 88 and compound 89:
  • the first step Compound 88-C(R)-3-((6-nitropyridin-3-yl)amino)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester
  • Step 5 Compound 88-H tert-butyl(R)-3-((3-bromoimidazo[1,2-a]pyridin-6-yl)(tert-butoxycarbonyl)amino)piperidine-1- formic acid
  • reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was subjected to silica gel column chromatography (eluted with petroleum ether containing 0%-50% ethyl acetate) to obtain a yellow solid compound 88-H tert-butyl (R)-3-((3 -Bromoimidazo[1,2-a]pyridin-6-yl)(tert-butoxycarbonyl)amino)piperidine-1-carboxylic acid (200 mg).
  • Step 6 Compound 88 tert-butyl(R)-3-((tert-butoxycarbonyl)(3-(3-sulfamoylphenyl)imidazo[1,2-a]pyridin-6-yl) Amino)piperidine-1-carboxylic acid
  • Step 7 Compound 89 (R)-3-(6-(piperidin-3-ylamino)imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)benzenesulfonamide
  • the first step: the synthesis of compound 90-C refers to the synthesis method of the first step of compound 89
  • the second step: the synthesis of compound 90-D refers to the synthesis method of the second step of compound 89
  • the third step: the synthesis of compound 90-E refers to the synthesis method of the third step of compound 89
  • the fourth step: the synthesis of compound 90-G refers to the synthesis method of the fourth step of compound 89
  • the fifth step: the synthesis of compound 90-H refers to the synthesis method of the fifth step of compound 89
  • the sixth step: the synthesis of compound 90-C refers to the synthesis method of the sixth step of compound 89
  • Embodiment 12 the synthesis of compound 91:
  • Embodiment 13 the synthesis of compound 92:
  • the first step the synthesis of compound 93 refers to the synthetic method of the first step of compound 92
  • Embodiment 14 the synthesis of compound 94:
  • N,N-dimethylformamide containing compound 94-A (40mg, 0.172mmol), compound 94-B methylamine hydrochloride (17.42mg, 0.258mmol) and triethylamine (52.21mg, 0.516mmol) (2ml) was stirred at 110°C for 48 hours. TLC monitoring reaction is complete. The reaction solution was extracted with water and ethyl acetate, the combined organic layers were washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • Embodiment 15 the synthesis of compound 95
  • the first step Compound 95 tert-butylmethyl (3-phenylimidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl) carbamate
  • Embodiment 16 the synthesis of compound 96:
  • reaction liquid was extracted with water and dichloromethane, the combined organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated under reduced pressure, and the obtained residue was separated and purified by preparative TLC (eluted with dichloromethane containing 4.76% methanol) to obtain compound 96 as a yellow solid (3-(3-Acetamidophenyl)imidazo[1,2-a]pyridin-6-yl)(methyl)carbamate tert-butyl ester (19 mg).
  • Embodiment 17 the synthesis of compound 97
  • Embodiment 18 the synthesis of compound 98:
  • the first step Compound 98 2-(2-(2-(2-((3-(6-((tert-butoxycarbonyl)(methyl)amino)imidazo[1,2-a]pyridine-3 -yl)phenyl)amino)-2-oxoethoxy)ethoxy)ethoxy)acetic acid
  • Embodiment 19 the synthesis of compound 99:
  • the first step compound 99 tert-butyl (3-(3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-amino-2-oxoethoxy) ethoxy) ethoxy) acetamido) phenyl )imidazolin[1,2-a]pyridin-6-yl)(methyl)carbamate
  • reaction solution was extracted with water (10ml) and dichloromethane (10ml x 3).
  • the organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to obtain the crude product which was subjected to Pre-TLC (eluted with dichloromethane containing 9.1% methanol) to obtain yellow solid compound 99 tert-butyl (3-(3-(2-(2 -(2-(2-Amino-2-oxoethoxy)ethoxy)ethoxy)acetylamino)phenyl)imidazolin[1,2-a]pyridin-6-yl)(methyl) Carbamate (9 mg).
  • Embodiment 20 compound 100, the synthesis of compound 101 and compound 102
  • the first step: the synthesis of compound 100-C refers to the synthesis process of the third step of intermediate BB5
  • the second step: the synthesis of compound 100-D refers to the synthesis process of the fourth step of intermediate BB5
  • the fourth step: the synthesis of compound 101 refers to the synthesis process of the first step of compound 2
  • Step 5 Compound 102-A 7-morpholine-3-phenylimidazo[1,2-a]pyridin-6-amine
  • Step 6 Compound 102N-(7-morpholine-3-phenylimidazo[1,2-a]pyridin-6-yl)acetamide
  • Embodiment 21 the synthesis of compound 103, compound 104 and compound 105
  • the first step Compound 103-B 6-((3,4-dimethylbenzyl)amino)imidazo[1,2-a]pyridine-3-carboxylic acid
  • Embodiment 22 the synthesis of compound 106
  • the first step Compound 106 6-((2,4-dimethoxybenzyl)amino)imidazo[1,2-a]pyridine-3-carboxylic acid ethyl ester
  • Embodiment 23 Synthesis of compound 107
  • the first step: the synthesis of compound 107-B refers to the synthesis process of the third step of intermediate BB5
  • the second step: the synthesis of compound 107-C refers to the synthesis process of the fourth step of intermediate BB5
  • the third step: the synthesis of compound 107-D refers to the synthesis process of the first step of compound 2
  • Step 5 Compound 107N-(7-methoxy-3-phenylimidazo[1,2-a]pyridin-6-yl)acetamide
  • Embodiment 24 the synthesis of compound 108 and compound 109
  • the first step Compound 108-C 3-bromo-N-(2-(2-methoxyethoxy)ethyl)benzenesulfonamide
  • the third step Compound 108 (3-(3-(N-(2-(2-methoxyethoxy)ethyl)sulfamoyl)phenyl)imidazo[1,2-a]pyridine-6 -yl)(methyl)carbamate tert-butyl
  • the synthesis of this step refers to the synthesis process of the first step of compound 2.
  • the synthesis of this step refers to the synthesis process of the first step of compound 63.
  • the first step: the synthesis of compound 110-C refers to the synthesis process of the first step of compound 109
  • the second step: the synthesis of compound 110-E refers to the synthesis process of the second step of compound 109
  • the third step: the synthesis of compound 110-G refers to the synthesis process of the third step of compound 109
  • the synthesis of this step refers to the synthesis process of the fourth step of compound 109
  • Embodiment 25 the synthesis of compound 111 and compound 112
  • the first step Compound 113-B 2-(2-(2-((3-(6-((tert-butoxycarbonyl)(methyl)amino)imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl )phenyl)amino)-2-oxoethoxy)ethoxy)acetic acid

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Abstract

本发明提供了SARM1酶活性抑制剂在治疗神经退行性疾病或神经性疾病或病症中的应用，本发明特别提供了作为SARM1酶活性抑制剂的式I化合物及其药物组合物。

Description

SARM1酶活性抑制剂及其应用
本申请要求于2021年8月26日提交到中国国家知识产权局的发明名称为“SARM1酶活性抑制剂及其应用”的中国专利申请202110990705.2的优先权，其内容通过引用以整体并入本文。
技术领域
本申请涉及可用于抑制SARM1酶活性的化合物,和/或这些化合物在治疗和/或预防与SARM1酶活性相关的神经退行性或神经性疾病或病症中的应用。
背景技术
神经退行性疾病是一类可以严重危害人类的疾病，其可以造成破坏性伤害，如神经细胞死亡的渐进性疾病。作为首要的神经变性疾病，已经知道的有阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、亨廷顿病(Hantington’s disease)等中枢神经疾病和如糖尿病等外围性神经疾病。其中大多数与衰老有关，实际上这些疾病的发作随着年龄的增加而增加，然而也存在发作于中年人甚至更年轻者身上的情况。
作为大脑结构和功能的研究结果，神经递质和神经营养因子的作用已逐步地阐明，但是有关神经变性的很多局部原因还不清楚。仅对帕金森病，阐明了该疾病与特殊的神经递质即多巴胺之间的关系，已用多巴胺的前体L-多巴作为减轻神经症状和恢复神经功能的药物。但是，L-多巴不能抑制神经变性的发展，而且随着病情的发展逐渐地丧失其作用，即多巴胺基的神经细胞变性和缺损。同样，阿尔茨海默病也是多种神经细胞如乙酰胆碱基神经细胞、一元胺基神经细胞等的变性和缺损引起的，作为治疗这种疾病的药物，胆碱酯酶抑制剂已投放市场或正在开发。不过，治疗帕金森病的L-多巴仍限于症候治疗，以暂时改善神经症状。
因此，至今对于神经退行性疾病而言，尤其缺乏有效的治疗药物。
研究发现，神经轴突损伤出现于多种神经退行性疾病、意外损伤等神经系统疾病中。轴突退化可引起周围神经系统结构坏死与功能紊乱，最终导致获得性或遗传性中枢神经系统退行性病变。
尽管目前还没有一套非常有效的药理学方法能够精确评估轴突退化所导致的发病率的权重，但是已经在组织病理学研究中发现，在阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、多发性硬化症(multiple sclerosis)、肌萎缩性硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、外周神经病变(peripheral neuropathy)等多种神经病变早期观察到显著的轴突损伤降解，表明轴突退化在神经病变发生发展中有重要作用(Fischer等，Neuro-degenerative Diseases,2007年，4:431-442)。因此，通过减弱甚至阻断轴突退化，维持神经元结构和功能的完整可能是使多种神经系统疾病受益的治疗方案。
在缺乏针对神经退行性疾病的有效治疗药物的情况下，现有技术迫切需要研究开发新的化合物，尤其是化学小分子，包括对神经轴突变性有作用的化合物。
发明内容
本发明人经过长期研究，意外发现一类具有显著的SARM1酶活性抑制作用的化合物，并且发现所述化合物可改善轴突变性，并用于治疗或预防神经退行性疾病及其相关病症。
SARM1由三个结构域组成，分别是氮端的ARM(Armadillo/HEAT repeat)结构域、两个串联的SAM(Sterile alpha motif)结构域和碳端TIR(Toll/Interleukin Receptor)结构域，此外在氮端还有一段线粒体定位信号肽。
已经知道，在野生型神经元中，轴突损伤诱导NAD +耗竭和轴突变性；敲除SARM1抑制轴突变性，且NAD +维持在正常水平，表明SARM1促进NAD +的消耗，加剧了轴突变性。
美国华盛顿大学医学院的Milbrandt课题组制备了SARM1的TIR结构域(SARM1-TIR)并发现它具有NAD +水解酶活性。进一步通过严格的大肠杆菌表达纯化实验和无细胞表达系统获得高纯度的SARM1-TIR，最终证明SARM1-TIR能够催化NAD +产生腺苷二磷酸 核糖(Adenosine 5’-diphosphate ribose，ADPR)和环腺苷二磷酸核糖(Cyclic adenosine 5’-diphosphate ribose，cADPR)。
SARM1是一个多功能信号酶，能够催化多种底物NAD +、NADP +和NA等生成信号分子cADPR、ADPR和NAADP等。在多种神经退行性疾病中，SARM1被激活，导致NAD +耗竭，进而启动一个全新的细胞死亡机制；敲除SARM1能够抑制轴突变性和疾病进程，因此被认为是相关神经疾病的潜在药物靶点，包括TBI、AD、CIPN、ASL等。
本公开中，发明人制备了全长SARM1，用于NAD酶活性实验，并用来筛选和获得了本发明的具有酶活性抑制能力的化合物分子。
因此，基于上述发现，在第一方面，本发明提供了SARM1酶活性抑制剂在制备用于治疗或预防神经退行性疾病或神经性疾病或病症中的应用。
在另一方面，本发明提供了SARM1酶活性抑制剂在制备用于治疗或预防轴突变性相关疾病或病症中的应用。
特别地，本发明提供了可作为SARM1酶活性抑制剂的式I化合物：
Figure PCTCN2022114815-appb-000001
或者其可药用盐或立体异构体，
其中，
A代表CH或N；
E代表CH或N；
R 1独立地选自氢、卤素、CF 3、CN、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、氨基、CF 3C(O)-NH-、CF 3C(O)-N(CH 3)-、C 1-C 6烷基氨基、C 3-C 6环烷基氨基、C 6-C 14芳基、C 5-C 14杂芳基、C 6-C 14芳基氨基、C 6-C 14杂芳基氨基、-OH、C 6-C 14芳基氧基、-CONH 2、-SO 2NH 2、C 1-C 6烷基-C(O)NR 5-、C 3-C 6环烷基-C(O)NR 5-和C 3-C 6杂环烷基-C(O)NR 5-、C 1-C 6烷基-OC(O)NR 5-、C 3-C 6环烷基-OC(O)NR 5-、C 3-C 6杂环烷基-OC(O)NR 5-、C 1-C 6烷基-OC(O)NR 5-(C 1-C 4烷基)-、C 1-C 6烷基-C(O)NR 5-(C 1-C 4烷基)-、C 3-C 6环烷基-OC(O)NR 5-(C 1-C 4烷基)-、C 3-C 6环烷基-C(O)NR 5-(C 1-C 4烷基)-、(C 6-C 14芳基)-(C 1-C 6烷基)-CO-N(R 5)-、(C 6-C 14芳基)-(C 3-C 6烷基)-N(R 5)-、(C 6-C 14芳基)-(C 3-C 6烯基)-N(R 5)-；上述C 1-C 6烷基中的1个碳原子可以被1个选自N、O和S原子的杂原子代替；优选地，R 1独立地选自C 1-C 6烷基氨基、C 3-C 6杂环烷基氨基、C 1-C 6烷基酰基氨基、1-吗啉基、C 1-C 6烷基-OC(O)NR 5-；
X代表环状结构，选自C 3-C 6环烷基、C 3-C 6环烯基、C 3-C 6杂环烷基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基，或者X缺失；优选地，X选自苯基、吡啶基、甲氧基取代的吡啶基、噻唑基、环己基、环己烯基，其中所述苯基可以被以下取代基取代：-SO 2-NH 2、-NH-COCH 3、-NH 2、-CO-NH 2、-OCH 3、卤素、C 1-C 4烷基、-SO 2-N(BoC)CH 3和C 1-C 4烷基-NH-SO 2-；
R 2独立地选自氢、卤素、-NH 2、-N(R 5)-CO-R、-CO-N(R 5)-R、-N(R 5)-SO 2-R、-SO 2-N(R 5)-R、-COOR、-COR、-(C 1-C 4烷基)-OR、-(C 1-C 4烷基)-N(CH 3) 2、NH-(C 1-C 4烷基)R-、-N(R 5)-R、-NHCO-(C 3-C 6环烷基)-(C 3-C 6杂环烷基)、-OR、-O-(C 1-C 4烷基)-R和R；
R选自C 1-C 4烷氧基、C 1-C 12烷基、-CONH 2、-SO 2-NH-R、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、-(C 1-C 12烷基)-(C 6-C 14)芳基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基，其中所述C 1-C 12烷基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基任选地被1、2或3个卤素取代，并且所述C 1-C 12烷基中的1至4个-CH 2-单元任选地被O原子、S原子、-CO-或-NH-所替代；
R 5选自H、C 1-C 4烷基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、C 1-C 4烷氧基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基；
R 3独立地选自氢、C 1-C 4烷基和C 1-C 4烷氧基羰基；
其中上述C 3-C 6杂环烷基和C 5-C 14杂芳基中含有1或2个选自N、O和S原子的杂原子；
所述R 1和R 2可以通过碳-碳键或醚键连接成14至16元环，所述环中含有1-4个选自N、O和S的杂原子，优选地，所述环中含有3-4个N原子和1-2个O或S原子；
m、n为选自1、2和3的正整数。
在一个优选的方面，本发明的所述式I化合物具有以下式II结构：
Figure PCTCN2022114815-appb-000002
其中E、R 1、R 2和X具有前述的定义。
在一个优选的方面，本发明的所述式I化合物具有以下式III结构：
Figure PCTCN2022114815-appb-000003
其中E、R 1和R 2具有前述的定义；
Y 1和Y 1’彼此独立地为CH或N。
在另一个优选的方面，本发明的所述式I化合物具有以下式IV结构：
Figure PCTCN2022114815-appb-000004
其中E和R 2具有前述的定义；
Y 1和Y 1’彼此独立地为CH或N；
Y 2选自-O-、-NH-、-NR 5-、-NR 5-(C 1-C 4烷基)-和-NR 5(C 3-C 6环烷基)-，或者Y 2不存在；
R 1’选自R、-C(＝O)-R,-SO 2-R,-C(＝O)-OR和-SO 2NHR；其中R 5和R具有前述的定义。
在又一个优选的方面，本发明的所述式I化合物具有以下式V结构：
Figure PCTCN2022114815-appb-000005
其中，
E、R 1’和Y 2具有前述的定义；
Y 3选自N(R 5)CO-、-CO-N(R 5)-、-N(R 5)-SO 2-、-SO 2-N(R 5)-、-CO 2-、-CO-、-NH-(C 1-C 4烷基)-、-N(R 5)-、-O-(C 1-C 4烷基)-和-O-，或者Y 3不存在；
R 4选自C 1-C 12烷基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基，其中所述C 1-C 12烷基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基任选地被1、2或3个卤素取代；所述C 3-C 6杂环烷基和C 5-C 14杂芳基中含有1或2个选自N、O和S原子的杂原子；并且所述C 1-C 12烷基中的1至4个-CH 2-单元任选地被O原子、S原子、-CO-或-NH-所替代。
在又一个优选的方面，本发明的化合物具有以下式VI结构：
Figure PCTCN2022114815-appb-000006
其中，
E、R 1、R 2、Y 1、Y 1’、Y 2、Y 3和R 4具有前述的定义；
L为C 2-C 12亚烷基，其中所述C 2-C 12亚烷基中的1、2、3或4个-CH 2-单元任选地被1、2、3或4个O原子、N原子、-CO-、-CONH-或-NHCO-所替代；
Q为E3连接酶配体，优选为VHL配体
Figure PCTCN2022114815-appb-000007
或者Q为如下的结构单元：
Figure PCTCN2022114815-appb-000008
其中变量A、E、X、R 1、R 2具有前述的定义；
或者Q是
Figure PCTCN2022114815-appb-000009
在另一个优选的方面，本发明的化合物具有以下式VII结构：
Figure PCTCN2022114815-appb-000010
其中，
E、R 1、R 2、R 1’、Y 1、Y 1’和Y 2具有前述的定义；
Y 3选自-N(R 5)CO-、-CO-N(R 5)-、-N(R 5)-SO 2-、-SO 2-N(R 5)-、-CO 2-、-CO-、-NH-(C 1-C 4烷基)-、-N(R 5)-、-O-(C 1-C 4烷基)-、和-O-，或者Y 3不存在；
L为C 2-C 12亚烷基，其中所述C 2-C 12亚烷基中的1、2、3或4个-CH 2-单元任选地被1、2、3或4个O原子、N原子、-CO-、-CONH-或-NHCO-所替代；
Q为E3连接酶配体，优选为VHL配体
Figure PCTCN2022114815-appb-000011
或者Q为选自如下的结构单元：
Figure PCTCN2022114815-appb-000012
其中变量A、E、X、R 1、R 2具有前述的定义；
或者Q是
Figure PCTCN2022114815-appb-000013
在一些优选的实施方案中，本发明所述的化合物选自以下的化合物，或者其可药用盐或立体异构体：
Figure PCTCN2022114815-appb-000014
Figure PCTCN2022114815-appb-000015
Figure PCTCN2022114815-appb-000016
Figure PCTCN2022114815-appb-000017
Figure PCTCN2022114815-appb-000018
Figure PCTCN2022114815-appb-000019
Figure PCTCN2022114815-appb-000020
Figure PCTCN2022114815-appb-000021
Figure PCTCN2022114815-appb-000022
Figure PCTCN2022114815-appb-000023
Figure PCTCN2022114815-appb-000024
Figure PCTCN2022114815-appb-000025
Figure PCTCN2022114815-appb-000026
Figure PCTCN2022114815-appb-000027
Figure PCTCN2022114815-appb-000028
Figure PCTCN2022114815-appb-000029
Figure PCTCN2022114815-appb-000030
Figure PCTCN2022114815-appb-000031
Figure PCTCN2022114815-appb-000032
在本文中，当提及式I-式VII化合物时，其还包括式I-式VII化合物的可药用盐或其立体异构体。
本发明还涉及一种治疗或预防神经退行性疾病或与之相关的神经性疾病或病症的方法，包括向有此需要的对象给予本发明的作为SARM1酶活性抑制剂的化合物。特别地，本发明涉及一种治疗或预防轴突变性相关疾病或病症的方法，包括向有此需要的对象给予本发明的作为SARM1酶活性抑制剂的化合物。更特别地，本发明涉及一种SARM1酶活性抑制方法，包括向有此需要的对象给予本发明的化合物；更特别地，本发明涉及一种抑制轴突退化的方法，包括向有此 需要的对象给予本发明的化合物。本发明的化合物或组合物可以有效量给予所需要的对象或患者。
相应地，本文还涉及本发明所述的化合物或者其可药用盐或立体异构体在制备用于治疗或预防神经退行性疾病或神经性疾病或病症中的应用。本文还涉及本发明所述的化合物或者其可药用盐或立体异构体在制备SARM1酶活性抑制剂中的应用。本文还涉及本发明所述的化合物或者其可药用盐或立体异构体在制备用于治疗或预防轴突变性相关疾病或病症中的应用。优选地，所述神经退行性疾病或神经性疾病或病症或轴突变性相关疾病或病症选自阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、多发性硬化症(multiple sclerosis)、肌萎缩性硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、外周神经病变(peripheral neuropathy)。
具体实施方式
术语
在本文中，当提及具有特定结构式的“化合物”时，一般地还涵盖其可药用盐、立体异构体、非对映异构体、对映异构体、外消旋混合物和同位素衍生物。
本领域技术人员公知，除了化合物的盐外，溶剂合物、水合物是化合物的替代性存在形式，它们都可以在一定条件下转化为所述化合物，因此，当在本文中当提到一种化合物时，一般地还包括它的溶剂合物和水合物。
本发明所述的可药用盐可使用例如以下的无机酸或有机酸而形成：“可药用盐”是指这样的盐，在合理的医学判断范围内，其适用于接触人和哺乳动物的组织，而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应 等，称得上合理的受益/风险比。可以在本发明化合物的最终分离和纯化期间原位制备所述盐，或单独通过将游离碱或游离酸与合适的试剂反应制备所述盐。例如，游离碱可以与合适的酸反应。可药用的酸加成盐的示例是氨基(胺基)与无机酸(例如，盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或有机酸(例如，醋酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用现有技术中的其他方法如离子交换形成的盐。其他可药用盐包括海藻酸钠、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、己二酸盐、樟脑磺酸盐、天门冬氨酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、柠檬酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。
本发明的可药用盐可通过常规方法制备，例如通过将本发明的化合物溶解于与水可混溶的有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙酮和乙腈)，向其中添加过量的有机酸或无机酸水溶液，以使得盐从所得混合物中沉淀，从中除去溶剂和剩余的游离酸，然后分离所沉淀的盐。
本发明所述的“溶剂合物”意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子(无论有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情形中，例如当一个或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离。溶剂化物中的溶剂分子可按规则排列和/或无序排列存在。溶剂合物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂合物”涵盖溶液相和可分离的溶剂合物。示例性溶剂合物包括但不限于水合物、乙醇合物、甲醇合物和异丙醇合物。溶剂化方法是本领域公知的。
本发明所述的“立体异构”分为构象异构和构型异构，构型异构还可分为顺反异构和旋光异构(即光学异构)，构象异构是指具有一定构型的有机物分子由于碳、碳单键的旋转或扭曲而使得分子各原子或原子团在空间产生不同的排列方式的一种立体异构现象，常见的有烷 烃和环烷烃类化合物的结构，如环己烷结构中出现的椅式构象和船式构象。“立体异构体”是指当本发明化合物含有一个或多个不对称中心，因而可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体。本发明化合物有不对称中心，每个不对称中心会产生两个光学异构体，本发明的范围包括所有可能的光学异构体和非对映异构体混合物和纯的或部分纯的化合物。
特别地，本发明所述的化合物可以以互变异构体形式存在，其通过一个或多个双键位移而具有不同的氢的连接点。例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。各互变异构体及其混合物都包括在本发明的化合物中。所有化合物的对映异构体、非对映异构体、外消旋体、内消旋体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物等，均包括在本发明范围中。
本发明的“同位素衍生物”是指在本专利中化合物被同位素标记的分子。通常用作同位素标记的同位素是：氢同位素，2H和3H；碳同位素：11C,13C和14C；氯同位素：35Cl和37Cl；氟同位素：18F；碘同位素：123I和125I；氮同位素：13N和15N；氧同位素：15O,17O和18O和硫同位素35S。这些同位素标记化合物可以用来研究药用分子在组织中的分布情况。某些重同位素，比如重氢(2H)，的取代能增强代谢的稳定性，延长半衰期从而达到减少剂量的目而提供疗效优势的。同位素标记的化合物一般从已被标记的起始物开始，用已知的合成技术象合成非同位素标记的化合物一样来完成其合成。
当将本发明化合物可以与另外的SARM1酶活性抑制剂联用用于治疗或预防神经退行性疾病或相关的神经性疾病或病症，或者可以与另外的用于治疗或预防神经退行性疾病或相关的神经性疾病或病症的活性药物联用，用于治疗或预防神经退行性疾病或相关疾病或病症。
本发明的化合物或其可药用盐可作为活性成分通过口服或肠胃外施用，其有效量的范围为在哺乳动物包括人(体重约70kg)的情况下0.1至2000mg/kg体重/天、优选0.1至100mg/kg体重/天，并且每天以单次或分次剂量，或者遵循/不遵循预定时间施用。活性成分的剂量可根据多个相关因素(例如待治疗对象的情况、疾病类型和 严重性、施用速率和医生意见)进行调整。在某些情况下，小于以上剂量的量可能是合适的。
可根据常规方法中的任何一种将本发明药物组合物配制成用于口服施用或肠胃外施用(包括肌内、静脉内和皮下途径、瘤内注射)的剂型，例如片剂、颗粒、粉末、胶囊、糖浆、乳剂、微乳剂、溶液或混悬液。
用于口服施用的本发明药物组合物可通过将活性成分与例如以下的载体混合来制备：纤维素、硅酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸钙、玉米淀粉、乳糖、蔗糖、右旋糖、磷酸钙、硬脂酸、表面活性剂、助悬剂、明胶、滑石、乳化剂和稀释剂。在本发明的注射组合物中采用的载体的实例是水、甘油酯、盐溶液、醇、二醇、葡萄糖溶液、醚(例如，聚乙二醇400)、油、脂肪酸、脂肪酸酯、表面活性剂、助悬剂和乳化剂。
如果无另外说明，使用质谱、核磁、HPLC、蛋白化学、生物化学、重组DNA技术和药理的常规方法。在本申请中，如果无另外说明，可以使用“或”或“和”指“和/或”。
在说明书和权利要求书中，给定化学式或名称应涵盖所有立体和光学异构体及其中存在上述异构体的外消旋物。除非另外指明，否则所有手性(对映异构体和非对映异构体)和外消旋形式均在本发明范围内。所述化合物中还可存在C＝C双键、C＝N双键、环系统等的许多几何异构体，且所有上述稳定异构体均涵盖于本发明内。本发明描述了本发明化合物的顺式-和反式-(或E-和Z-)几何异构体，且其可分离成异构体的混合物或分开的异构体形式。
本发明化合物可以光学活性或外消旋形式加以分离。用于制备本发明化合物和其中制备的中间体的所有方法均视为本发明的部分。在制备对映异构体或非对映异构体产物时，其可通过常规方法(例如通过色谱或分段结晶)进行分离。应当理解的是，可存在的所有互变异构体形式均包括在本发明内。本发明的化合物当作为现有技术已知化合物时可以通过商购获得。
除非另有定义，否则当取代基被标注为“任选取代”时，所述取代基选自例如以下取代基，诸如烷基、环烷基、芳基、杂环基、卤素、 羟基、烷氧基、硝基、氰基、氧代、烷酰基、芳基氧基、烷酰基氧基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷基硫基等。
本文使用的术语“烷基”或“亚烷基”意欲包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基团。本发明中的烷基优选C 1-C 12烷基、C 1-C 10烷基、C 1-C 8烷基，更优选C 1-C 6烷基，特别优选C 1-C 4烷基，尤其是C 1-C 3烷基。例如，“C 1-C 6烷基”表示具有1个至6个碳原子的烷基。烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)和戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)。对于本发明中的C 1-C 12烷基而言，其中的1至4个-CH 2-单元任选地被O原子、S原子或-NH-所替代。
术语“烷氧基”或“烷基氧基”是指-O-烷基。例如，“C 1-C 6烷氧基”(或烷基氧基)意欲包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6烷氧基。优选的烷氧基为C 1-C 10烷氧基、C 1-C 8烷氧基，更优选C 1-C 6烷氧基，特别优选C 1-C 4烷氧基，尤其是C 1-C 3烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)和叔丁氧基。类似地，“烷基硫基”或“硫代烷氧基”表示具有指定数量碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的烷基；例如甲基-S-和乙基-S-。同样，优选的烷基硫基为C 1-C 10烷基硫基、C 1-C 8烷基硫基，更优选C 1-C 6烷基硫基，特别优选C 1-C 4烷基硫基，尤其是C 1-C 3烷基硫基。
术语“羰基”是指由碳和氧两种原子通过双键连接而成的有机官能团(C＝O或C(O))。
术语“芳基”，单独或作为较大部分诸如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳基氧基烷基”的部分，是指具有总计6至14个环成员的单环、二环或三环的环系统，其中所述系统中的至少一个环为芳族的且其中所述系统中的每个环含有3至7个环成员。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指芳族环系统，其包括但不限于苯基、萘基、联苯基、茚满基、1-萘基、2-萘基和四氢萘基。本发明的芳基优选C 6-C 10芳基。术语“芳烷基”或“芳基烷基”是指连接至芳基环的烷基残基。非限制性的实例包括苄基、苯乙基。
术语“环烷基”是指环状烷基，其可为单环或二环。本发明的环烷基优选C 3-C 8环烷基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和降莰烷基。
“卤代”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘。“卤代烷基”意欲包括具有指定碳原子数且取代有1个或多个卤素的支链和直链饱和脂族烃基团。卤代烷基的实例包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。卤代烷基的实例还包括意欲包括具有指定碳原子数且取代有1个或多个氟原子的支链和直链饱和脂族烃基团的氟代烷基，特别优选的是三氟甲基。
卤代烷氧基表示具有指定数量碳原子的经氧桥连接的如上文所定义的卤代烷基。例如，“C 1-C 6卤代烷氧基”意欲包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6卤代烷氧基。卤代烷氧基的实例包括但不限于三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基和五氟乙氧基。类似地，“卤代烷基硫基”或“硫代卤代烷氧基”表示具有指定数量碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的卤代烷基；例如三氟甲基-S-和五氟乙基-S-。
本公开内容中，一个或更多个卤素可以各自独立地选自氟、氯、溴和碘。
术语“杂芳基”意指稳定的3元、4元、5元、6元、或7元芳香单环或7元、8元、9元、10元的芳香二环或芳香多环杂环，其为完全不饱和的、部分不饱和的，且其含有碳原子和1个、2个、3个或4个独立地选自N、O和S的杂原子。氮和硫杂原子可任选地被氧化。氮原子为取代的或未取代的(即N或NR，其中R为H或如果被定义，则为另一取代基)。杂环可在得到稳定结构的任何杂原子或碳原子处连接至其侧基。如果所得化合物是稳定的，则本文所述的杂环基可在碳或氮原子上被取代。杂环中的氮可任选地被季铵化。优选地，当杂环中S和O原子的总数超过1时，则这些杂原子彼此不相邻。优选地，杂环中S和O原子的总数不大于1。当使用术语“杂环”时，其意欲包括杂芳基。芳杂基的实施例包括但不限于吖啶基、氮杂环丁基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、 苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、咪唑并吡啶基、假吲哚基(indolenyl)、二氢吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基(isatinoyl)、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噻唑并吡啶基、异噁唑基、异噁唑并吡啶基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、二氮杂萘基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑并吡啶基、噁唑烷基、萘嵌间二氮杂苯基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑并吡啶基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2-吡咯烷酮基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四唑基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻唑并吡啶基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基、喹啉基、异喹啉基、酞嗪基、喹唑啉基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、1,2,3,4-四氢喹啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、5,6,7,8-四氢-喹啉基、2,3-二氢-苯并呋喃基、色满基、1,2,3,4-四氢-喹喔啉基和1,2,3,4-四氢-喹唑啉基。术语“杂芳基”还可以包括由上述所定义的“芳基”与单环“杂芳基”所形成的联芳基结构，例如但不限于“-苯基联吡啶基-”、“-苯基联嘧啶基”、“-吡啶基联苯基”、“-吡啶基联嘧啶基-”、“-嘧啶基联苯基-”；其中本发明还包括含有例如上述杂环的稠环和螺环化合物。
本文中所用的术语“取代”意指至少一个氢原子被非氢基团替代，条件是维持正常化合价且所述取代得到稳定的化合物。本文所用的环 双键为在两个相邻环原子之间形成的双键(例如C＝C、C＝N或N＝N)。
当任何变量在化合物的任何组成或式中出现一次以上时，其每次出现时的定义均独立于其在其它每种情况下出现时的定义。因此，例如，如果显示基团取代有0-3个R，则所述基团可任选地取代有至多三个R基团，且在每次出现时R独立地选自R的定义。此外，取代基和/或变量的组合仅在上述组合可产生稳定的化合物时才容许存在。
本文使用的术语“有效量”意指将会引起例如研究人员或临床医师所寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂(即本发明化合物)的量。此外，术语“治疗有效量”意指这样的量：与未接受上述量的相应受试者相比，所述量导致改善的治疗、治愈、预防或减轻疾病、病症或副作用，或降低在疾病或病症的进展速度。有效量可以一个或多个给药、施用或剂量给予且不意欲被特定的制剂或给药途径限制。该术语还包括在其范围内的增强正常生理机能的有效量。
本文使用的术语“治疗”包括导致改善病症、疾病、障碍等的任何效果，例如减轻、减少、调节、改善或消除，或改善其症状。
术语“药用”在本文中用于指如下那些化合物、物质、组合物和/或剂型：在合理医学判断的范围内，其适于与人类和动物的组织接触使用而无过高毒性、刺激性、过敏反应和/或其它问题或并发症，并与合理的益处/风险比相称。
本文使用的短语“可药用载体”意指药用物质、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如润滑剂、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌或硬脂酸)或溶剂包囊物质，其涉及将主题化合物从一个器官或身体的部分携带或运送至另一个器官或身体的部分。每种载体在与制剂的其它成分相容和对患者无害的意义上必须是“可接受的”。
术语“药物组合物”意指包含本发明化合物与至少一种其它药用载体的组合物。“药用载体”是指本领域中通常接受用于将生物活性剂递送至动物(具体为哺乳动物)的介质，包括(即)佐剂、赋形剂或媒介物，诸如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调控剂、崩解剂、润湿剂、 乳化剂、悬浮剂、增甜剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂，这取决于给药模式和剂型的性质。
如本文所用，某一化合物或药物组合物，给药后，可以使某一疾病、症状或情况得到改善，尤指其严重度得到改善，延迟发病，减缓病情进展，或减少病情持续时间。无论固定给药或临时给药、持续给药或断续给药，可以归因于或与给药有关的情况。
给药途径
适合的给药途径包括但不限于，口服、静脉注射、直肠、气雾剂、非肠道给药、眼部给药、肺部给药、经皮给药、阴道给药、耳道给药、鼻腔给药及局部给药。此外，仅作举例说明，肠道外给药，包括肌肉注射、皮下注射、静脉注射、髓内注射、心室注射、腹膜内注射、淋巴管内注射、及鼻内注射。
在一方面，此处描述的化合物给药方式是局部的而不是全身性的给药方式。在特定的具体实施例中，长效制剂通过植入给药(例如皮下或肌肉)或通过肌肉注射。此外，在另一具体化实施例中，药物通过靶向药物给药系统来给药。例如，由器官特异性抗体包裹的脂质体。在这种具体实施例中，所述脂质体被选择性的导向特定器官并吸收。
在本发明的药物组合物中，可以根据本领域技术人员认识范围内的诸多因素来调配药用载体。这些因素包括，但不限于：所调配活性剂的类型和性质；含有活性剂的组合物所要给药的受试者；组合物的预期给药途径；及所靶向的治疗适应症。药用载体包括水性和非水性液体介质及各种固体和半固体剂型。
上述载体可包括除活性剂外的诸多不同成分和添加剂，上述其它成分出于本领域技术人员公知的各种原因包括于制剂中，例如稳定活性剂、粘合剂等。关于合适的药用载体和载体选择中所涉及的因素的描述可参见多个容易获得的来源，例如Allen L.V.Jr.et al.Remington:The Science and Practice of Pharmacy(2Volumes),22 nd Edition(2012),Pharmaceutical Press。
所述化合物通常以与根据预期给药形式(例如口服片剂、胶囊剂、酏剂和糖浆剂)适当地选择且与常规药学实践相符合的合适药物稀释剂、赋形剂或载体(在本文中统称为药物载体)的混合物形式进行给药。
虽然本发明化合物可单独给药，但优选以药物制剂(组合物)形式给予化合物。
试剂盒/产品包装
为了用于上述适应症的治疗，试剂盒/产品包装也在此进行描述。这些试剂盒可以由输送器、药包或容器盒组成，容器盒可被划分成多格，以容纳一种或多种容器，如管形瓶、试管及类似物等，每个容器中包含所述方法中的单独一种成分。合适的容器包括瓶子，管形瓶，注射器和试管等。容器由可接受的玻璃或塑料等材料制作而成。
举例来讲，容器可装有一种或多种在此所述的化合物，化合物可能以药物组分形式存在，也可能与在本文中所述的其它成分组成混合物体存在。容器可有一个无菌输出口(例如容器可为静脉输液包或瓶，瓶塞可被皮下注射器针头刺破)。这样的试剂盒可带有一种化合物，及本文中所述的使用方法的说明、标签或操作说明。
一个典型的试剂盒可包括一种或多种容器，为适应商业推广和使用者对化合物使用的需求，每个容器装有一种或多种材料(如试剂，也可以是浓缩的母液，和/或器械)。这些材料包括但不局限于缓冲液，稀释液，滤器，针头，注射器，输送器，包，容器，瓶和/或试管，附有内容清单和/或使用说明书，内置包装也附有说明书。整套的说明都要包括在内。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条 件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
在本发明使用的术语中，“神经退行性疾病”与“神经变性疾病”具有相同的含义；“轴突退化”与“轴突变性”具有相同的含义。本领域技术人员能够理解，所述术语具有通常理解的含义。
具体实施例
本教导包括实施例中提供的描述，其并非旨在限制任何权利要求的范围。提供以下非限制性实施例以进一步说明本发明。根据本公开，本领域技术人员将理解，在不脱离本教导的精神和范围的情况下，可以对所公开的具体实施方案进行许多改变并仍然能获得相同或相似的结果。
除非另有说明，所有材料/试剂均从商业供应商处获得，无需进一步纯化即可使用。实验过程中通过LC-MS和/或薄层色谱(TLC)在硅胶60F254(0.2mm)预涂玻璃背衬上监测反应，并使用紫外光观察。下述实施例化合物的结构通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来表征。
1HNMR(400MHz)波谱通过Bruker波谱仪上在室温下记录，TMS或残留溶剂峰作为内标。化学位移值或峰型倍数在(δ)中给出，耦合常数(J)以赫兹(Hz)为单位的绝对值给出。1HNMR谱中的多重性缩写如下：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br或宽峰(加宽)。
制备型HPLC纯化过程在Shimadzu LC-6AD上进行。所有纯化工作均使用Shim-pack PREP-DDS(H)KIT色谱柱完成。流动相为水(含0.1％HCO2H)和乙腈；所有使用的试剂均为HPLC级。流速为10ml/min。
LC-MS在Agilent 1260infinityⅡ上进行；流动相：A：水(0.1％三氟乙酸)，B：ACN；3.5分钟跑柱；立柱：YMC-Triart C18 50*3mm,3um；流速：1.8ml/min；烤箱温度：40℃；梯度：5-100(ACN％)。
制备型TLC在WhatmanLK6F Silica Gel 60A尺寸20x20cm平板上进行，厚度为500μm。
以下实施例旨在说明本发明的实施方式，而非以任何方式对其进行限制。
中间体的合成:
中间体BB1的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000033
第一步：化合物BB1-B双叔丁基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基氨基双甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000034
将含有化合物BB1-A咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(50mg,0.373mmol)、二碳酸二叔丁酯(89.55mg,0.41mmol)、4-二甲氨基吡啶(9.1mg,0.0745mmol)和三乙胺(75.49mg,0.746mmol)的二氯甲烷溶液在室温下搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应混合物加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 2)萃取，有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得剩余物经制备TLC分离纯化(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱) 得到白色固体化合物BB1-B双叔丁基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基氨基双甲酸酯(85mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 335.1[M+H] +
第二步：化合物BB1(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)氨基双甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000035
将含有化合物BB1-B双叔丁基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基氨基双甲酸酯(60mg,0.256mmol)和N-溴代丁二酰亚胺(50.17mg,0.282mmol)的二氯甲烷(2.5ml)溶液在室温下搅拌反应5小时。TLC监测反应完全。反应混合物加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 2)萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得剩余物经制备TLC分离纯化(用含2.38％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到白色固体化合物BB1(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)氨基双甲酸叔丁酯(55mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 335.1[M+H] +
中间体BB2的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000036
第一步：化合物BB2 4-甲氧基-5-硝基吡啶-2-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000037
向含有化合物BB2-A(500mg,2.88mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入甲醇钠(1.56g,8.64mmol)。此反应在20℃下搅拌反应12小时，然后升至60℃搅拌反应1小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测化合物BB2-A(Rf＝0.7)消耗完毕，有一个新的点(Rf＝0.5)生成。浓缩反应液。剩余物加水(20mL)稀释,乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤,无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物通过硅胶柱层析(用含8％甲醇的二氯甲烷洗脱，Rf＝0.5)得到黄色固体化合物BB2 4-甲氧基-5-硝基吡啶-2-胺(420mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 170.1[M+H] +.
中间体BB3的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000038
第一步：化合物BB3 3-溴-7-氯咪唑[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000039
向含有化合物BB3-A(20mg,72.34umol)的乙醇(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中加入氯化铵(19.4mg)和还原铁粉(20.2mg)。反应液在80℃下搅拌反应3小时。TLC(PE:EtOAc＝1:2)监测化合物BB3-A(Rf＝0.7)消耗完毕，有两个新的点(Rf＝0.5,0.4)生成。反应液过滤，浓缩母液。剩余物加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物未经进一步纯化直接用于下一步。由此得到黄色固体粗品化合物BB-3 3-溴-7-氯咪唑[1,2-a]吡啶-6-胺(17.8mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 245.9[M+H] +.
中间体BB4的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000040
第一步：中间体BB4 N-(3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000041
0℃氮气下向含有化合物BB4-A 3-溴-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(80mg,0.354mmol)和三乙胺(35.75mg,0.354mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入化合物BB4-B乙酰氯(33.3mg,0.425mmol)。反应液在0℃下搅拌反应5小时。TLC监测反应完全。反应液加水和二氯甲 烷萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物，经制备TLC(用含2.4％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到褐色固体化合物BB4N-(3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙酰胺(43mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 269.9[M+H] +.
中间体BB5和BB6的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000042
第一步：化合物BB5-C(6-硝基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000043
向含有化合物BB5-A 5-溴-2-硝基吡啶(500mg,2.46mmol)和化合物BB5-B(577.1mg,4.93mmol)的甲苯溶液中加入醋酸钯(55.3mg,246.31umol)，Xant-Phos(142.5mg,246.31umol)，碳酸铯(2.41g,7.39mmol)。反应液在100℃氮气氛围下搅拌反应12小时。TLC(PE:EtOAc＝2:1)监测反应完全。反应液加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物用硅胶柱层析(用含33％乙酸乙酯的石 油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物BB5-C(6-硝基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(580mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 240.1[M+H] +.
第二步：化合物BB5-D(6-氨基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000044
向含有化合物BB5-C(580mg,2.42mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入Pd/C。反应液在20℃氢气氛围下搅拌反应12小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测显示化合物3(Rf＝0.9)消耗完毕，一个新的点(Rf＝0.3)生成。反应液经硅藻土过滤，浓缩母液。剩余物未经进一步纯化直接用于下一步。由此得到黄色固体化合物BB5-D(6-氨基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(540mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 210.1[M+H] +.
第三步：化合物BB5-F叔丁基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000045
向含有化合物BB5-D(540mg,2.58mmol)的乙醇溶液中加入化合物BB5-E(1.01g,5.16mmol,40％质量分数在水中)。反应液在80℃下搅拌反应3小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测显示反应完全。反应液浓缩，然后加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，二氯甲烷(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过 滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到黄色固体化合物BB5-F叔丁基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基氨基甲酸酯(400mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 234.1[M+H] +.
第四步：化合物BB5(3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000046
向含有化合物BB5-F(300mg,1.29mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(229mg,1.29mmol)。反应液在室温下搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应混合物减压浓缩，所得剩余物经硅胶柱层析(用含0％-50％乙酸乙酯的石油醚洗脱)得到黄色固体化合物BB5(3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(370mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 311.9[M+H] +.
第五步：化合物BB6(3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000047
在0℃氮气氛围下向含有化合物BB5(800mg,2.563mmol)的DMF(10ml)溶液中加入氢化钠(102.51mg,2.563mmol,60％)和碘甲烷(727.58mg,5.126mmol)，反应液在0℃下搅拌反应1小时。TLC 监测反应完全。反应液倒入饱和氯化铵溶液(30mL)中，加入乙酸乙酯(25mLx2)萃取，合并有机相,饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(洗脱液：0.024％-0.062％甲醇的二氯甲烷溶液)分离纯化得到白色固体化合物BB6(3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(840mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 327.9[M+H] +.
中间体BB7的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000048
第一步：化合物BB7-C二叔丁基(4,11-二氧-6,9-二恶英-3,12-二氮杂十四烷-1,14-二基)二氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000049
0℃下向含有化合物BB7-A 2,2'-(乙烷-1,2-二基双(氧基))二乙酸(300mg,1.7mmol)、化合物BB7-B(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(546mg,3.4mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.1g,8.5mmol)的DMF溶液中加入HATU(1.94g,5.1mmol)。反应液升至室温搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(30ml)和水(50ml)中。收集有机层，饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗 品经硅胶柱层析(用含1.5％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到白色固体化合物BB7-C二叔丁基(4,11-二氧-6,9-二恶英-3,12-二氮杂十四烷-1,14-二基)二氨基甲酸酯(480mg,61％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ1.43(s,18H),3.26-3.32(m,4H),3.41-3.45(m,4H),3.70(s,4H),4.02(s,4H).
第二步：化合物BB7 2,2'-(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(N-(2-氨基乙基)乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000050
向含有化合物BB7-C二叔丁基(4,11-二氧-6,9-二恶英-3,12-二氮杂十四烷-1,14-二基)二氨基甲酸酯(100mg)的甲醇(2ml)溶液中加入4M氯化氢-二氧六环溶液(5ml)。反应液在室温下搅拌反应3小时。TLC监测反应完全。反应液减压浓缩得到黑色油状物粗品化合物BB72,2'-(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(N-(2-氨基乙基)乙酰胺(80mg)，未经进一步纯化，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.86-2.91(m,4H),3.36-3.41(m,4H),3.66(s,4H),3.94(s,4H),8.08-8.11(m,6H).
实施例1：化合物1的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000051
第一步：化合物1 3-溴-N-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000052
将含有化合物1-A 3-溴-6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(40mg,0.172mmol)、化合物1-B甲氨盐酸盐(34.84mg,0.516mmol)和碳酸钾(83.07mg,0.602mmol)的N-甲基吡咯烷酮(1ml)溶液在100℃下搅拌反应18小时。TLC监测反应完全。反应液加水和乙酸乙酯萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得剩余物经制备TLC分离纯化(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到白色固体化合物1 3-溴-N-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(30mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 227.0[M+H] +.
实施例2：化合物2的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000053
第一步：化合物2(3-(3-氨基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000054
在室温氮气氛围下向含有化合物BB-6(530mg,1.625mmol)、化合物2-A(244.75mg,1.787mmol)和饱和碳酸钠水溶液(3ml)的1,4-二氧六环溶液中加入Pd(dppf)Cl 2-CH 2Cl 2(132.3mg,0.162mmol)。此反应在90℃下搅拌反应12小时。TLC监测显示反应完全。反应液冷至室温，加入水(20mL)和乙酸乙酯(30ml x 2)萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含0％-90％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到黄色固体化合物2(3-(3-氨基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(432mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 339.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.42(d,J＝1.2Hz,1H),7.66(s,2H),7.30(d,J＝9.2Hz,1H),7.17(t,J＝7.8Hz,1H),6.76(dd,J＝18.1,4.7Hz,2H),6.62(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),5.30(d,J＝4.9Hz,2H),3.18(s,3H),1.35(s,9H).
以下化合物的合成参照化合物2和中间体BB5或者BB6的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000055
化合物3的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000056
第一步：化合物3-C的合成参照中间体BB5第三步的合成方法
第二步：化合物3-D的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
第三步：化合物3的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000057
LC_MS:(ES +):m/z 369.8[M+H] +.
化合物4的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000058
第一步：化合物4-B的合成以化合物4-A和NIS为原料，参照中间体BB5第四步的合成方法
第二步：化合物4的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000059
LC_MS:(ES +):m/z 369.8[M+H] +.
化合物5的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000060
第一步：化合物5的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000061
LC_MS:(ES +):m/z 303.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.09(s,1H),8.00(d,J＝1.5Hz,1H),7.95(d,J＝7.7Hz,1H),7.85(d,J＝7.9Hz,1H),7.80–7.73(m,2H),7.73–7.67(m,1H),7.47(s,2H),7.21(d,J＝9.6Hz,1H),3.79(s,3H).
化合物6的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000062
第一步：化合物6的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000063
LC_MS:(ES +):m/z 403.0[M+H] +
化合物7的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000064
第一步：化合物7的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000065
LC_MS:(ES +):m/z 367.0[M+H] +.
化合物8的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000066
第一步：化合物8的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000067
LC_MS:(ES +):m/z 324.0[M+H] +.
化合物9的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000068
第一步：化合物9的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000069
LC_MS:(ES +):m/z 273.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.60–8.56(m,1H),8.06(t,J＝1.6Hz,1H),7.93–7.89(m,1H),7.87–7.83(m,2H),7.72(dd,J＝16.4,8.5Hz,2H),7.44(s,2H),7.35(ddd,J＝9.0,6.7,1.0Hz,1H),7.03(td,J＝6.8,1.1Hz,1H).
化合物10的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000070
第一步：化合物10的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000071
LC_MS:(ES +):m/z 338.0[M+H] +.
化合物11的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000072
第一步：化合物11的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000073
LC_MS:(ES +):m/z 358.0[M+H] +.
化合物12的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000074
第一步：化合物12的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000075
LC_MS:(ES +):m/z 330.0[M+H] +.
化合物13的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000076
第一步：化合物13的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000077
LC_MS:(ES +):m/z 354.0[M+H] +.
化合物14的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000078
第一步：化合物14的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000079
LC_MS:(ES +):m/z 354.0[M+H] +.
化合物15的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000080
第一步：化合物15的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000081
LC_MS:(ES +):m/z 325.0[M+H] +.
化合物16的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000082
第一步：化合物16的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000083
LC_MS:(ES +):m/z 355.0[M+H] +.
化合物17的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000084
第一步：化合物17的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000085
LC_MS:(ES +):m/z 325.0[M+H] +.
化合物18的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000086
第一步：化合物18的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000087
LC_MS:(ES +):m/z 325.0[M+H] +.
化合物19的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000088
第一步：化合物19的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000089
LC_MS:(ES +):m/z 244.0[M+H] +.
化合物20的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000090
第一步：化合物20的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000091
LC_MS:(ES +):m/z 225.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.20(dd,J＝8.4,1.1Hz,2H),7.87(s,1H),7.77(d,J＝9.7Hz,1H),7.47(dd,J＝10.7,4.9Hz,2H),7.31(dd,J＝10.5,4.3Hz,1H),7.11(d,J＝4.7Hz,1H),6.71(d,J＝9.7Hz,1H),2.85(d,J＝4.8Hz,3H).
化合物21的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000092
第一步：化合物21的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000093
LC_MS:(ES +):m/z 281.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.12(d,J＝7.4Hz,2H),7.99–7.93(m,2H),7.47(t,J＝7.8Hz,2H),7.32(t,J＝7.4Hz,1H),7.23(d,J＝9.9Hz,1H),3.77–3.72(m,4H),3.50–3.45(m,4H).
化合物22的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000094
第一步：化合物22的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000095
LC_MS:(ES +):m/z 311.1[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.37(s,1H),8.29(dd,J＝8.4,1.1Hz,2H),8.19(s,1H),8.11(d,J＝9.8Hz,1H),7.78–7.75(m,1H),7.69(d,J＝9.8Hz,1H),7.47(dd,J＝10.7,4.9Hz,2H),1.50(s,9H).
化合物23的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000096
第一步：化合物23的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000097
LC_MS:(ES +):m/z 253.0[M+H] +.
化合物24的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000098
第一步：化合物24的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000099
LC_MS:(ES +):m/z 267.1[M+H] +.
化合物25的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000100
第一步：化合物25的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000101
LC_MS:(ES +):m/z 263.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.78(s,1H),8.03(s,1H),7.88(d,J＝9.5Hz,1H),7.77(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.72(dd,J＝8.2,1.1Hz,2H),7.59(d,J＝7.5Hz,2H),7.55–7.53(m,1H).
化合物26的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000102
第一步：化合物26的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000103
LC_MS:(ES +):m/z 225.1[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.42(d,J＝7.6Hz,1H),7.63–7.60(m,3H),7.55–7.50(m,2H),7.43–7.39(m,1H),7.10(s,1H),6.71(dd,J＝7.5,2.4Hz,1H),3.85(s,3H).
化合物27的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000104
第一步：化合物27的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000105
LC_MS:(ES +):m/z 225.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.42(d,J＝7.6Hz,1H),7.63–7.60(m,3H),7.55–7.50(m,2H),7.43–7.39(m,1H),7.10(s,1H),6.71(dd,J＝7.5,2.4Hz,1H),3.85(s,3H).
化合物28的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000106
第一步：化合物28-C的合成参照中间体BB5第三步的合成方法
第二步：化合物28的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000107
LC_MS:(ES +):m/z 370.9[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.72(s,1H),7.66(dd,J＝8.9,1.2Hz,1H),7.50(dd,J＝7.1,1.1Hz,1H),6.92(dd,J＝8.9,7.1Hz,1H).
化合物29的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000108
第一步：化合物29-C的合成参照中间体BB5第三步的合成方法
第二步：化合物29-D的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
第三步：化合物29的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000109
LC_MS:(ES +):m/z 321.0[M+H] +.
化合物30的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000110
第一步：化合物30-C的合成参照中间体BB5第三步的合成方法
第二步：化合物30-D的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
第三步：化合物30的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000111
LC_MS:(ES +):m/z 321.0[M+H] +.
化合物31的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000112
第一步：化合物31的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000113
LC_MS:(ES +):m/z 320.9[M+H] +.
化合物32的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000114
第一步：化合物32的合成参照中间体BB5第三步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000115
LC_MS:(ES +):m/z 204.1[M+H] +.
化合物33的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000116
第一步：化合物32的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000117
LC_MS:(ES +):m/z 283.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.62(s,1H),7.58(d,J＝9.8Hz,1H),7.49(d,J＝1.9Hz,1H),7.41(dd,J＝9.8,2.2Hz,1H),3.77–3.74(m,4H),3.12–3.07(m,4H).
化合物34的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000118
第一步：化合物34的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000119
LC_MS:(ES +):m/z 280.1[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.02(s,1H),7.76(d,J＝1.3Hz,1H),7.69(d,J＝7.1Hz,2H),7.67(s,1H),7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.45(t,J＝7.4Hz,2H),3.80–3.69(m,4H),3.10–2.99(m,4H).
化合物35的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000120
第一步：化合物35的合成参照中间体BB5第三步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000121
LC_MS:(ES +):m/z 217.1[M+H] +.
化合物36的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000122
第一步：化合物36的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000123
LC_MS:(ES +):m/z 295.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.59(s,1H),7.51(d,J＝9.8Hz,1H),7.45(d,J＝1.8Hz,1H),7.35(dd,J＝9.8,2.2Hz,1H),3.13–3.06(m,4H),2.48(d,J＝5.9Hz,4H),2.23(s,3H).
化合物37的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000124
第一步：化合物37的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000125
LC_MS:(ES +):m/z 293.1[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.75(d,J＝1.7Hz,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,2H),7.64(s,1H),7.56(dd,J＝17.8,10.2Hz,3H),7.43(t,J＝7.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.5Hz,1H),3.08(s,4H),2.58(s,4H),2.29(s,3H).
化合物38的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000126
第一步：化合物38的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000127
LC_MS:(ES +):m/z 297.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ7.95(s,1H),7.67(d,J＝1.2Hz,1H),7.62(d,J＝9.5Hz,1H),7.40(d,J＝9.5Hz,1H),2.94(t,J＝4.7Hz,4H),2.51(d,J＝8.9Hz,4H),2.25(s,3H).
化合物39的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000128
第一步：化合物39的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000129
LC_MS:(ES +):m/z 293.1[M+H] +.
化合物40的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000130
第一步：化合物40的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000131
LC_MS:(ES +):m/z 339.1[M+H] +.
化合物41的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000132
第一步：化合物41的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000133
LC_MS:(ES +):m/z 340.1[M+H] +.
化合物42的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000134
第一步：化合物42的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000135
LC_MS:(ES +):m/z 266.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,CDCl 3)δ8.27(s,1H),7.83(s,1H),7.60–7.47(m,6H),7.18(d,J＝8.0Hz,1H),3.27(s,3H),1.95(s,3H).
化合物43的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000136
第一步：化合物43的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000137
LC_MS:(ES +):m/z 271.9[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.68(s,1H),7.86(s,1H),7.74(d,J＝9.2Hz,1H),7.70(d,J＝5.1Hz,1H),7.60(s,1H),7.36(d,J＝9.3Hz,1H),7.27(dd,J＝5.1,3.6Hz,1H),3.16(s,3H),1.83(s,3H).
化合物44的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000138
第一步：化合物44的合成以BB5-F和NIS为原料参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000139
LC_MS:(ES +):m/z 360.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.63(s,1H),8.80(s,1H),7.63(s,1H),7.58–7.45(m,1H),7.23(dd,J＝9.6,1.9Hz,1H),1.50(s,9H).
化合物45的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000140
第一步：化合物45的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000141
LC_MS:(ES +):m/z 295.2[M+H] +.
化合物46的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000142
第一步：化合物46的合成参照化合物2第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000143
LC_MS:(ES +):m/z 339.1[M+H] +.
实施例3：化合物47的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000144
第一步：化合物47(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000145
将含有化合物47(40mg,0.118mmol)、化合物47-A(15.85mg,0.118mmol)、HATU(44.84mg,0.118mmol)和DIPEA(30.44mg,0.236mmol)的DMF(2mL)溶液在室温下搅拌反应12小时。TLC监测显示反应完全。反应混合物加水(20ml)和乙酸乙酯(30ml x 3)萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经Pre-TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物47(3-(3-(2-(2-甲 氧基乙氧基)乙酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 455.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ9.08(s,1H),8.33(s,1H),7.85(d,J＝33.6Hz,3H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.49(t,J＝7.7Hz,1H),7.29(s,1H),4.12(s,2H),3.78(s,2H),3.63(s,2H),3.47(s,3H),3.27(s,3H),1.42(s,9H).
以下化合物参照化合物47的合成,使用相应的羧酸：
化合物48的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000146
第一步：化合物48的合成参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000147
LC_MS:(ES +):m/z 464.2[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.22(s,1H),8.47(d,J＝1.3Hz,1H),7.92(s,1H),7.75(s,1H),7.62(t,J＝9.3Hz,2H),7.48(t,J＝7.9Hz, 1H),7.35–7.28(m,2H),3.43(s,4H),3.20(s,3H),2.64–2.57(m,3H),1.98(s,1H),1.95(d,J＝11.4Hz,2H),1.83(s,2H),1.36(s,9H).
化合物49的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000148
第一步：化合物49的合成参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000149
LC_MS:(ES +):m/z 451.2[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.07(s,1H),8.47(d,J＝1.2Hz,1H),7.91(s,1H),7.75(s,1H),7.63(dd,J＝11.8,9.0Hz,2H),7.47(s,1H),7.31(d,J＝6.6Hz,2H),3.92–3.88(m,2H),3.20(s,3H),3.16(d,J＝4.9Hz,2H),2.63–2.58(m,1H),1.73–1.64(m,4H),1.36(s,9H).
化合物50的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000150
第一步：化合物50的合成参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000151
LC_MS:(ES +):m/z 455.2[M+H] +.
化合物51的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000152
第一步：化合物51的合成以化合物41和化合物51-A为原料，参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000153
LC_MS:(ES +):m/z 456.2[M+H] +.
化合物52的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000154
第一步：化合物52的合成参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000155
LC_MS:(ES+):m/z 550.3[M+H]+.
化合物53的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000156
第一步：化合物53-C的合成参照中间体BB5第三步的合成方法
第二步：化合物53-D的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
第三步：化合物53-F的合成参照化合物2第一步的合成方法
第四步：化合物53的合成以化合物53-F和化合物53-G为原料，参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000157
LC_MS:(ES+):m/z 340.1[M+H]+.
化合物54的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000158
第一步：化合物54的合成以化合物53-F和化合物54-A为原料参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000159
LC_MS:(ES+):m/z 336.4[M+H]+.
化合物55的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000160
第一步：化合物55-A 5-(叔丁氧基)-2-硝基吡啶
Figure PCTCN2022114815-appb-000161
0℃氮气氛围下向含有化合物55-A(450mg,3.17mmol)的四氢呋喃溶液中加入叔丁醇钾(426.5mg,3.80mmol)。反应液在20℃下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含10％石油醚的乙酸乙酯溶液洗脱)分离纯化得到无色油状物化合物55-A(253mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 197.1[M+H]+.
第二步：化合物55-C的合成参照中间体BB5第二步的合成方法
第三步：化合物55-E的合成参照中间体BB5第三步的合成方法
第四步：化合物55-F的合成参照中间体BB5第四步的合成方法
第五步：化合物55-H的合成参照化合物2第一步的合成方法
第六步：化合物55的合成以化合物55-H和化合物55-I为原料参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000162
LC_MS:(ES+):m/z 394.2[M+H]+.
化合物56的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000163
第一步：化合物56的合成以化合物45和化合物56-A为原料参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000164
LC_MS:(ES +):m/z 411.1[M+H] +.
化合物57的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000165
第一步：化合物57的合成以化合物45和化合物57-A为原料参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000166
LC_MS:(ES +):m/z 407.1[M+H] +.
化合物58的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000167
第一步：化合物58的合成以化合物46和化合物58-A为原料参照化合物47第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000168
LC_MS:(ES +):m/z 441.2[M+H] +.
实施例4:化合物59,化合物60的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000169
第一步：化合物59-C的合成参照化合物2第一步的合成方法
第二步：化合物59-D((3-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000170
向含有化合物59-C(400mg,1.14mmol)、三乙胺(230.3mg,1.37mmol)和4-二甲氨基吡啶(55.6mg,0.45mmol)的四氢呋喃(6ml)溶液中加入丁二酸二叔丁酯(298.1mg,1.37mmol)，反应液在室温下搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液加水和二氯甲烷萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得剩余物经硅胶柱层析(用含2.4％-4.7％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物59-D((3-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(370mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 453.9[M+H] +
第三步：化合物59-E叔丁基((3-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺酰基)(甲基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000171
0℃氮气下向含有氢化钠(25.7mg,0.643mmol,60％分散在矿物油中)的N,N-二甲基甲酰胺溶液中加入化合物59-D(290mg,0.643mmol)和碘甲烷(182.55mg,1.29mmol)，反应液在0℃下搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液加水和乙酸乙酯萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得剩余物经硅胶柱层析(用含1.9％-4.7％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物59-E叔丁基((3-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺酰基)(甲基)氨基甲酸酯(220mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 465.9[M+H] +.
第四步：化合物59叔丁基甲基((3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺酰基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000172
室温和氮气气氛下向含有化合物59-E(140mg,0.3mmol)、化合物59-F甲胺盐酸盐(101.28mg,1.5mmol)、碳酸铯(688.8mg,2.1mmol)的1,4-二氧六环(4ml)溶液中加入BrettPhos-Pd-G3(54.39mg,0.2mmol)，反应混合物氮气置换三次，110℃下搅拌反应48小时。TLC监测反应完全。反应液加水和二氯甲烷萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到褐色固体化合物59叔丁基甲基((3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺酰基)氨基甲酸酯(15mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 417.0[M+H] +.
第五步：化合物60N-甲基-3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000173
向含有化合物59叔丁基甲基((3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺酰基)氨基甲酸酯(15mg,0.036mmol)的甲醇(250ul)溶液中加入盐酸/二氧六环(1ml,4.0mol/L)溶液，反应混合物在室温下搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液减压浓缩，得到褐色固体化合物60N-甲基-3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺酰胺(8mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 317.0[M+H] +.
实施例5:化合物61和化合物62的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000174
第一步：化合物61-B 3-碘-6-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure PCTCN2022114815-appb-000175
向含有化合物61-A(4.85g,29.73mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(30ml)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(8g,35.67mmol)。反应混合物在室温下搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应混合物室温下边搅拌边加水(30ml)，大量的白色固体生成，过滤，收集固体，干燥，得到白色固体化合物61-B 3-碘-6-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶(8g，粗品)。
第二步：化合物61-C 3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000176
室温氮气下向含有化合物61-B(500mg,1.55mmol)、氯化铵(1.85g,34.6mmol)的乙醇(35ml)和水(10ml)的溶液中加入铁粉(1.93g,34.6mmol)。反应混合物在室温下搅拌反应1小时。TLC监测反应完全。反应混合物通过硅藻土过滤，滤液加水和二氯甲烷萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥、减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(用含9％二氯甲烷的乙酸乙酯洗脱)分离纯化得到褐色固体化合物61-C 3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(1g)。
LC_MS:(ES +):m/z 259.8.0[M+H] +.
第三步：化合物61-D(3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000177
向含有化合物61-C(1g,3.86mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.49g,11.58mmol)、4-二甲氨基吡啶(47.1mg,0.39mmol)的二氯甲烷(15ml)和N,N-二甲基甲酰胺(4ml)溶液中加入丁二酸二叔丁酯(925.6mg,4.25mmol)，反应混合物在室温下搅拌反应18小时。TLC监测反应完全。反应混合物加水和二氯甲烷萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(用含50％-100％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到褐色固体化合物61-D(3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(330mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 359.9[M+H] +.
第四步：化合物61-E(3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000178
0℃氮气下向含有氢化钠(36.76mg,0.92mmol,60％分散在矿物油中)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液中加入化合物61-D(330mg,0.92mmol)和碘甲烷(260.94mg,1.84mmol)，反应混合物在0℃下搅拌反应3小时。TLC监测反应完全。反应液加水和乙酸乙酯萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含2.4％-7.7％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到褐色固体化合物61-E(3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(270mg).
LC_MS:(ES +):m/z 373.9[M+H] +.
第四步：化合物61甲基(3-(3-氨磺酰基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000179
室温氮气下向含有化合物61-E(50mg,0.134mmol)、化合物61-F(94.83mg,0.335mmol)、碳酸钠(42.61mg,0.402mmol)的1，4-二氧六环(2ml)和水(600μl)溶液中加入Pd(PPh 3) 4(10.84mg,0.01mmol)，反应混合物氮气置换三次，90℃下搅拌反应18小时。TLC监测反应完 全。反应液加水和二氯甲烷萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含8.3％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到白色固体化合物61甲基(3-(3-氨磺酰基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(27mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 403.0[M+H] +.
第五步：化合物62 3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000180
将含有化合物61(24mg,0.035mmol)的甲醇(250μl)和盐酸/二氧六环(1ml,4.0mol/L)的溶液在室温下搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液减压浓缩得到黄色固体化合物62 3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺酰胺(16.7mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 302.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.23(t,J＝1.6Hz,1H),8.12(ddd,J＝7.9,1.8,1.1Hz,1H),8.04(s,1H),7.94(dd,J＝5.3,4.1Hz,1H),7.83(t,J＝7.8Hz,1H),7.74(d,J＝9.7Hz,1H),7.56(dd,J＝9.7,2.0Hz,1H),7.49(d,J＝1.9Hz,1H),2.76(s,3H).
实施例6：化合物63的合成路线：
Figure PCTCN2022114815-appb-000181
第一步：化合物63 4-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000182
将含有化合物6(40mg,0.099mmol)的甲醇(0.5ml)和盐酸/二氧六环(1ml，4.0mol/L)溶液在室温下搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应液减压浓缩，得到黄色固体化合物63(30mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 303.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.16(d,J＝7.4Hz,2H),8.09(s,1H),7.94(d,J＝7.8Hz,2H),7.78(d,J＝9.3Hz,1H),7.62(d,J＝10.2Hz,2H),2.80(s,3H).
以下化合物参照化合物63的合成:
化合物64的合成路线
Figure PCTCN2022114815-appb-000183
第一步：化合物64的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000184
LC_MS:(ES +):m/z 267.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.22(s,1H),8.13–8.09(m,1H),8.04(s,1H),7.93(d,J＝7.7Hz,1H),7.82–7.75(m,2H),7.70–7.57(m,2H),2.80(s,3H).
化合物65的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000185
第一步：化合物65的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000186
LC_MS:(ES +):m/z 224.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.98(s,1H),7.79(d,J＝9.6Hz,1H),7.73(d,J＝7.2Hz,1H),7.68–7.65(m,1H),7.64(d,J＝4.0Hz,1H),7.62(d,J＝2.7Hz,1H),2.80(s,1H).
化合物66的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000187
第一步：化合物66的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000188
LC_MS:(ES +):m/z 255.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.09(d,J＝1.9Hz,1H),8.79(s,1H),7.93–7.87(m,1H),7.80(d,J＝9.6Hz,1H),7.65(d,J＝7.4Hz,1H),7.51(d,J＝2.9Hz,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,1H),4.04(s,3H),2.74(s,3H).
化合物67的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000189
第一步：化合物67的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000190
LC_MS:(ES +):m/z 238.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.15(s,1H),7.82(d,J＝9.6Hz,1H),7.54(d,J＝2.1Hz,1H),7.52–7.48(m,3H),7.43(d,J＝7.3Hz,1H),6.87(d,J＝1.9Hz,1H),2.58(s,3H),2.18(s,3H).
化合物68的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000191
第一步：化合物68的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000192
LC_MS:(ES +):m/z 257.9[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.25(s,1H),7.83(d,J＝9.6Hz,1H),7.78(d,J＝8.1Hz,1H),7.69(t,J＝7.3Hz,2H),7.61(t,J＝7.4Hz,1H),7.55(dd,J＝9.7,1.9Hz,1H),6.97(s,1H),2.60(s,3H).
化合物69的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000193
第一步：化合物69的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000194
LC_MS:(ES +):m/z 229.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.30(s,1H),7.89(dd,J＝5.1,1.1Hz,1H),7.79(dd,J＝9.6,0.4Hz,1H),7.67(dd,J＝3.6,1.1Hz,1H),7.54(dd,J＝9.6,2.1Hz,1H),7.50(d,J＝1.8Hz,1H),7.34(dd,J＝5.1,3.6Hz,1H),2.68(s,3H).
化合物70的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000195
第一步：化合物70的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000196
LC_MS:(ES +):m/z 254.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.20(s,1H),7.78(d,J＝9.6Hz,1H),7.56–7.49(m,2H),7.47(d,J＝1.6Hz,1H),7.31–7.26(m,2H),7.17–7.12(m,1H),3.83(s,3H),2.66(s,3H).
化合物72的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000197
第一步：化合物72的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000198
LC_MS:(ES +):m/z 254.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),7.78(d,J＝9.6Hz,1H),7.65–7.62(m,1H),7.52–7.51(m,1H),7.36(d,J＝1.8Hz,1H),7.19–7.14(m,2H),3.84(s,3H),2.64(s,3H).
化合物73的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000199
第一步：化合物73的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000200
LC_MS:(ES +):m/z 225.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.11(s,1H),8.93(d,J＝4.3Hz,1H),8.54(d,J＝7.9Hz,1H),8.38(s,1H),7.95(dd,J＝7.8,5.3Hz,1H),7.86(d,J＝9.6Hz,1H),7.59(dd,J＝9.7,2.0Hz,1H),7.53(d,J＝1.6Hz,1H),2.70(s,3H).
化合物74的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000201
第一步：化合物74的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000202
LC_MS:(ES +):m/z 225.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.98(d,J＝6.6Hz,2H),8.64(s,1H),8.26(d,J＝6.6Hz,2H),7.85(d,J＝9.7Hz,1H),7.74(d,J＝1.7Hz,1H),7.59(dd,J＝9.7,2.0Hz,1H),2.72(s,3H).
化合物75的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000203
第一步：化合物75的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000204
LC_MS:(ES +):m/z 286.1[M+H] +.
化合物76的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000205
第一步：化合物76的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000206
LC_MS:(ES +):m/z 225.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.21(d,J＝1.9Hz,1H),8.83(s,1H),8.77(d,J＝4.7Hz,1H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),8.03–7.98(m,1H),7.82(d,J＝9.6Hz,1H),7.57(dd,J＝9.6,2.1Hz,1H),7.49–7.43(m,1H),2.74(s,3H).
化合物77的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000207
第一步：化合物77的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000208
LC_MS:(ES +):m/z 355.1[M+H] +.
化合物78的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000209
第一步：化合物78的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000210
LC_MS:(ES +):m/z 619.2[M+H] +.
化合物79的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000211
第一步：化合物79的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000212
LC_MS:(ES +):m/z 663.1[M+H] +.
实施例7：化合物80和化合物81的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000213
第一步：化合物80-B(3-(3-氨磺酰基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000214
向含有化合物BB5(100mg,320.34μmol)和化合物80-A(272mg,961.02μmol)的1,4-二氧六环(3mL)/水(1mL)溶液中加入Pd(PPh 3) 4(18.51mg,16.02μmol)和碳酸钠(102mg,961.02μmol)。反应液在氮气90℃下搅拌反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经制备TLC分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1,Rf＝0.5)得到黄色固体化合物80-B(3-(3-氨磺酰基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 389.0[M+H] +.
第二步：化合物80-C(3-(3-(N-(叔丁氧基羰基)氨磺酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000215
向含有化合物80-B(100mg,257.44μmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三乙胺(78.15mg,772.32μmol)、4-二甲氨基吡啶(3.2mg,25.74μmol)和二碳酸二叔丁酯(56.2mg,257.44μmol)。反应液在20℃下搅拌反应12小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)监测化合物80-B(Rf＝0.5)反应完全和有一个新的点(Rf＝0.6)生成。反应液加水(20mL)稀释，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经制备TLC分离纯化(二氯甲烷:甲醇＝10:1,Rf＝0.6)得到无色油状物化合物80-C(3-(3-(N-(叔丁氧基羰基)氨磺酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(54mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 489.0[M+H] +.
第三步：化合物80二叔丁基(E)-7-氧杂-3-硫-4,10-二氮杂-1(3,6)-咪唑[1,2-a]吡啶-2(1,3)-苯环癸烷-4,10-二羧酸盐3,3-二氧化物
Figure PCTCN2022114815-appb-000216
向含有化合物80-C(44mg,90.06μmol)、碳酸钾(62mg,450.60μmol)的乙腈(20mL)溶液中加入化合物80-D(147mg,633.84μmol)。反应液在80℃下搅拌反应12小时。LCMS监测到大部分产品生成。 反应液加水(30mL)稀释，乙酸乙酯(30mLx2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得粗品经制备TLC分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0:1,Rf＝0.8)得到黄色固体化合物80二叔丁基(E)-7-氧杂-3-硫-4,10-二氮杂-1(3,6)-咪唑[1,2-a]吡啶-2(1,3)-苯环癸烷-4,10-二羧酸盐3,3-二氧化物(34mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 559.1[M+H] +.
第四步：化合物81(E)-7-氧杂-3-硫杂-4,10-二氮杂-1(3,6)-咪唑并[1,2-α]吡啶-2(1,3)-苯并环癸烷3,3-二氧化物
Figure PCTCN2022114815-appb-000217
向含有化合物80(28mg,50.12μmol)的甲醇(1.5mL)溶液中加入盐酸/二氧六环(1.5mL)溶液。反应液在20℃下搅拌反应1小时。LCMS监测反应完全。反应液浓缩得到黄色固体化合物81(10.3mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 359.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.31(d,J＝9.0Hz,2H),8.03–7.91(m,3H),7.85(d,J＝25.9Hz,4H),7.53(d,J＝9.6Hz,1H),7.37–7.04(m,1H),3.78–3.59(m,4H),3.29–3.19(m,4H).
实施例8：化合物82合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000218
第一步：化合物82-C异氰苯
Figure PCTCN2022114815-appb-000219
向含有化合物82-A(400mg,3.30mmol)和三乙胺(2mL)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入化合物82-B(454.2mg,1.65mmol)。反应液在0℃搅拌反应3小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)监测有一个新点(Rf＝0.6)生成。反应混合物倒入冰水中，二氯甲烷(30mLx2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经硅胶柱层析(SiO 2,石油醚:乙酸乙酯＝5:1～1:1,Rf＝0.6)分离纯化得到黄色油状物化合物82-C(38mg)。
第二步：化合物82 6-甲氧基-N-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000220
将含有化合物82-D(38mg,306.10μmol)和化合物82-E(34mg,367.21μmol)的1,2-二氯乙烷(2ml)/甲醇(1ml)溶液在20℃下搅拌反应30分钟；然后将化合物82-C(38mg,367.32μmol)加入反应液中，混合反应液在20℃下搅拌反应12小时；最后往混合反应液加入二氯 甲烷和碳酸氢钠固体并在20℃搅拌15分钟。LCMS监测到产物生成。反应混合物通过硅藻土过滤，浓缩滤液，加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗品经制备TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1,Rf＝0.5)和制备TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:2.5,Rf＝0.3)分离纯化。所得化合物82 6-甲氧基-N-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-胺(34mg,367.21μmol)为褐色油状物。
LC_MS:(ES +):m/z 240.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,CDCl 3)δ7.49(d,J＝10.3Hz,1H),7.40(d,J＝1.9Hz,1H),7.27(s,1H),7.21(dd,J＝8.4,7.5Hz,2H),7.06(s,1H),6.99(d,J＝9.8Hz,1H),6.87(d,J＝7.3Hz,1H),6.68–6.50(m,2H),3.74(s,3H).
实施例9：化合物83、化合物84和化合物85的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000221
第一步：化合物83(3-(环己-1-烯-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000222
氮气氛围下向含有中间体BB6(90mg,275.94μmol)和化合物83-A(244.75mg,1.787mmol)的1,4-二氧六环(6ml)和水(1mL)的溶液中加入Pd(PPh 3) 4(16mg,13.80μmol)和碳酸钠(87.7mg,827.73μmol)。反应液在氮气保护下加热至90℃搅拌反应12小时。TLC检测反应完全。反应混合物加水(10ml)和乙酸乙酯(10ml x 2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(用含0％-90％乙酸乙酯的石油醚洗脱)得到黄色固体化合物83(3-(环己-1-烯-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(108mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 328.1[M+H] +.
第二步：化合物84(3-环己基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000223
将化合物83(88mg,268.8μmol)溶于甲醇(5mL)中，然后加入钯碳(10mg)。反应液在氢气氛围下20℃搅拌48小时。TLC检测反应完全。反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩，所得剩余物经制备TLC分离纯化(用含50％乙酸乙酯的石油醚洗脱)得到棕色油状物化合物84(3-环己基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(25mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 330.1[M+H] +.
第三步：化合物85 3-环己基-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000224
将化合物84(20mg,60.71μmol)溶于甲醇(1mL)中，然后加入盐酸的二氧六环溶液(1mL,4M)。反应液在室温下搅拌1小时。LC-MS检测反应完全。将反应液减压浓缩后得到棕色固体化合物85 3-环己基-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(9.9mg)
LC_MS:(ES +):m/z 230.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.80(d,J＝5.6Hz,1H),7.68(t,J＝6.6Hz,1H),7.62(s,1H),7.47–7.44(m,1H),7.44–7.40(m,1H),3.11(d,J＝11.4Hz,1H),2.74(s,2H),2.01(t,J＝10.1Hz,2H),1.84–1.70(m,3H),1.50(dd,J＝25.1,12.4Hz,2H),1.41–1.29(m,3H).
实施例10：化合物86和化合物87的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000225
第一步：化合物86-A 3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000226
将中间体BB5(100mg,320.34μmol)溶于盐酸的二氧六环溶液(5mL,4M)中。反应液在室温下搅拌1小时。LC-MS检测反应完全。将反应液减压浓缩后得到白色固体化合物86-A(80mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 211.9[M+H] +.
第二步：化合物86 3-溴-N-(四氢呋喃-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000227
将化合物86-A(48mg,226.36μmol)和化合物86-B(29.2mg,339.54μmol)以及一滴醋酸溶于甲醇(1mL)中，并加入NaBH 3CN(28.5mg,452.72μmol)和4A分子筛(50mg)。反应液在20℃下搅拌12小时。TLC检测反应完全。将反应液过滤后浓缩，加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(用含10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到黄色油状物化合物86 3-溴-N-(四氢呋喃-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(45mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 281.9[M+H] +.
第三步：化合物87 3-苯基-N-(四氢呋喃-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000228
氮气氛围下向含有化合物86(36mg,127.60μmol)和化合物87-A(31.1mg,255.19μmol)的1,4-二氧六环(3ml)和水(1mL)的溶液中加入Pd(PPh 3) 4(6.1mg,6.38μmol)和碳酸钠(40.6mg,382.79μmol)。反应液在氮气保护下加热至90℃搅拌反应30分钟。LCMS检测反应未进行完全，向反应液中继续加入化合物87-A苯基硼酸(31.1mg,255.19μmol)、四(三苯基膦)钯(6.1mg,6.38μmol)和碳酸钠(40.6mg,382.79μmol)。反应液在氮气保护下加热至100℃搅拌反应1.5小时。向反应混合物中加水(10ml)和乙酸乙酯(10ml x 2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析分离纯化(用含10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到黄色油状物化合物87 3-苯基-N-(四氢呋喃-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(11.6mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 280.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.72–7.39(m,9H),7.18(dd,J＝38.7,9.3Hz,1H),4.06–3.53(m,5H),2.31–2.06(m,1H),1.90(s,1H).
实施例11：化合物88和化合物89的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000229
第一步：化合物88-C(R)-3-((6-硝基吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000230
向含有化合物88-A(1.0g,4.93mmol)和化合物88-B(986.6mg,4.93mmol)的甲苯(20mL)溶液中加入Pd(OAc) 2(110.6mg,492.62μmol)，XantPhos(285mg,492.62μmol)，碳酸铯(4.82g,14.78mmol)。反应液在100℃氮气下搅拌反应4小时。TLC(PE:EtOAc＝1:1)监测化合物88-A(Rf＝0.8)反应完，有一个新点(Rf＝0.3)生成。反应液加水(50mL)稀释，乙酸乙酯(50mLx2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。所得剩余物经硅胶柱层析(SiO 2,石油醚:乙酸乙酯＝2:1-1:2,Rf＝0.3)分离纯化得到黄色固体化合物88-C(R)-3-((6-硝基吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.37g)。
LC_MS:(ES +):m/z 323.0[M+Na] +.
第二步：化合物88-D(R)-3-(((叔丁氧羰基)(6-硝基吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000231
向含有化合物88-C(1.32g,4.09mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.07g,4.91mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.59g,12.28mmol)和4-二甲氨基吡啶(50mg,409.47μmol)。反应液在40℃下搅拌反应12小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)显示大部分化合物88-C(Rf＝0.2)反应完，有一个新点(Rf＝0.6)生成。反应液加水(50mL)稀释，二氯甲烷(50mLx2)萃取。合并的有机层经饱和食盐水(100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(SiO 2,石油醚:乙酸乙酯＝4:1～2:1)分离纯化得到黄色固体化合物88-D(R)-3-(((叔丁氧羰基)(6-硝基吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.4g)。
LC_MS:(ES +):m/z 445.0[M+Na] +.
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.43(d,J＝2.3Hz,1H),8.34(dd,J＝8.6,0.4Hz,1H),8.01(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),4.36–4.23(m,1H),4.04(t,J＝11.1Hz,1H),3.94(d,J＝13.1Hz,1H),2.81(s,1H),2.56(s,1H),2.06–1.85(m,1H),1.81–1.62(m,1H),1.53(ddd,J＝16.8,8.5,4.0Hz,1H),1.46(s,8H),1.41(s,9H).
第三步：化合物88-E(R)-3-((6-氨基吡啶-3-基)(叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000232
向含有化合物88-D(1.3g,3.08mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入Pd/C(130mg)。反应液在20℃氢气球下搅拌反应12小时。LCMS 监测反应完全。反应液通过硅藻土过滤。滤液浓缩。剩余物不经纯化直接用于下一步反应。由此得到褐色固体化合物88-E(R)-3-((6-氨基吡啶-3-基)(叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g)。
LC_MS:(ES +):m/z 393.1[M+H] +.
第四步：化合物88-G(R)-3-(((叔丁氧羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000233
将含有化合物88-E(300mg,764.33μmol)和化合物88-F(300mg,1.53mmol,40％wt水溶液)的乙醇(10mL)溶液在80℃下搅拌反应15小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)监测化合物88-E(Rf＝0.6)反应完全，有一个新点(Rf＝0.3)生成。反应液浓缩，然后加乙酸乙酯(30mL)稀释，用碳酸氢钠溶液调节pH＝9。收集有机层，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(SiO 2,石油醚:乙酸乙酯＝1:1-0:1,Rf＝0.3)分离纯化得到褐色油状物化合物88-G(R)-3-(((叔丁氧羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(230mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 417.1[M+H] +.
第五步：化合物88-H叔丁基(R)-3-((3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-甲酸
Figure PCTCN2022114815-appb-000234
向含有化合物88-G(R)-3-(((叔丁氧羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.48mmol)的二氯甲烷(6ml)溶液中加入N-溴代丁二酰亚胺(85.57mg,0.48mmol)。反应液在室温下搅拌反应1小时。TLC监测反应完全。反应混合物减压浓缩，所得剩余物经硅胶柱层析(用含0％-50％乙酸乙酯的石油醚洗脱)得到黄色固体化合物88-H叔丁基(R)-3-((3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-甲酸(200mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 495.0[M+H]+.
第六步：化合物88叔丁基(R)-3-((叔丁氧基羰基)(3-(3-氨磺酰基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)哌啶-1-甲酸
Figure PCTCN2022114815-appb-000235
室温氮气下向含有化合物88-H(100mg,0.202mmol)、化合物88-I(142.88mg,0.504mmol)和碳酸钠(64.23mg,0.606mmol)的1,4-二氧六环(3ml)和水(1ml)的溶液中加入Pd(PPh 3) 4(16.34mg,0.0141mmol)，反应混合物氮气置换三次，90℃下搅拌反应6小时。TLC监测反应 完全。反应混合物加水和乙酸乙酯萃取。合并有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物88叔丁基(R)-3-((叔丁氧基羰基)(3-(3-氨磺酰基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)哌啶-1-甲酸(51mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 572.1[M+H]+.
第七步：化合物89(R)-3-(6-(哌啶-3-基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000236
向含有化合物88(50mg,0.0848mmol)的甲醇(2ml)溶液中加入盐酸/二氧六环(2ml,4.0mol/L)溶液，反应混合物在室温下搅拌反应6小时。TLC监测反应完全。反应液减压浓缩得到黄色固体化合物89(R)-3-(6-(哌啶-3-基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺酰胺(39.5mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 372.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.98(s,2H),8.29(s,1H),8.13(s,1H),7.97(dd,J＝17.8,7.9Hz,2H),7.83(dd,J＝15.6,8.5Hz,2H),7.74(s,1H),7.58(d,J＝5.0Hz,3H),6.62(s,1H),3.66(dd,J＝13.7,5.3Hz,2H),3.14(s,1H),2.87(s,1H),2.69(d,J＝9.8Hz,1H),1.94–1.81(m,2H),1.72(d,J＝10.4Hz,1H),1.52(d,J＝10.1Hz,1H).
以下化合物参照化合物89的合成：
化合物90的合成路线
Figure PCTCN2022114815-appb-000237
第一步：化合物90-C的合成参照化合物89第一步的合成方法
第二步：化合物90-D的合成参照化合物89第二步的合成方法
第三步：化合物90-E的合成参照化合物89第三步的合成方法
第四步：化合物90-G的合成参照化合物89第四步的合成方法
第五步：化合物90-H的合成参照化合物89第五步的合成方法
第六步：化合物90-C的合成参照化合物89第六步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000238
LC_MS:(ES +):m/z 386.2[M+H] +.
实施例12：化合物91的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000239
第一步：化合物91N-甲基-N-(3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)甲磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000240
0℃氮气下向含有化合物65N-甲基-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(65mg,0.291mmol)和三乙胺(32.32mg,0.32mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入化合物91-A甲基磺酰氯(36.65mg,0.32mmol)，反应混合物由0℃升至室温搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应液加水和二氯甲烷萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC分离纯化得到白色固体化合物91N-甲基-N-(3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)甲磺酰胺(15mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 302.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.62(s,1H),7.94(s,1H),7.78(s,3H),7.68(s,2H),7.56(s,2H),3.38(s,3H),3.15(s,3H).
实施例13：化合物92的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000241
第一步：化合物92N-(3-(2-氯苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000242
0℃氮气下向含有化合物68 3-(2-氯苯基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(70mg,0.271mmol)和三乙胺(30.3mg,0.3mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入化合物92-A乙酰氯(24.45mg,0.3mmol)，反应混合物由0℃升至室温搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液加水和二氯甲烷萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC分离纯化得到褐色固体化合物92N-(3-(2-氯苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙酰胺(30mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 300.0[M+H] +.
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.24(s,1H),7.79–7.74(m,2H),7.69(dd,J＝7.9,1.2Hz,1H),7.61(d,J＝7.3Hz,1H),7.57(dd,J＝7.5,1.9Hz,1H),7.54(dd,J＝5.3,1.8Hz,1H),7.51(dd,J＝7.4,1.4Hz,1H),7.38(d,J＝9.7Hz,1H),3.10(s,3H),1.81(s,3H).
以下化合物参照化合物92的合成：
化合物93的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000243
第一步：化合物93的合成参照化合物92第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000244
LC_MS:(ES +):m/z 286.0[M+H] +.
实施例14：化合物94的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000245
第一步：化合物94-C 3-溴-N,N-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000246
将含有化合物94-A(40mg,0.172mmol)、化合物94-B甲胺盐酸盐(17.42mg,0.258mmol)和三乙胺(52.21mg,0.516mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)的溶液在110℃下搅拌反应48小时。TLC监测反应完 全。反应液加水和乙酸乙酯萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC分离纯化(用含3.22％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到褐色固体化合物94-C 3-溴-N,N-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(14mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 240.9[M+H] +.
第二步：化合物94N,N-二甲基-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000247
室温氮气氛围下向含有化合物94-C 3-溴-N,N-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(14mg,0.058mmol)、化合物94-D苯硼酸(7.79mg,0.069mmol)和饱和碳酸钠溶液(0.5ml)的1,4-二氧六环(1ml)溶液中加入Pd(dppf)Cl 2-CH 2Cl 2(4.74mg,0.0058mmol)，反应混合物氮气置换三次，80℃下搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应混合物冷却至室温，加水和乙酸乙酯萃取。合并有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到白色固体化合物94N,N-二甲基-3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(6mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 239.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.18(dd,J＝8.4,1.1Hz,2H),7.94(s,1H),7.89(d,J＝10.0Hz,1H),7.46(dd,J＝10.7,4.8Hz,2H),7.31(d,J＝7.4Hz,1H),7.11(d,J＝10.0Hz,1H),3.09(s,6H).
实施例15：化合物95的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000248
第一步：化合物95叔丁基甲基(3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000249
0℃氮气下向含有化合物22(18.5mg,0.0597mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入氢化钠(2.39mg,0.0597mmol,60％分散在矿物油中)和碘甲烷(16.89mg,0.119mmol)加入反应液中；混合反应物由0℃升温至室温搅拌反应14小时。TLC监测反应完全。反应液加水和乙酸乙酯萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到浅黄色固体化合物95叔丁基甲基(3-苯基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)氨基甲酸酯(7mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 325.1[M+H] +.
实施例16：化合物96的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000250
第一步：化合物96(3-(3-乙酰氨基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000251
0℃氮气下向含有化合物2(20mg,0.0591mmol)和吡啶(9.35mg,0.118mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入化合物96-A乙酰氯(4.64mg,0.0591mmol)，反应混合物由0℃升温至室温搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液加水和二氯甲烷萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得剩余物经制备TLC分离纯化(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到黄色固体化合物96(3-(3-乙酰氨基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(19mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 339.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.11(s,1H),8.48(s,1H),7.88(s,1H),7.75(s,1H),7.68(d,J＝9.2Hz,1H),7.57(d,J＝7.8Hz,1H),7.46(t,J＝7.8Hz,1H),7.36(d,J＝9.5Hz,1H),7.30(d,J＝7.5Hz,1H),3.19(s,3H),2.05(s,3H),1.35(s,9H).
实施例17：化合物97的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000252
第一步：化合物97-A N-(3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)哌啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000253
将化合物52(70mg,0.127mmol)和盐酸/二氧六环(1ml)加入甲醇(1ml)溶液中，反应液在室温下搅拌反应6小时。TLC监测反应完全。反应液减压浓缩得到褐色固体粗品化合物97-A N-(3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)哌啶-4-甲酰胺(50mg)。
LC_MS:(ES +):m/z350.2[M+H] +.
第二步：化合物97 1-(2-甲氧基乙基)-N-(3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)哌啶-4-甲酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000254
将含有化合物97-A(20mg,0.0573mmol)、化合物97-B(7.96mg,0.0573mmol)和碳酸钾(31.63mg,0.23mmol)的N,N-二甲基甲酰胺 (1ml)溶液在70℃下搅拌反应16小时。TLC监测反应完全。反应混合物加乙酸乙酯萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC分离纯化(用含11.1％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到褐色胶状物化合物97 1-(2-甲氧基乙基)-N-(3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)哌啶-4-甲酰胺(3.2mg)。
LC_MS:(ES +):m/z408.2[M+H] +.
实施例18：化合物98的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000255
第一步：化合物98 2-(2-(2-(2-((3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸
Figure PCTCN2022114815-appb-000256
将含有化合物98-A(100mg,0.45mmol)的氯化亚砜(3ml)溶液在60℃下搅拌反应3.5小时。减压浓缩反应液，剩余物溶于二氯甲烷(2mL)，0℃将含有化合物2(50.76mg,0.15mmol)和三乙胺(75.89mg,0.75mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液加入到上述反应液中，此反应 在0℃下搅拌反应3小时。TLC监测显示反应完全。反应液加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 3)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩所得粗品经Pre-TLC(用含12.5％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到黄色固体化合物98 2-(2-(2-(2-((3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸(60mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 543.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.21(s,1H),8.49(s,1H),7.95(s,1H),7.79–7.70(m,2H),7.63(d,J＝9.4Hz,1H),7.47(t,J＝7.9Hz,1H),7.31(dd,J＝17.5,7.8Hz,2H),4.15(s,2H),3.65(d,J＝6.2Hz,4H),3.62–3.57(m,2H),3.53(s,4H),3.19(s,3H),1.34(s,9H).
实施例19：化合物99的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000257
第一步：化合物99叔丁基(3-(3-(2-(2-(2-(2-氨基-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)苯基)咪唑啉[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000258
将含有化合物99-A(49.28mg,0.222mmol)的氯化亚砜(1ml)溶液在60℃下搅拌反应5小时。减压浓缩反应液，剩余物溶于二氯甲烷(2mL)，0℃将含有化合物2(25mg,0.074mmol)、三乙胺(37.38mg,0.369mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液加入到上述反应液中，此反应在0℃下搅拌反应3小时。最后将碳酸铵(14.22mg,0.148mmol)加入到反应混合物中，室温搅拌反应14小时。TLC监测显示反应完全。反应液加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 3)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩所得粗品经Pre-TLC(用含9.1％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到黄色固体化合物99叔丁基(3-(3-(2-(2-(2-(2-氨基-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)苯基)咪唑啉[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯(9mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 542.3[M+H] +.
实施例20：化合物100,化合物101和化合物102的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000259
第一步：化合物100-C的合成参照中间体BB5第三步的合成过程
第二步：化合物100-D的合成参照中间体BB5第四步的合成过程
第三步：化合物100 4-(3-溴-6-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)吗啉
Figure PCTCN2022114815-appb-000260
向含有化合物100-D(150mg,542.55umol)和化合物100-E(70.9mg)的乙腈(3mL)溶液中加入DIPEA(140.2mg)。此反应在20℃下搅拌反应12小时。LCMS显示检测到产物Ms。反应液加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤,无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物通过硅胶柱层析(用含50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物100 4-(3-溴-6-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)吗啉(45mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 327.0[M+H] +.
第四步：化合物101的合成参照化合物2第一步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000261
LC_MS:(ES +):m/z 325.1[M+H] +.
第五步：化合物102-A 7-吗啉-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000262
向含有化合物101(14mg,43.16umol)的乙醇(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中加入NH 4Cl(11.5mg,215.82umol)和铁粉(12.1mg,215.82umol)。该反应在20℃下搅拌反应12小时。LCMS显示反应完全。反应液硅藻土过滤，浓缩母液。剩余物加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物未作进一步纯化直接用于下一步。由此得到黄色油状物化合物102-A 7-吗啉-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(12.7mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 295.1[M+H] +.
第六步：化合物102N-(7-吗啉-3-苯基咪唑[1,2-a]吡啶-6-基)乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000263
向含有化合物102-A(12.7mg,43.14umol)和三乙胺(129.43unol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入乙酰氯(4.1mg,51.77umol)。此反应在20℃下搅拌反应12小时。LCMS显示监测到产物Ms。反应液浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)分离纯化得到 黄色胶状物化合物102N-(7-吗啉-3-苯基咪唑[1,2-a]吡啶-6-基)乙酰胺(0.6mg).
LC_MS:(ES +):m/z 337.1[M+H] +.
实施例21：化合物103、化合物104和化合物105的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000264
第一步：化合物103-B 6-((3,4-二甲基苄基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸
Figure PCTCN2022114815-appb-000265
向含有化合物103-A(500mg,1.86mmol)和2,4-二甲氧基苯甲胺(372.8mg,2.23mmol)的二氧六环(20mL)溶液中加入叔丁醇钠(357.5mg,3.72mmol)和BrettPhos-Pd-G3(84.3mg,0.093mmol)。此反应在100℃氮气氛围下搅拌12小时。LCMS显示反应完全。反应液加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。有机层通过2N HCl调节pH＝7。大量固体生成。混合物过滤，收集滤饼，真空干燥。剩余物未经进一步 纯化直接用于下一步。由此得到黄色固体化合物103-B 6-((3,4-二甲基苄基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸(230mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 337.1[M+H] +.
第二步：化合物103 6-((3,4-二甲基苄基)氨基)-N-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000266
向含有化合物103-B(100mg,305.49umol)和化合物103-C(56.9mg,610.99umol)的DMF(2mL)溶液中加入DIPEA(118.5mg,916.48umol)和HATU(139.4mg,366.59umol)。此反应在20℃下搅拌反应3小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测显示化合物103-B(Rf＝0.05)消耗完，一个新的点(Rf＝0.5)生成。反应液加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到黄色固体化合物103 6-((3,4-二甲基苄基)氨基)-N-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(95mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 403.2[M+H] +.
第三步：化合物104 6-((3,4-二甲基苄基)(甲基)氨基)-N-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000267
向含有化合物103(95mg,236.05umol)和甲醛(98.4mg,1.18mmol，36％wt在水中)的甲醇(1mL)溶液中加入氰基硼氢化钠(29.7mg,472.10umol)和一滴醋酸。此反应在20℃下搅拌反应12小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测显示大部分的化合物103(Rf＝0.55)消耗完毕，一个新的点(Rf＝0.6)生成。反应液加水(10mL)稀释，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到黄色固体化合物104 6-((3,4-二甲基苄基)(甲基)氨基)-N-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(42mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 417.2[M+H] +.
第四步：化合物105 6-(甲基氨基)-N-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000268
向含有化合物104(37.0mg,88.84umol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)。此反应在45℃搅拌3小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测反应完全。反应液浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)稀释，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和 食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)得到白色固体化合物105 6-(甲基氨基)-N-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(12.1mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 267.1[M+H] +.
实施例22：化合物106的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000269
第一步：化合物106 6-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000270
向含有化合物106-A(20mg,74.32umol)和2,4-二甲氧基苯甲胺(14.9mg,89.19umol)的二氧六环(20mL)溶液中加入碳酸铯(72.65mg,222.97umol)和BrettPhos-Pd-G3(3.3mg,3.716umol)。此反应在100℃氮气氛围下搅拌12小时。LCMS显示反应完全。反应液加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物经Pre-TLC(用含50％乙 酸乙酯的石油醚溶液洗脱)得到绿色胶状物化合物106 6-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(4.1mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 356.1[M+H] +.
实施例23：化合物107的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000271
第一步：化合物107-B的合成参照中间体BB5第三步的合成过程
第二步：化合物107-C的合成参照中间体BB5第四步的合成过程
第三步：化合物107-D的合成参照化合物2第一步的合成过程
第四步：化合物107-E 7-甲氧基-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000272
向含有化合物107-D(80mg,297.11umol)的甲醇(5mL)溶液中加入钯/碳(10mg)。此反应在20℃氢气球氛围下搅拌反应12小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测化合物107-D(Rf＝0.7)反应完毕，一个新 的点(Rf＝0.6)生成。反应液通过硅藻土过滤，浓缩母液，剩余物未经进一步纯化直接用于下一步。由此得到棕色油状物粗品化合物107-E7-甲氧基-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(71mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 240.1[M+H] +.
第五步：化合物107N-(7-甲氧基-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000273
向含有化合物107-E(33mg,137.91umol)的乙腈(2mL)溶液中加入碳酸钾(38.1mg,275.83unol)、乙酰氯(23.8mg,303.42umol)和二碳酸二叔丁酯(60.2mg,275.82umol)。反应液在60℃搅拌反应12小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测显示反应完毕。反应液加水稀释(10mL),二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含6.7％的二氯甲烷溶液和含75％乙酸乙酯的石油醚洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物107N-(7-甲氧基-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)乙酰胺(3.6mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 282.1[M+H] +.
实施例24：化合物108和化合物109的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000274
第一步：化合物108-C 3-溴-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000275
向含有化合物108-A 3-溴苯磺酰氯(800mg,3.13mmol)和三乙胺(633.7mg,6.26mmol)的二氯甲烷溶液中加入化合物108-B 2-(2-甲氧基乙氧基)乙-1-胺(391.8mg,3.29mmol)。反应液在0℃下搅拌反应12小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)监测反应完全。反应液加水(20mL)稀释，二氯甲烷(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)分离纯化得到黄色油状物化合物108-C 3-溴-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)苯磺酰胺(840mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 337.9[M+H] +.
第二步：化合物108-E N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000276
向含有化合物108-C 3-溴-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)苯磺酰胺(840mg,2.48mmol)和化合物108-D双联频哪醇硼酸酯(946.0mg,3.73mmol)的1,4-二氧六环溶液中加入乙酸钾(731.2mg,7.45mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(202.5mg,0.248mmol)。反应液在85℃氮气氛围下搅拌反应12小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)监测反应完全。反应液经硅藻土过滤，母液加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)分离纯化得到黄色油状物粗品化合物108-E N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯磺酰胺(806mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 385.6[M+H] +.
第三步：化合物108(3-(3-(N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨磺酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000277
此步的合成参照化合物2第一步的合成过程。
LC_MS:(ES +):m/z 505.1[M+H] +.
第四步：化合物109N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-3-(6-(甲氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000278
此步的合成参照化合物63第一步的合成过程。
LC_MS:(ES +):m/z 405.0[M+H] +.
以下化合物参照化合物108、化合物109的合成
化合物110的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000279
第一步：化合物110-C的合成参照化合物109第一步的合成过程
第二步：化合物110-E的合成参照化合物109第二步的合成过程
第三步：化合物110-G的合成参照化合物109第三步的合成过程
第三步：化合物110 3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯磺酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000280
此步的合成参照化合物109第四步的合成过程
LC_MS:(ES +):m/z 387.0[M+H] +.
实施例25：化合物111和化合物112的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000281
第一步：化合物111-B和化合物112-B 6-氨基-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-醇&6-氨基-8-溴-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-醇
Figure PCTCN2022114815-appb-000282
0℃下向含有化合物111-A(20mg,83.58umol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三溴化硼(41.9mg,167.17umol)。反应液搅拌反应12小时。LCMS显示监测到化合物111-B和化合物112-B的MS。反应液浓缩。剩余物未经进一步纯化直接用于下一步。由此得到黄色固体粗品化合物111-B和化合物112-B 6-氨基-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-醇&6-氨基-8-溴-3-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-7-醇(18.8mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 226.1[M+H] +.
第二步：化合物111 7-苯基-3,4-二氢-2H-咪唑并[1',2':1,6]吡啶并[4,3-b][1,4]恶嗪&化合物112 10-溴-7-苯基-3,4-二氢-2H-咪唑[1',2':1,6]吡啶并[4,3-b][1,4]恶嗪
Figure PCTCN2022114815-appb-000283
向含有化合物111-B和化合物112-B(18.8mg,83.46umol)的DMF(2mL)溶液中加入1-2-二溴乙烷(18.8mg,100.15umol)和碳酸钾 (34.6mg,250.39umol)。此反应在100℃下搅拌反应12小时。LCMS显示检测到目标产物和副产物的生成。反应液加水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经硅胶柱层析(用含10％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到黄色油状物化合物111 7-苯基-3,4-二氢-2H-咪唑并[1',2':1,6]吡啶并[4,3-b][1,4]恶嗪(3.0mg)和黄色油状物化合物112 10-溴-7-苯基-3,4-二氢-2H-咪唑[1',2':1,6]吡啶并[4,3-b][1,4]恶嗪(3.4mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 252.1[M+H] +.
LC_MS:(ES +):m/z 330.0[M+H] +.
实施例26：化合物113的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000284
第一步：化合物113-B 2-(2-(2-((3-(6-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧乙氧基)乙氧基)乙酸
Figure PCTCN2022114815-appb-000285
向二氯亚砜(4mL)中加入化合物113-A(40mg,220μmol)，反应液在60℃下搅拌2小时至溶液澄清。将反应液减压浓缩，干燥后向残余物中加入二氯甲烷(30mL)溶解，然后在0℃下加入化合物2(25mg,74μmol)和三乙胺(52μL,370μmol)。反应液在0℃下搅拌反应3小时。反应结束后向反应液中加入盐酸水溶液(30mL，0.1N)并用乙酸乙酯萃取(30mLx2)。合并的有机层用饱和食盐水洗涤(30mL)，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。剩余物经制备薄层层析分离纯化(洗脱液：15％甲醇的二氯甲烷溶液)得到黄色固体化合物113-B(20mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 499.2[M+H] +.
第二步：化合物113(3-(3-(2-(2-(2-((((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000286
向含有化合物113-B(20mg,40μmol)，化合物113-C(18mg,40μmol)和三乙胺(12μL,80μmol)的二氯甲烷溶液中加入HATU(23mg,60μmol)。反应混合物在室温下搅拌反应9小时。反应结束后将反应液用水(20mL)稀释，二氯甲烷(20mLx2)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤，浓缩。剩余物经制备薄层层析分离纯化(洗脱液：8％甲醇的二氯甲烷溶液)得到白色固体化合物113(15mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 911.4[M+H] +.
实施例27：化合物114的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000287
第一步：化合物114(2S，4R)-1-((S)-3,3-二甲基-2-(2-(2-(2-((3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐
Figure PCTCN2022114815-appb-000288
将化合物113(5mg,5.5μmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后向反应液中加入氯化氢的二氧六环溶液(1mL,4M)。反应液在室温下搅拌 反应3小时。反应结束后将反应液减压浓缩，干燥后得到黄色固体。化合物114(4mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 811.3[M+H] +.
实施例28：化合物115的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000289
第一步：化合物115-B 2-(2-(2-(2-((3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸
Figure PCTCN2022114815-appb-000290
此步的合成参照化合物113第一步的合成过程
第二步：化合物115(3-(3-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000291
向含有化合物115-B(20mg,40μmol)、化合物115-C(14mg,55μmol)和三乙胺(15μL,111μmol)的乙腈溶液(3mL)中加入三氯氧磷(7μL,74μmol)。反应混合物在室温下搅拌反应4小时。反应结束后将反应液用水(20mL)稀释，二氯甲烷(20mLx2)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤，浓缩。剩余物经制备薄层层析分离纯化(洗脱液：10％甲醇的二氯甲烷溶液)得到白色固体化合物115(5.0mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 784.3[M+H] +.
实施例29：化合物116的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000292
第一步：化合物116((((((2,2'-(乙烷-1,2-二基双(氧基))双(乙酰基))双(氮杂二烷基))双(3,1-亚苯基))双(咪唑并[1,2-a]吡啶-3,6-二基))双(甲基氨基甲酸叔丁基酯)
Figure PCTCN2022114815-appb-000293
向二氯亚砜(4mL)中加入化合物116-A(40mg,220μmol)，反应液在60℃下搅拌2小时至溶液澄清。将反应液减压浓缩，干燥后向残余物中加入二氯甲烷(30mL)溶解，然后在0℃下加入化合物2(25mg,74μmol)和三乙胺(52μL,370μmol)。反应液在0℃下搅拌反应3h。反应结束后向反应液中加入盐酸水溶液(30mL，0.1N)并用乙酸乙酯萃取(30mLx2)。合并的有机层用饱和食盐水洗涤(30mL)，无水Na 2SO 4干燥，过滤，浓缩。剩余物经制备薄层层析分离纯化(洗脱液：8％甲醇的二氯甲烷溶液)得到白色固体化合物116(10mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 819.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.91(s,2H),8.23(d,J＝82.5Hz,4H),7.77(d,J＝19.8Hz,6H),7.42(t,J＝7.9Hz,2H),7.32(d,J＝9.4Hz,2H),7.22(s,2H),4.27(s,4H),4.01(s,4H),3.28(d,J＝6.1Hz,6H),1.47(s,18H).
化合物117的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000294
第一步：化合物117-B的合成参照化合物113第一步的合成过程
第二步：化合物117的合成参照化合物113第二步的合成过程
(2S，4R)-1-((S)-12-(叔丁基)-2-(3-(2-氯苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-3,10-二氧代-5,8-二氧杂-2,11-二氮杂十六烷-13-酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000295
LC_MS:(ES +):m/z 830.3[M+H] +.
化合物118的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000296
第一步：化合物118-B的合成参照化合物113第一步的合成过程
第二步：化合物118的合成参照化合物113第二步的合成过程
(2S,4R)-1-((S)-15-(叔丁基)-2-(3-(2-氯苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-3,13-二氧代-5,8,11-三氧杂-2,14-二氮杂十六烷-16-酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000297
LC_MS:(ES +):m/z 874.3[M+H] +.
化合物119的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000298
第一步：化合物119-B的合成参照化合物113第一步的合成过程
第二步：化合物119的合成参照化合物113第二步的合成过程
(3-(3-((S)-13-((2S，4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧杂-12-氮杂戊二酰胺)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000299
LC_MS:(ES +):m/z 955.4[M+H] +.
化合物120的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000300
第一步：化合物120的合成参照化合物114第一步的合成过程
(2S，4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-14-((3-(6-(甲基氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-4,14-二氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐
Figure PCTCN2022114815-appb-000301
LC_MS:(ES +):m/z 855.3[M+H] +.
化合物121的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000302
第一步：化合物121的合成参照化合物116第一步的合成过程
((((2,2'-((氧双(乙烷-2,1-二基))双(氧))双(乙酰基))双(氮杂二基))双(3,1-亚苯基))双(咪唑并[1,2-a]吡啶-3,6-二基))双((甲基)氨基甲酸叔丁基酯)
Figure PCTCN2022114815-appb-000303
LC_MS:(ES +):m/z 863.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.89(s,2H),8.32(s,5H),7.74(s,5H),7.45(t,J＝23.9Hz,4H),7.26–7.21(m,2H),4.12(s,4H),3.82(s,8H),3.26(s,6H),1.43(s,18H).
化合物122的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000304
第一步：化合物122的合成参照化合物116第一步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000305
LC_MS:(ES +):m/z 791.1[M+H] +.
化合物123的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000306
第一步：化合物123的合成参照化合物116第一步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000307
LC_MS:(ES +):m/z 835.1[M+H] +.
实施例30：化合物124和化合物125的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000308
第一步：化合物124 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸甲酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000309
在氮气保护下向含有中间体BB5(3-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.096mmol)，化合物124-A 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻吩-3-羧酸甲酯(38.65mg,0.144mmol)，碳酸铯(125.11mg,0.384mmol)，S-Phos(7.9mg,0.0192mmol)和氯化亚铜(9.5mg,0.096mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液中加入醋酸钯(1.08mg,0.0048mmol)，反应体系氮气置换3次，加热至100℃搅拌反应 18小时。TLC监测反应完全。反应液加水(15ml)和乙酸乙酯(15ml x3)萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC分离纯化(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)得到黄色固体化合物124 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸甲酯(12mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 374.0[M+H] +.
第二步：化合物125-A 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸
Figure PCTCN2022114815-appb-000310
向含有化合物124 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸甲酯(12mg，0.032mmol)的甲醇/水/四氢呋喃(1.5ml，1:1:1)的溶液中加入氢氧化锂水合物(6.71mg,0.16mmol)，反应液在室温下搅拌反应5小时。TLC监测反应完全。反应混合物用稀盐酸调酸，减压浓缩，得到黄色固体化合物125-A 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸(10mg,粗品)，粗品直接用于下一步反应。
第三步：化合物125(3-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酰基)噻吩-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000311
将含有化合物125-A 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸(10mg,0.0278mmol)、化合物125-B四氢-2H-吡喃-4-胺(2.81mg,0.0278mmol)、HATU(10.56mg,0.0278mmol)和N,N-二异丙基乙胺(10.76mg,0.0834mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液在室温下搅拌反应18小时。TLC监测反应完全。反应液加水和乙酸乙酯萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物125(3-(4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酰基)噻吩-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(2.3mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 443.1[M+H] +.
以下化合物参照化合物124、化合物125的合成
化合物126和化合物127的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000312
第一步：化合物126 5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-2-羧酸乙酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000313
此步参照化合物125第一步的合成过程
LC_MS:(ES +):m/z 2.636[M+H] +.
第二步：化合物127-A参照化合物125第二步的合成过程
第三步：化合物127(3-(5-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酰基)噻吩-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000314
此步参照化合物125第三步的合成过程
LC_MS:(ES +):m/z 443.1[M+H] +.
实施例31：化合物128和化合物129的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000315
第一步：化合物128 N-(3-(6-氨基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000316
室温下将含有化合物58(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.454mmol)的二氯甲烷(4ml)和三氟乙酸(800ul)的溶液在室温下搅拌反应5小时。TLC监测反应完全。反应混合物减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含4.76％-9.0％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到褐色固体化合物128N-(3-(6-氨基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰胺(150mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 341.1[M+H] +.
第二步：化合物129 N-(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)环丙烷甲酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000317
0℃下向含有化合物128 N-(3-(6-氨基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰胺(30mg,0.0881mmol)和三乙胺(26.74 mg,0.264mmol)的二氯甲烷溶液(2ml)中加入环丙烷甲酰氯(9.67mg,0.0925mmol)，反应液由0℃升温至室温搅拌反应18小时。TLC监测反应完全。反应液加水和二氯甲烷萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含4.76％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物129 N-(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)环丙烷甲酰胺(16mg).LC_MS:(ES +):m/z 409.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ9.29(d,J＝20.4Hz,2H),9.15(s,1H),7.90–7.75(m,2H),7.71(s,1H),7.61(d,J＝8.2Hz,1H),7.47(dd,J＝13.6,5.7Hz,2H),7.31(s,1H),4.15(s,2H),3.82–3.78(m,2H),3.66–3.62(m,2H),3.46(s,3H),1.82(dd,J＝8.0,3.7Hz,1H),1.03–0.97(m,2H),0.84(dd,J＝7.6,3.1Hz,2H).
以下化合物参照化合物129的合成
化合物130的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000318
第一步：化合物130的合成参照化合物129第二步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000319
LC_MS:(ES +):m/z 425.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.85(s,1H),9.41(s,1H),9.26(s,1H),7.87(t,J＝1.7Hz,1H),7.79(d,J＝8.2Hz,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.56(dd,J＝14.0,6.2Hz,2H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),4.12(s,2H),3.72–3.68(m,2H),3.56–3.53(m,2H),3.30(s,3H),1.23(s,9H).
化合物131的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000320
第一步：化合物131的合成参照化合物129第二步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000321
LC_MS:(ES +):m/z 413.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.04(s,1H),9.84(s,1H),9.30(s,1H),7.89(t,J＝1.7Hz,1H),7.80–7.76(m,1H),7.71(d,J＝8.1Hz,2H), 7.60–7.51(m,2H),7.36(d,J＝7.9Hz,1H),4.12(s,2H),4.03(s,2H),3.71–3.68(m,2H),3.56–3.53(m,2H),3.39(s,3H),3.30(s,3H).
实施例32：化合物132、化合物133和化合物134的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000322
第一步：化合物132-A的合成参照中间体BB-6第五步的合成过程
第二步：化合物132-C的合成参照化合物2第一步的合成过程
第三步：化合物132 3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸
Figure PCTCN2022114815-appb-000323
向含有化合物132-C 3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸甲酯(148mg,0.388mmol)的甲醇(3ml)溶液中加入含有氢氧化钠(46.56mg,1.164mmol)的水(1ml)溶液，反应混合物在室温下搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液用稀盐酸调节 pH至5-6，反应混合物减压浓缩，得到褐色固体化合物132 3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸(138mg,粗品)，直接用于下一步反应。
LC_MS:(ES +):m/z 368.0[M+H] +.
第四步：化合物133(3-(3-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基甲酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000324
向含有化合物132 3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸(50mg,0.136mmol)、化合物133-A 2-(2-甲氧基乙氧基)乙-1-胺(16.2mg,0.136mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(51.68mg,0.136mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(52.63mg,0.408mmol),反应混合液在室温下搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液加水和乙酸乙酯萃取，合并的有机层经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含8.33％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色凝胶状物化合物133 3(3-(3-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基甲酰基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(44mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 469.1[M+H] +.
第五步：化合物134的合成参照化合物63的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000325
LC_MS:(ES +):m/z 369.1[M+H] +.
以下化合物参照化合物134的合成
化合物135和化合物136的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000326
第一步：化合物135的合成参照化合物134第四步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000327
LC_MS:(ES +):m/z 451.1[M+H] +.
第二步：化合物136的合成参照化合物134第五步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000328
LC_MS:(ES +):m/z 351.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.98(s,2H),7.86(d,J＝7.1Hz,1H),7.66(s,2H),7.58(t,J＝7.7Hz,1H),7.35(s,1H),6.95(s,1H),4.28–4.17(m,1H),4.02(d,J＝10.6Hz,2H),3.58–3.49(m,2H),2.75(s,3H),2.07–1.96(m,2H),1.68–1.60(m,2H).
实施例33：化合物137的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000329
第一步：化合物137-B[6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯]
Figure PCTCN2022114815-appb-000330
室温氮气氛围下向含有化合物137-A 6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(1g,3.37mmol)、氨基甲酸叔丁酯(592mg,5.06mmol)、9,9-二甲基-4,5-双二苯基膦氧杂蒽(390mg,0.67mmol)和碳酸铯(3.3g,10.11mmol)的1,4-二氧六环(1ml)悬浮液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(309mg,0.34mmol)。反应液氮气置换三次，110℃下搅拌反应16 小时。TLC监测反应完全。反应液冷至室温，分配于水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)中。收集有机层，水层用含10％甲醇的二氯甲烷(10ml x 3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经Pre-TLC(用含0.8％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到淡黄色固体化合物137-B 6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(600mg,52％)。
LC_MS:(ES +):m/z 306.6[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ1.42(t,J＝7.2Hz,3H),1.54(s,9H),4.39-4.44(m,2H),6.60(s,1H),7.36-7.38(m,1H),7.66(d,J＝9.6Hz,1H),8.26(s,1H),9.67(s,1H).
第二步：化合物137-C[6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸]
Figure PCTCN2022114815-appb-000331
将含有化合物137-B 6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(600mg,1.97mmol)和一水合氢氧化锂(248mg,5.90mmol)的四氢呋喃(4ml)-水(1ml)-甲醇(1ml)的混合溶液在室温下搅拌反应4小时。TLC监测反应完全。反应液用1N盐酸酸化至pH 5-6，用含10％甲醇的二氯甲烷(20ml x 5)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到白色固体粗品化合物 137-C 6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸(300mg,55％)，未经进一步纯化，用于下一步。
LC_MS:(ES +):m/z 278.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.50(s,9H),7.38-7.41(m,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,1H),8.02(s,1H),9.55(s,1H),9.86(s,1H).
第三步：化合物137二叔丁基(3,3'-((乙烷-1,2-二基双(氮杂二基))双(羰基))双(咪唑并[1,2-a]吡啶-6,3-二基))二氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000332
0℃下向含有化合物137-C 6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸(20mg,0.072mmol)、乙烷-1,2-二胺(2.17mg,0.036mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(14mg,0.108mmol)的DMF(1mL)溶液中加入HATU(42mg,0.11mmol)。反应液升至室温，搅拌反应30分钟。TLC监测反应完全。混合物分配于乙酸乙酯(10ml)和水(10ml)中。收集有机层，饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含10％氨甲醇溶液的二氯甲烷(50％)-乙酸乙酯(50％))分离纯化得到白色固体化合物137二叔丁基(3,3'-((乙烷-1,2-二基双(氮杂二基))双(羰基))双(咪唑并[1,2-a]吡啶-6,3-二基))二氨基甲酸酯(8.7mg,42％)。
LC_MS:(ES +):m/z 579.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.50(s,18H),3.47-3.48(m,4H),7.38-7.40(m,2H),7.61-7.64(m,2H),8.26(s,2H),8.58-8.60(m,2H),9.55(s,2H),9.98(s,2H)
使用相应的胺化合物，以下化合物参照化合物137的合成
化合物138的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000333
第一步：化合物138的合成参照化合物137第三步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000334
LC_MS:(ES+):m/z 781.6[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.49(s,18H),3.29(s,4H),3.34-3.36(m,4H),3.60(s,4H),3.88(s,4H),7.36-7.38(m,2H),7.60-7.62(d,J＝9.6Hz,2H),7.91(t,J＝5.6Hz,2H),8.21(s,2H),8.45(t,J＝5.2Hz,2H),9.53(s,2H),9.95(s,2H).
化合物139的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000335
第一步：化合物139的合成参照化合物137第三步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000336
LC_MS:(ES+):m/z 667.2[M+H] +.
1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.49(s,18H),3.40-3.44(m,4H),3.54-3.58(m,8H),7.35-7.38(m,2H),7.61(d,J＝9.6Hz,2H),8.26(s,2H),8.47(t,J＝5.2Hz,2H),9.54(s,2H),9.97(s,2H).
化合物140的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000337
第一步：化合物140的合成参照化合物137第三步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000338
LC_MS:(ES +):m/z 695.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.49(s,18H),1.74-1.81(m,4H),3.29(s,2H),3.34(brs,2H),3.47-3.53(m,8H),7.36(d,J＝9.6Hz,2H),7.61(d,J＝9.6Hz,2H),8.22(s,2H),8.36(t,J＝5.6Hz,2H),9.52(s,2H),9.56(s,2H).
化合物141的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000339
第一步：化合物141的合成参照化合物137第三步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000340
LC_MS:(ES+):m/z 623.6[M+H] +.
1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.49(s,18H),3.45-3.49(m,4H),3.61(t,J＝5.8Hz,4H),7.37-7.40(m,2H),7.61(d,J＝9.6Hz,2H),8.26(s,2H),8.46(t,J＝5.6Hz,2H),9.54(s,2H),9.96(s,2H).
实施例34：化合物142的合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000341
第一步：化合物142-B N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000342
将含有化合物142-A 6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶(50mg,0.25mmol)，(R)-1-[(S)-2-(二环己基膦基)二茂铁基]乙基叔丁基膦(cas:158923-11-6)(14mg,0.025mmol)、双[三(2-甲基苯基)膦]钯(cas:69861-71-8)(18mg,0.025mmol)和叔丁醇钠(328mg,3.3mmol)的1,4-二氧六环溶液氮气置换三次，然后迅速加入甲胺盐酸盐(171mg,2.5mmol)。密封反应液，在100℃下搅拌反应24小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)中。收集有机层，饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含5％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到灰色油状物化合物142-B N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(17mg,45％)。
LC_MS:(ES+):m/z 148.1[M+H] +.
第二步：化合物142-C 2,2,2-三氟-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000343
0℃下向含有化合物142-B N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺(50mg,0.34mmol)、三乙胺(114mg,1.12mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(4mg,0.034mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中逐滴加入三氟乙酸酐(86mg,0.41mmol)。反应液升至室温搅拌反应15小时。TLC监测反应完全。反应液分配于二氯甲烷(10ml)和水(10ml)中。收集有机层，饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含3％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色油状物化合物142-C 2,2,2-三氟-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙酰胺(33mg,40％)。
LC_MS:(ES+):m/z 244.10[M+H] +.
第三步：化合物142-D 2,2,2-三氟-N-甲基-N-(3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000344
0℃搅拌条件下向含有化合物142-C 2,2,2-三氟-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙酰胺(33mg,0.14mmol)的浓硫酸(1ml)溶液中加入浓硝酸(9mg,0.14mmol)。反应混合物升至室温，搅拌反应1小时。TLC监测反应完全。反应液用饱和碳酸钠水溶液碱化至pH＝7，然后分配于乙酸乙酯(10ml)和水(10ml)中。收集有机层，饱和食盐水(10ml) 洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到黄色固体粗品化合物142-D2,2,2-三氟-N-甲基-N-(3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)乙酰胺(30mg,76％)，未经进一步纯化，直接用于下一步。
LC_MS:(ES+):m/z 288.95[M+H] +.
第四步：化合物142-E N-(3-氨基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000345
将含有钯碳(20％,6mg)和化合物142-D 2,2,2-三氟-N-甲基-N-(3-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)乙酰胺(30mg,0.1mmol)的甲醇(15ml)溶液在室温氢气(氢气球)氛围下搅拌反应过夜。TLC监测反应完全。过滤移除钯碳，用乙醇(5ml x2)冲洗。合并滤液，减压浓缩，所得粗品经制备TLC(用含5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)分离纯化得到棕色油状物化合物142-E N-(3-氨基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺(8mg,30％)。
LC_MS:(ES+):m/z 259.10[M+H] +.
第五步：化合物142 N,N'-(3,3'-((2,2'-((氧双(乙烷-2,1-二基))双(氧))双(乙酰基))双(氮杂二烷基))双(咪唑并[1,2-a]吡啶-6,3-二基))双(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰胺)
Figure PCTCN2022114815-appb-000346
此步的合成参照实施例29，化合物123的合成过程。
LC_MS:(ES+):m/z 703.50[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ3.37(s,6H),3.79-3.80(m,8H),4.04-4.18(m,4H),7.10-7.13(m,2H),7.57-7.69(m,4H),7.93-8.01(m,2H),8.88-9.07(m,2H).
以下化合物的合成参照化合物2，中间体BB5或者BB6描述的相应路线：
Figure PCTCN2022114815-appb-000347
化合物143
Figure PCTCN2022114815-appb-000348
LC_MS:(ES +):m/z 373.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.14(s,1H),7.70(s,1H),7.59(d,J＝9.2Hz,1H),7.52(t,J＝5.9Hz,1H),7.24(dd,J＝9.2,1.5Hz,1H),4.22(d,J＝6.0Hz,2H),3.17(d,J＝4.9Hz,1H),1.41(s,9H).
化合物144
Figure PCTCN2022114815-appb-000349
LC_MS:(ES +):m/z 339.1[M+H] +.
化合物145
Figure PCTCN2022114815-appb-000350
LC_MS:(ES +):m/z 455.1[M+H] +.
化合物146
Figure PCTCN2022114815-appb-000351
LC_MS:(ES +):m/z 439.1[M+H] +.
化合物147
Figure PCTCN2022114815-appb-000352
LC_MS:(ES +):m/z 466.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.92(s,1H),8.52(d,J＝1.2Hz,1H),7.94(t,J＝1.7Hz,1H),7.78(s,1H),7.73–7.64(m,2H),7.50(t,J＝7.9Hz,1H),7.34(ddd,J＝11.4,8.8,4.2Hz,2H),3.67–3.61(m,4H),3.22(s,3H),3.17(s,2H),2.55–2.51(m,4H),1.37(s,9H).
化合物148
Figure PCTCN2022114815-appb-000353
LC_MS:(ES +):m/z 466.2[M+H] +.
化合物149
Figure PCTCN2022114815-appb-000354
LC_MS:(ES +):m/z 437.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.22(s,1H),8.50(s,1H),7.92(s,1H),7.77(s,1H),7.65(dd,J＝17.5,8.6Hz,2H),7.49(t,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),3.96(t,J＝8.1Hz,1H),3.74(dq,J＝15.3,7.5Hz,3H),3.22(s,3H),3.17(d,J＝7.2Hz,1H),2.10(dd,J＝14.2,7.0Hz,2H),1.37(s,9H).
化合物150
Figure PCTCN2022114815-appb-000355
LC_MS:(ES +):m/z 423.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.13(s,1H),8.51(s,1H),7.94(s,1H),7.78(s,1H),7.65(dd,J＝12.4,9.2Hz,2H),7.51(t,J＝7.9Hz,1H),7.35(t,J＝7.6Hz,2H),4.75–4.69(m,4H),4.03–3.95(m,1H),3.22(s,3H),1.38(s,9H).
化合物151
Figure PCTCN2022114815-appb-000356
LC_MS:(ES+):m/z 467.2[M+H] +.
实施例35：化合物152的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000357
在0℃向含有化合物2(30mg,88.65umol)和N,N-二异丙基乙基胺(22.9mg,177.3umol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三光气(8.7mg,29.25umol)。搅拌反应30分钟后，将含有化合物152-A(23.2mg,265.95umol)和N,N-二异丙基乙基胺(34.4mg,265.95umol)的二氯甲烷(2mL)溶液加入到反应液中，升至室温反应12小时。LCMS监测反应完全。反应液加水(10mL)稀释，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。剩余物经Pre-TLC(用含10％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到黄色固体化合物152(16.8mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 452.1[M+H] +.
实施例36：化合物153的合成
Figure PCTCN2022114815-appb-000358
第一步：化合物153-B的合成参照化合物2第一步的合成过程
第二步：化合物153-D叔丁基(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000359
将含有化合物153-B(50mg,0.15mmol)、化合物153-C(27mg,0.15mmol)、碳酸钾(61mg,0.44mmol)和碘化钾(3mg,0.015mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液在50℃下搅拌反应15小时。TLC监测反应完全。反应液分配于乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)中。收集有机层，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经Pre-HPLC分离纯化得到无色油状物化合物153-D叔丁基(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯(36mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 442.60[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ1.46(s,9H),3.27(s,3H),3.39(s,3H),3.57-3.60(m,2H),3.72-3.75(m,2H),3.90(t,J＝4.8Hz,2H),4.22(t,J＝4.8Hz,2H),7.03-7.06(m,1H),7.10-7.13(m,2H),7.38(d,J＝9.6Hz,1H),7.47(t,J＝4.0Hz,1H),7.75(s,1H),7.94(d,J＝12.4Hz,1H),8.34(s,1H).
第三步：化合物153的合成参照化合物63第一步的合成方法
Figure PCTCN2022114815-appb-000360
LC_MS:(ES+):m/z 342.30[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ2.73(s,3H),3.36(s,3H),3.56-3.58(m,2H),3.70-3.72(m,2H),3.86-3.88(m,2H),4.20-4.22(m,2H),7.06-7.12(m,2H),7.20-7.23(m,2H),7.46-7.51(m,2H),7.58(s,1H),7.66(d,J＝9.6Hz,1H).
化合物154的合成参照化合物153的合成路线的第二步(使用化合物154-B)和第三步：
Figure PCTCN2022114815-appb-000361
LC_MS:(ES+):m/z 338.65[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ1.42-1.53(m,2H),1.76-1.79(m,2H),2.05-2.14(m,1H),2.76(s,3H),3.42-3.48(m,2H),3.85(d,J＝6.4Hz, 2H),4.01-4.04(m,2H),6.92-6.98(m,2H),7.05(s,1H),7.13(d,J＝7.2Hz,1H),7.39-7.42(m,2H),7.64(s,1H),8.12(brs,1H).
下列化合物的合成路线如下，参照实施例36化合物153的合成路线,并使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000362
Figure PCTCN2022114815-appb-000363
实施例37：化合物158、化合物159的合成路线
Figure PCTCN2022114815-appb-000364
第一步：化合物158叔丁基甲基(3-(3-(N-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000365
在0℃氮气氛围下向含有化合物49(200.00mg,443.91umol)的DMF(10ml)中，加入氢化钠(19.53mg,488.30umol,60％)和碘甲烷(75.61mg,532.70umol)，反应液在0℃下搅拌反应1小时。TLC监测反应完全。反应液倒入饱和氯化铵溶液(20mL)中，加入乙酸乙酯(15mLx2)萃取，合并有机相,饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(洗脱液：0％-5％甲醇的二氯甲烷溶液)分离纯化得到白色固体化合物158叔丁基甲基(3-(3-(N-甲基四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯(150mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 465.24[M+H] +.
第二步：化合物159的合成参照实施例6第一步的合成过程
Figure PCTCN2022114815-appb-000366
LC_MS:(ES+):m/z 365.19[M+H]+.
化合物160的合成路线参照实施例37化合物158的合成路线，并使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000367
LC_MS:(ES+):m/z 481.24[M+H] +.
实施例38：化合物161、化合物162的合成路线
Figure PCTCN2022114815-appb-000368
第一步：化合物161-B(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000369
0℃氮气氛围下向含有化合物61-E(3-碘代咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,0.8mmol)和化合物161-A 2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷(225mg,1.2mmol)的无水四氢呋喃(10ml)溶液中缓慢滴加异丙基氯化镁氯化锂络合物(0.75ml,0.96mmol,1.3N在四氢呋喃中)。反应混合物在0℃搅拌反应2小时。TLC监测反应完全。反应混合物用饱和氯化铵溶液(30ml)淬灭，乙酸乙酯(30ml)萃取。收集有机层，饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥， 减压浓缩得到淡红色固体化合物161-B(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(285mg,粗品)。
LC_MS:(ES +):m/z 291.8[M+H] +.
第二步：化合物161(3-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000370
室温氮气氛围下向含有化合物161-C 5-溴-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(100mg,0.508mmol)，化合物161-B(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(284.2mg,0.761mmol，粗品)，碳酸钠(1N,1.52ml,1.52mmol)的乙腈(5ml)和水(1ml)的悬浮液中加入四(三苯基膦)钯(58.7mg,50.75umol)，反应混合物氮气置换三次，在90℃下搅拌反应16小时。TLC监测反应完全。反应混合物分配于乙酸乙酯(20ml)和水(10ml)中。收集有机层，饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(用含1％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到化合物161(3-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg)。
LC_MS:(ES +):m/z 364.2[M+H] +
第三步：化合物162 N-甲基-3-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000371
此步的合成参照实施例6第一步的合成过程
LC_MS:(ES +):m/z 264.1[M+H] +
以下化合物的合成路线如下，参照实施例38化合物161、化合物162的合成路线,并使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000372
Figure PCTCN2022114815-appb-000373
Figure PCTCN2022114815-appb-000374
Figure PCTCN2022114815-appb-000375
Figure PCTCN2022114815-appb-000376
Figure PCTCN2022114815-appb-000377
Figure PCTCN2022114815-appb-000378
Figure PCTCN2022114815-appb-000379
实施例39：化合物201、化合物202的合成路线
Figure PCTCN2022114815-appb-000380
第一步：化合物201-C 6-(1H-吡唑-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure PCTCN2022114815-appb-000381
室温下向含有化合物201-A 6-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(1.0g,4.10mmol),化合物201-B吡唑(418.5mg,6.15mmol)的1,4-二氧六环(20mL)溶液中加入碘化亚铜(78.04mg，409.78μmol),磷酸三钾(78.04mg，409.78μmol),N1,N2-二甲基反式环己烷-1,2-二胺(58.29mg，409.78umol),氮气置换三次，反应混合物在110℃下搅拌反应12h。TLC监测反应完全。反应液经硅藻土过滤，减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层 析(用含0-10％甲醇的二氯甲烷洗脱)分离纯化得到化合物201-C6-(1H-吡唑-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(500mg)。
LC_MS:(ES+):m/z 185.07[M+H]+
第二步：化合物201 3-碘-6-(1H-吡唑-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure PCTCN2022114815-appb-000382
此步的合成参照中间体BB5第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 310.97[M+H] +
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.71(d,J＝1.4Hz,1H),8.65(d,J＝2.4Hz,1H),7.92(dd,J＝9.7,2.0Hz,1H),7.85–7.78(m,3H),6.62(dd,J＝5.6,3.4Hz,1H).
第三步：化合物202 3-(1H-吲哚-4-基)-6-(1H-吡唑-1-基)咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure PCTCN2022114815-appb-000383
此步的合成参照实施例2化合物2的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 300.12[M+H] +.
下列化合物的合成路线如下，参照实施例39化合物201、化合物202的合成路线,并使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000384
Figure PCTCN2022114815-appb-000385
实施例40：化合物208、化合物209的合成路线
Figure PCTCN2022114815-appb-000386
第一步：化合物208-C(3-(1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000387
此步的合成参照实施例38化合物161、化合物162第二步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 364.17[M+H]+.
第二步：化合物208叔丁基(3-(3-碘-1H-吡咯[2,3-c]吡啶-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000388
此步的合成参照中间体BB5第四步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 490.07[M+H] +.
第三步：化合物209(3-(3-碘-1H-吡咯[2,3-c]吡啶-4-基)-N-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-胺
Figure PCTCN2022114815-appb-000389
此步的合成参照实施例6第一步的合成方法
LC_MS:(ES+):m/z 390.01[M+H] +.
化合物210 3-(3-碘-1H-吲唑-7-基)-N-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-6-胺盐酸盐的合成路线参照实施例40化合物209的合成,使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000390
LC_MS:(ES+):m/z 390.01[M+H] +.
实施例41：化合物211、化合物212、化合物213的合成路线
Figure PCTCN2022114815-appb-000391
第一步：化合物211-C烯丙基(3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000392
此步的合成参照中间体BB6第五步的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 400.04[M+H]+.
第二步：化合物211烯丙基(3-(3-氨基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000393
此步的合成参照实施例2化合物2的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 365.19[M+H] +.
化合物212(E)-(3-(3-氨基苯基)烯丙基)(3-(3-氨基苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000394
此步的合成参照实施例2化合物2的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 456.23[M+H]+.
第三步：化合物213叔丁基烯丙基(3-(3-(四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2022114815-appb-000395
此步的合成参照实施例3化合物47的合成过程
LC_MS:(ES+):m/z 477.24[M+H]+.
下列化合物的合成路线如下，参照实施例41化合物211、化合物212、化合物213的合成路线,使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000396
Figure PCTCN2022114815-appb-000397
Figure PCTCN2022114815-appb-000398
Figure PCTCN2022114815-appb-000399
以下化合物的合成路线如下，参照中间体BB5、BB6和实施例2化合物2的合成路线,并使用相对应的试剂合成：
Figure PCTCN2022114815-appb-000400
Figure PCTCN2022114815-appb-000401
Figure PCTCN2022114815-appb-000402
Figure PCTCN2022114815-appb-000403
以下化合物的合成路线如下，参照实施例3化合物47和实施例6化合物63的合成路线,并使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000404
Figure PCTCN2022114815-appb-000405
Figure PCTCN2022114815-appb-000406
Figure PCTCN2022114815-appb-000407
Figure PCTCN2022114815-appb-000408
以下化合物的合成路线如下，参照实施例2化合物2和实施例6化合物63的合成路线,使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000409
Figure PCTCN2022114815-appb-000410
Figure PCTCN2022114815-appb-000411
Figure PCTCN2022114815-appb-000412
Figure PCTCN2022114815-appb-000413
Figure PCTCN2022114815-appb-000414
Figure PCTCN2022114815-appb-000415
Figure PCTCN2022114815-appb-000416
Figure PCTCN2022114815-appb-000417
Figure PCTCN2022114815-appb-000418
化合物299和化合物300的合成路线如下，参照实施例2化合物2和实施例3化合物47的合成路线,使用相对应的试剂合成:
Figure PCTCN2022114815-appb-000419
Figure PCTCN2022114815-appb-000420
化合物301-304的合成路线如下：
Figure PCTCN2022114815-appb-000421
第一步 参照实施例6化合物63的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第二步 参照实施例31化合物129第二步的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第三步 参照中间体BB6第五步的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第四步 参照实施例2化合物2的合成过程，使用相对应的试剂合成。
Figure PCTCN2022114815-appb-000422
化合物305-307的合成路线如下：
Figure PCTCN2022114815-appb-000423
第一步 参照实施例6化合物63的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第二步 参照实施例31化合物129第二步的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第三步 参照中间体BB6第五步的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第四步 参照实施例2化合物2的合成过程，使用相对应的试剂合成。
Figure PCTCN2022114815-appb-000424
化合物308-310的合成路线如下：
Figure PCTCN2022114815-appb-000425
第一步 参照实施例6化合物63的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第二步 参照实施例31化合物129第二步的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第三步 参照中间体BB6第五步的合成过程，使用相对应的试剂合成；
第四步 参照实施例2化合物2的合成过程，使用相对应的试剂合成。
Figure PCTCN2022114815-appb-000426
下列化合物的合成参照实施例9化合物83、化合物84、化合物85的合成路线,使用相对应的试剂合成:：
Figure PCTCN2022114815-appb-000427
Figure PCTCN2022114815-appb-000428
Figure PCTCN2022114815-appb-000429
生物活性实施例
生物活性实施例1：SARM1的制备及NAD酶活性测试
测试化合物的准备：
测试化合物的储备液浓度为200μM或10mM(在DMSO中)，在体外SARM1酶测定和抑制剂筛选时，进一步稀释到所需的化合物浓度。
SARM1蛋白的表达纯化
(1)质粒构建
本例采用PCR扩增dN-SARM1的基因序列，去除SARM1的N端线粒体定位信号肽，将PCR扩增产物构建到pLenti-CMV-puro-dest质粒(addgene catalog#17452)中，具体如下：
在上海生工公司合成BC2T-TEV多肽基因片段、dN-SARM1-F和dN-SARM1-R。其中，BC2T-TEV多肽基因片段为Seq ID No.1所示序列，dN-SARM1-F为Seq ID No.2所示序列，dN-SARM1-R为Seq ID No.3所示序列。
Seq ID No.1：
5’-CTCATGccagacagaaaagcggctgttagtcactggcagcaaGATATCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGAGGCGGATCTGGCGGAGGCGGATCTgagaatttgtattttcagggtGGCGGAGGCGGAGGTACCCTG-3’
Seq ID No.2：5’-GGTACCCTGGCGGTGCCTGGGCCAG-3’
Seq ID No.3：5’-GCGGCCGCCTAGGTTGGACCCATGGGTGCAGCACCC-3’
采用HindIII/KpnI酶切位点将合成的BC2T-TEV多肽基因片段连接到pENTR载体上pENTR1A-GFP-N2(addgene:catalog#19364)。用引物dN-SARM1-F和dN-SARM1-R将dN-SARM1基因片段扩增出来，通过KpnI和NotI酶切位点将扩增获得的dN-SARM1基因片段构建到带有BC2T-TEV的pENTR载体上。本例的所有核酸内切酶购买于thermo。
PCR扩增获得的dN-SARM1基因片段为Seq ID No.4所示序列。
Seq ID No.4：
GGTACCCTGGCGGTGCCTGGGCCAGATGGGGGCGGTGGCACGGGCCCATGGTGGGCTGCGGGTGGCCGCGGGCCCCGCGAAGTGTCGCCGGGGGCAGGCACCGAGGTGCAGGACGCCCTGGAGCGCGCGCTGCCGGAGCTGCAGCAGGCCTTGTCCGCGCTGAAGCAGGCGGGCGGCGCGCGGGCCGTGGGCGCCGGCCTGGCCGAGGTCTTCCAACTGGTGGAGGAGGCCTGGCTGCTGCCGGCCGTGGGCCGCGAGGTAGCCCAGGGTCTGTGCGACGCCATCCGCCTCGATGGCGGCCTCGACCTGCTGTTGCGGCTGCTGCAGGCGCCGGAGTTGGAGACGCGTGTGCAGGCCGCGCGCCTGCTGGAGCAGATCCTGGTGGCTGAGAACCGAGACCGCGTGGCGCGCATTGGGCTGGGCGTGATCCTGAACCTGGCGAAGGAACGCGAACCCGTAGAGCTGGCGCGGAGCGTGGCAGGCATCTTGGAGCACATGTTCAAGCATTCGGAGGAGACATGCCAGAGGCTGGTGGCGGCCGGCGGCCTGGACGCGGTGCTGTATTGGTGCCGCCGCACGGACCCCGCGCTGCTGCGCCACTGCGCGCTGGCGCTGGGCAACTGCGCGCTGCACGGGGGCCAGGCGGTGCAGCGACGCATGGTAGAGAAGCGCGCAGCCGAGTGGCTCTTCCCGCTCGCCTTCTCCAAGGAGGACGAGCTGCTTCGGCTGCACGCCTGCCTCGCAGTAGCGGTGTTGGCGACTAACAAGGAGGTGGAGCGCGAGGTGGAGCGCTCGGGCACGCTGGCGCTCGTGGAGCCGCTTGTGGCCTCGCTGGACCCTGGCCGCTTCGCCCGCTGTCTGGTGGACGCCAGCGACACAAGCCAGGGCCGCGGGCCCGACGACCTGCAGCGCCTCGTGCCGTTGCTCGACTCT AACCGCTTGGAGGCGCAGTGCATCGGGGCTTTCTACCTCTGCGCCGAGGCTGCCATCAAGAGCCTGCAAGGCAAGACCAAGGTGTTCAGCGACATCGGCGCCATCCAGAGCCTGAAACGCCTGGTTTCCTACTCTACCAATGGCACTAAGTCGGCGCTGGCCAAGCGCGCGCTGCGCCTGCTGGGCGAGGAGGTGCCACGGCCCATCCTGCCCTCCGTGCCCAGCTGGAAGGAGGCCGAGGTTCAGACGTGGCTGCAGCAGATCGGTTTCTCCAAGTACTGCGAGAGCTTCCGGGAGCAGCAGGTGGATGGCGACCTGCTTCTGCGGCTCACGGAGGAGGAACTCCAGACCGACCTGGGCATGAAATCGGGCATCACCCGCAAGAGGTTCTTTAGGGAGCTCACGGAGCTCAAGACCTTCGCCAACTATTCTACGTGCGACCGCAGCAACCTGGCGGACTGGCTGGGCAGCCTGGACCCGCGCTTCCGCCAGTACACCTACGGCCTGGTCAGCTGCGGCCTGGACCGCTCCCTGCTGCACCGCGTGTCTGAGCAGCAGCTGCTGGAAGACTGCGGCATCCACCTGGGCGTGCACCGCGCCCGCATCCTCACGGCGGCCAGAGAAATGCTACACTCCCCGCTGCCCTGTACTGGTGGCAAACCCAGTGGGGACACTCCAGATGTCTTCATCAGCTACCGCCGGAACTCAGGTTCCCAGCTGGCCAGTCTCCTGAAGGTGCACCTGCAGCTGCATGGCTTCAGTGTCTTCATTGATGTGGAGAAGCTGGAAGCAGGCAAGTTCGAGGACAAACTCATCCAGAGTGTCATGGGTGCCCGCAACTTTGTGTTGGTGCTATCACCTGGAGCACTGGACAAGTGCATGCAAGACCATGACTGCAAGGATTGGGTGCATAAGGAGATTGTGACTGCTTTAAGCTGCGGCAAGAACATTGTGCCCATCATTGATGGCTTCGAGTGGCCTGAGCCCCAGGTCCTGCCTGAGGACATGCAGGCTGTGCTTACTTTCAACGGTATCAAGTGGTCCCACGAATACCAGGAGGCCACCATTGAGAAGATCATCCGCTTCCTGCAGGGCCGCTCCTCCCGGGACTCATCTGCAGGCTCTGACACCAGTTTGGAGGGTGCTGCACCCATGGGTCCAACCTAG
PCR扩增反应体系为：5×PrimeSTAR Buffer(Mg 2+plus)10μL、dNTP Mixture(2.5mM each)4μL、加入终浓度0.2μmol/L的dN-SARM1-F、加入终浓度0.2μmol/L的dN-SARM1-R、DNA模板100ng、PrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5U/μL)0.5μL，最后补充灭菌ddH 2O至50μL。全长的SARM1由维真生物公司全合成到pUC57质粒中，以pUC57-SARM1作为DNA模版进行PCR。
PCR扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳，然后用Omega胶回收试剂盒D2500-02回收纯化，切胶回收具体步骤参考试剂盒说明书。回收纯化的PCR扩增产物用于构建到带有BC2T-TEV的pENTR载体上。
重组质粒的构建体系步骤如下：
酶切反应体系：PCR扩增回收产物或质粒800ng、核酸内切酶(Fastdigest)各1μL、缓冲液1μL，补充灭菌水至体积10μL。酶切反应条件为37℃恒温30分钟。
质粒连接：酶切反应结束后，将酶切的PCR扩增回收产物300ng、酶切的质粒50ng，与T4DNA连接酶1μL、T4DNA连接酶缓冲液1μL混合均匀，并补充灭菌水至体积20μL。连接条件为16℃恒温过夜。
连接产物采用琼脂糖凝胶电泳，然后用Omega胶回收试剂盒D2500-02回收纯化，回收纯化产物即本例的重组质粒，标记为pENTR1A-BC2T-dN-SARM1。
pENTR1A-BC2T-dN-SARM1质粒构建完成后，通过LR反应将dN-SARM1重组至pLenti-CMV-puro-dest。
重组反应体系：150ng的pENTR1A-BC2T-dN-SARM1、50ng的pLenti-CMV-puro-dest、1μL的5×LR Clonase TMreaction buffer，补充灭菌水至总体积5μL。
(2)转染
本例通过脂质体lipofectamine 2000(Life Technologies公司)将构建的pLenti-CMV-puro-dest和病毒包装质粒psPAX2,pMD2.G(addgene psPAX2:#12260,pMD2.G:#12259)共同转染到HEK293T细胞(ATCC)中，制备带有dN-SARM1阅读框的病毒。具体如下：
在3.5cm皿中铺1×10 6个细胞，第二天转染。
质粒混合物：1.7μg的pLenti-dN-SARM1、1.7μg的psPAX2、0.6μg的pMD2.G、8μL lipofectamine 2000转染试剂，根据说明书进行转染，8小时后换液，收集48小时的病毒。
(3)细胞筛选
采用dN-SARM1病毒感染“(2)转染”步骤获得的HEK293T细胞，通过加入嘌呤霉素筛选获得稳定表达dN-SARM1蛋白的细胞。具体如下：
病毒：80μL/3.5cm感染2×10 5，感染48小时后，加2μg/mL的嘌呤霉素进行筛选，筛选48小时后，不感染病毒的细胞已完全死亡。感染病毒的细胞大部分存活，再次加入2μg/mL的嘌呤霉素二次筛选48小时。
(4)蛋白质提取
培养并收集“(3)细胞筛选”步骤获得的稳定表达dN-SARM1蛋白的细胞，通过洋地黄皂甙裂解的方式获得细胞质中表达的dN-SARM1蛋白，用于体外活性测定实验。具体如下：
细胞培养用DMEM培养于10cm皿中，用trypsin-EDTA将细胞消化下来，然后1000rpm离心5分钟，加入PBS洗一次，然后用含有100μM毛地黄皂苷的PBS将细胞重悬，0.6mL PBS/10cm细胞，裂解5分钟。取细胞加入台盼蓝显微镜下观察，90％以上的细胞已经被裂解。将5000rpm离心10分钟，收集dN-SARM1蛋白的上清。
生物活性实施例2：抑制SARM1酶活性的体外生物化学测试(％抑制率)
采用通过上述生物活性实施例1中“SARM1蛋白的表达纯化”“(4)蛋白质提取”获得的dN-SARM1蛋白，对化合物进行PC6荧光法检测[中国专利202010528147.3]。
反应条件：
首先将0.05μg/ml dN-SARM1和20μM的化合物在50mM Tris-HCl(pH 7.5)溶液中孵育10分钟，然后50μM NAD、50μM PC6作为底物和50μM NMN作为激活剂加入与药物孵育后的dN-SARM1蛋白中，常温下反应30分钟。其中，各组分的浓度为反应体系中的终浓度。
在反应过程中，通过酶标仪检测PC6荧光波谱动力学，其中检测激发波长和发射波长分别为390nm和520nm。最终采用反应速率表示蛋白的活性，反应速率越高表明蛋白活性越强，化合物的抑制效率越低。
下表1中提供了一些化合物在20μM对SARM1酶活性的抑制率区间：A>90％；B:50-89％；C:25-49％；
表1
化合物编号 酶活性的抑制率
1 A
19 A
20 B
22 B
24 A
25 A
26 A
27 B
28 B
32 A
33 A
34 A
35 B
37 B
40 A
41 A
44 B
46 A
48 B
49 A
50 A
53 A
54 A
55 A
56 A
57 A
58 B
75 A
77 A
78 A
79 A
90 A
94 A
95 B
105 A
108 B
109 B
110 A
115 A
122 A
123 A
124 A
125 A
126 A
127 B
128 A
129 A
130 A
131 A
132 A
133 B
134 A
135 B
136 A
139 B
142 A
143 A
144 A
145 A
146 A
147 A
148 A
149 A
150 A
151 A
152 A
153 A
154 A
生物活性实施例3：抑制SARM1酶活性的体外生物化学测试(IC 50)
首先将200μM的化合物加入到含有0.05μg/ml dN-SARM1的50mM Tris-HCl(pH 7.5)溶液中，然后取一半加入等体积含有0.05μg/ml dN-SARM1的50mM Tris-HCl(pH 7.5)溶液混合，以此类推将药物稀释6次，终浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.25、3.125μM，或200、50、12.5、3.125、0.78、0.195、0.049μM，不加入抑制剂的为对照组，在室温孵育10分钟。
然后50μM NAD、50μM PC6作为底物和50μM NMN作为激活剂加入与抑制剂的孵育后的dN-SARM1蛋白中，常温下反应30分钟。其中，各组分的浓度为反应体系中的终浓度。
在反应过程中，通过酶标仪检测PC6荧光波谱动力学，其中检测激发波长和发射波长分别为390nm和520nm。最终采用反应速率表示蛋白的活性并计算半数抑制浓度，反应速率越高表明蛋白活性越强，化合物的抑制效率越低。
化合物抑制SARM1酶活性的剂量曲线采用上述方法。
在下表2中提供了这些化合物在测定中的IC 50区间：
抑制SARM1酶活性的IC 50区间：A<1.0μM；B:1-10μM；C:10-25μM
表2
化合物编号 IC 50
2 A
5 B
6 B
7 B
8 B
9 B
10 B
11 B
12 B
13 A
14 B
15 B
16 B
17 B
18 B
20 A
23 B
24 B
25 B
26 A
27 B
32 B
33 B
34 B
37 B
40 B
41 B
42 A
43 B
44 B
46 B
47 A
49 B
50 B
53 B
54 A
55 B
56 A
57 A
58 A
59 B
60 B
61 B
62 B
63 B
64 B
65 A
67 B
68 B
69 B
70 B
72 B
73 B
74 B
75 B
76 B
77 B
78 A
79 A
80 B
81 B
82 B
83 B
84 B
85 B
86 A
87 A
89 A
90 B
91 B
92 B
94 A
96 A
99 B
105 B
108 B
110 A
113 B
114 A
115 A
116 A
117 B
118 B
119 A
120 A
121 A
122 A
123 A
124 B
125 B
128 B
129 A
130 A
131 B
132 B
134 A
136 A
143 B
144 A
145 A
146 B
149 B
150 B
151 B
152 B
153 B
154 A
156 B
157 B
158 B
159 A
160 A
161 A
162 A
163 A
164 A
165 A
166 A
167 A
168 A
169 A
170 A
171 A
172 A
173 B
174 A
175 A
176 B
177 B
178 A
179 A
180 B
181 B
182 B
183 B
184 B
185 B
186 B
191 B
192 B
193 B
194 B
195 B
196 B
197 B
199 B
200 B
201 B
202 B
203 A
204 B
205 B
207 B
208 B
209 B
210 B
211 B
212 B
213 B
217 B
218 B
219 B
220 B
221 B
222 B
223 A
226 B
227 B
229 B
230 B
231 B
232 B
234 B
235 B
236 A
237 A
238 A
239 A
240 A
241 A
242 A
244 B
245 B
246 B
247 B
248 B
249 B
250 B
251 B
253 B
254 A
255 A
256 A
257 A
258 A
259 A
260 A
261 A
262 A
263 A
264 A
265 A
266 B
267 A
268 A
269 B
270 A
271 A
272 B
273 B
274 B
275 B
276 B
278 B
283 B
284 B
285 B
286 B
290 B
291 B
292 B
293 A
294 B
295 B
296 B
297 B
298 B
301 A
302 B
304 B
305 A
306 A
307 A
308 B
309 B
310 B
311 A
312 B
生物活性实施例4：在诱导型过表达SARM1的细胞系中检测药物的抑制活性
(1)iSARM1细胞系制备
本例采用PCR扩增SARM1的基因序列，构建到pInducer20-neo质粒中。利用脂质体包装pInducer20-SARM1病毒，感染HEK293，获得诱导型的SARM1过表达的细胞系，标记为iSARM1(HEK293)。具体制备如下：
本例采用Seq ID No.5和Seq ID No.6所示序列的引物，进行PCR扩增SARM1基因序列，PCR扩增产物回收、酶切、重组质粒构建、转染和细胞筛选都与“一、SARM1蛋白的表达纯化”中的dN-SARM1一致，唯一区别的是，在进行“(3)细胞筛选”时，采用2mg/mL新霉素替换“2μg/mL嘌呤霉素”，其余都相同，在此不累述。
Seq ID No.5：5’-TCTAGAGCCACCATGGTCCTGACGCTGCTTC-3’
Seq ID No.6：5’-GAATTCTTAGGTTGGACCCATGGGTG-3’
(2)检测抑制剂对细胞系中SARM1蛋白的活性抑制
首先用0.05mg/ml多聚赖氨酸处理96孔培养皿5分钟，用PBS清洗一次。将3×104的iSARM1(HEK293)铺板到96孔板中，在37℃和5％的培养箱中培养过夜。第二天，加入终浓度50μM的抑制剂到细胞中，在培养箱中孵育1.5小时；然后，加入终浓度100μM的激活剂CZ-48，在共同孵育16小时，同时设置不加CZ-48或不加药物的对照组。最后检测细胞内cADPR水平来表示SARM1的活性，计算出50μM抑制剂在细胞中对SARM1的抑制率。
cADPR测定方法具体如下：首先用PBS将细胞清洗一次，加入150μl预冷的0.6M高氯酸(PCA)将细胞快速裂解并沉淀蛋白。将PCA上清转移至1.5ml的离心管中，培养基中的蛋白用100μl 1M NaOH重新溶解。上清加入0.5ml有机试剂混合液(三辛胺：氯仿＝1：3)，将PCA从水中萃取出来。充分震荡后，12000rpm离心10分钟，溶液分为3层：上层水相，包含目的小分子；下层有机相，PCA 溶于其中；而上下两层之间为薄薄的一层蛋白层，取上层转移至新的离心管中。按1:100的比例向溶液中加1M Tris-Mg(1M Tris(pH 8.0)：1M MgCl2＝9：1)，按1：250的比例加入NADase，在37℃处理过夜，去除混合液中的NAD+。处理完成后，用Millipore的10K 96孔滤膜板过滤除去NADase。
通过Cycling分析法测定溶液中cADPR的含量，具体操作如下，取20μl待测样品或cADPR标准品加入96孔不透明白板中。制备反应液：9.6ml PBS(pH 7.4)，200μl ethanol，150μl 1mg/ml AD，10μl 10mM FMN，5μl 18mg/ml Diaphorase，10μl 10mM Resazurin，100μl 1M Nam。分出一半反应液加入0.2μg/ml cyclase，不加入cyclase的反应液为对照实验。每个样品分为两组，每组3个重复，分别加入含有或不含有cyclase的反应液开始反应，记录30分钟内的反应动力学曲线(Ex:Em＝544/599)。计算反应平均斜率，并且通过cADPR标准品换算得到准确的cADPR含量。绘制细胞内cADPR含量及对应抑制剂浓度的曲线，计算抑制剂的半数抑制浓度。
使用上述方法，在诱导型过表达SARM1的细胞系中的药物抑制活性
(EC50)见下表3：细胞活性EC50区间：A<1.0μM；B:1-10μM；C:10-25μM
表3
化合物编号 EC 50
2 B
6 A
7 B
8 B
9 B
10 A
11 A
12 A
13 B
14 B
15 B
17 B
20 B
25 B
32 B
33 B
34 B
40 B
44 B
47 A
49 A
50 B
63 B
65 B
68 B
69 B
70 B
75 A
78 B
79 B
84 A
87 B
90 B
96 B
99 B
105 B
113 B
114 B
115 B
116 A
118 A
119 B
121 A
122 A
123 A
129 B
130 B
155 A
156 B
157 B
158 A
159 B
160 A
161 B
162 A
164 B
167 A
168 B
169 B
171 A
181 B
183 B
185 B
201 A
205 A
211 A
212 A
213 A
215 A
219 B
220 B
221 A
227 A
230 B
231 B
234 B
236 B
237 A
238 A
239 A
240 A
241 A
244 A
245 A
246 B
247 A
248 A
249 A
251 B
253 B
254 B
255 B
256 B
259 B
260 B
262 A
272 B
273 B
274 B
275 B
276 B
278 B
301 B
307 B

Claims (12)

  1. 式I化合物：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100001
    或者其可药用盐或立体异构体，
    其中，
    A代表CH或N；
    E代表CH或N；
    R 1独立地选自氢、卤素、CF 3、CN、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、氨基、CF 3C(O)-NH-、CF 3C(O)-N(CH 3)-、C 1-C 6烷基氨基、C 3-C 6环烷基氨基、C 6-C 14芳基、C 5-C 14杂芳基、C 6-C 14芳基氨基、C 6-C 14杂芳基氨基、-OH、C 6-C 14芳基氧基、-CONH 2、-SO 2NH 2、C 1-C 6烷基-C(O)NR 5-、C 3-C 6环烷基-C(O)NR 5-和C 3-C 6杂环烷基-C(O)NR 5-、C 1-C 6烷基-OC(O)NR 5-、C 3-C 6环烷基-OC(O)NR 5-、C 3-C 6杂环烷基-OC(O)NR 5-、C 1-C 6烷基-OC(O)NR 5-(C 1-C 4烷基)-、C 1-C 6烷基-C(O)NR 5-(C 1-C 4烷基)-、C 3-C 6环烷基-OC(O)NR 5-(C 1-C 4烷基)-、C 3-C 6环烷基-C(O)NR 5-(C 1-C 4烷基)-、(C 6-C 14芳基)-(C 1-C 6烷基)-CO-N(R 5)-、(C 6-C 14芳基)-(C 3-C 6烷基)-N(R 5)-、(C 6-C 14芳基)-(C 3-C 6烯基)-N(R 5)-；上述C 1-C 6烷基中的1个碳原子可以被1个选自N、O和S原子的杂原子代替；优选地，R 1独立地选自C 1-C 6烷基氨基、C 3-C 6杂环烷基氨基、C 1-C 6烷基酰基氨基、1-吗啉基、C 1-C 6烷基-OC(O)NR 5-；
    X代表环状结构，选自C 3-C 6环烷基、C 3-C 6环烯基、C 3-C 6杂环烷基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基，或者X缺失；优选地，X选自苯基、吡啶基、甲氧基取代的吡啶基、噻唑基、环己基、环己烯基，其 中所述苯基可以被以下取代基取代：-SO 2-NH 2、-NH-COCH 3、-NH 2、-CO-NH 2、-OCH 3、卤素、C 1-C 4烷基、-SO 2-N(BoC)CH 3和C 1-C 4烷基-NH-SO 2-；
    R 2独立地选自氢、卤素、-NH 2、-N(R 5)-CO-R、-CO-N(R 5)-R、-N(R 5)-SO 2-R、-SO 2-N(R 5)-R、-COOR、-COR、-(C 1-C 4烷基)-OR、-(C 1-C 4烷基)-N(CH 3) 2、-NH(C 1-C 4烷基)-R、-N(R 5)-R、-NHCO-(C 3-C 6环烷基)-(C 3-C 6杂环烷基)、-OR、-O-(C 1-C 4烷基)-R和R；
    R选自C 1-C 4烷氧基、C 1-C 12烷基、-CONH 2、-SO 2-NH 2、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、-(C 1-C 12烷基)-(C 6-C 14)芳基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基，其中所述C 1-C 12烷基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基任选地被1、2或3个卤素取代，并且所述C 1-C 12烷基中的1至4个-CH 2-单元任选地被O原子、S原子、-CO-或-NH-所替代；
    R 5选自H、C 1-C 4烷基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、C 1-C 4烷氧基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基；
    R 3独立地选自氢、C 1-C 4烷基和C 1-C 4烷氧基羰基；
    其中上述C 3-C 6杂环烷基和C 5-C 14杂芳基中含有1或2个选自N、O和S原子的杂原子；
    所述R 1和R 2可以通过碳-碳键或醚键连接成14至16元环，所述环中含有1-4个选自N、O和S的杂原子，优选地，所述环中含有3-4个N原子和1-2个O或S原子；
    m、n为选自1、2和3的正整数。
  2. 根据权利要求1所述的式I化合物或者其可药用盐或立体异构体，其中式I化合物具有以下式II结构：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100002
    Figure PCTCN2022114815-appb-100003
    其中E、R 1、R 2和X具有如权利要求1中所述的定义。
  3. 根据权利要求1的式I化合物或者其可药用盐或立体异构体，其中式I化合物具有以下式III结构：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100004
    其中E、R 1和R 2具有如权利要求1中所述的定义；
    Y 1和Y 1’彼此独立地为CH或N。
  4. 根据权利要求1或3的式I化合物或者其可药用盐或立体异构体，其中式I化合物具有以下式IV结构：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100005
    其中E和R 2具有如权利要求1中所述的定义；
    Y 1和Y 1’彼此独立地为CH或N；
    Y 2选自-O-、-NH-、-NR 5-、-NR 5-(C 1-C 4烷基)-和-NR 5-(C 3-C 6环烷基)-，或者Y 2不存在；
    R 1’选自R、-C(＝O)-R、-SO 2-R、-C(＝O)-OR和-SO 2NHR；其中R 5和R具有如权利要求1中所述的定义。
  5. 根据权利要求4的式I化合物或者其可药用盐或立体异构体，其中式I化合物具有以下式V结构：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100006
    其中，
    E、R 1’和Y 2具有如权利要求4中所述的定义；
    Y 3选自-N(R 5)CO-、-CO-N(R 5)-、-N(R 5)-SO 2-、-SO 2-N(R 5)-、-CO 2-、-CO-、-NH-(C 1-C 4烷基)-、-N(R 5)-、-O-(C 1-C 4烷基)-和-O-，或者Y 3不存在；
    R 4选自C 1-C 12烷基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基，其中所述C 1-C 12烷基、C 3-C 6环烷基、C 3-C 6杂环烷基、C 6-C 14芳基和C 5-C 14杂芳基任选地被1、2或3个卤素取代；所述C 3-C 6杂环烷基和C 5-C 14杂芳基中含有1或2个选自N、O和S原子的杂原子；并且所述C 1-C 12烷基中的1至4个-CH 2-单元任选地被O原子、S原子、-CO-或-NH-所替代。
  6. 式VI化合物，或者其可药用盐或立体异构体：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100007
    其中，
    E、R 1、R 2、Y 1、Y 1’、Y 2、Y 3和R 4具有如权利要求5中所述的定义；L为C 2-C 12亚烷基，其中所述C 2-C 12亚烷基中的1、2、3或4个-CH 2-单元任选地被1、2、3或4个O原子、N原子、-CO-、-CONH-或-NHCO-所替代；
    Q为E3连接酶配体，优选为VHL配体
    Figure PCTCN2022114815-appb-100008
    Figure PCTCN2022114815-appb-100009
    或者Q为选自如下的结构单元：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100010
    其中变量A、E、X、R 1、R 2具有权利要求1中所述的定义；
    或者Q是
    Figure PCTCN2022114815-appb-100011
  7. 式VII化合物，或者其可药用盐或立体异构体：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100012
    其中，
    E、R 1、R 2、R 1’、Y 1、Y 1’和Y 2具有如权利要求5中所述的定义；
    Y 3选自-N(R 5)CO-、-CO-N(R 5)-、-N(R 5)-SO 2-、-SO 2-N(R 5)-、-CO 2-、-CO-、-NH-(C 1-C 4烷基)-、-N(R 5)-、-O-(C 1-C 4烷基)-、和-O-，或者Y 3不存在；
    L为C 2-C 12亚烷基，其中所述C 2-C 12亚烷基中的1、2、3或4个-CH 2-单元任选地被1、2、3或4个O原子、N原子、-CO-、-CONH-或-NHCO-所替代；
    Q为E3连接酶配体，优选为VHL配体
    Figure PCTCN2022114815-appb-100013
    Figure PCTCN2022114815-appb-100014
    或者Q为选自如下的结构单元：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100015
    其中变量A、E、X、R 1、R 2具有权利要求1中所述的定义；
    或者Q是
    Figure PCTCN2022114815-appb-100016
  8. 根据权利要求1-7中任一项所述的化合物或者其可药用盐或立体异构体，其中所述化合物选自：
    Figure PCTCN2022114815-appb-100017
    Figure PCTCN2022114815-appb-100018
    Figure PCTCN2022114815-appb-100019
    Figure PCTCN2022114815-appb-100020
    Figure PCTCN2022114815-appb-100021
    Figure PCTCN2022114815-appb-100022
    Figure PCTCN2022114815-appb-100023
    Figure PCTCN2022114815-appb-100024
    Figure PCTCN2022114815-appb-100025
    Figure PCTCN2022114815-appb-100026
    Figure PCTCN2022114815-appb-100027
    Figure PCTCN2022114815-appb-100028
    Figure PCTCN2022114815-appb-100029
    Figure PCTCN2022114815-appb-100030
    Figure PCTCN2022114815-appb-100031
    Figure PCTCN2022114815-appb-100032
    Figure PCTCN2022114815-appb-100033
    Figure PCTCN2022114815-appb-100034
    Figure PCTCN2022114815-appb-100035
  9. 如权利要求1至8中任一项所述的化合物或者其可药用盐或立体异构体在制备用于治疗或预防神经退行性疾病或神经性疾病或病症中的应用。
  10. 如权利要求1至8中任一项所述的化合物或者其可药用盐或立体异构体在制备SARM1酶活性抑制剂中的应用。
  11. 如权利要求1至8中任一项所述的化合物或者其可药用盐或立体异构体在制备用于治疗或预防轴突变性相关疾病或病症中的应用。
  12. 根据权利要求9或10或11的应用，其中所述神经退行性疾病或神经性疾病或病症或轴突变性相关疾病或病症选自阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、多发性硬化症(multiple sclerosis)、肌萎缩性硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、外周神经病变(peripheral neuropathy)。
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