TW202334132A - Ｓａｒｍ１酶活性抑制劑及其應用 - Google Patents

Abstract

本發明提供了SARM1酶活性抑制劑在治療神經退行性疾病或神經性疾病或病症中的應用，本發明特別提供了作為SARM1酶活性抑制劑的式I化合物及其藥物組合物。

Description

SARM1酶活性抑制劑及其應用

本發明涉及可用於抑制SARM1酶活性的化合物，和/或這些化合物在治療和/或預防與SARM1酶活性相關的神經退行性或神經性疾病或病症中的應用。

本發明要求於2021年8月26日提交到中國國家智慧財產權局的發明名稱為“SARM1酶活性抑制劑及其應用”的中國專利申請202110990705.2的優先權，其內容通過引用以整體併入本文。

神經退行性疾病是一類可以嚴重危害人類的疾病，其可以造成破壞性傷害，如神經細胞死亡的漸進性疾病。作為首要的神經變性疾病，已經知道的有阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、肌萎縮性脊髓側索硬化(Amyotrophic lateral Sclerosis,ALS)、亨廷頓病(Hantington’s disease)等中樞神經疾病和如糖尿病等週邊性神經疾病。其中大多數與衰老有關，實際上這些疾病的發作隨著年齡的增加而增加，然而也存在發作于中年人甚至更年輕者身上的情況。

作為大腦結構和功能的研究結果，神經遞質和神經營養因數的作用已逐步地闡明，但是有關神經變性的很多局部原因還不清楚。僅對帕金森病，闡明了該疾病與特殊的神經遞質即多巴胺之間的關係，已用多巴胺的前體L-多巴作為減輕神經症狀和恢復神經功能的藥物。但是，L-多巴不能抑制神經變性的發展，而且隨著病情的 發展逐漸地喪失其作用，即多巴胺基的神經細胞變性和缺損。同樣，阿爾茨海默病也是多種神經細胞如乙醯膽鹼基神經細胞、一元胺基神經細胞等的變性和缺損引起的，作為治療這種疾病的藥物，膽鹼酯酶抑制劑已投放市場或正在開發。不過，治療帕金森病的L-多巴仍限於症候治療，以暫時改善神經症狀。

因此，至今對於神經退行性疾病而言，尤其缺乏有效的治療藥物。

研究發現，神經軸突損傷出現於多種神經退行性疾病、意外損傷等神經系統疾病中。軸突退化可引起周圍神經系統結構壞死與功能紊亂，最終導致獲得性或遺傳性中樞神經系統退行性病變。

儘管目前還沒有一套非常有效的藥理學方法能夠精確評估軸突退化所導致的發病率的權重，但是已經在組織病理學研究中發現，在阿爾茲海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、多發性硬化症(multiple sclerosis)、肌萎縮性硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、外周神經病變(peripheral neuropathy)等多種神經病變早期觀察到顯著的軸突損傷降解，表明軸突退化在神經病變發生發展中有重要作用(Fischer等，Neuro-degenerative Diseases,2007年，4：431-442)。因此，通過減弱甚至阻斷軸突退化，維持神經元結構和功能的完整可能是使多種神經系統疾病受益的治療方案。

在缺乏針對神經退行性疾病的有效治療藥物的情況下，現有技術迫切需要研究開發新的化合物，尤其是化學小分子，包括對神經軸突變性有作用的化合物。

本發明人經過長期研究，意外發現一類具有顯著的SARM1酶活性抑制作用的化合物，並且發現所述化合物可改善軸突變性，並用於治療或預防神經退行性疾病及其相關病症。

SARM1由三個結構域組成，分別是氮端的ARM(Armadillo/HEAT repeat)結構域、兩個串聯的SAM(Sterile alpha motif)結構域和碳端TIR(Toll/Interleukin Receptor)結構域，此外在氮端還有一段線粒體定位信號肽。

已經知道，在野生型神經元中，軸突損傷誘導NAD⁺耗竭和軸突變性；敲除SARM1抑制軸突變性，且NAD⁺維持在正常水準，表明SARM1促進NAD⁺的消耗，加劇了軸突變性。

美國華盛頓大學醫學院的Milbrandt課題組製備了SARM1的TIR結構域(SARM1-TIR)並發現它具有NAD⁺水解酶活性。進一步通過嚴格的大腸桿菌表達純化實驗和無細胞表達系統獲得高純度的SARM1-TIR，最終證明SARM1-TIR能夠催化NAD⁺產生腺苷二磷酸核糖(Adenosine 5’-diphosphate ribose，ADPR)和環腺苷二磷酸核糖(Cyclic adenosine 5’-diphosphate ribose，cADPR)。

SARM1是一個多功能信號酶，能夠催化多種底物NAD⁺、NADP⁺和NA等生成信號分子cADPR、ADPR和NAADP等。在多種神經退行性疾病中，SARM1被啟動，導致NAD⁺耗竭，進而啟動一個全新的細胞死亡機制；敲除SARM1能夠抑制軸突變性和疾病進程，因此被認為是相關神經疾病的潛在藥物靶點，包括TBI、AD、CIPN、ASL等。

本公開中，發明人製備了全長SARM1，用於NAD酶活性實驗，並用來篩選和獲得了本發明的具有酶活性抑制能力的化合物分子。

因此，基於上述發現，在第一方面，本發明提供了SARM1酶活性抑制劑在製備用於治療或預防神經退行性疾病或神經性疾病或病症中的應用。

在另一方面，本發明提供了SARM1酶活性抑制劑在製備用於治療或預防軸突變性相關疾病或病症中的應用。

特別地，本發明提供了可作為SARM1酶活性抑制劑的式I化合物：

或者其可藥用鹽或立體異構體，其中，A代表CH或N；E代表CH或N；R₁獨立地選自氫、鹵素、CF₃、CN、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、氨基、CF₃C(O)-NH-、CF₃C(O)-N(CH₃)-、C₁-C₆烷基氨基、C₃-C₆環烷基氨基、C₆-C₁₄芳基、C₅-C₁₄雜芳基、C₆-C₁₄芳基氨基、C₆-C₁₄雜芳基氨基、-OH、C₆-C₁₄芳基氧基、-CONH₂、-SO₂NH₂、C₁-C₆烷基-C(O)NR₅-、C₃-C₆環烷基-C(O)NR₅-和C₃-C₆雜環烷基-C(O)NR₅-、C₁-C₆烷基-OC(O)NR₅-、C₃-C₆環烷基-OC(O)NR₅-、C₃-C₆雜環烷基-OC(O)NR₅-、C₁-C₆烷基-OC(O)NR₅-(C₁-C₄烷基)-、C₁-C₆烷基-C(O)NR₅-(C₁-C₄烷基)-、C₃-C₆環烷基-OC(O)NR₅- (C₁-C₄烷基)-、C₃-C₆環烷基-C(O)NR₅-(C₁-C₄烷基)-、(C₆-C₁₄芳基)-(C₁-C₆烷基)-CO-N(R₅)-、(C₆-C₁₄芳基)-(C₃-C₆烷基)-N(R₅)-、(C₆-C₁₄芳基)-(C₃-C₆烯基)-N(R₅)-；上述C₁-C₆烷基中的1個碳原子可以被1個選自N、O和S原子的雜原子代替；優選地，R₁獨立地選自C₁-C₆烷基氨基、C₃-C₆雜環烷基氨基、C₁-C₆烷基醯基氨基、1-嗎啉基、C₁-C₆烷基-OC(O)NR₅-；X代表環狀結構，選自C₃-C₆環烷基、C₃-C₆環烯基、C₃-C₆雜環烷基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基，或者X缺失；優選地，X選自苯基、吡啶基、甲氧基取代的吡啶基、噻唑基、環己基、環己烯基，其中所述苯基可以被以下取代基取代：-SO₂-NH₂、-NH-COCH₃、-NH₂、-CO-NH₂、-OCH₃、鹵素、C₁-C₄烷基、-SO₂-N(BoC)CH₃和C₁-C₄烷基-NH-SO₂-；R₂獨立地選自氫、鹵素、-NH₂、-N(R₅)-CO-R、-CO-N(R₅)-R、-N(R₅)-SO₂-R、-SO₂-N(R₅)-R、-COOR、-COR、-(C₁-C₄烷基)-OR、-(C₁-C₄烷基)-N(CH₃)₂、NH-(C₁-C₄烷基)R-、-N(R₅)-R、-NHCO-(C₃-C₆環烷基)-(C₃-C₆雜環烷基)、-OR、-O-(C₁-C₄烷基)-R和R；R選自C₁-C₄烷氧基、C₁-C₁₂烷基、-CONH₂、-SO₂-NH-R、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、-(C₁-C₁₂烷基)-(C₆-C₁₄)芳基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基，其中所述C₁-C₁₂烷基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基任選地被1、2或3個鹵素取代，並且所述C₁-C₁₂烷基中的1至4個-CH₂-單元任選地被O原子、S原子、-CO-或-NH-所替代；R₅選自H、C₁-C₄烷基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、C₁-C₄烷氧基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基；R₃獨立地選自氫、C₁-C₄烷基和C₁-C₄烷氧基羰基； 其中上述C₃-C₆雜環烷基和C₅-C₁₄雜芳基中含有1或2個選自N、O和S原子的雜原子；所述R₁和R₂可以通過碳-碳鍵或醚鍵連接成14至16元環，所述環中含有1-4個選自N、O和S的雜原子，優選地，所述環中含有3-4個N原子和1-2個O或S原子；m、n為選自1、2和3的正整數。

在一個優選的方面，本發明的所述式I化合物具有以下式II結構：

其中E、R₁、R₂和X具有前述的定義。

在一個優選的方面，本發明的所述式I化合物具有以下式III結構：

其中E、R₁和R₂具有前述的定義；Y₁和Y₁’彼此獨立地為CH或N。

在另一個優選的方面，本發明的所述式I化合物具有以下式IV結構：

其中E和R₂具有前述的定義；Y₁和Y₁’彼此獨立地為CH或N；Y₂選自-O-、-NH-、-NR₅-、-NR₅-(C₁-C₄烷基)-和-NR₅(C₃-C₆環烷基)-，或者Y₂不存在；R₁’選自R、-C(=O)-R,-SO₂-R,-C(=O)-OR和-SO₂NHR；其中R₅和R具有前述的定義。

在又一個優選的方面，本發明的所述式I化合物具有以下式V結構：

其中，E、R₁’和Y₂具有前述的定義； Y₃選自N(R₅)CO-、-CO-N(R₅)-、-N(R₅)-SO₂-、-SO₂-N(R₅)-、-CO₂-、-CO-、-NH-(C₁-C₄烷基)-、-N(R₅)-、-O-(C₁-C₄烷基)-和-O-，或者Y₃不存在；R₄選自C₁-C₁₂烷基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基，其中所述C₁-C₁₂烷基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基任選地被1、2或3個鹵素取代；所述C₃-C₆雜環烷基和C₅-C₁₄雜芳基中含有1或2個選自N、O和S原子的雜原子；並且所述C₁-C₁₂烷基中的1至4個-CH₂-單元任選地被O原子、S原子、-CO-或-NH-所替代。

在又一個優選的方面，本發明的化合物具有以下式VI結構：

其中，E、R₁、R₂、Y₁、Y₁’、Y₂、Y₃和R₄具有前述的定義；L為C₂-C₁₂亞烷基，其中所述C₂-C₁₂亞烷基中的1、2、3或4個-CH₂-單元任選地被1、2、3或4個O原子、N原子、-CO-、-CONH-或-NHCO-所替代；Q為E3連接酶配體，優選為VHL配體

或者Q為如下的結構單元：

其中變數A、E、X、R₁、R₂具有前述的定義；或者Q是

。

在另一個優選的方面，本發明的化合物具有以下式VII結構：

其中，E、R₁、R₂、R₁’、Y₁、Y₁’和Y₂具有前述的定義；Y₃選自-N(R₅)CO-、-CO-N(R₅)-、-N(R₅)-SO₂-、-SO₂-N(R₅)-、-CO₂-、-CO-、-NH-(C₁-C₄烷基)-、-N(R₅)-、-O-(C₁-C₄烷基)-、和-O-，或者Y₃不存在；L為C₂-C₁₂亞烷基，其中所述C₂-C₁₂亞烷基中的1、2、3或4個-CH₂-單元任選地被1、2、3或4個O原子、N原子、-CO-、-CONH-或-NHCO-所替代； Q為E3連接酶配體，優選為VHL配體

或

；或者Q為選自如下的結構單元：

其中變數A、E、X、R₁、R₂具有前述的定義；或者Q是

。

在一些優選的實施方案中，本發明所述的化合物選自以下的化合物，或者其可藥用鹽或立體異構體：

在本文中，當提及式I-式VII化合物時，其還包括式I-式VII化合物的可藥用鹽或其立體異構體。

本發明還涉及一種治療或預防神經退行性疾病或與之相關的神經性疾病或病症的方法，包括向有此需要的物件給予本發明的作為SARM1酶活性抑制劑的化合物。特別地，本發明涉及一種治療或預防軸突變性相關疾病或病症的方法，包括向有此需要的物件給予本發明的作為SARM1酶活性抑制劑的化合物。更特別地，本發明涉及一種SARM1酶活性抑制方法，包括向有此需要的物件給予本發明的化合物；更特別地，本發明涉及一種抑制軸突退化的方法，包括向有此需要的物件給予本發明的化合物。本發明的化合物或組合物可以有效量給予所需要的物件或患者。

相應地，本文還涉及本發明所述的化合物或者其可藥用鹽或立體異構體在製備用於治療或預防神經退行性疾病或神經性疾病或病症中的應用。本文還涉及本發明所述的化合物或者其可藥用鹽或立體異構體在製備SARM1酶活性抑制劑中的應用。本文還涉及本發明所述的化合物或者其可藥用鹽或立體異構體在製備用於治療 或預防軸突變性相關疾病或病症中的應用。優選地，所述神經退行性疾病或神經性疾病或病症或軸突變性相關疾病或病症選自阿爾茲海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、多發性硬化症(multiple sclerosis)、肌萎縮性硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、外周神經病變(peripheral neuropathy)。

術語

在本文中，當提及具有特定結構式的“化合物”時，一般地還涵蓋其可藥用鹽、立體異構體、非對映異構體、對映異構體、外消旋混合物和同位素衍生物。

本領域技術人員公知，除了化合物的鹽外，溶劑合物、水合物是化合物的替代性存在形式，它們都可以在一定條件下轉化為所述化合物，因此，當在本文中當提到一種化合物時，一般地還包括它的溶劑合物和水合物。

本發明所述的可藥用鹽可使用例如以下的無機酸或有機酸而形成：“可藥用鹽”是指這樣的鹽，在合理的醫學判斷範圍內，其適用於接觸人和哺乳動物的組織，而沒有不適當的毒性、刺激性、過敏反應等，稱得上合理的受益/風險比。可以在本發明化合物的最終分離和純化期間原位製備所述鹽，或單獨通過將游離堿或游離酸與合適的試劑反應製備所述鹽。例如，游離堿可以與合適的酸反應。可藥用的酸加成鹽的示例是氨基(胺基)與無機酸(例如，鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或有機酸(例如，醋酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸)形成的鹽，或通過使用現有技術中的其他方法如離子交換形成的鹽。其他可藥用鹽包括海藻酸鈉、抗壞血酸鹽、苯磺酸鹽、己二酸鹽、樟腦磺酸鹽、天門冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、檸檬酸鹽、十二烷基硫酸鹽、 乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、葡萄糖酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯丙酸鹽、磷酸鹽、苦味鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等。

本發明的可藥用鹽可通過常規方法製備，例如通過將本發明的化合物溶解于與水可混溶的有機溶劑(例如甲醇、乙醇、丙酮和乙腈)，向其中添加過量的有機酸或無機酸水溶液，以使得鹽從所得混合物中沉澱，從中除去溶劑和剩餘的游離酸，然後分離所沉澱的鹽。

本發明所述的“溶劑合物”意指本發明化合物與一個或多個溶劑分子(無論有機的還是無機的)的物理締合。該物理締合包括氫鍵。在某些情形中，例如當一個或多個溶劑分子納入結晶固體的晶格中時，溶劑化物將能夠被分離。溶劑化物中的溶劑分子可按規則排列和/或無序排列存在。溶劑合物可包含化學計量或非化學計量的溶劑分子。“溶劑合物”涵蓋溶液相和可分離的溶劑合物。示例性溶劑合物包括但不限於水合物、乙醇合物、甲醇合物和異丙醇合物。溶劑化方法是本領域公知的。

本發明所述的“立體異構”分為構象異構和構型異構，構型異構還可分為順反異構和旋光異構(即光學異構)，構象異構是指具有一定構型的有機物分子由於碳、碳單鍵的旋轉或扭曲而使得分子各原子或原子團在空間產生不同的排列方式的一種立體異構現象，常見的有烷烴和環烷烴類化合物的結構，如環己烷結構中出現的椅式構象和船式構象。“立體異構體”是指當本發明化合物含有一個或多個 不對稱中心，因而可作為外消旋體和外消旋混合物、單一對映異構體、非對映異構體混合物和單一非對映異構體。本發明化合物有不對稱中心，每個不對稱中心會產生兩個光學異構體，本發明的範圍包括所有可能的光學異構體和非對映異構體混合物和純的或部分純的化合物。

特別地，本發明所述的化合物可以以互變異構體形式存在，其通過一個或多個雙鍵位移而具有不同的氫的連接點。例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互變異構體。各互變異構體及其混合物都包括在本發明的化合物中。所有化合物的對映異構體、非對映異構體、外消旋體、內消旋體、順反異構體、互變異構體、幾何異構體、差向異構體及其混合物等，均包括在本發明範圍中。

本發明的“同位素衍生物”是指在本專利中化合物被同位素標記的分子。通常用作同位素標記的同位素是：氫同位素，2H和3H；碳同位素：11C,13C和14C；氯同位素：35Cl和37Cl；氟同位素：18F；碘同位素：123I和125I；氮同位素：13N和15N；氧同位素：15O,17O和18O和硫同位素35S。這些同位素標記化合物可以用來研究藥用分子在組織中的分佈情況。某些重同位素，比如重氫(2H)，的取代能增強代謝的穩定性，延長半衰期從而達到減少劑量的目而提供療效優勢的。同位素標記的化合物一般從已被標記的起始物開始，用已知的合成技術象合成非同位素標記的化合物一樣來完成其合成。

當將本發明化合物可以與另外的SARM1酶活性抑制劑聯用用於治療或預防神經退行性疾病或相關的神經性疾病或病症，或者可以與另外的用於治療或預防神經退行性疾病或相關的神經性疾病或病症的活性藥物聯用，用於治療或預防神經退行性疾病或相關疾病或病症。

本發明的化合物或其可藥用鹽可作為活性成分通過口服或腸胃外施用，其有效量的範圍為在哺乳動物包括人(體重約70kg)的情況下0.1至2000mg/kg體重/天、優選0.1至100mg/kg體重/天，並且每天以單次或分次劑量，或者遵循/不遵循預定時間施用。活性成分的劑量可根據多個相關因素(例如待治療物件的情況、疾病類型和嚴重性、施用速率和醫生意見)進行調整。在某些情況下，小於以上劑量的量可能是合適的。

可根據常規方法中的任何一種將本發明藥物組合物配製成用於口服施用或腸胃外施用(包括肌內、靜脈內和皮下途徑、瘤內注射)的劑型，例如片劑、顆粒、粉末、膠囊、糖漿、乳劑、微乳劑、溶液或混懸液。

用於口服施用的本發明藥物組合物可通過將活性成分與例如以下的載體混合來製備：纖維素、矽酸鈣、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、玉米澱粉、乳糖、蔗糖、右旋糖、磷酸鈣、硬脂酸、表面活性劑、助懸劑、明膠、滑石、乳化劑和稀釋劑。在本發明的注射組合物中採用的載體的實例是水、甘油酯、鹽溶液、醇、二醇、葡萄糖溶液、醚(例如，聚乙二醇400)、油、脂肪酸、脂肪酸酯、表面活性劑、助懸劑和乳化劑。

如果無另外說明，使用質譜、核磁、HPLC、蛋白化學、生物化學、重組DNA技術和藥理的常規方法。在本申請中，如果無另外說明，可以使用“或”或“和”指“和/或”。

在說明書和請求項書中，給定化學式或名稱應涵蓋所有立體和光學異構體及其中存在上述異構體的外消旋物。除非另外指明，否則所有手性(對映異構體和非對映異構體)和外消旋形式均在本發明範圍內。所述化合物中還可存在C=C雙鍵、C=N雙鍵、環系統等的許多幾何異構體，且所有上述穩定異構體均涵蓋于本發明內。 本發明描述了本發明化合物的順式-和反式-(或E-和Z-)幾何異構體，且其可分離成異構體的混合物或分開的異構體形式。

本發明化合物可以光學活性或外消旋形式加以分離。用於製備本發明化合物和其中製備的中間體的所有方法均視為本發明的部分。在製備對映異構體或非對映異構體產物時，其可通過常規方法(例如通過色譜或分段結晶)進行分離。應當理解的是，可存在的所有互變異構體形式均包括在本發明內。本發明的化合物當作為現有技術已知化合物時可以通過商購獲得。

除非另有定義，否則當取代基被標注為“任選取代”時，所述取代基選自例如以下取代基，諸如烷基、環烷基、芳基、雜環基、鹵素、羥基、烷氧基、硝基、氰基、氧代、烷醯基、芳基氧基、烷醯基氧基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷基硫基等。

本文使用的術語“烷基”或“亞烷基”意欲包括具有指定碳原子數的支鏈和直鏈飽和脂族烴基團。本發明中的烷基優選C₁-C₁₂烷基、C₁-C₁₀烷基、C₁-C₈烷基，更優選C₁-C₆烷基，特別優選C₁-C₄烷基，尤其是C₁-C₃烷基。例如，“C₁-C₆烷基”表示具有1個至6個碳原子的烷基。烷基的實例包括但不限於甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和異丙基)、丁基(例如正丁基、異丁基、叔丁基)和戊基(例如正戊基、異戊基、新戊基)。對於本發明中的C₁-C₁₂烷基而言，其中的1至4個-CH₂-單元任選地被O原子、S原子或-NH-所替代。

術語“烷氧基”或“烷基氧基”是指-O-烷基。例如，“C₁-C₆烷氧基”(或烷基氧基)意欲包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆烷氧基。優選的烷氧基為C₁-C₁₀烷氧基、C₁-C₈烷氧基，更優選C₁-C₆烷氧基，特別優選C₁-C₄烷氧基，尤其是C₁-C₃烷氧基。烷氧基的實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和異丙氧基)和叔丁氧基。類似地，“烷基硫基”或“硫代烷氧基”表示具有指定數量碳原子的經硫 橋連接的如上文所定義的烷基；例如甲基-S-和乙基-S-。同樣，優選的烷基硫基為C₁-C₁₀烷基硫基、C₁-C₈烷基硫基，更優選C₁-C₆烷基硫基，特別優選C₁-C₄烷基硫基，尤其是C₁-C₃烷基硫基。

術語“羰基”是指由碳和氧兩種原子通過雙鍵連接而成的有機官能團(C=O或C(O))。

術語“芳基”，單獨或作為較大部分諸如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳基氧基烷基”的部分，是指具有總計6至14個環成員的單環、二環或三環的環系統，其中所述系統中的至少一個環為芳族的且其中所述系統中的每個環含有3至7個環成員。在本發明的某些實施方案中，“芳基”是指芳族環系統，其包括但不限於苯基、萘基、聯苯基、茚滿基、1-萘基、2-萘基和四氫萘基。本發明的芳基優選C₆-C₁₀芳基。術語“芳烷基”或“芳基烷基”是指連接至芳基環的烷基殘基。非限制性的實例包括苄基、苯乙基。

術語“環烷基”是指環狀烷基，其可為單環或二環。本發明的環烷基優選C₃-C₈環烷基，包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基和降莰烷基。

“鹵代”或“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。“鹵代烷基”意欲包括具有指定碳原子數且取代有1個或多個鹵素的支鏈和直鏈飽和脂族烴基團。鹵代烷基的實例包括但不限於氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。鹵代烷基的實例還包括意欲包括具有指定碳原子數且取代有1個或多個氟原子的支鏈和直鏈飽和脂族烴基團的氟代烷基，特別優選的是三氟甲基。

鹵代烷氧基表示具有指定數量碳原子的經氧橋連接的如上文所定義的鹵代烷基。例如，“C₁-C₆鹵代烷氧基”意欲包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆鹵代烷氧基。鹵代烷氧基的實例包括但不限於三 氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基和五氟乙氧基。類似地，“鹵代烷基硫基”或“硫代鹵代烷氧基”表示具有指定數量碳原子的經硫橋連接的如上文所定義的鹵代烷基；例如三氟甲基-S-和五氟乙基-S-。

本公開內容中，一個或更多個鹵素可以各自獨立地選自氟、氯、溴和碘。

術語“雜芳基”意指穩定的3元、4元、5元、6元、或7元芳香單環或7元、8元、9元、10元的芳香二環或芳香多環雜環，其為完全不飽和的、部分不飽和的，且其含有碳原子和1個、2個、3個或4個獨立地選自N、O和S的雜原子。氮和硫雜原子可任選地被氧化。氮原子為取代的或未取代的(即N或NR，其中R為H或如果被定義，則為另一取代基)。雜環可在得到穩定結構的任何雜原子或碳原子處連接至其側基。如果所得化合物是穩定的，則本文所述的雜環基可在碳或氮原子上被取代。雜環中的氮可任選地被季銨化。優選地，當雜環中S和O原子的總數超過1時，則這些雜原子彼此不相鄰。優選地，雜環中S和O原子的總數不大於1。當使用術語“雜環”時，其意欲包括雜芳基。芳雜基的實施例包括但不限於吖啶基、氮雜環丁基、吖辛因基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並硫代呋喃基、苯並噻吩基、苯並噁唑基、苯並噁唑啉基、苯並噻唑基、苯並三唑基、苯並四唑基、苯並異噁唑基、苯並異噻唑基、苯並咪唑啉基、哢唑基、4aH-哢唑基、哢啉基、色滿基、色烯基、噌啉基、十氫喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氫呋喃並[2,3-b]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、咪唑並吡啶基、假吲哚基(indolenyl)、二氫吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛紅醯基(isatinoyl)、異苯並呋喃基、異色滿基、異吲唑基、異二氫吲哚基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噻唑並吡啶基、異噁唑基、異噁唑並吡啶基、亞甲基二氧基苯基、嗎啉基、二氮雜萘基、八氫異喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁 二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑並吡啶基、噁唑烷基、萘嵌間二氮雜苯基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、呱嗪基、呱啶基、呱啶酮基、4-呱啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑並吡啶基、吡唑基、噠嗪基、吡啶並噁唑基、吡啶並咪唑基、吡啶並噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2-吡咯烷酮基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環基、四唑基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻唑並吡啶基、噻吩並噻唑基、噻吩並噁唑基、噻吩並咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫噸基、喹啉基、異喹啉基、酞嗪基、喹唑啉基、吲哚基、異吲哚基、二氫吲哚基、1H-吲唑基、苯並咪唑基、1,2,3,4-四氫喹啉基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、5,6,7,8-四氫-喹啉基、2,3-二氫-苯並呋喃基、色滿基、1,2,3,4-四氫-喹喔啉基和1,2,3,4-四氫-喹唑啉基。術語“雜芳基”還可以包括由上述所定義的“芳基”與單環“雜芳基”所形成的聯芳基結構，例如但不限於“-苯基聯吡啶基-”、“-苯基聯嘧啶基”、“-吡啶基聯苯基”、“-吡啶基聯嘧啶基-”、“-嘧啶基聯苯基-”；其中本發明還包括含有例如上述雜環的稠環和螺環化合物。

本文中所用的術語“取代”意指至少一個氫原子被非氫基團替代，條件是維持正常化合價且所述取代得到穩定的化合物。本文所用的環雙鍵為在兩個相鄰環原子之間形成的雙鍵(例如C=C、C=N或N=N)。

當任何變數在化合物的任何組成或式中出現一次以上時，其每次出現時的定義均獨立於其在其它每種情況下出現時的定義。因此，例如，如果顯示基團取代有0-3個R，則所述基團可任選地取 代有至多三個R基團，且在每次出現時R獨立地選自R的定義。此外，取代基和/或變數的組合僅在上述組合可產生穩定的化合物時才容許存在。

本文使用的術語“有效量”意指將會引起例如研究人員或臨床醫師所尋求的組織、系統、動物或人的生物學或醫學回應的藥物或藥劑(即本發明化合物)的量。此外，術語“治療有效量”意指這樣的量：與未接受上述量的相應受試者相比，所述量導致改善的治療、治癒、預防或減輕疾病、病症或副作用，或降低在疾病或病症的進展速度。有效量可以一個或多個給藥、施用或劑量給予且不意欲被特定的製劑或給藥途徑限制。該術語還包括在其範圍內的增強正常生理機能的有效量。

本文使用的術語“治療”包括導致改善病症、疾病、障礙等的任何效果，例如減輕、減少、調節、改善或消除，或改善其症狀。

術語“藥用”在本文中用於指如下那些化合物、物質、組合物和/或劑型：在合理醫學判斷的範圍內，其適於與人類和動物的組織接觸使用而無過高毒性、刺激性、過敏反應和/或其它問題或併發症，並與合理的益處/風險比相稱。

本文使用的短語“可藥用載體”意指藥用物質、組合物或媒介物，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、製造助劑(例如潤滑劑、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或硬脂酸鋅或硬脂酸)或溶劑包囊物質，其涉及將主題化合物從一個器官或身體的部分攜帶或運送至另一個器官或身體的部分。每種載體在與製劑的其它成分相容和對患者無害的意義上必須是“可接受的”。

術語“藥物組合物”意指包含本發明化合物與至少一種其它藥用載體的組合物。“藥用載體”是指本領域中通常接受用於將生物活性劑遞送至動物(具體為哺乳動物)的介質，包括(即)佐劑、賦形劑 或媒介物，諸如稀釋劑、防腐劑、填充劑、流動調控劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、增甜劑、矯味劑、芳香劑、抗細菌劑、抗真菌劑、潤滑劑和分散劑，這取決於給藥模式和劑型的性質。

如本文所用，某一化合物或藥物組合物，給藥後，可以使某一疾病、症狀或情況得到改善，尤指其嚴重度得到改善，延遲發病，減緩病情進展，或減少病情持續時間。無論固定給藥或臨時給藥、持續給藥或斷續給藥，可以歸因於或與給藥有關的情況。

給藥途徑

適合的給藥途徑包括但不限於，口服、靜脈注射、直腸、氣霧劑、非腸道給藥、眼部給藥、肺部給藥、經皮給藥、陰道給藥、耳道給藥、鼻腔給藥及局部給藥。此外，僅作舉例說明，腸道外給藥，包括肌肉注射、皮下注射、靜脈注射、髓內注射、心室注射、腹膜內注射、淋巴管內注射、及鼻內注射。

在一方面，此處描述的化合物給藥方式是局部的而不是全身性的給藥方式。在特定的具體實施例中，長效製劑通過植入給藥(例如皮下或肌肉)或通過肌肉注射。此外，在另一具體化實施例中，藥物通過靶向藥物給藥系統來給藥。例如，由器官特異性抗體包裹的脂質體。在這種具體實施例中，所述脂質體被選擇性的導向特定器官並吸收。

在本發明的藥物組合物中，可以根據本領域技術人員認識範圍內的諸多因素來調配藥用載體。這些因素包括，但不限於：所調配活性劑的類型和性質；含有活性劑的組合物所要給藥的受試者；組合物的預期給藥途徑；及所靶向的治療適應症。藥用載體包括水性和非水性液體介質及各種固體和半固體劑型。

上述載體可包括除活性劑外的諸多不同成分和添加劑，上述其它成分出於本領域技術人員公知的各種原因包括於製劑中，例 如穩定活性劑、粘合劑等。關於合適的藥用載體和載體選擇中所涉及的因素的描述可參見多個容易獲得的來源，例如Allen L.V.Jr.et al.Remington：The Science and Practice of Pharmacy(2 Volumes),22^nd Edition(2012),Pharmaceutical Press。

所述化合物通常以與根據預期給藥形式(例如口服片劑、膠囊劑、酏劑和糖漿劑)適當地選擇且與常規藥學實踐相符合的合適藥物稀釋劑、賦形劑或載體(在本文中統稱為藥物載體)的混合物形式進行給藥。

雖然本發明化合物可單獨給藥，但優選以藥物製劑(組合物)形式給予化合物。

試劑盒/產品包裝

為了用於上述適應症的治療，試劑盒/產品包裝也在此進行描述。這些試劑盒可以由輸送器、藥包或容器盒組成，容器盒可被劃分成多格，以容納一種或多種容器，如管形瓶、試管及類似物等，每個容器中包含所述方法中的單獨一種成分。合適的容器包括瓶子，管形瓶，注射器和試管等。容器由可接受的玻璃或塑膠等材料製作而成。

舉例來講，容器可裝有一種或多種在此所述的化合物，化合物可能以藥物組分形式存在，也可能與在本文中所述的其它成分組成混合物體存在。容器可有一個無菌輸出口(例如容器可為靜脈輸液包或瓶，瓶塞可被皮下注射器針頭刺破)。這樣的試劑盒可帶有一種化合物，及本文中所述的使用方法的說明、標籤或操作說明。

一個典型的試劑盒可包括一種或多種容器，為適應商業推廣和使用者對化合物使用的需求，每個容器裝有一種或多種材料(如試劑，也可以是濃縮的母液，和/或器械)。這些材料包括但不局限於緩衝液，稀釋液，濾器，針頭，注射器，輸送器，包，容器，瓶和 /或試管，附有內容清單和/或使用說明書，內置包裝也附有說明書。整套的說明都要包括在內。

本發明提到的上述特徵，或實施例提到的特徵可以任意組合。本案說明書所揭示的所有特徵可與任何組合物形式並用，說明書中所揭示的各個特徵，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特徵取代。因此除有特別說明，所揭示的特徵僅為均等或相似特徵的一般性例子。

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數、比率、比例、或份數按重量計。

本發明中的重量體積百分比中的單位是本領域技術人員所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶質的重量。除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示範之用。

在本發明使用的術語中，“神經退行性疾病”與“神經變性疾病”具有相同的含義；“軸突退化”與“軸突變性”具有相同的含義。本領域技術人員能夠理解，所述術語具有通常理解的含義。

具體實施例

本教導包括實施例中提供的描述，其並非旨在限制任何請求項的範圍。提供以下非限制性實施例以進一步說明本發明。根據本公開，本領域技術人員將理解，在不脫離本教導的精神和範圍的情況下，可以對所公開的具體實施方案進行許多改變並仍然能獲得相同或相似的結果。

除非另有說明，所有材料/試劑均從商業供應商處獲得，無需進一步純化即可使用。實驗過程中通過LC-MS和/或薄層色譜(TLC)在矽膠60 F254(0.2mm)預塗玻璃背襯上監測反應，並使用紫外光觀察。下述實施例化合物的結構通過核磁共振(NMR)和/或質譜(MS)來表徵。

¹HNMR(400MHz)波譜通過Bruker波譜儀上在室溫下記錄，TMS或殘留溶劑峰作為內標。化學位移值或峰型倍數在(δ)中給出，耦合常數(J)以赫茲(Hz)為單位的絕對值給出。1HNMR譜中的多重性縮寫如下：s(單峰)、d(雙峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br或寬峰(加寬)。

製備型HPLC純化過程在Shimadzu LC-6AD上進行。所有純化工作均使用Shim-pack PREP-DDS(H)KIT色譜柱完成。流動相為水(含0.1% HCO2H)和乙腈；所有使用的試劑均為HPLC級。流速為10ml/min。

LC-MS在Agilent 1260 infinity Ⅱ上進行；流動相：A：水(0.1%三氟乙酸)，B：ACN；3.5分鐘跑柱；立柱：YMC-Triart C18 50*3mm,3um；流速：1.8ml/min；烤箱溫度：40℃；梯度：5-100(ACN%)。

製備型TLC在WhatmanLK6F Silica Gel 60A尺寸20x20cm平板上進行，厚度為500μm。

以下實施例旨在說明本發明的實施方式，而非以任何方式對其進行限制。

中間體的合成：

中間體BB1的合成

第一步：化合物BB1-B雙叔丁基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-基氨基雙甲酸酯

將含有化合物BB1-A咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-胺(50mg,0.373mmol)、二碳酸二叔丁酯(89.55mg,0.41mmol)、4-二甲氨基吡啶(9.1mg,0.0745mmol)和三乙胺(75.49mg,0.746mmol)的二氯甲烷溶液在室溫下攪拌反應14小時。TLC監測反應完全。反應混合物加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 2)萃取，有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得剩餘物經製備TLC分離純化(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到白色固體化合物BB1-B雙叔丁基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-基氨基雙甲酸酯(85mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 335.1[M+H]⁺

第二步：化合物BB1(3-溴咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-基)氨基雙甲酸叔丁酯

將含有化合物BB1-B雙叔丁基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-基氨基雙甲酸酯(60mg,0.256mmol)和N-溴代丁二醯亞胺(50.17mg,0.282mmol)的二氯甲烷(2.5ml)溶液在室溫下攪拌反應5小時。 TLC監測反應完全。反應混合物加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 2)萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得剩餘物經製備TLC分離純化(用含2.38%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到白色固體化合物BB1(3-溴咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-基)氨基雙甲酸叔丁酯(55mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 335.1[M+H]⁺

中間體BB2的合成

第一步：化合物BB2 4-甲氧基-5-硝基吡啶-2-胺

向含有化合物BB2-A(500mg,2.88mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入甲醇鈉(1.56g,8.64mmol)。此反應在20℃下攪拌反應12小時，然後升至60℃攪拌反應1小時。TLC(DCM：MeOH=10：1)監測化合物BB2-A(Rf=0.7)消耗完畢，有一個新的點(Rf=0.5)生成。濃縮反應液。剩餘物加水(20mL)稀釋，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物通過矽膠柱層析(用含8%甲醇的二氯甲烷洗脫，Rf=0.5)得到黃色固體化合物BB2 4-甲氧基-5-硝基吡啶-2-胺(420mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 170.1[M+H]⁺.

中間體BB3的合成

第一步：化合物BB3 3-溴-7-氯咪唑[1,2-a]吡啶-6-胺

向含有化合物BB3-A(20mg,72.34umol)的乙醇(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中加入氯化銨(19.4mg)和還原鐵粉(20.2mg)。反應液在80℃下攪拌反應3小時。TLC(PE：EtOAc=1：2)監測化合物BB3-A(Rf=0.7)消耗完畢，有兩個新的點(Rf=0.5,0.4)生成。反應液過濾，濃縮母液。剩餘物加水(10mL)稀釋，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物未經進一步純化直接用於下一步。由此得到黃色固體粗品化合物BB-3 3-溴-7-氯咪唑[1,2-a]吡啶-6-胺(17.8mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 245.9[M+H]⁺.

中間體BB4的合成

第一步：中間體BB4 N-(3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙醯胺

0℃氮氣下向含有化合物BB4-A 3-溴-N-甲基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(80mg,0.354mmol)和三乙胺(35.75mg,0.354mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入化合物BB4-B乙醯氯(33.3mg,0.425mmol)。反應液在0℃下攪拌反應5小時。TLC監測反應完全。反應液加水和二氯甲烷萃取。合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，剩餘物，經製備TLC(用含2.4%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到褐色固體化合物BB4 N-(3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙醯胺(43mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 269.9[M+H]⁺.

中間體BB5和BB6的合成

第一步：化合物BB5-C(6-硝基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物BB5-A 5-溴-2-硝基吡啶(500mg,2.46mmol)和化合物BB5-B(577.1mg,4.93mmol)的甲苯溶液中加入醋酸鈀(55.3mg,246.31umol)，Xant-Phos(142.5mg,246.31umol)，碳酸銫(2.41g,7.39mmol)。反應液在100℃氮氣氛圍下攪拌反應12小時。TLC(PE：EtOAc=2：1)監測反應完全。反應液加水(20mL)稀釋，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水洗滌(20mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物用矽膠柱層析(用含33%乙酸乙酯的石油醚溶液洗脫)分離純化得到黃色油狀物化合物BB5-C(6-硝基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(580mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 240.1[M+H]⁺.

第二步：化合物BB5-D(6-氨基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物BB5-C(580mg,2.42mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入Pd/C。反應液在20℃氫氣氛圍下攪拌反應12小時。TLC(DCM：MeOH=10：1)監測顯示化合物3(Rf=0.9)消耗完畢，一個新的點(Rf=0.3)生成。反應液經矽藻土過濾，濃縮母液。剩餘物未經進一步純化直接用於下一步。由此得到黃色固體化合物BB5-D(6-氨基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(540mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 210.1[M+H]⁺.

第三步：化合物BB5-F叔丁基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基氨基甲酸酯

向含有化合物BB5-D(540mg,2.58mmol)的乙醇溶液中加入化合物BB5-E(1.01g,5.16mmol,40%品質分數在水中)。反應液在80℃下攪拌反應3小時。TLC(DCM：MeOH=10：1)監測顯示反應完全。反應液濃縮，然後加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，二氯甲烷(20mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經矽膠柱層析(用含10%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到黃色固體化合物BB5-F叔丁基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基氨基甲酸酯(400mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 234.1[M+H]⁺.

第四步：化合物BB5(3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物BB5-F(300mg,1.29mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中加入N-溴代丁二醯亞胺(229mg,1.29mmol)。反應液在室溫下攪拌反應2小時。TLC監測反應完全。反應混合物減壓濃縮，所得剩餘物經矽膠柱層析(用含0%-50%乙酸乙酯的石油醚洗脫)得到黃色固體化合物BB5(3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(370mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 311.9[M+H]⁺.

第五步：化合物BB6(3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

在0℃氮氣氛圍下向含有化合物BB5(800mg,2.563mmol)的DMF(10ml)溶液中加入氫化鈉(102.51mg,2.563mmol,60%)和碘甲烷(727.58mg,5.126mmol)，反應液在0℃下攪拌反應1小時。TLC監測反應完全。反應液倒入飽和氯化銨溶液(30mL)中，加入乙酸乙酯(25mLx2)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得粗品經矽膠柱層析(洗脫液：0.024%-0.062%甲醇的二氯甲烷溶液)分離純化得到白色固體化合物BB6(3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(840mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 327.9[M+H]⁺.

中間體BB7的合成

第一步：化合物BB7-C二叔丁基(4,11-二氧-6,9-二惡英-3,12-二氮雜十四烷-1,14-二基)二氨基甲酸酯

0℃下向含有化合物BB7-A 2,2'-(乙烷-1,2-二基雙(氧基))二乙酸(300mg,1.7mmol)、化合物BB7-B(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(546mg,3.4mmol)和N,N-二異丙基乙胺(1.1g,8.5mmol)的DMF溶液中加入HATU(1.94g,5.1mmol)。反應液升至室溫攪拌反應2小時。TLC監測反應完全。反應液分配於乙酸乙酯(30ml)和水(50ml)中。收集有機層，飽和食鹽水(30ml)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析(用含1.5%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到白色固體化合物BB7-C二叔丁基(4,11-二氧-6,9-二惡英-3,12-二氮雜十四烷-1,14-二基)二氨基甲酸酯(480mg,61%)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 1.43(s,18H),3.26-3.32(m,4H),3.41-3.45(m,4H),3.70(s,4H),4.02(s,4H).

第二步：化合物BB7 2,2'-(乙烷-1,2-二基雙(氧基))雙(N-(2-氨基乙基)乙醯胺

向含有化合物BB7-C二叔丁基(4,11-二氧-6,9-二惡英-3,12-二氮雜十四烷-1,14-二基)二氨基甲酸酯(100mg)的甲醇(2ml)溶液中加入4M氯化氫-二氧六環溶液(5ml)。反應液在室溫下攪拌反應3小時。TLC監測反應完全。反應液減壓濃縮得到黑色油狀物粗品化合物BB7 2,2'-(乙烷-1,2-二基雙(氧基))雙(N-(2-氨基乙基)乙醯胺(80mg)，未經進一步純化，直接用於下一步。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 2.86-2.91(m,4H),3.36-3.41(m,4H),3.66(s,4H),3.94(s,4H),8.08-8.11(m,6H).

實施例1：化合物1的合成

第一步：化合物1 3-溴-N-甲基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-胺

將含有化合物1-A 3-溴-6-氯咪唑並[1,2-b]噠嗪(40mg,0.172mmol)、化合物1-B甲氨鹽酸鹽(34.84mg,0.516mmol)和碳酸鉀(83.07mg,0.602mmol)的N-甲基吡咯烷酮(1ml)溶液在100℃下攪拌反應18小時。TLC監測反應完全。反應液加水和乙酸乙酯萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得剩餘物經製備TLC分離純化(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到白色固體化合物1 3-溴-N-甲基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-胺(30mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 227.0[M+H]⁺.

實施例2：化合物2的合成

第一步：化合物2(3-(3-氨基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

在室溫氮氣氛圍下向含有化合物BB-6(530mg,1.625mmol)、化合物2-A(244.75mg,1.787mmol)和飽和碳酸鈉水溶液(3ml)的1,4-二氧六環溶液中加入Pd(dppf)Cl₂-CH₂Cl₂(132.3mg,0.162mmol)。此反應在90℃下攪拌反應12小時。TLC監測顯示反應完全。反應液冷至室溫，加入水(20mL)和乙酸乙酯(30ml x 2)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析(用含0%-90%乙酸乙酯的石油醚溶液洗脫)得到黃色固體化合物2(3-(3-氨基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(432mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 339.2[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.42(d,J=1.2Hz,1H),7.66(s,2H),7.30(d,J=9.2Hz,1H),7.17(t,J=7.8Hz,1H),6.76(dd,J=18.1,4.7Hz,2H),6.62(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),5.30(d,J=4.9Hz,2H),3.18(s,3H),1.35(s,9H).

以下化合物的合成參照化合物2和中間體BB5或者BB6的合成：

化合物3的合成

第一步：化合物3-C的合成參照中間體BB5第三步的合成方法

第二步：化合物3-D的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

第三步：化合物3的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 369.8[M+H]⁺.

化合物4的合成

第一步：化合物4-B的合成以化合物4-A和NIS為原料，參照中間體BB5第四步的合成方法

第二步：化合物4的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 369.8[M+H]⁺.

化合物5的合成

第一步：化合物5的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 303.9[M+H]⁺.

1H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.09(s,1H),8.00(d,J=1.5Hz,1H),7.95(d,J=7.7Hz,1H),7.85(d,J=7.9Hz,1H),7.80-7.73(m,2H),7.73-7.67(m,1H),7.47(s,2H),7.21(d,J=9.6Hz,1H),3.79(s,3H).

化合物6的合成

第一步：化合物6的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 403.0[M+H]⁺

化合物7的合成

第一步：化合物7的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 367.0[M+H]⁺.

化合物8的合成

第一步：化合物8的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 324.0[M+H]⁺.

化合物9的合成

第一步：化合物9的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 273.9[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.60-8.56(m,1H),8.06(t,J=1.6Hz,1H),7.93-7.89(m,1H),7.87-7.83(m,2H),7.72(dd,J=16.4,8.5Hz,2H),7.44(s,2H),7.35(ddd,J=9.0,6.7,1.0Hz,1H),7.03(td,J=6.8,1.1Hz,1H).

化合物10的合成

第一步：化合物10的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 338.0[M+H]⁺.

化合物11的合成

第一步：化合物11的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 358.0[M+H]⁺.

化合物12的合成

第一步：化合物12的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 330.0[M+H]⁺.

化合物13的合成

第一步：化合物13的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 354.0[M+H]⁺.

化合物14的合成

第一步：化合物14的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 354.0[M+H]⁺.

化合物15的合成

第一步：化合物15的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 325.0[M+H]⁺.

化合物16的合成

第一步：化合物16的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 355.0[M+H]⁺.

化合物17的合成

第一步：化合物17的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 325.0[M+H]⁺.

化合物18的合成

第一步：化合物18的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 325.0[M+H]⁺.

化合物19的合成

第一步：化合物19的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 244.0[M+H]⁺.

化合物20的合成

第一步：化合物20的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 225.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.20(dd,J=8.4,1.1Hz,2H),7.87(s,1H),7.77(d,J=9.7Hz,1H),7.47(dd,J=10.7,4.9Hz,2H),7.31(dd,J=10.5,4.3Hz,1H),7.11(d,J=4.7Hz,1H),6.71(d,J=9.7Hz,1H),2.85(d,J=4.8Hz,3H).

化合物21的合成

第一步：化合物21的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 281.1[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.12(d,J=7.4Hz,2H),7.99-7.93(m,2H),7.47(t,J=7.8Hz,2H),7.32(t,J=7.4Hz,1H),7.23(d,J=9.9Hz,1H),3.77-3.72(m,4H),3.50-3.45(m,4H).

化合物22的合成：

第一步：化合物22的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 311.1[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 10.37(s,1H),8.29(dd,J=8.4,1.1Hz,2H),8.19(s,1H),8.11(d,J=9.8Hz,1H),7.78-7.75(m,1H),7.69(d,J=9.8Hz,1H),7.47(dd,J=10.7,4.9Hz,2H),1.50(s,9H).

化合物23的合成：

第一步：化合物23的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 253.0[M+H]⁺.

化合物24的合成：

第一步：化合物24的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 267.1[M+H]⁺.

化合物25的合成：

第一步：化合物25的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 263.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.78(s,1H),8.03(s,1H),7.88(d,J=9.5Hz,1H),7.77(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.72(dd,J=8.2,1.1Hz,2H),7.59(d,J=7.5Hz,2H),7.55-7.53(m,1H).

化合物26的合成：

第一步：化合物26的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 225.1[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.42(d,J=7.6Hz,1H),7.63-7.60(m,3H),7.55-7.50(m,2H),7.43-7.39(m,1H),7.10(s,1H),6.71(dd,J=7.5,2.4Hz,1H),3.85(s,3H).

化合物27的合成：

第一步：化合物27的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 225.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.42(d,J=7.6Hz,1H),7.63-7.60(m,3H),7.55-7.50(m,2H),7.43-7.39(m,1H),7.10(s,1H),6.71(dd,J=7.5,2.4Hz,1H),3.85(s,3H).

化合物28的合成：

第一步：化合物28-C的合成參照中間體BB5第三步的合成方法

第二步：化合物28的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 370.9[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 7.72(s,1H),7.66(dd,J=8.9,1.2Hz,1H),7.50(dd,J=7.1,1.1Hz,1H),6.92(dd,J=8.9,7.1Hz,1H).

化合物29的合成：

第一步：化合物29-C的合成參照中間體BB5第三步的合成方法

第二步：化合物29-D的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

第三步：化合物29的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 321.0[M+H]⁺.

化合物30的合成：

第一步：化合物30-C的合成參照中間體BB5第三步的合成方法

第二步：化合物30-D的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

第三步：化合物30的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 321.0[M+H]⁺.

化合物31的合成：

第一步：化合物31的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 320.9[M+H]⁺.

化合物32的合成：

第一步：化合物32的合成參照中間體BB5第三步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 204.1[M+H]⁺.

化合物33的合成：

第一步：化合物32的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 283.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 7.62(s,1H),7.58(d,J=9.8Hz,1H),7.49(d,J=1.9Hz,1H),7.41(dd,J=9.8,2.2Hz,1H),3.77-3.74(m,4H),3.12-3.07(m,4H).

化合物34的合成：

第一步：化合物34的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 280.1[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.02(s,1H),7.76(d,J=1.3Hz,1H),7.69(d,J=7.1Hz,2H),7.67(s,1H),7.55(t,J=7.7Hz,2H),7.45(t,J=7.4Hz,2H),3.80-3.69(m,4H),3.10-2.99(m,4H).

化合物35的合成：

第一步：化合物35的合成參照中間體BB5第三步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 217.1[M+H]⁺.

化合物36的合成：

第一步：化合物36的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 295.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 7.59(s,1H),7.51(d,J=9.8Hz,1H),7.45(d,J=1.8Hz,1H),7.35(dd,J=9.8,2.2Hz,1H),3.13-3.06(m,4H),2.48(d,J=5.9Hz,4H),2.23(s,3H).

化合物37的合成：

第一步：化合物37的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 293.1[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 7.75(d,J=1.7Hz,1H),7.67(d,J=7.2Hz,2H),7.64(s,1H),7.56(dd,J=17.8,10.2Hz,3H),7.43(t,J=7.4Hz,1H),7.36(d,J=8.5Hz,1H),3.08(s,4H),2.58(s,4H),2.29(s,3H).

化合物38的合成：

第一步：化合物38的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 297.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 7.95(s,1H),7.67(d,J=1.2Hz,1H),7.62(d,J=9.5Hz,1H),7.40(d,J=9.5Hz,1H),2.94(t,J=4.7Hz,4H),2.51(d,J=8.9Hz,4H),2.25(s,3H).

化合物39的合成：

第一步：化合物39的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 293.1[M+H]⁺.

化合物40的合成：

第一步：化合物40的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 339.1[M+H]⁺.

化合物41的合成：

第一步：化合物41的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 340.1[M+H]⁺.

化合物42的合成：

第一步：化合物42的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 266.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ 8.27(s,1H),7.83(s,1H),7.60-7.47(m,6H),7.18(d,J=8.0Hz,1H),3.27(s,3H),1.95(s,3H).

化合物43的合成：

第一步：化合物43的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 271.9[M+H]⁺.

1H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.68(s,1H),7.86(s,1H),7.74(d,J=9.2Hz,1H),7.70(d,J=5.1Hz,1H),7.60(s,1H),7.36(d,J=9.3Hz,1H),7.27(dd,J=5.1,3.6Hz,1H),3.16(s,3H),1.83(s,3H).

化合物44的合成：

第一步：化合物44的合成以BB5-F和NIS為原料參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 360.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.63(s,1H),8.80(s,1H),7.63(s,1H),7.58-7.45(m,1H),7.23(dd,J=9.6,1.9Hz,1H),1.50(s,9H).

化合物45的合成：

第一步：化合物45的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 295.2[M+H]⁺.

化合物46的合成：

第一步：化合物46的合成參照化合物2第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 339.1[M+H]⁺.

實施例3：化合物47的合成

第一步：化合物47(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

將含有化合物47(40mg,0.118mmol)、化合物47-A(15.85mg,0.118mmol)、HATU(44.84mg,0.118mmol)和DIPEA(30.44mg,0.236mmol)的DMF(2mL)溶液在室溫下攪拌反應12小時。TLC監測顯示反應完全。反應混合物加水(20ml)和乙酸乙酯(30ml x 3)萃取。合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經Pre-TLC(用 含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色固體化合物47(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(30mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 455.2[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 9.08(s,1H),8.33(s,1H),7.85(d,J=33.6Hz,3H),7.60(d,J=8.0Hz,1H),7.49(t,J=7.7Hz,1H),7.29(s,1H),4.12(s,2H),3.78(s,2H),3.63(s,2H),3.47(s,3H),3.27(s,3H),1.42(s,9H).

以下化合物參照化合物47的合成，使用相應的羧酸：

化合物48的合成

第一步：化合物48的合成參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 464.2[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 10.22(s,1H),8.47(d,J=1.3Hz,1H),7.92(s,1H),7.75(s,1H),7.62(t,J=9.3Hz,2H),7.48(t,J =7.9Hz,1H),7.35-7.28(m,2H),3.43(s,4H),3.20(s,3H),2.64-2.57(m,3H),1.98(s,1H),1.95(d,J=11.4Hz,2H),1.83(s,2H),1.36(s,9H).

化合物49的合成

第一步：化合物49的合成參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 451.2[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 10.07(s,1H),8.47(d,J=1.2Hz,1H),7.91(s,1H),7.75(s,1H),7.63(dd,J=11.8,9.0Hz,2H),7.47(s,1H),7.31(d,J=6.6Hz,2H),3.92-3.88(m,2H),3.20(s,3H),3.16(d,J=4.9Hz,2H),2.63-2.58(m,1H),1.73-1.64(m,4H),1.36(s,9H).

化合物50的合成

第一步：化合物50的合成參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 455.2[M+H]⁺.

化合物51的合成

第一步：化合物51的合成以化合物41和化合物51-A為原料，參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 456.2[M+H]⁺.

化合物52的合成

第一步：化合物52的合成參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES+)：m/z 550.3[M+H]+.

化合物53的合成

第一步：化合物53-C的合成參照中間體BB5第三步的合成方法

第二步：化合物53-D的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

第三步：化合物53-F的合成參照化合物2第一步的合成方法

第四步：化合物53的合成以化合物53-F和化合物53-G為原料，參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES+)：m/z 340.1[M+H]+.

化合物54的合成

第一步：化合物54的合成以化合物53-F和化合物54-A為原料參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES+)：m/z 336.4[M+H]+.

化合物55的合成

第一步：化合物55-A 5-(叔丁氧基)-2-硝基吡啶

0℃氮氣氛圍下向含有化合物55-A(450mg,3.17mmol)的四氫呋喃溶液中加入叔丁醇鉀(426.5mg,3.80mmol)。反應液在20℃下攪拌反應12小時。LCMS監測反應完全。反應液加水(20mL)稀釋，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經矽膠柱層析(用含10%石油醚的乙酸乙酯溶液洗脫)分離純化得到無色油狀物化合物55-A(253mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 197.1[M+H]+.

第二步：化合物55-C的合成參照中間體BB5第二步的合成方法

第三步：化合物55-E的合成參照中間體BB5第三步的合成方法

第四步：化合物55-F的合成參照中間體BB5第四步的合成方法

第五步：化合物55-H的合成參照化合物2第一步的合成方法

第六步：化合物55的合成以化合物55-H和化合物55-I為原料參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES+)：m/z 394.2[M+H]+.

化合物56的合成

第一步：化合物56的合成以化合物45和化合物56-A為原料參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 411.1[M+H]⁺.

化合物57的合成

第一步：化合物57的合成以化合物45和化合物57-A為原料參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 407.1[M+H]⁺.

化合物58的合成

第一步：化合物58的合成以化合物46和化合物58-A為原料參照化合物47第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 441.2[M+H]⁺.

實施例4：化合物59，化合物60的合成

第一步：化合物59-C的合成參照化合物2第一步的合成方法

第二步：化合物59-D((3-(6-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺醯基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物59-C(400mg,1.14mmol)、三乙胺(230.3mg,1.37mmol)和4-二甲氨基吡啶(55.6mg,0.45mmol)的四氫呋喃(6ml)溶液中加入丁二酸二叔丁酯(298.1mg,1.37mmol)，反應液在室溫下攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液加水和二氯甲烷萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得剩餘物經矽膠柱層析(用含2.4%-4.7%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色固體化合物59-D((3-(6-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺醯基)氨基甲酸叔丁酯(370mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 453.9[M+H]⁺

第三步：化合物59-E叔丁基((3-(6-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺醯基)(甲基)氨基甲酸酯

0℃氮氣下向含有氫化鈉(25.7mg,0.643mmol,60%分散在礦物油中)的N,N-二甲基甲醯胺溶液中加入化合物59-D(290mg,0.643mmol)和碘甲烷(182.55mg,1.29mmol)，反應液在0℃下攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液加水和乙酸乙酯萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得剩餘物經矽膠柱層析(用含1.9%-4.7%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色固體化合物59-E叔丁基((3-(6-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺醯基)(甲基)氨基甲酸酯(220mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 465.9[M+H]⁺.

第四步：化合物59叔丁基甲基((3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺醯基)氨基甲酸酯

室溫和氮氣氣氛下向含有化合物59-E(140mg,0.3mmol)、化合物59-F甲胺鹽酸鹽(101.28mg,1.5mmol)、碳酸銫(688.8mg,2.1mmol)的1,4-二氧六環(4ml)溶液中加入BrettPhos-Pd-G3(54.39mg,0.2mmol)，反應混合物氮氣置換三次，110℃下攪拌反應48小時。TLC監測反應完全。反應液加水和二氯甲烷萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到褐色固體化合物59叔丁基甲基((3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺醯基)氨基甲酸酯(15mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 417.0[M+H]⁺.

第五步：化合物60 N-甲基-3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺醯胺

向含有化合物59叔丁基甲基((3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)磺醯基)氨基甲酸酯(15mg,0.036mmol)的甲醇(250ul)溶液中加入鹽酸/二氧六環(1ml,4.0mol/L)溶液，反應混合物在室溫下攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液減壓濃縮，得到褐色固體化合物60 N-甲基-3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺醯胺(8mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 317.0[M+H]⁺.

實施例5：化合物61和化合物62的合成：

第一步：化合物61-B 3-碘-6-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶

向含有化合物61-A(4.85g,29.73mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(30ml)溶液中加入N-碘代丁二醯亞胺(8g,35.67mmol)。反應混合物在室溫下攪拌反應14小時。TLC監測反應完全。反應混合物室溫下邊攪拌邊加水(30ml)，大量的白色固體生成，過濾，收集固體，乾燥，得到白色固體化合物61-B 3-碘-6-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶(8g，粗品)。

第二步：化合物61-C 3-碘咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

室溫氮氣下向含有化合物61-B(500mg,1.55mmol)、氯化銨(1.85g,34.6mmol)的乙醇(35ml)和水(10ml)的溶液中加入鐵粉(1.93g,34.6mmol)。反應混合物在室溫下攪拌反應1小時。TLC監測反應完全。反應混合物通過矽藻土過濾，濾液加水和二氯甲烷萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥、減壓濃縮。所得粗品經矽膠柱層析(用含9%二氯甲烷的乙酸乙酯洗脫)分離純化得到褐色固體化合物61-C 3-碘咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(1g)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 259.8.0[M+H]⁺.

第三步：化合物61-D(3-碘咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物61-C(1g,3.86mmol)、N,N-二異丙基乙胺(1.49g,11.58mmol)、4-二甲氨基吡啶(47.1mg,0.39mmol)的二氯甲烷(15ml)和N,N-二甲基甲醯胺(4ml)溶液中加入丁二酸二叔丁酯(925.6mg,4.25mmol)，反應混合物在室溫下攪拌反應18小時。TLC監測反應完全。反應混合物加水和二氯甲烷萃取。合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得粗品經矽膠柱層析(用含50%-100%乙酸乙酯的石油醚洗脫)分離純化得到褐色固體化合物61-D(3-碘咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(330mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 359.9[M+H]⁺.

第四步：化合物61-E(3-碘咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

0℃氮氣下向含有氫化鈉(36.76mg,0.92mmol,60%分散在礦物油中)的N,N-二甲基甲醯胺(2ml)溶液中加入化合物61-D(330mg,0.92mmol)和碘甲烷(260.94mg,1.84mmol)，反應混合物在0℃下攪拌反應3小時。TLC監測反應完全。反應液加水和乙酸乙酯萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析(用含2.4%-7.7%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到褐色固體化合物61-E(3-碘咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(270mg).

LC_MS：(ES⁺)：m/z 373.9[M+H]⁺.

第四步：化合物61甲基(3-(3-氨磺醯基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

室溫氮氣下向含有化合物61-E(50mg,0.134mmol)、化合物61-F(94.83mg,0.335mmol)、碳酸鈉(42.61mg,0.402mmol)的1，4-二氧六環(2ml)和水(600μl)溶液中加入Pd(PPh₃)₄(10.84mg,0.01mmol)，反應混合物氮氣置換三次，90℃下攪拌反應18小時。TLC監測反應完全。反應液加水和二氯甲烷萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含8.3%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到白色固體化合物61甲基(3-(3-氨磺醯基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(27mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 403.0[M+H]⁺.

第五步：化合物62 3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺醯胺

將含有化合物61(24mg,0.035mmol)的甲醇(250μl)和鹽酸/二氧六環(1ml,4.0mol/L)的溶液在室溫下攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液減壓濃縮得到黃色固體化合物62 3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺醯胺(16.7mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 302.9[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,MeOD)δ 8.23(t,J=1.6Hz,1H),8.12(ddd,J=7.9,1.8,1.1Hz,1H),8.04(s,1H),7.94(dd,J=5.3,4.1Hz,1H),7.83(t,J=7.8Hz,1H),7.74(d,J=9.7Hz,1H),7.56(dd,J=9.7,2.0Hz,1H),7.49(d,J=1.9Hz,1H),2.76(s,3H).

實施例6：化合物63的合成路線：

第一步：化合物63 4-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺醯胺

將含有化合物6(40mg,0.099mmol)的甲醇(0.5ml)和鹽酸/二氧六環(1ml，4.0mol/L)溶液在室溫下攪拌反應2小時。TLC監測反應完全。反應液減壓濃縮，得到黃色固體化合物63(30mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 303.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,MeOD)δ 8.16(d,J=7.4Hz,2H),8.09(s,1H),7.94(d,J=7.8Hz,2H),7.78(d,J=9.3Hz,1H),7.62(d,J=10.2Hz,2H),2.80(s,3H).

以下化合物參照化合物63的合成：

化合物64的合成路線

第一步：化合物64的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 267.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,MeOD)δ 8.22(s,1H),8.13-8.09(m,1H),8.04(s,1H),7.93(d,J=7.7Hz,1H),7.82-7.75(m,2H),7.70-7.57(m,2H),2.80(s,3H).

化合物65的合成

第一步：化合物65的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 224.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,MeOD)δ 7.98(s,1H),7.79(d,J=9.6Hz,1H),7.73(d,J=7.2Hz,1H),7.68-7.65(m,1H),7.64(d,J=4.0Hz,1H),7.62(d,J=2.7Hz,1H),2.80(s,1H).

化合物66的合成

第一步：化合物66的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 255.0[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 9.09(d,J=1.9Hz,1H),8.79(s,1H),7.93-7.87(m,1H),7.80(d,J=9.6Hz,1H),7.65(d,J=7.4Hz,1H),7.51(d,J=2.9Hz,1H),6.90(d,J=8.2Hz,1H),4.04(s,3H),2.74(s,3H).

化合物67的合成

第一步：化合物67的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 238.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.15(s,1H),7.82(d,J=9.6Hz,1H),7.54(d,J=2.1Hz,1H),7.52-7.48(m,3H),7.43(d,J=7.3Hz,1H),6.87(d,J=1.9Hz,1H),2.58(s,3H),2.18(s,3H).

化合物68的合成

第一步：化合物68的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 257.9[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.25(s,1H),7.83(d,J=9.6Hz,1H),7.78(d,J=8.1Hz,1H),7.69(t,J=7.3Hz,2H),7.61(t,J=7.4Hz,1H),7.55(dd,J=9.7,1.9Hz,1H),6.97(s,1H),2.60(s,3H).

化合物69的合成

第一步：化合物69的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 229.9[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.30(s,1H),7.89(dd,J=5.1,1.1Hz,1H),7.79(dd,J=9.6,0.4Hz,1H),7.67(dd,J=3.6,1.1Hz,1H),7.54(dd,J=9.6,2.1Hz,1H),7.50(d,J=1.8Hz,1H),7.34(dd,J=5.1,3.6Hz,1H),2.68(s,3H).

化合物70的合成

第一步：化合物70的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 254.0[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.20(s,1H),7.78(d,J=9.6Hz,1H),7.56-7.49(m,2H),7.47(d,J=1.6Hz,1H),7.31-7.26(m,2H),7.17-7.12(m,1H),3.83(s,3H),2.66(s,3H).

化合物72的合成

第一步：化合物72的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 254.0[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.11(s,1H),7.78(d,J=9.6Hz,1H),7.65-7.62(m,1H),7.52-7.51(m,1H),7.36(d,J=1.8Hz,1H),7.19-7.14(m,2H),3.84(s,3H),2.64(s,3H).

化合物73的合成

第一步：化合物73的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 225.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.11(s,1H),8.93(d,J=4.3Hz,1H),8.54(d,J=7.9Hz,1H),8.38(s,1H),7.95(dd,J=7.8,5.3Hz,1H),7.86(d,J=9.6Hz,1H),7.59(dd,J=9.7,2.0Hz,1H),7.53(d,J=1.6Hz,1H),2.70(s,3H).

化合物74的合成

第一步：化合物74的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 225.0[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.98(d,J=6.6Hz,2H),8.64(s,1H),8.26(d,J=6.6Hz,2H),7.85(d,J=9.7Hz,1H),7.74(d,J=1.7Hz,1H),7.59(dd,J=9.7,2.0Hz,1H),2.72(s,3H).

化合物75的合成

第一步：化合物75的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 286.1[M+H]⁺.

化合物76的合成

第一步：化合物76的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 225.0[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 9.21(d,J=1.9Hz,1H),8.83(s,1H),8.77(d,J=4.7Hz,1H),8.06(d,J=8.0Hz,1H),8.03-7.98(m,1H),7.82(d,J=9.6Hz,1H),7.57(dd,J=9.6,2.1Hz,1H),7.49-7.43(m,1H),2.74(s,3H).

化合物77的合成

第一步：化合物77的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 355.1[M+H]⁺.

化合物78的合成

第一步：化合物78的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 619.2[M+H]⁺.

化合物79的合成

第一步：化合物79的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 663.1[M+H]⁺.

實施例7：化合物80和化合物81的合成：

第一步：化合物80-B(3-(3-氨磺醯基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物BB5(100mg,320.34μmol)和化合物80-A(272mg,961.02μmol)的1,4-二氧六環(3mL)/水(1mL)溶液中加入Pd(PPh₃)₄(18.51mg,16.02μmol)和碳酸鈉(102mg,961.02μmol)。反應液在氮氣90℃下攪拌反應12小時。LCMS監測反應完全。反應液加水(20mL)稀釋，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品經製備TLC分離純化(二氯甲烷：甲醇=10：1,Rf=0.5)得到黃色固體化合物80-B(3-(3-氨磺醯基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 389.0[M+H]⁺.

第二步：化合物80-C(3-(3-(N-(叔丁氧基羰基)氨磺醯基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物80-B(100mg,257.44μmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三乙胺(78.15mg,772.32μmol)、4-二甲氨基吡啶(3.2mg,25.74μmol)和二碳酸二叔丁酯(56.2mg,257.44μmol)。反應液在20℃下攪拌反應12小時。TLC(二氯甲烷：甲醇=10：1)監測化合物80-B(Rf=0.5)反應完全和有一個新的點(Rf=0.6)生成。反應液加水(20mL)稀釋，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品經製備TLC分離純化(二氯甲烷：甲醇=10：1,Rf=0.6)得到無色油狀物化合物80-C(3-(3-(N-(叔丁氧基羰基)氨磺醯基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(54mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 489.0[M+H]⁺.

第三步：化合物80二叔丁基(E)-7-氧雜-3-硫-4,10-二氮雜-1(3,6)-咪唑[1,2-a]吡啶-2(1,3)-苯環癸烷-4,10-二羧酸鹽3,3-二氧化物

向含有化合物80-C(44mg,90.06μmol)、碳酸鉀(62mg,450.60μmol)的乙腈(20mL)溶液中加入化合物80-D(147mg,633.84μmol)。反應液在80℃下攪拌反應12小時。LCMS監測到大部分產 品生成。反應液加水(30mL)稀釋，乙酸乙酯(30mLx2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。得粗品經製備TLC分離純化(石油醚：乙酸乙酯=0：1,Rf=0.8)得到黃色固體化合物80二叔丁基(E)-7-氧雜-3-硫-4,10-二氮雜-1(3,6)-咪唑[1,2-a]吡啶-2(1,3)-苯環癸烷-4,10-二羧酸鹽3,3-二氧化物(34mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 559.1[M+H]⁺.

第四步：化合物81(E)-7-氧雜-3-硫雜-4,10-二氮雜-1(3,6)-咪唑並[1,2-α]吡啶-2(1,3)-苯並環癸烷3,3-二氧化物

向含有化合物80(28mg,50.12μmol)的甲醇(1.5mL)溶液中加入鹽酸/二氧六環(1.5mL)溶液。反應液在20℃下攪拌反應1小時。LCMS監測反應完全。反應液濃縮得到黃色固體化合物81(10.3mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 359.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.31(d,J=9.0Hz,2H),8.03-7.91(m,3H),7.85(d,J=25.9Hz,4H),7.53(d,J=9.6Hz,1H),7.37-7.04(m,1H),3.78-3.59(m,4H),3.29-3.19(m,4H).

實施例8：化合物82合成：

第一步：化合物82-C異氰苯

向含有化合物82-A(400mg,3.30mmol)和三乙胺(2mL)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入化合物82-B(454.2mg,1.65mmol)。反應液在0℃攪拌反應3小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=2：1)監測有一個新點(Rf=0.6)生成。反應混合物倒入冰水中，二氯甲烷(30mLx2)萃取。合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品經矽膠柱層析(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯=5：1~1：1,Rf=0.6)分離純化得到黃色油狀物化合物82-C(38mg)。

第二步：化合物82 6-甲氧基-N-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-胺

將含有化合物82-D(38mg,306.10μmol)和化合物82-E(34mg,367.21μmol)的1,2-二氯乙烷(2ml)/甲醇(1ml)溶液在20℃下攪拌反應30分鐘；然後將化合物82-C(38mg,367.32μmol)加入反應液中，混合反應液在20℃下攪拌反應12小時；最後往混合反應液加入二氯甲烷和碳酸氫鈉固體並在20℃攪拌15分鐘。LCMS監 測到產物生成。反應混合物通過矽藻土過濾，濃縮濾液，加水(10mL)稀釋，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。粗品經製備TLC(二氯甲烷：甲醇=10：1,Rf=0.5)和製備TLC(石油醚：乙酸乙酯=1：2.5,Rf=0.3)分離純化。所得化合物82 6-甲氧基-N-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-胺(34mg,367.21μmol)為褐色油狀物。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 240.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ 7.49(d,J=10.3Hz,1H),7.40(d,J=1.9Hz,1H),7.27(s,1H),7.21(dd,J=8.4,7.5Hz,2H),7.06(s,1H),6.99(d,J=9.8Hz,1H),6.87(d,J=7.3Hz,1H),6.68-6.50(m,2H),3.74(s,3H).

實施例9：化合物83、化合物84和化合物85的合成：

第一步：化合物83(3-(環己-1-烯-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

氮氣氛圍下向含有中間體BB6(90mg,275.94μmol)和化合物83-A(244.75mg,1.787mmol)的1,4-二氧六環(6ml)和水(1mL)的溶液中加入Pd(PPh₃)₄(16mg,13.80μmol)和碳酸鈉(87.7mg,827.73 μmol)。反應液在氮氣保護下加熱至90℃攪拌反應12小時。TLC檢測反應完全。反應混合物加水(10ml)和乙酸乙酯(10ml x 2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析分離純化(用含0%-90%乙酸乙酯的石油醚洗脫)得到黃色固體化合物83(3-(環己-1-烯-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(108mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 328.1[M+H]⁺.

第二步：化合物84(3-環己基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

將化合物83(88mg,268.8μmol)溶於甲醇(5mL)中，然後加入鈀碳(10mg)。反應液在氫氣氛圍下20℃攪拌48小時。TLC檢測反應完全。反應液用矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，所得剩餘物經製備TLC分離純化(用含50%乙酸乙酯的石油醚洗脫)得到棕色油狀物化合物84(3-環己基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(25mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 330.1[M+H]⁺.

第三步：化合物85 3-環己基-N-甲基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

將化合物84(20mg,60.71μmol)溶於甲醇(1mL)中，然後加入鹽酸的二氧六環溶液(1mL,4M)。反應液在室溫下攪拌1小時。LC-MS檢測反應完全。將反應液減壓濃縮後得到棕色固體化合物85 3-環己基-N-甲基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(9.9mg)

LC_MS：(ES⁺)：m/z 230.0[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 7.80(d,J=5.6Hz,1H),7.68(t,J=6.6Hz,1H),7.62(s,1H),7.47-7.44(m,1H),7.44-7.40(m,1H),3.11(d,J=11.4Hz,1H),2.74(s,2H),2.01(t,J=10.1Hz,2H),1.84-1.70(m,3H),1.50(dd,J=25.1,12.4Hz,2H),1.41-1.29(m,3H).

實施例10：化合物86和化合物87的合成：

第一步：化合物86-A 3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

將中間體BB5(100mg,320.34μmol)溶於鹽酸的二氧六環溶液(5mL,4M)中。反應液在室溫下攪拌1小時。LC-MS檢測反應完全。將反應液減壓濃縮後得到白色固體化合物86-A(80mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 211.9[M+H]⁺.

第二步：化合物86 3-溴-N-(四氫呋喃-3-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

將化合物86-A(48mg,226.36μmol)和化合物86-B(29.2mg,339.54μmol)以及一滴醋酸溶於甲醇(1mL)中，並加入NaBH₃CN(28.5mg,452.72μmol)和4A分子篩(50mg)。反應液在20℃下攪拌12小時。TLC檢測反應完全。將反應液過濾後濃縮，加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析分離純化(用含10%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到黃色油狀物化合物86 3-溴-N-(四氫呋喃-3-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(45mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 281.9[M+H]⁺.

第三步：化合物87 3-苯基-N-(四氫呋喃-3-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

氮氣氛圍下向含有化合物86(36mg,127.60μmol)和化合物87-A(31.1mg,255.19μmol)的1,4-二氧六環(3ml)和水(1mL)的溶液中加入Pd(PPh₃)₄(6.1mg,6.38μmol)和碳酸鈉(40.6mg,382.79μmol)。反應液在氮氣保護下加熱至90℃攪拌反應30分鐘。LCMS檢測反應 未進行完全，向反應液中繼續加入化合物87-A苯基硼酸(31.1mg,255.19μmol)、四(三苯基膦)鈀(6.1mg,6.38μmol)和碳酸鈉(40.6mg,382.79μmol)。反應液在氮氣保護下加熱至100℃攪拌反應1.5小時。向反應混合物中加水(10ml)和乙酸乙酯(10ml x 2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析分離純化(用含10%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到黃色油狀物化合物87 3-苯基-N-(四氫呋喃-3-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(11.6mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 280.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,MeOD)δ 7.72-7.39(m,9H),7.18(dd,J=38.7,9.3Hz,1H),4.06-3.53(m,5H),2.31-2.06(m,1H),1.90(s,1H).

實施例11：化合物88和化合物89的合成：

第一步：化合物88-C(R)-3-((6-硝基吡啶-3-基)氨基)呱啶-1-羧酸叔丁酯

向含有化合物88-A(1.0g,4.93mmol)和化合物88-B(986.6mg,4.93mmol)的甲苯(20mL)溶液中加入Pd(OAc)₂(110.6mg,492.62μmol)，XantPhos(285mg,492.62μmol)，碳酸銫(4.82g,14.78mmol)。反應液在100℃氮氣下攪拌反應4小時。TLC(PE：EtOAc=1：1)監測化合物88-A(Rf=0.8)反應完，有一個新點(Rf=0.3)生成。反應液加水(50mL)稀釋，乙酸乙酯(50mLx2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。所得剩餘物經矽膠柱層析(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯=2：1-1：2,Rf=0.3)分離純化得到黃色固體化合物88-C(R)-3-((6-硝基吡啶-3-基)氨基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(1.37g)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 323.0[M+Na]⁺.

第二步：化合物88-D(R)-3-(((叔丁氧羰基)(6-硝基吡啶-3-基)氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯

向含有化合物88-C(1.32g,4.09mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.07g,4.91mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(1.59g,12.28mmol)和4-二甲氨基吡啶(50mg,409.47μmol)。反應液在40℃下攪拌反應12小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=2：1)顯示大部分化合物88-C(Rf=0.2)反應完，有一個新點(Rf=0.6)生成。反應液加 水(50mL)稀釋，二氯甲烷(50mLx2)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(100mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經矽膠柱層析(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯=4：1~2：1)分離純化得到黃色固體化合物88-D(R)-3-(((叔丁氧羰基)(6-硝基吡啶-3-基)氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(1.4g)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 445.0[M+Na]⁺.

¹H NMR(400MHz,MeOD)δ 8.43(d,J=2.3Hz,1H),8.34(dd,J=8.6,0.4Hz,1H),8.01(dd,J=8.6,2.5Hz,1H),4.36-4.23(m,1H),4.04(t,J=11.1Hz,1H),3.94(d,J=13.1Hz,1H),2.81(s,1H),2.56(s,1H),2.06-1.85(m,1H),1.81-1.62(m,1H),1.53(ddd,J=16.8,8.5,4.0Hz,1H),1.46(s,8H),1.41(s,9H).

第三步：化合物88-E(R)-3-((6-氨基吡啶-3-基)(叔丁氧基羰基)氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯

向含有化合物88-D(1.3g,3.08mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液中加入Pd/C(130mg)。反應液在20℃氫氣球下攪拌反應12小時。LCMS監測反應完全。反應液通過矽藻土過濾。濾液濃縮。剩餘物不經純化直接用於下一步反應。由此得到褐色固體化合物88-E(R)-3-((6-氨基吡啶-3-基)(叔丁氧基羰基)氨基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 393.1[M+H]⁺.

第四步：化合物88-G(R)-3-(((叔丁氧羰基)(咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)氨基)呱啶-1-羧酸叔丁酯

將含有化合物88-E(300mg,764.33μmol)和化合物88-F(300mg,1.53mmol,40% wt水溶液)的乙醇(10mL)溶液在80℃下攪拌反應15小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=1：1)監測化合物88-E(Rf=0.6)反應完全，有一個新點(Rf=0.3)生成。反應液濃縮，然後加乙酸乙酯(30mL)稀釋，用碳酸氫鈉溶液調節pH=9。收集有機層，飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經矽膠柱層析(SiO₂，石油醚：乙酸乙酯=1：1-0：1,Rf=0.3)分離純化得到褐色油狀物化合物88-G(R)-3-(((叔丁氧羰基)(咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)氨基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(230mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 417.1[M+H]⁺.

第五步：化合物88-H叔丁基(R)-3-((3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(叔丁氧羰基)氨基)呱啶-1-甲酸

向含有化合物88-G(R)-3-(((叔丁氧羰基)(咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)氨基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.48mmol)的二氯甲烷(6ml)溶液中加入N-溴代丁二醯亞胺(85.57mg,0.48mmol)。反應液在室溫下攪拌反應1小時。TLC監測反應完全。反應混合物減壓濃縮，所得剩餘物經矽膠柱層析(用含0%-50%乙酸乙酯的石油醚洗脫) 得到黃色固體化合物88-H叔丁基(R)-3-((3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(叔丁氧羰基)氨基)呱啶-1-甲酸(200mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 495.0[M+H]+.

第六步：化合物88叔丁基(R)-3-((叔丁氧基羰基)(3-(3-氨磺醯基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)呱啶-1-甲酸

室溫氮氣下向含有化合物88-H(100mg,0.202mmol)、化合物88-I(142.88mg,0.504mmol)和碳酸鈉(64.23mg,0.606mmol)的1,4-二氧六環(3ml)和水(1ml)的溶液中加入Pd(PPh₃)₄(16.34mg,0.0141mmol)，反應混合物氮氣置換三次，90℃下攪拌反應6小時。TLC監測反應完全。反應混合物加水和乙酸乙酯萃取。合併有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色固體化合物88叔丁基(R)-3-((叔丁氧基羰基)(3-(3-氨磺醯基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基)呱啶-1-甲酸(51mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 572.1[M+H]+.

第七步：化合物89(R)-3-(6-(呱啶-3-基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺醯胺

向含有化合物88(50mg,0.0848mmol)的甲醇(2ml)溶液中加入鹽酸/二氧六環(2ml,4.0mol/L)溶液，反應混合物在室溫下攪拌反應6小時。TLC監測反應完全。反應液減壓濃縮得到黃色固體化合物89(R)-3-(6-(呱啶-3-基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺醯胺(39.5mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 372.0[M+H]+.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.98(s,2H),8.29(s,1H),8.13(s,1H),7.97(dd,J=17.8,7.9Hz,2H),7.83(dd,J=15.6,8.5Hz,2H),7.74(s,1H),7.58(d,J=5.0Hz,3H),6.62(s,1H),3.66(dd,J=13.7,5.3Hz,2H),3.14(s,1H),2.87(s,1H),2.69(d,J=9.8Hz,1H),1.94-1.81(m,2H),1.72(d,J=10.4Hz,1H),1.52(d,J=10.1Hz,1H).

以下化合物參照化合物89的合成：

化合物90的合成路線

第一步：化合物90-C的合成參照化合物89第一步的合成方法

第二步：化合物90-D的合成參照化合物89第二步的合成方法

第三步：化合物90-E的合成參照化合物89第三步的合成方法

第四步：化合物90-G的合成參照化合物89第四步的合成方法

第五步：化合物90-H的合成參照化合物89第五步的合成方法

第六步：化合物90-C的合成參照化合物89第六步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 386.2[M+H]⁺.

實施例12：化合物91的合成：

第一步：化合物91 N-甲基-N-(3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)甲磺醯胺

0℃氮氣下向含有化合物65 N-甲基-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(65mg,0.291mmol)和三乙胺(32.32mg,0.32mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入化合物91-A甲基磺醯氯(36.65mg,0.32mmol)，反應混合物由0℃升至室溫攪拌反應14小時。TLC監測反應完全。反應液加水和二氯甲烷萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC分離純化得到白色固體化合物91 N-甲基-N-(3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)甲磺醯胺(15mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 302.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.62(s,1H),7.94(s,1H),7.78(s,3H),7.68(s,2H),7.56(s,2H),3.38(s,3H),3.15(s,3H).

實施例13：化合物92的合成：

第一步：化合物92 N-(3-(2-氯苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙醯胺

0℃氮氣下向含有化合物68 3-(2-氯苯基)-N-甲基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(70mg,0.271mmol)和三乙胺(30.3mg,0.3mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入化合物92-A乙醯氯(24.45mg,0.3mmol)，反應混合物由0℃升至室溫攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液加水和二氯甲烷萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC分離純化得到褐色固體化合物92 N-(3-(2-氯苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙醯胺(30mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 300.0[M+H]⁺.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ 8.24(s,1H),7.79-7.74(m,2H),7.69(dd,J=7.9,1.2Hz,1H),7.61(d,J=7.3Hz,1H),7.57(dd,J=7.5,1.9Hz,1H),7.54(dd,J=5.3,1.8Hz,1H),7.51(dd,J=7.4,1.4Hz,1H),7.38(d,J=9.7Hz,1H),3.10(s,3H),1.81(s,3H).

以下化合物參照化合物92的合成：

化合物93的合成：

第一步：化合物93的合成參照化合物92第一步的合成方法

LC_MS：(ES⁺)：m/z 286.0[M+H]⁺.

實施例14：化合物94的合成：

第一步：化合物94-C 3-溴-N,N-二甲基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-胺

將含有化合物94-A(40mg,0.172mmol)、化合物94-B甲胺鹽酸鹽(17.42mg,0.258mmol)和三乙胺(52.21mg,0.516mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(2ml)的溶液在110℃下攪拌反應48小時。TLC監測反應完全。反應液加水和乙酸乙酯萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC分離純化(用含3.22%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到褐色固體化合物94-C 3-溴-N,N-二甲基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-胺(14mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 240.9[M+H]⁺.

第二步：化合物94 N,N-二甲基-3-苯基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-胺

室溫氮氣氛圍下向含有化合物94-C 3-溴-N,N-二甲基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-胺(14mg,0.058mmol)、化合物94-D苯硼酸(7.79mg,0.069mmol)和飽和碳酸鈉溶液(0.5ml)的1,4-二氧六環(1ml)溶液中加入Pd(dppf)Cl₂-CH₂Cl₂(4.74mg,0.0058mmol)，反應混合物氮氣置換三次，80℃下攪拌反應14小時。TLC監測反應完全。反應混合物冷卻至室溫，加水和乙酸乙酯萃取。合併有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到白色固體化合物94 N,N-二甲基-3-苯基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-胺(6mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 239.1[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.18(dd,J=8.4,1.1Hz,2H),7.94(s,1H),7.89(d,J=10.0Hz,1H),7.46(dd,J=10.7,4.8Hz,2H),7.31(d,J=7.4Hz,1H),7.11(d,J=10.0Hz,1H),3.09(s,6H).

實施例15：化合物95的合成

第一步：化合物95叔丁基甲基(3-苯基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-基)氨基甲酸酯

0℃氮氣下向含有化合物22(18.5mg,0.0597mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(1ml)溶液中加入氫化鈉(2.39mg,0.0597mmol,60%分散在礦物油中)和碘甲烷(16.89mg,0.119mmol)加入反應液中；混合反應物由0℃升溫至室溫攪拌反應14小時。TLC監測反應完全。反應液加水和乙酸乙酯萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到淺黃色固體化合物95叔丁基甲基(3-苯基咪唑並[1,2-b]噠嗪-6-基)氨基甲酸酯(7mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 325.1[M+H]⁺.

實施例16：化合物96的合成：

第一步：化合物96(3-(3-乙醯氨基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

0℃氮氣下向含有化合物2(20mg,0.0591mmol)和吡啶(9.35mg,0.118mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入化合物96-A乙醯氯(4.64mg,0.0591mmol)，反應混合物由0℃升溫至室溫攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液加水和二氯甲烷萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得剩餘物經製備TLC分離純化(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到黃色固體化合物96(3-(3-乙醯氨基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(19mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 339.2[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 10.11(s,1H),8.48(s,1H),7.88(s,1H),7.75(s,1H),7.68(d,J=9.2Hz,1H),7.57(d,J=7.8Hz,1H),7.46(t,J=7.8Hz,1H),7.36(d,J=9.5Hz,1H),7.30(d,J=7.5Hz,1H),3.19(s,3H),2.05(s,3H),1.35(s,9H).

實施例17：化合物97的合成

第一步：化合物97-A N-(3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)呱啶-4-甲醯胺

將化合物52(70mg,0.127mmol)和鹽酸/二氧六環(1ml)加入甲醇(1ml)溶液中，反應液在室溫下攪拌反應6小時。TLC監測反應完全。反應液減壓濃縮得到褐色固體粗品化合物97-A N-(3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)呱啶-4-甲醯胺(50mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z350.2[M+H]⁺.

第二步：化合物97 1-(2-甲氧基乙基)-N-(3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)呱啶-4-甲醯胺

將含有化合物97-A(20mg,0.0573mmol)、化合物97-B(7.96mg,0.0573mmol)和碳酸鉀(31.63mg,0.23mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(1ml)溶液在70℃下攪拌反應16小時。TLC監測反應完全。反應混合物加乙酸乙酯萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC分離純化(用含11.1%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到褐色膠狀物化合物97 1-(2-甲氧基乙基)-N-(3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)呱啶-4-甲醯胺(3.2mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z408.2[M+H]⁺.

實施例18：化合物98的合成：

第一步：化合物98 2-(2-(2-(2-((3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸

將含有化合物98-A(100mg,0.45mmol)的氯化亞碸(3ml)溶液在60℃下攪拌反應3.5小時。減壓濃縮反應液，剩餘物溶於二氯甲烷(2mL)，0℃將含有化合物2(50.76mg,0.15mmol)和三乙胺(75.89mg,0.75mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液加入到上述反應液中，此反應在0℃下攪拌反應3小時。TLC監測顯示反應完全。反應液加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 3)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮所得粗品經Pre-TLC(用含12.5%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到黃色固體化合物98 2-(2-(2-(2-((3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸(60mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 543.3[M+H]+.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 10.21(s,1H),8.49(s,1H),7.95(s,1H),7.79-7.70(m,2H),7.63(d,J=9.4Hz,1H),7.47(t,J=7.9 Hz,1H),7.31(dd,J=17.5,7.8Hz,2H),4.15(s,2H),3.65(d,J=6.2Hz,4H),3.62-3.57(m,2H),3.53(s,4H),3.19(s,3H),1.34(s,9H).

實施例19：化合物99的合成：

第一步：化合物99叔丁基(3-(3-(2-(2-(2-(2-氨基-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙醯氨基)苯基)咪唑啉[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯

將含有化合物99-A(49.28mg,0.222mmol)的氯化亞碸(1ml)溶液在60℃下攪拌反應5小時。減壓濃縮反應液，剩餘物溶於二氯甲烷(2mL)，0℃將含有化合物2(25mg,0.074mmol)、三乙胺(37.38mg,0.369mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液加入到上述反應液中，此反應在0℃下攪拌反應3小時。最後將碳酸銨(14.22mg,0.148mmol)加入到反應混合物中，室溫攪拌反應14小時。TLC監測顯示反應完全。反應液加水(10ml)和二氯甲烷(10ml x 3)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮所得粗品經Pre-TLC(用含9.1%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到黃色固體化合物99叔丁基(3-(3-(2-(2-(2-(2-氨基-2-氧代乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙醯氨基)苯基)咪唑啉[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯(9mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 542.3[M+H]⁺.

實施例20：化合物100，化合物101和化合物102的合成

第一步：化合物100-C的合成參照中間體BB5第三步的合成過程

第二步：化合物100-D的合成參照中間體BB5第四步的合成過程

第三步：化合物100 4-(3-溴-6-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶-7-基)嗎啉

向含有化合物100-D(150mg,542.55umol)和化合物100-E(70.9mg)的乙腈(3mL)溶液中加入DIPEA(140.2mg)。此反應在20℃下攪拌反應12小時。LCMS顯示檢測到產物Ms。反應液加水 (20mL)稀釋，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物通過矽膠柱層析(用含50%乙酸乙酯的石油醚溶液洗脫)分離純化得到黃色固體化合物100 4-(3-溴-6-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶-7-基)嗎啉(45mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 327.0[M+H]⁺.

第四步：化合物101的合成參照化合物2第一步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 325.1[M+H]⁺.

第五步：化合物102-A 7-嗎啉-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

向含有化合物101(14mg,43.16umol)的乙醇(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中加入NH₄Cl(11.5mg,215.82umol)和鐵粉(12.1mg,215.82umol)。該反應在20℃下攪拌反應12小時。LCMS顯示反應完全。反應液矽藻土過濾，濃縮母液。剩餘物加水(10mL)稀釋，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物未作進一步純化直接用於下一步。 由此得到黃色油狀物化合物102-A 7-嗎啉-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(12.7mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 295.1[M+H]⁺.

第六步：化合物102 N-(7-嗎啉-3-苯基咪唑[1,2-a]吡啶-6-基)乙醯胺

向含有化合物102-A(12.7mg,43.14umol)和三乙胺(129.43unol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入乙醯氯(4.1mg,51.77umol)。此反應在20℃下攪拌反應12小時。LCMS顯示監測到產物Ms。反應液濃縮。剩餘物經Pre-TLC(用含10%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)分離純化得到黃色膠狀物化合物102 N-(7-嗎啉-3-苯基咪唑[1,2-a]吡啶-6-基)乙醯胺(0.6mg).

LC_MS：(ES⁺)：m/z 337.1[M+H]⁺.

實施例21：化合物103、化合物104和化合物105的合成

第一步：化合物103-B 6-((3,4-二甲基苄基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸

向含有化合物103-A(500mg,1.86mmol)和2,4-二甲氧基苯甲胺(372.8mg,2.23mmol)的二氧六環(20mL)溶液中加入叔丁醇鈉(357.5mg,3.72mmol)和BrettPhos-Pd-G3(84.3mg,0.093mmol)。此反應在100℃氮氣氛圍下攪拌12小時。LCMS顯示反應完全。反應液加水(20mL)稀釋，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。有機層通過2N HCl調節pH=7。大量固體生成。混合物過濾，收集濾餅，真空乾燥。剩餘物未經進一步純化直接用於下一步。由此得到黃色固體化合物103-B 6-((3,4-二甲基苄基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸(230mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 337.1[M+H]⁺.

第二步：化合物103 6-((3,4-二甲基苄基)氨基)-N-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-甲醯胺

向含有化合物103-B(100mg,305.49umol)和化合物103-C(56.9mg,610.99umol)的DMF(2mL)溶液中加入DIPEA(118.5mg,916.48umol)和HATU(139.4mg,366.59umol)。此反應在20℃下攪拌反應3小時。TLC(DCM：MeOH=10：1)監測顯示化合物103-B(Rf=0.05)消耗完，一個新的點(Rf=0.5)生成。反應液加水(10mL)稀釋，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經Pre-TLC(用含10%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到黃色固體化合物103 6-((3,4-二甲基苄基)氨基)-N-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-甲醯胺(95mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 403.2[M+H]⁺.

第三步：化合物104 6-((3,4-二甲基苄基)(甲基)氨基)-N-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-甲醯胺

向含有化合物103(95mg,236.05umol)和甲醛(98.4mg,1.18mmol，36% wt在水中)的甲醇(1mL)溶液中加入氰基硼氫化鈉(29.7mg,472.10umol)和一滴醋酸。此反應在20℃下攪拌反應12小時。TLC(DCM：MeOH=10：1)監測顯示大部分的化合物103(Rf=0.55)消耗完畢，一個新的點(Rf=0.6)生成。反應液加水(10mL)稀釋，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫 酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經Pre-TLC(用含5%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到黃色固體化合物104 6-((3,4-二甲基苄基)(甲基)氨基)-N-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-甲醯胺(42mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 417.2[M+H]⁺.

第四步：化合物105 6-(甲基氨基)-N-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-甲醯胺

向含有化合物104(37.0mg,88.84umol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)。此反應在45℃攪拌3小時。TLC(DCM：MeOH=10：1)監測反應完全。反應液濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)稀釋，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經Pre-TLC(用含10%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)得到白色固體化合物105 6-(甲基氨基)-N-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-甲醯胺(12.1mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 267.1[M+H]⁺.

實施例22：化合物106的合成

第一步：化合物106 6-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯

向含有化合物106-A(20mg,74.32umol)和2,4-二甲氧基苯甲胺(14.9mg,89.19umol)的二氧六環(20mL)溶液中加入碳酸銫(72.65mg,222.97umol)和BrettPhos-Pd-G3(3.3mg,3.716umol)。此反應在100℃氮氣氛圍下攪拌12小時。LCMS顯示反應完全。反應液加水(10mL)稀釋，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，剩餘物經Pre-TLC(用含50%乙酸乙酯的石油醚溶液洗脫)得到綠色膠狀物化合物106 6-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(4.1mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 356.1[M+H]⁺.

實施例23：化合物107的合成

第一步：化合物107-B的合成參照中間體BB5第三步的合成過程

第二步：化合物107-C的合成參照中間體BB5第四步的合成過程

第三步：化合物107-D的合成參照化合物2第一步的合成過程

第四步：化合物107-E 7-甲氧基-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

向含有化合物107-D(80mg,297.11umol)的甲醇(5mL)溶液中加入鈀/碳(10mg)。此反應在20℃氫氣球氛圍下攪拌反應12小時。TLC(DCM：MeOH=10：1)監測化合物107-D(Rf=0.7)反應完畢，一個新的點(Rf=0.6)生成。反應液通過矽藻土過濾，濃縮母液，剩餘物未經進一步純化直接用於下一步。由此得到棕色油狀物粗品化合物107-E 7-甲氧基-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(71mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 240.1[M+H]⁺.

第五步：化合物107 N-(7-甲氧基-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)乙醯胺

向含有化合物107-E(33mg,137.91umol)的乙腈(2mL)溶液中加入碳酸鉀(38.1mg,275.83unol)、乙醯氯(23.8mg,303.42umol)和二碳酸二叔丁酯(60.2mg,275.82umol)。反應液在60℃攪拌反應12小時。TLC(DCM：MeOH=10：1)監測顯示反應完畢。反應液加水稀釋(10mL)，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經Pre-TLC(用含6.7%的二氯甲烷溶液和含75%乙酸乙酯的石油醚洗脫)分離純化得到黃色固體化合物107 N-(7-甲氧基-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)乙醯胺(3.6mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 282.1[M+H]⁺.

實施例24：化合物108和化合物109的合成

第一步：化合物108-C 3-溴-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)苯磺醯胺

向含有化合物108-A 3-溴苯磺醯氯(800mg,3.13mmol)和三乙胺(633.7mg,6.26mmol)的二氯甲烷溶液中加入化合物108-B 2-(2-甲氧基乙氧基)乙-1-胺(391.8mg,3.29mmol)。反應液在0℃下攪拌反應12小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=1：1)監測反應完全。反應液加水(20mL)稀釋，二氯甲烷(20mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到黃色油狀物化合物108-C 3-溴-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)苯磺醯胺(840mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 337.9[M+H]⁺.

第二步：化合物108-E N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯磺醯胺

向含有化合物108-C 3-溴-N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)苯磺醯胺(840mg,2.48mmol)和化合物108-D雙聯頻哪醇硼酸酯(946.0mg,3.73mmol)的1,4-二氧六環溶液中加入乙酸鉀(731.2mg,7.45mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物(202.5mg,0.248mmol)。反應液在85℃氮氣氛圍下攪拌反應12小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=1：1)監測反應完全。反應液經矽藻土過 濾，母液加水(20mL)稀釋，乙酸乙酯(20mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到黃色油狀物粗品化合物108-E N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯磺醯胺(806mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 385.6[M+H]⁺.

第三步：化合物108(3-(3-(N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨磺醯基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

此步的合成參照化合物2第一步的合成過程。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 505.1[M+H]⁺.

第四步：化合物109 N-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-3-(6-(甲氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯磺醯胺

此步的合成參照化合物63第一步的合成過程。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 405.0[M+H]⁺.

以下化合物參照化合物108、化合物109的合成

化合物110的合成

第一步：化合物110-C的合成參照化合物109第一步的合成過程

第二步：化合物110-E的合成參照化合物109第二步的合成過程

第三步：化合物110-G的合成參照化合物109第三步的合成過程

第四步：化合物110 3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)-N-(四氫-2H-吡喃-4-基)苯磺醯胺

此步的合成參照化合物109第四步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 387.0[M+H]⁺.

實施例25：化合物111和化合物112的合成

第一步：化合物111-B和化合物112-B 6-氨基-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-7-醇&6-氨基-8-溴-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-7-醇

0℃下向含有化合物111-A(20mg,83.58umol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三溴化硼(41.9mg,167.17umol)。反應液攪拌反應12小時。LCMS顯示監測到化合物111-B和化合物112-B的MS。反應液濃縮。剩餘物未經進一步純化直接用於下一步。由此得到黃色固體粗品化合物111-B和化合物112-B 6-氨基-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-7-醇&6-氨基-8-溴-3-苯基咪唑並[1,2-a]吡啶-7-醇(18.8mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 226.1[M+H]⁺.

第二步：化合物111 7-苯基-3,4-二氫-2H-咪唑並[1',2'：1,6]吡啶並[4,3-b][1,4]惡嗪&化合物112 10-溴-7-苯基-3,4-二氫-2H-咪唑[1',2'：1,6]吡啶並[4,3-b][1,4]惡嗪

向含有化合物111-B和化合物112-B(18.8mg,83.46umol)的DMF(2mL)溶液中加入1-2-二溴乙烷(18.8mg,100.15umol)和碳酸鉀(34.6mg,250.39umol)。此反應在100℃下攪拌反應12小時。LCMS顯示檢測到目標產物和副產物的生成。反應液加水(10mL)稀釋，乙酸乙酯(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經矽膠柱層析(用含10%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到黃色油狀物化合物111 7-苯基-3,4-二氫-2H-咪唑並[1',2'：1,6]吡啶並[4,3-b][1,4]惡嗪(3.0mg)和黃色油狀物化合物112 10-溴-7-苯基-3,4-二氫-2H-咪唑[1',2'：1,6]吡啶並[4,3-b][1,4]惡嗪(3.4mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 252.1[M+H]⁺.

LC_MS：(ES⁺)：m/z 330.0[M+H]⁺.

實施例26：化合物113的合成：

第一步：化合物113-B 2-(2-(2-((3-(6-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧乙氧基)乙氧基)乙酸

向二氯亞碸(4mL)中加入化合物113-A(40mg,220μmol)，反應液在60℃下攪拌2小時至溶液澄清。將反應液減壓濃縮，乾燥後向殘餘物中加入二氯甲烷(30mL)溶解，然後在0℃下加入化合物2(25mg,74μmol)和三乙胺(52μL,370μmol)。反應液在0℃下攪拌反應3小時。反應結束後向反應液中加入鹽酸水溶液(30mL，0.1N)並用乙酸乙酯萃取(30mLx2)。合併的有機層用飽和食鹽水洗滌(30mL)，無水Na₂SO₄乾燥，過濾後濃縮。剩餘物經製備薄層層析分離純化(洗脫液：15%甲醇的二氯甲烷溶液)得到黃色固體化合物113-B(20mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 499.2[M+H]⁺.

第二步：化合物113(3-(3-(2-(2-(2-((((S)-1-((2S，4R)-4-羥基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲醯基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙醯氨基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物113-B(20mg,40μmol)，化合物113-C(18mg,40μmol)和三乙胺(12μL,80μmol)的二氯甲烷溶液中加入HATU(23mg,60μmol)。反應混合物在室溫下攪拌反應9小時。反應結束後將反應液用水(20mL)稀釋，二氯甲烷(20mLx2)萃取。合併的有機層用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水Na₂SO₄乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經製備薄層層析分離純化(洗脫液：8%甲醇的二氯甲烷溶液)得到白色固體化合物113(15mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 911.4[M+H]⁺.

實施例27：化合物114的合成：

第一步：化合物114(2S，4R)-1-((S)-3,3-二甲基-2-(2-(2-(2-((3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙醯氨基)丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺鹽酸鹽

將化合物113(5mg,5.5μmol)溶於二氯甲烷(3mL)中，然後向反應液中加入氯化氫的二氧六環溶液(1mL,4M)。反應液在室溫下攪拌反應3小時。反應結束後將反應液減壓濃縮，乾燥後得到黃色固體。化合物114(4mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 811.3[M+H]⁺.

實施例28：化合物115的合成：

第一步：化合物115-B 2-(2-(2-(2-((3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸

此步的合成參照化合物113第一步的合成過程

第二步：化合物115(3-(3-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧呱啶-3-基)-1-氧代異吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物115-B(20mg,40μmol)、化合物115-C(14mg,55μmol)和三乙胺(15μL,111μmol)的乙腈溶液(3mL)中加入三氯氧磷(7μL,74μmol)。反應混合物在室溫下攪拌反應4小時。反應結束後將反應液用水(20mL)稀釋，二氯甲烷(20mLx2)萃取。合併的有機層用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水Na₂SO₄乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經製備薄層層析分離純化(洗脫液：10%甲醇的二氯甲烷溶液)得到白色固體化合物115(5.0mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 784.3[M+H]⁺.

實施例29：化合物116的合成：

第一步：化合物116((((((2,2'-(乙烷-1,2-二基雙(氧基))雙(乙醯基))雙(氮雜二烷基))雙(3,1-亞苯基))雙(咪唑並[1,2-a]吡啶-3,6-二基))雙(甲基氨基甲酸叔丁基酯)

向二氯亞碸(4mL)中加入化合物116-A(40mg,220μmol)，反應液在60℃下攪拌2小時至溶液澄清。將反應液減壓濃縮，乾燥後向殘餘物中加入二氯甲烷(30mL)溶解，然後在0℃下加入化合物2(25mg,74μmol)和三乙胺(52μL,370μmol)。反應液在0℃下攪拌反應3h。反應結束後向反應液中加入鹽酸水溶液(30mL，0.1N)並用乙酸乙酯萃取(30mLx2)。合併的有機層用飽和食鹽水洗滌(30mL)，無水Na₂SO₄乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經製備薄層層析分離純化(洗脫液：8%甲醇的二氯甲烷溶液)得到白色固體化合物116(10mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 819.4[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.91(s,2H),8.23(d,J=82.5Hz,4H),7.77(d,J=19.8Hz,6H),7.42(t,J=7.9Hz,2H),7.32(d,J=9.4Hz,2H),7.22(s,2H),4.27(s,4H),4.01(s,4H),3.28(d,J=6.1Hz,6H),1.47(s,18H).

化合物117的合成

第一步：化合物117-B的合成參照化合物113第一步的合成過程

第二步：化合物117的合成參照化合物113第二步的合成過程

(2S，4R)-1-((S)-12-(叔丁基)-2-(3-(2-氯苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-3,10-二氧代-5,8-二氧雜-2,11-二氮雜十六烷-13-醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺

LC_MS：(ES⁺)：m/z 830.3[M+H]⁺.

化合物118的合成

第一步：化合物118-B的合成參照化合物113第一步的合成過程

第二步：化合物118的合成參照化合物113第二步的合成過程

(2S,4R)-1-((S)-15-(叔丁基)-2-(3-(2-氯苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-3,13-二氧代-5,8,11-三氧雜-2,14-二氮雜十六烷-16-醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺

LC_MS：(ES⁺)：m/z 874.3[M+H]⁺.

化合物119的合成

第一步：化合物119-B的合成參照化合物113第一步的合成過程

第二步：化合物119的合成參照化合物113第二步的合成過程

(3-(3-((S)-13-((2S，4R)-4-羥基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲醯基)吡咯烷-1-羰基)-14,14-二甲基-11-氧代-3,6,9-三氧雜-12-氮雜戊二醯胺)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

LC_MS：(ES⁺)：m/z 955.4[M+H]⁺.

化合物120的合成

第一步：化合物120的合成參照化合物114第一步的合成過程

(2S，4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-14-((3-(6-(甲基氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)氨基)-4,14-二氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺鹽酸鹽

LC_MS：(ES⁺)：m/z 855.3[M+H]⁺.

化合物121的合成

第一步：化合物121的合成參照化合物116第一步的合成過程

((((2,2'-((氧雙(乙烷-2,1-二基))雙(氧))雙(乙醯基))雙(氮雜二基))雙(3,1-亞苯基))雙(咪唑並[1,2-a]吡啶-3,6-二基))雙((甲基)氨基甲酸叔丁基酯)

LC_MS：(ES⁺)：m/z 863.4[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.89(s,2H),8.32(s,5H),7.74(s,5H),7.45(t,J=23.9Hz,4H),7.26-7.21(m,2H),4.12(s,4H),3.82(s,8H),3.26(s,6H),1.43(s,18H).

化合物122的合成

第一步：化合物122的合成參照化合物116第一步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 791.1[M+H]⁺.

化合物123的合成

第一步：化合物123的合成參照化合物116第一步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 835.1[M+H]⁺.

實施例30：化合物124和化合物125的合成：

第一步：化合物124 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑並[1，2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸甲酯

在氮氣保護下向含有中間體BB5(3-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg,0.096mmol)，化合物124-A 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)噻吩-3-羧酸甲酯(38.65mg,0.144mmol)，碳酸銫(125.11mg,0.384mmol)，S-Phos(7.9mg,0.0192mmol)和氯化亞銅(9.5mg,0.096mmol)的N,N-二甲基甲醯胺溶液中加入醋酸鈀(1.08mg,0.0048mmol)，反應體系氮氣置換3次，加熱至100℃攪拌反應18小時。TLC監測反應完全。反應液加水(15ml)和乙酸乙酯(15ml x 3)萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC分離純化(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)得到黃色固體化合物124 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸甲酯(12mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 374.0[M+H]⁺.

第二步：化合物125-A 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸

向含有化合物124 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸甲酯(12mg，0.032mmol)的甲醇/水/四氫呋喃(1.5ml，1：1：1)的溶液中加入氫氧化鋰水合物(6.71mg,0.16mmol)，反應液在室溫下攪拌反應5小時。TLC監測反應完全。反應混合物用稀鹽酸調酸，減壓濃縮，得到黃色固體化合物125-A 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸(10mg，粗品)，粗品直接用於下一步反應。

第三步：化合物125(3-(4-((四氫-2H-吡喃-4-基)氨基甲醯基)噻吩-2-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

將含有化合物125-A 5-(6-((叔丁氧羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-3-羧酸(10mg,0.0278mmol)、化合物125-B四氫-2H-吡喃-4-胺(2.81mg,0.0278mmol)、HATU(10.56mg,0.0278mmol)和N,N-二異丙基乙胺(10.76mg,0.0834mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(1ml)溶液在室溫下攪拌反應18小時。TLC監測反應完全。反應液加水和乙酸乙酯萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色固體化合物125(3-(4-((四氫-2H-吡喃-4-基)氨基甲醯基)噻吩-2-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(2.3mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 443.1[M+H]⁺.

以下化合物參照化合物124、化合物125的合成

化合物126和化合物127的合成：

第一步：化合物126 5-(6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)噻吩-2-羧酸乙酯

此步參照化合物125第一步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 2.636[M+H]⁺.

第二步：化合物127-A參照化合物125第二步的合成過程

第三步：化合物127(3-(5-((四氫-2H-吡喃-4-基)氨基甲醯基)噻吩-2-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

此步參照化合物125第三步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 443.1[M+H]⁺.

實施例31：化合物128和化合物129的合成：

第一步：化合物128 N-(3-(6-氨基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)-2-(2-甲氧基乙氧基)乙醯胺

室溫下將含有化合物58(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.454mmol)的二氯甲烷(4ml)和三氟乙酸(800ul)的溶液在室溫下攪拌反應5小時。TLC監測反應完全。反應混合物減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析(用含4.76%-9.0%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到褐色固體化合物128 N-(3-(6-氨基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)-2-(2-甲氧基乙氧基)乙醯胺(150mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 341.1[M+H]⁺.

第二步：化合物129 N-(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)環丙烷甲醯胺

0℃下向含有化合物128 N-(3-(6-氨基咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯基)-2-(2-甲氧基乙氧基)乙醯胺(30mg,0.0881mmol)和三乙胺(26.74mg,0.264mmol)的二氯甲烷溶液(2ml)中加入環丙烷甲醯氯(9.67mg,0.0925mmol)，反應液由0℃升溫至室溫攪拌反應18小 時。TLC監測反應完全。反應液加水和二氯甲烷萃取，合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含4.76%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色固體化合物129 N-(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)環丙烷甲醯胺(16mg).

LC_MS：(ES⁺)：m/z 409.0[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 9.29(d,J=20.4Hz,2H),9.15(s,1H),7.90-7.75(m,2H),7.71(s,1H),7.61(d,J=8.2Hz,1H),7.47(dd,J=13.6,5.7Hz,2H),7.31(s,1H),4.15(s,2H),3.82-3.78(m,2H),3.66-3.62(m,2H),3.46(s,3H),1.82(dd,J=8.0,3.7Hz,1H),1.03-0.97(m,2H),0.84(dd,J=7.6,3.1Hz,2H).

以下化合物參照化合物129的合成

化合物130的合成

第一步：化合物130的合成參照化合物129第二步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 425.1[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 9.85(s,1H),9.41(s,1H),9.26(s,1H),7.87(t,J=1.7Hz,1H),7.79(d,J=8.2Hz,1H),7.68(d,J=8.5Hz,2H),7.56(dd,J=14.0,6.2Hz,2H),7.35(d,J=7.8Hz,1H),4.12(s,2H),3.72-3.68(m,2H),3.56-3.53(m,2H),3.30(s,3H),1.23(s,9H).

化合物131的合成

第一步：化合物131的合成參照化合物129第二步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 413.1[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 10.04(s,1H),9.84(s,1H),9.30(s,1H),7.89(t,J=1.7Hz,1H),7.80-7.76(m,1H),7.71(d,J=8.1Hz,2H),7.60-7.51(m,2H),7.36(d,J=7.9Hz,1H),4.12(s,2H),4.03(s,2H),3.71-3.68(m,2H),3.56-3.53(m,2H),3.39(s,3H),3.30(s,3H).

實施例32：化合物132、化合物133和化合物134的合成：

第一步：化合物132-A的合成參照中間體BB-6第五步的合成過程

第二步：化合物132-C的合成參照化合物2第一步的合成過程

第三步：化合物132 3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸

向含有化合物132-C 3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸甲酯(148mg,0.388mmol)的甲醇(3ml)溶液中加入含有氫氧化鈉(46.56mg,1.164mmol)的水(1ml)溶液，反應混合物在室溫下攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液用稀鹽酸調節pH至5-6，反應混合物減壓濃縮，得到褐色固體化合物132 3- (6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸(138mg,粗品)，直接用於下一步反應。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 368.0[M+H]⁺.

第四步：化合物133(3-(3-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基甲醯基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向含有化合物132 3-(6-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-基)苯甲酸(50mg,0.136mmol)、化合物133-A 2-(2-甲氧基乙氧基)乙-1-胺(16.2mg,0.136mmol)和2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(51.68mg,0.136mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(1ml)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(52.63mg,0.408mmol)，反應混合液在室溫下攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液加水和乙酸乙酯萃取，合併的有機層經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含8.33%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色凝膠狀物化合物133 3(3-(3-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)氨基甲醯基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(44mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 469.1[M+H]⁺.

第五步：化合物134的合成參照化合物63的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 369.1[M+H]⁺.

以下化合物參照化合物134的合成

化合物135和化合物136的合成

第一步：化合物135的合成參照化合物134第四步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 451.1[M+H]⁺.

第二步：化合物136的合成參照化合物134第五步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 351.0[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.98(s,2H),7.86(d,J=7.1Hz,1H),7.66(s,2H),7.58(t,J=7.7Hz,1H),7.35(s,1H),6.95(s,1H),4.28-4.17(m,1H),4.02(d,J=10.6Hz,2H),3.58-3.49(m,2H),2.75(s,3H),2.07-1.96(m,2H),1.68-1.60(m,2H).

實施例33：化合物137的合成：

第一步：化合物137-B[6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯]

室溫氮氣氛圍下向含有化合物137-A 6-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(1g,3.37mmol)、氨基甲酸叔丁酯(592mg,5.06mmol)、9,9-二甲基-4,5-雙二苯基膦氧雜蒽(390mg,0.67mmol)和碳酸銫(3.3g,10.11mmol)的1,4-二氧六環(1ml)懸浮液中加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(309mg,0.34mmol)。反應液氮氣置換三次，110℃下攪拌反應16小時。TLC監測反應完全。反應液冷至室溫，分配于水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)中。收集有機層，水層用含10%甲醇的二氯甲烷(10ml x 3)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(30ml)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經Pre-TLC(用含0.8%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到淡黃色固體化合物137-B 6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(600mg,52%)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 306.6[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 1.42(t,J=7.2Hz,3H),1.54(s,9H),4.39-4.44(m,2H),6.60(s,1H),7.36-7.38(m,1H),7.66(d,J=9.6Hz,1H),8.26(s,1H),9.67(s,1H).

第二步：化合物137-C[6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸]

將含有化合物137-B 6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸乙酯(600mg,1.97mmol)和一水合氫氧化鋰(248mg,5.90mmol)的四氫呋喃(4ml)-水(1ml)-甲醇(1ml)的混合溶液在室溫下攪拌反應4小時。TLC監測反應完全。反應液用1N鹽酸酸化至pH 5-6，用含10%甲醇的二氯甲烷(20ml x 5)萃取。合併有機層，飽和食 鹽水(30ml)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到白色固體粗品化合物137-C 6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸(300mg,55%)，未經進一步純化，用於下一步。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 278.4[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 1.50(s,9H),7.38-7.41(m,1H),7.62(d,J=9.2Hz,1H),8.02(s,1H),9.55(s,1H),9.86(s,1H).

第三步：化合物137二叔丁基(3,3'-((乙烷-1,2-二基雙(氮雜二基))雙(羰基))雙(咪唑並[1,2-a]吡啶-6,3-二基))二氨基甲酸酯

0℃下向含有化合物137-C 6-((叔丁氧基羰基)氨基)咪唑並[1,2-a]吡啶-3-羧酸(20mg,0.072mmol)、乙烷-1,2-二胺(2.17mg,0.036mmol)和N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(14mg,0.108mmol)的DMF(1mL)溶液中加入HATU(42mg,0.11mmol)。反應液升至室溫，攪拌反應30分鐘。TLC監測反應完全。混合物分配於乙酸乙酯(10ml)和水(10ml)中。收集有機層，飽和食鹽水(10ml)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含10%氨甲醇溶液的二氯甲烷(50%)-乙酸乙酯(50%))分離純化得到白色固體化合物137二叔丁基(3,3'-((乙烷-1,2-二基雙(氮雜二基))雙(羰基))雙(咪唑並[1,2-a]吡啶-6,3-二基))二氨基甲酸酯(8.7mg,42%)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 579.3[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 1.50(s,18H),3.47-3.48(m,4H),7.38-7.40(m,2H),7.61-7.64(m,2H),8.26(s,2H),8.58-8.60(m,2H),9.55(s,2H),9.98(s,2H)

使用相應的胺化合物，以下化合物參照化合物137的合成

化合物138的合成

第一步：化合物138的合成參照化合物137第三步的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 781.6[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 1.49(s,18H),3.29(s,4H),3.34-3.36(m,4H),3.60(s,4H),3.88(s,4H),7.36-7.38(m,2H),7.60-7.62(d,J=9.6Hz,2H),7.91(t,J=5.6Hz,2H),8.21(s,2H),8.45(t,J=5.2Hz,2H),9.53(s,2H),9.95(s,2H).

化合物139的合成

第一步：化合物139的合成參照化合物137第三步的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 667.2[M+H]⁺.

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 1.49(s,18H),3.40-3.44(m,4H),3.54-3.58(m,8H),7.35-7.38(m,2H),7.61(d,J=9.6Hz,2H),8.26(s,2H),8.47(t,J=5.2Hz,2H),9.54(s,2H),9.97(s,2H).

化合物140的合成

第一步：化合物140的合成參照化合物137第三步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 695.2[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 1.49(s,18H),1.74-1.81(m,4H),3.29(s,2H),3.34(brs,2H),3.47-3.53(m,8H),7.36(d,J=9.6Hz,2H),7.61(d,J=9.6Hz,2H),8.22(s,2H),8.36(t,J=5.6Hz,2H),9.52(s,2H),9.56(s,2H).

化合物141的合成

第一步：化合物141的合成參照化合物137第三步的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 623.6[M+H]⁺.

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 1.49(s,18H),3.45-3.49(m,4H),3.61(t,J=5.8Hz,4H),7.37-7.40(m,2H),7.61(d,J=9.6Hz,2H),8.26(s,2H),8.46(t,J=5.6Hz,2H),9.54(s,2H),9.96(s,2H).

實施例34：化合物142的合成：

第一步：化合物142-B N-甲基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

將含有化合物142-A 6-溴咪唑並[1,2-a]吡啶(50mg,0.25mmol)，(R)-1-[(S)-2-(二環己基膦基)二茂鐵基]乙基叔丁基膦(cas：158923-11-6)(14mg,0.025mmol)、雙[三(2-甲基苯基)膦]鈀(cas：69861-71-8)(18mg,0.025mmol)和叔丁醇鈉(328mg,3.3mmol)的1,4-二氧六環溶液氮氣置換三次，然後迅速加入甲胺鹽酸鹽(171mg,2.5mmol)。密封反應液，在100℃下攪拌反應24小時。TLC監測反應完全。反應液分配於乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)中。收集有機層，飽和食鹽水(10ml)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析(用含5%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到灰色油狀物化合物142-B N-甲基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(17mg,45%)。

LC_MS：(ES+)：m/z 148.1[M+H]⁺.

第二步：化合物142-C 2,2,2-三氟-N-(咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙醯胺

0℃下向含有化合物142-B N-甲基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(50mg,0.34mmol)、三乙胺(114mg,1.12mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(4mg,0.034mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中逐滴加入三氟乙酸酐(86mg,0.41mmol)。反應液升至室溫攪拌反應15小時。TLC監測反應完全。反應液分配於二氯甲烷(10ml)和水(10ml)中。收集有機層，飽和食鹽水(10ml)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析(用含3%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色油狀物化合物142-C 2,2,2-三氟-N-(咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙醯胺(33mg,40%)。

LC_MS：(ES+)：m/z 244.10[M+H]⁺.

第三步：化合物142-D 2,2,2-三氟-N-甲基-N-(3-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)乙醯胺

0℃攪拌條件下向含有化合物142-C 2,2,2-三氟-N-(咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-N-甲基乙醯胺(33mg,0.14mmol)的濃硫酸(1ml)溶液中加入濃硝酸(9mg,0.14mmol)。反應混合物升至室溫，攪拌反應1小時。TLC監測反應完全。反應液用飽和碳酸鈉水溶液鹼化至pH=7，然後分配於乙酸乙酯(10ml)和水(10ml)中。收集有機層，飽和食鹽水(10ml)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到黃色固體粗品 化合物142-D 2,2,2-三氟-N-甲基-N-(3-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)乙醯胺(30mg,76%)，未經進一步純化，直接用於下一步。

LC_MS：(ES+)：m/z 288.95[M+H]⁺.

第四步：化合物142-E N-(3-氨基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺

將含有鈀碳(20%,6mg)和化合物142-D 2,2,2-三氟-N-甲基-N-(3-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)乙醯胺(30mg,0.1mmol)的甲醇(15ml)溶液在室溫氫氣(氫氣球)氛圍下攪拌反應過夜。TLC監測反應完全。過濾移除鈀碳，用乙醇(5ml x2)沖洗。合併濾液，減壓濃縮，所得粗品經製備TLC(用含5%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)分離純化得到棕色油狀物化合物142-E N-(3-氨基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺(8mg,30%)。

LC_MS：(ES+)：m/z 259.10[M+H]⁺.

第五步：化合物142 N,N'-(3,3'-((2,2'-((氧雙(乙烷-2,1-二基))雙(氧))雙(乙醯基))雙(氮雜二烷基))雙(咪唑並[1,2-a]吡啶-6,3-二基))雙(2,2,2-三氟-N-甲基乙醯胺)

此步的合成參照實施例29，化合物123的合成過程。

LC_MS：(ES+)：m/z 703.50[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 3.37(s,6H),3.79-3.80(m,8H),4.04-4.18(m,4H),7.10-7.13(m,2H),7.57-7.69(m,4H),7.93-8.01(m,2H),8.88-9.07(m,2H).

以下化合物的合成參照化合物2，中間體BB5或者BB6描述的相應路線：

化合物143

LC_MS：(ES⁺)：m/z 373.9[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.14(s,1H),7.70(s,1H),7.59(d,J=9.2Hz,1H),7.52(t,J=5.9Hz,1H),7.24(dd,J=9.2,1.5Hz,1H),4.22(d,J=6.0Hz,2H),3.17(d,J=4.9Hz,1H),1.41(s,9H).

化合物144

LC_MS：(ES⁺)：m/z 339.1[M+H]⁺.

化合物145

LC_MS：(ES⁺)：m/z 455.1[M+H]⁺.

化合物146

LC_MS：(ES⁺)：m/z 439.1[M+H]⁺.

化合物147

LC_MS：(ES⁺)：m/z 466.1[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 9.92(s,1H),8.52(d,J=1.2Hz,1H),7.94(t,J=1.7Hz,1H),7.78(s,1H),7.73-7.64(m,2H),7.50(t,J=7.9Hz,1H),7.34(ddd,J=11.4,8.8,4.2Hz,2H),3.67-3.61(m,4H),3.22(s,3H),3.17(s,2H),2.55-2.51(m,4H),1.37(s,9H).

化合物148

LC_MS：(ES⁺)：m/z 466.2[M+H]⁺.

化合物149

LC_MS：(ES⁺)：m/z 437.2[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 10.22(s,1H),8.50(s,1H),7.92(s,1H),7.77(s,1H),7.65(dd,J=17.5,8.6Hz,2H),7.49(t,J=7.9Hz,1H),7.34(d,J=8.0Hz,2H),3.96(t,J=8.1Hz,1H),3.74(dq,J=15.3,7.5Hz,3H),3.22(s,3H),3.17(d,J=7.2Hz,1H),2.10(dd,J=14.2,7.0Hz,2H),1.37(s,9H).

化合物150

LC_MS：(ES⁺)：m/z 423.1[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 10.13(s,1H),8.51(s,1H),7.94(s,1H),7.78(s,1H),7.65(dd,J=12.4,9.2Hz,2H),7.51(t,J=7.9Hz,1H),7.35(t,J=7.6Hz,2H),4.75-4.69(m,4H),4.03-3.95(m,1H),3.22(s,3H),1.38(s,9H).

化合物151

化合物151

LC_MS：(ES+)：m/z 467.2[M+H]⁺.

實施例35：化合物152的合成

在0℃向含有化合物2(30mg,88.65umol)和N,N-二異丙基乙基胺(22.9mg,177.3umol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三光氣(8.7mg,29.25umol)。攪拌反應30分鐘後，將含有化合物152-A(23.2mg,265.95umol)和N,N-二異丙基乙基胺(34.4mg,265.95umol)的二氯甲烷(2mL)溶液加入到反應液中，升至室溫反應12小時。LCMS監測反應完全。反應液加水(10mL)稀釋，二氯甲烷(10mLx2)萃取。合併有機層，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮。剩餘物經Pre-TLC(用含10%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到黃色固體化合物152(16.8mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 452.1[M+H]⁺.

實施例36：化合物153的合成

第一步：化合物153-B的合成參照化合物2第一步的合成過程

第二步：化合物153-D叔丁基(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯

將含有化合物153-B(50mg,0.15mmol)、化合物153-C(27mg,0.15mmol)、碳酸鉀(61mg,0.44mmol)和碘化鉀(3mg,0.015mmol)的無水N,N-二甲基甲醯胺(2ml)溶液在50℃下攪拌反應15小時。TLC監測反應完全。反應液分配於乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)中。收集有機層，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經Pre-HPLC分離純化得到無色油狀物化合物153-D叔丁基(3-(3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯(36mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 442.60[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 1.46(s,9H),3.27(s,3H),3.39(s,3H),3.57-3.60(m,2H),3.72-3.75(m,2H),3.90(t,J=4.8Hz,2H), 4.22(t,J=4.8Hz,2H),7.03-7.06(m,1H),7.10-7.13(m,2H),7.38(d,J=9.6Hz,1H),7.47(t,J=4.0Hz,1H),7.75(s,1H),7.94(d,J=12.4Hz,1H),8.34(s,1H).

第三步：化合物153的合成參照化合物63第一步的合成方法

LC_MS：(ES+)：m/z 342.30[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)：δ 2.73(s,3H),3.36(s,3H),3.56-3.58(m,2H),3.70-3.72(m,2H),3.86-3.88(m,2H),4.20-4.22(m,2H),7.06-7.12(m,2H),7.20-7.23(m,2H),7.46-7.51(m,2H),7.58(s,1H),7.66(d,J=9.6Hz,1H).

化合物154的合成參照化合物153的合成路線的第二步(使用化合物154-B)和第三步：

LC_MS：(ES+)：m/z 338.65[M+H]⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ 1.42-1.53(m,2H),1.76-1.79(m,2H),2.05-2.14(m,1H),2.76(s,3H),3.42-3.48(m,2H),3.85(d,J=6.4Hz,2H),4.01-4.04(m,2H),6.92-6.98(m,2H),7.05(s,1H),7.13(d,J=7.2Hz,1H),7.39-7.42(m,2H),7.64(s,1H),8.12(brs,1H).

下列化合物的合成路線如下，參照實施例36化合物153的合成路線，並使用相對應的試劑合成：

實施例37：化合物158、化合物159的合成路線

第一步：化合物158叔丁基甲基(3-(3-(N-甲基四氫-2H-吡喃-4-甲醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯

在0℃氮氣氛圍下向含有化合物49(200.00mg,443.91umol)的DMF(10ml)中，加入氫化鈉(19.53mg,488.30umol,60%)和碘甲烷(75.61mg,532.70umol)，反應液在0℃下攪拌反應1小時。TLC監測反應完全。反應液倒入飽和氯化銨溶液(20mL)中，加入乙酸乙酯(15mLx2)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得粗品經矽膠柱層析(洗脫液：0%-5%甲醇的二氯甲烷溶液)分離純化得到白色固體化合物158叔丁基甲基(3-(3-(N-甲基四氫-2H-吡喃-4-甲醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯(150mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 465.24[M+H]⁺.

第二步：化合物159的合成參照實施例6第一步的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 365.19[M+H]+.

化合物160的合成路線參照實施例37化合物158的合成路線，並使用相對應的試劑合成：

LC_MS：(ES+)：m/z 481.24[M+H]⁺.

實施例38：化合物161、化合物162的合成路線

第一步：化合物161-B(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

0℃氮氣氛圍下向含有化合物61-E(3-碘代咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,0.8mmol)和化合物161-A 2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷(225mg,1.2mmol)的無水四氫呋喃(10ml)溶液中緩慢滴加異丙基氯化鎂氯化鋰絡合物(0.75ml,0.96mmol,1.3N在四氫呋喃中)。反應混合物在0℃攪拌反應2小時。TLC監測反應完全。反應混合物用飽和氯化銨溶液(30ml)淬滅，乙酸乙酯(30ml)萃取。收集有機層，飽和食鹽水(20ml)洗滌，無水硫 酸鈉乾燥，減壓濃縮得到淡紅色固體化合物161-B(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(285mg，粗品)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 291.8[M+H]⁺.

第二步：化合物161(3-(1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-5-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

室溫氮氣氛圍下向含有化合物161-C 5-溴-1H-吡咯並[2,3-c]吡啶(100mg,0.508mmol)，化合物161-B(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(284.2mg,0.761mmol，粗品)，碳酸鈉(1N,1.52ml,1.52mmol)的乙腈(5ml)和水(1ml)的懸浮液中加入四(三苯基膦)鈀(58.7mg,50.75umol)，反應混合物氮氣置換三次，在90℃下攪拌反應16小時。TLC監測反應完全。反應混合物分配於乙酸乙酯(20ml)和水(10ml)中。收集有機層，飽和食鹽水(20ml)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經矽膠柱層析(用含1%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到化合物161(3-(1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-5-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(50mg)。

LC_MS：(ES⁺)：m/z 364.2[M+H]⁺

第三步：化合物162 N-甲基-3-(1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-5-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

此步的合成參照實施例6第一步的合成過程

LC_MS：(ES⁺)：m/z 264.1[M+H]⁺

以下化合物的合成路線如下，參照實施例38化合物161、化合物162的合成路線，並使用相對應的試劑合成：

實施例39：化合物201、化合物202的合成路線

第一步：化合物201-C 6-(1H-吡唑-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶

室溫下向含有化合物201-A 6-碘咪唑並[1,2-a]吡啶(1.0g,4.10mmol)，化合物201-B吡唑(418.5mg,6.15mmol)的1,4-二氧六環(20mL)溶液中加入碘化亞銅(78.04mg，409.78μmol)，磷酸三鉀(78.04mg，409.78μmol),N1,N2-二甲基反式環己烷-1,2-二胺(58.29mg，409.78umol)，氮氣置換三次，反應混合物在110℃下攪拌反應12h。TLC監測反應完全。反應液經矽藻土過濾，減壓濃縮，所得粗品經矽 膠柱層析(用含0-10%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離純化得到化合物201-C 6-(1H-吡唑-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶(500mg)。

LC_MS：(ES+)：m/z 185.07[M+H]+

第二步：化合物201 3-碘-6-(1H-吡唑-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶

此步的合成參照中間體BB5第四步的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 310.97[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.71(d,J=1.4Hz,1H),8.65(d,J=2.4Hz,1H),7.92(dd,J=9.7,2.0Hz,1H),7.85-7.78(m,3H),6.62(dd,J=5.6,3.4Hz,1H).

第三步：化合物202 3-(1H-吲哚-4-基)-6-(1H-吡唑-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶

此步的合成參照實施例2化合物2的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 300.12[M+H]⁺.

下列化合物的合成路線如下，參照實施例39化合物201、化合物202的合成路線，並使用相對應的試劑合成：

實施例40：化合物208、化合物209的合成路線

第一步：化合物208-C(3-(1H-吡咯並[2,3-c]吡啶-4-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

此步的合成參照實施例38化合物161、化合物162第二步的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 364.17[M+H]+.

第二步：化合物208叔丁基(3-(3-碘-1H-吡咯[2,3-c]吡啶-4-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)(甲基)氨基甲酸酯

此步的合成參照中間體BB5第四步的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 490.07[M+H]⁺.

第三步：化合物209(3-(3-碘-1H-吡咯[2,3-c]吡啶-4-基)-N-甲基咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺

此步的合成參照實施例6第一步的合成方法

LC_MS：(ES+)：m/z 390.01[M+H]⁺.

化合物210 3-(3-碘-1H-吲唑-7-基)-N-甲基咪唑[1,2-a]吡啶-6-胺鹽酸鹽的合成路線參照實施例40化合物209的合成，使用相對應的試劑合成：

LC_MS：(ES+)：m/z 390.01[M+H]⁺.

實施例41：化合物211、化合物212、化合物213的合成路線

第一步：化合物211-C烯丙基(3-碘咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

此步的合成參照中間體BB6第五步的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 400.04[M+H]+.

第二步：化合物211烯丙基(3-(3-氨基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

此步的合成參照實施例2化合物2的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 365.19[M+H]⁺.

化合物212(E)-(3-(3-氨基苯基)烯丙基)(3-(3-氨基苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯

此步的合成參照實施例2化合物2的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 456.23[M+H]+.

第三步：化合物213叔丁基烯丙基(3-(3-(四氫-2H-吡喃-4-甲醯胺基)苯基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯

此步的合成參照實施例3化合物47的合成過程

LC_MS：(ES+)：m/z 477.24[M+H]+.

下列化合物的合成路線如下，參照實施例41化合物211、化合物212、化合物213的合成路線，使用相對應的試劑合成：

以下化合物的合成路線如下，參照中間體BB5、BB6和實施例2化合物2的合成路線，並使用相對應的試劑合成：

以下化合物的合成路線如下，參照實施例3化合物47和實施例6化合物63的合成路線，並使用相對應的試劑合成：

以下化合物的合成路線如下，參照實施例2化合物2和實施例6化合物63的合成路線，使用相對應的試劑合成：

化合物299和化合物300的合成路線如下，參照實施例2化合物2和實施例3化合物47的合成路線，使用相對應的試劑合成：

化合物301-304的合成路線如下：

第一步 參照實施例6化合物63的合成過程，使用相對應的試劑合成；第二步 參照實施例31化合物129第二步的合成過程，使用相對應的試劑合成；第三步 參照中間體BB6第五步的合成過程，使用相對應的試劑合成；第四步 參照實施例2化合物2的合成過程，使用相對應的試劑合成。

化合物305-307的合成路線如下：

第一步 參照實施例6化合物63的合成過程，使用相對應的試劑合成；第二步 參照實施例31化合物129第二步的合成過程，使用相對應的試劑合成；第三步 參照中間體BB6第五步的合成過程，使用相對應的試劑合成；第四步 參照實施例2化合物2的合成過程，使用相對應的試劑合成。

化合物308-310的合成路線如下：

第一步 參照實施例6化合物63的合成過程，使用相對應的試劑合成；第二步 參照實施例31化合物129第二步的合成過程，使用相對應的試劑合成；第三步 參照中間體BB6第五步的合成過程，使用相對應的試劑合成；第四步 參照實施例2化合物2的合成過程，使用相對應的試劑合成。

下列化合物的合成參照實施例9化合物83、化合物84、化合物85的合成路線，使用相對應的試劑合成：：

生物活性實施例

生物活性實施例1：SARM1的製備及NAD酶活性測試

測試化合物的準備：

測試化合物的儲備液濃度為200μM或10mM(在DMSO中)，在體外SARM1酶測定和抑制劑篩選時，進一步稀釋到所需的化合物濃度。

SARM1蛋白的表達純化

(1)質粒構建

本例採用PCR擴增dN-SARM1的基因序列，去除SARM1的N端線粒體定位信號肽，將PCR擴增產物構建到pLenti-CMV-puro-dest質粒(addgene catalog #17452)中，具體如下：

在上海生工公司合成BC2T-TEV多肽基因片段、dN-SARM1-F和dN-SARM1-R。其中，BC2T-TEV多肽基因片段為Seq ID No.1所示序列，dN-SARM1-F為Seq ID No.2所示序列，dN-SARM1-R為Seq ID No.3所示序列。

Seq ID No.1：

Seq ID No.2：5’-GGTACCCTGGCGGTGCCTGGGCCAG-3’

Seq ID No.3：5’-GCGGCCGCCTAGGTTGGACCCATGGGTGCAGCACCC-3’

採用HindIII/KpnI酶切位點將合成的BC2T-TEV多肽基因片段連接到pENTR載體上pENTR1A-GFP-N2(addgene：catalog #19364)。用引物dN-SARM1-F和dN-SARM1-R將dN-SARM1基因片段擴增出來，通過KpnI和NotI酶切位點將擴增獲得的dN-SARM1基因片段構建到帶有BC2T-TEV的pENTR載體上。本例的所有核酸內切酶購買於thermo。

PCR擴增獲得的dN-SARM1基因片段為Seq ID No.4所示序列。

Seq ID No.4：

PCR擴增反應體系為：5×PrimeSTAR Buffer(Mg²⁺ plus)10μL、dNTP Mixture(2.5mM each)4μL、加入終濃度0.2μmol/L的dN-SARM1-F、加入終濃度0.2μmol/L的dN-SARM1-R、DNA範本100ng、PrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5U/μL)0.5μL，最後補充滅菌ddH₂O至50μL。全長的SARM1由維真生物公司全合成到pUC57質粒中，以pUC57-SARM1作為DNA模版進行PCR。

PCR擴增產物採用瓊脂糖凝膠電泳，然後用Omega膠回收試劑盒D2500-02回收純化，切膠回收具體步驟參考試劑盒說明書。回收純化的PCR擴增產物用於構建到帶有BC2T-TEV的pENTR載體上。

重組質粒的構建體系步驟如下：

酶切反應體系：PCR擴增回收產物或質粒800ng、核酸內切酶(Fastdigest)各1μL、緩衝液1μL，補充滅菌水至體積10μL。酶切反應條件為37℃恒溫30分鐘。

質粒連接：酶切反應結束後，將酶切的PCR擴增回收產物300ng、酶切的質粒50ng，與T4 DNA連接酶1μL、T4 DNA連接酶緩衝液1μL混合均勻，並補充滅菌水至體積20μL。連接條件為16℃恒溫過夜。

連接產物採用瓊脂糖凝膠電泳，然後用Omega膠回收試劑盒D2500-02回收純化，回收純化產物即本例的重組質粒，標記為pENTR1A-BC2T-dN-SARM1。

pENTR1A-BC2T-dN-SARM1質粒構建完成後，通過LR反應將dN-SARM1重組至pLenti-CMV-puro-dest。

重組反應體系：150ng的pENTR1A-BC2T-dN-SARM1、50ng的pLenti-CMV-puro-dest、1μL的5×LR Clonase^TM reaction buffer，補充滅菌水至總體積5μL。

(2)轉染

本例通過脂質體lipofectamine 2000(Life Technologies公司)將構建的pLenti-CMV-puro-dest和病毒包裝質粒psPAX2,pMD2.G(addgene psPAX2：#12260,pMD2.G：#12259)共同轉染到HEK293T細胞(ATCC)中，製備帶有dN-SARM1閱讀框的病毒。具體如下：

在3.5cm皿中鋪1×10⁶個細胞，第二天轉染。

質粒混合物：1.7μg的pLenti-dN-SARM1、1.7μg的psPAX2、0.6μg的pMD2.G、8μL lipofectamine 2000轉染試劑，根據說明書進行轉染，8小時後換液，收集48小時的病毒。

(3)細胞篩選

採用dN-SARM1病毒感染“(2)轉染”步驟獲得的HEK293T細胞，通過加入嘌呤黴素篩選獲得穩定表達dN-SARM1蛋白的細胞。具體如下：

病毒：80μL/3.5cm感染2×10⁵，感染48小時後，加2μg/mL的嘌呤黴素進行篩選，篩選48小時後，不感染病毒的細胞已完全死亡。感染病毒的細胞大部分存活，再次加入2μg/mL的嘌呤黴素二次篩選48小時。

(4)蛋白質提取

培養並收集“(3)細胞篩選”步驟獲得的穩定表達dN-SARM1蛋白的細胞，通過洋地黃皂甙裂解的方式獲得細胞質中表達的dN-SARM1蛋白，用於體外活性測定實驗。具體如下：

細胞培養用DMEM培養於10cm皿中，用trypsin-EDTA將細胞消化下來，然後1000rpm離心5分鐘，加入PBS洗一次，然後用含有100μM毛地黃皂苷的PBS將細胞重懸，0.6mL PBS/10cm細胞，裂解5分鐘。取細胞加入台盼藍顯微鏡下觀察，90%以上的細胞已經被裂解。將5000rpm離心10分鐘，收集dN-SARM1蛋白的上清。

生物活性實施例2：抑制SARM1酶活性的體外生物化學測試(%抑制率)

採用通過上述生物活性實施例1中“SARM1蛋白的表達純化”“(4)蛋白質提取”獲得的dN-SARM1蛋白，對化合物進行PC6螢光法檢測[中國專利202010528147.3]。

反應條件：

首先將0.05μg/ml dN-SARM1和20μM的化合物在50mM Tris-HCl(pH 7.5)溶液中孵育10分鐘，然後50μM NAD、50μM PC6作為底物和50μM NMN作為啟動劑加入與藥物孵育後的dN-SARM1蛋白中，常溫下反應30分鐘。其中，各組分的濃度為反應體系中的終濃度。

在反應過程中，通過酶標儀檢測PC6螢光波譜動力學，其中檢測激發波長和發射波長分別為390nm和520nm。最終採用反應速率表示蛋白的活性，反應速率越高表明蛋白活性越強，化合物的抑制效率越低。

下表1中提供了一些化合物在20μM對SARM1酶活性的抑制率區間：A>90%；B：50-89%；C：25-49%；

生物活性實施例3：抑制SARM1酶活性的體外生物化學測試(IC ₅₀ )

首先將200μM的化合物加入到含有0.05μg/ml dN-SARM1的50mM Tris-HCl(pH 7.5)溶液中，然後取一半加入等體積含有0.05μg/ml dN-SARM1的50mM Tris-HCl(pH 7.5)溶液混合，以此類推將藥物稀釋6次，終濃度分別為200、100、50、25、12.5、6.25、3.125μM，或200、50、12.5、3.125、0.78、0.195、0.049μM，不加入抑制劑的為對照組，在室溫孵育10分鐘。

然後50μM NAD、50μM PC6作為底物和50μM NMN作為啟動劑加入與抑制劑的孵育後的dN-SARM1蛋白中，常溫下反應30分鐘。其中，各組分的濃度為反應體系中的終濃度。

在反應過程中，通過酶標儀檢測PC6螢光波譜動力學，其中檢測激發波長和發射波長分別為390nm和520nm。最終採用反應速率表示蛋白的活性並計算半數抑制濃度，反應速率越高表明蛋白活性越強，化合物的抑制效率越低。

化合物抑制SARM1酶活性的劑量曲線採用上述方法。

在下表2中提供了這些化合物在測定中的IC₅₀區間：抑制SARM1酶活性的IC₅₀區間：A<1.0μM；B：1-10μM；C：10-25μM

生物活性實施例4：在誘導型過表達SARM1的細胞系中檢測藥物的抑制活性

(1)iSARM1細胞系製備

本例採用PCR擴增SARM1的基因序列，構建到pInducer20-neo質粒中。利用脂質體包裝pInducer20-SARM1病毒，感染HEK293，獲得誘導型的SARM1過表達的細胞系，標記為iSARM1(HEK293)。具體製備如下：

本例採用Seq ID No.5和Seq ID No.6所示序列的引物，進行PCR擴增SARM1基因序列，PCR擴增產物回收、酶切、重組質粒構建、轉染和細胞篩選都與“一、SARM1蛋白的表達純化”中的dN-SARM1一致，唯一區別的是，在進行“(3)細胞篩選”時，採用2mg/mL新黴素替換“2μg/mL嘌呤黴素”，其餘都相同，在此不累述。

Seq ID No.5：5’-TCTAGAGCCACCATGGTCCTGACGCTGCTTC-3’

Seq ID No.6：5’-GAATTCTTAGGTTGGACCCATGGGTG-3’

(2)檢測抑制劑對細胞系中SARM1蛋白的活性抑制

首先用0.05mg/ml多聚賴氨酸處理96孔培養皿5分鐘，用PBS清洗一次。將3×104的iSARM1(HEK293)鋪板到96孔板中，在37℃和5%的培養箱中培養過夜。第二天，加入終濃度50μM的抑制劑到細胞中，在培養箱中孵育1.5小時；然後，加入終濃度100μM的啟動劑CZ-48，在共同孵育16小時，同時設置不加CZ-48或不加藥物的對照組。最後檢測細胞內cADPR水準來表示SARM1的活性，計算出50μM抑制劑在細胞中對SARM1的抑制率。

cADPR測定方法具體如下：首先用PBS將細胞清洗一次，加入150μl預冷的0.6M高氯酸(PCA)將細胞快速裂解並沉澱蛋白。將PCA上清轉移至1.5ml的離心管中，培養基中的蛋白用100μl 1M NaOH重新溶解。上清加入0.5ml有機試劑混合液(三辛胺：氯仿=1：3)，將PCA從水中萃取出來。充分震盪後，12000rpm離心10分鐘，溶液分為3層：上層水相，包含目的小分子；下層有機相，PCA溶於其中；而上下兩層之間為薄薄的一層蛋白層，取上層轉移至新的離心管中。按1：100的比例向溶液中加1M Tris-Mg(1M Tris(pH 8.0)：1M MgCl2=9：1)，按1：250的比例加入NADase，在37℃處理過夜，去除混合液中的NAD+。處理完成後，用Millipore的10K 96孔濾膜板過濾除去NADase。

通過Cycling分析法測定溶液中cADPR的含量，具體操作如下，取20μl待測樣品或cADPR標準品加入96孔不透明白板中。製備反應液：9.6ml PBS(pH 7.4)，200μl ethanol，150μl 1mg/ml AD，10μl 10mM FMN，5μl 18mg/ml Diaphorase，10μl 10mM Resazurin，100μl 1M Nam。分出一半反應液加入0.2μg/ml cyclase，不加入cyclase的反應液為對照實驗。每個樣品分為兩組，每組3個 重複，分別加入含有或不含有cyclase的反應液開始反應，記錄30分鐘內的反應動力學曲線(Ex：Em=544/599)。計算反應平均斜率，並且通過cADPR標準品換算得到準確的cADPR含量。繪製細胞內cADPR含量及對應抑制劑濃度的曲線，計算抑制劑的半數抑制濃度。

使用上述方法，在誘導型過表達SARM1的細胞系中的藥物抑制活性(EC50)見下表3：細胞活性EC50區間：A<1.0μM；B：1-10μM；C：10-25μM

Claims (12)

1. 式I化合物：

   

   或者其可藥用鹽或立體異構體，其中，A代表CH或N；E代表CH或N；R₁獨立地選自氫、鹵素、CF₃、CN、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、氨基、CF₃C(O)-NH-、CF₃C(O)-N(CH₃)-、C₁-C₆烷基氨基、C₃-C₆環烷基氨基、C₆-C₁₄芳基、C₅-C₁₄雜芳基、C₆-C₁₄芳基氨基、C₆-C₁₄雜芳基氨基、-OH、C₆-C₁₄芳基氧基、-CONH₂、-SO₂NH₂、C₁-C₆烷基-C(O)NR₅-、C₃-C₆環烷基-C(O)NR₅-和C₃-C₆雜環烷基-C(O)NR₅-、C₁-C₆烷基-OC(O)NR₅-、C₃-C₆環烷基-OC(O)NR₅-、C₃-C₆雜環烷基-OC(O)NR₅-、C₁-C₆烷基-OC(O)NR₅-(C₁-C₄烷基)-、C₁-C₆烷基-C(O)NR₅-(C₁-C₄烷基)-、C₃-C₆環烷基-OC(O)NR₅-(C₁-C₄烷基)-、C₃-C₆環烷基-C(O)NR₅-(C₁-C₄烷基)-、(C₆-C₁₄芳基)-(C₁-C₆烷基)-CO-N(R₅)-、(C₆-C₁₄芳基)-(C₃-C₆烷基)-N(R₅)-、(C₆-C₁₄芳基)-(C₃-C₆烯基)-N(R₅)-；上述C₁-C₆烷基中的1個碳原子可以被1個選自N、O和S原子的雜原子代 替；優選地，R₁獨立地選自C₁-C₆烷基氨基、C₃-C₆雜環烷基氨基、C₁-C₆烷基醯基氨基、1-嗎啉基、C₁-C₆烷基-OC(O)NR₅-；X代表環狀結構，選自C₃-C₆環烷基、C₃-C₆環烯基、C₃-C₆雜環烷基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基，或者X缺失；優選地，X選自苯基、吡啶基、甲氧基取代的吡啶基、噻唑基、環己基、環己烯基，其中所述苯基可以被以下取代基取代：-SO₂-NH₂、-NH-COCH₃、-NH₂、-CO-NH₂、-OCH₃、鹵素、C₁-C₄烷基、-SO₂-N(BoC)CH₃和C₁-C₄烷基-NH-SO₂-；R₂獨立地選自氫、鹵素、-NH₂、-N(R₅)-CO-R、-CO-N(R₅)-R、-N(R₅)-SO₂-R、-SO₂-N(R₅)-R、-COOR、-COR、-(C₁-C₄烷基)-OR、-(C₁-C₄烷基)-N(CH₃)₂、-NH(C₁-C₄烷基)-R、-N(R₅)-R、-NHCO-(C₃-C₆環烷基)-(C₃-C₆雜環烷基)、-OR、-O-(C₁-C₄烷基)-R和R；R選自C₁-C₄烷氧基、C₁-C₁₂烷基、-CONH₂、-SO₂-NH₂、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、-(C₁-C₁₂烷基)-(C₆-C₁₄)芳基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基，其中所述C₁-C₁₂烷基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基任選地被1、2或3個鹵素取代，並且所述C₁-C₁₂烷基中的1至4個-CH₂-單元任選地被O原子、S原子、-CO-或-NH-所替代；R₅選自H、C₁-C₄烷基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、C₁-C₄烷氧基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基；R₃獨立地選自氫、C₁-C₄烷基和C₁-C₄烷氧基羰基；其中上述C₃-C₆雜環烷基和C₅-C₁₄雜芳基中含有1或2個選自N、O和S原子的雜原子； 所述R₁和R₂可以通過碳-碳鍵或醚鍵連接成14至16元環，所述環中含有1-4個選自N、O和S的雜原子，優選地，所述環中含有3-4個N原子和1-2個O或S原子；m、n為選自1、2和3的正整數。
2. 如請求項1所述的式I化合物或者其可藥用鹽或立體異構體，其中式I化合物具有以下式II結構：

   

   其中E、R₁、R₂和X具有如請求項1中所述的定義。
3. 如請求項1的式I化合物或者其可藥用鹽或立體異構體，其中式I化合物具有以下式III結構：

   

   其中E、R₁和R₂具有如請求項1中所述的定義；Y₁和Y₁’彼此獨立地為CH或N。
4. 如請求項1或3的式I化合物或者其可藥用鹽或立體異構體，其中式I化合物具有以下式IV結構：

   

   其中E和R₂具有如請求項1中所述的定義；Y₁和Y₁’彼此獨立地為CH或N；Y₂選自-O-、-NH-、-NR₅-、-NR₅-(C₁-C₄烷基)-和-NR₅-(C₃-C₆環烷基)-，或者Y₂不存在；R₁’選自R、-C(=O)-R、-SO₂-R、-C(=O)-OR和-SO₂NHR；其中R₅和R具有如請求項1中所述的定義。
5. 如請求項4的式I化合物或者其可藥用鹽或立體異構體，其中式I化合物具有以下式V結構：

   

   其中，E、R₁’和Y₂具有如請求項4中所述的定義；Y₃選自-N(R₅)CO-、-CO-N(R₅)-、-N(R₅)-SO₂-、-SO₂-N(R₅)-、-CO₂-、-CO-、-NH-(C₁-C₄烷基)-、-N(R₅)-、-O-(C₁-C₄烷基)-和-O-，或者Y₃不存在； R₄選自C₁-C₁₂烷基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基，其中所述C₁-C₁₂烷基、C₃-C₆環烷基、C₃-C₆雜環烷基、C₆-C₁₄芳基和C₅-C₁₄雜芳基任選地被1、2或3個鹵素取代；所述C₃-C₆雜環烷基和C₅-C₁₄雜芳基中含有1或2個選自N、O和S原子的雜原子；並且所述C₁-C₁₂烷基中的1至4個-CH₂-單元任選地被O原子、S原子、-CO-或-NH-所替代。
6. 式VI化合物，或者其可藥用鹽或立體異構體：

   

   其中，E、R₁、R₂、Y₁、Y₁’、Y₂、Y₃和R₄具有如請求項5中所述的定義；L為C₂-C₁₂亞烷基，其中所述C₂-C₁₂亞烷基中的1、2、3或4個-CH₂-單元任選地被1、2、3或4個O原子、N原子、-CO-、-CONH-或-NHCO-所替代；Q為E3連接酶配體，優選為VHL配體

   

   或

   

   ； 或者Q為選自如下的結構單元：

   

   其中變數A、E、X、R₁、R₂具有請求項1中所述的定義；或者Q是

   

   。
7. 式VII化合物，或者其可藥用鹽或立體異構體：

   

   其中，E、R₁、R₂、R₁’、Y₁、Y₁’和Y₂具有如請求項5中所述的定義；Y₃選自-N(R₅)CO-、-CO-N(R₅)-、-N(R₅)-SO₂-、-SO₂-N(R₅)-、-CO₂-、-CO-、-NH-(C₁-C₄烷基)-、-N(R₅)-、-O-(C₁-C₄烷基)-、和-O-，或者Y₃不存在；L為C₂-C₁₂亞烷基，其中所述C₂-C₁₂亞烷基中的1、2、3或4個-CH₂-單元任選地被1、2、3或4個O原子、N原子、-CO-、-CONH-或-NHCO-所替代； Q為E3連接酶配體，優選為VHL配體

   

   或

   

   ；或者Q為選自如下的結構單元：

   

   其中變數A、E、X、R₁、R₂具有請求項1中所述的定義；或者Q是

   

   。
8. 如請求項1-7中任一項所述的化合物或者其可藥用鹽或立體異構體，其中所述化合物選自：

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   
9. 一種如請求項1至8中任一項所述的化合物或者其可藥用鹽或立體異構體在製備用於治療或預防神經退行性疾病或神經性疾病或病症中的應用。
10. 一種如請求項1至8中任一項所述的化合物或者其可藥用鹽或立體異構體在製備SARM1酶活性抑制劑中的應用。
11. 一種如請求項1至8中任一項所述的化合物或者其可藥用鹽或立體異構體在製備用於治療或預防軸突變性相關疾病或病症中的應用。
12. 如請求項9或10或11的應用，其中所述神經退行性疾病或神經性疾病或病症或軸突變性相關疾病或病症選自阿爾 茲海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、多發性硬化症(multiple sclerosis)、肌萎縮性硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、外周神經病變(peripheral neuropathy)。