WO2023007656A1 - 藻食性魚介類のための餌料の決定方法、藻食性魚介類への給餌方法、および餌料の製造方法 - Google Patents

藻食性魚介類のための餌料の決定方法、藻食性魚介類への給餌方法、および餌料の製造方法 Download PDF

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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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    • A01K61/10—Culture of aquatic animals of fish
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
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    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish

Definitions

  • the present invention relates to a method for determining a feed for algaebivorous fish and shellfish, a method for feeding algaebivorous fish and shellfish, and a method for producing the feed.
  • Non-Patent Document 1 is a document related to feeding of juvenile pearl oysters, and reports the feeding rate and digestibility of juvenile pearl oysters for six types of microalgae, and the amount of plant pigment contained in the digestive caecum.
  • Non-Patent Document 2 is a document relating to feeding of cured pearl oysters, and specifically reports the weight gain rate, protein content, and highly unsaturated fatty acid content of cured pearl oysters for two types of microalgae.
  • the purpose of the present invention is to provide a technique for increasing the feeding efficiency of algaebivorous fish and shellfish.
  • a method for determining food is provided.
  • a method for determining food is provided.
  • a method of feeding algaebivorous fish and shellfish comprising feeding the algaebivorous fish and shellfish with the feed determined by the method according to the first or second aspect.
  • a method for producing the feed determined by the method according to the first or second aspect comprising: culturing the algal cells; obtaining as the feed from the cultured algal cells that are at the same stage of growth or division that the algaebivorous fish and shellfish most preferred to feed on.
  • a technique for increasing the feeding efficiency of algaebivorous fish and shellfish is provided.
  • FIG. 1 is a schematic diagram showing growth and division of eukaryotic algae cells.
  • FIG. 2 is a schematic diagram showing an example of a food determination method according to the first embodiment.
  • FIG. 3 is a schematic diagram showing another example of the food determination method according to the first embodiment.
  • FIG. 4 is a schematic diagram showing an example of a food determination method according to the second embodiment.
  • the "method for determining food for algaebivorous fish and shellfish" according to the first embodiment of the present invention comprises: feeding algaevorous fish and shellfish with each of a plurality of samples having different stages of algal cell growth or division; selecting the algae cells in the same stage of growth or division as those most favored to be fed by the algaebivorous fishes and shellfishes, as a food to be given to the algaebivorous fishes and shellfishes.
  • algaeous fish and shellfish is a generic term for algaeous aquatic animals such as algaeous fish and algaeous shellfish, and refers to aquatic animals such as fish and shellfish that prey on algae.
  • Algaevorous fish are, for example, juvenile fish
  • algaevorous shellfish are, for example, pearl oysters.
  • microalgae refers to microalgae.
  • Microalgae are, for example, photosynthetic eukaryotes, single-celled organisms or colonies thereof.
  • Microalgae are, for example, unicellular green algae such as Chlamydomonas reinhardtti and Botryococcus, unicellular red algae such as Cyanidioschyzon merolae, diatoms such as Phaeodactylum, or their It is a colony.
  • Microalgae may not be eukaryotic, but may be photosynthetic prokaryotes, eg, bacteria such as cyanobacteria.
  • sample preparation process In the method according to the first embodiment, first, "a plurality of samples with different stages of algal cell growth or division” are prepared. In this method, the algal cells contained in one sample are in one particular stage of growth or division. In this method, in order to compare which of the samples are most favorably fed by algaebivorous fish and shellfish, the samples differ except in the stages of algal cell growth or division. are identical. That is, the multiple samples contain the same strain of algal cells, differing only in the stage of growth or division of the algal cells.
  • a plurality of samples refers to two or more types of samples, and the upper limit is not particularly limited. The plurality of samples can be, for example, 2-8 samples.
  • Algae multiply by repeating growth and division.
  • the process from the growth of a single cell immediately after division to the division into two cells is called the cell cycle.
  • the cell cycle includes, for example, G1 phase (DNA synthesis preparatory phase), S phase (DNA synthesis preparatory phase), G2 phase (division preparatory phase), M phase (division phase) prophase, middle M phase, late M phase, final M phase , G0 phase (resting phase).
  • FIG. 1 schematically shows the growth and division of eukaryotic algae cells.
  • an algal cell 1 includes a cell wall 10 and cytoplasm surrounded by it.
  • the cytoplasm contains a nucleus 11 and a chloroplast 12 .
  • DNA synthesis is primed and cells grow.
  • S phase chromosomal DNA is replicated.
  • the algal cell enters the G2 phase and prepares for division.
  • chromosome condensation occurs, in the middle M phase, the nuclear membrane disappears and the chromosomes are aligned on the equatorial plane, and in the late M phase, the chromatids are pulled by the spindle and separated.
  • the chromatids decondense, the nuclear envelope reforms, and the cytoplasm divides. The period during which no cell growth or division occurs is called the G0 phase.
  • a plurality of samples with different cell cycles of algal cells can be prepared as "a plurality of samples with different stages of algal cell growth or division".
  • Sample A1 G1 phase algal cells
  • Sample A2 S phase algal cells
  • Sample A3 G2 phase algal cells
  • Sample A4 Early M phase algal cells
  • Sample A5 Middle M phase algal cells
  • Sample A6 Late M phase algal cells
  • Sample A7 Algal cells at the end of M phase
  • Sample A8 Algal cells at G0 phase
  • samples can be prepared by culturing algal cells with the same cell cycle.
  • a technique for culturing algae cells in a uniform cell cycle is known as a synchronized culture method. For example, if algal cells are cultured while the culture environment is alternately switched between a light environment and a dark environment, the cell cycles of the algal cells can be aligned. Algal cells perform photosynthesis in a light environment, and when the light environment is switched to the dark environment, the photosynthetic activity decreases and the cell cycle progresses from the G1 phase to the S phase. You can adjust your cycle.
  • algal cells can be cultured in a medium containing a cytostatic agent or a cytostatic agent to arrest the cell cycle at a particular stage, and then cultured in the absence of the inhibitor, resulting in cell cycle can be aligned.
  • DNA replication inhibitors, microtubule formation inhibitors, and the like can be used as such inhibitors.
  • each of a plurality of prepared samples (that is, a plurality of samples at different stages of algal cell growth or division) is fed to algaevorous fish and shellfish.
  • the sample can be fed to algaevorous fish and shellfish such that, for example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 6 algal cells are administered per mL of breeding water in which the fish and shellfish are reared.
  • Administration of the sample may be a single administration or multiple administrations. For multiple administrations, sample administration can occur every 2-12 hours. In the case of multiple administrations, the number of administrations is, for example, 2-28.
  • test conditions such as dosing conditions can be set to be the same for all samples in order to compare which of the multiple samples is most favorably eaten by algae-eating fish and shellfish.
  • the test conditions include the concentration of the sample to be administered (ie, the number of algae cells), the breeding environment of algae-eating fish and shellfish before and during administration (eg, feeding conditions before administration), and the like. For example, for all samples, it is desirable to fasten the algaeous fish prior to feeding the sample to the algaeous fish. Alternatively, for all samples, it is desirable to let the algaeous fish be satiety prior to feeding the sample to the algaeous fish.
  • algae cells having the same stage of growth or division as those most favored by the algaebivorous fish are selected as food to be given to the algaebivorous fish.
  • algae cells are selected as at least part of the feed given to algae-eating fish and shellfish. That is, the algae cells selected here may be used as part of the feed given to the algaeous fish and shellfishes, or may be used as the entire feed given to the algaevorous fish and shellfishes.
  • the selection of food can be made by confirming which of the multiple samples was most favorably fed by algaebivorous fish and shellfish.
  • the selection of the bait is carried out by measuring the number of algae cells fed by the algaebivorous fish and shellfish for each algaebivorous fish and shellfish to which the sample was administered, and based on the measurement results, at which stage of growth or division This can be done by determining which algal cells were most favorably fed by algaevorous fish and shellfish.
  • Measurement of the number of algal cells fed by the algaeous fish and shellfish may be performed by removing the fed algal cells from the algaevorous fish and shellfish and directly measuring the number of algal cells, or by measuring the number of algal cells directly. This may be done indirectly by measuring the number of algal cells remaining in the rearing water.
  • the number of algal cells can be measured using, for example, a hemocytometer, flow cytometry, and the like.
  • the intake of algae-derived biological substances e.g., DHA and EPA
  • the intake of biogenic substances derived from algae by algae-eating fishes and shellfishes for example, lipids contained in algae-eating fishes and shellfishes are analyzed by GC-MS/MS (gas chromatography tandem mass spectrometry).
  • Food selection can be made, for example, 1 to 5 hours after sample administration. It is conceivable that the algal cells administered as a sample may progress through stages of growth or division between the administration of the sample and the selection of the food. Therefore, for the samples most favored by algae-eating fish and shellfish, at the time of food selection, it is determined whether the samples remaining in the breeding water (i.e., algal cells) are undergoing a stage of growth or division. is preferred. In this confirmation work, if the sample has not progressed to the stage of growth or division, algal cells having the same stage of growth or division as the sample most favored by the algaebivorous fish and shellfish can be selected as the bait. .
  • algal cells having a period from the growth or division stage of the sample at the time of administration to the advanced stage can be selected as the bait.
  • algaebivorous fish and shellfish are most preferred if the period between sample administration and diet selection is shorter, so that no growth or division steps occur between sample administration and diet selection. It can be narrowed down to which stage of growth or division the sample fed with.
  • FIG. 2 schematically shows an example of a food determination method according to the first embodiment.
  • algae-eating shellfish 2 are reared in breeding water 4 housed in a culture container 3 .
  • the eight types of samples described above were administered to the algaevorous shellfish 2.
  • FIG. 1b and G2-phase algal cells 1c are shown representatively.
  • the left column shows the test in which the algal cell 1a in the G1 phase was administered as the sample
  • the test in which the algal cell 1b in the S phase was administered as the sample is shown in the middle column
  • the algal cell 1c in the G2 phase was administered as the sample.
  • the tests performed are shown in the right column.
  • the upper diagram of each row shows the state immediately after the sample was administered to the algaevorous shellfish 2
  • the lower diagram of each row shows the state after the sample was administered to the algaevorous shellfish 2 for a predetermined time. The state after the passage is shown.
  • each administration of the sample is performed so that, for example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 6 algal cells are administered per 1 mL of breeding water for shellfish. It is preferable to administer the sample several times after making the algaeous shellfish fast. Multiple administrations of the sample can be used to more accurately determine the palatability of algaevorous shellfish.
  • the algae cells 1b in the S phase can be selected as food to be given to the algaebivorous shellfishes.
  • FIG. 3 schematically shows another example of the food determination method according to the first embodiment.
  • algae-eating shellfish 2 are reared in breeding water 4 housed in a culture container 3 .
  • the eight types of samples (Samples A1 to A8) described above were administered to the algaevorous shellfish 2.
  • FIG. 1b and G2-phase algal cells 1c) are shown representatively.
  • the left column shows the test in which the algal cell 1a in the G1 phase was administered as the sample
  • the test in which the algal cell 1b in the S phase was administered as the sample is shown in the middle column
  • the algal cell 1c in the G2 phase was administered as the sample.
  • the tests performed are shown in the right column.
  • the upper row of each row shows the state after administering the artificial food 5 to make the algaebivorous shellfish 2 full before administering the sample to the algaevorous shellfish 2.
  • the figure in the middle of each row shows the state immediately after administration of the sample to the algaebivorous shellfish 2
  • the figure in the lower row of each row shows the state after a predetermined time has passed since the sample was administered to the algaevorous shellfish 2. .
  • the algaevorous shellfishes 2 are administered artificial food 5 to make them full, and then the sample is administered once. Measure the number of algal cells that have been collected.
  • a satiety state can be achieved by providing the artificial food 5 in an amount such that the artificial food 5 remains in the rearing water for a period of time after feeding.
  • the sample is administered such that, for example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 6 algal cells are administered per 1 mL of breeding water for shellfish.
  • the algaeous shellfish 2 most prefers to feed on the algae cells 1b in the S phase, so the algae cells 1b in the S phase can be selected as food to be given to the algaebivorous shellfishes.
  • the "method for determining food for algaebivorous fish and shellfish" according to the second embodiment of the present invention comprises: providing algaevorous fish and shellfish with one or more samples each containing algal cells at different stages of growth or division; selecting the algae cells in the same stage of growth or division as those most favored to be fed by the algaebivorous fishes and shellfishes, as a food to be given to the algaebivorous fishes and shellfishes.
  • sample preparation process In the method according to the first embodiment, "a plurality of samples with different stages of growth or division of algae cells” were prepared as samples to be administered to algaevorous fish and shellfish, whereas in the method according to the second embodiment, prepare "one or more samples each containing algal cells at different stages of growth or division” as samples to be administered to algaevorous fish and shellfish. That is, in the method according to the first embodiment, algal cells contained in one sample are in a specific stage of growth or division, whereas in the method according to the second embodiment, one sample contains a combination of algal cells at different stages of growth or division.
  • a sample may be prepared so that algal cells with different growth or division are contained in the same number of cells in one sample, or algal cells with different growth or division are Samples may be prepared to contain different numbers of cells in one sample. In either case, it is possible to investigate which stage of algal cells among algal cells in different stages of growth or division are most favorably fed by algaevorous fish and shellfish.
  • a plurality of samples each containing algal cells at different stages of growth or division are prepared as samples to be administered to algaevorous fish and shellfish.
  • the multiple samples are identical except for the different stages of algal cell growth or division. That is, the multiple samples contain the same strain of algal cells, differing only in the stage of growth or division of the algal cells.
  • the term "different” here means that the stages of growth or division are at least partially different.
  • a plurality of samples refers to two or more types of samples, and the upper limit is not particularly limited.
  • the plurality of samples can be, for example, 2-8 samples.
  • Sample B1 A mixture of G1 phase algal cells and S phase algal cells
  • Sample B2 A mixture of G1 phase algal cells and G2 phase algal cells
  • Sample B3 G1 phase algal cells and early M phase algal cells
  • Sample B4 A mixture of algal cells in G1 phase and algal cells in mid-M phase
  • Sample B5 A mixture of algal cells in G1 phase and algal cells in late M phase
  • Sample B6 Algal cells in G1 phase and late M phase
  • Sample B7 A mixture of G1 phase algal cells and G0 phase algal cells
  • Sample B8 A mixture of S phase algal cells and G2 phase algal cells
  • Sample B9 S phase algal cells and M Mixture with algal cells in early phase
  • Sample B10 mixture of algal cells in S phase and algal cells in mid-M phase
  • Sample B11 A mixture of algal cells in S phase and algal cells in mid-M phase
  • All of the samples B1 to B28 may be used, or some of the samples B1 to B28 may be used as "a plurality of samples each containing algal cells at different stages of growth or division". .
  • seven types of samples B1 to B7 may be used as "a plurality of samples each containing algal cells at different stages of growth or division".
  • a combined sample of algal cells in 3 of the 8 cell cycle phases may be used, A combined sample of algal cells in 4 of the 8 cell cycle phases may be used; A combined sample of algal cells in 5 of the 8 cell cycle phases may be used, A combined sample of algal cells in 6 of the 8 cell cycle phases may be used; A combined sample of algal cells from 7 of the 8 cell cycle stages may be used.
  • Example administration step Administration of the sample to algae-eating fish and shellfish can be performed by the same procedure as the method according to the first embodiment.
  • test conditions such as administration conditions be the same. For example, for all samples, it is desirable to fasten the algaeous fish prior to feeding the sample to the algaeous fish. Alternatively, for all samples, it is desirable to let the algaeous fish be satiety prior to feeding the sample to the algaeous fish.
  • the selection of the food consists of removing the algal cells fed by the algaevorous fish and shellfish from the algaevorous fish and shellfish to identify the stage of growth or division of the algal cells.
  • the number of algal cells fed by the algaeous fish and shellfish is measured, and based on the measurement results, which stage of growth or division of the algal cells is most favored by the algaeous fish and shellfish. This can be done by determining whether the Identification of the stage of algal cell growth or division can be performed by microscopic observation.
  • FIG. 4 schematically shows an example of a food determination method according to the second embodiment.
  • algae-eating shellfish 2 are reared in breeding water 4 housed in a culture container 3 .
  • the above-mentioned 28 types of samples were administered to the algaebivorous shellfish 2, but in FIG. 1b, a mixture of G1-phase algal cells 1a and G2-phase algal cells 1c, and a mixture of G1-phase algal cells 1a and early M-phase algal cells 1d). .
  • the left column shows a test in which a mixture of G1-phase algal cells 1a and S-phase algal cells 1b was administered as a sample, and a mixture of G1-phase algal cells 1a and G2-phase algal cells 1c was used as a sample.
  • the middle column shows the test in which the algal cells 1a in the G1 phase and the algal cells 1d in the early M phase were administered as a sample in the right column.
  • the upper diagram of each row shows the state immediately after the sample was administered to the algaevorous shellfish 2
  • the lower diagram of each row shows the state after the sample was administered to the algaevorous shellfish 2 for a predetermined time. The state after the passage is shown.
  • each administration of the sample is performed so that, for example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 6 algal cells are administered per 1 mL of breeding water for shellfish.
  • the algaeous shellfish 2 most prefers to feed on the algae cells 1b in the S phase, so the algae cells 1b in the S phase can be selected as food to be given to the algaebivorous shellfishes.
  • the determined algal cells are By selectively feeding algaeous fish and shellfish, the feeding efficiency and nutritional intake efficiency of algaevorous fish and shellfish can be enhanced. As a result, the growth of algaeous fish and shellfish can be promoted, and as a result, the productivity of algaevorous fish and shellfish can be improved.
  • the algal cells to be specifically fed are captured from the mixture of algal cells different in the stage of growth or division. Therefore, it is possible to more accurately determine which stage of algae cells the algaeous fishes and shellfishes prefer to feed on.
  • algae are fed without distinguishing the stages of algal cell growth or division, and the algae to be fed are algal cells in various stages of growth or division.
  • a mixture When the present inventors administered a combination of algal cells at different stages of growth or division, among the given algae, algae cells that algaebivorous fishes and shellfishes liked to feed were found to be part. In and aquaculture, only part of the algae fed to them functions as food, and it is thought that the feeding efficiency and nutrient intake efficiency of algae-eating fish and shellfish are low.
  • the “method for feeding algaebivorous fish and shellfish” is to feed the food determined by the above-described “method for determining food for algaevorous fish and shellfish” to Including feeding algae-eating fish and shellfish.
  • the "feeding method for algaebivorous fish and shellfish” includes: feeding the algaebivorous fish and shellfish with the food determined by the above-described "method for determining food for algaebivorous fish and shellfish”; culturing the algal cells; obtaining, as the feed, from the cultured algae cells that are in the same stage of growth or division as those most favored by the algaebivorous fish and shellfish.
  • the "method of feeding algaebivorous fish and shellfish” can also be expressed as "method of raising algaebivorous fish and shellfish” or "method of producing algaebivorous fish and shellfish”.
  • the feed can be fed to algaevorous fish and shellfish such that, for example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 6 algal cells are administered per 1 mL of rearing water.
  • Food can be administered, for example, at intervals of 2-12 hours.
  • Algal cells can be cultured by suspension culture in a liquid medium containing sufficient concentrations of nutrients necessary for algal cells to perform photosynthesis, growth, division, and the like.
  • Algae cells may be cultured, for example, in an open culture tank called an open pond or in a closed system called a closed photobioreactor.
  • the feed can be obtained according to the procedure described in the "Sample preparation step" section of the method according to the first embodiment. That is, the food can be obtained by culturing the algae cells during cultivation with the same cell cycle. For example, if algal cells are cultured while the culture environment is alternately switched between a light environment and a dark environment, the cell cycles of the algal cells can be aligned. Algal cells perform photosynthesis in a light environment, and when the light environment is switched to the dark environment, the photosynthetic activity decreases and the cell cycle progresses from the G1 phase to the S phase. You can adjust your cycle.
  • algal cells can be cultured in a medium containing a cytostatic agent or a cytostatic agent to arrest the cell cycle at a particular stage, and then cultured in the absence of the inhibitor, resulting in cell cycle can be aligned.
  • DNA replication inhibitors, microtubule formation inhibitors, and the like can be used as such inhibitors.
  • algal cells whose cell cycle is in the S phase are obtained by alternately culturing a mixture of algal cells in various stages of growth or division (hereinafter also referred to as source cells) between a light environment and a dark environment. can be obtained by culturing after switching to , and recovering the cells after switching the culture environment from the light environment to the dark environment.
  • source cells a mixture of algal cells in various stages of growth or division
  • algal cells whose cell cycle is in S phase are obtained by culturing the source cells in a culture medium containing a DNA replication inhibitor, then culturing in the absence of the DNA replication inhibitor, and then recovering the cells. can be obtained by
  • the “method for manufacturing feed” is a method for manufacturing feed determined by the above-described “method for determining feed for algaebivorous fish and shellfish”, and this method comprises: culturing the algal cells; obtaining from the cultured algal cells at the same stage of growth or division that the algaebivorous fish and shellfish most favorably ingested as the feed.
  • This method can be carried out according to the same procedure as described in "2. Feeding method for algaebivorous fish and shellfish". By this method, it is possible to produce a feed for algae-eating fish and shellfish, which is excellent in feeding efficiency and nutrient intake efficiency.

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Abstract

藻食性魚介類の摂餌効率を高める技術を提供する。藻食性魚介類のための餌料の決定方法は、藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なる複数の試料の各々を藻食性魚介類に与えることと、前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと成長又は分裂の段階が同じ前記藻類細胞を、前記藻食性魚介類へ与える餌料として選択することとを含む。

Description

藻食性魚介類のための餌料の決定方法、藻食性魚介類への給餌方法、および餌料の製造方法
　本発明は、藻食性魚介類のための餌料の決定方法、藻食性魚介類への給餌方法、および餌料の製造方法に関する。
　アコヤガイなどの藻食性魚介類について、摂餌に関する研究が行われている。例えば、非特許文献１は、アコヤガイ稚貝の摂餌に関する文献であり、６種類の微細藻類に対する、アコヤガイ稚貝の摂餌率、消化率、および消化盲嚢に含まれる植物色素量を報告している。非特許文献２は、養生アコヤガイの摂餌に関する文献であり、具体的には、２種類の微細藻類に対する、養生アコヤガイの重量増加率、タンパク質含量、および高度不飽和脂肪酸含量を報告している。
６種の微細藻類におけるアコヤガイ稚貝の摂餌率、消化率および消化盲嚢中色素量の比較、Nippon Suisan Gakkaishi、68（4）、534-537（2002） 養生アコヤガイの成長に対する微細藻類の給餌効果、三重大学大学院生物資源学研究科紀要、44、1-5（2018）
　本発明は、藻食性魚介類の摂餌効率を高める技術を提供することを目的とする。
　本発明の第１側面によると、
　藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なる複数の試料の各々を藻食性魚介類に与えることと、
　前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと成長又は分裂の段階が同じ前記藻類細胞を、前記藻食性魚介類へ与える餌料として選択することと
を含んだ、藻食性魚介類のための餌料の決定方法が提供される。
　本発明の第２側面によると、
　成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ１以上の試料の各々を藻食性魚介類に与えることと、
　前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと成長又は分裂の段階が同じ前記藻類細胞を、前記藻食性魚介類へ与える餌料として選択することと
を含んだ、藻食性魚介類のための餌料の決定方法が提供される。
　本発明の第３側面によると、第１側面または第２側面に係る方法により決定した前記餌料を前記藻食性魚介類に与えることを含んだ、藻食性魚介類への給餌方法が提供される。
　本発明の第４側面によると、第１側面または第２側面に係る方法により決定した前記餌料の製造方法であって、
　前記藻類細胞を培養することと、
　培養した前記藻類細胞から、前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと同じ成長又は分裂の段階にあるものを、前記餌料として取得することと
を含んだ方法が提供される。
　本発明によると、藻食性魚介類の摂餌効率を高める技術が提供される。
図１は、真核藻類細胞の成長および分裂の様子を示す模式図である。 図２は、第１実施形態に係る餌料の決定方法の一例を示す模式図である。 図３は、第１実施形態に係る餌料の決定方法の別の例を示す模式図である。 図４は、第２実施形態に係る餌料の決定方法の一例を示す模式図である。
　以下に、本発明の実施形態について説明する。以下に説明する実施形態は、上記側面の何れかをより具体化したものである。以下に記載する事項は、単独で又は複数を組み合わせて、上記側面の各々に組み入れることができる。
　１．藻食性魚介類のための餌料の決定方法
　１－１．第１実施形態
　本発明の第１実施形態に係る「藻食性魚介類のための餌料の決定方法」は、
　藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なる複数の試料の各々を藻食性魚介類に与えることと、
　前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと成長又は分裂の段階が同じ前記藻類細胞を、前記藻食性魚介類へ与える餌料として選択することと
を含む。
　（用語の説明）
　用語「藻食性魚介類」は、藻食性魚類および藻食性貝類などの藻食性水産動物の総称であり、藻類を捕食する、魚類および貝類などの水産動物を指す。藻食性魚類は、例えば、稚魚であり、藻食性貝類は、例えば、アコヤ貝である。
　用語「藻類」は、微細藻類を指す。微細藻類は、例えば、光合成真核生物であって、単細胞生物又はその群体である。微細藻類は、例えば、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtti）及びボトリオコッカス（Botryococcus）などの単細胞緑藻、シアニディオシゾン（Cyanidioschyzon merolae）などの単細胞紅藻、フェオダクチラム（Phaeodactylum）などの珪藻、又は、それらの群体である。微細藻類は真核生物でなくてもよく、光合成を行う原核生物、例えば、シアノバクテリアなどのバクテリアであってもよい。
　（試料の準備工程）
　第１実施形態に係る方法では、まず、「藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なる複数の試料」を準備する。この方法では、１つの試料に含まれる藻類細胞は、成長又は分裂の段階が特定の１つの段階にある。この方法では、複数の試料のうちのどの試料が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されるかを比較するため、複数の試料は、藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なっていること以外は同一である。すなわち、複数の試料は、同一株の藻類細胞を含み、藻類細胞の成長又は分裂の段階のみが異なっている。複数の試料は、２種類以上の試料を指し、上限は特に制限されない。複数の試料は、例えば２～８種類の試料とすることができる。
　藻類は、成長と分裂を繰り返すことで増殖する。分裂直後の１個の細胞が成長して２個に分裂するまでの過程は、細胞周期と呼ばれる。細胞周期は、例えば、Ｇ１期（ＤＮＡ合成準備期）、Ｓ期（ＤＮＡ合成期）、Ｇ２期（分裂準備期）、Ｍ期（分裂期）前期、Ｍ期中期、Ｍ期後期、Ｍ期終期、Ｇ０期（静止期）の８つの時期に分類される。
　図１は、真核藻類細胞の成長および分裂の様子を模式的に示す。図１において、藻類細胞１は、細胞壁１０と、これに囲まれた細胞質とを含んでいる。細胞質は、核１１と、葉緑体１２とを含んでいる。図１に示されるとおり、Ｇ１期で、ＤＮＡ合成の準備が行われ、細胞が成長する。続いて、Ｓ期で、染色体ＤＮＡが複製される。染色体ＤＮＡの複製が完了すると、藻類細胞はＧ２期に入り、分裂の準備が行われる。その後、Ｍ期前期で、染色体の凝縮が起こり、Ｍ期中期で、核膜が消失し、染色体が赤道面上に並び、Ｍ期後期で、染色分体が紡錘体に引っ張られて分離し、Ｍ期終期で、染色分体が脱凝縮し、核膜が再形成され、細胞質が分裂する。細胞の成長も分裂も起こっていない時期は、Ｇ０期と呼ばれる。
　したがって、「藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なる複数の試料」として、例えば、藻類細胞の細胞周期が異なる複数の試料を準備することができる。具体的には、以下の８種類の試料を準備することができる。
　試料Ａ１：Ｇ１期の藻類細胞
　試料Ａ２：Ｓ期の藻類細胞
　試料Ａ３：Ｇ２期の藻類細胞
　試料Ａ４：Ｍ期前期の藻類細胞
　試料Ａ５：Ｍ期中期の藻類細胞
　試料Ａ６：Ｍ期後期の藻類細胞
　試料Ａ７：Ｍ期終期の藻類細胞
　試料Ａ８：Ｇ０期の藻類細胞
　これらの試料は、培養中の藻類細胞の細胞周期を揃えて培養することにより準備することができる。培養中の藻類細胞の細胞周期を揃えて培養する技術は、同調培養法として知られている。例えば、藻類細胞を、培養環境を明環境と暗環境との間で交互に切り替えて培養すると、藻類細胞の細胞周期を揃えることができる。藻類細胞は、明環境で光合成を行い、明環境から暗環境へ切り替えると、光合成活性が低下するとともにＧ１期からＳ期に移行して細胞周期を進行させるという特性を有しているため、細胞周期を揃えることができる。あるいは、藻類細胞を、細胞分裂阻害剤や細胞増殖阻害剤を含有する培養液中で培養して、細胞周期を特定の段階で停止し、その後、阻害剤の非存在下で培養すると、細胞周期を揃えることができる。かかる阻害剤として、ＤＮＡ複製阻害剤や微小管形成阻害剤などを使用することができる。
　（試料の投与工程）
　第１実施形態に係る方法では、準備された複数の試料（すなわち、藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なる複数の試料）の各々を藻食性魚介類に与える。試料は、魚介類を飼育している飼育水１ｍＬあたり、例えば１×１０４～１×１０６個の藻類細胞が投与されるように、藻食性魚介類に与えることができる。試料の投与は、１回の投与であってもよいし、複数回の投与であってもよい。複数回の投与の場合、試料の投与は、２～１２時間毎に行うことができる。複数回の投与の場合、投与回数は、例えば２～２８回である。
　この方法では、複数の試料のうちのどの試料が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されるかを比較するため、すべての試料について、投与条件などの試験条件を同一の条件とすることが望ましい。試験条件としては、投与される試料の濃度（すなわち、藻類細胞の数）、投与前および投与中の藻食性魚介類の飼育環境（例えば、投与前の給餌状況）などが挙げられる。例えば、すべての試料について、試料を藻食性魚介類に与えるのに先立ち、藻食性魚介類を絶食状態にしておくことが望ましい。あるいは、すべての試料について、試料を藻食性魚介類に与えるのに先立ち、藻食性魚介類を満腹状態にしておくことが望ましい。
　（餌料の選択工程）
　試料を藻食性魚介類に投与した後、藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと成長又は分裂の段階が同じ藻類細胞を、藻食性魚介類へ与える餌料として選択する。ここで、藻類細胞は、藻食性魚介類へ与える餌料の少なくとも一部として選択される。すなわち、ここで選択された藻類細胞が、藻食性魚介類へ与える餌料の一部として使用されてもよいし、藻食性魚介類へ与える餌料の全部として使用されてもよい。
　餌料の選択は、複数の試料のうちのどの試料が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されたかを確認することにより行うことができる。
　好ましくは、餌料の選択は、試料を投与された藻食性魚介類の各々について、藻食性魚介類が摂餌した藻類細胞の数を測定し、測定結果に基づいて、成長又は分裂のどの段階の藻類細胞が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されたかを決定することにより行うことができる。藻食性魚介類が摂餌した藻類細胞の数の測定は、摂餌された藻類細胞を藻食性魚介類から取り出して藻類細胞の数を直接測定することにより行ってもよいし、摂餌されずに飼育水中に残存している藻類細胞の数を測定することにより間接的に行ってもよい。藻類細胞の数は、例えば、血球計算盤やフローサイトメトリーなどを用いて測定することができる。
　あるいは、餌料の選択は、試料を投与された藻食性魚介類の各々について、藻類に由来する生体構成物質（例えばDHAやEPAなど）の藻食性魚介類による摂取量を測定し、測定結果に基づいて、成長又は分裂のどの段階の藻類細胞が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されたかを決定することにより行うことができる。この方法では、まず、藻類に由来する生体構成物質の藻食性魚介類による摂取量を、例えば、藻食性魚介類に含有される脂質をGC-MS/MS（ガスクロマトグラフィータンデム質量分析）により解析することにより測定する。次に、測定された摂取量を、藻食性魚介類に投与された藻類細胞１個が含んでいる生体構成物質の量で割って、藻食性魚介類に摂餌された藻類細胞の数を算出する。これにより、成長又は分裂のどの段階の藻類細胞が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されたかを決定することができる。
　餌料の選択は、試料の投与から、例えば１～５時間経過後に行うことができる。試料として投与された藻類細胞が、試料の投与から餌料の選択までの間に、成長又は分裂の段階が進行する可能性が考えられる。したがって、藻食性魚介類が最も好んで摂餌した試料について、餌料の選択の時に、飼育水中に残っている試料（すなわち藻類細胞）の成長又は分裂の段階が進行しているか否かを確認することが好ましい。この確認作業において、試料の成長又は分裂の段階が進行していなかった場合、藻食性魚介類が最も好んで摂餌した試料と成長又は分裂の段階が同じ藻類細胞を餌料として選択することができる。あるいは、確認作業において、成長又は分裂の段階が進行していた場合、投与時の試料の成長又は分裂の段階から進行段階までの期間を有する藻類細胞を餌料として選択することができる。後者の場合、試料の投与から餌料の選択までの期間をより短くして、試料の投与から餌料の選択までの間に成長又は分裂の段階が進行しないようにすると、藻食性魚介類が最も好んで摂餌した試料が、成長又は分裂のどの段階にあるかを絞り込むことができる。
　（具体例１）
　図２は、第１実施形態に係る餌料の決定方法の一例を模式的に示す。図２において、藻食性貝類２は、培養容器３に収容された飼育水４中で飼育されている。この例では、上述の８種類の試料（試料Ａ１～Ａ８）を藻食性貝類２に投与したが、図２には、試料Ａ１～Ａ３（すなわち、Ｇ１期の藻類細胞１ａ、Ｓ期の藻類細胞１ｂ、およびＧ２期の藻類細胞１ｃ）を投与した場合を代表的に示す。
　図２において、Ｇ１期の藻類細胞１ａを試料として投与した試験を左列に示し、Ｓ期の藻類細胞１ｂを試料として投与した試験を中央列に示し、Ｇ２期の藻類細胞１ｃを試料として投与した試験を右列に示す。また、図２において、各列の上段の図は、試料を藻食性貝類２へ投与した直後の様子を示し、各列の下段の図は、試料を藻食性貝類２に投与してから所定時間経過後の様子を示す。
　この例では、例えば、５匹の藻食性貝類２を、３日間にわたって給餌を停止して絶食状態にした後、試料を１２時間毎に計２８回投与し、試料の各投与から３時間経過後に、藻食性貝類２が摂餌した藻類細胞の数を測定する。ここで試料の各投与は、貝類の飼育水１ｍＬあたり、例えば１×１０４～１×１０６個の藻類細胞が投与されるように行う。藻食性貝類を絶食状態にした後、試料の投与は複数回行うことが好ましい。試料の投与を複数回行うと、藻食性貝類の嗜好性をより正確に調べることができる。図２では、藻食性貝類２が、Ｓ期の藻類細胞１ｂを最も好んで摂餌しているため、Ｓ期の藻類細胞１ｂを、藻食性貝類へ与える餌料として選択することができる。
　（具体例２）
　図３は、第１実施形態に係る餌料の決定方法の別の例を模式的に示す。図３において、藻食性貝類２は、培養容器３に収容された飼育水４中で飼育されている。この例では、上述の８種類の試料（試料Ａ１～Ａ８）を藻食性貝類２に投与したが、図３には、試料Ａ１～Ａ３（すなわち、Ｇ１期の藻類細胞１ａ、Ｓ期の藻類細胞１ｂ、およびＧ２期の藻類細胞１ｃ）を投与した場合を代表的に示す。
　図３において、Ｇ１期の藻類細胞１ａを試料として投与した試験を左列に示し、Ｓ期の藻類細胞１ｂを試料として投与した試験を中央列に示し、Ｇ２期の藻類細胞１ｃを試料として投与した試験を右列に示す。また、図３において、各列の上段の図は、試料を藻食性貝類２へ投与するのに先だって、藻食性貝類２を満腹状態にするために人工餌料５を投与した後の様子を示し、各列の中段の図は、試料を藻食性貝類２へ投与した直後の様子を示し、各列の下段の図は、試料を藻食性貝類２に投与してから所定時間経過後の様子を示す。
　この例では、例えば、５匹の藻食性貝類２に人工餌料５を投与して満腹状態にした後、試料を１回投与し、試料の投与から３時間経過後に、藻食性貝類２が摂餌した藻類細胞の数を測定する。満腹状態は、給餌後に一定期間にわたって人工餌料５が飼育水中に残るような量で人工餌料５を与えることで達成することができる。なお、人工餌料５の代わりに、成長又は分裂の段階が様々な藻類細胞の混合物を投与して満腹状態を達成してもよい。また、試料の投与は、貝類の飼育水１ｍＬあたり、例えば１×１０４～１×１０６個の藻類細胞が投与されるように行う。図３では、藻食性貝類２が、Ｓ期の藻類細胞１ｂを最も好んで摂餌しているため、Ｓ期の藻類細胞１ｂを、藻食性貝類へ与える餌料として選択することができる。
　１－２．第２実施形態
　本発明の第２実施形態に係る「藻食性魚介類のための餌料の決定方法」は、
　成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ１以上の試料の各々を藻食性魚介類に与えることと、
　前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと成長又は分裂の段階が同じ前記藻類細胞を、前記藻食性魚介類へ与える餌料として選択することと
を含む。
　以下、第２実施形態に係る方法を詳細に説明するが、以下の説明では、第１実施形態に係る方法と重複する内容の説明は省略し、第１実施形態に係る方法と異なる内容について説明する。
　（試料の準備工程）
　第１実施形態に係る方法では、藻食性魚介類に投与される試料として、「藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なる複数の試料」を準備したのに対し、第２実施形態に係る方法では、藻食性魚介類に投与される試料として、「成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ１以上の試料」を準備する。すなわち、第１実施形態に係る方法では、１つの試料に含まれる藻類細胞は、成長又は分裂の段階が特定の１つの段階にあるのに対し、第２実施形態に係る方法では、１つの試料のなかに、成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞が組み合わせて含まれている。第２実施形態に係る方法では、成長又は分裂が異なる藻類細胞が、１つの試料のなかに同じ細胞数で含まれるように試料を準備してもよいし、成長又は分裂が異なる藻類細胞が、１つの試料のなかに異なる細胞数で含まれるように試料を準備してもよい。いずれの場合も、成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞のうちのどの段階の藻類細胞が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されるかを調べることができる。
　好ましくは、第２実施形態に係る方法では、藻食性魚介類に投与される試料として、「成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ複数の試料」を準備する。複数の試料は、藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なっていること以外は同一である。すなわち、複数の試料は、同一株の藻類細胞を含み、藻類細胞の成長又は分裂の段階のみが異なっている。ここで「異なっている」という表現は、成長又は分裂の段階が少なくとも部分的に異なっていることを表す。複数の試料は、２種類以上の試料を指し、上限は特に制限されない。複数の試料は、例えば２～８種類の試料とすることができる。
　「成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ複数の試料」として、例えば、８つの細胞周期の時期のうちの２つの時期の藻類細胞を組み合わせた試料を使用することができる。この場合の試料は、具体的には以下のとおりである。
　試料Ｂ１：Ｇ１期の藻類細胞とＳ期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２：Ｇ１期の藻類細胞とＧ２期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ３：Ｇ１期の藻類細胞とＭ期前期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ４：Ｇ１期の藻類細胞とＭ期中期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ５：Ｇ１期の藻類細胞とＭ期後期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ６：Ｇ１期の藻類細胞とＭ期終期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ７：Ｇ１期の藻類細胞とＧ０期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ８：Ｓ期の藻類細胞とＧ２期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ９：Ｓ期の藻類細胞とＭ期前期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１０：Ｓ期の藻類細胞とＭ期中期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１１：Ｓ期の藻類細胞とＭ期後期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１２：Ｓ期の藻類細胞とＭ期終期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１３：Ｓ期の藻類細胞とＧ０期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１４：Ｇ２期の藻類細胞とＭ期前期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１５：Ｇ２期の藻類細胞とＭ期中期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１６：Ｇ２期の藻類細胞とＭ期後期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１７：Ｇ２期の藻類細胞とＭ期終期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１８：Ｇ２期の藻類細胞とＧ０期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ１９：Ｍ期前期の藻類細胞とＭ期中期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２０：Ｍ期前期の藻類細胞とＭ期後期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２１：Ｍ期前期の藻類細胞とＭ期終期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２２：Ｍ期前期の藻類細胞とＧ０期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２３：Ｍ期中期の藻類細胞とＭ期後期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２４：Ｍ期中期の藻類細胞とＭ期終期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２５：Ｍ期中期の藻類細胞とＧ０期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２６：Ｍ期後期の藻類細胞とＭ期終期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２７：Ｍ期後期の藻類細胞とＧ０期の藻類細胞との混合物
　試料Ｂ２８：Ｍ期終期の藻類細胞とＧ０期の藻類細胞との混合物
　「成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ複数の試料」として、試料Ｂ１～Ｂ２８の全てを使用してもよいし、試料Ｂ１～Ｂ２８のうちの幾つかを使用してもよい。例えば、「成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ複数の試料」として、試料Ｂ１～Ｂ７の７種類の試料を使用してもよい。
　あるいは、「成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ複数の試料」の各々として、
　８つの細胞周期の時期のうちの３つの時期の藻類細胞を組み合わせた試料を使用してもよいし、
　８つの細胞周期の時期のうちの４つの時期の藻類細胞を組み合わせた試料を使用してもよいし、
　８つの細胞周期の時期のうちの５つの時期の藻類細胞を組み合わせた試料を使用してもよいし、
　８つの細胞周期の時期のうちの６つの時期の藻類細胞を組み合わせた試料を使用してもよいし、
　８つの細胞周期の時期のうちの７つの時期の藻類細胞を組み合わせた試料を使用してもよい。
　（試料の投与工程）
　試料の藻食性魚介類への投与は、第１実施形態に係る方法と同様の手順で行うことができる。
　第２実施形態に係る方法においても、成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞のうちのどの段階の藻類細胞が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されるかを比較するため、すべての試料について、投与条件などの試験条件を同一の条件とすることが望ましい。例えば、すべての試料について、試料を藻食性魚介類に与えるのに先立ち、藻食性魚介類を絶食状態にしておくことが望ましい。あるいは、すべての試料について、試料を藻食性魚介類に与えるのに先立ち、藻食性魚介類を満腹状態にしておくことが望ましい。
　（餌料の選択工程）
　上述のとおり、第２実施形態では、１つの試料のなかに、成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞が組み合わせて含まれている。したがって、餌料の選択は、試料を投与された藻食性魚介類の各々について、藻食性魚介類が摂餌した藻類細胞を藻食性魚介類から取り出して藻類細胞の成長又は分裂の段階を特定し、藻類細胞の成長又は分裂の段階ごとに、藻食性魚介類が摂餌した藻類細胞の数を測定し、測定結果に基づいて、成長又は分裂のどの段階の藻類細胞が藻食性魚介類によって最も好んで摂餌されたかを決定することにより行うことができる。藻類細胞の成長又は分裂の段階の特定は、顕微鏡で観察することにより行うことができる。
　（具体例３）
　図４は、第２実施形態に係る餌料の決定方法の一例を模式的に示す。図４において、藻食性貝類２は、培養容器３に収容された飼育水４中で飼育されている。この例では、上述の２８種類の試料（試料Ｂ１～Ｂ２８）を藻食性貝類２に投与したが、図４には、試料Ｂ１～Ｂ３（すなわち、Ｇ１期の藻類細胞１ａとＳ期の藻類細胞１ｂとの混合物、Ｇ１期の藻類細胞１ａとＧ２期の藻類細胞１ｃとの混合物、およびＧ１期の藻類細胞１ａとＭ期前期の藻類細胞１ｄとの混合物）を投与した場合を代表的に示す。
　図４において、Ｇ１期の藻類細胞１ａとＳ期の藻類細胞１ｂとの混合物を試料として投与した試験を左列に示し、Ｇ１期の藻類細胞１ａとＧ２期の藻類細胞１ｃとの混合物を試料として投与した試験を中央列に示し、Ｇ１期の藻類細胞１ａとＭ期前期の藻類細胞１ｄとの混合物を試料として投与した試験を右列に示す。また、図４において、各列の上段の図は、試料を藻食性貝類２へ投与した直後の様子を示し、各列の下段の図は、試料を藻食性貝類２に投与してから所定時間経過後の様子を示す。
　この例では、例えば、５匹の藻食性貝類２を、３日間にわたって給餌を停止して絶食状態にした後、試料を１２時間毎に計２８回投与し、試料の各回の投与から３時間経過後に、藻食性貝類２が摂餌した藻類細胞の細胞周期の時期を特定し、藻類細胞の成長又は分裂の段階ごとに、藻食性魚介類が摂餌した藻類細胞の数を測定する。ここで試料の各投与は、貝類の飼育水１ｍＬあたり、例えば１×１０４～１×１０６個の藻類細胞が投与されるように行う。図４では、藻食性貝類２が、Ｓ期の藻類細胞１ｂを最も好んで摂餌しているため、Ｓ期の藻類細胞１ｂを、藻食性貝類へ与える餌料として選択することができる。
　１－３．効果
　上述の「藻食性魚介類のための餌料の決定方法」に従って、成長又は分裂のどの段階の藻類細胞が藻食性魚介類によって好んで摂餌されるかを決定すると、決定された藻類細胞を藻食性魚介類へ選択的に与えることにより、藻食性魚介類の摂餌効率や栄養摂取効率を高めることができる。これにより、藻食性魚介類の成長を促進することができ、その結果、藻食性魚介類の生産性を向上させることができる。
　第２実施形態に係る方法に従って、成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を組み合わせて投与すると、成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞の混合物のなかから、特異的に摂餌される藻類細胞を捉えることができるため、藻食性魚介類が、どの段階の藻類細胞を好んで摂餌するかをより正確に捉えることが可能である。
　従来、藻食性魚介類の飼育や養殖において、藻類は、藻類細胞の成長又は分裂の段階を区別することなく給餌されており、給餌される藻類は、成長又は分裂の段階が様々な藻類細胞の混合物である。本発明者らが、成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を組み合わせて投与したところ、与えた藻類のうち、藻食性魚介類が好んで摂餌する藻類細胞は一部であったため、従来の飼育や養殖では、与えた藻類の一部しか餌として機能しておらず、藻食性魚介類の摂餌効率や栄養摂取効率は低いと考えられる。
　２．藻食性魚介類への給餌方法
　本発明の一実施形態に係る「藻食性魚介類への給餌方法」は、上述の「藻食性魚介類のための餌料の決定方法」により決定した前記餌料を前記藻食性魚介類に与えることを含む。
　好ましい実施形態に係る「藻食性魚介類への給餌方法」は、
　上述の「藻食性魚介類のための餌料の決定方法」により決定した前記餌料を前記藻食性魚介類に与えることと、
　前記藻類細胞を培養することと、
　培養した前記藻類細胞から、前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと同じ成長又は分裂の段階にあるものを、前記餌料として取得することと
を含むことができる。
　なお、「藻食性魚介類への給餌方法」は、「藻食性魚介類の飼育方法」または「藻食性魚介類の生産方法」と表現することもできる。
　（餌料の投与工程）
　餌料は、飼育水１ｍＬあたり、例えば１×１０４～１×１０６個の藻類細胞が投与されるように、藻食性魚介類に与えることができる。餌料は、例えば２～１２時間の間隔で投与することができる。
　（藻類細胞の培養工程）
　藻類細胞の培養は、藻類細胞が、光合成、成長および分裂等を行うのに必要な栄養素を十分な濃度で含んだ液体培地中で、懸濁培養により行うことができる。藻類細胞の培養は、例えば、オープンポンドと呼ばれる開放型培養槽で行ってもよいし、閉鎖型フォトバイオリアクタと呼ばれる閉鎖型システムで行ってもよい。
　（餌料の取得工程）
　培養した藻類細胞から、藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと同じ成長又は分裂の段階にあるものを、餌料として取得し、これを藻食性魚介類に与える。
　餌料は、上述の第１実施形態に係る方法の「試料の準備工程」の欄に記載した手順に従って取得することができる。すなわち、餌料は、培養中の藻類細胞の細胞周期を揃えて培養することにより取得することができる。例えば、藻類細胞を、培養環境を明環境と暗環境との間で交互に切り替えて培養すると、藻類細胞の細胞周期を揃えることができる。藻類細胞は、明環境で光合成を行い、明環境から暗環境へ切り替えると、光合成活性が低下するとともにＧ１期からＳ期に移行して細胞周期を進行させるという特性を有しているため、細胞周期を揃えることができる。あるいは、藻類細胞を、細胞分裂阻害剤や細胞増殖阻害剤を含有する培養液中で培養して、細胞周期を特定の段階で停止し、その後、阻害剤の非存在下で培養すると、細胞周期を揃えることができる。かかる阻害剤として、ＤＮＡ複製阻害剤や微小管形成阻害剤などを使用することができる。
　例えば、「細胞周期がＳ期にある藻類細胞」は、成長又は分裂の段階が様々な藻類細胞の混合物（以下、原料細胞ともいう）を、培養環境を明環境と暗環境との間で交互に切り替えて培養し、培養環境を明環境から暗環境へ切り替えた後に細胞を回収することにより取得することができる。あるいは、「細胞周期がＳ期にある藻類細胞」は、原料細胞を、ＤＮＡ複製阻害剤を含有する培養液中で培養し、その後、ＤＮＡ複製阻害剤の非存在下で培養した後に細胞を回収することにより取得することができる。
　（効果）
　この方法では、上述の「藻食性魚介類のための餌料の決定方法」により決定した餌料を藻食性魚介類に選択的に与えるため、藻食性魚介類の摂餌効率や栄養摂取効率を高めることができる。これにより、藻食性魚介類の成長を促進することができ、その結果、藻食性魚介類の生産性を向上させることができる。
　３．餌料の製造方法
　本発明の一実施形態に係る「餌料の製造方法」は、上述の「藻食性魚介類のための餌料の決定方法」により決定した餌料の製造方法であり、この方法は、
　前記藻類細胞を培養することと、
　培養した前記藻類細胞から、前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと同じ成長又は分裂の段階にあるものを、前記餌料として取得することと
を含む。
　この方法は、「２．藻食性魚介類への給餌方法」に記載したのと同じ手順に従って実施することができる。この方法により、摂餌効率や栄養摂取効率に優れた、藻食性魚介類のための餌料を製造することができる。
　　１…藻類細胞
　　１ａ…Ｇ１期の藻類細胞
　　１ｂ…Ｓ期の藻類細胞
　　１ｃ…Ｇ２期の藻類細胞
　　１ｄ…Ｍ期前期の藻類細胞
　　２…藻食性貝類
　　３…培養容器
　　４…飼育水
　　５…人工餌料
　　１０…細胞壁
　　１１…核
　　１２…葉緑体

Claims (8)

  1. 　藻類細胞の成長又は分裂の段階が異なる複数の試料の各々を藻食性魚介類に与えることと、
    　前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと成長又は分裂の段階が同じ前記藻類細胞を、前記藻食性魚介類へ与える餌料として選択することと
    を含んだ、藻食性魚介類のための餌料の決定方法。
  2. 　前記複数の試料の各々を前記藻食性魚介類に与えるのに先立ち、藻食性魚介類を絶食状態にすることを更に含んだ請求項１に記載の方法。
  3. 　前記複数の試料の各々を前記藻食性魚介類に与えるのに先立ち、藻食性魚介類を満腹状態にすることを更に含んだ請求項１に記載の方法。
  4. 　成長又は分裂の段階が異なる藻類細胞を各々が含んだ１以上の試料の各々を藻食性魚介類に与えることと、
    　前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと成長又は分裂の段階が同じ前記藻類細胞を、前記藻食性魚介類へ与える餌料として選択することと
    を含んだ、藻食性魚介類のための餌料の決定方法。
  5. 　前記試料を前記藻食性魚介類に与えるのに先立ち、藻食性魚介類を絶食状態にすることを更に含んだ請求項４に記載の方法。
  6. 　請求項１乃至５の何れか１項に記載の方法により決定した前記餌料を前記藻食性魚介類に与えることを含んだ、藻食性魚介類への給餌方法。
  7. 　前記藻類細胞を培養することと、
    　培養した前記藻類細胞から、前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと同じ成長又は分裂の段階にあるものを、前記餌料として取得することと
    を更に含んだ請求項６に記載の方法。
  8. 　請求項１乃至５の何れか１項に記載の決定方法により決定した前記餌料の製造方法であって、
    　前記藻類細胞を培養することと、
    　培養した前記藻類細胞から、前記藻食性魚介類が最も好んで摂餌したものと同じ成長又は分裂の段階にあるものを、前記餌料として取得することと
    を含んだ方法。
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