WO2022270617A1 - ペプチド含有組成物 - Google Patents

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WO2022270617A1
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peptide
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耕作 大日向
賢太朗 金子
幸洋 竹隈
志門 阿部
作彩 荒木
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国立大学法人京都大学
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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present disclosure relates to peptide-containing compositions and the like.
  • Leptin is known as an anti-obesity hormone that is secreted from adipocytes and acts mainly on the hypothalamus to suppress food intake and increase energy consumption.
  • JP 2013-028560 A Japanese Patent Publication No. 2020-509057
  • An object of the present disclosure is to provide a composition for improving leptin resistance or a composition for enhancing leptin sensitivity. Another object of the present disclosure is to provide an appetite suppressing composition. Another object of the present disclosure is to provide an anti-obesity composition.
  • Patent Document 2 a peptide consisting of the amino acid sequence YHIEPV (SEQ ID NO: 1) has anxiolytic effects. Generally, substances having anxiolytic effects are known to increase appetite in many cases. Found and improved further.
  • Section 1 A composition for improving leptin resistance or enhancing leptin sensitivity, comprising a peptide containing the amino acid sequence YAB as an active ingredient, A composition for improving leptin resistance or enhancing leptin sensitivity, wherein A is an amino acid residue having a basic side chain and B is an amino acid residue having a nonpolar side chain or an amino acid residue having an acidic side chain thing.
  • Section 2. a peptide wherein the peptide consists of the amino acid sequence YHIEPV (SEQ ID NO: 1); a peptide consisting of YKLTY (SEQ ID NO: 2); Item 2.
  • composition for improving leptin resistance or enhancing leptin sensitivity according to item 1, which is a peptide consisting of YRLTY (SEQ ID NO: 3) or a peptide consisting of YRETY (SEQ ID NO: 4).
  • item 3 A composition for improving leptin resistance or enhancing leptin sensitivity, comprising a pepsin-treated rubisco protein or a pepsin- and pancreatin-treated product as an active ingredient. Section 4.
  • a composition for suppressing appetite containing a peptide containing the amino acid sequence YAB as an active ingredient, A composition for suppressing appetite, wherein A is an amino acid residue having a basic side chain, and B is an amino acid residue having a nonpolar side chain or an amino acid residue having an acidic side chain.
  • Item 5. a peptide wherein the peptide consists of the amino acid sequence YHIEPV (SEQ ID NO: 1); a peptide consisting of YKLTY (SEQ ID NO: 2); Item 5.
  • a composition for suppressing appetite comprising a pepsin-treated rubisco protein or a pepsin- and pancreatin-treated product as an active ingredient.
  • Item 7. An anti-obesity composition comprising a peptide containing the amino acid sequence YAB as an active ingredient, An anti-obesity composition wherein A is an amino acid residue with a basic side chain and B is an amino acid residue with a non-polar side chain or an amino acid residue with an acidic side chain.
  • Item 8. a peptide wherein the peptide consists of the amino acid sequence YHIEPV (SEQ ID NO: 1); a peptide consisting of YKLTY (SEQ ID NO: 2); Item 8.
  • the anti-obesity composition according to Item 7 which is a peptide consisting of YRLTY (SEQ ID NO: 3) or a peptide consisting of YRETY (SEQ ID NO: 4).
  • Item 9. An anti-obesity composition comprising, as an active ingredient, a pepsin-treated rubisco protein or a pepsin and pancreatin-treated product.
  • Item 10. The composition according to any one of Items 1 to 9, which is an oral composition.
  • Item 11. The composition according to any one of Items 1 to 10, which is a pharmaceutical composition.
  • a peptide comprising the amino acid sequence YAB, A is an amino acid residue with a basic side chain, and B is an amino acid residue with a non-polar side chain or an amino acid residue with an acidic side chain, administering the peptide to a patient or a preliminary group in need thereof.
  • a method for improving leptin resistance or enhancing leptin sensitivity comprising: Item 14.
  • a peptide comprising the amino acid sequence YAB, A is an amino acid residue with a basic side chain
  • B is an amino acid residue with a non-polar side chain or an amino acid residue with an acidic side chain, administering the peptide to a patient or a preliminary group in need thereof.
  • a method of suppressing food intake comprising: Item 15.
  • An anti-obesity method comprising: Item 16. a peptide wherein the peptide consists of the amino acid sequence YHIEPV (SEQ ID NO: 1); a peptide consisting of YKLTY (SEQ ID NO: 2); 16. The method according to any one of items 13 to 15, wherein the peptide consists of YRLTY (SEQ ID NO: 3) or YRETY (SEQ ID NO: 4).
  • a method for improving leptin resistance or enhancing leptin sensitivity comprising the step of administering a pepsin-treated rubisco protein or a pepsin and pancreatin-treated product to a patient or a preliminary group in need thereof.
  • Item 18 A method for suppressing food intake, comprising the step of administering a pepsin-treated product of rubisco protein or a pepsin- and pancreatin-treated product to a patient or a preliminary group in need thereof.
  • An anti-obesity method comprising the step of administering a pepsin-treated product of rubisco protein or a pepsin-and-pancreatin-treated product to a patient or a preliminary group in need thereof.
  • Item 20 for producing a medicament or food that improves leptin resistance or enhances leptin sensitivity, A peptide comprising the amino acid sequence YAB, Use of peptides wherein A is an amino acid residue with a basic side chain and B is an amino acid residue with a non-polar side chain or an amino acid residue with an acidic side chain.
  • Item 21 for the manufacture of medicines or foods that suppress feeding, A peptide comprising the amino acid sequence YAB, Use of peptides wherein A is an amino acid residue with a basic side chain and B is an amino acid residue with a non-polar side chain or an amino acid residue with an acidic side chain.
  • Item 22 for producing a medicament or food that improves leptin resistance or enhances leptin sensitivity, A peptide comprising the amino acid sequence YAB, Use of peptides wherein A is an amino acid residue with a basic side chain and B is an amino acid residue with a non-polar side chain or an amino acid residue with an acidic
  • a peptide comprising the amino acid sequence YAB Use of peptides wherein A is an amino acid residue with a basic side chain and B is an amino acid residue with a non-polar side chain or an amino acid residue with an acidic side chain.
  • Item 23 a peptide wherein the peptide consists of the amino acid sequence YHIEPV (SEQ ID NO: 1); a peptide consisting of YKLTY (SEQ ID NO: 2); 23.
  • Item 24 Use according to any one of paragraphs 20 to 22, which is a peptide consisting of YRLTY (SEQ ID NO: 3) or YRETY (SEQ ID NO: 4).
  • a composition for improving leptin resistance or a composition for enhancing leptin sensitivity is provided.
  • a composition for suppressing appetite is provided.
  • anti-obesity compositions are also provided.
  • 1 shows the results of evaluating the influence of green leaf rubisco digest A or B on high-fat diet intake.
  • 1 shows the results of evaluating the effect of oral administration of rubisco-derived peptide YHIEPV on high-fat diet intake.
  • 1 shows the results of evaluating the effect of an antagonist on the suppression of high-fat food intake by oral administration of YHIEPV.
  • 1 shows the results of evaluating the effect of long-term oral administration of YHIEPV on body weight gain due to a high-fat diet.
  • 5 shows the results of evaluating the effects of oral administration of YHIEPV for 5 weeks on blood leptin levels and fat weight.
  • 1 shows the results of evaluating the effect of YHIEPV on hypothalamic intracellular leptin sensitivity.
  • 1 shows the results of evaluating the influence of YHIEPV on leptin resistance induced by Forskolin.
  • 2 shows the results of evaluating the effect of oral administration of YHIEPV on the anti-obesity action of intracerebroventricularly administered leptin.
  • 2 shows the results of evaluation of the effect of oral administration of YHIEPV on the stress response in the brain due to intake of a high-fat diet.
  • 1 shows the results of evaluating the effect of oral administration of rubisco-derived peptide YKLTY on high-fat diet intake.
  • 1 shows the results of evaluating the effect of YKLTY on hypothalamic intracellular leptin sensitivity.
  • 1 shows the results of evaluating the effects of oral administration of peptides derived from spinach, algae, and bacterial rubisco on high-fat diet intake.
  • a composition encompassed by this disclosure preferably comprises a peptide comprising the amino acid sequence YAB.
  • the composition may be referred to as "the composition of the present disclosure”. More preferably, the composition of the present disclosure contains a peptide containing the amino acid sequence YAB as an active ingredient.
  • A is preferably an amino acid residue with a basic side chain.
  • Amino acid residues having a basic side chain include, for example, lysine, arginine, histidine and the like. Among them, lysine, arginine, or histidine is preferred.
  • B is preferably an amino acid residue with a nonpolar side chain or an amino acid residue with an acidic side chain.
  • Amino acid residues having nonpolar side chains include, for example, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine, triliptophan, and the like. Among them, leucine or isoleucine is preferred, and leucine is more preferred.
  • Amino acid residues having acidic side chains include, for example, glutamic acid, aspartic acid, and the like. Among them, glutamic acid is preferred.
  • A is preferably an amino acid residue with a basic side chain
  • B is preferably an amino acid residue with a nonpolar side chain or an amino acid residue with an acidic side chain.
  • Preferred amino acid residues with basic side chains are lysine, arginine, or histidine.
  • Leucine or isoleucine is preferable as the amino acid residue having a non-polar side chain, and leucine is more preferable.
  • Glutamic acid is preferred as the amino acid residue having an acidic side chain.
  • B is more preferably isoleucine, an amino acid residue with a non-polar side chain.
  • B is leucine, an amino acid residue with a non-polar side chain.
  • B is leucine, an amino acid residue with a non-polar side chain, or glutamic acid, an amino acid residue with an acidic side chain. is more preferred.
  • the number of amino acids constituting a peptide containing the amino acid sequence YAB may be, for example, 3-25, or 3-10. Among them, the number is preferably 5 or 6. In other words, an amino acid residue may be added to the amino acid sequence YAB.
  • the number of amino acid residues to be added may be, for example, 1-22 or 1-7. Among them, it is preferable that the number is two or three.
  • the amino acid residue to be added is not particularly limited, and any amino acid residue can be added.
  • the added amino acid residue may be added to the N-terminal side or the C-terminal side of the amino acid sequence YAB. Among others, it is preferably added to the C-terminal side of the amino acid sequence YAB.
  • peptides containing the amino acid sequence YAB include a peptide consisting of YHIEPV (SEQ ID NO: 1), a peptide consisting of YKLTY (SEQ ID NO: 2), a peptide consisting of YRLTY (SEQ ID NO: 3), a peptide consisting of YRETY (SEQ ID NO: 4). ) are exemplified. Peptides containing the amino acid sequence YAB can be used singly or in combination of two or more.
  • a peptide containing the amino acid sequence YAB is, for example, a peptide consisting of an amino acid sequence in which at least one amino acid is deleted, substituted, or added in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, 2, 3, or 4. good too.
  • the number of amino acids deleted, substituted, or added is, for example, , 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 18, 19, or 20.
  • the number may be 1 to 20, 1 to 10, 1 to 5, or 1 to 3.
  • an amino acid When an amino acid is added to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, 2, 3, or 4, it may be added to the N-terminal side of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, 2, 3, or 4, or the C-terminal may be added to the side. Among others, it is preferably added to the C-terminal side of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1, 2, 3, or 4.
  • conservative substitutions means substitution of an amino acid with an amino acid having a side chain having similar properties to the side chain of the amino acid.
  • conservative substitutions include substitutions between amino acid residues having basic side chains such as lysine, arginine, and histidine; substitutions between amino acid residues having acidic side chains such as aspartic acid and glutamic acid; glycine; , asparagine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, and cysteine.
  • substitutions between amino acid residues with ⁇ -branched side chains such as threonine, valine, and isoleucine; aromatic sides such as tyrosine, phenylalanine, tryptophan, and histidine. Substitution between amino acid residues having chains; and the like are exemplified.
  • amino acid residues that make up the peptide containing the amino acid sequence YAB can include both natural and/or non-natural amino acid residues.
  • natural amino acids include alanine, arginine, asparagine, aspartic acid, cysteine, glutamine, glutamic acid, glycine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, phenylalanine, proline, serine, threonine, tryptophan, tyrosine, valine, and the like.
  • non-natural amino acids include azetidinecarboxylic acid, 2-aminoadipic acid, 3-aminoadipic acid, ⁇ -alanine, aminopropionic acid, 2-aminobutyric acid, 4-aminobutyric acid, 6-aminocaproic acid, 2- aminoheptanoic acid, 2-aminoisobutyric acid, 3-aminoisobutyric acid, 2-aminopimelic acid, tert-butylglycine, 2,4-diaminoisobutyric acid, desmosine, 2,2-diaminopimelic acid, 2,3-diaminopropionic acid, N- Ethylglycine, N-ethylasparagine, homoproline, hydroxylysine, allohydroxy
  • L-amino acids, D-amino acids, and DL-amino acids including any of the racemates and amino acids having an excess of any one enantiomer, as long as they are mixtures of D- and L-amino acids. or can be used as an amino acid that constitutes a peptide. Among them, peptides consisting of only L-amino acids or only D-amino acids are preferred.
  • the peptide may be the respective enantiomers or diastereomers in any form and in any ratio.
  • Enantiomers and diastereomers can be separated using commonly used columns. a method using an optically active column; a method comprising optical resolution in a form having an introduced optically active group followed by removal of the optically active group; Separation can be achieved using any known method, such as a method involving formation of an optically active salt followed by optical resolution.
  • a peptide containing the amino acid sequence YAB may be in the form of a salt (acid addition salt or basic salt).
  • Acid addition salts such as inorganic salts such as hydrochloride, sulfate, nitrate, phosphate, hydrobromide, perchlorate; citric acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid , p-toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, methanesulfonic acid, and salts of organic acids such as trifluoroacetic acid.
  • Examples of basic salts include salts of alkali metals such as sodium, potassium and lithium; salts of alkaline earth metals such as calcium and magnesium; Bases that can be used to make base addition salts include, for example, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide, calcium hydroxide, and the like. Additional acids and bases from which pharmaceutically acceptable salts can be made can be found in Stahland Wermuth, eds. , 2008, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich, Switzerland.
  • a peptide containing the amino acid sequence YAB may be in the form of a solvate.
  • Solvates include, for example, water (for hydrates), methanol, ethanol, isopropanol, acetic acid, tetrahydrofuran, acetone, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, dimethylacetamide, acetamide, ethylene glycol, propylene glycol, solvents with dimethoxyethane Includes Japanese food.
  • a peptide containing the amino acid sequence YAB may be synthesized by any known peptide synthesis method, enzymatic method, or the like. It may also be obtained from a microorganism or cultured cell engineered to produce a peptide comprising the amino acid sequence YAB, e.g., from a microorganism or cultured cell into which the gene encoding the peptide has been inserted, or by in vitro translation. .
  • the content of the peptide containing the amino acid sequence YAB contained in the composition of the present disclosure is not particularly limited, and can be appropriately set up to 100% by mass.
  • compositions of the present disclosure may also include pepsinized rubisco (ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase) protein. More preferably, the composition of the present disclosure contains a pepsin-treated rubisco protein as an active ingredient.
  • the peptide consisting of YKLTY (SEQ ID NO: 2) is contained in the pepsin-treated rubisco protein, as shown in the examples below.
  • a peptide consisting of YRLTY SEQ ID NO: 3
  • a peptide consisting of YRETY SEQ ID NO: 4
  • compositions of the present disclosure may also include pepsin and pancreatin treated rubisco (ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase) proteins. More preferably, the composition of the present disclosure contains pepsin- and pancreatin-treated rubisco protein as active ingredients.
  • the peptide consisting of YHIEPV (SEQ ID NO: 1) is contained in pepsin- and pancreatin-treated rubisco proteins, as shown in the examples below. These can be used individually by 1 type or in combination of 2 or more types.
  • Rubisco protein is a protein involved in carbon dioxide fixation by green leaves. Rubisco protein is abundant in plants and is considered the most abundant protein on earth. Green plants containing rubisco protein include plants having edible green leaf parts, such as kale, barley grass, barley grass, Angelica keiskei kale, mulberry grass, spinach, mulukhiya, cabbage, and tea. Among them, spinach is preferred. Rubisco protein is also known to be synthesized by algae, bacteria, and the like. Examples of algae that synthesize Rubisco protein include Euglena and Chlorella. Bacteria that synthesize rubisco protein include, for example, hydrogen-oxidizing bacteria, purple non-sulfur bacteria, and the like.
  • the origin of the rubisco protein used in the present disclosure is preferably spinach, algae (more specifically, euglena, chlorella, etc.), bacteria (more specifically, hydrogen-oxidizing bacteria, purple non-sulfur bacteria, etc.). .
  • Pepsin (EC.3.4.23.1-3) is a type of protease that functions in the stomach of animals. Pepsin can be used as a food additive in Japan. Commercially available commercial reagent grade pepsin, food additive grade pepsin, etc. can be used.
  • Pancreatin is a mixture of enzymes secreted from the pancreas, including lipase, amylase, proteases (trypsin, chymotrypsin, etc.). Pancreatin can be used as a food additive in Japan. Commercially available commercial reagent grade pancreatin, food additive grade pancreatin, etc. can be used.
  • the substrate treated with pepsin or pepsin and pancreatin is not particularly limited as long as it contains rubisco protein.
  • rubisco protein For example, green plants, algae, bacteria themselves; green plants, algae, bacterial juice (so-called green juice etc.); purified rubisco protein and the like.
  • Rubisco protein can be easily extracted from spinach, algae (more specifically, Euglena, chlorella, etc.), bacteria (more specifically, hydrogen-oxidizing bacteria, red non-sulfur bacteria, etc.), etc., which can be extracted as soluble proteins. is.
  • the treatment temperature with pepsin or pepsin and pancreatin can be appropriately selected from, for example, 30-70°C, 30-40°C, 40-70°C, 50-65°C and the like.
  • the treatment time can be appropriately selected from, for example, about 30 minutes to 48 hours, about 1 to 10 hours, about 2 to 8 hours, and the like.
  • the pH during the treatment is, for pepsin, for example about pH 1.5 to 3.5, preferably about pH 2 to 3, and for pancreatin, for example, about pH 6.5 to 8.5, preferably about The pH can be appropriately selected from 7 to 8.
  • pepsin and pancreatin have different optimal pH values for the enzymes, it is preferable to perform the treatment with pepsin and the treatment with pancreatin separately.
  • the order of treatment with pepsin and treatment with pancreatin is not limited. For example, treatment with pepsin may be followed by treatment with pancreatin, or treatment with pancreatin may be followed by treatment with pepsin.
  • pepsin and pancreatin are inactivated by heating to a temperature that allows inactivation of pepsin and pancreatin (for example, heating at a temperature above 80° C. for about 5 to 60 minutes). good too.
  • the pepsin-treated rubisco protein and the pepsin- and pancreatin-treated products may be purified as necessary. Methods of purification treatment are known in the art and can be performed using any technique.
  • the contents of the pepsin-treated rubisco protein and the pepsin- and pancreatin-treated products contained in the composition of the present disclosure are not particularly limited, and can be appropriately set up to 100% by mass.
  • composition of the present disclosure contains a peptide containing the amino acid sequence YAB, a pepsin-treated rubisco protein, and/or a pepsin- and pancreatin-treated product, and can further contain other components.
  • Such other ingredients include pharmaceutically or food hygienically acceptable bases, carriers, solvents, dispersants, emulsifiers, buffers, stabilizers, excipients, binders, disintegrants, lubricants, thickeners, Other agents such as viscosity agents, antioxidants, preservatives, coating agents, coloring agents, gastric mucosa protective agents, and/or other ingredients and materials that can be used as foods are exemplified. These components can be used individually by 1 type or in combination of 2 or more types.
  • composition of the present disclosure is not particularly limited, and tablets, pills, capsules, powders, fine granules, granules, liquids, troches, jellies, injections, plasters, extracts, and suppositories. , suspensions, tinctures, ointments, poultices, nasal drops, inhalants, liniments, lotions, aerosols and the like.
  • composition of the present disclosure can be prepared by a conventional method by combining a peptide containing the amino acid sequence YAB, a pepsin-treated rubisco protein, and/or a pepsin- and pancreatin-treated product, and optionally other ingredients. can.
  • the composition of the present disclosure is preferably an oral composition.
  • pharmaceutical compositions, food and drink compositions, and the like are exemplified.
  • the food and drink composition may be, for example, a functional food, a dietary supplement, a supplement, a food for health use, a food for specified health use, a food with nutrient function claims, a food with function claims, or the like.
  • Food and drink compositions include, for example, beverages (coffee, cocoa, juice, soft drinks, mineral drinks, tea beverages, green tea, black tea, oolong tea, milk beverages, lactic acid beverages, yogurt beverages, carbonated beverages, other non-alcoholic beverages, alcoholic beverages, etc.), confectionery (candy, gum, gummy, jelly, pudding, mousse, cake, candy, cookie, cracker, biscuit, chocolate, ice (ice cream, popsicle, sherbet, shaved ice, etc.), etc.), furikake topping , dressings, seasonings, processed meat foods (hamburger patties, meatloaf, meatballs, tsukune (grilled chicken meatballs), etc.), processed fish foods (kamaboko (steamed fish patties), chikuwa (fish sausage), etc.), retort processing foods, jelly-like foods (jelly, agar, jelly-like beverages, etc.), and the like. Food and drink compositions may also be foods prepared from green plants as raw materials
  • composition of the present disclosure exhibits, for example, a high-fat food intake suppression effect, a weight loss effect, a leptin sensitivity enhancement effect, and/or a leptin resistance improvement effect, etc., as shown in the Examples described later. Therefore, the composition of the present disclosure can be suitably used, for example, for suppressing food intake, anti-obesity, enhancing leptin sensitivity, and/or improving leptin resistance.
  • leptin resistance means a state in which the response of the activation pathway to leptin stimulation (for example, phosphorylation of STAT3) is reduced at the cellular level, and at the individual level, leptin-induced It means a state in which the food intake suppressing action and/or the weight gain suppressing action are reduced.
  • compositions of the present disclosure act through delta opioid receptors or MC4 receptors, receptors involved in eating behaviour. Also, without wishing to be bound by theory, it is believed that the compositions of the present disclosure enhance leptin sensitivity by inhibiting the Rap1 activation pathway.
  • administration methods of the composition of the present disclosure include oral administration and parenteral (eg, intravenous, arterial, intramuscular, subcutaneous, peritoneal, rectal, transdermal, topical, etc.) administration. Among them, oral administration is preferred.
  • parenteral eg, intravenous, arterial, intramuscular, subcutaneous, peritoneal, rectal, transdermal, topical, etc.
  • Subjects to whom the composition of the present disclosure is administered (ingested) are not particularly limited, and examples include humans and mammals other than humans (e.g., rats, mice, rabbits, cows, pigs, dogs, cats, sheep, monkeys, etc.). ).
  • Subject humans include, for example, obesity, or humans suspected of being obese; humans with or suspected of being leptin-resistant; humans who need to reduce food intake; humans; or humans having two or more of these characteristics.
  • Examples of non-human mammals include mammals raised as pets, domestic animals, experimental animals, and the like. Such non-human mammals include, for example, dogs, cats, monkeys, cows, horses, sheep, goats, pigs, rabbits, mice, rats, camels, llamas, and the like.
  • the administration (ingestion) amount of the composition of the present disclosure is not particularly limited, and is determined according to the age, body weight, sex, administration method, type of active ingredient, etc. of the subject to be administered.
  • the active ingredient is a peptide containing the amino acid sequence YAB
  • the dose of the active ingredient is, for example, 0.01 mg/kg to 500 mg/kg, preferably 0.05 mg/kg per day for adults. ⁇ 100 mg/kg, more preferably 0.1-30 mg/kg.
  • the dosage of the active ingredient is, for example, 1 mg/kg to 50000 mg/kg, preferably 5 mg/kg to 10000 mg/kg per day for adults.
  • the dosage of the active ingredient is, for example, 1 mg/kg to 50000 mg/kg, preferably 5 mg/kg to 50000 mg/kg per day for adults. 10000 mg/kg, more preferably 10-3000 mg/kg.
  • composition of the present disclosure may be administered (taken) once a day, or may be administered (taken) in divided doses (eg, about 2 to 5 times) a day.
  • the sample was boiled (100°C, 10 minutes) to terminate the enzymatic reaction.
  • YHIEPV (SEQ ID NO: 1), YKLTY (SEQ ID NO: 2), YRLTY (SEQ ID NO: 3) and YRETY (SEQ ID NO: 4) were synthesized by standard methods, usually by solid-phase methods based on the Fmoc strategy. It was confirmed that YHIEPV (SEQ ID NO: 1) was contained in the aforementioned green leaf rubisco digest A and YKLTY (SEQ ID NO: 2) was contained in the green leaf rubisco digest B.
  • YRLTY SEQ ID NO: 3
  • YRETY SEQ ID NO: 4
  • algae e.g., Euglena, chlorella, etc.
  • bacteria e.g., hydrogen-oxidizing bacteria, red non-sulfur bacteria, etc.
  • Rubisco protein is a peptide predicted to be contained in a pepsin digest of the rubisco protein of .
  • Test Example 5 Blood leptin concentration after oral administration of YHIEPV for 5 weeks
  • test Example 4 blood was collected under anesthesia, and the blood was centrifuged to collect serum.

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Abstract

レプチン抵抗性改善用組成物、レプチン感受性増強用組成物、摂食抑制用組成物、又は抗肥満用組成物が提供される。具体的には、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを有効成分とする、レプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物であり、Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基である、レプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物が提供される。

Description

ペプチド含有組成物
　本開示は、ペプチド含有組成物等に関する。
　レプチンは脂肪細胞から分泌され、主に視床下部に作用することにより摂食抑制とエネルギー消費亢進をもたらす抗肥満ホルモンとして知られている。
　近年、脂肪の摂取量の増加などによる、肥満が増加している。一般に、脂肪蓄積量とレプチン分泌量との間には、正の相関があることが知られており、肥満の場合には、血清中のレプチン濃度が上昇していることが多いにもかかわらず、体重の減少が認められない、いわゆる「レプチン抵抗性」が引き起こされることが知られている（特許文献１）。
特開２０１３－０２８５６０号公報 特表２０２０－５０９０５７号公報
　本開示は、レプチン抵抗性改善用組成物、又はレプチン感受性増強用組成物を提供することを課題とする。また、本開示は、摂食抑制用組成物を提供することを課題とする。また、本開示は、抗肥満用組成物を提供することを課題とする。
　本発明者らは、これまでに、アミノ酸配列ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチドが抗不安作用を有することを見出している（特許文献２）。一般に抗不安作用を有する物質は、食欲を亢進する場合が多いことが知られているが、本発明者らは、アミノ酸配列ＹＨＩＥＰＶからなるペプチドが、高脂肪食の摂食抑制作用を有することを見出し、さらに改良を重ねた。
　本開示は、例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを有効成分とする、レプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物であり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基である、レプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物。
項２．
前記ペプチドが、アミノ酸配列
ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、
ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、
ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、又は
ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドである、項１に記載のレプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物。
項３．
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物を有効成分とする、レプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物。
項４．
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを有効成分とする、摂食抑制用組成物であり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基である、摂食抑制用組成物。
項５．
前記ペプチドが、アミノ酸配列
ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、
ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、
ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、又は
ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドである、項４に記載の摂食抑制用組成物。
項６．
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物を有効成分とする、摂食抑制用組成物。
項７．
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを有効成分とする、抗肥満用組成物であり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基である、抗肥満用組成物。
項８．
前記ペプチドが、アミノ酸配列
ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、
ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、
ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、又は
ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドである、項７に記載の抗肥満用組成物。
項９．
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物を有効成分とする、抗肥満用組成物。
項１０．
経口組成物である、項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
項１１．
医薬組成物である、項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
項１２．
飲食品組成物である、項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
項１３．
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドであり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であるペプチドを必要とする患者または予備群に投与する工程を含む、レプチン抵抗性改善、又はレプチン感受性増強方法。
項１４．
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドであり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であるペプチドを必要とする患者または予備群に投与する工程を含む、摂食抑制方法。
項１５．
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドであり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であるペプチドを必要とする患者または予備群に投与する工程を含む、抗肥満方法。
項１６．
前記ペプチドが、アミノ酸配列
ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、
ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、
ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、又は
ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドである、項１３～１５のいずれか一項に記載の方法。
項１７．
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物を必要とする患者または予備群に投与する工程を含む、レプチン抵抗性改善、又はレプチン感受性増強方法。
項１８．
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物を必要とする患者または予備群に投与する工程を含む、摂食抑制方法。
項１９．
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物を必要とする患者または予備群に投与する工程を含む、抗肥満方法。
項２０．
レプチン抵抗性を改善する、又はレプチン感受性を増強する医薬または食品を製造するための、
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドであり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であるペプチドの使用。
項２１．
摂食を抑制する医薬または食品を製造するための、
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドであり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であるペプチドの使用。
項２２．
肥満を抑制する医薬または食品を製造するための、
アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドであり、
Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であるペプチドの使用。
項２３．
前記ペプチドが、アミノ酸配列
ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、
ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、
ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、又は
ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドである、項２０～２２のいずれか一項に記載の使用。
項２４．
レプチン抵抗性を改善する、又はレプチン感受性を増強する医薬または食品を製造するための、
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物の使用。
項２５．
摂食を抑制する医薬または食品を製造するための、
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物の使用。
項２６．
肥満を抑制する医薬または食品を製造するための、
ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物の使用。
　例えば、レプチン抵抗性改善用組成物、又はレプチン感受性増強用組成物が提供される。また、例えば、摂食抑制用組成物が提供される。また、例えば、抗肥満用組成物が提供される。
緑葉ルビスコ消化物Ａ又はＢによる高脂肪食摂取に対する影響を評価した結果を示す。 ルビスコ由来ペプチドＹＨＩＥＰＶの経口投与による高脂肪食摂取に対する影響を評価した結果を示す。 ＹＨＩＥＰＶの経口投与による高脂肪食摂取抑制のアンタゴニストによる影響を評価した結果を示す。 ＹＨＩＥＰＶの長期間の経口投与による、高脂肪食による体重増加に対する影響を評価した結果を示す。 ＹＨＩＥＰＶの５週間の経口投与による、血中レプチン濃度及び脂肪重量に対する影響を評価した結果を示す。 ＹＨＩＥＰＶによる視床下部の細胞内レプチン感受性に対する影響を評価した結果を示す。 Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎによるレプチン抵抗性に対する、ＹＨＩＥＰＶによる影響を評価した結果を示す。 ＹＨＩＥＰＶの経口投与による、脳室内投与したレプチンの抗肥満作用に対する影響を評価した結果を示す。 ＹＨＩＥＰＶの経口投与による、脳における高脂肪食摂取によるストレス反応に対する影響を評価した結果を示す。 ルビスコ由来ペプチドＹＫＬＴＹの経口投与による高脂肪食摂取に対する影響を評価した結果を示す。 ＹＫＬＴＹによる視床下部の細胞内レプチン感受性に対する影響を評価した結果を示す。 ホウレンソウ、藻類、及び細菌ルビスコ由来ペプチドの経口投与による高脂肪食摂取に対する影響を評価した結果を示す。
　以下、本開示に包含される各実施形態について、さらに詳細に説明する。
　本開示に包含される組成物は、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを含むことが好ましい。本明細書において、当該組成物を「本開示の組成物」と表記することがある。本開示の組成物は、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを有効成分として含むことがより好ましい。
　アミノ酸配列ＹＡＢにおいて、Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であることが好ましい。塩基性側鎖を有するアミノ酸残基としては、例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン等が挙げられる。中でも、リジン、アルギニン、又はヒスチジンが好ましい。
　アミノ酸配列ＹＡＢにおいて、Ｂは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であることが好ましい。非極性側鎖を有するアミノ酸残基としては、例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、卜リプ卜ファン等が挙げられる。中でも、ロイシン、又はイソロイシンが好ましく、ロイシンがより好ましい。酸性側鎖を有するアミノ酸残基としては、例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸等が挙げられる。中でも、グルタミン酸が好ましい。
　中でも、アミノ酸配列ＹＡＢにおいて、Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であることが好ましい。塩基性側鎖を有するアミノ酸残基としては、リジン、アルギニン、又はヒスチジンが好ましい。また、非極性側鎖を有するアミノ酸残基しては、ロイシン、又はイソロイシンが好ましく、ロイシンがより好ましい。また、酸性側鎖を有するアミノ酸残基としては、グルタミン酸が好ましい。塩基性側鎖を有するアミノ酸残基Ａが、ヒスチジンである場合には、Ｂは、非極性側鎖を有するアミノ酸残基であるイソロイシンであることがより好ましい。塩基性側鎖を有するアミノ酸残基Ａが、リジンである場合には、Ｂは、非極性側鎖を有するアミノ酸残基であるロイシンであることがより好ましい。塩基性側鎖を有するアミノ酸残基Ａが、アルギニンである場合には、Ｂは、非極性側鎖を有するアミノ酸残基であるロイシン、又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基であるグルタミン酸であることがより好ましい。
　アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを構成するアミノ酸の数は、例えば、３～２５個であってもよく、３～１０個であってもよい。中でも、５個又は６個であることが好ましい。
　換言すれば、アミノ酸配列ＹＡＢには、さらにアミノ酸残基が付加されていてもよい。付加されるアミノ酸残基の個数としては、例えば、１～２２個であってもよく、１～７個であってもよい。中でも、２個又は３個であることが好ましい。
　付加されるアミノ酸残基は、特に限定されず、任意のアミノ酸残基を付加することができる。
　付加されるアミノ酸残基は、アミノ酸配列ＹＡＢのＮ末端側に付加されてもよく、Ｃ末端側に付加されてもよい。中でも、アミノ酸配列ＹＡＢのＣ末端側に付加されることが好ましい。
　アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドとしては、より具体的には、ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチド等が例示される。アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドは、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
　アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドとしては、例えば、配列番号１、２、３、又は４に示すアミノ酸配列において、少なくとも１個のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列からなるペプチドであってもよい。
　配列番号１、２、３、又は４に示すアミノ酸配列において、少なくとも１個のアミノ酸が欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸配列において、欠失、置換、若しくは付加されたアミノ酸の個数は、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個であってもよい。例えば、１～２０個であってもよく、１～１０個であってもよく、１～５個であってもよく、１～３個であってもよい。
　配列番号１、２、３、又は４に示すアミノ酸配列において、アミノ酸が付加される場合、配列番号１、２、３、又４に示すアミノ酸配列のＮ末端側に付加されてもよく、Ｃ末端側に付加されてもよい。中でも、配列番号１、２、３、又は４に示すアミノ酸配列のＣ末端側に付加されることが好ましい。
　配列番号１、２、３、又は４に示すアミノ酸配列において、アミノ酸が置換される場合、当該置換は、保存的置換であることが好ましい。本明細書において「保存的置換」とは、あるアミノ酸を当該アミノ酸の側鎖と類似の性質を有する側鎖を有するアミノ酸に置換することを意味する。具体的な保存的置換としては、リジン、アルギニン、及びヒスチジン等の塩基性側鎖を有するアミノ酸残基同士の置換；アスパラギン酸、及びグルタミン酸等の酸性側鎖を有するアミノ酸残基同士の置換；グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、及びシステイン等の非帯電性極性側鎖を有するアミノ酸残基同士の置換；アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、及び卜リプ卜ファン等の非極性側鎖を有するアミノ酸残基同士の置換；スレオニン、バリン、及びイソロイシン等のβ－分枝側鎖を有するアミノ酸残基同士の置換；チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びヒスチジン等の芳香族側鎖を有するアミノ酸残基同士の置換；等が例示される。
　少なくとも１個のアミノ酸の欠失、置換、若しくは付加などの変異を特定のアミノ酸配列に加える技術は当該技術分野において公知であり、任意の手法を用いて行うことができる。例えば、制限酵素処理、エキソヌクレアーゼやＤＮＡリガーゼ等による処理、位置指定突然変異導入法、ランダム突然変異導入法等を利用して行うことができる。
　また、別段の指定がない限り、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを構成するアミノ酸残基は、天然及び／又は非天然の両方のアミノ酸残基を含み得る。天然のアミノ酸としては、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンなどのタンパク質を構成するアミノ酸残基；セレノシステイン、Ｎ－ホルミルメチオニン、ピロールリジン、ピログルタミンなどの他のアミノ酸残基等が挙げられる。非天然アミノ酸としては、例えば、アゼチジンカルボン酸、２－アミノアジピン酸、３－アミノアジピン酸、β－アラニン、アミノプロピオン酸、２－アミノ酪酸、４－アミノ酪酸、６－アミノカプロン酸、２－アミノヘプタン酸、２－アミノイソ酪酸、３－アミノイソ酪酸、２－アミノピメリン酸、ｔｅｒｔ－ブチルグリシン、２，４－ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２－ジアミノピメリン酸、２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｎ－エチルグリシン、Ｎ－エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリジン、アロヒドロキシリシン、３－ヒドロキシプロリン、４－ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ－メチルアラニン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－メチルイソロイシン、Ｎ－メチルペンチルグリシン、Ｎ－メチルバリン、ナフトアラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸、チオプロリン等が挙げられる。
　Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、及びＤＬ－アミノ酸（それらが、Ｄ－及びＬ－アミノ酸の混合物である限りにおいて、ラセミ体及びいずれか１つの過剰のエナンチオマーを有するアミノ酸のいずれかを含む）のいずれかは、ペプチドを構成するアミノ酸として使用できる。中でも、Ｌ－アミノ酸のみ又はＤ－アミノ酸のみからなるペプチドが好ましい。
　アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドが、２個以上の不斉炭素原子を含む場合、このペプチドは、任意の形態の任意の比率のそれぞれのエナンチオマー又はジアステレオマーであってよい。エナンチオマー及びジアステレオマーは、よく使われるカラムを用いて分離できる。光学的に活性のカラムを使用する方法、導入された光学的に活性の基を有する形で、光学分割を実施した後、光学的に活性の基を除去することを含む方法、酸又は塩基と光学的に活性な塩を形成し、続けて、光学分割を行うことを含む方法などの任意の既知の方法を用いて分離できる。
　アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドは、塩（酸付加塩又は塩基性塩）の形態であってもよい。酸付加塩として、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、過塩素酸塩等の無機塩；クエン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸の塩等が挙げられる。塩基性塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属の塩；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属の塩等が挙げられる。塩基付加塩を作製するために使用できる塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム等が挙げられる。薬学的に許容可能な塩を作製できる追加の酸及び塩基は、ＳｔａｈｌａｎｄＷｅｒｍｕｔｈ，ｅｄｓ．，２００８，Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｕｓｅ，Ｖｅｒｌａｇ　Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄに記載されている。
　アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドは、溶媒和物の形態であってもよい。溶媒和物としては、例えば、水（水和物用）、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸、テトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、アセトアミド、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジメトキシエタンとの溶媒和物が含まれる。
　アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドは、任意の既知のペプチド合成法、酵素法等により合成してもよい。また、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを生成するように操作された微生物又は培養細胞、例えば、当該ペプチドをコードする遺伝子を挿入された微生物又は培養細胞から得てもよく、インビトロ翻訳により得てもよい。
　本開示の組成物に含まれる、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドの含有量は、特に限定されず、１００質量％を限度として適宜設定することができる。
　また、本開示の組成物は、ルビスコ（リブロース１，５－ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ）タンパク質のペプシン処理物を含んでいてもよい。本開示の組成物は、ルビスコタンパク質のペプシン処理物を有効成分として含むことがより好ましい。
　なお、ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチドは、後述する実施例に示すとおり、ルビスコタンパク質のペプシン処理物中に含まれる。また、ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、及びＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドは、ルビスコタンパク質のペプシン処理物中に含まれると予測される。
　また、本開示の組成物は、ルビスコ（リブロース１，５－ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ）タンパク質のペプシン及びパンクレアチン処理物を含んでいてもよい。本開示の組成物は、ルビスコタンパク質のペプシン及びパンクレアチン処理物を有効成分として含むことがより好ましい。
　なお、ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチドは、後述する実施例に示すとおり、ルビスコタンパク質のペプシン及びパンクレアチン処理物中に含まれる。
　これらは、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
　ルビスコタンパク質は、緑葉による二酸化炭素固定に関与するタンパク質である。ルビスコタンパク質は、植物中に豊富にあり、地球上で最も豊富なタンパク質と考えられている。ルビスコタンパク質を含む緑色植物には、食用緑葉部分を有する植物、例えば、ケール、大麦若葉、麦若葉、アシタバ、桑若葉、ホウレンソウ、モロヘイヤ、キャベツ、茶等が挙げられる。中でも、ホウレンソウが好ましい。
　また、ルビスコタンパク質は、藻類、細菌等によっても合成されることが知られている。ルビスコタンパク質を合成する藻類としては、例えば、ユーグレナ、クロレラ等が挙げられる。また、ルビスコタンパク質を合成する細菌としては、例えば、水素酸化細菌、紅色非硫黄細菌等が挙げられる。
　中でも、本開示に用いられるルビスコタンパク質の由来としては、ホウレンソウ、藻類（より具体的には、ユーグレナ、クロレラ等）、細菌（より具体的には、水素酸化細菌、紅色非硫黄細菌等）が好ましい。
　ペプシン（ＥＣ．３．４．２３．１－３）は、動物の胃中で機能するプロテアーゼの一種である。ペプシンは、日本では、食品添加物として使用できる。商業的に入手できる商品の試薬グレードペプシン、食品添加剤グレードペプシンなどを使用できる。
　パンクレアチンは、膵臓から分泌される酵素の混合物であり、リパーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ（トリプシン、キモトリプシン等）等を含む。パンクレアチンは、日本では、食品添加物として使用できる。商業的に入手できる商品の試薬グレードパンクレアチン、食品添加剤グレードパンクレアチンなどを使用できる。
　ペプシン、若しくはペプシン及びパンクレアチンで処理される基質は、ルビスコタンパク質を含む限り、特に限定されない。例えば、緑色植物、藻類、細菌それ自体；緑色植物、藻類、細菌の搾り汁（いわゆる青汁等）；精製されたルビスコタンパク質等が挙げられる。
　ルビスコタンパク質は、可溶性タンパク質として抽出できるホウレンソウ、藻類（より具体的には、ユーグレナ、クロレラ等）、細菌（より具体的には、水素酸化細菌、紅色非硫黄細菌等）等から抽出することが簡便である。
　ペプシン、若しくはペプシン及びパンクレアチンによる処理温度は、例えば、３０～７０℃、３０～４０℃、４０～７０℃、５０～６５℃等から適宜選択できる。
　処理時間は、例えば、約３０分～４８時間、約１～１０時間、約２～８時間等から適宜選択できる。
　処理する際のｐＨは、ペプシンの場合は、例えば、約ｐＨ１．５～３．５、好ましくは約ｐＨ２～３、パンクレアチンの場合は、例えば、約ｐＨ６．５～８．５、好ましくは約ｐＨ７～８から適宜選択できる。
　ペプシンとパンクレアチンとは、酵素の至適ｐＨが異なるため、ペプシンによる処理及びパンクレアチンによる処理は、別々に実施することが好ましい。この場合、ペプシンによる処理、及びパンクレアチンによる処理の順番は、限定されない。例えば、ペプシンによる処理を行った後、パンクレアチンによる処理を行ってもよく、パンクレアチンによる処理を行った後、ペプシンによる処理を行ってもよい。
　必要に応じ、ペプシン及びパンクレアチンの不活化を可能とする温度まで加熱する（例えば、８０℃を超える温度で約５～６０分間加熱する）ことにより、ペプシン及びパンクレアチンの失活処理を行ってもよい。
　ルビスコタンパク質のペプシン処理物、並びにペプシン及びパンクレアチン処理物は、必要に応じ、精製処理がなされていてもよい。精製処理の方法は、当該技術分野において公知であり、任意の手法を用いて行うことができる。
　本開示の組成物に含まれる、ルビスコタンパク質のペプシン処理物、並びにペプシン及びパンクレアチン処理物の含有量は、特に限定されず、１００質量％を限度として適宜設定することができる。
　本開示の組成物は、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチド、ルビスコタンパク質のペプシン処理物、及び／又はペプシン及びパンクレアチン処理物を含み、さらに他の成分を含むことができる。当該他の成分としては、薬学的又は食品衛生学上許容される基剤、担体、溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、増粘剤、抗酸化剤、保存剤、コーティング剤、着色料、胃粘膜保護剤などのその他の薬剤、及び／又はその他食品等として利用され得る成分・材料等が例示される。これらの成分は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
　本開示の組成物の形態は、特に限定されず、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、トローチ剤、ゼリー剤、注射剤、硬膏剤、エキス剤、坐剤、懸濁剤、チンキ剤、軟膏剤、パップ剤、点鼻剤、吸入剤、リニメント剤、ローション剤、エアゾール剤等が例示される。
　本開示の組成物は、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチド、ルビスコタンパク質のペプシン処理物、及び／又はペプシン及びパンクレアチン処理物と、必要に応じて他の成分とを組み合わせて常法により調製することができる。
　本開示の組成物は、経口組成物であることが好ましい。具体的には、医薬組成物、飲食品組成物等が例示される。飲食品組成物は、例えば、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、保健用食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品等であってもよい。
　飲食品組成物としては、例えば、飲料（コーヒー、ココア、ジュース、ソフトドリンク、ミネラル飲料、茶飲料、緑茶、紅茶、ウーロン茶、乳汁飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料、その他の非アルコール飲料、アルコール飲料等）、菓子（飴玉、ガム、グミ、ゼリー、プディング、ムース、ケーキ、キャンディ、クッキー、クラッカー、ビスケット、チョコレート、アイス（アイスクリーム、アイスキャンディ、シャーベット、かき氷等）等）、ふりかけトッピング、ドレッシング、調味料、加工肉食品（ハンバーガーのパテ、ミートローフ、ミートボール、つくね（焼き鳥ミートボール）等）、魚加工食品（蒲鉾（蒸した魚パテ）、竹輪（魚肉ソーセージ）等）、レトルト加工食品、ゼリー様食品（ゼリー、寒天、ゼリー様飲料等）等が挙げられる。また、飲食品組成物としては、原材料としての緑色植物から調製された食品、例えば、粉末状緑茶、青汁、野菜ジュース等であってもよい。
　本開示の組成物は、後述する実施例に示すように、例えば、高脂肪食摂食抑制作用、体重減少作用、レプチン感受性増強作用、及び／又はレプチン抵抗性改善作用等を奏する。このため、本開示の組成物は、例えば、摂食抑制用、抗肥満用、レプチン感受性増強用、及び／又はレプチン抵抗性改善用等として好適に用いることができる。
　なお、本明細書において、「レプチン抵抗性」は、細胞レベルでは、レプチン刺激に対する活性化経路の応答（例えば、STAT３のリン酸化）が低下している状態を意味し、個体レベルでは、レプチンによる摂食抑制作用及び／又は体重増加抑制作用が低下している状態を意味する。
　理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の組成物は、摂食行動に関与する受容体であるδオピオイド受容体又はＭＣ４受容体を介して作用すると考えられる。
　また、理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の組成物は、Ｒａｐ１活性化経路を抑制することにより、レプチン感受性を増強すると考えられる。
　本開示の組成物の投与方法としては、例えば、経口投与、及び非経口（例えば静脈、動脈、筋肉、皮下、腹腔、直腸、経皮、局所など）投与等が挙げられる。中でも、経口投与が好ましい。
　本開示の組成物を投与（摂取）する対象としては、特に限定されず、例えば、ヒト、ヒト以外の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ヒツジ、サル等）が挙げられる。対象となるヒトとしては、例えば、肥満、又は肥満が疑われるヒト；レプチン抵抗性が認められるヒト、又はその疑いがあるヒト；摂食量を抑制する必要があるヒト；体重を減少させる必要があるヒト；あるいはこれらの特徴を２種以上併せ持つヒト等が挙げられる。
　また、非ヒト哺乳動物としては、例えばペット、家畜、実験動物等として飼育される哺乳動物などが例示される。このような非ヒト哺乳動物としては、例えば、イヌ、ネコ、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、マウス、ラット、ラクダ、リャマ等が挙げられる。
　本開示の組成物の投与（摂取）量は、特に限定されず、投与する対象の年齢、体重、性別、投与方法、有効成分の種類等により決定される。
　例えば、有効成分が、アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドである場合には、有効成分の投与量としては、例えば、成人で１日当たり、０．０１ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、０．１～３０ｍｇ／ｋｇである。
　例えば、有効成分が、ルビスコタンパク質のペプシン処理物である場合には、有効成分の投与量としては、例えば、成人で１日当たり、１ｍｇ／ｋｇ～５００００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５ｍｇ／ｋｇ～１００００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、１０～３０００ｍｇ／ｋｇである。
　例えば、有効成分が、ルビスコタンパク質のペプシン及びパンクレアチン処理物である場合には、有効成分の投与量としては、例えば、成人で１日当たり、１ｍｇ／ｋｇ～５００００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５ｍｇ／ｋｇ～１００００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、１０～３０００ｍｇ／ｋｇである。
　本開示の組成物は、１日１回投与（摂取）するものであってもよく、１日複数回（例えば２～５回程度）に分けて投与（摂取）するものであってもよい。
　なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。また、本開示は、本明細書に説明した構成要件を任意の組み合わせを全て包含する。
　また、上述した本開示の各実施形態について説明した各種特性（性質、構造、機能等）は、本開示に包含される主題を特定するにあたり、どのように組み合わせられてもよい。すなわち、本開示には、本明細書に記載される組み合わせ可能な各特性のあらゆる組み合わせからなる主題が全て包含される。
　本開示の内容を以下の実施例を用いて具体的に説明する。しかし、本開示はこれらに何ら限定されるものではない。下記において、特に言及する場合を除いて、実験は大気圧及び常温条件下で行っている。また特に言及する場合を除いて、「％」は「質量％」を意味する。
　＜作製実施例１＞
　（ルビスコタンパク質の抽出）
　ホウレンソウをホモジナイズした。得られたホモジネートのｐＨを１ＮのＮａＯＨ水溶液でｐＨ１１に調節した。得られたホモジネートを２枚のガーゼを通して濾過した。濾液を１３，５００Ｇ、５℃で５０分間、遠心分離処理した。遠心分離後、上清を濾過した。得られた濾液のｐＨを酢酸を用いてｐＨ４．５に調節し、ルビスコタンパク質を沈殿させた。沈殿物をアセトン、エタノール及びジエチルエーテルで洗浄し、減圧器中で乾燥し、ルビスコ粉末を得た。
　（緑葉ルビスコ消化物Ａ）
　精製されたルビスコタンパク質の酵素消化物を下記条件下で調製した（ペプシン＋パンクレアチン消化）。
　酵素処理を１）及び２）の順に実施した。
　１）ペプシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）：ルビスコ＝１：１００（重量比、ルビスコの最終濃度：０．９９ｍｇ／ｍｌ）、反応温度：３７℃；反応時間：５時間；反応緩衝液：ｐＨ２．０。
　２）パンクレアチン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）：ルビスコ＝１：２０（重量比、ルビスコの最終濃度：０．８６ｍｇ／ｍｌ）、反応温度：３７℃；反応時間：５時間；反応緩衝液：ｐＨ７．５。
　上記の反応時間の経過後、試料を沸騰させて（１００℃、１０分）酵素反応を終了させた。
　（緑葉ルビスコ消化物Ｂ）
　精製されたルビスコタンパク質の酵素消化物を下記条件下で調製した（ペプシン消化）。
　酵素処理を実施した。
　１）ペプシン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｏ．ＬＬＣ）：ルビスコ＝１：１００（重量比、ルビスコの最終濃度：０．９９ｍｇ／ｍｌ）、反応温度：３７℃；反応時間：５時間；反応緩衝液：ｐＨ２．０。
　＜作製実施例２＞
　（ペプチド）
　ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）、ＹＫＬＴＹ（配列番号２）、ＹＲＬＴＹ（配列番号３）、及びＹＲＥＴＹ（配列番号４）を、標準的方法により、通常、Ｆｍｏｃ戦略に基づいて固相法により合成した。
　なお、前述の緑葉ルビスコ消化物Ａ中に、ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）が含まれ、緑葉ルビスコ消化物Ｂ中に、ＹＫＬＴＹ（配列番号２）が含まれていることが確認された。
　また、ＹＲＬＴＹ（配列番号３）、及びＹＲＥＴＹ（配列番号４）は、ルビスコタンパク質のオルソログ解析から、それぞれ藻類（例えば、ユーグレナ、クロレラ等）及び細菌（例えば、水素酸化細菌、紅色非硫黄細菌等）のルビスコタンパク質のペプシン消化物中に含まれると予測されるペプチドである。
試験例１：緑葉ルビスコ消化物Ａ又はＢによる高脂肪食摂取
　高脂肪食（６０ｋｃａｌ％Ｆａｔ）にて飼育した雄性マウスを使用し、ｏｖｅｒ　ｎｉｇｈｔ絶食条件下にて、消化物を経口投与し、経時的に、摂食量を測定した（Ｎ＝１４－１５）。結果を図１Ａに示す。データは、二元配置分散分析により解析し、引き続いてTukey検定により多重比較を行った。なお、図１Ａ中、「*」はp < 0.05であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 14-15)。
　図１Ａに示すとおり、緑葉ルビスコ消化物Ａによって、高脂肪食の摂取が抑制されることが確認された。
　緑葉ルビスコ消化物Ａに代えて、緑葉ルビスコ消化物Ｂを用いて、同様に試験を行った。結果を図１Ｂに示す。データは、二元配置分散分析により解析し、引き続いてTukey検定により多重比較を行った。なお、図１Ｂ中、「＃」はp < 0.1であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 9)。
　図１Ｂに示すとおり、緑葉ルビスコ消化物Ｂによって、高脂肪食の摂取が抑制されることが確認された。
試験例２：ルビスコ由来ペプチドＹＨＩＥＰＶの経口投与による高脂肪食摂取
　高脂肪食（６０ｋｃａｌ％Ｆａｔ）にて飼育した雄性マウスを使用し、ｏｖｅｒ　ｎｉｇｈｔ絶食条件下にて、ルビスコ由来ペプチドＹＨＩＥＰＶを経口投与し、経時的に、摂食量を測定した（Ｎ＝１１）。結果を図２に示す。データは、二元配置分散分析により解析し、引き続いてBonferroni検定により多重比較を行った。なお、図２中、「*」はp < 0.05であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 11)。
　図２に示すとおり、ルビスコ由来ペプチドＹＨＩＥＰＶによって、高脂肪食の摂取が抑制されることが確認された。
試験例３：ＹＨＩＥＰＶの経口投与による高脂肪食摂取抑制のアンタゴニストによる影響
　高脂肪食（６０ｋｃａｌ％Ｆａｔ）にて飼育した雄性マウスを使用し、ｏｖｅｒ　ｎｉｇｈｔ絶食条件下にて、ＹＨＩＥＰＶ（経口）、及びδオピオイド受容体阻害薬であるナルトリンドール（腹腔内）又はＭＣ４受容体阻害薬であるＨＳ０２４（脳室内）を投与し、４時間後の摂食量を測定した（Ｎ＝１３－１５）。なお、δオピオイド受容体及びＭＣ４受容体は、摂食行動に関与する受容体である。結果を図３に示す。データは、一元配置分散分析により解析し、引き続いてTukey検定により多重比較を行った。なお、図３中、「*」はp < 0.05であり、「**」はp < 0.01であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 13-15)。
　図３に示すとおり、ＹＨＩＥＰＶの経口投与による高脂肪食摂取抑制作用が、δオピオイド受容体阻害薬又はＭＣ４受容体阻害薬により、阻害されることが確認された。このことから、ＹＨＩＥＰＶは、これらの受容体を介して、作用することが示唆された。
試験例４：ＹＨＩＥＰＶの長期間の経口投与による、高脂肪食による体重増加に対する影響
　高脂肪食（６０ｋｃａｌ％Ｆａｔ）で１か月以上飼育した雄性マウスを使用し、ＹＨＩＥＰＶ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を１日に１度、経口投与にて与えた。また、体重及び摂食量を毎日測定し、摂食量は積算摂食量として算出した（Ｎ＝１０）。結果を図４に示す。データは、二元配置分散分析により解析し、引き続いてBonferroni検定により多重比較を行った。なお、図４中、「*」はp < 0.05であり、「**」はp < 0.01であり「***」はp < 0.001であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 10)。
　図４に示すとおり、高脂肪食による体重増加は、ＹＨＩＥＰＶの長期間の経口投与により抑制されることが確認された。
試験例５：ＹＨＩＥＰＶの５週間の経口投与による血中レプチン濃度
　試験例４において、ＹＨＩＥＰＶを５週間経口投与した後、麻酔下にて採血を行った後、血液を遠心分離し、血清を回収した。血清中のレプチン濃度をＥＬＩＳＡ（製造元のプロトコルに準ずる）にて測定した（Ｎ＝１０）。また、採血と同じタイミングで、脂肪重量（副睾丸周囲脂肪及び腸間膜脂肪）を測定した（Ｎ＝９）。結果を図５に示す。データは、t検定により解析した。なお、図５中、「*」はp < 0.05であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 9-10)。
　図５に示すとおり、ＹＨＩＥＰＶの５週間の経口投与により血中レプチン濃度が減少することが確認された。脂肪重量については、減少傾向が確認された。
試験例６：ＹＨＩＥＰＶによる視床下部の細胞内レプチン感受性
　視床下部器官培養系（Kaneko et al., Cell Reports 2016）を用い、ＹＨＩＥＰＶ（１００μＭ）で２４時間プレインキュベートした後に、レプチン刺激（３０ｎＭ）を１時間行った。その後、ホルマリン固定を行い、リン酸化ＳＴＡＴ３シグナルを免疫染色化学法にて、検出した（Ｎ＝６－７）。結果を図６に示す。データは、一元配置分散分析により解析し、引き続いてTukey検定により多重比較を行った。なお、図６中、「***」はp < 0.001であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 6-8)。
　図６に示すとおり、ＹＨＩＥＰＶにより視床下部の細胞内レプチン感受性が増強することが確認された。
試験例７：Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（Ｒａｐ１経路刺激）によるレプチン抵抗性に対する、ＹＨＩＥＰＶによる影響
　視床下部器官培養系を用い、Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（２０μＭ）及びＹＨＩＥＰＶ（１００μＭ）で６時間プレインキュベートした後に、レプチン刺激（６０ｎＭ）を１時間行った。その後、ホルマリン固定を行い、リン酸化ＳＴＡＴ３シグナルを免疫染色化学法にて、検出した（Ｎ＝６－７）。なお、Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎは、Ｒａｐ１活性化経路を介して、レプチン抵抗性を惹起することが知られている。結果を図７に示す。データは、一元配置分散分析により解析し、引き続いてTukey検定により多重比較を行った。なお、図７中、「**」はp < 0.01であり、「***」はp < 0.001であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 5-9)。
　図７に示すとおり、Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎによるレプチン抵抗性は、ＹＨＩＥＰＶによって改善することが確認された。このことから、ＹＨＩＥＰＶは、Ｒａｐ１活性化経路を抑制することによって、レプチン感受性を増強することが示唆された。
試験例８：ＹＨＩＥＰＶの経口投与による、脳室内投与したレプチンの抗肥満作用に対する影響
　高脂肪食（６０ｋｃａｌ％Ｆａｔ）で１か月以上飼育した雄性マウスの側脳室にガイドカニューラを留置後、１週間以上の回復期間を設けた。その後、ＹＨＩＥＰＶ（０．３ｍｇ／ｋｇ、経口投与）及びレプチン（０．５μｇ、脳室内投与）添加後の体重変化及び摂食量を測定した（Ｎ＝１０－１２）。結果を図８に示す。データは、二元配置分散分析により解析し、引き続いてTukey検定により多重比較を行った。なお、図７中、「*」はp < 0.05であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す (n = 10-12)。
　図８に示すとおり、脳室内投与したレプチンによる抗肥満作用は、ＹＨＩＥＰＶの経口投与によって増強されることが確認された。
試験例９：ＹＨＩＥＰＶの経口投与による、脳における高脂肪食摂取によるストレス反応に対する影響
　高脂肪食（６０ｋｃａｌ％Ｆａｔ）で１か月以上飼育した雄性マウスにＹＨＩＥＰＶ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を５日間経口投与した後、視床下部及び脳サンプルを採取した。視床下部におけるレプチン抵抗性関連遺伝子（ＳＯＣＳ－３、ＰＴＰ１Ｂ、ＴＣＰＴＰ）及び炎症性サイトカイン（ＩＬ－６、ＩＬ１β、ＴＮＦα）の発現量をＲＴ－ｑＰＣＲにて測定した。脳の活性型Ｒａｐ１はＡｃｔｉｖｅ　Ｒａｐ１　Ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ　ａｓｓａｙ　ｋｉｔ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｋｉｔを使用し、製造元プロトコルに従って、活性型Ｒａｐ１を定量した（Ｎ＝４）。結果を図９に示す。データは、t検定により解析した。なお、図９中、「*」はp < 0.05であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す(n = 4)。
　図９に示すとおり、ＹＨＩＥＰＶの経口投与により、ＳＯＣＳ－３、及びＴＣＰＴＰの発現量が有意に減少すること、並びにＰＴＰ１Ｂの発現量が減少傾向を示すことが確認された。また、ＹＨＩＥＰＶの経口投与により、ＩＬ１βの発現量が有意に減少すること、並びにＩＬ－６、及びＴＮＦαの発現量が減少傾向を示すことが確認された。さらに、ＹＨＩＥＰＶの経口投与により、活性型Ｒａｐ１の発現量が有意に減少することが確認された。以上のことから、ＹＨＩＥＰＶは、ストレス応答及びＲａｐ１活性化経路を抑制することによって、レプチン感受性を増強することが示唆された。
試験例１０：ルビスコ由来ペプチドＹＫＬＴＹの経口投与による高脂肪食摂取
　ＹＨＩＥＰＶを、ＹＫＬＴＹに代えた以外は、試験例２と同様の方法により、摂食量を測定した（Ｎ＝７－８）。結果を図１０に示す。データは、二元配置分散分析により解析し、引き続いてTukey検定により多重比較を行った。なお、図１０中、「*」はp < 0.05であることを示す。エラーバーは標準誤差を示す (n = 7-8)。
　図１０に示すとおり、ルビスコ由来ペプチドＹＫＬＴＹによって、高脂肪食の摂取が抑制されることが確認された。
試験例１１：ＹＫＬＴＹによる視床下部の細胞内レプチン感受性
　ＹＨＩＥＰＶを、ＹＫＬＴＹに代えた以外は、試験例６と同様の方法により、レプチン感受性を評価した（Ｎ＝６－７）。結果を図１１に示す。
　図１１に示すとおり、ＹＫＬＴＹにより視床下部の細胞内レプチン感受性が増強することが確認された。
試験例１２：ホウレンソウ、藻類、及び細菌ルビスコ由来ペプチドの経口投与による高脂肪食摂取
　ＹＨＩＥＰＶを、ＹＫＬＴＹ、ＹＲＬＴＹ、及びＹＲＥＴＹに代えた以外は、試験例２と同様の方法により、摂食量を測定した（Ｎ＝５－７）。結果を図１２に示す。データは、二元配置分散分析により解析し、引き続いてTukey検定により多重比較を行った。なお、図１０中、エラーバーは標準誤差を示す (n = 5-7)。

Claims (12)

  1. アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを有効成分とする、レプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物であり、
    Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基である、レプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物。
  2. 前記ペプチドが、アミノ酸配列
    ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、
    ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、
    ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、又は
    ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドである、請求項１に記載のレプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物。
  3. ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物を有効成分とする、レプチン抵抗性改善用、又はレプチン感受性増強用組成物。
  4. アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを有効成分とする、摂食抑制用組成物であり、
    Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基である、摂食抑制用組成物。
  5. 前記ペプチドが、アミノ酸配列
    ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、
    ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、
    ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、又は
    ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドである、請求項４に記載の摂食抑制用組成物。
  6. ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはペプシン及びパンクレアチン処理物を有効成分とする、摂食抑制用組成物。
  7. アミノ酸配列ＹＡＢを含むペプチドを有効成分とする、抗肥満用組成物であり、
    Ａは塩基性側鎖を有するアミノ酸残基であり、かつＢは非極性側鎖を有するアミノ酸残基又は酸性側鎖を有するアミノ酸残基である、抗肥満用組成物。
  8. 前記ペプチドが、アミノ酸配列
    ＹＨＩＥＰＶ（配列番号１）からなるペプチド、
    ＹＫＬＴＹ（配列番号２）からなるペプチド、
    ＹＲＬＴＹ（配列番号３）からなるペプチド、又は
    ＹＲＥＴＹ（配列番号４）からなるペプチドである、請求項７に記載の抗肥満用組成物。
  9. ルビスコタンパク質のペプシン処理物、若しくはプシン及びパンクレアチン処理物を有効成分とする、抗肥満用組成物。
  10. 経口組成物である、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 医薬組成物である、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
  12. 飲食品組成物である、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。 
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