WO2022250350A1 - 피페리딘디온 유도체 - Google Patents

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WO2022250350A1
WO2022250350A1 PCT/KR2022/006949 KR2022006949W WO2022250350A1 WO 2022250350 A1 WO2022250350 A1 WO 2022250350A1 KR 2022006949 W KR2022006949 W KR 2022006949W WO 2022250350 A1 WO2022250350 A1 WO 2022250350A1
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pyrimidin
oxo
benzyl
compound
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유혜동
신영준
김보경
이은명
김용환
유준걸
신소현
양동식
김성진
최서원
홍정현
배진건
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주식회사 이노큐어테라퓨틱스
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    • C07D495/14—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to piperidinedione derivative compounds. More specifically, the present invention relates to a piperidinedione derivative compound having a structure in which a target protein ligand and an E3 enzyme ligand are linked.
  • PROTACs an abbreviation of PROteolysis TArgeting Chimeras, is a technology that induces the degradation of a target protein (POI: protein of interest).
  • POI protein of interest
  • TPD Total Protein Degradation
  • Protac is a structure in which a target protein ligand and an E3 enzyme ligand are connected by a linker (see FIG. 1).
  • the target protein ligand is a structure that can bind to a target protein associated with a disease
  • the E3 enzyme ligand is a structure that can bind to an E3 enzyme.
  • E3 enzyme can attach a label called ubiquitin to a target protein, and the target protein labeled with such ubiquitin is degraded by the proteasome.
  • the E3 enzyme is located very close to the target protein by the Protac compound, thus creating an environment in which the target protein can be removed by the proteasome. do.
  • the Protac compound binds to a target protein involved in the proliferation of cancer cells, it can achieve a cancer treatment effect by inducing degradation of the target protein.
  • the present invention is to provide a compound that can be used for TPD by increasing the decomposition effect of a target protein (particularly c-MET protein).
  • the present invention relates to a compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • Z is a target protein ligand
  • Q 1 to Q 4 are each independently CZ, CH, C-Hal or C ⁇ N (here, Hal is a halogen), provided that any one of Q 1 to Q 4 is CZ;
  • R 1 is hydrogen, halogen, nitro, amino, C 1 to C 6 straight, branched or cyclic alkyl, or C 1 to C 6 straight, branched or cyclic alkyl substituted by halogen.
  • R 1 is preferably hydrogen, halogen, C 1 to C 4 straight-chain, branched or cyclic alkyl, or halogen-substituted C 1 to C 4 straight-chain, branched or cyclic alkyl. do.
  • a c_MET inhibitor compound may be used as the target protein ligand, and preferably a compound selected from the group consisting of the following compounds may be used:
  • the present invention relates to a compound of Formula 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • Z is a target protein ligand
  • Q 1 to Q 4 are each independently CZ, CH, C-Hal or C ⁇ N (here, Hal is a halogen), provided that any one of Q 1 to Q 4 is CZ.
  • a c-MET inhibitor compound may be used as the target protein ligand, and preferably a compound selected from the group consisting of the following compounds may be used:
  • the compound can be prepared, for example, by the method disclosed in Patent Document WO 2010/078897 A1 or the method disclosed in Example B described later.
  • the compound according to the present invention may preferably be a compound selected from the group consisting of the following compounds or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • the compound according to the present invention may preferably be a compound selected from the group consisting of the following compounds or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • the compound according to the present invention is a compound comprising a target protein ligand and an E3 enzyme ligand, and since the target protein ligand and E3 enzyme ligand are directly covalently linked to each other without using a linker, it is useful as a compound for target protein degradation.
  • the target protein ligand and the E3 enzyme ligand are directly connected without a linker, the molecular size of the compound is minimized to improve physical properties, and the protein-protein interaction between the target protein and the E3 ligand is maximized to effectively target the protein. It is possible to decompose
  • an oxophthalazine piperidinedione derivative such as the compound of Formula 3 or a dioxopiperidine isoindolinedione derivative such as the compound of Formula 4 below may be used:
  • X is halogen or cyano (-CN);
  • Q 1 to Q 4 are each independently CH or CX;
  • R 1 is hydrogen, halogen, nitro, amino, C 1 to C 6 straight-chain, branched or cyclic alkyl, or C 1 to C 6 straight-chain, branched or cyclic alkyl substituted by halogen (preferably , Wherein R 1 is hydrogen, halogen, C 1 to C 4 straight-chain, branched or cyclic alkyl, or halogen-substituted C 1 to C 4 straight-chain, branched or cyclic alkyl).
  • X is halogen or cyano (-CN);
  • Q 1 to Q 4 are each independently CH or CX.
  • the piperidinedione derivative compound according to the present invention is a target protein ligand, nuclear receptor (e.g., ER, AR, RAR, etc.), protein kinase (e.g., Akt, c-Abl, BTK, anaplastic lymphoma kinase [ALK], CDK9, c-Met, RIPK2, DAPK1, PSD-95, etc.), proteins involved in transcriptional regulation (eg, BRD4, Sirt2, HDAC6, TRIM24, IKZH1/3, Smad3, etc.), regulatory proteins (e.g.
  • nuclear receptor e.g., ER, AR, RAR, etc.
  • protein kinase e.g., Akt, c-Abl, BTK, anaplastic lymphoma kinase [ALK], CDK9, c-Met, RIPK2, DAPK1, PSD-95, etc.
  • proteins involved in transcriptional regulation eg, BRD4, Sirt2, HDAC
  • CRABP-I/II TACC3, AHR, FKBP12, ERR ⁇ , SHP2, X-protein, PTPN11, etc.
  • neurodegenerative related proteins e.g. Huntingtin, Tau, a-synuclein, PSD-95 etc.
  • cellular metabolism enzymes eg MetAP-2, DHODH
  • fusion proteins eg Alk-fusion, BCR-Abl, Brd-Nut, Ret-fusion, Halo Tags, etc.
  • mutant proteins eg Alk-fusion, BCR-Abl, Brd-Nut, Ret-fusion, Halo Tags, etc.
  • compounds that target proteins such as Braf mutant, EGFR mutant and deletion, Kras mutant, TP53 mutant and splicing variant, etc.
  • abnormal modified protein eg EGFRdel19, P53 splicing variant, fusion proteins, etc.
  • a compound targeting the c-MET protein may be used as the target protein ligand
  • the target protein ligand is a compound that is a c-MET inhibitor, preferably a compound selected from the group consisting of the following compounds:
  • the right side of the target protein ligand may covalently bind to any one carbon atom of Q1 to Q4 in the chemical compound of Formula 3 or 4, which is an E3 enzyme ligand.
  • an E3 enzyme ligand may be removed during the covalent bonding reaction at the site where the target protein ligand and the E3 enzyme ligand are covalently bonded to each other.
  • the protac compound can be usefully used for the treatment or prevention of diseases related to the target protein.
  • the compound of the present invention has an excellent anticancer effect, and further induces the degradation of c-MET protein to exhibit a therapeutic effect on diseases related to c-MET.
  • FIG. 1 schematically shows a protac compound consisting of a target protein ligand, a linker, and an E3 enzyme ligand.
  • Figure 2 shows the experimental results confirming the proteolytic effect of the compound of the present invention in the MKN45 cell line.
  • Figure 3 shows the experimental results confirming the proteolytic effect of the compound of the present invention in SNU638, Hs746T, EBC-1 cell lines.
  • Figure 6 shows the experimental results confirming the inhibition of SNU638, Hs746T, EBC-1 cancer cell proliferation of the compound of the present invention.
  • Figure 7 shows the experimental results of confirming whether the compound of the present invention has an inhibitory effect on normal cell proliferation.
  • Figure 8 shows the experimental results confirming the cell signaling inhibitory effect of each concentration of the compound of the present invention.
  • Figure 9 shows the experimental results confirming the cell signaling inhibitory effect over time of the compound of the present invention in SNU638 cells.
  • 10 to 14 show experimental results confirming the anticancer effect by intraperitoneal administration of the compound of the present invention in mice transplanted with SNU638 tumor cells.
  • Figure 15 shows the experimental results confirming the anticancer effect by oral administration of the compound of the present invention in mice transplanted with SNU638 tumor cells.
  • the scaffold of the oxophthalazinyl piperidione compound of Formula 1, which can be used as an E3 enzyme ligand in the protac compound of the present invention, can be prepared through the reaction steps of Scheme 1 or Scheme 2 below. can:
  • X is hydrogen, halogen or cyano.
  • the display of substituents that can be bonded to carbon in Q 1 to Q 4 of the compound of Formula 1 is omitted, and among R 1 substituents, only simple substituents such as hydrogen or methyl are representative. indicated.
  • methyl 4-fluoro-2-methylbenzoate was prepared from 4-fluoro-2-methylbenzoic acid.
  • methyl 5-fluoro-2-methylbenzoate was prepared from 5-fluoro-2-methylbenzoic acid.
  • a c-MET target protein ligand compound of the following formula can be prepared through the following reaction process:
  • reaction was stirred at 90° C. for 2 hours. After completion of the reaction, the reaction was poured into water, extracted with ethyl acetate (twice), dried over MgSO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by hexane/ethyl acetate (30-50%) column chromatography to obtain the title compound (5 g).
  • c-MET overexpressing human gastric cancer cell lines MKN45 and SNU638 were cultured in RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum, penicillin (100 U/ml) and streptomycin (100 mg/ml), and c-MET exon 14
  • the human gastric cancer cell line Hs746T with deletion (exon 14 skipping) was cultured in DMEM medium.
  • the human lung cancer cell line EBC-1 overexpressing c-MET was cultured in MEM medium supplemented with 10% fetal bovine serum, penicillin (100 U/ml) and streptomycin (100 mg/ml).
  • Normal cell line WI-38 derived from human lung tissue was cultured in EMEM medium supplemented with 10% fetal bovine serum, penicillin (100 U/ml) and streptomycin (100 mg/ml).
  • the compound synthesized according to the present invention was prepared as a 10 mM raw material solution dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO), and was diluted and treated sequentially.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • cells were dispensed at a concentration of 2 ⁇ 10 5 cells/well in a 12-well plate, and gastric cancer cell lines were sampled for 24 hours. and lung cancer cell lines were treated for 48 hours.
  • compound-treated cells were treated with 40 ⁇ L of RIPA buffer to which protease inhibitors were added for 30 minutes, and then incubated on ice.
  • the cell lysate was collected using a scraper from above, and centrifuged at 4° C. and 15,000 rpm for 30 minutes to obtain a protein-containing supernatant.
  • protein expression was measured using the Simple Western Automated Western Blot System Abby device using 3 ⁇ g of protein per sample. SDS and heat-denatured proteins are separated by molecular weight, attached to a capillary, reacted with a primary antibody, anti-c-MET or anti-GAPDH antibody, and then with an HRP-conjugated secondary antibody. After reacting, protein expression signals were analyzed with compass software.
  • Protein expression was normalized based on the expression value of GAPDH, and the protein expression amount in each sample was measured as a percentage (%) based on 100% of the sample treated with 0.1% DMSO vehicle, and the compound treatment DC 50 (the concentration of the compound at which 50% inhibition of protein expression is achieved) was calculated from the change in the amount of protein expression by .
  • Table 3 DC 50 and IC 50 of the compounds of the present invention in HS746T cell line
  • the cells were dispensed in a 96 well plate at a concentration of 5,000 cells/well, and then treated with the compound of the present invention prepared at various concentrations for 72 hours.
  • Cell viability was measured by adding 10 ml of WST-8 (water soluble tetrazolium salt) sample per well, which reacts with dehydrogenase present in the mitochondrial electron transport system to produce formazan, After incubation for 2 hours, absorbance was measured at 450 nm and the obtained value was calculated using GraphicPad Prism 8.0 software.
  • the IC 50 value (the concentration of the compound that achieves 50% inhibition of cell proliferation) is the average value of the measurement results. The results are shown in Tables 1 to 4 and FIGS. 4 to 6.
  • the compounds of the present invention showed an effect of inhibiting the proliferation of cancer cells, and in particular, the compounds of Examples 1, 2 and 10, which effectively decompose c-MET, are gastric cancer cell lines at low concentrations of less than 5 nM. Proliferation of MKN45 was effectively inhibited (see Table 1 and FIGS. 4 and 5). In addition, the compounds of Examples 1, 2 and 10 effectively inhibited the proliferation of cancer cells at a concentration of less than 100 nM in other gastric cancer cell lines, SNU638 and Hs746T, and lung cancer cell line EBC-1.
  • the normal cell line WI-38 was dispensed at a concentration of 5,000 cells/well in a 96 well plate, and then the compound of the present invention prepared at various concentrations treated for 72 hours.
  • Cell viability was measured by adding 10 ml of WST-8 (water soluble tetrazolium salt) sample per well, which reacts with dehydrogenase present in the electron transport system to mitochondria to produce formazan, and incubated for 2 hours. , the absorbance was measured at 450 nm and the value obtained was calculated using GraphicPad Prism 8.0 software.
  • the IC 50 value (the concentration of the compound that achieves 50% inhibition of cell proliferation) is the average value of the measurement results. The results are shown in Table 5 and FIG. 7 .
  • the gastric cancer cell line SNU638 was dispensed in a 6 well plate at a concentration of 5 ⁇ 10 5 cells/well, and then prepared at various concentrations according to the present invention. was treated for 24 hours with the compound of
  • the samples were treated at a concentration of 30 nM, and then cells were obtained over time.
  • compound-treated cells were treated with 70 ⁇ L of RIPA buffer with protease inhibitors added for 30 minutes, then cell lysates were collected using a scraper on ice, and 4 A supernatant containing protein was obtained by centrifugation at 15,000 rpm for 30 minutes.
  • the compounds of the present invention inhibited the activation of ERK and AKT signals in cancer cells induced by c-MET in proportion to the treatment concentration.
  • FIG. 9 it was confirmed that inhibition of ERK and AKT signaling in cancer cells was maintained for a longer period of time compared to cell lines treated with the small molecule inhibitor tepotinib.
  • the stomach mice were randomly divided into groups (distributed 5 mice per group), and the carrier and the compound of the present invention were intraperitoneally administered (FIGS. 10 to 14) and orally administered (FIG. 15). was treated daily for 2 weeks, and the body weight and tumor size of the mice were measured every 3 days.
  • the tumor was removed and weighed.
  • the protein was obtained by crushing the tumor and confirmed using a western blotting assay. The results are shown in FIGS. 10 to 15, respectively.
  • mice As can be seen from the experimental results, almost no change in the body weight of mice was observed during the treatment period of the compound, and when the compound of the present invention was administered intraperitoneally or orally, it effectively inhibited the growth of human gastric cancer cell lines transplanted into mice. Apoptosis of the tumor was induced.
  • the compounds according to the present invention can be usefully used as anticancer agents.

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Abstract

신규한 피페리딘디온 유도체 화합물을 개시한다.

Description

피페리딘디온 유도체
본 발명은 피페리딘디온 유도체 화합물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 표적단백질 리간드 및 E3 효소 리간드가 연결되어 있는 구조의 피페리딘디온 유도체 화합물에 관한 것이다.
프로탁(PROTACs)은 프로테올리시스 타겟팅 키메라(PROteolysis TArgeting Chimeras)의 약자로서, 표적단백질(POI: protein of interest)의 분해를 유도하는 기술이다. 프로탁이라는 용어 대신에 TPD (표적 단백질 분해: Targeted Protein Degradation) 라는 용어가 사용되기도 한다.
프로탁은 표적단백질 리간드 및 E3 효소 리간드가 링커에 의하여 연결되어 있는 구조이다(도 1 참조). 표적단백질 리간드는 질병과 관련된 표적 단백질에 결합할 수 있는 구조이며, E3 효소 리간드는 E3 효소와 결합할 수 있는 구조이다.
E3 효소(E3 리가아제)는 표적단백질에 유비퀴틴이라는 표지를 붙일 수 있고, 이러한 유비퀴틴 표지가 붙은 표적단백질은 프로테아좀에 의하여 분해된다.
프로탁 화합물의 표적단백질 리간드가 표적단백질에 결합한다면, 프로탁 화합물에 의하여 E3 효소가 표적단백질의 아주 가까운 거리에 위치하게 되며, 따라서 표적단백질이 프로테아좀에 의하여 제거될 수 있는 환경이 만들어지게 된다.
특히, 프로탁 화합물이 암세포의 증식에 관여하는 표적단백질에 결합한다면 해당 표적단백질의 분해를 유도하여 암 치료 효과를 거둘 수 있다.
본 발명은 표적단백질(특히 c-MET 단백질)의 분해 효과를 높여 TPD 용으로 사용될 수 있는 화합물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2022006949-appb-I000001
상기식에서,
Z는 표적단백질 리간드이고,
Q1 내지 Q4는 각각 독립적으로 C-Z, C-H, C-Hal 또는 C≡N이되(여기에서, Hal은 할로겐이다), 단 Q1 내지 Q4 중 어느 하나는 C-Z이며,
R1은 수소, 할로겐, 니트로, 아미노, C1 내지 C6의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, 또는 할로겐으로 치환된 C1 내지 C6의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬이다.
본 발명의 화합물에서 상기 R1은 수소, 할로겐, C1 내지 C4의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, 또는 할로겐으로 치환된 C1 내지 C4의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬인 것이 바람직하다.
본 발명의 화합물에서 상기 표적단백질 리간드로는 c_MET 억제제인 화합물이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이 사용될 수 있다:
Figure PCTKR2022006949-appb-I000002
또한, 본 발명은 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
[화학식 2]
Figure PCTKR2022006949-appb-I000003
상기식에서,
Y는 -C=O 또는 -CH2이고,
Z는 표적단백질 리간드이며,
Q1 내지 Q4는 각각 독립적으로 C-Z, C-H, C-Hal 또는 C≡N이되(여기에서, Hal은 할로겐이다), 단 Q1 내지 Q4 중 어느 하나는 C-Z이다.
본 발명의 화합물에서 상기 표적단백질 리간드로는 c-MET 억제제인 화합물이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이 사용될 수 있다:
Figure PCTKR2022006949-appb-I000004
상기 화합물은 예를 들어, 특허문헌 WO 2010/078897 A1호에 개시된 방법 또는 후술하는 실시예 B에 개시된 방법에 의하여 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 화합물은 바람직하게는 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure PCTKR2022006949-appb-I000005
Figure PCTKR2022006949-appb-I000006
또한, 본 발명에 따른 화합물은 바람직하게는 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염일 수 있다:
3-(6-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
3-(4-메틸-6-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
3-(7-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
3-(8-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
3-(4-메틸-8-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
3-(6-플루오로-7-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온
2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-메틸-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-메틸-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
본 발명에 따른 화합물은 표적단백질 리간드 및 E3 효소 리간드를 포함하는 화합물로서, 상기 표적단백질 리간드 및 E3 효소 리간드는 링커에 의하지 아니한 채 서로 직접 공유결합으로 연결되어 있으므로, 표적 단백질 분해를 위한 화합물로 유용하게 사용될 수 있다. 특히, 링커가 없이 표적 단백질 리간드 및 E3 효소 리간드가 직접 연결되어 있기 때문에, 화합물의 분자 크기를 최소화하여 물성을 우수하게 하고, 표적 단백질과 E3 리간드 사이의 단백질-단백질 상호작용을 극대화하여 효과적으로 표적단백질을 분해하는 것이 가능하다.
본 발명에서 E3 효소 리간드로는 하기 화학식 3의 화합물과 같은 옥소프탈라진 피페리딘디온 유도체 또는 하기 화학식 4의 화합물과 같은 디옥소피페리딘 이소인돌린디온 유도체가 사용될 수 있다:
[화학식 3]
Figure PCTKR2022006949-appb-I000007
상기식에서,
X는 할로겐 또는 시아노(-CN)이고,
Q1 내지 Q4는 각각 독립적으로 C-H 또는 C-X이며,
R1은 수소, 할로겐, 니트로, 아미노, C1 내지 C6의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, 또는 할로겐으로 치환된 C1 내지 C6의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬이다 (바람직하게는, 상기 R1은 수소, 할로겐, C1 내지 C4의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, 또는 할로겐으로 치환된 C1 내지 C4의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬이다).
[화학식 4]
Figure PCTKR2022006949-appb-I000008
상기식에서,
Y는 -C=O 또는 -CH2이고,
X는 할로겐 또는 시아노(-CN)이고,
Q1 내지 Q4는 각각 독립적으로 C-H 또는 C-X이다.
또한, 본 발명에 따른 피페리딘디온 유도체 화합물은 표적단백질 리간드로서, 핵 수용체(예를 들어, ER, AR, RAR 등), 단백질 키나제(예를 들어, Akt, c-Abl, BTK, anaplastic lymphoma kinase [ALK], CDK9, c-Met, RIPK2, DAPK1, PSD-95 등), 전사 조절에 관여하는 단백질(예를 들어, BRD4, Sirt2, HDAC6, TRIM24, IKZH1/3, Smad3 등), 조절 단백질(예를 들어, CRABP-I/II, TACC3, AHR, FKBP12, ERRα, SHP2, X-protein, PTPN11 등), 신경-퇴행성 관련 단백질(예를 들어, Huntingtin, Tau, a-synuclein, PSD-95 등), 세포 대사 효소(예를 들어, MetAP-2, DHODH), 융합 단백질(예를 들어, Alk-fusion, BCR-Abl, Brd-Nut, Ret-fusion, Halo Tags 등), 돌연변이 단백질(예를 들어, Braf mutant, EGFR mutant 및 deletion, Kras mutant, TP53 mutant 및 splicing varient 등), 비정상적 변형 단백질(예를 들어, EGFRdel19, P53 splicing varient, fusion proteins 등) 등을 표적단백질로 하는 화합물이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 c-MET 단백질을 표적으로 하는 화합물이 표적단백질 리간드로 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 c-MET 단백질과 관련있는 질병의 치료 또는 예방에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물에서 상기 표적단백질 리간드로는 c-MET 억제제인 화합물로서, 바람직하게는 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이 사용될 수 있다:
Figure PCTKR2022006949-appb-I000009
본 발명에서 상기 표적단백질 리간드의 우측은, E3 효소 리간드인 상기 화학식 3 또는 4의 화학물에서 Q1 내지 Q4 중의 어느 하나의 탄소 원자에 공유결합할 수 있다. 이와 같이 표적단백질 리간드 및 E3 효소 리간드가 서로 공유결합하여 연결되는 부위는 공유결합 반응 과정 중에서 일부 치환기가 이탈될 수 있음을 통상의 기술자는 이해할 수 있을 것이다.
본 발명의 화합물은 프로탁 화합물은 표적단백질(예를 들어, c-MET 단백질)결합하여 이를 분해할 수 있으므로, 표적단백질과 관련있는 질병의 치료 또는 예방에 유용하게 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 우수한 항암 효과를 가지며, 더 나아가서 c-MET 단백질의 분해를 유도하여 c-MET과 관련있는 질병에 대한 치료 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 표적단백질 리간드, 링커 및 E3 효소 리간드로 이루어지는 프로탁 화합물을 모식적으로 도시한 것이다.
도 2는 본 발명의 화합물의 MKN45 세포주에서의 단백질 분해 효과를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 화합물의 SNU638, Hs746T, EBC-1 세포주에서의 단백질 분해 효과를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 4 및 도 5는 본 발명의 화합물의 MKN45 암세포 증식 억제 효과를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 화합물의 SNU638, Hs746T, EBC-1 암세포 증식억제를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 화합물의 정상 세포 증식 억제 효과 여부를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 본 발명의 화합물의 농도 별 세포신호전달 억제 효과를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 SNU638 세포에서 본 발명의 화합물의 시간별 세포신호전달 억제 효과를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 10 내지 도 14는 SNU638 종양세포 이식 마우스에서 본 발명의 화합물의 복강투여에 의한 항암 효과를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 15는 SNU638 종양세포 이식 마우스에서 본 발명의 화합물의 경구투여에 의한 항암 효과를 확인한 실험 결과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 본 발명을 실시예에 의거하여 상세하게 설명하기로 한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 사상이나 범위가 어떤 의미로든 하기 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위하여 제공되는 것이다.
실시예 A: 옥소프탈라진일 피페리딘디온 유도체 화합물의 제조
본 발명의 프로탁 화합물에서 E3 효소 리간드로 사용될 수 있는 화학식 1의 옥소프탈라진일 피페리딘디온(oxophthalazinyl piperidione) 화합물의 기본골격(scaffold)은 하기 반응식 1 또는 반응식 2의 반응 단계를 거쳐 제조할 수 있다:
[반응식 1]
Figure PCTKR2022006949-appb-I000010
[반응식 2]
Figure PCTKR2022006949-appb-I000011
상기 반응식 1 또는 2에서, X는 수소, 할로겐 또는 시아노이다. 다만, 설명의 편의를 위하여, 상기 반응식에서는 화학식 1의 화합물 중 Q1 내지 Q4에서 탄소에 결합될 수 있는 치환기의 표시를 생략하였고, R1 치환기 중에서는 수소 또는 메틸과 같이 간단한 치환기만을 대표적으로 표시하였다.
이하에서는, 화학식 1의 화합물의 구체적인 예를 실시예를 통하여 제조한다.
실시예 A1:
화합물
Figure PCTKR2022006949-appb-I000012
의 제조
A1-1) 메틸 2-플루오로-6-메틸벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000013
실온에서, 아세톤 (200ml) 중의 2-플루오로-6-메틸벤조 산 (10g, 64.9 mmol) 용액에 K2CO3 (44.8g, 324 mmol)을 가하였다. 30분간 교반 후, 반응물에 요오드화 메탄 (46g, 324 mmol)을 가하고, 6시간 동안 60oC로 가열하였다. 냉각 후, 반응물을 여과하고, 감암 하에서 농축하였다. 생성물을 추가 정제없이 다음 반응에 사용하였다. (11.2g, 수율 103%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [168.3].
A1-2) 메틸 2-(브로모메틸)-6-플루오로벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000014
실온에서, ClCH2CH2Cl (250ml) 중의 메틸 2-플루오로-6-메틸벤조에이트 (21.2g, 126 mmol) 용액에 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (24.7g, 139mmol) 및 벤조일 벤젠카보퍼옥소에이트 (1.53g, 6.30mmol)을 순차적으로 가하였다. 반응물을 16시간 동안 가열 환류시켰다. 붉은 색이 사라지는 시점이 반응 완료 시점이다. 냉각 후, 반응물을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 조 생성물 을 추가 정제없이 다음 반응에 사용하였다. (35g, 수율 112%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [245.9].
A1-3) 메틸 2-플루오로-6-포르밀벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000015
실온에서, DCM (280ml) 중의 메틸 2-(브로모메틸)-6-플루오로벤조에이트 (35g, 142mmol) 용액에 NMO(24.9g, 212mmol)를 가하였다. 반응물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. DCM 층을 물(200ml)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 흰색 고체로서 수득하였다. (11.52g, 수율 45%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [183.1].
A1-4) 2-플루오로-6-포르밀벤조산 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000016
실온에서, THF (82ml) 중의 메틸 2-플루오로-6-포르밀벤조에이트 (11.5g, 63.2mmol) 용액에 리튬(+1) 하이드록사이드 (7.57g, 180mmol) 수용액(41ml)을 가하였다. 4시간 교반 후, 반응물을 감압 농축하여 THF를 건조시켰다. 0℃로 냉각시킨 후, 반응물을 1N HCl로 산성화시켜 pH를 4로 조정하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 (100ml)로 2회 추출하였다. 결합한 에틸 아세테이트 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켜, 흰색 결정을 수득하였다(10.4g, 97.8%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [168.8].
A1-5) 8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000017
실온에서, 메탄올 (120ml) 중의 2-플루오로-6-포르밀벤조산 (10.4g, 61.9mmol) 용액에 NH2NH2 일수화물 (3.72mg, 61.9mmol)을 가하고, 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 흰색 침전물을 여과하고, 메탄올로 세척하였다. 수득한 흰색 결정을 100ml의 에틸 아세테이트(EA)로 슬러리화하고, 여과하여 흰색 결정을 수득하였다(3.05g, 30%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [164.8].
A1-6) 3-(8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000018
0℃에서 DMF (5ml) 중의 8-플루오로프탈라진-1(2H)-온 (200mg, 1.22mmol) 용액에 NaH (60%, 53.6mg, 1.34mmol)을 가하고, 30분간 교반하였다. 이 용액에 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (468mg, 2.44mmol)을 가하고 6시간 동안 교반하였다. 물로 반응을 종결시키고, 에틸 아세테이트 (20ml)로 2회 추출하였다. 결합한 에틸 아세테이트를 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 흰색 결정으로 수득하였다(70mg, 20.8%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [276.1].
Figure PCTKR2022006949-appb-I000019
실시예 A2:
화합물
Figure PCTKR2022006949-appb-I000020
의 제조
A2-1) 메틸 5-플루오로-6-메틸벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000021
실온에서, 메탄올 (60ml) 중의 3-플루오로-2-메틸벤조 산 (10g, 64.9 mmol) 용액에 황산 (2ml)을 가하였다. 80oC로 가열하고, 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각 후, 반응물을 증발시키고, NaHCO3 및 에틸아세테이트(EA)로 추출하였다. MgSO4로 건조시켰다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 반응에 사용하였다. (10.1g, 수율 92%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [168.3].
A2-2) 메틸 2-(브로모메틸)-3-플루오로벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000022
실온에서, ClCH2CH2Cl (250ml) 중의 메틸 3-플루오로-2-메틸벤조에이트 (10g, 59.5mmol) 용액에 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (15.9g, 89.2mmol) 및 벤조일 벤젠카보퍼옥소에이트 (0.72g, 2.97mmol)을 순차적으로 가하였다. 반응물을 16시간 동안 가열 환류시켰다. 붉은 색이 사라지는 시점이 반응 완료 시점이다. 냉각 후, 반응물을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 반응에 사용하였다. (10.5g, 수율 71%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [245.9].
A2-3) 메틸 3-플루오로-2-포르밀벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000023
실온에서, DCM (200ml) 중의 메틸 2-(브로모메틸)-3-플루오로벤조에이트 (10g, 40.5mmol) 용액에 NMO (10.4g, 89mmol), 4Å 분자체를 가하였다. 반응물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. DCM 층을 물(200ml)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다. (5.5g, 75%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [183.1].
A2-4) 3-플루오로-2-포르밀벤조산 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000024
실온에서, THF (68ml) 중의 메틸 3-플루오로-2-포르밀벤조에이트 (2.5g, 13.7mmol) 용액에 리튬(+1) 하이드록사이드 일수화물 (2.88g, 68.6mmol) 수용액(41ml)을 가하였다. 4시간 교반 후, 반응물을 감압 농축하여 THF를 건조시켰다. 0℃로 냉각시킨 후, 반응물을 1N HCl로 산성화시켜 pH를 4로 조정하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 (100ml)로 2회 추출하였다. 결합한 에틸 아세테이트 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켜, 흰색 결정을 수득하였다(2.5g, 108%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [168.8].
A2-5) 5-플루오로-1,2-디하이드로프탈라진-1-온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000025
실온에서, THF:물=1:1 (70ml) 중의 3-플루오로-2-포르밀벤조산 (2.5g, 14.9mmol) 용액에 NH2NH2 일수화물 (1.22mg, 16.4mmol)을 가하고, 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 pH 4로 산성화하고, 고체를 헥산으로 여과하였다. 진공 건조시켜, 표제 화합물을 수득하였다(1.3g, 53%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [165.3]
A2-6) 3-(5-플루오로-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-2-일)피페리딘-2,6-디온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000026
0℃에서 DMF (10ml) 중의 5-플루오르-1,2-디하이드로로프탈라진-1-온 (300mg, 1.83mmol) 용액에 LDA (리튬 디이소프로필 아마이드, 2.19mmol)을 가하고, 30분간 교반하였다. 이 용액에 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (526mg, 2.74mmol)을 가하고 6시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응이 완료되면, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물(100ml)에 붓고, 6N HCl로 pH를 3~4로 조정하고, 그 후 에틸 아세테이트로 추출하고, 이를 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 생성물을 헥산으로 재결정하고, 진공 건조하여, 표제 화합물을 수득하였다. MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [276.1].
Figure PCTKR2022006949-appb-I000027
실시예 A3
화합물
Figure PCTKR2022006949-appb-I000028
의 제조
A3-1) 메틸 4-플루오로-6-메틸벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000029
실시예 A2-1의 제조방법에 준하여, 4-플루오로-2-메틸벤조산으로부터 메틸 4-플루오로-2-메틸벤조에이트를 제조하였다.
A3-2) 메틸 2-(브로모메틸)-4-플루오로벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000030
실온에서, ClCH2CH2Cl (100ml) 중의 메틸 4-플루오로-2-메틸벤조에이트 (20g, 119mmol) 용액에 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (31.8g, 178mmol) 및 벤조일 벤젠카보퍼옥소에이트 (1.92g, 5.95mmol)을 순차적으로 가하였다. 반응물을 3시간 동안 가열 환류시켰다. 붉은 색이 사라지는 시점이 반응 완료 시점이다. 냉각 후, 반응물을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 생성물을 MPLC (HX/EA EA 0 -> 5%)로 정제하였다(22g, 수율 75%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [248.4].
A3-3) 메틸 3-플루오로-2-포르밀벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000031
실온에서, DCM (100ml) 중의 메틸 2-(브로모메틸)-4-플루오로벤조에이트 (22g, 89mmol) 용액에 NMO (15.6mg, 134mmol) 및 4Å 분자체를 순차적으로 가하였다. 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 분자체를 여과하고, DCM (50ml)로 세척하였다. DCM 층을 물(200ml)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 흰색 고체로서 수득하였다. (12g, 73.98%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [183.2].
A3-4) 4-플루오로-2-포르밀벤조산 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000032
실온에서, THF (50ml) 중의 메틸 4-플루오로-6-포르밀벤조에이트 (12g, 65.9mmol) 용액에 리튬(+1) 하이드록사이드 (13.8g, 329mmol) 수용액(50ml)을 가하였다. 2시간 교반 후, 반응물을 감압 농축하여 THF를 건조시켰다. 0℃로 냉각시킨 후, 반응물을 1N HCl로 산성화시켜 pH를 4로 조정하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 (50ml)로 2회 추출하였다. 결합한 에틸 아세테이트 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켜, 흰색 결정을 수득하였다(10g, 90.3%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [169.2].
A3-5) 6-플루오로-1,2-디하이드로프탈라진-1-온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000033
실온에서, 메탄올 (50ml) 중의 4-플루오로-2-포르밀벤조산 (6.78g, 40.3mmol) 용액에 NH2NH2 일수화물 (2.02g, 40.3mmol)을 가하였다. 30분간 교반 후, 반응물을 2시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 농축하였다. 잔사를 물(150ml)에 붓고, 에틸 아세테이트 (150ml)로 2회 추출하였다. 결합한 에틸 아세테이트 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켜, 흰색 결정을 수득하였다(5.5g, 83.07%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [165.3].
A3-6) 3-(6-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000034
0℃에서 DMF (2ml) 중의 6-플루오르-1,2-디하이드로로프탈라진-1-온 (100mg, 0.609mmol) 용액에 소듐 2-메틸프로판-2-올레이트 (175mg, 0.914mmol)을 가하였다. 30분간 교반한 후, 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (90mg, 0.471mmol)을 반응 혼합물에 가하고 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물에 물(20ml)을 붓고, 에틸 아세테이트(20ml)로 2회 추출하였다. 결합된 에틸 아세테이트를 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 잔사를 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 흰색 결정으로 수득하였다(110mg, 65.5%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [276.6].
Figure PCTKR2022006949-appb-I000035
실시예 A4
화합물
Figure PCTKR2022006949-appb-I000036
의 제조
A4-1) 메틸 4-플루오로-6-메틸벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000037
실시예 A2의 제조방법에 준하여, 5-플루오로-2-메틸벤조산으로부터 메틸 5-플루오로-2-메틸벤조에이트를 제조하였다.
A4-2) 메틸 2-(브로모메틸)-5-플루오로벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000038
실온에서, ClCH2CH2Cl (100ml) 중의 메틸 5-플루오로-2-메틸벤조에이트 (20g, 119mmol) 용액에 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (31.8g, 178mmol) 및 벤조일 벤젠카보퍼옥소에이트 (1.92g, 5.95mmol)을 순차적으로 가하였다. 반응물을 3시간 동안 가열 환류시켰다. 붉은 색이 사라지는 시점이 반응 완료 시점이다. 냉각 후, 반응물을 물로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 생성물을 MPLC (HX/EA EA 0 -> 5%)로 정제하였다(29g, 수율 98.8%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [248.4].
A4-3) 메틸 5-플루오로-2-포르밀벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000039
실온에서, DCM (100ml) 중의 메틸 2-(브로모메틸)-5-플루오로벤조에이트 (29g, 117mmol) 용액에 NMO (20.6mg, 176mmol) 및 4Å 분자체를 순차적으로 가하였다. 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 분자체를 여과하고, DCM (50ml)로 세척하였다. DCM 층을 물(200ml)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 흰색 고체로서 수득하였다. (15g, 수율 70.16%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [183.2].
A4-4) 5-플루오로-2-포르밀벤조산 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000040
실온에서, THF (50ml) 중의 메틸 5-플루오로-2-포르밀벤조에이트 (15g, 82.3mmol) 용액에 리튬(+1) 하이드록사이드 (17.3g, 412mmol) 수용액(50ml)을 가하였다. 2시간 교반 후, 반응물을 감압 농축하여 THF를 건조시켰다. 0℃로 냉각시킨 후, 반응물을 1N HCl로 산성화시켜 pH를 4로 조정하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 (50ml)로 2회 추출하였다. 결합한 에틸 아세테이트 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켜, 흰색 결정을 수득하였다(12g, 86.67%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [169.2].
A4-5) 7-플루오로-1,2-디하이드로프탈라진-1-온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000041
실온에서, 메탄올 (50ml) 중의 5-플루오로-2-포르밀벤조산 (8.16g, 48.5mmol) 용액에 NH2NH2 일수화물 (3.74g, 74.8mmol)을 가하였다. 30분간 교반 후, 반응물을 2시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 농축하였다. 잔사를 물(150ml)에 붓고, 에틸 아세테이트 (150ml)로 2회 추출하였다. 결합한 에틸 아세테이트 층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켜, 흰색 결정을 수득하였다(6.5g, 81.59%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [165.3].
A4-6) 3-(7-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000042
0℃에서 DMF (5ml) 중의 7-플루오르-1,2-디하이드로로프탈라진-1-온 (500mg, 3.05mmol) 용액에 소듐 2-메틸프로판-2-올레이트 (586mg, 6.09mmol)을 가하였다. 30분간 교반한 후, 3-브로모피페리딘-2,6-디온 (1.05mg, 5.48mmol)을 반응 혼합물에 가하고 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50ml)에 붓고, 에틸 아세테이트(50ml)로 2회 추출하였다. 결합된 에틸 아세테이트를 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 흰색 결정으로 수득하였다(300mg, 35.78%). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [276.6].
Figure PCTKR2022006949-appb-I000043
실시예 A5
화합물
Figure PCTKR2022006949-appb-I000044
의 제조 (반응식 2에 준하여 제조함)
A5-1) 메틸 2-아세틸-6-플루오로벤조에이트 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000045
톨루엔 (20ml) 중의 메틸 2-아세틸-6-플루오로벤조에이트 (1.12g, 4.81mmol) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)주석 (1.91g, 5.29mmol) 용액에 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(0) (557mg, 0.48mmol)을 가하고, 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 5ml의 1N-HCl을 가하고, 1시간 동안 교반하였다. 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 감암 하에 농축하였다. 잔사를 실리카 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. (820mg, 수율 87%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [196.8].
A5-2) 2-아세틸-6-플루오로벤조 산 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000046
THF (20ml) 및 물 (10ml) 중의 메틸 2-아세틸-6-플루오로벤조에이트 (810mg, 4.13mmol) 용액에 LiOH (494mg, 20.6mmol)을 가하고, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 용액을 1N-HCl로 산성화시켜 pH가 약 3이 되도록 하였다. 100ml EA를 가하고, 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축하여 표제화합물을 수득하였다. (810mg 수율 108%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [183.1].
A5-3) 8-플루오로-4-메틸프탈라진-1(2H)-온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000047
메탄올 (23ml) 중의 2-아세틸-6-플루오로벤조 산 (790mg, 4.34mmol) 용액에 히드라진 일수화물 (261mg, 5.20mmol)을 가하고, 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 침전물을 여과하고, ACN (아세토니트릴)로 세척하여, 표제 화합물 을 흰색 고체로서 수득하였다. (612mg, 수율 79.2%) MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [179.1].
A5-4) 3-(8-플루오로-4-메틸-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000048
0℃에서 THF(30 ml) 중의 8-플루오로-4-메틸프탈라진-1(2H)-온(534 mg, 3 mmol) 용액에 1M-Lithium diisopropylamide (3.6 ml, 3.6 mmol)을 가하고, 20분간 교반하였다. 이 용액에 3-브로보피페리딘-2,6-디온(863 mg, 4.5 mmol)을 가하고 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 농축하여 건조시켰다. 물(10 ml)를 넣고 1시간 교반 후, 1N-HCl로 산성화시켜 pH를 4로 조정하였다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하여, 표제 화합물을 흰색 고체로서 수득하였다(760 mg, 수율: 86.5 %). MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [289.8].
Figure PCTKR2022006949-appb-I000049
실시예 A6: 3-(6-브로모-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온의 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000050
A6-1) 5-브로모-3-하이드록시이소벤조푸란-1(3H)-온의 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000051
200 ml 의 ClCH2CH2Cl 중의 5-브로모프탈라이드 (5.2 g, 24.4 mmol) 및 N-브로모숙신이미드 (5.6 g, 31.7 mmol) 혼합물에 AIBN (401 mg, 2.44 mmol)을 가하고, 8시간 동안 환류시켰다. 반응에 뒤이어 TLC를 진행하였다. 숙신이미드를 여과하고, 케이크를 ClCH2CH2Cl (50 mL)로 세척하였다. 용매를 진공에서 제거하여, 잔사 5.2g를 남기고, 여기에 50 ml 물을 가하였다. 혼합물을 4시간 동안 교반하면서 환류시키고, 혼합물을 냉각시키고, 생성물을 여과하고, 물로 중화 세척하고, 건조하여, 옅은 황백색의 결정을 수득하였다. (4.85g, 수율 86.7%)
MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [229.6] and [230.5]
A6-2) 6-브로모프탈라진-1(2H)-온의 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000052
MeOH (50 mL) 중의 5-브로모-3-하이드록시-1,3-디하이드로-2-벤조푸란-1-온 (1.5g, 6.55 mmol) 용액에 NH2NH2 H2O (315 mg, 9.82 mmol)를 실온에서 가하고, 30분간 교반하였다. 반응을 5시간 동안 환류시켰다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 농축하였다. 생성된 고체를 에틸 아세테이트로 분쇄(trituration)하여, 흰색 결정을 수득하였다. (1.31g, 5.82 mmol)
MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [226.3].
A6-3) 3-(6-브로모-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온의 제조
Figure PCTKR2022006949-appb-I000053
THF (150 mL) 중의 6-브로모-1,2-디하이드로프탈라진-1-온 (1.31g, 5.82mmol) 현탁액에 1.0 M LDA (7.33 mL)을 0℃에서 적가하였다. 30분간 교반한 후, 3-브로모피페리딘-2,6-디온을 반응물에 일부분씩 가하였다. 반응물을 80℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응이 종료되면, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물(100 ml)에 붓고, 6N HCl로 pH를 3~4로 조정하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 이를 MgSO4로 건조시키고, 감압 농축하였다. 생성된 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하여, 흰색 결정을 수득하였다.(1.73g, 5.15 mmol)
MS (ESI, m/z): [M+1]+ = [337.2].
[NMR] 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11.08 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.18-8.16 (m, 1H), 8.06-8.04 (m, 1H), 5.84-5.80 (m, 1H), 2.93 - 2.90 (m, 1H), 2.65 - 2.54 (m, 2H), 2.15 - 2.12 (m, 1H).
실시예 B : (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 합성
하기 반응 공정을 거쳐서 하기 화학식의 c-MET 표적 단백질 리간드 화합물을 제조할 수 있다:
Figure PCTKR2022006949-appb-I000054
Step 1) t-부틸 (2S)-2-{[(4-메틸벤젠술포닐)옥시]메틸}모르폴린-4-카복실레이트 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000055
DCM (500 ml) 중의 t-부틸 (2S)-2-(하이드록시메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (10 g, 46 mmol) 용액에 4-메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (9.65 g, 50.6 mmol), N,N-디메틸피리딘-4-아민(0.84 g, 6.9 mmol) 및 트리에틸아민 (3.0 당량)을 가하였다. 반응물을 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 물에 붓고, DCM으로 추출하고(2 회), MgSO4로 건조하고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 헥산/에틸 아세테이트 (0~30%) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (17 g) 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 372.4.
Step 2) t-부틸 (2S)-2-(아지도메틸)모르폴린-4-카복실레이트 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000056
DMF (500 ml) 중의 t-부틸 (2S)-2-{[(4-메틸벤젠술포닐)옥시]메틸}모르폴린-4-카복실레이트 (17 g, 45.8 mmol) 용액에 소듐 아자이드 (12 g, 183 mmol), 소듐 아이오다이드 (1.03 g, 6.86 mmol)를 가하였다. 반응물을 12 시간 동안 70℃에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 물에 붓고, 에틸 아세테이트으로 추출하고(2 회), MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 헥산/에틸 아세테이트 (0~30%) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물 (10.2 g)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 243.4.
Step 3) t-부틸 (2R)-2-(아미노메틸)모르폴린-4-카복실레이트 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000057
MeOH (500 ml) 중의 t-부틸 (2S)-2-(아지도메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (9.5 g, 39.2 mmol) 용액에 Pd/C (2 g, 5%)를 가하고, 이후 H2 (가스) 하에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통하여 여과하고, 감압 하에서 농축하였다. 표제 화합물(8.4 g)을 추가 정제 없이 다음 반응에서 바로 사용하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 217.4.
Step 4) t-부틸 (2R)-2-{[(3-아미노-6-브로모피라진-2-일)아미노]메틸}모르폴린-4-카복실레이트 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000058
DMSO (300 ml) 중의 t-부틸 (2R)-2-(아미노메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (8.4 g, 38.8 mmol) 및 3,5-디브로모피라진-2-아민 (11.8 g, 46.6 mmol) 용액에 트리에틸아민(3.0 당량)을 가하였다. 반응물을 12 시간 동안 150℃에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하고(2 회), MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 헥산/에틸 아세테이트(20~50%) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(8.5g)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 389.4.
Step 5) t-부틸 (2S)-2-({5-브로모-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일}메틸)모르폴린-4-카복실레이트 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000059
DMF(300 ml) 중의 t-부틸 (2R)-2-{[(3-아미노-6-브로모피라진-2-일)아미노]메틸}모르폴린-4-카복실레이트 (8.4 g, 21.6 mmol) 용액에 이소아밀 니트라이트(isoamyl nitrite) (3.8 g, 32.5 mmol)를 가하였다. 반응물을 3 시간 동안 70℃에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하고(2 회), MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 헥산/에틸 아세테이트 (0~30%) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(7.5g)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 400.4.
Step 6) t-부틸 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린-4-카복실레이트 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000060
1,4-디옥산 (300 ml) 및 H2O (100 ml) 중의 t-부틸 (2S)-2-({5-브로모-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일}메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (7.5 g, 18.8 mmol), 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (4.7 g, 22.5 mmol) 및 세슘 카보네이트(18.4 g, 56.4 mmol) 용액에 Pd(dppf)Cl2 (0.7 g, 0.95 mmol)를 가하였다. 반응물을 2 시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하고(2 회), MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를 헥산/에틸 아세테이트 (10~30%) 컬럼 크로마토그래피로로 정제하여, 표제 화합물(7.1 g)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 401.4.
Step 7) (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000061
DCM (300 ml) 중의 t-부틸 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린-4-카복실레이트 (7.1 g, 17.7 mmol) 용액에 TFA (100 ml)를 가하였다. 반응물을 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 혼합물 감압 하에서 농축하였다. 표제 화합물(4.8 g)을 추가 정제 없이 다음 반응에 바로 사용하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 301.4.
Step 8) (2S)-4-(5-브로모피리미딘-2-일)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000062
EtOH(300 ml) 중의 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린 (4.8 g, 16 mmol) 및 5-브로모-2-클로로피리미딘 (4.64 g, 24 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 가하였다. 반응물을 9 시간 동안 50℃에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 표제 화합물을 EtOH로 재결정하였다. 표제 화합물(5.5 g)을 추가 정제 없이 다음 반응에 바로 사용하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 458.4.
Step 9) 4-{2-[(2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린-4-일]피리미딘-5-일}벤즈알데하이드 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000063
1,4-디옥산 (150 ml) 및 H2O (50 ml) 중의 (2S)-4-(5-브로모피리미딘-2-일)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린 (5.5 g, 12 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤즈알데하이드 (4.2 g, 18 mmol), 세슘 카보네이트(8.31 g, 60.1 mmol) 용액에 Pd(dppf)Cl2 (1.8 g, 2.41 mmol)를 가하였다. 반응물을 2 시간 동안 90℃에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하고(2 회), MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 헥산/에틸 아세테이트 (30~50%) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(5 g)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 483.4.
Step 10) t-부틸 4-[(4-{2-[(2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린-4-일]피리미딘-5-일}페닐l)메틸]피페라진-1-카복실레이트 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000064
DCM (250 ml) 중의 4-{2-[(2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린-4-일]피리미딘-5-일}벤즈알데하이드 (5 g, 10.4 mmol) 및 t-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (4.8 g, 26 mmol) 용액에 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (3.9 g, 18.7 mmol) 및 AcOH(1 ml)를 가하였다. 반응물을 18 시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 물에 붓고, DCM으로 추출하고(2 회), MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄/메탄올 (0~10%) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(6.7g)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 653.8.
Step 11) (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 합성
Figure PCTKR2022006949-appb-I000065
DCM (150 ml) 중의 t-부틸 4-[(4-{2-[(2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}모르폴린-4-일]피리미딘-5-일}페닐l)메틸]피페라진-1-카복실레이트 (6.7 g, 10.3 mmol) 용액에 TFA (50 ml)를 가하였다. 반응물을 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄/메탄올 (0~10%) 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(6.7g)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 553.6.
실시예 C : TPD 용 화합물의 제조
실시예 1:
3-(6-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
Figure PCTKR2022006949-appb-I000066
NMP (N-메틸-2-피롤리돈) (3ml) 중의 3-(6-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)-4-(5-(4-(피페라진-1-일메틸)페닐)피리미딘-2-일)모르폴린 (100 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC(중압 액체 크로마토그래피)로 정제하여, 표제 화합물(70 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 808.8
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 11.01 (s, 1 H) 9.21 (s, 1 H) 8.72 - 8.80 (m, 2 H) 8.64 (s, 1 H) 8.31 (s, 1 H) 8.22 - 8.27 (m, 1 H) 8.05 (t, J=8.32 Hz, 1 H) 7.59 - 7.69 (m, 2 H) 7.46 - 7.54 (m, 1 H) 7.34 - 7.46 (m, 1 H) 7.26 (d, J=5.49 Hz, 1 H) 5.75 (d, J=6.87 Hz, 1 H) 4.86 - 5.00 (m, 3 H) 4.79 (d, J=10.68 Hz, 2 H) 4.73 (d, J=12.66 Hz, 2 H) 4.39 (d, J=12.51 Hz, 1 H) 4.22 (br. s., 1 H) 3.88 - 3.98 (m, 4 H) 3.64 (s, 1 H) 3.39 - 3.62 (m, 7 H) 3.07 - 3.17 (m, 2 H) 2.85 - 2.98 (m, 2 H) 2.14 - 2.21 (m, 2 H).
실시예 2:
3-(4-메틸-6-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
Figure PCTKR2022006949-appb-I000067
NMP(3ml) 중의 3-(6-플루오로-4-메틸-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 (100 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(75 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 822.92
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.98 (s, 1 H) 9.21 (s, 2 H) 8.78 (s, 2 H) 8.65 (s, 2 H) 8.31 (s, 2 H) 7.86 - 8.03 (m, 1 H) 7.50 (d, J=8.70 Hz, 1 H) 4.86 - 4.99 (m, 3 H) 4.73 (d, J=12.05 Hz, 1 H) 4.39 (d, J=13.73 Hz, 1 H) 3.90 - 3.98 (m, 9 H) 3.36 - 3.54 (m, 11 H) 3.07 - 3.17 (m, 2 H) 2.53 - 2.66 (m, 6 H).
실시예 3:
3-(7-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
Figure PCTKR2022006949-appb-I000068
NMP(3ml) 중의 3-(7-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 (100mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여 표제 화합물(60 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 808.8
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.92 (s, 1 H) 9.21 (s, 2 H) 8.88 (s, 1 H) 8.73 - 8.78 (m, 1 H) 8.62 - 8.68 (m, 2 H) 8.29 - 8.35 (m, 2 H) 8.26 (d, J=5.95 Hz, 2 H) 7.91 - 8.00 (m, 1 H) 7.43 (d, J=8.09 Hz, 1 H) 4.81 - 4.99 (m, 2 H) 3.88 - 3.96 (m, 9 H) 3.41 - 3.51 (m, 1 H) 3.29 - 3.47 (m, 11 H) 3.06 - 3.18 (m, 2 H) 2.53 - 2.68 (m, 3 H).
실시예 4:
3-(8-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
Figure PCTKR2022006949-appb-I000069
NMP(3ml) 중의 3-(8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 (100mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(53 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 808.8
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.92 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 8.69 (s, 2 H) 8.57 (s, 1 H) 8.24 (s, 1 H) 8.21 (s, 1 H) 7.69 - 7.75 (m, 1 H) 7.56 (d, J=8.09 Hz, 2 H) 7.31 - 7.39 (m, 2 H) 7.26 (d, J=8.24 Hz, 1 H) 4.79 - 4.93 (m, 2 H) 4.66 (d, J=12.51 Hz, 1 H) 4.30 (br. s., 1 H) 3.82 - 3.90 (m, 4 H) 3.28 - 3.45 (m, 14 H) 2.99 - 3.10 (m, 3 H) 2.55 (br. s., 3 H).
실시예 5:
3-(4-메틸-8-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
Figure PCTKR2022006949-appb-I000070
NMP(3ml) 중의 3-(8-플루오로-4-메틸-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 (100 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(45 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 822.92
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.92 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 8.74 (s, 2 H) 8.58 (s, 1 H) 8.24 (s, 1 H) 7.80 (t, J=8.09 Hz, 1 H) 7.73 (d, J=7.02 Hz, 1 H) 7.58 (br. s., 1 H) 7.48 (d, J=7.93 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.39 Hz, 1 H) 4.79 - 4.93 (m, 2 H) 4.67 (d, J=12.82 Hz, 1 H) 4.33 (d, J=13.28 Hz, 1 H) 3.82 - 3.91 (m, 4 H) 3.29 - 3.47 (m, 14 H) 3.01 - 3.11 (m, 2 H) 2.78 - 2.90 (m, 1 H) 2.46 - 2.63 (m, 3 H) 2.43 (s, 3H).
실시예 6:
3-(6-플루오로-7-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
Figure PCTKR2022006949-appb-I000071
NMP(3ml) 중의 3-(6,7-디플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50mg, 0.182 mmol) 및 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 (100 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(50 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 826.82
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.98 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 8.74 (s, 2 H) 8.58 (s, 1 H) 8.26 - 8.35 (m, 1 H) 8.24 (s, 1 H) 7.81 - 7.91 (m, 1 H) 7.71 - 7.81 (m, 2 H) 7.67 (d, J=8.39 Hz, 1 H) 7.55 (br. s., 3 H) 5.72 (br. s., 1 H) 4.78 - 4.92 (m, 2 H) 4.67 (d, J=12.51 Hz, 1 H) 4.40 (br. s., 1 H) 4.33 (d, J=13.28 Hz, 1 H) 4.15 (br. s., 1 H) 3.79 - 3.92 (m, 4 H) 3.73 (br. s., 2 H) 3.39 - 3.51 (m, 3 H) 3.18 (br. s., 3 H) 3.01 - 3.13 (m, 3 H) 2.76 - 2.92 (m, 1 H) 2.45 - 2.59 (m, 3 H).
실시예 7:
2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온
Figure PCTKR2022006949-appb-I000072
NMP(3ml) 중의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (50mg, 0.182 mmol) 및 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 (100 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(80 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 809.82
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 11.03 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 8.70 (s, 2 H) 8.58 (s, 1 H) 8.24 (s, 1 H) 7.64 (t, J=7.63 Hz, 1 H) 7.58 (br. s., 1 H) 7.37 (br. s., 2 H) 7.23 - 7.34 (m, 2 H) 5.02 (dd, J=12.66, 5.34 Hz, 1 H) 4.78 - 4.96 (m, 2 H) 4.66 (d, J=12.51 Hz, 2 H) 4.32 (d, J=13.12 Hz, 1 H) 4.15 (br. s., 1 H) 3.80 - 3.92 (m, 4 H) 3.53 (br. s., 1 H) 3.37 - 3.49 (m, 2 H) 3.33 (br. s., 1 H) 2.98 - 3.13 (m, 2 H) 2.71 - 2.88 (m, 1 H) 2.46 - 2.65 (m, 5 H) 1.79 - 2.00 (m, 3 H) 1.68 (br. s., 1 H) 1.38 (br. s., 1 H).
실시예 8:
2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온
Figure PCTKR2022006949-appb-I000073
NMP(3ml) 중의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (50mg, 0.182 mmol) 및 (2S)-2-{[5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일]메틸}-4-(5-{4-[(피페라진-1-일)메틸]페닐}피리미딘-2-일)모르폴린 (100 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(80 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 809.82
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 11.02 (s, 1 H) 9.14 (s, 1 H) 8.63 - 8.71 (m, 1 H) 8.54 - 8.60 (m, 1 H) 8.24 (s, 1 H) 7.66 - 7.77 (m, 1 H) 7.62 (d, J=8.54 Hz, 1 H) 7.56 (br. s., 1 H) 7.37 (br. s., 1 H) 7.28 (br. s., 1 H) 7.19 (d, J=8.85 Hz, 1 H) 4.96 - 5.05 (m, 1 H) 4.78 - 4.93 (m, 2 H) 4.62 - 4.76 (m, 2 H) 4.32 (d, J=12.51 Hz, 1 H) 4.15 (br. s., 1 H) 3.79 - 3.90 (m, 4 H) 3.50 (br. s., 1 H) 3.31 - 3.48 (m, 3 H) 2.97 - 3.13 (m, 3 H) 2.80 (d, J=12.51 Hz, 2 H) 2.50 - 2.61 (m, 5 H) 1.77 - 1.96 (m, 3 H) 1.69 (br. s., 1 H) 1.38 (br. s., 1 H).
실시예 9:
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
Figure PCTKR2022006949-appb-I000074
NMP(3ml) 중의 3-(6-플루오로-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-2-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(90 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ =734.80
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.93 (s, 1 H) 8.59 (s, 2 H) 8.31 (s, 2 H) 8.15 - 8.21 (m, 3 H) 8.11 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 7.96 (d, J=9.00 Hz, 1 H) 7.87 (d, J=7.63 Hz, 1 H) 7.65 (t, J=7.86 Hz, 1 H) 7.37 - 7.51 (m, 3 H) 7.16 - 7.25 (m, 1 H) 7.10 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 5.68 (dd, J=11.67, 5.11 Hz, 1 H) 5.38 (s, 2 H) 3.96 - 4.09 (m, 4 H) 2.77 - 3.00 (m, 3 H) 2.45 - 2.59 (m, 1 H) 2.07 (br. s., 1 H) 1.97 - 2.05 (m, 1 H) 1.84 (d, J=11.44 Hz, 2 H) 1.26 - 1.43 (m, 2 H).
실시예 10:
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-메틸-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
Figure PCTKR2022006949-appb-I000075
NMP(3ml) 중의 3-(6-플루오로-4-메틸-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(70 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 748.81 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.91 (s, 1 H) 8.52 - 8.64 (m, 2 H) 8.25 - 8.34 (m, 2 H) 8.08 - 8.22 (m, 3 H) 7.99 (d, J=9.00 Hz, 1 H) 7.86 (d, J=7.63 Hz, 1 H) 7.65 (t, J=7.86 Hz, 1 H) 7.33 - 7.48 (m, 3 H) 7.09 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 6.97 - 7.05 (m, 1 H) 5.57 - 5.67 (m, 1 H) 5.32 - 5.43 (m, 3 H) 4.00 - 4.13 (m, 4 H) 2.77 - 3.00 (m, 3 H) 2.40 - 2.60 (m, 5 H) 2.03 - 2.11 (m, 1 H) 1.94 - 2.03 (m, 1 H) 1.84 (d, J=11.44 Hz, 2 H) 1.36 (q, J=11.44 Hz, 2 H).
실시예 11:
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
Figure PCTKR2022006949-appb-I000076
NMP(3ml) 중의 3-(5-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 m g, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(90 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ =734.80
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.99 (s, 1 H) 8.58 - 8.66 (m, 2 H) 8.29 - 8.38 (m, 3 H) 8.15 - 8.22 (m, 2 H) 8.11 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 7.84 (d, J=7.93 Hz, 1 H) 7.87 (d, J=7.63 Hz, 1 H) 7.72 (t, J=7.86 Hz, 1 H) 7.65 (t, J=7.86 Hz, 1 H) 7.49 (d, J=7.93 Hz, 1 H) 7.38 - 7.44 (m, 2 H) 7.10 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 5.74 (dd, J=11.52, 4.65 Hz, 1 H) 5.38 (s, 2 H) 4.10 (d, J=6.26 Hz, 2 H) 2.73 - 2.93 (m, 3 H) 2.45 - 2.60 (m, 3 H) 2.00 - 2.13 (m, 2 H) 1.85 - 1.99 (m, 4 H) 1.60 (q, J=11.29 Hz, 2 H).
실시예 12:
3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
Figure PCTKR2022006949-appb-I000077
NMP(3ml) 중의 3-(7-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물 (40 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ =734.80
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.94 (s, 1 H) 8.54 - 8.64 (m, 2 H) 8.31 (d, J=1.68 Hz, 2 H) 8.13 - 8.21 (m, 3 H) 8.11 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 7.86 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=9.00 Hz, 1 H) 7.65 (t, J=7.86 Hz, 1 H) 7.56 (dd, J=9.00, 2.44 Hz, 1 H) 7.36 - 7.48 (m, 3 H) 7.09 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 5.63 - 5.74 (m, 1 H) 5.38 (s, 2 H) 3.95 - 4.08 (m, 4 H) 2.78 - 2.97 (m, 3 H) 2.45 - 2.62 (m, 3 H) 1.98 - 2.12 (m, 2 H) 1.85 (d, J=11.44 Hz, 2 H) 1.35 (q, J=11.19 Hz, 2 H).
실시예 13:
3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
Figure PCTKR2022006949-appb-I000078
NMP(3ml) 중의 3-(8-플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(40 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ =734.80
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm10.93 (s, 1 H) 8.56 - 8.66 (m, 2 H) 8.32 (d, J=6.10 Hz, 2 H) 8.14 - 8.24 (m, 3 H) 8.11 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 7.87 (d, J=7.63 Hz, 1 H) 7.72 (t, J=7.93 Hz, 1 H) 7.65 (t, J=7.86 Hz, 1 H) 7.37 - 7.47 (m, 2 H) 7.24 - 7.37 (m, 2 H) 7.10 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 5.38 (s, 2 H) 4.08 (d, J=6.26 Hz, 2 H) 3.38 (d, J=9.77 Hz, 2 H) 2.79 - 2.92 (m, 1 H) 2.69 (q, J=10.58 Hz, 2 H) 2.45 - 2.60 (m, 4 H) 1.98 - 2.09 (m, 1 H) 1.90 (br. s., 1 H) 1.80 (br. s., 2 H) 1.52 - 1.68 (m, 2 H).
실시예 14:
3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-메틸-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
Figure PCTKR2022006949-appb-I000079
NMP(3ml) 중의 3-(7-플루오로-4-메틸-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(38 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 748.81
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 10.91 (s, 1 H) 8.59 (s, 2 H) 8.25 - 8.34 (m, 2 H) 8.13 - 8.21 (m, 2 H) 8.11 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 7.86 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=9.00 Hz, 1 H) 7.65 (t, J=7.86 Hz, 1 H) 7.54 (dd, J=9.08, 2.37 Hz, 1 H) 7.47 (d, J=2.44 Hz, 1 H) 7.37 - 7.45 (m, 2 H) 7.10 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 5.63 (d, J=6.10 Hz, 1 H) 5.38 (s, 2 H) 3.94 - 4.09 (m, 4 H) 2.77 - 3.00 (m, 3 H) 2.45 - 2.61 (m, 4 H) 2.39 (s, 3 H) 1.97 - 2.06 (m, 1 H) 1.85 (d, J=12.21 Hz, 2 H) 1.26 - 1.43 (m, 2 H).
실시예 15:
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 및 3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴)
Figure PCTKR2022006949-appb-I000080
NMP(3ml) 중의 3-(6,7-디플루오로-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(50 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 752.78
실시예 16:
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
Figure PCTKR2022006949-appb-I000081
NMP(3ml) 중의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(80 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 735.75
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 11.10 (s, 1 H) 8.68 (s, 2 H) 8.39 (d, J=5.95 Hz, 2 H) 8.22 - 8.28 (m, 2 H) 8.18 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 7.94 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 7.67 - 7.76 (m, 2 H) 7.46 - 7.52 (m, 2 H) 7.34 (d, J=7.17 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.54 Hz, 1 H) 7.17 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 5.45 (s, 2 H) 5.10 (dd, J=12.82, 5.49 Hz, 1 H) 4.15 (d, J=6.10 Hz, 2 H) 3.76 (d, J=11.60 Hz, 2 H) 3.31 (t, J=7.10 Hz, 1 H) 2.81 - 2.98 (m, 3 H) 2.70 (s, 2 H) 2.52 - 2.63 (m, 2 H) 2.00 - 2.08 (m, 1 H) 1.53 - 1.62 (m, 2 H).
실시예 17:
3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
Figure PCTKR2022006949-appb-I000082
NMP(3ml) 중의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (50 mg, 0.182 mmol) 및 (3-(6-옥소-1-(3-(5-(피페리딘-4-일메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴 (120 mg, 0.182 mmol) 용액에 에틸비스(프로판-2-일)아민 (3.0 당량)을 반응 혼합물에 가하였다. 반응물을 24 시간 동안 130℃에서 교반하였다. 잔사를 MeOH/DCM (0~20%) MPLC로 정제하여, 표제 화합물(80 mg)을 수득하였다.
MS (ESI, m/z): [M+H]+ = 735.75
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) d ppm 11.02 (s, 1 H) 8.59 (s, 2 H) 8.31 (d, J=1.83 Hz, 2 H) 8.13 - 8.22 (m, 2 H) 8.11 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 7.86 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 7.65 (t, J=7.86 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=8.54 Hz, 1 H) 7.37 - 7.45 (m, 2 H) 7.28 (s, 1 H) 7.19 (dd, J=8.70, 1.98 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=9.61 Hz, 1 H) 5.38 (s, 2 H) 5.00 (dd, J=12.82, 5.34 Hz, 1 H) 3.98 - 4.07 (m, 4 H) 3.19 - 3.24 (m, 1 H) 2.96 (t, J=11.90 Hz, 2 H) 2.77 - 2.89 (m, 1 H) 2.63 (s, 2 H) 2.45 - 2.56 (m, 2 H) 1.90 - 2.01 (m, 1 H) 1.24 - 1.38 (m, 2 H).
실험예 :
실험예 1: 세포주 배양 및 화합물 처리
c-MET 과발현 인간 위암 세포주 MKN45 및 SNU638을 10 % 소 태아 혈청(fetal bovine serum), 페니실린 (100U/ml) 및 스트렙토마이신 (100mg/ml)을 첨가한 RPMI 배지에서 배양하고, c-MET 엑손 14 결손(exon 14 skipping) 돌연변이 인간 위암 세포주 Hs746T는 DMEM 배지에서 배양하였다. c-MET 과발현 인간 폐암 세포주 EBC-1은 10 % fetal bovine serum, 페니실린 (100U/ml) 및 스트렙토마이신 (100mg/ml)을 첨가한 MEM 배지에서 배양하였다. 인간 폐조직에서 유래한 정상세포주 WI-38은 10 % fetal bovine serum, 페니실린 (100U/ml) 및 스트렙토마이신 (100mg/ml)을 첨가한 EMEM 배지에서 배양하였다.
본 발명에 따라 합성된 화합물은 DMSO (dimethyl sulfoxide)에 용해시킨 10 mM의 원료용액으로 준비하였으며, 순차적으로 희석하여 처리하였다.
실험예 2: 본 발명의 화합물의 c-MET 단백질 분해능 평가
세포에서 발현되는 c-MET에 대한 본 발명의 화합물의 분해능을 평가하기 위하여 세포들을 12 웰 플레이트(well plate)에서 2 × 105 세포/well의 농도로 분주한 뒤, 위암 세포주들은 시료를 24 시간 동안 처리하였고 폐암 세포주는 48시간동안 처리하였다.
단백질 발현을 확인하기 위한 웨스턴 블롯 분석(western blotting assay)을 수행하기 위하여, 화합물이 처리된 세포에 프로테아제 억제제(protease inhibitor)가 첨가된 40 μL의 RIPA 버퍼(buffer)를 30분간 처리한 뒤, 얼음 위에서 스크래퍼를 이용하여 세포 용해물을 모으고, 4℃ 15,000 rpm에서 30분 동안 원심 분리하여, 단백질이 포함된 상층액을 얻었다.
이후, 각 샘플 당 3 μg의 단백질을 사용하여 Simple Western Automated Western Blot System Abby 기기를 이용하여 단백질 발현을 측정하였다. SDS와 열에 의해 변성된(denaturation) 단백질을 분자량 별로 분리하여 모세관(capillary)에 부착한 뒤, 1차 항체인 anti-c-MET 또는 anti-GAPDH 항체와 반응시키고, 이후 HRP-conjugated 2차 항체에 반응시킨 뒤, 단백질 발현 신호(signal)를 compass software로 분석하였다.
단백질의 발현은 GAPDH의 발현값을 기준으로 정규화 하였으며, 0.1% DMSO 담체(vehicle)를 처리한 샘플을 100% 기준으로 하여 각 샘플에서의 단백질 발현양을 백분율(%)로 측정하고, 화합물 처리에 의한 단백질 발현양의 변화로부터 DC50 (50 %의 단백질 발현 저해가 달성되는 화합물의 농도)를 계산하였다.
그 결과를 표 1 내지 4 및 도 2와 3에 나타냈다
[표 1] 본 발명의 화합물의 MKN45 세포주에서의 DC50 및 IC50
Figure PCTKR2022006949-appb-I000083
[표 2] 본 발명의 화합물의 SNU638 세포주에서의 DC50 및 IC50
Figure PCTKR2022006949-appb-I000084
[표 3] 본 발명의 화합물의 HS746T 세포주에서의 DC50 및 IC50
Figure PCTKR2022006949-appb-I000085
[표 4] 본 발명의 화합물의 EBC-1 세포주에서의 DC50 및 IC50
Figure PCTKR2022006949-appb-I000086
실험 결과, 위암 세포주 MKN45에서 대다수의 화합물들은 우수한 분해능을 나타냈으며, 특히 표 1 내지 4 및 도 2와 3의 결과에서 보이는 바와 같이 실험에 사용된 모든 위암세포주와 폐암 세포주에 대하여 본 발명의 화합물들은 c-MET 단백질을 효과적으로 분해하였다.
실험예 3: 본 발명의 화합물에 의한 암세포 항증식 활성 평가
세포 성장에 대한 저해 활성을 관찰하기 위하여 세포들을 96 well plate에서 5,000 세포/well의 농도로 분주한 뒤, 다양한 농도로 준비된 본 발명의 화합물로 72 시간 동안 처리하였다. 세포의 생존율은, 미트콘드리아의 전자전달계에 존재하는 탈수소효소(dehydrogenase)와 반응하여 포르마잔(formazon)을 생성하는 WST-8 (water soluble tetrazolium salt) 시료를 well 당 10 ml 씩 첨가한 뒤, 2 시간 동안 배양하고, 450 nm에서 흡광도를 측정하여 얻은 값을 GraphicPad Prism 8.0 소프트웨어를 사용하여 계산하였다. IC50 값 (50 %의 세포 증식 억제를 달성하는 화합물의 농도)은 측정 결과의 평균값이다. 그 결과를 표 1 내지 4 및 도 4 내지 6에 나타내었다.
실험 결과에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 화합물들은 암세포의 증식을 억제하는 효과를 보였으며, 특히 c-MET을 효과적으로 분해하는 실시예 1, 2 및 10의 화합물들은 5 nM 미만의 저농도에서 위암 세포주 MKN45의 증식을 효과적으로 억제하였다(표 1 및 도 4와 5 참조). 또한, 실시예 1, 2 및 10의 화합물들은 다른 위암 세포주인 SNU638 및 Hs746T와 폐암 세포주 EBC-1에서도 100 nM 미만의 농도에서 암세포의 증식을 효과적으로 억제하였다.
실험예 4: 본 발명의 화합물에 의한 정상세포 독성 평가
본 발명의 화합물의 처리에 의하여 정상 세포의 성장이 저해되는지 여부를 관찰하기 위하여, 정상 세포주 WI-38를 96 well plate에서 5,000 세포/well의 농도로 분주한 뒤, 다양한 농도로 준비된 본 발명의 화합물로 72 시간 동안 처리하였다. 세포의 생존율은 미트콘드리아에 전자전달계에 존재하는 dehydrogenase와 반응하여 포르마잔(formazon)을 생성하는 WST-8 (water soluble tetrazolium salt) 시료를 well 당 10 ml 씩 첨가한 뒤, 2 시간 동안 배양하고, 450 nm에서 흡광도를 측정하여 얻은 값을 GraphicPad Prism 8.0 소프트웨어를 사용하여 계산하였다. IC50 값 (50 %의 세포 증식 억제를 달성하는 화합물의 농도)은 측정 결과의 평균값이다. 그 결과를 표 5 및 도 7에 나타내었다.
[표 5] 본 발명의 화합물의 WI-38 세포주에서의 IC50
Figure PCTKR2022006949-appb-I000087
실험 결과, 본 발명의 화합물들은 정상 세포주의 증식에 영향을 주지 아니함을 확인하였다.
실험예 5: 본 발명의 화합물에 의한 c-MET 신호전달 억제 평가
본 발명의 화합물의 c-MET에 분해에 의한 암세포 성장 신호 억제 효과를 평가하기 위하여, 위암 세포주 SNU638을 6 well plate에서 5 × 105 세포/well의 농도로 분주한 뒤, 다양한 농도로 준비된 본 발명의 화합물로 24 시간 동안 처리하였다.
또한, 본 발명의 화합물에 의해 유도된 c-MET 단백질 분해에 의하여 암세포 성장 신호 전달 억제 효과가 얼마나 유지되는지 확인하기 위하여 시료를 30 nM의 농도로 처리한 후, 시간별로 세포를 확보하였다.
단백질 발현을 확인하기 위한 western blotting assay를 수행하기 위하여, 화합물이 처리된 세포에 protease inhibitor가 첨가된 70 μL의 RIPA buffer를 30분간 처리한 뒤, 얼음 위에서 스크래퍼를 이용하여 세포 용해물을 모으고, 4℃ 15,000 rpm에서 30 분 동안 원심 분리하여 단백질이 포함된 상층액을 얻었다.
이후, 각 샘플 당 10 μg의 단백질을 사용하여 SDS-PAGE, 단백질의 막 전이(membrane transfer)를 수행하고, anti-phospho-c-MET, anti-phospho-ERK, anti-phospho-AKT, anti-c-MET, anti-ERK, anti-AKT 또는 anti-GAPDH 항체에 4℃에서 16 시간 동안 반응시키고, 2차 항체를 상온에서 1시간 동안 반응시킨 후, SuperSignal™ West Pico PLUS 화학 발광 기질(chemiluminescence substrate)과 이미지 분석기(analyzer)를 이용하여 단백질의 발현을 확인하였다. 그 결과를 도 8 및 도 9에 나타내었다.
도 8의 결과에서 보이는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 대체적으로 처리 농도에 비례하여 c-MET에 의해 유도되는 암세포의 ERK와 AKT 신호의 활성화를 억제하였다. 또한, 도 9의 결과에서 보이는 바와 같이, 저분자 화합물 억제제(small inhibitor)인 테포티닙(Tepotinib)을 처리한 세포주에 비하여 암세포의 ERK와 AKT 신호전달 억제가 더 오랫동안 유지되는 것을 확인할 수 있었다.
실험예 6: 위암 세포가 이식된 동물모델에서의 본 발명의 화합물의 항암 활성 평가
본 발명의 화합물의 c-MET 분해에 의한 암세포 성장 억제 효과를 동물모델에서 평가하기 위하여 1 × 107 개의 위암 세포주 SNU638을 면역부전 마우스에 이식하여 일정한 크기의 종양을 형성시켰다.
본 발명의 화합물의 항암활성을 평가하기 위하여, 위 마우스를 무작위로 그룹으로 나누고(각 군당 5마리씩 분배), 담체와 본 발명의 화합물을 복강투여(도 10 내지 14) 및 경구투여(도 15)로 2 주간 매일 처리하고, 3일마다 마우스의 체중과 종양의 크기를 측정하였다.
실험이 종료된 이후, 종양을 적출하여 무게를 측정하였으며, 종양에서의 c-MET 단백질의 발현의 변화를 관찰하기 위하여 종양을 분쇄하여 단백질을 얻은 후, western blotting assay를 이용하여 확인하였다. 그 결과를 도 10 내지 15에 각각 도시하였다.
실험 결과에서 확인할 수 있듯이, 화합물의 처리기간 동안 마우스의 체중변화는 거의 관찰되지 않았으며, 본 발명의 화합물을 복강투여 또는 경구투여로 처리한 경우 마우스에 이식된 인간 위암 세포주의 성장을 효과적으로 억제하고 종양의 사멸을 유도하였다.
또한, 도 14로부터 확인되는 바와 같이, 실험 종료 후 적출된 종양의 단백질 발현을 관찰하였을 때, 본 발명의 화합물을 처리한 그룹에서의 c-MET의 발현이 대조군에 비하여 확연히 낮음을 확인할 수 있었다.
본 발명에 따른 화합물은 항암제로서 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (9)

  1. 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2022006949-appb-I000088
    상기식에서,
    Z는 표적단백질 리간드이고,
    Q1 내지 Q4는 각각 독립적으로 C-Z, C-H, C-Hal 또는 C≡N이되(여기에서, Hal은 할로겐이다), 단 Q1 내지 Q4 중 어느 하나는 C-Z이며,
    R1은 수소, 할로겐, 니트로, 아미노, C1 내지 C6의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, 또는 할로겐으로 치환된 C1 내지 C6의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 표적단백질 리간드는 c-MET 억제제인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 표적단백질 리간드는 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    Figure PCTKR2022006949-appb-I000089
  4. 제1항에 있어서, 상기 R1은 수소, 할로겐, C1 내지 C4의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, 또는 할로겐으로 치환된 C1 내지 C4의 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬인 화합물.
  5. 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2022006949-appb-I000090
    상기식에서,
    Y는 -C=O 또는 -CH2이고,
    Z는 표적단백질 리간드이며,
    Q1 내지 Q4는 각각 독립적으로 C-Z, C-H, C-Hal 또는 C≡N이되(여기에서, Hal은 할로겐이다), 단 Q1 내지 Q4 중 어느 하나는 C-Z이다.
  6. 제5항에 있어서, 상기 표적단백질 리간드는 c-MET 억제제인 화합물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 표적단백질 리간드는 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    Figure PCTKR2022006949-appb-I000091
  8. 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure PCTKR2022006949-appb-I000092
    Figure PCTKR2022006949-appb-I000093
  9. 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    3-(6-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
    3-(4-메틸-6-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
    3-(7-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
    3-(8-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
    3-(4-메틸-8-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
    3-(6-플루오로-7-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)-1-옥소프탈라진-2(1H)-일)피페리딘-2,6-디온
    2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온
    2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(4-(2-((S)-2-((5-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-1-일)메틸)모르폴리노)피리미딘-5-일)벤질)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온
    3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-메틸-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-메틸-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1-옥소-1,2-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(3-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-4-옥소-3,4-디하이드로프탈라진-6-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
    3-(1-(3-(5-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메톡시)피리미딘-2-일)벤질)-6-옥소-1,6-디하이드로피리다진-3-일)벤조니트릴
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