WO2022230971A1 - コロナウイルスに対する免疫応答を誘発する人工アジュバントベクター細胞、および当該細胞を含む医薬組成物、並びにそれらの使用 - Google Patents

コロナウイルスに対する免疫応答を誘発する人工アジュバントベクター細胞、および当該細胞を含む医薬組成物、並びにそれらの使用 Download PDF

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眞一郎 藤井
佳奈子 清水
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    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20071—Demonstrated in vivo effect

Definitions

  • the present disclosure relates to artificial adjuvant vector cells that induce an immune response against coronavirus, pharmaceutical compositions containing such cells, and uses thereof.
  • a method of inducing antigen-specific immunity in living organisms is being developed as a method of prevention and treatment of infectious diseases and tumors.
  • specific immunity to the target antigen can be induced in vivo by pulsing transformant cells co-expressing the target antigen and CD1d with a CD1d ligand.
  • SARS-CoV-2 binds to the ACE2 receptor of host cells (especially type II alveolar epithelial cells) via the spike protein and infects the host cells.
  • the spike protein has an internal Furin cleavage site that enhances infectivity and virulence (Non-Patent Document 1). It has been disclosed that mRNA vaccines against SARS-CoV-2 currently on the market induce antigen-specific antibodies but cannot induce antigen-specific T cells (see Non-Patent Document 2). On the other hand, induction of CTLs (i.e., CD8 T cells) was able to suppress COVID-19-induced symptoms in immunocompromised subjects and markedly impaired antibody responses to B cells and SARS-CoV-2. It has been disclosed that CD8 T cells showed reduced mortality in patients (Non-Patent Document 3).
  • the present disclosure provides artificial adjuvant vector cells that induce an immune response against coronavirus, pharmaceutical compositions containing such cells, and uses thereof.
  • the present disclosure also provides artificial adjuvant vector cells that induce an immune response against two different antigens, pharmaceutical compositions containing such cells, and uses thereof.
  • artificial adjuvant vector cells that elicit immune responses against coronaviruses can induce antigen-specific antibodies, as well as antigen-specific immune cells (especially antigen-specific cells) in spleen and lung tissue. T cells) were found to induce.
  • the following inventions are provided.
  • a cell expressing CD1d on the cell surface said CD1d binding a CD1d ligand and further expressing an antigen, wherein the antigen is a coronavirus spike protein or a fragment thereof, whereby A cell capable of inducing spike protein-specific immunity (preferably in lung tissue).
  • the spike protein comprises S1 and S2.
  • the cell according to (1) or (2) above which further expresses an additional antigen.
  • the cell according to (3) above, wherein the additional antigen is a cancer antigen.
  • a composition comprising the cell according to any one of (1) to (4) above.
  • composition according to (5) above for use in inducing antigen-specific antibodies and antigen-specific T cells (7) The composition according to (5) above for use in inducing antigen-specific T cells in lung tissue.
  • the composition according to (6) or (7) above, wherein the antigen-specific T cells are antigen-specific cytotoxic T cells.
  • the composition according to any one of (6) to (8) above, wherein the antigen-specific T cells are selected from the group consisting of effector T cells and effector memory T cells.
  • composition according to any one of (6) to (10) above which is administered to a subject refractory to a vaccine comprising lipid vesicles containing an effective amount of mRNA encoding a spike protein.
  • composition according to any one of (6) to (11) above which is administered to a subject who has undergone anticancer drug therapy.
  • the composition according to (11) or (12) above, wherein the subject does not significantly induce antibody production against the vaccine.
  • a method of inducing antigen-specific immunity in a subject comprising: an effective amount of aAVC expressing a first antigen a first antigen (e.g., betacoronavirus S protein) and a second antigen (e.g., an antigen not associated with betacoronavirus, e.g., a tumor-associated antigen) to the subject thereby inducing antigen-specific immunity against said tumor-associated antigen and betacoronavirus S protein in said subject;
  • the first antigen and the second antigen are different (the first antigen and the second antigen are, for example, derived from different proteins of the same biological species, preferably orthologs of different biological species, more preferably different derived from proteins of different species),
  • the aAVC expresses CD1d
  • the CD1d is pulsed with a CD1d ligand.
  • aAVC expressing a first antigen (e.g., betacoronavirus S protein) and a second antigen (e.g., an antigen not associated with betacoronavirus, e.g., a tumor-associated antigen); thereby inducing antigen-specific immunity against the betacoronavirus S protein in the lung tissue of the subject;
  • aAVC expresses CD1d, wherein the CD1d is pulsed with a CD1d ligand, a method ⁇ preferably the first antigen is a tumor-associated antigen and the second antigen is the betacoronavirus S protein ⁇ .
  • the method according to (19) above The subject is injected with an effective amount of aAVC expressing a first antigen (e.g., betacoronavirus S protein) and a second antigen (e.g., an antigen not associated with betacoronavirus, e.g., a tumor-associated antigen) in lung tissue ( (e.g., intrathoracic) or to non-pulmonary tissue (e.g., intravenous), thereby inducing antigen-specific immunity to the betacoronavirus S protein in the lung tissue of the subject;
  • a method wherein the aAVC expresses CD1d, and the CD1d is pulsed with a CD1d ligand.
  • (37) is capable of inducing a comparable strength of specific immunity to the first antigen compared to aAVC that express the first antigen and do not or substantially do not express the second antigen;
  • the method according to any one of (31) to (34) above. (38) capable of inducing a comparable strength of specific immunity to a second antigen compared to aAVC that express the second antigen and do not or substantially do not express the first antigen;
  • the method according to any one of (15) to (20) above. (39) can induce a comparable strength of specific immunity to a second antigen compared to aAVC that express the second antigen and do not or substantially do not express the first antigen;
  • the method according to any one of (31) to (34) above. (40) A composition or pharmaceutical composition for use in the method according to any one of (31) to (39) above.
  • a vaccine (especially a coronavirus vaccine) comprising the cell according to any one of (1) to (4) above.
  • (42) A vaccine (particularly, a coronavirus vaccine) comprising the cell according to (4) above.
  • (43) A vaccine (particularly a cancer vaccine), comprising the cells of (4) above.
  • (44) A vaccine for preventing or treating cancer or for preventing or treating coronavirus infection, comprising the cell according to (4) above.
  • FIG. 4 shows in vivo induction of NKT cells by an exemplary aAVC of the disclosure that expressed the spike protein of SARS-CoV-2 (aAVC-CoV2).
  • aAVC-CoV2 shows the evaluation schedule for CTL induction and antibody (Ab) induction by aAVC-CoV2 administration. Induction of specific antibodies against S1 after administration of aAVC-CoV2. Induction of specific antibodies against S2 after administration of aAVC-CoV2.
  • FIG. 2 shows experimental schemes for induction of vasculature CTL in mice and CTL induction in lung tissue after administration of aAVC-CoV2.
  • 7 days (7d) after administration of aAVC-CoV2 anti-CD45 antibody was injected into the tail vein to allow the anti-CD45 antibody to bind to CTL in the vasculature, and lung tissue was collected 5 minutes after administration to determine the number of CTL in lung tissue.
  • Test induction Data for lung tissue from untreated mice (naive) are shown.
  • the lower left panel shows that a CD45-positive fraction, intravascular CTL obtained from lung tissue, and a negative fraction, CTL infiltrating lung tissue, can be separated.
  • Lower right panel shows CD62L and CD44 expression on non-vascular and infiltrating CTL. Data from mice after administration of aAVC-CoV2 are shown.
  • the lower left panel shows a CD45-positive fraction (vascular fraction; vascular), which is CTL in blood vessels obtained from lung tissue, and a negative fraction (infiltrating fraction; infiltrating), which is CTL infiltrating lung tissue. shows that it can be divided into
  • the lower right panel shows CD62L and CD44 expression on intravascular and infiltrating CTL.
  • FIG. 10 shows an example of a procedure for making an exemplary aAVC of the present disclosure that expressed cancer antigens in addition to the spike protein of SARS-CoV-2.
  • FIG. 3 shows changes in tumor volume (mm 3 ) in OVA-expressing tumor graft models administered with aAVC-OVA-CoV-2.
  • aAVC-OVA changes in tumor volume in an OVA-expressing tumor graft model administered with aAVC (aAVC-OVA) in which only OVA is forcibly expressed in aAVC are compared with the above changes in volume.
  • FIG. 1 depicts aAVC that co-expressed TAA protein and spike protein intracellularly and expressed CD1d pulsed with CD1d ligand on the cell surface.
  • Antigen-specific immune induction by aAVC in mice (upper panel) and experimental scheme for verification of antitumor effect (lower panel) are shown.
  • Figure 3 shows the anti-tumor effect induced by aAVC.
  • Figure 3 shows the anti-tumor effect induced by aAVC.
  • aAVC artificial adjuvant vector cells
  • aAVC can be readily made by one skilled in the art using methods known in the art. Specifically, aAVC can be obtained by culturing CD1d-expressing cells in the presence of a CD1d ligand. If the cell is a human cell, the CD1d can be human CD1d. ⁇ -galactosylceramide ( ⁇ -GalCer) can be used as a CD1d ligand.
  • aAVC are human cells that express exogenous or endogenous CD1d and load CD1d on the cell surface with ⁇ -GalCer.
  • a "subject” is a vertebrate and can be, for example, mammals, including humans, such as mammals infected with SARS-CoV-2 (cats, ferrets, bats, and pangolins).
  • the subject can be a subject infected with SARS-CoV-2, can be an asymptomatic carrier infected with SARS-CoV-2, a subject infected with SARS-CoV-2 and who has developed COVID-19. could be.
  • the subject may be a subject at risk of being infected with SARS-CoV-2 or at risk of being infected with SARS-CoV-2.
  • Subjects can be children (e.g., infants (1-6 years old), school children (6-12 years old), adolescents (12 years old and older), adults (20 years old and older).
  • Adults are 30 years and older. , 40 years of age or older, 50 years of age or older, 60 years of age or older, or 70 years of age or older.
  • coronavirus refers to a virus belonging to the subfamily Orthocoronavirus, the order Nidoviridae, the family Coronaviridae, and is a single-stranded positive-strand RNA virus. Coronaviruses have spike protein protrusions (S proteins) on the virus surface and are named coronaviruses because their appearance resembles the corona of the sun. In humans, it causes respiratory infections, including the common cold.
  • S proteins spike protein protrusions
  • the orthocoronavirus subfamily coronaviruses are broadly divided into alphacoronaviruses, betacoronaviruses, gammacoronaviruses, and deltacoronaviruses.
  • SARS-related coronaviruses are classified as betacoronaviruses.
  • SARS-related coronaviruses include SARS coronavirus (SARS-CoV) and SARS coronavirus-2 (SARS-CoV-2).
  • SARS-CoV-2 has caused a pandemic of novel coronavirus disease (COVID-19) since the end of 2019.
  • the SARS-associated coronavirus infects host cells by binding to the ACE2 receptor of host cells via the S protein.
  • SARS-related coronaviruses have a common infection mechanism in that they use ACE receptors to infect cells.
  • the SARS-CoV-2 S protein has an internal furin cleavage site that enhances infectivity and virulence (Andersen et al., Nature Medicine, 26, 450-452, 2020).
  • SARS-CoV-2 is the coronavirus that caused the pandemic caused in 2020.
  • WHO World Health Organization
  • SARS-CoV-2 the coronavirus that caused the pandemic caused in 2020.
  • WHO World Health Organization
  • ICTV the International Commission on Taxonomy of Viruses
  • Coronaviruses can cause serious respiratory illnesses, from the common cold to severe acute respiratory syndrome (SARS) and Middle East respiratory syndrome (MERS).
  • SARS common cold to severe acute respiratory syndrome
  • MERS Middle East respiratory syndrome
  • the WHO has named the disease caused by this new coronavirus COVID-19.
  • the International Commission on Taxonomy of Viruses places SARS-CoV-2 in the genus Betacoronavirus, the same species (or its sister lineage) as SARS-CoV.
  • Virus particles have a particle size of about 50 to 200 nm, and contain spike protein, nucleocapsid protein, membrane protein, envelope protein, and viral genomic RNA, like common coronaviruses. Nucleocapsid proteins are complexed with RNA and surrounded by lipid-bound spike, membrane, and envelope proteins to form the virion envelope. The spike protein, located on the outermost surface of the envelope, is thought to bind to ACE2 receptors on the cell surface and promote cell infection.
  • SARS-CoV-2 There are people who become infected with SARS-CoV-2 but do not develop symptoms of the disease, and are called asymptomatic carriers. It has been pointed out that asymptomatic pathogen carriers may infect others with the virus they carry. It has been noted that infection with SARS-CoV-2 reduces or eliminates the sense of smell and/or taste. SARS-CoV-2 can cause severe acute respiratory syndrome. In severe acute respiratory syndrome, fever of about 40°C, cough, and shortness of breath have been reported as main symptoms. A prominent complication is pneumonia. Presence or absence of SARS-CoV-2 infection is mainly determined by PCR test.
  • This PCR test evaluates whether or not the SARS-CoV-2 gene exists in the body, depending on whether or not the band is amplified specifically for SARS-CoV-2.
  • Treatments against SARS-CoV-2 include antiviral agents against SARS-CoV-2 (e.g. remdesivir), steroidal anti-inflammatory agents (e.g. dexamethasone), and inhibitors of inflammatory cytokines (e.g. IL-6 inhibition). agents such as anti-IL-6 antibodies, TNF- ⁇ inhibitors such as etanercept).
  • spike protein refers to the protein encoded at positions 21563-25384 of the SARS-CoV-2 genome, which has been registered with the National Center for Biotechnology Information (NCBI) as GenBank accession number: MN908947.3 or It may be a protein having the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1, and the SARS-CoV-2 spike protein has an amino acid sequence registered with NCBI as GenBank accession number: QHD43416.1.
  • the spike protein comprises S1 and S2, with S1 occurring at positions 13-541 of the above amino acid sequence and S2 occurring at positions 543-1208 of the above amino acid sequence.
  • S1 further has an N-terminal domain (NTD) and a receptor binding domain (RBD), with the NTD at positions 13-304 and the RBD at positions 319-541 of the above amino acid sequence.
  • NTD N-terminal domain
  • RBD receptor binding domain
  • S1 and S2 are cleaved intracellularly, produced as separate peptides, and form a complex during virus particle formation.
  • Spike proteins are also called S proteins.
  • any spike protein (having an amino acid sequence corresponding to the amino acid sequence registered with NCBI as GenBank accession number: QHD43416.1) possessed by natural viruses (including, for example, mutant viruses) can be used. can be done.
  • peptide means a polymer of amino acids. Polymers generally do not have branches.
  • a "partial peptide” means a part of a specific peptide.
  • Peptides and partial peptides can be produced from nucleic acids encoding the peptides. Peptides and partial peptides can also be chemically synthesized. Peptides and partial peptides have also been isolated, enriched, or purified. Isolation means separating peptides and partial peptides from at least other components, and purification means at least selectively separating peptides and partial peptides. Enriched means that the concentration of peptides and partial peptides is increased.
  • compositions are a mixture of one or more ingredients.
  • a composition can include, for example, a partial peptide and an aqueous solvent (eg, water).
  • the composition may further comprise pharmaceutically acceptable excipients.
  • an immunogenic composition is a composition that can be administered to a subject to elicit an immune response in that subject. Immunogenic compositions can be used to elicit an immune response in a subject. Immunogenic compositions can elicit an immune response in a subject and can be used as vaccines.
  • the immunogenic compositions of the invention can be used to elicit an immune response against a SARS-related coronavirus (eg, SARS-CoV-2) or a SARS-related coronavirus (eg, SARS-CoV-2). 2) as a vaccine or as a therapeutic agent.
  • a SARS-related coronavirus eg, SARS-CoV-2
  • a SARS-related coronavirus eg, SARS-CoV-2
  • SARS-CoV-2 a SARS-related coronavirus
  • SARS-CoV-2 SARS-related coronavirus
  • treatment includes prophylactic treatment and therapeutic treatment.
  • Therapeutic treatment may be directed against infected virus, and prophylactic treatment may be directed to prevent future infection or to delay the onset of COVID-19 due to future infection, or to prevent COVID-19 from onset. It can be done to reduce symptoms.
  • Therapeutic treatment may be directed at symptomatic patients or asymptomatic carriers. Prophylactic treatment may be given to uninfected persons.
  • exogenous refers to the artificial introduction of a gene or nucleic acid into a target cell by manipulation such as genetic engineering or gene introduction, and The terms are used interchangeably to refer to genes or nucleic acids that have been introduced into , as well as their expressed proteins.
  • a foreign gene can be operably linked to a promoter sequence that drives expression of the gene.
  • endogenous or “intrinsic” means inherent in the cell.
  • a human-derived cell means that the cell is a cell obtained from a human, or a cell line obtained by subculturing the cell, for example, a human cell. do.
  • a protein fragment derived from the S protein can be a fragment having a portion of the amino acid sequence of the S protein.
  • aAVC that express the coronavirus spike protein
  • the present disclosure provides a cell that has expressed CD1d on its cell surface, said CD1d binding a CD1d ligand and further expressing an antigen, wherein the antigen is a coronavirus spike protein or its Cells are provided that are fragments and thereby can induce spike protein-specific immunity.
  • the cells are mammalian, preferably primate, and more preferably human (or human).
  • a cell is an isolated cell.
  • aAVC can present CD1d bound to CD1d ligand to NKT cells in vivo.
  • the coronavirus can be a SARS-associated coronavirus (eg, SARS-CoV-2).
  • Cells used in the present invention are, for example, stomach, small intestine, large intestine, lung, pancreas, kidney, liver, thymus, spleen, prostate, ovary, uterus, bone marrow, skin, muscle, peripheral blood, as long as they have proliferative ability. It may be cells derived from any human tissue such as. In one embodiment, the human-derived cells used in the present invention are non-blood cells. The cells used in the present invention are specific cell types in tissues (e.g., epithelial cells, endothelial cells, epidermal cells, stromal cells, fibroblasts, adipose tissue, mammary cells, mesangial cells, pancreatic ⁇ cells, nerve cells).
  • tissues e.g., epithelial cells, endothelial cells, epidermal cells, stromal cells, fibroblasts, adipose tissue, mammary cells, mesangial cells, pancreatic ⁇ cells, nerve cells
  • Cells used in the present invention may be normal cells or cancer cells.
  • the cells used in the present invention are normal cells.
  • the cells used in the present invention are human embryonic kidney 293 (HEK293) cells (J. Gen. Virol.; 1977; 36:59-74), WI-38 cells, SC-01MFP cells. , or MRC-5 cells, as well as cells derived therefrom.
  • the human-derived cells used in the present invention are HEK293 cell-derived cells.
  • the human-derived cells used in the present invention are HEK293 cells or FreeStyle TM 293-F cells. These cells may preferably be cells conditioned in serum-free medium.
  • Cells used in the present invention can be, for example, alveolar epithelial cells, particularly type II alveolar epithelial cells. By using type II alveolar epithelial cells, an S protein that is more similar to the S protein produced in vivo can be produced. Cells used in the present invention often express furin, but may additionally express furin.
  • the aAVC are preferably human-derived cells.
  • the cells used in the present invention are tissue-derived immortalized cells or cell lines. Immortalized cells and cell lines can be produced using methods known to those skilled in the art.
  • the CD1d used in the present invention may be naturally occurring CD1d.
  • CD1d may be CD1d endogenously expressed in the cells used, or CD1d exogenously expressed in the cells used.
  • expression means expression anywhere in the cell, and in one embodiment expression on the cell surface.
  • aAVC express exogenous CD1d.
  • the CD1d used in the present invention is CD1d from a mammal (eg, human, monkey, mouse, rat, dog, chimpanzee, etc.).
  • the CD1d used in the present invention is human CD1d.
  • human CD1d is a protein consisting of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2.
  • the human CD1d is 1 or several in the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, in some embodiments 1-10, 1-7, 1-5, 1-3, or 1
  • It is a protein consisting of an amino acid sequence in which ⁇ 2 amino acids have been deleted, substituted, inserted and/or added, and having the functions of CD1d.
  • the human CD1d has at least 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% or more identity with the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4. It is a protein consisting of a sequence and having the functions of CD1d.
  • CD1d Functions of CD1d include the ability to bind to CD1d ligands (eg, ⁇ -GalCer).
  • CD1d ligands eg, ⁇ -GalCer
  • the ability of CD1d to bind a CD1d ligand can be readily assessed by those skilled in the art using known methods.
  • the function of CD1d can also be evaluated using the ability of aAVC to activate human NKT cells as an index.
  • the ability to activate human NKT cells can be evaluated by the method described in Patent Document 1 or Example 4 of the present application.
  • aAVC can express multiple different antigens.
  • aAVC for example, express multiple (two or more) separate peptide antigens.
  • Peptide antigens may be encoded by one mRNA or may be encoded by separate mRNAs.
  • a peptide antigen may be translated as one protein or as separate proteins.
  • Peptide antigens may be linked by, for example, intracellularly cleavable linkers (referred to as cleavable linkers).
  • Peptide antigens may be linked by, for example, a linker that is not cleaved intracellularly (referred to as a non-cleavable linker).
  • intracellularly cleavable linker examples include, but are not limited to, 2A peptide (DXEXNPGP; peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, e.g., T2A: EGRGSLLTCG DVEENPGP (SEQ ID NO: 4), P2A: ATNFSLLKQAG DVEENPGP (SEQ ID NO: 5), E2A: QCTNYALLKLAG DVESNPGP (SEQ ID NO: 6), and F2A: VKQTLNFDLLKLAG DVESNPGP (SEQ ID NO: 7)), and furin cleavage sites (e.g., RXXR, especially RXK/RR, e.g., RARR, and RVRR, preferably RARR) and peptides having amino acid sequences corresponding to these.
  • X represents any amino acid.
  • Amino acids include A, H, I, L, K, M, F, T, W, V, R, C, Q
  • aAVC express multiple (two or more) separate peptide antigens.
  • the aAVC expresses the S1 and/or S2 portions of the spike protein.
  • aAVC expresses the S1 and/or S2 portions of the spike protein, but may also express additional antigens (eg, cancer antigens).
  • the aAVC expresses the S1 and S2 portions of the spike protein, which are linked via a cleavable or non-cleavable linker, or directly without a linker. .
  • aAVC expresses the S1 and S2 portions of the spike protein as separate peptides.
  • aAVC when aAVC expresses multiple separate peptide antigens, it can induce an immune response specific to any of the multiple separate peptides. This means that the virus can be treated if the induction of immunity to any of the multiple separate peptides is not circumvented by viral mutation in infectious disease control, which may guarantee a robust response to aAVC mutation. .
  • aAVC can also induce both B- and T-cell immunity (e.g., CD4-single-positive CD44 hi CD62L - cells and CD8-single-positive CD44 hi CD62L - cells), and thus far mRNA vaccines induce only B-cell immunity.
  • B- and T-cell immunity e.g., CD4-single-positive CD44 hi CD62L - cells and CD8-single-positive CD44 hi CD62L - cells
  • far mRNA vaccines induce only B-cell immunity.
  • aAVC may be particularly useful in age-related and immune-compromised subjects,
  • the spike protein can be the spike protein expressed in SARS-related coronaviruses (eg, SARS-CoV-2).
  • SARS-CoV-2 is the spike protein registered with the National Center for Biotechnology Information (NCBI) as GenBank accession number: MN908947.3 or 90% or more, 91% or more, 92% thereof It may be a SARS-CoV-2 spike protein having an amino acid sequence that is greater than, 93% or greater, 94% or greater, 95% or greater, 96% or greater, 97% or greater, 98% or greater, or 99% or greater identity.
  • aAVC is phagocytosed by dendritic cells in the body, and the protein expressed in aAVC cells is degraded into peptides of several amino acids to about 10 amino acids, which are presented as antigens by dendritic cells. Since it is such partial peptides that are presented as antigens, the peptides to be expressed in aAVC may be the partial peptides.
  • the antigen can be a portion (eg, partial peptide) of the spike protein of a SARS-related coronavirus (eg, SARS-CoV-2).
  • a partial peptide having the amino acid sequence of the spike protein at the position corresponding to the sequence is a SARS-related coronavirus (for example, SARS-CoV-2) in a natural variant of the spike protein of the SARS-related coronavirus (for example, SARS-CoV-2). It has an amino acid sequence aligned at the corresponding position when aligned with the partial peptide of the spike protein of CoV-2).
  • the partial peptide may, in certain aspects, include a partial peptide of S1 corresponding to the RBD or a portion thereof.
  • the partial peptide may include a partial peptide of S1 corresponding to a non-RBD of S1 (eg, NTD) or a portion thereof.
  • a partial peptide may, in certain aspects, include S2 or a portion thereof.
  • a partial peptide has a length of, for example, 10 amino acids or more, 20 amino acids or more, or 30 amino acids or more.
  • the spike protein comprises S1 and S2.
  • aAVC expressing the spike protein can express the spike protein intracellularly.
  • aAVC is destroyed by NKT cells in the body, and when phagocytosed by dendritic cells, the dendritic cells mature, migrate to lymphoid tissue, and activate the adaptive immune system such as T cells in the lymphoid tissue. Therefore, the spike protein may be presented extracellularly, but does not necessarily have to be presented extracellularly.
  • the antigen should be expressed intracellularly.
  • the antigen can be the spike protein, which includes the full length of S1 and S2. In some aspects, the antigen may be glycosylated.
  • aAVC comprises a polynucleotide encoding CD1d and a polynucleotide encoding spike protein or a portion thereof.
  • Polynucleotides can be DNA or RNA.
  • the polynucleotide encoding CD1d and the polynucleotide encoding the spike protein or a portion thereof are each operably linked to regulatory sequences and can be expressed in aAVC. can.
  • the polynucleotide is DNA
  • the polynucleotide encoding the spike protein (and optionally CD1d) operably linked to regulatory sequences can be incorporated into an expression vector.
  • CD1d does not need to be re-supplied externally if the cells express it endogenously.
  • a polynucleotide encoding CD1d may be introduced into the cell, whether or not the cell endogenously expresses CD1d.
  • Introduction of these polynucleotides into cells can be performed by methods well known to those skilled in the art. For example, electroporation, calcium phosphate precipitation, lipofection, and the like are known methods for introducing polynucleotides into cells.
  • Polynucleotides may be introduced into cells using viral vectors (eg, lentiviral vectors, adenoviral vectors, adeno-associated viral vectors, etc.).
  • a promoter that promotes constant expression or a promoter that is induced by drugs can be used.
  • promoters that promote constant expression include virus-derived promoters such as CMV (cytomegalovirus), RSV (respiratory syncytial virus), SV40 (simian virus 40), actin promoter, EF (elongation factor) 1 ⁇ promoter, and the like. be done.
  • inducible promoters include tetracycline response elements (TRE3G promoter), Cumate operator sequences, ⁇ operator sequences (12 ⁇ Op), heat shock promoters, and the like, and can be used in the present invention.
  • An expression vector may contain a start codon and a stop codon. In this case, it may contain enhancer sequences, untranslated regions, splice junctions, polyadenylation sites, replicable units, and the like.
  • the expression vector may contain a gene that can serve as a marker for confirming the expression of the gene of interest (for example, a drug resistance gene, a gene encoding a reporter enzyme, or a gene encoding a fluorescent protein, etc.).
  • the antigen comprises the spike protein S1. In one aspect, the antigen comprises the spike protein S2. In one aspect, the antigen comprises the spike proteins S1 and S2.
  • the spike proteins S1 and S2 have a cleavage site for a protease present in the cell between S1 and S2.
  • the proteolytic enzyme is furin in the native spike protein.
  • the aAVC expresses a first antigen and a second antigen, wherein the first antigen and the second antigen are different and expresses the first antigen and does not express the second antigen. or can induce an equivalent strength of specific immunity against the first antigen compared to substantially non-expressing aAVC.
  • the aAVC expresses a first antigen and a second antigen, wherein the first antigen and the second antigen are different and expresses the first antigen and does not express the second antigen. or can induce an equivalent strength of specific immunity against the first antigen compared to substantially non-expressing aAVC.
  • aAVC expresses an additional antigen (second antigen) in addition to the first antigen (eg, spike protein).
  • aAVC expresses an additional antigen (second antigen) intracellularly (eg, intracytoplasmically) in addition to the spike protein.
  • second antigen intracellularly (eg, intracytoplasmically) in addition to the spike protein.
  • such aAVC expressing multiple different antigens can induce antigen-specific immunity against each antigen in vivo.
  • aAVC expressing multiple different antigens can induce an equivalent strength of antigen-specific immunity compared to aAVC expressing only one of the antigens.
  • aAVC expressing a spike protein (first antigen) and a second antigen are compared to aAVC expressing the spike protein (with equal intensity) and no or substantially no second antigen.
  • aAVC expressing a spike protein (first antigen) and a second antigen do not express or substantially do not express the spike protein
  • aAVC expressing the second antigen (at the same intensity) Equivalent strength of antigen-specific immunity can be induced against a second antigen compared to .
  • antigen-specific immunity of equal strength means that between two groups to be compared, for example, antigen-specific INF- ⁇ -producing T cells (e.g., CD4-positive T or CD8 positive T cells) differ within ⁇ 50%, within ⁇ 40%, within ⁇ 30%, within ⁇ 20%, within ⁇ 10%, or within ⁇ 5% (here the smaller the difference the better).
  • equivalent intensity means that the expression intensity between the two groups to be compared is within ⁇ 50%, within ⁇ 40%, within ⁇ 30%, within ⁇ 20%, within ⁇ 10%, or within ⁇ 5% It means having only differences (where smaller differences are preferred).
  • the second antigen may be an endogenous antigen, but preferably an exogenous antigen.
  • the aAVC expressing the second antigen comprises a construct comprising, for example, a gene encoding the antigen operably linked to regulatory sequences, although the construct may be a non-naturally occurring construct.
  • the antigen comprises a spike protein or portion thereof and an additional antigen.
  • AAVC having a spike protein or portion thereof and an additional antigen can induce both spike protein-specific immunity and the additional antigen-specific immunity when administered to a subject.
  • the additional antigen can be a tumor-associated antigen (cancer antigen).
  • Cancer antigens include, but are not limited to, MART-1/Melan-A, Mage-1, Mage-3, gp100, tyrosinase, CEA, PSA, CA-125, erb-2, Muc-1, Muc-2.
  • Antigens of tumors in hematopoietic tissues are not particularly limited, but examples include proteinase 3, WT-1, hTERT, PRAME, PML/RAR-a, DEK/CAN, cyclophilin B, TEL-MAL1, BCR- ABL, OFA-iLRP, Survivin, idiotype, Sperm protein 17, SPAN-Xb, CT-27, and MUC1.
  • compositions comprising the aAVC of the present disclosure.
  • Compositions of the present disclosure are used to induce antigen-specific immunity in a subject.
  • spike protein-specific immunity can be induced.
  • Compositions of the present disclosure can induce spike protein-specific antibodies and spike protein-specific T cells.
  • the T cells may be cytotoxic T cells. Cytotoxic T cells have the ability to produce interferon- ⁇ .
  • spike protein-specific T cells can be effector T cells and effector memory T cells.
  • spike protein-specific T cells can be (eg, CD4 single positive CD44 hi CD62L ⁇ cells and CD8 single positive CD44 hi CD62L ⁇ cells).
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure may further comprise pharmaceutically acceptable excipients.
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure may comprise radiation (eg, gamma) sterilized aAVC.
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure can induce antigen-specific immunity in the lung.
  • Induction of antigen-specific immunity in the lung by a composition comprising aAVC of the present disclosure can also be achieved when aAVC is administered systemically (eg, intravenously). Since aAVC induces systemic immunity regardless of the route of administration, this suggests that immunity induction in lung tissue is possible regardless of the route of administration.
  • Compositions comprising aAVC of the present disclosure may thereby provide effective protection or treatment against coronaviruses that infect alveolar epithelial cells (eg, SARS-associated coronavirus).
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure can be used to prevent or treat coronavirus (eg, SARS-associated coronavirus) infection.
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure can induce antigen-specific antibodies and antigen-specific T cells with a single administration.
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure may be administered in a single dose.
  • a composition comprising aAVC of the present disclosure can be administered to a subject multiple times (eg, 2, 3, 4 times). Even a single administration is advantageous in that it can induce antigen-specific antibodies and antigen-specific T cells. Subjects who have received multiple doses can induce stronger antigen-specific immunity from the second and subsequent immunizations.
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure can induce antigen-specific T cells in addition to antigen-specific antibodies.
  • mRNA vaccines against SARS-CoV-2 currently on the market induce antigen-specific antibodies, but cannot induce antigen-specific T cells (for example, N Engl J Med. 2021 Mar. 23; see NEJ Mc2102051).
  • CTL ie, CD8 T cells
  • CTL can suppress COVID-19-induced symptoms in immunocompromised subjects (Res Sq., rs.3.rs-162289, 2021).
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure are substantially free of B-cells and/or exhibit antibody responses to antigens. It can be used to prevent and/or reduce the severity of COVID-19 in subjects who do not substantially exhibit it.
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure may be administered to subjects who are substantially free of B cells and/or exhibit substantially no antibody response to the antigen.
  • a therapeutic effect is expected by antigen-specific T cell immunity induction in infected subjects.
  • compositions comprising aAVCs of the present disclosure can be used to target antigen-specific T cells to a vaccine-refractory subject comprising lipid vesicles comprising an effective amount of mRNA encoding a spike protein. can be used to induce
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure can be administered to subjects who do not exhibit significant antibody production to vaccines. Since the composition containing the aAVC of the present disclosure can induce antigen-specific T cell immunity, such a subject can also obtain a vaccine effect through T cell immunity induction.
  • a subject can be, for example, a subject who is refractory to a vaccine comprising lipid vesicles containing an effective amount of mRNA encoding the spike protein, or a subject who has undergone anti-cancer drug therapy.
  • compositions comprising aAVC of the present disclosure comprise aAVC expressing an additional antigen (second antigen), wherein the additional antigen is a cancer antigen, to a subject with cancer.
  • second antigen additional antigen
  • compositions comprising aAVC of this disclosure comprise aAVC expressing an additional antigen, the additional antigen being a cancer antigen, and treating cancer in a subject with cancer. and to induce immunity against coronavirus.
  • a subject with cancer may or may not have undergone anticancer drug therapy. Immunity is often impaired or damaged by anticancer drugs in subjects who have received anticancer drug therapy. Also in such subjects, the composition containing the aAVC of the present disclosure can stimulate immunity and exert therapeutic effects on cancer and viral vaccines or therapeutic effects.
  • a method for inducing spike protein-specific antibody production in a subject is provided.
  • the present disclosure also provides a method of inducing spike protein-specific T cell immunity in a subject.
  • methods of inducing T cell immunity in lung tissue of a subject are provided.
  • the method comprises administering to the subject an effective amount of aAVC of the present disclosure or a composition comprising such aAVC.
  • Administration is not particularly limited, but can be, for example, intravenous administration.
  • the subject to be treated can be a subject uninfected with a SARS-related coronavirus (eg, SARS-CoV-2).
  • a SARS-related coronavirus e.g., SARS-CoV-2
  • Administration of aAVC of the present disclosure to a subject not infected with a SARS-associated coronavirus e.g., SARS-CoV-2
  • antigen-specific immunity e.g., antigen-specific antibody
  • the subject can be a subject infected with a SARS-related coronavirus (eg, SARS-CoV-2).
  • a subject can be a subject that has been infected with a SARS-related coronavirus (eg, SARS-CoV-2).
  • SARS-CoV-2 a subject that has been infected with a SARS-related coronavirus
  • a subject who has been infected with a SARS-related coronavirus can be a subject cured of disease due to a SARS-related coronavirus (eg, SARS-CoV-2) after infection.
  • the subject may be refractory to an mRNA vaccine against SARS-associated coronavirus (eg, SARS-CoV-2).
  • SARS-associated coronavirus eg, SARS-CoV-2
  • Induction of antigen-specific antibodies has been observed with mRNA vaccines, but induction of cell-mediated immunity (especially T-cell immunity) has not been confirmed.
  • aAVC of the present disclosure may be effective even if refractory to mRNA vaccines.
  • the SARS-related coronavirus may preferably be SARS-CoV-2.
  • the subject to be treated can be a patient exhibiting reduced B-cell immunity or reduced antigen-specific antibody responses.
  • the subject may be a patient with retained T cell immunity.
  • the subject can be a patient who exhibits reduced B-cell immunity, or reduced antigen-specific antibody response, and who retains T-cell immunity.
  • a subject can be one that has substantially no B cells and/or exhibits substantially no antibody response to an antigen. In the mode of administration to patients with reduced B-cell immunity and reduced antibody response, therapeutic effects or suppressive effects on severity are expected by antigen-specific T-cell immunity induction in infected subjects.
  • Patients exhibiting reduced B-cell immunity, or reduced antigen-specific antibody responses may be tumor-bearing patients, particularly those who have undergone chemotherapy. According to the present disclosure, if either an antigen-specific antibody response or an antigen-specific T cell response is activated, the aAVC of the present disclosure is expected to be effective in preventing infection or treating infectious diseases. can be useful.
  • the subject to be treated can be a patient with a tumor.
  • Patients with tumors can be administered antigens expressed by the tumor and aAVC expressing the spike protein or a portion thereof.
  • a patient with a tumor can be a patient who has undergone chemotherapy.
  • a patient with a tumor can be one who exhibits reduced B-cell immunity, or reduced antigen-specific antibody responses.
  • Administration to a patient with a tumor may induce antigen-specific antibodies and antigen-specific T cells in the subject in addition to treating the tumor. As a result, a preventive effect against infectious diseases or a preventive effect against aggravation after onset can be expected.
  • the subject to be treated can be a human patient aged 60 or older, 65 or older, 70 or older, 75 or older, or 80 or older. These patients often have weakened immunity due to aging. Since aAVC can stimulate not only innate immunity but also the entire adaptive immune system, it can be used to induce antigen-specific immunity in immunocompromised subjects. In addition, if either an antigen-specific antibody response or an antigen-specific T cell response is activated, the aAVC of the present disclosure is expected to be effective in preventing infection or treating an infectious disease, and thus can be useful in a wide range of patients. .
  • the subject to be treated can be a human patient aged 60 or older, 65 or older, 70 or older, 75 or older, or 80 or older and who is not infected with coronavirus.
  • the subject to be treated can be a human patient aged 60 or older, 65 or older, 70 or older, 75 or older, or 80 or older and infected with coronavirus.
  • aAVC-induced T-cell immunity can have a curative effect, prevent progression, and/or reduce severity of the disease.
  • aAVC in the manufacture of pharmaceutical compositions for prevention or treatment of coronavirus.
  • aAVC is as described above.
  • the administration subject of the pharmaceutical composition is as described above.
  • compositions are provided for use in the above methods.
  • aAVC is provided for use in the above methods.
  • Example 1 Preparation of aAVC displaying spike protein of SARS-CoV-2 tried to prepare.
  • NIH3T3 cells were transfected with mRNA encoding S protein (SEQ ID NO: 1) as well as mRNA encoding CD1d (SEQ ID NO: 2), CD1d was pulsed with CD1d ligand, aAVC was prepared. Transfection is carried out by adding S protein mRNA and CD1d mRNA to the cell suspension, and electroporating using a NEPA21 electroporator (Nepagene Co., Ltd.) (pouring pulse: voltage 150 V, pulse width 8 ms, pulse interval 50 ms).
  • NEPA21 electroporator NEPA21 electroporator
  • Spike protein expression was confirmed by Western blotting. The results were as shown in Figure 2A. As shown in FIG. 2A, spike protein was confirmed to be expressed in a dose-dependent manner with the amount of introduced mRNA ( ⁇ g). In addition, CD1d expression was measured by flow cytometry. Flow cytometry was performed using FACS Calibur TM (BD Biosciences) using APC Mouse Anti-Human CD1d antibody (BD Biosciences, Cat.563505). The results were as shown in Figure 2B. As shown in FIG. 2B, CD1d expression was confirmed in 95.3% of aAVC cells.
  • Phosphate-buffered saline (PBS) containing the resulting aAVC-CoV2 was then administered to mice via the tail vein.
  • the number of cells administered was 2.5 ⁇ 10 7 cells/kg body weight.
  • sera were obtained from treated mice in the time series shown in FIG. 3A to perform CTL testing, antibody (Ab) results.
  • An additional dose of aAVC-CoV2 at the same dose was given 56 days after the first dose to give a boost immunization. Levels of anti-S1 and anti-S2 antibodies in serum were measured. Measurements were performed by ELISA. The results were as shown in Figures 3B and 3C. As shown in FIG.
  • anti-S1 antibody levels increased dramatically after 14 days of treatment, and the amount increased even more dramatically after the boost immunization.
  • anti-S2 antibody levels increased dramatically after 14 days of treatment, and the amount increased even more dramatically after the boost immunization.
  • aAVC-CoV2 was shown to induce S1- and S2-specific immunity in vivo.
  • CD8 T cells The level of CTL (that is, CD8 single-positive T cells, hereinafter referred to as "CD8 T cells”) in the obtained spleen was measured.
  • CD8 T cells were obtained from the spleen by CD8 MACS Beads (Miltenyi Biotec).
  • As antigen-presenting cells dendritic cells (hereinafter referred to as DC) were obtained from the spleens of naive mice using CD11c MACS Beads (Miltenyi Biotec).
  • Peptivator SARS-CoV-2 Prot_S (Miltenyi Biotec) was added as antigen.
  • the amount of interferon- ⁇ (IFN- ⁇ ) produced per 3 ⁇ 10 5 CD8 T cells was measured.
  • aAVC-CoV2 induced antigen-specific antibody and T-cell immunity in vivo. This induction was enhanced by boost immunity, suggesting that memory immunity was induced.
  • anti-CD45 antibody was tail vein injected 7 days after aAVC-CoV2 treatment. Lungs were harvested after 5 minutes. Since the anti-CD45 antibody binds to blood cells (especially immune cells) present in the vasculature, it can stain these cells present in the vasculature. On the other hand, CTLs that infiltrate tissue are not stained with antibodies, and CTLs can be stained according to their location in the body by tail vein injection of anti-CD45 antibody.
  • CD62L-negative, CD44-positive fractions (effector T cells and effector memory cells) accounted for only about 12.6% of the infiltrated CTLs in the untreated group, but infiltrated in the aAVC-CoV2 treated group. It accounted for 87.4% of CTL.
  • CTL present in the vasculature in the untreated group, the CD62L-negative, CD44-positive fraction was only about 6%, whereas in the aAVC-CoV2-treated group, the CD62L-negative, CD44-positive fraction was only about 6%. minutes accounted for about 78.9%.
  • CD4 T cells obtained from excised lungs were also analyzed in the same manner.
  • Example 2 Induction of tumor-specific immunity and virus-specific immunity by aAVC
  • SARS-CoV-2 spike protein and ovalbumin ( OVA)-presenting aAVC (hereinafter referred to as aAVC-OVA-CoV2) was prepared, and it was tested whether the aAVC can induce immunity specific to multiple antigens.
  • CD8 T cells were obtained in the same manner as in Example 1, and IFN- ⁇ production in the presence of dendritic cells (DC) and the antigen peptide was confirmed.
  • DC dendritic cells
  • Example 3 Antigen-specific CD8-positive T-cell response and antitumor effect by multivalent antigen-expressing aAVC
  • aAVC expressing tumor-associated antigen (TAA) and spike protein (aAVC-TAA/CoV-2) was prepared according to Example 1, and its immunity-inducing ability and antitumor effect were evaluated.
  • aAVC-TAA/CoV-2 are cells that express TAA (OVA or TRP2) and CoV-2-S protein intracellularly and the CD1d/ ⁇ -GalCer complex on the cell surface (FIG. 7A).
  • FIG. 7B shows examination of CD8-positive T cell responses (upper panel) and anti-tumor efficacy test (lower panel).
  • CD8 T cells were obtained in the same manner as in Example 1, and IFN- ⁇ production in the presence of dendritic cells (DC) and the antigen peptide was confirmed.
  • DC dendritic cells
  • C57BL/6J mice were intravenously administered with 5 ⁇ 10 5 aAVC-OVA/CoV-2.
  • FIG. 7C in the aAVC-OVA-CoV2 treatment group, antigen-specific CD8 T cells that activated IFN- ⁇ production were induced against OVA, and IFN- ⁇ production against CoV-2-S protein was induced. It was found that antigen-specific CD8 T cells with activated - ⁇ production were induced.
  • the aAVC expressing multiple different antigens in this way can induce antigen-specific immunity against each antigen in vivo.
  • aAVC expressing a plurality of different antigens can exhibit immune-inducing effects comparable to aAVC expressing a single antigen.
  • SEQ ID NO: 1 Example of amino acid sequence of S protein of SARS-CoV-2 SEQ ID NO: 2: Example of amino acid sequence of human CD1d SEQ ID NO: 3: Amino acid sequence of 2A peptide SEQ ID NO: 4: Amino acid sequence of T2A peptide No. 5: amino acid sequence of P2A peptide SEQ ID No. 6: amino acid sequence of E2A peptide SEQ ID No. 7: amino acid sequence of F2A peptide

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Abstract

本開示は、コロナウイルスのスパイクタンパク質に対する免疫応答を誘発する人工アジュバントベクター細胞、および当該細胞を含む医薬組成物、並びにそれらの使用を提供する。本開示によれば、細胞は、コロナウイルスのスパイクタンパク質を発現する人工アジュバントベクター細胞（ａＡＶＣ）であり得る。

Description

コロナウイルスに対する免疫応答を誘発する人工アジュバントベクター細胞、および当該細胞を含む医薬組成物、並びにそれらの使用
　本開示は、コロナウイルスに対する免疫応答を誘発する人工アジュバントベクター細胞、および当該細胞を含む医薬組成物、並びにそれらの使用に関する。
　生体に対して抗原特異的免疫を誘導する方法が、感染症や腫瘍の予防および治療の方法として開発されている。特許文献１によれば、標的抗原およびＣＤ１ｄを共発現した形質転換体の細胞をＣＤ１ｄリガンドでパルス処理すると、生体内に標的抗原に対する特異的免疫を誘導できる。
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、スパイクタンパク質により宿主細胞（特に、ＩＩ型肺胞上皮細胞）のＡＣＥ２受容体に結合し、宿主細胞に感染する。スパイクタンパク質は、その内部に感染力と病原性を高めるフーリン切断部位を有する（非特許文献１）。現在上市されているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンは、抗原特異的抗体を誘導するものの、抗原特異的Ｔ細胞を誘導することはできないことが開示されている（非特許文献２参照）。一方で、ＣＴＬ（すなわち、ＣＤ８　Ｔ細胞）を誘導すると、免疫が不十分な対象においてＣＯＶＩＤ－１９による症状を抑制することができ、Ｂ細胞およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体応答を顕著に損なった患者において、ＣＤ８　Ｔ細胞が死亡率の低下を示したことが開示されている（非特許文献３）。
ＷＯ２００７／０９７３７０
Ａｎｄｅｒｓｅｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　２６，　４５０－４５２，　２０２０ Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ．　２０２１　Ｍａｒ　２３；ＮＥＪＭｃ２１０２０５１ Ｒｅｓ　Ｓｑ．，　ｒｓ．３．ｒｓ－１６２２８９，　２０２１
　本開示は、コロナウイルスに対する免疫応答を誘発する人工アジュバントベクター細胞、および当該細胞を含む医薬組成物、並びにそれらの使用を提供する。
　本開示はまた、２つの異なる抗原に対する免疫応答を誘発する人工アジュバントベクター細胞、および当該細胞を含む医薬組成物、並びにそれらの使用を提供する。
　本発明者らによれば、コロナウイルスに対する免疫応答を誘発する人工アジュバントベクター細胞は、抗原特異的抗体を誘導することができる上に、脾臓および肺組織において抗原特異的免疫細胞（特に抗原特異的Ｔ細胞）を誘導することを見出した。
　本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１）ＣＤ１ｄを細胞表面に発現した細胞であって、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドを結合しており、抗原をさらに発現し、抗原は、コロナウイルスのスパイクタンパク質またはその断片であり、これにより、（好ましくは、肺組織において）スパイクタンパク質特異的な免疫を誘導することができる、細胞。
（２）スパイクタンパク質が、Ｓ１およびＳ２を含む、上記（１）に記載の細胞。
（３）追加の抗原をさらに発現する、上記（１）または（２）に記載の細胞。
（４）追加の抗原が、がん抗原である、上記（３）に記載の細胞。
（５）上記（１）～（４）のいずれかに記載の細胞を含む、組成物。
（６）抗原特異的抗体および抗原特異的Ｔ細胞を誘導することに用いるための、上記（５）に記載の組成物。
（７）肺組織において抗原特異的Ｔ細胞を誘導することに用いるための、上記（５）に記載の組成物。
（８）抗原特異的Ｔ細胞が、抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞である、上記（６）または（７）に記載の組成物。
（９）抗原特異的Ｔ細胞が、エフェクターＴ細胞およびエフェクターメモリーＴ細胞からなる群から選択される、上記（６）～（８）のいずれかに記載の組成物。
（１０）単回投与される、上記（６）～（９）のいずれかに記載の組成物。
（１１）有効量のスパイクタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む脂質小胞を含むワクチンに対して不応性である対象に投与される、上記（６）～（１０）のいずれかに記載の組成物。
（１２）抗がん剤療法を受けた対象に投与される、上記（６）～（１１）のいずれかに記載の組成物。
（１３）対象が、前記ワクチンに対して抗体産生を有意に誘導しない対象である、上記（１１）または（１２）に記載の組成物。
（１４）対象が、前記ワクチンに対して抗体産生を有意に誘導しないことによる重症化リスクを有する対象である、上記（１３）に記載の組成物。
（１５）対象において抗原特異的な免疫を誘導する方法であって、
　当該対象に、第１の抗原第１の抗原（例えば、ベータコロナウイルスＳタンパク質）と第２の抗原（例えば、ベータコロナウイルスに関連しない抗原、例えば、腫瘍関連抗原）を発現するａＡＶＣの有効量を投与し、これにより、当該対象において前記腫瘍関連抗原とベータコロナウイルスＳタンパク質に対する抗原特異的な免疫を誘導することを含み、
　第１の抗原と第２の抗原は異なり（第１の抗原と第２の抗原は、例えば、同一生物種の異なるタンパク質に由来し、好ましくは異なる生物種のオーソログに由来し、より好ましくは異なる生物種の異なるタンパク質に由来する）、
　ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄを発現し、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドでパルスされている、方法。
（１６）前記対象が、がんを有する対象である、上記（１５）に記載の方法。
（１７）前記対象が、コロナウイルスに感染した対象である、上記（１５）に記載の方法。
（１８）前記対象が、コロナウイルスに感染し、かつがんを有する対象である、上記（１５）に記載の方法。
（１９）上記（１５）に記載の方法であって、
　当該対象に、第１の抗原（例えば、ベータコロナウイルスＳタンパク質）と第２の抗原（例えば、ベータコロナウイルスに関連しない抗原、例えば、腫瘍関連抗原）を発現するａＡＶＣの有効量を投与し、これにより、当該対象の肺組織においてベータコロナウイルスＳタンパク質に対する抗原特異的な免疫を誘導することを含み、
　ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄを発現し、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドでパルスされている、方法｛好ましくは、第１の抗原は、腫瘍関連抗原であり、第２の抗原は、ベータコロナウイルスＳタンパク質である｝。
（２０）上記（１９）に記載の方法であって、
　当該対象に、第１の抗原（例えば、ベータコロナウイルスＳタンパク質）と第２の抗原（例えば、ベータコロナウイルスに関連しない抗原、例えば、腫瘍関連抗原）を発現するａＡＶＣの有効量を肺組織（例えば、胸腔内）または肺組織以外（例えば、静脈内）に投与し、これにより、当該対象の肺組織においてベータコロナウイルスＳタンパク質に対する抗原特異的な免疫を誘導することを含み、
　ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄを発現し、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドでパルスされている、方法。
（２１）上記（１５）～（２０）のいずれかに記載の方法において用いるための、組成物または医薬組成物。
（３１）第１の抗原（例えば、ベータコロナウイルスＳタンパク質）は細胞内に発現している、上記（１５）～（２０）のいずれかに記載の方法。
（３２）第２の抗原（例えば、ベータコロナウイルスに関連しない抗原、例えば、腫瘍関連抗原）は細胞内に発現している、上記（１５）～（２０）のいずれかに記載の方法。
（３３）第１の抗原（例えば、ベータコロナウイルスＳタンパク質）および第２の抗原（例えば、ベータコロナウイルスに関連しない抗原、例えば、腫瘍関連抗原）は細胞内に発現している、上記（１５）～（２０）のいずれかに記載の方法。
（３４）第１の抗原が、ベータコロナウイルスＳタンパク質であり、第２の抗原が、腫瘍関連抗原である、上記（１５）～（２０）のいずれかに記載の方法。
（３５）第１の抗原が、ベータコロナウイルスＳタンパク質であり、第２の抗原が、腫瘍関連抗原である、上記（３１）～（３４）のいずれかに記載の方法。
（３６）第１の抗原を発現し、第２の抗原を発現しないまたは実質的に発現しないａＡＶＣと比較して、第１の抗原に対して同等強度の特異的免疫を誘導することができる、上記（１５）～（２０）のいずれかに記載の方法。
（３７）第１の抗原を発現し、第２の抗原を発現しないまたは実質的に発現しないａＡＶＣと比較して、第１の抗原に対して同等強度の特異的免疫を誘導することができる、上記（３１）～（３４）のいずれかに記載の方法。
（３８）第２の抗原を発現し、第１の抗原を発現しないまたは実質的に発現しないａＡＶＣと比較して、第２の抗原に対して同等強度の特異的免疫を誘導することができる、上記（１５）～（２０）のいずれかに記載の方法。
（３９）第２の抗原を発現し、第１の抗原を発現しないまたは実質的に発現しないａＡＶＣと比較して、第２の抗原に対して同等強度の特異的免疫を誘導することができる、上記（３１）～（３４）のいずれかに記載の方法。
（４０）上記（３１）～（３９）のいずれかに記載の方法において用いるための、組成物または医薬組成物。
（４１）上記（１）～（４）のいずれかに記載の細胞を含む、ワクチン（特に、コロナウイルスワクチン）。
（４２）上記（４）に記載の細胞を含む、ワクチン（特に、コロナウイルスワクチン）。
（４３）上記（４）に記載の細胞を含む、ワクチン（特に、がんワクチン）。
（４４）上記（４）に記載の細胞を含む、がんの予防もしくは治療のための、または、コロナウイルス感染症の予防もしくは治療のための、ワクチン。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質を発現した本開示の例示的ａＡＶＣの作成手順の一例を示す。 例示的ａＡＶＣにおける導入ｍＲＮＡ量とスパイクタンパク質の発現量の関係を示す。 例示的ａＡＶＣにおけるヒトＣＤ１ｄ（ｈＣＤ１ｄ）の発現を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質を発現した本開示の例示的ａＡＶＣ（ａＡＶＣ－ＣｏＶ２）によるＮＫＴ細胞のインビボでの誘導を示す。 ａＡＶＣ－ＣｏＶ２投与による、ＣＴＬ誘導と抗体（Ａｂ）誘導の評価スケジュールを示す。 ａＡＶＣ－ＣｏＶ２投与後のＳ１に対する特異的抗体の誘導を示す。 ａＡＶＣ－ＣｏＶ２投与後のＳ２に対する特異的抗体の誘導を示す。 ａＡＶＣ－ＣｏＶ２投与後のＩＮＦ－γ産生ＣＤ８単独陽性Ｔ細胞に対する特異的抗体の誘導を示す。 ａＡＶＣ－ＣｏＶ２投与後のマウスにおける血管系ＣＴＬの誘導と、肺組織におけるＣＴＬの誘導の実験スキームを示す。この実験では、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２投与７日（７ｄ）後に抗ＣＤ４５抗体を尾静注し、血管系のＣＴＬに抗ＣＤ４５抗体を結合させ、投与５分後に肺組織を回収して肺組織におけるＣＴＬの誘導を試験する。 未処置マウス（ｎａｉｖｅ）の肺組織のデータを示す。左下パネルは、肺組織から得られた血管内のＣＴＬであるＣＤ４５陽性の画分と、肺組織に浸潤したＣＴＬである陰性の画分とに分けることができることを示す。右下パネルは、血管ないのＣＴＬと浸潤したＣＴＬ関するＣＤ６２Ｌの発現およびＣＤ４４の発現を示す。 ａＡＶＣ－ＣｏＶ２投与後のマウスのデータを示す。左下パネルは、肺組織から得られた血管内のＣＴＬであるＣＤ４５陽性の画分（血管画分；ｖａｓｃｕｌａｒ）と、肺組織に浸潤したＣＴＬである陰性の画分（浸潤画分；ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ）とに分けることができることを示す。右下パネルは、血管内のＣＴＬと浸潤したＣＴＬ関するＣＤ６２Ｌの発現およびＣＤ４４の発現を示す。 未処置マウスとａＡＶＣ－ＣｏＶ２投与マウスにおける血管画分および浸潤画分それぞれにおけるＣＤ４単独陽性ＣＤ４４ｈｉＣＤ６２Ｌ－細胞の割合（％）、およびＣＤ８単独陽性ＣＤ４４ｈｉＣＤ６２Ｌ－細胞の割合（％）を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に加えてがん抗原を発現した本開示の例示的ａＡＶＣの作成手順の一例を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に加えてがん抗原のモデルとしてオボアルブミン（ＯＶＡ）を発現した本開示の例示的ａＡＶＣ（ａＡＶＣ－ＯＶＡ－ＣｏＶ－２）を投与したマウスにおけるＩＦＮ－γ産生性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の誘導を示す。ＣＤ８陽性Ｔ細胞は、Ｓタンパク質に対してもＯＶＡに対してもＩＦＮ－γ産生を誘導した。 ａＡＶＣ－ＯＶＡ－ＣｏＶ－２を投与したＯＶＡ発現腫瘍グラフトモデルにおける腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示す。ポジティブコントロールとして、ａＡＶＣにＯＶＡのみを強制発現させたａＡＶＣ（ａＡＶＣ－ＯＶＡ）を投与したＯＶＡ発現腫瘍グラフトモデルにおける腫瘍体積の変化と、上記体積変化が対比されている。 ＴＡＡタンパク質とスパイクタンパク質を細胞内に共発現し、かつ、細胞表面にＣＤ１ｄリガンドでパルスされたＣＤ１ｄを表出したａＡＶＣを図示する。 マウスにおけるａＡＶＣによる抗原特異的免疫誘導（上パネル）および抗腫瘍効果検証の実験スキーム（下パネル）を示す。 ＴＡＡ（ＯＶＡ）およびスパイクタンパク質（ＣｏＶ－２－Ｓ）それぞれに対するａＡＶＣによる抗原特異的免疫誘導の結果を示す。 ａＡＶＣにより誘導される抗腫瘍効果を示す。 ａＡＶＣにより誘導される抗腫瘍効果を示す。
発明の具体的な説明
＜定義＞
　本明細書では、「～を含む」は、「～からなる」または「～のみを含む」を包含する意味で用いられる。本明細書では、名詞の単数形は、断りのない限り、１またはそれ以上含む。
　本明細書では、「人工アジュバントベクター細胞」（ａＡＶＣ）とは、外来性又は内在性ＣＤ１ｄを発現し、該細胞表面上のＣＤ１ｄにＣＤ１ｄリガンドを積載している細胞（特に、ヒト細胞）である。ａＡＶＣは、当該分野で公知の方法を使用して当業者に容易に作製され得る。具体的には、ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄ発現細胞をＣＤ１ｄリガンド存在下で培養することによって得られ得る。細胞がヒト細胞である場合、ＣＤ１ｄは、ヒトＣＤ１ｄであり得る。ＣＤ１ｄリガンドとしては、α－ガラクトシルセラミド（α－ＧａｌＣｅｒ）を用いることができる。したがって、本発明のある好ましい態様では、ａＡＶＣは、外来性又は内在性ＣＤ１ｄを発現し、該細胞表面上のＣＤ１ｄにα－ＧａｌＣｅｒを積載しているヒト細胞である。
　本明細書では、「対象」とは、脊椎動物であり、例えば、ヒトを含む哺乳類、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が感染する哺乳類（ネコ、フェレット、コウモリ、およびセンザンコウ）であり得る。対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した対象であり得、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した無症状病原体保有者であり得、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染し、ＣＯＶＩＤ－１９を発症した対象であり得る。対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した可能性（リスク）を有する対象であり得、または、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染する可能性（リスク）を有する対象であり得る。対象は、小児（例えば、幼児（生後１～６年）、学童（生後６～１２年）、青年（生後１２年～）、成人（生後２０年～）であり得る。成人は、３０歳以上、４０歳以上、５０歳以上、６０歳以上、または７０歳以上の成人であり得る。
　本明細書では、「コロナウイルス」とは、ニドウイルス目コロナウイルス科オルトコロナウイルス亜科のウイルスであり、一本鎖プラス鎖ＲＮＡウイルスである。コロナウイルスは、ウイルス表面にスパイクタンパク質の突起（Ｓタンパク質）を有し、外観が太陽のコロナに似ていることからコロナウイルスと命名された。ヒトでは、風邪を含む呼吸器感染症を引き起こす。オルトコロナウイルス亜科のコロナウイルスは、アルファコロナウイルス、ベータコロナウイルス、ガンマコロナイウルス、およびデルタコロナウイルスに大別される。ＳＡＲＳ関連コロナウイルスは、ベータコロナウイルスに分類されている。ＳＡＲＳ関連コロナウイルスには、ＳＡＲＳコロナイウルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）およびＳＡＲＳコロナイウルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）が含まれる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、２０１９年末から新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）のパンデミックを引き起こしている。ＳＡＲＳ関連コロナウイルスは、Ｓタンパク質により宿主細胞のＡＣＥ２受容体に結合して宿主細胞に感染する。ＡＣＥ受容体を利用して細胞に感染する点で、ＳＡＲＳ関連コロナウイルスは共通した感染機構を有する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質は、内部に感染力と病原性を高めるフーリン切断部位が存在する（Ａｎｄｅｒｓｅｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　２６，　４５０－４５２，　２０２０）。
　本明細書では、「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２」は、２０２０年に引き起こされたパンデミックの原因となったコロナウイルスである。２０２０年１月７日に世界保健機関（ＷＨＯ）は、このウイルスを２０１９－ｎＣｏＶと暫定的に命名した。また、同年２月１１日に国際ウイルス分類委員会（ＩＣＴＶ）はこのウイルスをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と正式に命名した。コロナウイルスは、一般的な風邪から重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）や中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）などの重篤な呼吸器疾患を引き起こし得る。ＷＨＯは、この新型コロナウイルスによる疾患をＣＯＶＩＤ－１９と命名している。国際ウイルス分類委員会は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を、ベータコロナウイルス属に属し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶと同じ種（又はその姉妹系統）であるとしている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の完全ゲノム配列は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＭＮ９０８９４７．３として米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）に登録されている。ウイルス粒子（ビリオン）は、５０～２００ｎｍ程度の粒径を有し、一般的なコロナウイルスと同じようにスパイクタンパク質、ヌクレオキャプシドタンパク質、膜タンパク質、およびエンベロープタンパク質とウイルスゲノムＲＮＡを含む。ヌクレオキャプシドタンパク質がＲＮＡと複合体を形成し、その周囲に脂質と結合したスパイクタンパク質、膜タンパク質、およびエンベロープタンパク質が取り囲んで、ビリオンのエンベロープが形成される。エンベロープの最外表面に位置するスパイクタンパク質は、細胞表面のＡＣＥ２受容体に結合して細胞への感染を促進すると考えられている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染しても疾患の症状が現れない者が存在し、これを無症状病原体保有者という。無症状病原体保有者は、その保有するウイルスを他者に感染させる可能性があることが指摘されている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染によって、嗅覚および／または味覚が低下するまたは喪失することが指摘されている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、重症急性呼吸症候群を生じさせることがある。重症急性呼吸器症候群では、主症状として、４０℃程度の発熱、咳、息切れが報告されている。顕著な合併症は、肺炎である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染の有無は、主にＰＣＲ検査によって判定されている。このＰＣＲ検査は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２特異的にバンドを増幅するか否かによって、体内にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の遺伝子が存在するか否かを評価するものである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する治療としては、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗ウイルス薬（例えば、レムデシビル）、ステロイド系抗炎症薬（例えば、デキサメタゾン）、および炎症性サイトカインの阻害剤（例えば、ＩＬ－６阻害剤、例えば、抗ＩＬ－６抗体、ＴＮＦ－α阻害剤、例えば、エタネルセプト）が挙げられる。
　本明細書では、「スパイクタンパク質」は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＭＮ９０８９４７．３として米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）に登録されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ゲノムの２１５６３番目～２５３８４番目にコードされるタンパク質または配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するタンパク質であり得、上記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＱＨＤ４３４１６．１としてＮＣＢＩに登録されたアミノ酸配列を有する。スパイクタンパク質は、Ｓ１とＳ２を含み、Ｓ１は、上記アミノ酸配列の１３～５４１位に存在し、Ｓ２は、上記アミノ酸配列の５４３～１２０８位に存在する。Ｓ１はさらに、Ｎ末端ドメイン（ＮＴＤ）と受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を有し、ＮＴＤは、上記アミノ酸配列の１３～３０４位に存在し、ＲＢＤは、３１９～５４１位に存在する。Ｓ１とＳ２は、細胞内で切断され、別々のペプチドとして産生され、ウイルス粒子形成時に複合体を形成する。スパイクタンパク質は、Ｓタンパク質とも呼ばれる。スパイクタンパク質としては、天然のウイルス（例えば、変異ウイルスを含む）が有するスパイクタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＱＨＤ４３４１６．１としてＮＣＢＩに登録されたアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する）は、いずれも用いることができる。
　本明細書では、「ペプチド」は、アミノ酸のポリマーを意味する。ポリマーは、通常分岐を有しない。「部分ペプチド」とは、特定のペプチドの一部を意味する。ペプチドおよび部分ペプチドは、当該ペプチドをコードする核酸から製造され得る。ペプチドおよび部分ペプチドはまた、化学合成され得る。ペプチドおよび部分ペプチドはまた、単離、濃縮、または精製されている。単離とは、ペプチドおよび部分ペプチドを少なくとも他の成分から分離することを意味し、精製とは、ペプチドおよび部分ペプチドを少なくとも選択的に分離することを意味する。濃縮は、ペプチドおよび部分ペプチドの濃度が高まっていることを意味する。
　本明細書では、「組成物」とは、１以上の成分の混合物である。組成物は、例えば、部分ペプチドと水性溶媒（例えば、水）を含み得る。組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含んでいてもよい。本明細書では、免疫原性組成物とは、対象に投与することによって当該対象の体内で免疫反応を惹起することができる組成物である。免疫原性組成物は、対象において免疫反応を誘発することに用いられ得る。免疫原性組成物は、対象において免疫反応を惹起することができるので、ワクチンとして用いることができる。例えば、本発明の免疫原性組成物は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫反応を誘発することに用いられ得、または、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチンとして、もしくは治療薬として用いられ得る。本開示によれば、ａＡＶＣを含む免疫原性組成物は、獲得免疫、例えば、抗原特異的抗体および／または抗原特異的細胞性免疫を誘導し得る。
　本明細書では、「処置」は、予防的処置および治療的処置を含む。治療的処置は、感染したウイルスに対してなされ得、予防的処置は、将来の感染を予防するため、または将来の感染によりＣＯＶＩＤ－１９が発症するのを遅延させ、もしくは発症したＣＯＶＩＤ－１９の症状を低減するためになされ得る。治療的処置は、症状を有する患者または無症状病原体保有者に対してなされ得る。予防的処置は、無感染者に対してなされ得る。
　本明細書中、「外来性」又は「外来的」とは、遺伝子又は核酸を遺伝子操作又は遺伝子導入等の操作により目的の細胞内に人為的に導入すること、及び目的の細胞内に人為的に導入された遺伝子又は核酸、並びにそれら発現タンパク質を指す用語として交換可能に使用される。外来性の遺伝子は、遺伝子の発現を駆動するプロモーター配列に作動可能に連結されうる。本明細書中、「内在性」又は「内在的」とは、細胞に元々備わったものであることを意味する。
　本明細書中、「由来」とは、細胞またはタンパク質もしくはその断片が得られた動物種またはタンパク質を示すために用いられる。例えば、ヒト由来細胞は、当該細胞がヒトから得られた細胞であること、又は当該細胞を継代培養して得られた細胞株であることを意味し、例えば、ヒト細胞であることを意味する。Ｓタンパク質に由来するタンパク質断片とは、Ｓタンパク質のアミノ酸配列の一部を有する断片であり得る。
　本明細書における「同一性」とは、ＥＭＢＯＳＳ　Ｎｅｅｄｌｅ（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．；２０１５；４３：Ｗ５８０－Ｗ５８４）を用いて、デフォルトで用意されているパラメータによって得られたＩｄｅｎｔｉｔｙの値を意味する。前記のパラメータは以下のとおりである。
　Ｇａｐ　Ｏｐｅｎ　Ｐｅｎａｌｔｙ　＝　１０
　Ｇａｐ　Ｅｘｔｅｎｄ　Ｐｅｎａｌｔｙ　＝　０．５
　Ｍａｔｒｉｘ　＝　ＥＢＬＯＳＵＭ６２
　Ｅｎｄ　Ｇａｐ　Ｐｅｎａｌｔｙ　＝　ｆａｌｓｅ
＜本開示のａＡＶＣ、当該ａＡＶＣを含む組成物、およびその使用＞
　本開示では、コロナウイルスのスパイクタンパク質を発現するａＡＶＣが提供される。より具体的には、本開示では、ＣＤ１ｄを細胞表面に発現した細胞であって、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドを結合しており、抗原をさらに発現し、抗原は、コロナウイルスのスパイクタンパク質またはその断片であり、これにより、スパイクタンパク質特異的な免疫を誘導することができる、細胞が提供される。ある好ましい態様では、細胞は、哺乳動物由来、好ましくは霊長類由来、より好ましくはヒト由来細胞（またはヒト細胞）である。細胞は、単離された細胞である。ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄリガンドと結合したＣＤ１ｄを生体内でＮＫＴ細胞に提示することができる。ある好ましい態様では、コロナウイルスは、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）であり得る。
　本発明で使用される細胞は、増殖能を有する限りにおいて、例えば、胃、小腸、大腸、肺、膵臓、腎臓、肝臓、胸腺、脾臓、前立腺、卵巣、子宮、骨髄、皮膚、筋肉、末梢血等の任意のヒト組織由来の細胞であってよい。１つの実施形態において、本発明で使用されるヒト由来細胞は、非血球細胞である。本発明で使用される細胞は、組織における特定の細胞種（例えば、上皮細胞、内皮細胞、表皮細胞、間質細胞、線維芽細胞、脂肪組織、乳腺細胞、メサンギウム細胞、膵β細胞、神経細胞、グリア細胞、外分泌上皮細胞、内分泌細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、骨芽細胞、胚細胞、免疫細胞等）由来の細胞であってよい。本発明で使用される細胞は、正常細胞又はがん細胞であってもよい。１つの実施形態において、本発明で使用される細胞は、正常細胞である。１つの実施形態において、本発明で使用される細胞は、ヒト胎児腎細胞２９３（ＨＥＫ２９３）細胞（Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．；１９７７；３６：５９－７４）、ＷＩ－３８細胞、ＳＣ－０１ＭＦＰ細胞、又はＭＲＣ－５細胞、並びにそれら細胞に由来する細胞であってよい。１つの実施形態において、本発明で使用されるヒト由来細胞は、ＨＥＫ２９３細胞由来の細胞である。１つの実施形態において、本発明において使用されるヒト由来細胞は、ＨＥＫ２９３細胞またはＦｒｅｅＳｔｙｌｅＴＭ　２９３－Ｆ細胞である。これらの細胞は、好ましくは、血清フリーの培地において馴化された細胞であり得る。本発明において使用される細胞は、例えば、肺胞上皮細胞、特に、ＩＩ型肺胞上皮細胞であり得る。ＩＩ型肺胞上皮細胞を用いることで、より生体内で産生されるＳタンパク質と似たＳタンパク質を産生し得る。本発明において使用される細胞は、多くの場合にはｆｕｒｉｎ（フーリン）を発現するが、追加でｆｕｒｉｎを発現させてもよい。ヒトに投与される場合、ａＡＶＣはヒト由来の細胞であることが好ましい。
　１つの実施形態において、本発明で使用される細胞は、組織由来の不死化細胞又は株化細胞である。不死化細胞及び株化細胞は当業者により公知の方法を用いて作製することができる。
　本発明で使用されるＣＤ１ｄは、天然に存在するＣＤ１ｄであってよい。ＣＤ１ｄは、使用する細胞に内在的に発現するＣＤ１ｄであってもよく、使用する細胞に外来的に発現させたＣＤ１ｄであってもよい。１つの実施形態において、発現とは、細胞のいずれかの場所に発現していることを意味し、１つの実施形態において、細胞表面に発現していることを意味する。１つの実施形態において、ａＡＶＣは外来性ＣＤ１ｄを発現する。１つの実施形態において、本発明で使用されるＣＤ１ｄは哺乳類（例えば、ヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、チンパンジー等）由来のＣＤ１ｄである。１つの実施形態において、本発明で使用されるＣＤ１ｄはヒトＣＤ１ｄである。
　１つの実施形態において、ヒトＣＤ１ｄは、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。１つの実施形態において、ヒトＣＤ１ｄは、配列番号２に示されるアミノ酸配列において１又は数個、ある実施形態では１～１０個、１～７個、１～５個、１～３個、又は１～２個のアミノ酸の欠失、置換、挿入、及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、且つ、ＣＤ１ｄの機能を有するタンパク質である。１つの実施形態において、ヒトＣＤ１ｄは、配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ、ＣＤ１ｄの機能を有するタンパク質である。
　ＣＤ１ｄの機能としては、ＣＤ１ｄリガンド（例えば、α－ＧａｌＣｅｒ）に結合する能力が挙げられる。ＣＤ１ｄのＣＤ１ｄリガンドへの結合能は公知の方法を用いて当業者に容易に評価され得る。また、ＣＤ１ｄの機能は、ａＡＶＣによるヒトＮＫＴ細胞を活性化する能力を指標に評価することもできる。このヒトＮＫＴ細胞の活性化能は、特許文献１又は本願実施例４に記載の方法で評価することができる。
　本開示によれば、ａＡＶＣは、異なる複数の抗原を発現し得る。本開示によれば、例えば、ａＡＶＣは、複数（２以上）の別々のペプチド抗原を発現する。ペプチド抗原は、１つのｍＲＮＡにコードされてもよく、別々のｍＲＮＡにコードされてもよい。ペプチド抗原は、１つのタンパク質として翻訳されていてもよく、別々のタンパク質として翻訳されてもよい。ペプチド抗原は、例えば、細胞内で切断可能なリンカー（開裂性リンカーという）で連結されていてもよい。ペプチド抗原は、例えば、細胞内で切断されないリンカー（非開裂性リンカーという）で連結されていてもよい。細胞内で切断可能なリンカーとしては、特に限定されないが例えば、２Ａペプチド（ＤＸＥＸＮＰＧＰ；配列番号３のアミノ酸配列を有するペプチド、例えば、Ｔ２Ａ：ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号４）、Ｐ２Ａ：ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５）、Ｅ２Ａ：ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号６）、およびＦ２Ａ：ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号７））、およびフーリン（ｆｕｒｉｎ）切断部位（例えば、ＲＸＸＲ、特にＲ－Ｘ－Ｋ／Ｒ－Ｒ、例えば、ＲＡＲＲ、およびＲＶＲＲ、好ましくは、ＲＡＲＲ）並びにこれらに対応するアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられる。上記において、Ｘは、いずれのアミノ酸でもよいことを表す。アミノ酸としては、Ａ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｔ、Ｗ、Ｖ、Ｒ、Ｃ、Ｑ、Ｇ、Ｐ、Ｙ、Ｄ、Ｎ、Ｅ、およびＳが挙げられる。
　本開示によれば、例えば、ａＡＶＣは、複数（２以上）の別々のペプチド抗原を発現する。ある１つの態様では、ａＡＶＣは、スパイクタンパク質のＳ１部分および／またはＳ２部分を発現する。ある１つの態様では、ａＡＶＣは、スパイクタンパク質のＳ１部分および／またはＳ２部分を発現するが、これに加えて更なる抗原（例えば、がん抗原）を発現してもよい。ある１つの態様では、ａＡＶＣは、スパイクタンパク質のＳ１部分およびＳ２部分を発現し、これらが、開裂性リンカーもしくは非開裂性リンカーを介して、またはリンカーを介さずに直接的に、連結されている。ある１つの態様では、ａＡＶＣは、スパイクタンパク質のＳ１部分およびＳ２部分を別々のペプチドとして発現する。本開示によれば、ａＡＶＣが、複数の別々のペプチド抗原を発現する場合において、当該複数の別々のペプチドのいずれにも特異的な免疫応答を誘導し得る。これは、感染症対策において、ウイルス変異によっても、複数の別々のペプチドのいずれに対する免疫誘導も回避されなければ、ウイルスを処置できることを意味し、ａＡＶＣの変異に対するロバストな応答を保証するものとなり得る。また、ａＡＶＣは、自然免疫に加えて、Ｂ細胞免疫およびＴ細胞免疫（例えば、ＣＤ４単独陽性ＣＤ４４ｈｉＣＤ６２Ｌ－細胞およびＣＤ８単独陽性ＣＤ４４ｈｉＣＤ６２Ｌ－細胞）の両方を誘導することができ、これまでのｍＲＮＡワクチンではＢ細胞免疫しか誘導されないことと対照的である。したがって、加齢により免疫力が低下した対象、および他の治療により免疫力が低下した対象において、ａＡＶＣは特に有用であり得る。
　ある態様では、スパイクタンパク質は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）において発現しているスパイクタンパク質であり得る。ある態様では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号：ＭＮ９０８９４７．３として米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）に登録されたスパイクタンパク質またはこれと９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上同一なアミノ酸配列を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質であり得る。
　ａＡＶＣは体内では樹状細胞に貪食され、ａＡＶＣの細胞内に発現したタンパク質は数アミノ酸～１０アミノ酸程度のペプチドに分解されて、樹状細胞により抗原提示される。抗原提示されるのは、このような部分ペプチドであるから、ａＡＶＣに発現させるペプチドも部分ペプチドでもよい。したがって、ある態様では、抗原は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のスパイクタンパク質の一部（例えば、部分ペプチド）であり得る。当該配列に対応する位置のスパイクタンパク質のアミノ酸配列を有する部分ペプチドは、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のスパイクタンパク質の天然の変種において、上記ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のスパイクタンパク質の部分ペプチドとアラインメントしたときに対応する位置に並べられるアミノ酸配列を有する。部分ペプチドは、ある態様では、ＲＢＤに対応するＳ１の部分ペプチドまたはその一部を含み得る。部分ペプチドは、ある態様では、Ｓ１のＲＢＤ以外（例えば、ＮＴＤ）に対応するＳ１の部分ペプチドまたはその一部を含み得る。部分ペプチドは、ある態様では、Ｓ２またはその一部を含み得る。部分ペプチドは、例えば、１０アミノ酸以上、２０アミノ酸以上、または３０アミノ酸以上の長さを有する。
　ある態様では、スパイクタンパク質は、Ｓ１およびＳ２を含む。スパイクタンパク質を発現するａＡＶＣは、スパイクタンパク質を細胞内に発現し得る。ａＡＶＣは、体内ではＮＫＴ細胞により破壊され、樹状細胞によって貪食されると樹状細胞は成熟し、リンパ組織に移行して、リンパ組織においてＴ細胞等の獲得免疫系を賦活化する。このため、スパイクタンパク質は、細胞外に提示されててもよいが、必ずしも細胞外に提示されている必要はない。ａＡＶＣにおいては、抗原は、細胞内で発現していればよい。ある態様では、抗原は、Ｓ１およびＳ２の全長を含む、スパイクタンパク質であり得る。ある態様では、抗原は、グリコシル化されていてもよい。
　ａＡＶＣは、ある態様では、ＣＤ１ｄをコードするポリヌクレオチドと、スパイクタンパク質またはその一部をコードするポリヌクレオチドとを含む。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。ポリヌクレオチドがＤＮＡである場合には、ＣＤ１ｄをコードするポリヌクレオチドと、スパイクタンパク質またはその一部をコードするポリヌクレオチドは、それぞれ制御配列に作動可能に連結されており、ａＡＶＣ内において発現することができる。ポリヌクレオチドがＤＮＡである場合には、制御配列に作動可能に連結されたスパイクタンパク質（および場合によりＣＤ１ｄ）をコードするポリヌクレオチドは、発現ベクターに組み込まれていることができる。ＣＤ１ｄは、細胞が内在的に発現している場合には、改めて外部から供給する必要はない。しかし、細胞が内在的にＣＤ１ｄを発現している場合およびしていない場合において、細胞にＣＤ１ｄをコードするポリヌクレオチドを導入してもよい。これらのポリヌクレオチドの細胞への導入は、当業者に周知の方法により行うことができる。例えば、ポリヌクレオチドを細胞に導入する方法として、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム沈殿法、およびリポフェクション法などが知られている。ポリヌクレオチドは、ウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター等）を用いて細胞に導入されてもよい。
　制御配列は、例えば、恒常的に発現を促進するプロモーター又は薬剤等（例えば、テトラサイクリン又はドキシサイクリン等）により誘導されるプロモーターのいずれも用いることができる。恒常的に発現を促進するプロモーターとしては、例えば、ＣＭＶ（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）、ＲＳＶ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｃｙｔｉａｌ　ｖｉｒｕｓ）、ＳＶ４０（ｓｉｍｉａｎ　ｖｉｒｕｓ　４０）等のウイルス由来プロモーター、アクチンプロモーター、ＥＦ（ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ）１αプロモーター等が挙げられる。誘導型プロモーターとしては、例えば、テトラサイクリン応答因子（ＴＲＥ３Ｇプロモーター）、Ｃｕｍａｔｅオペレーター配列、λオペレーター配列（１２×λＯｐ）、ヒートショックプロモーター等が挙げられ、本発明で用いることができる。
　発現ベクターは、開始コドン及び終止コドンを含み得る。この場合、エンハンサー配列、非翻訳領域、スプライシング接合部、ポリアデニレーション部位、又は複製可能単位等を含んでいてもよい。また、発現ベクターには、目的の遺伝子の発現を確認するためのマーカーとなり得る遺伝子（例えば、薬剤耐性遺伝子、レポーター酵素をコードする遺伝子、又は蛍光タンパク質をコードする遺伝子等）を含んでいてもよい。
　ある態様では、抗原は、スパイクタンパク質のＳ１を含む。ある態様では、抗原は、スパイクタンパク質のＳ２を含む。ある態様では、抗原は、スパイクタンパク質のＳ１およびＳ２を含む。スパイクタンパク質のＳ１およびＳ２は、細胞内に存在するタンパク質分解酵素の切断部位をＳ１とＳ２の間に有する。タンパク質分解酵素は、天然のスパイクタンパク質においてはフーリンである。
　ある態様では、ａＡＶＣは、第１の抗原と第２の抗原を発現しており、第１の抗原と第２の抗原は異なり、第１の抗原を発現し、第２の抗原を発現しない、または実質的に発現しないａＡＶＣと比較して、第１の抗原に対して同等強度の特異的免疫を誘導することができる。ある態様では、ａＡＶＣは、第１の抗原と第２の抗原を発現しており、第１の抗原と第２の抗原は異なり、第１の抗原を発現し、第２の抗原を発現しない、または実質的に発現しないａＡＶＣと比較して、第１の抗原に対して同等強度の特異的免疫を誘導することができる。
　ある態様では、ａＡＶＣは、第１の抗原（例えば、スパイクタンパク質）に加えて追加の抗原（第２の抗原）を発現している。ある態様では、ａＡＶＣは、スパイクタンパク質に加えて追加の抗原（第２の抗原）を細胞内（例えば、細胞質内）に発現している。後述する実施例によれば、このような複数の異なる抗原を発現するａＡＶＣは、インビボでそれぞれの抗原に対する抗原特異的な免疫を誘導できる。ある好ましい態様では、複数の異なる抗原を発現するａＡＶＣは、その抗原のうちの一つのみを発現するａＡＶＣと比較して、同等強度の抗原特異的な免疫を誘導することができる。例えば、スパイクタンパク質（第１の抗原）と第２の抗原を発現するａＡＶＣは、スパイクタンパク質を（同等強度で）発現し、第２の抗原を発現しない、または実質的に発現しないａＡＶＣと比較して、スパイクタンパク質に対して同等強度の抗原特異的な免疫を誘導することができる。また例えば、スパイクタンパク質（第１の抗原）と第２の抗原を発現するａＡＶＣは、スパイクタンパク質を発現せず、または実質的に発現せず、第２の抗原を（同等強度で）発現するａＡＶＣと比較して、第２の抗原に対して同等強度の抗原特異的な免疫を誘導することができる。
　本明細書において、同等強度の抗原特異的な免疫とは、比較する２群間において、例えば、ａＡＶＣを受けた対象における胸腺中の抗原特異的なＩＮＦ－γ産生Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４陽性Ｔ細胞またはＣＤ８陽性Ｔ細胞）の数が、±５０％以内、±４０％以内、±３０％以内、±２０％以内、±１０％以内、または±５％以内の相違しか有しないことを意味する（ここで相違は小さいほど好ましい）。本明細書において、同等強度は、比較する２群間の発現強度が、±５０％以内、±４０％以内、±３０％以内、±２０％以内、±１０％以内、または±５％以内の相違しか有しないことを意味する（ここで相違は小さいほど好ましい）。ある態様では、第２の抗原は、内在性の抗原であり得るが、好ましくは、外来性の抗原とすることができる。ある好ましい態様では、第２の抗原を発現するａＡＶＣは、例えば、制御配列に作動可能に連結された抗原をコードする遺伝子を含む構築物を含むが、当該構築物は非天然の構築物であり得る。
　ある態様では、抗原は、スパイクタンパク質またはその一部と、追加の抗原を含む。スパイクタンパク質またはその一部と、追加の抗原を有するａＡＶＣは、対象に投与されると、スパイクタンパク質特異的免疫と、当該追加の抗原特異的免疫の両方を誘導し得る。ある態様では、追加の抗原は、腫瘍関連抗原（がん抗原）であり得る。がん抗原としては、特に限定されないが、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、Ｍａｇｅ－１、Ｍａｇｅ－３、ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＣＡ－１２５、ｅｒｂ－２、Ｍｕｃ－１、Ｍｕｃ－２、ＴＡＧ－７２、ＡＥＳ、ＦＢＰ、Ｃ－レクチン、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｇａｌｅｃｔｉｎ－４／ＮＹ－ＣＯ－２７、Ｐｅｃ６０、ＨＥＲ－２／ｅｒｂＢ－２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、Ｇ２５０、Ｈｓｐ１０５、点変異ｒａｓ癌遺伝子、点変異ｐ５３癌遺伝子、癌胎児性抗原が挙げられる（例えば、特開２００５－１３９１１８号公報、特開２００４－１４７６４９号公報、特開２００２－１１２７８０号公報、特開２００４－２２２７２６号公報を参照）。造血組織における腫瘍（例、白血病）の抗原としては特に限定されないが、例えば、ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　３、ＷＴ－１、ｈＴＥＲＴ、ＰＲＡＭＥ、ＰＭＬ／ＲＡＲ－ａ、ＤＥＫ／ＣＡＮ、シクロフィリンＢ、ＴＥＬ－ＭＡＬ１、ＢＣＲ－ＡＢＬ、ＯＦＡ－ｉＬＲＰ、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ｉｄｉｏｔｙｐｅ、Ｓｐｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１７、ＳＰＡＮ－Ｘｂ、ＣＴ－２７、ＭＵＣ１が挙げられる。
　本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物が提供される。本開示の組成物は、対象において抗原特異的な免疫を誘導することに用いられる。具体的には、スパイクタンパク質特異的な免疫を誘導することができる。本開示の組成物は、スパイクタンパク質特異的抗体およびスパイクタンパク質特異的Ｔ細胞を誘導し得る。特にＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞であり得る。細胞傷害性Ｔ細胞は、インターフェロンγ産生能を有する。本開示では、スパイクタンパク質特異的Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞およびエフェクターメモリーＴ細胞であり得る。本開示では、スパイクタンパク質特異的Ｔ細胞は、（例えば、ＣＤ４単独陽性ＣＤ４４ｈｉＣＤ６２Ｌ－細胞およびＣＤ８単独陽性ＣＤ４４ｈｉＣＤ６２Ｌ－細胞）であり得る。本開示では、誘導は、血管内に加えて肺組織内において、これらのＴ細胞を誘導することができる。本開示のａＡＶＣを含む組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含んでいてもよい。本開示のａＡＶＣを含む組成物は、放射線（例えば、γ線）滅菌されたａＡＶＣを含んでいてもよい。
　本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、肺において、抗原特異的免疫を誘導することができる。本開示のａＡＶＣを含む組成物による肺における抗原特異的免疫の誘導は、ａＡＶＣをシステミックに投与（例えば、静脈内投与）した場合においても達成され得る。ａＡＶＣは、投与経路によらずに全身性の免疫を誘導するため、このことは、投与経路によらずに肺組織における免疫誘導が可能であることを示唆するものである。これにより、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、肺胞上皮細胞に対して感染するコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス）に対して有効な防御または治療を提供し得る。本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス）の感染を予防または治療することに用いることができる。
　本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、単回投与により抗原特異的抗体および抗原特異的Ｔ細胞を誘導し得る。したがって、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、単回投与され得る。ある態様では、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、対象に複数回（例えば、２回、３回、４回）投与され得る。単回投与であっても、抗原特異的抗体および抗原特異的Ｔ細胞を誘導し得る点で有利である。複数回投与された対象は、２回目以降の免疫により抗原特異的免疫をより強く誘導し得る。
　本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、抗原特異的抗体に加えて、抗原特異的Ｔ細胞を誘導し得る。これに対して、現在上市されているＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンは、抗原特異的抗体を誘導するものの、抗原特異的Ｔ細胞を誘導することはできない（例えば、Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ．　２０２１　Ｍａｒ　２３；ＮＥＪＭｃ２１０２０５１参照）。一方で、ＣＴＬ（すなわち、ＣＤ８　Ｔ細胞）を誘導すると、免疫が不十分な対象においてＣＯＶＩＤ－１９による症状を抑制することができる（Ｒｅｓ　Ｓｑ．，　ｒｓ．３．ｒｓ－１６２２８９，　２０２１）。特に、Ｂ細胞およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体応答を顕著に損なった患者において、ＣＤ８　Ｔ細胞が死亡率の低下を示した（Ｒｅｓ　Ｓｑ．，　ｒｓ．３．ｒｓ－１６２２８９，　２０２１）。Ｂ細胞の不全や抗体の応答は、ＣＯＶＩＤ－１９による症状の重症化をもたらし得るところ、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、Ｂ細胞を実質的に有しない、および／または抗原に対する抗体応答を実質的に示さない対象において、ＣＯＶＩＤ－１９の予防および／または重症化の抑制に用いられ得る。
　本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、Ｂ細胞を実質的に有しない、および／または抗原に対する抗体応答を実質的に示さない対象に対して投与され得る。この態様では、感染した対象における抗原特異的Ｔ細胞免疫誘導による治療効果が期待される。
　本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、有効量のスパイクタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む脂質小胞を含むワクチンに対して不応性である対象に対して、抗原特異的Ｔ細胞を誘導させることに用い得る。
　本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、ワクチンに対して有意な抗体産生を示さない対象に対して投与され得る。本開示のａＡＶＣを含む組成物は、抗原特異的Ｔ細胞免疫を誘導することができることから、そのような対象においても、Ｔ細胞免疫誘導を介して、ワクチン効果を得ることができる。そのような対象は、例えば、有効量のスパイクタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む脂質小胞を含むワクチンに対して不応性である対象、または、抗がん剤療法を受けた対象であり得る。
　本開示によれば、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、追加の抗原（第２の抗原）を発現するａＡＶＣを含み、追加の抗原はがん抗原であり、がんを有する対象に対して投与され得る。本開示によればまた、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、追加の抗原を発現するａＡＶＣを含み、追加の抗原はがん抗原であり、かつ、がんを有する対象にがんを処置するため、およびコロナウイルスに対する免疫を誘導するために投与され得る。がんを有する対象は、抗がん剤療法を受けた対象または受けていない対象であり得る。抗がん剤療法を受けた対象においては、免疫が抗がん剤により障害または損傷を受けていることが多い。そのような対象においても、本開示のａＡＶＣを含む組成物は、免疫を賦活化させ、がん治療効果およびウイルスワクチンまたは治療効果を奏し得る。
　本開示によれば、対象において、スパイクタンパク質特異的な抗体産生を誘導する方法が提供される。本開示によればまた、対象において、スパイクタンパク質特異的なＴ細胞免疫を誘導する方法が提供される。本開示によれば、対象の肺組織においてＴ細胞免疫を誘導する方法が提供される。本開示によれば、方法は、対象に本開示の有効量のａＡＶＣまたは当該ａＡＶＣを含む組成物を投与することを含む。投与は、特に限定されないが例えば、静脈内投与であり得る。
　本開示によれば、処置される対象は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に感染していない対象であり得る。ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に感染していない対象に対して本開示のａＡＶＣを投与することにより、抗原特異的免疫を誘導し得、例えば、当該対象において抗原特異的抗体および抗原特異的Ｔ細胞を誘導し得る。これにより、感染症に対する予防効果または発症後の重症化の予防効果が期待できる。本開示によれば、対象は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に感染している対象であり得る。ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に感染している対象に対して本開示のａＡＶＣを投与することにより、当該対象において抗原特異的Ｔ細胞免疫を誘導し、重症化の予防効果または治療効果を発揮し得る。本開示によれば対象は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に感染したことがある対象であり得る。ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に感染したことがある対象は、感染後、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）による疾患が治癒した対象であり得る。本発明によれば、対象は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するｍＲＮＡワクチンに対して不応性の対象であり得る。ｍＲＮＡワクチンでは抗原特異的抗体の誘導は認められるものの、細胞性免疫（特にＴ細胞免疫）の誘導は確認されていない。したがって、ｍＲＮＡワクチンに対して不応性であったとしても、本開示のａＡＶＣは有効であり得る。ＳＡＲＳ関連コロナウイルスは、好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であり得る。
　本開示によれば、処置される対象は、Ｂ細胞免疫の低下、または抗原特異的抗体応答の低下を示す患者であり得る。本開示によれば、対象は、Ｔ細胞免疫を保持している患者であり得る。本開示によれば、対象は、Ｂ細胞免疫の低下、または抗原特異的抗体応答の低下を示し、かつ、Ｔ細胞免疫を保持している患者であり得る。本開示によれば、対象は、Ｂ細胞を実質的に有しない、および／または抗原に対する抗体応答を実質的に示さない対象であり得る。これらのＢ細胞免疫の低下、および抗体の応答の低下を有する患者に投与する態様では、感染した対象における抗原特異的Ｔ細胞免疫誘導による治療効果または重症化抑制効果が期待される。Ｂ細胞免疫の低下、または抗原特異的抗体応答の低下を示す患者は、腫瘍を有する患者、特に化学療法を受けた患者であり得る。本開示によれば、抗原特異的抗体応答または抗原特異的Ｔ細胞応答のいずれかが賦活化されれば、本開示のａＡＶＣによる感染予防または感染症治療効果が期待されるため、広範の患者において有用であり得る。
　本開示によれば、処置される対象は、腫瘍を有する患者であり得る。腫瘍を有する患者に対しては、当該腫瘍が発現する抗原と前記スパイクタンパク質またはその一部を発現するａＡＶＣを投与することができる。本開示によれば、腫瘍を有する患者は、化学療法を受けた患者であり得る。本開示によれば、腫瘍を有する患者は、Ｂ細胞免疫の低下、または抗原特異的抗体応答の低下を示す患者であり得る。腫瘍を有する患者に対して投与することで、腫瘍を処置することに加えて、当該対象において抗原特異的抗体および抗原特異的Ｔ細胞を誘導し得る。これにより、感染症に対する予防効果または発症後の重症化の予防効果が期待できる。
　本開示によれば、処置される対象は、６０歳以上、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、または８０歳以上のヒト患者であり得る。これらの患者においては、加齢により往々にして免疫力が低下している。ａＡＶＣは、自然免疫のみならず、獲得免疫系全体を賦活化することができるために、免疫力が低下した対象において、抗原特異的免疫を誘発することに用い得る。また、抗原特異的抗体応答または抗原特異的Ｔ細胞応答のいずれかが賦活化されれば、本開示のａＡＶＣによる感染予防または感染症治療効果が期待されるため、広範の患者において有用であり得る。本開示によれば、処置される対象は、６０歳以上、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、または８０歳以上のヒト患者であって、コロナウイルス非感染者であり得る。本開示によれば、処置される対象は、６０歳以上、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、または８０歳以上のヒト患者であって、コロナイウルス感染者であり得る。感染者においては、ａＡＶＣが誘発するＴ細胞免疫により、疾患の治癒効果、進行の抑制効果、および／または重症化の抑制効果が奏され得る。
　本開示によれば、コロナウイルスの予防または治療のための医薬組成物の製造におけるａＡＶＣの使用が提供される。ａＡＶＣは、上述した通りである。医薬組成物の投与対象は、上述した通りである。
　本開示によれば、上記方法において用いるための、組成物が提供される。本開示によれば、上記方法において用いるためのａＡＶＣが提供される。
実施例１：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質を提示するａＡＶＣの調製
　本実施例では、コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のスパイクタンパク質を発現するａＡＶＣ（以下、「ａＡＶＣ－ＣｏＶ２」という）の調製を試みた。
　図１に示されるように、ＮＩＨ３Ｔ３細胞にＳタンパク質（配列番号１）をコードするｍＲＮＡ、並びにＣＤ１ｄ（配列番号２）をコードするｍＲＮＡをトランスフェクションし、ＣＤ１ｄに対してＣＤ１ｄリガンドをパルスして、ａＡＶＣを調製した。トランスフェクションは、細胞懸濁液にＳタンパク質のｍＲＮＡとＣＤ１ｄ　ｍＲＮＡを添加し、ＮＥＰＡ２１エレクトロポレーター（ネッパジーン株式会社）を用いてエレクトロポレーション（ポアーリングパルス：電圧１５０Ｖ、パルス幅８ｍｓ、パルス間隔５０ｍｓ、回数２回、減衰率４０％、極性＋、トランスファーパルス：電圧２０Ｖ、パルス幅５０ｍｓ、パルス間隔５０ｍｓ、回数±５回、減衰率１０％、極性＋／－）を用いて行った。本実施例では、ＣＤ１ｄリガンドとして、α－ガラクトシルセラミド（α－ＧａｌＣｅｒ、十全化学株式会社に合成を委託）を用いた。
　スパイクタンパク質の発現をウェスタンブロッティングにより確認した。結果は、図２Ａに示される通りであった。図２Ａに示されるように、スパイクタンパク質は、導入したｍＲＮＡ量（μｇ）に用量依存的に発現していることが確認された。また、ＣＤ１ｄの発現をフローサイトメトリーにより測定した。フローサイトメトリーは、ＡＰＣ　Ｍｏｕｓｅ　Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ　ＣＤ１ｄ抗体（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、Ｃａｔ．５６３５０５）を使用し、ＦＡＣＳ　ＣａｌｉｂｕｒＴＭ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて行った。結果は図２Ｂに示される通りであった。図２Ｂに示されるように、ａＡＶＣにおいては９５．３％の細胞においてＣＤ１ｄの発現が確認された。
　次に、得られたａＡＶＣ－ＣｏＶ２を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）をマウスに尾静脈投与した。投与細胞数は、２．５×１０７細胞／ｋｇ体重とした。投与後、図３Ａに示される時系列で処置マウスから血清を得て、ＣＴＬの検査、抗体（Ａｂ）の結果を実施した。初回の投与の５６日後に同用量のａＡＶＣ－ＣｏＶ２をさらに投与し、ブースト免疫を行った。血清中の抗Ｓ１抗体と抗Ｓ２抗体のレベルを測定した。測定は、ＥＬＩＳＡにより実施した。結果は、図３Ｂおよび３Ｃに示される通りであった。図３Ｂに示されるように、抗Ｓ１抗体レベルは、処置１４日後には劇的に向上し、ブースト免疫後にはその量はさらに劇的に増加した。また、図３Ｃに示されるように、抗Ｓ２抗体レベルは、処置１４日後には劇的に向上し、ブースト免疫後にはその量はさらに劇的に増加した。このように、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２は、インビボでＳ１およびＳ２特異的免疫を誘導することが明らかになった。
　得られた脾臓中のＣＴＬ（すなわち、ＣＤ８単独陽性Ｔ細胞、以下「ＣＤ８Ｔ細胞」という）のレベルを測定した。脾臓から、ＣＤ８　ＭＡＣＳ　Ｂｅａｄｓ　（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ　Ｂｉｏｔｅｃ）によりＣＤ８Ｔ細胞を取得した。抗原提示細胞としてナイーブマウスの脾臓よりＣＤ１１ｃ　ＭＡＣＳ　Ｂｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ　Ｂｉｏｔｅｃ）により樹状細胞（以下ＤＣ）を取得した。抗原としてＰｅｐｔｉｖａｔｏｒ　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２　Ｐｒｏｔ＿Ｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ　Ｂｉｏｔｅｃ）を添加した。３×１０５細胞のＣＤ８Ｔ細胞あたりのインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）の産生量を測定した。測定は、ＥＬＩＳＰＯＴ法により行った。結果は、図４に示される通りであった。図４に示されるように、処置７日後にＩＦＮ－γ産生ＣＴＬの誘導を認め、ブースト免疫後にＩＦＮ－γ産生ＣＴＬがさらに増強した。このように、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２は、抗原特異的なＴ細胞免疫を惹起することが示唆された。
　ａＡＶＣ－ＣｏＶ２は、インビボで抗原特異的な抗体およびＴ細胞免疫を誘導した。この誘導は、ブースト免疫により強化されたことから、記憶免疫が誘導されたことが示唆された。
　次に、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２の体内動態を確認した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、肺に存在するＩＩ型肺胞上皮細胞を介して感染するとされる。そこで、肺におけるＣＴＬの浸潤を確認した。具体的には、図５Ａに示されるように、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２処置７日後に抗ＣＤ４５抗体を尾静注した。５分後に肺を回収した。抗ＣＤ４５抗体は、血管系に存在する血液細胞（特に免疫細胞）に結合するため、血管系に存在するこれらの細胞を染色することができる。これに対して組織に浸潤したＣＴＬは抗体では染まらず、抗ＣＤ４５抗体の尾静注により、ＣＴＬはその生体における存在部位により染め分けられる。
　処置７日後のマウスから肺を摘出し、肺組織をコラゲナーゼＤで処理して細胞をばらし、ＣＤ８陽性細胞について、抗ＣＤ４５抗体の結合に基づいてフローサイトメトリーを実施した。結果は、図５Ｂおよび５Ｃに示される通りであった。図５Ｂに示されるように、未処置群では、肺組織に浸潤したＣＴＬは全体の約２．５％に過ぎなかったのに対して、図５Ｃに示されるように、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２処置群では、肺組織に浸潤したＣＴＬは全体の約１６％に向上した。さらに、ＣＤ６２Ｌ陰性、ＣＤ４４陽性の画分（エフェクターＴ細胞およびエフェクターメモリー細胞）は、未処置群では浸潤したＣＴＬ中の約１２．６％に過ぎなかったが、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２処置群では、浸潤したＣＴＬ中の８７．４％を占めた。一方、血管系に存在するＣＴＬに関して、未処置群では、ＣＤ６２Ｌ陰性、ＣＤ４４陽性の画分は約６％に過ぎなかったのに対して、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２処置群では、ＣＤ６２Ｌ陰性、ＣＤ４４陽性の画分は約７８．９％を占めた。また、摘出した肺から得られたＣＤ４Ｔ細胞についても同様に分析を行った。その結果、図５Ｄに示されるように、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２処置群において、エフェクターメモリー細胞およびエフェクター細胞であるＣＤ６２Ｌ陰性、ＣＤ４４陽性の画分の割合が、肺組織中および血管系のいずれにおいても増加した。
　このことは、脾臓などのリンパ組織でプライムされ、活性化したエフェクターＴ細胞がリンパ組織から血管に遊走し、その後、血管内から肺組織内に到達したことを示す結果である。この結果から、ａＡＶＣ－ＣｏＶ２の投与は、肺組織におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して抗ウイルス効果を奏するものと期待できる。
実施例２：ａＡＶＣによる腫瘍特異的免疫とウイルス特異的免疫の誘導
　本実施例では、図６Ａに示されるように、実施例１と同様の手順によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質とオボアルブミン（ＯＶＡ）を提示するａＡＶＣ（以下、ａＡＶＣ－ＯＶＡ－ＣｏＶ２という）を調製し、当該ａＡＶＣが、複数の抗原に特異的な免疫を誘導できるかを試験した。実施例１と同様にＣＤ８Ｔ細胞を取得して、樹状細胞（ＤＣ）と抗原ペプチド存在下におけるＩＦＮ－γ産生を確認した。
　結果は、図６Ｂに示される通りであった。ａＡＶＣ－ＯＶＡ－ＣｏＶ２処置群では、ＯＶＡに対してＩＦＮ－γ産生を活性化した抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞が誘導されたことが明らかとなった。また、当該群では、スパイクタンパク質の発現に対してもＩＦＮ－γ産生を活性化した抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞が誘導されたことが明らかとなった。このように、ａＡＶＣは、複数の抗原を提示することができ、かつ、複数の抗原に対して抗原特異的な免疫を誘導することができた。
実施例３：多価抗原発現ａＡＶＣによる抗原特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞応答と抗腫瘍効果
　本実施例では、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）とスパイクタンパク質を発現するａＡＶＣ（ａＡＶＣ－ＴＡＡ／ＣｏＶ－２）を実施例１に従って作製し、その免疫誘導能と抗腫瘍効果を評価した。
　ａＡＶＣ－ＴＡＡ／ＣｏＶ－２は、細胞内にＴＡＡ（ＯＶＡまたはＴＲＰ２）とＣｏＶ－２－Ｓタンパク質を、細胞表面にＣＤ１ｄ／α－ＧａｌＣｅｒ複合体を発現する細胞である（図７Ａ）。図７Ｂには、ＣＤ８陽性Ｔ細胞応答の検査（上パネル）および抗腫瘍効果試験（下パネル）が示される。実施例１と同様にＣＤ８Ｔ細胞を取得して、樹状細胞（ＤＣ）と抗原ペプチド存在下におけるＩＦＮ－γ産生を確認した。具体的には、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、５×１０５個のａＡＶＣ－ＯＶＡ／ＣｏＶ－２を静脈内投与した。７日目に、タンパク質またはペプチドプールで２４時間培養した後、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋　Ｔ（図７Ｃの上パネル）およびＣｏＶ－２－Ｓ特異的ＣＤ８＋　Ｔ（図７Ｃの下パネル）細胞応答をＩＦＮ－γ　ＥＬＩＳＰＯＴ　ａｓｓａｙを用いて評価した（平均　±　ＳＥＭ、ｎ　＝　５）。結果は図７Ｃに示される通りであった。灰色の棒は平均値、その他の記号は各データをそれぞれ表す（＊＊＊ｐ＜０．００１　Ｔｕｋｅｙ’ｓ　ｔｅｓｔ）。図７Ｃに示されるように、ａＡＶＣ－ＯＶＡ－ＣｏＶ２処置群では、ＯＶＡに対してＩＦＮ－γ産生を活性化した抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞が誘導され、また、ＣｏＶ－２－Ｓタンパク質に対してＩＦＮ－γ産生を活性化した抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞が誘導されたことが明らかとなった。
　次に、ａＡＶＣ－ＯＶＡ／ＣｏＶ－２による抗腫瘍効果を評価した。マウスに５×１０５　ＭＯ４をｓ．ｃ．で接種し、１０日後に５×１０５　ａＡＶＣ－ＯＶＡ／ＣｏＶ－２またはａＡＶＣ－ＯＶＡをｉ．ｖ．で投与した。その後、移植された腫瘍のサイズを経時的に測定した（平均±ＳＥＭ、ｎ＝６～７／グループ）。その結果は、図７Ｄに示される通りであった。図７Ｄに示されるように、ａＡＶＣ－ＯＶＡ／ＣｏＶ－２は、ＭＯ４に対して抗腫瘍効果を示し、その効果は、ａＡＶＣ－ＯＶＡと同等であった。すなわち、ＣｏＶ－２のＳタンパク質と多重抗原にしたことによってその効果に負の影響は認められなかった（＊＊ｐ＜０．００１　Ｔｕｋｅｙ’ｓ　ｔｅｓｔ、ＮＳ：有意でない）。
　さらに、ａＡＶＣ－ＴＲＰ２／ＣｏＶ－２による抗腫瘍効果を評価した。マウスに１×１０５　Ｂ１６をｓ．ｃ．で接種し、７日目に５×１０５　ａＡＶＣ－ＴＲＰ２／ＣｏＶ－２またはａＡＶＣ－ＴＲＰ２をｉ．ｖ．で投与した。その後、移植された腫瘍のサイズを経時的に測定した（平均±ＳＥＭ，ｎ＝６－７／群）。その結果は、図７Ｅに示される通りであった。図７Ｄに示されるように、ａＡＶＣ－ＴＲＰ２／ＣｏＶ－２は、Ｂ１６に対して抗腫瘍効果を示し、その効果は、ａＡＶＣ－ＴＲＰ２と同等であった。すなわち、ＣｏＶ－２のＳタンパク質と多重抗原にしたことによってその効果に負の影響は認められなかった（＊＊＊ｐ＜０．００１　Ｔｕｋｅｙ’ｓ　ｔｅｓｔ，ＮＳ：有意でない）。
　このように複数の異なる抗原を発現するａＡＶＣは、インビボにおいて、それぞれの抗原に対して抗原特異的免疫を誘導することができる。また、複数の異なる抗原を発現するａＡＶＣは、単一の抗原を発現するａＡＶＣと遜色ない免疫誘導効果を示し得るものである。
　配列表について
配列番号１：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質のアミノ酸配列の例
配列番号２：ヒトＣＤ１ｄのアミノ酸配列の例
配列番号３：２Ａペプチドのアミノ酸配列
配列番号４：Ｔ２Ａペプチドのアミノ酸配列
配列番号５：Ｐ２Ａペプチドのアミノ酸配列
配列番号６：Ｅ２Ａペプチドのアミノ酸配列
配列番号７：Ｆ２Ａペプチドのアミノ酸配列

Claims (22)

  1. 　ＣＤ１ｄを細胞表面に発現した細胞であって、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドを結合しており、抗原をさらに発現し、抗原は、コロナウイルスのスパイクタンパク質またはその断片であり、これにより、スパイクタンパク質特異的な免疫を誘導することができる、細胞。
  2. 　スパイクタンパク質が、Ｓ１およびＳ２を含む、請求項１に記載の細胞。
  3. 　追加の抗原をさらに発現する、請求項１または２に記載の細胞。
  4. 　追加の抗原が、がん抗原である、請求項３に記載の細胞。
  5. 　請求項１～４のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。
  6. 　抗原特異的抗体および抗原特異的Ｔ細胞を誘導することに用いるための、請求項５に記載の組成物。
  7. 　肺組織において抗原特異的Ｔ細胞を誘導することに用いるための、請求項５に記載の組成物。
  8. 　抗原特異的Ｔ細胞が、抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞である、請求項６または７に記載の組成物。
  9. 　抗原特異的Ｔ細胞が、エフェクターＴ細胞およびエフェクターメモリーＴ細胞からなる群から選択される、請求項６～８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 　単回投与される、請求項６～９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 　有効量のスパイクタンパク質をコードするｍＲＮＡを含む脂質小胞を含むワクチンに対して不応性である対象に投与される、請求項６～１０のいずれか一項に記載の組成物。
  12. 　抗がん剤療法を受けた対象に投与される、請求項６～１１のいずれか一項に記載の組成物。
  13. 　対象が、前記ワクチンに対して抗体産生を有意に誘導しない対象である、請求項１１または１２に記載の組成物。
  14. 　対象が、前記ワクチンに対して抗体産生を有意に誘導しないことによる重症化リスクを有する対象である、請求項１３に記載の組成物。
  15. 　対象において抗原特異的な免疫を誘導する方法であって、
    　当該対象に、ベータコロナウイルスＳタンパク質（第１の抗原）と第２の抗原を発現するａＡＶＣの有効量を投与し、これにより、当該対象において前記腫瘍関連抗原とベータコロナウイルスＳタンパク質に対する抗原特異的な免疫を誘導することを含み、
    　第２の抗原は第１の抗原とは異なるタンパク質に由来し、
    　ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄを発現し、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドでパルスされている、方法。
  16. 　前記対象が、がんを有する対象である、請求項１５に記載の方法。
  17. 　前記対象が、コロナウイルスに感染した対象である、請求項１５に記載の方法。
  18. 　前記対象が、コロナウイルスに感染し、かつがんを有する対象である、請求項１５に記載の方法。
  19. 　請求項１５に記載の方法であって、
    　当該対象に、ベータコロナウイルスＳタンパク質（第１の抗原）と第２の抗原を発現するａＡＶＣの有効量を投与し、これにより、当該対象の肺組織においてベータコロナウイルスＳタンパク質に対する抗原特異的な免疫を誘導することを含み、
    　ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄを発現し、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドでパルスされている、方法。
  20. 　請求項１９に記載の方法であって、
    　当該対象に、ベータコロナウイルスＳタンパク質（第１の抗原）と第２の抗原を発現するａＡＶＣの有効量を静脈内投与し、これにより、当該対象の肺組織においてベータコロナウイルスＳタンパク質に対する抗原特異的な免疫を誘導することを含み、
    　ａＡＶＣは、ＣＤ１ｄを発現し、当該ＣＤ１ｄは、ＣＤ１ｄリガンドでパルスされている、方法。
  21. 　第２の抗原が、腫瘍関連抗原である、請求項１５～２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 　請求項１５～２１のいずれか一項に記載の方法において用いるための、組成物または医薬組成物。

     
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