WO2022154045A1 - 可溶型ｃｌｅｃ２を用いた癌患者における血栓症リスクの予測方法 - Google Patents

可溶型ｃｌｅｃ２を用いた癌患者における血栓症リスクの予測方法 Download PDF

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WO2022154045A1
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concentration
risk
thrombosis
soluble
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幸彦 藤井
雅英 川村
嘉門 白川
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株式会社Ｌｓｉメディエンス
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    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors

Definitions

  • the present invention relates to a method for predicting cancer-related thrombosis using soluble CLEC2.
  • Thrombus formed in blood vessels is considered to be a serious life-threatening factor among a wide range of human diseases, and it is known that the risk of thrombus formation increases in various diseases.
  • the risk of thrombosis is high in acute diseases such as chronic obstructive pulmonary disease (COPD), infectious diseases, and septicemia, advanced cancer, pregnancy, nephrosis syndrome, inflammatory bowel disease, and myeloablative disease.
  • COPD chronic obstructive pulmonary disease
  • pancreatic cancer and brain tumors have a high risk of thrombosis.
  • brain tumors were 48/1000 / year and pancreatic cancer was 58.9 / 1000 / year, compared with 13.6 / 1000 / year for cancer as a whole (non-).
  • Patent Document 2 It is considered that the cause is that the coagulation system is activated by the cancer cells expressing tissue factor (TF) and constantly releasing TF-positive Microparticles (MPs) into the blood.
  • TF tissue factor
  • MPs TF-positive Microparticles
  • VTE venous thromboembolism
  • CAT cancer-associated thrombosis
  • VTE Venous thromboembolism
  • PE pulmonary arterial thrombosis
  • VTE Venous thromboembolism
  • DVT deep vein thrombosis
  • PE pulmonary artery thrombosis
  • DVT cancer-related CAT
  • CAT varies depending on the type of cancer, and it has been reported that it is high in intra-abdominal and chest cancers, brain cancers, and cancers of unknown cause. In addition, the incidence of CAT is also high in cancer types with a high mortality rate, and it is considered that there is a correlation between the malignancy of cancer and the incidence of CAT.
  • the period when the incidence of CAT is high is the first 3 months after being diagnosed with cancer, and special attention should be paid to the start time of cancer treatment. It has also been reported that CAT recurrence and bleeding are likely to occur in cancer patients after the onset of CAT during anticoagulant therapy, and careful management during treatment is required. Therefore, in the so-called perioperative period, risk management involving many medical personnel is required.
  • Non-Patent Document 1 Venous and arterial thrombosis is often associated with cancer patients (Non-Patent Document 1), and clinically, the advanced stage, tumor volume, length of hospital stay, etc. increase the risk of thrombosis. It has been known.
  • Trousseau syndrome is known as an example of hypercoagulation associated with cancer. Trousseau syndrome refers to "hypercoagulation associated with malignant tumors and associated migratory thrombophlebitis", but malignant tumors are often discovered for the first time after the onset of cerebral infarction. Therefore, in Japan, it is being understood as “systemic (particularly brain) embolism caused by DIC-related thrombosis associated with malignant tumors and nonbacterial thrombotic endocarditis (NBTE)".
  • NBTE nonbacterial thrombotic endocarditis
  • CAT shall include Trousseau syndrome.
  • CAT malignant tumors that cause CAT are overwhelmingly adenocarcinomas such as lung cancer, pancreatic cancer, gastric cancer, and ovarian cancer (mutin-producing tumors).
  • Head MRI often presents with multiple embolism, and about half have nonbacterial thromboendocarditis (NBTE), but the detection rate by transthoracic echocardiography is low, and transesophageal echocardiography It is said to be useful for diagnosis.
  • NBTE nonbacterial thromboendocarditis
  • Non-Patent Document 3 There is a description about the management of CAT in domestic and foreign guidelines, and anticoagulant therapy is to be performed as the initial treatment. There is no option. In the treatment of CAT, it is necessary to consider that thrombus is likely to be formed and bleeding is likely to occur at the same time, and it is necessary to consider that the influence of thrombophilia is present not only in veins but also in arterial thrombi.
  • Podopranin is drawing attention as a thrombophilia predisposition for cancer patients.
  • Podopranin is a membrane protein highly expressed on the surface of many cancer cells such as squamous cell carcinoma (lung, esophagus, cervix, etc.), mesothelioma, brain tumor, etc., and is involved in cancer infiltration.
  • Kunida et al. Found that podoplanin promotes cancer metastasis through platelet aggregation (Non-Patent Document 4). It was also reported that podoplanin is highly expressed in brain tumors and osteosarcomas and has a high platelet aggregation ability.
  • a novel anti-podopranin antibody induces a high antitumor effect through cytotoxic activity and suppresses metastasis, demonstrating that podoplanin is useful as a therapeutic target for cancer metastasis.
  • C-type lectin-like receptor 2 (CLEC2), which is a receptor for podoplanin, was identified on platelets as a receptor for platelet-activated snake venom rhodocytin.
  • CLEC2 C-type lectin-like receptor 2
  • podoplanin The binding between CLEC2 and podoplanin has various pathophysiological roles, and its action of promoting hematogenous metastasis of tumors has been confirmed. Since CLEC2 is expressed almost specifically in platelets and megakaryocytes in humans, it is considered that thrombus is stabilized by homophyllically binding to platelet activation dependence in bloodstream (Non-Patent Document 5). ).
  • the prognosis of a wide range of thrombosis is extremely poor, and an early and accurate diagnostic method is indispensable for implementing appropriate treatment that greatly improves the mortality rate. Therefore, even in cancer patients, in order to evaluate the risk of thrombosis, it is necessary to adequately manage the perioperative blood hypercoagulation state, and to work on prevention and early treatment.
  • Patent Document 1 A method for diagnosing venous thromboembolism and stratifying risk, not only coagulation and hemostasis-related markers but also a method in which a plurality of markers such as blood pressure regulation, inflammation, myocardial disorder, and lung disorder are combined (Patent Document 1).
  • Patent Document 2 A method combining measurement of D-dimer and measurement of coagulation factor activity using fibrin formation as an index (Patent Document 2) has been known, but none of them can be easily carried out, and thrombosis formation is accurate. Since it is difficult to say that the risk of the disease can be evaluated, there was no marker that could be used for risk evaluation and monitoring that could meet the needs in clinical practice.
  • an object of the present invention is to develop a biomarker that better reflects thrombus formation in vivo and to provide a method that enables perioperative risk assessment of CAT in cancer patients.
  • sCLEC2 concentration of soluble CLEC2
  • CAT concentration of soluble CLEC2
  • the present invention provides: [1] A method for assessing the risk of cancer-related thrombosis in the perioperative period of a cancer patient, which comprises a step of measuring the concentration of soluble CLEC2 present in blood collected from a cancer patient. [2] A method for assessing the risk of cancer-related thrombosis during the perioperative period of cancer patients. (1) A step of providing a sample derived from a patient who may have cancer-related thrombosis or a patient who has been diagnosed with cancer-related thrombosis. (2) A step of determining the soluble CLEC2 concentration in the sample, (3) A step of correlating the soluble CLEC2 concentration with the presence or absence of cancer-related thrombosis or the likelihood of outcome in the patient.
  • the method of [1] including.
  • [3] A method for assessing the risk of cancer-related thrombosis during the perioperative period of a cancer patient, which includes the soluble CLEC2 concentration and the presence or absence of cancer-related thrombosis in the patient, or the possibility of outcome.
  • the method of [1] or [2], wherein the step of correlating is assessing whether the patient is at risk for cancer-related thrombosis based on changes in the soluble CLEC2 concentration.
  • [4] A method for risk assessment of cancer-related thrombosis in the perioperative period of a cancer patient, which comprises using at least one coagulation and hemostasis-related marker in addition to the soluble CLEC2 concentration [1]. ] To [3].
  • [5] A method for assessing the risk of cancer-related thrombosis in the perioperative period of a cancer patient, in which a value obtained by dividing the soluble CLEC-2 concentration by the platelet count is used instead of the soluble CLEC2 concentration.
  • the method according to any one of [1] to [4].
  • [6] A method for assessing the risk of cancer-related thrombosis in the perioperative period of a cancer patient, in which a sample derived from the cancer patient is provided over time from preoperative to 30 days after the operation, and the risk A method for predicting the effect of an antiplatelet agent by continuously monitoring the evaluation.
  • the cancer is selected from the group consisting of pancreatic cancer, squamous cell carcinoma (lung, esophagus, cervix, etc.), mesothelioma, brain tumor, advanced cancer, and myeloproliferative disease, [1] to [ 6] Any method. [8] The method according to any one of [1] to [7], wherein the cancer-related thrombosis is Trousseau syndrome.
  • the method of the present invention By measuring the sCLEC2 concentration present in the blood of a cancer patient, which is the method of the present invention, it is possible to perform an early, simple and accurate risk assessment of CAT. In addition, in the perioperative CAT onset prediction monitoring including the period after treatment such as surgery and chemotherapy in cancer patients, the prediction accuracy is improved compared to the conventional blood marker test and platelet aggregation test. Be expected.
  • a method for risk assessment of CAT which comprises measuring (or determining) the soluble CLEC2 concentration (or the value obtained by dividing the soluble CLEC-2 concentration by the platelet count) in a sample.
  • a method for assisting in CAT risk assessment which comprises measuring (or determining) the soluble CLEC2 concentration (or the soluble CLEC-2 concentration divided by the platelet count) in a sample.
  • An in vitro risk assessment method for CAT which comprises measuring (or determining) the soluble CLEC2 concentration (or the value obtained by dividing the soluble CLEC-2 concentration by the platelet count) in a sample.
  • Use of an antibody capable of detecting soluble CLEC2 concentration in the manufacture of a CAT risk assessment kit Included is a method of measuring (or determining) soluble CLEC2 concentration (or soluble CLEC-2 concentration divided by platelet count) in a sample to provide the information needed for CAT risk assessment. ..
  • cancer refers to a group of diseases in which cells are infiltrated and spread from the site of origin, that is, the site of origin to other parts of the body, due to uncontrolled proliferation of cells, and cancer that develops from epithelial cells. It is not limited to cancers limited to. It is assumed to be suitable for cancers in which it is known that podopranin or its receptor CLEC2, which will be described later, is involved. In general, cancer is often classified according to the organ, tissue, shape, etc.
  • basal cell carcinoma which is a cancer that develops from cells constituting the capsule, and myeloid proliferative disease.
  • organ for example, brain tumor, tongue cancer, laryngeal cancer, thyroid cancer, esophageal cancer, gastric cancer, colon cancer, hepatocellular carcinoma, biliary cyst cancer, bile duct cancer, pancreatic cancer, lung cancer, middle splenoma, breast cancer , Ovarian cancer, cervical cancer, uterine body cancer (uterine cancer), renal cell cancer, renal pelvis cancer, prostate cancer, bladder cancer, skin cancer, bone and soft tissue tumor, leukemia, malignant lymphoma, childhood cancer, etc. , Not limited to this. It also includes those advanced cancers.
  • organ for example, brain tumor, tongue cancer, laryngeal cancer, thyroid cancer, esophageal cancer, gastric cancer, colon cancer, hepatocellular carcinoma, biliary cyst cancer, bile duct cancer, pancreatic cancer, lung cancer, middle splenoma, breast cancer , Ovarian cancer, cervical cancer, uterine body cancer (uterine cancer), renal cell cancer, renal pelvis cancer, prostate
  • cancer-related thrombosis is understood as a general term for cancer-related thrombosis.
  • Thrombosis that can occur in cancer patients includes venous thromboembolism associated with the cancer itself, vascular disorders associated with chemotherapy, and the coagulation system, such as blood flow stagnation due to cancer, dehydration, lying down, and increased coagulation system due to cancer cells.
  • Venous thromboembolism associated with cancer treatment history of venous thromboembolism, obesity, such as hyperactivity, vascular injury associated with catheters, stagnation, portal stagnation associated with hypertonic hypertension, and vascular disorders of the portal vein.
  • Trousseau syndrome which is positioned as one aspect of this CAT, is not limited to the pathological condition in which a stroke symptom is exhibited due to hypercoagulation in the CAT, and thrombosis associated with DIC associated with a malignant tumor. And systemic embolism due to nonbacterial thrombotic endocarditis (NBTE).
  • NBTE nonbacterial thrombotic endocarditis
  • the "perioperative period” means a series of periods including before and after the surgery from the outpatient department where the surgery is decided to hospitalization, anesthesia / surgery, postoperative recovery, discharge / rehabilitation.
  • CLEC2 is a platelet activation receptor belonging to the C-type lectin family, which is usually present in the platelet membrane, but is released into the blood with the activation of platelets. ..
  • soluble CLEC2 sCLEC2
  • sCLEC2 refers to a molecule derived from CLEC2 or CLEC2 that is released from such platelets and detected in blood (in buffer, if incubated in buffer). Means.
  • SCLEC2 includes a protein having a molecular weight of about 40 kDa, a protein having a molecular weight of about 32 kDa, and a protein having a molecular weight of about 25 kDa in SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) under reducing conditions. It is presumed that the protein having a molecular weight of about 40 kDa and the protein having a molecular weight of about 32 kDa are present on the surface of the platelet membrane and are released in a state of being contained in the microparticles produced by the activation of platelets. It is considered that sugar chains are added to these.
  • a protein having a molecular weight of about 25 kDa is cleaved by a protease with activation of platelets and released from platelets.
  • the amount of sCLEC2 as described above is measured.
  • sCLEC2 may collectively detect a protein having a molecular weight of about 40 kDa, a protein having a molecular weight of about 32 kDa, and a protein having a molecular weight of about 25 kDa, or may detect only a protein having a molecular weight of about 25 kDa.
  • the sCLEC2 concentration used in the present invention only the sCLEC2 concentration may be used, or the value obtained by dividing the sCLEC2 concentration by the platelet count may be used.
  • the sCLEC2 concentration is interpreted to include both the case where the sCLEC2 concentration is used and the case where the sCLEC2 concentration is divided by the platelet count.
  • the sample used for the measurement is preferably derived from humans, but a sample derived from an animal other than humans may be used in order to grasp the pathological condition of the experimental animal.
  • the experimental animal is not particularly limited, and examples thereof include guinea pigs, rats, mice, and chinchillas.
  • thrombotic hemostatic diseases As used herein, “hemostatic” means that platelets and coagulation factors are conjugated to effectively and appropriately stop bleeding or bleeding.
  • thrombogenic hemostatic disease includes, but is not limited to, conditions and diseases including, but not limited to, excessive bleeding and abnormal blood coagulation. In particular, it can be suitably used in risk prediction of venous thromboembolism (VTE) and cancer-related thrombosis (CAT), which is a VTE associated with cancer.
  • VTE venous thromboembolism
  • CAT cancer-related thrombosis
  • the sCLEC2 concentration value is higher than that of a healthy person or a non-thrombogenic hemostatic disease group, it can be said that there is a high possibility or risk of suffering from CAT thrombotic hemostatic disease.
  • the sCLEC2 concentration can be compared preoperatively and postoperatively and used as a risk prediction for thrombosis.
  • sCLEC2 concentration is measured in patients with pancreatic cancer and brain tumor, and if the ratio becomes high, it can be judged that platelet activation in vivo has occurred, and antiplatelet drugs such as aspirin are used as primary drugs. It is considered possible to use it as a preventive measure. Furthermore, sCLEC2 concentration measurement will be performed in patients taking antiplatelet drugs such as aspirin and clovidogrel, and if the value is high, the dose of antiplatelet drug should be increased, or change to a different type of antiplatelet drug or additional administration should be considered. It is also possible.
  • the method for detecting the presence of sCLEC2 is not particularly limited, but an immunological method using an antibody that recognizes sCLEC2 (hereinafter, this may be referred to as "anti-sCLEC2 antibody”) is preferable.
  • immunological methods for detecting proteins include immunoassay using labeled antibodies such as enzyme immunoassay (ELISA method), chemoluminescence immunoassay, fluorescent antibody method, radioimmunoassay, and immunochromatography. Any commonly known method such as a measuring method, a Western blotting method, a latex agglutination method, or an immunoturbidimetric method can be used, but among these, from the viewpoint of simplicity of operation and measurement accuracy.
  • An immunoassay method using a labeled antibody is preferably used. For intraoperative diagnosis, it is desired that a rapid result can be obtained, and therefore chemiluminescent immunoassay, immunochromatography, or the like is particularly preferably used.
  • a sample is collected from a target subject (particularly a patient) using a blood collection tube for plasma blood collection.
  • a blood collection tube for plasma blood collection Considering the measurement of platelet count, EDTA-containing blood collection tube is preferable, but heparin and citric acid-containing blood collection tubes can also be used, and those skilled in the art can appropriately select and use an appropriate blood collection tube from these. can do.
  • Samples for measuring plasma sCLEC2 concentration and measuring platelet count may be obtained from one blood collection tube, but if blood is collected at the same time, different blood collection tubes may be used.
  • the plasma sCLEC2 concentration is measured using, for example, plasma centrifuged at 2000 g for about 20 minutes, but the centrifugation conditions are not limited to this, and a measurement system using whole blood may be used.
  • measurement of plasma sCLEC2 concentration will be described as an example, but the present invention is not limited thereto.
  • whole blood containing an anticoagulant such as EDTA is used.
  • the sCLEC2 concentration in the cancer patient-derived sample and the sCLEC2 concentration in the healthy person-derived sample may be appropriately set and used from the comparison of sCLEC2 concentration, or the sCLEC2 concentration can be compared from the time-dependent records of sCLEC2 concentration, such as comparison between preoperative and postoperative and comparison between the first day and several days after the operation in the same patient.
  • a CAT risk assessment may be performed when significant fluctuations in CAT are detected.
  • the platelet count is usually measured using an automatic blood cell counter (blood cell counter), but a blood cell counter and a microscope. It is also possible to count using.
  • the sCLEC2 concentration in plasma is represented by, for example, pg / mL
  • the blood platelet count is represented by, for example, 1000 cells / mm3
  • the sCLEC2 concentration / platelet count is calculated.
  • Any unit such as ng / mL or ng / L may be used for the concentration of sCLEC2 used here, and any unit such as 10000 platelets / mm 3 can be used for the platelet count, but a unified unit is used for comparison. Should be used.
  • the sCLEC2 concentration / platelet count can take different values, but they are essentially the same concept.
  • the ratio is calculated using the measured value obtained from the clinical laboratory device that measures the sCLEC2 concentration and the measured value that comes out from the blood calculator that measures the platelet count.
  • This calculation is suitable for daily medical care to be calculated automatically on a hospital inspection system, a hospital system, or a system such as an electronic medical record connected to both measuring instruments, but the data of the two measuring instruments is used.
  • a connecting system may be constructed, or a machine capable of simultaneously measuring the sCLEC2 concentration and the platelet count can be constructed. Alternatively, both data may be used for manual calculation.
  • the sCLEC2 concentration in plasma or the sCLEC2 concentration / platelet count and the correlation between the degree of platelet activation and various diseases are, for example, a determination threshold or original data for calculating a determination threshold. It may be used as statistical processing data or the like.
  • SCLEC2 is released into the blood with the activation of platelets.
  • Existing platelet activation markers such as PF4 and ⁇ TG, have been problematic in that granules are stimulated by physical pressure from blood sampling to cause non-specific release, whereas sCLEC2 induces platelet activation. It is a signal transduction-dependent release mechanism that can be a marker that more accurately reflects the activation of platelets in vivo.
  • CLEC2 is a specific marker with few false positives because its expression is almost limited in the platelet / megakaryocyte system in humans. Therefore, by measuring sCLEC2, it is possible to diagnose the activated state of platelets at an early stage, and it can be used as a method for predicting the risk of thrombosis.
  • Plasma sCLEC2 concentration tends to be high in individuals with high platelets, and plasma sCLEC2 concentration tends to be low in individuals with low platelets.
  • the value obtained by dividing the plasma sCLEC2 concentration by the blood platelet count may be used, taking advantage of the fact that the sCLEC2 concentration has a positive correlation with the blood platelet count.
  • the plasma sCLEC2 concentration is represented by pg / mL (A)
  • the blood platelet count is represented by 1000 cells / mm 3 (B)
  • the number obtained by dividing A by B is used as an index of platelet activation. can do.
  • plasma sCLEC2 concentration is measured and used for risk prediction by observing the change in the concentration. It is possible. For example, by appropriately setting the sampling period according to the background information for each patient, it is possible to obtain a more detailed profile, observe the condition, and evaluate the risk. It is used not only to predict the risk of CAT for patients who are observed to increase significantly from preoperatively, but also to monitor the post-drug status of patients diagnosed with CAT. can do.
  • CAT has a high recurrence rate, and it is thought that there are many cases in which long-term anticoagulant therapy is required.
  • anticoagulant therapy for CAT may increase the risk of bleeding, and anticancer drugs may cause hematological toxicity that reduces leukocytes (especially neutrophils), red blood cells, and platelets.
  • leukocytes especially neutrophils
  • red blood cells especially platelets.
  • anticoagulant therapy policy it is difficult to determine the duration of anticoagulant therapy for CAT because it must be determined in consideration of bleeding risk and prognosis, no clear criteria have been given for anticoagulant therapy policy. Therefore, by using the present invention to evaluate the risk of CAT in a patient, it may be an aid for appropriately determining a treatment policy.
  • the frequency of concentration measurement used for monitoring may be appropriately set according to the background information including the treatment history of the individual patient and the treatment policy. In that case, risk assessment is possible by collecting samples at regular intervals from preoperative to 30 days after surgery, but it is assumed that the situation will differ depending on the patient's background. Therefore, for example, the monitoring period and timing are appropriately set, for example, by observing the occurrence of CAT regularly during the 7th to 10th days after surgery, which requires special attention. Can be carried out.
  • the present invention for the purpose of assisting the risk assessment based on the sCLEC2 concentration, it may be used in combination with a biomarker currently reported to be useful as a risk assessment of CAT.
  • CAT risk assessment can be performed more accurately, which is preferable.
  • D-dimer or the like may be used for postoperative monitoring as in the present invention.
  • the sCLEC2 concentration fluctuates in the case diagnosed as CAT, the D-dimer does not fluctuate at all and the risk of CAT cannot be evaluated. It was found by the examination of the present inventors that there is a case.
  • thrombus This may depend on the mechanism by which the thrombus is formed. That is, by monitoring the fibrin-based thrombus formation with D-dimer and the platelet-based thrombus formation with sCLEC2 over time, there is a possibility that the risk assessment of CAT can be performed more accurately. That is, platelet-dominated thrombi can be predicted.
  • the present invention may be used in combination with other findings such as image evaluation.
  • diagnosis is performed by performing image diagnosis on a patient suspected of having CAT, and it is expected that the accuracy will be improved by using it in combination with this information, which is preferable. ..
  • treatment of thrombosis includes aspirin in the case of thrombosis in an artery where coagulation progresses due to activation and aggregation of platelets such as myocardial infarction, atherosclerotic cerebral infarction, and obstructive arteriosclerosis.
  • platelets such as myocardial infarction, atherosclerotic cerebral infarction, and obstructive arteriosclerosis.
  • thrombosis such as deep vein thrombosis, atrial fibrillation, cardiogenic cerebral embolism, and pulmonary embolism, in which the coagulation system is activated in the veins and atria and coagulation progresses, warfarin, DOAC, etc.
  • a treatment method that administers an anticoagulant is selected.
  • CAT which is a cancer-related thrombosis
  • an anticoagulant is currently used as a standard treatment method.
  • the need for postoperative care and treatment means can be evaluated and estimated in a reliable manner. For example, it is possible to quickly determine the therapeutic effect and predict the risk with reliable accuracy, and it is possible to select a drug having a lower risk of bleeding, so that a great benefit can be obtained from the method of the present invention. ..
  • Example 1 Measurement of sCLEC2 in human plasma >> The sCLEC2 concentration in plasma was measured according to Example 6 of Japanese Patent No. 4961595.
  • a sandwich ELISA system was constructed using mouse anti-human sCLEC2 antibody. That is, the 1-11D5 antibody (F (ab) ' 2 ) purified with 0.05 mol / L carbonate buffer (pH 9.5) was diluted to 10 ⁇ g / mL, and 100 ⁇ L / well was added to the immunoplate (Maxisorp; NUNC). did.
  • the prepared biotin-labeled 3-11E6 antibody (F (ab) ' 2 -biotin) was added to 1.0 ⁇ g / mL in 10% SuperBlock, 0.1% sodium octanate, 0.14 mol / L sodium chloride / PB. And 100 ⁇ L / well was added to each well. After reacting at 37 ° C. for 1 hour, the cells were washed 3 times in the same manner.
  • AMDEX streptavidin-conjugated horseradish peroxidase (GE Healthcare) was then diluted with 10% SuperBlock, 0.1% sodium octanate, 0.14 mol / L sodium chloride / PB and into each well. 100 ⁇ L / well was added. After reacting at 37 ° C. for 1 hour, the mixture was washed 5 times in the same manner, and 100 ⁇ L / well of each well was added with a 3,3', 5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) solution. After reacting at room temperature for about 20 minutes, the reaction was stopped with a 1 mol / L sulfuric acid solution.
  • TMB 3,3', 5,5'-tetramethylbenzidine
  • FIG. 1 shows a standard curve prepared by using the hsCLEC2 protein as a standard product.
  • Example 2 Measurement of sCLEC2 in plasma sample of pancreatic cancer patient >> 14 cases of pancreatic cancer patient plasma and 10 cases of healthy subjects purchased from BiolVT (Westbury, NY) were diluted with buffer and measured by the method of Example 1. The results of the obtained pancreatic cancer patients are shown in Table 1. In addition, the average value ⁇ SE of sCLEC2 concentration in healthy subjects and pancreatic cancer patients was calculated and shown in FIG. The sCLEC2 concentration was significantly (p ⁇ 0.05) higher than that of healthy subjects. From this, it was clarified that platelets are activated by the influence of cancer in patients with pancreatic cancer. Next, when pancreatic cancer patients were classified according to the presence or absence of blood abnormalities, as shown in FIG.
  • sCLEC2 was higher in patients with blood abnormalities than in patients without blood abnormalities.
  • 1382.2 pg / mL which is about 8 times higher than the average value of healthy subjects, was found in patients diagnosed with an abnormal coagulation profile, and it was revealed that the value was high in patients at high risk of thrombosis.
  • VTE monitoring generally uses D-dimer in addition to image evaluation. Therefore, D-dimer of 14 cases of pancreatic cancer patient plasma purchased from BiolVT was measured with LPIA Genesis D-dimer reagent (LSI Rulece) and compared with the sCLEC2 concentration measured in Example 2 (FIG. 4). As a result, two groups were observed: a group of patients in which D-dimer was elevated relative to sCLEC2 and a group of patients in which sCLEC2 was elevated relative to D-dimer. Thrombosis is roughly classified into venous thrombosis and arterial thrombosis.
  • Venous thrombosis is considered to be a fibrin-based thrombosis
  • arterial thrombosis is considered to be mainly composed of platelets.
  • D-dimer a fibrin degradation product
  • fibrin-based venous thrombosis is commonly used as a biomarker for fibrin-based venous thrombosis, but there is no commonly used biomarker for arterial thrombosis such as platelet-based Truseau syndrome.
  • the fact that a group in which D-dimer did not rise and sCLEC2 increased was observed in this example means that sCLEC2 captures the pathophysiology of platelet-based arterial thrombosis, which is unknown by the conventional D-dimer test. It has been shown that sCLEC2 is useful for the examination of Trousseau syndrome.
  • Example 3 Measurement of sCLEC2 in plasma sample of brain tumor patient
  • Plasma was collected from a sample obtained by general blood sampling 7 to 10 days after surgery for a brain tumor centered on malignant glioma admitted to neurosurgery and a healthy person with consent, and sCLEC2 was collected by the method of Example 1. The concentration was measured. The results of the obtained samples are shown in Tables 2 and 3.
  • the sCLEC2 concentration 7 to 10 days after the operation tended to be higher in DVT / PE cases than in cases without DVT / PE (p 0.239).
  • Table 4 shows the results of the mean value, standard deviation, and median value in the cases with DVT / PE and the cases without DVT / PE.
  • DVT was screened based on the D-dimer value and clinical symptoms, and was identified 10 days after surgery on average. This indicates that platelets may be activated in patients who developed DVT / PE during the perioperative period of brain tumors.
  • DVT monitoring generally uses a D-dimer in addition to image evaluation. Therefore, the D-dimer concentration, sCLEC2 concentration, and C2PAC value of patients (glioblastoma, 71 years old, female) who were able to collect blood over time were evaluated (FIG. 6). This case was identified as DVT 7 days after surgery and anticoagulant therapy was started. It was considered that the sCLEC2 and C2PAC levels were maximum on the 7th day when they were identified as DVT, and then gradually decreased due to the effect of anticoagulant therapy. On the other hand, D-dimer showed a relatively high value 14 days after the start of anticoagulant therapy in addition to the identification of DVT, but no significant change was observed. The sCLEC2 and C2PAC levels responded more sensitively to treatment, and in this case, the sCLEC2 and C2PAC levels were estimated to be the most useful for monitoring the therapeutic effect for monitoring anticoagulant therapy.
  • the method for predicting thrombosis risk is applied by measuring blood sCLEC2 of the present invention, the risk of thrombosis in a patient can be predicted before thrombosis occurs, and appropriate treatment can be started promptly. It becomes. Therefore, the thrombosis risk prediction method of the present invention can be applied to a wide range of fields such as medicine and biology, and is particularly useful in the field of clinical examination.

Abstract

生体内における血栓形成をよりよく反映するバイオマーカーを開発し、癌患者の周術期における癌関連血栓症のリスク評価を可能にする方法を提供する。前記方法は、癌患者から採取した血液中に存在する、可溶型ＣＬＥＣ２濃度を測定する工程を含む。

Description

可溶型ＣＬＥＣ２を用いた癌患者における血栓症リスクの予測方法
　本発明は、可溶型ＣＬＥＣ２を用いた癌関連血栓症の予測方法に関する。
　血管内に形成される血栓は、広範囲にわたる人間の病気の中でも生死にかかわる重大な因子とされており、各種疾患において血栓形成リスクが上昇することが知られている。特に慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）や感染症、敗血症などの急性疾患や進行性の癌、妊娠、ネフローゼ症候群、炎症性腸疾患や骨髄増抑性疾患では血栓形成リスクが高いとされる。
　血栓症の併発は生命予後を悪くする。米国の後視的な臨床検討によると１８７４人の癌患者（２００５年～２０１２年）における血栓症の発生率は１６．４％と高率であった。そのうち２％は血栓症の既往があったが１４．４％は癌と診断された３か月前以降に発病したといわれる。
　特に膵臓癌や脳腫瘍は血栓症のリスクが高い。年間当たり血栓発生率の調査では癌全体で１３．６人／１０００人／年に対して脳腫瘍は４８人／１０００人／年、膵臓癌は５８．９人／１０００人／年であった（非特許文献２）。その原因として、癌細胞が組織因子（ＴＦ）を発現し常に血液中にＴＦ陽性のＭｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＭＰｓ）を放出し続けることにより凝固系が活性化するものと考えられている。
　このように、担癌状態は血栓性素因の一つとされ、血栓が形成されやすいため、癌に合併した静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、いわゆる、癌関連血栓症（Cancer-Associated Thrombosis；ＣＡＴ)が起きやすい。静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）は、深部静脈に血栓ができることを意味し、肺動脈血栓症（ＰＥ）は、深部静脈の血栓が遊離し、血流に流され、右心房、右心室を通り肺動脈に塞栓となり肺血栓塞栓症となることを意味する。静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）は、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）と肺動脈血栓症（ＰＥ）とをあわせた疾患概念であるが、いずれの場合であってもＤＶＴ、特に癌に関連するＣＡＴは予後に大きな影響を与える。
　ＣＡＴの発症率は、癌の種類によって異なり、腹腔内や胸部の癌、脳の癌や原因不明の癌では高いことが報告されている。また、死亡率の高い癌種ではＣＡＴの発症率も高く、癌の悪性度とＣＡＴ発症率には相関があると考えられている。
　ＣＡＴ発症率が高い時期は、癌と診断されて最初の３か月間といわれており、癌治療の開始時期には特に注意が必要である。また、ＣＡＴ発症後の癌患者では、抗凝固療法中にＣＡＴの再発や出血を起こしやすいことも報告されており、治療中の慎重な管理が求められる。従って、いわゆる周術期において、多くの医療関係者が関わるリスク管理が必要とされる。
　癌患者においては静脈・動脈血栓症の併発が多く見られ（非特許文献１）、臨床的には、進行した病期、腫瘍量、入院期間の長さなどが血栓の発生リスクを増加させることが知られている。
　また、癌に伴う血液凝固亢進の一例としてトルーソー症候群が知られている。トルーソー症候群は「悪性腫瘍に合併する凝固能亢進状態とそれに伴う遊走性血栓性静脈炎」をさすが、脳梗塞の発症を機に初めて悪性腫瘍が発見されることも少なくない。このため、本邦では「悪性腫瘍に合併するＤＩＣに伴う血栓症および非細菌性血栓性心内膜炎（ＮＢＴＥ）に起因する全身性（とくに脳）塞栓症」として理解されつつある。以後、本明細書においてＣＡＴとはトルーソー症候群を含むものとする。
　ＣＡＴの原因となる悪性腫瘍は、白血病を除けば、肺癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌（ムチン産生腫瘍）などの腺癌が圧倒的に多い。頭部ＭＲＩでは多発性塞栓症を呈することが多く、約半数に非感染性血栓性心内膜炎（ＮＢＴＥ）が認められるが、経胸壁心エコーでの検出率は低く、経食道心エコーが診断に有用であるとされる。
　米国臨床腫瘍学会（ＡＳＣＯ）のガイドラインには、ＣＡＴの注意すべきバイオマーカーとして血小板数の増加、白血球数の増加、ヘモグロビン低値が記載されているが、ＣＡＴを直接的に診断する指標はない（非特許文献３）。国内外のガイドラインに、ＣＡＴの管理に関する記載があり、初期治療として抗凝固療法を行うことになっており、無症候に偶然発見された末梢型深部静脈血栓症（ＤＶＴ）を除くと「治療しない」という選択肢はない。ＣＡＴの治療にあたっては血栓が形成されやすいと同時に出血もしやすいということを考慮する必要があり、さらに血栓性素因の影響は静脈だけでなく動脈血栓にも存在することを考慮する必要がある。
　癌患者の血栓性素因としては、ポドプラニンが注目を浴びている。ポドプラニンは扁平上皮癌（肺、食道、子宮頸部等）、中皮腫、脳腫瘍、など多くの癌細胞表面で高発現する膜タンパク質であり癌の浸潤に関与する。国田らはポドプラニンが血小板凝集を介して癌転移を促進させる事を見出した（非特許文献４）。またポドプラニンは脳腫瘍や骨肉腫において高発現し、高い血小板凝集能を有する事が報告された。さらに新規抗ポドプラニン抗体が、細胞傷害活性を通じて高い抗腫瘍効果を誘導し転移を抑制することが見出され、癌転移治療標的としてポドプラニンが有用である事が示された。
　ポドプラニンの受容体であるC-type lectin-like receptor 2（ＣＬＥＣ２）は血小板活性化蛇毒ロドサイチンの受容体として，血小板上に同定された。ＣＬＥＣ２とポドプラニンの結合は様々な病態生理学的役割を持ち、腫瘍の血行性転移を促進する作用が確認されている。ＣＬＥＣ２はヒトではほぼ血小板・巨核球特異的に発現しているので、流血中で血小板活性化依存性にホモフィリックに結合することで血栓を安定化していると考えられている（非特許文献５）。
特表2008-544224号公報 特表2019-507345号公報
Trousseau A. Phlegmasia alba dolens. Clinique Medicale de l’Hotel Dieu de Paris, Vol 3. Paris: Bailliere. 1865; 654-712 in French Freesia Horsted et al., PLoS Med. 2012 Jul; 9(7): e1001275 Lyman GH et al. J Clin Oncol 31(17):2189-2204, 2013 Kunita A et al. Am J Pathol. 170:1337-1347 (2007) 井上克枝ほか、血栓止血誌　22(6):348-362（2011）
　広範な血栓症の予後は極めて予後不良であり、死亡率を大きく改善する適切な治療を実施するためにも、早期かつ正確な診断法が不可欠である。そのため、癌患者においても、血栓症のリスクを評価するために、周術期の血液過凝固状態の管理を充分に行い、予防と早期治療につとめる必要がある。
　静脈血栓塞栓症の診断やリスク層別化の方法としては、凝固および止血関連マーカーだけでなく、血圧調節、炎症、心筋障害、肺障害などの複数のマーカーを組み合わせて行う方法（特許文献１）や、Ｄダイマーの測定とフィブリン形成を指標とした凝固因子活性測定を組み合わせた方法（特許文献２）などが知られていたが、いずれも簡便に実施できるものではなく、また、正確に血栓形成のリスクを評価できているとは言い難いことから、臨床の現場でのニーズに応えられるリスク評価やモニタリングに使用可能なマーカーは存在していなかった。
　従って、本発明の課題は、生体内における血栓形成をよりよく反映するバイオマーカーを開発し、癌患者の周術期におけるＣＡＴのリスク評価を可能にする方法を提供することである。
　本発明者らは前記課題を解決するために鋭意検討を行った。その結果、癌患者血漿中の可溶型ＣＬＥＣ２（以下、ｓＣＬＥＣ２と称することがある）濃度は、ＣＡＴと有意に相関することを見出し、本発明を完成させるに至った。
　更に、癌患者のｓＣＬＥＣ２濃度を経時的に測定してその変動を観察することによって、早期かつ簡便で正確なＣＡＴのリスク評価を行うことができる方法を確立することができた。数十名の患者サンプルを用いて本法を検証し、膵臓癌及び脳腫瘍患者ＣＡＴリスク予測及びモニタリングに有用であることを示した。
　すなわち、本発明は、以下を提供する：
［１］癌患者から採取した血液中に存在する、可溶型ＣＬＥＣ２濃度を測定する工程を含む、癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法。
［２］癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、
　（１）癌関連血栓症を有する可能性のある患者、または癌関連血栓症と診断された患者に由来する試料を提供する工程、
　（２）前記試料中の可溶型ＣＬＥＣ２濃度を決定する工程、
　（３）前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度と、前記患者における癌関連血栓症の存在もしくは非存在、または転帰の可能性とを相関させる工程、
を含む、［１］の方法。
［３］癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度と、前記患者における癌関連血栓症の存在もしくは非存在、または転帰の可能性とを相関させる工程が、前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度の変化に基づいて、癌関連血栓症のリスクを前記患者が有するかどうかを評価することを含む、［１］又は［２］の方法。
［４］癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度に加えて、少なくとも１つの凝固および止血関連マーカーを使用することを含む、［１］～［３］のいずれかの方法。
［５］癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度に代えて、可溶型ＣＬＥＣ－２濃度を血小板数で除した値を使用することを特徴とする、［１］～［４］のいずれかの方法。
［６］癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、前記癌患者に由来する試料の提供を、術前から術後３０日までの間経時的に行い、リスク評価を継続してモニタリングすることにより、抗血小板剤の効果判定の予測方法。
［７］前記癌が、膵臓癌、扁平上皮癌（肺、食道、子宮頸部等）、中皮腫、脳腫瘍、進行癌、骨髄増殖性疾患からなる群から選択される、［１］～［６］のいずれかの方法。
［８］前記癌関連血栓症が、トルーソー症候群である、［１］～［７］のいずれかの方法。
　本発明の方法である、癌患者血液中に存在するｓＣＬＥＣ２濃度を測定することで、早期かつ簡便で正確なＣＡＴのリスク評価を行うことが可能となる。また、癌患者で手術や化学療法などの治療を施した後の期間を含む周術期のＣＡＴ発症予測モニタリングにおいて、従来の血液マーカーを用いた検査や血小板凝集能検査に比べ予測精度の向上が期待される。
ｈｓＣＬＥＣ２蛋白質を標準品として用いて作成した標準曲線である。 膵臓癌患者と健常人とでｓＣＬＥＣ２の血漿中濃度を比較した図である。 血液異常の有無によるｓＣＬＥＣ２の血漿中濃度を比較した図である。 血液異常の有無によるｓＣＬＥＣ２とＤダイマーの血漿中濃度を比較した図である。 脳腫瘍患者のＤＶＴ発症の有無における、ｓＣＬＥＣ２の血漿中濃度を比較した図である。 ＤＶＴ発症の有無とＣ２ＰＡＣ値の関係を示した図である。 神経膠芽腫周術期症例における、各種マーカーの経時的変動を比較した図である。
　以下において、本発明の実施形態について詳細に説明するが、利用方法の態様についてはこれに限定されるものではない。
　例えば、本発明には、
試料中の可溶型ＣＬＥＣ２濃度（又は可溶型ＣＬＥＣ－２濃度を血小板数で除した値）を測定（又は決定）することを特徴とする、ＣＡＴのリスク評価を行う方法、
試料中の可溶型ＣＬＥＣ２濃度（又は可溶型ＣＬＥＣ－２濃度を血小板数で除した値）を測定（又は決定）することを特徴とする、ＣＡＴのリスク評価を補助する方法、
ＣＡＴのリスク評価のために、試料中の可溶型ＣＬＥＣ２濃度（又は可溶型ＣＬＥＣ－２濃度を血小板数で除した値）を測定（又は決定）する方法、
試料中の可溶型ＣＬＥＣ２濃度（又は可溶型ＣＬＥＣ－２濃度を血小板数で除した値）を測定（又は決定）することを特徴とする、ＣＡＴのｉｎ　ｖｉｔｒｏリスク評価方法、
可溶型ＣＬＥＣ２濃度を検出できる抗体の、ＣＡＴのリスク評価用キットの製造における使用、
ＣＡＴのリスク評価に必要な情報を提供するために、試料中の可溶型ＣＬＥＣ２濃度（又は可溶型ＣＬＥＣ－２濃度を血小板数で除した値）を測定（又は決定）する方法
が含まれる。
　本明細書において「癌」とは、制御されない細胞の増殖で、発生部位、すなわち原発部位から身体の他の部位へ細胞の浸潤と拡散を示す病気の一群をいい、上皮細胞から発生するがんに限定した癌などに限定されない。後述するポドプラニンまたはその受容体であるＣＬＥＣ２が関係していることがわかる癌において好適であることが想定される。一般的に癌は発生した臓器、組織、形状などにより分類されることが多いが、表皮に存在する表皮角化細胞と呼ばれる細胞が悪性増殖してできる扁平上皮癌や下層である基底層や毛包などを構成する細胞から発生する癌である基底細胞癌、骨髄増殖性疾患などが含まれる。また、臓器による分類の場合には、例えば、脳腫瘍、舌癌、喉頭癌、甲状腺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝細胞癌、胆のう癌、胆管癌、膵臓癌、肺癌、中脾腫、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮体癌（子宮癌）、腎細胞癌、腎盂尿管癌、前立腺癌、膀胱癌、皮膚癌、骨軟部腫瘍、白血病、悪性リンパ腫、小児癌などが挙げられるが、これに限定されない。またそれらの進行癌も含まれるものとする。
　本明細書において「癌関連血栓症（ＣＡＴ）」とは、癌に関連した血栓症の総称として理解される。癌患者において生じ得る血栓症には、癌による血流停滞、脱水、臥床、癌細胞による凝固系の亢進のような、癌自体に伴う静脈血栓塞栓症、化学療法に伴う血管障害や凝固系の亢進、カテーテルに伴う血管損傷、うっ滞、門脈圧亢進症にともなう門脈のうっ滞、門脈の血管障害のような、癌治療に伴う静脈血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症の既往、肥満、高齢、長期臥床、下肢麻痺、ギブス固定、血栓性素因（アンチトロンビン欠乏症、プロテインＣ／Ｓ欠乏症、抗リン脂質抗体症候群など）、エストロゲン治療、下肢静脈瘤、うっ血性心不全、呼吸不全、重症感染症のような、癌以外の付加的なリスクにより生じる静脈血栓塞栓症などが想定されるが、いずれをも包含する。
　また、本明細書においては、このＣＡＴの一態様として位置付けられる「トルーソー症候群」は、ＣＡＴの中で血液凝固亢進により脳卒中症状を呈する病態に限定されず、悪性腫瘍に合併するＤＩＣに伴う血栓症及び非細菌性血栓性心内膜炎（ＮＢＴＥ）に起因する全身性塞栓症を意味する。
　本明細書において「周術期」とは、手術が決定した外来から入院、麻酔・手術、術後回復、退院・社会復帰までの手術前後を含めた一連の期間を意味する。
　また、本明細書において「ＣＬＥＣ２」とは、Ｃ型レクチンファミリーに属する血小板活性化受容体であり、通常、血小板の膜に存在するが、血小板の活性化に伴って、血液中に放出される。本明細書において用語「可溶型ＣＬＥＣ２（ｓＣＬＥＣ２）」とは、このような血小板から遊離し、血液中（バッファー中でインキュベートする場合はバッファー中）に検出されるＣＬＥＣ２またはＣＬＥＣ２由来の分子のことを意味する。
　ｓＣＬＥＣ２には、還元条件下ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）における分子量約４０ｋＤａのタンパク質、分子量約３２ｋＤａのタンパク質、分子量約２５ｋＤａのタンパク質などが含まれる。分子量約４０ｋＤａのタンパク質、分子量約３２ｋＤａのタンパク質は血小板膜表面に存在し、血小板活性化に伴って産生されるマイクロパーティクルに含まれた状態で放出されると推定される。これらには糖鎖が付加されていると考えられる。一方、分子量約２５ｋＤａのタンパク質は血小板の活性化に伴ってプロテアーゼによって切断を受けて血小板から遊離すると考えられる。本発明においては、前記のようなｓＣＬＥＣ２の量を測定する。ｓＣＬＥＣ２は分子量約４０ｋＤａのタンパク質、分子量約３２ｋＤａのタンパク質および分子量約２５ｋＤａのタンパク質をまとめて検出してもよいし、分子量約２５ｋＤａのタンパク質のみを検出してもよい。
　本発明において使用するｓＣＬＥＣ２濃度は、ｓＣＬＥＣ２濃度のみで使用してもよいし、ｓＣＬＥＣ２濃度を血小板数で除して得られた値を使用してもよい。本明細書においては、特に断りが無い限り、ｓＣＬＥＣ２濃度とはｓＣＬＥＣ２濃度を使用した場合、ｓＣＬＥＣ２濃度を血小板数で除した場合のいずれも含むものと解釈される。
　測定に用いる試料はヒト由来であることが好ましいが、実験動物の病態把握等のために、ヒト以外の動物由来の試料を用いてもよい。実験動物としては特に制限されないが、例えば、モルモット、ラット、マウス、チンチラ等が挙げられる。
　本発明方法は、血栓止血疾患の検査にも好適に使用される。本明細書で述べる「止血」とは、血小板および凝固因子が共役して流血あるいは出血を効果的に適切に止めることを意味する。本明細書で使用する「血栓止血疾患」には、過度の出血や異常な血液凝固を含む状態や疾患が含まれるが、これらに限定されることはない。特に、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）及び癌に合併したＶＴＥである癌関連血栓症（ＣＡＴ）のリスク予測において好適に使用することができる。
　例えば、ｓＣＬＥＣ２濃度の値が健常人あるいは非血栓止血疾患群と比較して多い場合はＣＡＴ血栓止血疾患に罹患している可能性あるいは罹患するリスクが高いといえるが、このような比較をもとに、ｓＣＬＥＣ２濃度を術前と術後で比較をして血栓症のリスク予測として使用することができる。
　具体的な例を挙げると、膵臓癌や脳腫瘍患者においてｓＣＬＥＣ２濃度の測定を行い、その比が高値になれば生体内の血小板活性化が生じていると判断でき、アスピリンなどの抗血小板薬を一次予防として投与する、といった使用法も可能と考えられる。さらに、アスピリン、クロビドグレルなどの抗血小板薬を服用している患者においてｓＣＬＥＣ２濃度測定を実施し、高値であれば抗血小板薬の増量、異なる種類の抗血小板薬への変更あるいは追加投与などを検討することも可能である。
　ｓＣＬＥＣ２の存在を検出するための方法は、特に制限されないが、ｓＣＬＥＣ２を認識する抗体（以下、これを「抗ｓＣＬＥＣ２抗体」と称することがある）を用いた免疫学的方法が好ましい。免疫学的にタンパク質の検出を行う方法としては、例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、化学発光免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫クロマトグラフィー等の標識抗体を用いた免疫測定法、あるいは、ウェスタンブロッティング法、ラテックス凝集法、免疫比濁法等のそれ自体公知の通常用いられる方法であればいかなる方法でも用い得るが、この中でも、操作の簡便性や測定精度の点から、標識抗体を用いた免疫測定法が好ましく用いられる。術中診断のためには、迅速に結果が得られることが望まれているため、化学発光免疫測定法や免疫クロマトグラフィー等が特に好ましく用いられる。
　対象の被験者（特には患者）から、例えば、血漿採血用の採血管で検体を採取する。血小板数の計測も考慮するとＥＤＴＡ入りの採血管が好適であるが、ヘパリン、クエン酸入りのものでも使用可能であり、当業者であればこれらの中から適切な採血管を適宜選択して使用することができる。血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度測定用と血小板数測定用のサンプルを一本の採血管で得てもよいが、同時採血であれば、各々別の採血管でもよい。血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度は例えば２０００ｇで２０分程度遠心分離した血漿を用いて測定するが、遠心の条件はこれに限るものではなくまた全血を使用した測定系であってもよい。以下、血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度の測定を例にとって説明するが、これに限定されるものではない。血中の血小板数は、ＥＤＴＡ等の抗凝固薬入りの全血を用いる。
　測定された癌患者由来試料中のｓＣＬＥＣ２濃度と、ＣＡＴの存在もしくは非存在、または転帰の可能性との相関については、癌患者由来試料中のｓＣＬＥＣ２濃度と、健常人由来試料中のｓＣＬＥＣ２濃度との比較から閾値を適宜設定して使用してもよいし、同一患者において術前と術後の比較や術後１日目と数日経過後の比較など、ｓＣＬＥＣ２濃度の経時的記録から、ｓＣＬＥＣ２濃度の顕著な変動が検出された場合にＣＡＴのリスク評価を行うこととしてもよい。
　ｓＣＬＥＣ２濃度を血小板数で除してＣＡＴのリスク予測に使用する場合には、血小板数の測定は、通常は自動血球計数機（血算計）を用いて測定が行われるが、血球計数板と顕微鏡を用いて計数することも可能である。
　血漿中のｓＣＬＥＣ２濃度を例えばｐｇ／ｍＬで表し、血中血小板数を例えば１０００個／ｍｍ３で表現し、ｓＣＬＥＣ２濃度／血小板数を計算する。ここで用いるｓＣＬＥＣ２の濃度はｎｇ／ｍＬ、ｎｇ／Ｌなどどの任意の単位を用いてもよく、血小板数も１００００個／ｍｍ３など任意の単位を用いることができるが、比較には統一した単位を用いるべきである。様々な単位を用いることにより、ｓＣＬＥＣ２濃度／血小板数は様々な値を取ることができるが、本質的には同じ概念のものである。
　比率の計算は、ｓＣＬＥＣ２濃度を測定する臨床検査機器から出てきた測定値と血小板数を測定する血算計から出てきた測定値を使って行う。この計算は、両方の測定器と繋がった病院の検査システム、病院のシステム、あるいは電子カルテなどのシステム上で自動的に計算することが日常診療上好適であるが、二つの測定器のデータをつなぐシステムを構築してもよいし、ｓＣＬＥＣ２濃度と血小板数を同時計測できる機械を構築することも可能である。また、両データを用いて手計算してもよい。
　また、血漿中のｓＣＬＥＣ２濃度、又はｓＣＬＥＣ２濃度／血小板数と血小板活性化の程度や各種疾患との相関を示すものを、例えば、判定用閾値、あるいは、判定用閾値を算出するためのオリジナルデータ又は統計処理データなどとして使用してもよい。
　ｓＣＬＥＣ２は、血小板の活性化に伴い血中に放出される。既存の血小板活性化マーカー、例えば、ＰＦ４、βＴＧは、採血による物理的な圧力により顆粒が刺激され、非特異的な放出を起こすことが問題とされているが、ｓＣＬＥＣ２は、血小板活性化を惹起するシグナル伝達依存的な放出機序であり、生体内の血小板の活性化をより正確に反映するマーカーになりうる。また、ＣＬＥＣ２はヒトでは血小板・巨核球系に発現がほぼ限られるため、偽陽性が少ない特異的なマーカーになる。従って、ｓＣＬＥＣ２を測定することにより血小板の活性化状態を早期に診断することが可能となり、血栓症リスクの予測方法として利用できる。
　血小板の多い個体では血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度が高くなり、血小板の少ない個体では血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度が低くなる傾向がみられるため、血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度は血中の血小板数の影響を受けてしまい必ずしも血小板の活性化を表さない場合、ｓＣＬＥＣ２濃度は血中の血小板数と正の相関性があることを利用して、血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度を血中血小板数で除した値を使用してもよい。
　血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度を血中血小板数で除して、血小板当たりのｓＣＬＥＣ２放出量を計算してこれを指標として血栓性疾患の診断を行うと、血中血小板数に依存すること無く、血小板の活性化度合いを評価することが可能となるため、好ましい。具体的には、例えば血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度をｐｇ／ｍＬで表し（Ａ）、血中血小板数を１０００個／ｍｍ３で表し（Ｂ）、ＡをＢで除した数字を血小板活性化の指標とすることができる。
　外科的治療を施された癌患者について、術後の血栓症のリスク予測をする場合、経時的に採血し、血漿中ｓＣＬＥＣ２濃度を測定してその濃度変化を観察することによってリスク予測に使用することが可能である。例えば、試料採取の期間を、患者別の背景情報に応じて適宜設定することで、より詳細なプロファイルを得て状態を観察し、リスク評価することが可能となる。術前より顕著に増加することが観察される患者については、ＣＡＴのリスクがあると予測することだけでなく、ＣＡＴと診断された患者についても、薬剤投与後の状態をモニタリングする方法としても使用することができる。
　ＣＡＴは再発率が高く、長期間抗凝固療法を行う必要がある症例が多いと考えられている。しかし、ＣＡＴの抗凝固療法は出血リスクを増大させる可能性があることや、抗癌剤により白血球（特に好中球）、赤血球、血小板が減少する血液毒性が生じる場合もあり、ＣＡＴに対する長期治療の方針は出血リスクや予後を考慮して決定する必要があることから、ＣＡＴに対する抗凝固療法の継続期間の判断は難しいとされるものの、抗凝固療法の方針について明確な基準が示されていない。そこで、本発明を利用して患者のＣＡＴのリスクを評価することで、治療方針を適切に決定するための補助となる可能性がある。
　モニタリングに使用する濃度測定の頻度は、患者個人の治療履歴等を含む背景情報や治療方針に合わせて適宜設定してよい。その場合、術前から術後３０日が経過するまでの間において一定間隔で試料を採取して実施することで、リスク評価が可能となるが、患者の背景によって状況が異なることが想定されるため、例えば、一般的にＣＡＴの発生に、特に注意を要する術後７～１０日目までの間に定期的に観察するなどして使用するなど、モニタリングの期間やタイミングなどの方法を適宜設定して実施することができる。
　本発明では、ｓＣＬＥＣ２濃度によるリスク評価を補助する目的で、現在、ＣＡＴのリスク評価として有用性があると報告のあるバイオマーカーと組み合わせて使用してもよい。それらのバイオマーカーと組み合わせて使用することで、より正確にＣＡＴのリスク評価を実施できるため、好ましい。例えば、Ｄダイマーなどを本発明と同様に術後のモニタリング用途として使用している場合がある。しかし、後述する実施例の場合のように、膵臓癌の場合には、ＣＡＴと診断された症例でｓＣＬＥＣ２濃度は変動があるにも関わらず、Ｄダイマーでは全く変動が無くＣＡＴのリスクを評価できないケースがあることが、本発明者らの検討によって見出された。このことは、血栓が形成される機構に依存することが考えられる。すなわち、Ｄダイマーによりフィブリン系による血栓形成を、ｓＣＬＥＣ２により血小板系による血栓形成を経時的にモニタリングすることで、より正確にＣＡＴのリスク評価ができる可能性がある。つまり、血小板優位の血栓が予測可能となる。
　また、本発明は、画像評価等他の所見と組み合わせて使用してもよい。一般的に臨床の現場ではＣＡＴが疑われる患者に対して画像診断を行うによって診断が行われているため、これらの情報と組み合わせて使用することで精度が向上することが期待されるため、好ましい。
　一般的に、血栓症の治療としては、心筋梗塞、アテローム血栓性脳梗塞、閉塞性動脈硬化症といった、血小板が活性化して凝集することで凝固が進行する動脈での血栓の場合にはアスピリンなどの抗血小板薬を、深部静脈血栓症、心房細動、心原性脳塞栓症、肺塞栓といった静脈や心房で凝固系が活性化されて凝固が進行する血栓の場合には、ワルファリン、ＤＯＡＣなどの抗凝固薬を投与する治療法が選択される。また、本発明の使用形態としては癌に関連した血栓症であるＣＡＴを想定しているが、現在標準的治療法としては、抗凝固薬が使用されている。本発明により血小板を主体とした血栓のリスク評価を行うことで抗血小板薬の選択が可能となることも考えられる。これらのことから、本発明を使用して術後の患者のｓＣＬＥＣ２濃度をモニタリングする意義は大きく、迅速で、信頼できてかつ費用効果的な術後リスクの層別化が可能になるため、モニタリングによる術後ケアや治療手段の必要性が、信頼しうる様態で評価され推定されうる。例えば、治療効果の判定やリスク予測を信頼できる精度で迅速に行うことができ、出血リスクのより低い薬剤の選択をすることが可能となるため、本発明の方法から大きな利益を得ることができる。
　以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
《実施例１：ヒト血漿中ｓＣＬＥＣ２の測定》
　特許第４９６１５９５号明細書の実施例６に従って、血漿中のｓＣＬＥＣ２濃度を測定した。
　マウス抗ヒトｓＣＬＥＣ２抗体を用いてサンドイッチＥＬＩＳＡ系を構築した。すなわち、０．０５ｍｏｌ／Ｌ炭酸緩衝液（ｐＨ９．５）で精製した１－１１Ｄ５抗体（Ｆ（ａｂ）’２）を１０μｇ／ｍＬに希釈し、イムノプレート（Maxisorp; NUNC）に１００μＬ／ウェル添加した。４℃で一晩反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳを各ウェルに２００μＬ添加しブロッキングした。次にスタンダードとして用いるヒトｓＣＬＥＣ２（ｈｓＣＬＥＣ２）蛋白質を１０％　ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ（Thermo Fisher Scientific）、０．１％オクタン酸ナトリウム、０．１４ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム／リン酸緩衝液（ＰＢ）を用いて標準品希釈系列を調製した。ヒト血漿は同バッファーで５倍以上に希釈した。それぞれ１００μＬ／ウェルで添加し、３７℃で１時間半反応させた後、同様に３回洗浄した。次に調製したビオチン標識した３－１１Ｅ６抗体（Ｆ（ａｂ）’２－ビオチン）を１０％ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ、０．１％オクタン酸ナトリウム、０．１４ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム／ＰＢにて１．０μｇ／ｍＬに希釈し、各ウェルに１００μＬ／ウェル添加した。３７℃で１時間、反応させた後、同様の方法で３回洗浄した。次いで、ＡＭＤＥＸストレプトアビジン標識ホースラディッシュペルオキシダーゼ（AMDEX streptavidin-conjugated horseradish peroxidase; GE Healthcare）を１０％ＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ、０．１％オクタン酸ナトリウム、０．１４ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム／ＰＢにて希釈し、各ウェルに１００μＬ／ウェル添加した。３７℃で１時間反応させた後、同様の方法で５回洗浄し、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）溶液を各ウェル１００μＬ／ウェル添加した。室温で約２０分間反応後、１ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液で反応を停止した。プレート分光光度計（BIO-TEK INSTRUMENTS社/EL312e）で４５０ｎｍ（－６２０ｎｍ）の吸光度を測定した。図１にｈｓＣＬＥＣ２蛋白質を標準品として用いて作成した標準曲線を示した。
《実施例２：膵臓癌患者の血漿検体中のｓＣＬＥＣ２の測定》
　ＢｉｏｌＶＴ社（Westbury, NY）より購入した膵臓癌患者血漿１４例及び健常人１０例をバッファーで希釈し、実施例１の方法により測定した。得られた膵臓癌患者の結果を表１に示した。また、健常人と膵臓癌患者のｓＣＬＥＣ２濃度の平均値±ＳＥを算出し図２に示した。ｓＣＬＥＣ２濃度は健常人に比較して有意（ｐ＜０．０５）に上昇していた。このことから、膵臓癌患者では癌の影響により血小板が活性化していることが明らかになった。次に膵臓癌患者を血液異常の有無により分類したところ、図３に示すように血液異常がある患者で、血液異常がない患者に比較して、ｓＣＬＥＣ２が高値を示した。その中でも異常凝固プロファイルと診断された患者では１３８２．２ｐｇ／ｍＬと健常人平均値の約８倍高値であり、血栓症リスクの高い患者で高値を示すことが明らかになった。
　ＶＴＥのモニタリングは一般的に画像評価に加えてＤダイマーを用いることが多い。そこで、ＢｉｏｌＶＴ社より購入した膵臓癌患者血漿１４例のＤダイマーをＬＰＩＡ　ジェネシス　Ｄダイマー試薬（ＬＳＩメディエンス）で測定し、実施例２で測定したｓＣＬＥＣ２濃度と比較検討した（図４）。その結果、ＤダイマーがｓＣＬＥＣ２に比して上昇する患者群と、ｓＣＬＥＣ２がＤダイマーに比して上昇する患者群の２群が観察された。血栓症は、静脈血栓症と動脈血栓症に大別され、静脈血栓はフィブリンが主体の血栓とされ、動脈血栓はその主体が血小板であるとされている。フィブリン主体の静脈血栓症ではフィブリン分解産物であるＤダイマーがそのバイオマーカーとして常用されるが、血小板が主体のトル―ソー症候群のような動脈血栓症には常用されるバイオマーカーはない。本実施例でＤダイマーが上昇せずｓＣＬＥＣ２が上昇する群が見られたことは、ｓＣＬＥＣ２が血小板主体の動脈血栓症の病態を捉えていることを意味し、従来のＤダイマー検査では不明であったトル―ソー症候群の検査にｓＣＬＥＣ２が有用であることを示している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
《実施例３：脳腫瘍患者の血漿検体中のｓＣＬＥＣ２の測定》
　脳神経外科に入院した悪性神経膠腫を中心とする脳腫瘍の術後７～１０日の一般採血で得られた検体及び同意の得られた健常人より血漿を採血し、実施例１の方法によりｓＣＬＥＣ２濃度を測定した。得られた検体の結果を表２、表３に示した。図５にＤＶＴ／ＰＥ合併症例（ｎ＝１０）、ＤＶＴ／ＰＥ非合併症例（ｎ＝４８）、及び健常人（ｎ＝１５）のｓＣＬＥＣ２濃度を示した。術後７～１０日後でのｓＣＬＥＣ２濃度はＤＶＴ／ＰＥ症例でＤＶＴ／ＰＥ非合併症例と比較して高値傾向を示した（ｐ＝０．２３９）。また、ＤＶＴ／ＰＥ合併症例とＤＶＴ／ＰＥ非合併症例における平均値、標準偏差、中央値の結果を表４に示した。なお、ＤＶＴはＤダイマー値と臨床症状でスクリーニングを行い、術後平均１０日で同定されていた。このことから、脳腫瘍の周術期にＤＶＴ／ＰＥを発症した患者では血小板が活性化している可能性が示された。また、ＣＬＥＣ２は血小板に発現し、血小板数の影響を受ける可能性があることから、ｓＣＬＥＣ２濃度を血小板数で割った値（ｓＣＬＥＣ２濃度ｐｇ／ｍＬを血小板数１０００個／μＬで除したもの。以下、Ｃ２ＰＡＣと表記する場合がある）により両群を比較したところ、ＤＶＴ／ＰＥ非合併症例と比べて、ＤＶＴ／ＰＥ合併症例で有意な上昇が示された（ｐ＝０．０３２、表２、表３、図６）。
　ＤＶＴのモニタリングは一般的に画像評価に加えてＤダイマーを用いることが多い。そこで、経時的に採血可能であった患者（神経膠芽腫、７１歳、女）のＤダイマー濃度、ｓＣＬＥＣ２濃度、Ｃ２ＰＡＣ値について評価した（図６）。本症例は手術後７日目にＤＶＴと同定され、抗凝固療法が開始された。ｓＣＬＥＣ２値とＣ２ＰＡＣ値はＤＶＴと同定された７日目で最大となり、その後抗凝固療法の効果により漸次低下したものと考えられた。一方、ＤダイマーはＤＶＴ同定時に加え、抗凝固療法開始１４日後も比較的高値を示していたが、大きな変化は認められなかった。ｓＣＬＥＣ２値とＣ２ＰＡＣ値は治療に対しより鋭敏に反応しており、本症例においては抗凝固療法のモニタリングにはｓＣＬＥＣ２値やＣ２ＰＡＣ値が治療効果のモニタリングに最も有用と推定された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　以上のように、本発明の血中ｓＣＬＥＣ２を測定することにより血栓症リスクの予測方法を適用すれば、血栓症になる前に患者の血栓症リスクを予測でき、速やかに適切な治療開始が可能となる。したがって、本発明の血栓症リスク予測方法は、医学や生物学等の広い分野に適用でき、特に、臨床検査の分野に有用である。

Claims (8)

  1. 　癌患者から採取した血液中に存在する、可溶型ＣＬＥＣ２濃度を測定する工程を含む、癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法。
  2. 　癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、
    　（１）癌関連血栓症を有する可能性のある患者、または癌関連血栓症と診断された患者に由来する試料を提供する工程、
    　（２）前記試料中の可溶型ＣＬＥＣ２濃度を決定する工程、
    　（３）前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度と、前記患者における癌関連血栓症の存在もしくは非存在、または転帰の可能性とを相関させる工程、
    を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 　癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度と、前記患者における癌関連血栓症の存在もしくは非存在、または転帰の可能性とを相関させる工程が、前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度の変化に基づいて、癌関連血栓症のリスクを前記患者が有するかどうかを評価することを含む、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 　癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度に加えて、少なくとも１つの凝固および止血関連マーカーを使用することを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 　癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、前記可溶型ＣＬＥＣ２濃度に代えて、可溶型ＣＬＥＣ－２濃度を血小板数で除した値を使用することを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 　癌患者周術期における癌関連血栓症のリスク評価を行う方法であって、前記癌患者に由来する試料の提供を、術前から術後３０日までの間経時的に行い、リスク評価を継続してモニタリングすることにより、抗血小板剤の効果判定の予測方法。
  7. 　前記癌が、膵臓癌、扁平上皮癌（肺、食道、子宮頸部等）、中皮腫、脳腫瘍、進行癌、骨髄増殖性疾患からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 　前記癌関連血栓症が、トルーソー症候群である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008539694A (ja) * 2005-04-25 2008-11-20 国立大学法人山梨大学 Ｃｌｅｃ−２シグナル伝達により止血疾患を治療するための組成物および方法
JP2008544224A (ja) 2005-06-09 2008-12-04 バイオサイト インコーポレイテッド 静脈血栓塞栓症の診断のための方法および組成物
WO2012128082A1 (ja) * 2011-03-22 2012-09-27 公益財団法人がん研究会 マウス抗Ａｇｇｒｕｓモノクローナル抗体
JP2014070942A (ja) * 2012-09-28 2014-04-21 Mitsubishi Chemical Medience Corp 可溶型ｃｌｅｃ−２に基づく血小板活性化測定方法
JP2019507345A (ja) 2016-02-18 2019-03-14 ダイアグノスティカ スターゴ 静脈血栓塞栓症に対して特異的なｄダイマーをアッセイするための方法、ならびに肺塞栓症および深部静脈血栓症を診断するためのその使用
WO2021172493A1 (ja) * 2020-02-28 2021-09-02 株式会社Ｌｓｉメディエンス 可溶型ｃｌｅｃ－２と血小板数に基づく血小板活性化測定方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008539694A (ja) * 2005-04-25 2008-11-20 国立大学法人山梨大学 Ｃｌｅｃ−２シグナル伝達により止血疾患を治療するための組成物および方法
JP4961595B2 (ja) 2005-04-25 2012-06-27 国立大学法人山梨大学 Ｃｌｅｃ−２シグナル伝達により止血疾患を治療するための組成物および方法
JP2008544224A (ja) 2005-06-09 2008-12-04 バイオサイト インコーポレイテッド 静脈血栓塞栓症の診断のための方法および組成物
WO2012128082A1 (ja) * 2011-03-22 2012-09-27 公益財団法人がん研究会 マウス抗Ａｇｇｒｕｓモノクローナル抗体
JP2014070942A (ja) * 2012-09-28 2014-04-21 Mitsubishi Chemical Medience Corp 可溶型ｃｌｅｃ−２に基づく血小板活性化測定方法
JP2019507345A (ja) 2016-02-18 2019-03-14 ダイアグノスティカ スターゴ 静脈血栓塞栓症に対して特異的なｄダイマーをアッセイするための方法、ならびに肺塞栓症および深部静脈血栓症を診断するためのその使用
WO2021172493A1 (ja) * 2020-02-28 2021-09-02 株式会社Ｌｓｉメディエンス 可溶型ｃｌｅｃ－２と血小板数に基づく血小板活性化測定方法

Non-Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FREESIA HORSTED ET AL., PLOS MED, vol. 9, no. 7, July 2012 (2012-07-01), pages e1001275
KATSUE SUZUKI-INOUE: "Roles of the CLEC-2-podoplanin interaction in tumor progression", PLATELETS, vol. 29, no. 8, 1 January 2018 (2018-01-01), GB , pages 786 - 792, XP009538258, ISSN: 0953-7104, DOI: 10.1080/09537104.2018.1478401 *
KUNITA A ET AL., AM J PATHOL., vol. 170, 2007, pages 1337 - 1347
LYMAN GH ET AL., J CLIN ONCOL, vol. 31, no. 17, 2013, pages 2189 - 2204
MAKOTO SANO, RYOTA TAKAHASHI, HIDEAKI IJICHI, HIROSHI MIYABAYASHI, KAZUYOSHI ISHIGAKI, SUGURU MIZUNO, YOSUKE NAKAI, KEISUKE TATEIS: "PCA1: Elevated plasma sVCAM-1 and ANP are risk predictors for pancreatic cancer-related thrombosis/thromboembolism", PANCREAS, vol. 35, no. 3, 17 July 2020 (2020-07-17), JP , pages A266, XP009538271, ISSN: 0913-0071, DOI: 10.2958/suizo.35.A1 *
MIR SEYED NAZARI PEGAH, RIEDL JULIA, PABINGER INGRID, AY CIHAN: "The role of podoplanin in cancer-associated thrombosis", THROMBOSIS RESEARCH, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 164, 1 April 2018 (2018-04-01), AMSTERDAM, NL , pages S34 - S39, XP055951090, ISSN: 0049-3848, DOI: 10.1016/j.thromres.2018.01.020 *
OSADA MAKOTO: "Examination for clinical applications and practical use of blood sCLEC-2 measurement method", GRANT-IN-AID FOR SCIENTIFIC RESEARCH, FINAL RESEARCH REPORT., 1 January 2016 (2016-01-01), XP055951088, Retrieved from the Internet <URL:https://kaken.nii.ac.jp/ja/file/KAKENHI-PROJECT-25460677/25460677seika.pdf> *
SHIRAI, T.; INOUE, O; HIRAYAMA, K.; ENDO, H.; SATO-UTIDA, H.; FUJII, H.; SUZUKI-INOUE, K.; OZAKI, Y.: "CLEC-2 facilitates hematogeneous tumor metastasis and in vitro tumor growth, but not in vivo tumor growth", JOURNAL OF THROMBOSIS AND HAEMOSTASIS, BLACKWELL PUBLISHING, OXFORD, vol. 13, no. Suppl. 2, 31 May 2015 (2015-05-31), GB , pages 226, XP009538357, ISSN: 1538-7933 *
SHIRAI, TOSHIAKI: "Platelet CLEC-2 promotes hematogenous metastasis and thromboinflammation in tumor-bearing mice", JAPANESE JOURNAL OF THROMBOSIS AND HEMOSTASIS, NIHON KESSEN SHIKETSU GAKKAI , TOKYO, vol. 31, no. 4, 1 January 2020 (2020-01-01), JP , pages 452 - 459, XP009538356, ISSN: 0915-7441, DOI: 10.2491/jjsth.31.452 *
SUZUKI-INOUE KATSUE: "Platelets and cancer-associated thrombosis: focusing on the platelet activation receptor CLEC-2 and podoplanin", BLOOD, vol. 134, no. 22, 28 November 2019 (2019-11-28), pages 1912 - 1918, XP055951087, DOI: 10.1182/blood.2019001388 *
TROUSSEAU A: "Phlegmasia alba dolens", CLINIQUE MEDICALE DE 1'HOTEL DIEU DE PARIS, vol. 3, pages 654 - 712

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