WO2022131108A1 - 真皮再生促進剤 - Google Patents

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WO2022131108A1
WO2022131108A1 PCT/JP2021/045233 JP2021045233W WO2022131108A1 WO 2022131108 A1 WO2022131108 A1 WO 2022131108A1 JP 2021045233 W JP2021045233 W JP 2021045233W WO 2022131108 A1 WO2022131108 A1 WO 2022131108A1
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WO
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imidazolidinone
hydroxyethyl
ltbp2
derivative
dermal
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PCT/JP2021/045233
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English (en)
French (fr)
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俊介 入山
紗織 丹野
有紀 上田
純一 細井
聡 天野
誠 常長
Original Assignee
株式会社 資生堂
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Publication date
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
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    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • the present invention relates to a dermis elasticity improving agent, a dermis wrinkle improving agent, a dermis papillary layer fiber growth promoter, a dermis papillary layer fiber stabilizer, and an LTBP2 and / or fibrillin-1 production promoter.
  • (2-Hydroxyethyl) -2-Imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient a dermis elasticity improving agent, a dermis wrinkle improving agent, a dermis papillary layer fiber growth promoter, and a dermis papillary layer fiber stabilizing agent.
  • agents and LTBP2 and / or fibrillin-1 production promoters are examples of agents.
  • the decrease in collagen which is the main component of the matrix, is associated with the decrease in sagging and firmness of the skin, and the decomposition and degeneration of elastin caused by the expression of elastin-degrading enzymes is considered to be the cause of the decrease in elasticity, and the collagen production is enhanced.
  • An agonist, a collagen-degrading enzyme inhibitor, an elastin-degrading enzyme inhibitor, and the like are blended as an anti-aging agent.
  • these drugs show a certain effect, they have not yet shown a sufficient effect.
  • Patent Document 1 describes an anti-aging skin external preparation that is effective in restoring / maintaining the firmness and elasticity of the skin, reducing wrinkles / sagging, and reducing pigmentation, and can restore and maintain a youthful skin condition.
  • an anti-aging skin external preparation which is characterized by containing niacin and ubiquinone.
  • Patent Document 2 describes new agents effective in preventing and suppressing skin aging from the viewpoint of the relationship between heparanase and skin aging, and whitening agents effective in preventing and suppressing pigmentation such as age spots, freckles, and dullness.
  • a cyclic carboxamide derivative having a specific structure is disclosed.
  • An object of the present invention is to find a substance and composition effective for improving skin elasticity and wrinkles from the viewpoint of maintaining or improving quality of life (QOL) in terms of both health and beauty.
  • heparanase activity inhibitors such as 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof promote the production of LTBP2 and / or fibrillin-1 in fibroblasts. It has been found that it exhibits an effect of improving dermis elasticity, an effect of improving dermis wrinkles, an effect of promoting dermal papilla fiber growth, and an effect of stabilizing dermis papillary layer fiber.
  • a dermis elasticity improving agent which comprises 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient.
  • a dermis wrinkle improving agent containing 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient.
  • An agent for promoting dermal papilla fiber growth which comprises 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient.
  • a dermis papillary layer fiber stabilizer containing 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient.
  • 1- (2-Hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof has the following general formula (I) :.
  • n is an integer of 1 to 3
  • R 1 is a hydrogen atom or a hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms which may be substituted with a hydroxyl group
  • X is ⁇ CH 2 ⁇ or. It is a group represented by -N (R 2 )-, and R 2 means a hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms which may be substituted with a hydrogen atom or a hydroxyl group.
  • a cosmetological method for improving the elasticity of the dermis which comprises increasing the production of LTBP2 and / or fibrillin-1.
  • a cosmetic method for preventing or ameliorating wrinkles which comprises increasing the production of LTBP2 and / or fibrillin-1.
  • a cosmetological method for preventing or improving wrinkles which comprises stabilizing the localization of LTBP2 and / or fibrillin-1.
  • a cosmetological method for preventing or improving wrinkles which is characterized by increasing the expression of PDGF-BB.
  • the agents according to the present disclosure increase and / or stabilize dermal papillary layer fibers by promoting the production of LTBP2 and / or fibrillin1, and are therefore effective for improving dermal elasticity and / or dermal wrinkles, for example. It can be suitably used as a cosmetic composition for cosmetics and the like.
  • FIG. 1 is a graph showing the results of examining the PDGFB gene expression level in the epidermis of an artificial skin model (skin three-dimensional model) by quantitative PCR analysis.
  • the results of treatment with a combination of heparanase inhibitor (BIPBIPU) and MMP inhibitor (CGS27023A) are shown relative to the control (Cont) on the left.
  • FIG. 4 is a graph showing changes in gene expression of fibroblasts by PDGF-BB. From the left, the results of LTBP2, type V collagen (COL5A1), type III collagen (COL3A1), type I collagen (COL1A1), and fibrillin 1 (FBLN1) are the results of treatment with control (cont) and 10 ng / mL PDGF-BB.
  • FIG. 3A is an image showing changes in the localization of LTBP2 due to a heparanase inhibitor. The results of investigating changes in LTBP2 localization in an organ culture model are shown. From the top, the results of treatment with a control (Cont), a combination of a heparanase inhibitor (BIPBIPU) and an MMP inhibitor (CGS27023A), and treatment with S-173 (HEI) are shown.
  • FIG. 3B is an image showing changes in the localization of LTBP2 due to a heparanase inhibitor. The results of examining changes in LTBP2 localization in a three-dimensional skin model are shown.
  • FIG. 4A is an image showing changes in the localization of LTBP2 and fibrillin-1 due to a heparanase inhibitor. The results of investigating changes in the localization of LTBP2 and fibrillin-1 in an organ culture model are shown. From the top, the results of treatment with a control (Cont), a combination of a heparanase inhibitor (BIPBIPU) and an MMP inhibitor (CGS27023A), and treatment with S-173 (HEI) are shown.
  • FIG. 4A is an image showing changes in the localization of LTBP2 and fibrillin-1 due to a heparanase inhibitor. The results of investigating changes in the localization of LTBP2 and fibrillin-1 in an organ culture model are shown. From the top, the results of treatment with a control (Cont), a combination of a heparanase inhibitor (BIPBIPU) and an MMP inhibitor (CGS27023A), and treatment with S-173 (HEI) are shown.
  • FIG. 4B is an image showing changes in the localization of LTBP2 and fibrillin-1 due to a heparanase inhibitor.
  • the results of investigating changes in the localization of LTBP2 and fibrillin-1 in a three-dimensional skin model are shown. From the top, the results of treatment with a control (Cont), a combination of a heparanase inhibitor (BIPBIPU) and an MMP inhibitor (CGS27023A), and treatment with S-173 (HEI) are shown.
  • FIG. 5 is a graph showing that LTBP2 and heparan sulfate bind in a concentration-dependent manner as a result of investigating the binding between heparan sulfate and LTBP2.
  • Figure 6 shows the subject's water evaporation on both cheeks measured 3 times with Vapometer (Delfin), the stratum corneum water content measured 5 times with Corneometer (MPA580, Courage + Khazakaelectronic GmbH), and skin elasticity measured 3 times with Cutometer. It is a graph which shows the result of this.
  • FIG. 7 is a graph showing the results of measuring the thickness of the papillary dermis layer with an acoustic microscope.
  • FIG. 8 is a graph showing changes in the wrinkle area ratio (%) due to the use of the cream preparation (Active) containing 1.5% HEI and the cream preparation (Placebo) not containing 1.5% HEI. Results are shown at 0 months (0M), 1 month (1M), and 2 months (2M) from the start of application.
  • Dermis elasticity improving agent which comprises 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone (HEI) or a derivative thereof as an active ingredient. ..
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone (HEI) may be referred to as S-173 or S173.
  • HAI (2-Hydroxyethyl) -2-imidazolidinone
  • the derivative of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone can be, for example, a compound represented by the following general formula (I):
  • n is an integer of 1 to 3
  • R 1 is a hydrogen atom or a hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms which may be substituted with a hydroxyl group
  • X is ⁇ CH 2 ⁇ or. It is a group represented by -N (R 2 )-, and R 2 means a hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms which may be substituted with a hydrogen atom or a hydroxyl group.
  • Heparanase is an enzyme that exists in various cells and specifically degrades the heparan sulfate chain of various heparan sulfate proteoglycans.
  • epidermal keratinized cells constituting the epidermis, fibroblasts of the dermis, vascular endothelial cells and the like are produced. It is known that the production is also increased in various cancer cells, and it is suggested that it is related to the malignancy of cancer.
  • Heparan sulfate proteoglycan functions to accumulate heparan sulfate-binding growth factors (bFGF, HGF, VEGF, HB-EGF, etc.) extracellularly.
  • Pearlcan a type of proteoglycan heparan sulfate, is also present in the basement membrane of the epidermis at the boundary between the epidermis and the dermis. It controls the movement of growth factors between.
  • perlecan present in the epidermal basement membrane also controls the action of growth factors on the epidermal basal cells bound to the epidermal basement membrane, and it has been clarified that it is essential for good proliferation and differentiation of the epidermis. ..
  • HEI 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone
  • MMP matrix metalloproteinase
  • the dermis elasticity improving agent according to the present disclosure is a composition for use in improving dermis elasticity, which contains 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient. Can also be expressed as. Such compositions can be used especially for non-therapeutic cosmetic applications.
  • one embodiment of the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in improving dermal elasticity.
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof may be used in the form of a composition in combination with other components.
  • one embodiment of the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in the manufacture of a dermal elasticity improver.
  • one embodiment of the present disclosure comprises administering 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof to a subject (eg, human) to improve dermal elasticity.
  • a subject eg, human
  • LTBP2 and / or Fibrillin-1 Production Promoter One embodiment according to the present disclosure comprises LTBP2 and / or a derivative thereof of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone as an active ingredient. / Or related to the production promoter of fibrillin-1. As detailed in the Examples section, we now show that 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone promotes the production of LTBP2 and / or fibrillin-1 in human fibroblasts. Found to have. The increase or decrease in the production of LTBP2 and / or fibrillin-1 can be examined by, for example, quantitative PCR analysis.
  • the LTBP2 and / or fibrillin-1 production promoter contains 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient, LTBP2 and / or.
  • it can be expressed as a composition for use in promoting the production of fibrillin-1.
  • Such compositions can be used especially for non-therapeutic cosmetic applications.
  • one embodiment of the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in promoting the production of LTBP2 and / or fibrillin-1.
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof may be used in the form of a composition in combination with other components.
  • one embodiment of the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in the production of LTBP2 and / or fibrillin-1 production promoters.
  • one embodiment of the present disclosure comprises administering 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof to a subject (eg, a human), LTBP2 and / or.
  • the present invention relates to a method for promoting the production of fibrillin 1.
  • one embodiment according to the present disclosure relates to a cosmetological method for improving the elasticity of the dermis, which is characterized by increasing the production of LTBP2 and / or fibrillin-1.
  • one embodiment of the present disclosure relates to a cosmetological method for preventing or ameliorating wrinkles, characterized by increased production of LTBP2 and / or fibrillin-1.
  • one embodiment of the present disclosure is characterized by stabilizing the localization of LTBP2 and / or fibrillin-1 just below the basement membrane to prevent or improve wrinkles (particularly dermal wrinkles). Regarding beauty methods to do.
  • PDGF-BB promotes the production of LTBP2 and fibrillin 1, and thus one embodiment according to the present disclosure is characterized by increasing the expression of PDGF-BB. Also related to beauty methods to prevent or improve wrinkles (especially dermal wrinkles).
  • the beauty method according to the present disclosure is a non-therapeutic method and does not include so-called medical practice.
  • An embodiment according to the present disclosure comprises 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient.
  • accelerators As detailed in the Examples section, the inventor has now found that 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone has the effect of promoting the growth of dermal papilla fibers.
  • the increase in dermal papilla layer fibers can be evaluated, for example, by measuring the thickness of the dermal papilla layer with an acoustic microscope (for example, AMS-50SI manufactured by Hyundai Motor Co., Ltd.).
  • Some embodiments are characterized by containing 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient, wherein the dermal papilla fibers are dermal papilla oxytalan fibers.
  • the papillary layer fiber growth promoter Regarding the papillary layer fiber growth promoter.
  • the dermal papillary layer fiber growth promoter contains 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient, and promotes dermal papillary layer fiber growth. It can also be expressed as a composition for use in. Such compositions can be used especially for non-therapeutic cosmetic applications.
  • one embodiment of the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in promoting dermal papilla fiber growth.
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof may be used in the form of a composition in combination with other components.
  • one embodiment of the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in the production of a dermal papillary layer fiber growth promoter.
  • one embodiment according to the present disclosure comprises administering 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof to a subject (eg, human). Regarding the method of promoting growth.
  • Dermal Papillary Fiber Stabilizer One embodiment according to the present disclosure comprises 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient. Regarding agents. As detailed in the Examples section, the inventor has now found that 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone has the effect of promoting the growth of dermal papilla fibers. Stabilization of the dermal papilla layer fibers can be evaluated, for example, by measuring the thickness of the dermal papilla layer with an acoustic microscope (for example, AMS-50SI manufactured by Hyundai Motor Co., Ltd.).
  • an acoustic microscope for example, AMS-50SI manufactured by Nissan Motor Co., Ltd.
  • Some embodiments are characterized by containing 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient, wherein the dermal papilla fibers are dermal papilla oxytalan fibers.
  • the papillary layer fiber growth promoter Regarding the papillary layer fiber growth promoter.
  • the dermal papillary layer fiber stabilizer according to the present disclosure contains 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient, and dermis papillary layer fiber stabilization. It can also be expressed as a composition for use in. Such compositions can be used especially for non-therapeutic cosmetic applications.
  • one embodiment according to the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in dermal papillary layer fiber stabilization.
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof may be used in the form of a composition in combination with other components.
  • one embodiment according to the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in the production of a dermal papilla layer fiber stabilizer.
  • one embodiment according to the present disclosure comprises administering 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof to a subject (eg, human). Regarding stabilization method.
  • a dermis wrinkle improving agent which comprises 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient.
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone has the effect of improving human dermal wrinkles. Fine wrinkles due to dryness are commonly referred to as epidermal wrinkles, while deep wrinkles at the corners of the eyes are defined as deep wrinkles with changes in the dermis and fat layer.
  • the technique disclosed in the present application is epoch-making in that it can improve deep dermal wrinkles by promoting the regeneration of the papillary layer (elastin fibers of the papillary layer) in addition to the fine wrinkles of the epidermis. So far, dermal wrinkles have been improved by suppressing the decomposition of common matrices such as collagen, elastin, and hyaluronic acid in the dermis, or simply promoting the production of collagen, elastin, and hyaluronic acid. It was a theory between.
  • treatment with 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone produces PDGF-BB from the epidermis and acts on PDGFR ⁇ -positive fibroblasts in the papillary layer. Increases the production of collagen and elastin.
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone promotes the regeneration of good basement membrane microstructure by suppressing the decomposition of the basement membrane. The important point is that a normal matrix can be constructed in the papillary layer by the interaction between the matrix whose production is promoted by PDGF-BB and the basement membrane formed by the suppression of degradation. The improvement of dermis wrinkles can be evaluated using, for example, an image analysis device or the like.
  • the dermis wrinkle improving agent according to the present disclosure contains 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof as an active ingredient, and has a composition for use in improving dermis wrinkles. It can also be expressed as a thing. Such compositions can be used especially for non-therapeutic cosmetic applications.
  • one embodiment according to the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in the improvement of dermal wrinkles.
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof may be used in the form of a composition in combination with other components.
  • one embodiment according to the present disclosure relates to the use of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof in the production of a dermal wrinkle improving agent.
  • one embodiment of the present disclosure comprises administering 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof to a subject (eg, human) to improve dermal wrinkles.
  • a subject eg, human
  • One embodiment according to the present disclosure relates to a screening method for a dermal elasticity improving agent using the expression of LTBP2 and / or fibrillin-1 as an index.
  • one embodiment according to the present disclosure relates to a method for screening a dermal wrinkle improving agent using the expression of LTBP2 and / or fibrillin-1 as an index.
  • Such a screening method determines, for example, a step of contacting a cell with a test compound, a step of measuring the expression of LTBP2 and / or fibrillin 1, and the presence or absence of an increase in the expression of LTBP2 and / or fibrillin 1 depending on the presence or absence of the compound.
  • Including the process of Increased expression of LTBP2 and / or fibrillin-1 can be assessed by measuring mRNA and protein levels by known techniques.
  • the compound to be screened for example, a compound contained in a compound library or a library of extracts such as microorganisms, animals and plants can be used.
  • one embodiment according to the present disclosure relates to a dermis elasticity improving agent and a screening method using the expression of PDGF-BB as an index.
  • a screening method includes, for example, a step of contacting cells with a test compound, a step of measuring the expression of PDGF-BB, and a step of determining the presence or absence of an increase in the expression of PDGF-BB depending on the presence or absence of the compound.
  • Increased expression of PDGF-BB can be assessed by measuring mRNA and protein levels by known methods.
  • the compound to be screened for example, a compound contained in a compound library or a library of extracts such as microorganisms, animals and plants can be used.
  • one embodiment according to the present disclosure relates to a screening method for a dermis wrinkle improving agent using the expression of PDGF-BB as an index.
  • a screening method includes, for example, a step of contacting cells with a test compound, a step of measuring the expression of PDGF-BB, and a step of determining the presence or absence of an increase in the expression of PDGF-BB depending on the presence or absence of the compound.
  • Increased expression of PDGF-BB can be assessed by measuring mRNA and protein levels by known methods.
  • the compound to be screened for example, a compound contained in a compound library or a library of extracts such as microorganisms, animals and plants can be used.
  • Formulation 1- (2-Hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof can be synthesized by a known method, or a commercially available product can be easily purchased.
  • 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof can be made into an inorganic salt or an organic salt by a known method.
  • the salt used in the embodiment according to the present disclosure is not particularly limited, and examples of the inorganic salt include hydrochloride, sulfate, phosphate, hydrobromide, sodium salt, potassium salt, magnesium salt, and the like. Calcium salt, ammonium salt and the like can be mentioned.
  • the organic salt include acetate, lactate, maleate, fumarate, tartrate, citrate, methanesulfonate, p-toluenesulfonate, triethanolamine salt, diethanolamine salt, amino acid salt and the like. Can be mentioned.
  • the agent according to the present disclosure may contain only one 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof alone, but any combination of two or more of the above compounds or salts thereof. And may be included in proportions.
  • the content of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof or a salt thereof in the agent according to the present disclosure is particularly limited as long as it is sufficient to effectively exert the desired effect. However, it may be appropriately selected according to the intended use of the agent. However, in general, the ratio of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof or a salt thereof to the whole agent is usually 0.0001% by mass or more, particularly 0.0001% by mass or more, and usually 5% by mass or less. Above all, it is preferably 1.5% by mass or less. When two or more kinds of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof or a salt thereof are used, the total amount thereof may satisfy the above range.
  • the agent according to the present disclosure is 1- (2-hydroxyethyl) -2 as long as the action of 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof or a salt thereof is not substantially impaired.
  • any other component may be contained.
  • Other components include other compounds with heparanase activity inhibitory activity or other activity (MMP inhibitory activity, especially MMP-9 inhibitory activity, etc.) (CGS27023A, BIPBIPU, etc.), pharmaceutically acceptable carriers and / Alternatively, an auxiliary agent may be mentioned. Examples of other ingredients include crude drugs (see Japanese Patent Application No.
  • heparanase inhibitors such as valerian extract, lily extract, long-lived herb extract, mukuroji extract, and chimpi extract, mangostin extract, turmeric extract, and (tormentilla extract).
  • examples include, but are not limited to, crude drugs that act as MMP inhibitors (see Japanese Patent Application No. 2018-545781).
  • MMP molecular pressure regulator
  • One of these other components may be used alone, or two or more thereof may be used in any combination and ratio.
  • some aspects of the invention are a compound having both heparanase inhibitory activity and MMP (particularly MMP-9) inhibitory activity, and / or a combination of a heparanase inhibitor and an MMP (particularly MMP-9) inhibitor.
  • the present invention relates to an agent such as a dermis elasticity improving agent, a dermis wrinkle improving agent, a dermis papillary layer fiber growth promoting agent, a dermis papillary layer fiber stabilizing agent, an LTBP2 and / or a fibrillin 1 production promoting agent.
  • an agent such as a dermis elasticity improving agent, a dermis wrinkle improving agent, a dermis papillary layer fiber growth promoting agent, a dermis papillary layer fiber stabilizing agent, an LTBP2 and / or a fibrillin 1 production promoting agent.
  • the agent according to the present disclosure can be produced according to a conventional method, and as a component constituting the external skin preparation, 1- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone or a derivative thereof or a salt thereof or Although two or more types can be prepared alone, the components usually used for skin external preparations such as cosmetics including non-pharmaceutical products and pharmaceuticals, such as oils, surfactants, powders, coloring materials, water, alcohols, etc. Sticky agents, chelating agents, silicones, antioxidants, ultraviolet absorbers, moisturizers, fragrances, various medicinal ingredients, preservatives, pH adjusters, neutralizers and the like can be appropriately blended as needed.
  • cosmetics including non-pharmaceutical products and pharmaceuticals, such as oils, surfactants, powders, coloring materials, water, alcohols, etc.
  • Sticky agents, chelating agents, silicones, antioxidants, ultraviolet absorbers, moisturizers, fragrances, various medicinal ingredients, preservatives, pH adjusters, neutralizers and the like can be appropriately blended
  • the administration route and dosage form of the agent according to the present disclosure are not limited, and may be appropriately selected according to the intended use.
  • Examples of the route of administration include local administration (external skin application, etc.), oral administration, parenteral administration (intravenous administration, intraperitoneal administration, etc.), etc., which are used as agents according to the present disclosure such as dermis regeneration promoting agents. If so, it is preferable to use it as a skin external preparation.
  • the dosage form includes solution system, solubilization system, emulsification system, powder dispersion system, water-oil two-layer system, water-oil-powder three-layer system, etc.
  • Examples thereof include ointments, creams, emulsions, lotions, gels, aerosols and the like.
  • solid preparations such as tablets, coated tablets, sugar-coated tablets, granules, powders, capsules (for example, hard or soft gelatin capsules), liquid preparations such as oral liquids and syrups (solutions, suspensions), etc.
  • liquid preparations such as oral liquids and syrups (solutions, suspensions), etc.
  • parenteral administration the form such as an injection solution can be mentioned.
  • the agent according to the present disclosure includes 1- (2- (2-hydroxyethyl) -2-imidazolidinone according to the present disclosure or a derivative thereof or a salt thereof, as long as the action thereof is not substantially impaired.
  • other one or more arbitrary components such as a carrier and / or an auxiliary agent may be blended.
  • Other components are not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended use, dosage form, administration form and the like of the pharmaceutical composition, and examples thereof include pharmaceutically acceptable carriers and / or adjuvants. ..
  • Auxiliaries include, for example, diluents, binders, disintegrants, thickeners, dispersants, reabsorption promoters, flavoring agents, buffers, surfactants, solubilizers, preservatives, emulsifiers, isotonic agents. , Stabilizers, pH adjusters and the like.
  • the agent according to the present disclosure when used as a skin external preparation, components usually used for the external preparation, such as a whitening agent, a moisturizer, an antioxidant, an oily component, an ultraviolet absorber, a surfactant, and a thickening agent, are used. Agents, alcohols, powder components, coloring agents, aqueous components, water, various skin nutrients and the like can be appropriately blended as needed.
  • metal ion blocking agents such as disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, gluconic acid, preservatives such as methylparaben, ethylparaben, butylparaben, caffeine, tannin, Bellapamil, tranexamic acid and its derivatives, licorice extract, glabridin, hot water extract of karin fruit, various crude drugs, tocopherol acetate, glycyrrhizinic acid and its derivatives or salts thereof, vitamin C, magnesium ascorbic acid phosphate, Whitening agents such as ascorbic acid glucoside, arbutin, and kodiic acid, sugars such as glucose, fructose, mannose, sucrose, and trehalose, and vitamin A derivatives such as retinoic acid, retinol, retinol acetate, and retinol palmitate should be added as appropriate. Can be done
  • the dosage form of the external skin preparation is not particularly limited, and is, for example, a solution system, a solubilization system, an emulsification system, a powder dispersion system, a water-oil two-layer system, and a water-oil-powder three-layer system.
  • Ointments, gels, aerosols and the like can be taken in any dosage form.
  • the form of use is not particularly limited, and for example, any form such as a lotion, a milky lotion, a cream, an essence, a jelly, a gel, an ointment, a pack, a mask, and a foundation can be taken.
  • the agent according to the present disclosure By applying the agent according to the present disclosure to the skin, it can be used as a cosmetic method for preventing the formation of dermal wrinkles and / or reducing / eliminating the formed dermal wrinkles.
  • the usage and dosage of the external skin preparation according to the present disclosure in such a cosmetic method are not particularly limited, and are appropriately determined depending on the dosage form and the condition of the dermal wrinkles to be treated, but are typically several times a day. For example, 1 to 5 times, an appropriate amount, for example, 0.1 ml to 1 ml per 1 square cm 2 , can be rubbed directly on the skin, or the appropriate amount can be soaked in gauze and then applied to the skin.
  • EFT-400 Three-dimensional skin model (EFT-400) purchased from MatTeK was used as an MMP-9 inhibitor CGS27023A (reference 1) (final concentration 10-5 M) and a heparanase inhibitor BIPBIPU (reference).
  • Reference 2 final concentration 10-5 M
  • the cells were cultured in a special medium (EFT400-ASY) supplemented with HEI (final concentration 0.01%).
  • EFT400-ASY a medium containing an equal amount of DMSO solvent not containing these inhibitors.
  • Medium was exchanged once every 2 days, and tissue pieces were collected on the 4th and 7th days.
  • Paraffin blocks, sectioned skin models, and fresh human skin were dehydrated and fixed with cold acetone according to the AMeX method, then replaced with acetone, methyl benzoate, and xylene in this order, and embedded in paraffin. Sections were prepared with a thickness of 3 ⁇ m, and sections for tissue staining were prepared.
  • Paraffin sections prepared with various immunostaining thicknesses of 3 ⁇ m were deparaffinized with xylene and then hydrated with EtOH.
  • Antibodies to type V collagen (Acris, AM10159PU-N, V13F6, mouse monoclonal antibody), antibodies to cytokerald 14 (K-14) (Fitzgerald, 20R-CP002, guniea pig polyclonal antibody), antibodies to fibrillin-1 (Abcam, 11C1.3, mouse monoclonal antibody), antibody against ⁇ 6 integrin (Santa Cruz, GOH-3, sc-19622, rat monoclonal antibody), antibody against LTBP2 (Protein-tech Group, 17708-1-AP, rabbit polyclonal antibody) Fluorescent immunostaining was performed using.
  • Subjects (20-30s, 50s-60s) who gave informed consent to the gene expression of LTBP2 purchased and obtained fibroblasts derived from abdominal skin from KAC Co., Ltd. The cells were cultured in DMEM medium containing 10% serum. The cells were seeded on a 6-well plate at 250,000 cells / well, and 2 days later, mRNA was extracted using the RNeasy mini kit (QUIAGEN), and cDNA was synthesized using SuperScript VILO (invitrogen). Then, using the synthesized cDNA, quantitative PCR analysis was performed using platinum SYBER green (invitrogen). The primers of the genes used are shown in Table 2.
  • Binding assay of LTBP2 and heparan sulfate Heparan sulfate was immobilized (biotinylated) by ring-opening reaction of heparan sulfate purchased from Biochemical Industry with sodium hypoiodide and adding it to a carbobind plate (corning). The method for immobilizing heparan sulfate on the plate is the same as that described in Reference 5). Recombinant human LTBP2 (abcam) of various concentrations was added to this heparan sulfate plate and reacted at room temperature for 2 hours.
  • the acquired replica is used to analyze the wrinkle area using a square with a side of 10 mm as the base point at a point 5 mm away from the outside eye angle to the outside of the face.
  • the rate (%) was calculated.
  • Figure 1 shows the results of quantitative PCR analysis of the PDGFB gene expression level in the epidermis of an artificial skin model (skin three-dimensional model) that promotes PDGF-BB production by heparanase inhibitors and MMP inhibitors .
  • the results in Figure 1 show that treatment with a heparanase inhibitor (BIPBIPU) and an MMP inhibitor (CGS27023A) increases PDGFB production.
  • BIPBIPU heparanase inhibitor
  • CCS27023A MMP inhibitor
  • Fig. 2 shows the results of investigating the effects of PDGF-BB on fibroblasts and the gene expression of fibrillin and LTBP2. The results in FIG. 2 show that PDGF-BB also promotes the production of LTBP2 and fibrillin-1.
  • LTBP2 localization change by heparanase inhibitor From the above results, an inhibitor that has the effect of simultaneously inhibiting the enzyme activities of both heparanase and MMP when heparanase inhibitor (BIPBIPU) and MMP inhibitor (CGS27023A) are allowed to act simultaneously.
  • BIPBIPU heparanase inhibitor
  • CCS27023A MMP inhibitor
  • 3A and 3B show that treatment with a heparanase inhibitor (BIPBIPU), an MMP inhibitor (CGS27023A), and a compound (HEI) having an inhibitory effect on both MMP and heparanase enzymes increased the production of LTBP2 and heparan sulfate. It is shown that it can be stably localized in the basement membrane by binding to.
  • BIPBIPU heparanase inhibitor
  • CCS27023A MMP inhibitor
  • FIGS. 4A and 4B show that fibrillin-1 is mediated directly below the basement membrane via LTBP2 by treatment with a heparanase inhibitor (BIPBIPU), an MMP inhibitor (CGS27023A), or a compound that inhibits both heparanase and MMP enzymes (HEI). It is shown that it can be stably localized in.
  • BIPBIPU heparanase inhibitor
  • HEI heparanase inhibitors
  • FIG. 5 shows the results of investigating the binding of heparan sulfate and LTBP2 using a plate on which heparan sulfate is immobilized. The results in FIG. 5 show that LTBP2 and heparan sulfate bind in a concentration-dependent manner.
  • FIG. 6 show that treatment with a serum containing 1.5% of the compound HEI, which inhibits the activity of both heparanase and MMP enzymes, improves the elasticity of the dermis.
  • the thickness of the dermal papilla layer was measured with an acoustic microscope AMS-50SI (Honda Motor Co., Ltd.). The results are shown in Figure 7.
  • the results in FIG. 7 show that treatment with HEI promotes the growth of dermal papilla fibers and stabilizes the dermal papilla fibers.
  • CGS 27023A a non-peptidic, potenti, and orally active stromelysin inhibitor that blocks cartilage degradation in rabbits. Journal of medicinal chemistry. 1997; 40 (16): 2525-32. 3) Iriyama S, Yamanishi H, Kunizawa N, Hirao T, Amano S. 1-(2-Hydroxyethyl) -2-imidazolidinone, a heparanase and matrix metalloproteinase inhibitor, improves epidermal basement membrane structure and epidermal barrier function. Experimental dermatology. 2019 28 (3): 247-53.
  • the agents according to the present disclosure increase and / or stabilize dermal papillary layer fibers by promoting the production of PDGF-BB, LTBP2 and / or fibrillin 1, thereby improving dermal elasticity and / or dermal wrinkles. It can be suitably used as a cosmetic composition such as an effective cosmetic product.

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Abstract

本開示は、健康・美容両面における生活の質（QOL）維持あるいは向上の観点から、皮膚の弾力の改善やシワの改善に有効な物質および組成物に関する。より具体的には、本開示は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体などの成分を含む組成物に関し、これは、線維芽細胞におけるLTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生を促進し、真皮弾力改善効果、真皮シワ改善効果、真皮乳頭層線維増大促進効果、および真皮乳頭層線維安定化効果を得るために使用することができる。

Description

真皮再生促進剤
　本発明は、真皮弾力改善剤、真皮シワ改善剤、真皮乳頭層線維増大促進剤、真皮乳頭層線維安定化剤、ならびにLTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進剤に関し、より詳細には、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする真皮弾力改善剤、真皮シワ改善剤、真皮乳頭層線維増大促進剤、真皮乳頭層線維安定化剤、ならびにLTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進剤に関する。
　本格的な高齢化社会を迎え、老化機構に関する研究・開発が活発化している。中でも皮膚は人体の最外層を形成し、生体保護に重要な役割を担うだけでなく外観が視覚的に捉えられるため、美容上において特に重要な臓器である。健康・美容両面における生活の質（QOL）維持あるいは向上の観点から皮膚老化防止への関心は近年益々高くなってきている。
　皮膚老化の防止を目的として、化粧料等の皮膚外用剤には以前から皮膚水分保持能向上が期待される保湿剤や抗酸化が期待されるビタミンE、C等が配合されてきた。そして、近年の研究の結果、皮膚中のマトリックス成分の減少や変性が、老化に伴うシワやたるみ、ハリの低下などに大きくかかわっていることが明らかとなってきた。
　特にマトリックスの主要な成分であるコラーゲンの減少は、皮膚のたるみ、ハリの低下に関わり、またエラスチン分解酵素の発現により起こるエラスチンの分解変性は、弾力性の低下の原因と考えられ、コラーゲン産生亢進作用剤、コラーゲン分解酵素阻害剤、エラスチン分解酵素阻害剤などが抗老化剤として配合されている。しかしながら、これら薬剤は一定の効果を示すものの、十分な効果を示すには至っていない。
　特許文献1には、皮膚のハリや弾力の回復・保持、しわ・たるみの軽減、色素沈着の軽減に有効で、若々しい肌の状態を取り戻し、維持することのできる抗老化用皮膚外用剤として、ナイアシンとユビキノンとを含有することを特徴とする抗老化用皮膚外用剤が開示されている。
　特許文献2には、ヘパラナーゼと皮膚老化との関係の観点から新たな皮膚老化の予防、抑制に有効な薬剤や、しみ、そばかす、くすみといった色素沈着の予防、抑制に有効な美白剤の成分として、特定の構造を有する環状カルボキサミド誘導体が開示されている。
特開2005－298370 特開2014－111640
Vlodavsky I., et. al., Semin Cancer Biol., 2002;12(2):121-129
　本発明の課題は、健康・美容両面における生活の質（QOL）維持あるいは向上の観点から、皮膚の弾力の改善やシワの改善に有効な物質および組成物を見出すことにある。
　本発明者は鋭意検討の結果、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体などのヘパラナーゼ活性阻害剤が、線維芽細胞におけるLTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生を促進し、真皮弾力改善効果、真皮シワ改善効果、真皮乳頭層線維増大促進効果、および真皮乳頭層線維安定化効果を示すことを見出した。
　したがって、本開示は以下の実施形態を提供する。
（1）　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮弾力改善剤。
（2）　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮シワ改善剤。
（3）　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮乳頭層線維増大促進剤。
（4）　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮乳頭層線維安定化剤。
（5）　真皮乳頭層線維が、真皮乳頭層オキシタラン線維であ（3）または（4）に記載の剤。
（6）　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、LTBP2および／またはフィブリリン1の産生促進剤。
（7）　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体が、下記一般式（I）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
 （一般式（I）中、nは1～3の整数、R1は水素原子または、水酸基で置換されてもよい炭素数1～6の炭化水素基であり、Xは－CH2－または、－N（R2）－で示される基であり、R2は水素原子または、水酸基で置換されてもよい炭素数1～6の炭化水素基を意味する。）
で示される環状カルボキサミド誘導体である、（1）～（6）のいずれか一項に記載の剤。
（8）　LTBP2および／またはフィブリリン1の産生を増大させることを特徴とする、真皮の弾力を改善する美容方法。
（9）　LTBP2および／またはフィブリリン1の産生を増大させることを特徴とする、シワを防止または改善する美容方法。
（10）LTBP2および／またはフィブリリン1の局在安定化を特徴とする、シワを防止または改善する美容方法。
（11）　LTBP2および／またはフィブリリン1の発現を指標とする、真皮弾力改善剤のスクリーニング方法。
（12）　LTBP2および／またはフィブリリン1の発現を指標とする、真皮シワ改善剤のスクリーニング方法。
（13）　PDGF-BBの発現を増大させることを特徴とする、シワを防止または改善する美容方法。
（14）　PDGF-BBの発現を指標とする、真皮弾力改善剤のスクリーニング方法。
（15）　PDGF-BBの発現を指標とする、真皮シワ改善剤のスクリーニング方法。
　本開示に係る剤は、LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生を促進することにより、真皮乳頭層線維を増大および／もしくは安定化させることから、例えば、真皮弾力および／もしくは真皮シワの改善に有効な化粧品などの美容用組成物として好適に使用することができる。
図1は、人工皮膚モデル（皮膚三次元モデル）の表皮におけるPDGFB遺伝子発現量を定量PCR解析にて調べた結果を示すグラフである。左側の対照（Cont）を基準として、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）とMMP阻害剤（CGS27023A）の組み合わせによる処置の結果が示されている。 図4は、PDGF-BBによる線維芽細胞の遺伝子発現変化を示すグラフである。左から、LTBP2、V型コラーゲン（COL5A1）、III型コラーゲン（COL3A1）、I型コラーゲン（COL1A1）、フィブリリン1（FBLN1）の結果が、対照（cont）と10ng/mLのPDGF-BBによる処置のそれぞれについて示されている。 図3Aは、ヘパラナーゼ阻害剤によるLTBP2の局在変化を示す画像である。器官培養モデルにおけるLTBP2局在の変化を調べた結果が示されている。上から、対照（Cont）、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）とMMP阻害剤（CGS27023A）の組み合わせによる処置、S-173（HEI）による処置の結果が示されている。 図3Bは、ヘパラナーゼ阻害剤によるLTBP2の局在変化を示す画像である。皮膚三次元モデルにおけるLTBP2局在の変化を調べた結果が示されている。上から、対照（Cont）、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）とMMP阻害剤（CGS27023A）の組み合わせによる処置、S-173（HEI）による処置の結果が示されている。 図4Aは、ヘパラナーゼ阻害剤によるLTBP2とフィブリリン1の局在変化を示す画像である。器官培養モデルにおけるLTBP2とフィブリリン1の局在の変化を調べた結果が示されている。上から、対照（Cont）、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）とMMP阻害剤（CGS27023A）の組み合わせによる処置、S-173（HEI）による処置の結果が示されている。 図4Bは、ヘパラナーゼ阻害剤によるLTBP2とフィブリリン1の局在変化を示す画像である。皮膚三次元モデルにおけるLTBP2とフィブリリン1の局在の変化を調べた結果が示されている。上から、対照（Cont）、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）とMMP阻害剤（CGS27023A）の組み合わせによる処置、S-173（HEI）による処置の結果が示されている。 図5は、ヘパラン硫酸とLTBP2の結合について調べた結果として、LTBP2とヘパラン硫酸が濃度依存的に結合することを示すグラフである。 図6は、被験者の両頬の水分蒸散量をVapometer（デルフィン社）で3回、角層水分量をCorneometer（MPA580、Courage+Khazaka electronic GmbH）で5回、肌の弾力をCutometerで3回測定した結果を示すグラフである。 図7は、真皮乳頭層の厚みを音響顕微鏡にて測定した結果を示すグラフである。 図8は、1.5% HEIを含むクリーム製剤（Active）／含まないクリーム製剤（Placebo）の使用によるシワ面積率（％）の変化を示すグラフである。適用開始から0カ月後（0M）、1か月後（1M）、2か月後（2M）の時点の結果が示されている。
真皮弾力改善剤
　本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノン（HEI）またはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮弾力改善剤に関する。なお、本明細書においては、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノン（HEI）をS-173またはS173と表記する場合もある。
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノン（HEI）は、以下の構造を有する化合物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンの誘導体は、例えば、以下の一般式（I）で表される化合物でありうる：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 （一般式（I）中、nは1～3の整数、R1は水素原子または、水酸基で置換されてもよい炭素数1～6の炭化水素基であり、Xは－CH2－または、－N（R2）－で示される基であり、R2は水素原子または、水酸基で置換されてもよい炭素数1～6の炭化水素基を意味する。）
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンおよびその誘導体は、ヘパラナーゼ活性阻害剤として働くことが知られている（特開2014－111640（特許文献2）参照）。ヘパラナーゼは、種々の細胞に存在し、様々なヘパラン硫酸プロテオグリカンのヘパラン硫酸鎖を特異的に分解する酵素である。皮膚では、表皮を構成する表皮角化細胞および真皮の線維芽細胞、血管内皮細胞などが産生する。各種癌細胞でも産生が高まっていることが知られ、癌の悪性度との関連も示唆されている。癌細胞でヘパラナーゼの産生が高いと転移性が高く、血管新生の誘導能も高いことが知られている（Vlodavsky I., et. al., Semin Cancer Biol., 2002;12(2):121-129（非特許文献1）参照）。
　ヘパラン硫酸プロテオグリカンはヘパラン硫酸結合性増殖因子（bFGF, HGF, VEGF, HB-EGF等）を細胞外に蓄積させる働きをする。ヘパラン硫酸プロテオグリカンの1種であるパールカンは、表皮と真皮の境界部に存在する表皮基底膜にも存在し、皮膚では、ヘパラン硫酸結合性増殖因子を表皮基底膜に結合させることによって、表皮、真皮間の増殖因子の移動を制御している。また、表皮基底膜に存在するパールカンは、基底膜に結合している表皮基底細胞に対する増殖因子の作用も制御しており、表皮の良好な増殖・分化に必須であることが明らかにされている。
　また、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノン（HEI）は、MMP（matrix metalloproteinase）の阻害剤としても働くことが知られている。HEIは例えば、MMP-9を阻害するが、MMP-1およびMMP-2の活性には影響を与えない。
　実施例の欄で詳述するように、本発明者は今回、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンがヒトの肌弾力を改善させる効果を有することを見出した。肌弾力は、例えば、Cutometer(商標)などの皮膚計測機器を用いて測定することができる。
　本開示に係る真皮弾力改善剤は、別の言い方をすれば、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有する、真皮弾力改善に用いるための組成物とも表現されうる。このような組成物は、特に非治療的な美容用途に用いられうる。また、別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、真皮弾力改善における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。このような使用の際には、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体は他の成分と組み合わせた組成物の形で使用されもよい。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、真皮弾力改善剤の製造における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を対象（例えばヒト）に投与することを含む、真皮弾力改善方法に関する。
LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進剤
　本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進剤に関する。実施例の欄で詳述するように、本発明者は今回、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンがヒト線維芽細胞におけるLTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生を促進させる効果を有することを見出した。LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生量の増減は、例えば、定量PCR解析を行なうことで調べることができる。
　本開示に係るLTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進剤は、別の言い方をすれば、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有する、LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進に用いるための組成物とも表現されうる。このような組成物は、特に非治療的な美容用途に用いられうる。また、別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。このような使用の際には、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体は他の成分と組み合わせた組成物の形で使用されもよい。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進剤の製造における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を対象（例えばヒト）に投与することを含む、LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生促進方法に関する。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、LTBP2および／またはフィブリリン1の産生を増大させることを特徴とする、真皮の弾力を改善する美容方法に関する。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、LTBP2および／またはフィブリリン1の産生を増大させることを特徴とする、シワを防止または改善する美容方法に関する。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、LTBP2および／またはフィブリリン1の基底膜直下での局在を安定化させることを特徴とする、シワ（特に真皮シワ）を防止または改善する美容方法に関する。また、本願の実施例において示されるように、PDGF-BBはLTBP2、フィブリリン1の産生を促進することから、本開示に係る一実施形態は、PDGF-BBの発現を増大させることを特徴とする、シワ（特に真皮シワ）を防止または改善する美容方法にも関する。なお、本開示に係る美容方法は、非治療的な方法であり、いわゆる医療行為を含まない。
真皮乳頭層線維増大促進剤
　本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮乳頭層線維増大促進剤に関する。実施例の欄で詳述するように、本発明者は今回、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンが真皮乳頭層線維の増大を促進させる効果を有することを見出した。真皮乳頭層線維の増大は、例えば、真皮乳頭層の厚みを音響顕微鏡（例えば、本田電子株式会社製のAMS-50SI）にて測定することにより評価することができる。
　いくつかの実施形態は、真皮乳頭層線維が真皮乳頭層オキシタラン線維である、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮乳頭層線維増大促進剤に関する。
　本開示に係る真皮乳頭層線維増大促進剤は、別の言い方をすれば、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有する、真皮乳頭層線維増大促進に用いるための組成物とも表現されうる。このような組成物は、特に非治療的な美容用途に用いられうる。また、別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、真皮乳頭層線維増大促進における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。このような使用の際には、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体は他の成分と組み合わせた組成物の形で使用されもよい。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、真皮乳頭層線維増大促進剤の製造における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を対象（例えばヒト）に投与することを含む、真皮乳頭層線維増大促進方法に関する。
真皮乳頭層線維安定化剤
　本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮乳頭層線維安定化剤に関する。実施例の欄で詳述するように、本発明者は今回、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンが真皮乳頭層線維の増大を促進させる効果を有することを見出した。真皮乳頭層線維の安定化は、例えば、真皮乳頭層の厚みを音響顕微鏡（例えば、本田電子株式会社製のAMS-50SI）にて測定することにより評価することができる。
　いくつかの実施形態は、真皮乳頭層線維が真皮乳頭層オキシタラン線維である、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮乳頭層線維増大促進剤に関する。
　本開示に係る真皮乳頭層線維安定化剤は、別の言い方をすれば、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有する、真皮乳頭層線維安定化に用いるための組成物とも表現されうる。このような組成物は、特に非治療的な美容用途に用いられうる。また、別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、真皮乳頭層線維安定化における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。このような使用の際には、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体は他の成分と組み合わせた組成物の形で使用されもよい。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、真皮乳頭層線維安定化剤の製造における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を対象（例えばヒト）に投与することを含む、真皮乳頭層線維安定化方法に関する。
真皮シワ改善剤
　本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮シワ改善剤に関する。実施例の欄で詳述するように、本発明者は今回、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンがヒトの真皮シワを改善剤させる効果を有することを見出した。乾燥による小ジワは俗に表皮性のシワと言われ、一方で目尻の深いシワは真皮や脂肪層の変化を伴う深いシワと定義されている。本願に開示の技術は、表皮性の小ジワに加えて、乳頭層（乳頭層のエラスチン線維）の再生を促すことで真皮性の深いシワの改善をもなしえた点で画期的である。これまで、真皮性のシワでは、真皮のコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸などといった一般的なマトリックスの分解抑制によって改善が成される、または単純にコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸産生促進というのが当業者の間でのセオリーであった。本願に開示の技術では、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンを処置することで表皮からPDGF-BBが産生され、乳頭層のPDGFRβ陽性の線維芽細胞に作用することで、コラーゲン、エラスチンの産生を高める。一方で1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンは基底膜の分解を抑えることで良好な基底膜微細構造の再生を促進させる。このPDGF-BBによって産生促進されたマトリックスと、分解抑制によって形成された基底膜が相互作用することで、正常なマトリックスを乳頭層で構築できる点が重要なポイントとなる。なお、真皮シワの改善は、例えば、画像解析装置等を用いて評価することができる。
　本開示に係る真皮シワ改善剤は、別の言い方をすれば、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有する、真皮シワの改善に用いるための組成物とも表現されうる。このような組成物は、特に非治療的な美容用途に用いられうる。また、別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、真皮シワの改善における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。このような使用の際には、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体は他の成分と組み合わせた組成物の形で使用されもよい。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、真皮シワ改善剤の製造における1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体の使用に関する。さらに別の観点からは、本開示に係る一実施形態は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を対象（例えばヒト）に投与することを含む、真皮シワ改善方法に関する。
スクリーニング方法
　本開示に係る一実施形態は、LTBP2および／またはフィブリリン1の発現を指標とする、真皮弾力改善剤のスクリーニング方法に関する。また、本開示に係る一実施形態は、LTBP2および／またはフィブリリン1の発現を指標とする、真皮シワ改善剤のスクリーニング方法に関する。このようなスクリーニング方法は、例えば、細胞と試験化合物を接触させる工程、LTBP2および／またはフィブリリン1の発現を測定する工程、該化合物の有無によるLTBP2および／またはフィブリリン1の発現の増加の有無を決定する工程を含む。LTBP2および／またはフィブリリン1の発現の増加は、mRNA量やタンパク質量を既知の手法により測定することにより評価することができる。スクリーニングの対象となる化合物は、例えば、化合物ライブラリーや、微生物・動植物等の抽出物のライブラリーに含まれるものが使用されうる。
　また、本開示に係る一実施形態は、PDGF-BBの発現を指標とする、真皮弾力改善剤およびスクリーニング方法に関する。このようなスクリーニング方法は、例えば、細胞と試験化合物を接触させる工程、PDGF-BBの発現を測定する工程、該化合物の有無によるPDGF-BBの発現の増加の有無を決定する工程を含む。PDGF-BBの発現の増加は、mRNA量やタンパク質量を既知の手法により測定することにより評価することができる。スクリーニングの対象となる化合物は、例えば、化合物ライブラリーや、微生物・動植物等の抽出物のライブラリーに含まれるものが使用されうる。
　さらに、本開示に係る一実施形態は、PDGF-BBの発現を指標とする、真皮シワ改善剤のスクリーニング方法に関する。このようなスクリーニング方法は、例えば、細胞と試験化合物を接触させる工程、PDGF-BBの発現を測定する工程、該化合物の有無によるPDGF-BBの発現の増加の有無を決定する工程を含む。PDGF-BBの発現の増加は、mRNA量やタンパク質量を既知の手法により測定することにより評価することができる。スクリーニングの対象となる化合物は、例えば、化合物ライブラリーや、微生物・動植物等の抽出物のライブラリーに含まれるものが使用されうる。
調合
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体は、公知の方法により合成することができ、または市販品を容易に購入することができる。
　また、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体は公知の方法により無機塩または有機塩とすることができる。本開示に係る実施形態において用いられる塩としては、特に限定されないが、例えば、無機塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。有機塩としては、酢酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、p－トルエンスルホン酸塩、トリエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、アミノ酸塩等が挙げられる。
　本開示に係る剤においては、ヘパラナーゼ活性阻害効果および／またはMMP阻害効果を有する1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンおよびその誘導体、特にヘパラナーゼ活性阻害効果とMMP阻害効果（特にMMP-9阻害効果）の両効果を有するものが好適に用いられうる。本開示に係る剤は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を1種のみ単独で含んでいてもよいが、2種以上の前記化合物またはその塩を任意の組み合わせおよび比率で含んでいてもよい。
　本開示に係る剤における、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンもしくはその誘導体またはその塩の含有量は、所望の効果を有効に発揮するのに十分な量であれば特に限定されず、剤の用途に応じて適宜選択すればよい。ただし一般には、剤全体に対する1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンもしくはその誘導体またはその塩の比率を、通常0.0001質量％以上、中でも0.0001質量％以上、また、通常 5質量％以下、中でも1.5質量％以下とするのが好ましい。2種以上の1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンもしくはその誘導体またはその塩を用いる場合は、それらの合計量が上記範囲を満たすようにすればよい。
　また、本開示に係る剤は、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンもしくはその誘導体またはその塩による作用を実質的に損なわない限りにおいて、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンもしくはその誘導体またはその塩に加えて、他の任意の成分を含有していてもよい。他の成分としては、ヘパラナーゼ活性の阻害作用や他の活性（MMP阻害活性、特にMMP-9阻害活性など）を有する他の化合物（CGS27023A、BIPBIPUなど）や、医薬的に許容され得る担体および／または補助剤が挙げられる。他の成分の例は、カノコソウエキス、ユリエキス、長命草エキス、ムクロジエキス、チンピエキスなどのヘパラナーゼ阻害薬剤として働く生薬（特願2014-165586参照）、マンゴスチンエキス、ウコンエキス、（トルメンチラエキス）などのMMP阻害剤として働く生薬（特願2018-545781参照）が挙げられるが、これらに限定はされない。かかる他の成分は、1種を単独で用いてもよく、2種以上を任意の組み合わせおよび比率で用いてもよい。よって、本発明の一部の態様は、へパラナーゼ阻害活性とMMP（特にMMP-9）阻害活性を併せ持った化合物、ならびに／またはへパラナーゼ阻害剤とMMP（特にMMP-9）阻害剤との組み合わせを有効成分として含む、真皮弾力改善剤、真皮シワ改善剤、真皮乳頭層線維増大促進剤、真皮乳頭層線維安定化剤、LTBP2および／またはフィブリリン1の産生促進剤などの剤に関する。
　本開示に係る剤は、常法に従って製造することができ、また皮膚外用剤を構成する成分として、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンもしくはその誘導体またはその塩の1種または2種以上単独でも調製可能であるが、通常医薬部外品を含む化粧品や医薬品等の皮膚外用剤等に用いられる成分、例えば油分、界面活性剤、粉末、色材、水、アルコール類、増粘剤、キレート剤、シリコーン類、酸化防止剤、紫外線吸収剤、保湿剤、香料、各種薬効成分、防腐剤、pH調整剤、中和剤等が必要に応じて適宜配合されうる。
　本開示に係る剤の投与経路および剤型はいずれも限定されず、その用途に応じて適宜選択すればよい。投与経路の例としては、局所投与（皮膚外用等）、経口投与、非経口投与（静脈投与、腹腔内投与等）、等が挙げられるが、真皮再生促進剤等の本開示に係る剤として使用する場合には皮膚外用剤として使用するのが好ましい。剤型としては、局所投与（皮膚外用材）の場合、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水－油二層系、水－油－粉末三層系等を、パッチ剤、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ゲル、エアゾール等にした形態が挙げられる。経口投与の場合、錠剤、コート錠、糖衣錠、顆粒剤、散剤、カプセル剤（例えばハードまたはソフトゼラチンカプセル）等の固形製剤や、内服液剤、シロップ剤等の液体製剤（溶液、懸濁液）等の形態が挙げられる。非経口投与の場合、注射液等の形態が挙げられる。
　また、本開示に係る剤には、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンもしくはその誘導体またはその塩による作用を実質的に損なわない限りにおいて、本開示に係る1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンもしくはその誘導体またはその塩に加えて、担体および／または補助剤等の他の1種または2種以上の任意の成分を配合してもよい。他の成分は特に限定されず、医薬組成物の用途、剤型、投与形態等に応じて適宜選択すればよいが、例としては、医薬的に許容され得る担体および／または補助剤が挙げられる。補助剤としては、例えば希釈剤、結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、矯味剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤、pH調製剤等が挙げられる。
　具体例として、本開示に係る剤を皮膚外用剤とする場合、外用剤に通常用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を、必要に応じて適宜配合することができる。さらに、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属イオン封鎖剤、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン等の防腐剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンC、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のビタミンA誘導体類等も適宜配合することができる。
　上記成分は例示であり、これらに限定されるものではない。またこれら成分は、所望する形態に応じた処方に従い、適宜組み合わせて配合することが可能である。
　本開示に係る皮膚外用剤の剤型は特に限定されるものではなく、例えば、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水－油二層系、水－油－粉末三層系、軟膏、ゲル、エアゾール等の任意の剤型をとることができる。また、使用形態も特に限定されるものではなく、例えば、化粧水、乳液、クリーム、エッセンス、ゼリー、ジェル、軟膏、パック、マスク、ファンデーション等の任意の形態をとることができる。
　本開示に係る剤は肌に適用することで、真皮シワの形成の予防および／または形成された真皮シワの軽減・消失を図るための美容方法に利用できる。かかる美容方法における本開示に係る皮膚外用剤の用法、用量も特に限定されるものではなく、剤型や処置する真皮シワの状態により適宜決定されるが、典型的には、1日当たり数回、例えば1回～5回、適量、例えば1平方cm2当たり0.1mlから1ml、肌に直接すり込むか、又その適量をガーゼなどに染み込ませてから肌に貼付することができる。
　以上、本発明について具体例を挙げて説明したが、以上の具体例はあくまでも例示であり、本発明は特許請求の範囲を逸脱しない範囲において、任意の変更を加えて実施することが可能である。上記の各所で言及されている本発明の様々な特徴および実施形態は、適宜、必要な変更を加えて、他の部分の記載にも適用されうる。したがって、ある実施形態において特定されている特徴は、適宜、他の実施形態で特定されている機能と組み合わせられうる。特許、特許出願、論文、教科書、および配列アクセッション番号を含む、本明細書で引用されたすべての参考文献、およびそこに引用された参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。組み込まれた文献および同様な資料の1つまたは複数が、定義された用語、用語の使用法、説明された技法などを含むがこれらに限定されない点につき、本願と異なるか、または矛盾する場合、本願の記載が優先される。
　以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
1．材料および方法
皮膚モデルの培養
　MatTeK社から購入した皮膚三次元モデル（EFT-400）を、MMP-9阻害剤であるCGS27023A（参考文献1）（終濃度10－5M）、ヘパラナーゼ阻害剤であるBIPBIPU（参考文献2）（終濃度10－5M）、MMP-9とヘパラナーゼの両方を阻害する効果を持つ独自開発成分、1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノン（参考文献3）（以下HEI、最終濃度0.01%）を添加した専用培地（EFT400-ASY）中で培養した。対照ではこれらの阻害剤を含めないDMSO溶媒を等量加えた培地で培養を行った。2日に1回培地交換を行い、4日目、7日目に組織片を回収した。
新鮮ヒト皮膚の培養
　インフォームドコンセントを行った被験者（20代から30代）の腹部の新鮮皮膚サンプルを株式会社KACから購入取得した。参考文献4に記載の方法と同じ方法にて、取得されたサンプルに50mJ/cm2のUVBを照射し、CGS27023A（終濃度10－5M）、BIPBIPU（終濃度10－5M）、HEI（最終濃度0.01%）を含むWilliam’s E培地（Thermo Fisher Science, Waltham, MA)で培養した。対照は、CGS27023A、BIPBIPU、HEIを添加せず、DMSO溶媒を等量加えた培養培地を用いて培養した。毎日培地交換を行い、5日目に皮膚片を回収した。
パラフィンブロック、切片作成
　回収した皮膚モデル、新鮮ヒト皮膚をAMeX法に従って、冷アセトンを用いて脱水固定後、アセトン、安息香酸メチル、キシレンの順で置換し、パラフィンに包埋した。3μmの厚さで切片を作成し、組織染色用の切片を作成した。
各種免疫染色
　3μmの厚さで作成したパラフィン切片を、キシレンで脱パラフィン後、EtOHを使って水和化した。V型コラーゲンに対する抗体（Acris, AM10159PU-N, V13F6, mouse monoclonal antibody）およびサイトケラチン14（K-14）に対する抗体（Fitzgerald, 20R-CP002, guniea pig polyclonal antibody）、フィブリリン-1に対する抗体（Abcam, 11C1.3, mouse monoclonal antibody）、α6インテグリンに対する抗体（Santa Cruz, GOH-3, sc-19622, rat monoclonal antibody）、LTBP2に対する抗体（Protein-tech Group, 17708-1-AP, rabbit polyclonal antibody）を用いて蛍光免疫染色を行った。
PDGFB（PDGF-BB）の遺伝子発現
　回収した皮膚モデルの表皮のみをピンセットで剥がして、ジルコニアボールを入れた1mL Trizol溶液に表皮を入れて、組織破砕機にて3分振動させ表皮を破砕した。クロロホルム、イソプロパノールを用いてRNAを抽出し、RNeasy mini kit（QIAGEN）を用いてRNAを精製し、NanoDropにてRNA濃度を測定後、SuperScript VILO(Invitrogen)を用いてcDNAを合成した。その後合成したcDNAを用いて、platinum SYBER green（invitrogen）を用いて定量PCR解析を行った。使用した遺伝子のプライマーを表1に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
LTBP2の遺伝子発現
　インフォームドコンセントを行った被験者（20～30代、50代～60代）腹部皮膚由来の線維芽細胞を株式会社KACから購入取得した。10%血清を含むDMEM培地にて培養した。6well plateに25万細胞/wellで播種し、2日後にRNeasy mini kit（QUIAGEN）を用いてmRNAを抽出、SuperScript VILO（invitrogen）を用いてcDNAを合成した。その後合成したcDNAを用いて、platinum SYBER green（invitrogen）を用いて定量PCR解析を行った。使用した遺伝子のプライマーを表2に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
LTBP2とヘパラン硫酸の結合アッセイ
　生化学工業から購入したヘパラン硫酸を次亜ヨウ素酸ナトリウムにて開環反応させ、カルボバインドプレート（コーニング）に添加することで、ヘパラン硫酸を固相化した（ビオチン化ヘパラン硫酸をプレートへ固相化する方法については、参考文献5に記載された方法と同じ方法で実施）。このヘパラン硫酸プレートに各種濃度のrecombinant human LTBP2（abcam）を添加し、室温で2時間反応させた。PBSで3回洗浄後、HRP標識-anti-LTBP2抗体を添加、室温で2時間反応させた後にPBSで3回洗浄を行った。TMBで発色反応後1N HClで反応を停止させ、OD475nmを測定することで、結合LTBP2量を算出した。
PDGF-BBを作用させた線維芽細胞の遺伝子発現解析
　インフォームドコンセントを行った被験者（14カ月）の線維芽細胞を株式会社KACから購入取得した。10%血清を含むDMEM培地にて培養した。6well plateに25万細胞/wellで播種し、1日後に、10ng/mLのrecombinant human PDGF-BB (R&D sysytems社)を添加し、1日後にRNeasy mini kit（QUIAGEN）を用いてmRNAを抽出、SuperScript VILO（invitrogen）を用いてcDNAを合成した。その後合成したcDNAを用いて、platinum SYBER green（invitrogen）を用いて定量PCR解析を行った。使用した遺伝子のプライマーを表3に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
肌弾力に関する効果検証のヒト試験
　30代～50代の健常な日本人女性30名に、1.5% HEIを含む美容液／含まない美容液を半顔で4週間使用していただいた。適用開始から0週後、2週後、4週後に試験施設まで来ていただき、恒温恒湿室にて順化頂いた後に、両頬の水分蒸散量をVapometer（デルフィン社）で3回、角層水分量をCorneometer（MPA580、Courage+Khazaka electronic GmbH）で5回、肌の弾力をCutometerで3回、真皮乳頭層の厚みを音響顕微鏡AMS-50SI（本田電子株式会社）にて測定した。
シワ改善に関する効果検証のヒト試験
　30代～50代の健常な日本人女性34名に、1.5% HEIを含むクリーム製剤／含まないクリーム製剤を目尻に0.1mLずつ、1日2回、2カ月間使用していただいた。適用開始から0カ月後、1か月後、2か月後に試験施設まで来ていただき、恒温恒湿室にて順化頂いた後に、レプリカ剤（SILFLO（Flexico、England））を外眼角から外側に一辺4cmの円形に塗布してレプリカを採取した。取得したレプリカを反射用レプリカ解析システムASA-03RXDおよび反射型三次元皮膚解析ソフトを用いて、外眼角から顔の外側に5mm離れた点を基点として1辺10mmの正方形を解析領域として、シワ面積率（％）を算出した。0カ月、1か月、2か月の左右のシワ面積率（％）を算出した後、割付表に基づき、アクティブ、プラセボに分け、アクティブ、プラセボの使用前（0カ月）、1か月後、2か月後の測定値を比較した。
2．結果および考察
ヘパラナーゼ阻害剤とMMP阻害剤によるPDGF-BB産生促進
　人工皮膚モデル（皮膚三次元モデル）の表皮におけるPDGFB遺伝子発現量を定量PCR解析にて調べた結果を図1に示す。図1の結果は、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）とMMP阻害剤（CGS27023A）による処置により、PDGFBの産生量が増加することを示している。
PDGF-BBによる線維芽細胞の遺伝子発現変化
　ヘパラナーゼ阻害剤とMMP阻害剤を処置することで表皮中のPDGFB遺伝子量が増加したことから、表皮中でPDGF-BBタンパク質量が増加したと推察される。PDGF-BBは基底膜を通過して真皮の線維芽細胞へ作用することから、PDGF-BBが線維芽細胞に与える影響を次に検討した。これまでに、PDGF-BBを線維芽細胞に作用させると、V型コラーゲンの産生が亢進することを明らかにしているが、エラスチン線維形成に関わるフィブリリン1やLTBP2の発現に与える影響は明らかになっていない。そこで、PDGF-BBを線維芽細胞に作用させ、フィブリリンやLTBP2の遺伝子発現に与える影響を調べた結果を図2に示す。図2の結果は、PDGF-BBがLTBP2、フィブリリン1の産生も促進することを示している。
ヘパラナーゼ阻害剤によるLTBP2局在変化
　上記結果から、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）とMMP阻害剤（CGS27023A）を同時に作用させた場合、もしくはヘパラナーゼとMMPの両方の酵素活性を同時に阻害する効果を持つ阻害剤HEIを作用させた場合、表皮中のPDGF-BB量が増加し、真皮乳頭層の線維芽細胞のフィブリリン、LTBP2の産生量が高まる可能性が考えられる。またヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU、HEI）を作用させることで、基底膜成分パールカンのヘパラン硫酸鎖の分解が抑制され、ヘパラン硫酸結合ドメインを持つLTBP2が基底膜と接着する仮説が考えられた。そこで、器官培養ヒト皮膚モデルと皮膚三次元モデルにおけるLTBP2局在の変化を調べた結果を図3Ａおよび３Ｂに示す。図3Ａおよび３Ｂの結果は、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）、MMP阻害剤（CGS27023A）、MMPとヘパラナーゼの両酵素の阻害効果を持つ化合物（HEI）による処置により、LTBP2の産生量が高まり、ヘパラン硫酸に結合することで、基底膜に安定的に局在できることを示している。
ヘパラナーゼ阻害剤によるLTBP2/Fibrillin-1局在変化
　器官培養ヒト皮膚モデルと皮膚三次元モデルにおけるフィブリリン1とLTBP2局在の変化を調べた結果を図4Ａおよび４Ｂに示す。図4Ａおよび４Ｂの結果は、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU）、MMP阻害剤（CGS27023A）、もしくはヘパラナーゼとMMPの両酵素を阻害する化合物（HEI）による処置により、LTBP2を介してフィブリリン1が基底膜直下に安定的に局在できることを示している。また、この結果は、ヘパラナーゼ阻害剤（BIPBIPU、HEI）による処置が、真皮乳頭層オキシタラン線維に影響を及ぼすことを示している。
ヘパラン硫酸とLTBP2の結合
　ヘパラン硫酸とLTBP2の結合について、ヘパラン硫酸を固相化したプレートを用いて調べた結果を図5に示す。図5の結果は、LTBP2とヘパラン硫酸が濃度依存的に結合することを示している。
肌弾力に関する効果検証のヒト試験
　30代～50代の健常な日本人女性30名に、1.5% HEIを含む美容液／含まない美容液を半顔で4週間使用していただいた。適用開始から0週後、2週後、4週後に試験施設まで来ていただき、恒温恒湿室にて順化頂いた後に、両頬の水分蒸散量をVapometer（デルフィン社）で3回、角層水分量をCorneometer（MPA580、Courage+Khazaka electronic GmbH）で5回、肌の弾力をCutometerで3回測定した。結果を図6に示す。図6の結果は、ヘパラナーゼとMMPの両酵素の活性を阻害する化合物HEIを1.5％含む美容液の処置により、真皮の弾力が改善することを示している。また、真皮乳頭層の厚みを音響顕微鏡AMS-50SI（本田電子株式会社）にて測定した。結果を図7に示す。図7の結果は、HEIによる処置により、真皮乳頭層線維の増大が促進され、真皮乳頭層線維が安定化することを示している。
シワ改善に関する効果検証のヒト試験
　30代～50代の健常な日本人女性34名に、1.5% HEIを含むクリーム製剤（アクティブ）／含まないクリーム製剤（プラセボ）を目尻に使用頂き、レプリカを採取し、シワ面積率（％）を算出した。結果を図8に示す。図8の結果は、HEIを含むアクティブ製剤と処置により、シワ面積率（％）が有意に低下していたことを示す。一方、プラセボ製剤を処置した群では変化が見られなかった。アクティブ側では使用前後で減少が確認されたことから、マンホイットニーU検定を行ったところ、アクティブ側のシワ面積率（％）は使用前後で有意に減少が確認された。
参考文献
1) Pan W, Miao HQ, Xu YJ, Navarro EC, Tonra JR, Corcoran E, et al. 1-[4-(1H-Benzoimidazol-2-yl)-phenyl]-3-[4-(1H-benzoimidazol-2-yl)-phenyl]- urea derivatives as small molecule heparanase inhibitors. Bioorganic & medicinal chemistry letters. 2006;16(2):409-12.
2) MacPherson LJ, Bayburt EK, Capparelli MP, Carroll BJ, Goldstein R, Justice MR, et al. Discovery of CGS 27023A, a non-peptidic, potent, and orally active stromelysin inhibitor that blocks cartilage degradation in rabbits. Journal of medicinal chemistry. 1997;40(16):2525-32.
3) Iriyama S, Yamanishi H, Kunizawa N, Hirao T, Amano S. 1-(2-Hydroxyethyl)-2-imidazolidinone, a heparanase and matrix metalloproteinase inhibitor, improves epidermal basement membrane structure and epidermal barrier function. Experimental dermatology. 2019;28(3):247-53.
4) Iriyama S, Yasuda M, Nishikawa S, Takai E, Hosoi J, Amano S. Decrease of laminin-511 in the basement membrane due to photoaging reduces epidermal stem/progenitor cells. Scientific reports. 2020;10(1):12592.
5) Farhad Behzad, Paul E C Brenchley. A multiwell format assay for heparinase. Anal Biochem. 2003 Sep 15;320(2):207-13.
　本開示に係る剤は、PDGF-BB、LTBP2および／もしくはフィブリリン1の産生を促進することにより、真皮乳頭層線維を増大および／もしくは安定化させることから、真皮弾力および／もしくは真皮シワの改善に有効な化粧品などの美容用組成物として好適に使用することができる。
 

Claims (15)

　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮弾力改善剤。
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮シワ改善剤。
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮乳頭層線維増大促進剤。
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、真皮乳頭層線維安定化剤。
　真皮乳頭層線維が、真皮乳頭層オキシタラン線維である請求項3または4に記載の剤。
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、LTBP2および／またはフィブリリン1の産生促進剤。
　1-(2-ヒドロキシエチル)-2-イミダゾリジノンまたはその誘導体が、下記一般式（I）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
 （一般式（I）中、nは1～3の整数、R1は水素原子または、水酸基で置換されてもよい炭素数1～6の炭化水素基であり、Xは－CH2－または、－N（R2）－で示される基であり、R2は水素原子または、水酸基で置換されてもよい炭素数1～6の炭化水素基を意味する。）
で示される環状カルボキサミド誘導体である、請求項1～6のいずれか一項に記載の剤。
　LTBP2および／またはフィブリリン1の産生を増大させることを特徴とする、真皮の弾力を改善する美容方法。
　LTBP2および／またはフィブリリン1の産生を増大させることを特徴とする、シワを防止または改善する美容方法。
　LTBP2および／またはフィブリリン1の局在安定化を特徴とする、シワを防止または改善する美容方法。
　LTBP2および／またはフィブリリン1の発現を指標とする、真皮弾力改善剤のスクリーニング方法。
　LTBP2および／またはフィブリリン1の発現を指標とする、真皮シワ改善剤のスクリーニング方法。
　PDGF-BBの発現を増大させることを特徴とする、シワを防止または改善する美容方法。
　PDGF-BBの発現を指標とする、真皮弾力改善剤のスクリーニング方法。
　PDGF-BBの発現を指標とする、真皮シワ改善剤のスクリーニング方法。
 

 
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024095793A1 (ja) * 2022-11-02 2024-05-10 株式会社 資生堂 組成物

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008303186A (ja) * 2007-06-08 2008-12-18 Shiseido Co Ltd コーニファイドエンベロープ形成・成熟化促進剤
JP2014043400A (ja) * 2012-08-24 2014-03-13 Naris Cosmetics Co Ltd しわ改善剤
JP2014111640A (ja) * 2009-09-30 2014-06-19 Shiseido Co Ltd ヘパラナーゼ活性阻害剤
US20150110755A1 (en) * 2005-05-17 2015-04-23 Human Matrix Sciences, Llc Elastin producing fibroblast formulations and methods of using the same
JP2017043575A (ja) * 2015-08-28 2017-03-02 北海道三井化学株式会社 皮膚外用剤
WO2018074606A1 (ja) * 2016-10-21 2018-04-26 株式会社資生堂 ラミニン５１１産生促進剤、表皮基底膜安定化剤及び／又は表皮幹細胞減少抑制又は増加促進剤のスクリーニング方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150110755A1 (en) * 2005-05-17 2015-04-23 Human Matrix Sciences, Llc Elastin producing fibroblast formulations and methods of using the same
JP2008303186A (ja) * 2007-06-08 2008-12-18 Shiseido Co Ltd コーニファイドエンベロープ形成・成熟化促進剤
JP2014111640A (ja) * 2009-09-30 2014-06-19 Shiseido Co Ltd ヘパラナーゼ活性阻害剤
JP2014043400A (ja) * 2012-08-24 2014-03-13 Naris Cosmetics Co Ltd しわ改善剤
JP2017043575A (ja) * 2015-08-28 2017-03-02 北海道三井化学株式会社 皮膚外用剤
WO2018074606A1 (ja) * 2016-10-21 2018-04-26 株式会社資生堂 ラミニン５１１産生促進剤、表皮基底膜安定化剤及び／又は表皮幹細胞減少抑制又は増加促進剤のスクリーニング方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DANNO, KIICHIRO: "Photoaging and wrinkles", FRAGRANCE JOURNAL, no. 4, 1 January 1998 (1998-01-01), JP , pages 11 - 17, XP009537595, ISSN: 0288-9803 *
HIRAO, TETSUJI: "Establishment and application of a non-invasive evaluation method of cornified envelope maturity in the stratum corneum", FRAGRANCE JOURNAL, no. 9, 1 January 2002 (2002-01-01), JP , pages 46 - 53, XP009537596, ISSN: 0288-9803 *
SHUNSUKE IRIYAMA, HARUYO YAMANISHI, NAOMI KUNIZAWA, TETSUJI HIRAO, SATOSHI AMANO: "1-(2-Hydroxyethyl)-2-imidazolidinone, a heparanase and matrix metalloproteinase inhibitor, improves epidermal basement membrane structure and epidermal barrier function", EXPERIMENTAL DERMATOLOGY, BLACKWELL MUNSGAARD, COPENHAGEN; DK, vol. 28, no. 3, 1 March 2019 (2019-03-01), COPENHAGEN; DK , pages 247 - 253, XP055688084, ISSN: 0906-6705, DOI: 10.1111/exd.13876 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024095793A1 (ja) * 2022-11-02 2024-05-10 株式会社 資生堂 組成物

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