WO2022111700A1 - 哒嗪酮衍生物及其在医药上的应用 - Google Patents

哒嗪酮衍生物及其在医药上的应用 Download PDF

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WO2022111700A1
WO2022111700A1 PCT/CN2021/134103 CN2021134103W WO2022111700A1 WO 2022111700 A1 WO2022111700 A1 WO 2022111700A1 CN 2021134103 W CN2021134103 W CN 2021134103W WO 2022111700 A1 WO2022111700 A1 WO 2022111700A1
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WO
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compound
pharmaceutically acceptable
stereoisomer
acceptable salt
trifluoromethyl
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PCT/CN2021/134103
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魏用刚
朱钰沁
楚洪柱
孙毅
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成都百裕制药股份有限公司
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
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    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings

Definitions

  • the present invention relates to pyridazinone derivatives or their stereoisomers or pharmaceutically acceptable salts and their use in medicine.
  • ADP-ribosylation is a post-transcriptional modification of proteins that inserts single or multiple adenosine diphosphate ribose (ADP-ribose) groups into amino acid residues in proteins.
  • ADP-ribosylation is a reversible process involving physiological regulation such as cell signal transduction, DNA damage repair, transcription, gene expression regulation and apoptosis.
  • ADP-ribose is derived from a redox cofactor: nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+), and the enzyme that mediates the intercalation of ADP ribose is ADP-ribosylase.
  • N-glycosidic bond of NAD+ linking the ADP-ribose molecule and the nicotinamide group is cleaved, which is then captured to form a bond with the corresponding amino acid residue of the target protein.
  • ADP-ribosylases can perform two types of modifications: mono-ADP ribosylation and poly-ADP ribosylation. When DNA is damaged or cells are stressed by stress, PARP is activated, resulting in an increase in the amount of poly ADP-ribose and a decrease in the amount of NAD+.
  • PARP1 has been thought to be the only poly-ADP-ribose polymerase in mammalian cells, and thus the enzyme is the most studied.
  • MonoPARP occupies the majority of the PARP family and mediates important biological functions and various stress responses, such as: unfolded protein responses, NF- ⁇ B signaling, antiviral responses, and cytokine signaling.
  • TCDD 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin
  • PARP-7 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin
  • TCDD 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin
  • PARP-7 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin
  • PARP-7 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin
  • PARP-7 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo
  • AHR a ligand-activated transcription factor that mediates the toxic activities of many environmental heterologous organisms.
  • AHR up-regulates the expression of PARP-7, and PARP-7 interacts with the kinase TBK1 and ADP-ribosylates it, resulting in the inhibition of TBK1 activity and the down-regulation of IFN-I (type I interferon) response, which in turn leads to the body's antiviral and tumor immune responses are suppressed.
  • One or more embodiments of the present application aim to provide novel PARP inhibitors.
  • One or more embodiments of the present application aim to provide novel PARP-7 inhibitors.
  • One or more embodiments of the present application provide a compound of general formula (I), or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • R, R', R" are each independently H or C 1-6 alkyl
  • R and R' or R and R" form a 4- to 8-membered heterocycloalkyl with the attached atom;
  • R 1 and R 2 are each independently H or C 1-6 alkyl
  • L is a bond or NH
  • C 1 is 6-membered, 7-membered or 8-membered heterocyclyl
  • R 3 and R 4 are each independently H, halogen or C 1-6 alkyl, wherein the C 1-6 alkyl is optionally further substituted by 1 or more substituents selected from OH or CN;
  • C is a 6-membered heteroaryl optionally further substituted with 1 or more substituents selected from CN or C 1-6 alkyl optionally substituted with 1 or more halogens ;
  • C 2 is C 3-6 carbocycle
  • R 5 is each independently H, halogen, CN or OH;
  • n 1 or 2;
  • n 0, 1, 2, 3, 4 or 5.
  • C 1 is a 6-, 7-, or 8-membered heterocyclyl group containing 1, 2, or 3 N atoms.
  • C 1 is
  • C is a 6-membered heteroaryl containing 1, 2, or 3 N atoms, optionally further selected by 1 or more from CN or any Substituents optionally substituted with 1 or more halogen-substituted C1-6 alkyl groups.
  • C is It is optionally further substituted with 1 or more substituents selected from CN or C1-6 alkyl optionally substituted with 1 or more halogens.
  • the heterocycloalkyl group is a 4-, 5-, or 6-membered heterocycloalkyl group containing 1 N atom.
  • R is H.
  • R', R" are each independently H or C 1-6 alkyl
  • R 1 and R 2 are H.
  • L is a bond
  • C 1 is
  • R 3 , R 4 are each independently halogen or C 1-6 alkyl, wherein the C 1-6 alkyl is optionally further substituted with 1 or more OH.
  • C is
  • C2 is a C3 carbocycle.
  • R 5 is halogen
  • n is 2.
  • m is zero.
  • One or more embodiments of the present application provide a compound of general formula (II), or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H or C 1-6 alkyl
  • R 3 and R 4 are each independently selected from H, halogen or C 1-6 alkyl, wherein the C 1-6 alkyl is optionally further substituted by 1 or more substituents selected from OH or CN;
  • R 5 is each independently selected from H, halogen, CN or OH;
  • L is a bond or -NH-
  • C 2 is C 3-5 carbocycle
  • n 1 or 2;
  • n 0, 1, 2, 3, 4 or 5.
  • R 1 and R 2 are H.
  • L is a bond
  • R 3 , R 4 are each independently halogen or C 1-6 alkyl, wherein the C 1-6 alkyl is optionally further substituted with 1 or more OH.
  • C2 is a C3 carbocycle.
  • R 5 is halogen
  • n is 2.
  • m is zero.
  • One or more embodiments of the present application provide a compound, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, selected from the following structures:
  • One or more embodiments of the present application provide intermediate compounds or stereoisomers or pharmaceutically acceptable salts thereof for the preparation of compounds of general formula (I), (II) or stereoisomers or pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • R, R', R" are each independently H or C 1-6 alkyl
  • R and R' or R and R" form a 4- to 8-membered heterocycloalkyl with the attached atom;
  • R 1 and R 2 are each independently H or C 1-6 alkyl
  • L is a bond or NH
  • C 1 is a 6- to 8-membered heterocyclyl
  • R 3 and R 4 are each independently H, halogen or C 1-6 alkyl, wherein the C 1-6 alkyl is optionally further substituted by 1 or more substituents selected from OH or CN;
  • C is a 6-membered heteroaryl group, which is optionally further substituted with 1 or more substituents selected from CN or C 1-6 alkyl groups, which are optionally is further substituted by 1 or more halogens;
  • C 2 is C 3-6 carbocycle
  • R 5 is each independently H, halogen, CN or OH;
  • C 3 is a 6- to 8-membered heterocyclyl
  • X 1 is H or NH 2 ;
  • n 1 or 2;
  • n 0, 1, 2, 3, 4 or 5.
  • the heterocycloalkyl group is a 4-, 5-, or 6-membered heterocycloalkyl group containing 1 N atom.
  • C 1 is a 6-, 7-, or 8-membered heterocyclyl group containing 1, 2, or 3 N atoms.
  • C is a 6-membered heteroaryl group containing 1, 2, or 3 N atoms.
  • C 1 is
  • C is It is optionally further substituted with 1 or more substituents selected from CN or C1-6 alkyl optionally further substituted with 1 or more halogen.
  • C3 is
  • the intermediate compound, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof has the following structure, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • One or more embodiments of the present application provide the use of the compounds of the present application, or stereoisomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, or the pharmaceutical compositions of the present application, in the preparation of antitumor drugs.
  • the tumor formation is associated with PARP.
  • the PARP is PARP-7.
  • One or more embodiments of the present application provide the use of a compound of the present application, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition of the present application, in the preparation of a PARP inhibitor.
  • the PARP is PARP-7.
  • One or more embodiments of the present application provide a compound of the present application, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition of the present application, for use as a medicament.
  • One or more embodiments of the present application provide a compound of the present application, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition of the present application, for use in a method of treating a tumor.
  • the tumor formation is associated with PARP.
  • the PARP is PARP-7.
  • One or more embodiments of the present application provide a compound of the present application, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition of the present application, for use as a PARP inhibitor, eg, a PARP-7 inhibitor.
  • a PARP inhibitor eg, a PARP-7 inhibitor.
  • One or more embodiments of the present application provide methods of treating tumors comprising administering a compound of the present application, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition of the present application to a subject in need thereof.
  • One or more embodiments of the present application provide methods of inhibiting PARP, comprising administering a compound of the present application, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition of the present application.
  • the PARP is PARP-7.
  • the carbon, hydrogen, oxygen, sulfur, nitrogen or F, Cl, Br, I involved in the groups and compounds of the present invention all include their isotopic conditions, and the carbons involved in the groups and compounds of the present invention , hydrogen, oxygen, sulfur or nitrogen are optionally further replaced by one or more of their corresponding isotopes, wherein isotopes of carbon include 12 C, 13 C and 14 C, and isotopes of hydrogen include protium (H), deuterium (D, Also known as heavy hydrogen), tritium (T, also known as super-heavy hydrogen), the isotopes of oxygen include 16 O, 17 O and 18 O, the isotopes of sulfur include 32 S, 33 S, 34 S and 36 S, and the isotopes of nitrogen include 14 N and 15 N, fluorine isotopes include 17 F and 19 F, chlorine isotopes include 35 Cl and 37 Cl, and bromine isotopes include 79 Br and 81 Br.
  • isotopes of carbon include 12 C, 13 C
  • Alkyl means 1 to 20 carbon atoms (eg 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 carbon atoms) linear or branched saturated aliphatic hydrocarbon group, preferably an alkyl group of 1 to 8 carbon atoms, more preferably an alkyl group of 1 to 6 carbon atoms, still more preferably 1 to 4 carbon atoms Alkyl of carbon atoms.
  • Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, neobutyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, n-hexyl and various branched chain isomers thereof; when the alkyl group is substituted, it can be optionally further substituted by one or more substituents.
  • Aryl means a substituted or unsubstituted aromatic ring, which may be a 5- to 8-membered (eg, 5, 6, 7, 8) , 8, 9, 10, 11, 12 membered) bicyclic ring or 10 to 15 membered (eg 10, 11, 12, 13, 14, 15 membered) tricyclic ring system, which may be a bridged ring or a spiro ring, non-limiting implementation Examples include phenyl, naphthyl. The aryl group may optionally be further substituted with one or more substituents.
  • Heteroaryl refers to a substituted or unsubstituted aromatic ring, which may be a 5 to 8 membered (eg 5, 6, 7, 8 membered) monocyclic, 5 to 12 membered (eg 8, 9, 10, 11, 12 membered) bicyclic ring or 10 to 15 membered (eg 10, 11, 12, 13, 14, 15 membered) tricyclic ring system, including 1 to 6 (eg 1, 2, 3, 4, 5, 6) heteroatoms selected from N, O or S, preferably a 3- to 8-membered (eg 3, 4, 5, 6, 7, 8-membered) heterocyclic group, the ring selectivity of the heterocyclic group Substituted N, S can be oxidized to various oxidation states.
  • N, S can be oxidized to various oxidation states.
  • the heterocyclyl group can be attached to a heteroatom or a carbon atom, the heterocyclyl group can be a bridged ring or a spirocyclic ring, non-limiting examples include cyclopyridyl, furyl, thienyl, pyranyl, pyrrolyl, pyrimidinyl, Pyrazinyl, pyridazinyl, imidazolyl, piperidinylbenzimidazolyl, benzopyridyl, pyrrolopyridyl.
  • a heteroaryl group When a heteroaryl group is substituted, it may be optionally further substituted with one or more substituents.
  • Heterocyclyl or “heterocycle” refers to a saturated or unsaturated heteroaromatic ring or a non-heteroaromatic ring, and when selected from a heteroaromatic ring, its definition is the same as the definition of "heteroaryl"above; when selected from a non-heteroaromatic ring
  • an aromatic ring it may be a 3- to 10-membered (eg 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-membered) monocyclic, 4- to 12-membered (eg 9, 10, 11, 12 membered) bicyclic or 10 to 15 membered (e.g. 10, 11, 12, 13, 14, 15 membered) tricyclic ring systems, including 1 to 4 (e.g.
  • heterocyclyl is a heteroatom selected from N, O or S, preferably a 3- to 8-membered heterocyclic group.
  • the selectively substituted N and S in the ring of "heterocyclyl” or “heterocycle” can be oxidized to various oxidation states; “heterocyclyl” or “heterocycle” can be attached to a heteroatom or a carbon atom; ""Heterocyclyl” or “heterocycle” may be bridged or spirocyclic.
  • heterocyclyl or “heterocycle” include oxiranyl, glycidyl, azetidinyl, oxetanyl, azetidinyl, thietanyl , 1,3-dioxolanyl, 1,4-dioxolanyl, 1,3-dioxanyl, azepanyl, oxepanyl, thiepanyl, oxygen Azazelyl, diazepine, thiazepinyl, pyridyl, piperidinyl, homopiperidinyl, furanyl, thienyl, pyranyl, N-alkylpyrrolyl, pyrimidinyl, pyridyl Azinyl, pyridazinyl, piperazinyl, homopiperazinyl, imidazolyl, piperidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl
  • Heterocycloalkyl refers to a substituted or unsubstituted saturated non-aromatic ring group which may be (eg 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 membered) bicyclic or 10 to 15 membered (eg 10, 11, 12, 13, 14, 15 membered) tricyclic ring systems, including 1, 2 or 3 heteroatoms selected from N, O or S, eg 3 to 8 membered heterocyclyl.
  • heterocycloalkyl can be oxidized to various oxidation states; "heterocycloalkyl” can be attached to a heteroatom or carbon atom; “heterocycloalkyl” can be a bridge ring or spiro.
  • heterocycloalkyl include oxiranyl, azetidinyl, oxetanyl, azetidinyl, 1,3-dioxolanyl, 1,4-dioxetanyl Oxolanyl, 1,3-dioxanyl, azepanyl, piperidinyl, piperidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, 1,3-dithianyl, tetrahydrofuranyl , tetrahydropyrrolyl, tetrahydroimidazolyl, tetrahydrothiazolyl, tetrahydropyranyl, azabicyclo[3.2.1]octyl, azabicyclo[5.2.0]nonyl, oxa Tricyclo[5.3.1.1]dodecyl, azaadamantyl and oxaspiro[3.3]heptyl.
  • Carbocyclyl or “carbocycle” refers to a saturated or unsaturated aromatic or non-aromatic ring. When selected from aromatic rings, it is as defined above for "aryl”; when selected from non-aromatic rings, it may be a 3- to 10-membered monocyclic, 4- to 12-membered bicyclic, or 10- to 15-membered tricyclic ring system , can be bridged or spiro, non-limiting examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, 1-cyclopentyl-1-enyl, 1-cyclopentyl-2-enyl, 1 -Cyclopentyl-3-enyl, cyclohexyl, 1-cyclohexyl-2-enyl, 1-cyclohexyl-3-enyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cyclooctyl base, cyclonon
  • “Pharmaceutical composition” refers to a mixture of one or more of the compounds of the present invention, pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof and other active ingredients, wherein “other active ingredients” refers to pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof. acceptable carriers, excipients and/or one or more other therapeutic agents.
  • Carrier refers to a material that is not appreciably irritating to the organism and that does not abrogate the biological activity and properties of the administered compound.
  • Excipient refers to an inert substance added to a pharmaceutical composition to facilitate administration of a compound.
  • Non-limiting examples include calcium carbonate, calcium phosphate, sugars, starches, cellulose derivatives (including microcrystalline cellulose), gelatin, vegetable oils, polyethylene glycols, diluents, granulating agents, lubricants, binding agents agent and disintegrant.
  • Steps refer to isomers resulting from different arrangements of atoms in a molecule in space, including cis-trans isomers, enantiomers and conformational isomers.
  • “Pharmaceutically acceptable salt” or “a pharmaceutically acceptable salt thereof” means that a compound of the present invention retains the biological effectiveness and properties of a free acid or free base that is treated with a non-toxic inorganic base or Organic bases, said free bases are salts obtained by reacting with non-toxic inorganic or organic acids.
  • heterocyclyl optionally substituted with an alkyl group means that the alkyl group may, but need not, be present, and the description includes instances where the heterocyclyl group is substituted with an alkyl group, as well as where the heterocyclyl group is not substituted with an alkyl group happening.
  • reaction solution was slowly poured into 1.0 L of ice-water mixture to quench, and extracted with 2 ⁇ 500 mL of dichloromethane. The organic layers were combined and concentrated. The solid was washed with methanol (500 mL ⁇ 2) to obtain compound 1b as a yellow solid (48.4 g, yield 66%).
  • reaction mixture was allowed to warm to ambient temperature and stirred for 4 h.
  • reaction was quenched with 10 mL of saturated ammonium chloride solution.
  • the reaction mixture was extracted with 3 x 120 mL of ethyl acetate. The organic layers were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated in vacuo to obtain crude product 3a, 6.4 g of yellow oil.
  • the crude product 3a was used directly in the next reaction without further purification.
  • intermediate 4 was prepared as a white solid, and intermediate 4 could be directly used in the next reaction without further purification.
  • intermediate 5 was prepared as a white solid, and intermediate 5 was directly used in the next reaction without further purification.
  • intermediate 6c was prepared as a white solid (770 mg, yield 87%).
  • intermediate 6 was prepared as a white solid, and intermediate 6 was directly used in the next reaction without further purification.
  • intermediate 7 was prepared as a white solid; intermediate 7 can be directly used in the next reaction without further purification.
  • intermediate 8 was prepared as a white solid (1.8 g, yield 70%).
  • 1,1'-binaphthyl-2,2'-bisdiphenylphosphine (124.5 mg, 0.2 mmol, 0.1 equiv)
  • tris(dibenzylideneacetone)dipalladium(0):1,1 '-Binaphthalene-2,2'-bisdiphenylphosphine 91.6 mg, 0.1 mmol, 0.05 equiv)
  • tetrahydrofuran 2.0 ml
  • reaction solution was cooled to room temperature and diluted with ethyl acetate and saturated ammonium chloride solution.
  • the reaction mixture was extracted with 3 x 60 mL of ethyl acetate.
  • compound 11b was prepared as a white solid (1.2 g, yield 83%).
  • reaction solution was cooled to room temperature, 30 mL of ethyl acetate and 30 mL of water were added, and the mixture was stirred for 30 min.
  • intermediate 13 was prepared as a white solid. Intermediate 13 was used directly in the next reaction without further purification.
  • intermediate 17 was prepared as a white solid. Intermediate 17 was used directly in the next reaction without further purification.
  • intermediate 20 was prepared as a white solid (800 mg, yield 97%).
  • intermediate 21 was prepared as a white solid. Intermediate 21 was used directly in the next reaction without further purification.
  • intermediate 22 was prepared as a white solid. Intermediate 22 was used directly in the next reaction without further purification.
  • intermediate 23a (130 mg, 0.45 mmol, 1.0 equiv) was weighed and dissolved in anhydrous N,N-dimethylformamide (4 mL). Under nitrogen protection, sodium hydride (54 mg, 1.35 mmol, 3.0 equiv) was added in portions at 0 °C, and the addition was completed, and stirring was continued at this temperature for 10 min.
  • intermediate 24 was prepared as a white solid. Intermediate 24 was used directly in the next reaction without further purification.
  • intermediate 1 (303 mg, 0.979 mmol, 1.0 equiv)
  • intermediate 2 200 mg, 0.979 mmol, 1.0 equiv
  • N,N,N',N'-tetramethyl-O-(7-aza Benzotriazol-1-yl)urea hexafluorophosphate (372 mg, 0.979 mmol, 1.0 equiv) was dissolved in N,N-dimethylformamide (4.0 mL) in a 10 mL reaction flask.
  • compound 2 was prepared as a white solid (157 mg, yield 34%).
  • compound 3 was prepared as a white solid (70 mg, yield 42%).
  • compound 4 was prepared as a white solid (70 mg, yield 26%).
  • compound 5 was prepared as a white solid (280 mg, yield 53%).
  • compound 6 was prepared as a white solid (60 mg, yield 82%).
  • compound 7 was prepared as a white solid (16 mg, yield 6%).
  • compound 8 was prepared as a white solid (40 mg, yield 25%).
  • compound 9 was prepared as a white solid (76 mg, yield 50%).
  • compound 10A was prepared as a white solid product (200 mg, yield 63%).
  • compound 11B was prepared as a white solid (320 mg, 97%).
  • compound 12 was prepared as a white solid (98 mg, yield 34%).
  • compound 13 was prepared as a white solid (98 mg, yield 34%).
  • compound 14 was prepared as a white solid (51 mg, yield 46%).
  • compound 15 was prepared as a white solid (270 mg, yield 44%).
  • compound 16 was prepared as a white solid (128 mg, yield 20%).
  • compound 18 was prepared as a white solid (40 mg, yield 50%).
  • compound 19 was prepared as a white solid (80 mg, yield 31%).
  • compound 20B was prepared as a white solid (230 mg, yield 72%).
  • compound 20 was prepared as a white solid (140 mg, yield 40%).
  • compound 21B was prepared as a white solid (120 mg, yield 61%).
  • compound 21 was prepared as a white solid (40 mg, yield 23%).
  • compound 22B was prepared as a white solid (220 mg, yield 60%).
  • compound 22D was prepared as a white solid (110 mg, yield 45%).
  • compound 23A was prepared as a white solid (810 mg, yield 66%).
  • compound 23 was prepared as a white solid (485 mg, 73% yield).
  • compound 24A was prepared as a yellow oil (300 mg, yield 45%).
  • compound 24 was prepared as a white solid (180 mg, 73% yield).
  • compound 25 was prepared as a white solid (120 mg, yield 43%).
  • compound 26 was prepared as a white solid (68 mg, yield 26%).
  • compound 27 was prepared as a white solid (76 mg, yield 32%).
  • compound 28 was prepared as a white solid (22 mg, 80% yield)
  • compound 29 was prepared as a white solid (66 mg, yield 43%).
  • Blocking Add 100 ⁇ L/well of Blocking buffer and block for 90min.
  • Compound dilution The compound was diluted at a ratio of 1:3 to 8 concentrations, and the initial concentration was 1000 nM.
  • IC50 refers to the concentration of the compound at which the PARP enzyme activity is inhibited by 50%.
  • the compounds of the present invention have significant bioinhibitory activity on PARP-7 target protein.
  • the compound was prepared into 10 mM stock solution with DMSO, diluted with 1640 medium to 8 concentrations (1:5), and the final concentrations were 10000, 2000, 400, 80, 16, 3.2, 0.64, and 0.128 nM, respectively.
  • the cells without drug treatment were used as the control group, and the remaining cells were treated with different drug concentrations respectively.
  • a cell-free culture well was set up as a blank zero-adjustment group. Each group was set up with 2 parallel wells and placed in 37°C, 5% Cultured in a CO 2 incubator.
  • IC50 refers to the compound concentration at which cell proliferation is inhibited by 50%.
  • the compounds of the present invention have a significant inhibitory effect on the proliferation of NCI-H1373 cells.
  • % relative positive control activity (sample activity of compound group - sample activity of blank control group)/(activity of positive control group sample - sample activity of blank control group) ⁇ 100%
  • Positive control group hepatocytes were incubated with an inducer of CYP450 (phenobarbital 1000 ⁇ M for CYP2B6 subtype, rifampicin 25 ⁇ M for CYP3A4 subtype).
  • Blank control group cells were incubated with medium containing the same content (v/v) of organic solvent.
  • the compounds of the present invention have no potential induction effect on the activity of metabolic enzyme CYP450, while the reference substance has obvious induction activity.

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Abstract

提供了哒嗪酮衍生物及其在医药上的应用，该衍生物为PARP抑制剂，例如PARP-7抑制剂。

Description

哒嗪酮衍生物及其在医药上的应用 技术领域
本发明涉及哒嗪酮衍生物或者其立体异构体或药学上可接受的盐及其在医药上的应用。
背景技术
二磷酸腺苷核糖基化(ADP-ribosylation，ADP-核糖基化)是蛋白质转录后修饰过程，将单个或多个二磷酸腺苷核糖(ADP核糖)基团嵌入蛋白质的氨基酸残基上。ADP-核糖基化是可逆过程，涉及细胞信号转导、DNA损伤修复、转录、基因表达调控和细胞凋亡等生理调控。ADP-核糖来源于氧化还原辅因子：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+)，介导ADP核糖嵌入修饰的酶为ADP-核糖基化酶。在该生理反应调节中，连接ADP-核糖分子和烟酰胺(nicotinamide)基团的NAD+的N-糖苷键发生裂解，随后其与靶蛋白相应氨基酸残基捕捉成键。ADP-核糖基酶可以进行两种类型的修饰：单-ADP核糖基化和聚-ADP核糖基化。当DNA损伤或细胞受到压力应激时，PARP会被激活，导致聚ADP-核糖量增加，而NAD+量减少。十多年来，人们一直认为PARP1是哺乳动物细胞中唯一的聚ADP-核糖聚合酶，因此对该酶的研究最多。迄今为止，科学家已经鉴定出17个不同的PARP。MonoPARP占据了PARP家族的大部分，并介导重要的生物学功能和各种应激反应，例如：未折叠的蛋白质反应、NF-κB信号传导、抗病毒反应和细胞因子信号传导。2,3,7,8-四氯二苯并-对二恶英(TCDD)诱导型聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP-7)是MonoPARP家族成员之一，其表达受TCDD激活芳烃受体(AHR)的调节，AHR是一种配体激活的转录因子，可介导许多环境异源生物的毒性活性。AHR上调PARP-7的表达，PARP-7通过与激酶TBK1相互作用并使其ADP-核糖基化，导致TBK1活性受抑制、IFN-I(Ⅰ型干扰素)反应的下调，进而导致机体抗病毒和肿瘤免疫应答受到抑制。
发明内容
本申请的一个或多个实施方式的目的在于提供新型PARP抑制剂。
本申请的一个或多个实施方式的目的在于提供新型PARP-7抑制剂。
本申请的一个或多个实施方式提供了通式(I)的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2021134103-appb-000001
其中
R、R′、R″各自独立地为H或C 1-6烷基；或者
R和R′或者R和R″与相连的原子形成4至8元杂环烷基；
R 1、R 2各自独立地为H或C 1-6烷基；
L 1为键或C＝O；
L为键或NH；
C 1为6元、7元或8元杂环基；
R 3、R 4各自独立地为H、卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个选自OH或者CN的取代基所取代；
C为6元杂芳基，所述6元杂芳基任选地进一步被1或多个选自CN或者任选地被1或多个卤素取代的C 1-6烷基的取代基所取代；
C 2为C 3-6碳环；
R 5各自独立地为H、卤素、CN或OH；
n为1或2；
m为0、1、2、3、4或5。
在一个或多个实施方式中，C 1为包含1个、2个或3个N原子的6元、7元或8元杂环基。
在一个或多个实施方式中，C 1为
Figure PCTCN2021134103-appb-000002
Figure PCTCN2021134103-appb-000003
在一个或多个实施方式中，C为包含1个、2个或3个N原子的6元杂芳基，所述6元杂芳基任选地进一步被1或多个选自CN或者任选地被1或多个卤素取代的C 1-6烷基的取代基所取代。
在一个或多个实施方式中，C为
Figure PCTCN2021134103-appb-000004
其任选地进一步被1或多个选自CN或者任选地被1或多个卤素取代的C 1-6烷基的取代基所取代。
在一个或多个实施方式中，所述杂环烷基为含有1个N原子的4元、5元或6元杂环烷基。
在一个或多个实施方式中，R为H。
在一个或多个实施方式中，R′、R″各自独立地为H或C 1-6烷基；
在一个或多个实施方式中，R 1和R 2为H。
在一个或多个实施方式中，L 1为C＝O。
在一个或多个实施方式中，L为键。
在一个或多个实施方式中，L 1为C＝O，L为NH。
在一个或多个实施方式中，L 1为C＝O，L为键。
在一个或多个实施方式中，C 1为
Figure PCTCN2021134103-appb-000005
Figure PCTCN2021134103-appb-000006
在一个或多个实施方式中，R 3、R 4各自独立地为卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个OH取代。
在一个或多个实施方式中，C为
Figure PCTCN2021134103-appb-000007
在一个或多个实施方式中，C 2为C 3碳环。
在一个或多个实施方式中，R 5为卤素。
在一个或多个实施方式中，n为2。
在一个或多个实施方式中，m为0。
本申请的一个或多个实施方式提供了通式(II)的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2021134103-appb-000008
其中
R 1、R 2各自独立地选自H或者C 1-6烷基；
R 3、R 4各自独立地选自H、卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个选自OH或者CN的取代基所取代；
R 5各自独立地选自H、卤素、CN或OH；
L为键或-NH-；
C 1为
Figure PCTCN2021134103-appb-000009
C 2为C 3-5碳环；
n为1或2；
m为0、1、2、3、4或5。
在一个或多个实施方式中，R 1和R 2为H。
在一个或多个实施方式中，L为键。
在一个或多个实施方式中，R 3、R 4各自独立地为卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个OH取代。
在一个或多个实施方式中，C 2为C 3碳环。
在一个或多个实施方式中，R 5为卤素。
在一个或多个实施方式中，n为2。
在一个或多个实施方式中，m为0。
本申请的一个或多个实施方式提供了化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其选自以下结构：
Figure PCTCN2021134103-appb-000010
Figure PCTCN2021134103-appb-000011
Figure PCTCN2021134103-appb-000012
本申请一个或多个实施方式提供了用于制备通式(I)、(II)化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐的中间体化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其具有通式(III)、(IV)、(V)或(VI)所示的化合物：
Figure PCTCN2021134103-appb-000013
Figure PCTCN2021134103-appb-000014
其中
R、R′、R″各自独立地为H或C 1-6烷基；或者
R和R′或者R和R″与相连的原子形成4至8元杂环烷基；
R 1、R 2各自独立地为H或者C 1-6烷基；
L 1为键或者C＝O；
L为键或者NH；
C 1为6至8元杂环基；
R 3、R 4各自独立地为H、卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个选自OH或者CN的取代基所取代；
C为6元杂芳基，所述6元杂芳基任选地进一步被1或多个选自CN或C 1-6烷基的取代基所取代，所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个卤素所取代；
C 2为C 3-6碳环；
R 5各自独立地为H、卤素、CN或OH；
C 3为6至8元杂环基；
X 1为H或NH 2；
n为1或2；
m为0、1、2、3、4或5。
在一个或多个实施方式中，所述杂环烷基为含有1个N原子的4元、5元或6元杂环烷基。
在一个或多个实施方式中，C 1为包含1个、2个或3个N原子的6元、7元或8元杂环基。
在一个或多个实施方式中，C为包含1个、2个或3个N原子的6元杂芳基。
在一个或多个实施方式中，C 1为
Figure PCTCN2021134103-appb-000015
Figure PCTCN2021134103-appb-000016
在一个或多个实施方式中，C为
Figure PCTCN2021134103-appb-000017
其任选地进一步被1或多个选自CN或C 1-6烷基的取代基所取代，所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个卤素所取代。
在一个或多个实施方式中，C 3为
Figure PCTCN2021134103-appb-000018
Figure PCTCN2021134103-appb-000019
在一个或多个实施方式中，中间体化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐具有以下结构或者其立体异构体或药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2021134103-appb-000020
本申请的一个或多个实施方式提供了药物组合物，其包含：
(1)本申请的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐；
(2)任选的一种或者多种其他活性成分；以及
(3)药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本申请的一个或多个实施方式提供了本申请的化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐或者本申请的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
在一个或多个实施方式中，所述肿瘤的形成与PARP相关。
在一个或多个实施方式中，所述PARP为PARP-7。
本申请的一个或多个实施方式提供了本申请的化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐或者本申请的药物组合物在制备PARP抑制剂中的用途。
在一个或多个实施方式中，所述PARP为PARP-7。
本申请的一个或多个实施方式提供了本申请的化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐或者本申请的药物组合物，其用作药物。
本申请的一个或多个实施方式提供了本申请的化合物或者其立体异构体或药学上可 接受的盐或者本申请的药物组合物，其用于治疗肿瘤的方法中。在一个或多个实施方式中，所述肿瘤的形成与PARP相关。在一个或多个实施方式中，所述PARP为PARP-7。
本申请的一个或多个实施方式提供了本申请的化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐或者本申请的药物组合物，其用作PARP抑制剂，例如PARP-7抑制剂。
本申请的一个或多个实施方式提供了治疗肿瘤的方法，其包括将本申请的化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐或者本申请的药物组合物给予有此需要的对象。
本申请的一个或多个实施方式提供了抑制PARP的方法，其包括给予本申请的化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐或者本申请的药物组合物。在一个或多个实施方式中，所述PARP为PARP-7。
发明详述
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或F、Cl、Br、I均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括 12C、 13C和 14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氢)、氚(T，又叫超重氢)，氧的同位素包括 16O、 17O和 18O，硫的同位素包括 32S、 33S、 34S和 36S，氮的同位素包括 14N和 15N，氟的同位素包括 17F和 19F，氯的同位素包括 35Cl和 37Cl，溴的同位素包括 79Br和 81Br。
“烷基”是指1至20个碳原子(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳原子)的直链或支链饱和脂肪族烃基，优选为1至8个碳原子的烷基，更优选为1至6个碳原子的烷基，进一步优选为1至4个碳原子的烷基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、新丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基及其各种支链异构体；当烷基被取代基时，可以任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
“芳基”是指是指取代的或未取代的芳香环，其可以是5至8元(例如5、6、7、8元)的单环、5至12元(例如5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，其可以是桥环或者螺环，非限制性实施例包括苯基、萘基。所述的芳基可以任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
“杂芳基”是指取代的或未取代的芳香环，其可以是5至8元(例如5、6、7、8元)的单环、5至12元(例如5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，且包含1至6个(例如1、2、3、4、5、6个)选自N、O或S的杂原子，优选3至8元(例如3、4、5、6、7、8元)杂环基，杂环基的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以是桥环或者螺环，非限制性实施例包括环吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基。当杂芳基被取代时，可以任选进一步被1个或多个取代基所取代。
“杂环基”或“杂环”是指饱和或不饱和的杂芳环或者非杂芳环，当选自杂芳环时，其定义与上文“杂芳基”定义相同；当选自非杂芳环时，其可以是3至10元(例如3、4、5、6、7、8、9、10元)的单环、4至12元(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，且包含1至4个(例如1、2、3、4个)选自N、O或S的杂原子，优选3至8元杂环基。“杂环基”或“杂环”的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态；“杂环基”或“杂环”可以连接在杂原子或者碳原子上；“杂环基”或“杂环”可以为桥环或者螺环。“杂环基”或“杂环”的非限制性实施例包括环氧乙基、环 氧丙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、硫杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、吡啶基、哌啶基、高哌啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌嗪基、高哌嗪基、咪唑基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、1,3-二噻烷基、二氢呋喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹嗪基、N-吡啶基尿素、1,1-二氧硫代吗啉基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、
Figure PCTCN2021134103-appb-000021
Figure PCTCN2021134103-appb-000022
氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。所述的“杂环基”或“杂环”可以任选进一步被0个或者多个取代基所取代。
“杂环烷基”是指取代的或未取代的饱和非芳香环基，其可以是3至8元(例如3、4、5、6、7或8元)的单环、4至12元(例如4、5、6、7、8、9、10、11、12元)双环或者10至15元(例如10、11、12、13、14、15元)三环体系，且包含1、2或3个选自N、O或S的杂原子，例如3至8元杂环基。“杂环烷基”的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态；“杂环烷基”可以连接在杂原子或者碳原子上；“杂环烷基”可以为桥环或者螺环。“杂环烷基”非限制性实施例包括环氧乙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。
“碳环基”或“碳环”是指饱和或者不饱和的芳香环或者非芳香环。当选自芳香环时，其定义与上文“芳基”的定义相同；当选自非芳香环时，其可以是3至10元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，可以是桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊基-1-烯基、1-环戊基-2-烯基、1-环戊基-3-烯基、环己基、1-环己基-2-烯基、1-环己基-3-烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基、
Figure PCTCN2021134103-appb-000023
Figure PCTCN2021134103-appb-000024
所述的“碳环基”或“碳环”可以任选进一步被1个或者多个取代基所取代。
当上文所述的“烷基”、“芳基”、“杂芳基”、“杂环”、“杂环基”、“杂环烷基”、“碳环”、“碳环基”被取代时，可以任选进一步被0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、C 1-6烷基氨基、＝O、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-NR q4R q5、＝NR q6、-C(＝O)OC 1-6烷基、-OC(＝O)C 1-6烷基、-C(＝O)NR q4R q5、C 3-8环烷基、C 3-8杂环烷基、C 6-10芳基、C 5-10杂芳基、-C(＝O)OC 6-10芳基、-OC(＝O)C 6-10芳基、-OC(＝O)C 5-10杂芳基、-C(＝O)OC 5-10杂芳基、-OC(＝O)C 3-8杂环烷基、-C(＝O)OC 3-8杂环 烷基、-OC(＝O)C 3-8环烷基、-C(＝O)OC 3-8环烷基、-NHC(＝O)C 3-8杂环烷基、-NHC(＝O)C 6-10芳基、-NHC(＝O)C 5-10杂芳基、-NHC(＝O)C 3-8环烷基、-NHC(＝O)C 3-8杂环烷基、-NHC(＝O)C 2-6烯基或者-NHC(＝O)C 2-6炔基的取代基所取代，且其中所述的取代基C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、C 3-8杂环烷基、C 6-10芳基、C 5-10杂芳基、-NHC(＝O)C 6-10芳基、-NHC(＝O)C 5-10杂芳基、-NHC(＝O)C 3-8杂环烷基或者-NHC(＝O)C 3-8环烷基任选进一步被1至3个选自OH、F、Cl、Br、I、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、-NR q4R q5或者＝O的取代基所取代；R q1选自C 1-6烷基、C 1-6烷氧基或者C 6-10芳基；R q2、R q3选自H或者C 1-6烷基；R q4、R q5选自H、C 1-6烷基、-NH(C＝NR q1)NR q2R q3、-S(＝O) 2NR q2R q3、-C(＝O)R q1或者-C(＝O)NR q2R q3，其中所述的C 1-6烷基任选进一步被1个或者多个选自OH、F、Cl、Br、I、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 6-10芳基、C 5-10杂芳基、C 3-8环烷基或者C 3-8杂环烷基的取代基所取代；或者R q4与R q5及N原子形成一个3至8元杂环，所述的环可以含有1个或者多个选自N、O或者S的杂原子。
“药物组合物”是指一种或多种本发明所述的化合物、其药学上可接受的盐或前药和其它活性组分形成的混合物，其中，“其它活性组分”是指药学上可接受的载体、赋形剂和/或一种或多种其它治疗剂。
“载体”是指不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的材料。
“赋形剂”是指加入到药物组合物中以促进化合物给药的惰性物质。非限制性实施例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚乙二醇类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“药学上可接受的盐”或者“其药学上可接受的盐”是指本发明化合物保持游离酸或者游离碱的生物有效性和特性，且所述的游离酸通过与无毒的无机碱或者有机碱，所述的游离碱通过与无毒的无机酸或者有机酸反应获得的盐。
“任选”或“任选地”或“选择性的”或“选择性地”是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，该描述包括其中发生该事件或状况的情况及其中未发生的情况。例如，“选择性地被烷基取代的杂环基”是指该烷基可以但未必存在，该描述包括其中杂环基被烷基取代的情况，及其中杂环基未被烷基取代的情况。
具体实施方式
以下实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。
PMB：是指对甲氧基苄基。
中间体1
(S)-3-(2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酸(中间体1)
(S)-3-(2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoic acid
Figure PCTCN2021134103-appb-000025
第一步：
4,5-二溴-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮(1b)
4,5-dibromo-2-(4-methoxybenzyl)pyridazin-3(2H)-one
在0-10℃下，向4,5-二溴-2,3-二氢哒嗪-3-酮(1a,50g，196.94mmol，1.0equiv)的N,N-二甲基甲酰胺(500mL)溶液中，分批次加入钠氢(11.82g，295.41mmol，1.5equiv，60％)，在0℃下加入1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(46.06g，294.11mmol，1.49equiv)。加毕，将反应混合于室温下搅拌3h。待反应完全后，将反应液缓慢倾倒入1.0L冰水混合物中淬灭，并用2×500mL二氯甲烷萃取。合并有机层并浓缩。用甲醇(500mL×2)洗涤固体，得化合物1b,黄色固体(48.4g,产率66％)。
LC-MS m/z(ESI)＝375.00[M+1]。
第二步：
4-溴-5-甲氧基-2-(4-甲氧基苄基)哒嗪-3(2H)-酮(1c)
4-bromo-5-methoxy-2-(4-methoxybenzyl)pyridazin-3(2H)-one
将化合物1b(48.4g，129.40mmol，1.0equiv)，氢氧化钾(21.78g，388.30mmol，3.00equiv)溶解由于甲醇(417mL)中，反应液于室温下搅拌2h。将所得反应混合物浓缩至80mL，过滤得粗品。将所得滤饼在水(160mL)中制浆1h，过滤得化合物1c,白色固体(38.72g，产率92％)。
LC-MS m/z(ESI)＝326.30[M+1]。
第三步：
5-甲氧基-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(1d)
5-methoxy-2-(4-methoxybenzyl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
称取化合物1c(14g，43.04mmol，1.0equiv)和碘化亚铜(4.10g，21.52mmol，0.50equiv)与250mL反应烧瓶中，以N-甲基吡咯烷酮(72mL)溶解，随后缓慢加入2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸甲酯(16.4mL，129.11mmol，3.0equiv)。加毕，将反应置于100℃油浴中搅拌反应3h。待反应完全后，向反应液中加入90mL水淬灭。以3×60mL的二氯甲烷萃取所得溶液。合并有机层、无水硫酸钠干燥、真空浓缩，将残留物通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得化合物1d，白色固体(12.1g，产率89％)。
LC-MS m/z(ESI)＝315.10[M+1]。
第四步：
5-羟基-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(1e)
5-hydroxy-2-(4-methoxybenzyl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
在室温下，向化合物1d(12.1g，38.52mmol，1.0equiv)的N，N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液中，逐滴加入三甲基碘硅烷(9.97g，50.07mmol，1.3equiv)。将所得反应液在85℃下搅拌20h。待反应完毕，向反应混合物中加入60mL水淬灭反应，随后以3×60mL二氯甲烷萃取所得溶液。合并有机相、无水硫酸钠干燥、真空浓缩，将残留物通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得化合物1e，白色固体(10.4g，产率90％)。
LC-MS m/z(ESI)＝301.07[M+1]。
第五步：
5-氯-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(1f)
5-chloro-2-(4-methoxybenzyl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
在0℃下，向化合物1e(10.4g，34.66mmol，1.0equiv)的DMF(52mL)溶液中，缓慢滴加草酰二氯(8.79g，69.32mmol，2.0equiv)。加毕，将反应混合液于室温下搅拌8h。待反应完全，向反应液中加入550mL水淬灭。过滤混合液，得化合物1f，为白色固体(11.04g，99％)。
LC-MS m/z(ESI)＝319.68[M+1]。
第六步：
(S)-5-((1-羟基丙烷-2-基)氨基)-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(1g)
(S)-5-((1-hydroxypropan-2-yl)amino)-2-(4-methoxybenzyl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
称取化合物1f(5.0g，15.69mmol，1.0equiv)于100mL反应瓶中，并加入乙醇(40mL)溶解。随后，依次加入三乙胺(4.4mL，31.38mmol，2.0equiv)和(2S)-2-氨基丙-1-醇(1.19g，15.69mmol，1.0equiv)，将混合物于60℃下搅拌反应4h。待反应完全后，真空浓缩，将残留物通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1.5)纯化得化合物1g，白色固体(5.31g，产率95％)。
LC-MS m/z(ESI)＝358.43[M+1]。
第七步：
(S)-3-(2-(((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酸甲酯(1h)
Methyl-(S)-3-(2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoate
称取化合物1g(5.31g，14.86mmol，1.0equiv)，碳酸铯(4.73g，14.86mmol，1.0equiv)于100mL反应烧瓶中。随后，加入乙腈(50mL)溶解，向混合物中加入丙-2-烯酸甲酯(13.38g，148.6mmol，10equiv)。加毕，将反应混合物于在30℃下搅拌4h。待反应完全后，真空浓缩，将残留物通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得化合物1h，白色固体(3.40g，产率51％)。
LC-MS m/z(ESI)＝444.50[M+1]。
第八步：
(S)-3-(2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酸甲酯(1i)
Methyl-(S)-3-(2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoate
向称有化合物1h(3.40g，7.67mmol，1.0equiv)的25mL反应烧瓶中依次加入三氟乙酸(21.42mL)和三氟甲烷磺酸(2.7mL，30.68mmol，4.0equiv)。加毕，反应于25℃下搅拌2h。随后，向反应液中加入85mL水淬灭。所得溶液用3×60mL乙酸乙酯萃取。通过碳酸钾水溶液将有机层的pH值调节至8到9。合并有机层、真空浓缩，将残留物通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:3)纯化得化合物1i，白色固体(2.06g，产率83％)。
LC-MS m/z(ESI)＝324.30[M+1]。
第九步：
(S)-3-(2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酸(中间体1)
(S)-3-(2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoic acid
分别称取化合物1i(2.06g，6.37mmol，1.0equiv)和一水合氢氧化锂(1.34g，31.85mmol，5.0equiv)，加至100mL反应瓶中。随后，依次加入甲醇(14mL)和水(14mL)，将反应液于25℃下搅拌1h。待反应完全后，三氟乙酸调节反应混合液的pH值调节至为6。反应混合液，真空浓缩，残留物以C18反相色谱法(水:乙腈＝6:1)纯化得中间体1，淡黄色固体(1.32g，产率67％)。
LC-MS m/z(ESI)＝310.32[M+1]。
中间体2
5-环丙基-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(中间体2)
5-cyclopropyl-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000026
第一步：
4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2b)
tert-butyl 4-(5-bromopyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
称取2-氯-5-溴嘧啶(2a，12.0g，62.04mmol，1.05equiv)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(11.0g，59.08mmol，1.0equiv)和碳酸钾(16.33g，124.08mmol，2.0equiv)于250mL的反应瓶中。随后，向混合物中加入N-甲基吡咯烷酮(90mL)溶解，并将反应于80℃油浴下加热搅拌1h。待反应完全后，将反应液倾倒入280mL的冰水混合物中，过滤悬浊液，得化合物2b，为白色固体(16.4g，产率81％)。
LC-MS m/z(ESI)＝344.90[M+1]。
第二步：
5-溴-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(2c)
5-bromo-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
称取化合物2b(16.4g，47.78mmol，1.0equiv)溶解于盐酸的二氧六环溶液中(4M，67mL)中。将反应液于室温下搅拌1h。待反应完全时，过滤悬浊液，二氧六环洗涤滤饼，干燥，得到化合物2c，为白色固体(11.3g，产率97％)。
LC-MS m/z(ESI)＝244.90[M+1]。
第三步：
5-环丙基-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(中间体2)
5-cyclopropyl-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
向25mL反应瓶中，分别加入已称取的化合物2c(1.0g，4.10mmol，1.0equiv)，碳酸钾(2.83g，20.50mmol，5.0equiv)，环丙硼酸(1.06g，12.30mmol，3.0equiv)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(344.8mg，0.41mmol，0.1equiv)。随后加入THF/H 2O(35.2/4.4mL)混合液，N 2保护，并将反应置于66℃油浴下加热搅拌3h。待反应完全后，冷却反应液至室温，真空浓缩，柱层析(二氯甲烷:甲醇＝15:1)纯化得中间体2，为白色固体(0.66g，产率78％)。
LC-MS m/z(ESI)＝205.30[M+1]。
中间体3
5-环丁基-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(中间体3)
5-cyclobutyl-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000027
第一步：
4-(5-(1-(羟基环丁基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3a)
tert-butyl 4-(5-(1-hydroxycyclobutyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
将化合物2b(7.8g，22.66mmol，1.0equiv)溶解于无水四氢呋喃(62mL)中，并降温至 -78℃。随后，滴加正丁基锂23.8mL(1.0M正己烷溶液，23.79mmol，1.05equiv)。加毕，在该温度下搅拌10min后，自然升温至环境温度并继续搅拌2h。将反应液降温至-20℃，缓慢滴加环丁酮(1.86mL，24.93mmol，1.1equiv)。加毕，使反应混合物升温至环境温度，搅拌4h。待反应完全，以10mL饱和氯化铵溶液淬灭反应。反应混合物以3×120mL的乙酸乙酯萃取。合并有机层、无水硫酸钠干燥、真空浓缩，得粗品3a，黄色油状物6.4g。粗品3a直接用于下一步反应，不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝335.40[M+1]。
第二步：
5-环丁基-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(中间体3)
5-cyclobutyl-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
将干燥后的化合物3a(约5.7mmol)转移至20mL反应瓶中，二氯甲烷(6mL)溶解。随后，向其中加入三乙基硅烷(2.74mL，17.1mmol，3equiv)和三氟乙酸的二氯甲烷溶液(3.0mL，TFA:CH 2Cl 2＝1:2，体积比)。加毕，将反应混合物于室温下搅拌过夜。反应液真空下浓缩，得到油状物。残留物经反相C18色谱柱纯化(水:乙腈＝1:3)，得中间体3，为白色固体(1.35g，27％)。
LC-MS m/z(ESI)＝219.20[M+1]。
中间体4
5-(1-氟环丙基)-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(中间体4)
5-(1-fluorocyclopropyl)-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000028
第一步：
2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-羧酸甲酯(4b)
methyl 2-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)pyrimidine-5-carboxylate
称取2-氯-5-羧酸甲酯4a(17.2g，0.1mol，1.0equiv)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(21.0g，0.11mol，1.1equiv)和碳酸钾(28.0g，0.2mol，2.0equiv)于250mL的反应瓶中。随后，向混合 物中加入N-甲基吡咯烷酮(100mL)溶解，并将反应于80℃油浴下加热搅拌1h。待反应完全后，将反应液倾倒入280mL的冰水混合物中，过滤悬浊液，得化合物4b，为白色固体(26.2g，产率81％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.81(s,2H),3.92–3.69(m,7H),3.47–3.37(m,4H),1.42(s,9H)。
LC-MS m/z(ESI)＝323.20[M+1]。
第二步：
4-(5-(1-(羟基环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4c)
tert-butyl 4-(5-(1-hydroxycyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
称取化合物4b(5.0g，15.5mmol，1.0equiv)、钛酸四异丙酯(6.4g，21.7mmol，1.4equiv)溶于50mL无水四氢呋喃，于冰水浴、氮气保护下滴加乙基溴化镁溶液(43.5mL，43.5mol，2.8equiv)，滴加完毕，室温反应2h。待反应完全后，向反应液中加入40mL乙酸乙酯和20mL水，乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩除去溶剂，粗品经柱层析(正己烷:乙酸乙酯＝5:1)得化合物4c，为白色固体(1.5g，产率30％)。
LC-MS m/z(ESI)＝321.20[M+1]。
第三步：
4-(5-(1-(((三甲基甲硅烷基)氧基)环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4d)
tert-butyl-4-(5-(1-((trimethylsilyl)oxy)cyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
称取化合物4c(500mg，1.5mmol，1.0equiv)溶于5mL二甲基甲酰胺，依次加入咪唑(204mg，3mol，2equiv)和三甲基氯硅烷(285μL，2.25mmol，1.5equiv)，室温反应1h。待反应完全后，加入5mL水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得化合物4d，粗品直接用于下一步反应。
第四步：
4-(5-(1-氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4e)
tert-butyl 4-(5-(1-fluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
将化合物4d(1.5mmol，1.0equiv)溶于5mL二氯甲烷，加入二乙胺基三氟化硫(396μL，3mol，2.0equiv)，室温反应1h。待反应完全后，直接旋干过柱(正己烷:乙酸乙酯＝3:1)，得化合物4e，为白色固体(290mg，产率60％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.44(d,2H),3.77–3.71(m,4H),3.40(dd,4H),1.42(s,9H),1.39–1.31(m,2H),1.12–1.01(m,2H)。
第五步：
5-(1-氟环丙基)-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(中间体4)
5-(1-fluorocyclopropyl)-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体4，为白色固体，中间体4可直接用于下一步反应而不需进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝223.20[M+1]
中间体5
5-环丙基嘧啶-2-((3S,5R)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)嘧啶(中间体5)
5-cyclopropyl-2-((3S,5R)-3,5-dimethylpiperazin-1-yl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000029
第一步：
(2S，6R)-4-(5-溴嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5b)
tert-butyl(2S,6R)-4-(5-bromopyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazine-1-carboxylate
称取2-氯-5-溴嘧啶2a(1.5g，7.7mmol，1.0equiv)，(2S，6R)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.0g，9.0mmol，1.2equiv)和碳酸钾(2.1g，15.4mmol，2.0equiv)于100mL的反应瓶中。随后，向混合物中加入氮甲基吡咯烷酮(20mL)溶解，并将反应于80℃油浴下加热搅拌1h。待反应完全后，将反应液倾倒入80mL的冰水混合物中，过滤悬浊液得化合物5b，为白色固体(2.7g，产率98％)。
LC-MS m/z(ESI)＝371.20[M+1]。
第二步：
(2S，6R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5c)
tert-butyl(2S,6R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazine-1-carboxy-late
参考中间体2的合成方法，制备得到化合物5c，为白色固体(1.8g,产率70％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.17(s,2H),4.52(s,1H),4.49(s,1H),4.19–4.08(m,2H),2.99(dd,2H),1.76–1.64(m,1H),1.42(s,9H),1.09(d,6H),0.89–0.83(m,2H),0.67–0.59(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝333.23[M+1]。
第三步：
5-环丙基嘧啶-2-((3S,5R)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)嘧啶(中间体5)
5-cyclopropyl-2-((3S,5R)-3,5-dimethylpiperazin-1-yl)pyrimidine
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体5，为白色固体，中间体5直接用于下一步反应，不需进一步纯化。
中间体6
1-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-胺(中间体6)
1-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,3-difluoropiperidin-4-amine
Figure PCTCN2021134103-appb-000030
Figure PCTCN2021134103-appb-000031
第一步：
(1-(5-溴嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6b)
tert-butyl(1-(5-bromopyrimidin-2-yl)-3,3-difluoropiperidin-4-yl)carbamate
称取2-氯-5-溴嘧啶2a(682mg，3.5mmol，1.0equiv)，(3,3-二氟哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，4.2mmol，1.2equiv)和碳酸钾(0.97g，7.0mmol，2.0equiv)于50mL的反应瓶中。随后，向混合物中加入氮甲基吡咯烷酮(10mL)溶解，并将反应于80℃油浴下加热搅拌1h。待反应完全后，将反应液倾倒入80mL的冰水混合物中，过滤悬浊液，得化合物6b，为白色固体(1.02g，产率75％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.50(s,2H),7.24(d,1H),4.76–4.68(m,1H),4.45(d,1H),4.23–4.04(m,1H),3.56(dd,1H),3.30–3.23(m,1H),1.83–1.82(m,1H),1.67–1.54(m,1H),1.40(s,9H)。
LC-MS m/z(ESI)＝394.25[M+1]。
第二步：
(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6c)
tert-butyl(1-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,3-difluoropiperidin-4-yl)carbamate
参考中间体2的合成方法，制备得到中间体6c，为白色固体(770mg,产率87％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ8.19(s,2H),7.20(d,1H),4.78–4.72(m,1H),4.47(d,1H),4.16–4.02(m,1H),3.50–3.43(m,1H),3.21–3.16(m,1H),1.79–1.74(m,2H),1.62–1.56(m,1H),1.40(s,9H),0.93–0.83(m,2H),0.68–0.61(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝355.40[M+1]。
第三步：
1-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-胺(中间体6)
1-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,3-difluoropiperidin-4-amine
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体6，为白色固体，中间体6直接用于下一步反应而不需进一步纯化。
中间体7：
7-(5-环丙基嘧啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷(中间体7)
7-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-4,7-diazaspiro[2.5]octane
Figure PCTCN2021134103-appb-000032
Figure PCTCN2021134103-appb-000033
第一步：
2-氯-5-环丙基嘧啶(7a)
2-chloro-5-cyclopropylpyrimidine
参考中间体2的合成方法，制备得到化合物7a，为白色固体(1.32g，产率83％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.55(s,2H),2.00–1.93(m,1H),1.09–1.02(m,2H),0.90–0.84(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝155.03[M+1]。
第二步：
7-(5-环丙基嘧啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯(7b)
tert-butyl 7-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-4,7-diazaspiro[2.5]octane-4-carboxylate
称取2-氯-5-环丙基嘧啶7a(300mg，2mmol，1.0equiv)，4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯(640mg，3mmol，1.2equiv)和碳酸钾(0.55g，4.0mmol，2.0equiv)于50mL的反应瓶中。随后，向混合物中加入氮甲基吡咯烷酮(10mL)溶解，并将反应于80℃油浴下加热搅拌1h。待反应完全后，将反应液倾倒入80mL的冰水混合物中，过滤悬浊液，得化合物7b，为白色固体(350mg，产率53％)。
LC-MS m/z(ESI)＝331.30[M+1]。
第三步：
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体7，为白色固体；中间体7可直接用于下一步反应，不需进一步纯化。
中间体8：
(1R,5S)-3-(5-环丙基嘧啶-2-基)-1,5-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-胺(中间体8)
(1R,5S)-3-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-1,5-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexan-6-amine
Figure PCTCN2021134103-appb-000034
参考中间体7的合成方法，制备得到中间体8，为白色固体(1.8g,产率70％)。
LC-MS m/z(ESI)＝344.50[M+1]
中间体9：
(S)-2-(2-(((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)乙酸(中间体9)
(S)-2-(2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)acetic acid
Figure PCTCN2021134103-appb-000035
第一步：
(S)-2-(2-(((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)乙酸叔丁酯(9a)
tert-butyl(S)-2-(2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydro pyridazin-4-yl)amino)propoxy)acetate
依次称取化合物1g(1.0g，2.79mmol，1.0equiv)，溴乙酸叔丁酯(1.65g，8.37mmol，3.0equiv)和叔丁醇钾(0.94g，8.37mmol，3.0equiv)于11.0mL二甲基甲酰胺中，室温反应3h，加30mL水淬灭反应，再用30mL乙酸乙酯萃取两遍，用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩，残留物柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得化合物9a，为黄色固体(0.33g，产率25％)。
LC-MS m/z(ESI)＝472.48[M+1]。
第二步：
(S)-2-(2-(((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)乙酸(中间体9)
(S)-2-(2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)acetic acid
在50mL单口瓶中，将化合物9a(330mg，0.7mmol，1equiv)溶于2.5mL二氯甲烷，然后加入2.5mL三氟乙酸，室温反应2h，旋干反应液，得到中间体9(220mg，产率76％)，直接进行下一步反应。
LC-MS m/z(ESI)＝416.37[M+1]。
中间体10
1-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)环丙烷-1-腈(中间体10)
1-(2-(piperazin-1-yl)pyrimidin-5-yl)cyclopropane-1-carbonitrile
Figure PCTCN2021134103-appb-000036
Figure PCTCN2021134103-appb-000037
第一步：
4-(5-(1-(氰基环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(10a)
tert-butyl 4-(5-(1-cyanocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
向反应烧瓶中加入1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(124.5mg，0.2mmol，0.1equiv)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0):1,1′-联萘-2,2′-双二苯膦(91.6mg，0.1mmol，0.05equiv)和四氢呋喃(2.0ml)，抽换入氮气，将悬浮液在氮气下搅拌20min。取另外一个反应瓶，加入化合物2b(686mg，2.0mmol，1.0equiv)和环丙烷甲腈(267μL，3.0mmol，1.5equiv)，加入环戊基甲基醚(4.0mL)溶解，加毕抽换入氮气保护。随后，向反应中加入制备好的催化剂悬浮液，随后滴加双三甲基硅基胺基锂(3.0mL，1M in THF，3.0mmol，1.5euqiv)。将反应混合物加热至80℃下搅拌反应3h。待反应完全，冷却反应液至室温，以乙酸乙酯和饱和氯化铵溶液稀释。反应混合物以3×60mL的乙酸乙酯萃取。合并有机层、无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:10)得化合物10a，为白色固体(482mg，产率73％)。
LC-MS m/z(ESI)＝330.30[M+1]。
第二步：
1-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)环丙烷-1-腈(中间体10)
1-(2-(piperazin-1-yl)pyrimidin-5-yl)cyclopropane-1-carbonitrile
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体10的粗品，为白色固体327mg。中间体10可直接用于下一步反应，而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝230.20[M+1]。
中间体11
5-(2,2-二氟环丙基)-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(中间体11)
5-(2,2-difluorocyclopropyl)-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000038
第一步：
4-(5-乙烯基嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11b)
tert-butyl 4-(5-vinylpyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
参考化合物2b的合成方法，制备得到化合物11b，为白色固体(1.2g，产率83％)。
LC-MS m/z(ESI)＝290.4[M+1]。
第二步：
4-(5-(2,2-二氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11c)
tert-butyl 4-(5-(2,2-difluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
分别称取11b(634mg，2.18mmol，1.0eq)，碘化钠(729.7mg，4.87mmol，2.23equiv)于15mL高压反应管中，加入二氧六环(2.0mL)和乙二醇二甲醚(30μL)溶解。抽换入氮气保护，随后依次滴加入氟磺酰基二氟乙酸甲酯(556μL，4.37mmol，2.0equiv)和三甲基氯硅烷(474.3mg，4.37mmol，2.0equiv)，加毕将反应移至120℃油浴下搅拌反应3h。待反应完全，将反应液冷却至室温，加入30mL的乙酸乙酯和30mL的水，混合物搅拌30min。分离有机相，真空浓缩，柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:15)纯化得化合物11c，为白色固体(220mg，产率30％)。
LC-MS m/z(ESI)＝341.30[M+1]。
第三步：
5-(2,2-二氟环丙基)-2-(哌嗪-1-基)嘧啶(中间体11)
5-(2,2-difluorocyclopropyl)-2-(piperazin-1-yl)pyrimidine
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体11的粗品，为白色固体169mg。中间体11可直接用于下一步反应而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝241.29[M+1]。
中间体12
2-(哌嗪-1-基)-5-(2,2,3-三氟环丙基)嘧啶(中间体12)
2-(piperazin-1-yl)-5-(2,2,3-trifluorocyclopropyl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000039
第一步：
4-(5-(2-溴-1-氟乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(12a)
tert-butyl 4-(5-(2-bromo-1-fluoroethyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
称取化合物11b(420mg，1.4mmol,1.0equiv)于25mL反应瓶中，并加入10mL二氯甲烷溶解。将反应降至0℃下，随后滴加三乙胺的三氟化氢溶液(338mg，2.1mmol，1.5equiv)，向反应液中加入溴代丁二酰亚胺(300mg,1.68mmol，1.2equiv)。反应自然升至室温，继续搅拌1h。待反应完全，将反应倾倒入20mL冰水中，浓氨水调节水相为碱性，二氯甲烷(3×40mL)萃取、分离有机相，真空浓缩、干燥得化合物12a，为淡黄色油状物344mg。12a可直接用于下一步反应而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝390.20[M+1]。
第二步：
4-(5-(1-氟乙烯基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(12b)
tert-butyl 4-(5-(1-fluorovinyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
分别称取化合物12a(344mg，0.88mmol,1.0equiv)和叔丁醇钾(188mg，1.68mmol，1.2equiv)于25mL反应瓶中，加入四氢呋喃(10mL)溶解，随后将反应于50℃下搅拌反应。待反应完全，反应液自然冷却至室温后，将其缓慢加入30mL冰水混合物中，二氯甲烷(3×40mL)萃取、分离有机相，真空浓缩、柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:20)纯化得化合物12b，为白色固体(128mg，产率47％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.62(s,2H),5.25(dd,1H),4.82(dd,1H),3.87–3.72(m,4H),3.41(t,4H),1.42(s,9H)。
LC-MS m/z(ESI)＝309.30[M+1]。
第三步：
4-(5-(2,2,3-三氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(12c)
tert-butyl 4-(5-(2,2,3-trifluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
称取化合物12b(64mg，0.2mmol，1.0equiv)，无水碘化钠(6mg，0.04mmol，0.2eq)，加入5mL无水四氢呋喃溶解。在氮气保护下，向反应中加入(三氟甲基)三甲基硅烷(74μL，0.5mmol，2.5equiv)。加毕将反应至于65℃下搅拌反应2h。待反应完全，真空浓缩反应液、柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝1:15)纯化得化合物12c，为无色油状物(54mg，产率75％)。
LC-MS m/z(ESI)＝359.33[M+1]。
第四步：
2-(哌嗪-1-基)-5-(2,2,3-三氟环丙基)嘧啶(中间体12)
2-(piperazin-1-yl)-5-(2,2,3-trifluorocyclopropyl)pyrimidine
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体12粗品，为白色固体47mg。中间体12可直接用于下一步反应而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝259.30[M+1]。
中间体13
3-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷(中间体13)
3-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,6-diazabicyclo[3.1.1]heptane
Figure PCTCN2021134103-appb-000040
第一步：
3-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,6-二氮杂环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(13a)
tert-butyl 3-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,6-diazabicyclo[3.1.1]heptane-6-carboxylate
称取2-氯-5-环丙基嘧啶7a(300mg，2mmol，1.0equiv)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，依次加入3,6-二氮杂环[3.1.1]庚烷-6-羧酸叔丁酯(460mg，2.3mmol，1.2equiv)和DIPEA(1.6mL，9.7mmol，5.0equiv)，并将反应于120℃油浴下加热搅拌1h。将反应液冷却至室温，减压蒸馏。经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得化合物13a，为黄色油状物(400mg，产率65％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.20(s,2H),4.21–4.11(m,2H),4.12–3.96(m,2H),3.44(d,2H),2.56–2.51(m,1H),1.78–1.76(m,1H),1.43(d,1H),1.25(s,9H),0.91–0.79(m,2H),0.69–0.57(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝317.20[M+1]。
第二步：
3-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷(中间体13)
3-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,6-diazabicyclo[3.1.1]heptane
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体13，为白色固体。中间体13可直接用于下一步反应，而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝217.20[M+1]。
中间体14
8-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷(中间体14)
8-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octane
Figure PCTCN2021134103-appb-000041
参考中间体13的合成方法，制备得到中间体14的粗品，为白色固体。中间体14可直接用于下一步反应，而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝231.20[M+1]。
中间体15
5-((2S)-1-(3-(3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(中间体15)
5-(((2S)-1-(3-(3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000042
Figure PCTCN2021134103-appb-000043
第一步：
叔丁基8-(3-((S)-2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酰基)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-3-羧酸酯(15b)
tert-butyl8-(3-((S)-2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)-propoxy)-propanoyl)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octane-3-carboxylate
分别称取15a(212mg，1.0mmol，1.0equiv)，中间体1(401mg，1.3mmol，1.3equiv)，N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(380mg，1.0mmol，1.0equiv)于10mL的反应瓶中，并以N，N-二甲基甲酰胺(4.0mL)溶解。向混合物中加入N，N-二异丙基乙胺(0.65mL，4.0mmol，4equiv)，反应于25℃下搅拌1h。待反应完全后，真空浓缩反应混合物。残留物经C18反相色谱法(水:乙腈＝1:5)纯化得15b，白色固体(307mg，产率61％)。
LC-MS m/z(ESI)＝505.20[M+1]。
第二步：
5-((2S)-1-(3-(3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(中间体15)
5-(((2S)-1-(3-(3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体15粗品，为白色固体100mg。中间体15可直接用于下一步反应，而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝405.20[M+1]。
中间体16
5-环丙基-2-((2S，5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)嘧啶(中间体16)
5-cyclopropyl-2-((2S,5R)-2,5-dimethylpiperazin-1-yl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000044
参考中间体13的合成方法，制备得到中间体16的粗品，为白色固体。中间体16可直接用于下一步反应，而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝233.20[M+1]。
中间体17
5-环丙基-2-((2S，5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)嘧啶(中间体17)
5-cyclopropyl-2-((2S,5R)-2,5-dimethylpiperazin-1-yl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000045
参考中间体13的合成方法，制备得到中间体17的粗品，为白色固体。中间体17可直接用于下一步反应，而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝217.20[M+1]。
中间体18：
2-((S)-2-((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酸(中间体18)
2-((S)-2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoic acid
Figure PCTCN2021134103-appb-000046
第一步：
叔丁基2-((S)-2-((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酸酯(18a)
tert-butyl 2-((S)-2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoate
依次称取化合物1g(550mg，1.539mmol，1.0equiv)，2-溴丙酸叔丁酯(479mg，2.309mmol，1.5equiv)和叔丁醇钾(259mg，2.309mmol，1.5equiv)于11.0mL DMF中，室温反应3h，加30mL水淬灭反应，再用30mL乙酸乙酯萃取两遍，用无水硫酸钠干燥有机相，浓缩，残留物柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得化合物18a，为黄色固体(360mg，产率48％)。
LC-MS m/z(ESI)＝486.5[M+1]。
第二步：
2-((S)-2-((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酸(中间体18)
2-((S)-2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoic acid
在20mL单口瓶中，将化合物18a(300mg，0.618mmol，1equiv)溶于5mL DCM，然后在加入2mL三氟乙酸，室温反应2h，待反应完全后，真空浓缩反应混合物。残留物经C18反相色谱法(水:乙腈＝3:2)纯化得中间体18，白色固体(250mg，产率94％)。
LC-MS m/z(ESI)＝430.4[M+1]。
中间体19
3-((1-(1-(1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)吡咯烷-2--2-基)甲氧基)丙酸(中间体19)
3-((1-(1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)pyrrolidin-2-yl)methoxy)propanoic acid
Figure PCTCN2021134103-appb-000047
第一步：
5-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(19a)
5-(2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(4-methoxybenzyl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
称取1f(1.5g，4.72mmol，1.0equiv)于100mL反应瓶中，加入N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶解。随后，依次加入二异丙基乙胺(3.3mL，18.87mmol，4.0equiv)和吡咯-2-基甲醇(0.53g，5.19mmol，1.1equiv)。将混合物于100℃下搅拌反应2h。待反应完全后，真空浓缩，将残留物通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化得化合物19a，白色固体(1.59g，产率88％)。
LC-MS m/z(ESI)＝384.15[M+1]。
第二步：
吡咯烷-2-基甲醇甲基3-((1-(1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)吡咯烷-2-基)甲氧基)丙酸酯(19b)
Methyl 3-((1-(1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)pyrrolidin-2-yl )methoxy)propanoate
称取化合物19a(1.59g，4.16mmol，1.0equiv)，碳酸铯(1.35g，4.16mmol，1.0equiv)于50mL反应烧瓶中，加入乙腈(14mL)溶解。向混合物中缓慢滴加入丙-2-烯酸甲酯(3.6g，41.55mmol，10.0equiv)。加毕，将反应混合物于在30℃下搅拌4h。待反应完全后，真空浓缩，将残留物通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化得化合物19b，白色固体(1.04g，产率53％)。
LC-MS m/z(ESI)＝470.18[M+1]。
第三步：
3-((1-(1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)吡咯烷-2-基)甲氧基)丙酸(中间体19)
3-((1-(1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)pyrrolidin-2-yl)methoxy)propanoic acid
分别称取化合物19b(1.04g，2.217mmol，1.0equiv)和一水合氢氧化锂(265mg，11.09mmol，5.0equiv)，于50mL反应瓶中。随后，依次加入甲醇(5mL)和水(5mL)，将反应液于25℃下搅拌1h。待反应完全后，以三氟乙酸调节反应混合液的pH值为6。真空浓缩反应混合物，残留物以C18反相色谱法(水:乙腈＝5:1)纯化得中间体19，淡黄色固体(830mg，产率82％)。
LC-MS m/z(ESI)＝456.17[M+1]。
中间体20
1-(5-环丙基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪(中间体20)
1-(5-cyclopropyl-3-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)piperazine
Figure PCTCN2021134103-appb-000048
第一步：
4-(5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20b)
tert-butyl 4-(5-bromo-3-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
称取20a(3.9g，15.00mmol，1.0equiv)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.54g，22.5mmol，1.5equiv)和碳酸钾(7.3g，52.5mmol，3.5equiv)于250mL的反应瓶中。随后，向混合物中加入乙腈(40mL)溶解，并将反应于80℃油浴下加热搅拌2h。待反应完全后，冷却反应液至室温，真空浓缩、柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)过柱得中间体20b，为白色固体(1.4g，产率22.67％)。
LC-MS m/z(ESI)＝409.06[M+1]。
第二步：
4-(5-环丙基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20c)
tert-butyl-4-(5-cyclopropyl-3-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
向25mL反应瓶中，分别加入已称取的中间体20b(1.4g，3.40mmol，1.0equiv)，碳酸铯(2.78g，8.50mmol，2.5equiv)，环丙硼酸(442mg，5.1mmol，1.5equiv)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(277mg，0.34mmol，0.1equiv)。随后加入Toulune/H 2O(20/2mL)混合液，抽换入氮气保护，并将反应置于95℃油浴下加热搅拌2h。待反应完全后，冷却反应液至室温，真空浓缩、柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得中间体20c，为白色固体(1.02g，产率79.41％)。
LC-MS m/z(ESI)＝371.18[M+1]
第三步：
1-(5-环丙基-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪(中间体20)
1-(5-cyclopropyl-3-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)piperazine
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体20，为白色固体(800mg，产率97％)。
LC-MS m/z(ESI)＝271.18[M+1]。
中间体21
5-环丙基-2-(哌嗪-1-基)烟腈(中间体21)
5-cyclopropyl-2-(piperazin-1-yl)nicotinonitrile
Figure PCTCN2021134103-appb-000049
第一步：
2-氯-5-环丙基烟腈(21b)
2-chloro-5-cyclopropylnicotinonitrile
向25mL反应瓶中，分别加入已称取的化合物21a(2.17g，10mmol，1.0equiv)，碳酸铯(8.2g，25mmol，2.5equiv)，环丙硼酸(1.72g，20mmol，2.0equiv)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(816mg，1mmol，0.1equiv)。随后加入Toulune/H 2O(20/2mL)混合液，抽换入氮气保护，并将反应置于95℃油浴下加热搅拌2h。待反应完全后，冷却反应液至室温，真空浓缩、柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得中间体21b，为白色固体(670mg，产率38.40％)。
LC-MS m/z(ESI)＝178.03[M+1]
第二步：
4-(3-氰基-5-环丙基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(21c)
tert-butyl 4-(3-cyano-5-cyclopropylpyridin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
参考中间体2b的合成方法，经由柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化得中间体21c，为白色固体(0.8g，产率63.80％)。
LC-MS m/z(ESI)＝328.19[M+1]。
第三步：
5-环丙基-2-(哌嗪-1-基)烟腈(中间体21)
5-cyclopropyl-2-(piperazin-1-yl)nicotinonitrile
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体21，为白色固体。中间体21可直接用于下一步反应，而不需进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝228.19[M+1]。
中间体22
2-环丙基-5-(哌嗪-1-基)吡嗪(中间体22)
2-cyclopropyl-5-(piperazin-1-yl)pyrazine
Figure PCTCN2021134103-appb-000050
第一步：
4-(5-氯吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(22b)
tert-butyl 4-(5-chloropyrazin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
参考中间体2b的合成方法，经由柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化得中间体22b，淡黄色固体(2.0g，产率50％)。
LC-MS m/z(ESI)＝298.12[M+1]。
第二步：
4-(5-环丙基吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(22c)
tert-butyl 4-(5-cyclopropylpyrazin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
参考中间体2的合成方法，经由柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得中间体22c，为白色固体(0.9g，产率44％)。
LC-MS m/z(ESI)＝304.19[M+1]
第三步：
2-环丙基-5-(哌嗪-1-基)吡嗪(中间体22)
2-cyclopropyl-5-(piperazin-1-yl)pyrazine
参考化合物2c的合成方法，制备得到到中间体22，为白色固体。中间体22可直接用于下一步反应，而不需进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝204.19[M+1]。
中间体23
3-((S)-2-氨基丙氧基)-1-(4-(5-环丙嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丁酮(中间体23)
3-((S)-2-aminopropoxy)-1-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)butan-1-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000051
第一步：
1-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-羟基丁烷-1-酮(23a)
1-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-hydroxybutan-1-one
分别称取中间体2(139mg，0.50mmol，1.0equiv)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(144mg，0.75mmol，1.5equiv)，1-羟基苯并三唑(101mg，0.75mmol，1.5equiv)于10mL的反应瓶中，并以N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)溶解。向混合物中依次滴加N,N-二异丙基乙胺(331μL，2.0mmol，4equiv)和3-羟基丁酸(57mg，0.55mmol，1.1equiv)，反应于25℃下搅拌12h。待反应完全后，真空浓缩反应混合物。残留物经C18反相色谱法(水:乙腈＝1:5)纯化得中间体23a，为淡黄色油状物(135mg，产率60％)。
LC-MS m/z(ESI)＝290.3[M+1]。
第二步：
((2S)-1-((4-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-基)氧基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(23b)
tert-butyl ((2S)-1-((4-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-4-oxobutan-2-yl)oxy)propan-2-yl)carbamate
向50mL反应瓶中，称取中间体23a(130mg，0.45mmol，1.0equiv)，无水N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶解。氮气保护，0℃下分批加入氢化钠(54mg，1.35mmol，3.0equiv)，加毕，于该温度下继续搅拌10min。随后，向反应体系中缓慢滴加(S)-4-甲基-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-羧酸叔丁酯2,2-二氧化物(160mg，0.68mmol，1.5equiv)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(7mL)，保持滴加过程温度为0℃并继续搅拌2h。待反应完全，盐酸溶液(2M)调节反应体系至pH＝3，并室温搅拌0.5h。反应混合物以乙酸乙酯(3×120mL)的萃取。合并有机层，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得粗品，柱层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)纯化，得中间体23b，为无色油状物(40mg，产率40％)。
LC-MS m/z(ESI)＝448.6[M+1]。
第三步：
3-((S)-2-氨基丙氧基)-1-(4-(5-环丙嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丁酮(中间体23)
3-((S)-2-aminopropoxy)-1-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)butan-1-one
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体23的粗品，为白色固体。中间体23可直接用于下一步反应，而不需进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝348.5[M+1]。
中间体24
2-(哌嗪-1-基)-5-(2,2,3,3-四氟环丙基)嘧啶(中间体24)
2-(piperazin-1-yl)-5-(2,2,3,3-tetrafluorocyclopropyl)pyrimidine
Figure PCTCN2021134103-appb-000052
第一步：
4-(5-甲酰基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(24c)
tert-butyl 4-(5-formylpyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
参考中间体2b的合成方法，得到中间体24c粗品，为白色固体。中间体24c可直接用于下一步反应，而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝293.40[M+1]。
第二步：
4-(5-(2,2-二氟乙烯基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(24d)
tert-butyl 4-(5-(2,2-difluorovinyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
称取中间体24c(2.83g，12mmol，1.0equiv)，三苯基膦(4.72g，18.0mmol，1.5equiv)于250mL反应烧瓶中，以N，N-二甲基甲酰胺(70mL)溶解，氮气保护性分批次加入二氟溴乙酸钠(10min内加完)；加毕，反应于90℃下搅拌反应2h。待反应完全，将反应液冷却至室温，减压蒸馏。经柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得中间体24d，为黄色固体(2.1g，产率73％)。
LC-MS m/z(ESI)＝327.40[M+1]。
第三步：
4-(5-(2,2,3,3-四氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(24e)
tert-butyl 4-(5-(2,2,3,3-tetrafluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazine-1-carboxylate
称取中间体24d(1.0g,3.1mmol,1.0equiv)于100mL反应瓶中，加入二乙二醇二甲醚溶解，氮气保护下，将反应液加热至180℃。待温度升高至指定温度，鼓氮气条件分批次加入氯代二氟乙酸钠(1.65g,10.8mmol，3.5equiv)；加毕，搅拌反应4h。待反应完全，残留物经C18反相色谱法(水:乙腈＝1:5)纯化得中间体24e，为白色固体(354.4mg，产率30％)。
LC-MS m/z(ESI)＝377.4[M+1]。
第四步：
2-(哌嗪-1-基)-5-(2,2,3,3-四氟环丙基)嘧啶(中间体24)
2-(piperazin-1-yl)-5-(2,2,3,3-tetrafluorocyclopropyl)pyrimidine
参考化合物2c的合成方法，制备得到中间体24，白色固体。中间体24可直接用于下一步反应，而不需要进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝277.4[M+1]。
实施例1
(S)-5-((1-(3-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪3(2H)-酮(化合物1)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000053
分别称取中间体1(303mg，0.979mmol，1.0equiv)，中间体2(200mg，0.979mmol，1.0equiv)，N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(372mg，0.979mmol，1.0equiv)于10mL的反应瓶中，以N,N-二甲基甲酰胺(4.0mL)溶解。向混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(0.65mL，3.916mmol，4equiv)，加毕，反应于25℃下搅拌1h。待反应完全，真空浓缩，残留物经C18反相色谱法(水:乙腈＝1:5)纯化得化合物1，为白色固体(125mg，产率25％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.33(s,1H),8.21(s,2H),7.66(s,1H),5.78(s,1H),3.97–3.80(m,6H),3.72–3.71(m,2H),3.64(dd,1H),3.61–3.44(m,3H),2.62(t,2H),1.79–1.73(m,1H),1.31–1.25(m,3H),0.98–0.95(m,2H),0.66–0.63(m,2H)。
LCMS m/z＝496.5[M+l]。
实施例2
(S)-5-((1-(3-(4-(5-环丁基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟 甲基)哒嗪3(2H)-酮(化合物2)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-cyclobutylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000054
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物2，为白色固体(157mg，产率34％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.36(s,1H),8.29(s,2H),7.66(s,1H),5.78(d,1H),3.99–3.79(m,6H),3.78–3.68(m,2H),3.68–3.54(m,3H),3.52–3.35(m,2H),2.62(t,2H),2.42–2.28(m,2H),2.17–1.86(m,5H),1.31–1.25(m,3H)。
LCMS m/z＝510.6[M+l]。
实施例3
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物3)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-fluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000055
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物3，为白色固体(70mg，产率42％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.45(d,2H),7.91(s,1H),6.30–6.26(m,1H),4.17–4.13(m,1H),3.76(t,2H),3.72–3.65(m,4H),3.53–3.50(m,4H),3.48(d,2H),2.59(t,2H),1.40–1.32(m,2H),1.15(d,3H),1.09–1.05(m,2H)。
LCMS m/z＝514.4[M+l]。
实施例4
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-羟基环丁基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物4)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-hydroxycyclobutyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)-propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000056
第一步：
1-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)环丁醇(4A)
1-(2-(piperazin-1-yl)pyrimidin-5-yl)cyclobutan-1-ol
参考中间体2c的合成方法，得化合物4A的粗品，为白色固体。化合物4A可直接用于下一步反应，而不需进一步纯化。
LCMS m/z＝235.2[M+1]。
第二步：
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-羟基环丁基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物4)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-hydroxycyclobutyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)-propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物4，为白色固体(70mg，产率26％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.47(s,2H),7.91(s,1H),6.31–6.27(m,1H),5.59(s,1H),4.23–4.03(m,1H),3.74–3.64(m,6H),3.52–3.47(m,6H),2.58(t,2H),2.40–2.34(m,2H),2.27–2.20(m,2H),1.86–1.77(m,1H),1.61–1.49(m,1H),1.14(d,3H)。
LCMS m/z＝526.3[M+1]。
实施例5
5-(((S)-1-(3-((2R，6S)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物5)
5-(((S)-1-(3-((2R,6S)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000057
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物5，白色固体(280mg，产率53％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.45(s,1H),8.18(s,2H),7.91(s,1H),6.28(dd,1H),4.50(d,3H),4.23–4.06(m,2H),3.69(s,2H),3.48(d，2H),3.03–2.85(m,2H),2.72–2.57(m,1H),2.42(s,2H),1.80–1.72(m,1H),1.18–1.00(m,8H),0.96–0.76(m,2H),0.71–0.53(m,2H)。
LCMS m/z＝524.3[M+l]。
实施例6
5-(((S)-1-(3-((2R,6S)-2,6-二甲基-4-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羰基)环丁氧基)丙-2-基)氨基)-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物6)
N-(1-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,3-difluoropiperidin-4-yl)-3-((S)-3-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)butoxy)propanamide
Figure PCTCN2021134103-appb-000058
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物6，为白色固体(60mg，产率82％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.47(s,1H),8.20(s,2H),8.13(d,1H),7.90(s,1H),6.26(d,1H),4.84–4.74(m,1H),4.47(dd,3H),4.12(s,2H),3.68–3.56(m,2H),3.48–3.42 (m,2H),3.16(t,1H),2.40–2.37(m,2H),1.80–1.73(m,2H),1.60–1.49(m,1H),1.15(s,1H),1.13(s,1H),0.93–0.83(m,2H),0.67–0.61(m,2H)。
LCMS m/z＝560.54[M+l]。
实施例7
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-羟基环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物7)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-hydroxycyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000059
第一步：
1-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)环丙烷-1-醇(7A)
1-(2-(piperazin-1-yl)pyrimidin-5-yl)cyclopropan-1-ol
参考中间体2c的合成方法，制备得到化合物7A的粗品，化合物7A可直接用于下一步反应而不需进一步纯化。
LCMS m/z＝221.3[M+l]。
第二步：
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-羟基环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物7)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-(1-hydroxycyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物7，为白色固体(16mg，产率6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.29(s,2H),7.91(s,1H),6.31–6.26(m1H),5.96(s,1H),4.20–4.11(m,1H),3.85(d,1H),3.71–3.64(m,5H),3.54(d,1H),3.51–3.46(m,5H),2.58(t,2H),1.14(d,3H),1.02–0.96(m,2H),0.90–0.85(m,2H)。
LCMS m/z＝512.3[M+l]。
实施例8
(S)-5-((1-(3-(7-(5-环丙基嘧啶-2-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛丹-4-基)-3-氧代丙氧基)丙-2-基) 氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物8)
(S)-5-((1-(3-(7-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-4,7-diazaspiro[2.5]octan-4-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000060
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物8，为白色固体(40mg，产率25％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.44(s,1H),8.14(s,2H),7.89(s,1H),6.26–6.23(m,1H),4.13(t,1H),3.81–3.40(m,9H),2.71(t,2H),2.52(s,1H),1.78–1.71(m,1H),1.11(d,3H),1.06–0.70(m,6H),0.65–0.57(m,2H)。
LCMS m/z＝522.3[M+l]。
实施例9
N-((1R，5S)-3-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己6-基)-3-((S)-2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酰胺(化合物9)
N-((1R,5S)-3-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3-azabicyclo[3.1.0]hexan-6-yl)-3-((S)-2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanamide
Figure PCTCN2021134103-appb-000061
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物9，为白色固体(76mg，产率50％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ12.47(s,1H),8.13(s,2H),8.02(d,1H),7.90(s,1H),6.27(dd,1H),4.13(t,1H),3.75(dd,2H),3.68–3.56(m,2H),3.45–3.41(m,4H),2.52(d,1H),2.33–2.31(m,1H),2.25(t,2H),1.80–1.66(m,3H),1.14(d,3H),0.92–0.80(m,2H),0.65– 0.54(m,2H)。
LCMS m/z＝508.3[M+l]。
实施例10
(S)-5-((1-(2-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪3(2H)-酮(化合物10)
(S)-5-((1-(2-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-2-oxoethoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000062
第一步：
(S)-5-((1-(2-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)丙-2-基)氨基)-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(10A)
(S)-5-((1-(2-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-2-oxoethoxy)propan-2-yl)amino)-2-(4-methoxybenzyl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物10A，为白色固体产物(200mg，产率63％)。
LC-MS m/z(ESI)＝602.6[M+1]。
第二步：
(S)-5-((1-(2-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪3(2H)-酮(化合物10)
(S)-5-((1-(2-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-2-oxoethoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
向称有化合物10A(200mg，0.33mmol，1.0equiv)的25mL反应烧瓶中依次加入三氟乙酸(1mL)和三氟甲磺酸(0.2mL，2.64mmol，8.0equiv)。加毕，反应于25℃下搅拌2h。随后，向反应液中加入15mL水淬灭。乙酸乙酯萃取(3×20mL)，以碳酸钾水溶液调节有机层的pH值调节为8至9。合并有机层、真空浓缩，将残留物通过反相(水:乙腈＝3:2)纯化得化合物10，白色固体(105mg，产率62％)。
1H NMR(600MHz,DMSO)δ12.47(s,1H),8.19(s,2H),7.94(s,1H),6.66(dd,1H),4.41–4.09(m,3H),3.76–3.61(m,4H),3.54(d,2H),3.50(dd,2H),3.40(t,2H),1.82–1.71(m,1H),1.17(d,3H),0.93–0.81(m,2H),0.68–0.59(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝482.2[M+1]。
实施例11
5-((S)-1-(3-((S)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物11)
5-(((S)-1-(3-((S)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2-(hydroxymethyl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000063
第一步：
(S)-3-(羟甲基)-4-(3-((S)-2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(11B)
tert-butyl(S)-3-(hydroxymethyl)-4-(3-((S)-2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoyl)piperazine-1-carboxylate
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物11B，为白色固体(320mg，97％)。
LC-MS m/z(ESI)＝508.3[M+1]。
第二步：
5-((S)-1-(3-((S)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(11C)
5-(((S)-1-(3-((S)-2-(hydroxymethyl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考中间体2c的合成方法，制备得到化合物11C粗品。11C可直接应用于下一步反应而不需进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝408.3[M+1]。
第三步：
5-((S)-1-(3-((S)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物11)
5-(((S)-1-(3-((S)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2-(hydroxymethyl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
将化合物11C(200mg，0.416mmol，1.0equiv)溶于N’N-二甲基乙酰胺(2.0mL)中，依次加入中间体7a(70.7mg，0.46mmol，1.1equiv)，N，N-二异丙基乙胺(0.36mL，2.08mmol，5.0equiv)。加毕，反应于120℃下搅拌5h，待反应完全，真空浓缩反应混合物。残留物经C18反相色谱法(水:乙腈＝1:1.5)纯化得化合物11，白色固体(30mg，14％)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ12.47(d,1H),8.18(d,2H),7.92(s,1H),6.29–6.27(m,1H),4.63–4.42(m,2H),4.32–4.25(m,1H),4.17–4.12(m,1H),4.03(d,J＝9.6Hz,1H),3.67(t,2H),3.49(d,1H),3.44–3.34(m,4H),3.30–3.20(m,1H),3.01–2.99(m,1H),2.80–2.69(m,2H),2.65–2.57(m,1H),1.78–1.74(m,1H),1.15(d,3H),0.95–0.79(m,2H),0.69–0.57(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝526.23[M+1]。
实施例12
(S)-1-(2-(4-(3-(2-(((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酰基)哌嗪]-1-yl)嘧啶-5-基)环丙烷-1-腈(化合物12)
(S)-1-(2-(4-(3-(2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoyl)piperazin-1-yl)pyrimidin-5-yl)cyclopropane-1-carbonitrile
Figure PCTCN2021134103-appb-000064
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物12，为白色固体(98mg，产率34％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.30(s,2H),7.90(s,1H),6.34–6.28(m1H),5.96(s,1H),4.19–4.10(m,1H),3.87(d,1H),3.73–3.62(m,5H),3.54–3.52(m,2H),3.50–3.44(m,4H),2.44(t,2H),1.20(d,3H),1.00–0.95(m,2H),0.90–0.87(m,2H)。
LC-MS m/z＝521.50[M+l]。
实施例13
5-(((S)-1-(3-(4-(5-((R)-2,2-二氟环丙基)]嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物13-1)
5-(((S)-1-(3-(4-(5-((R)-2,2-difluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
5-(((S)-1-(3-(4-(5-((S)-2,2-二氟环丙基))嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-3-代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物13-2)
5-(((S)-1-(3-(4-(5-((S)-2,2-difluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000065
第一步：
5-(((S)-1-(3-(4-(5-(2,2-二氟环丙基)]嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物13)
5-(((S)-1-(3-(4-(5-(2,2-difluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物13，为白色固体(98mg，产率34％)。
LCMS m/z＝521.50[M+l]。
第二步：
5-(((S)-1-(3-(4-(5-((R)-2,2-二氟环丙基)]嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物13-1)
5-(((S)-1-(3-(4-(5-((R)-2,2-difluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
5-(((S)-1-(3-(4-(5-((S)-2,2-二氟环丙基))嘧啶-2-基)哌啶-1-基)-3-代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物13-2)
5-(((S)-1-(3-(4-(5-((S)-2,2-difluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
消旋体13通过SFC拆分得到化合物13-1(27mg，ee％：100％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:乙醇＝70:30；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝11.738min)和化合物13-2(24mg，ee％：97.18％，手性HPLC(OX-3)；流动 相：正己烷:乙醇＝70:30；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝18.869min)。
化合物13-1： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.80(s,2H),7.87(s,1H),6.23(dd,1H),6.05(s,1H),5.00(s,2H),4.45(dd,1H),4.36–4.26(m,2H),4.15–4.09(m,2H),3.33–3.18(m,2H),1.33(d,3H),1.12(d,3H)。
化合物13-2： 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(s,2H),7.86(s,1H),6.25(dd,1H),6.10(s,1H),5.08(s,2H),4.43(dd,1H),4.31–4.24(m,2H),4.14–4.06(m,2H),3.39–3.24(m,2H),1.31(d,3H),1.13(d,3H)。
实施例14
5-(((S)-1-(3-氧代-3-(4-(5-((R)-1,2,2-三氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丙氧基)丙-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-one(化合物14-1)
5-(((S)-1-(3-oxo-3-(4-(5-((S)-1,2,2-trifluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)propoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
5-(((S)-1-(3-氧代-3-(4-(5-((S)-1,2,2-三氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丙氧基)丙-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-one(化合物14-2)
5-(((S)-1-(3-oxo-3-(4-(5-((R)-1,2,2-trifluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)propoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000066
第一步：
5-(((S)-1-(3-氧代-3-(4-(5-(1,2,2-三氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丙氧基)丙-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-one(化合物14)
5-(((2S)-1-(3-oxo-3-(4-(5-(1,2,2-trifluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)propoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物14，为白色固体(51mg，产率46％)。
LCMS m/z＝550.40[M+l]。
第二步：
5-(((S)-1-(3-氧代-3-(4-(5-((R)-1,2,2-三氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丙氧基)丙-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-one(化合物14-1)
5-(((S)-1-(3-oxo-3-(4-(5-((S)-1,2,2-trifluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)propoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
5-(((S)-1-(3-氧代-3-(4-(5-((S)-1,2,2-三氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丙氧基)丙-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-one(化合物14-2)
5-(((S)-1-(3-oxo-3-(4-(5-((R)-1,2,2-trifluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)propoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
消旋体14通过SFC拆分得到化合物14-1(30mg，ee％：100％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:乙醇＝70:30；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝15.850min)和化合物14-2(29mg，ee％：100％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:乙醇＝70:30；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝16.936min)。
化合物14-1： 1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.59(d,2H),7.92(s,1H),6.28(dd,1H),4.17–4.13(m,1H),3.80(t,2H),3.76(dd,2H),3.71–3.64(m,2H),3.53(t,4H),3.49(d,2H),2.59(t,3H),2.47–2.38(m,1H),1.15(d,3H)。
化合物14-2： 1H NMR(600MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.59(d,2H),7.91(s,1H),6.28(dd,1H),4.15(t,1H),3.80(t,2H),3.76(t,2H),3.72–3.63(m,2H),3.57–3.46(m,6H),2.67–2.57(m,3H),2.47–2.37(m,1H),1.15(d,3H)。
实施例15
5-((2S)-1-(3-(3-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,6-二氮杂环[3.1.1]庚烷-6-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物15)
5-(((2S)-1-(3-(3-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,6-diazabicyclo[3.1.1]heptan-6-yl)-3-oxopr opoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000067
Figure PCTCN2021134103-appb-000068
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物15，为白色固体(270mg，产率44％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.48(s,1H),8.18–8.14(m,2H),7.81(d,1H),6.20(s,1H),4.61(s,1H),4.38–4.36(m,1H),4.00–3.96(m,1H),3.90–3.79(m,2H),3.70–3.65(m,1H),3.61–3.56(m,3H),3.41–3.73(m,1H),2.59(d,1H),2.42–2.31(m,1H),2.29–2.20(m,1H),1.77–1.79(m,1H),1.53(d,1H),1.03–1.01(m,3H),0.87–0.82(m,2H),0.61–0.55(m,2H)。
LCMS m/z＝508.10[M+l]。
实施例16
5-((2S)-1-(3-(8-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物16)
5-(((2S)-1-(3-(8-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000069
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物16，为白色固体(128mg，产率20％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.44(s,1H),8.17(d,2H),7.91(s,1H),6.28(s,1H),4.99–4.55(m,2H),4.34–4.06(m,3H),3.68(t,2H),3.48(t,2H),3.20–3.08(m,1H),2.95(dd,1H),2.78–2.64(m,1H),1.81–1.70(m,1H),1.14(d,3H),1.10(d,1H),1.02(dd,3H),0.96(d, 1H),0.89–0.82(m,2H),0.65–0.59(m,2H)。
LCMS m/z＝522.10[M+l]。
实施例17
5-((2S)-1-(3-(3-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-8-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物17)
5-(((2S)-1-(3-(3-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000070
称取2-氯-5-环丙基嘧啶7a(92mg，0.6mmol，1.0equiv)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，依次加入中间体15(240mg，0.6mmol，1.0equiv)和N，N-二异丙基乙胺(0.5mL，3mmol，5.0equiv)，并将反应于120℃油浴下加热搅拌1h。将反应液冷却至室温，减压蒸馏。残留物经C18反相色谱法(水:乙腈＝1:5)纯化得化合物17，为白色固体(78mg，产率25％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.46(s,1H),8.15(d,2H),7.89(d,1H),6.26(dd,1H),4.59(d,1H),4.46–4.08(m,6H),3.71–3.63(m,2H),3.48(d,2H),2.98(dd,1H),2.94–2.82(m,1H),2.62–2.52(m,1H),1.90–1.81(m,1H),1.67(d,1H),1.65–1.45(m,2H),1.12(dd,3H),0.90–0.79(m,2H),0.68–0.54(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝522.20[M+1]。
实施例18
5-((S)-1-(3-((2R，5S)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物18)
5-(((S)-1-(3-((2R,5S)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,5-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000071
Figure PCTCN2021134103-appb-000072
参考化合物1的合成方法，制备得到到化合物18为白色固体(40mg，产率50％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.44(s,1H),8.17(d,2H),7.91(s,1H),6.28(s,1H),4.89–4.59(m,2H),4.26(d,1H),4.24–4.06(m,2H),3.68(t,2H),3.48(t,2H),3.44–3.40(m,1H),3.20–3.16(m,1H),3.12–3.01(m,1H),2.98–2.93(m,1H),1.85–1.67(m,1H),1.14(d,3H),δ1.12–0.94(m,6H),0.90–0.82(m,2H),0.67–0.56(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝524.20[M+1]。
实施例19
5-((2S)-1-(3-(5-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,5-二氮杂环[2.2.1]庚烷-2-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物19)
5-(((2S)-1-(3-(5-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000073
参考化合物1的合成方法，制备得到到化合物19，为白色固体(80mg，产率31％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.47(s,1H),8.13(s,2H),7.85(d,1H),6.28–6.21(m,1H),4.86–4.69(m,2H),4.06(d,1H),3.69–3.56(m,2H),3.53(d,1H),3.49–3.44(m,2H),3.39(d,2H),3.31–3.27(m,1H),2.65–2.53(m,2H),2.36–2.25(m,1H),1.89(d,1H),1.77–1.70(m,1H),1.13–1.01(m,3H),0.86–0.83(m,2H),0.63–0.51(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝508.20[M+1]。
实施例20
5-((S)-1-(3-((S)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2-甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物20-1)
5-(((S)-1-(3-((S)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2-methylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
5-((S)-1-(3-((R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2-甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物20-2)
5-(((S)-1-(3-((R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2-methylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000074
第一步：
叔丁基3-甲基-4-(3-((S)-2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)哌嗪-1-羧酸酯(20B)
tert-butyl 3-methyl-4-(3-((S)-2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoyl)piperazine-1-carboxylate
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物20B，为白色固体(230mg，产率72％)。
LC-MS m/z(ESI)＝492.51[M+1]。
第二步：
5-((2S)-1-(3-(2-甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(20C)
5-(((2S)-1-(3-(2-methylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考中间体2c的合成方法，制备得到化合物20C粗品，为白色固体。化合物20C可直接用于下一步反应，而不需进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝392.40[M+1]。
第三步：
5-((2S)-1-(3-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2-甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物20)
5-(((2S)-1-(3-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2-methylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物19的合成方法，制备得到化合物20，为白色固体(140mg，产率40％)。
LC-MS m/z(ESI)＝510.53[M+1]。
第四步：
5-((S)-1-(3-((S)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2-甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物20-1)
5-(((S)-1-(3-((S)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2-methylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
5-((S)-1-(3-((R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2-甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物20-2)
5-(((S)-1-(3-((R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2-methylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
消旋体化合物20通过SFC拆分得到化合物20-1(35mg，ee％：99.74％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:异丙醇＝80:20；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝8.157min)和化合物20-2(29mg，ee％：98.80％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:异丙醇＝80:20；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝6.596min)。
化合物20-1： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.17(s,2H),7.91(s,1H),6.29–6.26(m,1H),4.61(s,1H),4.48(d,1H),4.35(d,2H),4.23(d,1H),4.15(t,2H),3.76(d,1H),3.66(t,2H),3.47(d,2H),3.05(t,1H),3.00–2.89(m,1H),2.83(q,1H),1.79–1.72(m,1H),1.14(d,3H),1.07(d,1H),0.98(d,1H),0.89–0.83(m,2H),0.65–0.60(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝510.60[M+1]。
化合物20-2： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.17(s,2H),7.91(s,1H),6.29–6.26(m,1H),4.62(s,1H),4.48(d,1H),4.37(t,,2H),4.23(d,,1H),4.14(t,2H),3.75(d,1H),3.66(d,2H),3.47(d,2H),3.04(s,1H),2.94(s,1H),2.81(t,1H),1.79–1.72(m,1H),1.14(d,3H),1.07(d,1H),0.98(d,1H),0.89–0.83(m,2H),0.66–0.60(m,2H)。
实施例21
5-((S)-1-(3-((2S，5R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物21)
5-(((S)-1-(3-((2S,5R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,5-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000075
第一步：
叔丁基(2R，5S)-2,5-二甲基-4-(3-((S)-2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酰基)哌嗪-1-羧酸盐(21B)
tert-butyl(2R,5S)-2,5-dimethyl-4-(3-((S)-2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoyl)piperazine-1-carboxylate
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物21B，为白色固体(120mg，产率61％)。
LC-MS m/z(ESI)＝506.54[M+1]。
第二步：
5-((S)-1-(3-((2S，5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(21C)
5-(((S)-1-(3-((2S,5R)-2,5-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考中间体2c的合成方法，制备得到化合物21C粗品，为白色固体。化合物21C可直接应用于下一步反应，而不需进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝406.42[M+1]。
第三步：
5-((S)-1-(3-((2S，5R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物21)
5-(((S)-1-(3-((2S,5R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,5-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物19的合成方法，制备得到化合物21，为白色固体(40mg，产率23％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.45(s,1H),8.17(d,2H),7.91(s,1H),6.32–6.25(m,1H),4.85–4.66(m,2H),4.25(s,1H),4.24–4.11(m,2H),3.74–3.63(m,2H),3.48(t,2H),3.41(m,1H),3.22–3.15(m,1H),3.10(m,1H),2.95(m,1H),1.74(m,1H),1.14(m,3H),1.11–0.94(m,6H),0.86(m,2H),0.66–0.59(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝524.56[M+1]。
实施例22
N-((3R，4R)-1-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-2-((S)-2-((6-氧基-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙酰胺(化合物22)
N-((3R,4R)-1-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3-hydroxypiperidin-4-yl)-2-((S)-2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanamide
Figure PCTCN2021134103-appb-000076
第一步：
叔丁基(3R，4R)-3-羟基-4-(2-((S)-2-((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙酰胺)哌啶-1-羧酸酯(22B)
tert-butyl(3R,4R)-3-hydroxy-4-(2-((S)-2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluorometh-yl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanamido)piperidine-1-carboxylate
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物22B，为白色固体(220mg，产率60％)。
LC-MS m/z(ESI)＝628.66[M+1]。
第二步：
N-((3R，4R)-3-羟基哌啶-4-基)-2-((S)-2-((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧基-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)酰胺(22C)
N-((3R,4R)-3-hydroxypiperidin-4-yl)-2-((S)-2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanamide
参考化合物2c的合成方法，制备得到化合物22C粗品，为白色固体。化合物22C可直接应用于下一步反应，而不需进一步纯化。
LC-MS m/z(ESI)＝528.55[M+1]。
第三步：
N-((3R，4R)-1-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-2-((S)-2-((1-(4-甲氧基苄基)-6-氧基-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙胺(22D)
N-((3R,4R)-1-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3-hydroxypiperidin-4-yl)-2-((S)-2-((1-(4-methoxybenzyl)-6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanamide
参考化合物19的合成方法，制备得到化合物22D，为白色固体(110mg，产率45％)。
LC-MS m/z(ESI)＝646.68[M+1]。
第四步：
N-((3R，4R)-1-(5-环丙基嘧啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)-2-((S)-2-((6-氧基-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙酰胺(化合物22)
N-((3R,4R)-1-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-3-hydroxypiperidin-4-yl)-2-((S)-2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanamide
参考中间体1i的合成方法，制备得到化合物22，为白色固体(41mg，产率45％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.45(d,J＝24.8Hz,1H),8.16(s,2H),7.95(d,1H),7.55–7.52(m,1H),6.49–6.29(m,1H),4.68–4.43(m,2H),4.16(s,1H),3.85–3.78(m,1H),3.72–3.64(m,1H),3.46–3.29(m,5H),2.78(d,2H),1.79–1.73(m,2H),1.20–1.14(m,6H),0.90–0.81(m,2H),0.65–0.57(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝526.53[M+1]。
实施例23
(R)-5-(2-((3-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物23-1)
(R)-5-(2-((3-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
(S)-5-(2-((3-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物23-2)
(S)-5-(2-((3-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000077
Figure PCTCN2021134103-appb-000078
第一步：
2-(4-甲氧基苄基)-5-(2-((3-氧代-3-(4-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(23A)
2-(4-methoxybenzyl)-5-(2-((3-oxo-3-(4-(5-(trifluoromethyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)propoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物23A，为白色固体(810mg，产率66％)。
LC-MS m/z(ESI)＝670.25[M+1]。
第二步：
5-(2-((3-氧代-3-(4-(5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物23)
5-(2-((3-oxo-3-(4-(5-(trifluoromethyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)propoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考中间体1i的合成方法，制备得到化合物23，为白色固体(485mg，产率73％)。
LC-MS m/z(ESI)＝550.19[M+1]。
第三步：
(R)-5-(2-((3-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物23-1)
(R)-5-(2-((3-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
(S)-5-(2-((3-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物23-2)
(S)-5-(2-((3-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl) pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
消旋体化合物23通过SFC拆分得到化合物23-1(54mg，ee％：100％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:乙醇＝70:30；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝11.738min)和化合物23-2(56mg，ee％：97.18％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:乙醇＝70:30；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝18.869min)。
化合物23-1： 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.36(s,1H),8.19(s,2H),8.01(s,1H),4.56–4.47(m,1H),3.69–3.58(m,6H),3.52–3.44(m,7H),3.22–3.16(m,1H),2.55–2.52(m,2H),2.06(q,J＝6.4Hz,1H),1.87(d,J＝5.1Hz,1H),1.76(d,J＝5.2Hz,1H),1.62(d,J＝3.8Hz,2H),0.90–0.83(m,2H),0.66–0.60(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝550.19[M+1]。
化合物23-2： 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.36(s,1H),8.19(s,2H),8.01(s,1H),4.53–4.50(m,1H),3.70–3.57(m,6H),3.52–3.44(m,7H),3.22–3.18(m,1H),2.55–2.51(m,2H),2.10–2.03(m,1H),1.87(d,J＝5.0Hz,1H),1.82–1.72(m,1H),1.62(t,J＝5.2Hz,2H),0.90–0.83(m,2H),0.66–0.60(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝550.19[M+1]。
实施例24
5-((R)-2-((3-((2S，6R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物24-1)
5-((R)-2-((3-((2S,6R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
5-((S)-2-((3-((2S，6R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物24-2)
5-((S)-2-((3-((2S,6R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000079
Figure PCTCN2021134103-appb-000080
第一步：
5-(2-((3-((2R，6S)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(24A)
5-(2-((3-((2R,6S)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-2-(4-methoxybenzyl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物24A，为黄色油状物(300mg，产率45％)。
LCMS m/z＝670.33[M+l]。
第二步：
5-(2-((3-((2R，6S)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物24)
5-(2-((3-((2R,6S)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考中间体1i的合成方法，制备得到化合物24，为白色固体(180mg，产率73％)。
LC-MS m/z(ESI)＝550.27[M+1]。
第三步：
5-((R)-2-((3-((2S，6R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物24-1)
5-((R)-2-((3-((2S,6R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
5-((S)-2-((3-((2S，6R)-4-(5-环丙基嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物24-2)
5-((S)-2-((3-((2S,6R)-4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)-2,6-dimethylpiperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
消旋体化合物24通过SFC拆分得到化合物24-1(54mg，ee％：100％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:乙醇＝70:30；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝5.05min)和化合物24-2(56mg，ee％：97.18％，手性HPLC(OX-3)；流动相：正己烷:乙醇＝70:30；柱温：35；柱压：80bar；流速：2mL/min；检测器信号通道：214nm@4.8nm；二极管阵列检测器起始波长：200nm；二极管阵列检测器终止波长：400nm；RT＝7.49min)。
化合物24-1: 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.34(s,1H),8.17(s,2H),8.01(s,1H),4.50(d,3H),4.19–4.03(m,1H),3.67(s,2H),3.52–3.49(m,2H),3.40–3.54(m,2H),3.21(s,1H),2.95(s,2H),2.45–2.37(m,2H),2.07(s,1H),1.87(s,1H),1.79–1.72(m,1H),1.63(d,2H),1.08(d,6H),0.90–0.83(m,2H),0.66–0.58(m,2H)。
化合物24-1: 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.34(s,1H),8.17(s,2H),8.01(s,1H),4.50(d,3H),4.09(s,1H),3.66(s,2H),3.51(d,2H),3.43–3.34(m,2H),3.20(s,1H),2.96(s,2H),2.45–2.34(m,2H),2.07(s,1H),1.87(s,1H),1.81–1.70(m,1H),1.62(s,2H),1.08(d,6H),0.90–0.82(m,2H),0.66–0.62(m,2H)。
实施例25
(S)-5-((1-(3-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪3(2H)-酮(化合物25)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000081
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物25，为白色固体(120mg，产率43％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.36(s,1H),7.91(s,1H),7.72(s,1H),6.27(dd,1H),3.70-3.65(m,2H),3.56–353(m,4H),3.48(d,2H),3.01-2.98(m,4H),2.58(t,2H),2.07–1.95(m,1H),1.15(d,3H),0.98-0.90(m,2H),0.84–0.73(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝563.20[M+1]。
实施例26
(S)-5-环丙基-2-(4-(3-(2-((6-氧代-5-(三氟甲基)-1,6-二氢哒嗪-4-基)氨基)丙氧基)丙基)哌嗪-1-基)烟腈(化合物26)
(S)-5-cyclopropyl-2-(4-(3-(2-((6-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)propoxy)propanoyl)piperazin-1-yl)nicotinonitrile
Figure PCTCN2021134103-appb-000082
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物26，白色固体(68mg，产率26％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.45(s,1H),8.29(s,1H),7.91(s,1H),7.79(s,1H),6.28(dd,1H),4.21–4.09(m,2H),3.68-3.61(m,4H),3.58(d,2H),3.49-3.37(m,4H),2.59(t,2H),1.96-1.92(m,1H),1.15(d,3H),0.98–0.88(m,2H),0.77–0.66(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝520.22[M+1]。
实施例27
(S)-5-((1-(3-(4-(5-环丙基吡嗪-2-基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物27)
(S)-5-((1-(3-(4-(5-cyclopropylpyrazin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oxopropoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000083
Figure PCTCN2021134103-appb-000084
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物27，白色固体(76mg，产率32％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.43(s,1H),8.26(s,1H),7.65(s,1H),7.58(s,1H),6.24(dd,1H),4.33–4.26(m,2H),3.74–3.63(m,4H),3.52(d,2H),3.55-3.46(m,4H),2.59(t,2H),1.99-1.90(m,1H),1.15(d,3H),0.96–0.84(m,2H),0.79–0.63(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝496.20[M+1]。
实施例28
5-(((2S)-1-((4-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-基)氧基)丙-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物28)
5-(((2S)-1-((4-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-4-oxobutan-2-yl)oxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000085
第一步：
5-(((2S)-1-((4-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-基)氧基)丙-2-基)氨基)-2-(4-甲氧基苄基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(28A)
5-(((2S)-1-((4-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-4-oxobutan-2-yl)oxy)propan-2-yl)amino)-2-(4-methoxybenzyl)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考中间体1g的合成方法，制备得到化合物28A，为白色固体(34mg，产率64％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.46(s,1H),8.18(d,2H),7.92(s,1H),6.29(s,1H),4.90–4.57(m,2H),4.26(t,1H),4.24–4.11(m,2H),3.65(t,2H),3.43(t,2H),3.44–3.40(m,1H),3.20–3.16(m,1H),3.12–3.01(m,1H),2.88–2.73(m,1H),1.84–1.66(m,1H),1.12(d,3H),δ1.10–0.94(m,3H),0.91–0.80(m,2H),0.62–0.55(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝630.70[M+1]。
第二步：
5-(((2S)-1-((4-(4-(5-环丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-基)氧基)丙-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物28)
5-(((2S)-1-((4-(4-(5-cyclopropylpyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)-4-oxobutan-2-yl)oxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
参考化合物15的合成方法，制备得到化合物28，为白色固体(22mg，80％产率)
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.43(s,1H),8.26(s,1H),7.65(s,1H),7.58(s,1H),6.24(dd,1H),4.33–4.26(m,2H),3.74–3.63(m,4H),3.52(d,2H),3.55–3.46(m,4H),2.59–2.55(m,2H),1.99-1.90(m,1H),1.15(d,3H),0.96–0.84(m,2H),0.79–0.63(m,2H)。
LC-MS m/z(ESI)＝510.20[M+1]。
实施例29
(S)-5-((1-(3-氧代-3-(4-(5-(2,2,3,3-四氟环丙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)丙氧基)丙烷-2-基)氨基)-4-(三氟甲基)哒嗪-3(2H)-酮(化合物29)
(S)-5-((1-(3-oxo-3-(4-(5-(2,2,3,3-tetrafluorocyclopropyl)pyrimidin-2-yl)piperazin-1-yl)propoxy)propan-2-yl)amino)-4-(trifluoromethyl)pyridazin-3(2H)-one
Figure PCTCN2021134103-appb-000086
参考化合物1的合成方法，制备得到化合物29，白色固体(66mg，产率43％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.45(s,1H),8.65(s,1H),7.91(s,1H),6.30–6.26(m,1H),4.17–4.12(m,1H),3.85–3.65(m,6H),3.64–3.46(m,7H),2.59(t,3H),1.15(d,3H)。
LC-MS m/z(ESI)＝568.20[M+1]。
生物学试验
PARP酶学生化试验方案：
1、包被：1×histone mixture(25μL/孔)过夜包被。
2、封闭：加入Blocking buffer 100μL/孔，封闭90min。
3、化合物稀释：将化合物按照1:3比例稀释8个浓度，起始浓度为1000nM。
4、向包含10×PARP buffer、10×PARP Assay mixture、5×Activated DNA、蒸馏水的12.5μL混合物中，加入2.5μL不同浓度化合物、10μL酶(1-2ng/μL)，室温孵育1h。
5、加入稀释Streptavidin-HRP孵育30min，加入显色液进行显色。
6、用酶标仪进行化学发光读数。
IC 50：是指PARP酶活性受到50％抑制时的化合物浓度。
表1.化合物对PARP-7酶抑制活性
Figure PCTCN2021134103-appb-000087
结论：本发明化合物对PARP-7靶蛋白具有显著的生物抑制活性。
表2.化合物对PARP-1、PARP-7亚型选择性
Figure PCTCN2021134103-appb-000088
结论：相对于对照品，本发明化合物具备更强的PARP-7选择性。
NCI-H1373细胞增殖抑制实验方案
1、将NCI-H1373细胞接种于96孔细胞培养板中(1500个/孔)，每孔体积为80μL。置于37℃、5％CO 2培养箱孵育过夜。
2、将化合物用DMSO配制成10mM母液，用1640培养基稀释8个浓度(1:5)，终浓度分别为10000，2000，400，80，16，3.2，0.64，0.128nM。
3、以未经药物处理的细胞为对照组，其余细胞分别接受各药物浓度处理，同时设立无细胞的培养孔作为空白调零组，每组设2个平行孔，放入37℃、5％CO 2培养箱培养。
4、培养6天后，从培养箱中取出96孔板，每孔加入100μL Cell Titer Blue工作液，震荡2min，孵育10min。
5、用酶标仪进行化学发光读数。
6、计算细胞存活率＝(处理组荧光强度/对照组荧光强度)×100％，通过曲线拟合计算半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC 50)。
IC 50：是指细胞增殖受到50％抑制时的化合物浓度。
表3.化合物抑制NCI-H1373细胞增殖活性
Figure PCTCN2021134103-appb-000089
结论：本发明化合物对NCI-H1373细胞增殖具有显著的抑制效果。
药物代谢酶CYP450诱导作用
1、孵育贴壁原代人肝细胞(3个供体)，实验条件如下：细胞密度为0.7×10 6cell/mL，温度37.0℃，5％CO 2。
2、化合物与细胞孵育2-3天后，测试CYP450的酶活性。
3、试验数据处理：％相对阳性对照活性(％of PC)＝(给化合物组样本活性-空白对照组样本活性)/(阳性对照组样本活性-空白对照组样本活性)×100％
阳性对照组：肝细胞与CYP450的诱导剂孵育(CYP2B6亚型对应苯巴比妥1000μM，CYP3A4亚型对应利福平25μM)。
空白对照组：细胞与含相同含量(v/v)有机溶剂的培养基孵育。
表4.化合物对代谢酶CYP450的诱导实验
Figure PCTCN2021134103-appb-000090
结论：本发明化合物对代谢酶CYP450活性没有潜在诱导作用，而对照品有明显的诱导活性。
本发明说明书对具体实施方案进行了详细描述，本领域技术人员应认识到，上述实施方案是示例性的，不能理解为对本发明的限制，对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，通过对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰获得技术方案也落在本发明的权利要求书的保护范围内。

Claims (33)

  1. 通式(I)的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2021134103-appb-100001
    其中
    R、R′、R″各自独立地为H或C 1-6烷基；或者
    R和R′或者R和R″与相连的原子形成4至8元杂环烷基；
    R 1、R 2各自独立地为H或C 1-6烷基；
    L 1为键或C＝O；
    L为键或NH；
    C 1为6元、7元或8元杂环基，优选为包含1个、2个或3个N原子的6元、7元或8元杂环基，更优选为
    Figure PCTCN2021134103-appb-100002
    Figure PCTCN2021134103-appb-100003
    R 3、R 4各自独立地为H、卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个选自OH或者CN的取代基所取代；
    C为6元杂芳基，优选为包含1个、2个或3个N原子的6元杂芳基，更优选为
    Figure PCTCN2021134103-appb-100004
    Figure PCTCN2021134103-appb-100005
    所述6元杂芳基任选地进一步被1或多个选自CN或者任选地被1或多个卤素取代的C 1-6烷基的取代基所取代；
    C 2为C 3-6碳环；
    R 5各自独立地为H、卤素、CN或OH；
    n为1或2；
    m为0、1、2、3、4或5。
  2. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中所述杂环烷基为含有1个N原子的4元、5元或6元杂环烷基。
  3. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R为H。
  4. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R′、R″各自独立地为H或C 1-6烷基；
  5. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R 1和 R 2为H。
  6. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中L 1为C＝O。
  7. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中L为键。
  8. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中L 1为C＝O，L为NH。
  9. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中L 1为C＝O，L为键。
  10. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中C 1为
    Figure PCTCN2021134103-appb-100006
  11. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R 3、R 4各自独立地为卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个OH取代。
  12. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中C为
    Figure PCTCN2021134103-appb-100007
  13. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中C 2为C 3碳环。
  14. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R 5为卤素。
  15. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中n为2。
  16. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中m为0。
  17. 通式(II)的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2021134103-appb-100008
    其中
    R 1、R 2各自独立地选自H或者C 1-6烷基；
    R 3、R 4各自独立地选自H、卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个选自OH或者CN的取代基所取代；
    R 5各自独立地选自H、卤素、CN或OH；
    L为键或-NH-；
    C 1为
    Figure PCTCN2021134103-appb-100009
    C 2为C 3-5碳环；
    n为1或2；
    m为0、1、2、3、4或5。
  18. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R 1和R 2为H。
  19. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中L为键。
  20. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R 3、R 4各自独立地为卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个OH取代。
  21. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中C 2为C 3碳环。
  22. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R 5为卤素。
  23. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中n为2。
  24. 如权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中m为0。
  25. 化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其选自以下结构：
    Figure PCTCN2021134103-appb-100010
    Figure PCTCN2021134103-appb-100011
    Figure PCTCN2021134103-appb-100012
  26. 用于制备通式(I)、(II)化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐的中间体化合物或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其具有通式(III)、(IV)、(V)或(VI)所示的化合物：
    Figure PCTCN2021134103-appb-100013
    其中
    R、R′、R″各自独立地为H或C 1-6烷基；或者
    R和R′或者R和R″与相连的原子形成4至8元杂环烷基；
    R 1、R 2各自独立地为H或者C 1-6烷基；
    L 1为键或者C＝O；
    L为键或者NH；
    C 1为6至8元杂环基，优选为
    Figure PCTCN2021134103-appb-100014
    Figure PCTCN2021134103-appb-100015
    R 3、R 4各自独立地为H、卤素或C 1-6烷基，其中所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个选自OH或者CN的取代基所取代；
    C为6元杂芳基，优选为
    Figure PCTCN2021134103-appb-100016
    所述6元杂芳基任选地进一步被1或多个选自CN或C 1-6烷基的取代基所取代，所述C 1-6烷基任选地进一步被1或多个卤素所取代；
    C 2为C 3-6碳环；
    R 5各自独立地为H、卤素、CN或OH；
    C 3为6至8元杂环基，优选为
    Figure PCTCN2021134103-appb-100017
    Figure PCTCN2021134103-appb-100018
    X 1为H或NH 2；
    n为1或2；
    m为0、1、2、3、4或5。
  27. 如权利要求26所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中所述杂环烷基为含有1个N原子的4元、5元或6元杂环烷基。
  28. 如权利要求26所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中C 1为为包含1个、2个或3个N原子的6元、7元或8元杂环基。
  29. 如权利要求26所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其中C为包含1个、2个或3个N原子的6元杂芳基。
  30. 根据权利要求26所述的中间体化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其为以下结构：
    Figure PCTCN2021134103-appb-100019
    Figure PCTCN2021134103-appb-100020
  31. 药物组合物，其包含：
    (1)权利要求1至25中任一项所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐；
    (2)任选的一种或者多种其他活性成分；以及
    (3)药学上可接受的载体和/或赋形剂。
  32. 权利要求1至25中任一项所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐或者权利要求31所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途；优选地，所述肿瘤的形成与PARP相关；更优选地，所述PARP为PARP-7。
  33. 权利要求1至25中任一项所述的化合物，或者其立体异构体或药学上可接受的盐或者权利要求31所述的药物组合物在制备PARP抑制剂中的用途；优选地，所述PARP为PARP-7。
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