WO2022075059A1 - サーチュイン１活性化剤 - Google Patents

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activator
present
skin
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辰也 金
優美 白井
喜範 片倉
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株式会社 資生堂
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Definitions

  • the present invention provides a sirtuin 1 activator.
  • Sirtuin gene which is a NAD + -dependent deacetylase
  • Sirtuin genes have been identified from sirtuin 1 to sirtuin 7.
  • Sirtuin 1 is attracting attention.
  • the protein targeted by sirtuin 1 has been identified, and it is considered from the study that it is involved in anti-aging, intracellular metabolism, energy expenditure, inflammation, stress response pathway, etc. (Non-Patent Document 1).
  • Non-Patent Document 1 Non-Patent Document 1
  • Japanese Unexamined Patent Publication No. 2019-218296 Japanese Unexamined Patent Publication No. 2018-48152 Japanese Unexamined Patent Publication No. 2018-199680 Japanese Unexamined Patent Publication No. 2017-66128 Japanese Unexamined Patent Publication No. 2014-166982 Japanese Unexamined Patent Publication No. 2013-241380 Japanese Unexamined Patent Publication No. 2012-211106
  • An object of the present invention is to provide a sirtuin 1 activator.
  • the present inventors consist of cowberry, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi, narco lily, okura, mugwort, edamame, barley young leaves, yuzu, chia seed, kikyo, gymnema, and rose hips. It was found that one or more herbal medicines selected from the group function as a sirtuin 1 activator. Furthermore, the present inventors have also found that these substances act on skin cells via intestinal cells.
  • sirtuin 1 activator according to (1) or (2), wherein the sirtuin 1 activator activates sirtuin 1 of skin cells by oral administration.
  • a food composition for beautiful skin containing the sirtuin 1 activator according to any one of (1) to (3).
  • a food composition for bee pollen containing a plurality of crude drugs as an ingredient for bee pollen having a function of activating sirtuin 1 by oral administration.
  • Sirtuin 1 can be activated by administration of the sirtuin 1 activator of the present invention. According to the present invention, it is possible to provide a composition or an internal preparation containing a sirtuin 1 activator.
  • FIG. 1 is a schematic diagram of the Transwell method used in Experiment 2.
  • FIG. 2 shows the expression level of sirtuin 1 in HaCat (SIRT1p-EGFP) when each sample was added in Experiment 2 as a relative value with a negative control (DMSO only) as 100.
  • Sirtuin 1 can be activated by administration of the sirtuin 1 activator of the present invention.
  • Activation of the Sirtuin 1 gene is a disease in the skin such as anti-aging of the skin, prolongation of life span, repair of DNA damage caused by ultraviolet rays, anti-inflammatory, suppression of oxidative stress, suppression of wrinkles, whitening, suppression of melanin, melanoma, and xeroderma pigmentosum. It has been suggested that it is useful for the treatment and improvement of melanin (Non-Patent Documents 1 to 5).
  • the sirtuin 1 activator of the present invention is expected to contribute to beautiful skin by activating sirtuin 1 of skin cells via the intestinal tract, especially by oral administration.
  • skin beautification is mediated by activation of sirtuin 1 in skin cells such as skin anti-aging, life extension, repair of DNA damage by ultraviolet rays, anti-inflammatory, oxidative stress suppression, wrinkle suppression, whitening, and melanin suppression.
  • skin beautification is mediated by activation of sirtuin 1 in skin cells such as skin anti-aging, life extension, repair of DNA damage by ultraviolet rays, anti-inflammatory, oxidative stress suppression, wrinkle suppression, whitening, and melanin suppression.
  • Activation of sirtuin 1 means, for example, enhancing the expression of the sirtuin 1 gene, for example, the expression of the sirtuin 1 gene is increased when the sirtuin 1 activator is given, as compared with the state (control) in which nothing is given. It can mean that it is enhanced. For example, it may mean that it is enhanced with a statistically significant difference (for example, Student's t-test) with a significance level of 5%.
  • the activation of the sirtuin 1 gene in the present invention means that the expression of the sirtuin 1 gene is, for example, 5% when the sirtuin 1 activator is given, as compared with the state (control) in which nothing is given.
  • sirtuin is determined by any known technique, for example, a method of transfecting a skin cell with the SIRT1 promoter as described in Non-Patent Document 5 and determining the change in EGFP fluorescence derived from SIRT1p-EGFP. be able to.
  • the sirtuin 1 activator of the present invention activates sirtuin 1 of skin cells, especially via intestinal cells.
  • Activating sirtuin 1 of skin cells via intestinal cells means that the active ingredient of the present invention is administered to intestinal cells and absorbed by the intestinal cells so that the same ingredient as the active ingredient is directly produced in the skin cells. Or the active ingredient is absorbed by the intestinal cells and reaches the skin cells in a decomposed or modified state, or the intestinal cells take up the active ingredient to release another different component, and the different components are the skin cells. It refers to the final activation of sirtuin 1 in skin cells via direct or indirect pathways such as acting on.
  • activation of sirtuin 1 of skin cells by oral administration can be mentioned.
  • Activating sirtuin 1 of skin cells by oral administration means that the active ingredient of the present invention is absorbed through the intestinal tract and taken up from the intestine by orally ingesting the sirtuin 1 activator of the present invention. It means that the substance acts directly or indirectly to finally activate sirtuin 1 in skin cells.
  • Non-Patent Documents 6-8 carnosine taken up from the intestine does not directly act on the brain, but activates CREB in intestinal cells, resulting in enhanced BDNF production. Indirect effects such as BDNF activating nerve cells and improving brain function have been reported. Furthermore, it has been suggested that such cerebral-intestinal correlation activation is mediated by exosomes. In other words, it is unclear what kind of action the component has on the target cells even if a certain component is given to the intestine, so give the test substance to the intestinal cells and then confirm what kind of action it will have on the target cells. There is a need.
  • Such actions via intestinal cells can be measured by various methods including in vivo, in vitro, ex vivo and the like. For example, it can be determined by administering the test substance to the intestinal cell layer and determining the activity of sirtuin 1 in the skin cells via the intestinal cell layer.
  • a test substance is added to one side of a layer of intestinal cells such as Caco-2, and skin cells such as HaCaT that pass through this layer and are present on the other side of the layer.
  • It can be determined by the Transwell method to measure the activity of sirtuin 1 in.
  • the Transwell method is known in the art or can be easily implemented by those skilled in the art. However, the measuring method is not limited to the above method, and any other method may be adopted.
  • in vitro methods such as administering a test substance to an intestinal cell culture medium and adding the supernatant to skin cells, or measuring the activity of sirtuin 1 in the skin after oral ingestion by an animal such as a human. You may adopt the in vivo method such as doing.
  • the present invention is selected from the group consisting of cowberry, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi, narco lily, okra, mugwort, edamame, barley young leaf, yuzu, chia seed, kikyo, gymnema, and rose hip.
  • a sirtuin 1 activator containing a plurality of crude drugs as an active ingredient is provided.
  • the present invention is selected from the group consisting of cowberry, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi, narco lily, okra, mugwort, edamame, barley young leaves, yuzu, chia seeds, kikyo, gymnema, and rose hips.
  • compositions containing one or more herbal medicines as active ingredients may be in the form of an oral preparation or an enteral preparation, or may be for beautiful skin.
  • the cowberry (Vaccinium vitis-idaea L.) used in the present invention is a shrub of the genus Vaccinium in the family Ericaceae. It is preferable to use fruits. Fruits include resveratrol, anthocyanins, proanthocyanidins, etc.
  • Echinacea purpurea used in the present invention is a perennial plant belonging to the genus Echinacea purpurea in the family Asteraceae. It is preferable to use the above-ground juice of Echinacea at the time of flowering. Echinacea has been reported to have antibacterial and antiviral effects.
  • the bee pollen used in the present invention is a pollen grain (pollen load) collected by honeybees. There are reports that it contains nutrients such as vitamins and minerals. It may be any pollen such as cistus, oak, rose, echium, and chrysanthemum pollen. The place where bee pollen is collected is not limited to Europe such as Spain and Asia such as China.
  • the wolfberry fruit used in the present invention is a fruit of wolfberry (Lycium chinense Miller or L. barbarum Linne (Solanaceae)), which is a deciduous shrub of the Solanaceae family, and contains zeaxanthin, betaine, polyphenol and the like. Lycium chinense has been reported to have a nourishing tonic effect, a blood flow improving effect, a whitening effect, a DNA damage repairing effect, and the like (Non-Patent Document 2 and Patent Document 7).
  • the cinnamon bark used in the present invention is a crude drug obtained by drying the bark of Cinnamomum cassia of the family Lauraceae. It contains phenylpropanoid, cinnamon aldehyde, cinnamon acid and so on. It is known to have sweating action, antipyretic action, and analgesic action.
  • Reishi (Ganoderma lucidum) used in the present invention is a crude drug obtained by drying mushrooms (fruiting bodies) of the family Ganoderma lucidum. It is said to be effective for nourishing and tonic.
  • Narco lily used in the present invention is a perennial herb belonging to the genus Solomon's seal in the family Liliaceae. It is preferable to use it as a crude drug with dried rhizomes. It is said to be effective for nourishing and tonic.
  • the okra used in the present invention is a plant belonging to the genus Abelmoschus manihot in the Malvaceae family. It is preferable to use fruits. It has been reported that fruits contain mucin and pectin and have an effect of adjusting gastrointestinal tone.
  • the mugwort (Artemisia princeps Pampanini) used in the present invention is a plant of the Asteraceae family, and it is preferable to use the above-ground part of the mugwort.
  • Mugwort contains coumarins and caffeic acid derivatives, and is said to be effective for astringent, hemostatic, and antispasmodic effects.
  • Green soybean (Glycinemax) used in the present invention refers to immature seeds harvested before the seeds of plants belonging to the genus Glycine of the family Fabales are fully ripe. Contains isoflavones, vitamins B1, B2, potassium and iron.
  • the young barley leaves used in the present invention are young leaves before heading of barley (Hordeum vulgare), which is a plant belonging to the genus Hordeum of the Gramineae family. It contains various vitamins, minerals, folic acid, SOD enzyme, etc., has a high nutritional effect, and is used as a material for green juice and the like.
  • Yuzu (Citrus junos) used in the present invention is an evergreen small tree of the genus Citrus. It is preferable to use fruits. Yuzu contains hesperidin and vitamin C, and is known to have an immune effect.
  • the chia seeds used in the present invention are the seeds of chia (Salvia hispanica), which is an annual plant belonging to the genus Sage of the Labiatae family. Chia seeds contain ⁇ -linolenic acid, omega-3 fatty acids, various vitamins and minerals, chlorogenic acid, etc., and are known as superfoods.
  • Platycodon grandiflorum used in the present invention is a perennial plant belonging to the genus Platycodon in the family Bellflower family.
  • the root of Platycodon grandiflorum contains saponin and is said to have antitussive expectorant and intestinal regulating effects. It is preferable to use the root part.
  • Gymnema used in the present invention is a climbing plant of the genus Gymnema of the Apocynaceae family. It contains gymnemic acid and glucuronic acid, and has been reported to have an appetite-suppressing effect and an effect of suppressing a rapid rise in blood glucose level. It is preferable to use the leaf part.
  • Rosehip used in the present invention is a plant belonging to the genus Rosa in the family Rosaceae.
  • Vitamin C contains carotenoids, beta-carotene, lutein, zeaxanthin, lycopene and the like, and is known to have skin-beautifying, antibacterial and antiviral effects. It is preferable to use fruits.
  • the above-mentioned crude drug is a known substance, and can be easily dried, purified, extracted, etc. by a known method, and a commercially available product can be easily obtained. It can be used raw or dried, but it can also be used as an extract, a dried product, a dried powder, a powdered raw material, a juice squeezed liquid, or the like from the viewpoint of usability, formulation, and the like. Depending on the raw material, it is possible to appropriately select whether to use the form of the squirrel, and if necessary, sterilization or the like may be performed.
  • the extraction method of the extract can be performed, for example, by solvent extraction.
  • solvent extraction the whole plant or various parts (leaves, flowers, roots, etc.) of the plant are dried as needed, shredded or crushed as needed, and then an aqueous extractant, water, for example, cold water.
  • Hot water hot water having a boiling point or lower temperature, or a hydrous organic solvent, an organic solvent such as ethanol, methanol, ether, 1,3-butylene glycol, etc., as appropriate depending on the properties of the raw materials and the use of the composition. It is extracted by selecting it at room temperature or by heating it.
  • the extraction method is not limited to solvent extraction, and may be a conventional method known in the art, and the extraction method of the extract and the form of the extract used in the present invention are not limited to the effect of the present invention.
  • the form of the extract may be not only the extract itself but also appropriately diluted or concentrated by a conventional method, and is a powdery or lumpy solid obtained by drying the extract. May be good.
  • a water-containing lower alcohol such as water-containing ethanol
  • the water content in that case is, for example, 0 to 10v / v%, 10 to 40v / v%, 20 to 30v / v%, 30. It may be ⁇ 50v / v%, 50-80v / v%, 80-99.5v / v%, or the like.
  • a method for obtaining a dry powder a method of shredding or crushing the whole plant or various parts (leaves, flowers, roots, etc.) of the plant and then drying, or a method of drying the plant and then shredding or crushing the dry powder is obtained. There is a way to get it. Further, a method of shredding or crushing the plant, subjecting it to fermentation or enzyme treatment, drying it, and further crushing it to a predetermined particle size, if necessary, can be appropriately adopted.
  • the sirtuin 1 activator of the present invention is preferably taken orally or enterally, it does not exclude other routes of administration such as transdermal administration.
  • the sirtuin 1 activator of the present invention is administered by various routes of administration, it is preferable to apply the active ingredient of the present invention in an amount such that the effect of sirtuin 1 activation is sufficiently exerted.
  • the blending amount of the plant body of Enmeisou or the solvent extract thereof can be appropriately determined according to the type, purpose, form, usage method and the like thereof.
  • sirtuin 1 activator of the present invention is used as an oral preparation or an enteral preparation, bilberry, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi, narco lily, etc. It is preferable to prepare the dry weights of okura, yomogi, edamame, young barley leaves, yuzu, chia seeds, goji, gymnema, and rose hips to be about 0.00001 to 0.5% by weight, more preferably about 0.0001 to 0.05% by weight. , 0.001 to 0.005% by weight is more preferable.
  • the concentration in the intestine may be adjusted to be about 0.1 to 100 ⁇ g / ml, more preferably about 0.5 to 50 ⁇ g / ml, and even more preferably about 1 to 10 ⁇ g / ml.
  • sirtuin 1 activator of the present invention When used as an oral preparation or an enteric preparation, bilberry, echinacea, bee pollen, goji seeds, rosehip, reishi, narco lily, okra, yomogi, and edamame per adult. , Barley young leaves, yuzu, chia seeds, lingonberry, gymnema, and rosehip plants or their solvent extracts are, for example, about 0.005 mg to about 0.5 g (dry weight equivalent) per day, more preferably 0.05. It is preferably prepared to be about mg to about 50 mg, more preferably about 0.5 mg to about 5 mg (in terms of dry weight).
  • the frequency of ingestion is not limited, but it may be taken once, but according to one example, for example, once every two weeks, once a week, once every three days, once every two days, one day. It can be taken once, twice a day, three times a day, four times a day, and the like. In addition, it may be ingested each time, continuously, or intermittently, for example, at intervals of several months.
  • the sirtuin 1 activator of the present invention can be contained in a composition for oral or enteral ingestion, for example, a food composition.
  • a composition for oral or enteral ingestion for example, a food composition.
  • powdery, liquid, solid such as tablets, granules, granules, pastes, gels and the like can be arbitrarily selected.
  • Additives can be arbitrarily selected and used in combination with the sirtuin 1 activator and composition of the present invention, if necessary. Excipients and the like can be included as the additive.
  • the excipient may be any starch as long as it is usually used in the desired dosage form, for example, starches such as wheat starch, rice starch, corn starch, potato starch, dextrin, cyclodextrin, and crystalline celluloses.
  • Lactose Lactose, starch, sugar, reduced malt sugar, water candy, fructo-oligosaccharide, emulsified oligosaccharide and other sugars, and sugar alcohols such as sorbitol, erythritol, xylitol, lactitol and mannitol.
  • sugar alcohols such as sorbitol, erythritol, xylitol, lactitol and mannitol.
  • colorants preservatives, thickeners, binders, disintegrants, dispersants, stabilizers, gelling agents, antioxidants, surfactants, preservatives, pH adjusters, etc. Can be selected and used as appropriate.
  • the present invention is selected from the group consisting of cowberry, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi, narco lily, okura, mugwort, edamame, barley young leaves, yuzu, chia seeds, kikyo, gymnema, and rose hips.
  • a method of activating sirtuin 1 of the skin by administering multiple herbal medicines, for example, by oral or transenteral route.
  • the present invention is also selected from the group consisting of cowberry, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi, narco lily, okura, mugwort, edamame, barley young leaves, yuzu, chia seed, kikyo, gymnema, and rose hips. Also provided are methods for skin anti-aging via sirtuin 1 activation of the skin, eg, by administering one or more herbal medicines, eg, by oral or enteric route.
  • the method of the present invention is a method for the purpose of cosmetology and may not be treated by a doctor or a medical professional.
  • the present invention relates to bilberries, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi, narco lilies, okra, mugwort, edamame, young barley leaves in the manufacture of pharmaceuticals such as oral or enteric agents for anti-aging of the skin. Also provided is the use of one or more herbal medicines selected from the group consisting of Yuzu, Chia Seeds, Lingonberry, Gymnema, and Rosehip.
  • the present invention is for bilberries, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi for use in methods for anti-aging of the skin by activating sirtuin 1 of the skin, for example by oral or enteral administration.
  • one or more herbal medicines selected from the group consisting of, narco lily, lingonberry, yomogi, edamame, young barley leaves, yuzu, chia seed, lingonberry, gymnema, and rosehip.
  • Experiment 1 Preparation of samples As candidate samples for sirtuin 1 activator, bilberry, echinacea, bee pollen, goji, keihi, reishi, narukoyuri, okra, yomogi, edamame, barley young leaves, yuzu, chia seeds, kikyo, gymnema, And rose hips were prepared as shown in the table below.
  • a total of 152 types of candidate samples were prepared, including naturally derived components such as extracts of animals and plants and synthetic components.
  • the sample was adjusted to 10 mg / ml using DMSO, and appropriately diluted with a culture medium to adjust to 10 ⁇ g / ml as an evaluation sample.
  • DMSO containing 10 ⁇ g / ml resveratrol was used as a positive control, DMSO containing nothing as a negative control and DMSO containing 10 ⁇ g / ml astaxanthin.
  • Experiment 2 Construction of a screening system for components that activate the SIRT1 promoter
  • Experiment 2-1 Culture of human skin epidermis-derived cell line HaCaT cells
  • HaCaT cells were used as model cells for human skin.
  • Cells were cultured in a cell culture dish (Greiner bio-one, Tokyo, Japan) using DMEM medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium; Nissui, Tokyo, Japan) supplemented with 10% Fetal bovine serum (FBS; Life Technologies, CA, USA). In Japan), subculture was performed at 37 ° C. in the presence of 5% CO 2 .
  • DMEM medium Dulbecco's Modified Eagle Medium
  • Fetal bovine serum Fetal bovine serum
  • DMEM medium 10.0 g of DMEM powder is dissolved in 1 L of Milli-Q water, streptomycin sulfate 0.1 g titer (Meiji. Tokyo, Japan), penicillin G potassium 100,000 U (Meiji), 1 M HEPES. 2.38 g (DOJINDO, Kumamoto, Japan) and 2.0 g of 10% NaHCO 3 (Wako, Osaka, Japan) were added, and 0.22 ⁇ m filter sterilized (Toyo Roshi Kaisha, Tokyo, Japan) was used.
  • Experiment 2-2 Culture of human colon cancer-derived cell line Caco-2 cells
  • human colon cancer-derived Caco-2 cells were used as a human intestinal epithelial model.
  • Caco-2 cells were cultured in a cell culture dish (Greiner) using Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (Nissui, Tokyo, Japan) containing deactivated 10% Fetal Bovine Serum (FBS) (Life Technologies, CA, USA). Bio-one, Tokyo, Japan) was subcultured under the conditions of 37 ° C and 5% CO 2 .
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • DMEM medium 10.0 g of DMEM powder is dissolved in 1 L of Milli-Q water, 100 U / mL penicillin (Meiji), 0.1 mg / mL streptomycin (Meiji), 1M HEPES 2.38 g (DOJINDO, Kumamoto, Japan). ), 10% NaHCO 3 2.0 g (Wako, Osaka, Japan) was added, and 0.22 ⁇ m filter sterilized (Tokyo Roshi Kaisha, Tokyo, Japan) was used.
  • SIRT1p-EGFP plasmid
  • HaCat SIRT1p-EGFP
  • the human SIRT1 promoter 1159 to -1
  • the amplified fragment was cloned into pEGFP-C3 (TaKaRa, Japan) from which the CMV promoter was removed by digestion with restriction enzymes AseI and NheI, and the obtained plasmid was designated as SIRT1p-EGFP.
  • this plasmid was stably transfected into the human skin keratinized cell line HaCaT to obtain HaCat (SIRT1p-EGFP), which was used for evaluation of human SIRT1 promoter activity.
  • HA044263-R 5'-TTCGAGGATCTGTGCCAATCATAA-3' (SEQ ID NO: 2)
  • Experiment 2-4 Setting of Transwell method
  • the Caco-2 cells prepared in Experiment 2-2 were seeded at 2.0 ⁇ 10 5 cells / ml on the membrane of a cup of Transwell (Millicell cell culture insert manufactured by Merck). Then, TEER / transepithelial potential measurement was measured. Medium was exchanged every few days to induce differentiation for 14 days. On the 14th day, TEER / transepithelial potential measurement was measured, and it was confirmed that the value was higher than that on the 1st day.
  • Each sample prepared in Experiment 1 was added to Caco-2 cells so as to reach 10 ⁇ g / ml.
  • HaCaT (SIRT1p-EGFP) was seeded on a black plate at 6.0 ⁇ 10 5 cells / ml. After 24 hours, the HaCaT (SIRT1p-EGFP) medium was removed and 100 ⁇ L of Caco-2 permeate was added. After 48 hours, the Caco-2 permeate added to HaCaT (SIRT1p-EGFP) was removed, washed with PBS, and stained with Hoechst 33342. After that, the fluorescence intensity of HaCaT (SIRT1p-EGFP) was measured with IN Cell Analyzer 2000.

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Abstract

新規なサーチュイン1活性化剤を提供する。　本発明は、コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される1つまたは複数の生薬を有効成分として含有するサーチュイン1活性化剤を提供する。

Description

サーチュイン１活性化剤
　本発明はサーチュイン1活性化剤を提供する。
　近年、長寿遺伝子として、NAD+依存性脱アセチル化酵素であるサーチュイン（Sirtuin）遺伝子が注目されている。サーチュイン遺伝子は、サーチュイン1からサーチュイン7まで同定されている。中でも、サーチュイン1に注目が集まっている。サーチュイン1が標的とするタンパク質は同定されており、その研究から抗老化、細胞内代謝、エネルギー消費、炎症及びストレス応答経路等に関与していると考えられている（非特許文献１）。
　これまでに、サーチュイン活性化物質としては、各種ポリフェノール、レスベラトロール、トラネキサム酸、黒ウコン、分子量５００～６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖、ピセアタンノール、グルコサミン塩又はＮ－アセチルグルコサミン、プロアントシアニジン等が知られている（特許文献１～６、非特許文献１）。
特開2019-218296号公報 特開2018-48152号公報 特開2018-199680号公報 特開2017-66128号公報 特開2014-166982号公報 特開2013-241380号公報 特開2012-211106号公報
Journal of Functional Foods Volume 54, 2019, Pages 119-127 Biosci Biotechnol Biochem , 82 (10), 1812-1820(2018) Arch Biochem Biophys. 2014 December 1; 563: 94100 Cell Cycle 13:18, 2821-2826(2014) Journal of Functional Foods, 23, 444452(2016) PLoS ONE 14(5): e0217394.https://doi.org/10.1371/journal.pone.0217394, May 28, 2019 和光純薬時報 Vol.87 No.2 (2019年6月号), p.9-11 片倉 喜範 アンチブレインエイジング食品の探索とその機能性の分子基盤の解明, 公益財団法人アサヒビール学術振興財団, 2010年4月
　本発明の課題は、サーチュイン1活性化剤の提供にある。
　本発明者らは、鋭意研究の結果、コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される1つまたは複数の生薬が、サーチュイン1活性化剤として機能することを見出した。さらに、本発明者らは、これらの物質は腸管細胞を介して皮膚細胞に作用することも見出した。以上の発見により、以下の発明を完成するに至った：
（１）コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される１つまたは複数の生薬を有効成分として含有するサーチュイン１活性化剤。
（２）前記サーチュイン１活性化剤は、腸管細胞を介して皮膚細胞のサーチュイン１を活性化する、（１）に記載のサーチュイン１活性化剤。
（３）前記サーチュイン１活性化剤は、内服により皮膚細胞のサーチュイン１を活性化する、（１）又は（２）に記載のサーチュイン１活性化剤。
（４）（１）～（３）のいずれか１項に記載のサーチュイン１活性化剤を含有する、美肌用食品組成物。
（５）コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される１つまたは複数の生薬が内服によりサーチュイン１を活性化する機能を有する美肌用成分として含有される、美肌用食品組成物。
　本発明のサーチュイン1活性化剤の投与により、サーチュイン1を活性化することができる。本発明によれば、サーチュイン1活性化剤を含有する組成物や内服剤を提供することができる。
図１は、実験２で使用したTranswell法の概略図である。 図２は、実験２において各試料を添加した場合のHaCat（SIRT1p-EGFP）におけるサーチュイン1発現量を、陰性対照（DMSOのみ）を添加した場合を100とした相対値として示す。
　本発明のサーチュイン1活性化剤の投与により、サーチュイン1を活性化することができる。サーチュイン1遺伝子の活性化は、皮膚の抗老化、寿命延長、紫外線によるDNAダメージの修復、抗炎症、酸化ストレス抑制、しわ抑制、美白、メラニン抑制、メラノーマ、色素性乾皮症などの皮膚における疾患や状態に対する治療や改善に有用であることが示唆されている（非特許文献１～５）。本発明のサーチュイン1活性化剤は、とりわけ内服により腸管を介し皮膚細胞のサーチュイン1を活性化することにより美肌への寄与が期待される。
　本発明において、美肌とは、皮膚の抗老化、寿命延長、紫外線によるDNAダメージの修復、抗炎症、酸化ストレス抑制、しわ抑制、美白、メラニン抑制といったなどの皮膚細胞におけるサーチュイン１の活性化を介する皮膚状態の改善を指す。
　サーチュイン1の活性化とは、例えばサーチュイン1遺伝子の発現を亢進させること、例えば何も付与していない状態（コントロール）に比べて、サーチュイン1活性化剤を付与した場合にサーチュイン1遺伝子の発現が亢進していることを意味し得る。例えば、有意水準を5％とした統計学的有意差（例えばスチューデントのｔ検定）をもって亢進していることを意味することもある。あるいは、本発明におけるサーチュイン1遺伝子の活性化とは、例えば何も付与していない状態（コントロール）に比べて、サーチュイン1活性化剤を付与した場合に、サーチュイン1遺伝子の発現が、例えば5％以上、10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以、70％以上、80％以上、90％以上、100％以上、200％以上、300％以上、400％以上、又は500％以上亢進していることを意味し得る。サーチュインの発現量は、任意の公知技術、例えば、限定されないものの、非特許文献５に記載のようなSIRT1プロモーターを皮膚細胞にトランスフェクトしSIRT1p-EGFPに由来するEGFP蛍光の変化を求める方法により求めることができる。
　本発明のサーチュイン１活性化剤は、とりわけ腸管細胞を介して皮膚細胞のサーチュイン１を活性化する。「腸管細胞を介して皮膚細胞のサーチュイン１を活性化する」とは、本発明の有効成分を腸管細胞に投与し、腸管細胞に吸収されることにより、有効成分と同一の成分が直接皮膚細胞に到達する、あるいは有効成分が腸管細胞に吸収され分解又は修飾された状態で皮膚細胞に到達する、あるいは腸管細胞が有効成分を取り込むことにより別の異なる成分を放出し、その異なる成分が皮膚細胞に作用するといった直接的又は間接的な経路を介して最終的に皮膚細胞におけるサーチュイン1が活性化されることを指す。「腸管細胞を介して皮膚細胞のサーチュイン１を活性化する」ことの一例として、内服により皮膚細胞のサーチュイン１を活性化すること等が挙げられる。「内服により皮膚細胞のサーチュイン１を活性化する」とは、本発明のサーチュイン1活性化剤を経口的に摂取することにより、本発明の有効成分が腸管を介して吸収され、腸から取り込まれた物質が直接的又は間接的に作用し最終的に皮膚細胞におけるサーチュイン1が活性化されることを指す。
　例えば、ある成分が内服により腸から取り込まれてもその物質が直接標的細胞へ到達されるわけではなく腸管細胞から分泌された別の物質が標的細胞に到達し間接的に作用することがある。例えば、非特許文献６～８に記載のように、腸から取り込まれたカルノシンが直接的に脳に作用を及ぼすのではなく、腸管細胞においてCREBを活性化し、その結果、BDNF産生が増強され、BDNFが神経細胞を活性化し脳の機能改善をもたらすというような間接的な作用が報告されている。さらには、このような脳腸相関活性化はエクソソームが介在するという示唆もされている。つまり、腸にある成分を与えてもその成分が標的とする細胞でどのような作用を及ぼすのかは不明であるため、被験物質を腸管細胞に与え、その後標的細胞においていかなる作用を奏するのか確認する必要がある。
　このような腸管細胞を介した作用は、in vivo、in vitro、ex vivo等を含む各種方法で測定できる。例えば、被験物質を腸管細胞層に投与し、腸管細胞層を介した皮膚細胞におけるサーチュイン1の活性を求めることにより決定できる。例えば、本明細書における実施例のようにCaco-2等の腸管細胞の層の一方の側に試験物質を添加し、この層を通過して、層の逆側に存在するHaCaT等の皮膚細胞におけるサーチュイン1の活性を測定するTranswell法により決定することができる。Transwell法は当該分野で公知又は当業者が容易に実施可能である。しかしながら測定方法は上記方法に限定されず、他の任意の方法を採用してもよい。例えば、腸管細胞培養液に被験物質を投与しその上清液を皮膚細胞に添加するといったin vitroの方法や、ヒト等の動物に経口的に摂取させた後に、皮膚におけるサーチュイン1の活性を測定するといったin vivoの方法を採用してもよい。
　本発明は、コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される1つまたは複数の生薬を有効成分として含有するサーチュイン1活性化剤を提供する。さらに、本発明は、コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される１つまたは複数の生薬を有効成分として含有される、組成物も提供する。本発明のサーチュイン1活性化剤及び組成物は、経口剤又は経腸剤の形態であってもよく、美肌のためのものであってもよい。
　本発明で用いられるコケモモ（Vaccinium vitis-idaea L.）は、ツツジ科スノキ属の低木である。果実を使用することが好ましい。果実にはレスベラトロールや、アントシアニン、プロアントシアニジンなどが含まれている。
本発明で用いられるエキナセア（Echinacea purpurea）はキク科ムラサキバレンギク属の多年草である。エキナセアの開花時の地上部の搾汁液を使用することが好ましい。エキナセアには、抗菌、抗ウイルス作用等が報告されている。
本発明で用いられるビーポーレンはミツバチが集めた花粉の粒（花粉荷）である。ビタミンやミネラルなどの栄養素が含まれるという報告がある。シスタス、オーク、バラ、エキウム、キクの花粉など任意の花粉であってよい。ビーポーレンが採取される場所もスペインといったヨーロッパ、中国といったアジア等限定されない。
本発明で用いられるクコの実はナス科の落葉低木であるクコ（Lycium chinense Miller又はL.barbarum Linne(Solanaceae）)の果実であり、ゼアキサンチン、ベタイン、ポリフェノールなどが含まれている。クコの実には滋養強壮作用、血流改善作用、美白効果、DNA損傷修復作用等が報告されている（非特許文献２、特許文献７）。
本発明で用いられるケイヒ（桂皮）はクスノキ科のトンキンニッケイ（Cinnamomum cassia）の樹皮を乾燥させた生薬である。フェニルプロパノイド、ケイヒアルデヒド、ケイヒ酸などが含まれている。発汗作用、解熱作用、鎮痛作用などが知られている。
本発明で用いられる霊芝（Ganoderma lucidum）はマンネンタケ科のキノコ（子実体）を乾燥させた生薬である。滋養強壮などに効果があると言われている。
本発明で用いられるナルコユリ（Polygonatum falcatum）はユリ科アマドコロ属に属する多年草草本である。根茎を乾燥させた生薬として使用するのが好ましい。滋養強壮などに効果があると言われている。
本発明で用いられるオクラはアオイ科トロロアオイ属に属する植物である。果実を用いるのが好ましい。果実にはムチンやペクチンなどが含まれており胃腸の調子を整える作用があることが報告されている。
本発明で用いられるヨモギ（Artemisia princeps Pampanini）はキク科の植物であり、ヨモギの地上部を用いることが好ましい。ヨモギにはクマリン類およびカフェ酸誘導体などが含まれ、収れん・止血・鎮痙作用などに効果があると言われている。
本発明で用いられるエダマメ（Glycine max）はマメ目マメ科ダイズ属に属する植物の種子が完熟する前に収穫された未成熟の種子を指す。イソフラボン、ビタミンB1、B2、カリウム、鉄分などが含まれている。
本発明で用いられる大麦若葉はイネ科オオムギ属の植物である大麦（Hordeum vulgare）の出穂前の若い葉である。各種ビタミン、ミネラル類、葉酸、SOD酵素などが含まれ、栄養効果が高く、青汁等の材料として使用されている。
本発明で用いられるユズ（Citrus junos）はミカン属の常緑小高木である。果実を用いることが好ましい。ユズには、ヘスペリジン、ビタミンCが含まれており、免疫効果などが知られている。
本発明で用いられるチアシードはシソ科アキギリ属に属する一年草であるチア（Salvia hispanica）の種子である。チアシードは、α-リノレン酸、オメガ3脂肪酸、各種ビタミン・ミネラルやクロロゲン酸等が含まれ、スーパーフードとして知られている。
本発明で用いられるキキョウはキキョウ科キキョウ属の多年草である。キキョウの根はサポニンを含み、鎮咳去痰作用や整腸作用があるといわれている。根の部分を使用することが好ましい。
本発明で用いられるギムネマ（Gymnema sylvestre）はキョウチクトウ科ギムネマ属のつる性植物である。ギムネマ酸、グルクロン酸を含み、食欲抑制作用、血糖値の急激な上昇を抑制する作用が報告されている。葉の部分を使用することが好ましい。
本発明で用いられるローズヒップ(Rosa canina)は、バラ科バラ属の植物である。ビタミンCはカロテノイド、ベータカロテン、ルテイン、ゼアキサンチン、リコペン等を含み、美肌、抗菌、抗ウイルス効果などが知られている。果実を用いることが好ましい。
　上述の生薬は公知の物質であり、公知の方法により容易に乾燥、精製、抽出等ができ、また市販品を容易に入手可能である。生のままでも乾燥したものでも使用することができるが、使用性、製剤化等の観点から抽出物、乾燥物、乾燥粉末、原料の粉末物、搾汁液等として用いることもできる。原料により、いすれの形態を用いるかは適宜選択することができ、必要に応じて殺菌等の処理を施してもよい。
　抽出物として用いる場合、その抽出物の抽出方法は例えば溶媒抽出により行うことができる。溶媒抽出の場合には、植物の全草あるいは各種部位（葉、花、根等）を必要に応じて乾燥させ、更に必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤、水、例えば冷水、温水、又は沸点若しくはそれより低温の熱水、あるいは含水有機溶媒、有機溶媒、例えばエタノール、メタノール、エーテル、１，３－ブチレングリコール等を原料の性質や組成物の用途等により好ましい溶媒を適宜選択して常温で又は加熱して用いることにより抽出される。しかしながら、抽出方法は溶媒抽出に限定されず、当業界で知られている常用の手法によってもよく、本発明で用いる抽出物の抽出方法や抽出物の形態は、本発明の効果を損なわない限り任意である。上記抽出物の形態は、抽出液自体だけでなく、常用の手法により適宜希釈又は濃縮したものであってもよく、更に、抽出液を乾燥することによって得られる粉状あるいは塊状の固体であってもよい。
　含水有機溶媒の例として、含水エタノール等の含水低級アルコールを用いてもよく、その場合の含水率は、例えば0～10v/v％、10～40v/v％、20～30v/v％、30～50v/v％、50～80v/v％、80～99.5v/v％等であってもよい。
　乾燥粉末を得る方法としては、植物の全草あるいは各種部位（葉、花、根等）を細断又は粉砕しその後に乾燥する方法や、植物を乾燥した後に細断又は粉砕して乾燥粉末を得る方法がある。また、植物を細断又は粉砕し、発酵や酵素処理を施した後、乾燥し、更に必要に応じて所定の粒径にすべく粉砕する方法等を適宜採ることができる。
　本発明のサーチュイン1活性化剤は、経口又は経腸摂取が好ましいものの、経皮投与といった他の投与経路を排除するものではない。本発明のサーチュイン1活性化剤を各種投与経路で投与する場合、本発明の有効成分をサーチュイン1活性化の効果が十分発揮されるような量で適用することが好ましい。エンメイソウの植物体又はその溶媒抽出物の配合量は、それらの種類、目的、形態、利用方法などに応じて、適宜決めることができる。
　本発明のサーチュイン1活性化剤を経口剤又は経腸剤として利用する場合には、経口剤又は経腸剤全量に対して、コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップの乾燥重量が、0.00001～0.5重量％程度になるように調製することが好ましく、0.0001～0.05重量％程度がより好ましく、0.001～0.005重量％程度だと更に好ましい。あるいは、腸内での濃度が0.1～100μg/ml程度、より好ましくは0.5～50μg/ml程度、更に好ましくは1～10μg/ml程度になるように調整してもよい。
　また、本発明のサーチュイン1活性化剤を経口剤又は経腸剤として利用する場合には、成人１人当たりのコケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップの植物体又はその溶媒抽出物の摂取量は、例えば１日あたり、0.005mg～約0.5g（乾燥重量換算）程度、より好ましくは0.05mg～約50mg、更に好ましくは0.5mg～約5mg（乾燥重量換算）程度になるように調製するのが好ましい。また、摂取頻度は、限定されないものの、１回の摂取でもよいが、一例によれば、例えば２週間に１回、１週間に１回、３日に１回、２日に１回、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回等の頻度で摂取することができる。また、都度摂取するものであっても、継続的に摂取するものであっても、例えば数か月の間隔を空け断続的に摂取するものであってもよい。
　また、本発明のサーチュイン1活性化剤は、経口又は経腸摂取用の組成物、例えば、食品組成物に含有できる。本発明のサーチュイン1活性化剤及び組成物の形態としては、例えば、粉末状、液体状、錠剤等の固形、顆粒、粒状、ペースト状、ゲル状など任意に選択することができる。
　本発明のサーチュイン1活性化剤及び組成物には、必要に応じて添加剤を任意に選択し併用することができる。添加剤としては賦形剤等を含ませることができる。賦形剤としては、所望の剤型としたときに通常用いられるものであれば何でも良く、例えば、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、シクロデキストリンなどのでんぷん類、結晶セルロース類、乳糖、ブドウ糖、砂糖、還元麦芽糖、水飴、フラクトオリゴ糖、乳化オリゴ糖などの糖類、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、ラクチトール、マンニトールなどの糖アルコール類が挙げられる。これら賦形剤は、単独で又は二種以上組み合わせて使用できる。
　その他の着色剤、保存剤、増粘剤、結合剤、崩壊剤、分散剤、安定化剤、ゲル化剤、酸化防止剤、界面活性剤、保存剤、ｐＨ調整剤等については、公知のものを適宜選択して使用できる。
　本発明は、コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される1つまたは複数の生薬を例えば経口又は経腸経路で投与することにより皮膚のサーチュイン1を活性化する方法も提供する。また、本発明は、コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される1つまたは複数の生薬を例えば経口又は経腸経路で投与することにより皮膚のサーチュイン1活性化を介する皮膚の抗老化のための方法も提供する。本発明の方法は、美容を目的とする方法であり、医師や医療従事者による治療ではないことがある。
　さらに、本発明は、皮膚の抗老化のための経口剤又は経腸剤といった医薬の製造におけるコケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される1つまたは複数の生薬の使用も提供する。本発明は、例えば経口又は経腸投与により、皮膚のサーチュイン1を活性化することによる、皮膚の抗老化のための方法に使用するためのコケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される1つまたは複数の生薬も提供する。
　次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。
実験１：試料の調製
　サーチュイン１活性化剤の候補試料として、コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップを、以下の表のように調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　その他動植物の抽出物といった天然由来成分や合成成分を含め、合計152種類の候補試料を調製した。試料はDMSOを用いて10mg/mlとして調整し、適宜、培養液で希釈して評価検体として10μg/mlとなるように調整した。陽性対照として10μg/mlのレスベラトロールを含むDMSO、陰性対照として何も含まないDMSOおよび10μg/mlのアスタキサンチンを含むDMSOを用いた。
実験２：SIRT1プロモーターを活性化する成分のスクリーニングシステムの構築
実験２-1：ヒト皮膚表皮由来細胞株HaCaT細胞の培養
　本実験ではヒト皮膚のモデル細胞として、HaCaT細胞を用いた。細胞は非働化した10% Fetal bovine serum（FBS；Life Technologies, CA, USA）添加DMEM培地（Dulbecco’s Modified Eagle Medium；Nissui, Tokyo, Japan）を用いて、細胞培養ディッシュ（Greiner bio-one, Tokyo, Japan）にて、37℃、5％ CO2存在下で継代培養した。DMEM培地としては、1 LのMilli-Q水に対して、DMEM粉末10.0gを溶解し、硫酸ストレプトマイシン0.1g力価（Meiji. Tokyo, Japan）、ペニシリンGカリウム10万U（Meiji）、1M HEPES 2.38g（DOJINDO, Kumamoto, Japan）、10% NaHCO3（Wako, Osaka, Japan）2.0gを添加し、0.22μmフィルター滅菌（Toyo Roshi Kaisha, Tokyo, Japan）したものを用いた。
　実験２-２：ヒト結腸ガン由来細胞株Caco-2細胞の培養
　本研究では、ヒト腸管上皮モデルとしてヒト結腸ガン由来Caco-2細胞を用いた。Caco-2細胞は、非働化した10% Fetal Bovine Serum (FBS)(Life Technologies, CA, USA) を含むDulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) (Nissui, Tokyo, Japan)を用いて、細胞培養ディッシュ（Greiner bio-one, Tokyo, Japan）にて、37℃、5% CO2条件下で継代培養した。DMEM培地としては、1LのMilli-Q水に対して、DMEM粉末10.0gを溶解し、100U/mL ペニシリン(Meiji)、0.1mg/mLストレプトマイシン(Meiji)、1M HEPES 2.38g(DOJINDO, Kumamoto, Japan)、10% NaHCO3 2.0g(Wako, Osaka, Japan)を添加し、0.22μmフィルター滅菌(Tokyo Roshi Kaisha, Tokyo, Japan) したものを用いた。
　実験２-３：プラスミド(SIRT1p-EGFP)の調製
　非特許文献１に記載の方法に従いHaCat(SIRT1p-EGFP)を調製した。具体的には、非特許文献１に記載の以下のプライマーを用いるPCR法によりヒトSIRT1プロモーター（-1159～-1）を増幅した。増幅断片を、制限酵素AseIおよびNheI消化によりCMVプロモーターを除去したpEGFP-C3（TaKaRa、日本）にクローニングし、得られたプラスミドをSIRT1p-EGFPとした。非特許文献５に記載の方法に従い、このプラスミドをヒト皮膚角化細胞株HaCaTに安定的にトランスフェクトし、HaCat（SIRT1p-EGFP）とし、ヒトSIRT1プロモーター活性の評価に使用した。
　Homo sapiens sirtuin1（hSIRT1）, mRNA
　HA044263-F: 5’-GCCTCACATGCAAGCTCTAGTGAC-3’（配列番号１）
　HA044263-R: 5’-TTCGAGGATCTGTGCCAATCATAA-3’（配列番号２）
　実験２-４：Transwell法の設定
　実験２－２で調整したCaco-2細胞をTranswell（メルク社製のミリセル（Millicell）セルカルチャーインサート）のカップのメンブレン上に2.0×105 cells/ｍlで播種し、TEER/経上皮電位測定を測定した。2，3日おきに培地交換をして14日間分化を誘導した。14日目、TEER/経上皮電位測定を測定し、数値が1日目より上昇していることを確認した。Caco-2細胞に実験1で調製した各試料を10μg/mlになるように添加した。次に、ブラックプレートにHaCaT (SIRT1p-EGFP)を6.0×105cells/mlで播種した。24時間後、HaCaT (SIRT1p-EGFP)の培地を取り除き、Caco-2透過液を100 μL添加した。48時間後、HaCaT (SIRT1p-EGFP)に添加したCaco-2透過液を取り除き、PBSで洗浄した後、Hoechst33342で染色した。
その後、IN Cell Analyzer2000でHaCaT (SIRT1p-EGFP)の蛍光強度を測定した。
　結果：
　結果を図２に示す。図２に示すように、本発明の生薬を投与すると、陰性対照（DMSOのみ及びアスタキサンチンを含むDMSO）と比べてサーチュイン1の発現量が有意に増加した。この発現量は、陽性対照（レスベラトロールを含むDMSO）と比較しても本発明の生薬は、優れたサーチュイン1活性化効果があることがわかる。

Claims (5)

  1. 　コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される１つまたは複数の生薬を有効成分として含有するサーチュイン１活性化剤。
  2. 　前記サーチュイン１活性化剤は、腸管細胞を介して皮膚細胞のサーチュイン１を活性化する、請求項１に記載のサーチュイン１活性化剤。
  3. 　前記サーチュイン１活性化剤は、内服により皮膚細胞のサーチュイン１を活性化する、請求項１又は２に記載のサーチュイン１活性化剤。
  4. 　請求項１～３のいずれか１項に記載のサーチュイン１活性化剤を含有する、美肌用食品組成物。
  5. 　コケモモ、エキナセア、ビーポーレン、クコの実、ケイヒ、霊芝、ナルコユリ、オクラ、ヨモギ、エダマメ、大麦若葉、ユズ、チアシード、キキョウ、ギムネマ、及びローズヒップからなる群より選択される１つまたは複数の生薬が内服によりサーチュイン１を活性化する機能を有する美肌用成分として含有される、美肌用食品組成物。
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