WO2021210925A1 - 림프부종의 치료, 예방 또는 개선용 조성물 - Google Patents

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WO2021210925A1
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WO
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compound
dihydroxyphenyl
prop
lymphedema
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PCT/KR2021/004725
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구진모
이석찬
강희
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재단법인 경기도경제과학진흥원
성균관대학교산학협력단
경희대학교 산학협력단
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    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/74—Benzo[b]pyrans, hydrogenated in the carbocyclic ring

Definitions

  • the present invention relates to a novel compound exhibiting an effect of treating, preventing or improving lymphedema, and a composition comprising the same as an active ingredient, and may be applied as a pharmaceutical, functional food or food supplement, or cosmetics.
  • Lymphedema can be broadly divided into primary lymphedema caused by congenital genetic abnormalities and secondary lymphedema caused by surgery or radiation therapy.
  • the secondary lymphedema often appears as a sequelae after surgical treatment and/or radiation treatment for breast cancer and uterine cancer. Therefore, breast or uterine cancer patients who have undergone surgery or radiation therapy are generally considered to be potential secondary lymphedema patients.
  • the lymphedema can be divided into stage 0, stage 1, stage 2, and stage 3 depending on the degree of the lymphedema.
  • Stage 0 refers to the incubation stage, where lymphatic movement ability is reduced but no clinical symptoms
  • stage 1 refers to a state in which edema is visible and the skin is kept in for a long time when the skin is pressed
  • stage 2 refers to a state in which protein is accumulated in the tissue and fibrosclerosis occurs.
  • Stage 3 refers to a state in which the skin does not enter even when pressed
  • stage 3 refers to a state in which the skin is excessively inflated and the skin loses its function.
  • lymphedema is a symptom of swelling caused by a problem in the circulation of the lymphatic system. is a different disease, so it is stated that an independent management and treatment method suitable for lymphedema is required.
  • the treatment of secondary lymphedema recommended by the World Lymphedema Association is the most effective treatment for complex lymphedema.
  • the complex lymphedema therapy refers to lymphatic massage, compression therapy, exercise and skin care.
  • such complex lymphedema therapy not only shows different efficacy depending on the mastery level of the patient, the number and interval of the therapy, but also has the problem that it takes a long time to heal and the problem that it is difficult to cure it. have.
  • lymphedema Although a therapy different from that applied for edema caused by problems with body metabolism or kidneys is required, lymphatic massage, compression therapy, exercise, skin care, etc. The same remedies cannot be fundamental and effective.
  • Korean Patent Publication No. 10-1533197 found for the first time that butein or a pharmaceutically acceptable salt thereof can have a preventive or therapeutic effect on lymphedema or lipoedema.
  • the need to improve the disadvantages of butane such as solubility and blood exposure at the time of administration of the active ingredient was confirmed, and accordingly, candidate substances improved pharmaceutically, foodologically, or cosmetically are of the art of the art. It remains a large unmet demand.
  • the present inventors recognized the problems of the prior art, and repeated research through numerous trials and errors in order to discover a compound having an excellent therapeutic, preventive or ameliorating effect on lymphedema.
  • a compound capable of having excellent therapeutic, ameliorating, and preventive effects on lymphedema in various aspects such as TNF ⁇ production inhibitory activity, metabolic stability, solubility, and blood exposure has been developed and the present invention has been completed.
  • a compound according to the present invention for achieving the object of the present invention is represented by the following Chemical Formula 1 or 2:
  • R1 and R2 are each independently -H, -OH, -OR3 , -OCOR3, -NO 2 , -CN, -SH, -SR3, -COR4, -COOR4, -CONHR4, -CON(R4) 2 , -NH 2 , -NHR4, -N(R4) 2 , -NHCOR4, -N(R5)COR4, C 1-6 alkyl group, C 2-6 alkenyl group, C 2-6 alkynyl group, halogen, allyloxy group One selected from the group consisting of a C 3-7 cycloalkyl group, an allyl group, a heteroallyl group having 3-7 atoms having at least one hetero atom, and a heterocycloalkyl group having 3-7 atoms having at least one hetero atom more than,
  • R3 is each independently a C 1-4 C 1-6 alkyl group, C 3-10 aryl group, , and is selected from the group consisting of
  • R6 is each independently -H, -OH, -0R7, -NO 2 , -CN, C 1-6 alkyl group, C 1-6 alkoxy group, halogen, -NH 2 , -NHR7, and -N( R7) is at least one selected from the group consisting of 2,
  • R7 is selected from the group consisting of a C 1-6 alkyl group, an allyl group, and a heteroallyl group,
  • R4 is selected from the group consisting of a C 1-6 alkyl group, an allyl group, and a heteroallyl group,
  • R5 is selected from the group consisting of a C 1-6 alkyl group, an allyl group, and a heteroallyl group;
  • R8 and R9 are each independently -H, -OH, -OR10, -NO 2 , -CN, -SH, -SR10, -COR11, -COOR11, -CONHR11, -CON(R11) 2 , -NH 2 , - NHR11, -N(R11) 2 , -NHCOR 11 , -N(R12) COR11, C 1-6 alkyl group, C 2-6 alkenyl group, C 2-6 alkynyl group, halogen, allyloxy group, C a cycloalkyl group of 3-7, allyl group, of 3-7 atoms having at least one hetero atom heterocyclic an allyl group, and is at least one selected from the group consisting of a heterocycloalkyl group of 3 to 7 atoms with one or more heteroatoms ,
  • R10 is each independently a C 1-6 alkyl group, a C 3-10 aryl group, , and is selected from the group consisting of
  • R13 is each independently -H, -OH, -NO 2 , -CN, a C 1-6 alkyl group, a C 1-6 alkoxy group, halogen, -NH 2 , -NHR14, and -N(R14) 2 At least one selected from the group consisting of
  • R14 is selected from the group consisting of a C 1-6 alkyl group, an allyl group, and a heteroallyl group,
  • R11 is selected from the group consisting of a C 1-6 alkyl group, an allyl group, and a heteroallyl group,
  • R12 is selected from the group consisting of a C 1-6 alkyl group, an allyl group, and a heteroallyl group.
  • the term "independently of each other” means that two or more substituents may be individually defined and may be different from or the same as each other.
  • the substituents R1, R2, R6, R8, R9 and R13 may be one, or two or more, for example, 2, 3, 4 or 5.
  • each may be the same as or different from each other, and may be in the ortho, meta or para position.
  • the compound of Formula 1 does not contain butein.
  • Butane is a compound represented by the following formula, referred to herein as compound 1:
  • alkyl, alkenyl, alkynyl are intended to include both straight chain (also referred to as linear) or branched (also referred to as branched) chain.
  • halogen means fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • alkoxy refers to O-alkyl
  • hetero means that a hetero atom selected from oxygen, nitrogen and sulfur is included in the ring.
  • the compound of formula 1 or 2 according to the present invention is selected from the group consisting of:
  • pharmaceutically acceptable salt and “food acceptable salt” used in the present invention are those that can be prepared by a conventional method in the art, for example, hydrochloric acid, hydrogen bromide, sulfuric acid. , salts with inorganic acids such as sodium hydrogen sulfate, phosphoric acid, carbonic acid, or formic acid, acetic acid, oxalic acid, benzoic acid, citric acid, tartaric acid, gluconic acid, gestisic acid, fumaric acid, lactobionic acid, salicylic acid, or acetylsalicylic acid ( Aspirin) to form pharmaceutically or food-acceptable salts of these acids with organic acids, or react with alkali metal ions such as sodium and potassium to form metal salts thereof, or react with ammonium ions Another form of pharmaceutically or food acceptable salt may be formed, but the present invention is not limited thereto.
  • the present invention provides a composition for treating or preventing lymphedema, comprising the compound represented by Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • treatment refers to any action in which symptoms of lymphedema are improved or cured by administration of the composition according to the present invention.
  • prevention refers to any action in which lymphedema is suppressed or delayed by administration of the composition according to the present invention.
  • lymphedema includes all symptoms, diseases, conditions, etc., which are additionally caused by the progression of lymphedema, or accompanying lymphedema, or increased in severity of lymphedema.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may contain the compound represented by Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof alone, or may additionally contain one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents.
  • the pharmaceutically acceptable carrier may further include, for example, a carrier for oral administration or a carrier for parenteral administration.
  • Carriers for oral administration may include lactose, starch, cellulose derivatives, magnesium stearate, stearic acid, and the like.
  • the carrier for parenteral administration may include water, a suitable oil, saline, aqueous glucose and glycol, and the like, and may further include a stabilizing agent and a preservative. Suitable stabilizers include antioxidants such as sodium bisulfite, sodium sulfite or ascorbic acid. Suitable preservatives are benzalkonium chloride, methyl- or propyl-paraben and chlorobutanol.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered to mammals including humans by any method.
  • it can be administered orally or parenterally.
  • Parenteral administration methods include, but are not limited to, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intrathecal, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, enteral, topical, sublingual or rectal administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be prepared in an injectable form and administered by lightly pricking the skin with a 30-gauge thin injection needle, or by directly applying it to the skin.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be formulated as a formulation for oral administration or parenteral administration according to the administration route as described above.
  • the composition of the present invention may be formulated as a powder, granule, tablet, pill, dragee, capsule, liquid, gel, syrup, slurry, suspension, etc. using methods known in the art.
  • oral preparations can be obtained by blending the active ingredient with a solid excipient, pulverizing it, adding a suitable adjuvant, and processing it into a granule mixture to obtain tablets or dragees.
  • excipients include sugars including lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol and maltitol, and starches, including corn starch, wheat starch, rice starch and potato starch, cellulose, Cellulose, including methyl cellulose, sodium carboxymethylcellulose and hydroxypropylmethyl-cellulose, and the like, fillers such as gelatin, polyvinylpyrrolidone, and the like may be included.
  • cross-linked polyvinylpyrrolidone, agar, alginic acid or sodium alginate may be added as a disintegrant if necessary.
  • the composition of the present invention may further include an anti-aggregating agent, a lubricant, a wetting agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, and an antiseptic agent.
  • Formulations for parenteral administration can be formulated in the form of injections, creams, lotions, external ointments, oils, moisturizers, gels, aerosols and nasal inhalants by methods known in the art. These formulations are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour, a recipe commonly known to all pharmaceutical chemistry.
  • the total effective amount of the pharmaceutical composition of the present invention may be administered to a patient as a single dose, and may be administered by a fractionated treatment protocol in which multiple doses are administered for a long period of time.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may vary the content of the active ingredient according to the symptoms of the disease.
  • the preferred total dose of the composition of the present invention may be about 0.01 ⁇ g to 1,000 mg, most preferably 0.1 ⁇ g to 100 mg per kg of patient body weight per day.
  • the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is not only the route of administration and the number of treatments, but also the effective dosage for the patient in consideration of various factors such as the age, weight, health status, sex, severity of the disease, diet and excretion rate of the patient. Thus, one of ordinary skill in the art will be able to determine an appropriate effective dosage.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention is not particularly limited in its formulation, administration route and administration method as long as the effect of the present invention is exhibited.
  • composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents.
  • composition of the present invention and the other therapeutic agents may be administered simultaneously, separately, or sequentially.
  • the other therapeutic agent may be a substance already known to have an effect of treating or ameliorating lymphedema.
  • the other therapeutic agent includes all surgical procedures other than drug therapy, surgery, and the like.
  • composition of the present invention When the pharmaceutical composition of the present invention is administered in combination with another therapeutic agent, the composition of the present invention and the other therapeutic agent may be formulated separately in separate containers, or may be formulated together in the same container.
  • a method for treating or preventing lymphedema comprising administering a composition of the present invention to a subject.
  • each term has the same meaning as described above in the composition for treating or preventing lymphedema, unless otherwise specified.
  • the term “individual” includes any human or non-human animal.
  • the term “non-human animal” may be a vertebrate, such as non-human primates, sheep, dogs, and rodents, such as mice, rats and guinea pigs.
  • the subject may preferably be a human.
  • the term “subject” is used interchangeably herein with “subject” and “patient”.
  • the composition of the present invention may be administered to a subject simultaneously, sequentially, or separately with other therapeutic agents.
  • the "simultaneous” administration means that the composition of the present invention and another therapeutic agent are administered at one time through the same injection method.
  • the “sequential” administration means administering the composition of the present invention and another therapeutic agent using a separate injection method, but relatively continuous administration, allowing the minimum possible time as the time consumed in the administration interval.
  • the "individual” administration refers to administration of the composition of the present invention and another therapeutic agent at regular time intervals.
  • the administration method of the composition of the present invention and other therapeutic agents may be appropriately selected by a person skilled in the art in consideration of the therapeutic efficacy and side effects of the patient.
  • the present invention provides a food composition for improving or preventing lymphedema, comprising the compound represented by Formula 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • each term has the same meaning as described above in the pharmaceutical composition for the treatment or prevention of lymphedema unless otherwise specified.
  • the term “improvement” refers to any action in which the degree of lymphedema or related symptoms is reduced, improved, or progress is delayed by administration of the composition according to the present invention.
  • the food may be a health functional food.
  • health functional food refers to food manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, pills, etc. using raw materials or ingredients useful for the human body.
  • functionality refers to obtaining useful effects for health purposes, such as regulating nutrients or physiological actions with respect to the structure and function of the human body.
  • the food composition according to the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and during the preparation, it can be prepared by adding raw materials and components commonly added in the art.
  • the food composition of the present invention is used to enhance or improve the therapeutic effect of lymphedema. It can be taken as a supplement for
  • the amount of the compound or salt thereof included as an active ingredient in the food composition according to the present invention may be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, improvement or therapeutic treatment).
  • the compound of the present invention or a salt thereof may be included in an amount of 0.001 to 20% by weight, 0.001 to 15% by weight, or 0.001 to 10% by weight of the composition.
  • 0.01 to 2 g, specifically 0.02 to 2 g, more specifically 0.3 to 1 g, based on 100 mL may be added.
  • the above amount may be used below the above range.
  • the compound according to the present invention or a salt thereof added to the food composition in the process of preparing the food composition may be appropriately increased or decreased in its content as needed.
  • the food composition of the present invention may further include additional ingredients in addition to the above compound or a salt thereof to enhance efficacy.
  • the food composition may be in any one formulation selected from the group consisting of pills, tablets, granules, powders, capsules, and liquid solutions.
  • the type of the food is not particularly limited.
  • foods to which the above substances can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, There are alcoholic beverages, vitamin complexes, and the like, and includes all foods in a conventional sense.
  • the food composition of the present invention may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients, like conventional food.
  • the natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural sweeteners such as taumatine and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like can be used.
  • the food composition of the present invention is a beverage composition
  • the liquid component except for containing the compound or its salt in the indicated ratio as an essential component, and as in a conventional beverage, various flavoring agents or natural carbohydrates are added as additional components. can be contained as
  • the present invention provides a cosmetic composition for improving or preventing lymphedema comprising a compound represented by Formula 1 or 2 or a cosmetically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • each term has the same meaning as described above in the pharmaceutical composition or food composition unless otherwise specified.
  • the cosmetic composition of the present invention can be applied alone, and can be applied simultaneously with the pharmaceutical composition and/or food composition of the present invention, and the effect of treating, preventing or improving lymphedema can be enhanced.
  • the cosmetic composition according to the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and at the time of manufacture, it can be prepared by adding raw materials and components commonly added in the art.
  • the content of the compound or salt thereof included as an active ingredient in the cosmetic composition according to the present invention is determined in consideration of various factors such as purpose of use (prevention, improvement or therapeutic treatment), period of use, type of formulation, route of administration, skin condition of the subject, etc. can be appropriately determined.
  • the content of the compound or salt thereof may be 0.001 to 10% by weight, for example, 0.01 to 5% by weight, based on the total weight of the cosmetic composition. It can be prepared in the form of emulsified formulations and solubilized formulations.
  • the cosmetic composition of the present invention includes patches, ointments, gels for skin adhesion, creams, packs, lotions, essences, sprays, masks, foundations, makeup bases, detergents, water (W) type, Oil (O) type, silicone (S) type, oil-in-water (O/W) type, water-in-oil (W/O) type, water-in-silicone (W/S) type, silicone in water (S/W) type, solid, It can be prepared in various formulations such as liquid.
  • the cosmetic composition according to the present invention may further include additional ingredients in addition to the extract to enhance efficacy.
  • additional ingredients are not limited as long as they do not counteract or reduce the efficacy of the compounds according to the invention or salts thereof.
  • it may further include adjuvants, carriers, etc. commonly used in the cosmetic field.
  • ingredients typically used to add or enhance cosmetic functions may also be added.
  • stabilizers for example, stabilizers, emulsifiers, thickeners, humectants, liquid crystal film strengthening agents, pH regulators, antibacterial agents, water-soluble polymers, film agents, sequestering agents, amino acids, organic amines, polymer emulsions, pH regulators, skin nutrients, antioxidants, one or more aqueous additives selected from antioxidants, preservatives, fragrances, and the like; and at least one oily additive selected from oils and fats, waxes, hydrocarbon oil, higher fatty acid oil, higher alcohol, synthetic ester oil, silicone oil, and the like may be added.
  • composition according to the present invention can significantly reduce the size of lymphedema, and can achieve the effect of reducing the size of lymphedema in a shorter time than the conventionally used therapy for treating or ameliorating lymphedema.
  • the composition according to the present invention exhibits an effect of inhibiting, blocking, or preventing the new generation or expansion of lymphedema.
  • the composition according to the present invention can exhibit excellent therapeutic and ameliorating effects to a desired degree within a short period of time for a subject already suffering from lymphedema.
  • it may have the effect of preventing lymphedema in advance in subjects with potential for having lymphedema (eg, patients undergoing cancer surgery and/or radiation therapy), and thus the incidence of lymphedema significantly lowers
  • composition of the present invention may be provided in the form of a pharmaceutical, alternatively may be provided in the form of a functional food or food supplement, or may be provided in the form of a cosmetic.
  • 1 is a graph showing the level of LPS-induced TNF ⁇ production in mouse peritoneal macrophages.
  • Figure 2a is a photograph showing the change in the size of lymphedema on the 7th day after surgery in the normal group, the control group, and the compound-treated group of the present invention for lymphedema induced in mice
  • Figure 2b is the volume of lymphedema in each group. This is a comparison graph.
  • 3A is a photograph showing an H&E image of the right hind leg of a mouse taken through immunofluorescence analysis in a normal group, a control group, and a group treated with the compound of the present invention.
  • 3B is a graph comparing mRNA expression of TNF ⁇ in lymphedema tissue of the right hindlimb of a mouse.
  • 4A is a photograph showing an H&E image of the right hind leg of a mouse taken through immunofluorescence analysis in a normal group, a control group, and a group treated with the compound of the present invention.
  • Figure 4b is a photograph confirming the distribution of PPAR ⁇ , a major regulator of lipid production in the epidermal layer of lymphedema tissue.
  • Figure 4c is a western blot photograph confirming the expression of PPAR ⁇ and its target protein Fabp4 in lymphedema tissue.
  • 4D is a graph comparing the expression of PPAR ⁇ and its target protein Fabp4 in lymphedema tissue.
  • Compound 1 represents butane.
  • reaction mixture was stirred for 4 h at room temperature and filtered.
  • the solid was washed with EtOAc (80 mL) and the filtrate was washed with NaH 2 PO 4 (sat. 50 mL) and water (80 mL), dried over MgSO 4 and concentrated.
  • Compound 1, as butein, is disclosed in Korean Patent Publication No. 10-1533197 (2015.07.02) for its therapeutic effect on lymphedema.
  • compound 1 has poor physiological and chemical properties such as water solubility (79 ⁇ M, 21 ⁇ g/mL) and partition coefficient (logP, 0.42), and also has an IC 50 (43 ⁇ M) when treated in vitro at a concentration of 20 ⁇ M. and efficacy (10% inhibition) were also found to be poor. This indicates that Compound 1 is not the most suitable active ingredient for the treatment of lymphedema.
  • the present inventors have analyzed the physiological and chemical properties (solubility, logP), and the maximum concentration (Cmax), bioavailability (BA), half-life (T 1/2 ), total concentration (area under curve, AUC) of the drug after oral administration, etc. It was intended to invent compounds capable of improving pharmacokinetic parameters through structural modification.
  • mice were intraperitoneally injected with 2 ml of 3.5% sterile thioglycolate (BD, Sparks, MD, USA) 4 days before sacrifice. Mice were sacrificed by cervical dislocation, and peritoneal secretory cells were removed by peritoneal washing with cold DMEM (HyClone, Logan, UT, USA) containing 10% FBS (fetal bovine serum; HyClone) and 1% penicillin-streptomycin. isolated aseptically. After centrifugation, cells were resuspended and counted using a TC20 Cell Counter (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA).
  • DMEM HyClone, Logan, UT, USA
  • FBS fetal bovine serum
  • penicillin-streptomycin 1% penicillin-streptomycin
  • Peritoneal secretory cells were left in a 24-well plate overnight at 37°C, and non-adherent cells were removed. The cells were then stimulated with 100 ng/ml LPS (lipopolysaccharide) for 24 hours. The supernatant was collected during cytokine analysis, and the level of TNF ⁇ in the supernatant was measured using BD OptEIA mouse ELISA sets (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) according to the manufacturer's protocol.
  • LPS lipopolysaccharide
  • FIG. 1 The results of measuring the LPS-induced TNF ⁇ production level in mouse peritoneal macrophages exposed to the compound at a concentration of 20 ⁇ M are shown in FIG. 1 .
  • Data are mean ⁇ standard deviation of values for 3 mice, respectively (LPS vs. *: P ⁇ 0.01, **: P ⁇ 0.001; Compound 1 vs. #: P ⁇ 0.01, ##: P ⁇ 0.001).
  • FIG. 1 it can be confirmed that all of the compounds 14a to 14d, 8a and 8b treatment groups have significantly better TNF ⁇ production inhibitory ability than the positive control butane treatment group.
  • IC 50 values in relation to the dose-dependent inhibition level of TNF ⁇ production in macrophages are shown in Table 1 below.
  • IC 50 ( ⁇ M) values were measured twice, respectively, and expressed as mean ⁇ standard deviation.
  • the compound 7h treatment group showed similar IC 50 values to the positive control butane treatment group, and compounds 7i, 71, 7m, 14a to 14d, and 8a all had significantly superior IC compared to butane. 50 values were shown.
  • mice Compounds were administered to each of 5-week-old male CD-1 mice at 1 mg/kg tail vein administration (administration volume 5 mL/kg), oral administration 20 mg/kg, and 100 mg/kg. Three mice were used for each independent experiment. Blood samples were taken via the saphenous vein at 5, 15, 30, 60, 120, 180, 360 and 1440 minutes in 20-30 ⁇ L.
  • Table 2 below shows the physicochemical properties of representative compounds identified through parallel artificial membrane permeability assay (PAMPA). As can be seen in Table 2 below, it was confirmed that the compound of the present invention exhibited superior properties compared to the solubility and permeability of Compound 1.
  • T 1/2 represents the terminal half-life
  • Cmax represents the maximum plasma concentration
  • AUC ⁇ represents the total area under the plasma concentration-time curve from time zero to infinity.
  • the blood exposure concentration is represented
  • BA is the bioavailability expressed as (AUCpo/AUCiv) ⁇ 100.
  • Compound 1 had too short a half-life and a low measurand, so T 1/2 could not be determined.
  • Cmax and AUC ⁇ are mean ⁇ SD values obtained from 3 male ICR mice. Blood exposure during systemic circulation of the compound was compared by calculating the AUC (area under the curve) after oral administration of the compound at an amount of 100 mg/kg.
  • Compounds 1, 7m, and 14a were administered orally to mice, respectively, for 7 days prior to surgical induction of lymphedema in mice.
  • the normal group did not undergo surgery and did not induce lymphedema.
  • the compound 1 treatment group, the compound 7m treatment group, and the compound 14a treatment group lymphedema was induced through surgery. After surgery, the compound was administered once every two days.
  • the volume of lymphedema on the 7th day after surgery in the compound 1 treatment group, the compound 7m treatment group, and the compound 14a treatment group was reduced by 52%, 53%, and 70%, respectively, compared to the control group (compared to the control group * : P ⁇ 0.005; compared to compound 1 #: P ⁇ 0.001).
  • Tissue samples were collected on day 7 after surgery to induce lymphedema at a location 15-25 mm from the right leg of the mouse.
  • the collected tissue samples were fixed with 10% formalin solution, and the specimens were cut to a thickness of 5 ⁇ m.
  • Sections were deparaffinized in 100% xylene, rehydrated with a series of 100%, 95%, 90%, 80% and 70% ethanol, and washed with water. Sections were reacted with hematoxylin solution at room temperature. After washing in PBS, sections were stained with eosin at room temperature. Images were acquired by a Pannoramic Viewer microscope (3DHISTECH Ltd., Hungary).
  • 3A shows H&E images of the right hind legs of mice taken through histological and immunofluorescence analysis in the normal group, the control group (lymphedema-inducing carrier injection group), the compound 1 treated group, and the compound 14a treated group.
  • the scale bar of the upper panel is 500 ⁇ m
  • the scale bar of the lower panel is 100 ⁇ m.
  • compound 14a decreased neutrophil infiltration and improved the epidermal layer of lymphedema tissue.
  • FIG. 4A H&E images of the right hind legs of mice taken through histological and immunofluorescence analysis in the normal group, the control group (lymphedema-inducing carrier injection group), the compound 1 treated group and the compound 14a treated group are shown in FIG. 4A .
  • the scale bar of the upper panel is 200 ⁇ m
  • the scale bar of the lower panel is 100 ⁇ m.
  • FIG. 4a it was confirmed that Compound 1 and Compound 14a had a preventive effect on lymphedema tissue by inhibiting the development of adipose tissue in the epidermal layer.
  • peroxisome activated receptor ⁇ is a major regulator of lipogenesis, and as shown in FIG. 4b showing the results of immunofluorescence staining, the distribution of PPAR ⁇ in the epidermal layer of lymphedema tissue after treatment with Compound 1 and Compound 14a was decreased. inhibition was observed.
  • FIG. 4c showing a western blot picture
  • Compound 1 and Compound 14a reduced the expression of PPAR ⁇ , which is an lipogenic biomarker, and its target protein Fabp4 (fatty acid binding protein 4) in lymphedema tissue.
  • Fabp4 fatty acid binding protein 4
  • FIG. 4d showing the PPAR ⁇ and Fabp4 mRNA levels
  • compound 1 exhibits superior efficacy compared to the control, but compound 14a exhibits more significant efficacy compared to compound 1 (* P ⁇ 0.05, ** P ⁇ 0.01, ***P ⁇ 0.001).

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Abstract

본 발명은 림프부종의 치료, 예방 또는 개선 효과를 나타내는 신규 화합물, 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 의약품, 기능성 식품 또는 식품보충제, 또는 화장품으로 적용될 수 있다. 본 발명에 따른 유효성분 화합물은 TNFα 생성 억제 활성, 대사 안정성, 가용성, 혈액 노출 등 다양한 측면에서 림프부종에 대해 현저하게 개선된 효과를 나타낸다.

Description

림프부종의 치료, 예방 또는 개선용 조성물
본 발명은 림프부종의 치료, 예방 또는 개선 효과를 나타내는 신규 화합물, 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 의약품, 기능성 식품 또는 식품보충제, 또는 화장품으로 적용될 수 있다.
림프부종은 크게 선천적인 유전적 이상으로 인해 발생하는 일차성 림프부종과 수술, 방사선 치료 등으로 인해 후천적으로 발생하는 이차성 림프부종으로 나눌 수 있다. 특히, 상기 이차성 림프부종은 유방암, 자궁암에 대한 수술 치료 및/또는 방사선 치료 후의 후유증으로서 나타나는 경우가 매우 많다. 따라서, 수술이나 방사선 치료를 받은 유방암 또는 자궁암 환자는 잠재적인 이차성 림프부종 환자로 여겨지는 것이 일반적이다.
또한, 상기 림프부종은 그 정도에 따라 0기, 1기, 2기, 3기로 나눌 수 있다. 0기는 잠복기로 림프액 이동 능력은 저하되어 있지만 임상증상이 없는 상태를 말하고, 1기는 부종이 눈에 띄게 보이며 피부를 눌렀을 때 장기간 들어가 있는 상태를 말하고, 2기는 조직에 단백질이 축적되어 섬유경화증이 오는 시기로 피부를 눌러도 들어가지 않는 상태를 말하고, 3기는 피부가 과다하게 팽창되고 피부의 기능을 상실한 상태를 말한다.
이와 관련하여, 보건복지부에서 주관하고 국립암센터에서 운영하는 국가암정보센터에 따르면, 림프부종은 림프계 순환의 문제로 발생되어 붓는 증상으로 몸의 신진대사나 신장의 문제 등으로 나타나는 부종의 증상과는 다른 질환이기 때문에, 림프부종에 적합한 관리 및 치료 방법이 독립적으로 필요하다는 점을 명시하고 있다.
또한, 국민건강보험공단에 따르면, 이차성 림프부종의 치료법은 세계림프협회에서 추천하는 복합적 림프부종 요법이 가장 효과적이라고 언급하고 있다. 여기서, 상기 복합적 림프부종 요법은 림프마사지, 압박치료, 운동 및 피부관리를 가리킨다. 그러나, 이와 같은 복합적 림프부종 요법은 환자의 숙달 정도, 요법의 수행 횟수 및 간격에 따라 그 효능이 상이하게 나타날 뿐만 아니라, 치유에 장기간이 소요된다는 문제점과 그럼에도 불구하고 완치가 어렵다는 문제점을 함께 내포하고 있다.
이와 같이 림프부종에 대해서는 몸의 신진대사나 신장의 문제 등으로 나타나는 부종에서 적용되는 요법과는 다른 요법이 요구됨에도 불구하고, 지금까지 통상적으로 이용되고 있는 림프마사지, 압박치료, 운동, 피부관리 등과 같은 요법들은 근본적이고 효율적인 방안이 될 수 없다.
최근 한국 등록특허공보 제10-1533197호(2015.07.02)는 부테인(butein) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 림프부종 또는 지방부종의 예방 또는 치료 효과를 나타낼 수 있다는 점이 처음으로 밝혀졌다. 그러나, 약동학적 측면에서 유효성분 투여시 가용성 및 혈액 노출과 같은 부테인의 단점을 개선할 필요성이 확인되었으며, 이에 따라 약학적으로, 식품학적으로, 또는 화장품학적으로 개량된 후보물질은 당업계의 큰 미충족 수요로 여전히 남아 있다.
본 발명자들은 상기 종래 기술의 문제점을 인지하고, 림프부종에 대해 우수한 치료, 예방 또는 개선 효과를 가지는 화합물을 발견하기 위해 수많은 시행착오를 거치며 연구를 거듭하였다. 그 결과, TNFα 생성 억제 활성, 대사 안정성, 가용성, 혈액 노출 등 다양한 측면에서 림프부종에 대해 우수한 치료, 개선, 예방 효과를 가질 수 있는 화합물을 개발하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명의 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 화합물은 하기 화학식 1 또는 2로 표시된다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2021004725-appb-I000001
상기 화학식 1에서,
R1 및 R2는 서로 독립적으로 -H, -OH, -OR3, -OCOR3, -NO2, -CN, -SH, -SR3, -COR4, -COOR4, -CONHR4, -CON(R4)2, -NH2, -NHR4, -N(R4)2, -NHCOR4, -N(R5)COR4, C1-6의 알킬기, C2-6의 알케닐기, C2-6의 알키닐기, 할로겐, 알릴옥시기, C3-7의 사이클로알킬기, 알릴기, 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 원자수 3-7의 헤테로알릴기, 및 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 원자수 3-7의 헤테로사이클로알킬기로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이며,
상기 R3은 각각 독립적으로 C1-4의 C1-6의 알킬기, C3-10의 아릴기,
Figure PCTKR2021004725-appb-I000002
,
Figure PCTKR2021004725-appb-I000003
및
Figure PCTKR2021004725-appb-I000004
로 이루어진 군에서 선택되며,
상기 R6은 각각 독립적으로 -H, -OH, -0R7, -NO2, -CN, C1-6의 알킬기, C1-6의 알콕시기, 할로겐, -NH2, -NHR7, 및 -N(R7)2로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이며,
상기 R7은 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
상기 R4는 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
상기 R5는 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며;
[화학식 2]
Figure PCTKR2021004725-appb-I000005
상기 식에서,
R8 및 R9는 서로 독립적으로 -H, -OH, -OR10, -NO2, -CN, -SH, -SR10, -COR11, -COOR11, -CONHR11, -CON(R11)2, -NH2, -NHR11, -N(R11)2, -NHCOR11, -N(R12)COR11, C1-6의 알킬기, C2-6의 알케닐기, C2-6의 알키닐기, 할로겐, 알릴옥시기, C3-7의 사이클로알킬기, 알릴기, 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 원자수 3-7의 헤테로알릴기, 및 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 원자수 3-7의 헤테로사이클로알킬기로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이며,
상기 R10은 각각 독립적으로 C1-6의 알킬기, C3-10의 아릴기,
Figure PCTKR2021004725-appb-I000006
,
Figure PCTKR2021004725-appb-I000007
및
Figure PCTKR2021004725-appb-I000008
로 이루어진 군에서 선택되며,
상기 R13은 각각 독립적으로 -H, -OH, -NO2, -CN, C1-6의 알킬기, C1-6의 알콕시기, 할로겐, -NH2, -NHR14, 및 -N(R14)2로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이며,
상기 R14는 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
상기 R11은 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
상기 R12는 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택된다.
본 발명에서 사용되는 용어 "서로 독립적으로"는, 2개 이상의 치환기가 개별적으로 정의되어 서로 상이할 수도 있고 동일할 수도 있다는 것을 의미한다. 상기 치환기 R1, R2, R6, R8, R9 및 R13은 1개일 수도 있으며, 2개 이상, 예를 들어 2개, 3개, 4개 또는 5개일 수 있다. 치환기 R1, R2, R6, R8, R9 및 R13이 2개 이상인 경우, 각각은 서로 동일하거나 상이할 수 있으며, 오르쏘, 메타 또는 파라 위치에 있을 수 있다.
바람직하게는, 상기 화학식 1의 화합물에는 부테인(butein)이 포함되지 않는다. 부테인은 하기 화학식으로 표시되는 화합물이며, 본 명세서에서 화합물 1이라고 지칭된다:
[화합물 1]
Figure PCTKR2021004725-appb-I000009
본 발명에서, 알킬, 알케닐, 알키닐과 같은 용어는 직쇄(또는 선형이라고도 지칭함) 또는 측쇄(또는 분지형이라고도 지칭함)를 모두 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명에서 사용되는 용어 "할로겐"은 플루오르, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "알콕시"는 O-알킬을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "헤테로사이클로알킬"에 있어서, 헤테로는 산소, 질소 및 황 중에서 선택된 헤테로 원자가 고리 내에 포함된 것을 의미한다.
더 바람직한 일구현예에서, 본 발명에 따른 화학식 1 또는 2의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-히드록시-3-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-히드록시-4-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-플루오로-4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-플루오로-3-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(2-플루오로-4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-메틸페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-이소프로폭시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(2,4-디메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(p-톨릴)프로프-2-엔-1-온,
(E)-1-(4-클로로페닐)-3-(3,4-디히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
(E)-4-(3-(2,4-디아세톡시페닐)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)-1,2-페닐렌 디아세테이트,
(E)-4-(3-(2,4-비스(벤조일옥시)페닐)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)-1,2-페닐렌 디벤조에이트,
(E)-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 벤조에이트,
(E)-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-메틸벤조에이트,
(E)-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-메톡시벤조에이트, 또는
(E)-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-클로로벤조에이트.
본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용가능한 염" 및 "식품학적으로 허용가능한 염"은, 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있는 것으로, 예를 들면, 염산, 브롬화수소, 황산, 황산수소나트륨, 인산, 탄산 등의 무기산과의 염 또는 개미산, 초산, 옥살산, 벤조산, 시트르산, 타르타르산, 글루콘산, 게스티스산, 푸마르산, 락토비온산, 살리실릭산, 또는 아세틸살리실릭산(아스피린)과 같은 유기산과 함께 약학적으로 또는 식품학적으로 허용가능한 이들의 산의 염을 형성하거나, 또는 나트륨, 칼륨 등의 알칼리금속 이온과 반응하여 이들의 금속염을 형성하거나, 또는 암모늄 이온과 반응하여 또 다른 형태의 약학적으로 또는 식품학적으로 허용가능한 염을 형성할 수도 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 림프부종의 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 림프부종의 증상이 호전 또는 완치되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 림프부종이 억제 또는 지연되는 모든 행위를 의미한다.
상기 림프부종은 림프부종이 진행되어 추가로 발생하거나 또는 림프부종에 수반되어 발생하거나 또는 림프부종의 중증도가 높아진 증상, 질환, 상태 등을 모두 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 단독으로 함유하거나 또는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 약학 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다. 예컨대, 본 발명의 약학 조성물을 주사형 제형으로 제조하여 이를 30 게이지의 가는 주사 바늘로 피부를 가볍게 단자(prick)하는 방법, 또는 피부에 직접적으로 도포하는 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다.
경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
본 발명의 약학 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 질환의 증상에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 조성물의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1 ㎏ 당 약 0.01 ㎍ 내지 1,000 mg, 가장 바람직하게는 0.1 ㎍ 내지 100 mg일 수 있다. 그러나 상기 본 발명의 약학 조성물의 용량은 투여 경로 및 치료 횟수 뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량을 고려하여, 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자가 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
또한, 본 발명의 약학 조성물은 개별 치료제로 투여되거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 다른 치료제와 병용하여 투여되는 경우, 본 발명의 조성물과 다른 치료제는 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 상기 다른 치료제는 림프부종의 치료 또는 개선 효과를 갖는 것으로 이미 알려져 있는 물질일 수 있다. 상기 다른 치료제는 약물 요법 이외의 외과적 처치, 수술 등을 모두 포함한다
본 발명의 약학 조성물이 다른 치료제와 병용하여 투여될 경우, 본 발명의 조성물과 다른 치료제는 각각 별도의 용기로 분리시켜 제형화되거나, 동일한 용기에서 함께 제형화될 수 있다.
본 발명의 또다른 측면에서, 본 발명의 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 림프부종의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 림프부종의 치료 또는 예방 방법에서 각 용어는 특별히 언급하지 않는 한 상기 림프부종의 치료 또는 예방용 조성물에서 전술한 바와 동일한 의미를 갖는다.
용어 "개체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 용어 "비인간 동물"은 척추동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 및 설치류, 예컨대 마우스, 래트 및 기니 피그일 수 있다. 상기 개체는 바람직하게 인간일 수 있다. 용어 "개체"는 본 명세서에서 "대상체" 및 "환자"와 상호교환적으로 사용 가능하다.
본 발명에 따른 림프부종의 치료 또는 예방 방법에서, 본 발명의 조성물은 다른 치료제와 동시에, 순차적으로, 또는 개별적으로 개체에 투여될 수 있다. 상기 "동시" 투여는 본 발명의 조성물과 다른 치료제를 동일한 주입방법을 통해 한번에 투여되는 것을 의미한다. 상기 "순차적" 투여는 별개의 주입방법을 이용하여 본 발명의 조성물과 다른 치료제를 투여하되, 비교적 연속적으로 투여하는 것을 의미하는 것으로, 투여 간격에 소모되는 시간으로 가능한 최소한의 시간을 허락한다. 상기 "개별적" 투여는 일정 시간 간격을 두고 본 발명의 조성물과 다른 치료제를 투여하는 것을 의미한다. 상기 본 발명의 조성물 및 다른 치료제의 투여 방법은 환자의 치료 효능 및 부작용을 고려하여 당 분야의 통상의 지식을 가진 자가 적절하게 선택할 수 있다.
본 발명의 또다른 측면에서, 본 발명은 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물 또는 이의 식품학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 림프부종의 개선 또는 예방용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 식품 조성물에서 각 용어는 특별히 언급하지 않는 한 상기 림프부종의 치료 또는 예방용 약학 조성물에서 상기한 바와 동일한 의미를 갖는다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은 본 발명에 따른 조성물의 투여로 림프부종 또는 관련 증상의 정도가 감소되거나 호전되거나 진행이 지연되는 모든 행위를 의미한다.
상기 식품은 건강기능성 식품일 수 있다. 용어 "건강기능성 식품"이란, 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 의미한다. 여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나므로, 본 발명의 식품 조성물은 림프부종의 치료 효과를 증진 또는 개선시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
본 발명에 따른 식품 조성물에 유효성분으로서 포함되는 화합물 또는 이의 염의 양은 사용 목적(예방, 개선 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 화합물 또는 이의 염은 조성물 중 0.001 내지 20 중량%, 0.001 내지 15 중량% 또는 0.001 내지 10 중량%의 양으로 포함될 수 있다. 건강음료의 경우 100 mL를 기준으로 0.01 내지 2 g, 구체적으로 0.02 내지 2 g, 보다 구체적으로 0.3 내지 1 g을 가할 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 식품 조성물을 제조하는 과정에서 식품 조성물에 첨가되는 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 염은 필요에 따라 그 함량을 적절히 가감할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 효능 증진을 위해 상기 화합물 또는 이의 염 외에 추가 성분을 더 포함할 수 있다.
상기 식품 조성물은 환제, 정제, 과립, 분말, 캡슐, 액상의 용액으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형일 수 있다.
또한, 상기 식품의 종류는 특별한 제한되지 않는다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 식품 조성물은 통상의 식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물이 음료 조성물일 경우 필수 성분으로서 상기 화합물 또는 이의 염을 지시된 비율로 함유하는 외에는 액체 성분에 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
본 발명의 또다른 측면에서, 본 발명은 화학식 1 또는 2로 표시되는 화합물 또는 이의 화장품학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 림프부종의 개선 또는 예방용 화장품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 화장품 조성물에서 각 용어는 특별히 언급하지 않는 한 상기 약학 조성물 또는 식품 조성물에서 전술한 바와 동일한 의미를 갖는다.
본 발명의 화장품 조성물은 단독으로 적용할 수 있을 뿐만 아니라, 본 발명의 약학 조성물 및/또는 식품 조성물과 동시에 적용 가능하며, 림프부종의 치료, 예방 또는 개선 효과를 증진시킬 수 있다.
본 발명에 따른 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 화장품 조성물에 유효성분으로 포함되는 화합물 또는 이의 염의 함량은 사용 목적(예방, 개선 또는 치료적 처치), 사용 기간, 제형의 종류, 투여 경로, 대상체의 피부 상태 등 다양한 요인을 고려하여 적합하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 화합물 또는 이의 염의 함량은 화장품 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 10 중량%, 예컨대 0.01 내지 5 중량%일 수 있다.본 발명에 따른 화장품 조성물은 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형 등의 형태로 제조될 수 있다. 이때, 본 발명의 화장품 조성물은 패치류, 연고류, 피부접착용 겔류, 크림류, 팩류, 화장수류, 에센스류, 스프레이류, 마스크류, 파운데이션류, 메이크업베이스류, 세정제류, 수(W)형, 유(O)형, 실리콘(S)형, 수중유(O/W)형, 유중수(W/O)형, 실리콘중수(W/S)형, 수중실리콘(S/W)형, 고체상, 액상 등의 다양한 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 화장품 조성물은 효능 증진을 위해 상기 추출물 이외에 추가 성분을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 추가 성분은 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 염의 효능을 상쇄시키거나 감소시키지 않는다면 제한이 없다. 선택적으로, 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 담체 등을 추가로 포함할 수 있다. 선택적으로, 화장품 기능을 부가하거나 증대시키기 위하여 전형적으로 사용되는 성분들이 또한 추가될 수 있다. 예를 들면, 안정화제, 유화제, 점증제, 보습제, 액정 막강화제, pH 조절제, 항균제, 수용성 고분자, 피막제, 금속 이온 봉쇄제, 아미노산, 유기 아민, 고분자 에멀션, pH 조정제, 피부 영양제, 산화 방지제, 산화 방지조제, 방부제, 향료 등에서 선택되는 하나 이상의 수성 첨가제; 및 유지류, 왁스류, 탄화 수소유, 고급 지방산유, 고급 알콜, 합성 에스테르유 및 실리콘유 등에서 선택되는 하나 이상의 유성 첨가제 등이 추가될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 림프부종의 크기를 유의적으로 감소시킬 수 있으며, 림프부종을 치료하거나 개선하기 위해 종래에 사용되던 요법에 비해 더 짧은 시간 내에 림프부종의 크기 감소 효과를 얻을 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 조성물은 림프부종의 신규 생성 또는 확장을 억제, 차단, 예방하는 효과를 나타낸다.
따라서, 본 발명에 따른 조성물은 림프부종을 이미 앓고 있는 대상체에 대해서는 단시간내에 원하는 정도로 우수한 치료 및 개선 효과를 나타낼 수 있다. 또한, 림프부종을 앓을 가능성을 잠재적으로 보유하고 있는 대상체(예컨대, 암 수술을 받거나 및/또는 방사선 치료를 받은 환자)에 대해서는 림프부종을 미리 예방하는 효과를 나타낼 수 있고, 이에 따라 림프부종의 발병률을 현저하게 낮춰준다.
이와 같은 본 발명의 조성물은 의약품의 형태로 제공될 수도 있고, 또다르게는 기능성 식품 또는 식품보충제의 형태로 제공될 수도 있으며, 또다르게는 화장품의 형태로 제공될 수도 있다.
도 1은 마우스 복막 마크로파지에서 LPS-유도된 TNFα 생성 수준을 나타내는 그래프이다.
도 2a는 마우스에서 유도된 림프부종에 대해 정상군, 대조군, 본 발명의 화합물 처리군에서 수술 후 7일째에 림프부종의 크기 변화를 보여주는 사진이며, 도 2b는 각각의 군에서 림프부종의 체적을 비교하는 그래프이다.
도 3a는 정상군, 대조군, 본 발명의 화합물 처리군에서 면역형광 분석을 통해 촬영한 마우스의 오른쪽 뒷다리의 H&E 이미지를 나타내는 사진이다.
도 3b는 마우스의 오른쪽 뒷다리 림프부종 조직에서 TNFα의 mRNA 발현을 비교하는 그래프이다.
도 4a는 정상군, 대조군, 본 발명의 화합물 처리군에서 면역형광 분석을 통해 촬영한 마우스의 오른쪽 뒷다리의 H&E 이미지를 나타내는 사진이다.
도 4b는 림프부종 조직의 표피층에서 지질생성의 주요 조절인자인 PPARγ의 분포를 확인할 수 있는 사진이다.
도 4c는 림프부종 조직에서 PPARγ 및 이의 타겟 단백질 Fabp4의 발현을 확인할 수 있는 웨스턴블롯 사진이다.
도 4d는 림프부종 조직에서 PPARγ 및 이의 타겟 단백질 Fabp4의 발현을 비교하는 그래프이다.
이하 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다. 또한, 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 취지를 해하지 않는 범위 내에서 본 발명에 대해 다양한 변형 및 수정을 가할 수 있을 것이다. 본 명세서에서 특별히 정의되지 않은 용어들에 대해서는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것으로 이해되어야 할 것이다.
하기 실시예에서 모든 동물 시험은 성균관대학교 의과대학의 실험동물운영위원회(Institutional Animal Care and Use Committee, IACUC)의 승인을 받고 수행되었다(승인 번호: SKKUIACUC-20150037). 모든 방법들은 승인된 가이드라인에 따라 진행하였다. 후천적 림프부종을 위한 뮤린 모델은 기 구축된 프로토콜을 이용하여 수컷 ICR 마우스의 다리에서 수술에 의해 유도하였다. 요약하면, 천서혜부 림프절, 슬와 림프절, 심서혜부 림프절 및 대퇴부 림프관을 포함하는 주요 림프 부위들을 제거하고, 마우스의 오른쪽 아래 다리를 마취하에 제한적으로 소작하였다(cauterized).
화학식 1 또는 2의 화합물들은 scheme 1 또는 scheme 2에 따라 제조되었다. 예를 들어, 후술하는 화합물 1, 7a-m, 8a-b, 및 9는 scheme 1에 따라 제조되었으며, 화합물 14a-d는 scheme 2에 따라 제조되었다.
[scheme 1]
Figure PCTKR2021004725-appb-I000010
상기 scheme 1에서 시약 및 조건은 다음과 같다:
(i) 제법 A: 60% KOH(aq), 에탄올, 실온, 6 h, 60 ~ 72%; 제법 B: 10% CuBr2, 에틸아세테이트, 80℃, 8 h, 42 ~ 60%;
(ii) 무수 아세트산, 환류, 밤새, 93% 또는 벤조일 클로라이드, TEA, THF, 6 h, 65%;
(iii) KOH(s), 메탄올, 환류, 4 h, 60%.
[scheme 2]
Figure PCTKR2021004725-appb-I000011
상기 scheme 2에서 시약 및 조건은 다음과 같다:
(iv) 메톡시메틸 클로라이드, K2CO3, 아세톤, 실온, 4 h, 61%;
(v) 메톡시메틸 클로라이드, K2CO3, 아세톤, 환류, 2.5 h, 70%;
(vi) 60% KOH(aq), 에탄올, 실온, 6 h, 70%;
(vii) 아실 클로라이드, TEA, DMF, 실온, 2~3 h, 60~73%;
(viii) 6N HCl(aq), 에탄올, 실온, 4 h, 60~75%.
하기에서는 본 발명에 따른 화합물의 제조예를 구체적인 제조단계와 그에 상응하는 대표적인 예들을 함께 기재한다. 치환기가 다른 화합물들의 경우에도 유사한 단계를 통해 실제로 제조되었으나, 본 명세서에 모든 제조예들을 명시하지는 않았다. 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 하기의 대표적인 예들을 참조하여 치환기가 다른 화학식 1 또는 2의 화합물들을 용이하게 제조할 수 있을 것이다.
제법 A
화합물 1: (E) -1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3,4-디히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000012
화합물 1은 부테인을 나타낸다.
3,4-디히드록시벤즈알데히드 (화합물 6a, 1.0 g, 7.2 mmol) 및 1-(2,4-디히드록시페닐)에탄-1-온 (화합물 5a, 1.1 g, 7.2 mmol)을 에탄올(10 mL)에 용해시켰다. 60% KOH (aq) (1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 6시간 동안 실온에 놔두었다. 감압하에 용매를 제거하고, 잔여물을 디에틸 에테르 30 ml로 3회 추출하였다. 디에틸 에테르 층을 물(30 ml x 3)로 3회 세척하고, 무수 MgSO4로 건조시켰다.
용매를 제거한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔:n-헥산-에틸아세테이트=1:1)에 의해 화합물 1을 수득하였다(황색 고체, 42% 수율). 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.95 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.73 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.54 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.20 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.12 (1H, dd, J = 8.4, 2.4 Hz), 6.83 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.43 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.31 (1H, d, J = 2.4 Hz); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.50, 167.52, 166.37, 149.95, 146.86, 146.11, 133.30, 128.45, 123.64, 118.31, 116.63, 115.84, 114.74, 109.17, 103.85; LRMS (ESI) calcd. for C15H13O5 [M+H]+: 273.08, found: 273.10; HRMS (ESI) calcd. for C15H13O5 [M+H]+: 273.0685, found: 273.0754; M.P = 214.7℃.
제법 B
1-(4-히드록시-2-메틸페닐)에탄-1-온 (화합물 5b, 150 mg, 1.0 mmol), 2,4-디히드록시벤즈알데히드 (화합물 6a, 138 mg, 1.0 mmol) 및 CuBr2 (22 mg, 0.1 mmol)를 가압 튜브에서 실온에서 5 ml 에틸아세테이트에 용해시키고, 반응 혼합물을 80℃에서 교반하였다. 12시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트(Celite)로 여과하였다.
유기 층을 진공 조건에서 농축시키고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔:n-헥산-에틸아세테이트=1:1)에 의해 화합물 7h를 수득하였다(황색 고체, 66% 수율).
화합물 7a: (E) -1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-히드록시-3-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000013
제법 A를 통해 화합물 7a가 단리되었으며(황색 고체, 46% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 8.06 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.69 (1H, d, J = 15.2 Hz), 7.55 (1H, d, J = 15.2 Hz), 7.27 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.12 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 6.75 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.31 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.19 (1H, d, J = 2.4 Hz) 3.84 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.4, 167.5, 166.4, 151.7, 148.0, 145.5, 133.4, 129.5, 123.5, 119.2, 115.2, 114.7, 112.5, 109.2, 103.8, 56.56; LRMS (ESI) calcd. for C16H15O5 [M+H]+: 287.09, found: 287.10; HRMS (ESI) calcd. for C16H15O5 [M+H]+: 287.0914, found: 287.0908; M.P = 198.1℃.
화합물 7b: (E) -1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-히드록시-4-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000014
제법 A를 통해 화합물 7b가 단리되었으며(황색 고체, 48% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.96 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.74 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.59 (1H, d, J = 15.2 Hz), 7.25 (1H, d, J = 2.4 Hz), 7.20 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 6.98 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.43 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.31 (1H, d, J = 2.4 Hz) 3.92 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.4, 167.5, 166.4, 151.7, 148.0, 145.5, 133.4, 129.5, 123.5, 119.2, 115.2, 114.7, 112.5, 109.2, 103.8, 56.39; LRMS (ESI) calcd. for C16H15O5 [M+H]+: 287.09, found: 287.10; HRMS (ESI) calcd. for C16H15O5 [M+H]+: 287.0914, found: 287.0908; M.P = 206.4℃
화합물 7c: (E) -1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-플루오로-4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000015
제법 A를 통해 화합물 7c가 단리되었으며(황색 고체, 53% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD δ 7.99 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.75 (1H, d, J = 15.2 Hz), 7.65 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.57 (1H, dd, J = 12.4, 2.0 Hz), 7.39 (1H, dd, J = 8.4, 1.6 Hz), 6.97 (1H, t, J = 8.8 Hz), 6.43 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.30 (1H, d, J = 2.4 Hz); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.2, 167.5, 166.5, 154.2, 151.9, 149.1, 144.1, 133.5, 127.4, 119.9, 118.9, 116.5, 114.6, 109.2, 103.8; LRMS (ESI) calcd. for C15H12O4F [M+H]+: 275.07, found: 275.10; HRMS (ESI) calcd. for C15H12O4F [M+H]+: 275.0714, found: 275.0709; M.P = 210.5℃.
화합물 7d: (E) -1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-플루오로-3-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000016
제법 A를 통해 화합물 7d가 단리되었으며(황색 고체, 52% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.98 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.74 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.67 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.32 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 7.25 - 7.21 (1H, m), 7.15 - 7.10 (1H, m), 6.44 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.31 (1H, d, J = 2.4 Hz); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.2, 167.6, 166.7, 155.7, 146.7, 144.3, 133.5, 133.2, 122.0, 121.4, 118.5, 117.4, 114.6, 109.3, 103.8; LRMS (ESI) calcd. for C15H12O4F [M+H]+: 275.07, found: 275.10; HRMS (ESI) calcd. for C15H12O4F [M+H]+: 275.0714, found: 275.0709; M.P = 252.4℃.
화합물 7e: (E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000017
제법 A를 통해 화합물 7e가 단리되었으며(황색 고체, 43% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.98 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.80 (1H, d, J = 15.2 Hz), 7.64 - 7.60 (3H, m), 6.86 (2H, d, J = 8.0 Hz), 6.43 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.31 (1H, d, J = 2.4 Hz); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.5, 167.5, 166.3, 161.5, 145.6, 133.3, 131.8, 127.8, 118.5, 116.9, 114.7, 109.1, 103.8; LRMS (ESI) calcd. for C15H13O4 [M+H]+: 257.08, found: 257.10; HRMS (ESI) calcd. for C15H13O4 [M+H]+: 257.0801, found: 257.0801; M.P = 205.7℃.
화합물 7f: (E) -1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000018
제법 A를 통해 화합물 7f가 단리되었으며(황색 고체, 52% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.00 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.66 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.51 (1H, d, J = 15.2 Hz), 7.19 (1H, d, J = 2.4 Hz), 7.11 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz), 6.91 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.83 (1H, d, J = 8.0 Hz); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 191.0, 163.7, 149.8, 146.2, 132.2, 131.2, 128.4, 123.4, 119.5, 116.6, 116.4, 115.6; LRMS (ESI) calcd. for C15H13O4 [M+H]+: 257.08, found: 257.10; HRMS (ESI) calcd. for C15H13O4 [M+H]+: 257.0808, found: 257.0803; M.P = 208.0℃.
화합물 7g: (E) -3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(2-플루오로-4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000019
제법 A를 통해 화합물 7g가 단리되었으며(황색 고체, 53% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.75 (1H, t, J = 8.8 Hz), 7.62 (1H, dd, J = 15.6, 2.0 Hz), 7.28 (1H, dd, J = 15.2, 2.4 Hz), 7.14 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.19 (1H, d, J = 2.4 Hz), 7.04 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 6.82 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.72 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 6.61 (1H, dd, J = 13.2, 2.4 Hz); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 189.5, 165.0, 150.0, 146.8, 133.6, 128.2, 123.6, 123.2, 119.6, 116.6, 115.4, 113.1, 104.2, 103.9; LRMS (ESI) calcd. for C15H12O4F [M+H]+: 275.08, found: 275.10; HRMS (ESI) calcd. for C15H12O4F [M+H]+: 275.0714, found: 275.0708; M.P = 207.8℃.
화합물 7h: (E) -3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-메틸페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000020
제법 B를 통해 화합물 7h가 단리되었으며(황색 고체, 66% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.54 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.41 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.12 (1H, d, J = 2.4 Hz), 7.09 (1H, d, J = 16.0 Hz), 7.02 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz), 6.81 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.73 - 6.70 (2H, m), 2.42 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 197.0, 161.3, 149.9, 147.3, 146.8, 141.7, 132.5, 131.6, 128.1, 124.0, 123.4, 119.2, 116.5, 115.4, 113.3, 21.26; LRMS (ESI) calcd. for C16H15O4 [M+H]+: 271.10, found: 271.10; HRMS (ESI) calcd. for C16H15O4 [M+H]+: 271.0965, found: 271.0958; M.P = 208.2℃.
화합물 7i: (E) -3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000021
제법 B를 통해 화합물 7i가 단리되었으며(황색 고체, 46% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.59 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.51 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.38 (1H, d, J = 15.2 Hz), 7.12 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.00 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 6.80 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.53 (1H, d, J = 2.0 Hz), 6.47 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 3.91 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.0, 164.5, 162.5, 149.5, 146.8, 144.5, 133.7, 128.6, 125.1, 123.3, 121.7, 116.5, 115.2, 108.9, 100.1, 56.15; LRMS (ESI) calcd. for C16H15O5 [M+H]+: 287.09, found: 287.10; HRMS (ESI) calcd. for C16H15O5 [M+H]+: 287.0914, found: 287.0906; M.P = 200.4℃.
화합물 7j: (E) -3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-이소프로폭시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000022
제법 A를 통해 화합물 7j가 단리되었으며(황색 고체, 53% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.58 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.47 (2H, d, J = 2.8 Hz), 7.11 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.00 (1H, dd, J = 8.4, 2.4 Hz), 6.81 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.51 (1H, d, J = 2.4 Hz), 6.45 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 4.69 (1H, hept, 6.0 Hz), 1.40 (6H, d, J = 6.0 Hz); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.4, 160.6, 146.8, 143.9, 133.7, 128.7, 125.5, 123.1, 122.9, 116.5, 115.2, 109.1, 102.2, 72.21, 22.43; LRMS (ESI) calcd. for C18H19O5 [M+H]+: 315.12, found: 315.20; HRMS (ESI) calcd. for C18H19O5 [M+H]+: 315.1227, found: 315.1219; M.P = 80.4℃.
화합물 7k: (E) -3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(2,4-디메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000023
제법 A를 통해 화합물 7k가 단리되었으며(황색 고체, 63% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.65 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.51 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.34 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.12 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.00 (1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz), 6.81 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.65 - 6.61 (2H, m), 3.93 (3H, s), 3.89 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 193.3, 166.0, 162.0, 149.7, 146.8, 145.0, 133.4, 128.5, 124.9, 123.4, 116.5, 115.2, 106.7, 99.53, 56.20; LRMS (ESI) calcd. for C17H17O5 [M+H]+: 301.10, found: 301.10; HRMS (ESI) calcd. for C17H17O5 [M+H]+: 301.1071, found: 301.1065; M.P = 162.9℃.
화합물 7l: ( E )-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(p-톨릴)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000024
제법 A를 통해 화합물 7l이 단리되었으며(황색 고체, 66% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.96 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.68 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.50 (1H, d, J = 15.2 Hz), 7.36 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.20 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.11 (1H, dd, J = 8.4, 2.4 Hz), 6.83 (1H, d, J = 8.4 Hz), 2.44 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 192.2, 150.0, 147.0, 146.8, 145.0, 137.1, 130.4, 129.6, 128.3, 123.6, 119.6, 116.6, 115.7, 21.64; LRMS (ESI) calcd. for C16H15O3 [M+H]+: 255.10, found: 255.10; HRMS (ESI) calcd. for C16H15O3 [M+H]+: 255.1016, found: 255.1014; M.P = 190.9℃.
화합물 7m: (E) -1-(4-클로로페닐)-3-(3,4-디히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온
Figure PCTKR2021004725-appb-I000025
제법 A를 통해 화합물 7m이 단리되었으며(황색 고체, 63% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.06 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.71 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.56 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.49 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.21 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.14 (1H, dd, J = 8.4, 2.4 Hz), 6.84 (1H, d, J = 8.4 Hz); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 191.1, 147.8, 146.9, 140.0, 138.2, 131.1, 129.9, 128.1, 123.8, 119.1, 116.6, 115.8; LRMS (ESI) calcd. for C15H12O3Cl [M+H]+: 275.05, found: 275.10; HRMS (ESI) calcd. for C15H12O3Cl [M+H]+: 275.0469, found: 275.0465; M.P = 205.4℃.
화합물 8a: (E) -4-(3-(2,4-디아세톡시페닐)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)-1,2-페닐렌 디아세테이트
Figure PCTKR2021004725-appb-I000026
Ac2O (8 mL) 중 (E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3,4-디히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온(화합물 1, 500 mg, 1.8 mmol) 용액을 120-130 ℃로 가열하고, 이 온도에서 5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 생성된 혼합물을 진공 조건에서 농축시켰다. 잔여물로부터 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔:n-헥산-에틸아세테이트=1:2)에 의해 화합물 8a를 397 mg 수득하였다(백색 고체, 90% 수율). 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.86 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.63 - 7.61 (2H, m), 7.58 (1H, d, J = 16.0 Hz), 7.35 (1H, d, J = 12.4 Hz), 7.31 (1H, d, J = 5.2 Hz), 7.22 (1H, dd, J = 8.4, 2.4 Hz), 7.10 (1H, d, J = 2.4 Hz), 2.33 (3H, s), 2.31 (6H, d, J = 3.2 Hz), 2.23 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 188.8, 168.6, 168.0, 153.4, 149.5, 143.7, 142.4, 142.3, 133.1, 131.2, 128.9, 127.5, 125.4, 124.1, 123.3, 119.6, 117.6, 20.76, 20.32; LRMS (ESI) calcd. for C23H21O9 [M+H]+: 441.12, found: 441.10; HRMS (ESI) calcd. for C23H21O9 [M+H]+: 441.1180, found: 441.1171; M.P = 131.3℃.
화합물 8b: (E) -4-(3-(2,4-비스(벤조일옥시)페닐)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)-1,2-페닐렌 디벤조에이트
Figure PCTKR2021004725-appb-I000027
(E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3,4-디히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온 (화합물 1, 500 mg, 1.8 mmol)을 무수 피리딘(5 mL)에 용해시키고, 벤조일클로라이드(2.1 ml, 18.4 mmol)로 처리하고, 4시간 동안 환류하고, 22-24 ℃에서 밤새 놔두고, 다음날 차가운 H2O로 희석시켰다. 에틸 아세테이트 층을 물(30 ml x 3)로 3회 세척하고, 무수 MgSO4로 건조시켰다.
용매를 제거한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔:n-헥산-에틸아세테이트=1:2)에 의해 화합물 8b를 413 mg 수득하였다(백색 고체, 60% 수율). 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.24 - 8.21 (2H, m), 8.16 - 8.13 (2H, m), 8.05 - 7.99 (6H, m), 7.65 - 7.57 (7H, m), 7.51 - 7.37 (11H, m); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 188.6, 164.2, 163.4, 153.7, 149.7, 143.7, 142.4, 134.2, 133.4, 132.7, 131.1, 129.7, 129.6, 129.4, 129.2, 128.9, 128.4, 128.1, 127.8, 125.7, 124.1, 123.2, 120.1, 118.0; LRMS (ESI) calcd. for C43H29O9 [M+H]+: 689.18, found: 689.20; HRMS (ESI) calcd. for C43H29O9 [M+H]+: 689.1812, found: 689.1794; M.P = 36.7℃.
화합물 10: 1-(2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐)에탄온
12 mL 아세톤 중 1-(2,4-디히드록시페닐)에탄온 (화합물 5a, 1.5 g, 10 mmol)을 K2CO3 (1.4 g, 10 mmol)에 첨가하고, 실온에서 Ar 대기 조건에서 클로로(메톡시)메탄 (885 mg, 11 mmol)을 느리게 교반하면서 첨가하였다.
반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하고, 여과하였다. 고체를 EtOAc (80 mL)로 세척하고, 여과액을 NaH2PO4 (sat. 50 mL) 및 물 (80 mL)로 세척한 후, MgSO4 로 건조시키고 농축시켰다.
조 생성물로부터 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔:n-헥산-에틸아세테이트=1:4)에 의해 화합물 10을 1.2 g 수득하였다(황백색 고체, 61% 수율). 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.49 (1H, s), 7.85 (1H, d, J = 8.8 Hz) 6.60 (1H, dd, J = 8.8, 2.4 Hz), 5.53 (1H, d, J = 2.4 Hz), 5.27 (2H, s), 3.39 (3H, s), 2.57 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 203.1, 163.5, 133.2, 114.5, 108.0, 102.9, 93.62, 55.90, 26.71; HRMS (ESI) calcd. for C10H12O4 [M+H]+: 197.08, found: 197.10; HRMS (ESI) calcd. for C10H12O4 [M+H]+: 197.0825, found: 197.0815; M.P = 60.2℃.
화합물 11: 3,4-비스(메톡시메톡시)벤즈알데히드
포타슘 카보네이트(4.0 g, 19 mmol) 및 메톡시메틸 클로라이드(2.3 g, 2.2 mL, 19 mmol)을 아세톤(40 mL) 중 3,4-디히드록시벤즈알데히드 (화합물 6a, 1 g, 7.2 mmol) 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2.5시간 동안 환류하고, 침전물을 여과하였다. 이어서, 용매를 감압하에 제거하였다.
잔여물을 CH2Cl2 (30 mL)에 용해시키고, 물(80 mL)로 세척하고, MgSO4로 건조하고 농축시켰다.
조 생성물로부터 실리카 크로마토그래피(n-헥산-에틸아세테이트, 1:4)에 의해 화합물 11을 1.1 g 수득하였다(백색 고체, 70% 수율). 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.85 (1H, s), 7.60 - 7.58 (2H, m), 7.31 (1H, d, J = 8.0 Hz), 5.30 (4H, d, J = 23.6 Hz), 3.42 (6H, d, J = 2.0 Hz); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 191.3, 152.1, 146.9, 130.5, 126.1, 115.6, 115.3, 94.67, 94.34, 55.97, 55.79; HRMS (ESI) calcd. for C11H14O5 [M+H]+: 227.09, found: 227.10; HRMS (ESI) calcd. for C11H14O5 [M+H]+: 227.0935, found: 227.0935; M.P = 44.6℃.
화합물 12: (E) -3-(3,4-비스(메톡시메톡시)페닐)-1-(2-히드록시-4-(메톡시메톡시)-페닐)-프로프-2-엔-1-온
1-(2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐)-에탄온 (화합물 10, 1.0 g, 5.09 mmol) 및 3,4-비스(메톡시메톡시)벤즈알데히드 (화합물 11, 1.2 g, 5.09 mmol)를 에탄올 (10 mL) 중에 용해시켰다. 60% KOH (aq) (2 mL)를 첨가하고, 혼합물을 6시간 동안 실온에 놔두었다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔여물을 디에틸 에테르 30 ml로 3회 추출하였다. 디에틸 에테르 층을 물(30 ml x 3)로 3회 세척하고, 무수 MgSO4로 건조시켰다.
용매를 제거한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔:n-헥산-에틸아세테이트=1:2)에 의해 화합물 12를 1.3 g 수득하였다(황색 고체, 63% 수율). 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (700 MHz, DMSO-d6) δ 13.36 (1H, s), 8.25 (1H, dd, J = 9.1, 3.5 Hz), 7.88 (1H, dd, J = 15.4, 3.5 Hz), 7.77 (1H, dd, J = 15.4, 3.5 Hz), 7.76 - 7.68 (1H, m), 7.52 - 7.50 (1H, m), 7.18 (1H, dd, J = 8.4, 4.2 Hz), 6.66 - 6.64 (1H, m), 6.59 - 6.58 (1H, m) 5.29 (3H, dd, J = 13.3, 4.2 Hz) 3.45 (3H, d, J = 4.2 Hz), 3.41 (6H, dd, J = 7.7, 4.2 Hz); 13C NMR (175 MHz, DMSO-d6) δ 133.0, 129.2, 125.2, 120.1, 117.7, 117.0, 115.2, 108.6, 103.6, 95.53, 95.12, 94.33, 56.51, 56.43, 56.37; HRMS (ESI) calcd. for C21H24O8 [M+H]+: 405.16, found: 405.10; HRMS (ESI) calcd. for C21H24O8 [M+H]+: 405.1582, found: 405.1592; M.P = 107.8℃.
화합물 13a: (E) -2-(3-(3,4-비스(메톡시메톡시)페닐)아크릴로일)-5-(메톡시메톡시)페닐 벤조에이트
(E)-3-(3,4-비스(메톡시메톡시)페닐)-1-(2-히드록시-4-(메톡시메톡시)페닐)프로프-2-엔-1-온 (화합물 12, 500mg, 1.0 mmol)을 메틸렌 클로라이드 (10 mL) 중에 용해시켰다. TEA (164 μL, 1.18 mmol) 및 벤조일클로라이드 (137 μL, 1.18 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 6시간 동안 실온에 놔두었다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔여물을 에틸 아세테이트 20 ml로 3회 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 물(20 ml x 3)로 3회 세척하고, 무수 MgSO4로 건조시켰다.
용매를 제거한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔:n-헥산-에틸아세테이트=1:2)에 의해 화합물 13a를 430 mg 수득하였다(황색 고체, 86% 수율). 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (700 MHz, DMSO-d6) δ 7.97 (2H, d, J = 7.7 Hz), 7.92 (1H, d, J = 9.1 Hz), 7.43 (1H, d, J = 11.9 Hz), 7.35 (1H, d, J = 14.7 Hz), 7.32 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.25 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.12 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.08 (2H, d, J = 9.1 Hz), 5.33 (2H, s), 5.23 (4H, d, J = 19.6 Hz), 3.42 (9H, t, J = 8.1 Hz), 2.38 (3H, s) 13C NMR (175 MHz, DMSO-d6) δ 188.8, 164.8, 160.7, 150.9, 149.8, 147.2, 144.8, 143.8, 132.1, 130.3, 129.7, 129.5, 129.0, 126.4, 126.1, 124.4, 124.0, 117.2, 116.9, 114.1, 111.7, 95.49, 95.12, 94.52, 56.43, 56.36, 56.32, 21.63; HRMS (ESI) calcd. for C29H30O9 [M+H]+: 523.20, found: 523.20; HRMS (ESI) calcd. for C29H30O9 [M+H]+: 523.2006, found: 523.2006; M.P = 47.2℃.
화합물 14a: (E) -2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 벤조에이트
Figure PCTKR2021004725-appb-I000028
(E)-2-(3-(3,4-비스(메톡시메톡시)페닐)아크릴로일)-5-(메톡시메톡시)페닐 벤조에이트 (화합물 13a, 400 mg, 0.787 mmol)를 메탄올 (1.5 mL) 중에 용해시키고, 0.25 mL의 진한 염산을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 2시간 동안 45℃로 가열하였다. 감압하에 용매를 증발시켜 고체 잔여물을 수득하고, 이를 에틸아세테이트 (10 mL) 중에 용해시키고 NaHCO3-포화 용액 (3 x 20 mL)으로 세척하였다. 유기상은 MgSO4로 건조시켰다.
용매를 제거한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔:n-헥산-에틸아세테이트=1:1)에 의해 화합물 14a를 220 mg 수득하였다(황색 고체, 74% 수율). 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.12 (2H, dd, J = 8.4, 1.6 Hz), 7.75 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.65 - 7.60 (1H, m), 7.47 (2H, t, J = 8.4 Hz), 7.42 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.11 (1H, d, J = 16.0 Hz), 6.89 - 6.85 (2H, m), 6.73 - 6.70 (2H, m); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 192.1, 166.5, 152.5, 149.8, 146.7, 134.9, 133.1, 131.2, 130.4, 129.7, 1.9, 125.2, 123.4, 123.0, 116.4, 115.5, 114.3, 111.4; LRMS (ESI) calcd. for C22H17O6 [M+H]+: 377.10, found: 377.10; HRMS (ESI) calcd. for C22H17O6 [M+H]+: 377.1020, found: 377.1007; M.P = 204.9℃.
화합물 14b: (E) -2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-메틸벤조에이트
Figure PCTKR2021004725-appb-I000029
화합물 14b가 단리되었으며(황색 고체, 51% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.98 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.74 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.39 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.26 (2H, d, J = 7.6 Hz), 7.08 (1H, d, J = 16.0 Hz), 6.92 (1H, d, J = 2.0 Hz), 6.86 - 6.82 (2H, m), 6.71 - 6.68 (2H, m), 2.40 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 192.1, 166.6, 163.5, 152.6, 149.8, 146.6, 146.1, 133.1, 131.2, 130.3, 128.0, 127.5, 125.3, 123.4, 123.2, 116.3, 115.4, 114.3, 111.4, 21.72; LRMS (ESI) calcd. for C23H19O6 [M+H]+: 391.12, found: 391.10; HRMS (ESI) calcd. for C23H19O6 [M+H]+: 391.1176, found: 391.1171; M.P = 185.7℃.
화합물 14c: ( E )-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-메톡시벤조에이트
Figure PCTKR2021004725-appb-I000030
화합물 14c가 단리되었으며(갈색 고체, 44% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.05 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.73 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.39 (1H, d, J = 15.6 Hz), 7.09 (1H, d, J = 15.6 Hz), 6.95 - 6.93 (3H, m), 6.86 - 6.82 (2H, m), 6.71 - 6.69 (2H, m), 3.85 (3H, s); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 192.1, 166.2, 165.7, 163.5, 152.7, 149.8, 146.6, 146.4, 133.4, 133.1, 128.0, 125.5, 123.4, 123.3, 122.3, 116.3, 115.4, 115.0, 114.3, 111.4, 56.07; LRMS (ESI) calcd. for C23H19O7 [M+H]+: 407.11, found: 407.10; HRMS (ESI) calcd. for C23H19O7 [M+H]+: 407.1125, found: 407.1116; M.P = 161.1℃.
화합물 14d: (E) -2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-클로로벤조에이트
Figure PCTKR2021004725-appb-I000031
화합물 14d가 단리되었으며(황색 고체, 61% 수율), 1H NMR, 13C NMR, LRMS, HRMS 및 M.P 데이터는 다음과 같이 측정되었다:
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.08 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.76 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.47 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.40 (1H, d, J = 16.0 Hz), 7.09 (1H, d, J = 16.0 Hz), 6.96 (1H, d, J = 2.4 Hz), 6.88 - 6.85 (2H, m), 6.73 - 6.71 (2H, m); 13C NMR (100 MHz, MeOD) δ 191.9, 163.6, 152.5, 149.9, 146.7, 146.6, 133.2, 130.0, 129.1, 127.9, 125.0, 123.4, 123.0, 116.4, 115.4, 114.4, 111.4; LRMS (ESI) calcd. for C22H16O6Cl [M+H]+: 411.06, found: 411.10; HRMS (ESI) calcd. for C22H16O6Cl [M+H]+: 411.0630, found: 411.0620; M.P = 102.8℃.
실험예
화합물 1은 부테인(butein)으로서 한국 등록특허공보 제10-1533197호(2015.07.02)에서 림프부종 치료 효과에 대해 개시되어 있다. 그러나, 화합물 1은 수용성(79 μM, 21 μg/mL), 분배계수(logP, 0.42)와 같은 생리화학적 성질이 좋지 않으며, 또한 인비트로에서 20 μM의 농도로 처리하였을 때 IC50(43 μM) 및 유효성(10% 억제) 역시 좋지 않은 것으로 확인되었다. 이는 화합물 1이 림프부종 치료를 위해 가장 적합한 유효성분은 아니라는 것을 나타낸다.
이에, 본 발명자들은 생리화학적 성질(가용성, logP), 및 경구 투여 후 약물의 최대 농도(Cmax), 생체이용률(BA), 반감기(T1/2), 총 농도(area under curve, AUC) 등 약동학적 파라미터를 개선할 수 있는 화합물을 구조 개질을 통해 발명하고자 하였다.
항염증 효과
복막 마크로파지를 분리하기 위하여, 수컷 Balb/c 마우스를 희생시키기 4일 전에 2 ml의 3.5% 멸균 티오글리콜레이트(BD, Sparks, MD, USA)로 복강내 주사하였다. 마우스는 경부 탈구에 의해 희생시켰으며, 10% FBS(fetal bovine serum; HyClone) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신을 함유하는 차가운 DMEM(HyClone, Logan, UT, USA)으로 복막 세척을 통해 복막분비세포가 무균적으로 분리되었다. 원심분리 후, 세포를 재현탁하고, TC20 Cell Counter (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 이용하여 카운팅하였다. 복막분비세포를 37℃에서 밤새 24-웰 플레이트에 놔두었으며, 부착되지 못한 세포들은 제거하였다. 이어서, 세포를 100 ng/ml LPS(lipopolysaccharide, 리포폴리사카라이드)로 24시간 동안 자극시켰다. 사이토카인 분석 동안 상청액을 수집하였으며, BD OptEIA mouse ELISA sets (BD Biosciences, San Diego, CA, USA)를 이용하여 제조사의 프로토콜에 따라 상청액 중 TNFα의 수준을 측정하였다.
20 μM 농도의 화합물에 노출된 마우스 복막 마크로파지에서 LPS-유도된 TNFα 생성 수준을 측정한 결과를 도 1에 나타내었다. 데이터는 각각 3마리 마우스에 대한 값의 평균±표준편차이다(LPS 대비 *: P<0.01, **: P<0.001; 화합물 1 대비 #: P<0.01, ##: P<0.001). 도 1에서 볼 수 있듯이, 화합물 14a 내지 14d, 8a 및 8b 처리 군은 모두 양성대조군 부테인 처리 군에 비해 TNFα 생성 억제능이 유의적으로 더 우수하다는 것을 확인할 수 있다.
또한, 화합물의 항염증 활성을 확인하기 위하여, 마크로파지에서 TNFα 생성의 용량 의존적 억제 수준과 관련하여 IC50 값을 하기 표 1에 기재하였다. IC50(μM) 값은 각각 2회 측정하여 평균±표준편차로 나타내었다. 하기 표 1에서 볼 수 있듯이, 화합물 7h 처리 군은 양성대조군 부테인 처리 군과 유사한 IC50 값을 보였으며, 화합물 7i, 7l, 7m, 14a 내지 14d, 8a는 모두 부테인에 비해 현저하게 우수한 IC50 값을 보였다.
IC50(μM)
화합물 1 43.3 ± 1.72
화합물 7h 48.4 ± 2.35
화합물 7i 32.2 ± 2.15
화합물 7l 18.6 ± 1.50
화합물 7m 17.3 ± 2.11
화합물 14a 14.6 ± 1.56
화합물 14b 18.9 ± 1.15
화합물 14c 20.8 ± 1.62
화합물 14d 17.9 ± 1.84
화합물 8a 12.8 ± 1.24
물리화학적 및 약동학적 파라미터
5주령 수컷 CD-1 마우스 각각에게 꼬리 정맥 투여 1 mg/kg (투여 부피 5 mL/kg), 경구 투여 20 mg/kg, 100 mg/kg로 화합물을 투여하였다. 3마리의 마우스를 각각의 독립적인 실험을 위해 사용하였다. 혈액 샘플은 복재 정맥을 통해 5, 15, 30, 60, 120, 180, 360 및 1440 분에 20-30 μL씩 채취하였다.
하기 표 2에는 parallel artificial membrane permeability assay(PAMPA)를 통해 확인한 대표적인 화합물의 물리화학적 성질들을 나타내었다. 하기 표 2에서 볼 수 있듯이, 화합물 1의 가용성 및 투과성과 비교하여 본 발명의 화합물은 더 우수한 성질을 나타낸다는 것이 확인되었다.
pKa logP 투과성(permeability) 가용성(solubility)
화합물 1 7.96/11.65 0.42 -5.35 21 μg/mL
화합물 7m 9.23/11.58 3.77 -4.33 28 μg/mL
화합물 14a 3.38/8.63/9.55 3.47 -5.67 136 μg/mL
또한, Win Non-lin을 이용하여 비구획 분석으로부터 약동학적 파라미터를 산출하였다. 하기 표 3은 화합물 1 및 14a의 약동학적 분석 결과를 나타낸다.
화합물 투여 경로 투여량
(mg/Kg)		 T1/2 (hr) Tmax (hr) Cmax
(ng/mL)		 AUC∞
(hr*ng/mL)		 BA (%)
화합물 1 I.V 1 - 0.1 41 6.7 -
P.O 20 - 0.3 43 21 15
P.O 100 - 0.3 601 251 37
화합물 14a I.V 1 1.36 0.2 110 163 -
P.O 20 0.57 0.4 83 141 4
P.O 100 0.35 0.4 1600 1224 7.5
상기 표 3에서, T1/2은 반감기(terminal half-life)를 나타내며, Cmax는 최대 혈장 농도(maximum plasma concentration)를 나타내며, AUC∞는 타임 제로부터 무한까지 혈장 농도-시간 곡선 하 면적으로서 전체 혈액 노출 농도를 나타내며, BA는 (AUCpo/AUCiv) x 100으로 나타내어지는 생체이용률(bioavailability)을 나타낸다. 화합물 1은 반감기가 너무 짧고 측정량이 낮아서, T1/2을 측정할 수 없었다. Cmax 및 AUC∞는 3마리의 수컷 ICR 마우스로부터 얻은 평균±SD 값이다. 화합물이 전신 순환하는 동안 혈액 노출은 화합물을 100 mg/kg의 양으로 경구 투여한 후 AUC(곡선하면적)를 산출하여 비교하였다.
경구 투여를 통한 약동학적 분석 결과, 개질되지 않은 화합물 1을 사용하는 것(AUC 251 h*ng/mL)에 비해 화합물 14a를 사용하여 전신 순환계로 화합물 1을 전달(delivery)하는 것(AUC 1,224 h*ng/mL)이 현저하게 더 효과적이라는 점이 입증되었다.
림프부종 형성에 대한 예방적 효과
마우스에 림프부종을 수술에 의해 유도하기 전 7일 동안 화합물 1, 7m, 및 14a를 각각 마우스에게 경구 투여하였다.
정상군(Normal)은 수술을 하지 않았으며, 림프부종을 유도하지 않았다. 반면, 대조군(Control)과 화합물 1 처리군, 화합물 7m 처리군 및 화합물 14a 처리군에서는 수술을 통해 림프부종을 유도하였다. 수술 후에는 이틀에 한번씩 화합물을 투여하였다.
도 2a에서 볼 수 있듯이, 마우스 오른쪽 뒷다리에서 림프부종의 팽창이 현저하게 억제되는 것이 관찰되었다. 수술 후 7일째에 림프부종의 체적을 측정하였으며, 마우스의 처리 상태에 대해 블라인드된 자가 캘리퍼스 자를 이용하여 림프부종의 크기를 기록하였다.
도 2b에서 볼 수 있듯이 화합물 1 처리군, 화합물 7m 처리군, 및 화합물 14a 처리군에서 수술 후 7일째 림프부종의 체적은 대조군과 비교하여 각각 52%, 53% 및 70% 감소하였다(대조군 대비 *: P<0.005; 화합물 1 대비 #: P<0.001).
이에 따라, 화합물 14a의 약동학적 성질의 개질은 궁극적으로 림프부종 예방 효과를 유의적으로 더 개선시켰다는 것이 놀랍게도 입증되었다.
조직학적 및 면역형광 분석
조직 샘플을 마우스 오른쪽 다리에서 15-25 mm 떨어진 위치에서 림프부종을 유도하는 수술 후 7일째에 채취하였다. 채취한 조직 샘플은 10% 포르말린 용액으로 고정하였으며, 시편을 5μm 두께로 절단하였다. 단면을 100% 크실렌에서 탈파라핀화하고, 100%, 95%, 90%, 80% 및 70% 에탄올 시리즈로 재수화하고, 물로 세척하였다. 단면을 실온에서 헤마톡실린 용액과 반응시켰다. PBS에서 세척한 후, 단면을 실온에서 에오신으로 염색하였다. 이미지는 Pannoramic Viewer microscope (3DHISTECH Ltd., Hungary)에 의해 획득하였다. 준비된 슬라이드는 항마우스 PPARγ (Santa Cruz Biotechnology, USA) 및 Alexa Fluor 488 및 DAPI (Life Technologies, USA)로 인큐베이션하였다. 샘플은 Nikon ECLIPSE 80i microscope (Nikon Instruments Inc., Japan)로 분석하였다.
정상군, 대조군(림프부종 유도 담체 주사군), 화합물 1 처리군 및 화합물 14a 처리군에서 조직학적 및 면역형광 분석을 통해 촬영한 마우스의 오른쪽 뒷다리의 H&E 이미지를 도 3a에 나타내었다. 도 3a에서 상단 패널의 스케일 바는 500μm이며, 하단 패널의 스케일 바는 100μm이다. 도 3a에서 볼 수 있듯이, 화합물 14a는 호중구 침윤(neutrophil infiltration)을 감소시켰으며 림프부종 조직의 표피층을 개선(amelioration)시키는 것이 관찰되었다.
또한, 림프부종 조직에서 TNFα의 mRNA 발현을 분석한 결과를 도 3b에 나타내었다. 그 결과, 화합물 1 처리군 및 화합물 14a 처리군에서 TNFα mRNA 발현량이 감소되었음이 확인되었다(대조군 대비 *: P<0.05; 화합물 1 대비 #: P<0.05).
다음으로, 림프부종에서 관찰되는 지질생성(adipogenesis)에 대해 화합물 1 및 화합물 14a가 미치는 조절 효과를 분석하였다.
정상군, 대조군(림프부종 유도 담체 주사군), 화합물 1 처리군 및 화합물 14a 처리군에서 조직학적 및 면역형광 분석을 통해 촬영한 마우스의 오른쪽 뒷다리의 H&E 이미지를 도 4a에 나타내었다. 도 4a에서 상단 패널의 스케일 바는 200μm이며, 하단 패널의 스케일 바는 100μm이다. 도 4a에서 볼 수 있듯이, 화합물 1 및 화합물 14a는 표피층에서 지방조직이 발달(development)되는 것을 억제함으로써 림프부종 조직에 대해 예방적 효과를 갖는 것이 확인되었다.
또한, PPARγ(peroxisome activated receptor γ)는 지질생성의 주요 조절인자인데, 면역형광염색 분석 결과를 보여주는 도 4b에서 볼 수 있듯이 화합물 1 및 화합물 14a로 처리한 후 림프부종 조직의 표피층에서 PPARγ의 분포가 억제되는 것이 관찰되었다.
웨스턴블롯 사진을 보여주는 도 4c에서 볼 수 있듯이, 화합물 1 및 화합물 14a는 림프부종 조직에서 지질생성 바이오마커에 해당하는 PPARγ 및 이의 타겟 단백질 Fabp4(fatty acid binding protein 4)의 발현을 감소시킨다는 것이 확인되었다. 특히, PPARγ 및 Fabp4 mRNA 수준을 나타내는 도 4d에서 화합물 1은 대조군 대비 우수한 효능을 나타내지만, 화합물 14a는 화합물 1에 비해서도 더욱 유의적인 효능을 나타내는 것을 확인할 수 있다(* P<0.05, ** P<0.01, *** P<0.001).
상기 두 개의 조직학적 시험은 염증 및 지질생성이 림프부종의 병리생리학적 특성을 조절하는데 영향을 미치며, 화합물 14a는 대조군 뿐만 아니라 화합물 1과 비교해서도 항염증 및 항지질생성 효과를 통해 림프부종을 유의적으로 조절한다는 것을 보여준다.

Claims (8)

  1. 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로, 식품학적으로, 또는 화장품학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2021004725-appb-I000032
    상기 식에서,
    R1 및 R2는 서로 독립적으로 -H, -OH, -OR3, -OCOR3, -NO2, -CN, -SH, -SR3, -COR4, -COOR4, -CONHR4, -CON(R4)2, -NH2, -NHR4, -N(R4)2, -NHCOR4, -N(R5)COR4, C1-6의 알킬기, C2-6의 알케닐기, C2-6의 알키닐기, 할로겐, 알릴옥시기, C3-7의 사이클로알킬기, 알릴기, 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 원자수 3-7의 헤테로알릴기, 및 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 원자수 3-7의 헤테로사이클로알킬기로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이며,
    상기 R3은 각각 독립적으로 C1-6의 알킬기, C3-10의 아릴기,
    Figure PCTKR2021004725-appb-I000033
    ,
    Figure PCTKR2021004725-appb-I000034
    및
    Figure PCTKR2021004725-appb-I000035
    로 이루어진 군에서 선택되며,
    상기 R6은 각각 독립적으로 -H, -OH, -0R7, -NO2, -CN, C1-6의 알킬기, C1-6의 알콕시기, 할로겐, -NH2, -NHR7, 및 -N(R7)2로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이며,
    상기 R7은 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
    상기 R4는 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
    상기 R5는 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
    단, 상기 화학식 1의 화합물에서 부테인은 제외됨.
  2. 하기 화학식 2의 화합물 또는 이의 약학적으로, 식품학적으로, 또는 화장품학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2021004725-appb-I000036
    상기 식에서,
    R8 및 R9는 서로 독립적으로 -H, -OH, -OR10, -NO2, -CN, -SH, -SR10, -COR11, -COOR11, -CONHR11, -CON(R11)2, -NH2, -NHR11, -N(R11)2, -NHCOR11, -N(R12)COR11, C1-6의 알킬기, C2-6의 알케닐기, C2-6의 알키닐기, 할로겐, 알릴옥시기, C3-7의 사이클로알킬기, 알릴기, 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 원자수 3-7의 헤테로알릴기, 및 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 원자수 3-7의 헤테로사이클로알킬기로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이며,
    상기 R10은 각각 독립적으로 C1-6의 알킬기, C3-10의 아릴기,
    Figure PCTKR2021004725-appb-I000037
    ,
    Figure PCTKR2021004725-appb-I000038
    및
    Figure PCTKR2021004725-appb-I000039
    로 이루어진 군에서 선택되며,
    상기 R13은 각각 독립적으로 -H, -OH, -NO2, -CN, C1-6의 알킬기, C1-6의 알콕시기, 할로겐, -NH2, -NHR14, 및 -N(R14)2로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이며,
    상기 R14는 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
    상기 R11은 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택되며,
    상기 R12는 C1-6의 알킬기, 알릴기, 및 헤테로알릴기로 이루어진 군에서 선택됨.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 헤테로 원자는 O, N 및 S로 이루어진 군에서 선택된 1개 이상인 화합물 또는 이의 약학적으로 또는 식품학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로, 식품학적으로, 또는 화장품학적으로 허용가능한 염:
    (E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-히드록시-3-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-히드록시-4-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-플루오로-4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-플루오로-3-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-1-(2,4-디히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(2-플루오로-4-히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-메틸페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(4-히드록시-2-이소프로폭시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(2,4-디메톡시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-3-(3,4-디히드록시페닐)-1-(p-톨릴)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-1-(4-클로로페닐)-3-(3,4-디히드록시페닐)프로프-2-엔-1-온,
    (E)-4-(3-(2,4-디아세톡시페닐)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)-1,2-페닐렌 디아세테이트,
    (E)-4-(3-(2,4-비스(벤조일옥시)페닐)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)-1,2-페닐렌 디벤조에이트,
    (E)-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 벤조에이트,
    (E)-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-메틸벤조에이트,
    (E)-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-메톡시벤조에이트, 및
    (E)-2-(3-(3,4-디히드록시페닐)아크릴로일)-5-히드록시페닐 4-클로로벤조에이트.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    림프부종 치료, 예방 또는 개선을 위한 화합물 또는 이의 약학적으로, 식품학적으로, 또는 화장품학적으로 허용가능한 염.
  6. 제1항 또는 제2항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 림프부종 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 따른 화합물 또는 이의 식품학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 림프부종 개선 또는 예방용 식품 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 따른 화합물 또는 이의 화장품학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 림프부종 개선 또는 예방용 화장품 조성물.
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