WO2021106125A1 - 定量方法 - Google Patents

Abstract

ヒスタミンを定量する定量方法では、ヒスタミンを含む含有溶液が、酵素が製膜された酵素膜を表面に有する電極に滴下され、含有溶液に含まれるヒスタミンが酵素と反応して分解し、分解物が生成される（Ｓ１９）。次いで、ヒスタミンが酵素により分解物に分解される過程で、含有溶液中の酸素が酸化反応により消費される（Ｓ２１）。次いで、電極に対する電圧印加によって含有溶液中の酸素が分解されるときに流れる電流の電流値が取得される（Ｓ２３）。次いで、取得された電流値に基づき、ヒスタミンが定量される（Ｓ２５）。

Description

定量方法

　本発明は、ヒスタミンの定量方法に関する。

　ヒスタミンの定量方法が各種提案されている。例えば特許文献１に記載の定量方法では、次の第一工程～第六工程を経てヒスタミンが定量される。第一工程では、魚介類や食肉等からヒスタミンが抽出される。第二工程では、抽出されたヒスタミンを含むヒスタミン含有水溶液の温度が測定される。第三工程では、第二工程において測定された温度におけるヒスタミン含有水溶液の飽和溶存酸素濃度と化学量論的に等しい第１仮想ヒスタミン濃度が、あらかじめ用意されたテーブルを参照することにより求められる。第四工程では、ヒスタミンオキシダーゼ活性を有する酵素がヒスタミン含有水溶液に注入される。第五工程では、ヒスタミン含有水溶液中のヒスタミンに酵素が反応してイミダゾールアセトアルデヒドが生成される過程で、ヒスタミン含有水溶液中の酸素が酸化反応により消費される。酸化反応後、ヒスタミン含有水溶液の飽和溶存酸素濃度と化学量論的に等しい第２仮想ヒスタミン濃度が、酸素センサからの出力信号に基づいて求められる。第六工程では、第１仮想ヒスタミン濃度と第２仮想ヒスタミン濃度との差が算出されることにより、ヒスタミン含有水溶液中のヒスタミンの濃度が定量される。

特開平１０－１７４５９９号公報

　上記方法では、ヒスタミンを定量するために必要な工程が多く、手順が煩雑である。これに対し、より簡易な方法で高精度にヒスタミンを定量したいという要求がある。

　本発明の目的は、より簡易な方法で高精度にヒスタミンを定量することが可能な定量方法を提供することである。

　本発明に係る定量方法は、ヒスタミンを定量する定量方法であって、前記ヒスタミンを含む含有溶液を、酵素が製膜された酵素膜を表面に有する電極に滴下し、前記含有溶液に含まれる前記ヒスタミンを前記酵素と反応させて分解し、分解物を生成する分解工程と、前記分解工程において前記ヒスタミンが前記酵素により前記分解物に分解される過程で、前記含有溶液中の酸素が酸化反応により消費される消費工程と、前記電極に対する電圧印加によって前記含有溶液中の前記酸素が分解されるときに流れる電流の電流値を取得する取得工程と、前記取得工程により取得された前記電流値に基づき、前記ヒスタミンを定量する定量工程とを備えたことを特徴とする。

　本発明に係る定量方法では、酵素が製膜された酵素膜を表面に有する電極が用いられる。このため、含有溶液に酵素が注入される方法と比べて、ヒスタミンの定量作業を容易化できる。又、電極は繰り返し使用可能となるため、コストの面でも有効である。

　本発明において、前記取得工程では、前記電極に印加する電圧をスイープした場合に流れる前記電流に基づき、前記電流値を取得してもよい。この場合、ヒスタミンの定量を高精度に実行できる。

　本発明において、前記定量工程は、前記電流値と前記ヒスタミンの濃度との対応関係を示した第１情報に基づき、前記取得工程により取得された前記電流値に対応する前記濃度を特定してもよい。この場合、電極に対する電圧印加時に流れる電流の電流値に基づき、ヒスタミンの濃度を簡易に定量できる。

　本発明において、前記酵素膜の膜厚を、前記ヒスタミンの定量範囲に基づき決定する決定工程を備え、前記定量工程は、前記電流値及び前記ヒスタミンの濃度との対応関係を前記膜厚別に示した第２情報に基づき、前記取得工程により取得された前記電流値と、前記決定工程により決定された前記膜厚とに対応する前記濃度を特定してもよい。この場合、ヒスタミンの濃度を酵素膜の膜厚別に定量できる。又、ヒスタミンの定量範囲に基づいて酵素膜の膜厚を決定することにより、ヒスタミンの定量範囲に対して最適な酵素膜の膜厚を選択して適用できる。

　本発明において、前記酵素は、ヒスタミンオキシダーゼであり、前記分解物は、イミダゾールアセトアルデヒドであってもよい。この場合、ヒスタミンがヒスタミンオキシダーゼにより分解されることで、含有溶液中の酸素は酸化反応により消費される。従って、酸素の消費量に応じて変動する電流値に基づき、ヒスタミンの濃度を適切に定量できる。

　本発明において、イオン交換体を前記含有溶液に混合し、夾雑物を除去する第１前工程を備え、前記分解工程は、前記第１前工程により前記夾雑物が除去された前記含有溶液を用いて前記分解物を生成してもよい。この場合、ヒスタミンの定量を更に高精度に行うことができる。

　本発明において、前記イオン交換体は、陰イオン交換体であってもよい。この場合、含有溶液に含まれる陰イオンの夾雑物を、陰イオン交換体により適切に除去できる。

　本発明において、タンパク質凝集剤を前記含有溶液に混合し、タンパク質を除去する第２前工程を備え、前記分解工程は、前記第２前工程により前記タンパク質が除去された前記含有溶液を用いて前記分解物を生成してもよい。この場合、ヒスタミンの定量を更に高精度に行うことができる。

　本発明において、前記タンパク質凝集剤はポリエチレングリコール及びデキストランのうち何れかであってもよい。この場合、含有溶液に含まれるタンパク質を、ポリエチレングリコール及びデキストランの何れかにより適切に除去できる。

　本発明において、ｐＨ調整剤を前記含有溶液に混合する第３前工程を備え、前記分解工程は、前記第３前工程によりｐＨが調整された前記含有溶液を用いて前記分解物を生成してもよい。この場合、ヒスタミンの定量を更に高精度に行うことができる。

酵素反応を示す図である。 電極１１、１２、１３、及び測定部３を示す模式図である。 定量方法を示すフローチャートである。 第１グラフである。 第１グラフを導出するための測定結果を示すグラフである。 変形例における第２グラフである。 変形例における第３グラフである。

　本発明を具体化した実施形態について、図面を参照して順に説明する。参照する図面は、本発明が採用しうる技術的特徴を説明するために用いられるものであり、記載されている装置の構成等は、それのみに限定する趣旨ではなく、単なる説明例である。本実施形態に係るヒスタミンの定量方法は、酵素の触媒作用によりヒスタミンが分解されるという化学反応を利用し、電気化学的手法によりヒスタミンを定量するものである。

＜定量方法の概要＞
　図１、図２を参照し、ヒスタミンの定量方法の概要について説明する。図１に示すように、ヒスタミンは、酵素として用いられるヒスタミンオキシダーゼ（ＨＯＤ）と反応することにより、酸化及び脱アミノ化され分解される。この反応により、ヒスタミンからイミダゾールアセトアルデヒドが生成され（矢印Ｙ１１）、ＨＯＤは還元反応により酸化型から還元型に変位する（矢印Ｙ１２）。又、還元型のＨＯＤの酸化反応（矢印Ｙ１３）により酸素が分解され、分解された酸素と水から過酸化水素が生成される（矢印Ｙ１４）。つまり、ＨＯＤによるヒスタミン１分子の分解反応に応じ、ヒスタミン及び酸素が夫々１分子ずつ消失し、イミダゾールアセトアルデヒド及び過酸化水素が夫々１分子ずつ生成される。

　図２に示すように、本実施形態では、酵素が製膜された酵素膜１０を表面に有する電極１１、１２、１３が用いられる。電極１１は作用極であり、電極１２は対極であり、電極１３は参照極である。ヒスタミンを含む溶液（以下、「含有溶液２１」という。）として、魚肉等の生体から得られたサンプルを溶媒に溶解した溶液が調製される。調製された含有溶液２１が、酵素膜１０に滴下される。このとき、含有溶液２１に含まれるヒスタミンは、酵素膜１０のＨＯＤと反応して分解し、イミダゾールアセトアルデヒド（ＩＡＡ）が生成される（矢印Ｙ２１）。又、ヒスタミンがＨＯＤにより分解される過程で、含有溶液２１中の酸素が酸化反応により消費され、過酸化水素が生成される（矢印Ｙ２２）。

　測定部３により、電極１１に電圧が印加される。含有溶液２１中に残留する酸素は、電極１１の酵素膜１０を浸透して電極１１に到達する。酸素は、電極１１から供給される電子と結合し、分解する（矢印Ｙ２３）。

　このため、電圧印加時において電極１１に流れる電流値を、測定部３にて電気化学的に計測することにより、分解された酸素の量、言い換えれば、含有溶液２１中に残留する酸素の量を測定できる。なお、含有溶液２１中に残留する酸素の量は、含有溶液２１に含有されるヒスタミンが酵素反応により分解される程、少なくなる。即ち、含有溶液２１に含有されるヒスタミンの量と、電圧印加時において電極１１に流れる電流の電流値とは、相関がある。従って、測定部３にて計測された電流値に基づき、含有溶液２１に含有されるヒスタミンの濃度が定量可能となる。

＜定量手順＞
　図３を参照し、ヒスタミンの定量手順について説明する。はじめに準備工程が実行される（Ｓ１１）。準備工程では、魚肉等の生体からサンプルが抽出される。サンプルにはヒスタミンが含まれる。サンプルが溶媒に溶解されることにより、ヒスタミンを含む含有溶液２１が調製される。

　次に、含有溶液２１から夾雑物を除去するための工程として、第１前工程が実行される（Ｓ１３）。第１前工程では、陰イオン交換体が含有溶液２１に混合されることにより、含有溶液２１中の陰イオンの夾雑物が除去される。陰イオン交換体は、官能基としてアミノ基が導入されたイオン交換樹脂であり、Ｃｌイオン、ＳＯ_４イオン、アミノ酸等の陰イオンの夾雑物を除去できる。

　次に、含有溶液２１からタンパク質を除去するための工程として、第２前工程が実行される（Ｓ１５）。第２前工程では、ポリエチレングリコール及びデキストランの何れかがタンパク質凝集剤として含有溶液２１に混合されることにより、含有溶液２１中のタンパク質が除去される。

　次に、含有溶液２１のｐＨを調整するための工程として、第３前工程が実行される（Ｓ１７）。第３前工程では、ｐＨ調整剤としてリン酸粉末が含有溶液２１に混合されることにより、含有溶液２１のｐＨが中性～弱アルカリ性に調整される。

　次に、酵素膜１０を表面に有する電極１１が準備される。第１前工程（Ｓ１３）、第２前工程（Ｓ１５）、及び第３前工程（Ｓ１７）を経て調製された含有溶液２１が、酵素膜１０に滴下される。これにより、含有溶液２１に含まれるヒスタミンが酵素膜１０のＨＯＤと反応して分解され、イミダゾールアセトアルデヒドが生成される（Ｓ１９）。又、ヒスタミンを分解したＨＯＤにより、含有溶液２１中の酸素が酸化反応により消費される（Ｓ２１）。

　次に、測定部３によって電極１１に電圧が印加される。より詳細には、測定部３は、電極１１に印加される電圧をスイープする。含有溶液２１中に残留する酸素は分解され、過酸化水素が生成される。又、酸素が分解する時に流れる電流の電流値が、測定部３により計測され取得される（Ｓ２３）。より詳細には、電圧のスイープ時に流れた電流の極値が、測定部３により電流値として取得される。

　次に、Ｓ２３の工程により取得された電流値に基づき、ヒスタミンが定量される（Ｓ２５）。ヒスタミンの具体的な定量方法は、次の通りである。図４に示すように、電流値とヒスタミンの濃度との対応関係を示した第１グラフが予め準備される。第１グラフにおいて、ｘ軸はヒスタミンの濃度を規定する。ｙ軸は、電極に印加する電圧をスイープさせた時に測定部３で取得される電流値を規定する。ヒスタミンの濃度（変数ｘ）と電流値（変数ｙ）とは、略線形の関係を有する。第１グラフを線形近似した直線を示す関数は、式（１）の関係を満たす。但し、変数ｘの単位はｐｐｍであり、変数ｙの単位はｎＡである。
ｙ＝５１．７４２ｘ－９３７２．２　　　（１）
ヒスタミンの定量時、Ｓ２３の工程で取得された電流値が式（１）の変数ｙに代入されたときに算出される変数ｘの値が、ヒスタミンの濃度として特定される。

　図５は、図４の第１グラフを導出するために測定された測定結果を示す。キハダマグロの生肉から抽出されたサンプルについて、ヒスタミンの濃度が０ｐｐｍ、５０ｐｐｍ、１００ｐｐｍとなるように調製された含有溶液２１が用いられた。ｐＨは略７とされた。そして、電極１１の電圧を、０ｍＶから－８００ｍＶまでの間で－２０ｍＶ／ｓｅｃの条件でスイープさせ、この時に電極１１に流れた電流の電流値が、夫々２回ずつ測定された。図４に示す第１グラフは、図５に示す測定結果の夫々において極小となる時の電流値と、対応するヒスタミンの濃度との関係をプロットしたものである。

　図４に示す第１グラフでは、ヒスタミンの濃度が増加する程、電流値の絶対値は小さくなっている。この結果は、ヒスタミンの濃度が増加する程、酵素の酸化反応（矢印Ｙ１３、図１参照）により分解される酸素（矢印Ｙ１４、図１参照）の量も増加し、含有溶液２１に残留する酸素の量が少なくなることを示している。

　なお、上記のＳ２５の工程は、測定部３により実行されてもよいし、別の方法で実行されてもよい。例えば測定部３は、取得した電流値を外部に出力してもよい。使用者は、出力された電流値に基づき、式（１）を参照することによってヒスタミンを定量してもよい。

＜本実施形態の作用、効果＞
　以上のように、本実施形態に係るヒスタミンの定量方法では、酵素として用いるＨＯＤが製膜された酵素膜１０を表面に有する電極１１が用いられる。このため、含有溶液２１に酵素が注入される従来の方法と比べて、ヒスタミンの定量作業を容易化できる。又、酵素膜１０を有する電極１１は繰り返し使用可能となるため、ヒスタミンの定量に要するコストを削減できる。

　なお、酸素が電圧印加により分解するときに要する電圧は、－１０００ｍＶ～－４００ｍＶである（図４参照）。一方、ヒスタミンがＨＯＤにより分解されることに応じて生成されるイミダゾールアセトアルデヒド（図１参照）が電圧印加により分解するときの電圧は、３００～５００ｍＶである。又、酸素がＨＯＤにより分解されることに応じて生成される過酸化水素（図１参照）が電圧印加により分解するときの電圧は、７００ｍＶ～１０００ｍＶである。つまり、酸素は負電圧で分解することができるため、正電圧で容易に酸化される物質による影響を受けない。このため、含有溶液２１に残留する酸素の量を電気化学測定により測定してヒスタミンを定量する本実施形態の定量方法は、含有溶液２１に残留するイミダゾールアセトアルデヒド又は過酸化水素の量を電気化学的に測定してヒスタミンを定量する場合と比べて、安定的に実行可能である。従って、上記方法によりヒスタミンを定量することにより、ヒスタミンの濃度を精度よく定量できる。

　Ｓ２３の工程において、電極１１に印加する電圧が測定部３によりスイープされ、その時に流れる電流に基づいて電流値が取得される。なお、電極１１に印加する電圧をスイープさせることにより、含有溶液２１及び酵素膜１０中の酸素の移動、拡散を考慮して電流値を取得できる。従って、取得された電流値に基づくヒスタミンの定量を高精度に実行できる。

　Ｓ２５の工程において、Ｓ２３の工程で取得された電流値に対応するヒスタミンの濃度は、式（１）の変数ｙに電流値が代入されたときに算出される変数ｘの値として算出される。この場合、取得された電流値に基づき、ヒスタミンの濃度を容易に定量できる。

　ヒスタミンを分解するための酵素として、ヒスタミンオキシダーゼ（ＨＯＤ）が用いられる。ヒスタミンがヒスタミンオキシダーゼにより分解される場合、含有溶液２１中の酸素は酸化反応により消費される。又、ヒスタミンはイミダゾールアセトアルデヒドに分解される（図１参照）。従って、酸素の消費量に応じて変動する電流値に基づき、ヒスタミンの濃度を適切に定量できる。

　第１前工程（Ｓ１３）では、イオン交換体が含有溶液２１に混合され、夾雑物が除去される。Ｓ１９～Ｓ２５の工程では、夾雑物が除去された含有溶液２１が用いられてヒスタミンが定量される。この場合、酵素によるヒスタミンの分解が夾雑物により阻害されることを抑制できるので、ヒスタミンの定量を更に高精度に行うことができる。又、イオン交換体として陰イオン交換体が用いられることにより、含有溶液２１に含まれる陰イオンの夾雑物を、陰イオン交換体により適切に除去できる。

　第２前工程（Ｓ１５）では、タンパク質凝集剤が含有溶液２１に混合され、タンパク質が除去される。Ｓ１９～Ｓ２５の工程では、タンパク質が除去された含有溶液２１が用いられてヒスタミンが定量される。この場合、酵素によるヒスタミンの分解がタンパク質により阻害されることを抑制できるので、ヒスタミンの定量を更に高精度に行うことができる。又、タンパク質凝集剤としてポリエチレングリコール及びデキストランのうち何れかが用いられることにより、含有溶液２１に含まれるタンパク質をより適切に除去できる。

　第３前工程（Ｓ１７）では、ｐＨ調整剤が含有溶液２１に混合され、ｐＨが中性～弱アルカリ性に調整される。Ｓ１９～Ｓ２５の工程では、ｐＨが調整された含有溶液２１が用いられてヒスタミンが定量される。この場合、適切なｐＨとすることにより酵素によるヒスタミンの分解を促進できるので、ヒスタミンの定量精度を更に向上させることができる。

＜変形例＞
　本発明は上記実施形態に限定されず、種々の変更が可能である。上記実施形態において、測定部３に測定機本体が接続されてもよい。測定機本体には、測定部３により測定された電流値が出力されてもよい。測定機本体の記憶部に、式（１）が記憶されてもよい。測定機本体のＣＰＵは、測定部３が出力した電流値を取得して式（１）を適用することにより、ヒスタミンの濃度を特定してもよい。ＣＰＵは、特定したヒスタミンの濃度を、測定機本体の表示部に出力してもよい。更に例えば、測定部３は、電極１１に印加する電圧をスイープさせたときに流れる電流の電流値を、そのまま測定機本体に出力してもよい。測定機本体は、測定部３から出力された電流値に基づき、極値を特定してもよい。測定機本体は、特定した極値を式（１）に適用することにより、ヒスタミンの濃度を特定してもよい。

　測定部３、及び電極１１～１３が一体となった測定チップであってもよい。測定チップは、測定機本体のインタフェースに接続されて使用されてもよい。測定部３は、測定された電流値を、インタフェースを介して測定器本体に出力してもよい。

　Ｓ２３の工程で取得される電流値は、電圧のスイープ時に流れた電流の極値でなくてもよい。例えば、電圧のスイープ時に流れた電流の総量が、電流値として取得されてもよい。又、Ｓ２３の工程で電極１１に印加される電圧は、スイープされなくてもよい。例えば測定部３は、酸素が分解される電圧を、電極１１に一定時間連続して印加し、その時に流れる電流の電流値を取得してもよい。

　Ｓ２５の工程でヒスタミンを定量する方法は、式（１）を用いる方法に限定されない。例えば、電流値とヒスタミンの濃度との対応関係を示すテーブルが予め準備されてもよい。この場合、テーブルのうちＳ２３の工程で取得された電流値に対応するヒスタミンの濃度を取得することにより、ヒスタミンが定量されてもよい。ヒスタミンを分解するための酵素として用いられる物質は、ヒスタミンオキシダーゼである場合に限定されず、ヒスタミンを分解可能な他の酵素が用いられてもよい。

　第１前工程において含有溶液２１に混合されるイオン交換体は、陰イオン交換体に限定されず、含有物質を吸着しない条件下では陽イオン交換体を使用してもよい。又、陰イオン交換体と陽イオン交換体との両方が含有溶液２１に混合されてもよい。第２前工程において含有溶液２１に混合されるタンパク質凝集剤は、ポリエチレングリコール及びデキストランに限定されず、他の材料であってもよい。第３前工程において含有溶液２１に混合されるｐＨ調整剤は、リン酸粉末に限定されず、含有溶液２１を中性～弱アルカリ性とすることが可能な他の物質が用いられてもよい。第１前工程（Ｓ１３）、第２前工程（Ｓ１５）、第３前工程（Ｓ１７）のうち一部または全部は、ヒスタミンの定量過程で実行されなくてもよい。

　定量方法の準備工程（Ｓ１１）において、電極１１の表面に形成される酵素膜１０の膜厚が、ヒスタミンの定量範囲に基づいて決定されてもよい。膜厚の具体的な決定方法は、次の通りである。

　図６に示す第２グラフでは、含有溶液２１中のヒスタミンの濃度と、電極１１に電圧が印加されることに応じて分解される酸素の量との関係を示す理論曲線が、酵素膜１０の膜厚毎に示されている。酵素膜１０の膜厚が大きくなる程、ヒスタミンの濃度に対する酸素の消費量の割合が大きくなる。又、理論曲線は、酵素膜１０の膜厚が大きくなる程、線形部分の範囲がヒスタミンの濃度の小さい領域に分布し、傾きは急峻となる。一方、酵素膜１０の膜厚が小さくなる程、線形部分の範囲がヒスタミンの濃度の大きい部分まで広く分布し、傾きは緩やかになる。なお、第２グラフを用いてヒスタミンの濃度が特定される場合、理論曲線の線形部分を利用した方が、より詳細かつ正確に濃度を特定できるため好ましい。

　従って、例えば準備工程（Ｓ１１）において、サンプルに含まれるヒスタミンの濃度として想定される値が小さく、且つ定量範囲が狭い程、酵素膜１０の膜厚として大きい値が決定される。一方、サンプルに含まれるヒスタミンの濃度として想定される値が大きく、且つ定量範囲が広い程、酵素膜１０の膜厚として小さい値が決定される。具体的には、例えばヒスタミンの定量範囲が範囲３１（約２０～５０ｐｐｍ）であることが想定される場合、最も膜厚の大きい理論曲線３２に基づき、対応する膜厚が決定される。又、例えばヒスタミンの定量範囲が範囲３３（約５０～１７０ｐｐｍ）であることが想定される場合、最も膜厚の小さい理論曲線３４に基づき、対応する膜厚が決定される。

　又、Ｓ２５の工程でヒスタミンが定量される場合、図６に示す第２グラフが用いられる。具体的には次の通りである。Ｓ２３の工程により取得された電流値は、所定の関数が用いられることにより、酸素消費量に換算される。第２グラフにおいて、使用された酵素膜１０の膜厚に対応する理論曲線が参照され、換算された酸素消費量に対応するヒスタミンの濃度が特定される。例えば、理論曲線３２に対応する膜厚の酵素膜１０が使用された場合、範囲３１（約２０～５０ｐｐｍ）内のヒスタミンの濃度は、理論曲線３２の線形部分３２Ａを利用して特定される。又、例えば、理論曲線３４に対応する膜厚の酵素膜１０が使用された場合、範囲３３（約５０～１７０ｐｐｍ）内のヒスタミンの濃度は、理論曲線３４の線形部分３４Ａを利用して特定される。

　以上のように、電極１１に電圧を印加した時に流れる電流の電流値に基づき、ヒスタミンの濃度を酵素膜１０の膜厚別に定量できる。従って、酵素膜１０の膜厚が変動した場合でも、ヒスタミンの濃度を高精度に定量できる。又、酵素膜１０の膜厚を、ヒスタミンの定量範囲に応じて決定することにより、第２グラフの理論曲線のうち線形部分を利用してヒスタミンの濃度を特定できる。従って、より詳細かつ正確にヒスタミンの濃度を特定できる。

　図７に示す第３グラフは、含有溶液２１中のヒスタミンの濃度と、電極１１に印加する電圧をスイープさせた時に測定部３で取得される電流値との関係を、酵素膜１０の膜厚（１μｍ、３μｍ）毎に示した実測値である。第３グラフから、特にヒスタミンの濃度が約１０ｐｐｍよりも大きい場合において、酵素膜１０の膜厚が大きくなる程電流値が増加することが明らかとなった。

＜その他＞
　Ｓ１９の処理は、本発明の「分解工程」の一例である。Ｓ２１の処理は、本発明の「消費工程」の一例である。Ｓ２３の処理は、本発明の「取得工程」の一例である。Ｓ２５の処理は、本発明の「定量工程」の一例である。式（１）は、本発明の「第１情報」の一例である。Ｓ１１の処理は、本発明の「決定工程」の一例である。第２グラフは、本発明の「第２情報」の一例である。

３　　　：測定部
１０　　：酵素膜
１１、１２、１３　　：電極
２１　　：含有溶液

Claims (10)

1. 　ヒスタミンを定量する定量方法であって、
   　前記ヒスタミンを含む含有溶液を、酵素が製膜された酵素膜を表面に有する電極に滴下し、前記含有溶液に含まれる前記ヒスタミンを前記酵素と反応させて分解し、分解物を生成する分解工程と、
   　前記分解工程において前記ヒスタミンが前記酵素により前記分解物に分解される過程で、前記含有溶液中の酸素が酸化反応により消費される消費工程と、
   　前記電極に対する電圧印加によって前記含有溶液中の前記酸素が分解されるときに流れる電流の電流値を取得する取得工程と、
   　前記取得工程により取得された前記電流値に基づき、前記ヒスタミンを定量する定量工程と
   を備えたことを特徴とする定量方法。
2. 　前記取得工程では、
   　　前記電極に印加する電圧をスイープした場合に流れる前記電流に基づき、前記電流値を取得することを特徴とする請求項１に記載の定量方法。
3. 　前記定量工程は、
   　　前記電流値と前記ヒスタミンの濃度との対応関係を示した第１情報に基づき、前記取得工程により取得された前記電流値に対応する前記濃度を特定することを特徴とする請求項１又は２に記載の定量方法。
4. 　前記酵素膜の膜厚を、前記ヒスタミンの定量範囲に基づき決定する決定工程を備え、
   　前記定量工程は、
   　　前記電流値及び前記ヒスタミンの濃度との対応関係を前記膜厚別に示した第２情報に基づき、前記取得工程により取得された前記電流値と、前記決定工程により決定された前記膜厚とに対応する前記濃度を特定することを特徴とする請求項１又は２に記載の定量方法。
5. 　前記酵素は、ヒスタミンオキシダーゼであり、
   　前記分解物は、イミダゾールアセトアルデヒドであることを特徴とする請求項１から４の何れかに記載の定量方法。
6. 　イオン交換体を前記含有溶液に混合し、夾雑物を除去する第１前工程を備え、
   　前記分解工程は、
   　　前記第１前工程により前記夾雑物が除去された前記含有溶液を用いて前記分解物を生成することを特徴とする請求項１から５の何れかに記載の定量方法。
7. 　前記イオン交換体は、陰イオン交換体であることを特徴とする請求項６に記載の定量方法。
8. 　タンパク質凝集剤を前記含有溶液に混合し、タンパク質を除去する第２前工程を備え、
   　前記分解工程は、
   　　前記第２前工程により前記タンパク質が除去された前記含有溶液を用いて前記分解物を生成することを特徴とする請求項１から７の何れかに記載の定量方法。
9. 　前記タンパク質凝集剤はポリエチレングリコール及びデキストランのうち何れかであることを特徴とする請求項８に記載の定量方法。
10. 　ｐＨ調整剤を前記含有溶液に混合する第３前工程を備え、
    　前記分解工程は、
    　　前記第３前工程によりｐＨが調整された前記含有溶液を用いて前記分解物を生成することを特徴とする請求項１から９の何れかに記載の定量方法。

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