WO2021076020A2 - Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний - Google Patents

Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний Download PDF

Info

Publication number
WO2021076020A2
WO2021076020A2 PCT/RU2020/050320 RU2020050320W WO2021076020A2 WO 2021076020 A2 WO2021076020 A2 WO 2021076020A2 RU 2020050320 W RU2020050320 W RU 2020050320W WO 2021076020 A2 WO2021076020 A2 WO 2021076020A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
infectious
composition according
composition
inflammatory
inflammatory disease
Prior art date
Application number
PCT/RU2020/050320
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2021076020A3 (ru
Inventor
Андрей Михайлович ГАПОНОВ
Владимир Митрофанович ПИСАРЕВ
Original Assignee
Андрей Михайлович ГАПОНОВ
Владимир Митрофанович ПИСАРЕВ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from RU2019132497A external-priority patent/RU2793626C2/ru
Application filed by Андрей Михайлович ГАПОНОВ, Владимир Митрофанович ПИСАРЕВ filed Critical Андрей Михайлович ГАПОНОВ
Publication of WO2021076020A2 publication Critical patent/WO2021076020A2/ru
Publication of WO2021076020A3 publication Critical patent/WO2021076020A3/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/722—Chitin, chitosan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics

Definitions

  • the present invention relates to the field of medicine and veterinary medicine, namely, to the treatment and prevention of infectious and inflammatory diseases.
  • the present invention relates to the use of alkylresorcinol as a cytoprotective agent.
  • Inflammatory diseases caused by infection with bacterial pathogens are among the most common in humans and farm animals.
  • the main approach in the treatment of infectious and inflammatory diseases is currently the use of antibiotics.
  • Their widespread use in medicine and veterinary medicine has made it possible to significantly reduce mortality in infectious and inflammatory diseases. Nevertheless, the resistance of microorganisms to antibiotics and a decrease in their effectiveness is the main problem of their use.
  • Infection of multicellular eukaryotic organisms begins with the penetration of bacteria (bacterial invasion) into their internal environment, followed by active bacterial expansion and death of the multicellular organism as a result of this expansion.
  • colonization resistance An important mechanism of resistance of mammalian body cells to bacterial invasion is the so-called colonization resistance, which in turn is determined by the integrity and full functioning of cells adjacent to the external environment (integumentary epithelium of the skin and mucous membranes).
  • integumentary epithelium of the skin and mucous membranes Viable, normally functioning cells of the integumentary epithelium of the skin and mucous membranes provide colonization resistance due to the formation of a dense layer of cells that is difficult to penetrate for bacterial pathogens, the synthesis and secretion of barrier components, mechanical evacuation of pathogens by the cilia of the apical part of cells and, which is extremely important, the synthesis of antibacterial substances (peptides , surfactants, organic acids).
  • the initial stage of bacterial invasion is mechanical destruction and / or metabolic (including inflammatory) disruption of the functional activity of the integumentary epithelium cells, after which the movement of bacterial cells and their components, that is, PRR ligands (pathogen recognition receptor), into the submucosal layer occurs and initiation of inflammatory reactions with the release of inflammatory mediators.
  • PRR ligands pathogen recognition receptor
  • the main mediators of inflammation leading to necrosis and apoptosis of epithelial cells are reactive oxygen species, including singlet oxygen, hydroxyl radical, hydrogen peroxide, and the like.
  • reactive oxygen species have a cytopathogenic effect on bacteria that caused the inflammatory reaction.
  • a decrease in the production of reactive oxygen species at the site of bacterial invasion is not an optimal approach. It is necessary to increase the viability and maintain the functional integrity of epithelial cells in the presence of bactericidal and cytotoxic concentrations of inflammatory mediators. Such an increase will contribute to the preservation of the colonization resistance of the integumentary epithelium cells and limit the spread of the infectious and inflammatory process.
  • the cells of the integumentary epithelium are able to synthesize and secrete biologically active substances with pro- and anti-inflammatory activity in response to stimuli associated with bacterial pathogens and tissue damage.
  • a shift in the spectrum of such biologically active molecules towards substances with anti-inflammatory activity will also be useful for increasing colonization resistance and treating infectious and inflammatory diseases.
  • RF patent 2665006 February 28, 2017 is known, relating to a composition containing an antibiotic and C-alkylresorcinol, as well as a solubilizer.
  • the patent describes a composition comprising an antibiotic and a C4-7 alkylresorcinol capable of retarding the development of antibiotic resistance.
  • the present the composition does not contain an antibiotic.
  • composition of the present invention does not contain an antibiotic.
  • Another patent, RU 2465576, September 19, 2011, describes a method for protecting DNA when detecting the results of gel electrophoresis, which uses hexylresorcinol.
  • the patent does not relate to the composition of an alkylresorcinol with a compound of the beta-glucan group for the treatment of infectious and inflammatory diseases.
  • the authors of the present invention managed to find a new approach to the problem of treating infectious and inflammatory diseases by increasing the anti-inflammatory activity and colonization resistance of the integumentary epithelial cells.
  • This approach is based on the discovery of new properties of the known substance alkylresorcinol, or its analogs, with an alkyl hydrocarbon chain length of 4 to 12 carbon atoms and a modified aromatic ring.
  • the created composition allows:
  • the present invention makes it possible to effectively eliminate the damaging effect of the inflammatory process on the surrounding inflammatory locus (focus, zone, place, localization, etc.) healthy tissues, while maintaining their physical integrity and functional competence (that is, it has a cytoprotective effect).
  • the present invention relates to a composition of an alkylresorcinol, or analogs thereof, with an alkyl hydrocarbon chain length of 4 to 12 carbon atoms and a modified aromatic ring and a beta-glucan group compound.
  • the alkylresorcinol is butylresorcinol, hexylresorcinol, or heptylresorcinol.
  • the composition of the present invention contains a glucan, in particular a compound of the beta-glucan group, which is chitosan.
  • chitosan in the composition is in the form of nanoparticles less than 200 ⁇ m in size.
  • the composition according to the present invention may contain neutral excipients used in pharmaceuticals.
  • the composition of the present invention enhances the anti-inflammatory activity of cells adjacent to the external environment, as well as supports their barrier function.
  • the composition increases the anti-inflammatory activity and the barrier function of the cells of the integumentary epithelium and mucous membranes.
  • the present invention relates to a composition of the present invention for the treatment and prevention of an infectious-inflammatory disease in animals and humans.
  • the composition according to the invention can be used in the treatment of specific infectious and inflammatory diseases, in particular, infectious and inflammatory diseases of the skin, oral cavity, urogenital tract, gastrointestinal tract.
  • the present invention is effective for the treatment and prevention of mastitis, such as bovine mastitis.
  • the invention also relates to a method for the treatment of an infectious inflammatory disease, comprising the use of a composition according to the present invention.
  • a composition according to the present invention comprising topical application of the composition of the present invention.
  • the present invention relates to a combination therapy for the treatment of an infectious-inflammatory disease, comprising the use of a composition of the present invention and any antibacterial agent, in particular an antibiotic.
  • any antibacterial agent in particular an antibiotic.
  • sulfur and other antimicrobial agents can be used as the antibacterial agent.
  • composition of the present disease can be used in a method for treating an infectious-inflammatory disease caused by a pathogen with resistance and / or sensitivity to the action of an antibiotic.
  • the present invention relates to a topical formulation containing the composition of the present invention.
  • the composition can be applied to the affected area in the treatment or prevention of an infectious and inflammatory disease.
  • the composition can be used to treat or prevent primary and secondary infection of a wound, burn, and any other lesion that may be infected.
  • the present invention relates to the use of a composition according to the present invention for the treatment or prevention of infectious and inflammatory diseases.
  • the present invention relates to the use of the composition according to the present invention in the treatment or prevention of specific infectious and inflammatory diseases, in particular, infectious and inflammatory diseases of the skin, oral cavity, urogenital tract, gastrointestinal tract.
  • the composition of the present invention is used in combination with an antibacterial agent, in particular in combination with an antibiotic or other antimicrobial agent.
  • alkylresorcinol has cytoprotective effects
  • the present invention also claims the use of alkylresorcinol, alone or in combination with other suitable substances, including, with glucans, for cytoprotection.
  • the present invention also includes a kit containing the composition of the present invention in any pharmaceutical form as described above, as well as instructions or other appropriate components.
  • the present invention relates to a kit containing a pre-filled syringe and instructions for use.
  • Figure 1 shows the results of the study described in example 1.
  • the presented results demonstrate the dose-dependent effect of 4-hexylresorcinol and 5-heptylresorcinol on the tumor line of human colon epithelium cells HT-29, treated with one of the toxic inflammatory mediators.
  • Abscissa 0.2 ⁇ M 4-HexR - treatment with 0.2 ⁇ M 4-hexylresorcinol; 2 ⁇ M 4-HexR - treatment with 2 ⁇ M 4-hexylresorcinol; 0.2 ⁇ M 5-HepR - treatment with 0.2 ⁇ M 5-heptylresocinol; 2 ⁇ M 5-HepR - 2 ⁇ M 5-heptylresocinol.
  • Figure 3 shows a diagram of the action of the composition according to the present invention.
  • infectious-inflammatory disease is understood as a complex, local and general pathological process that occurs in response to the action of the causative agent of an infectious disease and manifests itself in reactions aimed at eliminating products, and, if possible, the pathogen. It is important to note that the mechanism of inflammation is common to all organisms, regardless of localization, type of stimulus.
  • Infectious and inflammatory diseases which are contemplated within the framework of the present invention, include infectious and inflammatory diseases associated with the integumentary epithelium and mucosa.
  • infectious and inflammatory diseases include infectious and inflammatory diseases of the skin and mucous membranes, infectious and inflammatory diseases of the mouth and throat, infectious and inflammatory diseases of the ear, throat and nose, infectious and inflammatory diseases of the gastrointestinal tract (GIT), infectious and inflammatory diseases of the urogenital tract.
  • GIT gastrointestinal tract
  • Infectious and inflammatory skin diseases include skin diseases caused, in particular, by Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidus, and streptococci.
  • Infectious and inflammatory skin diseases include staphylococcal skin lesion syndrome, skin abscess, furuncle and carbuncle, phlegmon, various local infections of the skin and subcutaneous tissue.
  • Staphylococcal pyoderma also includes ostiofolliculitis, folliculitis, hydradenitis, sycosis, barley, prickly heat, and vesiculopustulosis. They also include epidemic pemphigus of newborns, exfoliative dermatitis of newborns by Ritter.
  • Streptococcal pyoderma includes streptococcal impetigo, bullous impetigo, impetigo of the corners of the mouth, superficial panaritium, intertriginous streptoderma, intertriginous streptoderma, post-erosive syphiloid, versicolor, superficial dry erysipelas, erysipelas erysipelas inflammation - phlebitis, phlegmon and the like.
  • infectious and inflammatory skin diseases is mixed streptostaphylococcal pyoderma, streptostaphylococcal impetigo, chronic ulcerative and ulcerative vegetative pyoderma, chancriform pyoderma, pyogenic granuloma, erythrasma.
  • infectious and inflammatory skin diseases include allergic dermatosis (atopic dermatitis, eczema, strofulus), viral diseases (chickenpox, herpes), parasitic diseases (scabies, head lice), which in children are complicated by secondary infection, leading to the development of various forms of pyoderma.
  • infectious and inflammatory skin diseases include adolescent hydradenitis, artifical dermatitis, excoriated acne, onychophagia accompanied by pyoderma.
  • infectious and inflammatory skin diseases include chronic ulcerative and ulcerative vegetative pyoderma, carbuncles, sycosis.
  • a separate group of inflammatory skin diseases include parasitic skin diseases. These include, in particular, scabies, in which papules, pustules, erosion, scratching, purulent and hemorrhagic crusts are formed, as well as post-inflammatory pigmentation spots, with associated secondary infection. Scabies, complicated by pyoderma, and scabies in a child, which are characterized by the addition of a secondary infection with the development of common forms of pyoderma, should be distinguished separately.
  • head lice Another parasitic skin disease is head lice, which is also characterized by the addition of infection.
  • Infectious and inflammatory diseases of the mouth and throat include pharyngitis, tonsillitis, periodontitis, gingivitis, stomatitis.
  • Infectious and inflammatory diseases of the ear, throat and nose include, in particular, adenoids, rhinitis, sinusitis, sinusitis, otitis media, tympanitis, eustachitis.
  • Diseases of the ear, nose and throat are often complications of past viral and bacterial infections.
  • Infectious and inflammatory diseases of the urogenital tract include diseases caused by pathogens such as staphylococci, ureaplasmas, enterococci, chlamydia, herpes virus, Candida fungus, Escherichia coli, gonococcus, Trichomonas.
  • diseases for which the use the compositions of the present invention will be effective include balanitis, urethritis, cystitis, endometritis, balanoposthitis, oophoritis, salpingitis.
  • Infectious and inflammatory diseases of the present invention also include infectious and inflammatory diseases of the gastrointestinal tract, which include acute and chronic gastritis, duodenitis, post-resection syndrome (dumping syndrome), gastric and duodenal ulcers, erosion of the stomach and duodenum, peptic ulcer, inflammatory bowel disease, hemorrhoids, colon diverticulosis, diverticula of the digestive tract, infectious bowel inflammation, ischemic colitis, ulcerative colitis, non-specific bowel inflammation, acute colitis, acute enteritis, chronic colitis, chronic enteritis, enteritis, ulcerative colitis and the like with an inflammatory and / or infectious component in its pathogenesis.
  • infectious and inflammatory diseases of the gastrointestinal tract which include acute and chronic gastritis, duodenitis, post-resection syndrome (dumping syndrome), gastric and duodenal ulcers, erosion of the stomach and duodenum, peptic ulcer, inflammatory bowel disease, hemorrhoids, colon diverticulosis, diver
  • infectious and inflammatory diseases of the present invention include mastitis, in particular, bovine mastitis.
  • cells of the integumentary epithelium and mucous membranes are understood cells of epithelial tissue, that is, cells lining the surface of the body, body cavity, mucous membranes of internal organs, in particular the alimentary tract, respiratory system, urogenital tract.
  • Antibiotics are understood as substances produced by microorganisms, cells of animals and plants, as well as derivatives and synthetic products that have the selective ability to suppress and retard the growth of microorganisms.
  • Antibiotics in the framework of the present invention include all known antibiotics, including antibiotics to which microorganisms have resistance and / or sensitivity, in particular, beta-lactam antibiotics (penicillins, cephalosporins, carbapenems), macrolides, tetracyclines, aminoglycosides, lincosamides, chloramphenicol, glycopeptide antibiotics, polymyxins, sulfa antibacterial drugs, quinolones, nitrofuran derivatives, anti-tuberculosis drugs, antifungal antibiotics.
  • antibiotics are: beta-lactam antibiotics - benzylpenicillin (penicillin), phenoxymethylpenicillin, methicillin, oxacillin, nafcillin, amoxicillin, ampicillin, ticarcillin, carbenicillin, ureidopenicillins) (mezlocyllin cephalosporins - cephaloridine, cephalothin, cephapirin, cephradine, cefazolin, cephalexin, cefadroxil, cefuroxime, cefaclor, cefamandole, cefotiam, cefsulodin, cefoxitin, cefotaxime, ceftazidime, ceftriaxone, ceftibuten, ceftazidime, cefixime, cefpodoxime, tsefodizim, cefetamet, cefpirome, cefepime, ceftobiprol, ceftaroline, ce
  • pathogenic microorganisms in this case, understand any microorganism, including fungi, viruses, bacteria, causing disease in humans.
  • pathogenic microorganisms include representatives of the genera
  • Staphylococcus and Streptococcus ureaplasma, enterococci, chlamydia, herpes virus, Candida fungus, E. coli, gonococcus, Trichomonas, cytomegalovirus, papillomavirus, mycoplasma and the like.
  • Antibiotic resistance is understood as the phenomenon of resistance of a strain of infectious agents to the action of one or more antibacterial drugs, a decrease in the sensitivity of a culture of microorganisms to the action of an antibacterial substance.
  • Antibiotic resistance is based on evolutionary mechanisms that provide a uniquely high level of adaptability of microorganisms to new antibacterial agents. The key mechanisms for the development of antibiotic resistance are:
  • Alkylresorcinol is a phenolic lipid composed of a long aliphatic chain and resorcinol. Alkylresorcinol is synthesized by higher plants, in the greatest quantities by cereals, some types of algae, mosses, microorganisms. Alkylresorcinols consist of a benzene ring with two hydroxy groups at positions 1 and 3 and an alkyl substituent at position 5. Alkylresorcinols differ in the chain length of the hydrocarbon substituent, which consists of an odd number of carbon atoms with a degree of unsaturated TM from 0 to 4. Long-chain alkylresorcinols (the length of the C11-C29 alkyl radical) are known for their antioxidant activity.
  • Short-chain alkylresorcinols (C1-Cb) also exhibit antioxidant activity, and it was found that the latter increases with an increase in the length of the alkyl radical.
  • such adjuncts include alkylresorcinol is butylresorcinol, hexylresorcinol, or heptylresorcinol.
  • Alkylresorcins demonstrate the absence of mutagenic, carcinogenic and carcinogenic effects, therefore, they can be used in pharmacology and medicine.
  • butylresorcinol, hexylresorcinol and heptylresorcinol are contemplated as preferred alkylresorcinol analogs.
  • glucan is meant a polysaccharide molecule of D-glucose monomers linked by glycosidic bonds. Glucans are classified into alpha glucans and beta glucans. Alpha glucans are D-glucose polysaccharides linked by alpha-type glycosidic bonds:
  • Beta-glucans are polysaccharides (3-B-glucose, forming a linear skeleton with 1-3 b-glycosidic bonds. Beta-glucan molecules are diverse in their molecular weight, solubility, viscosity, side chain structure and gelling properties, which causes different physiological effects in animals.
  • the "beta-glucan group compound" of the present invention is a mixture of beta-1,3-glucan and beta-1,6-glucan. Beta glucans are effective immunomodulatory agents.
  • Chitosan a polysaccharide polymer consisting of randomly repeating units of b- (1-4) -linked N-acetyl-b-glucosamine and b-glucosamine. Chitosan is used in the food industry, agriculture, medicine and pharmaceuticals, and is non-toxic and biodegradable.
  • Antimicrobial agents include sulfur, halogens and halogenated compounds, in particular, chloramine, pantocid, iodoform, iodinol, iodine and its preparations, hydrogen peroxide solution, potassium permanganate, salicylic acid, boric acid, formaldehyde solution, hexamethylenetetramine, various medical alcohols, in particular, ethyl alcohol, heavy metal salts, in particular mercury oxide yellow, protargol, collargol, zinc sulfate, lead plaster.
  • Neuronuclear excipients from the point of view of pharmaceuticals are additional substances necessary for imparting the appropriate dosage form to the drug, as well as for imparting the necessary properties to the drug.
  • Auxiliary substances include natural substances, for example, starch, which is used as a filler in tablets; in pills as a filler; in ointments as a thickener; in suspensions and emulsions as a stabilizer; as a sorbent in enteral dosage forms.
  • natural excipients include alginates, which are used as thickeners, stabilizers and binders in the production of emulsions, ointments, as disintegrants in tablets.
  • Agar-agar has stabilizing properties, as well as loosening and gliding properties of tableting materials. It can also be used together with glycerin as an ointment base. Agar also has a corrective effect, softening unpleasant taste of medicinal substances.
  • pectin is used as a base for chewable tablets, as a thickener for ointments and syrups.
  • Cellulose in particular microcrystalline cellulose, is used as a filler.
  • Collagen is widely used for the formation of films containing an active substance (for example, for the production of eye films with antibiotics). Collagen is also used in hemostatic sponges. It ensures the optimal activity of medicinal substances, which is associated with deep penetration and prolonged contact of medicinal substances included in the collagen base with the tissues of the body.
  • a particular variant of collagen is gelatin, which is an active emulsifier and stabilizer. It is also used to make ointments, suppositories, and gelatin capsules.
  • Natural inorganic polymers such as bentonites can also be used as adjuvants. They are used as an adsorbent to increase the viscosity, ensure dispersion, and stability of medicinal formulations. Aerosil is used as a sliding excipient in pharmaceuticals, which ensures an even distribution of medicinal substances.
  • Talc is used to improve hydrophobicity, rheological properties, and storage stability. It is used as an antiperspirant in ointments.
  • Semi-synthetic talc derivatives are used in a similar manner. Methylcellulose and carboxymethylcellulose are used as the basis of ointments and liniment. Also in pharmacological compositions, hydroxypropyl methylcellulose, acetylcellulose and other derivatives of this methylcellulose are used.
  • polyvinol is used as an emulsifier, thickener and suspension stabilizer; as ointment bases and eye films.
  • Polyvinylpyrrolidone is also used as a stabilizer for emulsions and suspensions, as well as a prolonging component.
  • the bio-soluble polymer of polyacrylamide is widely used to create medicinal bio-soluble films that provide the maximum contact time of the active substance of the composition with the surface.
  • Polyethylene oxides are used for the manufacture of ointments, suspension emulsions, suppositories and other dosage forms.
  • Tween-80 which is a monoester of oleic acid, is used as a solubilizer, emulsifier and stabilizer.
  • lactose As forming agents (fillers or solvents), you can use lactose, sugar, starch; cocoa butter, paraffin, wax; purified water, alcohol, polyethylene glycol; gelatin, cellulose ethers.
  • Stabilizing excipients include antioxidants - butyloxyanisole, butyloxytoluene, tocopherols, carotenoids, low-valence sulfur derivatives (sodium sulfite and metabisulfite, rongolite, methionine), ascorbic acid, complexes with metal ions, citric acid, tartaric acid, EDTA, Trilon B.
  • K antimicrobial stabilizing agents include antiseptics and preservatives - chlorobutanol hydrate, phenol, chloroform, merthiolate, nipagin, nipazole, sorbic acid, ethanol, benzyl alcohol, chlorobutanol hydrate, phenol, parabens (nipagin, nipazylmethyl, benzalonium dimethyl) essential oils.
  • Lactic acid, boric acid, hydrogen peroxide, sorbic acid, formic acid, uotoropin, formaldehyde and the like are used as preservatives.
  • emulsifiers substances are used that have the ability to impart stability to emulsions.
  • Emulsifying properties are possessed by soaps of monovalent metals of fatty or synthetic alkyl sulfonic acids (sodium lauryl sulfate, polyoxyethylene ethers of alcohols (spines, tweens), colloids of high molecular weight, proteins (casein, albumin, gelatin), carbohydrates (dextrin), saponins, tannins, bile salts.
  • soaps of monovalent metals of fatty or synthetic alkyl sulfonic acids sodium lauryl sulfate, polyoxyethylene ethers of alcohols (spines, tweens), colloids of high molecular weight, proteins (casein, albumin, gelatin), carbohydrates (dextrin), saponins, tannins, bile salts.
  • hydrophobic emulsifiers are used: fat-soluble emulsifiers (soaps of polyvalent metals), lipoids (phospholipids, lycetin, lanolin, resins and wax).
  • a separate group of emulsifiers includes solid, highly dispersed, mineral powders such as clays bentonites, oxides, carbonates, sulfates of calcium, aluminum, silicon (aerosil).
  • Glycerin polyethylene glycol are used as solubilizers.
  • pluronics also known as poloxamers
  • Pluronic are block copolymers of polyoxyethylene and polyoxypropylene, possess the properties of surfactants and provide a delayed release of active substances.
  • the different pluronic grades are liquids, pastes or wax-like solids.
  • the composition of the present invention may also be in a kit containing the composition of the present invention, generally in an effective amount, and any other appropriate component.
  • Another suitable component may, for example, be a base for creating a pharmaceutical form for immediate use.
  • the kit contains instructions for using the composition.
  • the kit may contain disposable gloves, a disposable syringe, and any other components for ease of administration and use of the composition of the present invention.
  • the present invention relates to a kit containing a pre-filled syringe with a composition of the present invention and instructions for use.
  • the composition of the present invention may contain alkylresorcinol in an amount of 1 to 200 mg / liter and 1-3 beta-glucan in an amount of 50-500 mg / liter.
  • the composition of the present invention is mixed with lanolin (vazilin) in a ratio of 1:10 and forms ointment.
  • the composition of the present invention is a 2% lotion solution.
  • the composition of the present invention is in the form of ear drops.
  • the composition is a 5-10%, 12% and 20% ointment.
  • the amount of alkylresorcinol ranges from 0.1-20% and beta-glucan ranges from 5-50% in the pharmaceutical composition or formulation. In another specific embodiment, the amount of alkylresorcinol is from 10 mg to 2 g and beta-glucan is from 500 mg to 5 g per 10 g of the pharmaceutical composition or formulation. In preferred embodiments, hexylresorcinol was used as alkylresorcinol in an amount of 10 mg to 1 g, in more preferred embodiments, hexylresorcinol was in an amount of 10, 20, 30, 40, 50, 60 mg per 1 liter of the finished product. Beta-glucan was 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg per 1 liter of the finished product.
  • water for injection and / or a hydrogel which are polymers of acrylic acid (PAA) cross-linked with polyalkyl esters of sugars or multivolume alcohols, is used as the base.
  • the concentration of PAA can vary from 0.5 to 30 g / l of the finished composition, from 1 to 30 g / l of the finished composition, or from 1 to 20 g / liter of the finished composition.
  • oil-in-oil or “oil-in-water” can be used as a base, with a volume ratio of oil / water components in the final product from 1/9 to 9/1.
  • oil means triglycerides of organic acids, as well as liquid mixtures of high-boiling (high-molecular) hydrocarbons (boiling point 300-600 ° C), mainly alkylnaphthenic and alkylaromatic, obtained by refining petroleum, approved for use in medical and veterinary practice - for example, Vaseline oil.
  • the preparation contains methyl ester paraoxybenzoic acid in an amount from 0.1 g / L of the finished product to 3 g / L of the finished product, in a particularly preferred embodiment from 0.5 g / L to 2.5 g / L of the finished product.
  • the preparation contains dimethyl sulfoxide (DMSO) at a concentration of 10 to 200 g, 20 to 100 g, or 22 to 110 g per liter of the finished composition.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the composition according to the invention contains Carbapol 980 NF ("Lubrizol” USA) in the amount of 1, 1.5, 2, 3, 4 grams per 1 liter of the finished solution, the content of methyl ester of paraoxybenzoic acid (or nipagin) is from 0 , 1 g to 1 g per liter, preferably 0.2, 0.3, 0.5 g / l of the finished composition, the DMSO content is from 30 to 60 g / l, preferably 35, 45 and 55 g / l of the finished composition , water for injection - quantum satis (preferably up to 1 liter).
  • Carbapol 980 NF (“Lubrizol” USA) in the amount of 1, 1.5, 2, 3, 4 grams per 1 liter of the finished solution
  • the content of methyl ester of paraoxybenzoic acid (or nipagin) is from 0 , 1 g to 1 g per liter, preferably 0.2, 0.3, 0.5 g / l of the finished composition
  • Example 1 Dose-dependent effect of ⁇ -hexylresorcinol and 5-heptylresorcinol on HT-29 cells treated with an inflammatory mediator
  • Human colon epithelial tumor cells HT-29 were cultured in DMEM medium supplemented with 10 vol% fetal bovine serum (cat. No. SV30160.03, Hyclone, USA), 1 mg / ml glutamine (cat. No. F032, PanEco, Russia), 50 U / ml penicillin and 50 ⁇ g / ml streptomycin (cat. No. A065, PanEco, Russia) at 37 ° C in an atmosphere containing 5% CO2. After reaching the monolayer, the cells were washed with Versene's solution and the cells were removed with trypsin (0.25% in Versene's solution). The number of cells was counted using a Goryaev chamber and the cells were scattered at the rate of 100,000 cells per cm2.
  • HT-29 cells that had reached the monolayer were removed from the substrate as described above and plated into 96-well plates (SPL Litesciences, South Korea, cat. No. 30096, PanEko, Russia), 20,000 cells per well. The cells were incubated for 4 hours at 37 ° C in an atmosphere containing 5% CO2. After the end of incubation, the nutrient medium together with non-adherent cells was removed and added to wells of fresh medium containing 4-hexylresorcinol and 5 geptilrezortsin a final concentration of 0 M / l, 10 of 5 M / L, 10 6M / l and 10- 7 M / L.
  • HT-29 cells were incubated with H2O2 for 16 hours at 37 ° C in an atmosphere containing 5% CO2. Then, the wells were washed with a nutrient medium (three times 200 ⁇ l) and 100 ⁇ l of a crystal violet solution (REACHIM, Russia) in 10% ethanol was added. It was incubated for 10 min and the unbound dye was removed by washing the plate with water until the wash water was not stained. The optical density in the wells was measured on a ClarioStar device (BMG Labtech, Germany) at a wavelength of 620 nm.
  • a ClarioStar device BMG Labtech, Germany
  • the presented results demonstrate the dose-dependent cytoprotective effect of 4-hexylresorcinol and 5-heptylresorcinol against the tumor line of human colon epithelium cells HT-29 treated with one of the toxic inflammatory mediators, in particular, hydrogen peroxide.
  • HT-29 cells were cultured in DMEM medium supplemented with 10 vol% fetal bovine serum (cat. No. SV30160.03, Hyclone, USA), 1 mg / ml glutamine (cat. No. F032, PanEco, Russia), 50 U / ml of penicillin and 50 ⁇ g / ml of streptomycin (cat. No. A065, PanEko, Russia) at 37 ° C in an atmosphere containing 5% CO2. After reaching the monolayer, the cells were washed with Versene's solution and the cells were removed with trypsin (0.25% in Versene's solution).
  • HT-29 cells that had reached the monolayer were removed from substrates as described above and plated into 24-well plates (SPL Lifesciences, South Korea, cat. No. 30096, PanEco, Russia), 100,000 cells per well. The cells were incubated for 4 hours at 37 ° C in an atmosphere containing 5% CO2.
  • the culture medium together with nonadherent cells were removed and added to the wells fresh nutrient medium containing 4- and 5-hexylresorcinol geptilrezortsin a final concentration of 0 M / l, 10 of 5 M / L, 10 6M / l and 10- 7 M / L.
  • An equivalent volume of nutrient medium was added to the control wells.
  • the cells were cultured for 18 hours at 31 ° C, in an atmosphere containing 5% CO2, and after the end of incubation, the preparations were removed, and the cells were lysed in an ExtractRNA solution (ZAO Evrogen, Russia). Cell lysates were stored at -80 ° C until use. Isolation of mRNA, synthesis of the coding strand
  • DNA and RT-PCR reactions were performed using commercial kits manufactured by ZAO Evrogen, Russia, according to the attached protocols.
  • the level of gene expression was assessed by the content of mRNA in HT-29 cells using the primers presented in Table 1. Table 1. The genes studied and the sequences of the primers used.
  • hexylresorcins dose-dependently increase the expression of genes ARG1, ID01 in the cells of the tumor line of the intestinal epithelium HT-29.
  • the products of expression of these genes the enzymes arginase 1 and indoleamine-pyrrole-2,3-dioxygenase, have a pronounced ability to suppress the immunological mechanisms of maintaining the inflammatory process.
  • arginase 1 and indoleamine-pyrrole-2,3-dioxygenase are involved in the destruction of bacteria, increasing the nonspecific resistance of barrier tissues to bacterial invasion.
  • NFIA and SPI1 genes confirms the previously established fact of the cytoprotective effect of alkyloxybenzenes on the cells of the tumor line of the intestinal epithelium HT-29. It was shown that the products of the expression of these genes are involved in the protection of cells from the adverse effects of the microenvironment.
  • Example 3 Effect of the preparation based on the combination according to the present invention for the treatment of bovine mastitis in a production environment
  • the drug is a homogeneous gel from colorless to yellow with opalescence.
  • the preparation contains alkylresorcinol, 1-3 / 1-6 beta-glucan and excipients (dimethyl sulfoxide, nipagin, carbopol, water for injection).
  • the drug is presented in the form of plastic syringes of 10 g.
  • composition of the preparation (g / l of the finished preparation):
  • the drug was used in cows for the treatment of clinical and subclinical forms of mastitis of bacterial etiology during lactation.
  • mastitis The diagnosis of mastitis was made on the basis of a set of diagnostic studies, which included: a general clinical examination of the animal with a trial milking and external examination of the secretion of the mammary gland; laboratory examination of breast secretions using rapid diagnostic tests (CMT, Kerba test, Belomastin M, etc.) and sedimentation tests; bacteriological examination of the secretion of the mammary gland, with the determination of the sensitivity of the isolated microflora to antibiotics.
  • CMT Kerba test
  • Belomastin M Belomastin M, etc.
  • bacteriological examination of the secretion of the mammary gland With the determination of the sensitivity of the isolated microflora to antibiotics.
  • the examination of the mammary gland included three diagnostic steps: examination, palpation, and milking.
  • Cows of group 1 (subclinical mastitis) were injected into the affected lobe of the udder 3-4 times with an interval of 12 hours according to the instructions.
  • Cows of group 2 (clinical mastitis) were injected into the affected lobe of the udder 4-8 times with an interval of 12 hours according to the instructions.
  • the frequency of administration of the drug was adjusted upward / downward, depending on the timing and degree of recovery of the animals, as well as the individual sensitivity of the animals to the components of the drug.
  • the drug was injected into the affected quarter of the udder of a cow in a single dose of 10 g (contents of 1 syringe).
  • the secretion from the diseased udder quarters was removed and disposed of, the nipple was carefully treated with a cleaning napkin, then the protective cap was removed, the tip of the syringe was inserted into the nipple canal and the contents were carefully squeezed out. After that, the tip was removed, the tip of the nipple was pinched with fingers and the nipple was lightly massaged from the bottom up to better distribute the drug.
  • the indications for stopping the administration of the drug were a significant compaction of the udder tissue, an increase in udder temperature and pain on palpation, and inflammatory changes in the udder nipples.
  • PCR polymerase chain reaction
  • RT-PCR quantitative real-time PCR
  • D + Positive dynamics
  • organoleptic improvement of breast secretion a decrease in the number of somatic cells in milk, a qualitative improvement in the examination and palpation of the udder, in clinical forms of mastitis - the disappearance of visible characteristic clinical changes on the part of the mammary gland and / or its secretion;
  • Negative dynamics (D-) organoleptic deterioration of the secretion of the mammary gland, an increase in the number of somatic cells in milk, a visible deterioration during examination and palpation of the udder, the manifestation of visible characteristic clinical signs of the development of an infectious and inflammatory process;
  • Recovery the secretion of the mammary gland is normal, the number of somatic cells in milk does not exceed 200 thousand cells / ml, clinical changes are within normal limits.
  • Table 1 Dynamics and control of the therapeutic efficacy of the drug in the period from 3-7 days from the end of therapy.
  • Table 2 Dynamics and control of the therapeutic efficacy of the drug in the period from 8-14 days after the end of therapy.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно, к лечению и профилактике инфекционно- воспалительных заболеваний. Заявлена фармацевтическая композиция, содержащая алкилрезорцин и глюкан, в частности, бета-глюкан, которая может использоваться при лечении различных инфекционно- воспалительных заболеваний, в том числе заболеваний, вызываемых штаммами бактерий, резистентных и/или чувствительных к антибиотикам.

Description

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно, к лечению и профилактике инфекционно- воспалительных заболеваний. Заявлена фармацевтическая композиция, содержащая алкилрезорцин и глюканы, в частности, соединения группы бета-глюкана, которая может использоваться при лечении различных инфекционно-воспалительных заболеваний, в том числе заболеваний, вызываемых штаммами бактерий, резистентных и/или чувствительных к антибиотикам. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению алкилрезорцина в качестве цитопротективного агента.
Уровень техники
Воспалительные заболевания, вызываемые заражением бактериальными патогенами, (инфекционно-воспалительные заболевания) являются одними из самых распространенных у человека и сельскохозяйственных животных. Главным подходом в лечении инфекционно-воспалительных заболеваний в настоящее время является использование антибиотиков. Их широкое внедрение в медицине и ветеринарии позволило значительно снизить летальность при инфекционно-воспалительных заболеваниях. Тем не менее, резистентность микроорганизмов к антибиотикам и снижение их эффективности является главной проблемой их применения.
Заражение многоклеточных эукариотических организмов, в частности, млекопитающих бактериальными патогенами, начинается с проникновения бактерии (бактериальной инвазии) в их внутреннюю среду, затем следует активная бактериальная экспансия и гибель многоклеточного организма в результате этой экспансии.
В ходе эволюции многоклеточные эукариоты сформировали ряд механизмов, позволяющих противостоять бактериальной инвазии и элиминировать проникшие бактериальные патогены. Многочисленные исследования установили, что отсутствие или значительное ослабление этих механизмов приводит к активной инвазии бактерий и развитию инфекционного процесса. И наоборот, усиление механизмов устойчивости к бактериальной инвазии способствует повышению защиты от бактериальной инвазии.
Таким образом, усиление механизмов устойчивости клеток к бактериальной инвазии является еще одним подходом к терапии инфекционно-воспалительных заболеваний, наряду с применением антибиотиков.
Важным механизмом устойчивости клеток организма млекопитающих к бактериальной инвазии является так называемая колонизационная резистентность, которая в свою очередь определяется целостностью и полноценным функционированием клеток, граничащих с внешней средой (покровный эпителий кожи и слизистых). Жизнеспособные, нормально функционирующие клетки покровного эпителия кожи и слизистых обеспечивают колонизационную резистентность за счет формирования плотного пласта клеток, трудно проницаемого для бактериальных патогенов, синтеза и секреции компонентов барьера, механической эвакуации патогенов ресничками апикальной части клеток и, что крайне важно, синтезом антибактериальных веществ (пептиды, сурфактанты, органические кислоты). Как указано выше, первоначальным этапом бактериальной инвазии является механическое разрушение и/или метаболическое (включая воспалительное) нарушение функциональной активности клеток покровного эпителия, после чего происходит перемещение бактериальных клеток и их компонентов, то есть лигандов PRR (патоген распознающий рецептор), в подслизистый слой и инициация воспалительных реакций с высвобождением медиаторов воспаления.
Возникающие на месте бактериальной инвазии воспалительные реакции с высвобождением медиаторов воспаления приводят к повреждению и дисфункции прилежащих участков покровного эпителия (так называемой вторичной альтерации), что снижает колонизационную резистентность и, в результате, приводит к генерализации инфекционно-воспалительного процесса. Таким образом, снижение количества медиаторов воспаления с целью повышения колонизационной резистентности и сохранения функциональной целостности клеток является подходом для усиления механизмов устойчивости клеток к бактериальной инвазии, то есть борьбы с инфекционно-воспалительным заболеванием.
Основными медиаторами воспаления, приводящими к некрозу и апоптозу клеток эпителия, являются активные формы кислорода, включая синглетный кислород, гидроксильный радикал, перекись водорода и тому подобное. При этом, активные формы кислорода обладают цитопатогенным действием на бактерии, которые вызывали воспалительную реакцию. Таким образом, уменьшение продукции активных форм кислорода на месте бактериальной инвазии не является оптимальным походом. Необходимо повысить жизнеспособность и поддержание функциональной целостности клеток эпителия в присутствии бактерицидных и цитотоксических концентраций медиаторов воспаления. Такое повышение будет способствовать сохранению колонизационной резистентности клеток покровного эпителия и ограничивать распространение инфекционно- воспалительного процесса.
Клетки покровного эпителия способны синтезировать и секретировать биологически активные вещества, обладающие про- и противовоспалительной активностью в ответ на стимулы, ассоциированные с бактериальными патогенами и повреждением тканей. Смещение спектра таких биологически активных молекул в сторону веществ с противовоспалительной активностью также будет полезно для повышения колонизационной резистентности и лечения инфекционно-воспалительных заболеваний.
Таким образом, авторы настоящего изобретения предлагают сосредоточить усилия на повышении противовоспалительной активности и повышении колонизационной резистентности при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний. На этом основании была создана композиция, содержащая алкилрезорцин и 1— З/1-б бета глюкан.
Из уровня техники известен патент РФ 2665006, 28 февраля 2017, относящийся к композиции, содержащей антибиотик и С- алкилрезорцин, а также солюбилизатор. В частности, в патенте описана композиция, включающая антибиотик и С4-7-алкилрезорцин, способная замедлять развитие резистентности к антибиотику. В отличие от композиции, описанной в патенте 2665006, настоящая композиция не содержит антибиотик.
В статье Brown D. et al. Antibiotic resistance breakers: can repurposed drugs fill the antibiotic discovery void? Nat Rev Drag Discov. 2015, декабрь; 14(12):821-32), описаны лекарственные вещества, которые усиливают действие антибиотиков. Комбинации антибиотиков и усиливающих агентов являются новым направлением в поиске новых антибактериальным средств, но проблема резистентности к антибиотикам сохраняется для таких комбинаций. В отличие от описанных композиций, композиция по настоящему изобретению не содержит антибиотик.
В другом патенте, RU 2465576, 19 сентября 2011, описан способ защиты ДНК при детекции результатов гель-электрофореза, в котором применяется гексилрезорцин. Патент не относится к композиции алкилрезорцина с соединением группы бета-глюканом для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний.
Авторам настоящего изобретения удалось найти новый подход к проблеме лечения инфекционно-воспалительных заболеваний за счет повышения противовоспалительной активности и колонизационной резистентности клеток покровного эпителия.
Такой подход основан на обнаружении новых свойств известного вещества алкилрезорцина, или его аналогов, с длиной алкильной углеводородной цепи от 4 до 12 атомов углерода и модифицированным ароматическим кольцом.
Созданная композиция позволяет:
(a) уменьшить численность бактериальной популяции без использования антибиотиков;
(B) избежать развития резистентности к антибиотикам;
(c) снизить цитотоксический эффект бактериальных токсинов;
(d) снизить цитотоксический эффект продуктов воспаления на клетки покровного эпителия кожи и слизистых для сохранения их жизнеспособности и функциональной активности;
(e) стимулировать противоинфекционный врожденный иммунный ответ, то есть стимулировать фагоцитоз, продукцию антибактериальных факторов, в частности антибактериальных пептидов.
Наконец, настоящее изобретение позволяет эффективно устранять повреждающее воздействие воспалительного процесса на окружающие воспалительный локус (очаг, зону, место, локализацию, и тому подобное) здоровые ткани, сохраняя их физическую целостность и функциональную компетентность (то есть, обладает цитопротекторным действием).
Раскрытие сущности изобретения
В первом аспекте настоящее изобретение относится к композиции алкилрезорцина, или его аналогов, с длиной алкильной углеводородной цепи от 4 до 12 атомов углерода и модифицированным ароматическим кольцом, и соединением группы бета-глюкана. В одном из вариантов осуществления такой композиции алкилрезорцин представляет собой бутилрезорцин, гексилрезорцин или гептилрезорцин. В еще одном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению содержит глюкан, в частности, соединение группы бета-глюкана, которое представляет собой хитозан. В частности, хитозан в композиции находится в виде наночастиц размером менее 200 мкм. Кроме того, композиция по настоящему изобретению может содержать нейтральные вспомогательные вещества, использующиеся в фармацевтики.
Во другом аспекте, композиция по настоящему изобретению повышает противовоспалительную активность клеток, граничащих с внешней средой, а также поддерживает их барьерную функцию. В частности, композиция повышает противовоспалительную активностью и барьерную функцию клеток покровного эпителия и слизистых.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к композиции по настоящему изобретению для лечения и профилактики инфекционно-воспалительного заболевания у животных и человека. В частности, композицию по изобретения можно использовать при лечении конкретных инфекционно-воспалительных заболеваний, в частности, инфекционно-воспалительных заболеваниях кожи, ротовой полости, урогенитального тракта, ЖКТ. В частности, настоящее изобретение эффективно для лечения и профилактики мастита, например, мастита коров.
Также изобретение относится к способу лечения инфекционно воспалительного заболевания, включающему применение композиции по настоящему изобретению. В частности, к способу лечения, б включающему местное применение композиции по настоящему изобретению.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к комбинированной терапии для лечения инфекционно-воспалительного заболевания, включающему применение композиции по настоящему изобретению и любого антибактериального средства, в частности, антибиотика. В одном из вариантов осуществления, в качестве антибактериального средства можно использовать серу и другие противомикробные средства.
В особом аспекте композицию по настоящему заболеванию относится можно использоваться в способе лечения инфекционно- воспалительного заболевания, вызванного патогеном с резистентностью и/или чувствительностью к действию антибиотика.
Также настоящее изобретение относится к составу для местного применения, содержащему композицию по настоящему изобретению. Состав можно наносить на пораженный участок при лечении или профилактики инфекционно-воспалительного заболевания. В частности, состав можно использовать для лечения или профилактики первичного и вторичного инфицирования раны, ожога и любого другого поражения, которое может быть инфицировано.
Настоящее изобретение относится к применению композиции по настоящему изобретению для лечения или профилактики инфекционно- воспалительных заболеваний. В частности, настоящее изобретение относится к применению композиции по настоящему изобретению при лечении или профилактики конкретных инфекционно-воспалительных заболеваний, в частности, инфекционно-воспалительных заболеваниях кожи, ротовой полости, урогенитального тракта, ЖКТ. В еще одном варианте осуществления, композицию по настоящему изобретению применяют в комбинации с антибактериальным средством, в частности, в комбинации с антибиотиком или другим противомикробным средством.
Кроме того, заявитель обнаружил, что алкилрезорцин обладает цитопротективными эффектами, поэтому также в настоящем изобретении заявлено применение алкилрезорцина, самостоятельно или в комбинации с другими подходящими веществами, в том числе, с глюканами, для цитопротекции.
Настоящее изобретение также включает в себя набор, содержащий композицию по настоящему изобретению в любой фармацевтической форме, как описано выше, а также инструкцию или другие соответствующие компоненты. В качестве примера, настоящее изобретение относится к набору, содержащему заранее заполненный шприц и инструкцию для применения.
Краткое описание чертежей
На фиг.1 показаны результаты исследования, описанного в примере 1. Представленные результаты демонстрируют дозо- зависимый эффект 4-гексилрезорцина и 5-гептилрезорцина на опухолевую линию клеток эпителия толстой кишки человека НТ-29, обработанных один из токсических медиаторов воспаления.
На фиг.2 показана экспрессия некоторых генов в клетках НТ- 29 через 18 часов после обработки алкилоксибензолами. *- р<0,05, п=4, парный критерий Уилкоксона-Манна-Уитни. По оси ординат отношение количества мРНК по отношению к контролю (клетки НТ-29 инкубировались без АОБ). По оси абсцисс: 0,2 мкМ 4-HexR - обработка 0,2 мкМ 4-гексилрезорцинолом; 2 мкМ 4-HexR - обработка 2 мкМ 4-гексилрезорцинолом; 0,2 мкМ 5-HepR - обработка 0,2 мкМ 5-гептилрезоцинолом; 2 мкМ 5-HepR - 2 мкМ 5-гептилрезоцинолом.
На фиг.3 показана схема действия композиции по настоящему изобретению.
Осуществление изобретения
Все использованные в настоящем описании термины хорошо известны среднему специалисту в данной области. Ниже приведены некоторые определения.
«Воспалительные заболевания, вызываемые заражением бактериальными патогенами», и «инфекционно-воспалительные заболевания» используются в тексте описания взаимозаменяемо.
Под «инфекционно-воспалительным заболеванием» понимают комплексный, местный и общий патологический процесс, возникающий в ответ на действие возбудителя инфекционного заболевания и проявляющийся в реакциях, направленных на устранение продуктов, а если возможно, то и возбудителя. Важно отметить, что механизм воспаления является общим для всех организмов, независимо от локализации, вида раздражителя.
Инфекционно-воспалительные заболевания, которые рассматриваются в рамках настоящее изобретения, включают инфекционно-воспалительные заболевания, связанные с покровным эпителием и слизистой.
В частности, инфекционно-воспалительные заболевания включают инфекционно-воспалительные заболевания кожи и слизистых, инфекционно-воспалительные заболевания полости рта и горла, инфекционно-воспалительные заболевания ухо, горла и носа, инфекционно-воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), инфекционно-воспалительные заболевания урогенитального тракта. Указанные варианты приведены только в качестве примера и не являются ограничивающими.
К инфекционно-воспалительным заболеваниям кожи относятся заболевания кожи, вызываемые, в частности, золотистым стафилококком (Staphylococcus aureus), эпидермальным стафилококком (Staphylococcus epidermidus), а также стрепококками. К инфекционно-воспалительным заболеваниям кожи относятся синдром стафилококкового поражения кожи, абсцесс кожи, фурункул и карбункул, флегмона, различные местные инфекции кожи и подкожной клетчатки. Стафилококковые пиодермии также включают остиофолликулит, фолликулит, гидраденит, сикоз, ячмень, потницу и везикулопустулез. К ним также относится эпидемическая пузырчатка новорожденных, эксфолиативный дерматит новорожденных Риттера. Стрептококковые пиодермии включают стрептококковое импетиго, буллезное импетиго, импетиго углов рта, поверхностный панариций, интертригинозную стрептодермию, интертригинозную стрептодермию, послеэрозивный сифилоид, простой лишай, сухую поверхностную стрептодермию, эктиму вульгарную, множественные эктимы, рожистое воспаление, рожистое воспаление у младенца, а также осложнения рожистого воспаления - флебиты, флегмоны и тому подобное. Примером инфекционно-воспалительных заболеваний кожи является смешанная стрептостафилококковая пиодермия, стрептостафилококковое импетиго, хроническая язвенная и язвенно- вегетирующая пиодермия, шанкриформная пиодермия, пиогенная гранулема, эритразма. Кроме того, отдельно следует выделить инфекционно-воспалительные заболевания кожи у детей. В частности, к ним относятся аллергодерматозы (атопический дерматит, экземы, строфулюс), вирусные заболевания (ветряная оспа, герпес), паразитарные заболевания (чесотка, педикулез), которые у детей осложняются вторичным инфицированием, приводящим к развитию разнообразных форм пиодермий. В одном из вариантов осуществления, инфекционно-воспалительные заболевания кожи включают гидраденит подростков, артифициальные дерматиты, экскориированные акне, онихофагии, сопровождающиеся присоединением пиодермий. В еще одном варианте осуществления, инфекционно-воспалительные заболевания кожи включают хроническую язвенную и язвенно-вегетирующую пиодермию, карбункулы, сикозы.
Отдельную группу воспалительных-заболеваний кожи включают паразитарные болезни кожи. К ним относятся, в частности, чесотка, при которой образуются папулы, пустулы, эрозии, расчесы, гнойные и геморрагические корочки, а также пост- воспалительные пятна пигментации, с присоединенной вторичной инфекцией. Отдельно следует выделить чесотку, осложненную пиодермией, и чесотку у ребенка, при которых характерно присоединение вторичной инфекции с развитием распространенных форм пиодермии.
Другим паразитарным заболеванием кожи является педикулез, при котором также характерно присоединение инфекции.
К инфекционно-воспалительным заболеваниям полости рта и горла относятся фарингит, тонзиллит, пародонтит, гингивит, стоматит.
К инфекционно-воспалительным заболеваниям уха, горла и носа относятся, в частности, аденоиды, риниты, гаймориты, синуситы, отиты, тимпаниты, евстахииты. Болезни уха, носа и горла зачастую являются осложнениями перенесенных вирусных и бактериальных инфекций.
К инфекционно-воспалительным заболеваниям урогенитального тракта относятся заболевания, вызываемые таким возбудителями, как стафилококки, уреаплазмы, энтерококки, хламидии, вирус герпеса, грибок Candida, кишечная палочка, гонококк, трихомонада. Примеры заболеваний, в отношении которых применение композиции по настоящему изобретению будет эффективно, включают баланит, уретрит, цистит, эндометрит, баланопостит, оофорит, сальпингит.
Инфекционно-воспалительные заболевания по настоящему изобретению также включают в себя инфекционно-воспалительные заболевания ЖКТ, к которым относятся острый и хронический гастрит, дуоденит, пострезекционный синдром (демпинг-синдром), язва желудка и двенадцатиперстной кишки, эрозии желудка и двенадцатиперстной кишки, язвенная болезнь, воспалительные болезни кишечника, геморрой, дивертикулез ободочной кишки, дивертикулы пищеварительного тракта, инфекционное воспаление кишечника, ишемический колит, неспецифический язвенный колит, неспецифическое воспаление кишечника, острый колит, острый энтерит, хронический колит, хронический энтерит, энтерит, язвенный колит и тому подобное, связанные с воспалительным и/или инфекционным компонентом в своем патогенезе.
Также к инфекционно-воспалительным заболеваниям по настоящему изобретению относится мастит, в частности, мастит коров.
Под «клетками покровного эпителия и слизистых» понимают клетки эпителиальной ткани, то есть, клетки, выстилающие поверхность тела, полость тела, слизистые оболочки внутренних органов, в частности пищевого тракта, дыхательной системы, мочеполовые пути.
Под «антибиотиками» понимают вещества, продуцируемые микроорганизмами, клетками животных и растений, а также производные и синтетические продукты, которые обладают селективной способностью подавлять и задерживать рост микроорганизмов. К антибиотикам в рамках настоящего изобретения относятся все известные антибиотики, включая антибиотики, к которым у микроорганизмов имеется резистентность и/или чувствительность, в частности, бета-лактамные антибиотики (пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы), макролиды, тетрациклины, аминогликозиды, линкозамиды, хлорамфеникол, гликопептидные антибиотики, полимиксины, сульфаниламидные антибактериальные препараты, хинолоны, производные нитрофурана, противотуберкулёзные препараты, противогрибковые антибиотики. Неограничивающими примерами антибиотиков являются: бета- лактамные антибиотики - бензилпенициллин (пенициллин), феноксиметилпенициллин, метициллин, оксациллин, нафциллин, амоксициллин, ампициллин, тикарциллин, карбенициллин, уреидопенициллины (мезлоциллин, азлоциллин), амидинопенициллины (мециллам); цефалоспорины - цефалоридин, цефалотин, цефапирин, цефрадин, цефазолин, цефалексин, цефадроксил, цефуроксим, цефаклор, цефамандол, цефотиам, цефсулодин, цефокситин, цефотаксим, цефоперазон, цефтриаксон, цефтибутен, цефтазидим, цефиксим, цефподоксим, цефодизим, цефетамет, цефпиром, цефепим, цефтобипрол, цефтаролин, цефтолозан; карбапенемы - биапенем, эртапенем, дорипенем, фаропенем, меропенем, имипенем; макролиды эритромицин, олеандомицин, мидекамицин, спирамицин, лейкомицин, джозамицин, рокситромицин, клэритромицин, диритромицин, флуритромицин, телитромицин, азитромицин, рокитамицин, тетрациклины - тетрациклин, окситетрациклин, хлортетрациклин; аминогликозиды - стрептомицин, канамицин, неомицин, гентамицин, тобрамицин, нетилмицин, сизомицин, амикацин, изепамицин; линкозамиды - антибиотик линкомицин и его полусинтетический аналог клиндамицин; хлорамфеникол - левомицетин, синтомицин; гликопептидные антибиотики ванкомицин, тейкопланин, телаванцин, блеомицин, рамопланин и декапланин; полимиксины - полимиксин В и полимиксин М; сульфаниламидные антибактериальные препараты - белый стрептоцид, красный стрептоцид; хинолоны - налидиксовая, оксолиновая, пипемидовая кислоты, норфлоксацин, офлоксацин, пефлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, спарфлоксацин, моксифлоксацин; нитрофураны - нифурател; противотуберкулёзные препараты изониазид, рифампицин, стрептомицин, канамицин, амикацин, этамбутол, пиразинамид, офлоксацин, ципрофлоксацин, этионамид, протионамид, капреомицин, циклосерин, ПАСК, тиоацетазон; противогрибковые антибиотики - нистатин, амфотерицин В.
Под «патогенными микроорганизмами», в данном случае, понимают любой микроорганизм, в том числе грибы, вирусы, бактерии, вызывающие заболевание у человека. В частности, к патогенным микроорганизмам относятся представители родов
Staphylococcus и Streptococcus, уреаплазмы, энтерококки, хламидии, вирус герпеса, грибок Candida, кишечная палочка, гонококк, трихомонада, цитомегаловирус, папилломавирус, микоплазма и тому подобное.
Под «резистентностью к антибиотикам» понимают феномен устойчивости штамма возбудителей инфекции к действию одного или нескольких антибактериальных препаратов, снижение чувствительности культуры микроорганизмов к действию антибактериального вещества. В основе резистентности к антибиотикам лежат эволюционно возникшие механизмы, обеспечивающие уникально высокий уровень приспособляемости микроорганизмов к новым антибактериальным средствам. Ключевыми механизмами развития резистентности к антибиотикам являются:
(1) гены антибиотикорезистентности, контролирующие процессы, обеспечивающие освобождение или ускользание микроорганизма от антибиотика;
(2) гены антибиотикотолерантности, в основном, принадлежащие системе токсинов-антитоксинов, функционирование которых обеспечивает временное снижение метаболического уровня бактериальной клетки и/или пролиферативной активности клеток, что делает бактерии нечувствительными к антипролиферативным или антиметаболическим эффектам антибиотиков. Клетки, которые фактически «переживают» период антибиотикотерапии, называют «персистерами». Их основное отличие от антибиотикорезистентных клеток заключается в последующей способности вновь восстанавливать собственную популяцию.
«Алкилрезорцин» представляет собой фенольный липид, состоящий из длинной алифатической цепи и резорцина. Алкилрезорцин синтезируется высшими растениями, в наибольших количествах зерновыми культурами, некоторыми видами водорослей, мхов, микроорганизмов. Алкилрезорцины состоят из бензольного кольца с двумя гидрокси-группами в положениях 1 и 3 и алкильным заместителем в положении 5. Алкилрезорцины отличаются длиной цепи углеводородного заместителя, который состоит из нечетного количества углеродных атомов со степенью ненасыщенное™ от 0 до 4. Длиноцепочечные алкилрезорцины (длина алкильного радикала С11- С29) известны своей антиоксидантной активностью.
Короткоцепочечные алкилрезорцины (С1—Сб) также проявляют антиоксидантную активность, при этом установлено, что последняя возрастает с увеличением длины алкильного радикала. В качестве неограничивающих примеров, такие дополнительные вещества включают алкилрезорцин представляет собой бутилрезорцин, гексилрезорцин или гептилрезорцин. Алкилрезорцины демонстрируют отсутствие мутагенного, канцерогенного и канцерогенного эффектов, поэтому могут применяться в фармакологии и медицине. В настоящем изобретении в качестве предпочтительных аналогов алкилрезорцина рассматривается бутилрезорцин, гексилрезорцин и гептилрезорцин.
Под «глюканом» понимают молекулу полисахарида из мономеров D-глюкозы, связанных гликозидными связями. Глюканы классифицируют на альфа-глюканы и бета-глюканы. Альфа-глюканы представляют собой полисахариды из D-глюкозы, связанные гликозидными связями по альфа типу:
Figure imgf000015_0001
Бета-глюканы представляют собой полисахариды (З-Б-глюкозы, образующие линейный скелет с 1-3 b-гликозидных связей. Молекулы бета-глюканов разнообразны по своей молекулярной массе, растворимости, вязкости, структуре боковых цепей и желатинирующим свйоствам, что вызывает разлинчые физиологичекие эффекты у животных.
Figure imgf000015_0002
В частности, «соединение группы бета-глюкана» по настоящему изобретению представляет собой смесь из бета-1,3-глюкана и бета- 1,6-глюкана. Бета-глюканы являются эффективными иммуномодулирующими средствами.
Одним из представителей бета-глюканов является хитозан, полисахаридный полимер, состоящий из случайно повторяющихся звеньев b-(1-4)-связанного Ы-ацетил-б-глюкозамина и б- глюкозамина. Хитозан используется в пищевой промышленности, сельском хозяйстве, медицине и фармацевтике, является нетоксичным и биоразлагаемым.
«Противомикробные средства» включают серу, галогены и галогенсодержащие соединения, в частности, хлорамин, пантоцид, йодоформ, йодинол, йод и его препараты, раствор перекиси водорода, калия перманганат, салициловую кислоту, борную кислоте, раствор формальдегида, гексаметилентетрамин, различные медицинские спирты, в частности, этиловый спирт, соли тяжелых металлов, в частности ртути окись желтая, протаргол, колларгол, цинка сульфат, пластырь свинцовый.
«Нейтральные вспомогательные вещества» с точки зрения фармацевтики представляют собой дополнительные вещества, необходимые для придания лекарственному средству соответствующей лекарственной формы, а также для придания лекарственному средству необходимых свойств.
К вспомогательным веществам относятся природные вещества, например, крахмал, который используют в таблетках в качестве наполнителя; в пилюлях в качестве наполнителя; в мазях в качестве загустителя; в суспензиях и эмульсиях в качестве стабилизатора; в качестве сорбента в энтеральных лекарственных формах. Также природные вспомогательные вещества включают альгинаты, которые применяют в качестве загустителей, стабилизаторов и связующих агентов при производстве эмульсий, мазей, в качестве разрыхлители в составе таблеток. Агар-агар обладает стабилизирующими свойствами, а также разрыхляет и придает скользящие свойства таблетируемым материалам. Его также можно вместе с глицерином использовать в качестве мазевой основы. Агар обладает также корригирующим эффектом, смягчая неприятный вкус лекарственных веществ. Другим примером природного вспомогательного вещества является пектин, который используют в качестве основы для жевательных таблеток, в качестве загустителя для мазей и сиропов. Целлюлозу, в частности, микрокристаллическую целлюлозу используют в качестве наполнителя. Коллаген широко использует для формирования пленок, содержащих активное вещество (например, для получения глазных пленок с антибиотиками). Коллаген также используют в составе гемостатических губок. Он обеспечивает оптимальную активность лекарственных веществ, что связано с глубоким проникновением и продолжительным контактом лекарственных веществ, включенных в коллагеновую основу, с тканями организма. Частным вариантом коллагена является желатин, который является активным эмульгатором и стабилизатором. Его также используют для изготовления мазей, суппозиториев и желатиновых капсул.
В качестве вспомогательных средств также можно использовать природные неорганические полимеры, такие как бентониты. Их применяют в качестве адсорбента, для повышения вязкости, обеспечения дисперсности, стабильности лекарственным составам. В качестве скользящего вспомогательного вещества в фармацевтике используется аэросил, который обеспечивает равномерное распределение лекарственных веществ. Тальк используют для улучшения гидрофобность, реологических свойств, стабильности хранения. Его используют в составе мазей в качестве антиперсперанта. Аналогичным образом используют полусинетические производные талька. В основе мазей и линиментов используют метилцеллюлозу, а также карбоксиметилцеллюлозу. Также в фармакологических составах используют оксипропилметилцеллюлозу, ацетилцеллюлозу и другие производные этого метилцеллюлозы.
В качестве синтетических вспомогательные вещества используют поливинол, который применяют в качестве эмульгатора, загустителя и стабилизатора суспензий; в качестве мазевых основ и глазных пленок. Также используют поливинилпирролидон в качестве стабилизатора эмульсий и суспензий, а также как пролонгирующий компонент. Биорастворимый полимер полиакриламида широко используют для создания лекарственных биорастворимых пленок, обеспечивающих максимальное время контакта активного вещества состава с поверхностью. Полиэтиленоксиды используют для изготовления мазей, эмульсий суспензий, суппозиториев и других лекарственных форм. Твин-80, представляющий собой моноэфир олеиновой кислоты, используют в качестве солюбилизатора, эмульгатора и стабилизатора.
В качестве формообразующих агентов (наполнителей или растворителей) можно использовать лактозу, сахар, крахмал; масло какао, парафин, воск; очищенную воду, спирт, полиэтилен гликоль; желатин, эфиры целлюлозы.
К стабилизирующим вспомогательным веществам относят антиоксиданты - бутилоксианизол, бутилокситолуол, токоферолы, каротиноиды, производные серы низкой валентности (натрия сульфит и метабисульфит, ронголит, метионин), аскорбиновая кислота, комплексы с ионами металлов, лимонная кислота, винная кислота, ЭДТА, трилон Б. К противомикробным стабилизующим веществам относятся антисептики и консерванты - хлорбутанолгидрат, фенол, хлороформ, мертиолат, нипагин, нипазол, сорбиновая кислота, этанол, бензиловый спирт, хлорбутанолгидрат, фенол, парабены (нипагин, нипазол), метиловый и пропиловый эфиры, хлорид бензалкония, диметилдодецилбензиламмония хлорид, эфирные масла.
В качестве консервантов используют молочную кислоту, борную кислоту, перекись водорода, сорбиновую кислоту, муравьиную, уроторопин, формальдегид и тому подобное.
В качестве эмульгаторов используют вещества, обладающие способностью придавать устойчивость эмульсиям. Эмульгирующими свойствами обладают мыла одновалентных металлов жирных или синтетических алкилсульфокислот (натрия лаурилсульфат, полиоксиэтиленовые эфиры спиртов (спены, твины), коллоиды большого молекулярного веса, белки (казеин, альбумин, желатин), углеводы (декстрин), сапонины, танины, соли желчных кислот. Для получения эмульсий типа «вода-в-масле» применяют гидрофобные эмульгаторы: жирорастворимые эмульгаторы (мыла поливалентных металлов), липоиды (фосфолипиды, лицетин, ланолин, смолы и воск). К отдельной группе эмульгаторов относятся твердые, высокодисперсные, минеральные порошки, такие как глины бентониты, окислы, карбонаты, сульфаты кальция, алюминия, кремния (аэросил).
В качестве солюбилизаторов используют глицирин, полиэтиленгликоль.
Кроме того, в качестве вспомогательных средств следует рассматривать плюроники (pluronics), также известные как полоксамеры. Плюроники представляют собой блок-сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена, обладают свойствами поверхностно-активных веществ и обеспечивают замедленное освобождения действующих веществ. В зависимости от общей молекулярной массы и соотношения размеров полиоксиэтиленовых и полиоксипропиленовых блоков, различные марки плюроников представляют из себя жидкости, пасты или воскоподобные твердые вещества.
Более подробная информация о вспомогательных веществах, а также об их применении представлена в литературе по фармации, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Hardcover).
Композиция по настоящему изобретению также может находиться в наборе, содержащем композицию по настоящему изобретению, как правило в эффективном количестве, и любой другой соответствующий компонент. В качестве другого соответствующего компонента может, например, выступать основа для создания фармацевтической формы для немедленного применения. Кроме того, набор содержит инструкция по применению композиции. Кроме того, набор может содержать одноразовые перчатки, одноразовый шприц и любые другие компоненты для удобства введения, применения композиции по настоящему изобретению. В качестве примера, настоящее изобретение относится к набору, содержащему заранее заполненный композицией по настоящему изобретению шприц и инструкцию для применения.
Композиция по настоящему изобретению может содержать алкилрезорцин в количестве от 1 до 200 мг/литр и 1-3 бета-глюкан в количестве от 50-500 мг/литр. В конкретном варианте осуществления, композиция по настоящему изобретению находится в смеси с ланолином (вазилином) в соотношении 1:10 и образует мазь. В еще одном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению представляет собой 2% раствор для примочек. В еще одном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению находятся в форме ушных капель. В еще одном варианте осуществления композиция представляет собой 5- 10%, 12% и 20% мазь.
В конкретных вариантах, количественное содержание алкилрезорцина составляет от 0,1-20% и бета-глюкана составляет от 5-50% в фармацевтической композиции или составе. В другом конкретном варианте, количественное содержание алкилрезорцина составляет от 10 мг до 2 г и бета-глюкана составляет от 500 мг до 5 г на 10 г фармацевтической композиции или состава. В предпочтительных вариантах, в качестве алкилрезорцина использовался гексилрезорцинол в количестве от 10 мг до 1 г, в более предпочтительных вариантах осуществления гексилрезорцинол находился в количестве 10, 20, 30, 40, 50, 60 мг на 1 литр готового препарата. Бета-глюкан составлял 100 мг, 200 мг, 300 мг, 400 мг, 500 мг на 1 литр готового препарата.
Кроме того, в конкретном варианте осуществления в качестве основы используется вода для инъекций и/или гидрогель, представляющий собой полимеры акриловой кислоты (ПАК), поперечно- сшитые полиалкильными эфирами сахаров или многотомных спиртов. Концентрация ПАК может варьировать от 0,5 до 30 г/л готового состава, от 1 до 30 г/л готового состава или от 1 до 20 г/литр готового состава.
Кроме этого, в качестве основы могут использоваться стабильные эмульсии «вода в масле» или «масло в воде», при соотношении объёмов компонентов масло/вода в конечном продукте от 1/9 до 9/1. Под термином «масло» понимаются триглицериды органических кислот, а также жидкие смеси высококипящих (высокомолекулярных) углеводородов (температура кипения 300— 600°С), главным образом алкилнафтеновых и алкилароматических, получаемые переработкой нефти, разрешённые к применению в медицинской и ветеринарной практике - например, вазелиновое масло.
Кроме этого, в состав препарата входит метиловый эфир параоксибензойной кислоты в количестве от 0,1 г/л готового препарата до 3 г/л готового препарата, в особенно предпочтительном варианте от 0,5 г/л до 2,5 г/л готового состава.
Также, в состав препарата входит диметилсульфоксид (ДМСО) в концентрации от 10 до 200 г, от 20 до 100 г или от 22 до 110 г на литр готового состава.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения состав по изобретению содержит Карбапол 980 NF («Lubrizol» USA) в количестве 1, 1,5, 2, 3, 4 грамма на 1 литр готового раствора, содержание метилового эфира параоксибензойной кислоты (или нипагина) составляет от 0,1 г до 1 г на литр, предпочтительно, 0,2, 0,3, 0,5 г/л готового состава, содержание ДМСО составляет от 30 до 60 г/л, предпочтительно 35, 45 и 55 г/л готового состава, воду для инъекции - quantum satis (предпочтительно до 1 л).
Примеры
Пример 1. Дозозависимый эффект -гексилрезорцина и 5- гептилрезорцина на клетки линии НТ-29, обработанные медиатором воспаления
Клетки опухолевой линии эпителия толстой кишки человека НТ- 29 культивировали в среде DMEM с добавлением 10 об.% фетальной бычьей сыворотки (кат. Номер SV30160.03, Hyclone, США), 1 мг/мл глутамина (кат. Номер. Ф032, ПанЭко, Россия), 50 Ед/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина (кат. Номер А065, ПанЭко, Россия) при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СОг. После достижении монослоя, клетки промывали раствором Версена и клетки снимали трипсином (0,25% в растворе Версена). Количество клеток подсчитывали с использованием камеры Горяева и рассевали клетки, исходя из расчета - 100000 клеток на см2.
В день проведения эксперимента, клетки НТ-29 достигшие монослоя снимали с подложки, как описано выше и рассевали в 96 - луночные планшеты (SPL Litesciences, Ю. Корея, кат. Номер 30096, ПанЭко, Россия), по 20000 клеток на лунку. Клетки инкубировали 4 часа, при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% С02. После окончания инкубации, питательную среду вместе с неадгезированными клетками удаляли и в лунки добавляли свежую питательную среду, содержащую 4-гексилрезорцин и 5-гептилрезорцин в конечной концентрации 0 М/л, 105 М/л, 106 М/л и 10-7 М/л. В контрольные лунки вносили эквивалентный объём питательной среды. Клетки культивировали 18 часов при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% С02 и после окончания инкубации препараты удаляли, клетки промывали свежей питательной средой и вносили Н2О2 в конечной концентрации 2x10_б М/л. В контрольные лунки вносили эквивалентный объем питательной среды.
Клетки НТ-29 инкубировали с Н2О2 в течение 16 часов, при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% СОг. Затем, лунки промывали питательной средой (трижды по 200 мкл) и вносили 100 мкл раствора кристаллического фиолетового ("РЕАХИМ", Россия) в 10% этаноле. Инкубировали 10 мин и не связавшийся краситель удаляли промыванием планшета водой, до отсутствия окрашивания промывных вод. Оптическую плотность в лунках измеряли на приборе «ClarioStar» (BMG Labtech, Германия) при длине волны 620 нм.
Результаты исследования представлены на фигуре 1.
Представленные результаты демонстрируют дозозависимый цитопротективный эффект 4-гексилрезорцина и 5-гептилрезорцина в отношении опухолевой линии клеток эпителия толстой кишки человека НТ-29, обработанных одним из токсических медиаторов воспаления, в частности, пероксидом водорода.
Пример 2. Гексилрезорцины дозозависимо увеличивают экспрессию генов ARG1, ID01 в клетках опухолевой линии кишечного эпителия НТ-29
Клетки НТ-29 культивировали в среде DMEM с добавлением 10 об.% фетальной бычьей сыворотки (кат. Номер SV30160.03, Hyclone, США), 1 мг/мл глутамина (кат. Номер. Ф032, ПанЭко, Россия), 50 Ед/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина (кат. Номер А065, ПанЭко, Россия) при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СОг. После достижении монослоя, клетки промывали раствором Версена и клетки снимали трипсином (0,25% в растворе Версена). Количество клеток подсчитывали с использованием камеры Горяева и рассевали клетки, исходя из расчета - 100 000 клеток на см2. В день проведения эксперимента, клетки НТ-29, достигшие монослоя снимали с подложки, как описано выше и рассевали в 24 -луночные планшеты (SPL Lifesciences, Ю. Корея, кат. Номер 30096, ПанЭко, Россия), по 100 000 клеток на лунку. Клетки инкубировали 4 часа, при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% СО2. После окончания инкубации, питательную среду вместе с неадгезированными клетками удаляли и в лунки добавляли свежую питательную среду, содержащую 4- гексилрезорцин и 5-гептилрезорцин в конечной концентрации 0 М/л, 105 М/л, 106 М/л и 10-7 М/л. В контрольные лунки вносили эквивалентный объём питательной среды. Клетки культивировали 18 часов при 31°С, в атмосфере, содержащей 5% СОг и после окончания инкубации препараты удаляли, а клетки лизировали в растворе «ExtractRNA» (ЗАО «Евроген», Россия). Лизаты клеток хранили при -80° С, до использования. Выделение мРНК, синтез кодирующей цепи
ДНК и проведение реакции RT-PCR проводили с использованием коммерческих наборов производства ЗАО «Евроген», Россия, согласно прилагаемых протоколов.
Уровень экспрессии генов оценивали по содержанию мРНК в клетках НТ-29 с использованием праймеров, представленных в таблице 1. Таблица 1. Исследованные гены и последовательности использованных праймеров.
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000024_0001
Результаты проведенных экспериментов представлены на Фиг.2.
Как видно из представленных данных, гексилрезорцины дозозависимо увеличивают экспрессию генов ARG1, ID01 в клетках опухолевой линии кишечного эпителия НТ-29. Продукты экспрессии этих генов - ферменты аргиназа 1 и индолеамин-пиррол-2,3- диоксигеназа обладают выраженной способностью супрессировать иммунологические механизмы поддержания воспалительного процесса. Кроме этого, аргиназа 1 и индолеамин-пиррол-2,3-диоксигеназа участвуют в уничтожении бактерий, усиливая неспецифическую резистентность барьерных тканей к бактериальной инвазии.
Анализ экспрессии генов NFIA и SPI1 подтверждают ранее установленный факт цитопротективного действия алкилоксибензолов на клетки опухолевой линии кишечного эпителия НТ-29. Показано, что продукты экспрессии этих генов участвуют в защите клеток неблагоприятного воздействия микроокружения.
Пример 3. Действие препарата на основе комбинации по настоящему изобретению для лечения мастита коров в производственных условиях.
Препарат представляет собой однородный гель от бесцветного до желтого цвета с опалесценцией. В препарате содержатся алкилрезорцин, 1-3/1-6 бета-глюкан и вспомогательные вещества (диметилсульфоксид, нипагин, карбопол, вода для инъекций). Препарат представлен в виде пластиковых шприцев по 10 г.
Состав препарата (г/л готового препарата):
Алкилрезорцин 0,45 г/л
Бета-глюкан - 0,55 г/л
Карбапол 980 NF («Lubrizol» USA)- 2,5 г/л,
Метиловый эфир параоксибензойной кислоты (нипагин) - 1 г/л;
ДМСО - 50 г/л;
Вода для инъекции - до 1 л.
Препарат применяли коровам для лечения клинической и субклинической форм мастита бактериальной этиологии в период лактации.
Методы исследования: При определении эффективности действия препарата учитывались характеристики, в том числе схема применения препарата, возможные ограничения, индивидуальная чувствительность к компонентам препарата, эффект после применения препарата, а также иные характеристики и действия препарата, которые могли быть выявлены в производственных условиях. Исследование проводилось на базе ряда молочных хозяйств в Республике Беларусь и РФ.
Схема проведения исследования:
- Период введения препарата;
- Мониторинг/контроль эффективности в периоды с 3-го по 7 день и с 8-го по 14 день после последнего введения препарата; контроль состояния животных после 14 дней с момента окончания лечения.
Из коров с субклинической (п=32) и клинической (п=24) формами мастита были сформированы две опытные группы (1 и 2 группы). Группы формировали постепенно по мере выявления больных животных. Количество пораженных долей вымени составляло от 1 до
4.
Figure imgf000025_0001
Диагноз мастита ставили на основании комплекса диагностических исследований, который включал: общее клиническое обследование животного с проведением пробного сдаивания и внешнего осмотра секрета молочной железы; лабораторное исследование секрета молочной железы с помощью быстрых диагностических тестов (СМТ, Kerba test, Беломастин М и др.) и пробы отстаивания; бактериологическое исследование секрета молочной железы, с определением чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам. При диагностике клинически выраженных маститов (катаральный и фибринозный) прежде всего учитывали характерные изменения со стороны молочной железы и ее секрета, а также данные анамнеза. Исследование молочной железы включало три диагностических приема: осмотр, пальпацию и доение.
Коровам 1 группы (субклинический мастит) вводили в пораженную долю вымени 3-4 кратно с интервалом 12 часов согласно инструкции. Коровам 2 группы (клинический мастит) вводили в пораженную долю вымени 4-8 кратно с интервалом 12 часов согласно инструкции. Во всех опытных группах кратность введения препарата регулировалась в сторону увеличения/уменьшения в зависимости от сроков и степени выздоровления животных, а также индивидуальной чувствительности животных на компоненты препарата.
Препарат вводили в пораженную четверть вымени коровы в разовой дозе 10 г (содержимое 1 шприца). Перед применением препарата секрет из больных четвертей вымени сдаивали и утилизировали, сосок тщательно обрабатывали очищающей салфеткой, затем снимали защитный колпачок, вводили наконечник шприца в канал соска и осторожно выдавливали содержимое. После этого наконечник извлекали, верхушку соска пережимают пальцами и слегка массировали сосок снизу вверх для лучшего распределения лекарственного препарата.
Показанием к прекращению введения препарата являлись значительное уплотнение ткани вымени, повышение температуры вымени и болезненности при пальпации, воспалительные изменения сосков вымени.
Контроль эффективности и мониторинг состояния животных, динамики инфекционно-воспалительного процесса на фоне применения препарата осуществлялись на основании комплекса исследований:
Микроскопия окрашенных по Романовскому-Гимзе клеточных осадков проб молока.
Определение микробной нагрузки и идентификация возбудителя в пробе молока, с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) и количественной ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ).
Пробы молока отбирали индивидуально из пораженной доли до введения препарата, ежедневно во время лечения, на 3-й, 7-й и 14- й день после последнего введения препарата. Для диагностики также использовали быстрые диагностические тесты (Kerba test и др.)· По результатам обследования и лабораторных исследований животных распределяли на следующие группы:
- Положительная динамика (Д+ ) - органолептическое улучшение секрета молочной железы, уменьшение количества соматических клеток в молоке, качественное улучшение при осмотре и пальпации вымени, при клинических формах мастита -исчезновение видимых характерных клинических изменений со стороны молочной железы и/или ее секрета;
Негативная динамика (Д- ) - органолептическое ухудшение секрета молочной железы, увеличение количества соматических клеток в молоке, видимое ухудшение при осмотре и пальпации вымени, проявление видимых характерных клинических признаков развития инфекционно-воспалительного процесса;
Выздоровление (Выздоровление) - секрет молочной железы соответствует норме, количество соматических клеток в молоке не превышает 200 тыс. клеток/мл, клинические изменения в пределах нормы.
Для контроля местного инфекционно-воспалительного процесса в молочной железе животных и оценки продолжительности терапевтического эффекта проводились лабораторные исследования молока на наличие с помощью микроскопии окрашенных по Романовскому-Гимзе клеточных осадков проб молока, а также определение микробной нагрузки и идентификация возбудителя в пробе молока, с использованием метода ПЦР и ПЦР-РВ. Анализ проб и осмотр осуществляли выборочно после 14 дней с момента завершения лечения препаратом. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Таблица 1 . Динамика и контроль терапевтической эффективности препарата в период с 3-7 дней с момента окончания терапии.
Figure imgf000028_0001
Таблица 2 . Динамика и контроль терапевтической эффективности препарата в период с 8-14 дней с момента окончания терапии.
Figure imgf000028_0002
Анализ данных Таблицы 1 и Таблицы 2 показывает, что лечебная эффективность препарата при субклиническом и клиническом мастите коров составила 84,2% и 78,7% соответственно. Специфика механизма действия препарата и особенности его состава обеспечивают устойчивую терапевтическую эффективность в период применения препарата и отсроченный эффект после прекращения введения препарата (при сохранении положительной динамики в сторону выздоровления), заключающийся в купировании воспалительных изменений в молочной железе и снижении риска рецидива заболевания. По результатам контроля животных по продолжительности терапевтического эффекта негативной динамики или наличия повторных заболеваний маститом на момент проведения осмотра и анализа проб молока не наблюдалось. На фоне введения препарата не выявлено никаких побочных действий, не наблюдалось каких-либо нежелательных эффектов, связанных с введением препарата. Все животные завершили исследование в полном соответствии с протоколом. Полученные результаты исследования применения препарата в производственных условиях дают основание для его использования в качестве эффективного средства для лечения субклинического и клинического мастита.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Композиция для повышения противовоспалительной активности клеток и поддержания их барьерной функции, содержащая алкилрезорцин и соединение группы бета-глюкана.
2. Композиция по п.1, где алкилрезорцин представляет собой бутилрезорцин, гексилрезорцин или гептилрезорцин.
3. Композиция по п.1 или п.2, где соединение группы бета- глюкана представляет собой хитозан.
4. Композиция по любому из пп.1-3, где хитозан находится в виде наночастиц размером менее 200 мкм.
5. Композиция по любому из пп.1-4, которая также содержит вспомогательное вещество.
6. Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики инфекционно-воспалительного заболевания у животных и человека, содержащая алкилрезорцин и соединение группы бета-глюкана.
7. Композиция по п.б, где алкилрезорцин представляет собой бутилрезорцин, гексилрезорцин или гептилрезорцин.
8. Композиция по п.б или п.7, где соединение группы бета- глюкана представляет собой хитозан.
9. Композиция по любому из пп.б-8, где хитозан находится в виде наночастиц размером менее 200 мкм.
10. Композиция по любому из пп.б-9, которая также содержит вспомогательное вещество.
11. Композиция по любому из пп.б-10, где инфекционно- воспалительное заболевание представляет собой инфекционно- воспалительное заболевание кожи.
12. Композиция по любому из пп.6-11, где инфекционно- воспалительное заболевание кожи выбрано из группы, включающей абсцесс кожи, фурункул, карбункул, флегмону, поверхностный панариций, простой лишай, рожистое воспаление, флебит, флегмону, атопический дерматит, экзему, ветряную оспу, герпес, чесотку, педикулез, акне.
13. Композиция по любому из пп.б-9, где инфекционно- воспалительное заболевание представляет собой инфекционно- воспалительное заболевание ротовой полости.
14. Композиция по любому из пп.б-9 и 13, где инфекционно-
ЗАМЕНЯЮЩИЕ ЛИСТЫ (ПРАВИЛО 26) воспалительное заболевание ротовой полости выбрано из стоматита, фарингита, тонзиллита, пародонтита, гингивита.
15. Композиция по любому из пп.6-9, где инфекционно- воспалительное заболевание представляет собой инфекционно- воспалительное заболевание урогенитального тракта.
16. Композиция по любому из пп.6-9 и 15, где инфекционно- воспалительное заболевание урогенитального тракта представляет собой баланит, уретрит, цистит, эндометрит, баланопостит, оофорит, сальпингит.
17. Композиция по любому из пп.6-9, где инфекционно- воспалительное заболевание представляет собой инфекционно- воспалительное заболевание ЖКТ.
18. Композиция по любому из пп.б-9 и 17, где инфекционно- воспалительное заболевание ЖКТ представляет собой острый и хронический гастрит, дуоденит, язву желудка и двенадцатиперстной кишки, эрозии желудка и двенадцатиперстной кишки, язвенную болезнь, воспалительные болезни кишечника, геморрой, дивертикулез ободочной кишки, дивертикулы пищеварительного тракта, инфекционное воспаление кишечника, ишемический колит, неспецифический язвенный колит, неспецифическое воспаление кишечника, острый колит, острый энтерит, хронический колит, хронический энтерит, энтерит, язвенный коли .
19. Композиция по любому из пп.6-9 для лечения и профилактики мастита.
20. Способ лечения инфекционно-воспалительного заболевания, включающий применение композиции по настоящему изобретению.
21. Способ по п.21, где композиция находится в составе для местного применения.
22. Комбинированная терапия для лечения инфекционно- воспалительного заболевания, включающая применение композиции по настоящему изобретению и любого антибактериального средства.
23. Комбинированная терапия по п.22, где антибактериальным средством является антибиотик.
24. Комбинированная терапия по п.23, где антибактериальным средством является противомикробное средство, отличное от антибиотика.
ЗАМЕНЯЮЩИЕ ЛИСТЫ (ПРАВИЛО 26)
25. Способ лечения инфекционно-воспалительного заболевания, включающий применение композиции по настоящему изобретению, где инфекционно-воспалительное заболевание вызвано патогеном с резистентностью и/или чувствительностью к действию антибиотика.
26. Состав для местного применения, содержащий композицию по любому из пп.1-5.
27. Состав по п.26 для лечения или профилактики первичного и вторичного инфицирования раны, ожога и любого другого поражения, которое может быть инфицировано.
28. Применение композиции по любому из пп.1-5 для лечения или профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний.
29. Применение по п.28, где инфекционно-воспалительным заболеванием является инфекционно-воспалительное заболевание кожи, ротовой полости, урогенитального тракта, ЖКТ.
30. Применение по п.29, где композиция находится в комбинации с антибиотиком.
31. Применение алкилрезорцина в качестве цитопротективного агента.
32. Набор, содержащий композицию по любому из пп.1-19 или состав по любому из пп.26-27 и инструкцию по применению.
33. Набор по п.32, где композиция или состав находятся в шприце.
ЗАМЕНЯЮЩИЕ ЛИСТЫ (ПРАВИЛО 26)
PCT/RU2020/050320 2019-10-14 2020-11-12 Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний WO2021076020A2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019132497A RU2793626C2 (ru) 2019-10-14 Алкилрезорцины в качестве цитопротективного агента
RU2019132497 2019-10-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2021076020A2 true WO2021076020A2 (ru) 2021-04-22
WO2021076020A3 WO2021076020A3 (ru) 2021-07-15

Family

ID=75495597

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2020/050320 WO2021076020A2 (ru) 2019-10-14 2020-11-12 Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2021076020A2 (ru)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6525071B2 (en) * 2001-03-02 2003-02-25 Mcj, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of bovine mastitis
WO2007149868A2 (en) * 2006-06-20 2007-12-27 The Regents Of The University Of California Controlled release encapsulated anti-bacterial and anti-inflammatory nanoparticles
RU2665006C1 (ru) * 2017-02-28 2018-08-24 Общество с ограниченной ответственностью "Супербаг Солюшенс" Композиция антимикробных препаратов для лечения инфекционных заболеваний людей и животных и способ её применения

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021076020A3 (ru) 2021-07-15
RU2019132497A3 (ru) 2021-04-14
RU2019132497A (ru) 2021-04-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108135967B (zh) 用于药物递送的具有渗透增强剂的组合物
CN106236708B (zh) 含游离脂肪酸的抗微生物组合物
JP6625677B2 (ja) カルシウムフラックスアゴニスト及びその方法
SG191146A1 (en) A composition comprising an antibiotic and a dispersant or an anti -adhesive agent
WO2013159029A1 (en) Compositions for topical treatment of microbial infections
JP2019513769A (ja) アトピー性皮膚炎を処置するためのグラム陰性種の使用
JP2021532099A (ja) アトピー性皮膚炎を処置するためのグラム陰性種の使用
WO2006079288A1 (fr) Emploi de lysozyme humaine dans la préparation de produits cosmétiques contre l&#39;acné
AU2014311968B2 (en) Anti-inflammatory compositions, methods and uses thereof
RU2793626C2 (ru) Алкилрезорцины в качестве цитопротективного агента
WO2021076020A2 (ru) Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний
CN108135919B (zh) 用于维持乳杆菌属优势的组合物
US11612584B2 (en) Gluconic acid derivatives for use in the treatment and/or prevention of microbial infections
Tripathi et al. Formulation and In-vitro evaluation of pH-sensitive oil entrapped polymeric blend amoxicillin beads for the eradication of Helicobacter pylori
US20180289656A1 (en) Compositions and methods to treat urinary tract infections
RU2323735C1 (ru) Средство для лечения и профилактики заболеваний человека, передающихся половым путем, и способ его получения
KR20200024921A (ko) 토타롤의 용도 및 토타롤을 함유하는 약제학적 조성물
WO2019079150A1 (en) COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING ATOPIC DERMATITIS
KR20200089649A (ko) 인공적인 세균 집락형성을 사용하는 스타필로코커스 아우레우스의 예방을 위한 약학 조성물 및 방법
KR20170006018A (ko) 후코이단을 유효성분으로 함유하는 mrsa의 항균을 위한 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20877794

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20877794

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2