WO2021000933A1 - 作为糜酶抑制剂的嘧啶酮类化合物及其应用 - Google Patents

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WO2021000933A1 PCT/CN2020/100127 CN2020100127W WO2021000933A1 WO 2021000933 A1 WO2021000933 A1 WO 2021000933A1 CN 2020100127 W CN2020100127 W CN 2020100127W WO 2021000933 A1 WO2021000933 A1 WO 2021000933A1
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丁照中
蔡亚仙
陈曙辉
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Abstract

一类具有嘧啶酮结构的作为糜酶（chymase）抑制剂药物的化合物，具体公开了式（I）所示化合物、其药学上可接受的盐及其异构体，以及包含它们的药物组合物。

Description

作为糜酶抑制剂的嘧啶酮类化合物及其应用
本申请主张如下优先权：
CN201910597205.5，申请日2019年07月03日；
CN202010402394.9，申请日2020年05月13日。
技术领域
本发明涉及新的作为糜酶(chymase)抑制剂药物的嘧啶酮类化合物，具体涉及式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐及其异构体，以及包含它们的药物组合物。
背景技术
糜酶(chymase)是一种糖蛋白，属于丝氨酸蛋白酶家族，主要存在于肥大细胞、内皮细胞和间质细胞中。当受到炎症等刺激时肥大细胞即脱颗粒，糜酶即被释放到细胞外并被活化。糜酶在体内的作用，主要为转化Ang I(血管紧张素I)到AngII(血管紧张素II)，诱导活化TGF-β和活化基质金属蛋白酶9(MMP-9)。TGF-β能促进胶原的产生，促进组织纤维化；MMP-9与细胞外基质的降解和重塑有关。AngII、TGF-β和MMP-9都能刺激心肌细胞的重构、坏死和引起肾组织的纤维化，导致心衰和肾病的发生。糜酶抑制剂则能减缓疾病的进展。
大量动物实验表明，糜酶抑制剂在心衰动物中能够减少心肌纤维化面积且提高心肌功能，在糖肾动物模型中能够显著减少肾脏尿蛋白和纤粘蛋白的产生，改善肾纤维化程度。
如本文所使用的，chymase意指人chymase。
基于抑制chymase的作用来治疗心力衰竭、肾病等疾病的研究已进行了多年，目前尚无该靶点药物上市，Bayer公司的糜酶抑制剂BAY-1142524正在进行临床II期的研究，用于治疗心力衰竭和糖尿病引起的肾病，其在专利WO2013167495A1中公开，结构如下：
Figure PCTCN2020100127-appb-000001
已报道的BAY-1142524的数据显示其体外活性较好，但PK性质有待进一步的改善。本发明设计得到了一类新型的具有更长的半衰期、更高的小鼠血浆暴露量的化合物。
发明内容
一方面，本发明提供式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，
Figure PCTCN2020100127-appb-000002
其中，m和n各自独立地为0或1；
R 1为-CN、-C(＝O)OR a或四唑基；
R a为H或C 1-3烷基；
R 2为H、F、Cl或C 1-3烷基；
R 3为-NH-C(＝O)R b或5-6元杂环烷基，其中所述5-6元杂环烷基任选被1、2或3个独立选自氧代(＝O)、F、Cl、Br和C 1-3烷基的取代基所取代；
R b为C 1-3烷基或C 1-3烷氧基；
R 4为
Figure PCTCN2020100127-appb-000003
T 1为-CH 2-或-O-CH 2-；
R 5为H、F、Cl、Br或C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代；
R 6和R 7各自独立地为H、F、Cl、Br或C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代；
或R 6和R 7连接在一起使结构单元
Figure PCTCN2020100127-appb-000004
为
Figure PCTCN2020100127-appb-000005
R e和R f各自独立地为H、F、Cl、Br或C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代；
所述5-6元杂环烷基包含1、2、3或4个独立选自N、-O-和-S-的杂原子。
在本发明的一些方案中，上述化合物具有式(I-1)或(I-2)所示结构：
Figure PCTCN2020100127-appb-000006
其中，R 1、R 2、R 3和R 4如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 4为
Figure PCTCN2020100127-appb-000007
R 5、R 6、R 7、R e和R f和其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 4为
Figure PCTCN2020100127-appb-000008
Figure PCTCN2020100127-appb-000009
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物具有式(I-3)、(I-4)、(I-5)或(I-6)所示结构：
Figure PCTCN2020100127-appb-000010
其中，R 1、R 2、R 3、R 5、R 6、R 7、R e和R f如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物具有式(I-7)、(I-8)、(I-9)或(I-10)所示结构：
Figure PCTCN2020100127-appb-000011
其中，带“*”的碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在；R 1、R 2、R 3、R 5、R 6、R 7、R e和R f如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述化合物具有式(I-11)或(I-12)所示结构：
Figure PCTCN2020100127-appb-000012
其中，R 1、R 2、R 3和R 5如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 5为H、F、Cl、Br或-CH 3，其中所述-CH 3任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 5为H、F、-CH 3或-CF 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 5为-CF 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R e和R f各自独立地为H或F，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R e和R f各自独立地为F，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 6和R 7各自独立地为H、F、Cl、Br或-CH 3，其中所述-CH 3任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 6和R 7各自独立地为H、F、Cl、-CH 3或-CF 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 6和R 7各自独立地为Cl、-CH 3或-CF 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 6和R 7连接在一起使结构单元
Figure PCTCN2020100127-appb-000013
为
Figure PCTCN2020100127-appb-000014
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R a为H、-CH 3或-CH 2CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R a为H或-CH 2CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1为-CN、
Figure PCTCN2020100127-appb-000015
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1为-CN、
Figure PCTCN2020100127-appb-000016
其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 2为H或-CH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R b为-CH 3或-OCH 3，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 3为
Figure PCTCN2020100127-appb-000017
Figure PCTCN2020100127-appb-000018
其中所述
Figure PCTCN2020100127-appb-000019
任选被1、2或3个独立选自氧代(＝O)、F、Cl、Br、-CH 3或-CH 2CH 3的取代基所取代，其他变量如本发明所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 3为
Figure PCTCN2020100127-appb-000020
Figure PCTCN2020100127-appb-000021
其他变量如本发明所定义。
本发明还有一些方案是由上述各变量任意组合而来。
在本发明的一些方案中，上述化合物为下式化合物、其药学上可接受的盐或其异构体：
Figure PCTCN2020100127-appb-000022
在本发明的一些方案中，上述化合物为下式化合物、其药学上可接受的盐或其异构体：
Figure PCTCN2020100127-appb-000023
另一方面，本发明还提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
本发明还提供了上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐以及上述药物组合物在制备糜酶(chymase)抑制剂药物中的应用。
技术效果
本发明化合物能够抑制组织内糜酶的功能，从而减少AngII、TGF-β和MMP-9的产生和活化并最终降低心肌组织和肾组织的纤维化水平。在体外实验中，本发明化合物在抑制人chymase方面表现出良好的活性。此外，在小鼠的体内实验中，本发明化合物表现出优异的PK性质。
定义
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
除非另有说明，“(D)”或者“(+)”表示右旋，“(L)”或者“(-)”表示左旋，“(DL)”或者“(±)”表示外消旋。
除非另有说明，用楔形实线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000024
和楔形虚线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000025
表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000026
和直形虚线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000027
表示立体中心的相对构型，用波浪线
Figure PCTCN2020100127-appb-000028
表示楔形实线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000029
或楔形虚线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000030
或用波浪线
Figure PCTCN2020100127-appb-000031
表示直形实线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000032
和直形虚线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000033
本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valence tautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2,4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变。
除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。
除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚( 3H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体， 只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR) 0-，表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，
Figure PCTCN2020100127-appb-000034
中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2020100127-appb-000035
也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成
Figure PCTCN2020100127-appb-000036
所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000037
直形虚线键
Figure PCTCN2020100127-appb-000038
或波浪线
Figure PCTCN2020100127-appb-000039
表示。例如-OCH 3中的直形实线键表示通过该基团中的氧原子与其他基团相连；
Figure PCTCN2020100127-appb-000040
中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他基团相连；
Figure PCTCN2020100127-appb-000041
中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与其他基团相连。
除非另有规定，环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5-7元环”是指环绕排列5-7个原子的“环”。
除非另有规定，“5-6元环”表示由5至6个环原子组成的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所述的环包括单环，也包括螺环、并环和桥环等双环体系。除非另有规定，该环任选地包含1、2或3个独立选自O、S和N的杂原子。所述5-6元环包括5元、6元环等。“5-6元环”包括例如苯基、吡啶基和哌啶基等；另一方面，术语“5-6元杂环烷基”包括哌啶基等，但不包括苯基。术语 “环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
除非另有规定，术语“C 1-3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C 1-3烷基包括C 1-2和C 2-3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C 1- 3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n-丙基和异丙基)等。
除非另有规定，术语“C 1-3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C 1-3烷氧基包括C 1-2、C 2-3、C 3和C 2烷氧基等。C 1-3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
除非另有规定，术语“5-6元杂环烷基”本身或者与其他术语联合分别表示由5至6个环原子组成的饱和环状基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子，其中氮原子任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O) p，p是1或2)。其包括单环和双环体系，其中双环体系包括螺环、并环和桥环。此外，就该“5-6元杂环烷基”而言，杂原子可以占据杂环烷基与分子其余部分的连接位置。所述5-6元杂环烷基包括5元和6元杂环烷基。5-6元杂环烷基的实例包括但不限于吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢噻吩基(包括四氢噻吩-2-基和四氢噻吩-3-基等)、四氢呋喃基(包括四氢呋喃-2-基等)、四氢吡喃基、哌啶基(包括1-哌啶基、2-哌啶基和3-哌啶基等)、哌嗪基(包括1-哌嗪基和2-哌嗪基等)、吗啉基(包括3-吗啉基和4-吗啉基等)、二噁烷基、二噻烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、1,2-噁嗪基、1,2-噻嗪基、六氢哒嗪基、高哌嗪基或高哌啶基等。
除非另有规定，C n-n+m或C n-C n+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C 1-12包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6、C 7、C 8、C 9、C 10、C 11、和C 12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C 1-12包括C 1- 3、C 1-6、C 1-9、C 3-6、C 3-9、C 3-12、C 6-9、C 6-12、和C 9-12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3-12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3-12元环包括3-6元环、3-9元环、5-6元环、5-7元环、6-7元环、6-8元环、和6-10元环等。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方 式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：
Figure PCTCN2020100127-appb-000042
扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
本发明采用下述缩略词：ADDP代表偶氮二甲酰二哌啶；aq代表水；eq代表等量；mol代表摩尔；mmol代表毫摩尔；kg代表千克；g代表克；mg代表毫克；L代表升；ml代表毫升；mm代表毫米；μm代表微米；h代表小时；min代表分钟；s代表秒；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；DCE代表1,2-二氯乙烷；t-BuOK代表叔丁醇钾；KOAc代表醋酸钾；NaH代表钠氢；KHMDS代表双(三甲基硅烷基)氨基钾；DIEA代表N,N-二异丙基乙胺；NH 3·H 2O代表氨水；THF代表四氢呋喃；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N,N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；DMAC代表二甲基乙酰胺；EtOAc或EA代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；FA代表甲酸；ACN代表乙腈；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；DMAP代表4-二甲氨基吡啶；r.t.代表室温；Boc 2O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl 2代表氯化亚砜；CS 2代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；LDA代表二异丙基胺基锂；T 3P代表1-丙基磷酸酐；Pd 2(dba) 3代表三(二亚苄基丙酮)二钯；Pd(dppf)Cl 2·CH 2Cl 2代表[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物；Pd(PPh 3) 4代表四三苯基膦钯；TEA代表三乙胺；TLC代表薄层色谱分离；HPLC代表高效液相分离；SFC表示超临界流体色谱分离。
本发明化合物依据本领域常规命名原则或者使用
Figure PCTCN2020100127-appb-000043
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
附图说明
图1为化合物15和BAY-1142524在仓鼠肾病模型肾纤维化的评分。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
实施例1
Figure PCTCN2020100127-appb-000044
Figure PCTCN2020100127-appb-000045
步骤A：在75℃下，溶有化合物1-a(20g,224.48mmol,1eq)和丙二酸单乙酯(29.66g,224.48mmol,1eq)的Ac 2O(400mL)混合液搅拌4h。混合液冷却至室温，减压浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(100-200目，PE/EtOAc＝20/1-3/1)纯化得到1-b。
步骤B：在140℃下，溶有化合物1-b(21g,103.35mmol,1eq)和原甲酸三乙酯(15.32g,103.35mmol,17.19mL,1eq)的Ac 2O(25mL)溶液搅拌2h。混合液冷却至室温，减压浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(100-200目，PE/EtOAc＝10/1-1/1)纯化得到1-c。
Figure PCTCN2020100127-appb-000046
步骤A：在0℃下，氯磺酸(210.00g,1.80mol,120.00mL,13.11eq)逐滴加入至化合物1-d(3-[2-(三氟甲基)苯基]丙酸)(30g,137.51mmol,1eq)中，滴加完毕后混合液升温至45℃并搅拌1h。混合液冷却至室温，缓慢倒入冰水中，EtOAc(500mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品经硅胶层析柱(100-200目,PE/EtOAc＝20/1-5/1)纯化得到1-e。
步骤B：在0℃下，向溶有化合物1-e(8g,39.97mmol,1eq)的MeOH(40mL)和THF(40mL)混合溶液中加入NaBH 4(2.27g,59.95mmol,1.5eq)，搅拌2h。混合液用H 2O(50mL)稀释，EtOAc(50mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品通过硅胶柱层析(100-200目,PE/EtOA c＝20/1-2/1)纯化得到1-f。
Figure PCTCN2020100127-appb-000047
步骤A：在15℃下，溶有化合物1-g(50g,283.56mmol,1eq)的CH 3CN(500mL)溶液中加入吡啶(29.16g,368.63mmol,29.75mL,1.3eq)和1-1(94.43g,368.63mmol,1.3eq)，混合液搅拌6h。混合液浓缩得到粗品，粗品用EtOAc(400mL)溶解后依次用饱和NaHCO 3水溶液(300mL×3)和饱和食盐水(500mL×3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品通过硅胶层析柱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化得到1-h。
步骤B：在15℃下，溶有1-2(46.09g,215.05mmol,1eq)的DMF(600mL)中加入DIEA(27.79g,215.05mmol,37.46mL,1eq)和化合物1-h(68.26g,215.05mmol,1eq)。混合液搅拌13h。混合液倒入H 2O(800mL)中，悬浊液过滤，滤饼用H 2O(20mL×5)洗涤，真空干燥得到1-i。
步骤C：在15℃下，向溶有化合物1-i(80.72g,193.75mmol,1eq)的THF(400mL)溶液中加入TBAF(1M,387.49mL,2eq)，室温搅拌3h。混合液用H 2O(500mL)淬灭，EtOAc(300mL)稀释，混合液再用EA(200mL×3)萃取，合并的有机相并用饱和食盐水(800mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品，粗品通过PE/EtOAc＝4/1(160mL)打浆纯化得到1-j。
步骤D：在0℃下，向溶有化合物1-j(43.1g,142.54mmol,1eq)的THF(800mL)中缓慢加入t-BuOK(39.99g,356.36mmol,2.5eq)和TosCl(32.61g,171.05mmol,1.2eq)，混合液升温至15℃，搅拌15h。混合液用H 2O(1000mL)淬灭，悬浊液过滤，滤饼用H 2O(50mL×5)洗涤，真空干燥得到1-k。
步骤E：在15℃下，向溶有化合物1-k(32.15g,113.06mmol,1eq)的DCM(330mL)中加入TFA(169.40g,1.49mol,110mL,13.14eq)，混合液搅拌2h。混合液减压浓缩得到1-m。
步骤F：在15℃下，向溶有化合物1-m(28g,93.88mmol,1eq,TFA盐)的EtOH(280mL)中加入t-BuOK(10.53g,93.88mmol,1eq)和1-c(24.34g,93.88mmol,1eq)。混合液升温至100℃下搅拌2h。混合液冷却至60℃，加入t-BuOK(21.07g,187.76mmol,2eq)，混合液再升温至60℃下搅拌1h。混合液冷却至室温，倒入1M HCl水溶液(400mL)中，室温搅拌20min，悬浊液过滤，滤饼用H 2O(10mL×5)洗涤，真空干燥得到1-n。
步骤G：在15℃下，溶有化合物1-n(6g,17.08mmol,1eq)和1-f(4.7g,20.69mmol,1.21eq)的DMF(60mL)和THF(30mL)中加入PPh 3(9g,34.31mmol,2.01eq)和DIAD(6.97g,34.46mmol,6.7mL,2.02eq)，混合液搅拌12h。混合液用180mL H 2O稀释，EtOAc(200mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(100mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品依次通过硅胶层析柱PE/EtOAc＝4/1)和制备HPLC(柱:Phenomenex luna C18(250mm×70mm×10μm)；流动相:[水(0.225％FA)-乙腈]；乙腈％:45％-75％,18min)纯化得到化合物1。再用SFC(柱:REGIS(s,s)WHELK-O1(250mm×50mm,10μm)；流动相:[中性-甲醇]；甲醇％:83.33％-83.33％,5.37min；220min)纯化得到化合物1-II(保留时间：3.718min)。
1-II: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝8.24-8.16(m,1H),7.51-7.42(m,1H),7.25-7.16(m,2H),6.73-6.52(m,1H),4.54-4.42(m,1H),4.40-4.27(m,4H),3.89-3.73(m,1H),3.57-3.43(m,3H),3.25-3.04(m,1H),2.64-2.48(m,1H),2.45-2.29(m,1H),2.14-1.92(m,4H),1.81-1.61(m,4H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H)；MS(ESI)m/z:536.2(M+H) +。
实施例2
Figure PCTCN2020100127-appb-000048
在15℃下，向溶有化合物1(6.5g,12.14mmol,1eq)的AcOH(60mL)中加入HCl(2M,27.08mL,4.46eq)水溶液，混合液升温至120℃，搅拌4h。混合液冷却至室温，倒入H 2O(200mL)中，EtOAc(100mL×3)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(300mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物2的粗品，粗品再通过制备HPLC(柱:Phenomenex luna c18 250mm×100mm×10μm；流动相:[水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:35％-65％,20min)和SFC(柱:DAICEL CHIRALPAK AD(250mm×30mm,10μm)；流动相:[中性-甲醇]；甲醇％:35％-35％,4.6min；170min)纯化得到化合物2-I(保留时间：2.780min)和化合物2-II(保留时间：3.718min)。
2-I： 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ＝8.52(br s,1H),7.52(d,J＝7.9Hz,1H),7.41(br d,J＝7.8Hz,1H),7.34(br d,J＝7.7Hz,1H),6.46(br s,1H),4.34(br s,1H),4.22(t,J＝7.9Hz,2H),3.65(br s,1H),3.46(br t,J＝6.8Hz,2H),3.27(br s,2H),3.10(br d,J＝6.2Hz,1H),2.37(br d,J＝16.5Hz,1H),1.99-1.54(m,9H)；MS(ESI)m/z:508.1(M+H) +；
2-II： 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝12.98-11.92(m,1H),8.57-8.38(m,1H),7.68-7.48(m,1H),7.37-7.29(m,1H),7.26-7.21(m,1H),6.78-6.54(m,1H),4.58-4.43(m,1H),4.41-4.29(m,2H),3.87-3.73(m,1H),3.64-3.46(m,3H),3.30-3.13(m,1H),2.71-2.58(m,1H),2.52-2.34(m,1H),2.16-1.94(m,4H),1.87-1.63(m,4H)；MS(ESI)m/z:508.1(M+H) +。
实施例3
Figure PCTCN2020100127-appb-000049
Figure PCTCN2020100127-appb-000050
步骤A：在15℃下，向化合物3-a(8g,37.33mmol,1eq)的DMF(80.00mL)溶液中加入DIEA(4.82g,37.33mmol,6.50mL,1eq)和1-h(11.85g,37.33mmol,1eq)，反应液搅拌12小时。反应液倒入600mL水中，然后用400mL EtOAc稀释，所得混合液用EtOAc(400mL×2)萃取，合并有机相并用400mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩得到粗品化合物3-b。
步骤B：在15℃下，向化合物3-b(13.3g,31.92mmol,1eq)的THF(60.00mL)溶液中加入四丁基氟化铵的THF溶液(1M,63.85mL,2eq)，反应液在15℃下搅拌2小时。反应液用50mL水稀释并用EtOAc(50mL×2)萃取，合并有机相并用50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液浓缩得粗品化合物3-c。
步骤C：在0℃下，向化合物3-c(10.5g,34.73mmol,1eq)的THF(200.00mL)溶液中加入t-BuOK(9.74g,86.82mmol,2.5eq)和TosCl(7.94g,41.67mmol,1.2eq)，反应液升温至15℃并搅拌12小时。反应液倒入400.00mL水中，EA(150mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(300mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩后得粗品。粗产物通过硅胶色谱柱(100-200目,PE/EtOAc＝5/1-0/1)纯化分离得到化合物3-d。
步骤D：在15℃下，向化合物3-d(3.5g,12.31mmol,1eq)的DCM(35.00mL)溶液中加入TFA(18.48g,162.07mmol,12mL,13.17eq)，搅拌0.5小时。反应液减压浓缩得到粗品3-e。
步骤E：在15℃下，向化合物3-e(2.27g,12.32mmol,1eq)的EtOH(90mL)溶液中先加入t-BuOK(1.38g,12.32mmol,1eq)，再加入1-c(3.19g,12.32mmol,1eq)，升温至100℃搅拌1小时。混合液冷却至60℃，再加入t-BuOK(1.38g,12.32mmol,1eq)，混合液升温至100℃再搅拌2小时。反应液冷却至15℃，倒入40mL 1N HCl，15℃下搅拌0.5h。混合液先用EA(30.00mL)萃取，再用DCM(30.00mL)萃取，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩得到化合物3-f。
步骤F：在N 2保护20℃下，向化合物3-f(1g,2.85mmol,1eq)的甲苯(30mL)溶液中加入1-f(748.03mg,3.70mmol,1.3eq)和三苯基膦(1.73g,8.54mmol,2.11mL,3eq)，混合液在20℃下搅拌0.5h。再向反应液中加入ADDP(2.15g,8.54mmol,3eq)，混合液在20℃下搅拌0.5h后升温至120℃下继续搅拌12h。混合液冷却至室温，加30mL H 2O稀释，30mL EtOAc萃取，有机相再依次用HCl(2M,30mL)，30mL饱 和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩得到粗品。粗产物通过硅胶色谱柱(100-200目,PE/EtOAc＝3/1-1/1)和制备HPLC(柱子:Phenomenex Synergi C18 150×30mm×4μm；流动相:[水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:55％-75％,12min)纯化分离得到化合物3-g。
步骤G：在25℃下，向化合物3-g(480mg,896.34μmol,1eq)的AcOH(2.00mL)中加入HCl(2M,1mL,2.23eq)，混合液升温至120℃下搅拌2h。混合液冷却至室温并用10mL H 2O稀释，过滤，滤饼为化合物3的粗品。粗品再用制备HPLC(柱子:Phenomenex Synergi C18 150mm×30mm×4μm；流动相:[水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:54％-74％,12min)纯化得到化合物3。化合物3通过SFC(柱子:DAICEL CHIRALPAK IC(250mm×30mm,10μm)；流动相:[0.1％NH 3·H 2O-甲醇]；0.1％NH 3·H 2O,甲醇％:60％-60％,4min；120min)纯化得到化合物3-I(保留时间：2.423min)和化合物3-II(保留时间:2.761min)。
3-I: 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ＝8.45(s,1H),7.53(d,J＝7.5Hz,1H),7.46-7.39(m,1H),7.37-7.30(m,1H),6.48(br s,1H),4.34(br s,1H),4.25(br t,J＝7.8Hz,2H),3.71(br t,J＝7.8Hz,2H),3.61(br s,1H),3.25-3.21(m,1H),3.17-3.03(m,1H),2.48-2.44(m,1H),2.42-2.29(m,1H),2.09(br s,2H),1.96-1.59(m,6H)；MS(ESI)m/z:508.1(M+H) +。
3-II: 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ＝12.70(br s,1H),8.47(s,1H),7.54(br d,J＝7.6Hz,1H),7.43(br d,J＝7.5Hz,1H),7.38-7.29(m,1H),6.48(br s,1H),4.34(br s,1H),4.25(br t,J＝7.8Hz,2H),3.71(br t,J＝7.6Hz,2H),3.62(br s,1H),3.29-3.25(m,1H),3.10(td,J＝7.9,15.8Hz,1H),2.47-2.44(m,1H),2.43-2.29(m,2H),2.20-2.05(m,2H),1.97-1.60(m,6H)；MS(ESI)m/z:508.1(M+H) +。
实施例4
Figure PCTCN2020100127-appb-000051
步骤A：在15℃下，向4-a(3g,12.08mmol,1eq)和4-1(2.2g,14.01mmol,1.16eq)的DCM(50mL)溶液中加入TEA(2.45g,24.25mmol,3.37mL,2.01eq)，混合液搅拌12h后用50mL H 2O稀释，DCM(50mL×2)萃取，合并有机相并用40mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩，残留物用100mL混 合溶剂(PE:EtOAc＝2:1)搅拌，过滤后得到4-b。
步骤B：在15℃下，往4-b(2.8g,7.59mmol,1eq)的MeCN(60mL)溶液中加入Cs 2CO 3(10g,30.69mmol,4.04eq)，混合液升温至85℃下搅拌12h。混合液冷却至室温，50mL H 2O稀释，EtOAc(100mL×2)萃取，合并有机相并用50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩，得到的粗品用100mL混合溶剂(PE:EA＝2:1)搅拌过滤后得到化合物4-c。
步骤C：在15℃氮气保护下，向4-c(1.2g,3.61mmol,1eq)的MeOH(25.00mL)溶液中加入Pd/C(120mg,3.61mmol,10％纯度)，H 2置换三次，混合液在H 2(15psi)下搅拌12h。混合液过滤，滤液减压浓缩得到化合物4-d。
步骤D：在15℃下，向4-d(550mg,2.77mmol,1eq)的EtOH(15mL)溶液中加入1-c(0.7g,2.70mmol,1eq)，混合液升温至100℃下搅拌1h。混合液冷却至60℃，加入t-BuOK(0.32g,2.85mmol,1.03eq)，混合液再升温至100℃下搅拌1h。混合液冷却至室温，4M的HCl/EtOAc调节pH至3～4。悬浊液浓缩，残留物用20mL EtOAc重结晶得到4-e。
步骤E：在15℃下，向4-e(700mg,1.92mmol,1eq)的THF(5mL)和DMF(10mL)混合溶剂中，加入1-f(581mg,2.87mmol,1.5eq)，DIAD(988.00mg,4.89mmol,0.95mL,2.55eq)，混合液搅拌15min，再加入PPh 3(1.26g,4.79mmol,2.5eq)，混合液搅拌75min。混合液用35mL H 2O稀释，EtOAc(50mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(20.00mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品用制备HPLC(柱子:Kromasil C18(250×50mm×10μm)；流动相:[水(0.225％FA)-乙腈]；乙腈％:30％-60％,25min)纯化得到化合物4-f。
步骤F：在15℃下，向4-f(700mg,1.27mmol,1eq)的AcOH(10mL)溶液中加入HCl(2M,5mL,7.85eq)，混合液升温至120℃下搅拌1h。混合液冷却至室温，30mL的H 2O稀释，所得悬浊液过滤，滤饼为粗品。粗品用制备HPLC(柱子:Phenomenex luna C18 150mm×40mm×15μm；流动相:水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:37％-67％,10min)纯化得到化合物4。
步骤G：化合物4通过SFC(柱子:DAICEL CHIRALPAK AD(250mm×30mm,10μm)；流动相:[0.1％NH 3·H 2O-异丙醇]；0.1％NH 3·H 2O,异丙醇％:40％-40％,4.8min,220min)纯化得到化合物4-I(保留时间：1.929min)和化合物4-II(保留时间：2.097min)。
4-I: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝12.83-11.88(m,1H),8.46(s,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.33-7.27(m,1H),7.25-7.19(m,1H),6.62(br s,1H),4.60-4.39(m,2H),4.18(s,2H),3.94-3.81(m,2H),3.63-3.47(m,1H),3.25(br t,J＝4.8Hz,2H),3.22-3.11(m,1H),2.62(dtd,J＝5.0,9.5,14.0Hz,1H),2.47-2.32(m,1H),2.17-1.87(m,4H),1.84-1.68(m,4H)；MS(ESI)m/z:522.2(M+H) +；
4-II: 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ＝8.58(s,1H),7.54(d,J＝7.7Hz,1H),7.44(br d,J＝7.6Hz,1H),7.40-7.30(m,1H),6.48(br s,1H),4.40(br s,2H),4.02(s,2H),3.79(br t,J＝4.8Hz,2H),3.25(br s,3H),3.17-3.02(m,1H),2.49-2.44(m,1H),2.42-2.31(m,1H),2.05-1.53(m,8H)；MS(ESI)m/z:522.2(M+H) +。
实施例5
Figure PCTCN2020100127-appb-000052
步骤A：在15℃下，向5-a(5g,26.99mmol,1eq)的MeOH(50mL)溶液中加入BnNH 2(4.34g,40.49mmol,4.41mL,1.5eq)和NaBH 3CN(2.37g,37.71mmol,1.40eq)，混合液用AcOH调节pH至5，搅拌4h。混合液用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8，EtOAc(150mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩得到粗品。粗品通过硅胶层析柱(100-200目,DCM/MeOH＝1/0-20/1)纯化得到化合物5-b。
步骤B：在15℃氮气保护下，向溶有5-b(3g,10.85mmol,1eq)的MeOH(90mL)溶液中加入Pd(OH) 2/C(300.00mg,1.07mmol,50％纯度)，混合液用H 2置换三次，H 2(15psi)下升温至40℃下搅拌12h。混合液过滤，滤液减压浓缩得到化合物5-c。
步骤C：在15℃下，向溶有5-c(2g,10.74mmol,1eq)的DMF(20mL)中加入1-h(3.42g,10.76mmol,1eq)和DIEA(3.56g,27.56mmol,4.80mL,2.57eq)，混合液搅拌12h。混合液倒入80mL H 2O中，所得悬浊液过滤，滤饼为化合物5-d。
步骤D：在15℃下，向溶有5-d(2.4g,6.18mmol,1eq)的THF(30mL)溶液中加入TBAF(1M,12.35mL,2eq)，混合液搅拌2h。混合液用150mL EtOAc稀释，再依次用H 2O(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩得到化合物5-e。
步骤E：在15℃下，向5-e(1.8g,6.56mmol,1eq)的THF(60mL)中，加入t-BuOK(1.85g,16.45mmol,2.51eq)和TosCl(1.57g,8.24mmol,1.26eq)，混合液搅拌12h。混合液用30mL H 2O稀释，EtOAc(60mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩得到残留物。残留物经硅胶柱层析(100-200目,PE/EtOAc＝2/1-1/1)纯化得到化合物5-f。
步骤F：在15℃下，向溶有5-f(600mg,2.34mmol,1eq)的DCM(10mL)中加入TFA(3mL)，混合液搅拌1h。混合液减压浓缩得到化合物5-g。
步骤G：在15℃下，向5-g(632mg,2.34mmol,1eq,TFA盐)的EtOH(15mL)中加入1-c(600mg,2.31mmol,1eq)，混合液升温至100℃，搅拌0.5h。混合液冷却至60℃，加入t-BuOK(525mg,4.68mmol,2eq)，混合液再升温至100℃，搅拌2h。混合液冷却至15℃，用15mL 1N的HCl(aq.)稀释，所得混合液减压浓缩后的残留物用20mL EtOAc溶解，悬浊液过滤，所得滤液减压浓缩得到化合物5-h。
步骤H：在15℃氮气保护下，向溶有5-h(50mg,154.65μmol,1eq)的THF(1.5mL)和DMF(1.5mL)的混合溶剂中加入1-f(38.00mg,187.96μmol,1.22eq)和PPh 3(121.69mg,463.96μmol,3eq)，混合液搅拌30min，加入DIAD(93.82mg,463.96μmol,90.21uL,3eq)，混合液继续搅拌11.5h。混合液用10mL H 2O稀释，EtOAc(15mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(10mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩得到粗品。然后通过制备型TLC(PE/EA＝1/1)纯化得到5-i。
步骤I：在15℃下，向5-i(10mg,19.71μmol,1eq)的AcOH(0.5mL)中加入HCl(2M,0.25mL,25.37eq)，混合液在120℃下搅拌1h。混合液冷却至室温，减压浓缩得到粗品。粗品通过制备HPLC(柱子:Phenomenex Synergi C18 150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:50％-70％,12min)纯化得到化合物5。
5: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝12.50(br s,1H),8.62-8.53(m,1H),7.53(d,J＝7.5Hz,1H),7.32-7.27(m,1H),7.25-7.17(m,1H),6.57(br s,1H),5.04(br s,0.3H),4.48(br s,0.7H),4.37(br t,J＝7.7Hz,2.3H),4.10(br s,0.7H),3.75-3.61(m,2H),3.59-3.45(m,1H),3.18(td,J＝8.0,15.7Hz,1H),3.01-2.53(m,5H),2.49-2.29(m,1H)；MS(ESI)m/z:480.1(M+H) +。
实施例6
Figure PCTCN2020100127-appb-000053
步骤A：在0℃下，向溶有6-a(0.5g,2.40mmol,1eq)的MeOH(10mL)溶液中加入NaBH 4(91mg,2.41mmol,1eq)，混合液搅拌1h。混合液用10mL饱和氯化铵溶液淬灭，混合液减压浓缩得到粗品，粗品用20mL H 2O稀释，EtOAc(20mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(15mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后的滤液减压浓缩得到化合物6-b。
步骤B：在15℃氮气保护下，向1-n(380mg,1.08mmol,1eq)和6-b(330mg,1.57mmol,1.45eq)的DMF(10mL)和THF(5mL)的混合溶液中加入PPh 3(570.00mg,2.17mmol,2.01eq)，混合液搅拌15min，加入DIAD(474.24mg,2.35mmol,456.00μL,2.17eq)，继续搅拌1h。混合液用30mL H 2O稀释，EtOAc(30mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩得到粗品，粗品通过硅胶柱层析(100-200目,PE/EtOAc＝1/1-1/3)纯化得到化合物6-c。
步骤C：在15℃下，向6-c(320mg,588.32μmol,1eq)的AcOH(16mL)中加入HCl(2M,8.00mL,27.20eq)，加热到120℃搅拌1h。混合液冷却至室温，减压浓缩得到粗品。粗品通过制备HPLC(柱子:Phenomenex luna C18 150mm×40mm×15μm；流动相:[水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:35％-65％,10min)纯化得到化合物6。
6: 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ＝12.68(br s,1H),8.66(s,1H),7.80(dd,J＝2.0,7.1Hz,1H),7.57-7.37(m,2H),5.14(s,2H),4.49-4.37(m,1H),4.28-4.19(m,2H),3.76-3.64(m,1H),3.55-3.45(m,2H),2.07-1.95(m,2H),1.95-1.86(m,2H),1.82-1.74(m,2H),1.72-1.58(m,2H)；MS(ESI)m/z:516.1(M+H) +。
实施例7
Figure PCTCN2020100127-appb-000054
步骤A：0℃和氮气保护条件下，向LAH(173.96mg,4.58mmol,2eq)的THF(4.00mL)溶液中逐滴加入化合物7-a的THF(2.00mL)溶液，滴加完毕，0℃继续搅拌0.5小时。随后反应液逐步升温至25℃后反应2小时。反应结束反应液用2mL 1M HCl在25℃淬灭，用无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物7-b。
步骤B：25℃和氮气保护条件下，向7-b(0.371g,1.95mmol,1.2eq)的THF(4.00mL)和DMF的混合溶液中依次加入1-n(571.23mg,1.63mmol,1eq)，PPh 3(852.87mg,3.25mmol,2eq)和DIAD(657.51mg,3.25mmol,632.22uL,2eq)，在25℃下反应10小时，EA(20mL×3)萃取。合并有机层，无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶色谱柱(100-200目,PE/EtOAc＝5/1-3/1)纯化分离得到化合物7-c。
步骤C：在室温将化合物7-c(0.78g,1.49mmol,1eq)溶于AcOH(14mL)和HCl(2M,7mL,9.40eq)的混合溶剂中，加热至120℃反应2小时。冷却至室温滴加入140mL水中，搅拌15分钟后过滤得到粗品，经制备HPLC(柱:Max-RP 150mm×50mm×10μm；流动相:[水(0.2％甲酸)-乙腈]；乙腈％:42％-72％)纯化得到化合物7。
7: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝12.44(br s,1H),8.52(s,1H),7.61(d,J＝7.8Hz,1H),7.27-7.23(m,1H),7.22-7.17(m,1H),5.27(s,2H),4.63-4.50(m,1H),4.41-4.33(m,2H),3.87-3.75(m,1H),3.59-3.51(m,2H),2.58(s,3H),2.16-2.04(m,4H),1.91-1.79(m,2H),1.78-1.68(m,2H)；MS(ESI)m/z:496.2(M+H) +。
实施例8
Figure PCTCN2020100127-appb-000055
步骤A：在15℃下，向溶有化合物8-a(10g,46.66mmol,1eq)的EtOH(120mL)中加入1-c(13.00g,50.14mmol,1eq)。混合液升温至90℃下搅拌1h。混合液冷却至60℃，加入t-BuOK(5.50g,49.00mmol,1.05eq)，混合液再升温至90℃下搅拌2h。混合液冷却至室温，倒入1M HCl水溶液(300mL)中，室温搅拌30min，悬浊液过滤，滤饼用H 2O(10mL×5)洗涤，真空干燥得到8-b。
步骤B：在0℃下，向溶有BH 3·THF(1M,29.98mL,1.2eq)的四氢呋喃(100mL)中加入8-1(1.38g,5.00mmol,1.46mL,0.2eq)。混合液在0℃下搅拌15分钟，然后把溶有1-e的四氢呋喃(100mL)溶液通过注射器缓慢滴加到混合液中。在此温度下继续搅拌30分钟。在0℃下缓慢滴加100mL甲醇，然后在减压下浓缩去除甲醇，然后用EtOAc(100mL)和HCl(2M,100mL)进行萃取，用HCl(2M,100mL)和饱和食盐水(100mL)洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到(s)-1-f。
步骤C：在15℃下，化合物8-b(3g,7.88mmol,1eq)和(S)-1-f(1.80g,8.90mmol,1.13eq)溶解在DMF(30mL)和THF(15mL)的混合溶液中，然后加入PPh 3(4.05g,15.44mmol,1.96eq)和DIAD(3.43g,16.97mmol,3.30mL,2.16eq)。混合液室温下搅拌12h后加入120mL H 2O稀释，EtOAc(100mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(80mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品通过硅胶柱层析(PE/EtOAc＝3/1–1/1)纯化得到8-c。
步骤D：在15℃下，化合物8-c(1.70g,3.01mmol,1eq)溶解在1,4-二氧六环(20mL)中，然后加入HCl/1,4-二氧六环(4M,8mL,10.65eq)并在15℃下搅拌1h。反应液直接减压浓缩得到粗品8-d。
步骤E：在25℃下向8-d(100mg,214.84μmol,1eq)的DCM(2mL)溶液中逐滴加入TEA(86.96mg,859.36μmol,119.61uL,4eq)和乙酰氯(16.86mg,214.84μmol,15.33μL,1eq)，加毕反应体系在25℃搅拌12 小时。DCM(10mL×2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物8-e。
步骤F：在25℃下将化合物8-e(80mg,157.64μmol,1eq)溶于AcOH(2mL)和HCl(2M,1mL,12.69eq)的混合溶剂中，加热至120℃反应0.5小时。冷却至室温后减压浓缩得到粗品，经制备型HPLC(柱:C18150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈％:46％-76％)纯化分离得到化合物8(保留时间：1.585min)。
8: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝12.53(br s,1H),8.55-8.45(m,1H),8.48-8.45(m,1H),8.46(s,1H),7.56(d,J＝7.6Hz,1H),7.35-7.30(m,1H),7.26-7.21(m,1H),6.64(br s,1H),5.32-5.25(m,1H),4.50(br s,1H),3.90-3.77(m,1H),3.63-3.51(m,1H),3.27-3.15(m,1H),2.64(dtd,J＝5.0,9.4,14.0Hz,1H),2.49-2.37(m,1H),2.21(br s,2H),2.10-2.02(m,1H),1.99(s,3H),1.97-1.91(m,1H),1.79-1.68(m,2H),1.34(br dd,J＝9.0,15.3Hz,2H).MS(ESI)m/z:480.1(M+H) +。
实施例9
Figure PCTCN2020100127-appb-000056
步骤A：在25℃下向化合物8-d(100mg,214.84μmol,1eq)的DCM(2mL)溶液中逐滴加入TEA(86.96mg,859.36μmol,119.61μL,4eq)和氯甲酸甲酯(20.30mg,214.84μmol,16.64uL,1eq)，加毕反应体系在25℃搅拌12小时。DCM(10mL×2)萃取。合并有机层，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物9-a。
步骤B：在室温将化合物9-a(80mg,152.82μmol,1eq)溶于AcOH(2mL)和HCl(2M,1mL,13.09eq)的混合溶剂中，加热至120℃反应1小时。冷却至室温后减压浓缩得到粗品，经制备型HPLC(柱:C18150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈:50％-70％)纯化分离得到化合物9(保留时间：1.686min)。
9: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝8.47(s,1H),7.56(d,J＝7.5Hz,1H),7.34-7.30(m,1H),7.26-7.22(m,1H),6.63(br d,J＝8.0Hz,1H),4.52(br d,J＝13.3Hz,2H),3.69(br s,3H),3.62-3.51(m,2H),3.27-3.16(m,1H),2.63(dtd,J＝4.9,9.4,14.0Hz,1H),2.49-2.38(m,1H),2.22(br s,2H),2.09-2.01(m,1H),1.95(br s,1H),1.79-1.70(m,2H),1.44-1.28(m,2H)；MS(ESI)m/z:496.1(M+H) +。
实施例10
Figure PCTCN2020100127-appb-000057
步骤A：在15℃下，向4-a(1g,4.03mmol,1eq)的MeOH(25mL)溶液中加入10-a(0.8g,4.62mmol,1.15eq)和AcOH(52.50mg,874.24μmol,50uL)，混合液搅拌1h，0℃下加入NaBH 3CN(305.00mg,4.85mmol,1.21eq)，混合液升温至15℃，搅拌11h。混合液用15mL MeOH稀释，减压浓缩得到粗品，粗品硅胶层析柱(100-200目,PE/EA＝1/0-1/4)纯化得到化合物10-b。
步骤B：在15℃下，向化合物10-b(400mg,986.36μmol,1eq)的DCM(8mL)溶液中加入HCl/1,4-二氧六环(4M,4mL,16.22eq)，混合液搅拌0.5h后减压浓缩得到化合物10-c。
步骤C：在15℃下，向化合物10-c(300mg,877.51μmol,1eq,HCl)的THF(10mL)中加入DIEA(482.30mg,3.73mmol,0.65mL,4.25eq)和CDI(175mg,1.08mmol,1.23eq)，混合液升温至60℃反应4h。然后冷却至室温，加入20mL H 2O稀释，EtOAc(50mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(15mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤所得滤液减压浓缩得到粗品，粗品经硅胶层析柱(100-200目,PE/EA＝1/0-1/4)纯化得到化合物10-d。
步骤D：在15℃氮气保护下，向化合物10-d(120mg,362.09μmol,1eq)的MeOH(8mL)中加入Pd/C(15mg,10％纯度)，混合液用H 2置换三次，H 2(15psi)下搅拌12h。混合液过滤后减压浓缩得到化合物10-e。
步骤E：在15℃下，向10-e(60mg,304.14μmol,1eq)的EtOH(5mL)溶液中加入1-c(80.00mg,308.58μmol,1.01eq)，混合液升温至90℃，搅拌1h。混合液冷却至60℃，加入t-BuOK(40.00mg,356.47μmol,1.17eq)，混合液再升温至90℃，搅拌1h。混合液冷却至15℃，用4N的HCl/EtOAc调节pH至4。混合液浓缩得到化合物10-f。
步骤F：在15℃氮气保护下，向溶有10-f(40mg,109.77μmol,1eq)和(s)-1-f(40mg,197.85μmol,1.80eq)的甲苯(3mL)溶液中加入ADDP(111mg,439.93μmol,4.01eq)和三丁基膦(90.20mg,445.84μmol,0.11mL,4.06eq)，混合液升温至110℃下搅拌1h。混合液冷却至室温，减压浓缩得到粗品，粗品通过制备TLC(EtOAc/MeOH/＝/10/1)纯化得到化合物10-g。
步骤G：在15℃下，向10-g(80mg,145.84μmol,1eq)的AcOH(2mL)溶液中加入HCl(2M,1mL,13.71eq)，混合液升温至120℃，搅拌45min。混合液冷却至室温，减压浓缩得到粗品。粗品通过制备HPLC(柱: Phenomenex Synergi C18 150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:56％-76％,11min)纯化得到化合物10。
10: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝12.81-12.29(m,1H),8.54-8.45(m,1H),7.56(d,J＝7.7Hz,1H),7.34-7.30(m,1H),7.26-7.21(m,1H),6.78-6.53(m,1H),4.55-4.38(m,1H),3.90-3.75(m,1H),3.64-3.49(m,1H),3.36-3.24(m,4H),3.23-3.16(m,1H),2.81(s,3H),2.71-2.56(m,1H),2.51-2.37(m,1H),2.07(s,1H),2.01-1.88(m,3H),1.85-1.68(m,4H)；MS(ESI)m/z:521.3(M+H) +。
实施例11
Figure PCTCN2020100127-appb-000058
步骤A：在20℃下,向化合物11-a(15g,78.90mmol,1eq)的DMF(300mL)溶液中加入Pd(OAc) 2(885.66mg,3.94mmol,0.05eq)、11-1(38.12g,118.35mmol,1.5eq)和I 2(30.04g,118.35mmol,23.84mL,1.5eq)。反应液在氮气保护下加热到110℃，搅拌10个小时。反应液冷却至室温，过滤，滤液用Na 2SO 3(200mL)淬灭，用NaOH(2M)碱化至pH＝8，EtOAc(200mL×2)萃取。收集水相并用HCl(2M)酸化至pH＝5，EtOAc(200mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(100mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到化合物11-b。
步骤B：在20℃下，向化合物11-b(10g,31.64mmol,1eq)的THF(200mL)溶液中缓慢加入BH 3-Me 2S(12M,7.91mL,3eq)。反应液在氮气保护下加热到90℃，搅拌47个小时。反应液冷却至室温，用MeOH(50mL)淬灭。加水(200mL)，EtOAc(200mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(100mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到化合物11-c。
步骤C：在20℃下,向化合物11-c(8g,26.49mmol,1eq)的THF(80mL)溶液中加入NaH(1.59g,39.73mmol,60％纯度,1.5eq)，反应液在20℃下搅拌30分钟。然后加入烯丙基溴(4.81g,39.73mmol,1.5eq)，继续搅拌10个小时。加水(50mL)，EtOAc(50mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(30mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶色谱柱(PE:EA＝20:1-5:1)纯化分离得到化合物11-d。
步骤D：在20℃下，向化合物11-d(4.6g,13.45mmol,1eq)的MeCN(50mL)溶液中加入Pd(OAc) 2(150.94mg,672.33μmol,0.05eq)、PPh 3(352.68mg,1.34mmol,0.1eq)和TEA(6.80g,67.23mmol,9.36mL, 5eq)。反应液在氮气保护下加热到80℃，搅拌12个小时。反应液冷却至室温，减压浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶色谱柱(PE/EA＝30/1-5/1)纯化分离得到化合物11-e。
步骤E：在-78℃下,向化合物11-e(2.2g,10.27mmol,1eq)的MeOH(2mL)和DCM(2mL)溶液中通臭氧30分钟。然后加入Me 2S(1.28g,20.54mmol,1.51mL,2eq)继续搅拌30分钟。加水(20mL)，EtOAc(20mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(20mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到粗品化合物。粗产物通过硅胶色谱柱(PE/EA＝20/1-3/1)纯化分离得到化合物11-f。
步骤F：在20℃下，向化合物11-f(870mg,4.02mmol,1eq)的MeOH(2mL)和THF(8mL)溶液中加入NaBH 4(304.54mg,8.05mmol,2eq)。反应液搅拌1个小时。加水(20mL)，EtOAc(20mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(20mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到化合物11-g。
步骤G：在20℃下，向化合物11-g(300mg,1.38mmol,1eq)的THF(20mL)溶液中加入1-n(579.76mg,1.65mmol,1.2eq)，三丁基磷(1.11g,5.50mmol,1.36mL,4eq)和ADDP(1.39g,5.50mmol,4eq)。反应液在氮气保护下加热到90℃搅拌1个小时。加水(20mL)，EtOAc(30mL×2)萃取。合并有机相用HCl(2M,15mL)，饱和食盐水(30mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到粗产物，粗产物通过硅胶色谱柱(PE/EA＝10/1-1/3)纯化分离得到化合物11-h。
步骤H：在20℃下，向化合物11-h(470mg,852.20μmol,1eq)的HOAc(4mL)溶液中加入HCl(2M,2mL,4.69eq)。反应液加热到120℃搅拌1小时。反应液冷却至室温，加水(50mL)，EtOAc(50mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(50mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到粗产物，粗产物通过高效液相色谱(柱:Phenomenex Synergi C18 150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈％:37％-67％,10min)纯化分离得到化合物11。
11： 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.49(br s,1H),7.56(br d,J＝7.1Hz,1H),7.30(br s,1H),7.13(br d,J＝6.5Hz,1H),6.42(br s,1H),5.15-5.03(m,1H),5.03-4.91(m,1H),4.45(br s,1H),4.34(br t,J＝7.8Hz,3H),4.23(br d,J＝10.5Hz,2H),3.78(br s,1H),3.51(br d,J＝7.3Hz,2H),2.04(br s,6H),1.78(br d,J＝11.9Hz,4H)；MS(ESI)m/z:524.3(M+H) +。
实施例12
Figure PCTCN2020100127-appb-000059
Figure PCTCN2020100127-appb-000060
步骤A：在20℃下,向化合物12-a(10g,47.38mmol,1eq)的MeOH(20mL)溶液中加入Pd(dppf)Cl 2(1.73g,2.37mmol,0.05eq)和TEA(9.59g,94.76mmol,13.19mL,2eq)。反应液加压CO(50psi)，加热到80℃，搅拌36个小时。反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩得到粗产物，粗产物通过硅胶色谱柱(PE/EA＝20/1-3/1)纯化分离得到化合物12-b。
步骤B：在20℃下,向化合物12-b(3g,15.77mmol,1eq)的甲苯(50mL)溶液中加入乙二硫醇(1.63g,17.35mmol,1.46mL,1.1eq)和对甲苯磺酸(600.07mg,3.15mmol,0.2eq)。反应液在加热到80℃，搅拌10个小时。反应液冷却至室温，加水(50mL)，EtOAc(50mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(50mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到粗产物，粗产物通过硅胶色谱柱(PE/EA＝20/1-3/1)纯化分离得到化合物12-c。
步骤C：在-78℃，氮气保护下，向化合物DBH(7.37g,30.03mmol,4eq)的DCM(30mL)溶液中加入吡啶氢氟酸盐(1.49g,15.02mmol,1.35mL,2eq)，反应液在-78℃下搅拌30分钟。然后加入化合物12-c(2g,7.51mmol,1eq)的DCM(10mL)溶液继续搅拌2个小时。反应液冷却到室温，用Na 2SO 3(30mL)淬灭，EtOAc(30mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(30mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶色谱柱(PE:EA＝20:1-5:1)纯化分离得到化合物12-d。
步骤D：在20℃下,向化合物12-d(1g,3.44mmol,1eq)的DCM(15mL)溶液中加入DBU(836.79mg,5.50mmol,828.50μL,1.6eq)。反应液搅拌2个小时。反应液用Na 2SO 3(30mL)淬灭，EtOAc(30mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(30mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到化合物12-e。
步骤E：在0℃下，向化合物12-e(400mg,1.90mmol,1eq)的MeCN(5mL)溶液中加入2-硝基-苯磺酰氯(843.55mg,3.81mmol,2eq)和水合肼(381.09mg,7.61mmol,369.99μL,4eq)。反应液升温至20℃搅拌2小时。反应液减压浓缩得到粗产物。粗产物通过硅胶色谱柱(PE:EA＝30:1-5:1)纯化分离得到化合物12-f。
步骤F：在20℃下，向化合物12-f(290mg,1.37mmol,1eq)的THF(15mL)溶液中加入LAH(103.73mg,2.73mmol,2eq)。反应液搅拌30分钟。向反应液依次加入水(0.1mL),NaOH(15％,0.1mL)和H 2O(0.3mL)，搅拌5分钟后过滤，滤液减压浓缩得到化合物12-g。
步骤G：在20℃下，向化合物12-g(50mg,271.47μmol,1eq)的THF(1mL)和DMF(1mL)溶液中加入1-n(114.46mg,325.76μmol,1.2eq),PPh 3(142.41mg,542.94μmol,2eq)和DIAD(109.79mg,542.94μmol,105.56μL,2eq)。反应液在氮气保护下搅拌1个小时。反应液减压浓缩得到粗产物，粗产物通过制备TLC(PE:EA＝1:3)纯化分离得到化合物12-h。
步骤H：在20℃下,向化合物12-h(20mg,38.65μmol,1eq)的MeOH(2mL)和H 2O(0.2mL)溶液中加入LiOH-H 2O(3.24mg,77.29μmol,2eq)。反应液搅拌1个小时。反应液冷却至室温，加水(20mL)，EtOAc(20mL×2)萃取。合并有机相用饱和食盐水(20mL)洗，Na 2SO 4干燥后过滤，滤液减压浓缩得到粗产物，粗产物通过高效液相色谱(柱:Shim-pack C18 150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-乙腈]；乙腈％: 39％-69％,10min)纯化分离得到化合物12。
12: 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.56(s,1H),7.45(br d,J＝7.5Hz,1H),7.38-7.26(m,2H),5.02(s,2H),4.47-4.35(m,1H),4.27-4.20(m,2H),3.73-3.61(m,1H),3.54-3.46(m,2H),3.13(br s,2H),2.65-2.55(m,2H),2.04-1.55(m,9H)。
实施例13
Figure PCTCN2020100127-appb-000061
步骤A：在25℃下向化合物8-d(300mg,644.52μmol,1eq)的DCM(4mL)溶液中逐滴加入TEA(260.87mg,2.58mmol,358.84μL,4eq)和氯甲酸3-氯丙酯(121.42mg,773.42μmol,93.40μL,1.2eq)，加毕反应体系在25℃搅拌12小时。DCM(20mL)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物13-a。
步骤B：在0℃下、氮气保护条件下，向13-a(200mg,341.30μmol,1eq)的THF(5.00mL)溶液中逐滴加入化合物NaHMDS(1M,1.37mL,4eq)溶液，滴加完毕，0℃继续搅拌2小时。反应结束反应液用饱和NH 4Cl(10mL)在0℃淬灭，EA(20mL×3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(30mL)洗涤，用无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物13-b。
步骤C：在室温下将13-b(150mg,272.96μmol,1eq)溶于AcOH(4mL)和HCl(2M,2mL,14.65eq)的混合溶剂中，加热至120℃反应1小时。冷却至室温后EA(20mL×3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL×2)洗涤，用无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经制备型HPLC(柱:C18 150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.1％TFA)-乙腈]；乙腈％:45％-75％)纯化分离得到化合物13(保留时间：1.374min)。
13: 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.48(s,1H),7.56(d,J＝7.6Hz,1H),7.36-7.29(m,1H),7.26-7.20(m,1H),6.64(br s,1H),4.48(br s,1H),4.25(t,J＝5.3Hz,2H),4.22-4.13(m,1H),3.63-3.52(m,1H),3.29-3.18(m,3H),2.64(dtd,J＝4.8,9.4,14.0Hz,1H),2.47-2.42(m,1H),2.15-2.03(m,4H),2.00(br s,2H),1.87-1.68(m,4H)；MS(ESI)m/z:522.3(M+H) +。
实施例14
Figure PCTCN2020100127-appb-000062
Figure PCTCN2020100127-appb-000063
步骤A：在25℃下，向化合物8-d(300mg,644.52μmol,1eq)的DCM(5mL)溶液中逐滴加入TEA(260.87mg,2.58mmol,358.84μL,4eq)和5-溴戊酰氯(154.28mg,773.42μmol,103.54μL,1.2eq)，加毕，反应体系在25℃搅拌12小时。DCM(10mL×3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物14-a。
步骤B：在0℃下、氮气保护条件下，向14-a(100mg,159.11μmol,1eq)的THF(1.00mL)溶液中逐滴加入化合物NaHMDS(1M,636.46μL,4eq)溶液，滴加完毕，0℃继续搅拌0.5小时。反应结束反应液用饱和氯化铵淬灭，EA(10mL×3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL)洗涤，用无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物14-b。
步骤C：在室温下将14-b(50mg,91.31μmol,1eq)溶于AcOH(1mL)和HCl(2M,1.25mL,27.38eq)的混合溶剂中，加热至120℃反应1小时。冷却至室温后EA(20mL×3)萃取。合并有机层，饱和食盐水(20mL×2)洗涤，用无水Na 2SO 4干燥，过滤并浓缩得到粗产物，经制备型HPLC(柱:C18 150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.1％TFA)-乙腈]；乙腈％:48％-78％)纯化分离得到化合物14(保留时间：1.938min)。
14: 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ＝8.49(s,1H),7.56(br d,J＝7.5Hz,1H),7.36-7.30(m,1H),7.26-7.20(m,1H),6.64(br s,1H),4.64-4.43(m,2H),3.55(br d,J＝11.3Hz,1H),3.28-3.15(m,3H),2.64(dtd,J＝4.7,9.4,13.9Hz,1H),2.51-2.41(m,3H),2.17-2.03(m,2H),1.97(br s,2H),1.90-1.82(m,8H)；MS(ESI)m/z:520.3(M+H) +。
实施例15
Figure PCTCN2020100127-appb-000064
步骤A：在90℃下，15-a(350mg,1.60mmol,1eq,HCl)和1-c(415mg,1.60mmol,1eq)的EtOH(10mL)溶液搅拌1h。混合液冷却至60℃，加入t-BuOK(180mg,1.60mmol,1eq)，混合液升温至90℃下继续搅拌1h。混合液冷却至室温，20mL 0.5M HCl(aq.)稀释，所得悬浊液过滤，滤饼用30mL PE和30mL EtOAc搅拌过滤得到15-b。
步骤B：在15℃氮气保护下，向溶有15-b(60mg,171.73μmol,1eq)和(s)-1-f(50mg,247.31μmol,1.44 eq)的甲苯(2.5mL)溶液中加入ADDP(129.99mg,515.20μmol,3eq)和三丁基膦(106.60mg,526.90μmol,130.00uL,3.07eq)，混合液升温至110℃下搅拌12h。混合液冷却至室温，10mL水稀释，EtOAc(15mL×2)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(10mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，所得滤液减压浓缩得到粗品，然后制备TLC(EtOAc/PE＝3/1)纯化得到15-c。
步骤C：在15℃下，向15-c(35mg,65.60μmol,1eq)的AcOH(1.5mL)溶液中加入HCl(2M,750.00uL,22.87eq)，混合液升温至120℃，搅拌45min。混合液冷却至室温，减压浓缩得到的粗品通过制备HPLC(柱子:Phenomenex Synergi C18 150mm×30mm×4μm；流动相:[水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:40％-70％,10min)得到化合物15。
15: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝12.71-12.31(m,1H),8.54-8.38(m,1H),7.58-7.49(m,1H),7.32-7.26(m,1H),7.25-7.19(m,1H),6.71-6.54(m,1H),4.55-4.35(m,1H),4.09-3.96(m,1H),3.60-3.48(m,1H),3.38-3.27(m,2H),3.26-3.11(m,1H),2.68-2.55(m,1H),2.47-2.40(m,1H),2.40-2.35(m,2H),2.12-1.96(m,4H),1.95-1.86(m,2H),1.85-1.66(m,4H)；MS(ESI)m/z:506.1(M+H) +。
实施例16
Figure PCTCN2020100127-appb-000065
步骤A：在15℃下，向溶有氰基乙酸(8.5g,99.93mmol,1eq)和16-a(8.90g,99.93mmol,1eq)的甲苯(50mL)溶液中，依次缓慢加入氧氯化磷(7.43g,48.42mmol,4.5mL)，DMF(475.00mg,6.50mmol,0.5mL,6.50e-2eq)，混合液升温至70℃下搅拌2h。混合液冷却至室温，50mL H 2O淬灭，悬浊液过滤，干燥滤饼得到化合物16-b。
步骤B：在110℃下，溶有16-b(10g,64.05mmol,1eq)和原乙酸三乙酯(11.06g,68.19mmol,12.50mL,1.06eq)的Ac 2O(50mL)溶液搅拌1h。混合液冷却至室温，减压浓缩得到的粗品用50mL EtOAc和200mL PE混合溶剂搅拌过滤得到化合物16-c。
步骤C：在15℃下，向溶有16-c(3.5g,15.47mmol,1eq)的EtOH(40mL)溶液中加入1-m(3.03g,16.46mmol,1.06eq)，混合液升温至90℃下，搅拌1h。混合液冷却至60℃，加入t-BuOK(1.75g,15.60mmol,1.01eq)，混合液再升温至90℃下搅拌3h。混合液冷却至室温，0.5M HCl(aq.)调节pH至4，所得悬浊液过滤，滤饼干燥后得到化合物16-d。
步骤D：在15℃氮气保护下，向溶有16-d(100mg,314.14μmol,1eq)和(s)-1-f(90mg,445.16μmol,1.42eq)的甲苯(6mL)溶液中加入ADDP(300mg,1.19mmol,3.78eq)和三丁基膦(246.00mg,1.22mmol,0.3mL,3.87eq)，混合液升温至110℃下搅拌12h。混合液冷却至室温，15mL H 2O稀释，EtOAc(30mL×2) 萃取，合并有机相并用饱和食盐水(15mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤所得滤液减压浓缩得到粗品，粗品通过制备HPLC(柱子:Phenomenex Synergi C18 150mm×25mm×10μm；流动相:[水(0.05％HCl)-乙腈]；乙腈％:58％-78％,9min)纯化得到化合物16。
16: 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ＝7.53-7.47(m,1H),7.25-7.21(m,1H),7.19-7.14(m,1H),6.49(br dd,J＝6.1,9.7Hz,1H),4.36-4.27(m,2H),3.74-3.62(m,1H),3.57-3.47(m,3H),3.19-3.08(m,1H),2.60(s,3H),2.57-2.46(m,2H),2.41-2.27(m,1H),2.04-1.89(m,2H),1.85-1.69(m,2H),1.67-1.58(m,4H)；MS(ESI)m/z:503.1(M+H) +。
活性测试
效果实施例1：本发明化合物酶水平活性测定
本发明中应用酶与底物催化反应生成荧光底物，实验采用荧光(Fluorescence)方法检测。具体步骤如下：用Bravo对受试化合物进行4倍梯度稀释，每个化合物稀释10个浓度设置加阳性化合物(100％抑制)的孔作为阳性对照，只加DMSO的孔作为阴性对照。用缓冲液(50mM三(羟甲基)氨基甲烷-HCl(Tris-HCl)，1mM NaCl，0.01％Triton X-100)将Chymase蛋白稀释至0.5μg/mL并加25μL到384孔板中，1000rpm，离心10s。然后用排枪转1μL稀释好的化合物到384孔板中，每个化合物浓度设双复孔，离心反应板1000rpm，10s。用缓冲液稀释底物Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-AMC至200μM，使用排枪加25μL稀释好的底物到384反应板中，离心，1000rpm，10s。离心后将384孔板放入23℃温箱中孵育30min。运用FlexStation读取荧光信号值(激发光380nm，发射光460nm)。用荧光信号读值计算得到抑制率，公式如下：抑制率＝(加化合物孔值-阴性对照孔值)/(阳性对照孔值-阴性对照孔值)×100％。使用GraphPad Prism 5.0分析数据。各化合物的IC 50值示于下表1中。
表1本发明化合物酶活性测试结果
化合物 人chymase IC 50(nM)
1-II 37.69
2-II 15.32
3-II 152.40
4-II 10.37
5 568.9
6 73.29
7 65.65
8 169.20
9 255.30
10 22.94
11 22.15
12 90.45
13 11.77
14 12.66
15 9.02
16 2043
结论：本发明化合物能够有效的抑制人的糜酶活性。
效果实施例2：小鼠药代动力学研究
1.摘要
以雌性Balb/c小鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了小鼠尾部静脉注射和口服盒式给药法(cassette dosing)给予阳性参照化合物BAY-1142524和化合物2-II后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明的化合物在小鼠体内的药代动力学行为，评价其药代动力学特征。
2.试验方案
2.1实验药品：BAY-1142524和化合物2-II。
2.2试验动物
健康幼年雌性Balb/c小鼠20-30g，总共4只。
2.3药物配制
称取适量样品，将BAY-1142524和本发明化合物2-II，用10％DMAC/10％solutol(聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯)/80％水配制成0.1mg/mL的澄清溶液用于静脉注射，用10％DMAC/10％solutol/80％水配制成0.3mg/mL的澄清溶液用于口服组。
2.4给药
雌性Balb/c小鼠4只，禁食一夜后2只尾端静脉注射给药，剂量为0.5mg/kg；另外2只口服给药，剂量为3mg/kg。
3.操作
于给药前及给药后0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、24小时采血，置于肝素化抗凝试管中，7000rpm(5204g)、4℃下离心，分离血浆，于-80℃保存。给药后4小时进食。
用LC/MS/MS法测定IV(静脉注射)和口服给药给药后小鼠血浆中的待测化合物含量。血浆样品经沉淀蛋白预处理后进行分析。药代动力学参数结果，见表2：
表2
Figure PCTCN2020100127-appb-000066
结论：与BAY-1142524比较，在小鼠静脉注射给药剂量为0.5mpk水平时，本发明化合物的清除率更低且体内半衰期更长。口服给药剂量为3mg/kg水平时，本发明化合物的血浆暴露量显著更大，口服生物利用度相近，具有更优的药代动力学性质。
效果实施例3：犬药代动力学研究
1.摘要
以雄性比格犬为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了犬尾部静脉注射和口服盒式给药法(cassette dosing)给予阳性参照化合物BAY-1142524和化合物15后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明的化合物在犬体内的药代动力学行为，评价其药代动力学特征。
2.试验方案
2.1实验药品：BAY-1142524和化合物15。
2.2试验动物
健康雄性比格犬7.5-10kg，总共4只。
2.3药物配制
称取适量样品，将BAY-1142524和本发明化合物15，用10％DMAC/10％solutol(聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯)/80％水配制成0.3mg/mL的澄清溶液用于静脉注射，用10％DMAC/10％solutol/80％水配制成1mg/mL的澄清溶液用于口服组。
2.4给药
雄性比格犬4只，IV组不禁食，PO组禁食一夜后，2只尾端静脉注射给药，剂量为0.3mg/kg；另外2只口服给药，剂量为1mg/kg。
3.操作
于给药前及给药后0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、24小时采血，置于肝素化抗凝试管中，7000rpm(5204g)、4℃下离心，分离血浆，于-80℃保存。
用LC/MS/MS法测定IV(静脉注射)和口服给药后犬血浆中的待测化合物含量。血浆样品经沉淀蛋白预处理后进行分析。药代动力学参数结果，见表3：
表3
Figure PCTCN2020100127-appb-000067
结论：与BAY-1142524比较，在犬静脉注射给药剂量为0.5mpk水平时，本发明化合物的清除率更低且体内半衰期明显更长，具有支持更长给药间隔的药代动力学性质。
效果实施例4：仓鼠肾病模型药效研究
1.摘要：本实验模型为左肾输尿管结扎诱导的纤维化模型(UUO)。仓鼠(Syrian Hamster)经异氟烷吸入麻醉后，分层打开动物腹腔，暴露左侧输尿管，利用丝线结扎输尿管，确认完全闭塞，层层关闭腹腔。将动物放置于室温37℃的环境下进行复苏，等待动物苏醒后转移至笼中定期给予食物与水。
2.实验分组：本实验共分7组，每组5只动物，即假模型组，模型组，BAY-1142524组(10mpk)和本发明化合物15组(10mpk)。手术前一日给药一次，手术后连续给药14天。
3.实验动物生理观察：一周两次检测体重；监测试验周期内动物死亡率。
4.实验终点末次给药结束2小时后，动物安乐死，组织取材具体如下：
A.采血：EDTA抗凝，分离血浆500μL；非抗凝血液样本，分离制备血清，-80℃保存，用于肌酐与尿素氮检测；
B.左右肾脏称重，UUO侧肾脏量长度，正常组同步量；
C.尿液收集：所有组保存肾盂(UUO侧)中的尿液及收取膀胱中的尿液500μL；
D.肾脏：UUO侧肾脏矢状切，拍照，一半病理检测，一半冷冻，对侧正常肾脏所有组全部冷冻；
E.肾脏重量：UUO测肾脏尿液排除后称重，对侧正常称重。
5.实验结果测定
肾脏病理检测：苏木精-伊红染色法(HE)染色及评分(小管扩张、基质增厚、炎症等)、马森染色法(Masson)染色及分析纤维化情况。在肾脏皮质中随机选择5个大小为1mm 2的观察视野，根据以下标准对每个视野进行评分。实验结果见图1(图1中“**”代表与模型组相比p值小于0.005；“****”代表与模型组相比p值小于0.0001)。
A.肾小管上皮扁平化，肾小管扩张评价方法和标准：
0级＝0％；
1级＝0–10％；
2级＝10–25％；
3级＝25–50％；
4级＝50–75％；
5级>75％；
B.肾小管上皮细胞坏死评价方法和标准：
0级：表示没有变化；
1级：变化影响<25％的肾小管损伤(轻度)；
2级：变化影响25-50％的肾小管损伤(中度)；
3级：变化影响>50％的肾小管损伤(重度)；
C.肾间质炎症细胞浸润评价方法和标准：
0级：无；
1级：轻度；
2级：中度；
3级：重度；
D.肾间质纤维化评价方法和标准：
得分0＝正常；
得分1＝轻度间质纤维化(≤10％)；
得分2＝中度间质纤维化(10–25％)；
得分3＝重度间质纤维化(25–75％)；
得分4＝极度严重的间质纤维化(≥75％)；
结论：与BAY-1142524比较，在仓鼠UUO肾病模型中每天口服给药剂量为10mpk水平，给药14天后，本发明化合物的肾纤维化评分更低，具有更显著的改善肾纤维化药效。

Claims (23)

  1. 式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，
    Figure PCTCN2020100127-appb-100001
    其中，m和n各自独立地为0或1；
    R 1为-CN、-C(＝O)OR a或四唑基；
    R a为H或C 1-3烷基；
    R 2为H、F、Cl或C 1-3烷基；
    R 3为-NH-C(＝O)R b或5-6元杂环烷基，其中所述5-6元杂环烷基任选被1、2或3个独立选自氧代(＝O)、F、Cl、Br和C 1-3烷基的取代基所取代；
    R b为C 1-3烷基或C 1-3烷氧基；
    R 4为
    Figure PCTCN2020100127-appb-100002
    T 1为-CH 2-或-O-CH 2-；
    R 5为H、F、Cl、Br或C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代；
    R 6和R 7各自独立地为H、F、Cl、Br或C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代；
    或R 6和R 7连接在一起使结构单元
    Figure PCTCN2020100127-appb-100003
    为
    Figure PCTCN2020100127-appb-100004
    R e和R f各自独立地为H、F、Cl、Br或C 1-3烷基，其中所述C 1-3烷基任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代；
    所述5-6元杂环烷基包含1、2、3或4个独立选自N、-O-和-S-的杂原子。
  2. 根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其化合物具有式(I-1)或(I-2)所示结构：
    Figure PCTCN2020100127-appb-100005
    其中，R 1、R 2、R 3和R 4如权利要求1所定义。
  3. 根据权利要求2所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 4为
    Figure PCTCN2020100127-appb-100006
    Figure PCTCN2020100127-appb-100007
  4. 根据权利要求3所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 4为
    Figure PCTCN2020100127-appb-100008
    Figure PCTCN2020100127-appb-100009
  5. 根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其化合物具有式(I-3)、(I-4)、(I-5)或(I-6)所示结构：
    Figure PCTCN2020100127-appb-100010
    其中，R 1、R 2、R 3、R 5、R 6、R 7、R e和R f如权利要求1所定义。
  6. 根据权利要求5所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其化合物具有式(I-7)、(I-8)、(I-9)或(I-10)所示结构：
    Figure PCTCN2020100127-appb-100011
    Figure PCTCN2020100127-appb-100012
    其中，带“*”的碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在；R 1、R 2、R 3、R 5、R 6、R 7、R e和R f如权利要求5所定义。
  7. 根据权利要求6所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其化合物具有式(I-11)或(I-12)所示结构：
    Figure PCTCN2020100127-appb-100013
    其中，R 1、R 2、R 3和R 5如权利要求6所定义。
  8. 根据权利要求1～3或5～7任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 5为H、F、Cl、Br或-CH 3，其中所述-CH 3任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代。
  9. 根据权利要求8所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 5为H、F、-CH 3或-CF 3。
  10. 根据权利要求1～3或5～7任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R e和R f各自独立地为H或F。
  11. 根据权利要求10所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 6和R 7各自独立地为H、F、Cl、Br或-CH 3，其中所述-CH 3任选被1、2或3个独立选自F、Cl、Br和-OH的取代基所取代。
  12. 根据权利要求11所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 6和R 7各自独立地为H、F、Cl、-CH 3或-CF 3。
  13. 根据权利要求10所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 6和R 7连接在一起使结构单元
    Figure PCTCN2020100127-appb-100014
    为
    Figure PCTCN2020100127-appb-100015
  14. 根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R a为H、-CH 3或-CH 2CH 3。
  15. 根据权利要求1～7或14任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 1为-CN、
    Figure PCTCN2020100127-appb-100016
  16. 根据权利要求1～7任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 2为H或-CH 3。
  17. 根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R b为-CH 3或-OCH 3。
  18. 根据权利要求1～7或17任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 3为
    Figure PCTCN2020100127-appb-100017
    Figure PCTCN2020100127-appb-100018
    其中所述
    Figure PCTCN2020100127-appb-100019
    Figure PCTCN2020100127-appb-100020
    任选被1、2或3个独立选自氧代(＝O)、F、Cl、Br、-CH 3或-CH 2CH 3的取代基所取代。
  19. 根据权利要求18所述的化合物、其药学上可接受的盐或其异构体，其中R 3为
    Figure PCTCN2020100127-appb-100021
    Figure PCTCN2020100127-appb-100022
  20. 下式化合物、其药学上可接受的盐或其异构体：
    Figure PCTCN2020100127-appb-100023
    Figure PCTCN2020100127-appb-100024
  21. 下式化合物、其药学上可接受的盐或其异构体：
    Figure PCTCN2020100127-appb-100025
    Figure PCTCN2020100127-appb-100026
  22. 一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1～21任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
  23. 根据权利要求1～21任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐或根据权利要求22所述的药物组合物在制备糜酶(chymase)抑制剂药物中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114671878A (zh) * 2020-12-25 2022-06-28 广东东阳光药业有限公司 取代的含氮双环化合物及其用途

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101505752A (zh) * 2006-06-23 2009-08-12 史密丝克莱恩比彻姆公司 脯氨酸羟化酶抑制剂
CN104395310A (zh) * 2012-05-09 2015-03-04 拜耳药业股份公司 二环取代尿嘧啶及其用途
CN105873919A (zh) * 2013-11-08 2016-08-17 拜耳医药股份有限公司 作为类糜蛋白酶抑制剂的取代的尿嘧啶
CN105980381A (zh) * 2013-11-08 2016-09-28 拜耳医药股份有限公司 取代的尿嘧啶及其用途
WO2018114514A1 (de) * 2016-12-20 2018-06-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Verwendung von chymaseinhibitoren zur behandlung von endometriose, post-operativer fibrose und erkrankungen die durch fibrosebildung gekennzeichnet sind

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3066095A1 (de) * 2013-11-08 2016-09-14 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituierte 1,2,4-triazin-3,5-dione und ihre verwendung als chymase hemmern

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101505752A (zh) * 2006-06-23 2009-08-12 史密丝克莱恩比彻姆公司 脯氨酸羟化酶抑制剂
CN104395310A (zh) * 2012-05-09 2015-03-04 拜耳药业股份公司 二环取代尿嘧啶及其用途
CN105873919A (zh) * 2013-11-08 2016-08-17 拜耳医药股份有限公司 作为类糜蛋白酶抑制剂的取代的尿嘧啶
CN105980381A (zh) * 2013-11-08 2016-09-28 拜耳医药股份有限公司 取代的尿嘧啶及其用途
WO2018114514A1 (de) * 2016-12-20 2018-06-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Verwendung von chymaseinhibitoren zur behandlung von endometriose, post-operativer fibrose und erkrankungen die durch fibrosebildung gekennzeichnet sind

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SARFARAZ AHMAD, FERRARIO CARLOS M: "Chymase Inhibitors for the Treatment of Cardiac Diseases: a Patent Review (2010-2018)", EXPERT OPINION ON THERAPEUTIC PATENTS, vol. 28, no. 11, 10 October 2018 (2018-10-10), pages 755 - 764, XP055771437, ISSN: 1354-3776, DOI: 10.1080/13543776.2018.1531848 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114671878A (zh) * 2020-12-25 2022-06-28 广东东阳光药业有限公司 取代的含氮双环化合物及其用途
WO2022135534A1 (zh) * 2020-12-25 2022-06-30 广东东阳光药业有限公司 取代的含氮双环化合物及其用途
CN114671878B (zh) * 2020-12-25 2023-08-04 广东东阳光药业有限公司 取代的含氮双环化合物及其用途

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