WO2020108500A1 - 一类组蛋白乙酰化酶p300抑制剂及其用途 - Google Patents

一类组蛋白乙酰化酶p300抑制剂及其用途 Download PDF

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霍永旭
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Definitions

  • the invention belongs to the technical field of medicinal chemistry, and specifically relates to a class of histone acetylase p300 inhibitors and their preparation and application.
  • Post-translational modifications of histones such as acetylation, phosphorylation, methylation, ADP-ribosylation, ubiquitination, etc., play an important role in the physiological and pathological processes of eukaryotic organisms.
  • histone acetylation modification has received more and more attention in the field of life science research.
  • Histone acetylation modification has important biological functions in gene transcription regulation, cell differentiation, cell proliferation, cell cycle regulation, and apoptosis.
  • the acetylation modification of histone is accomplished by histone acetyltransferase (HAT, also known as histone acetylase).
  • Histone acetyltransferase catalyzes the transfer of acetyl groups from Acetyl-CoA (Acetyl-CoA) to specific lysine epsilon-N.
  • Acetyl-CoA Acetyl-CoA
  • p300/CBP p300/CBP family
  • nuclear receptor co-activator family TAFII250 family
  • TFIIIC family TFIIIC family.
  • the acetylation state of lysine at histone-specific sites is coordinated and maintained by histone acetylase (histone acetylase, HAT) and histone deacetylase (histone deacetylase, HDAC).
  • histone acetylase histone acetylase, HAT
  • histone deacetylase histone deacetylase
  • HDAC histone deacetylase
  • the acetylation state of histones directly regulates its interaction with DNA, thereby regulating the interaction between related enzymes and DNA during DNA replication, transcription, repair and recombination. If the balance between the two is disrupted, the acetylation state of histones regulated by it will be abnormal, which will seriously affect the life activity of the body and cause diseases such as malignant tumors, heart disease, diabetes and neurodegenerative disorders.
  • histone acetyltransferase (HAT) family p300 has become a research hotspot. Studies have shown that histone acetyltransferase p300 plays an important role in tumorigenesis. The expression of the p300 gene is increased in some tumor cells, and after the p300 gene is knocked out, the proliferation of tumor cells will be inhibited.
  • HDAC inhibitors At present, there are more studies on HDAC inhibitors, and more inhibitors are listed as anti-cancer drugs. However, compared with HDAC, there are few studies on HAT inhibitors, especially drug-like inhibitors with high affinity and high selectivity have not been reported. As one of the two important targets for antagonizing the level of acetylation in the body, the biological significance and research status of HAT provide a valuable opportunity for us to study new cancer treatment targets and develop new drugs.
  • histone acetylase p300 inhibitors Due to the particularity of the biological function of p300/CBP, people's research on HAT mainly focuses on histone acetylase p300 inhibitors. Therefore, the development of histone acetylase p300 inhibitors with high affinity and high selectivity is very important for the treatment of cancer.
  • the object of the present invention is to provide a class of histone acetylase p300 inhibitors and their preparation and application.
  • the present invention provides a compound represented by formula (I) or its stereochemical isomers, solvates or pharmaceutically acceptable salts, or its isotope substitution form:
  • A is selected from O, N, S;
  • Ry is selected from none, H, alkyl, substituted alkyl or alkenyl;
  • Rv, Rw, Rx are independently selected from hydrogen, halogen, cyano, nitro, alkyl, substituted alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, heterocyclyl, substituted heterocyclyl , Aryl, substituted aryl, aromatic heterocyclic, substituted aromatic heterocyclic, substituted amide, substituted guanidino, substituted ureido, amino, substituted amino, alkoxy, substituted alkoxy;
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are independently selected from H, alkyl and halogen; or, among R 1 , R 2 , R 3 and R 4 , R 1 and R 2 are connected to form a ring, R 2 and R 3 is connected to form a ring and/or R 3 and R 4 are connected to form a ring;
  • R 5 is selected from alkyl, alkoxy, amino, substituted amino, amide, substituted amide, ester, carbonyl, heterocyclic, substituted heterocyclic.
  • Rv and Rw are independently selected from hydrogen, halogen, alkyl, and substituted alkyl;
  • Rx is selected from substituted amide, substituted guanidino, substituted heterocyclic, substituted ureido, and amino;
  • R 1 is selected from H, F, and CH 3 ;
  • R 2 is H, F, and CH 3 ; alternatively, R 1 and R 2 are both CH 2 and connected to form a three-membered ring;
  • R 3 is H; or, R 2 is CH 2.
  • R 3 is H and connected into a three-membered ring;
  • R 4 is H;
  • R 5 is heterocyclic group, substituted heterocyclic group or Wherein R 6 is H, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl or substituted cycloalkyl; R 7 is H, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, heterocyclyl, substituted hetero A cyclic group, an aryl group, a substituted aryl group, an aromatic heterocyclic group or a substituted aromatic heterocyclic group; alternatively, R 6 and R 7 are connected to form a hetero ring or a substituted hetero ring.
  • R x is selected from Amino
  • R b is selected from methyl, halomethyl, -YR a , R a is selected from methyl or cyclopropyl, Y is selected from NH or O;
  • Rv and Rw are independently selected from hydrogen, halogen and methyl
  • R 1 is selected from H, F, and CH 3 ;
  • R 2 is H, F, and CH 3 ;
  • R 3 is H; or, R 1 and R 2 are both CH 2 and connected to form a three-membered ring; or, R 2 is CH 2.
  • R 3 is H and connected into a three-membered ring;
  • A is O or S
  • R 6 is H, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl or substituted cycloalkyl
  • R 7 is H, alkyl, substituted alkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, heterocyclyl, substituted heterocyclyl , Aryl, substituted aryl, aromatic heterocyclic group or substituted aromatic heterocyclic group; substituted alkyl, substituted cycloalkyl, substituted heterocyclic group, substituted aryl, substituted aromatic heterocyclic group described in R 6 and R 7
  • the substituents in are each independently selected from halogen, The methyl group, the hydroxyl group, and R h are selected from halogen; alternatively, R 6 and R 7 are connected to form a heterocyclic ring or a substituted heterocyclic ring.
  • the R 6 and R 7 are connected to form a heterocyclic ring or a substituted heterocyclic ring, and the heterocyclic ring and the substituted heterocyclic ring are 4-6 membered rings.
  • the heterocyclic ring or substituted heterocyclic ring formed by the connection of R 6 and R 7 is Substituted or unsubstituted bridged ring, substituted or unsubstituted fused ring, substituted or unsubstituted fused ring; wherein, X is CH 2 , NH, O or S, SO 2 , m, n, s are each independently selected from Integers of 1-5, R c , R d , and R e are each independently selected from hydrogen, halogen, cyano, carboxy, nitro, alkyl, substituted alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, Cycloalkyl, substituted cycloalkyl, heterocyclic group, substituted heterocyclic group, aryl group, substituted aryl group, aromatic heterocyclic group, substituted aromatic heterocyclic group, bridged ring, fused ring or paracyclic ring; R f , R g Halogen
  • the substituents on the bridged ring, fused ring or fused ring are each independently selected from Boc group, fluorinated C 1-6 alkyl group, substituted or unsubstituted heterocyclic group, alkanoyl group, preferably Boc group, Fluoromethyl, -COCH 3 ;
  • R c , R d , and R e are each independently selected from halogen, C 1-6 alkyl, halogenated C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, and halogenated C 1- 6 Alkoxy, hydroxy.
  • heterocyclic ring or substituted heterocyclic ring formed by the connection of R 6 and R 7 is
  • R 8 and R 9 are independently selected from hydrogen, alkyl, substituted alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, substituted ring Alkyl, heterocyclic, substituted heterocyclic, aryl, substituted aryl, aromatic heterocyclic, substituted aromatic heterocyclic;
  • R 0 is none, H or alkoxy; alternatively, R 8 and R 9 are connected to form a fused ring or a bridge ring;
  • R 10 , R 11 , R 12 , R 13 and R 14 are independently selected from hydrogen, halogen and cyanide Group, carboxyl group, nitro group, alkyl group, substituted alkyl group, cycloalkyl group, substituted cycloalkyl group, heterocyclic group, substituted heterocyclic group, aryl group, substituted aryl group, aromatic heterocyclic group, substituted aromatic heterocyclic group; Or, R 10 and R 11 are connected to form a ring;
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 , R 13 , and R 14 are each independently selected from halogen, C 1-6 alkyl, halogenated C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, halogenated C 1-6 alkoxy, hydroxy.
  • X is C or O;
  • R 8 and R 9 are independently selected from hydrogen, alkyl, substituted alkyl, aryl, substituted aryl, aromatic heterocyclic group, and substituted aromatic heterocyclic group;
  • R 10 , R 11 , R 12 , R 13 , and R 14 are each independently selected from hydrogen, cyano, carboxy, alkyl, alkenyl, substituted alkyl, cycloalkyl, substituted cycloalkyl, heterocyclic, substituted Heterocyclic group, aryl group, substituted aryl group, aromatic heterocyclic group, substituted aromatic heterocyclic group; or, when R 10 and R 11 are both alkyl groups, they are connected to form a ring;
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 , R 13 and R 14 are as described above.
  • R 8 and N are connected to the same carbon atom, and are selected from phenyl or substituted phenyl;
  • R 9 is selected from hydrogen, alkyl, and substituted alkyl;
  • R 10 and R 11 are independently selected from hydrogen, C 1-6 alkyl, cyano, carboxy, substituted alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 2-6 alkenyl; or, R 10 and R 11 All are CH 2 and connected into a three-membered ring;
  • R 12 and R 13 are independently selected from hydrogen, methyl, phenyl, substituted phenyl, aromatic heterocyclic group, substituted aromatic heterocyclic group, cycloalkyl and substituted cycloalkyl;
  • R 14 is selected from hydrogen, phenyl ;
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 , R 13 and R 14 are as described above.
  • A is O.
  • Ra is selected from methyl or cyclopropyl
  • Y is selected from NH or O
  • R v and R w are independently selected from hydrogen, halogen and methyl
  • R 1 is selected from H, F, and CH 3 ;
  • R 2 is H, F, and CH 3 ;
  • R 3 is H; or, R 1 and R 2 are both CH 2 and connected to form a three-membered ring; or, R 2 is CH 2.
  • R 3 is H and connected into a three-membered ring;
  • R 10 and R 11 are independently selected from hydrogen, C 1-6 alkyl, cyano, carboxy, substituted C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 2-6 alkenyl, and C
  • the substituent on the 1-6 alkyl group is selected from halogen, hydroxy, C 1-6 alkyl; alternatively, R 10 and R 11 are both CH 2 and connected to form a three-membered ring; preferably, R 10 and R 11 are independently Selected from hydrogen, methyl, ethyl, isopropyl, cyano, carboxyl, halogen substituted methyl, cyclopropyl, vinyl, methoxy substituted methyl, hydroxy substituted methyl; or, R 10 , R 11 are all CH 2 and connected into a three-membered ring;
  • R 12 and R 13 are independently selected from hydrogen, methyl, phenyl, substituted phenyl, aromatic heterocyclic group, substituted aromatic heterocyclic group, cycloalkyl or substituted cycloalkyl; the cycloalkyl is 5 ⁇ 6-membered cycloalkyl;
  • the substituents on the substituted phenyl, substituted aromatic heterocyclic group, and substituted cycloalkyl are each independently selected from halogen, C 1-3 alkyl, halogenated C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy , Halogenated C 1-3 alkoxy, hydroxyl;
  • isotope is a deuterium.
  • the structure of the compound is one of the following structures:
  • the invention also provides a preparation method of the above compound, the method is:
  • A, Ry, Rv, Rw, Rx, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , and R 5 are as shown above, and R 6 and R 7 are as shown above.
  • the temperature of the reaction is 15-30°C and the reaction time is 0.5-2 hours; preferably, the temperature of the reaction is 20°C and the reaction time is 1 hour;
  • the reaction is carried out under the action of DIEA and HATU, the compound of formula IV,
  • the molar ratio of DIEA to HATU is 1:1:3:1.
  • the present invention also provides the use of the above compound or its stereochemical isomers, solvates or pharmaceutically acceptable salts, or isotope substitutions thereof in the preparation of histone acetylase inhibitors.
  • histone acetylase is p300.
  • the histone acetylase inhibitor is a drug for treating cancer, metabolic diseases, neurological diseases and/or inflammation; preferably, the cancer is prostate cancer, leukemia, lymphoma, breast cancer or multiple Myeloma.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition which uses the above-mentioned compound or its stereoisomer, solvate or pharmaceutically acceptable salt, or its isotope substitution form as the active ingredient, plus a pharmaceutically acceptable The preparation of the auxiliary materials.
  • the present invention also provides a combination drug, which contains the above-mentioned compound and anticancer drug for simultaneous or separate administration of unit preparations of the same or different specifications, and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the anti-cancer drug is a CDK4/6 inhibitor; preferably, the CDK4/6 inhibitor is palbociclib.
  • isotopic substitution form refers to a compound obtained by replacing one or more atoms in a compound with its corresponding isotope, for example, hydrogen in the compound is replaced with protium, deuterium, or tritium.
  • the compound prepared by the present invention can effectively inhibit histone acetylase p300, and can effectively inhibit the proliferation of cancer cells (including prostate cancer cells, leukemia cells, lymphoma cells, breast cancer cells, multiple myeloma cells, etc.) It has a very good application prospect in the preparation of histone acetylase p300 inhibitors and drugs for the treatment of cancer.
  • the compound of the present invention is used in combination with a CDK4/6 inhibitor to exert a synergistic effect on inhibiting the proliferation of cancer cells, and has very important value in the preparation of a combined drug.
  • the reagents and test equipment used in the present invention are conventional commercially available reagents and equipment.
  • Example 7 Compound 1-((R)-3'-(2-((1S,4S)-7-azabicyclo[2.2.1]heptane-7-yl)-2-oxoethyl)-2 Synthesis of',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (7)
  • Example 8 Compound 1-((R)-3'-(2-((S)-2-(4-fluoro-2-methylphenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl ) Synthesis of 2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (8)
  • Int 8-1 (1.47g, 5mmol) was dissolved in 15mL DCM, added 3.7mL TFA, stirred at room temperature, TLC detection, after the completion of the reaction, the pH was adjusted to neutral with saturated aqueous sodium bicarbonate solution, with DCM (10mL ⁇ 3 ) Extraction, dried over anhydrous sodium sulfate, and spin-dried to obtain Int. 8-2 (0.79 g; 90%), mass spectrum: 178 (M+H + ).
  • Int. 8-2 (0.79g; 4.5mmol) was added to a reaction flask containing 8mL of methanol, and sodium borohydride (0.68g; 18mmol) was added in portions with stirring at room temperature. After the addition, stirring was continued at room temperature and TLC detection. After the reaction was completed, the reaction solution was poured into water, 30mL (10mL ⁇ 3) EA was extracted, the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and separated by column chromatography to obtain Int. (M+H + ).
  • Example 11 Compound 1-((1R)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(2-(o-tolyl)pyrrolidin-1-yl)ethyl) Of -2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea(11)
  • Example 12 Compound 1-methyl-3-((1R)-3'-(2-(octahydroquinolin-1-(2H)-yl)-2-oxoethyl)-2',4' Of 2-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)urea (12)
  • Example 13 Compound 1-((1R)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(2-(2-(trifluoromethoxy)phenyl)pyrrolidine -1-yl)ethyl)-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (13)
  • Example 14 Compound 1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-fluorophenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxo Synthesis of ethyl)-2',4'-dioxo 2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (14)
  • Example 21 Compound 1-(R)-3'-(2-((5R)-2-(4-fluoro-2-methylphenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2- Oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (21) synthesis
  • Int 21-1 (2.59g, 8.5mmol) was dissolved in 26mL DCM, added 2.6mL TFA, stirred at room temperature, TLC detection, after the completion of the reaction, the pH was adjusted to neutral with saturated aqueous sodium bicarbonate solution, with DCM (10mL ⁇ 3) Extraction, dried over anhydrous sodium sulfate, and spin-dried to obtain Int 21-2 (1.46 g; 90%), mass spectrum: 192 (M+H + ).
  • Int 21-2 (1.46 g; 7.65 mmol) was added to a reaction flask containing 8 mL of methanol, and sodium borohydride (1.16 g; 30.6 mmol) was added in portions with stirring at room temperature. After the addition, stirring was continued at room temperature and TLC detection. After the reaction was completed, the reaction solution was poured into water, 30 mL (10 mL ⁇ 3) EA was extracted, the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and separated by column chromatography to obtain Int 21-3 (1.35 g; 91%), mass spectrum: 194 ( M+H + ).
  • Example 25 Compound 1-((R)-3'-(2-2-(4-fluoro-2-(trifluoromethyl)phenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2- Oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (25) synthesis
  • Example 39 Compound 1-((R)-3'-(2-(5-(4-fluorophenyl)-2,2-dimethylpyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl) Of -2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (39)
  • Example 43 Compound 1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-ethyl-5-(4-fluorophenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxo Synthesis of ethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (43)
  • Example 57 Compound 1-((R)-3'-(2-(2-(2-ethyl-4-fluorophenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl Yl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (57)
  • Example 74 Compound 1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-fluorophenyl)-5-(trifluoromethyl)pyrrolidin-1-yl)- 2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (74 )Synthesis
  • Dissolve bromomethyltriphenylphosphine (35.6g, 100mmol) in THF (300mL), protect with nitrogen, add t-BuOK (11.2g, 100mmol) in batches under ice-water bath conditions, and react at this temperature after addition Get this solution for an hour and set aside.
  • Dissolve SM 29 (21 g, 100 mmol) in THF (300 mL), cool in an ice-water bath, drop the spare solution into the THF solution of SM 29, and continue the reaction for half an hour after the ice-water bath is dropped.
  • the reaction solution was poured into water (1 L), and extracted three times with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product.
  • Diiodomethane (26.8g, 100mmol) was dissolved in DCM (50mL), protected by nitrogen, cooled to -70°C, and an organic solution of diethylzinc (100mL, 1N in?) was dropped into it, then at -45
  • the reaction was carried out at °C for two hours, then a solution of trichloroacetic acid (16.3g, 100mmol) in dichloromethane was dropped into it, and then the reaction was carried out at -15°C for two hours, and finally The methyl chloride solution was dropped into it, and then reacted at room temperature for 12 hours.
  • the reaction solution was poured into water and extracted three times with dichloromethane.
  • Example 98 Compound 1-(3'-(2-(N-(4-fluorobenzyl)-N-((S)-1,1,1-trifluoroprop-2-yl))-2-oxo Ethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[cyclopropane-1,1'-indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3- Synthesis of methyl urea (98)
  • Example 101 Compound 1-((R)-(2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-((S)-3-phenylpyrrolidin-1-yl)ethane Yl)-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (101)
  • Example 103 Compound 1-((R)-(3'-(2-((1S,4R)-2-oxa-5-azabicyclo[2.2.1]hept-5-yl)-2-oxo Of ethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (103)
  • the intermediate Int 1-15 (30 mg, 90 ⁇ mol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (35 mg, 270 ⁇ mol) and HATU (41 mg, 108 ⁇ mol) were added, followed by SM 36 (15 mg, 0.1 mmol), and stirred at room temperature for 16 hours .
  • Water (5 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 103 (20 mg) with a yield of 50%. Mass spectrum: 415 (M+H + ).
  • Example 105 Compound (R)-N-(3-hydroxy-2,2,4,4-tetramethylcyclobutyl)-2-(5-(3-methylureido)-2',4' Of 2-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazole]-3'-yl)acetamide (105)
  • Int 1-15 (30 mg, 90 ⁇ mol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (35 mg, 270 ⁇ mol) and HATU (41 mg, 108 ⁇ mol) were added, followed by SM 37 (19 mg, 135 ⁇ mol), and stirred at room temperature for 16 hours. Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 105 (17 mg) with a yield of 65%. Mass spectrum: 459 (M+H + ).
  • Example 106 Compound 1-((1R)-(2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(2-phenylazetidin-1-yl)ethyl) Synthesis of -2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (106):
  • Example 108 Compound 1-((1R)-(3'-(2-((4S)-2-(tert-butyl)-4-phenyloxazolidin-3-yl)-2-oxoethyl ) Synthesis of 2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (108)
  • Example 111 Compound 1-methyl-3-((R)-(3'-(2-(2-(1-methyl-1H-imidazol-2-yl)pyrrolidin-1-yl)-2- Synthesis of oxoethyl)-2',4'dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)urea (111)
  • Int 111-1 (1.34g, 5mmol) was dissolved in 13mL DCM, added 1.3mL TFA, stirred at room temperature, TLC detection, after the reaction was completed, the pH was adjusted to neutral with saturated aqueous sodium bicarbonate solution, with DCM (10mL ⁇ 3) Extraction, drying over anhydrous sodium sulfate, and spin-drying to obtain Int 111-2 (0.67 g; 90%), mass spectrum: 150 (M+H + ).
  • Int 111-2 (0.67g; 4.5mmol) was added to a reaction flask containing 6mL of methanol, and sodium borohydride (0.68g; 18mmol) was added in portions with stirring at room temperature. After the addition, stirring was continued at room temperature and TLC detection was performed. After the reaction was completed, the reaction solution was poured into water, 30 mL (10 mL ⁇ 3) EA was extracted, the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and separated by column chromatography to obtain Int 111-3 (0.61 g; 90%), mass spectrum: 152 ( M+H + ).
  • Int 1-15 (30 mg, 90 ⁇ mol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (35 mg, 270 ⁇ mol) and HATU (41 mg, 108 ⁇ mol) were added, followed by Int 111-3 (20.3 mg, 135 ⁇ mol), and stirred at room temperature for 16 hours .
  • Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 111 (17 mg, yield 63%). Mass spectrum: 467 (M+H + ).
  • Example 112 Compound 1-((1R)-(3'-(2-(2-(Benzo[d][1,3]dioxol-4-yl)pyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea( 112) Synthesis
  • Int 1-15 (30 mg, 90 ⁇ mol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (35 mg, 270 ⁇ mol) and HATU (41 mg, 108 ⁇ mol) were added, followed by Int 112-3 (25.8 mg, 135 ⁇ mol), and stirred at room temperature for 16 hours .
  • Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 112 (17 mg, yield 61%). Mass spectrum: 507 (M+H + ).
  • Example 114 Compound N-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-fluorophenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxo Synthesis of ethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)acetamide (114)
  • Example 201 Compound 1-(R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-Difluorophenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2- Oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (201) synthesis
  • Example 205 Compound 1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(3,4,5-trifluorophenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea( 205) Synthesis
  • Example 209 Compound 1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4,4-didifluorocyclohexyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)- 2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (209 )Synthesis
  • Int 209-1 (25.6 g; 85 mmol) was dissolved in THF (250 mL), NaH (5.6 g; 60%; 85 mmol) was added and stirred at room temperature for 30 minutes, and Int 209-2 (18.2 g, 100 mmol) in THF was added dropwise The solution (182 mL) was reacted at room temperature for 4 hours. The reaction solution was poured into ice water (250 mL), extracted twice with ethyl acetate, and the organic phases were combined, washed with saturated brine and dried over anhydrous sodium sulfate. After concentration, a crude product was obtained. After column chromatography, an oily product, Int 209-3 (34.3 g, 90%), was obtained. Mass spectrum: 449 (M+H + ).
  • Int 209-4 (15.4 g, 62 mmol) was added to a mixed solvent of water/methanol (1/10, 15 mL), lithium hydroxide monohydrate (13.0 g; 310 mmol) was added and stirred at room temperature, and monitored by TLC. After the reaction was completed, most of the solvent was distilled off under reduced pressure, the pH was adjusted to 2-3 with HCl (2N) solution, extracted with DCM (100 mL ⁇ 3), the organic phases were combined, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and reduced The solvent was removed by autoclaving to obtain the product Int. 209-5 (12.5 g, 92%). Mass spectrum: 221 (M+H + ).
  • Int 209-6 (14.4g, 45mmol) and Et 3 SiH (17.21g, 148.5mmol) were added to DCM (150mL), cooled to -70°C under nitrogen protection, and a solution of TiCl 4 in THF (99ml, 1M, 99mmol), control the reaction temperature below -65 °C, after the dropwise addition is completed, naturally warm to room temperature and stir, TLC monitoring. After the reaction was completed, it was washed with saturated NaHCO 3 solution, saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and the product Int 209-7 (13.8 g, 95%) distilled under reduced pressure. Mass spectrum: 324 (M+H + ).
  • Int 209-8 (13.9 g, 40 mmol) was dissolved in t-BuOH (70 mL), sodium tert-butoxide (7.68 g, 80 mmol) was added, stirred at 45°C, and monitored by TLC. After the reaction was completed, a part of the solvent was removed, water (70 mL) was added, extracted with DCM (50 mL ⁇ 3), washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and distilled under reduced pressure to obtain Int 209-9 (11.6 g, 95%). Mass spectrum: 306 (M+H + ).
  • Int 209-9 (11.6 g, 38 mmol) was dissolved in THF (120 mL), HCl (1N; 12 mL) was added, heated to reflux, and monitored by TLC. After the reaction, the pH was adjusted to 7-8 with saturated NaHCO 3 solution, extracted with DCM (50mL ⁇ 3), the organic phases were combined, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and column chromatography to obtain the product Int 209-10 (7.37 g, 95%). Mass spectrum: 204 (M+H + ).
  • Int 209-11 (303mg, 1mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (3mL), after cooling to zero degree in an ice water bath, a solution of methylmagnesium bromide in tetrahydrofuran (1M in THF; 1mL) was added dropwise, and the temperature was raised to room temperature and stirred. TLC monitoring. After the reaction was completed, the reaction solution was poured into saturated aqueous ammonium chloride solution (6 mL), extracted with ethyl acetate (5 mL ⁇ 3), the organic phases were combined, washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and distilled under reduced pressure to obtain the product Int 209-12 (223 mg, 70%). Mass spectrum: 320 (M+H + ).
  • Example 212 Compound 1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4,4-Difluorocyclohexyl)-5-ethyl-pyrrolidin-1-yl)- 2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (212 )Synthesis
  • Int 209-11 (303 mg, 1 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (3 mL), cooled to 0°C in an ice water bath, and a solution of methylmagnesium bromide in tetrahydrofuran (1 M in THF; 1 mL) was added dropwise, and the mixture was naturally heated to room temperature and stirred. TLC monitoring.
  • Example 217 Compound 1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(2,4-difluorophenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2 -Oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (217) Synthesis
  • Example 300 Compound (R)-1-(2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(7-(trifluoromethyl)-3,4-dihydroquinoline -1(2H)-yl)ethyl)-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (300)
  • Example 302 Compound (R)-1-methyl-3-(3'-(2-(6-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-3,4-dihydroquinoline- 1(2H)-yl)-2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl) Synthesis of urea (302)
  • Example 304 Compound (R)-1-(2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(5H-pyrrolo[3,4-b]pyridine-6(7H) -Yl)ethyl)-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (304)
  • Example 306 Compound 1-((R)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-((R)-2-phenylpyrrolidin-1-yl)ethyl ) Synthesis of 2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (306)
  • Example 308 Compound 2-(5-(3,5-Dimethylisoazol-4-yl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[cyclopropane-indene-1, 5'-oxazole)-3'-yl)-N-(4-fluorobenzyl)-N-((S)-1,1,1-trifluoropropan-2-yl)acetamide (308) synthesis
  • Example 309 Compound 1-((S)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-((R)-2-phenylpyrrolidin-1-yl)ethyl ) Synthesis of 2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (309)
  • Example 310 Compound 1-((S)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-((S)-2-phenylpyrrolidin-1-yl)ethyl ) Synthesis of 2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (310)
  • Example 311 Compound (S)-1-(3'-(2-(3,4-Dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)-2-oxoethyl)-2',4'- Synthesis of Dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (311)
  • Example 315 Compound 1-((S)-3'-(2-((1R,4R)-2-oxa-5-azabicyclo[2.2.1]hept-5-yl)-2-oxo Synthesis of ethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (315)
  • Example 317 Compound (S)-1-(2',4'-dioxo-3'-((5-phenyl-1,3,4-oxadiazol-2-yl)methyl)-2 Of 1,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (317)
  • Example 318 Compound 1-((1R)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(2-m-methylphenyl)-pyrrolidin-1-yl)ethane ))-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (318)
  • Example 319 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(2-(2-Methoxyphenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2',4' -Dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (319)
  • Example 322 Compound 1-((1R)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(2-phenylpiperidin-1-yl)ethyl)-2, Synthesis of 3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (322)
  • Example 323 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(2-fluorophenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2',4'-di Synthesis of Oxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (323)
  • Example 324 Compound 1-((1R)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(2-o-methylphenyl)pyrrolidin-1-yl)ethyl ) Synthesis of 2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (324)
  • Example 328 Compound 1-(3'-(2-((2S)-2-(2-oxa-5-azabicyclo[2.2.1]heptane-5-carbonyl)pyrrolidin-1-yl) -2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea( 328) Synthesis
  • Example 330 Compound 1-(3'-(2-(2-(1H-imidazol-2-yl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2',4'-dioxo Synthesis of -2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (330)
  • Int 330-1 (1.52g, 6mmol) was dissolved in 15mL DCM, added 3.7mL TFA, stirred at room temperature, TLC detection, after the reaction was completed, the pH was adjusted to neutral with saturated aqueous sodium bicarbonate solution, with DCM (10mL ⁇ 3) Extraction, dried over anhydrous sodium sulfate, and spin-dried to obtain Int. 330-2 (0.72 g; 89%), mass spectrum: 136 (M+H + ).
  • Int. 330-2 (0.72g; 5.34mmol) was added to a reaction flask containing 7mL of methanol, and sodium borohydride (0.68g; 18mmol) was added in portions with stirring at room temperature. After the addition, stirring was continued at room temperature and TLC detection. After the reaction was completed, the reaction solution was poured into water, 30 mL (10 mL ⁇ 3) EA was extracted, the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and separated by column chromatography to obtain Int. 330-3 (0.37 g; 50%), mass spectrum: 138 (M+H + ).
  • the intermediate Int. 1-10 (30 mg, 0.09 mmol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (35 mg, 0.027 mmol) and HATU (41 mg, 0.011 mmol) were added, followed by the raw material Int. 330-3 (1.5 eq ), stirred at room temperature for 16 hours. Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 330, 25 mg, and a yield of 61%. Mass spectrum: 453 (M+H + ).
  • Example 331 Compound 1-((R)-3'-(2-((S)-2-cyanopyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2',4'-diox Synthesis of 2,2-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (331)
  • Example 332 Compound 1-((1R)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(2-(pyridin-2-yl)pyrrolidin-1-yl)ethane ))-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (332)
  • Example 333 Compound 1-methyl-3-((R)-3'-(2-((S)-2-(3-methyl-1H-pyrazol-5-yl)pyrrolidin-1-yl )-2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)urea (333)
  • Example 334 Compound 1-((1R)-2',4'-dioxo-3'-(2-oxo-2-(2-(pyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)ethane ))-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (334)
  • Example 335 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(3-methoxyphenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2',4' -Synthesis of -dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (335)
  • Example 336 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(2-(2-Bromophenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2',4'-di Synthesis of oxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (336)
  • Example 337 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(4-fluoro-2-methoxyphenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxo Synthesis of ethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (337)
  • Int 337-1 (2.28g, 7mmol) was dissolved in DCM (22mL), TFA (3.7mL) was added, stirred at room temperature, TLC detection, after the reaction was completed, the pH was adjusted to neutrality with saturated aqueous sodium bicarbonate solution, using Extracted with DCM (10 mL ⁇ 3), dried over anhydrous sodium sulfate, and spin-dried to obtain Int 337-2 (0.87 g; 90%), mass spectrum: 208 (M+H + ).
  • Int. 337-2 (0.87g; 4.2mmol) was added to a reaction flask containing 9mL of methanol, and sodium borohydride (0.68g; 18mmol) was added in portions with stirring at room temperature. After the addition, stirring was continued at room temperature and TLC detection. After the reaction was completed, the reaction solution was poured into water, 30 mL (10 mL ⁇ 3) EA was extracted, the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and separated by column chromatography to obtain Int. 337-3 (0.70 g; 80%), mass spectrum: 210 (M+H + ).
  • the intermediate Int 1-15 (30 mg, 0.09 mmol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (35 mg, 0.027 mmol) and HATU (41 mg, 0.011 mmol) were added, followed by the raw material Int 337-3 (28.2 mg, 0.135) mmol) and stirred at room temperature for 16 hours. Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 337 (36 mg) with a yield of 76%. Mass spectrum: 525 (M+H + ).
  • Example 338 Compound 1-((R)-3'-(2-(2-(2-(2-Methoxyphenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2',4' Of 2-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (338)
  • Example 340 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(4-fluoro-2-methoxyphenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2 Synthesis of',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (340)
  • Example 341 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(2,4-dimethoxyphenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2' Of 4,4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (341)
  • Example 347 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(4-fluoro-2-methylphenyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2' Of 4,4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (347)
  • Int 347-1 (2.36g, 8mmol) was dissolved in DCM (23mL), TFA (2.3mL) was added, stirred at room temperature, TLC detection, after the reaction was completed, the pH was adjusted to neutral with saturated aqueous sodium bicarbonate solution, using Extracted with DCM (10 mL ⁇ 3), dried over anhydrous sodium sulfate, and spin-dried to obtain Int 347-2 (1.2 g, 85%), mass spectrum: 178 (M+H + ).
  • Int 347-2 (1.2g, 6.8mmol) was added to a reaction flask containing methanol (12mL), sodium borohydride (0.90g, 23.8mmol) was added in portions with stirring at room temperature, after the addition was continued stirring at room temperature, TLC Detection. After the reaction was completed, the reaction solution was poured into water, 30mL (10mL ⁇ 3) EA was extracted, the organic phases were combined, dried over anhydrous sodium sulfate, and separated by column chromatography to obtain Int 347-3 (0.97g, 80%), mass spectrum: 180 ( M+H + ).
  • the intermediate Int 1-15 (30 mg, 0.09 mmol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (35 mg, 0.027 mmol) and HATU (41 mg, 0.011 mmol) were added, followed by Int 347-3 (24 mg, 0.135 mmol) , Stir at room temperature for 16 hours. Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 347 (32 mg) in 72% yield. Mass spectrum: 495 (M+H + ).
  • Example 348 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(4-fluorophenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-2' Of 4,4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (348)
  • Example 349 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2,2-bis(4-methoxyphenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl ))-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (349)
  • Dissolve SM 71 (1.9g, 10mmol) in dry tetrahydrofuran (50mL), replace with nitrogen, slowly drop n-butyllithium (10mL, 1M in hexane) at -78°C, stir for 30 minutes Tert-Butyl-5-oxopyrrolidine-1-carboxylate (2g, 10mmol) was slowly added dropwise and stirred for 30 minutes. Saturated aqueous ammonium chloride solution was added, extracted with ethyl acetate, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated.
  • Example 350 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(4-Methoxyphenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)- Synthesis of 2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (350)
  • Example 351 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(4-chloro-2-methylphenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl Yl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (351)
  • Dissolve SM 72 (2.1 g, 10 mmol) in dry tetrahydrofuran (50 mL), replace with nitrogen, slowly drop n-butyllithium (10 mL, 1 M in hexane) at -78°C, stir for 30 minutes, remove 2-methyl Tert-Butyl-5-oxopyrrolidine-1-carboxylate (2g, 10mmol) was slowly added dropwise and stirred for 30 minutes. Saturated aqueous ammonium chloride solution was added, extracted with ethyl acetate, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated.
  • Example 352 Compound 1-methyl-3-((1R)-3'-(2-(2-methyl-5-(2-methyl-4-(trifluoromethyl)phenyl)pyrrolidine- 1-yl)-2-oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)urea (352 )Synthesis
  • Example 353 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(4-fluoro-2-methylphenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl ))-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (353)
  • Int 353-1 (2.63g, 8.5mmol) was dissolved in DCM (23mL), TFA (2.3mL) was added, stirred at room temperature, TLC detection, after the reaction was completed, the pH was adjusted to neutral with saturated aqueous sodium bicarbonate, It was extracted with DCM (10 mL ⁇ 3), dried over anhydrous sodium sulfate, and spin-dried to obtain Int 353-2 (1.41 g), yield 87%, mass spectrum: 192 (M+H + ).
  • the intermediate Int 1-15 (30 mg, 0.09 mmol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (35 mg, 0.027 mmol) and HATU (41 mg, 0.011 mmol) were added, followed by the raw material Int 353-3 (26 mg, 0.135 mmol) ), stirred at room temperature for 16 hours. Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 353 (37 mg) with a yield of 81%. Mass spectrum: 509 (M+H + ).
  • Example 354 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(2-(2-Bromo-4-fluorophenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl ) Synthesis of 2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (354)
  • the intermediate Int 1-15 (33 mg, 0.1 mmol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (39 mg, 0.3 mmol) and HATU (38 mg, 0.1 mmol) were added, followed by the raw material Int 354-3 (27 mg, 0.1 mmol) ), stirred at room temperature for 16 hours. Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 354 (29 mg) with a yield of 50%. Mass spectrum: 573,575 (M+H + ).
  • Example 355 Compound 1-(3'-(2-(9-acetyl-1,9-diazaspiro[5.5]undec-1-yl)-2-oxoethyl)-2', Synthesis of 4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (355)
  • the intermediate Int 1-15 (33 mg, 0.1 mmol) was contained in DMF (1 mL), DIEA (39 mg, 0.3 mmol) and HATU (38 mg, 0.1 mmol) were added, followed by SM 75 (24 mg, 0.1 mmol), room temperature Stir for 16 hours. Water (10 mL) was added to the reaction solution, and extracted twice with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine and concentrated to obtain a crude product. Column chromatography gave an off-white solid product 355 (26 mg) with a yield of 50%. Mass spectrum: 512 (M+H + ).
  • Example 356 Compound 1-((1R)-3'-(2-(2-(4-fluoro-2-(trifluoromethyl)phenyl)-5-methylpyrrolidin-1-yl)-2 -Oxoethyl)-2',4'-dioxo-2,3-dihydrospiro[indene-1,5'-oxazolidine]-5-yl)-3-methylurea (356) Synthesis

Abstract

一类组蛋白乙酰化酶p300抑制剂及其用途，属于药物化学技术领域。一类式(Ⅰ)所示化合物、或其立体化学异构体，或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，能够抑制组蛋白乙酰化酶p300的活性，能够抑制多种肿瘤细胞的增殖活性。

Description

一类组蛋白乙酰化酶p300抑制剂及其用途 技术领域
本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一类组蛋白乙酰化酶p300抑制剂及其制备和应用。
背景技术
组蛋白的翻译后修饰，如乙酰化、磷酸化、甲基化、ADP-核糖基化、泛素化等在真核生物体的生理和病理过程中起着很重要的作用。其中，组蛋白乙酰化修饰在生命科学研究领域受到越来越多的关注。组蛋白乙酰化修饰在基因转录调控、细胞分化、细胞增殖、细胞周期调控、细胞凋亡等方面具有重要的生物功能。组蛋白的乙酰化修饰，是由组蛋白乙酰化转移酶(HAT，又称组蛋白乙酰化酶)完成的。组蛋白乙酰化转移酶催化乙酰基从乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)到特异的赖氨酸epsilon-N上的转移。至今已有多个组蛋白乙酰化转移酶的结构被确定并公开。根据序列保守性与分布位置可以分为至少六个大的家族：Gcn5/PCAF家族，MYST家族，p300/CBP家族，细胞核受体辅激活因子家族，TAFII250家族和TFIIIC家族等。
组蛋白特异位点的赖氨酸的乙酰化状态是由组蛋白乙酰化酶(histone acetylase,HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)协调维持的。组蛋白的乙酰化状态直接调控着其与DNA之间的相互作用，从而调控着DNA复制、转录、修复和重组过程中相关酶与DNA的相互作用。如果二者的平衡被破坏，受其调控的组蛋白的乙酰化状态出现异常，会严重影响机体的生命活动，导致疾病，如恶性肿瘤，心脏病，糖尿病和神经退行性紊乱等。
目前，在组蛋白乙酰化转移酶(HAT)家族中，p300成为研究的一个热点。有研究表明组蛋白乙酰化转移酶p300在肿瘤的发生中发挥着重要的作用，p300基因在一些肿瘤细胞中的表达升高，而p300基因敲除后，肿瘤细胞的增殖会受到抑制。
目前，针对HDAC抑制剂的研究较多，更有抑制剂作为抗癌药物上市。但是与HDAC相比，目前对HAT的抑制剂的研究很少，尤其是具有高亲和力和高选择性的类药型抑制剂尚未报导。作为体内平衡乙酰化水平的两种功能拮抗的重要靶点之一，HAT的生物学意义及研究现状为我们研究新的癌症治疗靶点、研发新型药物提供了宝贵的契机。
由于p300/CBP生物功能的特殊性，人们对HAT的研究主要集中在组蛋白乙酰化酶p300抑制剂上面。因此，研制出具有高亲和力和高选择性的组蛋白乙酰化酶p300抑制剂对治疗癌症具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一类组蛋白乙酰化酶p300抑制剂及其制备和应用。
本发明提供了一种式(Ⅰ)所示化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式：
Figure PCTCN2019121086-appb-000001
其中A选自O、N、S；Ry选自无、H、烷基、取代烷基或者烯基；
Rv、Rw、Rx分别独立地选自氢、卤素、氰基、硝基、烷基、取代烷基、烯基、炔基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基、取代酰胺基、取代胍基、取代脲基、氨基、取代氨基、烷氧基、取代烷氧基；
R 1、R 2、R 3、R 4分别独立地选自H、烷基、卤素；或者，R 1、R 2、R 3、R 4中，R 1和R 2连接成环、R 2和R 3连接成环和/或R 3和R 4连接成环；
R 5选自烷基、烷氧基、氨基、取代氨基、酰胺基、取代酰胺基、酯基、羰基、杂环基、取代杂环基。
进一步地，
Rv、Rw分别独立地选自氢、卤素、烷基、取代烷基；Rx选自取代酰胺基、取代胍基、取代杂环基、取代脲基、氨基；
R 1选自H、F、CH 3；R 2为H、F、CH 3；或者，R 1、R 2均为CH 2并连接成三元环；R 3为H；或者，R 2为CH 2、R 3为H并连接成三元环；R 4为H；
R 5为杂环基、取代杂环基或
Figure PCTCN2019121086-appb-000002
其中，R 6为H、烷基、取代烷基、环烷基或取代环烷基；R 7为H、烷基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基或取代芳杂环基；或者，R 6、R 7连接成为杂环或取代杂环。
进一步地，
所述化合物的结构如式II所示：
Figure PCTCN2019121086-appb-000003
其中，R x选自
Figure PCTCN2019121086-appb-000004
氨基、
Figure PCTCN2019121086-appb-000005
R b选自甲基、卤代甲基、-YR a，R a选自甲基或环丙基，Y选自NH或O；
Rv、Rw分别独立地选自氢、卤素、甲基；
R 1选自H、F、CH 3；R 2为H、F、CH 3；R 3为H；或者，R 1、R 2均为CH 2并连接成三元环；或者，R 2为CH 2、R 3为H并连接成三元环；
A为O或S；
R 6为H、烷基、取代烷基、环烷基或取代环烷基；R 7为H、烷基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基或取代芳杂环基；R 6、R 7中所述取代烷基、取代环烷基、取代杂环基、取代芳基、取代芳杂环基中的取代基各自独立地选自卤素、
Figure PCTCN2019121086-appb-000006
甲基、羟基，R h选自卤素；或者，R 6、R 7连接成为杂环或取代杂环。
进一步地，
所述R 6、R 7连接成为杂环或取代杂环，所述杂环、取代杂环为4～6元环。
进一步地，
所述R 6、R 7连接形成的杂环或取代杂环为
Figure PCTCN2019121086-appb-000007
Figure PCTCN2019121086-appb-000008
取代或未取代的桥环、取代或未取代的稠环、取代或未取代的并环；其中，X为CH 2、NH、O或S、SO 2，m、n、s各自独立地选自1-5的整数，R c、R d、R e各自独立地选自氢、卤素、氰基、羧基、硝基、烷基、取代烷基、烷氧基、烯基、炔基、
Figure PCTCN2019121086-appb-000009
环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基、桥环、稠环或并环；R f、R g为卤素；
所述桥环、稠环或并环上的取代基各自独立地选自Boc基团、氟代C 1-6烷基、取代或未取代的杂环基、烷酰基，优选为Boc基团、氟代甲基、
Figure PCTCN2019121086-appb-000010
Figure PCTCN2019121086-appb-000011
-COCH 3；
所述R c、R d、R e上的取代基各自独立地选自卤素、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基。
进一步地，
所述R 6、R 7连接形成的杂环或取代杂环为
Figure PCTCN2019121086-appb-000012
其中，X为C、N、O或S、SO 2；R 8、R 9分别独立地选自氢、烷基、取代烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基；
R 0为无、H或烷氧基；或者，R 8、R 9连接形成稠环或桥环；R 10、R 11、R 12、R 13、R 14分别独立地选自氢、卤素、氰基、羧基、硝基、烷基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基；或者，R 10、R 11连接成环；
所述R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14上的取代基各自独立地选自卤素、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基。
进一步地，
X为C或O；R 8、R 9分别独立地选自氢、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基；
R 10、R 11、R 12、R 13、R 14分别独立地选自氢、氰基、羧基、烷基、烯基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基；或者，R 10、R 11均为烷基时连接成环；
所述R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14上的取代基如上所述。
进一步地，
R 8与N连接在同一碳原子上，且选自苯基或取代苯基；R 9选自氢、烷基、取代烷基；
R 10、R 11分别独立地选自氢、C 1-6烷基、氰基、羧基、取代烷基、C 3-6环烷基、C 2-6烯基；或者，R 10、R 11均为CH 2并连接成三元环；
R 12、R 13分别独立地选自氢、甲基、苯基、取代苯基、芳杂环基、取代芳杂环基、环烷基以及取代环烷基；R 14选自氢、苯基；
所述R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14上的取代基如上所述。
进一步地，
A为O。
进一步地，
所述化合物的结构如式III所示：
Figure PCTCN2019121086-appb-000013
其中，Ra选自甲基或环丙基；
Y选自NH或O；
R v、R w分别独立地选自氢、卤素、甲基；
R 1选自H、F、CH 3；R 2为H、F、CH 3；R 3为H；或者，R 1、R 2均为CH 2并连接成三元环；或者，R 2为CH 2、R 3为H并连接成三元环；
R 10、R 11分别独立地选自氢、C 1-6烷基、氰基、羧基、取代C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 2-6烯基，所示C 1-6烷基上的取代基选自卤素、羟基、C 1-6烷基；或者，R 10、R 11均为CH 2并连接成三元环；优选地，R 10、R 11分别独立地选自氢、甲基、乙基、异丙基、氰基、羧基、卤素取代的甲基、环丙基、乙烯基、甲氧基取代的甲基、羟基取代的甲基；或者，R 10、R 11均为CH 2并连接成三元环；
R 12、R 13分别独立地选自氢、甲基、苯基、取代苯基、芳杂环基、取代芳杂环基、环烷基或取代环烷基；所述环烷基为5～6元环烷基；
所述取代苯基、取代芳杂环基、取代环烷基上的取代基各自独立地选自卤素、C 1-3烷基、卤代C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷氧基、羟基；
所述同位素替代形式为氘代物。
进一步地，
所述化合物结构为以下结构之一：
Figure PCTCN2019121086-appb-000014
Figure PCTCN2019121086-appb-000015
Figure PCTCN2019121086-appb-000016
Figure PCTCN2019121086-appb-000017
Figure PCTCN2019121086-appb-000018
Figure PCTCN2019121086-appb-000019
本发明还提供了上述化合物的制备方法，所述方法为：
Figure PCTCN2019121086-appb-000020
以式IV所示化合物与
Figure PCTCN2019121086-appb-000021
为原料，反应，即得；
其中，A、Ry、Rv、Rw、Rx、R 1、R 2、R 3、R 4、R 5如上所示，R 6、R 7如上所示。
进一步地，
所述反应的温度为15～30℃，反应时间为0.5～2小时；优选地，所述反应的温度为20℃，反应时间为1小时；
所述反应是在DIEA和HATU的作用下进行的，所述式IV所示化合物、
Figure PCTCN2019121086-appb-000022
DIEA和HATU的摩尔比为1：1：3：1。
本发明还提供了上述化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，在制备组蛋白乙酰化酶抑制剂中的用途。
进一步地，所述组蛋白乙酰化酶为p300。
进一步地，所述组蛋白乙酰化酶抑制剂是治疗癌症、代谢类疾病、神经类疾病和/或炎症的药物；优选地，所述癌症为前列腺癌、白血病、淋巴瘤、乳腺癌或多发性骨髓瘤。
本发明还提供了一种药物组合物，它是以上述的化合物或其立体异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
本发明还提供了一种联合用药物，它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的上述的化合物和抗癌药物，以及药学上可接受的载体。
进一步地，所述抗癌药物为CDK4/6抑制剂；优选地，所述CDK4/6抑制剂为palbociclib。
本发明中，“同位素替代形式”是指化合物中的一个或两个以上的原子被其对应的同位素替换后得到的化合物，比如化合物中的氢被替换为氕、氘或氚。
实验证明，本发明制得的化合物能够有效抑制组蛋白乙酰化酶p300，能够有效抑制癌细胞(包括前列腺癌细胞、白血病细胞、淋巴瘤细胞、乳腺癌细胞、多发性骨髓瘤细胞等)的增殖，在制备组蛋白乙酰化酶p300抑制剂和治疗癌症的药物上具有非常好的应用前景。同时，本发明的化合物与CDK4/6抑制剂联用，对抑制癌细胞增殖发挥了协同增效的作用，在制备联合用药物中具有非常重要的价值。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
具体实施方式
以下通过实施例和试验例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
除特别标注外，本发明所用试剂和测试设备均为常规的市售试剂和设备。中间体化合物(R)-5-溴-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 1-4)和(S)-5-溴 -2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 1-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000023
5-溴-1-((三甲基甲硅烷基)氧基)-2,3-二氢-1H-茚-1-腈(Int 1-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000024
于100mL的反应瓶中加入三氯化铝(1.26g，9.4mmol)，5-溴茚酮(10g，47mmol)，100mL干燥的二氯甲烷，冰浴下缓慢滴入三甲基硅氰(9.4g，94mmol)，加毕室温下搅拌5小时。将反应液倒入200mL饱和碳酸氢钾水溶液中，二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。柱层析后得10g白色中间体Int 1-1，收率68％。质谱：310,312(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(dq,J＝1.6,0.8Hz,1H),7.54(ddt,J＝8.1,1.6,0.8Hz,1H),7.44(d,J＝8.1Hz,1H),3.11–3.02(m,1H),3.01–2.91(m,1H),2.72(ddd,J＝13.5,7.8,5.8Hz,1H),2.40(ddd,J＝13.4,7.8,5.6Hz,1H),0.16(s,9H).
5-溴-1-羟基-2,3-二氢-1H-茚-1-甲亚胺酸乙酯(Int 1-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000025
将中间体Int.1-1(10g，32.3mmol)溶于60mL干燥乙醇中，通入HCl气体(自制，干燥)，TLC检测，反应完毕直接浓缩，得淡黄色固体粗品9.6g，直接用于下一步反应。
5-溴-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int.1-3)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000026
将9.6g中间体Int.1-2悬浮于120mL干燥的THF中，冰浴下加入三乙胺(20mL，5e.q.),再分批加入三光气(3.8g，0.4e.q.)。加完后继续冰浴下搅拌2小时，再用HCl(2N，a.q.)缓慢调节至pH<5，搅拌1小时，EA萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。EA/PE＝1/1打浆，得5.3g白色中间体Int.1-3，两步收率58.3％。质谱：282,284(M+H +)。
(R)-5-溴-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int.1-4)和(S)-5-溴-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int.1-5)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000027
手性分离条件：仪器：SFC-80(Thar,Waters)；手性分离柱：CHIRALCEL AD(30*250mm 5μm)(Daicel)；柱温：35℃；流动相：A＝CO 2，B＝MeOH；出峰时间：t 1＝12.1min,t 2＝15min。
5g中间体Int.1-3手性分离后，得到中间体Int.1-4(t 1＝12.1min，2.3g)，e.e＝99％，[α] 20 D＝+28°(c 1.0，MeOH)， 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ12.18(s,1H),7.71(d,J＝1.9Hz,1H),7.61(m,1H),7.44-7.28(m,1H),3.14-3.02(m,1H),3.02-2.90(m,1H),2.66(m,1H),2.59-2.39(m,1H)；中间体Int.1-5(t 2＝15min，2.3g)，e.e＝99％，[α] 20 D＝-30°(c 1.0，MeOH)， 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ12.18(s,1H),7.71(d,J＝1.9Hz,1H),7.61(m,1H),7.44-.28(m,1H),3.14-3.02(m,1H),3.02-2.90(m,1H),2.66(m,1H),2.59-2.39(m,1H)。
通用中间体化合物2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int.1-10)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000028
2-(5-溴-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-6)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000029
将中间体Int.1-3(10g，35.4mmol)，溴代乙酸叔丁酯(7.5g，38.4mmol)以及碳酸钾(7.3g，52.9mmol)加入100mL DMF中，室温下搅拌4小时。加入200mL水，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，石油醚打浆，过滤，得到白色固体12g，收率86％。质谱：396,398(M+H +)。
2-(5–((二苯基亚甲基)氨基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-7)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000030
将中间体Int.1-3(11.5g，29mmol)，二苯甲酮亚胺(7g，38mmol)，醋酸钯(260mg，1.16mmol)，1,1-联萘-2,2-双二苯膦(1.61g，2.58mmol)和碳酸铯(13.2g，40mmol)加入50mL甲苯中，氮气氛围下，升温至100℃，搅拌4小时。浓缩，柱层析得到12g灰色固体，收率83.1％。质谱：497(M+H +)。
2-(5-氨基-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-8)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000031
将中间体Int.1-7(12g，24mmol)溶于20mL四氢呋喃中，室温下加入10mL盐酸(2N)，搅拌30分钟。乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体6.9g，收率86％。质谱：289(M-43)。
2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[叔茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-9)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000032
将三光气(3.5g，12mmol)置于25mL二氯甲烷中，冰浴下，将中间体Int.1-8(6.9g，20mmol)和三乙胺(20g，200mmol)的二氯甲烷(25mL)的溶液缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时，加入甲胺盐酸盐(7g，104mmol)，搅拌4小时。加入100mL水，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到5g黄色固体，收率62％。质谱：390(M+H +)。
2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int.1-10)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000033
将中间体Int.1-9(5g，13mmol)溶于5mL三氟乙酸中，室温搅拌过夜，浓缩得浅黄色固体4.1g，收率96％。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ13.52(s,1H),8.78(s,1H),7.53(s,1H),7.31-7.25(m,1H),7.19-7.11(m,1H),6.12(s,1H),4.38-4.18(m,2H),3.18-2.98(m,2H),2.71-2.57(m,4H),2.55-2.41(m,1H)。
通用中间体化合物(R)-2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int 1-15)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000034
(R)-2-(5-溴-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-11)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000035
将中间体Int.1-4(10g，35.4mmol)，溴代乙酸叔丁酯(7.5g，38.4mmol)以及碳酸钾(7.3g，52.9mmol)溶于100mL DMF中，室温下搅拌4小时。加入200mL水，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，石油醚打浆，过滤，得到白色固体12.2g，收率88％。质谱：396,398(M+H +)。
(R)-2-(5-((二苯基亚甲基)氨基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-12)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000036
将中间体Int.1-11(11.5g，29mmol)，二苯甲酮亚胺(7g，38mmol)，醋酸钯(260mg，1.16mmol)，1,1-联萘-2,2-双二苯膦(1.61g，2.58mmol)和碳酸铯(13.2g，40mmol)溶于50mL甲苯中，氮气置换，升温至100℃，搅拌4小时。浓缩，柱层析得到12.2g灰色固体，收率85％。质谱：497(M+H +)。
(R)-2-(5-氨基-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-13)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000037
将中间体Int.1-12(12g，24mmol)溶于20mL四氢呋喃中，室温下加入10mL盐酸(2N)，搅拌30分钟。乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体7.1g，收率88％。质谱：289(M-43)。
(R)-2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[叔茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-14)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000038
将三光气(3.5g，12mmol)置于25mL二氯甲烷中，冰浴下，将中间体(Int.1-13)(6.9g，20mmol)和三乙胺(20g，200mmol)以及25mL二氯甲烷的混合液缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时，加入甲胺盐酸盐(7g，104mmol)，搅拌4小时。加入100mL水，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到5.2g黄色固体，收率64％。质谱：390(M+H +)。
(R)-2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int.1-15)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000039
将中间体Int.1-14(5g，13mmol)溶于5mL三氟乙酸中，室温搅拌过夜，浓缩得浅黄色固体4.2g，收率98％。MS:334(M+H +)； 1H NMR(400MHz,DMSO):δ13.52(s,1H),8.78(s,1H),7.53(s,1H),7.31-7.25(m,1H),7.19-7.11(m,1H),6.12(s,1H),4.38-4.18(m,2H),3.18-2.98(m,2H),2.71-2.57(m,4H),2.55-2.41(m,1H)。[α] 20 D＝+53.3°(c 1.0，MeOH)
通用中间体化合物(S)-2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int 1-20)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000040
(S)-2-(5-溴-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-16)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000041
将中间体Int.1-5(10g，35.4mmol)，溴代乙酸叔丁酯(7.5g，38.4mmol)以及碳酸钾(7.3g，52.9mmol)溶于DMF(100mL)中，室温下搅拌4小时。加入水(200mL)，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，石油醚打浆，过滤，得到白色固体12.1g，收率86％。质谱：396,398(M+H +)。
(S)-2-(5-((二苯基亚甲基)氨基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-17)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000042
将中间体Int.1-16(11.5g，29mmol)，二苯甲酮亚胺(7g，38mmol)，醋酸钯(260mg，1.16mmol)，1,1-联萘-2,2-双二苯膦(1.61g，2.58mmol)和碳酸铯(13.2g，40mmol)溶于50mL甲苯中，氮气置换，升温至100℃，搅拌4小时。浓缩，柱层析得到12.1g灰色固体，收率84％。质谱：497(M+H +)。
(S)-2-(5-氨基-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-18)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000043
将中间体Int.1-17(12g，24mmol)溶于20mL四氢呋喃中，室温下加入10mL盐酸(2N)，搅拌30分钟。乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体7g，收率88％。质谱：289(M-43)。
(S)-2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[叔茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int.1-19)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000044
将三光气(3.5g，12mmol)置于25mL二氯甲烷中，冰浴下，将中间体Int.1-18(6.9g，20mmol)和三乙胺(20g，200mmol)的25mL二氯甲烷的混合液缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时，加入甲胺盐酸盐(7g，104mmol)，搅拌4小时。加入100mL水，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到5.1g黄色固体，收率63％。质谱：390(M+H +)。
(S)-2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int.1-20)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000045
将中间体Int.1-19(5g，13mmol)溶于5mL三氟乙酸中，室温搅拌过夜，浓缩得浅黄色固体4.09g，收率96％。MS:334(M+H +)； 1H NMR(400MHz,DMSO):δ13.52(s,1H),8.78(s,1H),7.53(s,1H),7.31-7.25(m,1H),7.19-7.11(m,1H),6.12(s,1H),4.38-4.18(m,2H),3.18-2.98(m,2H),2.71-2.57(m,4H),2.55-2.41(m,1H)。
实施例1化合物1-((S)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((R)-2-苯基哌嗪-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1-,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000046
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-20(333mg，1mmol)，SM1(97mg，1mmol)，DIEA(N,N-二异丙基乙胺，387mg，3mmol)，最后加入HATU(O-(7-氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入20mL水中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物1(248mg)，收率52％。质谱:477(M+H +)。
实施例2化合物1-((R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((R)-2-苯基哌嗪-1-基)乙 基)-2,3-二氢螺[茚-1-,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000047
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，SM1(97mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入20mL水中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物2(252mg)，收率53％。质谱:477(M+H +)。
实施例3化合物1-((R)-3'-(2-((1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000048
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，SM 3(111mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入20mL水中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物3(226mg)，收率53％。质谱:427(M+H +)。
实施例4化合物1-((S)-2',4'-二氧-3'-(2-氧-2-((S)-2-苯哌啶-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲脲(4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000049
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-20(333mg，1mmol)，SM4(161mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物4(300mg)，收率63％。质谱:477(M+H +)。
实施例5化合物1-((R)-2',4'-二氧-3'-(2-氧-2-((S)-2-苯哌啶-1-基)乙基)-2,3-二氢 螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲脲(5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000050
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，SM1(161mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物5(300mg)，收率63％。质谱:477(M+H +)。
实施例7化合物1-((R)-3'-(2-((1S,4S)-7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-7-基)-2-氧乙基)-2',4'-二氧-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲脲(7)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000051
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，SM4(97mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物7(260mg)，收率63％。质谱:413(M+H +)。
实施例8化合物1-((R)-3'-(2-((S)-2-(4-氟-2-甲基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(8)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000052
中间体(4-(4-氟-2-甲基苯基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int.8-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000053
将向装有SM 5(2.36g，10mmol)的反应瓶中加入干燥的THF(23mL)，氮气保护，冰水浴条件下向瓶中加入异丙基溴化镁的四氢呋喃溶液(10mL，1M in THF)，然后撤去冰水浴，室温搅拌7小时，最后加入N-Boc-2-吡咯烷酮(1.85g，10mmol)，室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int.8-1(1.47g，5mmol)，收率50％。质谱:296(M+H +)。
中间体5-(4-氟-2-甲基苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int.8-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000054
将Int 8-1(1.47g，5mmol)溶于15mL DCM中，加入3.7mLTFA，室温下搅拌，TLC检测，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至中性，用DCM(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干得到Int.8-2(0.79g；90％)，质谱:178(M+H +)。
中间体2-(4-氟-2-甲基苯基)吡咯烷(Int.8-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000055
将Int.8-2(0.79g；4.5mmol)加入装有8mL甲醇的反应瓶中，室温搅拌下分批加入硼氢化钠(0.68g；18mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后将反应液倒入水中，30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到Int.8-3(0.79g；97％)，质谱：180(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((S)-2-(4-氟-2-甲苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧乙基)-2',4'-二氧-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲脲(8)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000056
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int.1-15(333mg，1mmol)，Int.8-3(179mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物8(280mg)，收率56％。质谱:495(M+H +)， 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.33(d,J＝38.5Hz,2H),7.06(s,1H),6.94(d,J＝9.8Hz,2H),6.83～6.74(m,1H),5.13(s,1H),3.93～3.68(m,3H),3.12(s,1H),3.01(s,1H),2.82(s,2H),2.72(s,4H),2.49(s,2H),2.39(s,2H),2.24(d,J＝3.9Hz,1H),1.77(s,1H),1.25(s,1H)。
实施例10化合物(1S,4S)-5-(2-((R)-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[叔茚-1,5'-恶唑烷]叔丁基-3'-基)乙酰基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯(10)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000057
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int.1-15(333mg，1mmol)，SM 6(198mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物10(370mg)，收率72％。质谱:514(M+H +)， 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.52(s,1H),7.32(d,J＝7.8Hz,1H),6.94(d,J＝8.3Hz,1H),4.88(s,1H),4.44(m,4H),3.62～3.33(m,4H),3.14(s,1H),3.03(s,1H),2.76(s,3H),2.54(s,1H),1.99～1.78(m,2H),1.47(s,9H),1.26(d,J＝9.1Hz,1H)。
实施例11化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-(邻甲苯基)吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(11)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000058
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，SM 7(198mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg， 1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，向反应液中倒入水(20mL)，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物11(233mg，收率50％)。质谱:477(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.94-8.45(m,1H),7.54(d,J＝9.5Hz,1H),7.36-7.26(m,1H),7.26-7.10(m,2H),7.10-6.77(m,3H),6.24-5.88(m,1H),5.43-5.11(m,1H),4.71-4.00(m,2H),3.84(d,J＝11.5Hz,3H),3.78-3.44(m,2H),3.09(m,1H),3.03-2.89(m,1H),2.67-2.55(m,4H),2.55-2.50(m,1H),2.50-2.25(m 1H),2.02-1.59(m,3H)。
实施例12化合物1-甲基-3-((1R)-3'-(2-(八氢喹啉-1-(2H)-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(12)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000059
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，SM 8(139mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，向反应液中倒入水(20mL)，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物12(227mg，收率50％)。质谱:455(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.72(s,1H),7.55(s,1H),7.35-7.33(m,1H),7.25-7.17(m,1H),6.12-6.06(m 1H),4.66-4.21(m,2H),4.20-3.47(m,2H),3.33-2.78(m,4H),2.74-2.55(m,4H),2.55-2.50(m,1H)1.91-1.20(m,12H)。
实施例13化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-(2-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(13)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000060
中间体4-氧代-4-(2-(三氟甲氧基)苯基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int.13-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000061
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 9(2.88g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入叔丁基-2-氧代吡咯烷-1-羧酸酯(1.85g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 13-2(1.74g，5mmol)，收率50％。质谱:348(M+H +)。
中间体5-(2-(三氟甲氧基)苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int.13-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000062
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 13-2(1.74g，5mmol)，再加入TFA(5mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 13-3(1.04g，4.5mmol)，收率90％。质谱:230(M+H +)。
中间体2-(2-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷(Int.13-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000063
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 13-3(1.04g，4.5mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 13-4(1.04g，4.5mmol)，收率98％。质谱:232(M+H +)。
化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-(2-(三氟甲氧基)苯基)吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(13)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000064
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int13-3(231mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物13(273mg)，收率50％。质谱:547(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ7.65-7.29(m,5H),7.19-6.98(m,2H),5.49-5.27(m,2H),4.54-4.41(m,1H),3.80(m,2H),3.10-3.02(m,1H),3.01-2.88(m,1H),2.66(s,3H),2.59-2.41(m,4H),2.06-1.83(m,4H)。
实施例14化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(14)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000065
中间体(S)-叔丁基-(4-(4-氟苯基)-3-甲基-4-氧丁基)氨基甲酸酯(Int.14-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000066
向100mL的反应瓶中加入干燥THF(25mL)，然后加入1-氟-4-碘苯(5g，22.5mmol)，冰水浴冷下，缓慢加入异丙基氯化镁(10mL，2.0mol/L in THF)，加完后移除冰水浴恢复至室温搅拌3小时。将原料(S)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4.9g，24.8mmol)溶解在THF(10mL)中，快速加入至上述反应液中，室温反应3小时。反应完毕后，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反 应，用90mL(30mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得粗产品Int.14-1(8g)。质谱:296(M+H +)。
中间体(S)-5-(4-氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int.14-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000067
将上一步粗产品溶解于DCM(50mL)中，加入TFA(5mL)，室温搅拌反应16小时，反应完毕后，浓缩，加入水(50mL)，用碳酸氢钠调节PH至8-9，用90mL(30mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化后得化合物Int.14-2(2.4g，mmol)，两步收率60％。质谱:178(M+H +)。
中间体(2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷Int.14-3的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000068
向反应瓶中加入DCM(1mL)，然后加入Int 14-2(2g，11.3mmol)，再冰水浴条件下加入DIBAL-H(12mL，1M in hexane)，然后室温反应1小时。加少量水淬灭后，过滤，DCM(1mL×3)洗，浓缩后得Int 14-3(1.82g，10.17mmol)，收率90％。质谱:180(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.41-7.29(m,2H),7.05-6.91(m,2H),4.14(t,J＝8.0Hz,1H),3.32(dd,J＝13.9,7.2Hz,1H),2.24-2.08(m,1H),2.04-1.93(m,1H),1.72(dddd,J＝12.5,10.1,8.4,5.9Hz,1H),1.57(brs,1H),1.53-1.43(m,1H),1.24(d,J＝6.2Hz,3H).
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(14)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000069
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)， Int 14-3(179mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入20mL水中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物14(247mg)，收率50％。质谱:495(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.44-7.35(m,2H),7.33-7.27(m,2H),7.12(td,J＝8.6,2.4Hz,2H),7.04(d,J＝8.2Hz,1H),4.98-4.89(m,1H),4.41(d,J＝6.7Hz,1H),4.21-4.09(m,2H),3.63(s,1H),3.17(dd,J＝15.8,7.4Hz,1H),3.07(s,1H),2.89(s,3H),2.79(d,J＝1.4Hz,3H),2.72(d,J＝6.7Hz,1H),2.56-2.41(m,1H),2.04(dd,J＝21.7,13.1Hz,2H),1.65(s,1H).
实施例15化合物1-((R)-3'-(2-((5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(15)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000070
中间体(5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 15-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000071
将Int 14-2(2g,11.3mmol)溶于甲醇(50mL)中，分批加入硼氢化钠(0.86g,22.6mmol)，室温搅拌反应2小时，浓缩，加入水(50mL)，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，纯化后得Int 15-3(1.72g,9.6mmol)，收率85％。质谱:180(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-((5S)-2-(2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(15)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000072
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 15-3(179mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入20mL水中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物15(260mg)，收率52％。质谱:495(M+H +)。
实施例16化合物1-(3'-(2-(2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-噁唑烷]-5-基)-3-甲基脲(16)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000073
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-10(333mg，1mmol)，SM 11(97mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物16(206mg)，收率50％。质谱:413(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ7.48(m,2H),7.32(m,1H),6.89(m,1H),5.39-5.22(m,1H),4.52(m,1H),4.36-4.12(m,2H),3.43(m,1H),3.24-3.08(m,2H),3.01(m,1H),2.74(m,3H),2.58-2.46(m,1H),1.77(m,3H),1.31-1.22(m,4H)。
实施例17化合物1-((R)-3'-(2-((2R,5R)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(17)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000074
中间体(R)-叔丁基-(4-(4-氟苯基)-3-甲基-4-氧丁基)氨基甲酸酯(Int 17-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000075
向100mL的反应瓶中加入干燥THF(25mL)，然后加入1-氟-4-碘苯(5g，22.5mmol)，冰水浴下，缓慢加入异丙基氯化镁(10mL，2.0mol/L in THF)，加完后移除冰水浴恢复至室温搅拌3小时。将原料(R)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4.9g，24.8mmol)溶解在THF(10mL)快速加入至上述反应液中，室温反应3小时。反应完毕后，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，用90mL(30mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得粗产品Int 17-1(7.5g)。质谱:296(M+H +)。
中间体(R)-5-(4-氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 17-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000076
将上一步粗产品溶解于DCM(50mL)中，加入TFA(5mL)，室温搅拌反应16小时，反应完毕后，浓缩，加入水(50mL)，用碳酸氢钠调节PH至8-9，用(30mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化后得化合物Int 17-2(2.2g)，两步收率59％。质谱:178(M+H +)。
中间体(2R,5R)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷Int 17-3的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000077
向反应瓶中加入DCM(1mL)，然后加入Int 17-2(2g，11.3mmol)，再冰水浴条件下加入DIBAL-H(12mL，1M in hexane)，然后室温反应1小时。加少量水淬灭后，过滤，DCM(1mL×3)洗，浓缩后得Int 17-3(1.82g，10.17mmol)，收率90％。质谱:180(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.41-7.29(m,2H),7.05-6.91(m,2H),4.14(t,J＝8.0Hz,1H),3.32(dd,J＝13.9,7.2Hz,1H),2.24-2.08(m,1H),2.04-1.93(m,1H),1.72(dddd,J＝12.5,10.1,8.4,5.9Hz,1H),1.57(brs,1H),1.53-1.43(m,1H),1.24(d,J＝6.2Hz,3H).
化合物1-((R)-3'-(2-((2R,5R)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(17)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000078
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 17-3(179mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物17(233mg)，收率48％。质谱:495(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.44-7.35(m,2H),7.33-7.27(m,2H),7.12(td,J＝8.6,2.4Hz,2H),7.04(d,J＝8.2Hz,1H),4.98-4.89(m,1H),4.41(d,J＝6.7Hz,1H),4.21-4.09(m,2H),3.63(s,1H),3.17(dd,J＝15.8,7.4Hz,1H),3.07(s,1H),2.89(s,3H),2.79(d,J＝1.4Hz,3H),2.72(d,J＝6.7Hz,1H),2.56-2.41(m,1H),2.04(dd,J＝21.7,13.1Hz,2H),1.65(s,1H).
实施例18化合物1-((R)-3'-(2-((5R)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(18)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000079
中间体(5R)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷Int 18-3的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000080
将17-2(2g，11.3mmol)溶解于甲醇(50mL)中，分批加入硼氢化钠(0.86g，22.6mmol)，室温搅拌反应2小时，反应完毕后，浓缩，加入水(50mL)，用90mL(30mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化后得化合物Int 18-3(1.72g,9.6mmol)，收率85％。质谱:180(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((5R)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(18)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000081
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 18-3(179mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入20mL水中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物18(223mg)，收率48％。质谱:495(M+H+)。
实施例21化合物1-(R)-3'-(2-((5R)-2-(4-氟-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧 代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(21)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000082
中间体(R)-(4-(4-氟-2-甲基苯基)-3-甲基-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int 21-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000083
将向装有SM 5(2.36g，10mmol)的反应瓶中加入干燥的THF(23mL)，氮气保护，冰水浴条件下向瓶中加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后撤去冰水浴，室温搅拌7小时，最后加入(R)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.99g，10mmol)，室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 21-1(2.59g，8.5mmol)，收率85％。质谱:306(M+H +)。
中间体(R)-5-(4-氟-2-甲基苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 21-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000084
将Int 21-1(2.59g，8.5mmol)溶于26mL DCM中，加入2.6mL TFA，室温下搅拌，TLC检测，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至中性，用DCM(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干得到Int 21-2(1.46g；90％)，质谱:192(M+H +)。
中间体(2R,5R)-2-(4-氟-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯烷Int 21-3的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000085
将Int 21-2(1.46g；7.65mmol)加入装有8mL甲醇的反应瓶中，室温搅拌下分批加入硼氢化钠(1.16g；30.6mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后将反应液倒入水中，30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到Int 21-3(1.35g；91％)，质谱：194(M+H +)。
化合物1-(R)-3'-(2-((5R)-2-(4-氟-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(21)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000086
向装有1mL DMF的25mL圆底烧瓶中分别加入Int 1-15(30mg；0.09mmol)、Int 21-3(17mg；0.09mmol)、DIEA(18mg；0.14mmol)以及HATU(34mg；0.09mmol)，室温下搅拌，TLC监测，反应完毕后，加入H 2O(5mL)，EA萃取(5mL×3),刮板纯化，得白色固体粉末21(30mg)，收率65％。质谱:509(M+H +)。
实施例25化合物1-((R)-3'-(2-2-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(25)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000087
中间体(R)-叔丁基-(5-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸酯(Int 25-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000088
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 12(2.9g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入(R)-叔丁基-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸酯(1.99g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 25-1(1.82g，5mmol)，收率50％。质谱:364(M+H +)。
中间体(R)-5-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 25-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000089
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 25-1(1.82g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 25-2(1.1g，4.5mmol)，收率90％。质谱:246(M+H +)。
中间体2-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 25-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000090
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 25-2(1.1g，4.5mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得异构体混合物，拆分后得到Int 25-3(0.96g，3.9mmol)，收率86％。质谱:248(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-2-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙 基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(25)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000091
向装有1mL DMF的25mL圆底烧瓶中分别加入Int 1-15(30mg；0.09mmol)、Int 25-3(22mg；0.09mmol)以及HATU(34mg；0.09mmol)，室温下搅拌，TLC监测，反应完毕后，加入H 2O(10mL)，EA萃取(5mL×3),刮板纯化，得白色固体粉末25(27mg)，收率50％。质谱:563(M+H +)。
实施例39化合物1-((R)-3'-(2-(5-(4-氟苯基)-2,2-二甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(39)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000092
中间体化合物4-甲基-4-硝基戊酸甲酯(Int 39-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000093
向反应瓶中加DCM(40mL)，然后加入SM 16(4.4g，0.05mol)，丙烯酸甲酯(4.3g，0.05mol)再加入DBU(3mL)，然后室温反应24小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 39-1(5.25g，0.03mol)，收率60％。
中间体化合物5,5-二甲基吡咯烷-2-酮(Int 39-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000094
向反应瓶中加入MeOH(50mL)，然后加入Int 39-1(5.2g，0.03mol)，Pd/C(400mg)，然后室温下氢化反应24小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 39-2(2.6g，0.023mol)，收率77％。
中间体2,2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 39-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000095
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 39-2(2.6g，0.023mol)，DMAP(800mg)，然后室温下反应24小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 39-3(3.9g，0.018mol)，收率79％。质谱:214(M+H +)。
中间体(5-(4-氟苯基)-2-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 39-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000096
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入Int 39-3(2.1g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入SM 10(2.13g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 39-4(1.7g，5.5mmol)，收率55％。质谱:310(M+H +)。
中间体5-(4-氟苯基)-2,2-二甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 39-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000097
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 39-4(1.54g，5mmol)，再加入TFA(6mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 39-5(864mg，4.5mmol)，收率90％。质谱:192(M+H +)。
中间体5-(4-氟苯基)-2,2-二甲基吡咯烷(Int 39-6)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000098
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 39-5(768g，4mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 39-6(718mg，3.7mmol)，收率94％。质谱:194(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-(5-(4-氟苯基)-2,2-二甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(39)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000099
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 39-6(194mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物39(280mg)，收率55％。质谱:509(M+H +)。
实施例43化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-乙基-5-(4-氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(43)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000100
中间体(R)-(1-(4-氟苯基)-4-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(Int 43-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000101
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 18(2.8g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入乙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 43-1(2.17g，7mmol)，收率70％。质谱:310(M+H +)。
中间体(S)-5-乙基-2-(4-氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 43-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000102
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 43-1(1.54g，5mmol)，再加入TFA(6mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 43-2(764mg，4mmol)，收率80％。质谱:192(M+H +)。
中间体(2S,5S)-2-乙基-5-(4-氟苯基)吡咯(Int 43-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000103
向反应瓶中加入DCM(15mL)，然后加入Int 43-2(764mg，4mmol)，再冰水浴条件下加入DIBAL-H(5mL，1M in hexane)，然后室温反应1小时。加少量水淬灭后，过滤，DCM(15mL×3)洗，浓缩后得Int 43-3(694mg，3.6mmol)，收率90％。质谱:194(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.37(dt,J＝9.1,4.7Hz,2H),6.99(t,J＝8.7Hz,2H),4.15(dd,J＝14.6,7.0Hz,1H),3.13(dd,J＝13.9,7.0Hz,1H),2.23-2.08(m,1H),2.07-1.94(m,1H),1.80-1.65(m,1H),1.63-1.46(m,3H),1.25(m,1H),0.95(ddd,J＝9.6,5.5,2.5Hz,3H).
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-乙基-5-(4-氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(43)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000104
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 43-3(193mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物43(279mg)，收率55％。质谱:509(M+H +)。
实施例47化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-异丙基吡咯-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(47)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000105
中间体(S)-(1-(4-氟苯基)-5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(Int 47-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000106
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 18(2.8g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 47-1(2.2g，7mmol)，收率70％。质谱:324(M+H +)。
中间体(S)-2-(4-氟苯基)-5-异丙基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 47-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000107
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 47-1(1.62g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 47-2(820mg，4mmol)，收率80％。质谱:206(M+H +)。
中间体(2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-异丙基吡咯烷(Int 47-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000108
向反应瓶中加入DCM(15mL)，然后加入Int 47-2(820mg，4mmol)，再冰水浴条件下加入DIBAL-H(5mL，1M in hexane)，然后室温反应1小时。加少量水淬灭后，过滤，DCM(15mL×3)洗，浓缩后得Int 43-7(749mg，3.6mmol)，收率90％。质谱:208(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.42-7.34(m,2H),7.03-6.94(m,2H),4.14(t,J＝7.8Hz,1H),2.90(q,J＝7.7Hz,1H),2.12(dddd,J＝11.9,9.4,6.8,5.2Hz,1H),1.98-1.88(m,1H),1.72-1.64(m,1H),1.61-1.53(m,1H),1.25(m,1H),0.97(d,J＝6.6Hz,3H),0.93-0.85(m,4H).
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-异丙基吡咯-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(47)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000109
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 47-3(208mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入20mL水中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物47(266mg)，收率51％。质谱:523(M+H +)。
实施例57化合物1-((R)-3'-(2-(2-(2-乙基-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(57)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000110
中间体(5-(2-乙基-4-氟苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 57-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000111
向50mL的反应瓶中加入化合物SM 19(400mg,2mmol)和四氢呋喃(4mL),氮气保护下冷却到-70℃，向反应液中滴加丁基锂(2.5M in hexane，0.8mL,2mmol)。反应在该温度下反应2～3个小时后加入2-甲基-5-氧代哌啶酮-N-甲酸叔丁酯(400mg,2mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液。加入完毕后自然升温。反应完毕后加入饱和的氯化铵水溶液(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物Int 57-1(440mg，收率68％)。质谱:324.2(M+H +)。
中间体5-(2-乙基-4-氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 57-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000112
向25mL的反应瓶中加入粗品Int 57-1(440mg,1.4mmol)和二氯甲烷(4mL),再加入三氟乙酸(0.4mL)，反应室温过夜，反应完毕后，真空旋去溶剂，加入碳酸氢钠水溶液调节pH～7，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，真空旋去溶剂后得到粗品化合物Int 57-2(260mg,收率93％)。质谱:206.1(M+H +)。
中间体2-(2-乙基-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 57-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000113
向50mL的反应瓶中加入Int 57-2(260mg，1.3mmol)和甲醇(3mL),冰浴下分批加入硼氢化钠(48mg，1.3mmol)，反应完毕后加入水(5mL),用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，真空旋去溶剂后得到粗品化合物，该化合物分离后得到Int 57-3(251mg)。质谱:208.1(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-(2-(2-乙基-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(57)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000114
向25mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(33mg，0.1mmol)，Int 57-3(31mg,0.15mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)和DMF(1mL)。搅拌下加入HATU(57mg，0.15mmol)。常温搅拌过夜，反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物57(20mg，收率38％)。质谱:523.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.72(s,1H),7.53(d,J＝7.1Hz,1H),7.30-6.87(m,5H),6.09(d,J＝4.7Hz,1H),5.22(dt,J＝15.9,7.1Hz,1H),4.68(dd,J＝24.4,16.7Hz,1H),4.47-4.16(m,2H),3.44(t,J＝17.1Hz,1H),3.08(dt,J＝15.6,7.6Hz,1H),3.01-2.91(m,1H),2.89(s,1H),2.82-2.72(m,1H),2.63(t,J＝3.9Hz,3H),2.42(ddd,J＝10.8,9.9,5.5Hz,2H),2.05(dt,J＝14.0,7.3Hz,1H),1.73(ddd,J＝20.2,13.2,7.1Hz,1H),1.53(td,J＝12.1,6.2Hz,1H),1.42(dd,J＝6.2,4.3Hz,3H),1.26-1.20(m,3H).
实施例74化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(74)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000115
中间体(3R,7aR)-7a-(4-氟苯基)-3-苯基四氢吡咯烷[2,1-b]恶唑-5(6H)-酮(Int 74-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000116
将中间体Int 73-1(6.1g，31mmol)和(R)-2-氨基-1-苯基乙烷-1-醇(4.3g，31mmol)加入50mL甲苯中，分水器分水，148度下反应20小时。浓缩，柱层析后得到6g白色固体Int 74-2，收率66％。质谱：298(M+H +)。
中间体(S)-5-(4-氟苯基)-1-((R)-2-羟基-1-苯基乙基)吡咯烷-2-酮(Int 74-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000117
将中间体Int 74-2(6g，20mmol)和三乙基硅氢(7.5g，65mmol)加入100mL二氯甲烷中，-78℃下，滴加四氯化钛溶液(20mL，1M in hexane)，滴加完毕后，缓慢恢复到室温，搅拌4小时。加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品直接用于下一步反应。
中间体(S)-5-(4-氟苯基)-1-((R)-2-氯-1-苯基乙基)吡咯烷-2-酮(Int 74-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000118
向250mL的反应瓶中加入Int 74-3(10g，33mmol)和四氢呋喃(100mL)，冰浴下缓慢加入二氯亚砜(8g，67mmol)，反应自然升温到室温，在室温下再反应2个小时，反应完毕后，真空旋走溶剂后得粗品化合物Int 74-4(13g,收率122％)。质谱:318.1(M+H +)。
中间体((S)-5-(4-氟苯基)-1-(1-苯基乙烯基)吡咯烷-2-酮(Int 74-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000119
向250mL的反应瓶中加入粗品Int 74-4(13g，41mmol)和叔丁醇(130mL),再加入叔丁醇钠(7.9g，82mmol)，反应加热到40℃，2～3个小时，反应完毕 后，旋走溶剂，加入水(50mL),用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋走溶剂后得粗品化合物Int 74-5(11g,收率96％)。质谱:282.1(M+H +)。
中间体(R)-5-(4-氟苯基)吡咯烷-2-酮(Int 74-6)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000120
向250mL的反应瓶中加入粗品Int 74-5(11g，39mmol)，2N盐酸水溶液(50mL)和四氢呋喃(60mL)，反应加热到80℃反应2～3个小时，反应完毕后，用饱和的碳酸氢钠水溶液调节pH～7，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，真空旋走溶剂后，所得固体用乙酸乙酯(20mL)打浆1个小时，过滤得化合物Int 74-6(5g，收率74％)。质谱:180.1(M+H +)。
中间体(S)-2-(4-氟苯基)-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 74-7)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000121
向100mL的反应瓶中加入粗品Int 74-6(5g，28mmol)，二碳酸二叔丁酯(7.4g，34mmol)和二氯甲烷(50mL)，最后分批加入4-二甲氨基吡啶(3.4g，28mmol)，室温搅拌过夜，反应完毕后，加入0.5N盐酸水溶液(20mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，真空旋走溶剂后，柱层析纯化后化合物Int 74-7(7.5g,收率96％)。质谱:280.1(M+H +)。
中间体(5S)-5-(4-氟苯基)-2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 74-8)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000122
将中间体Int 74-7(2.8g，10mmol)和三氟乙酸乙酯(2.8g，20mmol)溶于50mL四氢呋喃中，加入氢化钠(0.8g，20mmol)，升温至50℃，反应4小时。将反应液倒入冷水中，用2N盐酸调pH至5-6，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品直接用于下一步反应。
中间体(S)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 74-9)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000123
将上一步得到的粗品溶于10mL二氧六环中，加入30mL浓盐酸，加热至100℃，搅拌过夜。用碳酸氢钠将pH调至7-8，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。溶于20mL二氯甲烷，加入1mL三氟醋酸，室温搅拌过夜，浓缩，加水，调pH至7-8，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到1.5g无色液体Int 74-9，两步收率：65％。质谱：232(M+H +)。
中间体(2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡咯烷(Int 74-10)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000124
将中间体Int 74-9(1.65g，5mmol)溶于50mL二氯甲烷中，冰浴下加入DIBAL-H(5.5mL，l M in hexane)，搅拌4小时，加入硅藻土，10mL水，过滤，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到淡黄色液体Int 74-10(740mg)，收率65％。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.42-7.36(m,2H),7.03-6.96(m,2H),4.32(dd,J＝9.7,5.2Hz,1H),3.81(ddd,J＝14.1,12.5,6.9Hz,1H),2.16-2.03(m,3H),1.70(dq,J＝9.6,8.5Hz,1H).
中间体2-溴-1-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)乙烷-1-酮(Int 74-12)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000125
将中间体Int 74-10(233mg，10mmol)，溶于10mL二氯甲烷中，冰浴下滴加溴乙酰溴(200mg，10mmol)，搅拌1小时，二氯甲烷萃取，柱层析得到320mg白色固体Int 74-12，收率90％。质谱：354,356(M+H +)。
中间体(R)-5-溴-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 74-13)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000126
将Int 1-4(140mg，5mmol)，中间体Int 74-12(176mg，5mmol)以及碳酸钾(140mg，10mmol)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，室温下搅拌4小时，加入50mL水，过滤，干燥，得到500mg白色固体Int 74-13，收率90％。质谱：555,557(M+H +)。
中间体(R)-5-(二苯基亚甲基)氨基)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 74-14)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000127
将中间体Int 74-13(100mg，0.28mmol)，二苯甲酮亚胺(62mg，0.34mmol)，醋酸钯(13mg，0.06mmol)，1,1-联萘-2,2-双二苯膦(72mg，0.12mmol)和碳酸铯(136mg，0.42mmol)溶于5mL甲苯中，氮气置换，升温至100℃，搅拌4小时。浓缩，柱层析得到110mg灰色固体Int 74-14，收率84％。质谱：656(M+H +)。
中间体(R)-5-氨基-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 74-15)的合成的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000128
将中间体Int 74-14(110mg，0.24mmol)溶于5mL四氢呋喃中，室温下加入2N盐酸(5mL)，搅拌30分钟。乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体Int 74-15(62mg)，收率88％。质谱：448(M-43)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(74)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000129
将三光气(35mg，0.12mmol)置于5mL二氯甲烷中，冰浴下，将中间体Int 74-15(62mg，0.2mmol)和三乙胺(200mg，2mmol)以及5mL二氯甲烷的混合液缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时，加入甲胺盐酸盐(33mg，0.5mmol)，搅拌4小时。加入10mL水，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到30mg黄色固体(74)，收率45％。质谱：549(M+H +)。
实施例96化合物1-((1R)-3'-(2-(2-环己基-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(96)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000130
中间体(5-环己基-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 96-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000131
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 28(10mL，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3) 乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 96-1(1.6g，5.5mmol)，收率55％。质谱:284(M+H +)。
中间体5-环己基-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 96-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000132
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 96-1(1.42g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 96-2(660mg，4mmol)，收率80％。质谱:166(M+H +)。
中间体2-环己基-5-甲基吡咯烷(Int 96-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000133
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 96-2(660g，4mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 96-3(618mg，3.7mmol)，收率94％。质谱:168(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-环己基-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(96)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000134
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 96-3(167mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物96(266mg)，收率55％。质谱:483(M+H +)。
实施例97化合物1-(3'-(2-(2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(97)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000135
中间体6-溴-1-甲烯基-2,3-二氢-1H-茚(Int 97-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000136
将溴甲基三苯基膦(35.6g，100mmol)溶于THF(300mL)，氮气保护，冰水浴条件下分批次加入t-BuOK(11.2g，100mmol)，加完后在此温度下反应一个小时，得到这个溶液，备用。将SM 29(21g，100mmol)溶于THF(300mL)中，冰水浴条件冷却，将备用溶液滴入SM 29的THF溶液中，滴完冰水浴继续反应半个小时。将反应液倒入水(1L)，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-1(12g)，收率60％。 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(m,1H),7.32–7.28(m,1H),7.11(m,1H),5.43(m,1H),5.06(m,1H),2.97–2.84(m,2H),2.84–2.71(m,2H).
中间体6'-溴-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚](Int 97-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000137
将二碘甲烷(26.8g，100mmol)溶于DCM(50mL)中，氮气保护，降温到-70℃，将二乙基锌的有机溶液(100mL，1N in？)滴入其中，然后在-45℃反应两个小时，然后将三氯乙酸(16.3g，100mmol)的二氯甲烷溶液滴入其中，然后在-15℃反应两个小时，最后将Int 97-1(10.4g，50mmol)的二氯甲烷溶液滴入其中，然后室温反应12个小时。将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-2(8.8g)，收率80％。 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.20-7.18(m,1H),7.05–7.03(m,1H),6.76(s,1H),2.99-2.95(m,2H),2.14-2.08(m,2H),0.96-0.87(m,4H).
中间体6'-溴螺[环丙烷-1,1'-茚]-3'(2'H)-酮(Int 97-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000138
将Int 97-2(8.8g，40mmol)溶于丙酮(100mL)，加入水(100mL)，加入高锰酸钾(15.8g，100mmol)，五水硫酸铜(25g，100mmol)，然后室温反应24个小时。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取10次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-3(3.8g)，收率40％。质谱:237，239(M+H +)。
中间体6'-溴-3'-((三甲基甲硅烷基)氧基)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-3'-腈(Int 97-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000139
将Int 97-3(3.8g，16mmol)溶于DCM(100mL)，加入TMSCN(2g，20mmol)，NMO(580mg，5mmol),然后室温反应16个小时。将反应液倒入饱和NaHCO 3水溶液中，萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-4(2.7g，8mmol)，收率50％。质谱:336,338(M+H +)。
中间体6'-溴-3'-羟基-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-3'-碳酰亚胺盐酸盐(Int 97-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000140
将Int 97-4(2.7g，8mmol)溶于EtOH(30mL)，持续通入干燥的HCl气体5个小时。将反应液浓缩干，干燥，得Int 97-5(2.8g，8mmol)，收率100％。
中间体5-溴-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 97-6)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000141
将Int 97-5(2.8g，8mmol)溶于THF(20mL)，冰水浴条件下加入DIEA(5.2g，40mmol)，搅拌五分钟，再分批加入三光气(2.4g，8mmol)，然后反应1个小时。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-6(1.96g，6.4mmol)，收率80％。质谱:308,310(M+H +)。
中间体2-(5-溴-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 97-7)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000142
将Int 97-6(1.96g，6.4mmol)溶于DMF(20mL)，加入溴乙酸叔丁酯(1.36g，7mmol)，碳酸钾(1.38g，10mmol)，反应3个小时。将反应液倒入水中，萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-7(2.42g，5.76mmol)，收率90％。质谱:422,424(M+H +)。
中间体2-(5-((二苯基亚甲基)氨基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 97-8)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000143
将Int 97-7(2.42g，5.76mmol)，二苯甲酮亚胺(1.05g，5.76mmol)，碳酸铯(1.88g，5.76mmol)，醋酸钯(224mg，1mmol)，BINAP(311mg，0.5mmol)溶于甲苯(20mL)，氮气置换三次，加热到100℃反应5个小时。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-8(2.4g，4.6mmol)，收率80％。质谱:523(M+H +)。
中间体2-(5-氨基-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 97-9)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000144
将Int 97-8(2.4g，4.6mmol)溶于THF(20mL)，加入盐酸溶液(10mL，1N)，室温反应2个小时。将反应液用NaHCO 3溶液处理，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-9(1.64g，4.6mmol)，收率100％。质谱:315(M-43)。
中间体2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 97-10)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000145
将Int 97-9(1.64g，4.6mmol)溶于THF(15mL)，加入三光气(1.4g，4.6mmol)，室温反应十分钟，然后加入DIEA(3.9g，30mmol)，最后加入甲胺盐酸盐(310mg，4.6mmol)，室温反应1个小时。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 97-10(1.7g，4.1mmol)，收率90％。质谱:416(M+H +)。
中间体2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int 97-11)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000146
将Int 97-10(1.7g，4.1mmol)溶于DCM(15mL)，加入TFA(1.5mL)，室温反应1个小时。浓缩干得Int 97-11(1.47g，4.1mmol)，收率100％。质谱:360(M+H +)。
化合物1-(3'-(2-(2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(97)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000147
将中间体Int 97-11(30mg，89μmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入SM 30(20mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品97(26mg)，收率50％。质谱:521.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.71(s,1H),7.44-7.35(m,1H),7.32-7.19(m,3H),7.17-7.03(m,3H),6.13-6.00(m,1H),5.26-4.92(m,1H),4.52(m,2H),4.27-3.41(m,1H),2.77(m,1H),2.62(t,J＝3.8Hz,3H),2.39(dd,J＝13.6,7.7Hz,2H),2.01(ddd,J＝11.8,10.4,6.5Hz,1H),1.95-1.84(m,1H),1.74(dd,J＝49.7,7.9Hz,1H),1.52(dd,J＝11.0,4.1Hz,1H),1.38(dd,J＝6.1,3.8Hz,3H),1.10-1.05(m,1H),1.03-0.95(m,1H),0.93-0.83(m,1H).
实施例98化合物1-(3'-(2-(N-(4-氟苄基)-N-((S)-1,1,1-三氟丙-2-基))-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(98)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000148
中间体2-(5-((二苯基亚甲基)氨基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑]-3'-基)-N-(4-氟苄基)-N-((S)-1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(Int 98-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000149
将Int 308-3(3.27g，5.76mmol)，二苯甲酮亚胺(1.05g，5.76mmol)，碳酸铯(1.88g，5.76mmol)，醋酸钯(224mg，1mmol)，BINAP(311mg，0.5mmol)溶于甲苯(30mL)，氮气置换三次，加热到100℃反应5个小时。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 98-1(3g，4.6mmol)，收率80％。质谱:670(M+H +)。
中间体2-(5-氨基-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑]-3'-基)-N-(4-氟苄基)-N-((S)-1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(Int 98-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000150
将Int 98-1(3g，4.6mmol)溶于THF(20mL)，加入盐酸溶液(10mL，1N)，室温反应2个小时。将反应液用NaHCO 3溶液处理，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得Int 98-2(2.3g，4.6mmol)，收率100％。质谱:462(M-43)。
化合物2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑]-3'-基)-N-(4-氟苄基)-N-((S)-1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(98)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000151
将Int 98-2(2.3g，4.6mmol)溶于THF(20mL)，加入三光气(1.4g，4.6mmol)，室温反应十分钟，然后加入DIEA(3.9g，30mmol)，最后加入甲胺盐酸盐(310mg，4.6mmol)，室温反应1个小时。将反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得化合物98(1.15g，2.05mmol)，收率45％。质谱:563(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.32(m,2H),7.13(m,2H),6.94(m,3H),5.55-5.39(m,1H),4.69(m,2H),4.43(m,1H),4.24(m,1H),2.90(m,1H),2.79(s,3H),2.44(m,1H),1.33(m,3H),1.16-1.00(m,4H)。
实施例99化合物N-((3S,5S,7S)-金刚烷-1-基)-2-((R)-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑]-3'-基)乙酰胺(99)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000152
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，0.09mmol)，DMF(1mL)， DIEA(35mg，0.27mmol)和HATU(41mg，0.108mmol)，然后加入SM 32(21mg，0.14mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品99(18mg)，收率43％。质谱:467.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ：8.72(s,1H),7.82(s,1H),7.55(s,1H),7.33-7.06(m,2H),6.10(q,J＝4.4Hz,1H),4.09(q,J＝16.6Hz,2H),3.66-3.55(m,1H),3.18-3.05(m,1H),3.05-2.92(m,1H),2.68-2.56(m,4H),2.49-2.40(m,1H),2.02(s,3H),1.93(d,J＝2.0Hz,6H),1.82-1.68(m,1H),1.63(s,6H).
实施例100化合物(R)-1-(3'-(2-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(100)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000153
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，90μmol),DMF(1mL)，DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入SM 33(18mg，135μmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层,用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品100(20mg,收率50％)。质谱:449.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.74(s,1H),7.56(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.30-7.00(m,5H),6.10(q,J＝4.4Hz,1H),4.78(s,1H),4.73-4.44(m,3H),3.78-3.71(m,2H),3.17-3.09(m,1H),3.05-2.91(m,2H),2.82(t,J＝6.0Hz,1H),2.70-2.57(m,4H),2.55-2.51(m,1H)。
实施例101化合物1-((R)-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((S)-3-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(101)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000154
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，90μmol)，DMF(1mL)，DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入SM 34(20mg，135μmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品101(16mg,收率38％)。质谱:463(M+H +)。
实施例102化合物(R)-1-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(3-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3- 二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(102)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000155
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，90μmol)，DMF(1mL)，DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入SM 35(20mg，135μmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品102(18mg,收率43％)。质谱:463(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.73(s,1H),7.57(s,1H),7.44-7.30(m,5H),7.30-7.04(m,2H),6.09(d,J＝4.5Hz,1H),4.58-4.34(m,2H),3.95-3.82(m,1H),3.71-3.61(m,1H),3.56-3.49(m,1H),3.43-3.38(m,1H),3.35-3.21(m,1H),3.15-3.09(m,1H),3.03-3.00(m,1H),2.71-2.56(m,4H),2.57-2.51(m,1H),2.42-2.16(m,1H),2.15-1.83(m,1H)。
实施例103化合物1-((R)-(3'-(2-((1S,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(103)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000156
将中间体Int 1-15(30mg，90μmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入SM 36(15mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品103(20mg)，收率50％。质谱:415(M+H +)。
实施例105化合物(R)-N-(3-羟基-2,2,4,4-四甲基环丁基)-2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑]-3'-基)乙酰胺(105)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000157
将Int 1-15(30mg，90μmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入SM 37(19mg，135μmol)， 室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品105(17mg)，收率65％。质谱:459(M+H +)。
实施例106化合物1-((1R)-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-苯基氮杂环丁-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(106)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000158
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，90μmol)，DMF(1mL)，DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入SM 38(18mg，135μmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品106(16mg，收率40％)。质谱：449(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.72(s,1H),8.72(s,1H),7.63-7.50(m,2H),7.47(t,J＝6.9Hz,1H),7.42-7.08(m,5H),6.07(d,J＝2.9Hz,1H),5.76-5.14(m,1H),4.51-3.87(m,4H),3.19-3.03(m,1H),3.03-2.75(m,1H),2.86-2.74(m,1H),2.69-2.56(m,4H),2.48-2.35(m,1H),2.25-1.94(m,1H)。
实施例107化合物1-((R)-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((S)-3-苯基吗啉基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(107)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000159
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，90μmol)，DMF(1mL)，DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入SM 39(22mg，135μmol)，室温搅拌过夜。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层,用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品107(19mg,收率44％)。质谱:479(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.72(s,1H),7.56(s,1H),7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.40-7.15(m,6H),6.09(d,J＝4.4Hz,1H),5.31(d,J＝113.0Hz,1H),4.92-4.51(m,2H),4.43(d,J＝12.2Hz,1H),4.24-3.90(m,1H),3.89-3.72(m,2H),3.56(dt,J＝23.1,10.7Hz,1H),3.28(d,J＝11.3Hz,1H),3.13(dt,J＝15.5,7.5Hz,1H),3.06-2.95(m,1H),2.65(t,J＝11.3Hz,4H),2.52(s,1H).
实施例108化合物1-((1R)-(3'-(2-((4S)-2-(叔丁基)-4-苯基恶唑烷-3-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(108)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000160
中间体(4S)-2-叔丁基-4-苯基唑烷(Int 108-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000161
向250mL的反应瓶中加入化合物(S)-2-氨基-2-苯乙醇(10g，73mmol)，SM40(45g，80mmol)，三乙胺(707mg，7.3mmol)和甲苯(100mL)，反应液回流带水大约7～8个小时，反应完毕后，减压旋去溶剂得粗产品，柱层析得Int 108-1(2.3g,收率15％)。质谱:206(M+H +)。
化合物1-((1R)-(3'-(2-((4S)-2-(叔丁基)-4-苯基恶唑烷-3-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(108)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000162
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，90μmol)，DMF(1mL)，DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入Int 108-1(28mg，135μmol)，室温搅拌过夜。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层,用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品108(13mg,收率28％)。质谱:521.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.73(d,J＝4.4Hz,1H),7.49(dt,J＝14.7,10.3Hz,5H),7.34(t,J＝6.8Hz,1H),7.30-7.18(m,2H),6.10(dd,J＝4.4,2.0Hz,1H),5.55(t,J＝6.2Hz,1H),5.33(s,1H),4.72(t,J＝15.9Hz,1H),4.52(t,J＝7.0Hz,1H),4.17-4.12(m,1H),4.08-3.93(m,1H),3.18-3.05(m,1H),2.99(dd,J＝12.6,9.6Hz,1H),2.71-2.56(m,4H),2.44(s, 1H),0.87(d,J＝6.5Hz,9H).
实施例109化合物(R)-1-甲基-3-(3'-(2-(6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(三氟甲基)-3,4-二氢喹啉-1-(2H)-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(109)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000163
中间体6-溴-7-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉(Int 109-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000164
向30mL的反应瓶中加入化合物SM 41(200mg，1mmol)和二氯甲烷(3mL)，然后加入N-溴代丁二酰亚胺(178mg，1mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中加入水(5mL)，用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，粗产品柱层析纯化得产品Int 109-1(94mg,收率34％)。质谱:280(M+H +)。
中间体6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(三氟甲基)-1,2,3,4-四氢喹啉(Int 109-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000165
向50mL的反应瓶中加入化合物Int 109-1(94mg，0.34mmol)，1-甲基-1H-吡唑-5-硼酸频哪醇酯(84mg，0.4mmol)，碳酸钠(139mg，1mmol)，DMF(3mL)和水(0.1mL)，在氮气置换后加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(30mg，0.04mmol)，反应液氮气保护，90℃下搅拌过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层,用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品Int 109-2(35mg,收率36％)。质谱:282(M+H +)。
化合物(R)-1-甲基-3-(3'-(2-(6-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(三氟甲基)-3,4-二氢喹啉-1-(2H)-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(109)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000166
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，90μmol)，Int 109-2(25mg，90μmol)，二氯甲烷(1mL)和水(1mL)，最后加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(34mg，135μmol)，室温搅拌过夜。向反应液中加入水(5mL)，用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品109(15mg,收率28％)。质谱:597.2(M+H +)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75(s,1H),8.26(s,1H),7.89(s,1H),7.56(d,J＝5.3Hz,2H),7.39(s,1H),7.26(dt,J＝8.5,5.1Hz,2H),6.14-6.05(m,1H),4.74(s,2H),3.89(s,5H),3.14(dt,J＝15.6,7.6Hz,1H),3.01(ddd,J＝16.3,8.6,3.3Hz,1H),2.85(t,J＝6.3Hz,2H),2.66(dd,J＝18.8,6.3Hz,4H),2.54(s,1H),1.98(dd,J＝12.4,6.5Hz,2H).
实施例110化合物(R)-1-(2',4'-二氧代-3'-((5-苯基-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(110)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000167
中间体(R)-2-氧代-2-苯基乙基-2-(5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸乙酯(Int 110-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000168
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(20mg，60μmol)，2-溴-1-苯乙酮(12mg，60μmol)，DMF(1mL)，DIEA(9mg，72μmol)。室温搅拌过夜，反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品Int 110-1(27mg，收率100％)。质谱：452.1(M+H +)。
化合物(R)-1-(2',4'-二氧代-3'-((5-苯基-1H-咪唑-2-基)甲基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(110)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000169
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 110-1(27mg，60μmol)，醋酸铵(14mg，180μmol)，醋酸(2mL)和DMF(0.5mL)，该混合物加热到80℃搅拌5～6小时。向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品110(12mg，收率46％)。质谱:432.2(M+H +)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.28(s,1H),8.75(d,J＝9.2Hz,1H),7.78(d,J＝7.2Hz,1H),7.66-7.58(m,2H),7.53(d,J＝8.2Hz,1H),7.44-7.16(m,5H),6.13-6.05(m,1H),4.89-4.71(m,2H),3.14(dd,J＝15.8,7.9Hz,1H),3.01(ddd,J＝16.3,8.7,3.3Hz,1H),2.78-2.61(m,4H),2.59-2.52(m,1H)
实施例111化合物1-甲基-3-((R)-(3'-(2-(2-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(111)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000170
中间体(4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int 111-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000171
将向装有SM 42(2.08g，10mmol)的反应瓶中加入干燥的THF(20mL)，氮气保护，冰水浴条件下向瓶中加入异丙基溴化镁的四氢呋喃溶液(10mL，1M in THF)，然后撤去冰水浴，室温搅拌7小时，最后加入N-Boc-2-吡咯烷酮(1.85g，10mmol)，室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int111-1(1.34g，5mmol)，收率50％。质谱:268(M+H +)。
2-(3,4-二氢-2H-吡咯-5-基)-1-甲基-1H-咪唑(Int 111-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000172
将Int 111-1(1.34g，5mmol)溶于13mL DCM中，加入1.3mL TFA，室温下搅拌，TLC检测，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至中性，用DCM(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干得到Int 111-2(0.67g；90％)，质谱:150(M+H +)。
1-甲基-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑(Int 111-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000173
将Int 111-2(0.67g；4.5mmol)加入装有6mL甲醇的反应瓶中，室温搅拌下分批加入硼氢化钠(0.68g；18mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后将反应液倒入水中，30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到Int 111-3(0.61g；90％)，质谱：152(M+H +)。
化合物化合物1-甲基-3-((R)-(3'-(2-(2-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(111)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000174
将Int 1-15(30mg，90μmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入Int 111-3(20.3mg，135μmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品111(17mg,收率63％)。质谱:467(M+H +)。
实施例112化合物1-((1R)-(3'-(2-(2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(112)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000175
中间体叔丁基-3-(苯并[d][1,3]二恶英-4-羰基)-2-氧代吡咯烷-1-羧酸酯(Int 112-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000176
将叔丁基-2-氧代吡咯烷-1-羧酸酯(1.8g，10mmol)和苯并[d][1,3]二恶英-4-羧酸甲酯(1.8g，10mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，加入氢化钠(0.8g，20mmol)，升温至50℃，反应4小时。将反应液倒入冷水中，用2N盐酸调pH至5-6，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品直接用于下一步反应。
中间体5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 112-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000177
将上一步得到的粗品溶于二氧六环(10mL)中，加入浓盐酸(30mL)，加热至100℃，搅拌过夜。用碳酸氢钠将pH调至7-8，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。溶于二氯甲烷(20mL)，加入三氟醋酸(2mL)，室温搅拌过夜，浓缩，加水，调pH至7-8，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到无色液体Int 112-2(0.7g)，两步收率：37％。质谱：190(M+H +)。
中间体2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)吡咯烷(Int 112-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000178
将中间体Int 112-2(0.7g，3.7mmol)溶于甲醇(10mL)中，冰浴下加入NaBH 4(0.38g，10mmol)，搅拌4小时，加入硅藻土，水(10mL)，过滤，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到淡黄色液体Int 112-3(650mg)，收率93％。质谱：192(M+H +)。
化合物1-((1R)-(3'-(2-(2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(112)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000179
将Int 1-15(30mg，90μmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，270μmol)和HATU(41mg，108μmol)，然后加入Int 112-3(25.8mg，135μmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品112(17mg，收率61％)。质谱:507(M+H +)。
实施例114化合物N-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺环[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)乙酰胺(114)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000180
中间体2-溴-1-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-(甲基)吡咯烷-1-基)乙-1-酮(Int 114-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000181
将中间体Int 14-3(900mg，5mmol)，溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴下滴加溴乙酰溴(200mg，10mmol)，搅拌1小时，二氯甲烷萃取，柱层析得到白色固体Int 114-1(1.35g)，收率90％。质谱：300,302(M+H +)。
中间体(R)-5-溴-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-(甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 114-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000182
将中间体Int 1-4(500mg，1.8mmol)，中间体Int 114-1(550mg，1.8mmol)以及碳酸钾(500mg，3.6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，室温下搅拌4小时，加入水(50mL)，过滤，干燥，得到白色固体Int 114-2(800mg)，收率89％。质谱：501,503(M+H +)。
中间体(R)-5-(二苯基亚甲基)氨基)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-(甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 114-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000183
将中间体Int 114-2(800mg，1.6mmol)，二苯甲酮亚胺(350mg，1.9mmol)，醋酸钯(13mg，0.06mmol)，1,1-联萘-2,2-双二苯膦(72mg，0.12mmol)和碳酸铯(780mg，2.4mmol)溶于甲苯(5mL)中，氮气置换，升温至100℃，搅拌4小时。浓缩，柱层析得到灰色固体Int 114-3(770mg)，收率80％。质谱：602(M+H +)。
中间体(R)-5-氨基-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 114-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000184
将中间体Int 114-3(770mg，1.3mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，室温下加入盐酸(10mL，2N)，搅拌30分钟。乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体Int 114-4(400mg)，收率70％。质谱：394(M-43)。
化合物N-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺环[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)乙酰胺(114)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000185
将中间体Int 114-4(30mg，0.2mmol)和三乙胺(60mg，0.6mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，冰浴下，将以乙酰氯(24mg，0.3mmol)缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时。加入水(10mL)，分出有机层，二氯甲烷 萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体114(20mg)，收率58％。质谱：480.2(M+H +)。
实施例115化合物((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺环[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)氨基甲酸甲酯(115)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000186
将中间体Int 114-4(30mg，0.2mmol)和三乙胺(60mg，0.6mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，冰浴下，将以甲氧基甲酰氯(34mg，0.3mmol)缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时。加入水(10mL)，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体115(23mg)，收率60％。质谱：496.2(M+H +)。
实施例201化合物1-(R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(201)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000187
中间体(S)-(5-(3,4-二氟苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 201-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000188
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 44(2.4g，10mmol)， 氮气保护，冰水浴条件下加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入(S)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 201-1(1.72g，5.5mmol)，收率55％。质谱:314(M+H +)。
中间体(S)-5-(3,4-二氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 201-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000189
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 201-1(1.56g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 201-2(780mg，4mmol)，收率80％。质谱:196(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.71(ddd,J＝11.3,7.8,2.1Hz,1H),7.63-7.50(m,1H),7.18(dt,J＝10.0,8.3Hz,1H),4.39-4.14(m,1H),3.01(m,1H),2.93-2.71(m,1H),2.28(m,1H),1.68-1.51(m,1H),1.36(d,J＝6.8Hz,3H)。
Int 201-3(Int 201-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000190
向反应瓶中加入DCM(15mL)，然后加入Int 201-2(780mg，4mmol)，再冰水浴条件下加入DIBAL-H(16mL，1M in hexane)，然后室温反应1小时。加少量水淬灭后，过滤，DCM(15mL×3)洗，浓缩后得Int 201-3(752mg，3.8mmol)，收率95％。质谱:198(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ7.25-7.16(m,1H),7.09-7.04(m,2H),4.22-3.95(m,1H),3.38-3.27(m,1H),2.20-2.10(m,1H),1.96(m,1H),1.73-1.58(m,1H),1.51-1.38(m,1H),1.24(d,J＝6.2Hz,3H)。
化合物1-(R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(201)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000191
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 201-3(197mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物201(282mg)，收率55％。质谱:513(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.71(s,1H),7.54(d,J＝5.7Hz,2H),7.44-7.33(m,1H),7.29-7.15(m,3H),6.08(s,1H),5.29-4.91(m,1H),4.41(m,2H),3.52(m,1H),3.18-2.93(m,2H),2.63(t,J＝3.8Hz,3H),2.60-2.53(m,1H),2.45-2.31(m,2H),1.99(s,2H),1.85-1.62(m,1H),1.36(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例205化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(3,4,5-三氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(205)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000192
中间体(S)-(5-氧代-5-(3,4,5-三氟苯基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 205-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000193
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 45(2.57g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反 应7小时，最后加入(S)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 205-1(2g，6mmol)，收率60％。质谱:332(M+H +)。
中间体(S)-2-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 205-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000194
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 205-1(1.66g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 205-2(852mg，4mmol)，收率80％。质谱:214(M+H +)。
中间体(2S,5S)-2-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 205-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000195
向反应瓶中加入DCM(15mL)，然后加入Int 205-2(852g，4mmol)，再冰水浴条件下加入DIBAL-H(16mL，1M in hexane)，然后室温反应1小时。加少量水淬灭后，过滤，DCM洗3次(15mL×3)，浓缩后得Int 205-3(774mg，3.6mmol)，收率90％。质谱:216(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.09-6.99(m,2H),4.12(t,J＝7.7Hz,1H),3.34(m,1H),2.33(m,1H),2.16(m,1H),1.94(m,1H),1.69-1.54(m,1H),1.52-1.34(m,1H),1.23(d,J＝6.2Hz,3H)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(3,4,5-三氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(205)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000196
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 205-3(215mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应2小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物205(265mg)，收率50％。质谱:531(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.72(s,1H),7.54(d,J＝4.3Hz,1H),7.33-7.21(m,2H),7.17(s,1H),7.10(dd,J＝8.9,6.8Hz,1H),6.16-6.00(m,1H),5.08(m,1H),4.77-4.34(m,2H),3.60(dd,J＝7.5,5.4Hz,1H),3.11(dd,J＝16.0,7.7Hz,1H),2.98(dd,J＝10.9,5.6Hz,1H),2.70-2.57(m,4H),2.43-2.31(m,1H),2.16-1.79(m,2H),1.79-1.71(m,1H),1.48(d,J＝6.3Hz,1H),1.35(dd,J＝6.3,2.4Hz,3H)。
实施例209化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4,4-二二氟环己基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(209)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000197
中间体1,1-二叔丁基2-乙基乙烷-1,1,2-三羧酸酯(Int 209-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000198
将SM 46(21.6g；0.1mol)溶于(220mL)THF中，加入NaH(6.67g；60％；0.1mol)室温搅拌30分钟。再向反应瓶中加入SM 47(16.7g；0.1mol)，并继续室温下搅拌，TLC监测。反应完毕后，将反应液倒入冰水(220mL)中，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类油状产品Int 209-1(25.6g；85％)。质谱:303(M+H +)。
中间体4,4-二氟环己烷碳酰氯(Int 209-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000199
将SM 48(16.4g，0.1mol)容于DCM(17mL)中，加入1滴DMF，并滴入草酰氯(14g，0.11mol)，滴加完毕后，室温下搅拌4小时。浓缩得粗产品Int 209-2(18.2g,100％)。直接用于下一步。
中间体2,2-二叔丁基-1-乙基-3-(4,4-二氟环己基)-3-氧代丙烷-1,2,2-三羧酸酯(Int 209-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000200
将Int 209-1(25.6g；85mmol)溶于THF(250mL)中，加入NaH(5.6g；60％；85mmol)室温下搅拌30分钟，滴入Int 209-2(18.2g,100mmol)的THF溶液(182mL)，室温下反应4小时。将反应液倒入冰水(250mL)中，用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，用饱和食盐食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩得到粗产品，柱层析后得油状产品Int 209-3(34.3g,90％)。质谱:449(M+H +)。
中间体4-(4,4-二氟环己基)-4-氧代丁酸乙酯(Int 209-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000201
将Int 209-3(34.3g,76mmol)加入甲苯(340mL)中，加入对甲苯磺酸(1.3g；7.6mmol)，回流，TLC监测。反应完毕后，减压蒸馏除去溶剂，柱层析分离得到油状Int 209-4(15.4g,82％)。质谱:249(M+H +)。
中间体4-(4,4-二氟环己基)-4-氧代丁酸(Int 209-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000202
将Int 209-4(15.4g,62mmol)加入水/甲醇(1/10，15mL)的混合溶剂中，加入一水合氢氧化锂(13.0g；310mmol)室温下搅拌，TLC监测。反应完毕后，减压蒸馏除去大部分溶剂，用HCl(2N)溶液调节pH至2～3，用DCM(100mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂得到产品Int.209-5(12.5g,92％)。质谱:221(M+H +)。
中间体(3R,7aR)-7a-(4,4-二氟环己基)-3-苯基四氢吡咯并[2,1-b]恶唑-5(6H)-酮(Int 209-6)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000203
将Int 209-5(12.5g,57mmol)和D-苯甘氨醇(7.8g,57mmol)加入甲苯(130mL)中，回流分水，TLC监测。反应完毕后，柱层析分离的产品Int 209-6(14.4g,79％)。质谱:322(M+H +)。
中间体(S)-5-(4,4-二氟环己基)-1-((R)-2-羟基-1-苯基乙基)吡咯烷-2-酮(Int 209-7)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000204
将Int 209-6(14.4g,45mmol)和Et 3SiH(17.21g,148.5mmol)加入DCM(150mL)中，氮气保护下冷却至-70℃，滴入TiCl 4的THF溶液(99ml,1M,99mmol),控制反应温度低于-65℃，滴加完毕后自然升温至室温搅拌，TLC监测。反应完毕后，用饱和NaHCO 3溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏的产品Int 209-7(13.8g,95％)。质谱:324(M+H +)。
中间体(S)-1-((R)-2-氯-1-苯基乙基)-5-(4,4-二氟环己基)吡咯烷-2-酮(Int 209-8)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000205
将Int 209-7(13.8g,43mmol)加入THF(140mL)中,滴入氯化亚砜(10.2g,86mmol)，室温搅拌，TLC监测。反应完毕后，用饱和NaHCO 3溶液洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏的产品Int 209-8(13.9g,95％)。质谱:342(M+H +)。
中间体(S)-5-(4,4-二氟环己基)-1-(1-苯基乙烯基)吡咯烷-2-酮(Int 209-9)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000206
将Int 209-8(13.9g,40mmol)溶于t-BuOH(70mL)中，加入叔丁醇钠(7.68g,80mmol),45℃下搅拌，TLC监测。反应完毕后旋去一部分溶剂，加水(70mL),DCM(50mL×3)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏后得Int 209-9(11.6g,95％)。质谱:306(M+H +)。
中间体(S)-5-(4,4-二氟环己基)吡咯烷-2-酮(Int 209-10)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000207
将Int 209-9(11.6g,38mmol)溶于THF(120mL)中，加入HCl(1N；12mL)，加热回流，TLC监测。反应完毕后，用饱和NaHCO 3溶液调节pH至7～8，DCM(50mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得产品Int 209-10(7.37g,95％)。质谱:204(M+H +)。
中间体(S)-2-(4,4-二氟环己基)-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 209-11)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000208
将Int 209-10(7.37g,36mmol)溶于DCM(70mL)中，加入DMAP(0.44g,3.6mmol)及(Boc) 2O(7.84g，36mmol)，室温下搅拌，TLC监测，反应完毕后，用HCl(0.5N；70mL×2)洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得产品Int 209-11(10.36g,95％)。质谱:304(M+H +)。
中间体(S)-叔丁基-(1-(4,4-二氟环己基)-4-氧代戊基)氨基甲酸酯(Int 209-12)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000209
将Int 209-11(303mg,1mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，冰水浴冷却至零度后，滴入甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(1M in THF；1mL)，自然升温至室温下搅拌，TLC监测。反应完毕后将反应液倒入饱和氯化铵水溶液(6mL)中，用乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得产品Int 209-12(223mg,70％)。质谱:320(M+H +)。
中间体(S)-2-(4,4-二氟环己基)-5-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 209-13)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000210
将Int 209-12(223mg,0.7mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温下搅拌，TLC监测。反应完毕后直接减压蒸馏除去溶剂，得Int 209-13(131mg,93％)。质谱:202(M+H +)。
中间体(2S,5S)-2-(4,4-二氟环己基)-5-甲基吡咯烷(Int 209-14)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000211
将Int 209-13(131mg,0.65mmol)溶于二氯甲烷(1.5mL)中，冰水浴冷却至零度，滴入二异丁基氢化铝的正己烷溶液(1M in hexane；2.28mL)。自然升温至室温下搅拌，TLC监测。反应完毕后，加入二氯甲烷(3mL)，冰水浴冷却至零度，依次加入水(0.09mL)，15％的氢氧化钠水溶液(0.09mL)，水(0.23mL)，无水硫酸钙，搅拌10分钟，过滤，二氯甲烷淋洗。无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得产品Int 209-14(112mg,85％)。质谱:204(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4,4-二二氟环己基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(209)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000212
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，0.06mmol)，DMF(1mL)，Int 209-14(12mg，0.06mmol)和HATU(34mg，0.09mmol)，体系在室温下反应3小时。反应完毕后，将反应液倒入水(30mL)中，用15mL(5mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物209(17mg)，收率57％。质谱:519(M+H +)。
实施例212化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4,4-二氟环己基)-5-乙基-吡咯烷-1- 基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(212)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000213
中间体(S)-(1-(4,4-二氟环己基)-4-氧代己基)氨基甲酸叔丁酯(Int 212-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000214
将Int 209-11(303mg,1mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，冰水浴冷却至0℃，滴入甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(1M in THF；1mL)，自然升温至室温下搅拌，TLC监测。反应完毕后将反应液倒入饱和氯化铵水溶液(6mL)中，用乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得产品Int 212-1(243mg,73％)。质谱:334(M+H +)。
中间体(S)-2-(4,4-二氟环己基)-5-乙基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 212-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000215
将Int 212-1(243mg,0.7mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(0.2mL)，室温下搅拌，TLC监测。反应完毕后直接减压蒸馏除去溶剂，得Int 212-2(138mg,88％)。质谱:216(M+H +)。
中间体(2S,5S)-2-(4,4-二氟环己基)-5-乙基吡咯烷(Int 212-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000216
将Int 212-2(138mg,0.64mmol)溶于二氯甲烷(1.5mL)中，冰水浴冷却至0℃，滴入二异丁基氢化铝的正己烷溶液(1M in hexane；2.28mL)。自然升温至室温下搅拌，TLC监测。反应完毕后，加入二氯甲烷(3mL)，冰水浴冷却至零度，依次加入水(0.09mL)，15％的氢氧化钠水溶液(0.09mL)，水(0.23mL)，无水硫酸钙，搅拌10分钟，过滤，二氯甲烷淋洗。无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得产品Int 212-3(111mg,80％)。质谱:218(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4,4-二氟环己基)-5-乙基-吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(212)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000217
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，0.06mmol)，DMF(1mL)，Int 212-3(13mg，0.06mmol)和HATU(34mg，0.09mmol)，体系在室温下反应3小时。反应完毕后，将反应液倒入水(30mL)中，用15mL(5mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物212(25mg)，收率78％。质谱:533(M+H +)。
实施例213化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(213)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000218
中间体(S)-(5-(3-氯-4-氟苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 213-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000219
向100mL的反应瓶中加入干燥THF(25mL)，然后加入1-氟-2-氯-4-碘苯(5g，19.5mmol)，用冰水浴冷却至0℃，缓慢加入异丙基氯化镁(10mL，2.0M in THF)，加完后移除冰水浴恢复至室温搅拌3小时。将原料(S)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4.9g，24.8mmol)溶解在THF(10mL)快速加入至上述反应液中，室温反应3小时。反应完毕后，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，用(30mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得粗产品Int 213-1(8g)。质谱:330(M+H) +。
中间体(S)-5-(3-氯-4-氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯烷(Int 213-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000220
将粗产品Int 213-1溶解于DCM(50mL)中，加入TFA(5mL)，室温搅拌反应16小时，反应完毕后，浓缩，加入水(50mL)，用碳酸氢钠调节PH至7-8，用(30mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化后得化合物Int 213-2(2.4g)，两步收率60％。质谱:212(M+H) +。
中间体(2S,5S)-2-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 213-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000221
将Int 213-2(2g，9.4mmol)溶解于DCM(50mL)中，冰水浴下加入DIBAL-H(22mmol，1M in hexane)，室温搅拌反应2小时，反应完毕后，浓缩，加入水(50mL)，用(30mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化后得化合物Int 213-3(650mg)，收率33％。质谱:180(M+H) +。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.45(dd,J＝7.2,2.1Hz,1H),7.23(dddd,J＝8.4,4.6,2.2,0.4Hz,1H),7.06(t,J＝8.7Hz,1H),4.11(t,J＝7.9Hz,1H),3.31(dd,J＝14.1,7.0Hz,1H),2.18-2.09(m,1H),1.95(dddd,J＝12.6,8.7,7.1,5.8Hz,1H),1.69-1.59(m,1H),1.44(dddd,J＝12.4,10.2,8.1,6.2Hz,1H),1.24(t,J＝6.1Hz,3H).
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(213)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000222
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 213-3(213mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物213(280mg)，收率60％。质谱:529(M+H +)。
实施例217化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(2,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(217)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000223
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 217(20mg， 0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品217(17mg)，收率55％。质谱:513(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.59-7.40(m,1H),7.33(m,1H),7.22-6.68(m,4H),5.29-5.00(m,2H),4.43-4.26(m,1H),4.21-3.81(m,1H),3.19-2.92(m,2H),2.81-2.60(m,4H),2.50(m,2H),2.29-1.75(m,3H),1.40(m,3H).
实施例221化合物(R)-5-(1,4-二甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(221)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000224
将Int 114-2(50mg，0.1mmol)，1,4-二甲基-1H-1,2,3-三唑(11mg，0.11mmol)，醋酸钯(6mg，0.02mmol)，x-phos(8mg，0.025mmol)以及醋酸钾(25mg，0.2mmol)溶于叔戊醇(5mL)中，氮气置换，加热至120℃，搅拌4小时，浓缩，加水(5mL)，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到淡黄色固体221(33mg)，收率64％。质谱:518(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ7.70-7.48(m,3H),7.45-7.10(m,4H),5.11(dt,J＝16.3,7.6Hz,1H),4.60(dd,J＝148.1,16.6Hz,2H),4.24(dd,J＝11.9,6.2Hz,1H),3.93(d,J＝7.7Hz,3H),3.22(m,1H),3.13(m,1H),2.72-2.60(m,1H),2.40(m,1H),2.22(d,J＝6.8Hz,3H),2.10-1.96(m,1H),1.90(m,1H),1.74(m,1H),1.54(m,1H),1.37(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例225化合物1-((R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((S)-2-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(225)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000225
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入SM 50(20mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取两次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品225(23mg)，收率50％。质谱:463(M+H +)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.73(d,J＝5.4Hz,1H),7.54(d,J＝5.0Hz,1H),7.40(t,J＝7.4Hz,1H),7.30(dt,J＝8.4,7.1Hz,3H),7.26-7.13(m,3H),6.13-6.04(m,1H),5.21(dd,J＝64.8,7.2Hz,1H),4.62-3.88 (m,2H),3.71(q,J＝9.2Hz,1H),3.66-3.50(m,1H),3.09(td,J＝16.8,8.1Hz,1H),2.96(tdd,J＝15.0,10.0,5.3Hz,1H),2.69-2.55(m,4H),2.41(ddd,J＝14.3,8.0,3.4Hz,1H),2.25(ddd,J＝18.9,9.4,5.8Hz,1H),1.97-1.68(m,3H).
实施例300化合物(R)-1-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(7-(三氟甲基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(300)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000226
向30mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(30mg，90μmol)，SM 300(18mg，90μmol)，二氯甲烷(1mL)和水(1mL)，最后加入EEDQ(34mg，135μmol)，室温搅拌过夜。向反应液中加入水(5mL)，用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有机层,用无水硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，粗产品柱层析纯化得产品300(20mg)，收率43％。质谱:517.2(M+H +)。
实施例302化合物(R)-1-甲基-3-(3'-(2-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(302)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000227
中间体6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1,2,3,4-四氢喹啉(Int 302-1)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000228
将6-溴-1,2,3,4-四氢喹啉(212mg，1mmol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(208mg，1mmol)，醋酸钾(200mg，2mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(73mg，0.1mmol)加入二氧六环(20mL)中，氮气置换三次，加热至100℃，反应4小时，浓缩，加水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析后得到黄色固体Int 302-1(98mg)，收 率46％。质谱：214(M+H +)。
化合物(R)-1-甲基-3-(3'-(2-(6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(302)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000229
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)，中间体Int 302(22mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于DMF(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体302(35mg)，收率66％。质谱:529(M+H +)。
实施例303化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(303)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000230
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入SM 52(20mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得类白色固体产品303(23mg),收率50％。质谱:463(M+H +)。
实施例304化合物(R)-1-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(5H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(7H)-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(304)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000231
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 53(12mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg， 0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物304(19mg)，收率44％。质谱:436.2(M+H +)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75(s,1H),8.50(d,J＝4.3Hz,1H),7.83(d,J＝7.7Hz,1H),7.60-7.54(m,1H),7.42-7.32(m,2H),7.25(ddd,J＝8.4,3.6,1.9Hz,1H),6.10(q,J＝4.4Hz,1H),5.06(d,J＝18.9Hz,2H),4.74(d,J＝26.0Hz,2H),4.67-4.51(m,2H),3.18-3.09(m,1H),3.01(ddd,J＝16.4,8.7,3.3Hz,1H),2.75-2.61(m,4H),2.58-2.52(m,1H).
实施例305化合物(S)-1-(3'-(2-(5,7-二氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(305)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000232
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 53(13mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体305(33mg)，收率76％。质谱:436(M+H +)。
实施例306化合物1-((R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((R)-2-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(306)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000233
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 54(15mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物306(17mg)，收率37％。质谱:463.2(M+H +)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(d,J＝5.4Hz,1H),7.41(t,J＝7.5Hz,1H),7.30(dt,J＝10.4,4.4Hz,3H),7.23-7.10(m,3H),6.10-6.03(m,1H),5.20(dd,J＝65.9,7.6Hz,1H),4.66-3.88(m,2H),3.75-3.67(m,1H),3.65-3.48(m,1H),3.09(dt,J＝13.8,7.3Hz,1H),2.96(ddd,J＝16.1,11.2,4.7Hz,1H),2.65-2.54(m,4H),2.48-2.41(m,1H),2.25(ddd,J＝14.9,11.8,7.8Hz,1H),1.98-1.71(m,3H).
实施例308化合物2-(5-(3,5-二甲基异唑-4-基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑]-3'-基)-N-(4-氟苄基)-N-((S)-1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(308)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000234
中间体(S)-1,1,1-三氟-N-(4-氟苄基)丙-2-胺(Int 308-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000235
将SM 55(1.88g，10mmol)溶于DMF(15mL)中，加入碳酸钾(2.76g，20mmol)和(S)-1,1,1-三氟异丙胺盐酸盐(1.5g，10mmol)，室温搅拌6小时。反应液倒入水(60mL)，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得中间体Int 308-1(1.8g，8mmol),收率80％。质谱:222(M+H +)。
中间体(S)-2-溴-N-(4-氟苄基)-N-(1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(Int 308-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000236
将中间体Int 308-1(1.8g，8mmol)溶于DCM(15mL)中，冰水浴冷却，加入溴乙酰溴(1.6g，8mmol)，搅拌3小时。反应液倒入水(60mL)，用DCM萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得中间体Int 308-2(2.19g，6.4mmol)，收率80％。质谱:342，344(M+H +)。
中间体2-(5-溴-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑]-3'-基)-N-(4-氟苄基)-N-((S)-1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(Int 308-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000237
将中间体Int 308-2(2.19g，6.4mmol)和中间体Int 97-7(1.97g，6.4mmol)溶于DMF(15mL)中，加入碳酸钾(1.38g，10mmol)，室温搅拌6小时。反应液倒入水(60mL)，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得中间体Int 308-3(3.27g，5.76mmol),收率90％。质谱:569,571(M+H +)。
化合物2-(5-(3,5-二甲基异唑-4-基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑]-3'-基)-N-(4-氟苄基)-N-((S)-1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(308)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000238
将中间体Int 308-3(569mg，1mmol)，3,5-二甲基异恶唑-4-硼酸频哪醇酯(223mg，1mmol)溶于dioxane(10mL)中，加入碳酸铯(652mg，2mmol)，Pd(dppf)Cl 2(73mg，0.1mmol)，氮气置换三次，加热到100℃搅拌6小时。反应液倒入水(60mL)，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得化合物308(351mg，0.6mmol)，收率60％。质谱:586(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.66-7.51(m,1H),7.31(m,2H),7.21-7.08(m,3H),6.62(s,1H),5.52(m,1H),4.70(m,2H),4.47(m,1H),4.25(m,1H),2.99(m,1H),2.56-2.47(m,1H),2.39(m,3H),2.27-2.18(m,3H),1.38-1.28(m,3H),1.22-1.10(m,3H),1.10-1.03(m,1H)。
实施例309化合物1-((S)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((R)-2-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(309)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000239
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入SM 54(20mg，0.1mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得类白色固体产品309(23mg)，收率50％。质谱:463(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.71(m,1H),7.54(m,1H),7.45-7.09(m,7H),6.15-6.00(m,1H),5.29-5.13(m,1H),4.53(m,1H),3.93(m,1H),3.71(m,1H),3.65-3.51(m,1H),3.09(m,1H),3.02-2.90(m,1H),2.73(s,1H),2.68-2.55(m,3H),2.48-2.34(m,1H),2.25(m,1H),1.98-1.67(m,3H)。
实施例310化合物1-((S)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((S)-2-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(310)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000240
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入SM 50(20mg，0.1mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得类白色固体产品310(23mg)，收率50％。质谱:463(M+H +)。H NMR(400MHz,CDCl3)：δ7.37(m,3H),7.28-6.84(m,5H),5.12(m,1H),4.49(s,1H),4.29(m,1H),3.83(m,2H),2.99(m,2H),2.71(s,3H),2.41(m,2H),2.07-1.82(m,4H)。
实施例311化合物(S)-1-(3'-(2-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(311)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000241
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入SM 33(15mg，0.1mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得类白色固体产品311(22mg)，收率50％。质谱:449(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.50(m,1H),7.36(s,1H),7.25-7.09(m,4H),6.94(s,1H),4.70(m,2H),4.51(s,2H),3.78(m,2H),3.22-2.45(m,9H)。
实施例314化合物(R)-1-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(3-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(314)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000242
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 35(15mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物314(25mg)，收率55％。质谱:463(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.73(s,1H),7.57(s,1H),7.40-7.31(m,5H),7.26(ddd,J＝17.1,9.6,5.2Hz,2H),6.09(d,J＝4.5Hz,1H),4.45(dtd,J＝45.6,17.1,3.6Hz,2H),3.88(dt,J＝35.4,8.0Hz,1H),3.65(dt,J＝16.6,10.5Hz,1H),3.51(t,J＝9.1Hz,1H),3.44-3.37(m,1H),3.32-3.22(m,1H),3.13(dt,J＝15.6,7.6Hz,1H),3.06-2.94(m,1H),2.70-2.59(m,4H),2.56-2.51(m,1H),2.40-2.20(m,1H),2.13-1.89(m,1H).
实施例315化合物1-((S)-3'-(2-((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(315)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000243
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入原料(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(16mg，0.1mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得类白色固体产品315(26mg)，收率50％。质谱:415(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.58-7.25(m,2H),7.10-6.87(m,1H),5.00-4.25(m,3H),4.00-3.75(m,2H),3.60-3.40(m,2H),3.20-2.90(m,2H),2.75(s,3H),2.55-2.45(m,1H),2.00-1.80(m,2H),1.45-1.20(m,2H)。
实施例317化合物(S)-1-(2',4'-二氧代-3'-((5-苯基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(317)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000244
中间体(S)-1-(3'-(2-(2-苯甲酰肼基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(Int 317-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000245
将中间体Int 1-15(66mg，0.2mmol)，苯甲酰肼(27mg，0.2mmol)，HATU(100mg，0.26mmol)以及DIEA(40mg，0.3mmol)溶于DMF(10mL)中，搅拌过夜，加水，EA萃取，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体Int 317-1(41mg)，收率46％。质谱：452(M+H +)。
化合物(S)-1-(2',4'-二氧代-3'-((5-苯基-1,3,4-恶二唑-2-基)甲基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(317)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000246
将中间体Int 317-1(41mg，0.09mmol)，对甲苯磺酰氯(30mg，0.16mmol)，DIEA(27mg，0.2mmol)溶于乙腈(5mL)中，室温下，搅拌2小时，浓缩，柱层析得到黄色固体317(21mg)，收率54％。质谱：434(M+H +)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.76(s,1H),8.07-7.96(m,2H),7.69-7.60(m,3H),7.54(s,1H),7.30-7.21(m,2H),6.10(d,J＝4.5Hz,1H),5.14(d,J＝3.0Hz,2H),3.19-3.07(m,1H),3.06-2.97(m,1H),2.75-2.61(m,4H),2.60-2.53(m,1H).
实施例318化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-间甲基苯基)-吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(318)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000247
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM304(16mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物318(20mg)，收率42％。质谱:477(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.74-8.67(m,1H),7.54(d,J＝5.3Hz,1H),7.33-6.93(m,6H),6.13-6.02(m,1H), 5.15(dd,J＝64.2,7.6Hz,1H),4.66-3.87(m,2H),3.76-3.65(m,1H),3.64-3.52(m,1H),3.17-3.03(m,1H),3.01-2.92(m,1H),2.67-2.54(m,4H),2.45-2.36(m,1H),2.34-2.16(m,4H),2.00-1.66(m,3H).
实施例319化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(2-甲氧基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(319)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000248
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM304(18mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物319(19mg)，收率39％。质谱:493(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75-8.67(m,1H),7.54(d,J＝6.0Hz,1H),7.33-7.09(m,5H),7.06-6.98(m,1H),6.14-6.04(m,1H),5.32(dd,J＝82.8,7.9Hz,1H),4.69-3.95(m,2H),3.82-3.68(m,1H),3.65-3.46(m,1H),3.09(dd,J＝15.8,7.7Hz,1H),2.98(dd,J＝12.1,8.9Hz,1H),2.65-2.52(m,4H),2.45-2.35(m,3H),2.29(d,J＝21.6Hz,2H),2.04-1.70(m,3H).
实施例322化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-苯基哌啶-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(322)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000249
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM304(16mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物322(18mg)，收率38％。质谱:477(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.71(s,1H),7.56(s,1H),7.47-7.13(m,7H),6.08(s,1H),5.52(d,J＝165.7Hz,1H),4.85-4.31(m,2H),4.20-3.79(m,1H),3.13(dt,J＝15.5,7.6Hz,1H),3.01(dd,J＝12.5,9.0Hz,1H),2.64(d,J＝2.9Hz,4H),2.41(d,J＝12.9Hz,1H),1.89(d,J＝82.8Hz,1H),1.61(s,3H),1.49-1.05(m,3H).
实施例323化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(2-氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(323)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000250
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM304(17mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物323(20mg)，收率42％。质谱:481.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.74-8.65(m,1H),7.55(d,J＝6.7Hz,1H),7.41-7.08(m,6H),6.12-6.02(m,1H),5.38(dd,J＝93.9,7.8Hz,1H),4.66-3.91(m,2H),3.80-3.67(m,1H),3.64-3.52(m,1H),3.10(dd,J＝15.5,7.6Hz,1H),3.03-2.93(m,1H),2.66-2.55(m,4H),2.47-2.37(m,1H),2.35-2.23(m,1H),1.99(dd,J＝9.4,5.8Hz,1H),1.88(d,J＝7.2Hz,1H),1.73(d,J＝7.8Hz,1H).
实施例324化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-邻甲基苯基)吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(324)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000251
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM304(16mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物324(22mg)，收率46％。质谱:477.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75-8.61(m,1H),7.54(d,J＝9.5Hz,1H),7.34-7.25(m,1H),7.26-7.09(m,2H),7.09-6.82(m,3H),6.12-6.02(m,1H),5.41-5.22(m,1H),4.70-3.92(m,2H),3.84(d,J＝11.5Hz,3H),3.75-3.64(m,1H),3.61-3.49(m,1H),3.09(td,J＝14.8,7.0Hz,1H),3.02-2.92(m,1H),2.61(dt,J＝14.1,5.5Hz,4H),2.47-2.39(m,1H),2.25(ddd,J＝24.9,16.7,9.3Hz,1H),1.98-1.62(m,3H).
实施例325化合物1-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-((S)-2-苯基吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[环丙烷-茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(325)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000252
将中间体Int 97-12(35mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入(S)-2-苯基吡咯烷(22mg，0.15mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，粗产品过硅胶柱得类白色固体产品325(24mg)，收率50％。质谱:489(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.68-6.18(m,8H),5.11(m,1H),4.57-4.19(m,1H),3.79(m,2H),2.75(m,4H),2.54-2.23(m,2H),2.16-1.68(m,4H),1.27(m,1H),1.14-0.91(m,3H)。
实施例328化合物1-(3'-(2-((2S)-2-(2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-羰基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(328)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000253
中间体5-(苄基-L-脯氨酰基)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(Int 328-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000254
将苄基-L-脯氨酸(205mg，1mmol)，2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(99mg，1mmol)，HATU(570mg，1.5mmol)以及DIEA(260mg，2mmol)溶于二氯甲烷(50mL)，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体Int 328-1(210mg)，收率73％。质谱：287(M+H +)。
中间体5-(-L-脯氨酰基)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(Int 328-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000255
将中间体Int 328-1(30mg，0.1mmol)溶于甲醇(10mL)，加入钯炭(2mg)，氢气氛下搅拌2小时，过滤，浓缩，得到无色液体Int 328-2(28mg)，收率99％。质谱：197(M+H +)。
化合物1-(3'-(2-((2S)-2-(2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-羰基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(328)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000256
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)，Int 328-2(28mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体328(38mg)，收率74％。质谱:512(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.73(s,1H),7.57-7.48(m,1H),7.35(t,J＝5.6Hz,1H),7.24(dd,J＝15.5,5.3Hz,1H),6.08(s,1H),4.71(m,4H),3.99-3.45(m,7H),3.13-2.94(m,2H),2.65(m,5H),2.03-1.69(m,6H)。
实施例330化合物1-(3'-(2-(2-(1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(330)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000257
中间体(4-(1H-咪唑-2-基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int 333-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000258
将向装有SM 330(1.93g，10mmol)的反应瓶中加入干燥的THF(20mL)，氮气保护，冰水浴条件下向瓶中加入异丙基溴化镁的四氢呋喃溶液(10mL，1M in THF)，然后撤去冰水浴，室温搅拌7小时，最后加入N-Boc-2-吡咯烷酮(1.85g，10mmol)，室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int330-1(1.52g，6mmol)，收率60％。质谱:254(M+H +)。
中间体2-(3,4-二氢-2H-吡咯-5-基)-1H-咪唑(Int 330-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000259
将Int 330-1(1.52g，6mmol)溶于15mL DCM中，加入3.7mL TFA，室温下搅拌，TLC检测，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至中性，用DCM(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干得到Int.330-2(0.72g；89％)，质谱:136(M+H +)。
中间体2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑(Int 330-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000260
将Int.330-2(0.72g；5.34mmol)加入装有7mL甲醇的反应瓶中，室温搅拌下分批加入硼氢化钠(0.68g；18mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后将反应液倒入水中，30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到Int.330-3(0.37g；50％)，质谱：138(M+H +)。
化合物1-(3'-(2-(2-(1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(330)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000261
将中间体Int.1-10(30mg，0.09mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，0.027mmol)和HATU(41mg，0.011mmol)，然后加入原料Int.330-3(1.5eq)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品330，25mg,收率61％。质谱:453(M+H +)。
实施例331化合物1-((R)-3'-(2-((S)-2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(331)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000262
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM6 3(10mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物331(17mg，收率41％)。质谱:412.1(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.74(s,1H),7.56(s,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.24(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H),6.10(q,J＝4.3Hz,1H),4.87(dd,J＝7.2,3.7Hz,1H),4.51(dd,J＝34.6,17.1Hz,2H),3.86-3.77(m,1H),3.57(dd,J＝15.8,8.7Hz,1H),3.14(dt,J＝15.7,7.6Hz,1H),3.00(ddd,J＝16.2,8.7,3.2Hz,1H),2.71-2.62(m,4H),2.59-2.51(m,1H),2.23-2.13(m,2H),2.12-1.99(m,2H).
实施例332化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-(吡啶-2-基)吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(332)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000263
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 64(15mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg， 0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物332(15mg，收率32％)。质谱:464.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75-8.67(m,1H),8.53(dd,J＝19.4,15.2Hz,1H),7.89-7.68(m,1H),7.54(s,1H),7.40-7.28(m,1H),7.28-7.10(m,3H),6.10-6.02(m,1H),5.21(dd,J＝90.2,8.1Hz,1H),4.62-3.87(m,2H),3.71(ddd,J＝12.4,11.5,5.9Hz,1H),3.63-3.50(m,1H),3.09(dd,J＝14.3,6.4Hz,1H),3.05-2.92(m,1H),2.70-2.56(m,4H),2.46-2.36(m,1H),2.34-2.19(m,1H),2.05-1.80(m,3H).
实施例333化合物1-甲基-3-((R)-3'-(2-((S)-2-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(333)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000264
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 65(15mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物333(14mg，收率30％)。质谱:467.2(M+H +)。
实施例334化合物1-((1R)-2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2-(吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(334)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000265
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 66(15mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物334(18mg，收率39％)。质谱:464.2(M+H +)。
实施例335化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(3-甲氧基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(335)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000266
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 67(18mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物335(19mg，收率39％)。质谱:493.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.76-8.65(m,1H),7.55(d,J＝6.3Hz,1H),7.32(dq,J＝10.7,3.4Hz,1H),7.27-7.11(m,2H),6.90-6.69(m,3H),6.13-6.02(m,1H),5.17(dd,J＝61.1,7.1Hz,1H),4.65-3.89(m,2H),3.79-3.66(m,4H),3.64-3.53(m,1H),3.16-3.05(m,1H),3.02-2.91(m,1H),2.68-2.55(m,4H),2.49-2.39(m,1H),2.40-2.17(m,1H),2.01-1.70(m,3H).
实施例336化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(2-溴苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(336)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000267
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 68(23mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物336(16mg，收率30％)。质谱:541.2,543.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.74-8.65(m,1H),7.54(d,J＝9.9Hz,1H),7.47-7.09(m,6H),6.09(d,J＝4.6Hz,1H),5.18(dd,J＝44.2,8.0Hz,1H),4.70-4.00(m,2H),3.73(dd,J＝17.6,8.7Hz,1H),3.64-3.52(m,1H),3.18-3.03(m,1H),2.98(ddd,J＝13.1,9.1,4.4Hz,1H),2.69-2.54(m,4H),2.42(dd,J＝15.9,7.2Hz,1H),2.36-2.19(m,1H),2.01-1.67(m,3H).
实施例337化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(337)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000268
中间体(5-(4-氟-2-甲氧基苯基)-2-甲基-5-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int 337-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000269
将向装有SM 69(2.52g，10mmol)的反应瓶中加入干燥的THF(20mL)，氮气保护，冰水浴条件下向瓶中加入异丙基溴化镁(10mL，1M in Hexane)，然后撤去冰水浴，室温搅拌7小时，最后加入2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.99g，10mmol)，室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 337-1(2.28g，7mmol)，收率70％。质谱:326(M+H +)。
中间体5-(4-氟-2-甲氧基苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 337-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000270
将Int 337-1(2.28g，7mmol)溶于DCM(22mL)中，加入TFA(3.7mL)，室温下搅拌，TLC检测，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至中性，用DCM(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干得到Int 337-2(0.87g；90％)，质谱:208(M+H +)。
中间体2-(4-氟-2-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 337-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000271
将Int.337-2(0.87g；4.2mmol)加入装有9mL甲醇的反应瓶中，室温搅拌下分批加入硼氢化钠(0.68g；18mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后将反应液倒入水中，30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到Int.337-3(0.70g；80％)，质谱：210(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(337)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000272
将中间体Int 1-15(30mg，0.09mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，0.027mmol)和HATU(41mg，0.011mmol)，然后加入原料Int 337-3(28.2mg，0.135mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品337(36mg),收率76％。质谱:525(M+H +)。
实施例338化合物1-((R)-3'-(2-(2-(2-甲氧基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(338)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000273
向25mL的反应瓶中加入DMF(5mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，SM 67(210mg，1mmol)，DIEA(390mg，3mmol)，最后加入HATU(570mg，1.5mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，得到的粗品手性拆分得化合物338(300mg)。质谱:493.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.71(d,J＝7.3Hz,1H),7.55(d,J＝10.7Hz,1H),7.34-7.26(m,1H),7.24-7.10(m,2H),7.09-6.81(m,3H),6.08(dd,J＝7.1,4.6Hz,1H),5.31(dd,J＝45.5,7.5Hz,1H), 4.69-3.93(m,2H),3.84(d,J＝12.1Hz,3H),3.75-3.64(m,1H),3.55(dd,J＝17.9,11.1Hz,1H),3.09(dt,J＝12.9,7.2Hz,1H),2.97(dd,J＝10.1,6.5Hz,1H),2.69-2.56(m,4H),2.45-2.38(m,1H),2.37-2.13(m,1H),1.99-1.62(m,3H).
实施例340化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-甲氧基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(340)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000274
中间体(4-(4-氟-2-甲氧基苯基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int 340-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000275
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 69(2.5g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.85g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 340-1(1.7g，5.6mmol)，收率56％。质谱:312(M+H +)。
中间体5-(4-氟-2-甲氧基苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 340-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000276
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 340-1(1.56g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中， 用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 340-2(772mg，4mmol)，收率80％。质谱:194(M+H +)。
中间体2-(4-氟-2-甲氧基苯基)吡咯烷(Int 340-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000277
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 340-2(772g，4mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 340-3(721g，3.7mmol)，收率94％。质谱:196(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-甲氧基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(340)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000278
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，Int 340-3(19.5mg，0.1mmol)，DIEA(38.7mg，0.3mmol)，最后加入HATU(38mg，0.1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(10mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物340(28mg)，收率55％。质谱:511(M+H +)。
实施例341化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(2,4-二甲氧基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(341)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000279
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 70(21mg，0.1mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)，最后加入HATU(57mg，0.15mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物341(19mg，收率36％)。质谱:523.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ 8.71(d,J＝6.2Hz,1H),7.55(d,J＝11.3Hz,1H),7.34-7.09(m,2H),6.88(dd,J＝35.3,8.4Hz,1H),6.64-6.36(m,2H),6.13-6.00(m,1H),5.23(dd,J＝38.6,7.4Hz,1H),4.69-3.89(m,2H),3.82(d,J＝12.4Hz,3H),3.77-3.70(m,3H),3.66(t,J＝8.7Hz,1H),3.61-3.46(m,1H),3.17-3.03(m,1H),2.97(d,J＝7.3Hz,1H),2.61(dt,J＝14.2,5.6Hz,4H),2.46-2.37(m,1H),2.20(d,J＝66.6Hz,1H),1.95-1.60(m,3H).
实施例343化合物2-(1-(2-((R)-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑]-3'-基)乙酰基)吡咯烷-2-基)吡啶-1-氧化物(343)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000280
中间体2-吡啶-2-基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 343-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000281
将中间体SM 64(1.48g，10mmol)溶于DCM(20mL)中，加入三乙胺(2g，20mmol)，然后加入(Boc) 2O(2.18g，10mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(20mL)，萃取3次，有机相用饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩得粗产品，柱层析得产品Int 343-1(2.23g，9mmol)，收率90％。质谱:249(M+H +)。
中间体2-(1-叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)吡啶-1-氧化物(Int 343-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000282
将中间体Int 343-1(2.23g，9mmol)溶于DCM(20mL)中，加入m-CPBA(1.73g，10mmol)，室温搅拌2小时。向反应液浓缩掉大部分DCM，粗产品直接过反相柱得产品Int 343-2(1.9，7.2mmol)，收率80％。质谱:265(M+H +)。
中间体2-吡咯烷-2-基吡啶-1-氧化物(Int 343-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000283
将中间体Int 343-2(1.9g，7.2mmol)溶于DCM(20mL)中，加入TFA(2mL)，室温搅拌2小时。向反应液浓缩得Int 343-3(1.18g，7.2mmol),收率100％。质谱:165(M+H +)。
化合物2-(1-(2-((R)-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑]-3'-基)乙酰基)吡咯烷-2-基)吡啶-1-氧化物(343)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000284
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 343-3(20mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品343(24mg),收率50％。质谱:480(M+H +)。
实施例347化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-甲基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(347)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000285
中间体(4-(4-氟-2-甲基苯基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int 347-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000286
将向装有SM 5(2.36g，10mmol)的反应瓶中加入干燥的THF(20mL)，氮气保护，冰水浴条件下向瓶中加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后撤去冰水浴，室温搅拌7小时，最后加入N-Boc-2-吡咯烷酮(1.85g，10mmol)，室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 347-1(2.36g，8mmol)，收率80％。质谱:296(M+H +)。
中间体5-(4-氟-2-甲基苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 347-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000287
将Int 347-1(2.36g，8mmol)溶于DCM(23mL)中，加入TFA(2.3mL)，室温下搅拌，TLC检测，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至中性，用DCM(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干得到Int 347-2(1.2g，85％)，质谱:178(M+H +)。
中间体2-(4-氟-2-甲基苯基)吡咯烷(Int 347-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000288
将Int 347-2(1.2g，6.8mmol)加入装有甲醇(12mL)的反应瓶中，室温搅拌下分批加入硼氢化钠(0.90g，23.8mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后将反应液倒入水中，30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到Int 347-3(0.97g，80％)，质谱：180(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-甲基苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(347)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000289
将中间体Int 1-15(30mg，0.09mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，0.027mmol)和HATU(41mg，0.011mmol)，然后加入Int 347-3(24mg，0.135mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品347(32mg)，收率72％。质谱:495(M+H +)。
实施例348化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(348)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000290
中间体(5-(4-氟苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(348)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000291
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 10(2.22g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.99g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 348-1(1.5g，5mmol)，收率50％。质谱:296(M+H +)。
中间体5-(4-氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 348-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000292
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 348-1(1.5g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 348-2(0.8g，4.5mmol)，收率90％。质谱:178(M+H +)。
中间体2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 348-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000293
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 348-2(0.8g，4.5mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 348-3(0.8g，4.4mol)，收率98％。质谱:180(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(348)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000294
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 348-3(24mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品348(25mg),收率50％。质谱:495(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.59-7.41(m,1H),7.37-7.27(m,2H),7.21-6.88(m,4H),4.97(m,1H),4.49-4.35(m,1H),4.17-4.08(m, 1H),3.73(m,1H),3.08-2.95(m,1H),2.78-2.64(m,3H),2.59-2.36(m,2H),2.08-1.92(m,2H),1.49-1.16(m,6H)。
实施例349化合物1-((1R)-3'-(2-(2,2-双(4-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(349)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000295
中间体2,2-双(4-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 349-1)和5-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 350-1)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000296
将SM 71(1.9g，10mmol)溶于干燥的四氢呋喃(50mL)中，氮气置换，-78℃下，缓慢滴入正丁基锂(10mL，1M in hexane)，搅拌30分钟，将2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2g，10mmol)缓慢滴加，搅拌30分钟。加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。将所得粗产物溶于二氯甲烷(20mL)，加入三氟乙酸(2mL)，搅拌过夜，浓缩，柱层析分别得到中间体Int 349-1(500mg)，质谱：298(M+H +)。中间体Int 350-1(300mg)，质谱：190(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2,2-双(4-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(349)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000297
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)，中间体Int 349-1(30mg，0.11mmol)，HATU)(50mg，0.13mmol以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于DMF(5mL)，搅拌过夜，加水，EA萃取，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体349(38mg)，收率62％。质谱:613(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.79(s,1H),8.25(s,1H),7.57(d,J＝5.4Hz,1H),7.34(t,J＝8.9Hz,1H),7.24(d,J＝8.3Hz,1H),7.12-7.01(m,4H),7.00-6.91(m,2H),6.81(d,J＝8.8Hz,1H),6.74(d,J＝8.8Hz,1H),6.13(d,J＝4.6Hz,1H),5.91(s,1H),4.22-4.06(m,2H),3.93(td,J＝13.1,6.2Hz,1H),3.78(t,J＝5.9Hz,3H),3.72-3.67(m,3H),3.16-2.95(m,2H),2.69-2.44(m,5H),2.21(t,J＝5.9Hz,2H),1.05(dd,J＝6.6,2.4Hz,3H).
实施例350化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(350)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000298
中间体2-(4-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 350-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000299
将中间体Int 350-1(190mg，1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴下加入二异丁基氢化铝(4mL，1M in DCM)，搅拌4小时，加入硅藻土，水(10mL)，过滤，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到淡黄色液体Int 350-2(100mg)，收率53％。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-甲氧基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(350)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000300
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)，中间体Int 350-2(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于DMF(5mL)中，搅拌过夜，加水，EA萃取，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体350(37mg)，收率73％。质谱:507(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.71(s,1H),7.53(d,J＝4.8Hz,1H),7.28(d,J＝8.6Hz,2H),7.23-7.08(m,2H),6.98(dd,J＝8.6,1.9Hz,2H),6.09(d,J＝4.5Hz,1H),4.37(dd,J＝20.2,12.2Hz,1H),3.78(d,J＝16.7Hz,2H),3.74-3.71(m,1H),3.34(s,3H),3.14-2.91(m,2H),2.70-2.47(m,5H),2.45-2.28(m,2H),2.06-1.82(m,2H),1.36(dd,J＝6.7,3.1Hz,3H).
实施例351化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氯-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(351)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000301
中间体5-(4-氯-2-甲基苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 351-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000302
将SM 72(2.1g，10mmol)溶于干燥的四氢呋喃(50mL)中，氮气置换，-78℃下，缓慢滴入正丁基锂(10mL，1M in hexane)，搅拌30分钟，将2-甲基 -5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2g，10mmol)缓慢滴加，搅拌30分钟。加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。将所得粗产物溶于二氯甲烷(20mL)，加入三氟乙酸(2mL)，搅拌过夜，浓缩，柱层析分别得到中间体Int 351-1(600mg)，两步收率：29％。质谱：208(M+H +)。
中间体2-(4-氯-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 352-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000303
将中间体Int 351-1(207mg，1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，冰浴下加入二异丁基氢化铝(4mL，1M in DCM)，搅拌4小时，加入硅藻土，水(10mL)，过滤，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到淡黄色液体Int 351-2(153mg)，收率73％。质谱：210(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氯-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(351)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000304
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)，中间体Int 351-2(21mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于DMF(5mL)中，搅拌过夜，加水，EA萃取，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体351(38mg)，收率72％。质谱:525(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.71(s,1H),7.53(s,1H),7.36-7.01(m,5H),6.08(d,J＝4.5Hz,1H),5.39-5.31(m,1H),4.52-4.34(m,2H),4.22(dd,J＝12.5,6.3Hz,1H),3.06(dd,J＝27.3,20.0Hz,2H),2.69-2.52(m,5H),2.46-2.29(m,5H),1.79-1.47(m,2H),1.44-1.37(m,3H)。
实施例352化合物1-甲基-3-((1R)-3'-(2-(2-甲基-5-(2-甲基-4-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(352)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000305
中间体(5-(2-甲基-4-(三氟甲基)苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 352-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000306
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 73(2.86g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入叔丁基2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸酯(1.99g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 352-1(1.8g，5mmol)，收率50％。质谱:360(M+H +)。
中间体5-(2-甲基-4-(三氟甲基)苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 352-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000307
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 352-1(1.8g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 352-2(1.08g，4.5mmol)，收率90％。质谱:242(M+H +)。
中间体2-(2-甲基-4-(三氟甲基)苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 352-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000308
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 352-2(1.08g，4.5mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 352-3(1.07g，4.4mmol)，收率98％。质谱:244(M+H +)。
化合物1-甲基-3-((1R)-3'-(2-(2-甲基-5-(2-甲基-4-(三氟甲基)苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(352)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000309
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 352-3(26mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品352(28mg)，收率50％。质谱:559(M+H +)。
实施例353化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(353)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000310
中间体(5-(4-氟-2-甲基苯基)-2-甲基-5-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(Int 353-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000311
将向装有SM 5(2.36g，10mmol)的反应瓶中加入干燥的THF(20mL)，氮气保护，冰水浴条件下向瓶中加入异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后撤去冰水浴，室温搅拌7小时，最后加入2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.99g，10mmol)，室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int353-1(2.63g，8.5mmol)，收率85％。质谱:310(M+H +)。
中间体5-(4-氟-2-甲基苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 353-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000312
将Int 353-1(2.63g，8.5mmol)溶于DCM(23mL)中，加入TFA(2.3mL)，室温下搅拌，TLC检测，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至中性，用DCM(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干得到Int 353-2(1.41g)，收率87％，质谱:192(M+H +)。
中间体2-(4-氟-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯(Int 353-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000313
将Int 353-2(1.41g，7.4mmol)加入装有甲醇(12mL)的反应瓶中，室温搅拌下分批加入硼氢化钠(1.09g，29.58mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后将反应液倒入水中，30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到Int 353-3(1.17g)，收率82％。质谱：194(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-甲基苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(353)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000314
将中间体Int 1-15(30mg，0.09mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，0.027mmol)和HATU(41mg，0.011mmol)，然后加入原料Int 353-3(26mg，0.135mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品353(37mg)，收率81％。质谱:509(M+H +)。
实施例354化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(2-溴-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(354)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000315
中间体(5-(2-溴-4-氟苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 351-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000316
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 74(3g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入叔丁基2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸酯(1.99g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 354-1(1.87g，5mmol)，收率50％。质谱:374,376(M+H +)。
中间体5-(2-溴-4-氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 354-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000317
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 354-1(1.87g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 354-2(1.15g，4.5mmol)，收率90％。质谱:256,258(M+H +)。
中间体2-(2-溴-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 354-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000318
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 354-2(1.15g，4.5mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 354-3(1.14g，4.4mmol)，收率98％。质谱:258,260(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(2-溴-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(354)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000319
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入原料Int 354-3(27mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品354(29mg)，收率50％。质谱:573,575(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.64-7.26(m,3H),7.28-6.82(m,3H),5.27(m,1H),4.77-4.05(m,2H),3.82-3.36(m,1H),3.18-2.89(m,1H),2.84-2.40(m,4H),2.30-1.85(m,3H),1.86-1.15(m,6H)。
实施例355化合物1-(3'-(2-(9-乙酰基-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(355)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000320
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入SM 75(24mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相 用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品355(26mg)，收率50％。质谱:512(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.77(s,1H),7.55(m,1H),7.36-7.16(m,2H),6.13(d,J＝4.5Hz,1H),4.43(m,2H),3.70-3.55(m,1H),3.47(m,3H),3.34-3.27(m,1H),3.23-2.96(m,3H),2.82(m,1H),2.73-2.56(m,5H),2.00(m,3H),1.69(m,6H),1.41(m,2H),1.23(s,1H)。
实施例356化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(356)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000321
中间体(5-(2-三氟甲基-4-氟苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 356-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000322
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 12(2.9g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入叔丁基2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸酯(1.99g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 356-1(1.82g，5mmol)，收率50％。质谱:364(M+H +)。
中间体5-(2-三氟甲基-4-氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 356-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000323
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 356-1(1.82g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 356-2(1.1g，4.5mmol)，收率90％。质谱:246(M+H +)。
中间体2-(2-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 356-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000324
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 356-2(1.1g，4.5mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 356-3(1.1g，4.4mmol)，收率98％。质谱:248(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(356)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000325
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 356-3(24mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品356(28mg)，收率50％。质谱:563(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)：δ8.92-8.56(s,1H),7.78-7.39(m,4H),7.32-7.01(m,2H),6.17-6.01(m,1H),5.47-4.99(m,1H),4.77-4.47(m,1H),4.45-4.17(m,2H),3.30(m,1H),3.18-2.87(m,2H),2.71-2.59(m,3H),2.39(m,2H),2.14(m,1H),1.89-1.55(m,2H),1.45(m,3H)。
实施例357化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-环己基-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(357)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000326
中间体(S)-(5-环己基-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 357-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000327
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 76(10mL，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入(S)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 357-1(1.7g，6mmol)，收率60％。质谱:284(M+H +)。
中间体(S)-5-环己基-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 357-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000328
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 357-1(1.42g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 357-2(701mg，4.25mmol)，收率85％。质谱:166(M+H +)。
中间体(2S,5S)-2-环己基-5-甲基吡咯烷(Int 357-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000329
向反应瓶中加入DCM(15mL)，然后加入Int 357-2(660mg，4mmol)，冰水浴条件下加入DIBAL-H(16mL，1M in DCM)，然后室温反应1小时。将反应液加水淬灭，过滤，30mL(10mL×3)DCM洗，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 357-3(618mg，3.7mmol)，收率94％。质谱:168(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-环己基-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(357)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000330
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(33.3mg，0.1mmol)，Int 357-3(16.7mg，0.1mmol)，DIEA(38.7mg，0.3mmol)，最后加入HATU(38.1mg，0.1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物357(26.5mg)，收率55％。质谱:483(M+H +)。
实施例359化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(359)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000331
中间体(5-(3-氯-4-氟苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 359-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000332
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 76(2.58g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入叔丁基2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸酯(1.99g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 359-1(1.66g，5mmol)，收率50％。质谱:330,331(M+H +)。
中间体5-(3-氯-4-氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 359-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000333
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 359-1(1.66g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 359-2(0.95g，4.5mmol)，收率90％。质谱:212，213(M+H +)。
中间体2-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 359-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000334
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 359-2(0.95g，4.5mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 359-3(0.95g，4.4mmol)，收率98％。质谱:214,215(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(2-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(359)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000335
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 359-3(24mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品359(26mg)，收率50％。质谱:529,530(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.61-7.45(m,1H),7.44-7.25(m,2H),7.16-6.77(m,3H),5.42-5.22(m,1H),4.96-4.78(m,1H),4.54-4.20(m,1H),3.67(m,1H),3.10-2.94(m,1H),2.92-2.84(m,1H),2.62(s,3H),2.37(m,2H),2.05-1.74(m,2H),1.62-1.48(m,1H),1.45-1.30(m,3H),1.23-1.13(m,1H)。
实施例360化合物1-((R)-3'-(2-((R)-2-(4-氟苯基)-5-(羟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(360)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000336
中间体(R)-5-(4-氟苯基)吡咯烷-2-羧酸乙酯(Int 360-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000337
将Int 51-2(1.06g，4.5mmol)加入装有甲醇(10mL)的反应瓶中，室温搅拌下分批加入硼氢化钠(0.68g，18mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后将反应液倒入水中，30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析分离得到Int 360-1(0.91g)，收率85％。质谱：238(M+H +)。
中间体(R)-(5-(4-氟苯基)吡咯烷-2-基)甲醇(Int 360-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000338
将Int 360-1(0.91g，3.8mmol)加入装有四氢呋喃(10mL)的反应瓶中，室温搅拌下分批加入氢化铝锂(0.58g，15.3mmol)，加完后继续室温下搅拌，TLC检测。反应完毕后向反应液汇总加入十水硫酸钠搅拌，过滤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏后的Int 360-2(0.44g)，收率60％。质谱：196(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((R)-2-(4-氟苯基)-5-(羟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(360)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000339
将中间体Int 1-15(30mg，0.09mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，0.027mmol)和HATU(41mg，0.011mmol)，然后加入原料Int 347-3(26mg，0.135mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品360(36mg)，收率78％。质谱:511(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.55-7.45(m,2H),7.30(dd,J＝11.2,6.8Hz,2H),7.09(dd,J＝15.5,7.0Hz,2H), 6.96-6.90(m,1H),5.33(d,J＝4.5Hz,1H),5.03(d,J＝6.3Hz,1H),4.33(dd,J＝12.4,6.8Hz,1H),4.25(d,J＝16.5Hz,1H),3.86-3.71(m,3H),3.17-3.07(m,1H),2.99(dd,J＝13.4,5.4Hz,2H),2.81(s,2H),2.74(d,J＝4.2Hz,3H),2.43(d,J＝7.3Hz,1H),2.00(d,J＝12.9Hz,1H),1.83(d,J＝6.5Hz,1H),1.76-1.67(m,1H),1.25(s,1H)。
实施例361化合物1-(3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(羟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(361)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000340
将中间体Int 1-15(30mg，0.09mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，0.027mmol)和HATU(41mg，0.011mmol)，然后加入原料Int 361-1(26mg，0.135mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品361(33mg)，收率71％。质谱:511(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.55-7.45(m,2H),7.30(dd,J＝11.2,6.8Hz,2H),7.09(dd,J＝15.5,7.0Hz,2H),6.96-6.90(m,1H),5.33(d,J＝4.5Hz,1H),5.03(d,J＝6.3Hz,1H),4.33(dd,J＝12.4,6.8Hz,1H),4.25(d,J＝16.5Hz,1H),3.86-3.71(m,3H),3.17-3.07(m,1H),2.99(dd,J＝13.4,5.4Hz,2H),2.81(s,2H),2.74(d,J＝4.2Hz,3H),2.43(d,J＝7.3Hz,1H),2.00(d,J＝12.9Hz,1H),1.83(d,J＝6.5Hz,1H),1.76-1.67(m,1H),1.25(s,1H)。
实施例362化合物1-(3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(362)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000341
化合物1-(3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(362)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000342
将中间体Int 1-15(30mg，0.09mmol)容于DMF(1mL)中，加入DIEA(35mg，0.027mmol)和HATU(41mg，0.011mmol)，然后加入Int 362-1(27mg，0.135mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品362(36mg)，收率76％。质谱:525(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.55-7.45(m,2H),7.30(dd,J＝11.2,6.8Hz,2H),7.09(dd,J＝15.5,7.0Hz,2H),6.96-6.90(m,1H),5.33(d,J＝4.5Hz,1H),5.03(d,J＝6.3Hz,1H),4.33(dd,J＝12.4,6.8Hz,1H),4.25(d,J＝16.5Hz,1H),3.86-3.71(m,2H),3.31(s,3H),3.17-3.07(m,1H),2.99(dd,J＝13.4,5.4Hz,2H),2.81(s,2H),2.74(d,J＝4.2Hz,3H),2.43(d,J＝7.3Hz,1H),2.00(d,J＝12.9Hz,1H),1.83(d,J＝6.5Hz,1H),1.76-1.67(m,1H),1.25(s,1H)。
实施例363化合物1-((1R)-3'-(2-((5S)-2-(4-氟苯基)-5-(羟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(363)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000343
中间体(S)-甲基-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(4-氟苯基)-5-氧代戊酸酯(Int 363-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000344
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 10(2.22g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入(S)-1-叔丁基2-甲基5-氧代吡咯烷-1,2-二羧酸酯(2.43g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int363-1(1.7g，5mmol)，收率50％。质谱:340(M+H +)。
中间体(S)-甲基-5-(4-氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯-2-羧酸酯(Int 363-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000345
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 363-1(1.7g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 363-2(1g，4.5mmol)，收率90％。质谱:222(M+H +)。
中间体((2S)-5-(4-氟苯基)吡咯烷-2-基)甲醇的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000346
向反应瓶中加入DCM(15mL)，然后加入Int 363-2(1g，4.5mmol)，氮气保护，降温到-78℃，加入DIBAH(36mL，1M in DCM)，然后逐渐恢复到室温反应15小时。将反应液倒入冰冷的1N氢氧化钠水溶液中，用DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 363-3(0.86g，4.4mmol)，收率98％。 质谱:196(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-((5S)-2-(4-氟苯基)-5-(羟甲基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(363)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000347
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 363-3(24mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得产品363(26mg)，收率50％。质谱:511(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.54-7.29(m,3H),7.16-7.04(m,2H),6.91(m,1H),5.38(m 1H),5.10-4.96(m,1H),4.55-4.27(m,2H),3.86-3.76(m,2H),3.19-2.86(m,2H),2.81(s,3H),2.78-2.65(m,3H),2.52-2.32(m,2H),2.04(m,2H),1.26(m,1H)。
实施例365化合物1-((1R)-3'-(2-(5-(4-氟苯基)-2,2-二甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(365)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000348
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(33.3mg，0.1mmol)，Int 365-1(19.3mg，0.1mmol)，DIEA(38.7mg，0.3mmol)，最后加入HATU(38.1mg，0.1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物365(28mg)，收率55％。质谱:509(M+H +)。
实施例366化合物1-((1R)-3'-(2-(5-(3,4-二氟苯基)-2,2-二甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(366)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000349
中间体(5-(3,4-二氟苯基)-2-甲基-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 366-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000350
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 44(2.4g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入Int 39-3(2.13g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 366-1(1.8g，5.5mmol)，收率55％。质谱:328(M+H +)。
中间体5-(3,4-二氟苯基)-2,2-二甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 366-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000351
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 366-1(1.64g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 366-2(941mg，4.5mmol)，收率90％。质谱:210(M+H +)。
中间体5-(3,4-二氟苯基)-2,2-二甲基吡咯烷(Int 366-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000352
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 366-2(836mg，4mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 366-3(802mg，3.8mmol)，收率95％。质谱:212(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-(5-(3,4-二氟苯基)-2,2-二甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(366)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000353
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(33.3mg，0.1mmol)，Int 366-3(21.1mg，0.1mmol)，DIEA(38.7mg，0.3mmol)，最后加入HATU(38.1mg，0.1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物366(26.3mg)，收率50％。质谱:527(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.51(s,1H),7.29(t,J＝8.2Hz,1H),7.19-7.00(m,5H),6.90(s,1H),5.35(d,J＝8.6Hz,1H),5.13(s,1H),4.35-3.66(m,2H),3.22-2.90(m,2H),2.77(d,J＝8.9Hz,3H),2.50(m,2H),1.99-1.89(m,2H),1.79(m,1H),1.49(d,J＝5.8Hz,6H)。
实施例367化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-乙烯基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(367)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000354
中间体(2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 367-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000355
向25mL的反应瓶中加入Int 367-1(400mg，1.4mmol)，和二氯甲烷(5mL)，最后分批加入Dess-Martin试剂(579mg，1.4mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，过滤，用碳酸氢钠水溶液洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物Int 367-2(375mg)，收率94％。质谱:294.2(M+H +)。
中间体(2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-乙烯基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 367-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000356
向25mL的反应瓶中加入甲基三苯基溴化膦(146mg，0.41mmol)和四氢呋喃(3mL)，冰浴下分批加入叔丁醇钠(44mg，0.45mmol)，反应大约1个小时后，往反应液中加入Int 367-2(100mg，0.34mmol)，反应室温过夜，向反应瓶中加入水(5mL),用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干 燥，柱层析纯化后得化合物Int 367-3(33mg)，收率33％。质谱:292.2(M+H +)。
中间体((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-乙烯基吡咯烷(Int 367-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000357
向25mL的反应瓶中加入Int 367-3(33mg，0.12mmol)和二氯甲烷(0.5mL)，最后加入三氟乙酸(1mL),反应大约3个小时，反应完毕后真空旋走溶剂，加入二氯甲烷(5mL),用碳酸氢钠水溶液洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥，真空旋走溶剂得到粗品Int 367-4(13mg)，收率59％。质谱:192.2(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5R)-2-(4-氟苯基)-5-乙烯基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(367)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000358
向25mL的反应瓶中加入DMF(1mL)，然后加入Int 1-15(23mg，0.07mmol)，Int 367-3(13mg，0.07mmol)，DIEA(27mg，0.21mmol)，最后加入HATU(42mg，0.11mmol)，体系在室温下反应过夜。反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物367(9mg)，收率25％。质谱:507.2(M+H +)。
实施例368化合物(R)-1-(2',4'-二氧代-3'-(2-氧代-2-(2,2,6,6-四甲基哌嗪-1-基)乙基)-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(368)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000359
将中间体Int 1-15(33mg，0.1mmol)，SM 77(15mg，0.11mmol)，HATU (50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体368(35mg)，收率77％。质谱:457(M+H +)。
实施例369化合物1-((R)-3'-(2-((2R,5S)-2-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(369)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000360
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(333mg，1mmol)，Int 213-4(213mg，1mmol)，DIEA(387mg，3mmol)，最后加入HATU(381mg，1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物369(270mg)，收率59％。质谱:529(M+H +)。
实施例370化合物1-((R)-3'-(2-((5S)-2-(2,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(370)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000361
中间体(S)-(5-(2,4-二氟苯基)-5-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 370-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000362
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 78(2.4g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入(S)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(1.99g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int370-1(1.5g，5mmol)，收率50％。质谱:314(M+H +)。
中间体(S)-5-(2,4-二氟苯基)-2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 370-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000363
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 370-1(1.5g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 370-2(0.8g，4.5mmol)，收率90％。质谱:196(M+H +)。
中间体(5S)-2-(2,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 370-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000364
向反应瓶中加入甲醇(15mL)，然后加入Int 370-2(0.8g，4.5mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.76g，20mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得粗产品消旋体，纯化后得Int 370-3(0.8g，4.4mmol)，收率800％。质谱:198(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2R,5S)-2-(2,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(370)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000365
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 370-3(24mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品370(26mg),收率50％。质谱:513(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ7.47(m,2H),7.25-7.05(m,1H),6.99-6.51(m,3H),5.47-5.11(m,1H),4.57-4.37(m,1H),4.30(m,1H),3.81(m,1H),3.13-2.90(m,2H),2.76-2.65(m,3H),2.64-2.40(m,2H),2.24-1.51(m,4H),1.34-1.22(m,3H)。
实施例371化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-环丙基基脲(371)的合成的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000366
将三光气(35mg，0.12mmol)置于二氯甲烷(5mL)中，冰浴下，将化合物Int 114-4(62mg，0.2mmol)和三乙胺(200mg，2mmol)以及二氯甲烷(5mL)的混合液缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时，加入环丙胺(33mg，0.5mmol)，搅拌4小时。加入水(10mL)，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体371(30mg)，收率45％。质谱:521(M+H +)。
实施例373化合物1-(3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚-3',5'-恶唑烷]-6'-基)-3-甲基脲(373)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000367
将中间体Int 97-12(36mg，0.1mmol)，中间体Int 14-3(18mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体373(37mg)，收率71％。质谱:521(M+H +)。
实施例374化合物1-((R)-3'-(2-((5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(374)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000368
中间体(5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷(Int 374-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000369
向反应瓶中加入DCM(15mL)，然后加入Int 201-2(195mg，1mmol)，再分批加入硼氢化钠(152mg，4mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 374-1(187mg，0.95mmol)，收率95％。质谱:198(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2R,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(374)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000370
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(33.3mg，0.1mmol)，Int 374-1(19.7mg，0.1mmol)，DIEA(38.7mg，0.3mmol)，最后加入HATU(38.1mg，0.1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物374(28.2mg)，收率55％。质谱:513 (M+H +)。
实施例375化合物1-甲基-3-(3'-(2-((2S)-2-甲基-5-(吡啶-4-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(375)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000371
中间体(S)-(5-氧代-5-(吡啶-4-基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 375-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000372
向反应瓶中加入干燥的THF(30mL)，然后加入SM 79(2.05g，10mmol)，氮气保护，冰水浴条件下加入1N异丙基溴化镁(10mL，1M in THF)，然后室温反应7小时，最后加入(S)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(2.13g，10mmol)，然后室温反应12小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int375-1(1.53g，5.5mmol)，收率55％。质谱:279(M+H +)。
中间体(S)-4-(2-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯-5-基)吡啶(Int 375-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000373
向反应瓶中加入DCM(20mL)，然后加入Int 375-1(1.39g，5mmol)，再加入TFA(2mL)，然后室温反应7小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中， 用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 375-2(640mg，4mmol)，收率80％。质谱:161(M+H +)。
中间体4-((5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)吡啶(Int 375-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000374
向反应瓶中加入DCM(15mL)，然后加入Int 375-2(483mg，3mmol)，再分批加入硼氢化钠(0.57g，15mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int375-3(462mg，2.85mmol)，收率95％。质谱:163(M+H +)。
化合物1-甲基-3-(3'-(2-((2S)-2-甲基-5-(吡啶-4-基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)脲(375)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000375
向25mL的反应瓶中加入DMF(3mL)，然后加入Int 1-15(33.3mg，0.1mmol)，Int 375-3(16.2mg，0.1mmol)，DIEA(38.7mg，0.3mmol)，最后加入HATU(38.1mg，0.1mmol)，体系在20℃下反应1小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20mL)中，用30mL(10mL×3)乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物375(24.8mg)，收率52％。质谱:478(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ8.63(dd,J＝10.7,6.0Hz,1H),8.40(dd,J＝38.2,6.0Hz,1H),7.65-7.41(m,2H),7.18(m,1H),7.06(m,1H),6.96-6.55(m,1H),5.51-5.29(m,1H),5.05m,1H),4.61-4.39(m,1H),4.35-4.13(m,1H),3.80-3.44(m,1H),3.07m,1H),2.98-2.91(m,1H),2.68m,3H),2.48-2.42(m,1H),2.27-2.18(m,2H),2.01-1.76(m,1H),1.49(m,2H),1.26-1.22(m,4H)。
实施例376化合物2,2-二氟-N-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)乙酰胺(376)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000376
将2,2-二氟乙酸(100mg，1mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，滴加草酰氯(127mg，1mmol)，室温下搅拌1小时，浓缩。将所得粗品加入二氯甲烷(5mL)中，再加入三乙胺(101mg，1mmol)，Int 114-4(44mg，0.1mmol)，室温搅拌过夜。浓缩，柱层析得到黄色固体376(33mg)，收率64％。质谱:516(M+H +)。
实施例377化合物(S)-N-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(4-氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-2-甲氧基丙酰胺(377)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000377
将(S)-2-甲氧基丙酸(104mg，1mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，滴加草酰氯(127mg，1mmol)，室温下搅拌1小时，浓缩。将所得粗品加入二氯甲烷(5mL)中，再加入三乙胺(101mg，1mmol)，Int 114-4(44mg，0.1mmol)，室温搅拌过夜。浓缩，柱层析得到黄色固体377(35mg)，收率67％。质谱:524(M+H +)。
实施例378化合物1-((1R)-3'-(2-((2S)-2-((1,1-二氟-6-氮杂-螺[2.5]辛-6-基)甲基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(378)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000378
中间体(S)-(5-氧代吡咯烷-2-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(Int 378-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000379
向反应瓶中加入DCM(30mL)，然后加入TsCl(1.9g，10mmol)，SM 80(4.6g，40mmol)，三乙胺(2g，20mmol)，然后室温反应5小时。将反应液倒入水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 378-1(2.55g，9.5mmol)，收率95％。质谱:270(M+H +)。
中间体((S)-(1-叔丁氧基羰基-5-氧代吡咯烷-2-基)-甲基-4-甲基苯磺酸酯(Int 378-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000380
向反应瓶中加入DCM(30mL)，然后加入Int 378-1(2.55g，9.5mmol),碳酸二叔丁酯(2.18g，10mmol)，DMAP(122mg，1mmol)，然后室温反应15小时。将反应液倒入水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 378-2(1.85g，5mmol)，收率50％。质谱:370(M+H +)。
中间体(S)-2-((1,1-二氟-6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)甲基)-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 378-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000381
向反应瓶中加入NMP(20mL)，然后加入Int 378-2(1.85g，5mmol)，碳酸钾(1.38g，10mmol)，1,1-二氟-6-氮杂螺[2.5]辛烷盐酸盐(905mg，5mmol)， 然后加热到80℃室温反应5小时。将反应液倒入水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 378-3(1.04g，3mmol)，收率60％。质谱:345(M+H +)。
中间体(S)-(1-(1,1-二氟-6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-5-氧代己烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(Int 378-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000382
向反应瓶中加入无水THF(15mL)，然后加入Int 378-3(1.04g，3mmol)，氮气保护，冰水浴冷却，加入甲基溴化镁溶液(3mL，1M in hexane)，然后室温反应1小时。将反应液倒入饱和氯化铵水溶液中，用30mL(10mL×3)EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 378-4(0.72g，2mmol)，收率67％。质谱:361(M+H +)。
中间体(S)-1,1-二氟-6-((5-甲基-3,4-二氢-2H-吡咯-2-基)甲基)-6-氮杂-螺[2.5]辛烷(Int 378-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000383
向反应瓶中加入DCM(10mL)，然后加入Int 378-4(0.72g，2mmol)，TFA(1mL)，然后室温反应5小时。将反应液旋干，饱和碳酸氢钠水溶液中和，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得Int 378-5(0.44g，1.8mmol)，收率90％。质谱:243(M+H +)。
中间体1,1-二氟-6-(((2S)-5-甲基吡咯烷-2-基)甲基)-6-氮杂-螺[2.5]辛烷(Int 378-6)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000384
向反应瓶中加入甲醇(10mL)，然后加入Int 378-5(0.44g，1.8mmol)，分批加入硼氢化钠(0.38g，10mmol)，然后室温反应1小时。将反应液倒入水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 378-6(0.44g，1.75mmol)，收率98％。质谱:245(M+H +)。
化合物1-((1R)-3'-(2-((2S)-2-((1,1-二氟-6-氮杂-螺[2.5]辛-6-基)甲基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(378)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000385
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 378-6(24mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品378(28mg)，收率50％。质谱:560(M+H +)。
实施例379化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-((1,1-二氟-6-氮杂-螺[2.5]辛-6-基)甲基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(379)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000386
中间体1,1-二氟-6-(((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)甲基)-6-氮杂-螺[2.5]辛烷(Int379-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000387
向反应瓶中加入DCM(10mL)，然后加入Int 378-5(0.44g，1.8mmol)，氮气保护，冰水浴冷却，分批加入DIBAL-H(10mL，1M in DCM)，然后室温反应16小时。将反应液倒入冷的0.5N氢氧化钠水溶液中，用30mL(10mL×3)DCM萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩后得Int 379-1(0.44g，1.75mmol)，收率98％。质谱:245(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-((1,1-二氟-6-氮杂-螺[2.5]辛-6-基)甲基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(379)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000388
将Int 1-15(33mg，0.1mmol)溶于DMF(1mL)中，加入DIEA(39mg，0.3mmol)和HATU(38mg，0.1mmol)，然后加入Int 379-1(24mg，0.1mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取2次，有机相用饱和食盐水洗涤，浓缩得粗产品，柱层析得类白色固体产品379(28mg)，收率50％。质谱:560(M+H +)。
实施例380化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-环丙基-5-(4-氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(380)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000389
中间体(4-(4-氟苯基)-4-氧代丁酸(Int 74-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000390
向250mL的反应瓶中加入氟苯(10g，0.1mol)，丁二酸酐(9.4g 0.09mmol)，和二氯甲烷(100mL)。冰浴下向反应瓶中分批加入三氯化铝(13.9g，0.1mol)，反应过夜，将反应液倒入2N盐酸水溶液，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，真空旋走溶剂得到粗品Int 74-1(10g)，收率57％。质谱:197.1(M+H +)。
中间体(3R,7aR)-7a-(4-氟苯基)-3-苯基四氢吡咯烷[2,1-b]恶唑-5(6H)-酮(Int 74-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000391
将中间体Int 73-1(6.1g，31mmol)和(R)-2-氨基-1-苯基乙烷-1-醇(4.3g，31mmol)加入50mL甲苯中，分水器分水，148度下反应20小时。浓缩，柱层析后得到6g白色固体Int 74-2，收率66％。质谱：298(M+H +)。
中间体(S)-5-(4-氟苯基)-1-((R)-2-羟基-1-苯基乙基)吡咯烷-2-酮(Int 74-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000392
将中间体Int 74-2(6g，20mmol)和三乙基硅氢(7.5g，65mmol)加入100mL二氯甲烷中，-78℃下，滴加四氯化钛溶液(20mL，1M in hexane)，滴加完毕后，缓慢恢复到室温，搅拌4小时。加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品直接用于下一步反应。
中间体(S)-5-(4-氟苯基)-1-((R)-2-氯-1-苯基乙基)吡咯烷-2-酮(Int 74-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000393
向250mL的反应瓶中加入Int 74-3(10g，33mmol)和四氢呋喃(100mL)，冰浴下缓慢加入二氯亚砜(8g，67mmol)，反应自然升温到室温，在室温下再 反应2个小时，反应完毕后，真空旋走溶剂后得粗品化合物Int 74-4(13g,收率122％)。质谱:318.1(M+H +)。
中间体((S)-5-(4-氟苯基)-1-(1-苯基乙烯基)吡咯烷-2-酮(Int 74-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000394
向250mL的反应瓶中加入粗品Int 74-4(13g，41mmol)和叔丁醇(130mL),再加入叔丁醇钠(7.9g，82mmol)，反应加热到40℃，2～3个小时，反应完毕后，旋走溶剂，加入水(50mL),用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋走溶剂后得粗品化合物Int 74-5(11g,收率96％)。质谱:282.1(M+H +)。
中间体(R)-5-(4-氟苯基)吡咯烷-2-酮(Int 74-6)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000395
向250mL的反应瓶中加入粗品Int 74-5(11g，39mmol)，2N盐酸水溶液(50mL)和四氢呋喃(60mL)，反应加热到80℃反应2～3个小时，反应完毕后，用饱和的碳酸氢钠水溶液调节pH～7，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，真空旋走溶剂后，所得固体用乙酸乙酯(20mL)打浆1个小时，过滤得化合物Int 74-6(5g，收率74％)。质谱:180.1(M+H +)。
中间体(S)-2-(4-氟苯基)-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(Int 74-7)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000396
向100mL的反应瓶中加入粗品Int 74-6(5g，28mmol)，二碳酸二叔丁酯(7.4g，34mmol)和二氯甲烷(50mL)，最后分批加入4-二甲氨基吡啶(3.4g，28mmol)，室温搅拌过夜，反应完毕后，加入0.5N盐酸水溶液(20mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，真空旋走溶剂后，柱层析纯化后化合物Int 74-7(7.5g,收率96％)。质谱:280.1(M+H +)。
中间体((S)-4-环丙基-1-(4-氟苯基)-4-氧代丁基氨基甲酸叔丁酯(Int 380-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000397
向50mL的反应瓶中加入粗品Int 74-7(500mg，1.8mmol)和四氢呋喃(5mL)，冰浴下加入环丙基溴化镁(1.8mL，1M in THF)，反应大约2～3个小时，反应完毕后，加入饱和的氯化铵水溶液(5mL)，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后化合Int 380-1(310mg)，收率54％。质谱:322.1(M+H +)。
中间体(S)-5-环丙基-2-(4-氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯(Int 380-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000398
向25mL的反应瓶中加入粗品Int 380-1(310mg，1mmol)和二氯甲烷(3mL)，再加入三氟乙酸(0.3mL),反应室温过夜，反应完毕后，真空旋去溶剂，加入碳酸氢钠水溶液调节pH～7，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，真空旋去溶剂后得到粗品化合物Int 380-2(125mg)，收率70％。质谱:204.1(M+H +)。
中间体(2R,5S)-2-环丙基-5-(4-氟苯基)吡咯烷(Int 380-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000399
向25mL的反应瓶中加入粗品Int 380-2(125mg，0.68mmol)和二氯甲烷(3mL)，冰浴下滴加二异丁基氢化铝(2.7mL，1M in hexane)，反应室温过夜，反应完毕后，加入15％氢氧化钠水溶液(0.2mL)，加入水(0.2mL)，硅藻土过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，真空旋去溶剂后得到粗品化合物Int 380-3(103mg)，收率82％。质谱:206.1(M+H +)。
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-环丙基-5-(4-氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(380)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000400
向25mL的反应瓶中加入化合物Int 1-15(33mg，0.1mmol)，Int 380-3(31mg，0.15mmol)，DIEA(39mg，0.3mmol)和DMF(1mL)。搅拌下加入HATU(57mg，0.15mmol)。常温搅拌过夜，反应完毕后，向反应液中加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化后得化合物380(26mg)，收率50％。质谱:521.2(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.71(s,1H),7.58-7.11(m,7H),6.14-6.03(m,1H),5.11(dt,J＝53.2,7.3Hz,1H),4.59(dd,J＝99.5,16.9Hz,1H),4.39-3.75(m,2H),3.51(d,J＝16.8Hz,1H),3.07(dd,J＝15.8,7.8Hz,1H),3.03-2.89(m,1H),2.70-2.55(m,4H),2.47-2.03(m,2H),1.85(ddd,J＝53.6,33.0,9.3Hz,3H),1.19-1.03(m,1H),0.80-0.44(m,3H).
实施例381化合物1-((S)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(381)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000401
中间体5-溴-4-氟-1-((三甲基甲硅烷基)氧基)-2,3-二氢-1H-茚-1-腈(Int 381-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000402
于100mL的反应瓶中加入三氯化铝(1.26g，9.4mmol)，5-溴-4-氟茚酮(10.7g，47mmol)，干燥的二氯甲烷(100mL)，冰浴下缓慢滴加三甲基硅氰(9.4g，94mmol)，加毕室温下搅拌5小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钾水溶液(200mL)中，二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。柱层析后得白色中间体Int 381-1(10g)，收率65％。质谱：328，330(M+H +)。
中间体5-溴-4-氟-1-羟基-2,3-二氢-1H-茚-1-甲亚胺酸乙酯(Int 381-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000403
将中间体Int 381-1(10g，32mmol)溶于干燥乙醇(60mL)中，通入干燥的HCl气体，搅拌过夜。TLC检测，浓缩，得淡黄色固体粗品Int 381-2(9.5g)，直接用于下一步反应。
中间体5-溴-4-氟-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 381-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000404
将9.5g中间体Int 381-2悬浮于干燥的THF(120mL)中，冰浴下加入三乙胺(20mL，5e.q.)，分批加入三光气(3.8g，0.4e.q.)。加完搅拌2小时，冰浴下，缓慢加入HCl(2N)，至pH<5，搅拌1小时，EA萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。EA/PE重结晶，搅拌，过滤，得白色中间体Int 381-3(5g)，两步收率53％。质谱：300，302(M+H +)。
中间体2-(5-溴-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 381-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000405
将Int 381-3(10g，34mmol)，溴代乙酸叔丁酯(7.5g，38.4mmol)以及碳酸钾(7.3g，52.9mmol)溶于DMF(100mL)中，室温下搅拌4小时。加入水(200mL)，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，石油醚打浆，过滤，得到白色固体Int 381-4(12g)，收率84％。质谱：414，416(M+H +)。
中间体2-(5-((二苯基亚甲基)氨基)-4-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 381-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000406
将中间体Int 381-4(12g，28mmol)，二苯甲酮亚胺(7g，38mmol)，醋酸钯(260mg，1.16mmol)，1,1-联萘-2,2-双二苯膦(1.61g，2.58mmol)和碳酸铯(13.2g，40mmol)溶于甲苯(50mL)中，氮气置换，升温至100℃，搅拌4小时。浓缩，柱层析得到灰色固体Int 381-5(12g)，收率82.1％。质谱：515(M+H +)。
中间体2-(5-氨基-4-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 381-6)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000407
将Int 381-5(12g，24mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，室温下加入盐酸(2N，10mL)，搅拌30分钟。乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体Int 381-6(6.8g)，收率85％。质谱：307(M-43)。
中间体2-(5-(3-甲基脲基)-4-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[叔茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 381-7)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000408
将三光气(3.5g，12mmol)置于二氯甲烷(25mL)中，冰浴下，将Int 381-6(6.8g，20mmol)和三乙胺(20g，200mmol)以及二氯甲烷(25mL)的混合液缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时，加入甲胺盐酸盐(7g，104mmol)，搅拌4小时。加入水(100mL)，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体Int 381-7(5.1g)，收率61％。质谱：425(M+18)。
中间体(S)-2-(4-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基) 乙酸叔丁酯(Int 381-8)和(R)-2-(4-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 383-1)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000409
手性分离条件：仪器：SFC-80(Thar,Waters)；手性分离柱：CHIRALCEL OD(4.6x100mm 3μm)；柱温：35℃；流动相：A＝CO 2，B＝MEOH；出峰时间：t 1＝1.61min,t 2＝1.98min。
Int 381-7(5g)手性分离后，得到Int 381-8(t 1，2.3g)，e.e＝99％，；Int 383-1(t 2，2.3g)，e.e＝99％，
中间体(S)-2-(4-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int 381-9)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000410
将中间体Int 381-8(2.3g，5mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌过夜，浓缩得浅黄色固体Int 381-9(1.6g)，收率91％。质谱：350(M-H -)。[α] 20 D＝-54.5°(c 1.0，MeOH)
化合物1-((S)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(381)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000411
将Int 381-9(33mg，0.1mmol)，Int 201-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体381(35mg)，收率69％。质谱：531(M+H +)。
实施例382化合物1-((S)-4-氟-3'-(2-((2S,5S)-2-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡咯烷-1- 基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(382)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000412
将Int 381-9(33mg，0.1mmol)，中间体Int 205-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体382(35mg)，收率69％。质谱：549(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.02-7.91(m,1H),7.21(dd,J＝33.7,8.6Hz,1H),7.04-6.96(m,1H),6.85(d,J＝7.1Hz,1H),4.97(d,J＝35.7Hz,1H),4.44(dt,J＝69.8,34.9Hz,2H),3.99(dd,J＝148.8,16.4Hz,2H),3.27-3.11(m,2H),2.93-2.75(m,4H),2.61(s,1H),2.52-2.39(m,1H),2.32-1.89(m,3H),1.73(d,J＝65.5Hz,1H),1.28(s,1H).
实施例383化合物化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(383)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000413
中间体(R)-2-(4-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int 383-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000414
将Int 383-1(2.3g，5mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌过夜，浓缩得浅黄色固体Int 383-2(1.6g)，收率91％。质谱：350(M-H -)。[α] 20 D＝+53.8°(c 1.0，MeOH)
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(383)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000415
将Int 383-1(33mg，0.1mmol)，Int 201-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体381(35mg)，收率69％。质谱：531(M+H +)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.71(s,1H),7.53(d,J＝6.4Hz,1H),7.36-7.31(m,1H),7.23(ddd,J＝29.6,16.1,9.6Hz,3H),6.08(d,J＝4.5Hz,1H),5.38-4.97(m,1H),4.54-4.30(m,2H),4.27-4.17(m,1H),3.44(t,J＝17.0Hz,1H),3.14-3.03(m,1H),2.98(s,1H),2.69-2.56(m,4H),2.46-2.41(m,1H),2.04(dd,J＝13.1,6.1Hz,1H),1.73(dd,J＝12.6,6.0Hz,1H),1.65-1.46(m,2H),1.29(dd,J＝40.9,5.9Hz,2H).
实施例384化合物化合物1-((R)-4-氟-3'-(2-((2S,5S)-2-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(384)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000416
将Int 383-2(33mg，0.1mmol)，中间体Int 205-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体382(35mg)，收率69％。质谱：549(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.02-7.86(m,1H),7.14(dd,J＝47.6,7.9Hz,1H),7.04-6.96(m,1H),6.87-6.78(m,1H),4.96(d,J＝31.1Hz,1H),4.59-3.73(m,4H),3.18(d,J＝10.1Hz,2H),2.84(s,4H),2.59(d,J＝8.2Hz,1H),2.44(s,1H),2.23(s,1H),2.07(dd,J＝21.2,13.1Hz,2H),1.75(d,J＝80.1Hz,1H),1.30(d,J＝13.0Hz,1H).
实施例385化合物1-((S)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧 代乙基)-7-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(385)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000417
中间体5-溴-7-氟-1-((三甲基甲硅烷基)氧基)-2,3-二氢-1H-茚-1-腈(Int 385-1)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000418
于100mL的反应瓶中加入三氯化铝(1.17g，8.8mmol)，5-溴-7-氟茚酮(10g，44mmol)，干燥的二氯甲烷(100mL)，冰浴下缓慢滴加三甲基硅氰(8.7g，88mmol)，加毕室温下搅拌5小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钾水溶液(200mL)中，二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。柱层析后得白色中间体Int 385-1(9g)，收率63％。质谱：328，330(M+H +)。
中间体5-溴-7-氟-1-羟基-2,3-二氢-1H-茚-1-甲亚胺酸乙酯盐酸盐(Int 385-2)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000419
将中间体Int 385-1(9g，27mmol)溶于干燥乙醇(60mL)中，通入干燥的HCl气体，搅拌过夜。TLC检测，浓缩，得淡黄色固体粗品Int 385-1(8.5g)，直接用于下一步反应。
中间体5-溴-7-氟-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-2',4'-二酮(Int 385-3)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000420
将中间体Int 385-2(8.5g，25mmol)悬浮于干燥的THF(120mL)中，冰浴下加入三乙胺(17.7g，175mmol),分批加入三光气(3g，10mmol)。加完搅拌2小时，冰浴下，用盐酸溶液(2N)调节至pH<5，搅拌1小时，EA萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。用EA和PE重结晶，过滤，得白色中间体Int 385-3(4g)，两步收率50％。质谱：300,302(M+H +)。
中间体2-(5-溴-7-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 385-4)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000421
将中间体Int 385-3(4g，13mmol)，溴代乙酸叔丁酯(2.6g，13mmol)以及碳酸钾(2.8g，20mmol)溶于DMF(100mL)中，室温下搅拌4小时。加入水(200mL)，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，石油醚打浆，过滤，得到白色固体Int 385-4(4.7g)，收率85％。质谱：414，416(M+H +)。
中间体2-(5-((二苯基亚甲基)氨基)-7-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 385-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000422
将中间体Int 385-4(4.7g，11mmol)，二苯甲酮亚胺(2.67g，15mmol)，醋酸钯(250mg，1.10mmol)，1,1-联萘-2,2-双二苯膦(685mg，1.1mmol)和碳酸铯(5.54g，17mmol)溶于甲苯(50mL)中，氮气置换，升温至100℃，搅拌4小时。浓缩，柱层析得到灰色固体Int 385-5(4.3g)，收率76％。质谱：515(M+H +)。
中间体2-(5-氨基-7-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 385-6)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000423
将中间体Int 385-5(4.3g，8.4mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，室温下加入盐酸(10mL，2N)，搅拌30分钟。乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体Int 385-6(2.8g)，收率96％。质谱：307(M-43)。
中间体2-(5-(3-甲基脲基)-7-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[叔茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 385-7)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000424
将三光气(1.2g，4mmol)置于二氯甲烷(25mL)中，冰浴下，将中间体Int 385-6(2.8g，8mmol)和三乙胺(6.5g，64mmol)以及二氯甲烷(25mL)的混合液缓慢滴入反应瓶中，滴加完毕后，搅拌1小时，加入甲胺盐酸盐(1.6g，24mmol)，搅拌4小时。加入水(100mL)，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体Int 385-7(2.5g)，收率77％。质谱：408(M+H +)。
中间体(S)-2-(7-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基) 乙酸叔丁酯(Int 385-8)和(R)-2-(7-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 387-1)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000425
手性分离条件：仪器：SFC-80(Thar,Waters)；手性分离柱：CHIRALCEL OD(4.6x100mm 3μm)；柱温：35℃；流动相：A＝CO 2，B＝MEOH；出峰时间：t 1＝1.61min,t 2＝1.98min。
Int 385-7(5g)手性分离后，得到Int 385-8(t 1，1.2g)，e.e＝99％，；Int 387-1(t 2，1.2g)，e.e＝99％，
中间体(S)-2-(7-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int 385-9)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000426
将中间体Int 385-8(1.2g，3mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌过夜，浓缩得浅黄色固体Int 385-9(0.9g)，收率86％。质谱：350(M-H -)。[α] 20 D＝-68°(c 1.0，MeOH)
化合物1-((S)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-7-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(385)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000427
将中间体Int 385-9(33mg，0.1mmol)，Int 201-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体385(35mg)，收率69％。质谱：531(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.96(d,J＝4.4Hz,1H),7.51(d,J＝10.5Hz,1H),7.42-7.12(m,4H),6.22-6.16(m,1H),4.97(m,1H),4.53-4.36(m,2H),3.85(m,1H),3.09(m,2H),2.62-2.51(m,5H),2.45-2.32(m,1H),2.00(m,2H),1.70 (m,1H),1.39-1.33(m,3H)。
实施例386化合物1-((S)-7-氟-3'-(2-((2S,5S)-2-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(386)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000428
将中间体Int 385-9(33mg，0.1mmol)，Int 205-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体386(35mg)，收率69％。质谱：549(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.97(s,1H),7.36-7.24(m,3H),7.15(s,1H),7.11-7.05(m,1H),6.20(s,1H),4.88-4.76(m,1H),4.47(m,2H),4.18-3.54(m,1H),3.14(m,1H),3.05(m,1H),2.71-2.57(m,4H),2.41-2.32(m,1H),2.14-2.05(m,1H),2.02-1.91(m,1H),1.81(m,1H),1.47(m,1H),1.36(t,J＝5.9Hz,3H)。
实施例387化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-7-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(387)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000429
中间体(R)-2-(7-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int 387-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000430
将中间体Int 387-1(1.2g，3mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌过夜，浓缩得浅黄色固体Int 387-2(0.9g)，收率86％。[α] 20 D＝+67°(c 1.0，MeOH)
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-7-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(387)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000431
将中间体Int 387-2(33mg，0.1mmol)，Int 201-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体387(35mg)，收率69％。质谱：531(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.97(s,1H),7.52(dd,J＝18.9,8.4Hz,1H),7.42-7.29(m,2H),7.23-7.12(m,2H),6.20(d,J＝4.5Hz,1H),5.06(m,1H),4.74-4.34(m,2H),3.98(m,1H),3.15(m,1H),3.03(m,1H),2.71-2.57(m,4H),2.42-2.33(m,1H),2.14-1.98(m,1H),1.92(m,1H),1.87-1.64(m,1H),1.49(m,1H),1.40-1.31(m,3H)。
实施例388化合物1-(R)-7-氟-3'-(2-((2S,5S)-2-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(388)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000432
Int 387-2(33mg，0.1mmol)，Int 205-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，搅拌过夜，浓缩，柱层析，得到淡黄色固体387(35mg)，收率69％。质谱：549(M+H +)。 1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.97(s,1H),7.35-7.29(m,1H),7.26(dd,J＝13.4,4.9Hz,1H),7.15(s,1H),7.10(dd,J＝9.0,6.9Hz,1H),6.20(d,J＝4.8Hz,1H),5.27-4.85(m,1H),4.76-4.37(m,2H),4.20-3.57(m,1H),3.15(m,1H),3.08-3.00(m,1H),2.67-2.55(m,4H),2.42-2.31(m,1H),2.17-2.05(m,1H),2.02-1.91(m,1H),1.88-1.74(m,1H),1.48(d,J＝6.8Hz,1H),1.39-1.31(m,3H)。
实施例389化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(389)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000433
3-(4-氟-3-硝基苯基)丙烯酸(Int 389-1)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000434
于反应瓶中加入4-氟-3-硝基苯甲醛(50g，295.7mmol)，丙二酸(30.75g，295.7mmol)，冰乙酸(200mL)，并加入乙酸钠(7.27g，88.7mmol)，加热到100℃反应16个小时。将反应液倒入的的盐酸溶液(800mL，0.1N)中，过滤，滤饼先用水(100mL)洗，再用MTBE(50mL)洗，最后乙醇(20mL)洗，抽干，滤饼晾干得中间体Int 389-1(40g)，收率63％。质谱：210(M-H -)。
3-(3-氨基-4-氟苯基)丙酸(Int 389-2)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000435
将中间体Int 389-1(40g，189.4mmol)溶于乙醇(600mL)，加入钯碳(2g)，氢气置换三次，反应18个小时。过滤，滤液浓缩后得到中间体Int 389-2(33g)，收率95％。质谱：184(M+H +)。
3-(3-乙酰氨基-4-氟苯基)丙酸(Int 389-3)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000436
将中间体Int 389-2(18.3g，100mmol)溶于DCM(200mL)，加入醋酸酐(10.2g，100mmol)，室温反应2个小时。加入水(50mL)，搅拌五分钟，浓缩掉二氯甲烷，再加入水(100mL)，搅拌，过滤，滤饼水洗，抽干，旋干后得到中间体Int 389-3(20.2g)，收率90％。质谱：226(M+H +)。
N-(6-氟-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(Int 389-4)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000437
将中间体Int 389-3(22.5g，100mmol)溶于DCM(200mL)，加入氯化亚砜(24g，200mmol)，室温反应1个小时。旋干，所得残留物溶于DCM(200mL)，加入无水氯化铝(26.6g，200mmol)，加热到40℃反应16个小时。将反应液倒入冰水(400mL)，萃取，有机相饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩之后，重结晶，得中间体Int 389-4(14.5g)，收率70％。质谱：208(M+H +)。
N-(-氰基-6-氟-1-((三甲基甲硅烷基)氧基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(Int 389-5)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000438
将中间体Int 389-4(2.07g，10mmol)溶于DCM(20mL)，加入NMO(468mg，4mmol)，最后加入TMSCN(2g，20mmol)，室温反应18个小时。旋掉DCM，柱层析得中间体Int 389-5(2.14g)，收率70％。质谱：324(M+18)。
5-乙酰氨基-6-氟-1-羟基-2,3-二氢-1H-茚-1-甲亚胺酸乙酯(Int 389-6)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000439
将中间体Int 389-5(3.06g，10mmol)溶于乙醇(40mL)，持续通入干燥的HCl气体，搅拌过夜。TLC检测，浓缩，得中间体Int 389-6粗品(3g)，直 接用于下一步反应。
N-(6-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)乙酰胺(Int 389-7)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000440
将中间体Int 389-6(3.16g，10mmol)悬浮于THF(30mL)中，冰浴下加入DIEA(20mL；50mmol)，分批加入三光气(1.5g，5mmol)。加完搅拌2小时，冰浴下，缓慢加入HCl(2N)，至pH<5，搅拌1小时，EA萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。乙酸乙酯石油醚重结晶，得白色中间体Int 389-7(1.75g)，收率60％。质谱：279(M+H +)。
2-(5-乙酰氨基-6-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸叔丁酯(Int 389-8)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000441
将Int 389-7(2.78g，10mmol)，溴代乙酸叔丁酯(1.95g，10mmol)以及碳酸钾(2.76g，20mmol)溶于DMF(15mL)，室温下搅拌2小时。倒入水(30mL)中，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，石油醚打浆，过滤，得到中间体Int 389-8(3.2g)，收率80％。质谱：410(M+18)。
2-(5-氨基-6-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸甲酯(Int 389-9)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000442
将Int 389-8(3.92g，10mmol)溶于甲醇(20mL)，加入浓盐酸(20mL)，加热到65℃反应18小时。旋干溶剂，柱层析得中间体Int 389-9(2.46g)，收率80％。质谱：265(M-43)。
(R)-2-(6-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸甲酯(Int 389-10)和(S)-2-(6-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸甲酯(Int 389-11)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000443
将中间体Int 389-9(12.3g，40mmol)溶于DCM(150mL)，冰水浴冷却，加入三光气(7.1g，24mmol)，反应十分钟，加入DIEA(36.1g，280mmol)，最后加入甲胺盐酸盐(4.1g，60mmol)，反应半个小时。加入水(100mL)，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到黄色固体(10.2g)，收率70％。取5g手性分离后，得到Int 389-10(t 2，2.3g)，e.e＝99％，质谱：366(M+H +)。Int 389-11(t 1，2.3g)，e.e＝99％，质谱：366(M+H +)。
手性分离条件：仪器：SFC-80(Thar,Waters)；手性分离柱：CHIRALCEL OD(4.6x100mm 3μm)；柱温：35℃；流动相：A＝CO 2，B＝MEOH；出峰时间：t 1＝1.848min,t 2＝2.228min。
(R)-2-(6-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]3'-基)乙酸(Int 389-12)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000444
将Int 389-10(3.65g，10mmol)溶于浓盐酸(30mL)，加热到65℃反应三个小时，浓缩至干得固体Int 389-12(3.4g)，收率96％。质谱：352(M+H +)。[α] 20 D＝+39.3°(c 1.0，MeOH)
化合物1-((R)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(389)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000445
将Int 389-12(35mg，0.1mmol)，Int 201-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于DMF(3mL)，搅拌2小时，倒入水中，萃取，有机相饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析， 得到白色固体389(40mg)，收率80％。质谱：531(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ8.10(m,1H),7.28-6.82(m,5H),4.98(m,1H),4.49-3.67(m,3H),3.08(m,2H),2.76(m,3H),2.56-2.39(m,2H),2.03(m,3H),1.71-1.58(m,1H),1.48(m,3H)。
实施例390化合物1-((R)-6-氟-3'-(2-((2S,5S)-2-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(390)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000446
将Int 389-12(35mg，0.1mmol)，Int 205-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于DMF(3mL)，搅拌2小时，倒入水中，萃取，有机相饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析，得到白色固体390(40mg)，收率80％。质谱：549(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ8.12(m,1H),7.07(m,3H),6.86-6.74(m,1H),5.02-4.85(m,1H),4.50-3.74(m,3H),3.21-2.95(m,2H),2.79(s,3H),2.59-2.32(m,2H),2.28-1.65(m,4H),1.49(m,3H)。
实施例391化合物
Figure PCTCN2019121086-appb-000447
中间体(S)-2-(6-氟-5-(3-甲基脲基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-3'-基)乙酸(Int 389-13)的合成
Figure PCTCN2019121086-appb-000448
将Int 389-11(3.65g，10mmol)溶于浓盐酸(30mL)，加热到65℃反应三个小时，浓缩至干得固体Int 389-12(3.4g)，收率96％。质谱：352(M+H +)。[α] 20 D＝-34.9°(c 1.0，MeOH)
化合物1-((S)-3'-(2-((2S,5S)-2-(3,4-二氟苯基)-5-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氟-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(391)的合成。
Figure PCTCN2019121086-appb-000449
将Int 389-13(35mg，0.1mmol)，Int 201-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于DMF(3mL)，搅拌2小时，倒入水中，萃取，有机相饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析，得到白色固体391(40mg)，收率80％。质谱：531(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ8.10(m,1H),7.28-6.82(m,5H),4.98(m,1H),4.49-3.67(m,3H),3.08(m,2H),2.76(m,3H),2.56-2.39(m,2H),2.03(m,3H),1.71-1.58(m,1H),1.48(m,3H).
实施例392化合物1-((S)-6-氟-3'-(2-((2S,5S)-2-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2',4'-二氧代-2,3-二氢螺[茚-1,5'-恶唑烷]-5-基)-3-甲基脲(392)的合成：
Figure PCTCN2019121086-appb-000450
将Int 389-13(35mg，0.1mmol)，Int 205-3(20mg，0.11mmol)，HATU(50mg，0.13mmol)以及DIEA(20mg，0.15mmol)溶于DMF(3mL)，搅拌2小时，倒入水中，萃取，有机相饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析，得到白色固体392(40mg)，收率80％。质谱：549(M+H +)。 1H NMR(400MHz,CDCl 3)：δ8.12(m,1H),7.07(m,3H),6.86-6.74(m,1H),5.02-4.85(m,1H),4.50-3.74(m,3H),3.21-2.95(m,2H),2.79(s,3H),2.59-2.32(m,2H),2.28-1.65(m,4H),1.49(m,3H)。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1 检测化合物对组蛋白乙酰化酶P300的抑制活性
1.实验方法
利用放射性同位素FlashPlate技术，检测本发明化合物对组蛋白乙酰化酶p300(购买自BPS)的半抑制浓度IC50。将待测化合物分别稀释成10个梯度浓度点进行检测(单孔)，采用已知的组蛋白乙酰化酶p300抑制剂化合物C646(CAS：328968-36-1，采购自Calbiochem公司)作为阳性对照。在组蛋白乙酰化酶p300 的催化作用下，将同位素标记的[3H]-Ac-CoA上的[3H]-Ac基团转移到生物素化的组蛋白多肽底物(购买自吉尔生化)上，生物素化的组蛋白多肽底物与FlashPlate板上的链霉亲和素结合，使同位素与FlashPlate板距离足够近，同位素辐射能量就可以将FlashPlate板包被的闪烁液转化为光子并被检测到。具体步骤如下：
(1)溶液配制
①反应缓冲液和反应终止液配制
1倍反应缓冲液：50mM Tris-HCl,pH 7.5；0.01％Tween-20
反应终止液：750uM的Ac-CoA溶液
②化合物配制
各待测化合物分别用100％DMSO溶解成10mM。将化合物在Echo384孔板上稀释到所需要的浓度。用Echo550仪器从上述稀释好的Echo384孔板中转移200nl化合物到384孔反应板中，以化合物C646作为阳性对照。阴性对照转移入200nl的100％DMSO。
③配制2倍酶溶液
将p300加入1倍反应缓冲液，形成2倍酶溶液(酶终浓度为0.2nM)。
④配制2倍的底物溶液
将多肽底物和[3H]-Ac-CoA加入1倍反应缓冲液，形成2倍底物溶液(底物终浓度分别为600nM和250nM)。
(2)实验步骤
①向384孔板中加入酶溶液
向384孔反应板孔中加入10μl的2倍酶溶液。对于无酶活对照孔，用10μl的1倍反应缓冲液替代酶溶液。1000rpm离心1分钟，室温下孵育15分钟。
②向384孔板中加入底物溶液启动酶学反应
向384孔反应板每孔中加入10μl的2倍底物溶液。1000rpm离心1分钟。25℃反应60分钟。
③酶学反应的终止
向384孔反应板每孔中加入10μl的反应终止液终止反应。从试验板中每孔取25uL转移到Flashplate中，在室温下放置1小时。然后用0.1％的Tween-20溶液洗Flashpate板3次。
④用MicroBeta 2读取数据
⑤抑制率计算
从Microbeta 2上复制数据。按照公式抑制率(％)＝(最大值-样本值)/(最大值-最小值)×100％)，计算出抑制率。其中最大值是为DMSO对照的转化率，最小值是为无酶活对照的转化率。
将数据导入GraphPad Prism5，并使用公式"log(inhibitor)vs.response--Variable slope"进行曲线拟合,得到半抑制浓度IC 50。
2.实验结果
表1.各化合物对P300的IC50
Figure PCTCN2019121086-appb-000451
Figure PCTCN2019121086-appb-000452
可以看出，本发明制得的化合物能够有效抑制组蛋白乙酰化酶p300，本发明化合物对p300的IC50基本都在0.01uM以下，远低于阳性对照化合物C646(0.96uM)。所以，本发明的化合物能够用于制备组蛋白乙酰化酶p300的抑制剂，并且其抑制效果显著优于已知的组蛋白乙酰化酶p300抑制剂——化合物C646。
实验例2 本发明化合物对CWR22RV1细胞增殖抑制作用的生物学测定
1.实验步骤：
①CWR22RV1细胞用细胞培养液传代培养，取生长状态良好的细胞接种于96孔板，每孔80μL，每孔细胞数为1500，于37℃，5％CO 2细胞孵育箱中培养过夜。
②将药物用二甲基亚砜(DMSO)配置成30mM的储存液。临用前再用DMSO稀释3倍，再按3倍梯度稀释，得到9个浓度梯度，再用培养液将各浓度的化合物稀释200倍(以此保证培养体系中DMSO浓度为0.1％)，每个浓度做2个孔重复。取20μL稀释好的化合物加到细胞培养孔(终浓度为10μM,3.3μM,1.1μM…)，轻轻振荡混匀。另外设置3个只加细胞的阴性对照孔和3个只加培养液的空白对照孔(6孔各加20μL培养液稀释200倍的DMSO)。
2.结果检测：
(1)培养6天后，每孔加10μL CCK-8，于37℃，5％CO2细胞孵育箱中继续培养2.5小时。
(2)用多功能酶标仪在450nm处测定吸光度(OD值)。
(3)数据用软件GraphPad Prism6中Dose-response-inhibition方程分析，得出IC50值。
本发明化合物对CWR22RV1细胞的活性抑制的IC50(nM)，结果如表2所示。
A表示IC50小于或等于500nM；B表示IC50大于500nM且小于或等于2000nM；C表示IC50大于2000nM。
表2各化合物对CWR22RV1细胞的IC50
化合物编号 IC 50 化合物编号 IC 50 化合物编号 IC 50 化合物编号 IC 50
1 C 2 C 3 C 4 C
5 C 7 C 8 B 10 C
11 B 12 C 13 C 14 A
15 A 16 C 17 C 18 A
21 A 25 C 39 B 43 A
96 A 97 C 98 B 99 C
100 C 101 C 102 C 103 C
105 C 106 C 107 C 108 C
109 C 110 C 111 C 112 C
114 B 115 C 201 A 205 A
209 A 212 A 213 A 217 A
221 C 225 B 300 C 302 C
303 B 304 C 305 C 306 C
308 A 309 B 310 C 311 C
314 C 315 C 317 C 318 C
319 C 322 C 323 C 324 C
325 C 328 C 330 C 331 C
332 C 333 C 334 C 335 C
336 C 337 B 338 C 339 C
340 C 341 C 343 C 347 B
348 A 349 C 350 B 351 A
352 C 353 A 354 B 355 C
356 C 357 A 358 B 359 A
360 C 361 B 362 A 363 C
365 B 366 B 367 B 368 C
369 C 370 C 371 B 372 C
373 C 374 C 375 C 376 B
377 B 378 C 379 C 380 A
381 C 382 C 383 C 384 C
385 C 386 C 387 B 388 C
389 A 390 A 391 C 392 B
可以看出，本发明制得的化合物对人前列腺癌细胞CWR22RV1具有明显的抑制作用，特别是化合物14、15、18、21、43、201、205、209、212、213、217、308、348、351、353、357、359、362、380、389、390，对CWR22RV1细胞的IC50小于小于或等于500nM。
实验例3 本发明化合物对其他肿瘤细胞增殖抑制作用的生物学测定
1.实验方法
采用与实验例2相同的方法，将CWR22RV1细胞替换为表3中的肿瘤细胞，测试并计算本发明化合物对这些肿瘤细胞活性抑制的IC50(nM)，结果如表3所示。
2.实验结果
A表示IC50小于或等于500nM；B表示IC50大于500nM且小于或等于2000nM.
表3各化合物对各肿瘤细胞的IC50
Figure PCTCN2019121086-appb-000453
Figure PCTCN2019121086-appb-000454
可以看出，本发明制得的化合物对其他前列腺癌细胞、白血病细胞、淋巴瘤细胞、乳腺癌细胞、多发性骨髓瘤细胞的增殖均有有效的抑制作用。说明本发明化合物同时对多种肿瘤具有抑制效果。
实验例4 本发明化合物与CDK4/6抑制剂palbociclib联用对CWR22RV1细胞增殖抑制作用的生物学测定
1.实验步骤：
测试并计算本发明化合物、palbociclib、以及本发明化合物与palbociclib联用对CWR22RV1细胞增殖抑制的IC50(nM)，具体如下：
1)CWR22RV1细胞用细胞培养液传代培养，取生长状态良好的细胞接种于96孔板，每孔60μL，每孔细胞数为2000，于37℃，5％CO 2细胞孵育箱中培养过夜。
2)将药物用二甲基亚砜(DMSO)配置成10mM的储存液。临用前再用DMSO稀释3倍，再按3倍梯度稀释，得到9个浓度梯度，再用培养液将各浓度的化合物稀释200倍(以此保证培养体系中DMSO浓度为0.1％)， 每个浓度做2个孔重复。取20μL稀释好的化合物加到细胞培养孔(终浓度为10μM,3.3μM,1.1μM…)；palbociclib用培养液分别稀释为500nM,150nM,50nM,5nM，取20μL稀释好的化合物加到相应的细胞培养孔(终浓度为100nM,30nM,10nM,1nM)，轻轻振荡混匀。另外设置3个只加细胞的阴性对照孔和3个只加培养液的空白对照孔(6孔各加20μL培养液稀释200倍的DMSO)。
2.结果检测：
1)培养6天后，每孔加10μL CCK-8，于37℃，5％CO 2细胞孵育箱中继续培养2.5小时。
2)用多功能酶标仪在450nm处测定吸光度(OD值)。
3)数据用软件GraphPad Prism6中Dose-response-inhibition方程分析，得出IC50值。
本发明化合物与palbociclib联用对CWR22RV1细胞活性抑制的IC50(nM)，结果如表4所示。
表4化合物与palbociclib联用对CWR22RV1细胞的活性抑制的IC50(nM)
化合物编号 IC50(nM)
205 120
palbociclib 66
100nM palbociclib+205 ＜1
30nM palbociclib+205 40
10nM palbociclib+205 110
1nM palbociclib+205 130
可以看出，与CDK4/6抑制剂palbociclib联用时，本发明化合物205对CWR22RV1细胞抑制活性远高于单独使用化合物205或单独使用palbociclib。说明本发明化合物与palbociclib联用在抑制前列腺癌中发挥了协同增效的作用。
实验例5 本发明化合物与CDK4/6抑制剂palbociclib联用对MCF-7细胞增殖抑制作用的生物学测定
1.实验方法
采用与实验例4相同的方法，将CWR22RV1细胞替换为MCF-7细胞，测试并计算本发明化合物、palbociclib、以及本发明化合物与palbociclib联用对MCF-7细胞增殖抑制的IC50(nM)，结果如表5所示。
2.实验结果
表5化合物与palbociclib联用对MCF-7细胞的活性抑制的IC50(nM)
化合物编号 IC50(nM)
palbociclib 34
205 81
100nM palbociclib+205 1.5
30nM palbociclib+205 1.6
10nM palbociclib+205 19
可以看出，本发明化合物205与CDK4/6抑制剂palbociclib联用时，对MCF-7细胞抑制活性远高于单独使用化合物205或单独使用palbociclib。说明本发明化合物与palbociclib联用在抑制乳腺癌中发挥了协同增效的作用。
综上，本发明提供了式I所示的化合物，该化合物能够有效抑制组蛋白乙酰化酶p300，能够有效抑制包括前列腺癌细胞、白血病细胞、淋巴瘤细胞、乳腺癌细胞、多发性骨髓瘤细胞等在内的多种肿瘤细胞的增殖活性。同时，本发明化合物与CDK4/6抑制剂联用，在抑制包括前列腺癌细胞、乳腺癌细胞在内的肿瘤细胞的增殖中发挥了协同作用。因此，本发明的化合物在制备组蛋白乙酰化酶抑制剂，制备预防和/或治疗癌症、代谢类疾病、神经类疾病或炎症的药物以及联合用药物中具有非常好的应用前景。

Claims (19)

  1. 一种式(Ⅰ)所示化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式：
    Figure PCTCN2019121086-appb-100001
    其中A选自O、N、S；Ry选自无、H、烷基、取代烷基或者烯基；
    Rv、Rw、Rx分别独立地选自氢、卤素、氰基、硝基、烷基、取代烷基、烯基、炔基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基、取代酰胺基、取代胍基、取代脲基、氨基、取代氨基、烷氧基、取代烷氧基；
    R 1、R 2、R 3、R 4分别独立地选自H、烷基、卤素；或者，R 1、R 2、R 3、R 4中，R 1和R 2连接成环、R 2和R 3连接成环和/或R 3和R 4连接成环；
    R 5选自烷基、烷氧基、氨基、取代氨基、酰胺基、取代酰胺基、酯基、羰基、杂环基、取代杂环基。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：
    Rv、Rw分别独立地选自氢、卤素、烷基、取代烷基；Rx选自取代酰胺基、取代胍基、取代杂环基、取代脲基、氨基；
    R 1选自H、F、CH 3；R 2为H、F、CH 3；或者，R 1、R 2均为CH 2并连接成三元环；R 3为H；或者，R 2为CH 2、R 3为H并连接成三元环；R 4为H；
    R 5为杂环基、取代杂环基或
    Figure PCTCN2019121086-appb-100002
    其中，R 6为H、烷基、取代烷基、环烷基或取代环烷基；R 7为H、烷基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基或取代芳杂环基；或者，R 6、R 7连接成为杂环或取代杂环。
  3. 根据权利要求2所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：所述化合物的结构如式II所示：
    Figure PCTCN2019121086-appb-100003
    其中，R x选自
    Figure PCTCN2019121086-appb-100004
    氨基、
    Figure PCTCN2019121086-appb-100005
    R b选自甲基、卤代甲基、-YR a，R a选自甲基或环丙基，Y选自NH或O；
    Rv、Rw分别独立地选自氢、卤素、甲基；
    R 1选自H、F、CH 3；R 2为H、F、CH 3；R 3为H；或者，R 1、R 2均为CH 2并连接成三元环；或者，R 2为CH 2、R 3为H并连接成三元环；
    A为O或S；
    R 6为H、烷基、取代烷基、环烷基或取代环烷基；R 7为H、烷基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基或取代芳杂环基；R 6、R 7中所述取代烷基、取代环烷基、取代杂环基、取代芳基、取代芳杂环基中的取代基各自独立地选自卤素、
    Figure PCTCN2019121086-appb-100006
    甲基、羟基，R h选自卤素；或者，R 6、R 7连接成为杂环或取代杂环。
  4. 根据权利要求3所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：
    所述R 6、R 7连接成为杂环或取代杂环，所述杂环、取代杂环为4～6元环。
  5. 根据权利要求4所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：所述R 6、R 7连接形成的杂环或取代杂环为
    Figure PCTCN2019121086-appb-100007
    取代或未取代的桥环、取代或未取代的稠环、取代或未取代的并环；其中，X为CH 2、NH、O或S、SO 2，m、n、s各自独立地选自1-5的整数，R c、R d、R e各自独立地选自氢、卤素、氰基、羧基、硝基、烷基、取代烷基、烷氧基、烯基、炔基、
    Figure PCTCN2019121086-appb-100008
    Figure PCTCN2019121086-appb-100009
    环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基、桥环、稠环或并环；R f、R g为卤素；
    所述桥环、稠环或并环上的取代基各自独立地选自Boc基团、氟代C 1-6烷基、 取代或未取代的杂环基、烷酰基，优选为Boc基团、氟代甲基、
    Figure PCTCN2019121086-appb-100010
    Figure PCTCN2019121086-appb-100011
    -COCH 3；
    所述R c、R d、R e上的取代基各自独立地选自卤素、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基。
  6. 根据权利要求5所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：
    所述R 6、R 7连接形成的杂环或取代杂环为
    Figure PCTCN2019121086-appb-100012
    其中，X为C、N、O或S、SO 2；R 8、R 9分别独立地选自氢、烷基、取代烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基；
    R 0为无、H或烷氧基；或者，R 8、R 9连接形成稠环或桥环；R 10、R 11、R 12、R 13、R 14分别独立地选自氢、卤素、氰基、羧基、硝基、烷基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基；或者，R 10、R 11连接成环；
    所述R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14上的取代基各自独立地选自卤素、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、卤代C 1-6烷氧基、羟基。
  7. 根据权利要求6所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：
    X为C或O；R 8、R 9分别独立地选自氢、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基；
    R 10、R 11、R 12、R 13、R 14分别独立地选自氢、氰基、羧基、烷基、烯基、取代烷基、环烷基、取代环烷基、杂环基、取代杂环基、芳基、取代芳基、芳杂环基、取代芳杂环基；或者，R 10、R 11均为烷基时连接成环；
    所述R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14上的取代基如权利要求6所述。
  8. 根据权利要求7所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：
    R 8与N连接在同一碳原子上，且选自苯基或取代苯基；R 9选自氢、烷基、取代烷基；
    R 10、R 11分别独立地选自氢、C 1-6烷基、氰基、羧基、取代烷基、C 3-6环烷基、C 2-6烯基；或者，R 10、R 11均为CH 2并连接成三元环；
    R 12、R 13分别独立地选自氢、甲基、苯基、取代苯基、芳杂环基、取代芳杂环基、环烷基以及取代环烷基；R 14选自氢、苯基；
    所述R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14上的取代基如权利要求7所述。
  9. 根据权利要求8所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：
    A为O。
  10. 根据权利要求1-9任一项所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：所述化合物的结构如式III所示：
    Figure PCTCN2019121086-appb-100013
    其中，Ra选自甲基或环丙基；
    Y选自NH或O；
    R v、R w分别独立地选自氢、卤素、甲基；
    R 1选自H、F、CH 3；R 2为H、F、CH 3；R 3为H；或者，R 1、R 2均为CH 2并连接成三元环；或者，R 2为CH 2、R 3为H并连接成三元环；
    R 10、R 11分别独立地选自氢、C 1-6烷基、氰基、羧基、取代C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 2-6烯基，所示C 1-6烷基上的取代基选自卤素、羟基、C 1-6烷基；或者，R 10、R 11均为CH 2并连接成三元环；优选地，R 10、R 11分别独立地选自氢、甲基、乙基、异丙基、氰基、羧基、卤素取代的甲基、环丙基、乙烯基、甲氧基取代的甲基、羟基取代的甲基；或者，R 10、R 11均为CH 2并连接成三元环；
    R 12、R 13分别独立地选自氢、甲基、苯基、取代苯基、芳杂环基、取代芳杂环基、环烷基或取代环烷基；所述环烷基为5～6元环烷基；
    所述取代苯基、取代芳杂环基、取代环烷基上的取代基各自独立地选自卤素、C 1-3烷基、卤代C 1-3烷基、C 1-3烷氧基、卤代C 1-3烷氧基、羟基；
    所述同位素替代形式为氘代物。
  11. 根据权利要求1～10所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，其特征在于：所述化合物结构为以下结构之一：
    Figure PCTCN2019121086-appb-100014
    Figure PCTCN2019121086-appb-100015
    Figure PCTCN2019121086-appb-100016
    Figure PCTCN2019121086-appb-100017
    Figure PCTCN2019121086-appb-100018
    Figure PCTCN2019121086-appb-100019
  12. 权利要求1-11任一项所述化合物的制备方法，其特征在于：所述方法为：
    Figure PCTCN2019121086-appb-100020
    以式IV所示化合物与
    Figure PCTCN2019121086-appb-100021
    为原料，反应，即得；
    其中，A、Ry、Rv、Rw、Rx、R 1、R 2、R 3、R 4、R 5如权利要求1-11任一项所示，R 6、R 7如权利要求2-11任一项所示。
  13. 根据权利要求12所述的方法，其特征在于：所述反应的温度为15～30℃，反应时间为0.5～2小时；优选地，所述反应的温度为20℃，反应时间为1小时；
    所述反应是在DIEA和HATU的作用下进行的，所述式IV所示化合物、
    Figure PCTCN2019121086-appb-100022
    DIEA和HATU的摩尔比为1：1：3：1。
  14. 权利要求1～11任一项所述的化合物或其立体化学异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式，在制备组蛋白乙酰化酶抑制剂中的用途。
  15. 根据权利要求14所述的用途，其特征在于：所述组蛋白乙酰化酶为p300。
  16. 根据权利要求14或15所述的用途，其特征在于：所述组蛋白乙酰化酶抑制剂是治疗癌症、代谢类疾病、神经类疾病和/或炎症的药物；优选地，所述癌症为前列腺癌、白血病、淋巴瘤、乳腺癌或多发性骨髓瘤。
  17. 一种药物组合物，其特征在于：它是以权利要求1～11任一项所述的化合物或其立体异构体、溶剂合物或药学上可接受的盐、或其同位素替代形式为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
  18. 一种联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的权利要求1～11任一项所述的化合物和抗癌药物，以及药学上可接受的载体。
  19. 根据权利要求18所述的合用药物，其特征在于：所述抗癌药物为CDK4/6抑制剂；优选地，所述CDK4/6抑制剂为palbociclib。
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