WO2020032270A1 - 乾燥血液試料保存基材 - Google Patents

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WO2020032270A1
WO2020032270A1 PCT/JP2019/031713 JP2019031713W WO2020032270A1 WO 2020032270 A1 WO2020032270 A1 WO 2020032270A1 JP 2019031713 W JP2019031713 W JP 2019031713W WO 2020032270 A1 WO2020032270 A1 WO 2020032270A1
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WO
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blood
base material
holding disk
blood sample
opening
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Application number
PCT/JP2019/031713
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English (en)
French (fr)
Inventor
辰雄 中原
喜次郎 橋本
雄文 上野
Original Assignee
公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団
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Publication date
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/02—Devices for withdrawing samples
    • G01N1/10—Devices for withdrawing samples in the liquid or fluent state
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers

Definitions

  • the present invention relates to a substrate for storing a dried blood sample for storing a blood sample in a dry state.
  • the dried blood sample storage substrate is a paper card-shaped substrate on which blood collected from a specimen is dropped, left at room temperature for 2 to 3 hours, dried, and a blood spot is punched out. It is taken in a tube or the like and used for a blood test (Non-Patent Document 1).
  • Blood tests using dried blood sample storage materials have the advantages of relatively low blood collection volumes and the fact that extracting drugs from whole blood eliminates the need for centrifugation for plasma separation. is there. Furthermore, the storage at room temperature eliminates the need for dry ice or a freezer, and has the advantage that it can be easily transported from remote facilities.
  • Non-Patent Document 2 There is a partial punch analysis method in which a central part of a dropped blood spot is cut out with a punch on a substrate for storing a dried blood sample.
  • Non-Patent Document 2 There is a possibility that a blood component in a portion cut out by a punch may fluctuate due to a hematocrit value of blood.
  • Non-Patent Document 2 There is also a punch analysis method in which a fixed amount of a blood sample is spotted and the whole of the dropped blood spot is punched out. Further, there is a precut analysis method in which a fixed amount of a blood sample is spotted on a previously cut disk (Non-Patent Document 3). However, in these methods, it is necessary to drop a fixed amount of a blood sample with a micropipette or the like, which requires skill and labor.
  • Non-patent Document 4 there is a quantitative absorption microsample method in which blood is absorbed into a small piece of filter paper and then dried and collected. This method is not affected by the hematocrit value, and a fixed amount of blood sample can be obtained simply by immersing a small piece of filter paper in blood. However, this technique is complicated in equipment.
  • PCDBS Pre-cut dried blood spot
  • the present invention has been made in view of such a problem, and a dry blood sample storage substrate that can appropriately store a blood sample without being affected by a hematocrit value, and that does not require skill or labor with a simple structure.
  • the purpose is to provide.
  • the dry blood sample storage substrate is a dry blood sample storage substrate that stores a blood sample in a dry state, and holds a base material plate made of cellulose filter paper and a dropped blood sample in a dry state.
  • a blood holding disk made of cellulose filter paper, and a connecting portion for connecting the base material plate and the blood holding disk, wherein the blood holding disk is separated from the base material plate by the connecting portion and the base material is provided.
  • a plurality of openings are provided on the base material plate, and the blood holding disk is provided on the adhesive surface of the adhesive tape at an interval from the inner peripheral surface of the opening. , Are arranged.
  • the substrate for storing a dried blood sample may be referred to as an air gap type substrate.
  • the air gap type base material is described as a round air gap type base material or a square air gap type base material depending on the shape of the blood holding disk.
  • the blood sample can be appropriately stored without being affected by the hematocrit value, and the skill and labor are not required when storing the blood sample.
  • FIG. 1 It is a schematic diagram of a substrate for storing a dried blood sample according to the first embodiment. It is the schematic of the dry blood sample storage base material concerning 2nd Embodiment. It is the schematic of the dry blood sample storage base material concerning 3rd Embodiment. It is the schematic of the dry blood sample storage base material concerning 4th Embodiment. It is the schematic of the dry blood sample storage base material concerning 5th Embodiment. It is a photographic view of the blood sample storage base material according to Example 1, (A) a photographic view before blood dropping, (B) a photographic view after blood dropping, and (C) a photographic view of a detached disk. It is a figure which shows the influence of hematocrit on blood retention of a round air gap type base material.
  • FIG. 1 It is a schematic diagram of a substrate for storing a dried blood sample according to the first embodiment. It is the schematic of the dry blood sample storage base material concerning 2nd Embodiment. It is the schematic of the dry blood sample storage base material concerning 3rd
  • FIG. 3 is a view showing chromatograms of clozapine (CLZ), ⁇ norclozapine (DMC), clozapine N-oxide (CLZ-NO) ⁇ and an internal standard ⁇ (IS) ⁇ . It is a figure which shows the calibration curve of clozapine (CLZ) and its metabolite, norclozapine (DMC), and clozapine N-oxide (CMO).
  • FIG. 2 is a graph showing the effect of hematocrit on blood levels of clozapine (CLZ) ⁇ and its metabolites norclozapine (DMC) and clozapine N-oxide (CNO) measured using a 4/6 mm round air gap type substrate.
  • FIG. 2 is a graph showing the effect of hematocrit on blood levels of clozapine (CLZ) and its metabolites norclozapine (DMC) and clozapine N-oxide (CNO) measured using a 6/8 mm round air gap type substrate. It is a figure which shows the influence of hematocrit with respect to the blood concentration of olanzapine. It is a figure which shows the influence of hematocrit with respect to the blood concentration of risperidone. It is a figure which shows the influence of hematocrit with respect to the blood concentration of aripiprazole.
  • FIG. 4 shows the effect of the hematocrit value on the blood holding volume of a round air gap 4-bridge type substrate.
  • FIG. 4 shows the effect of hematocrit on clozapine and metabolite blood concentrations measured using a 4/6 mm round air gap 4-bridge substrate.
  • FIG. 4 shows the effect of hematocrit on clozapine and metabolite blood concentrations measured using a 6/8 mm round air gap 4-bridge substrate.
  • FIG. 4 shows the effect of hematocrit on clozapine and metabolite blood concentrations measured using an 8/10 mm round air gap 4-bridge substrate. It is a photographic view of a blood sample storage base material according to Example 4, (A) a photographic view before blood dropping, (B) a photographic view after blood dropping, and (C) a photographic view of a detached disk. It is a figure which shows the influence of hematocrit with respect to the blood holding volume measured using the square air gap type base material. It is a photograph figure of the blood sample preservation base material concerning Example 5, the left side is a photograph figure before blood dripping, and the right side is a photograph figure after blood dripping. It is a figure which shows the analysis result of the blood concentration of caffeine and its metabolite.
  • the dried blood sample storage substrate 900 according to the present embodiment is a round air gap type substrate shown in FIG.
  • the dried blood sample storage base material 900 includes the base material plate 100, the adhesive tape 200, and the blood holding disk 300.
  • the base material plate 100 is formed of cellulose filter paper and has one or a plurality of openings 500.
  • the dimensions of the base material plate 100 are not particularly limited, but are, for example, 65 mm to 85 mm in length, 95 mm to 115 mm in width, and 0.87 mm to 1.07 mm in thickness, preferably 75 mm in length, 105 mm in width, and 0.97 mm in thickness. is there.
  • the shape of the opening 500 is not particularly limited, and is, for example, a circle having a diameter of 6.0 mm to 14 mm, preferably a circle having a diameter of 10 mm.
  • the shape of the opening is not limited to a circle, but may be, for example, an ellipse, an egg, a pear, or the like.
  • the cellulose filter paper is preferably made of cellulose fibers of ⁇ -cellulose of 99% or more.
  • Cellulose filter paper for example, can be employed Advantec paper chromatography filter paper, for example, mass 285 g / m 3, the drainage time of 20 seconds (JIS P 3801, using Herutsuberuhi filtration rate tester, 10 cm 2 It is a time to filter 100 mL of distilled water at 20 ° C. under a pressure of 0.98 Pa on the filter paper surface of (1), filter paper having an ash content of 0.1% and a wet burst strength of 10 kPa can be used.
  • the water absorption of the cellulose filter paper at 20 ° C. is, for example, 17 cm / 10 min to 19 cm / 10 min, preferably 18 cm / 10 min.
  • the water absorption of the cellulose filter paper for example, at 5 minutes 960 ⁇ 1000 (ml / m 2 ), preferably 989ml / m 2.
  • the water absorption is 22.5 to 24.5 ⁇ l in 5 minutes, preferably 23.5 ⁇ l.
  • the shape of the adhesive tape is not particularly limited, but is, for example, a line segment shape.
  • the adhesive tape is not particularly limited, but is, for example, a cellophane tape or a gum tape, and is preferably a cellophane tape.
  • a 3M Japan scotch tape can be used, and for example, No. 811 can be used as a product number.
  • the blood holding disk 300 is attached to the adhesive surface of the adhesive tape 200 at a distance from the inner peripheral surface of the opening 500 of the base material plate 100 so as to be disposed substantially at the center of the opening 500.
  • the adhesive tape 200 is attached to the opening end on one side of the opening 500 of the base material plate 100 so as to have a gap 600 between the adhesive tape 200 and the opening end. Since air can be inserted between the upper surface and the lower surface of the base material plate 100 through the gap portion 600, the gap portion 600 may be referred to as an air gap 600.
  • one adhesive tape 200 is attached to one opening end of the opening 500, and two adhesive tapes 200 are attached to one opening end of the opening 500.
  • Blood holding disk 300 is made of, for example, the same cellulose filter paper as base material plate 100, and holds a dropped blood sample in a dry state.
  • the blood sample to be dropped is not particularly limited, and is, for example, venous blood or peripheral blood.
  • the shape of the blood holding disk 300 is not particularly limited, but is, for example, a circle having a diameter of 4.0 mm to 12 mm, preferably a circle having a diameter of 4.0 mm to 8.0 mm, and more preferably a circle having a diameter of 8.0 mm. .
  • the shape of the blood holding disk 300 is not limited to a circular shape, and may be, for example, an elliptical shape, an oval shape, a pear shape, or the like. It is preferable that the shape of the opening 500 and the shape of the blood holding disk 300 be the same.
  • the shape of the opening 500 may be a circle having a diameter of 10 mm
  • the shape of the blood holding disk 300 may be a circle having a diameter of 8.0 mm
  • the gap 600 may be an arc having a width of 1.0 mm
  • the shape of the opening 500 may be a circle having a diameter of 8.0 mm
  • the shape of the blood holding disk 300 may be a circle having a diameter of 6.0 mm
  • the gap 600 may be an arc having a width of 1.0 mm.
  • the shape of the opening 500 may be a circle having a diameter of 6.0 mm
  • the shape of the blood holding disk 300 may be a circle having a diameter of 4.0 mm
  • the gap 600 may be an arc having a width of 1.0 mm.
  • Blood holding disk 300 has a thickness of, for example, 0.87 mm to 1.07 mm, and preferably 0.97 mm.
  • the distance between the inner peripheral surface of the opening 500 and the outer peripheral surface of the blood holding disk 300 ie, the width of the arc-shaped void portion 600
  • a reinforcing plate made of kraft paper can be attached to the upper surface and lower surface of the base material plate 100 so as to be sandwiched.
  • the reinforcing plate has a kraft opening so as to expose the opening 500 of the base material plate 100.
  • the shape of the craft opening is not limited to a circle, but may be, for example, an ellipse.
  • Drop 1 to 3 drops of the blood sample on the blood holding disk 300 with a dropper, for example.
  • the total drop volume of the blood sample dropped by the dropper is not particularly limited, but is, for example, 25 to 75 ⁇ l.
  • the dropped blood sample is absorbed and held by the blood holding disk 300.
  • the extra blood sample passes through the gap between the outer peripheral surface of the blood holding disk 300 and the inner peripheral surface of the opening 500 of the base material plate 100, and passes through the base material plate 100 around the blood holding disk 300.
  • the blood sample is simply dropped by the dropper onto the blood holding disk 300 with one to three drops, without being affected by the hematocrit value of the blood sample. A certain amount of blood is held on the blood holding disk 300.
  • the base material plate 100 on which the excess blood sample has been absorbed and the blood holding disk 300 on which the blood sample has been dropped are dried at room temperature, for example, and stored and transported in a dry state.
  • the blood holding disk 300 is peeled off from the adhesive tape 200 before use.
  • the dried blood sample storage substrate 910 according to the present embodiment is a round air gap 4-bridge type modified substrate shown in FIG.
  • a reinforcing bridge portion 400 made of cellulose filter paper is attached to the adhesive surface of the adhesive tape 200 so as to connect the blood holding disk 300 and the base material plate 100. Otherwise, it is the same as the first embodiment.
  • the reinforcing bridge portion 400 is attached to the adhesive surface of the adhesive tape 200, the adhesive tape 200 is protected from physical impact.
  • the adhesive tape 200 is not used. That is, the dried blood storage substrate according to the present embodiment is a dried blood sample storage substrate for storing a blood sample in a dry state, and a base material plate provided with a plurality of openings made of cellulose filter paper, A blood holding disk made of cellulose filter paper that holds the dropped blood sample in a dry state, and a plurality of ultra-volume connections made of cellulose filter paper that connect the blood holding disk and the base material plate, The plurality of connecting portions connect the blood holding disk and the base material plate such that the blood holding disk is disposed in the opening at an interval from the inner peripheral surface of the opening.
  • the connection portion is broken, the connection between the blood holding disk and the base material plate is released, and the blood holding disk is easily removed. It can be removed from the base plate.
  • the dried blood sample storage substrate 920 is shown in FIG.
  • the connection part 420 is a filter paper piece made of cellulose filter paper.
  • a paraffin solution in which paraffin is dissolved in an organic solvent adheres to the connection portion 420, and then the organic solvent evaporates to dry, thereby attaching paraffin.
  • Paraffin is a general term for alkanes having 20 or more carbon atoms. Paraffin can be obtained, for example, under the trade names Lunaflex® (from Fuller) and Deawax® (from DEA Mineraloel AG).
  • the organic solvent is not particularly limited, and includes, for example, heptane and hexane.
  • connection portion is a filter paper piece made of cellulose filter paper in which a paraffin solution is attached and an organic solvent is evaporated and dried.
  • a filter paper piece made of cellulose filter paper may be used. Any substance to which paraffin is attached can be used.
  • connection part 420 connects the base material plate 100 made of cellulose filter paper and the blood holding disk 300 made of cellulose filter paper. Blood holding disk 300 is attached to base material plate 100 at connection portion 420 at a distance from base material plate 100. A plurality of openings 500 are provided in the base material plate 100.
  • connection portions 420 are provided. In FIG. 3, the connection portions 420 are provided evenly at 120-degree intervals.
  • the connection part 420 is provided integrally with the blood holding disk 300 and the base material plate 100.
  • the connecting portion 420 is provided as a separate member from the blood holding disk 300 and the base material plate 100, and the base material plate 100 and the connecting portion 420 are bonded to each other with an adhesive, and the connecting portion 420 and the blood holding disk 300 are connected to each other. By bonding with an adhesive, the connecting portion 420 can connect the base material plate 100 made of cellulose filter paper and the blood holding disk 300 made of cellulose filter paper.
  • the dry blood sample storage substrate 911 according to the present embodiment is a square air gap type substrate shown in FIG.
  • the shape of the opening in plan view and the shape of the blood holding disk in plan view are quadrangular such as square and rectangular, respectively.
  • the dried blood sample storage base material 911 includes the base material plate 101, the adhesive tape 201, and the blood holding disk 301.
  • the base material plate 101 is formed of cellulose filter paper, and has one or a plurality of openings 501.
  • the dimensions of the base material plate 101 are not particularly limited, but are, for example, 65 mm to 85 mm in length, 95 mm to 115 mm in width, and 0.87 mm to 1.07 mm in thickness as in the first embodiment, preferably 75 mm in length, and It is 105mm and 0.97mm thick.
  • the shape of the opening 501 is a square having a side of 4.0 mm to 12 mm, preferably a square having a side of 4.0 mm to 8.0 mm, and more preferably a square having a side of 6.0 mm. Note that the shape of the opening is not limited to a square, but may be, for example, a rectangle, a parallelogram, a rhombus, or the like.
  • a filter paper for paper chromatography manufactured by Advantech Co., Ltd. can be used as the cellulose filter paper.
  • One or a plurality of adhesive tapes 201 are attached to the opening end on one side of the opening 501 of the base material plate 101.
  • the shape of the adhesive tape is not particularly limited, but is, for example, a line segment shape.
  • the adhesive tape is not particularly limited, but is, for example, a cellophane tape as in the first embodiment.
  • a blood holding disk 301 is attached to the adhesive surface of the adhesive tape 201 so as to be arranged at a substantially center in the opening 501 at a distance from the inner peripheral surface of the opening 501 of the base material plate 101. Further, the adhesive tape 201 is attached to an opening end on one side of the opening 501 of the base material plate 101 so as to have a gap 601 between the adhesive tape 201 and the opening end. Since air can be inserted between the upper surface and the lower surface of the base material plate 101 through the gap 601, the gap 601 can be referred to as an air gap 601.
  • one adhesive tape 201 is attached to one opening end of the opening 501, and two adhesive tapes 201 are attached to one opening end of the opening 501. The case is described.
  • the blood holding disk 301 is made of, for example, the same cellulose filter paper as the base material plate 101, and holds a dropped blood sample in a dry state.
  • the blood sample to be dropped is not particularly limited, and is, for example, venous blood or peripheral blood.
  • the shape of the blood holding disk 301 is not particularly limited, but is, for example, a square having a side of 2.0 mm to 10 mm, preferably a square having a side of 4.0 mm.
  • the shape of the blood holding disk 301 is not limited to a square, but may be, for example, a rectangle, a parallelogram, a rhombus, or the like.
  • the shape of the opening 501 and the shape of the blood holding disk 301 be the same.
  • the shape of the opening 501 can be a square having a side of 12 mm
  • the shape of the blood holding disk 301 can be a square having a side of 10 mm
  • the gap 601 can be a square having a width of 1.0 mm.
  • the shape of the opening 501 can be a square having a side of 10 mm
  • the shape of the blood holding disk 301 can be a square having a side of 8.0 mm
  • the gap 601 can be a square having a width of 1.0 mm
  • the shape of the opening 501 may be a square having a side of 8.0 mm
  • the shape of the blood holding disk 301 may be a square having a side of 6.0 mm
  • the gap 601 may be a square having a width of 1.0 mm.
  • the shape of the opening 501 can be a square having a side of 6.0 mm
  • the shape of the blood holding disk 301 can be a square having a side of 4.0 mm
  • the gap 601 can be a square having a width of 1.0 mm
  • the shape of the opening 501 can be a square having a side of 4.0 mm
  • the shape of the blood holding disk 301 can be a square having a side of 2.0 mm
  • the gap 601 can be a square having a width of 1.0 mm.
  • the thickness of the blood holding disk 301 is, for example, 0.87 mm to 1.07 mm, and preferably 0.97 mm, as in the first embodiment.
  • the distance between the inner peripheral surface of the opening 501 and the outer peripheral surface of the blood holding disk 301 (that is, the width of the gap 601) can be 0.8 mm to 1.2 mm, preferably 0.9 mm to 1.1 mm. And more preferably 1.0 mm.
  • a reinforcing plate made of kraft paper can be attached and clamped to the base material plate 101 on the upper and lower surfaces thereof.
  • the reinforcing plate has a kraft opening so as to expose the opening 501 of the base material plate 101.
  • the shape of the craft opening is not limited to a square, but may be, for example, a rectangle.
  • the shape of the opening in plan view and the shape of the blood holding disk in plan view are rectangles such as a rectangle, a parallelogram, and a rhombus, respectively.
  • the present invention is not limited to this, and may be, for example, a polygon such as a triangle, a pentagon, and a hexagon.
  • the dry blood sample storage substrate 912 according to the present embodiment is a square air gap 4-bridge type modified substrate shown in FIG.
  • a reinforcing bridge 401 made of cellulose filter paper is attached to the adhesive surface of the adhesive tape 201 so as to connect the blood holding disk 301 and the base material plate 101. Otherwise, it is the same as the fourth embodiment.
  • the reinforcing bridge portion 401 is attached to the adhesive surface of the adhesive tape 201, the adhesive tape 201 is protected from physical impact.
  • Example 1 1-1. Preparation of Preservation Substrate for Preserving Dried Blood Sample
  • a filter paper No.590 for paper chromatography (thickness: 0.97 mm, water absorption rate: 18 cm / 10 minutes, 20 ° C.) manufactured by Advantech Co. was used.
  • a base material plate having a width of 105 mm, a length of 75 mm and a thickness of 0.97 mm was prepared.
  • six circular openings with a diameter of 6 mm were created in a grid pattern, and a circular blood holding disk with a diameter of 4 mm was arranged in the center of the opening (4/6 mm round air gap type base material) .
  • the base material plate In the base material plate, six circular openings with a diameter of 8 mm were formed in a grid pattern, and a circular blood holding disk with a diameter of 6 mm was arranged in the center of the opening (a 6/8 mm round air gap type base). Material).
  • the gap that is, the width of the air gap was 1 mm.
  • Scotch tape No. 811 manufactured by 3M Japan was used as the adhesive tape.
  • the width of the adhesive tape was 1 mm.
  • the adhesive tape was affixed to one opening end of the opening of the base material plate so as to have a gap between the adhesive tape and the opening end.
  • the blood holding disk was disposed at the center of the opening on the adhesive surface of the adhesive tape at a distance from the inner peripheral surface of the opening.
  • the discarded blood transferred from the laboratory was anonymized and used. Blood was collected using a 2K-EDTA blood collection tube, and blood was collected for 2 to 3 days. Mix 10-20 blood, 12,000 The mixture was centrifuged at 4 ° C for 5 minutes to separate serum and blood cells, and hematocrit blood of 30%, 40%, 50%, and 60% was prepared by a gravimetric method. The blood density was determined by placing 5 ml of each blood in a stoppered vial, aspirating with a 100 ⁇ l Gilson pipette, and weighing the reduced amount. The pipette volume was corrected with pure water (water density 0.99704 g / cm 3 , 25 ° C.). The volume correction value of the pipette was 0.100772 mL.
  • Table 2 shows the blood densities of hematocrit, 30%, 40%, 50%, and 60%.
  • FIG. 6 shows (A) a photograph before blood dropping, (B) a photograph after blood dropping, and (C) a photograph of a detached disk.
  • Example 2 shows an application example of the air gap type base material to a second generation antipsychotic drug.
  • Coulochem II (ESA) was used, equipped with a Model 5011 analysis cell and a Model 5020 guard cell. Table 5 shows the separation conditions for each drug and the load voltage of Coulochem.
  • FIG. 8 shows the chromatography of clozapine and metabolites.
  • Example 3 In Example 3, the reinforcing bridge portion made of cellulose filter paper connects the blood holding disk and the base material plate to each other, and the dried blood sample storage base material (also referred to as an air gap bridge type modified base material).
  • the air gap bridge type modified base material is, for example, a round air gap four bridge type modified base material or a square air gap four bridge type modified base material.
  • the base material plate On the base material plate, six circular openings having a diameter of 6 mm were formed in a grid pattern, and a circular blood holding disk having a diameter of 4 mm was arranged at the center of the opening (4/6 mm air gap type base material). In addition, six 8mm-diameter circular openings were formed in a grid on the base material plate, and a 6mm-diameter circular blood holding disk was placed at the center of the opening (6 / 8mm air gap type base material). . In addition, the base material plate was formed with six circular openings of 10 mm in diameter in a lattice pattern, and a circular blood holding disk of 8 mm in diameter was arranged at the center of the opening (8/10 mm air gap type base material). .
  • the gap that is, the width of the air gap was 1 mm.
  • Scotch tape No. 811 manufactured by 3M Japan was used as the adhesive tape in the same manner as in Example 1.
  • the width of the adhesive tape was 1 mm.
  • the adhesive tape was affixed to one opening end of the opening of the base material plate so as to have a gap between the adhesive tape and the opening end.
  • the blood holding disk was disposed at the center of the opening on the adhesive surface of the adhesive tape at a distance from the inner peripheral surface of the opening.
  • the reinforcing bridge portion made of cellulose filter paper paper chromatography filter paper No. 590 manufactured by Advantech Co.
  • FIG. 15 is a photograph of a round air gap 4 bridge type modified base material (Air gap-4 bridge), which shows 8/10 mm, 6/8 mm, and 4/6 mm from the left side.
  • FIG. 16 shows the effect of the hematocrit value on the blood holding volume of the round air gap four-bridge modified substrate.
  • FIG. 17 shows the effect of hematocrit on clozapine and metabolite blood levels measured using a 4/6 mm air gap 4 bridge modified substrate.
  • FIG. 18 shows the effect of hematocrit on clozapine and metabolite blood levels measured using a 6/8 mm air gap 4 bridge modified substrate.
  • FIG. 19 shows the effect of hematocrit on clozapine and metabolite blood levels measured using an 8/10 mm air gap 4 bridge modified substrate. From these results, for CLZ and CNO, the effect of hematocrit (HCT) was not observed on any of the substrates used.
  • HCT hematocrit
  • Example 4 4-1 Preparation of Preserved Substrate for Preserving Dried Blood Sample
  • a cellulose filter paper a filter paper No.590 for paper chromatography (thickness: 0.97 mm, water absorption rate: 18 cm / 10 minutes, 20 ° C.) manufactured by Advantech Co., Ltd. was used. .
  • a base material plate having a width of 105 mm, a length of 75 mm and a thickness of 0.97 mm was prepared.
  • a square opening having a side of 4 mm was formed in a lattice shape, and a square blood holding disk having a side of 2 mm was arranged in the center of the opening (a 2/4 mm square air gap type base material).
  • a square opening having a side of 6 mm was formed in a lattice shape, and a square blood holding disk having a side of 4 mm was arranged in the center of the opening (4/6 mm square air gap type base material).
  • a square opening having a side of 8 mm was formed in a lattice shape, and a square blood holding disk having a side of 6 mm was arranged in the center of the opening (a 6/8 mm square air gap type base material).
  • a square opening with a side of 10 mm was formed in a lattice shape, and a blood holding disk of a square with a side of 8 mm was arranged in the center of the opening (8/10 mm square air gap type base material).
  • a square opening having a side of 12 mm was formed in a lattice shape, and a square blood holding disk having a side of 10 mm was arranged at the center of the opening (a 10/12 mm square air gap type base material).
  • the gap that is, the width of the air gap was 1 mm.
  • Scotch tape No. 811 manufactured by 3M Japan was used as the adhesive tape.
  • the width of the adhesive tape was 1 mm.
  • the adhesive tape was affixed to one opening end of the opening of the base material plate so as to have a gap between the adhesive tape and the opening end.
  • the blood holding disk was disposed at the center of the opening on the adhesive surface of the adhesive tape at a distance from the inner peripheral surface of the opening.
  • base material 4-2-1.Weight of base material The weight of a square blood holding disk with sides of 2 mm, 4 mm, 6 mm, 8 mm, and 10 mm is weighed using the BD210 microbalance or Type 4431 ultra-microbalance ( (Saritrius). Table 9 shows the measurement results. The unit is mg. As shown in Table 9 below, the relative standard deviation (% RSD) indicating the variation of the products was about 5%, and the quality was uniform.
  • FIG. 20 is a photograph of a square air gap type base material having a 4/6 mm square air gap type base material and a 6/8 mm square air gap type base material on one base material plate.
  • FIG. 20 shows (A) a photograph before the blood dripping, (B) a photograph after the blood dripping, and (C) a photograph of the detached disk.
  • Table 11 shows the effect of the hematocrit value on the blood holding volume of the 2/4 mm square air gap type base material.
  • Table 12 shows the effect of the hematocrit value on the blood retention volume of the 4/6 mm square air gap type substrate.
  • Table 13 shows the effect of the hematocrit value on the blood holding volume of the 6/8 mm square air gap type base material.
  • Table 14 shows the effect of the hematocrit value on the blood holding volume of the 8/10 mm square air gap type base material.
  • FIG. 21 shows the hemato-vs. Of the blood holding volume in each of the 2/4 mm square air gap type base material, 4/6 mm square air gap type base material, 6/8 mm square air gap type base material, and 8/10 mm square air gap type base material. It is a figure showing the influence of a click. It is the most important condition of the substrate that the blood volume retained in the substrate is not affected by hematocrit. As shown in FIG. 21, no significant effect of hematocrit on blood retention volume was observed.
  • Example 5 Preparation of Preservation Substrate for Dried Blood Sample
  • a filter paper No.590 for paper chromatography thickness: 0.97 mm, water absorption rate: 18 cm / 10 min, manufactured by Advantech Co.
  • a base material plate having a width of 105 mm, a length of 75 mm and a thickness of 0.97 mm was prepared using this cellulose filter paper.
  • connection part On the base material plate, six circular openings having a diameter of 6 mm were formed in a grid pattern, and a circular blood holding disk having a diameter of 4 mm was arranged at the center of the opening (4/6 mm air gap type base material).
  • the gap that is, the width of the air gap was 1 mm.
  • Three connecting portions for connecting the base material plate and the blood holding disk were provided at equal intervals at 120 degrees.
  • the shape of the connection part was a rectangular parallelepiped, the length in plan view was 1 mm, and the width in plan view was 0.3 mm.
  • connection portion was provided integrally with the blood holding disk and the base material plate.
  • the dried blood sample storage base material according to the present example corresponds to the arc-shaped protrusion by pressing, for example, arc-shaped protrusions evenly arranged at 120 ° intervals on a cellulol filter paper having a rectangular shape in a plan view.
  • the portions to be cut are each punched out from a cellulosic filter paper having a rectangular shape in a plan view, whereby the blood holding disk is separated from the base material plate and adhered to the base material plate by the connection portion.
  • paraffin Lunaflex registered trademark
  • n-Heptane heptane
  • ⁇ Can be used to store and transport dried blood samples.

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Abstract

ヘマトクリック値に影響を受けずに血液試料を適切に保存でき、しかも簡易な構造で熟練度や労力を要しない乾燥血液試料保存基材を提供する。セルロース濾紙製の母材板１００と、粘着テープ２００と、滴下された血液試料を乾燥状態で保持するセルロース濾紙製の血液保持ディスク３００と、を有する。血液保持ディスク３００は母材板１００と離隔されて粘着テープ２００により母材板１００に貼り付けられる。母材板１００には、複数の開口部５００が設けられ、粘着テープ２００は母材板１００の開口部５００の一方側の開口端に、粘着テープと前記開口端との間に空隙部(エアギャプ)６００を有するように貼り付けられる。

Description

乾燥血液試料保存基材
　本発明は、血液試料を乾燥状態で保存する乾燥血液試料保存基材に関する。
　乾燥血液試料保存基材は紙製カード状の基材であり、検体から採取した血液が滴下され、室温で2～3時間放置されて乾燥後、パンチで血液スポットがくり抜かれ、くり抜いたディスクがチューブ等に取りこまれて血液検査に使用される（非特許文献１）。
　乾燥血液試料保存基材を使用した血液検査では、採血量が比較的低量であり、また全血から薬物を抽出することにより、血しょう分離のための遠心分離が不要である等の利点がある。更には室温保存により、ドライアイスや冷凍庫が不要となり、また遠隔施設から容易に輸送できるという利点もある。
　乾燥血液試料保存基材には、滴下された血液スポットの中心部をパンチでくり抜く部分パンチ分析法がある（非特許文献２）。しかしながらこの手法では血液のヘマトクリット値により、パンチでくり抜いた部分の血液成分が変動する虞がある。
　また、定量の血液試料をスポットして、滴下された血液スポットの全体をパンチでくり抜くパンチ分析法がある（非特許文献２）。更には予めカットしたディスクに定量の血液試料をスポットするプリカット分析法がある（非特許文献３）。しかしながらこれらの手法では、定量の血液試料をマイクロピペット等により滴下する必要があり、熟練度や労力を有する。
　また、濾紙小片に血液を吸収後に乾燥させて採取する定量吸収ミクロサンプル法がある（非特許文献４）。この手法はヘマトクリック値に影響を受けず、しかも血液に濾紙小片を浸すだけで一定量の血液試料が得られる。しかしながらこの手法は器具が複雑である。
A.J. Wilhelm, J.C.G. den Burger, E.L. Swart, Therapeutic drug monitoring by dried blood spot: progress to date and future directions, Clin. Pharmacokinet. 53 (2014) 961-973. P.M. De Kesel, S. Capiau, W.E. Lambert, C.P. Stove, Current strategies for coping with the hematocrit problem in dried blood spot analysis, Bioanalysis. 6 (2014) 1871-1874. N. Youhnovski, A.Bergeron, M.Furtado, F.Garofolo, Pre-cut dried blood spot (PCDBS): an alternative to dried blood spot (DBS) technique to overcome hematocrit impact, Rapid Commun Mass Spectrom. 25 (2011) 2951-2958. Spooner N, Denniff P, Michielsen L, De Vries R, Ji QC, Arnold ME, Woods K, Woolf EJ, Xu Y, Boutet V, Zane P, Kushon S, Rudge JB. A device for dried blood microsampling in quantitative bioanalysis: overcoming the issues associated blood hematocrit. Bioanalysis. 7 (2015) 653-659.
　本発明はかかる問題点に鑑みてなされたものであって、ヘマトクリット値に影響を受けずに血液試料を適切に保存でき、しかも簡易な構造で熟練度や労力を要しない乾燥血液試料保存基材を提供することを目的とする。
　本発明にかかる乾燥血液試料保存基材は、血液試料を乾燥状態で保存する乾燥血液試料保存基材であって、セルロース濾紙製の母材板と、滴下された血液試料を乾燥状態で保持するセルロース濾紙製の血液保持ディスクと、前記母材板と前記血液保持ディスクとを接続する接続部と、を有し、前記血液保持ディスクは前記母材板と離隔されて前記接続部により前記母材板に貼り付けられ、前記母材板には、複数の開口部が設けられ、前記血液保持ディスクは、前記粘着テープの粘着面に、前記開口部の内周面から間隔をあけて前記開口部内に配置されている、ことを特徴とする。乾燥血液試料保存基材はエアギャプ型基材と表記されることもある。エアギャプ型基材は、血液保持ディスクの形状により、丸形エアギャプ型基材若しくは角形エアギャプ型基材等と表記される。
　本発明によれば、ヘマトクリック値に影響を受けずに血液試料を適切に保存でき、しかも血液試料を保存する際に熟練度や労力を要しない。
第１実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材の概略図である。 第２実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材の概略図である。 第３実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材の概略図である。 第４実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材の概略図である。 第５実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材の概略図である。 実施例１にかかる血液試料保存基材の写真図であり、(A)血液滴下前の写真図、(B)血液滴下後の写真図、(C)脱着したディスクの写真図である。 丸形エアギャプ型基材の血液保持に対するヘマトクリットの影響を示す図である。 クロザピン(CLZ), ノルクロザピン(DMC)、クロザピンN-オキシド(CLZ-NO) 及び内部標準 (IS) のクロマトグラムを示す図である。 クロザピン（CLZ）及びその代謝物、ノルクロザピン（DMC）、クロザピンN-オキシド（CMO）の検量線を示す図である。 4/6 mm丸形エアギャプ型基材を用いて測定したクロザピン(CLZ) とその代謝物ノルクロザピン(DMC)及びクロザピンN-オキシド(CNO)血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す図である。 6/8 mm丸形エアギャプ型基材を用いて測定したクロザピン(CLZ) とその代謝物ノルクロザピン(DMC)及びクロザピンN-オキシド(CNO)血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す図である。 オランザピンの血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す図である。 リスペリドンの血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す図である。 アリピプラゾールの血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す図である。 エアギャプ４ブリッジ型改変基材（Air gap-4 bridge）の写真図であり左側より8/10mm、6/8mm、4/6mmを示す。 丸型エアギャプ４ブリッジ型基材の血液保持体積に対するヘマトクリット値の影響を示す。 4/6 mm丸型エアギャプ4ブリッジ型基材を用いて測定したクロザピン及び代謝物血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す。 6/8 mm丸型エアギャプ4ブリッジ型基材を用いて測定したクロザピン及び代謝物血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す。 8/10 mm丸型エアギャプ4ブリッジ型基材を用いて測定したクロザピン及び代謝物血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す。 実施例４にかかる血液試料保存基材の写真図であり、(A)血液滴下前の写真図、(B)血液滴下後の写真図、(C)脱着したディスクの写真図である。 角形エアギャプ型基材を用いて測定した血液保持体積に対するヘマトクリットの影響を示す図である。 実施例５にかかる血液試料保存基材の写真図であり、左側は血液滴下前の写真図、右側は血液滴下後の写真図である。 カフェイン及びその代謝物の血中濃度の分析結果を示す図である。
　以下、添付の図面を参照して本発明の実施形態について具体的に説明するが、当該実施形態は本発明の原理の理解を容易にするためのものであり、本発明の範囲は、下記の実施形態に限られるものではなく、当業者が以下の実施形態の構成を適宜置換した他の実施形態も、本発明の範囲に含まれる。
　(1)第１実施形態
　本実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９００は図１に示される丸形エアギャプ型基材である。
　乾燥血液試料保存基材９００は、母材板１００と、粘着テープ２００と、血液保持ディスク３００と、を有する。
　母材板１００はセルロース濾紙で形成されており、１つ又は複数の開口部５００が設けられている。母材板１００の寸法は特に限定されるものではないが、例えば縦65mm～85mm、横95mm～115mm、厚さ0.87mm～1.07mmであり、好ましくは縦75mm、横105mm、厚さ0.97mmである。開口部５００の形状は特に限定されるものではなく、例えば直径6.0mm～14mmの円形であり、好ましくは直径10mmの円形である。なお、開口部の形状は円形に限定されるものではなく、例えば、楕円形、卵形、洋梨形等とすることも可能である。
　セルロース濾紙は厚さが厚く、濾過速度の速い濾紙を使用することが好ましい。セルロース濾紙は、α-セルロース99％以上のセルロース繊維を原料とすることが好ましい。セルロース濾紙は、例えば、アドバンテック社のペーパークロマトグラフィー用濾紙を採用することができ、例えば質量285g/m3、濾水時間20秒（JIS P 3801により、ヘルツベルヒ濾過速度試験器を使用し、10cm2の濾紙面において、20℃、100mLの蒸留水を0.98Paの圧力にて濾過する時間である。）、灰分0.1％、湿潤破裂強さ10kPaの濾紙を使用できる。
　また、セルロース濾紙の吸水度は、20℃で例えば17cm/10分～19cm/10分であるが、好ましくは18cm/10分である。セルロース濾紙の吸水量は、例えば５分で960～1000(ml/m2)であり、好ましくは989ml/m2である。直径5.5mmの円形の血液保持ディスク３００の場合、吸水量は５分で22.5～24.5μlであり、好ましくは23.5μlである。
　母材板１００の開口部５００の一方側の開口端には１つ又は複数の粘着テープ２００が貼り付けられている。粘着テープの形状は特に限定されるものではないが、例えば線分形状である。粘着テープは特に限定されるものではないが、例えばセロハンテープ、ガムテープ等であり、好ましくはセロハンテープである。粘着テープは、例えば3Mジャパン社のスコッチテープを使用することができ、品番としては例えばNo.811を使用できる。
　粘着テープ２００の粘着面には、母材板１００の開口部５００の内周面から間隔をあけて開口部５００内の略中央に配置されるように血液保持ディスク３００が貼り付けられている。また粘着テープ２００は、粘着テープ２００と開口端との間に空隙部６００を有するように、母材板１００の開口部５００の一方側の開口端に貼り付けられている。空隙部６００を通して母材板１００の上面と下面とで空気が挿通可能であるため、空隙部６００はエアギャプ６００と称することも可能である。図１においては、１つの粘着テープ２００が開口部５００の一方側の開口端に貼り付けられている場合と、２つの粘着テープ２００が開口部５００の一方側の開口端に貼り付けられている場合とが記載されている。血液保持ディスク３００は、例えば母材板１００と同様のセルロース濾紙製であり、滴下された血液試料を乾燥状態で保持する。滴下される血液試料は特に限定されるものではなく、例えば静脈血や抹消血である。
　血液保持ディスク３００の形状は特に限定されるものではないが、例えば直径4.0mm～12mmの円形であり、好ましくは直径4.0mm～8.0mmの円形であり、より好ましくは直径8.0mmの円形である。なお、血液保持ディスク３００の形状は円形に限定されるものではなく、例えば楕円形、卵形、洋梨形等とすることも可能である。開口部５００の形状と血液保持ディスク３００の形状とは同一の形状とすることが好ましい。例えば開口部５００の形状が直径10mmの円形で、血液保持ディスク３００の形状が直径8.0mmの円形で、空隙部６００は幅1.0mmの円弧形状とすることが可能である。例えば開口部５００の形状が直径8.0mmの円形で、血液保持ディスク３００の形状が直径6.0mmの円形で、空隙部６００は幅1.0mmの円弧形状とすることが可能である。例えば開口部５００の形状が直径6.0mmの円形で、血液保持ディスク３００の形状が直径4.0mmの円形で、空隙部６００は幅1.0mmの円弧形状とすることが可能である。血液保持ディスク３００の厚さは例えば0.87mm～1.07mmであり、好ましくは0.97mmである。開口部５００の内周面と血液保持ディスク３００の外周面との間の距離(即ち、円弧形状の空隙部６００の幅)は0.8mm～1.2mmであることが可能であり、好ましくは0.9mm～1.1mmであり、更に好ましくは1.0mmである。
　なお、母材板１００には、その上面及び下面にクラフト紙からなる補強板が貼り付けられて挟持されることが可能である。補強板は母材板１００の開口部５００を露出するようにクラフト開口部を有する。なお、クラフト開口部の形状は円形に限定されるものではなく、例えば楕円形等とすることも可能である。
　次に本実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９００の使用形態を説明する。
　血液試料をスポイトで血液保持ディスク３００上に例えば１乃至３ドロップを滴下する。スポイトで滴下する血液試料の合計のドロップ体積は、特に限定されるものではないが例えば25～75μlである。滴下された血液試料は血液保持ディスク３００に吸収されて保持される。この時、余分の血液試料は、血液保持ディスク３００の外周面と母材板１００の開口部５００の内周面との間の間隙を通り超えて、血液保持ディスク３００の周りの母材板１００に吸収される。また、血液保持ディスク３００の外周面と母材板１００の開口部５００の内周面との間の間隙があるから、仮に血液試料が低ヘマトクリック値であっても過剰に血液保持ディスク３００の周りの母材板１００に吸収されにくい。
　このように本実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９００では、血液試料をスポイトで血液保持ディスク３００上に１乃至３ドロップを滴下するだけで、血液試料のヘマトクリック値に影響されること無く、一定量の血液が血液保持ディスク３００に保持される。
　余分の血液試料が吸収された母材板１００と血液試料がドロップされた血液保持ディスク３００は、例えば室温にて乾燥されて、乾燥状態で保存、輸送される。血液試料の分析時には、血液保持ディスク３００を粘着テープ２００から剥がして使用される。
　(2)第２実施形態
　本実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９１０は図２に示される丸形エアギャプ４ブリッジ型改変基材である。本実施形態においては、セルロース濾紙製の補強ブリッジ部４００が、血液保持ディスク３００と母材板１００とを連絡するように、粘着テープ２００の粘着面に貼り付けられている。それ以外については第１実施形態と同様である。第２実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９１０では、補強ブリッジ部４００が粘着テープ２００の粘着面に貼り付けられているため、粘着テープ２００が物理的衝撃から保護される。
　(3)第３実施形態
　本実施形態においては、第１実施形態及び第２実施形態と異なり、粘着テープ２００を使用しない。即ち、本実施形態にかかる乾燥血液保存基材は、血液試料を乾燥状態で保存する乾燥血液試料保存基材であって、セルロース濾紙製の複数の開口部が設けられている母材板と、滴下された血液試料を乾燥状態で保持するセルロース濾紙製の血液保持ディスクと、前記血液保持ディスクと前記母材板とを接続するセルロース濾紙製の極小体積の複数の接続部と、を有し、前記複数の接続部は、血液保持ディスクを前記開口部の内周面から間隔をあけて前記開口部内に配置されるように、前記血液保持ディスクと前記母材板とを接続している。本実施形態によれば、血液が保持された血液保持ディスクを例えば指等により押すことにより、接続部が破壊されて血液保持ディスクと母材板との接続が解除されて簡単に血液保持ディスクを母材板から取り外すことができる。
　更に具体的には本実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９２０は図３に示される。
　接続部４２０はセルロール濾紙製の濾紙片である。接続部４２０には、パラフィンが有機溶媒に溶解したパラフィン溶液が付着し、その後にその有機溶媒が蒸発乾燥することでパラフィンが付着している。パラフィンは、炭素原子の数が20以上のアルカンの総称である。パラフィンは、例えばLunaflex(登録商標)(Fuller製)およびDeawax(登録商標)(DEA Mineraloel AG製)という商標名で入手することができる。有機溶媒は特に限定されるものではなく例えばヘプタン、ヘキサン等が挙げられる。なお本実施形態では、接続部はパラフィン溶液が付着し有機溶媒が蒸発乾燥したセルロール濾紙製の濾紙片であるが、このような実施形態に限定されるものではなく、セルロール濾紙製の濾紙片にパラフィンが付着しているものであれば用いることが可能である。
　接続部４２０は、セルロース濾紙製の母材板１００とセルロース濾紙製の血液保持ディスク３００とを接続する。血液保持ディスク３００は母材板１００と離隔されて接続部４２０により母材板１００に貼り付けられている。母材板１００には、複数の開口部５００が設けられている。
　血液保持ディスク３００は、開口部５００の内周面から間隔をあけて開口部５００内に配置されている。そのため血液保持ディスク３００と母材板１００の開口部５００の内周面との間には空隙部が存在する。接続部４２０は一つ又は複数設けられる。図３において接続部４２０は１２０度間隔で均等に設けられている。接続部４２０は、血液保持ディスク３００及び母材板１００と一体的に設けられる。なお、接続部４２０は、血液保持ディスク３００及び母材板１００と別部材にて設け、母材板１００と接続部４２０とを接着剤にて接着し、接続部４２０と血液保持ディスク３００とを接着剤にて接着することで、接続部４２０がセルロース濾紙製の母材板１００とセルロース濾紙製の血液保持ディスク３００とを接続することも可能である。
　(4)第４実施形態
　本実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９１１は図４に示される角形エアギャプ型基材である。本実施形態では開口部の平面視における形状及び血液保持ディスクの平面視における形状は、それぞれ、正方形や長方形等の四角形である。
　乾燥血液試料保存基材９１１は、母材板１０１と、粘着テープ２０１と、血液保持ディスク３０１と、を有する。
　母材板１０１はセルロース濾紙で形成されており、１つ又は複数の開口部５０１が設けられている。母材板１０１の寸法は特に限定されるものではないが、第１実施形態と同様に例えば縦65mm～85mm、横95mm～115mm、厚さ0.87mm～1.07mmであり、好ましくは縦75mm、横105mm、厚さ0.97mmである。開口部５０１の形状は本実施形態では一辺が4.0mm～12mmの正方形であり、好ましくは一辺が4.0mm～8.0mmの正方形であり、より好ましくは一辺が6.0mmの正方形である。なお、開口部の形状は正方形に限定されるものではなく、例えば、長方形、平行四辺形、菱形等とすることも可能である。
　セルロース濾紙は第１実施形態と同様にアドバンテック社のペーパークロマトグラフィー用濾紙を採用することができる。
　母材板１０１の開口部５０１の一方側の開口端には１つ又は複数の粘着テープ２０１が貼り付けられている。粘着テープの形状は特に限定されるものではないが、例えば線分形状である。粘着テープは特に限定されるものではないが、第１実施形態と同様に例えばセロハンテープである。
　粘着テープ２０１の粘着面には、母材板１０１の開口部５０１の内周面から間隔をあけて開口部５０１内の略中央に配置されるように血液保持ディスク３０１が貼り付けられている。また粘着テープ２０１は、粘着テープ２０１と開口端との間に空隙部６０１を有するように、母材板１０１の開口部５０１の一方側の開口端に貼り付けられている。空隙部６０１を通して母材板１０１の上面と下面とで空気が挿通可能であるため、空隙部６０１はエアギャプ６０１と称することも可能である。図４においては、１つの粘着テープ２０１が開口部５０１の一方側の開口端に貼り付けられている場合と、２つの粘着テープ２０１が開口部５０１の一方側の開口端に貼り付けられている場合とが記載されている。血液保持ディスク３０１は、例えば母材板１０１と同様のセルロース濾紙製であり、滴下された血液試料を乾燥状態で保持する。滴下される血液試料は特に限定されるものではなく、例えば静脈血や抹消血である。
　血液保持ディスク３０１の形状は特に限定されるものではないが、例えば一辺が2.0mm～10mmの正方形であり、好ましくは一辺が4.0mmの正方形である。なお、血液保持ディスク３０１の形状は正方形に限定されるものではなく、例えば長方形、平行四辺形、菱形等とすることも可能である。開口部５０１の形状と血液保持ディスク３０１の形状とは同一の形状とすることが好ましい。例えば開口部５０１の形状が一辺12mmの正方形で、血液保持ディスク３０１の形状が一辺10mmの正方形で、空隙部６０１は幅1.0mmの正方形とすることが可能である。例えば開口部５０１の形状が一辺10mmの正方形で、血液保持ディスク３０１の形状が一辺8.0mmの正方形で、空隙部６０１は幅1.0mmの正方形とすることが可能である。例えば開口部５０１の形状が一辺8.0mmの正方形で、血液保持ディスク３０１の形状が一辺6.0mmの正方形で、空隙部６０１は幅1.0mmの正方形とすることが可能である。例えば開口部５０１の形状が一辺6.0mmの正方形で、血液保持ディスク３０１の形状が一辺4.0mmの正方形で、空隙部６０１は幅1.0mmの正方形とすることが可能である。例えば開口部５０１の形状が一辺4.0mmの正方形で、血液保持ディスク３０１の形状が一辺2.0mmの正方形で、空隙部６０１は幅1.0mmの正方形とすることが可能である。血液保持ディスク３０１の厚さは第１実施形態と同様に例えば0.87mm～1.07mmであり、好ましくは0.97mmである。開口部５０１の内周面と血液保持ディスク３０１の外周面との間の距離(即ち、空隙部６０１の幅)は0.8mm～1.2mmであることが可能であり、好ましくは0.9mm～1.1mmであり、更に好ましくは1.0mmである。
　なお、母材板１０１には、その上面及び下面にクラフト紙からなる補強板が貼り付けられて挟持されることが可能である。補強板は母材板１０１の開口部５０１を露出するようにクラフト開口部を有する。なお、クラフト開口部の形状は正方形に限定されるものではなく、例えば長方形等とすることも可能である。
　なお、第４実施形態においては開口部の平面視における形状及び血液保持ディスクの平面視における形状は、それぞれ、長方形、平行四辺形、菱形等の四角形であるが、本発明はこのような実施形態に限定されるものではなく、例えば三角形、五角形、六角形等の多角形とすることも可能である。
　(5)第５実施形態
　本実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９１２は図５に示される角形エアギャプ４ブリッジ型改変基材である。本実施形態においては、セルロース濾紙製の補強ブリッジ部４０１が、血液保持ディスク３０１と母材板１０１とを連絡するように、粘着テープ２０１の粘着面に貼り付けられている。それ以外については第４実施形態と同様である。第５実施形態にかかる乾燥血液試料保存基材９１２では、補強ブリッジ部４０１が粘着テープ２０１の粘着面に貼り付けられているため、粘着テープ２０１が物理的衝撃から保護される。
　1.実施例１
　1-1.乾燥血液試料保存基材の作成
　セルロース濾紙として、アドバンテック社製のペーパークロマトグラフィー用濾紙No.590（厚さ：0.97 mm、吸水速度：18 cm/10分、20℃）を使用した。このセルロース濾紙を使用して、横105mm縦75mm厚さ0.97mmの母材板を作成した。母材板には直径6mmの円形の開口部を格子状に6個作成し、更には直径4mmの円形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(4/6mm丸形エアギャプ型基材)。また、母材板には直径8mmの円形の開口部を格子状に6個作成し、更には直径6mmの円形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(6/8mm丸形エアギャプ型基材)。空隙部即ちエアギャプの幅は1mmであった。粘着テープとして、3Mジャパン社製のスコッチテープNo.811を使用した。粘着テープの幅は1mmとした。粘着テープは母材板の開口部の一方側の開口端に、粘着テープと開口端との間に空隙部を有するように貼り付けられた。血液保持ディスクは、粘着テープの粘着面に、開口部の内周面から間隔をあけて開口部内の中央に配置された。
　1-2.基材の品質と性能
　1-2-1.基材の重量
　直径4 mmと6 mm のディスクの重量をBD210 微量天秤あるいは Type 4431 超ミクロ天秤 (ザリトリウス)で秤量し、測定結果を表１に示す。ディスクの重量は、4 mm : 3.44 ± 0.23 mg、6 mm: 7.87 ± 0.47 mg (平均±標準偏差、n = 15) で、製品のバラツキを示す相対標準偏差（%RSD）は５％に近く、品質は均一である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　1-2-2.血液密度
　検査室から譲渡された廃棄血液を匿名化して用いた。採血は2K-EDTA採血管を用い、採血２?３日の血液を使用した。10-20本の血液を混合し、12,000
rpm, 4℃、５分間遠心分離し、血清と血球に分離、重量法で30％、40％、50％、60％のヘマトクリット血液を調整した。血液の密度は、各血液5mlを栓つきバイアルに入れ、100μlのギルソンピペットで吸引し、減少量を秤量した。ピペット体積は純水（水の密度0.99704 g/cm3 , 25℃）で補正した。ピペットの体積補正値は0.100772 mLであった。
　ヘマトクリット、30％、40％、50％、60％の血液密度を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　1-2-3.基材に保持される血液の体積
　4/6mm丸形エアギャプ型基材、6/8mm丸形エアギャプ型基材の各基材に血液をスポットした。1mlのディスポーザブルスポイドを用い、4/6 mmには１-2滴、6/8 mmには２-3滴をスポットした。この操作で、基材の周辺まで血液は広がる。スポットしてから5分後にディスクを脱着、その重量を測定して、保持される血液の体積（血液含有量）を下記の計算式から算出した（表３、４）。計算式は、血液保持体積（μl） ＝（総重量(mg) ? 空重量（mg））/ 血液密度（g/mL）であった。なお、図６に、(A)血液滴下前の写真図、(B)血液滴下後の写真図、(C)脱着したディスクの写真図を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　これらの結果から、エアギャプ型基材の血液含有量の相対標準偏差は５％前後であり、さらに、ヘマトクリットによる変動幅も１個の値を除けば５％以内である。従って、これらの基材を用いスポイドで血液を滴下するだけで、ヘマトクリット値の影響を受けずに一定容量の血液を採取できることが証明された。図７に結果を示す。
　2.実施例２
　実施例２ではエアギャプ型基材の第二世代抗精神病薬への応用例を示す。
　2-1.抗精神病薬の血中濃度モニタリング(Therapeutic Drug Monitoring：TDM)
　抗精神病薬の血中濃度と臨床効果との間には一貫した相関関係が認められ、血中濃度モニタリングの有効性が示唆されている。さらに、AGNP ガイドラインは、薬剤の狭い治療域と重大な副作用によってTDMを強力に推奨している。従って、エアギャプ型基材の有効性を確認するために、第二世代の抗精神病薬、クロザピン（clozapine）、オランザピン (olanzapine)、リスペリドン (risperidone) 及びアリピプラゾール (aripiprazole) の血中濃度を測定した。治療抵抗性統合失調症に使用されるクロザピンについては、本基材の使用によって静脈血の採血が回避できる等、患者のストレスや不安を解消できるメリットが推定され、代謝産物をも含めて詳細に検討した。さらに、対象とした抗精神病薬は薬剤治療の大部分を占めており、入院患者のみならず、外来患者、在宅患者の自己採血にも利用できると推定される。
　2-2.乾燥血液スポットの作製と薬剤の抽出
　ヘマトクリット、30%、 40%、 50%、 60% の血液に最終濃度が250-2,000 ng/mLになるように各薬剤をスパイクした。基材にスポイドで2-3滴の血液を滴下して、４時間あるいは一晩室温で乾燥した。 
　乾燥血液ディスクはピンセットで2mlエッペンドルフチューブに入れる。このチューブに0.1M炭酸ナトリウム (pH11.7) 水溶液500μlを加え、ボルテックスで撹拌する。このチューブに1000 ng/ml の内部標準液20μlを加え、ボルテックスで撹拌、5分間（クロザピン、オランザピン）あるいは１５分間（リスペリドン、アリピプラゾール ）超音波処理をする。このエッペンドルフチューブに酢酸エチル800μlを加え、60秒間ボルテックスで撹拌、遠心分離後(12,000 回転/分、5分間、4 ℃)、上清400μl を取りサンプルチューブに入れる。窒素気流（40℃、20 分間）で溶媒を完全に蒸発する。このチューブに移動相溶液60μlを加えてボルテックスで撹拌し、オートサンプラーで20μlを高速液体クロマトグラフィー（HPLC）に注入測定する。
　2-3.HPLC-Coulochem IIによる血中薬剤の分析
　HPLCの分離カラムにはC18逆相カラム、 Eicompak ODS-C18,５μm,150 x 4.5mm,ガードセル(ODS  C-18) (（株）エイコム)、あるいはGemini C18、 00F-4435-E0、150x4.5mm、ガードカートリッジC18、AJO-4287、4.0mm x 3.0mmID、ホルダーアッセンブリーキットKJO- 4282、カラム内径、2.0mm-8.0mmID((株)島津ジーエルシー)を用いた。移動相には、メタノールと50 mM リン酸緩衝溶液 (pH 2.1)の混合溶液を用いた。薬剤定量にはCoulochem II (ESA)を用い、Model 5011 分析セル及びModel 5020 ガードセルを装着した。各薬剤に対する分離条件とクーロケムの負荷電圧は表５に示す。クロザピンと代謝物のクロマトグラフィを図８に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　2-4.クロザピンと代謝物の検量線
　クロザピン（CLZ）及びその代謝物、ノルクロザピン（DMC）、クロザピンN-オキシド（CMO）を血液にスパイクした後、エアギャプ型基材に滴下、乾燥し、それらの濃度を３日後に測定した。検量線を図９に示す。4/6 mm 及び6/8 mmエアギャプ型基材には、薬剤とそのシグナルの間に極めて良好な相関関係(R>0.99)が認められ、各基材が定量的に血液を保持していること、血中濃度の測定には支障がないことが証明された。
　2-5.クロザピン及び代謝物血中濃度に対するヘマトクリットの影響
　ヘマトクリット値、30、40、50、60％の血液にクロザピン（CLZ）及びその代謝物、ノルクロザピン（DMC）、クロザピンN-オキシド（CMO）をそれぞれ750 ng/ml スパイクし、4/6 mm及び6/8 mmエアギャプ型基材に滴下した。乾燥し３日後に分析した（図１０、１１）。これらの結果から、薬剤の血中濃度にヘマトクリット値による統計的に有意な差異は認められず、ヘマトクリット 30～60%の変動は±10％以内であり、
±15％の基準値以内であった。ヘマトクリットによる血中濃度の変化は認められなかったが、図１０、１１に示すように、全ての薬剤の血中濃度がヘマトクリット値の上昇に従って低下する傾向が見られた。この原因として高ヘマトクリットにおける薬剤の回収率の低下が考えられたので、抽出時間や液-液抽出の条件を検討した。 超音波抽出の時間を５分から15分に延長した結果、高いヘマトクリット値における薬剤の血中濃度の低下は認められなかった。このことから、抽出時間を延長することで、ヘマトクリットの影響は無視できると推定される。結論として、ヘマトクリット値による分析値の変動幅は許容範囲にあり、エアギャプ型基材はクロザピン及びその代謝物の血中濃度測定に有効であることが認められた。
　2-6.オランザピン、リスペリドン、アリピプラゾール 血中濃度に対するヘマトクリットの影響
　ヘマトクリット値、30、40、50、60％の血液にオランザピン、リスペリドン、アリピプラゾールをそれぞれの最終濃度が1000-2000 ng/ml になるようにスパイクし、4/6 mm及び6/8 mmエアギャプ型基材に滴下して、乾燥後血中濃度を測定した（図１２、１３、１４）。これらの結果から、エアギャプ型血液試料乾燥保存基材の使用によって、ヘマトクリット値による分析値の変動幅は許容範囲に、同一条件での測定値のばらつきは基準値以下に抑えられることが確認された。
　3.実施例３
　実施例３では、セルロース濾紙製の補強ブリッジ部が、血液保持ディスクと母材板とを連絡している乾燥血液試料保存基材(なお、エアギャプブリッジ型改変基材と称することも可能であり、エアギャプブリッジ型改変基材は例えば丸形エアギャプ４ブリッジ型改変基材や角形エアギャプ４ブリッジ型改変基材等である。)について示す。
　3-1.乾燥血液試料保存基材の作成
　実施例１と同様に、セルロース濾紙として、アドバンテック社製のペーパークロマトグラフィー用濾紙No.590（厚さ：0.97 mm、吸水速度：18 cm/10分、20℃）を使用した。そして、実施例１と同様に、このセルロース濾紙を使用して、横105mm縦75mm厚さ0.97mmの母材板を作成した。母材板には直径6mmの円形の開口部を格子状に6個作成し、更には直径4mmの円形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(4/6mmエアギャプ型基材)。また、母材板には直径8mmの円形の開口部を格子状に6個作成し、更には直径6mmの円形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(6/8mmエアギャプ型基材)。また、母材板には直径10mmの円形の開口部を格子状に6個作成し、更には直径8mmの円形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(8/10mmエアギャプ型基材)。空隙部即ちエアギャプの幅は1mmであった。実施例１と同様に粘着テープとして、3Mジャパン社製のスコッチテープNo.811を使用した。粘着テープの幅は1mmとした。粘着テープは母材板の開口部の一方側の開口端に、粘着テープと開口端との間に空隙部を有するように貼り付けられた。血液保持ディスクは、粘着テープの粘着面に、開口部の内周面から間隔をあけて開口部内の中央に配置された。そして実施例１と異なり、セルロース濾紙製(アドバンテック社製のペーパークロマトグラフィー用濾紙No.590)の補強ブリッジ部を、血液保持ディスクと母材板とを連絡するように、粘着テープの粘着面に貼り付けた(図１５)。図１５は、丸形エアギャプ４ブリッジ型改変基材（Air gap-4 bridge）の写真図であり左側より8/10mm、6/8mm、4/6mmを示す。
　3-1-1. 丸形エアギャプ４ブリッジ型改変基材の血液保持体積
　図１５の基材にヘマトクリット（HCT）値30、40、50、60％の血液をスポットし、５分後に重量を測定、含有血液量を求め（表６、７、８）、これらの結果を図１６に示した。図１６は、丸型エアギャプ４ブリッジ型改変基材の血液保持体積に対するヘマトクリット値の影響を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　3-1-2.クロザピン及びその代謝産物の血中濃度
　丸型エアギャプ４ブリッジ型改変基材、4/6mm、6/8mm及び8/10mmに、それぞれ1000 ng/ml、500 ng/ml、及び250 ng/mlのクロザピン(clozapine: CLZ)、代謝産物のノルクロザピン（desmethylclozapine:DMC） 、クロザピンN-オキシド(clozapine N-oxide: CNO)をスパイクした血液をスポットし、各化合物血中濃度に対するヘマトクリット値の影響を調べた（図１７、図１８、図１９）。図１７は、4/6 mmエアギャプ4ブリッジ改変型基材を用いて測定したクロザピン及び代謝物血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す。図１８は、6/8 mmエアギャプ4ブリッジ改変型基材を用いて測定したクロザピン及び代謝物血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す。図１９は、8/10 mmエアギャプ4ブリッジ改変型基材を用いて測定したクロザピン及び代謝物血中濃度に対するヘマトクリットの影響を示す。これらの結果から、CLZ及びCNOについては、ヘマトクリット(HCT)の影響は用いた全ての基材で認められなかった。
　4.実施例４
　4-1.乾燥血液試料保存基材の作成
　セルロース濾紙として、アドバンテック社製のペーパークロマトグラフィー用濾紙No.590（厚さ：0.97 mm、吸水速度：18 cm/10分、20℃）を使用した。このセルロース濾紙を使用して、横105mm縦75mm厚さ0.97mmの母材板を作成した。母材板には一辺4mmの正方形の開口部を格子状に作成し、更には一辺2mmの正方形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(2/4mm角形エアギャプ型基材)。母材板には一辺6mmの正方形の開口部を格子状に作成し、更には一辺4mmの正方形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(4/6mm角形エアギャプ型基材)。母材板には一辺8mmの正方形の開口部を格子状に作成し、更には一辺6mmの正方形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(6/8mm角形エアギャプ型基材)。母材板には一辺10mmの正方形の開口部を格子状に作成し、更には一辺8mmの正方形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(8/10mm角形エアギャプ型基材)。母材板には一辺12mmの正方形の開口部を格子状に作成し、更には一辺10mmの正方形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(10/12mm角形エアギャプ型基材)。空隙部即ちエアギャプの幅は1mmであった。粘着テープとして、3Mジャパン社製のスコッチテープNo.811を使用した。粘着テープの幅は1mmとした。粘着テープは母材板の開口部の一方側の開口端に、粘着テープと開口端との間に空隙部を有するように貼り付けられた。血液保持ディスクは、粘着テープの粘着面に、開口部の内周面から間隔をあけて開口部内の中央に配置された。
　4-2.基材の品質と性能
　4-2-1.基材の重量
　一辺が2mm,4mm,6mm,8mm,10mmの正方形の血液保持ディスクの重量をBD210 微量天秤あるいは Type 4431 超ミクロ天秤 (ザリトリウス)で秤量した。測定結果を表9に示す。単位はmgである。下記表9に示すように製品のバラツキを示す相対標準偏差（%RSD）はほぼ５％前後であり、品質は均一であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　4-2-2.血液密度
　検査室から譲渡された廃棄血液を匿名化して用いた。採血は2K-EDTA採血管を用い、採血２?３日の血液を使用した。10-20本の血液を混合し、12,000
rpm, 4℃、５分間遠心分離し、血清と血球に分離、重量法で30％、40％、50％、60％のヘマトクリット血液を調整した。血液の密度は、各血液7mlを栓つきバイアルに入れ、100μlのギルソンピペットで吸引し、減少量を秤量した。ピペット体積は純水（水の密度0.99704 g/cm3 , 25℃）で補正した。ピペットの体積補正値は0.100772 mLであった。ヘマトクリット、30％、40％、50％、60％の血液密度を表１０に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　4-2-3.基材に保持される血液の体積
　2/4mm角形エアギャプ型基材、4/6mm角形エアギャプ型基材、6/8mm角形エアギャプ型基材、8/10mm角形エアギャプ型基材の各基材に血液をスポットした。1mlのディスポーザブルスポイドを用い、2/4 mmには先端を軽く触れるだけ、4/6 mmには１滴、6/8 mmには２滴、8/10 mmには３滴、10/12 mmには３滴をスポットした。この操作で、基材の周辺まで血液は広がる。スポットしてから5分後にディスクを脱着、その重量を測定して、保持される血液の体積（血液含有量）を下記の計算式から算出した（表１１，１２，１３，１４）。計算式は、血液保持体積（μl）＝（総重量(mg) ? 空重量（mg））/ 血液密度（g/mL）であった。図２０は、4/6mm角形エアギャプ型基材と6/8mm角形エアギャプ型基材とを一枚の母材板に有する角形エアギャプ型基材の写真図である。図２０は、(A)血液滴下前の写真図、(B)血液滴下後の写真図、(C)脱着したディスクの写真図を示す。
　表１１は2/4mm角形エアギャプ型基材の血液保持体積に対するヘマトクリット値の影響を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　表１２は4/6mm角形エアギャプ型基材の血液保持体積に対するヘマトクリット値の影響を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　表１３は6/8mm角形エアギャプ型基材の血液保持体積に対するヘマトクリット値の影響を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
　表１４は8/10mm角形エアギャプ型基材の血液保持体積に対するヘマトクリット値の影響を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
　図２１は、2/4mm角形エアギャプ型基材、4/6mm角形エアギャプ型基材、6/8mm角形エアギャプ型基材、8/10mm角形エアギャプ型基材の各基材において、血液保持体積に対するヘマトクリックの影響を示す図である。基材に保持される血液量がヘマトクリットに影響されないことは、基材の最も重要な条件である。図２１に示されるように血液保持体積に対するヘマトクリットの有意な影響は認められなかった。
　5.実施例5
　5-1.乾燥血液試料保存基材の作成
　実施例１と同様に、セルロース濾紙として、アドバンテック社製のペーパークロマトグラフィー用濾紙No.590（厚さ：0.97 mm、吸水速度：18 cm/10分、20℃）を使用した。そして、実施例１と同様に、このセルロース濾紙を使用して、横105mm縦75mm厚さ0.97mmの母材板を作成した。母材板には直径6mmの円形の開口部を格子状に6個作成し、更には直径4mmの円形の血液保持ディスクを開口部内の中央に配置した(4/6mmエアギャプ型基材)。空隙部即ちエアギャプの幅は1mmであった。母材板と血液保持ディスクとを接続する接続部は、１２０度間隔で均等に3箇所設けられた。接続部の形状は直方体であり、平面視での長さは1mmであり平面視での幅は0.3mmであった。
　本実施例にかかる乾燥血液試料保存基材は、接続部は血液保持ディスク及び母材板と一体的に設けられるものであった。本実施例にかかる乾燥血液試料保存基材は、例えば、平面視長方形のセルロール濾紙に対して、１２０度間隔で均等に配置された円弧状凸部をプレスすることによりその円弧状凸部に対応する部分が平面視長方形のセルロール濾紙からそれぞれ打ち抜きされ、これにより血液保持ディスクは母材板と離隔されて接続部により母材板に貼り付けられる。
　そしてパラフィンLunaflex(登録商標)(Fuller製)をヘプタン（n-Heptane）に溶解させて常温でパラフィンが飽和するパラフィン濃度の溶液を調整した。この溶液の0.5-1μLをピペットでそれぞれの接続部に付着させその後風乾させた（図２２左側）。乾燥するとパラフィンは目視できなくなったが、血液試料を血液保持ディスクにスポットすると、血液保持ディスクから接続部を超えて通過する血流は遮断されることが判明した（図２２右側）。
　5-2.基材に保持される血液の体積
　スポットされた血液試料の乾燥を確認した後に、ハサミで母材板から血液保持ディスクを切り離して、カフェインとその代謝物濃度を測定した（図２３）。全ての化合物の血中濃度は30％および60％ヘマトクリットの血液中で完全に一致した。この方法によって、スポイトで血液を滴下するという簡単な操作で、ヘマトクリットに影響されず、一定量の血液が採取されることが証明された。
　乾燥血液試料の保存や運搬に使用できる。
　１００,１０１：母材板
　２００,２０１：粘着テープ
　３００,３０１：血液保持ディスク
　４００,４０１：補強ブリッジ部
　４２０：接続部
　５００,５０１：開口部
　６００,６０１：空隙部(エアギャプ)
　９００,９０１,９１１,９１２：乾燥血液試料保存基材

Claims (9)

  1. 　血液試料を乾燥状態で保存する乾燥血液試料保存基材であって、
    　セルロース濾紙製の母材板と、
    　滴下された血液試料を乾燥状態で保持するセルロース濾紙製の血液保持ディスクと、前記母材板と前記血液保持ディスクとを接続する接続部と、を有し、
    　前記血液保持ディスクは前記母材板と離隔されて前記接続部により前記母材板に貼り付けられ、
    　前記母材板には、複数の開口部が設けられ、
    　前記血液保持ディスクは、前記開口部の内周面から間隔をあけて前記開口部内に配置されている、ことを特徴とする乾燥血液試料保存基材。
  2. 　血液試料を乾燥状態で保存する乾燥血液試料保存基材であって、前記接続部は粘着テープであり、
    　セルロース濾紙製の母材板と、粘着テープと、
    　滴下された血液試料を乾燥状態で保持するセルロース濾紙製の血液保持ディスクと、を有し、
    　前記血液保持ディスクは前記母材板と離隔されて前記粘着テープにより前記母材板に貼り付けられ、
    　前記母材板には、複数の開口部が設けられ、
    　前記粘着テープは、一方の面に粘着面を有する１つ又は複数の片面テープであり、前記粘着テープは前記母材板の開口部の一方側の開口端に、前記粘着テープと前記開口端との間に空隙部を有するように貼り付けられ、
    　前記血液保持ディスクは、前記粘着テープの粘着面に、前記開口部の内周面から間隔をあけて前記開口部内に配置されている、ことを特徴とする請求項１に記載の乾燥血液試料保存基材。
  3. 　前記血液保持ディスクを形成する濾紙は吸水度が18cm/10分、20℃であることを特徴とする請求項１又は２に記載の乾燥血液試料保存基材。
  4. 　前記血液保持ディスクは平面視略円形であり、前記血液保持ディスクの直径は4.0mm～12mmであり、前記開口部の内周面と前記血液保持ディスクの外周面との間の距離は0.8mm～1.2mmであることを特徴とする請求項１乃至３の何れか１項に記載の乾燥血液試料保存基材。
  5. 　前記血液保持ディスクの直径は4.0mm～8.0mmであることを特徴とする請求項４記載の乾燥血液試料保存基材。
  6. 　前記血液保持ディスクは平面視略正方形であり、前記血液保持ディスクの一辺は2.0mm～10mmであり、前記開口部の内周面と前記血液保持ディスクの外周面との間の距離は0.8mm～1.2mmであることを特徴とする請求項１乃至３の何れか１項に記載の乾燥血液試料保存基材。
  7. 　前記血液保持ディスクの一辺は4.0mm～8.0mmであることを特徴とする請求項６記載の乾燥血液試料保存基材。
  8. 　血液試料を乾燥状態で保存する乾燥血液試料保存基材であって、
    　前記接続部は、パラフィンが有機溶媒に溶解したパラフィン溶液が付着し前記有機溶媒が蒸発乾燥したセルロール濾紙製の濾紙片であり、
    　セルロース濾紙製の母材板と、
    　滴下された血液試料を乾燥状態で保持するセルロース濾紙製の血液保持ディスクと、前記母材板と前記血液保持ディスクとを接続する接続部と、を有し、
    　前記血液保持ディスクは前記母材板と離隔されて前記接続部により前記母材板に貼り付けられ、
    　前記母材板には、複数の開口部が設けられ、
    　前記血液保持ディスクは、前記開口部の内周面から間隔をあけて前記開口部内に配置されている、ことを特徴とする請求項１記載の乾燥血液試料保存基材。
  9. 　血液試料を乾燥状態で保存する乾燥血液試料保存基材であって、
    　セルロース濾紙製の母材板と、
    　粘着テープと、
    　滴下された血液試料を乾燥状態で保持するセルロース濾紙製の血液保持ディスクと、を有し、
    　前記母材板には、複数の開口部が設けられ、
    　前記粘着テープは、一方の面に粘着面を有する１つ又は複数の片面テープであり、前記粘着テープは前記母材板の開口部の一方側の開口端に、前記粘着テープと前記開口端との間に空隙部を有するように貼り付けられ、
    　前記血液保持ディスクは、前記粘着テープの粘着面に、前記開口部の内周面から間隔をあけて前記開口部内に配置され、
    　セルロース濾紙製の補強ブリッジ部が、前記血液保持ディスクと前記母材板とを連絡するように、前記粘着テープの粘着面に貼り付けられている、ことを特徴とする乾燥血液試料保存基材。
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